JPH0489433A - 免疫調節剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス
等の自己免疫疾患の治療に有用な免疫調節剤に関する。

［従来の技術］ 慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等のいわゆ
る自己免疫疾患の治療剤としては、従来、ステロイドホ
ルモン剤、金製剤、Ｄ−ペニシラミン、レバミゾール等
の化学合成薬剤が主として使われていた。最近では、イ
ンターフェロンやインターロイキン（Ｉ　Ｌ−１、Ｉ　
Ｌ−２、Ｉ　Ｌ−３等）等のタンパク質性生物学的薬剤
が注目され、基礎及び応用研究が種々検討されている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、上記の化学合成薬剤は副腎皮質機能不全、感染
症、腎障害、造血障害又は胃腸障害等、時として重篤な
副作用を起こすので、使用に当たっては細心の注意を払
わなければならず、またインターフェロンやインターロ
イキン等のタンパク質性生物学的薬剤は効能の点で必ず
しも満足できるものではない。

本発明は効能が高く、しかも副作用が少なくて使いやす
い免疫調節剤を提供するものである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らはＩｇＥのＦｃ領域由来のペプチド又はそれ
と類似するペプチドを種々合成し、それらの抗アレルギ
ー活性をはじめとする種々の薬理活性を鋭意検討してい
たところ、抗アレルギー活性を示すペプチドの中に免疫
調節作用を示すものがあることを見出し、本発明を完成
した。ここで、免疫調節作用とは、免疫機能低下状態に
対し増強的に働き、免疫機能亢進状態に対し抑制的に働
く作用のことをいい、この作用をもつ薬剤を免疫調節剤
という。

すなわち、本発明は次の式［Ｉ） Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨ［
Ｉ　］（ただし、ＡＳｐはＬ−アスパラギン酸残基、Ｓ
ｅｒはＬ−セリン残基、Ｇｌｙはグリシン残基、Ｌｙｓ
はＬ−リジン残基を示す）で表されるペンタペプチド又
はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する
免疫調節剤に関するものである。

上記のＨ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−
ＯＨは本発明者らによって抗アレルギー剤としての有用
性とともに、見出されたペプチドである（特開平１−３
１６３９８号）。

上記のペンタペプチドは特開平１−３１６３９８号公報
明細書に記載したように、常法どおり固相法によっても
製造できるし、また特願平１−２５８３６６号明細書に
記載したとおり、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（ただし、Ｂｏ
Ｃはｔ−ブチルオキシカルボニル基を示す）で表される
グリシン誘導体とＨ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＢｚｌ　（ただ
し、Ｚはベンジルオキシカルボニル基、Ｂｚｌはベンジ
ル基を示す）で表されるし一リジン誘導体を、脱水縮合
させてＢｏｃ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ　（Ｚ）−０Ｂｚｌとし
、酸でＢｏＣ基を外し、これにＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−０Ｈで表されるし一アスパラギン酸誘導体を加え
、脱水縮合させてＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｙ
−Ｌｙｓ（Ｚ）−０Ｂｚｌとし、酸でＢｏＣ基を外し、
これにＢｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨで表されるし一セリン誘導
体を加え、脱水縮合させてＢｏＣ−８ｅｒＡｓｐ（ＯＢ
ｚｌ）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｚ）−０Ｂｚｌとし、酸でＢ
ｏＣ基を外し、Ｚ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨで表され
るし一アスパラギン酸誘導体を加え、脱水縮合させたの
ち、接触還元することによっても得られる。

Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨで
表されるペンタペプチドの薬学的に許容される塩として
は、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、
クエン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、乳酸塩等の有機
酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、
カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩
、アンモニウム塩等が挙げられる。

上記の薬学的に許容される塩は、合成の最終工程で保護
基を外したのちに、塩酸、酢酸等の酸を加え、又は水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基を加え相当する
塩とすることもできるし、式ＣＩ）で表されるペンタペ
プチドを単離したのち、上記と同様に酸又は塩基を加え
て塩とすることもできる。

本発明の免疫調節剤は経口的又は非経口的に投与するた
めの形態を適宜にとりうる。代表的な投与方法としては
経口、直腸、皮膚透過、皮下、静脈内、筋肉内、吸入ま
たは鼻腔内経路を含む種々の経路により投与することが
できる。

これらの投与方法では、本発明の免疫調節剤は種々の薬
学的製剤の形態で投与されうる。これらの薬学的製剤の
形態としては、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、顆
粒剤、散剤、トローチ剤、坐剤、シロップ剤、クリーム
剤、軟膏剤、ハツプ剤、注射剤、懸濁剤、吸入剤、エア
ロゾール剤などがある。また他の免疫調節剤、その他の
医薬と共に二重層錠、多重層錠などとすることもできる
。

さらに錠剤の場合には必要に応じて通常の剤皮を施し、
例えば糖衣錠、腸溶被錠とすることもできる。

錠剤、顆粒剤、散剤などの固体製剤とする場合は、製剤
化に当って公知の添加剤、例えば乳糖、ショ糖、ブドウ
糖、結晶セルロース、コーンスターチ、リン酸カルシウ
ム、ソルビトール、グリシン、カルボキシメチルセルロ
ース、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム、
ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ステ
アリン酸マグネシウム、タルク等を添加することができ
る。

