PT2651951E - Compostos tricíclicos do inibidor pi3k e processos para a sua utilização - Google Patents

Compostos tricíclicos do inibidor pi3k e processos para a sua utilização Download PDF

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dimethyl
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Jennafer Dotson
Robert Andrew Heald
Timothy Heffron
Graham Elgin Jones
Sussie Lerche Krintel
Neville James Mclean
Chudi Ndubaku
Alan G Olivero
Laurent Salphati
Lan Wang
Binqing Wei
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Hoffmann La Roche
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Description

DESCRIÇÃO
COMPOSTOS TRICÍCLICOS DO INIBIDOR PI3K E PROCESSOS PARA A SUA UTILIZAÇÃO
DOMÍNIO DA INVENÇÃO A presente invenção tem por objecto, de uma forma geral, compostos com actividade anti-cancro ou actividade anti-inflamatória e, mais especificamente, inibem a actividade de Pl3-cinase. A presente invenção também tem por objecto processos para utilizar os compostos para o diagnóstico in vitro, in situ e in vivo ou o tratamento de células de mamíferos ou de estados clínicos patológicos associados.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 fosfatidilinositol é um de um certo número de fosfolípidos encontrados nas membranas de células gue desempenham um papel importante na transdução do sinal intracelular. A sinalização celular, por via de fosfoinositídeos fosforilados em 3', tem sido implicada numa variedade de processos celulares, por exemplo, transformação maligna, sinalização do factor de crescimento, inflamação e imunidade (Rameh et ai (1999) J. Biol Chem, 274: 8347-8350) . A enzima responsável pela geração destes produtos de sinalização fosforilados, a fosfatidilinositol-3-cinase (também referida como PI-3-cinase ou PI3K), foi originalmente identificada como uma actividade associada a oncoproteínas virais e às tirosina-cinases do receptor do factor de crescimento gue fosforilam fosfatidiloinositol (PI) e os seus derivados fosforilados no hidroxilo de 3' do anel de inositol (Panayotou et al (1992) Trends Cell Biol 2: 358-60).
As fosfoinositldeo-3-cinases (PI3K) são cinases de lípidos que fosforilam os lípidos no resíduo de hidroxilo 3 de um anel de inositol (Whitman et al (1988) Nature, 332: 664). Os fosfolípidos fosforilados na posição 3 (PIP3) gerados pelas Pl3-cinases actuam como segundos mensageiros que recrutam as cinases com domínios de ligação de lípidos (incluindo regiões de homologia com plecstrina (HP)), tais como Akt e cinase 1 dependente de fosfoinositídio (PDK1). A ligação de Akt a PIP3 da membrana causa a translocação de Akt para a membrana do plasma, pondo Akt em contacto com PDKl, que é responsável pela activação de Akt. A fosfatase supressora de tumor, PTEN, desfosforila PIP3 e por isso actua como um regulador negativo da activação de Akt. As cinases PI3, Akt e PDKl são importantes na regulação de muitos processos celulares incluindo a regulação, proliferação, sobrevivência, apoptose e motilidade do ciclo celular e são componentes significativos dos mecanismos moleculares de doenças tais como cancro, diabetes e inflamação imunitária (Vivanco et al (2002) Nature Rev. Câncer 2: 489; Phillips et al (1998) Câncer 83: 41).
A principal isoforma de Pl3-cinase no cancro é a cinase PI3 da classe I, pllOa (alfa) (US 5824492; US 5846824; US 6274327). Outras isoformas estão implicadas nas doenças cardiovasculares e imuno-inflamatórias (Workman P (2004) Biochem Soc Trans 32: 393-396; Patel et al (2004) Proceedings of the American Association of Câncer Research (Abstract LB-247) 95th Annual Meeting, March 27-31, Orlando, Florida, USA; Ahmadi K e Waterfield MD (2004) Enciclopédia of Biological Chemistri (Lennarz W J, Lane M D eds) Elsevier/Academic Press). A via de cinase Pl3/Akt/PTEN é um alvo atractivo para o desenvolvimento de fármacos para o cancro dado que se espera que os agentes de regulação ou de inibição inibam a proliferação, invertam a repressão da apoptose e ultrapassem a resistência a agentes citotóxicos em células cancerosas (Folkes et al (2008) J. Med. Chem. 51: 5522-5532; Yaguchi et al (2006) Jour. of the Nat. Câncer Inst. 98(8): 545-556).
Os gliomas malignos são os tumores mais comuns do cérebro em adultos. No gliolastoma (GBM), o sub-tipo mais agressivo de glioma, a formação e o crescimento do tumor parecem ser comandados pela amplificação ou hiper-expressão de produtos genéticos envolvidos na transdução de sinal iniciada pelo factor de crescimento, que actua em cooperação com alterações genéticas disruptivas do controlo do ciclo celular (Holland EC (2001) Nat Rev Genet 2: 120-129) . Das alterações genómicas descritas no GBM, a mutação e/ou a eliminação de PTEN é a mais comum, com uma frequência estimada de 70-90 % (Nutt C, Louis DN (2005) Câncer of the Nervous Sistem (McGraw-Hill, Nova Iorque), 2a Ed, p 837-847.). Estas verificações, em conjunto com o valor do prognóstico do estado do PTEN em casos de GBM (Phillips HS, et al. (2006) Câncer Cell 9: 157-163), sugerem a importância da via de fosfoinositideo-3-cinase (PIK3)/Akt na promoção de condições malignas da glial altamente agressivas, assim como as oportunidades de tratamento com inibidores de PI3K que possuem propriedades de penetração na barreira sangue-cérebro.
Os gliomas malignos são tratados com uma combinação de cirurgia, radiação e temozolomida (TEMODAR™), mas estas terapêuticas, em última análise, falham com uma enorme frequência devido à recurrência do tumor. São necessárias terapêuticas adicionais para libertar concentrações eficazes de fármacos eficazes no cérebro, para tratar distúrbios hiperproliferativos, tais como glioblastoma e cancro do cérebro com metástases. Os inibidores de PI3K de moléculas pequenas estão descritos, por exemplo, na WO 2010/052569 A2; Haiakawa, et ai. (2007) Bioorg. Med. Chem. Lett. 17: 2438-2442; e US 2003/0236271 AI.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção é definida pelas reivindicações em anexo. A descrição que se segue está sujeita a esta limitação. Todos os aspectos e modalidades que são designados por "aspecto da presente invenção" mas que não estão cobertos pelas reivindicações, são aspectos meramente referentes à presente memória descritiva e não fazem parte da presente invenção. A presente invenção tem por objecto, de uma forma geral, compostos triciclicos de inibidor de Pl3k, de fórmula I, com actividade anti-cancro, actividade anti-inflamatória ou propriedades imuno-reguladoras e, mais especificamente, com actividade reguladora ou inibidora de Pl3-cinase. Alguns distúrbios hiperproliferativos são caracterizados pela regulação da função da PI3 cinase, por exemplo, por mutações ou hiper-expressão das proteínas. De acordo com isto, os compostos da presente invenção podem ser úteis no tratamento de distúrbios hiperproliferativos tais como cancro. Os compostos podem inibir o crescimento do tumor em mamíferos e podem ser úteis para o tratamento de doentes humanos com cancro. A presente invenção também tem por objecto processos para utilizar os compostos triciclicos do inibidor de PI3K, de fórmula I, para o diagnóstico in vitro, in situ e in
vivo ou o tratamento de células de mamíferos, organismos ou estados clínicos patológicos associados.
Os compostos de fórmula I incluem:
e os seus estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros e sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. As linhas a tracejado indicam uma ligação dupla opcional e pelo menos uma linha a tracejado representa uma ligação dupla. Os substituintes são os que aqui são descritos.
Noutro aspecto, a presente invenção tem por objecto uma composição farmacêutica que compreende um composto tricíclico de inibidor de PI3K de fórmula (I) e um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. A composição farmacêutica pode ainda conter um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
Noutro aspecto, a presente invenção tem por objecto processos de inibição da actividade da PI3 cinase, compreendendo o contacto de uma PI3 cinase com uma quantidade inibidora eficaz de um composto de fórmula I.
Noutro aspecto, a presente invenção tem por objecto processos de prevenção ou de tratamento de doenças ou distúrbios hiper-proliferativos regulados pelas PI3 cinases, compreendendo a administração, a um mamífero que tenha essa necessidade, de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I. Exemplos dessas doenças ou distúrbios hiper-proliferativos incluem, mas não se limitam a cancro.
Noutro aspecto, a presente invenção tem por objecto processos de prevenção ou de tratamento de um distúrbio hiper-proliferativo compreendendo a administração, a um mamífero que tenha essa necessidade, de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I, isolado ou em combinação com um ou mais compostos adicionais com propriedades anti-hiper-proliferativas.
Ainda noutro aspecto, a presente invenção tem por objecto um processo para utilizar um composto da presente invenção para tratar uma doença ou um estado clínico hiper-prolif erat ivos , regulados pela PI3 cinase, num mamífero.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste na utilização de um composto da presente invenção para o tratamento de cancro regulado pela PI3 cinase num mamífero.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste na utilização de um composto da presente invenção para ser utilizado como uma substância activa sob o ponto de vista terapêutico.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste na utilização de um composto da presente invenção para o tratamento de cancro regulado pela PI3 cinase num mamífero.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste na utilização de um composto da presente invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento de cancro regulado pela PI3 cinase num mamífero.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste num composto da presente invenção para ser utilizado no tratamento de cancro regulado pela PI3 cinase num mamífero.
Um outro aspecto da presente invenção inclui estojos que contêm um composto de fórmula I, uma embalagem e eventualmente uma inserção na embalagem ou num rótulo que indica o tratamento.
Um outro aspecto da presente invenção inclui processos de preparação, processos de separação e processos de purificação dos compostos de fórmula I.
Um outro aspecto da presente invenção inclui novos produtos intermédios úteis para a preparação de compostos de fórmula I.
DESCRIÇÃO DETALHADA DE EXEMPLOS DE MODALIDADES
Agora far-se-á referência, em detalhe, a certas modalidades da presente invenção, cujos exemplos estão ilustrados nas estruturas e fórmulas que ilustram a descrição. Embora a presente invenção vá ser descrita em conjunto com as modalidades enumeradas, deve entender-se que não se pretende limitar a presente invenção a essas modalidades. Pelo contrário, entende-se que a presente invenção cobre todas as alternativas, modificações e equivalentes que possam estar incluídos no âmbito da presente invenção, tal como definido nas reivindicações. Um especialista nesta técnica reconhecerá muitos processos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos aqui, que poderão ser utilizados na prática da presente invenção. A presente invenção não se limita, de nenhum modo, aos processos e materiais descritos. No caso de um ou mais dos elementos da literatura, patentes e materiais similares aqui incorporados diferir ou contradisser o presente pedido de patente, incluindo, mas não se limitando aos termos definidos, à utilização dos termos, às técnicas descritas ou similares, o presente pedido de patente serve como controlo.
DEFINIÇÕES 0 termo "alquilo", tal como se utiliza aqui, refere-se a um radical de hidrocarboneto monovalente, saturado, de cadeia linear ou ramificada com um a doze átomos de carbono (C1-C12) , em que o radical alquilo pode estar eventualmente substituído, independentemente, com um ou mais substituintes descritos a seguir. Noutra modalidade, um radical alquilo tem um a oito átomos de carbono (Ci-Cg) ou um a seis átomos de carbono (Ci-Cg) . Exemplos de grupos alquilo incluem, mas não se limitam a metilo (Me, -CH3) , etilo (Et, -CH2CH3) , 1-propilo (n-Pr, n-propilo, -CH2CH2CH3) , 2-propilo (i-Pr, i-propilo, -CH(CH3)2), 1- butilo (n-Bu, n-butilo, -CH2CH2CH2CH3) , 2-metil-l-propilo (i-Bu, i-butilo, -CH2CH(CH3) 2) , 2-butilo (s-Bu, s-butilo, -CH (CH3) CH2CH3) , 2-metil-2-propilo (t-Bu, t-butilo, —C (CH3) 3) , 1-pentilo (n-pentilo, -CH2CH2CH2CH2CH3) , 2-pentilo (-CH (CH3) CH2CH2CH3) , 3-pentil0 (-CH (CH2CH3) 2) , 2-metil-2-butilo (—C (CH3) 2CH2CH3) , 3-metil-2-butilo (-CH (CH3) CH (CH3) 2) , 3-metil-l-butilo (-CH2CH2CH (CH3) 2) , 2-metil-l-butilo (-CH2CH (CH3) CH2CH3) , 1-hexilo (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3) , 2-hexilo (-CH (CH3) CH2CH2CH2CH3) , 3-hexilo (-CH (CH2CH3) (CH2CH2CH3) ) , 2- metil-2-pentilo (-C (CH3) 2CH2CH2CH3) , 3-metil-2-pentilo (-CH (CH3) CH (CH3) CH2CH3) , 4-metil-2-pentilo (-CH (CH3) CH2CH (CH3) 2) , 3-metil-3-pentilo (-C (CH3) (CH2CH3) 2) , 2-metil-3-pentilo (-CH (CH2CH3) CH (CH3) 2) , 2,3-dimetil-2- butilo ( —C (CH3) 2CH (CH3) 2) , 3,3-dimetil-2-butilo (-CH (CH3) C (CH3) 3, 1-heptilo, 1-octilo e similares. 0 termo "alcileno", tal como se utiliza aqui, refere-se a um radical de hidrocarboneto bivalente, saturado, de cadeia linear ou ramificada com um a doze átomos de carbono (C!-C12) , em que o radical alcileno pode estar eventualmente substituído, independentemente, com um ou mais substituintes descritos a seguir. Noutra modalidade, um radical alcileno tem um a oito átomos de carbono (Cg-Cg) ou um a seis átomos de carbono (Ο2-Ο6) . Exemplos de grupos alquilo incluem, mas não se limitam a metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-) , propileno (-CH2CH2CH2-) e similares. 0 termo "alcenilo" refere-se a um radical de hidrocarboneto monovalente, de cadeia linear ou ramificada com dois a oito átomos de carbono (C2-Cg) com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, um carbono-carbono, uma ligação dupla sp2, em que o radical alcenilo pode estar eventualmente substituído, independentemente, com um mais substituintes aqui descritos e inclui radicais com orientações "cis" e "trans" ou, alternativamente, orientações "E" e "Z". Os respectivos exemplos incluem, mas não se limitam a etilenilo ou vinilo (-CH=CH2) , alilo (-CH2CH=CH2) e similares. 0 termo "alcenileno" refere-se a um radical de hidrocarboneto bivalente, de cadeia linear ou ramificada com dois a oito átomos de carbono (C2-C8) com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, um carbono-carbono, uma ligação dupla sp2, em que o radical alcenilo pode estar eventualmente substituído e inclui radicais com orientações "cis" e "trans" ou, alternativamente, orientações "E" e "Z". Os respectivos exemplos incluem, mas não se limitam a etilenileno ou vinileno (-CH=CH2) , alilo (-CH2CH=CH2) e similares. 0 termo "alcinilo" refere-se a um radical de hidrocarboneto monovalente, de cadeia linear ou ramificada com dois a oito átomos de carbono (C2-C8) com pelo menos um sitio de insaturação, isto é, uma li~gação carbono-carbono, uma ligação tripla sp, em que o radical alcinilo pode estar eventualmente substituído, independentemente, com um mais substituintes aqui descritos. Os respectivos exemplos incluem, mas não se limitam a etinilo (-C^CH), propinilo (propargilo, -CH2C^CH) e similares. 0 termo "alcinileno" refere-se a um radical de hidrocarboneto bivalente, de cadeia linear ou ramificada com dois a oito átomos de carbono (C2-C8) com pelo menos um sítio de insaturação, isto é, uma ligação tripla um carbono-carbono, sp, em que o radical alcinilo pode estar eventualmente substituído, independentemente, com um mais substituintes aqui descritos. Os respectivos exemplos incluem, mas não se limitam etinileno (-C=C-) , propinileno (propargileno, -CH2C^CH) e similares.
Os termos "carbociclo", "carbociclilo", "anel carbocíclico" e "cicloalquilo" referem-se a um anel monovalente não aromático, saturado ou parcialmente insaturado, com 3 a 12 átomos de carbono (C3-C12) , como um anel monocíclico ou 7 a 12 átomos de carbono como um anel bicíclico. Carbociclos bicíclicos com 7 a 12 átomos podem ser arranjados, por exemplo, como um sistema [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6] bicíclico e os carbociclos bicíclicos com 9 ou 10 átomos no anel podem ser arranjados como um sistema [5,6] ou [6,6] bicíclico ou como sistemas com pontes tais como biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano e biciclo- [ 3.2.2]nonano. Exemplos de carbociclos monocíclicos incluem, mas não se limitam a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1-ciclopent-l-enilo, l-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciclo-hexilo, 1-ciclo-hex-l-enilo, 1-ciclo-hex-2-enilo, l-ciclo-hex-3-enilo, ciclo-hexadienilo, ciclo-heptilo, ciclo-octilo, ciclononilo, ciclodecilo, cicloundecilo, ciclododecilo e similares. "Arilo" significa um radical de hidrocarboneto aromático monovalente com 6-20 átomos de carbono (C6-C20) derivado, por eliminação, de um átomo de hidrogénio de um único átomo de carbono de um sistema parental de anel aromático. Alguns grupos arilo estão representados nas estruturas dos exemplos como "Ar". Arilo inclui radicais bicíclicos compreendendo um anel aromático fundido com um anel saturado, parcialmente insaturado ou um anel carbocíclico aromático. Os grupos arilo típicos incluem, mas não se limitam a radicais derivados de benzeno (fenilo), benzenos substituídos, naftaleno, antraceno, bifenilo, indenilo, indanilo, 1,2-di-hidronaftaleno, 1,2,3,4-tetra-hidronaftilo e similares. Os grupos arilo estão eventualmente substituídos, independentemente, por um ou mais substituintes aqui descritos. "Arileno" significa um radical de hidrocarboneto aromático monovalente com 6-20 átomos de carbono (C6-C20) derivado, por eliminação de dois átomos de hidrogénio de dois átomos de carbono de um sistema parental de anel aromático. Alguns grupos arileno estão representados nas estruturas dos exemplos como "Ar". Arileno inclui radicais bicíclicos compreendendo um anel aromático fundido com um anel saturado, parcialmente insaturado ou um anel carbocíclico aromático. Os grupos arileno típicos incluem, mas não se limitam a radicais derivados de benzeno (fenileno), benzenos substituídos, naftaleno, antraceno, bifenileno, indenileno, indanileno, 1,2-di-hidronaftaleno, I, 2,3,4-tetra-hidronaftilo e similares. Os grupos arileno estão eventualmente substituídos, independentemente, por um ou mais substituintes aqui descritos.