半固体製剤とする場合は、植物性ワックス、ミクロクリ
スタリンワックス、脂肪例えばタローラノリンなどの材
料を添加することができる。

液体製剤とする場合は、添加剤、例えば塩化ナトリウム
、ソルビトール、グリセリン、オリーブ油、アーモンド
油、プロピレングリコール、エチレンゲリコール、エチ
ルアルコールなどの材料を添加することができる。

式ＣＩ）で表されるペプチドの投与量は、患者の年令、
体重、症状などにより適宜増減することができるが、経
口投与の場合の投与量は１日当たり０．０１〜１０ｍｇ
／ｋｇ、非経ロ投与の場合の量は１日当たり１０〜１，
０００μｇ／ｋｇである。

［実施例コ 以下の実施例において、式〔Ｉ〕で表されるペプチドが
免疫調節作用を有し、免疫調節剤として治療用に利用さ
れうることを説明する。

（実施例１） 各種レクチンで刺激したリンパ球の幼若化に及ぼす式〔
Ｉ〕で表されるペプチドの効果ヘパリン存在下採血した
健常人から、フィコール−ハイパキュー　（Ｆｉｃｏｌ
ｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）比重遠心法にて単核細胞を採取し
、ウシ胎児血清（ＦＢＳと略す、大日本製薬製）を１０
容量％添加したＲＰＭＩ−１６４０培養液（ギブコ社製
）にこれを浮遊した。細胞数の濃度をｌＸ１０６個／ｍ
ｌに調整し、これを９６穴マイクロプレート（ファルコ
ン社製）の各ウェルに１００μｌずつ分注した。

次いでＰ　ＨＡ　（Ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎ
ｉｎ）　１　ｕ　ｇ　／　ｍ　ｌ、Ｃｏｎ−Ａ（Ｃｏｎ
ｃａｎａｖａｌｉｎ　Ａ）　１０　μｇ　／　ｍ　１も
しくはＰ　ＷＭ（Ｐｏｋｅｗｅｅｄ　ｍｉｔｏｇｅｎ）
　１５１１　ｇ　／　ｍ　ｌの各レクチン（いずれも第
−化学薬品製）、及び所定濃度のペプチド〔Ｉ〕を添加
し、１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩ−１６４０培地を加えて
最終液量を２００μｌとしたのち、５容量％ＣＯ２イン
キュベータ内、３７℃で７２時間培養した。培養終了２
４時間前に３Ｈ−チミジン０．５μＣｉを加え、セル−
ハーベスタ−（Ｂｉｏ−Ｌａｂ社製）にて細胞を回収し
、液体シンチレーションカウンターで３Ｈ−チミジン取
込量を測定した。第１表はその゛測定結果を示し、表中
の数字は平均カウント数（ｃｐｍ）士標準誤差を示す。

第１表の結果から、式〔Ｉ〕のペプチドは、マイトーゲ
ンを添加しない場合、リンパ球の３Ｈ−チミジン取込量
にほとんど影響を及ぼさないが、各レクチン、特にＣｏ
ｎ−Ａで刺激したリンパ球の３Ｈ−チミジン取込量を強
く抑制することがわかる。

第１表（つづき） （実施例２） 液性因子産生能に及ぼす式ＣＩ）で表されるペプチドの
効果 ヘパリン存在下採血した健常人から、フィコール−ハイ
パキュー比重遠心法で分離した単核細胞を、ＦＢＳＩＯ
容量％を容量口たＲＰＭＩ−１６４０培養液に浮遊した
。これを培養チューブ（ファルコン２０５４チューブ）
にＩ　Ｘ　１０６個／ｍｌずつ分注し、式［１）で表さ
れるペプチドを添加して、インキュベータにて一週間培
養を行った。

培養終了後、遠心して（１，５０Ｏｒｐｍ、　１０分間
）、上清を採取し、培養上清中の液性因子を測定した。

インターロイキン１　（ＩＬ−１）及び腫瘍壊死因子（
ＴＮＦ）はそれぞれアマジャム社及びメドジニックス社
のラジオイムノアッセイキットで測定した。インターロ
イキン６（ＩＬ−６）は抗Ｉ　Ｌ−６抗体（ジエンザイ
ム社製）を用いた酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）で行っ
た。測定結果を第２表に示した。なお数値は平均値上標
準誤差を表す。

第２表 リンパ球の液性因子産生能 第２表の結果から、式（Ｉ）のペプチドはＩＬ−６及び
ＴＮＦの産生を強く促進することがわかる。

［発明の効果］ 式ＣＩ）で表されるペプチドはマイト−ジエンで刺激し
たリンパ球の活性化反応を抑制又は増強し、また、ｊＬ
−６やＴＮＦ等の液性因子の産生能を高める。本発明に
より、免疫調節剤として効能があり、しかも副作用が少
なくて、使いやすい薬剤を提供することができた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の式〔 I 〕 Ｈ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＯＨ〔
   I 〕（ただし、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基、Ｓ
   ｅｒはＬ−セリン残基、Ｇｌｙはグリシン残基、Ｌｙｓ
   はＬ−リジン残基を示す）で表されるペンタペプチド又
   はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する
   免疫調節剤。