Os termos "heterociclo", "heterociclilo" e "anel heterocíclico" são utilizados aqui intermutavelmente e referem-se a um radical carbocíclico saturado ou parcialmente insaturado (isto é, com uma ou mais ligações duplas e/ou ligações triplas dentro do anel), com 3 a cerca de 20 átomos no anel em que pelo menos um átomo do anel é um heteroátomo seleccionado entre azoto, oxigénio, fósforo e enxofre, sendo os restantes átomos do anel átomos de C, em que um ou mais dos átomos do anel está eventualmente substituído, independentemente, com um ou mais substituintes descritos a seguir. Um heterociclo pode ser um monociclo com 3 a 7 átomos no anel (2 a 6 átomos de carbono e 1 a 4 heteroátomos seleccionados entre N, O, P e S) ou um biciclo com 7 a 10 átomos no anel (4 a 9 átomos de carbono e 1 a 6 heteroátomos seleccionados entre N, O, P e S) , por exemplo: um sistema bicíclico [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6]. Os heterociclos estão descritos em Paquette, Leo A.; "Principies of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), particularmente os capítulos 1, 3, 4, 6, 7 e 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 até hoje), em particular os volumes 13, 14, 16, 19 e 28; e J. Am. Chem. Soc. (1960) 82: 5566. "Heterociclilo" também inclui radicais em que os radicais heterociclo estão fundidos com um anel saturado ou parcialmente insaturado ou carbocíclico aromático ou anel heterocíclico. Exemplos de anéis heterocíclicos incluem, mas não se limitam a morfolin-4-ilo, piperidin-l-ilo, piperazinilo, piperazin-4- ilo-2-ona, piperazin-4-ilo-3-ona, pirrolidin-l-ilo, tio-morfolin-4-ilo, S-dioxotiomorfolin-4-ilo, azocan-l-ilo, azetidin-l-ilo, octa-hidropirido[l,2-a]pirazin-2-ilo, [1,4]diazepan-l-ilo, pirrolidinilo, tetra-hidrofuranilo, di-hidrofuranilo, tetra-hidrotienilo, tetra-hidropiranilo, di-hidropiranilo, tetra-hidrotiopiranilo, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanilo, piperazinilo, homo-piperazinilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, homo-piperidinilo, oxepanilo, tiepanilo, oxazepinilo, di-azepinilo, tiazepinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, di-hidropiranilo, di-hidrotienilo, di-hidrofuranilo, pirazol-idinilimidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabicico[3.1.0]-hexanilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo, azabiciclo[2.2.2]-hexanilo, 3H-indolilo-quinolizinilo e N-piridil-ureias. As partes espiro estão também incluídas no âmbito desta definição. Exemplos de um grupo heterocíclico em que 2 átomos do anel estão substituídos com radicais oxo (=0) são pirimidinonilo e 1,1-dioxo-tiomorfolinilo. Estes grupos heterociclo estão eventualmente substituídos, independentemente, com um ou mais substituintes aqui descritos. 0 termo "heteroarilo" refere-se a um radical aromático monovalente com 5, 6, ou 7 átomos no anel e inclui sistemas de anéis fundidos (pelo menos um dos quais é aromático) de 5-20 átomos, contendo um ou mais heteroátomos seleccionados, independentemente, entre azoto, oxigénio e enxofre. Exemplos de grupos heteroarilo incluem piridinilo (incluindo, por exemplo, 2-hidroxipiridinilo), imidazolilo, imidazopiridinilo, pirimidinilo (incluindo, por exemplo, 4-hidroxipirimidinilo) , pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxa- diazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetra-hidroisoquinolinilo, indolilo, benzimidazolilo, benzofuranilo, cinolinilo, indazolilo, indolizinilo, ftalazinilo, piridazinilo, triazinilo, iso-indolilo, pteridinilo, purinilo, oxadiazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo e furopiridinilo. Os grupos heteroarilo estão eventualmente substituídos, independentemente, por um ou mais substituintes aqui descritos.
Os grupos heterociclo ou heteroarilo podem estar ligados por carbono (ligados por carbono) ou por azoto (ligados por azoto) quando isso é possível. A título de exemplo não limitativo, os grupos heterociclo ou heteroarilo podem estar ligados por carbono nas posições 2, 3, 4, 5 ou 6 de uma piridina, nas posições 3, 4, 5 ou 6 de uma piridazina, nas posições 2, 4, 5 ou 6 de uma pirimidina, nas posições 2, 3, 5 ou 6 de uma pirazina, nas posições 2, 3, 4 ou 5 de um furano, tetra-hidrofurano, tiofurano, tiofeno, pirrol ou tetra-hidropirrol, nas posições 2, 4 ou 5 de um oxazol, imidazol ou tiazol, nas posições 3, 4 ou 5 de um isoxazol, pirazol ou isotiazol, nas posições 2 ou 3 de uma aziridina, nas posições 2, 3 ou 4 de uma azetidina, nas posições 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 de uma quinolina ou nas posições 1, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 de uma isoquinolina. A título de exemplo não limitativo, os heterociclos ou heteroarilos ligados por azoto estão ligados na posição 1 de uma aziridina, azetidina, pirrol, pirrolidina, 2-pirrolina, 3-pirrolina, imidazol, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazol, pirazolina, 2- pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indol, indolina, ΙΗ-indazol, na posição 2 de um isoindol ou isoindolina, na posição 4 de uma morfolina e na posição 9 de um carbazol ou β-carbolina.
Os termos "tratar" e "tratamento" referem-se tanto ao tratamento terapêutico como a medidas preventivas ou profilácticas, em que o objecto é prevenir ou diminuir (retardar) uma alteração ou um distúrbio fisiológico indesejáveis, tal como o desenvolvimento ou a disseminação de cancro. Para as finalidades da presente invenção, os resultados benéficos ou desejados incluem, mas não se limitam a alivio dos sintomas, diminuição da extensão da doença, estabilização (isto é, não haver pioria) do estado da doença, retardamento ou atraso da progressão da doença, melhoria ou paliativos do estado de doença e remissão (quer parcial quer total), se for detectável ou indetectável. "Tratamento" também pode significar o prolongamento da sobrevivência quando comparada com a sobrevivência esperada se não se receber tratamento. Os que necessitam de tratamento incluem os que já têm um estado clinico ou um distúrbio, assim como os que têm probabilidade de ter o estado clinico ou o distúrbio ou aqueles em que o estado clinico ou o distúrbio tem de ser prevenido. A frase "quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico" significa uma quantidade de um composto da presente invenção que (i) trata ou previne a doença, estado clinico ou distúrbio particular, (ii) atenua, melhora ou elimina um ou mais sintomas da doença, do estado clinico ou do distúrbio particular ou (iii) previne ou retarda o inicio de um ou mais sintomas da doença, estado clinico ou distúrbio particular aqui descritos. No caso de cancro, a quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico do fármaco pode reduzir o número de células de cancro; reduzir a dimensão do tumor; inibir (isto é, retardar de alguma forma e preferencialmente parar) a infiltração de células cancerosas em órgãos periféricos; inibir (isto é, retardar de alguma forma e preferencialmente parar) as metástases de um tumor; inibir, em certa medida, o crescimento do tumor; e/ou aliviar, nalguma medida, um ou mais dos sintomas associados com o cancro. Em certa medida, o fármaco pode prevenir o crescimento e/ou matar células de cancro existentes, pode ser citostático e/ou citotóxico. Para a terapêutica do cancro, pode medir-se a eficácia, por exemplo, avaliando o tempo até à progressão da doença (TTP) e/ou determinando a taxa de resposta (TR). 0 termo "cancro" refere-se ou descreve o estado fisiológico em mamíferos que normalmente é caracterizado por um crescimento desregulado das células. Um "tumor" contém uma ou mais células cancerosas. Exemplos de cancro incluem, mas não se limitam a carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma e leucemia ou malignidades linfóides. Exemplos mais particulares desses cancros incluem cancro de células escamosas (por exemplo, cancro epitelial de células escamosas) , cancro do pulmão incluindo cancro do pulmão de células pequenas, cancro do pulmão de células não pequenas ("CPCNP"), adenocarcinoma do pulmão e carcinoma escamoso do pulmão, cancro do peritoneu, cancro hepatocelular, cancro gástrico ou do estômago incluindo cancro gastrointestinal, cancro pancreático, gliobastoma, cancro cervical, cancro do ovário, cancro do fígado, cancro da bexiga, hepatoma, cancro da mama, cancro do cólon, cancro rectal, cancro colorectal, carcinoma do endométrio ou uterino, carcinoma das glândulas salivares, cancro do rim ou renal, cancro da próstata, cancro da vulva, cancro da tiróide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma do pénis, assim como cancro da cabeça e do pescoço.
Um "agente quimioterapêutico" é um composto quimico útil no tratamento de cancro, independentemente do seu mecanismo de acção. As classes de agentes quimio-terapêuticos incluem, mas não se limitam a: agentes de alquilação, antimetabólitos, alcaloides de plantas arbóreas venenosas, antibióticos citotóxicos/anti-tumor, inibidores de topoisomerase, anticorpos, foto-sensibilizadores e inibidores de cinase. Os agentes quimioterapêuticos incluem compostos utilizados em "terapêutica dirigida" e quimioterapia convencional. Exemplos de agentes quimio-terapêuticos incluem: erlotinib (TARCEVA®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (TAXOTERE®, Sanofi-Aventis), 5-FU (fluorouracilo, 5-fluorouracilo, CAS No. 51-21-8), gencitabina (GEMZAR®, Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), cisplatina (cis-diamina, dicloroplatina (II), CAS No. 15663-27-1), carboplatina (CAS No. 41575-94-4), paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), pemetrexede (ALIMTA®, Eli Lilli), trastuzumabe (HERCEPTIN®, Genentech) , temozolomida (4-metH-5-OXO-2,3,4,6, 8-pentazabiciclo [4.3.0]nona-2,7, 9-trieno-9-carboxamida, CAS No. 85622-93-1, TEMODAR®, TEMODAL®, Schering Plough), tamoxifeno ( (Z)-2-[4-(1,2-difenilbut-l-enil)fenoxi]-N,N-dimetiletanamina, NOLVADEX®, ISTUBAL®, VALODEX®) e doxorubicina (ADRIAMYCIN®), Akti-1/2, HPPD e rapamicina.
Mais exemplos de agentes quimioterapêuticos incluem: oxaliplatina (ELOXATIN®, Sanofi), bortezomibe (VELCADE®, Millennium Pharm.), sutente (SUNITINIB®, SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA®, Novartis), mesilato de imatinib (GLEEVEC®, Novartis), XL-518 (inibidor de Mek, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (inibidor de Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (inibidor de PI3K, Semafore Pharmaceuticals) , BEZ-235 (inibidor de PI3K, Novartis), XL-147 (inibidor de PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrante (FASLODEX®, AstraZeneca), leucovorina (ácido folinico), rapamicina (sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), lapatinibe (TiKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnibe (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenibe (NEXAVAR®, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinibe (IRESSA®, AstraZeneca), irinotecano (CAMPTOSAR®, CPT-11, Pfizer), tipifarnibe (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (isento de Cremophor), formulações de paclitaxel em nanoparticulas tratadas por engenharia com albumina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), vandetanibe (rINN, ZD6474, ZACTIMA®, AstraZeneca), clorambucil, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL®, Wyeth), pazopanibe (GlaxoSmithKline), canfosfamida (TELCYTA®, Telik), tiotepa e ciclosfosfamida (CYTOXAN®, NEOSAR®); sulfonatos de alquilo tais como busulfano, improsulfano e pipo-sulfano; aziridinas tais como benzodopa, carbocona, meturedopa e uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, tri-etilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotio-fosforamida e trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacinona); uma camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo os seus análogos sintéticos, adozelesina, carzelesina e bizelesina); cripto-ficinas (particularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo os seus análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; uma sarcodictina; espongistatina; mostardas de azoto tais como clorambucil, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracilo; nitrosoureias tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina e rani-mnustina; antibióticos tais como antibióticos de enedina (por exemplo, calicheamicina, calicheamicina gamma II, calicheamicina omega II (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33: 183-186); dinemicina, dinemicina A; bisfosfonatos, tais como clodronato; uma esperamicina; assim como o cromóforo neocarzinostatina e cromoforos de antibióticos da cromoproteina enedina relacionados), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicina, cactino-micina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromo-micinias, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, morfolino-doxorubicina, ciano-morfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina e desoxi-doxorubicina), epirubicina, esorubicina, idarubicina, nemorubicina, marcelomicina, mitomicinas tais como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivo-micina, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quela-micina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti-metabólitos tais como metotrexato e 5-fluorouracilo (5-FU); análogos de ácido fólico tais como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogps de purina tais como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tio-guanina; análogos de pirimidina tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; androgenos tais como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-super-renais tais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; recargas de ácido fólico tais como ácido frolinico; aceglatona; glicósido de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracilo; ansacrina; bestrabucilo; bis-antreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diazicona; elfornitina; acetato de eliptínio; um epotilona; eto-glúcido; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinano; lonidainina; maitansinóides tais como maitansina e ansa-mitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmole; nitra-erina; pentostatina; fenameto; pirarubicina; losoxantrona; ácido podofilinico; 2-etil-hidrazida; procarbazina; complexo de polissacárido PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR) ; razoxano; rizoxina; sizofirano; espiro-germânio; ácido tenuazónico; triazicona; 2,2 ' ,2"-tricloro-trietilamina; tricotecenos, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinósido ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; 6-tio-guanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina tais como cisplatina e carboplatina; vinblastina; etopósido (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (NAVELBINE®); novantrona; tenipósido; edatrexato; dauno-micina; aminopterina; capecitabina (XELODA®, Roce); ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO) ; retinóides tais como ácido retinóicoi; e qualquer sal, ácido e derivado dos produtos anteriores, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
Também estão incluídos na definição de "agente quimioterapêutico": (i) agentes anti-hormonais que actuam de modo a regular ou inibir a acção da hormona sobre os tumores tais como anti-estrogénios e reguladores selectivos de receptores de estrogénios (RSRE), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxifeno, LY117018, onapristona e FARESTON® (citrato de toremifina); (ii) inibidores de aromatase que inibem a enzima aromatase, que regula a produção de estrogénios nas glândulas supra-renais, tais como, por exemplo, 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano; Pfizer), formestania, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis) e ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca) ; (iii) anti-androgénios tais como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolide e goserelina; assim como troxacitabina (um análogo de citosina do nucleósido 1,3-dioxolano); (iv) inibidores de proteinas-cinases tal como inibidores de MEK (WO 2007/044515); (v) inibidores de lipido-cinases; (vi) oligonucleótidos anti-paralelos, particularmente os que inibem a expressão de genes nas vias de sinalização implicadas na proliferação aberrante de células, por exemplo, PKC-alfa, Raf e H-Ras, tal como oblimerseno (GENASENSE®, Genta Inc.); (vii) ribozimas tais como inibidores de expressão de FCEV (por exemplo, ANGIOZYME®) e inibidores da expressão de HER2; (viii) vacinas tal como vacinas de terapêutica de genes, por exemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® e VAXID®; o rIL-2 PROLEUKIN®; inibidores de topoisomerase 1 tais como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes anti-angiogénicos tais como bevacizumabe (AVASTIN®, Genentech); e qualquer sal, ácido e derivado dos produtos anteriores, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
Também estão incluídos na definição de "agente quimio-terapêutico" antibióticos terapêuticos tais como alentuzumabe (Campath), bevacizumabe (AVASTIN®, Genentech); cetuximabe (ERBITUX®, Imclone) ; panitumumabe (VECTIBIX®, Amgen), rituximabe (RITUXAN®, Genentech/Biogen Idec), pertuzumabe (OMNITARG™, 2C4, Genentech), trastuzumabe (HERCEPTIN®, Genentech), tositumomabe (Bexxar, Corixia) e o conjugado de anticorpo e fármaco, gemtuzumabe-ozogamicina (MYLOTARG®, Wyeth).
Os anticorpos monoclonais humanizados com potencial terapêutico como agentes quimioterapêuticos em combinação com os inibidores de PI3K da presente invenção inlcuem: alemtuzumabe, apolizumabe, aselizumabe, atlizumabe, bapi-neuzumabe, bevacizumabe, bivatuzumabe-mertansina, cantuzumabe-mertansina, cedelizumabe, certolizumabe-pegol, cidfusituzumabe, cidtuzumabe, daclizumabe, eculizumabe, efalizumabe, epratuzumabe, erlizumabe, felvizumabe, fontolizumabe, gentuzumabe ozogamicina, inotuzumabe ozo-gamicina, ipilimumabe, labetuzumabe, lintuzumabe, matu-zumabe, mepolizumabe, motavizumabe, motovizumabe, natali-zumabe, nimotuzumabe, nolovizumabe, numavizumabe, ocreli-zumabe, omalizumabe, palivizumabe, pascolizumabe, pecfusituzumabe, pectuzumabe, pertuzumabe, pexelizumabe, ralivizumabe, ranibizumabe, reslivizumabe, reslizumabe, resivizumabe, rovelizumabe, ruplizumabe, sibrotuzumabe, siplizumabe, sontuzumabe, tacatuzumabe-tetraxetano, tadocizumabe, talizumabe, tefibazumabe, tocilizumabe, toralizumabe, trastuzumabe, tucotuzumabe celmoleucina, tucusituzumabe, umavizumabe, urtoxazumabe e visilizumabe.
Um "metabólito" é um produto produzido no corpo através do metabolismo de um composto especifico ou de um seu sal. Os metabólitos de um composto podem ser identificados utilizando técnicas de rotina conhecidas na técnica e as suas actividades podem ser determinadas utilizando ensaios tais como os aqui descritos. Esses produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, redução, hidrólise, amidação, desamidação, esterificação, des-esterificação, clivagem enzimática e similares, do composto administrado. De acordo com isto, a presente invenção inclui metabólitos dos compostos da presente invenção, incluindo compostos produzidos por um processo que compreende o contacto de um composto da presente invenção com um mamífero, durante um período de tempo suficiente para originar o respectivo produto metabólico. A expressão "inserção na embalagem" utiliza-se para referir as instruções habituais incluídas nas embalagens comerciais dos produtos terapêuticos que contêm informação acerca das indicações, utilização, dosagem, administração, contra-indicações e/ou avisos respeitantes à utilização dessses produtos terapêuticos. 0 termo "quiral" refere-se a moléculas que têm a propriedades de não sobreposição com o seu par numa imagem de espelho, enquanto o termo "aquiral" refere-se a moléculas que se sobrepõem ao seu par numa imagem de espelho. 0 termo "estereoisómeros" refere-se a compostos que têm uma constituição química idêntica, mas diferem no que respeita ao arranjo dos átomos ou grupos no espaço. "Diastereómeros" referem-se a estereoisómeros com dois ou mais centros de quiralidade e cujas moléculas não são imagens num espelho uma da outra. Os diastereómeros têm propriedades físicas diferentes, por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, propriedades espectrais e reactividades. As misturas de diastereómeros podem separar-se por meio de procedimentos analíticos de elevada resolução tal como electroforese e cromatografia. "Enantiómeros" referem-se a dois estereoisómeros de um composto que não se sobrepõem um ao outro numa imagem de espelho.
As definições e as convenções estereoquimicas aqui utilizadas seguem, de uma forma geral, S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; e Eliel, E. e Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Os compostos da presente invenção podem conter centros assimétricos quirais e, por isso, existem em diferentes formas estereoisoméricas. Entende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da presente invenção, incluindo, mas não se limitando a diastereómeros, enantiómeros e atropisómeros, assim como as suas misturas, tal como as misturas racémicas, fazem parte da presente invenção. Muitos compostos orgânicos existem em formas opticamente activas, isto é, têm a capacidade de rodar no plano da luz polarizada no plano. Quando se descreve um composto opticamente activo, os prefixos D e L ou R e S são utilizados para indicar a configuração absoluta da molécula à volta dos seus centros quirais. Os prefixos d e 1 ou ( + ) e (-) são utilizados para designar o sinal de rotação da luz polarizada no plano, por parte do composto, sendo que (-) ou 1 significa que o composto é levógiro. Um composto com o prefixo ( + ) ou d é o que gira para a direita. Para uma dada estrutura química, estes estereoisómeros são idênticos excepto no facto de serem imagens no espelho um do outro. Um estereoisómero específico pode também ser referido como um enantiómero e uma mistura desses isómeros é muitas vezes designada como uma mistura enantiomérica. Uma mistura a 50:50 de enantiómeros é referida como uma mistura racémica ou um racemato, que pode ocorrer quando não houve estereo-selecção ou estereo-especificidade numa reacção química ou processo. As expressões "misturas racémicas" e "racematos" referem-se a uma mistura equimolar de duas espécies enantioméricas, desprovidas de actividade óptica.
As expressões "tautómero" ou "forma tautomérica" referem-se a isómeros estruturais de diferentes energias que são interconvertiveis por via de uma barreira de baixa energia. Por exemplo, os tautómeros de protões (também conhecidos por tautómeros prototrópicos) incluem inter-conversões, por via da migração de um protão, tal como isomerizações de ceto-enol e imina-enamina. Os tautómeros de valência incluem interconversões por reorganização dos electrões de ligação. A frase "sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico", tal como se utiliza aqui, refere-se a sais orgânicos ou inorgânicos de um composto da presente invenção, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Exemplos de sais, incluem, mas não se limitam aos sais sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloreto, brometo, iodeto, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metano-sulfonato "mesilato", etano-sulfonato, benzeno-sulfonato, p-tolueno-sulfonato e pamoato (isto é, 1,1'-metileno-bis(2-hidroxo-3-naftoato)). Um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico pode envolver a inclusão de outra molécula tal como um ião de acetato, um ião de succinato ou outro contra-ião. 0 contra-ião pode ser qualquer radical orgânico ou inorgânico que estabilize a carga no composto parental. Além disso, um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico pode ter mais do que um átomo carregado na sua estrutura. Exemplos em que vários átomos carregados fazem parte do mesmo sal, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, podem ter vários contra-iões. Assim, um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico pode ter um ou mais átomos carregados e/ou um ou mais contra-iões.
Se o composto da presente invenção for uma base, o sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico desejado pode ser preparado por qualquer processo apropriado disponível na técnica, por exemplo, pelo tratamento da base livre com um ácido inorgânico, tal como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metano-sulfónico, ácido fosfórico e similares ou com um ácido orgânico, tal como ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido de piranosidilo, tal como como ácido glicurónico ou ácido galacturónico, um ácido alfa-hidroxi, tal como ácido cítrico ou ácido tartárico, um aminoácido, tal como ácido aspártico ou ácido glutâmico, um ácido aromático, tal como ácido benzóico ou ácido cinâmico, um ácido sulfónico, tal como ácido p-tolueno-sulfónico ou ácido etano-sulfónico ou similares.
Se o composto da presente invenção for um ácido, o sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico desejado pode ser preparado por qualquer processo apropriado, por exemplo, pelo tratamento do ácido livre com uma base inorgânica ou orgânica, tal como uma amina (primária, secundária ou terciária), um hidróxido de metal alcalino ou um hidróxido de um metal alcalino-terroso ou similar. Exemplos ilustrativos de sais apropriados incluem, mas não se limitam a sais orgânicos derivados de aminoácidos tais como glicina e arginina, amónia, aminas primárias, secundárias e terciárias e aminas cíclicas, tais como piperidina, morfolina e piperazina e sais inorgânicos derivados de sódio, cálcio, potássio, magnésio, manganês, ferro, cobre, zinco, alumínio e lítio. A frase "aceitável sob o ponto de vista farmacêutico" indica que a substância ou a composição devem ser compatíveis quimicamente e/ou toxicologicamente, com os outros ingredientes, compreendendo uma formulação e/ou o mamífero a ser tratado com ela.
Um "solvato" refere-se a uma associação ou a um complexo de uma ou mais moléculas de dissolventes e um composto da presente invenção. Exemplos de dissolventes que formam solvatos incluem, mas não se limitam a água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, ácido acético e etanolamina.
As expressões "composto da presente invenção" e "compostos da presente invenção" e "compostos de fórmula I" incluem compostos de fórmula I e os seus esteroisómeros, isómeros geométricos, tautómeros, solvatos, metabólitos e sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e pró-fármacos.
Entende-se que qualquer fórmula ou estrutura aqui indicada, incluindo os compostos de fórmula I, também representa hidratos, solvatos e polimorfos desses compostos e as suas misturas.
COMPOSTOS TRICÍCLICOS DO INIBIDOR DE PI3K DE FÓRMULA I A presente invenção tem por objecto compostos tricíclicos inibidores de PI3K, de fórmula I e as suas formulações farmacêuticas, que são potencialmente úteis no tratamento de doenças, estados clínicos e/ou distúrbios
regulados pelas PI3 cinases. Mais especificamente, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula I.
(D e os seus estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros e sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, em que: as linhas a tracejado indicam uma ligação dupla opcional e pelo menos uma linha a tracejado representa uma ligação dupla. X1 representa S, 0, N, NRa, CR1, C(R2)2 ou -C^hO-; X2 representa C, CR2 ou N; X3 representa C, CR3 ou N; A representa um anel de carbociclilo ou de heterociclilo com 5, 6 ou 7 átomos no núcleo fundido com X2 e X3, eventualmente substituídos com um ou mais grupos R5;
Ra representa H, alquilo C2-C12, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8, - (alcileno Ci-Ci2) - (carbociclilo C3-Ci2) , (alcileno Ci-Ci2) - (heterociclilo com 3-20 átomos no anel), -(alcileno Ci-Ci2)-C (=0) - (heterociclilo com 3-20 átomos no anel), -(alcileno C2-Ci2) - (arilo C6-C20) e -(alcileno Ci-Ci2)-(heterociclilo com 5-20 átomos no anel), em que alquilo, alcenilo, alcinilo, alcileno, carbociclilo, heterociclilo, arilo e heteroarilo estão eventualmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados, independentemente entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C(CH3)3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, - CONHCH3, -CON(CH3)2, —c (ch3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S (O)2ch3, =0, -OH, -OCH3, -S (O)2N(CH3)2, -SCH3, -S(O)2CH3, Ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; R1, R2 e R3 seleccionam-se, independentemente, entre H, F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C (CH3) 3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, — C (CH3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -nhs(O)2ch3, -n (CH3) c (CH3) 2conh2, - N (CH3) ch2ch2s (0) 2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -sch3, -s(O)2ch3, cciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; R4 selecciona-se entre arilo Cg-C2o, heterociclilo com 3-20 átomos no anel e heteroarilo com 5-20 átomos no anel, cada um dos quais está eventualmente substituído com um ou mais grupos R6, seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -ch2ch (CH3) 2, -ch2ch3, -ch2cn, -cn, -cf3, -ch2oh, -co2h, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, - no2, -nh2, -nhch3, nhcoch3, -oh, -och3, -och2ch3, - OCH(CH3)2, -SH, -NHC (=0) NHCH3, -NHC (=0) NHCH2CH3, - NHS (0) 2CH3, -N (CH3) C (=0) 0C (CH3) 3, —S (0) 2CH3, benzilo, benziloxi, morfolinilo, morfolinometilo e 4-metilpiperazin-l-ilo; e R5 selecciona-se, independentemente, entre alquilo C2-C12, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8, - (alcileno C2-C12)- (carbociclilo C3-C12) , -(alcileno C2-C12)-(heterociclilo com 3-20 átomos no anel), -(alcileno C2-C12)-C (=0) -(heterociclilo com 3-20 átomos no anel), -(alcileno C2-C12)-(arilo C8—C20) e -(alcileno C2-C12)-(heteroarilo com
5-20 átomos no anel) ; ou dois grupos R5 geminais dormam anel de carbociclilo ou de heterocicliclo com 3, 4, 5 ou 6 átomos no núcleo, em que alquilo, alcenilo, alcinilo, alcileno, carbociclilo, heterociclilo ou arilo e heteroarilo estão eventualmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados, independentemente entre F, Cl, Br, I, CH3, -CH2CH3, -C(CH3)3, -CH2OH, - CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -ch2f, -chf2, -cf3, -co2h, -coch3, - COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -NHS(O)2CH3, -N (CH3) C (CH3) 2conh2, -N(CH3)CH2CH2S (O)2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -SCH3, —S (0)2CH3, ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; mor selecciona-se entre:
eventualmente substituído com um ou mais grupos R7 seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -ch2ch3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -ch2och3, -chf2, -cn, -cf3, -ch2oh, -ch2och3, -ch2ch2oh, -CH2C (CH3) 20H, -CH(CH3)OH, -CH (CH2CH3) OH, - CH2CH (OH) ch3, -C(CH3)2OH, -C(CH3)2OCH3, -CH(CH3)F, -C(CH3)F2, -CH (CH2CH3)F, -c (CH2CH3) 2f, -co2h, -conh2, -CON (CH2CH3) 2, -coch3, -CON(CH3)2, -no2, -nh2, - NHCH3, -N(CH3)2,
-NHCH2CH3, -NHCH(CH3)2, -nhch2ch2oh, -nhch2ch2och3, -nhcoch3, -nhcoch2ch3, -nhcoch2oh, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)S(O)2CH3, =0, -OH, - och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC (=0) NHCH3, -NHC (=0) NHCH2CH3, -S (0) CH3, -S(O)CH2CH3, -S(O)2CH3, -S(O)2NH2, -S(O)2NHCH3, -S(O)2N(CH3)2 e -ch2s (0) 2ch3.
Mais especificamente, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula I.
(I) e os seus estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros e sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, em que: as linhas a tracejado indicam uma ligação dupla opcional e pelo menos uma linha a tracejado representa uma ligação dupla. X1 representa S, 0, N, NRa, CR1, C(R1)2 ou -C(R1)20-; X2 representa C, CR2 ou N; X3 representa C, CR3 ou N; A representa uma anel de carbociclilo ou de heterociclilo com 5, 6 ou 7 átomos no núcleo fundido com X2 e X3, eventualmente substituídos com um ou mais grupos R5;Ra representa H, alquilo C2-C12, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8, - (alcileno C2-C12) - (carbociclilo C3- C12) , -(alcileno C2-C12)-(heterociclilo C2-C20) , (alcileno C2-C12)-C (=0) - (heterociclilo C2-C20) , -(alcileno C2-C12) - (arilo C6-C20) e -(alcileno C2-C12)-(heteroarilo C2-C2o) , em que alquilo, alcenilo, alcinilo, alcileno, carbociclilo, heterociclilo, arilo e heteroarilo estão eventualmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados, independentemente entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C (CH3) 3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -ch2f, -chf2, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, -c (CH3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S (0) 2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -sch3, -S(O)2CH3, cciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; R1, R2 e R3 seleccionam-se, independentemente, entre H, F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C (CH3) 3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, — C (CH3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -NHS(O)2CH3, -N (CH3) C (CH3) 2conh2, - N (CH3) CH2CH2S (0) 2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -sch3, -S(O)2CH3, ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; R4 selecciona-se entre arilo C6-C20, heterociclilo C2-C20 e heteroarilo C2-C2o, cada um dos quais está eventualmente substituído com um ou mais grupos R6, seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -ch2ch3, -ch2cn, - CN, -cf3, - ch2oh, -co2h, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, -nhcoch3, -oh, -och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -sh, -NHC (=0) nhch3, -NHC (=0) nhch2ch3, -NHC (=0) NHCH (CH3) 2, -NHS (0) 2CH3, -N (CH3) C (=0) OC (CH3) 3, —S(0)2CH3, benzilo, benziloxi, morfolinilo, morfolino-metilo e 4-metilpiperazin-l-ilo; e R5 selecciona-se, independentemente, entre alquilo C2-C12, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8, -(alcileno C2-C12)-(carbociclilo C3-C12) , -(alcileno C2-C12)-(heterociclilo
C2-C20) , - (alcileno C!-C12)-C (=0) - (heterociclilo C2-C2o) , -(alcileno C!-C12) - (arilo C6-C2o) θ -(alcileno C^-C^)-(heteroarilo 03-02ο) ou dois grupos R5 geminais formam um anel de carbociclilo ou de heterocicliclo com 3, 4, 5 ou 6 átomos no núcleo, em que alquilo, alcenilo, alcinilo, alcileno, carbociclilo, heterociclilo, arilo e heteroarilo estão eventualmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C (CH3) 3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -ch2f, -chf2, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, - co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -no2, -nh2, -nhch3, - N(CH3)2, -NHCOCHs, -NHS(O)2CH3, -N (CH3) C (CH3) 2CONH2, N(CH3)CH2CH2S (O)2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -SCH3, —S (0)2CH3, ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; mor selecciona-se entre:
eventualmente substituído com um ou mais grupos R7 seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -ch2och3, -chf2, -cn, -cf3, -ch2oh, -ch2och3, -ch2ch2oh, -CH2C (CH3) 2oh, -CH(CH3)OH, -CH (CH2CH3) oh, -CH2CH (OH) ch3, -C(CH3)2OH, -C(CH3)2OCH3, -CH(CH3)F, -C(CH3)F2,
-CH (CH2CH3)F, -C(CH2CH3)2F, -C02h, -conh2, -CON(CH2CH3)2, -coch3, -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhch2ch3, -NHCH(CH3)2, -nhch2ch2oh, -nhch2ch2och3, -nhcoch3, -nhcoch2ch3, -nhcoch2oh, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)S(O)2CH3, =0, -OH, -och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC (=0) NHCH3, -NHC (=0) NHCH2CH3, -S (0) CH3, -S(O)CH2CH3, -s(O)2ch3, -s(O)2nh2, -s(O)2nhch3, -S(O)2N(CH3)2 e -ch2s (0) 2ch3.
Além disso, deve entender-se que quando uma das modalidades relacionada com um resíduo específico X1, X2, X3, A, Ra, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e mor, tal como descrito aqui, pode ser combinada com qualquer outra modalidade relacionada com outro resíduo X1, X2, X3, A, Ra, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 e mor, tal como aqui descrito.
Exemplos de modalidades dos compostos da presente invenção incluem as fórmulas Ia-n:
Exemplos de modalidades dos compostos da presente invenção incluem os de fórmulas Ia, Ib, Id, Ij e In.
Exemplos de modalidades dos compostos de fórmula I incluem
em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
Exemplos de modalidades dos compostos de fórmula Ia incluem:
em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
Exemplos do composto de fórmula Ia incluem:
em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
Nos exemplos dos compostos de fórmula I o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com dois ou três grupos R5.
Nos exemplos dos compostos de fórmula I o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com dois grupos R5.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem:
em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 representa fenilo substituído com um ou mais grupos seleccionados entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CN, -cf3, -ch2oh, -co2h, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, nhcoch3, -oh, -och3, -OCH2CH3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC (=0) NHCH3, -NHC (=0) NHCH2CH3, -NHS (0) 2CH3, -N(CH3)C(=O)OC(CH3)3 e -S(O)2CH3.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 representa um grupo heteroarilo bicíclico eventualmente substituído seleccionado entre ΙΗ-indazol, lH-indol, indolin-2-ona, 1-(indolin-l-il)etanona, lH-benzo[d] [1,2,3]-triazol, lH-pirazol[3,4-b]piridina, lH-pirazol[3,4-d]-pirimidina, ΙΗ-benzo[d]imidazol, ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona, lH-pirazol[3,4-c]piridina, lH-pirrol[2,3-c]piridina, 3H-imidazo[4,5-c]piridina, 7H-pirrol[2,3-d]pirimidina, 7H-purina, lH-pirazol[4,3-d]pirimidina, 5H-pirrol[3,2-d]-pirimidina, 2-amino-lH-purin-6(9H)-ona, quinolina, quinazolina, quinoxalina, isoquinolina, isoquinolin-1(2H)-ona, 3,4-di-hidroisoquinolin-l(2H)-ona, 3,4-di-hidro-quinolin-2(1H)-ona, quinazolin-2(1H)-ona, quinoxalin-2(1H)-ona, 1,8-naftiridina, pirido[3,4-d]pirimidina e pirido[3,2-b]pirazina.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 eventualmente substituído se selecciona entre:
em que a linha ondulada indica o sítio de ligação.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 eventualmente substituído se selecciona entre:
em que a linha ondulada indica o sítio de ligação.
Numa modalidade da presente invenção R4 representa 1H-indazol-4-ilo.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 representa um grupo heteroarilo monocíclico, eventualmente
substituído, seleccionado entre piridilo, pirimidinilo ou pirazolilo.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 representa um grupo pirimidinilo, eventualmente substituído.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem aqueles em que R4 representa um grupo heteroarilo monocíclico, eventualmente substituído, seleccionado entre 2-furanilo, 3-furanilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-pirazolilo, 4-pirazolilo, 2-pirazinilo, 3-piridazinilo, 4-piridazinilo, 5-piridazinilo, 2- pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 6-pirimidinilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 5-tetrazolilo, 1-tetrazolilo, 2-tetrazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 3-triazolilo e 1-triazolilo.
Numa modalidade da presente invenção R4 representa 2-aminopirimidin-5-ilo.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 se selecciona entre:
em que a linha ondulada indica o sítio de ligação.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem em que R4 está eventualmente substituído:
em que a linha ondulada indica o sítio de ligação.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem dois grupos R5 geminais que formam ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, tetra-hidrofurilo, tetra-hidropiranilo, oxetanilo, azetidinilo, pirrolidinilo, piperidilo, piperazinilo, ciclo-hexilo, morfolino ou 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo.
Exemplos de compostos de fórmula I incluem mor:
em que a linha ondulada indica o sítio de ligação, eventualmente substituída por um ou mais grupos R7 seleccionados independentemente entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -ch2och3, -chf2, -CN, -cf3, -ch2oh, -ch2och3, -ch2ch2oh, - CH2C (CH3) 20H, -CH(CH3)0H, -CH(CH2CH3)OH, -CH2CH(OH)CH3, -C(CH3)2OH, -C(CH3)2OCH3, -CH(CH3)F, -C(CH3)F2, -CH (CH2CH3)F, -C(CH2CH3)2F, -co2h, -conh2, -CON (CH2CH3) 2, -coch3, -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhch2ch3, - NHCH(CH3)2, -nhch2ch2oh, -nhch2ch2och3, -NHCOCHs, -NHCOCH2CH3, - NHCOCH2OH, -NHS (0) 2CH3, -N(CH3) s (0) 2ch3, =0, -OH, -och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -sh, -NHC (=0) nhch3, -NHC (=0) NHCH2CH3, -S (0) CH3, -S(O)CH2CH3, -S(O)2CH3, -S(O)2NH2, -S(O)2NHCH3, -S (O)2N(CH3)2 e -ch2s(0)2ch3.
Numa modalidade da presente invenção um ou mais grupos R5 representam alquilo Ci-Ci2 eventualmente substituído com um ou mais grupos seleccionados entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C(CH3)3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -cf2, -co2h, —coch3, —COC(CH2)3, —co3ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, —c (CH3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, - N(CH3)CH2CH2S (O)2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -sch3, -S(0)2CH3, ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1, 1-dioxo-tiopiran-4-ilo;
Numa modalidade da presente invenção R5 representa metilo eventualmente substituído com um ou mais grupos tal como definidos antes. Numa modalidade, esses substituintes são F, OH e =0.
Numa modalidade da presente invenção um ou mais grupos R5 seleccionam-se, independentemente entre F, Cl, Br, I, -ch3, -ch2ch3, -C(CH3)3, -ch2oh, -ch2ch2oh, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -ch2f, -chf2, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -CONHCH3, -CON(CH3)2, -c (CH3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S (O)2ch3, =0, -OH, -och3, - S (0) 2N (CH3) 2, -SCH3, —S (0) 2CH3, ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo;
Os compostos de fórmula I da presente invenção podem conter centros assimétricos quirais e, por isso, existem em diferentes formas estereoisoméricas. Entende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da presente invenção, incluindo, mas não se limitando a diastereómeros, enantiómeros e atropisómeros, assim como as suas misturas, tal como as misturas racémicas, fazem parte da presente invenção.
Além disso, a presente invenção engloba todos os isómeros geométricos e posicionais. Por exemplo, se um composto de fórmula I incorporar uma ligação dupla ou um anel fundido, as formas cis e trans, assim como as suas misturas, estão englobadas no âmbito da presente invenção. Tanto os isómeros posicionais isolados como as misturas de isómeros posicionais estão também dentro do âmbito da presente invenção.
Na estrutura aqui ilustrada, em que a estereoquimica de qualquer átomo quiral não está especificada, estão contemplados todos os estereoisómeros e incluídos como compostos da presente invenção. Quando a estereoquimica é especificada por uma cunha a cheio ou uma linha a tracejado, representando uma configuração particular, então esse estereoisómero é assim especificado e definido.
Os compostos da presente invenção podem existir nas formas solvatadas e não solvatadas, com dissolventes aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico tais como água, etanol e similares e entende-se que a presente invenção engloba tanto as formas solvatadas como as não solvatadas.
Os compostos da presente invenção podem também existir em diferentes formas tautoméricas e todas essas formas estão englobadas no âmbito da presente invenção. As expressões "tautómero" ou "forma tautomérica" refere-se a isómeros estruturais de diferentes energias que são interconvertíveis por via de uma barreira de baixa energia. Por exemplo, os tautómeros de protões (também conhecidos como tautómeros prototrópicos) incluem interconversões, por via da migração de um protão, tal como isomerizações de ceto-enol e imina-enamina. Os tautómeros de valência incluem interconversões por reorganização dos electrões de ligação. A presente invenção também engloba compostos presente invenção marcados radioactivamente que são idênticos aos citados aqui mas, no caso de um ou mais átomos estarem substituídos por um átomos com uma massa atómica ou um número de massa diferente da massa atómica ou do número de massa normalmente encontrados na natureza. Todos os isótopos de qualquer átomo ou elemento particular, tal como se especificam aqui estão contemplados no âmbito dos compostos da presente invenção e as respectivas utilizações. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da presente invenção incluem isótopos de hidrogénio,carbono, azoto, oxigénio, fósforo, enxofre, flúor, cloro e iodo, tais como 2H (D) , 3H, 21C, 13C, 14,-, 13-K-r 15-K-r 17/-\ 18/-\ 32t-> 33t-> 35 q 1θ τη 3 6z~^ η 12 3 -r- 125 -r- C, N, N, Q, Q, Q, P, P, S, F, Cl, I e I.
Alguns compostos da presente invenção, marcados 3 Ί 4 isotopicamente, (por exemplo, os marcados com He C) são úteis nos ensaios de distribuição nos tecidos de compostos e/ou de substratos. Os isótopos de (3H) e carbono 14 (14C) tritiados são úteis pela facilidade da sua preparação e possibilidade de detecção. Além disso, a substituição com isótopos mais pesados tais como deutério (isto é, 2H) pode trazer algumas vantagens terapêuticas resultantes de uma maior estabilidade metabólica (por exemplo, aumento do semi-periodo de vida in vivo ou diminuição da dose requerida) e por isso podem ser preferíveis nalgumas circunstâncias. Os isótopos que emitem positrões, tais como 150, 13N, 21C e 18F são úteis para os estudos de tomografia de emissão do positrão (conhecida por PET) para examinar a ocupação do receptor do substrato. Os compostos da presente invenção, marcados isotopicamente, podem ser preparados, geralmente, seguindo procedimentos análogos aos descritos nos esquemas e/ou nos exemplos que se seguem, substituindo um reagente marcado isotopicamente por um reagente não marcado isotopicamente.
AVALIAÇÃO BIOLÓGICA A determinação da actividade da cinase PI3 de um composto de fórmula I é possível por meio de processos de detecção directa e indirecta. Fez-se o ensaio de alguns compostos aqui descritos no que respeita a pllOa (alfa) e outras isoformas, actividade de ligação de PI3K (exemplo 901) e actividade, in vitro, contra células tumorais (exemplo 902) . Alguns exemplos de compostos da presente invenção tinham valores de CI50 da actividade de ligação a PI3K inferiores a 10 nM. Alguns compostos da presente invenção tinham valores de CE50 da actividade à base de células inferiores a 100 nM. A actividade citotóxica ou citostática de alguns exemplos de compostos de fórmula I foi medida por: estabelecimento de uma linha de células tumorais de mamíferos em proliferação, num meio de cultura de células, adição de um composto de fórmula I, cultura das células por um período de cerca de 6 horas a cerca de 5 dias; e medição da viabilidade das células (exemplo 902) . Os ensaios in vitro à base de células foram utilizados para medir a viabilidade, isto é, a proliferação (CI50) , citotoxicidade (CE 50) e indução de apoptose (activação de caspase). A potência, in vitro, de exemplos de compostos de fórmula I foi medida por meio de um ensaio de proliferação de células, ensaio luminescente da viabilidade das células CellTiter-Glo®, comercialmente disponível na Promega Corp., Madison, WI (exemplo 902). Este processo homogéneo do ensaio tem por base a expressão recombinante da luciferase Coleoptera (US 5583024; US 5674713; US 5700670) e determina o número de células viáveis na cultura, com base na quantificação do ATP presente, um indicador das células activas sob o ponto de vista metabólico (Crouch et ai (1993) J. Immunol. Meth. 160: 81-88; US 6602677). O ensaio
CellTiter-Glo® foi realizado no formato de 96 ou 384 poços, tornando-o apto para um rastreio automático de elevado rendimento (RER, HTS em inglês) (Cree et ai (1995)
AntiCancer Drugs 6: 398-404). TO procedimento do ensaio homogéneo envolve a adição de um único reagente (reagente CellTiter-Glo®) directamente às células em cultura num meio complementado com soro. Não são necessárias as etapas de lavagem de células, eliminação do meio e pipetagem múltipla. O sistema detecta poucas células, da ordem de 15 células/poço num formato de 384 poços, em 10 minutos, após a adição do reagente e da sua mistura. O formato homogéneo de "adicionar à mistura e medir" resulta na lise das células e gera um sinal luminescente proporcional à quantidade de ATP presente. A quantidade de ATP é directamente proporcional ao número de células presentes numa cultura. O ensaio CellTiter-Glo® gera um sinal luminescente do "tipo brilhante" produzido pela reacção de luciferase que tem um semi-periodo de vida geralmente maior do que cinco horas, consoante o tipo de células e o meio utilizados. As células viáveis reflectem-se em unidades relativas de luminescência (URL). O substrato, luciferina de bezouro, é descarboxilado de forma oxidante por recombinação de luciferase de pirilampo com a concomitante conversão de ATP em AMP e geração de fotões. O prolongamento do semi-periodo de vida elimina a necessidade de utilizar injectores de reagente e providencia flexibilidade para um processamento em modo continuo ou em lotes das várias placas. Este ensaio de proliferação de células pode ser utilizado com vários formatos de vários poços, por exemplo, um formato de 96 ou 384 poços. Os dados podem ser registados por meio de um luminómetro ou um dispositivo de imagem de câmara de transferência de carga. O resultado da luminescência é apresentado como unidades relativas de luz (URL), medido ao longo do tempo.
Os efeitos anti-proliferativos de exemplos de compostos de fórmula I foram medidos por meio do ensaio CellTiter-Glo® (exemplo 902) em função de várias linhas de células de tumor. Os valores da potência CE50 foram estabelecidos para os compostos ensaiados. A gama de actividades de potência das células, in vitro, foi de cerca de 100 nM a cerca de 10 μΜ. Alguns dos compostos ensaiados tinham valores de CE50 inferiores an 1 micromolar (1 μΜ) na paragem da proliferação de algumas linhas de células de tumor.
Mediram-se algumas propriedades de ADME (absorção, distribuição, metabolização e eliminação) para alguns exemplos dos compostos por meio de ensaios incluindo: permeabilidade de caco-2 (exemplo 903), depuração de hepatócitos (exemplo 904), inibição do citocroma P450 (exemplo 905), indução do do citocroma P450 (exemplo 906), ligação da proteína do plasma (exemplo 907) e bloqueio do canal de hERG (exemplo 908) .
Alguns exemplos de compostos foram ensaiados quanto à eficácia em estudos de eacalonamento da dose em modelos de murganhos pelados Taconic NCR portadores de tumores (exemplo 909) . O modelo de murganho com xeno-enxerto subcutâneo U-87 MG Merchant (uma variante interna derivada das células U-87 MG da ATCC, Manassas, VA) foi utilizado para ensaiar compostos de fórmula I em doses crescentes em conjunto com o veículo (MCT, controlo negativo). Mediu-se o retardamento do crescimento do tumor no seguimento do início de uma dosagem oral diária, durante < 28 dias. Mediu-se a alteração do peso corporal durante o tratamento como um indicador de segurança. A resposta farmacocinética e farmacodinâmica à administração do fármaco, dependente da dose e do tempo, neste mesmo modelo de murganho com xeno-enxerto subcutâneo foi também examinada (exemplo 913) .
Avaliou-se, in vitro, o potencial de penetração (propriedades) na barreira sangue-cérebro utilizando células MDCK transfectadas de forma estável com glicoproteína (MDR1) ou bcrpl (exemplo 911). Determinou-se a penetração no cérebro, in vivo, medindo as concentrações do composto (exemplo 912) e/ou medindo a regulação da via de PI3K (exemplo 913) no cérebro de ratos, no seguimento de uma dose única IV ou oral. Mediu-se a eficácia no tumor do cérebro no exemplo 914 por meio de engenharia com GS-2 (glioblastoma multiforme (GBM) humano tratado por engenharia para expressar luciferase). 0 efeito de uma dose oral diária no crescimento de implantes intracranianos de GS-2 foi avaliado por imagiologia por ressonância magnética (IRM). Administrou-se aos murganhos, com xenoenxertos de tumor de células U-87 MG, doses de fármaco ou de veiculo e analisaram-se as amostras quanto à presença de PK, PD e/ou fez-se a análise de IHQ (exemplo 915).
Os exemplos dos compostos de fórmula I No. 101-177, no quadro 1, foram preparados, caracterizados e ensaiados quanto à inibição de PI3K alfa (CI50 ou ΚΞ da ligação a pllO alfa inferior a 1 micromolar, μΜ) e à select ividade, de acordo com os processos da presente invenção e têm as estruturas que se seguem e os nomes correspondentes (ChemBioDraw Ultra, versão 11.0, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA).
Quadro 1.
ADMINISTRAÇÃO DE COMPOSTOS DE FÓRMULA I
Os compostos de fórmula I da presente invenção podem ser administrados por qualquer via apropriada ao estado clínico a ser tratado. As vias apropriadas incluem as vias oral, parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intradérmica, intratecal e epidural), transdérmica, rectal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal, intraperitoneal, intra-pulmonar e intranasal. Para o tratamento de imuno-supressão local, os compostos podem ser administrados por via intralesional, incluindo perfusão ou qualquer outra forma de contacto do enxerto com o inibidor, antes do transplante. Deve entender-se que a via preferida pode variar, por exemplo, com o estado clínico do receptor. Quando o composto é administrado oralmente, pode ser formulado sob a forma de uma pastilha, cápsula, comprimido, etc., com um veiculo ou um excipiente, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Quando o composto é administrado parentericamente, pode ser formulado com um veiculo parentérico, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e numa dose unitária de uma forma injectável, unitária tal como se descreve em detalhe a seguir.
Uma dose para tratar doentes humanos pode variar entre cerca de 10 mg e cerca de 1000 mg do composto de fórmula I. Uma dose típica pode ser de cerca de 100 mg a cerca de 300 mg do composto. Pode-se administrar uma dose uma vez por dia (QID) , duas vezes por dia (BID) ou mais frequentemente, consoante as propriedades farmacodinâmicas ou farmacocinéticas, incluindo absorção, distribuição, metabolismo e excreção do composto particular. Além disso, os factores de toxicidade podem influenciar o regime de dosagem e de administração. Quando administrado oralmente, a pastilha, a cápsula ou o comprimido podem ser ingeridos diariamente ou menos frequentemente, durante um período de tempo especificado. O regime pode ser repetido durante um certo número de ciclos de terapêutica.
PROCESSOS DE TRATAMENTO COM OS COMPOSTOS DE FORMULA I
Os compostos de fórmula I da presente invenção são úteis para o tratamento de doenças, estados clínicos e/ou distúrbios hiperproliferativos, incluindo, mas não se limitando aos caracterizados pela hiper-expressão de lípido-cinases, por exemplo, a cinase PI3. De acordo com isto, um dos aspectos da presente invenção inclui processos de tratamento ou de prevenção de doenças ou estados clínicos que podem ser tratados ou prevenidos pela inibição de lípido-cinases, incluindo a PI3. Numa modalidade, o processo compreende a administração, a um mamífero que disso necessite, de uma quantidade eficaz, sob o ponto de vista terapêutico, de um composto de fórmula I ou de um seu estereoisómero, isómero geométrico, tautómero ou sal, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Uma modalidade da presente invenção inclui um processo de tratamento de cancro num doente que compreende a administração, ao referido doente, de uma quantidade eficaz, sob o ponto de vista terapêutico, de um composto da presente invenção, em que o cancro é cancro da mama, do ovário, do colo do útero, da próstata, dos testículos, do tracto genito-urinário, do esófago, da laringe, um glioblastoma, um neuroblastoma, cancro do estômago, da pele, queratoacantoma, cancro do pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma de células grandes, carcinoma do pulmão de células não pequenas (CPCNP), carcinoma de células pequenas, adenocarcinoma do pulmão, cancro ósseo, do cólon, adenoma, cancro do pâncreas, adenocarcinoma, cancro da tiróide, carcinoma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, malenoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e das passagens biliares, carcinoma do rim, cancro renal, pancreático, distúrbios mielóides, linfoma, dos trico-leucitos, da cavidade bucal, da naso-faringe, da faringe, dos lábios, da língua, da boca, do intestino delgado, do cólon-recto, do intestino grosso, do recto, do cérebro e do sistema nervoso central, cancro de Hodgkin ou leucemia.
Numa modalidade, o cancro é um cancro do cérebro.
Numa modalidade da presente invenção, o processo compreende ainda a administração, ao doente, de um agente terapêutico adicional seleccionado entre um agente quimio- terapêutico, um agente terapêutico anti-angiogénese, um agente anti-inflamatório, um agente imuno-regulador, um factor neurotrópico, um agente para o tratamento de doenças cardiovasculares, um agente para o tratamento de doenças do fígado, um agente anti-viral, um agente para o tratamento de distúrbios do sangue, um agente para o tratamento de diabetes e um agente para o tratamento de distúrbios de imunodeficiência.
Numa modalidade da presente invenção, o agente terapêutico adicional é o bevacizumabe.
Numa modalidade, o doente humano é tratado com um composto de fórmula I e um veículo ou adjuvante, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, em que o referido composto de fórmula I está presente numa quantidade para inibir a actividade da cinase PI3, de uma forma detectável.
Os compostos de fórmula I também podem ser úteis para o tratamento de doenças hiper-proliferativas caracterizadas por uma hiper-expressão de proteína-cinases tais como as codificadas por PIM; os genes Pim-1, Pim-2 e Pim-3 (Proviral hisertion, Moloney) que estão implicados no desenvolvimento de linfoma e de tumores sólidos (Cuypers et al. (1984) Cell, vol. 37 (1) pp. 141-50; Selten et al. (1985) EMBO J. vol. 4 (7) pp. 1793-8; van der Lugt et al. (1995) EMBO J. vol. 14 (11) pp. 2536-44; Mikkers et al. (2002) Nature Genetics, vol. 32 (1) pp. 153-9; van Lohuizen et al. (1991) Cell, vol. 65 (5) p. 737-52.
Os cancros que podem ser tratados de acodo com os processos da presente invenção, incluem, mas não se limitam a cancro da mama, do ovário, do colo do útero, da próstata, dos testículos, do tracto genito-urinário, do esófago, da laringe, um glioblastoma, um neuroblastoma, cancro do estômago, da pele, queratoacantoma, cancro do pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma de 'células grandes, carcinoma do pulmão de células não pequenas (CPCNP), carcinoma de células pequenas, adenocarcinoma do pulmão, cancro ósseo, do cólon, adenoma, cancro do pâncreas, adenocarcinoma, cancro da tiróide, carcinoma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e das passagens biliares, carcinoma do rim, distúrbios mielóides, distúrbios linfóides, dos tricoleucitos, da cavidade bucal e da faringe (oral), dos lábios, da língua, da boca, da faringe, do intestino delgado, do cólon-recto, do intestino grosso, do recto, do cérebro e do sistema nervoso central, cancro de Hodgkin e leucemia.
Os compostos de fórmula I também podem ser úteis para o diagnóstico ou o tratamento in vitro, in situ e in vivo de células de mamíferos, organismos ou estados clínicos patológicos associados, tais como inflamação sistémica e local, doenças imuno-inflamatórias tais como artrite reumatóide, supressão imunitária, rejeição de transplante de órgãos, alergias, colite ulcerosa, doença de Crohn, dermatite, asma, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjõrgren, esclerose múltipla, escleroderma/esclerose sistémica, púrpura trombocitopénica idiopática (PTI), vasculite de anticorpos citoplásmicos anti-neutrófilos (ACAN), doença pulmonar obstrutiva crónica (DPOC), psoríase e para efeitos protectores genéricos das articulações,
Os compostos de fórmula I podem ser úteis para o tratamento de estados clínicos do cérebro e do sistema nervoso central, o que requer o transporte através da barreira de sangue-cérebro. Alguns compostos de fórmula I têm propriedades penetrantes através da barreira de sangue-cérebro, favoráveis para se libertarem no cérebro. Os distúrbios do cérebro que podem ser eficazmente tratados com os compostos de fórmula I incluem tumores primários do cérebro e metástases, tais como glioblastoma e melanoma.
Os compostos de fórmula I podem ser úteis para o tratamento de distúrbios oculares tais como degeneração macular relacionada com a idade (DGI) húmida e seca e edema da retina, por meio da administração localizada do olho. Alguns compostos de fórmula I têm propriedades favoráveis para administração e absorção pelo olho. Alguns compostos de fórmula I podem aumentar a eficácia e prolongar a duração da resposta para o tratamento de DGI húmida em combinação com ranibizumabe (LUCENTIS®, Genentech, Inc.) e bevacizumabe (AVASTIN®, Genentech, Inc.).
Um outro aspecto da presente invenção tem por objecto um composto da presente invenção para ser utilizado no tratamento de doenças ou estados clínicos aqui descritos, num mamífero, por exemplo, um ser humano que sofra dessa doença ou estado clinico. Também tem por objecto a utilização de um composto da presente invenção na preparação de um medicamento para o tratamento das doenças ou estados clínicos aqui descritos, num animal de sangue quente, tal como um mamífero, por exemplo, um ser humano que sofra desse distúrbio.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste num composto da presente invenção para ser utilizado como uma substância activa sob o ponto de vista terapêutico.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste na utilização de um composto da presente invenção para o tratamento de cancro.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste na utilização de um composto da presente invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento de cancro.
Um aspecto adicional da presente invenção consiste num composto da presente invenção para ser utilizado no tratamento de cancro.
Noutro aspecto da presente invenção, o cancro é um cancro da mama, do ovário, do colo do útero, da próstata, dos testículos, do tracto genito-urinário, do esófago, da laringe, um glioblastoma, um neuroblastoma, cancro do estômago, da pele, queratoacantoma, cancro do pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma de células grandes, carcinoma do pulmão de células não pequenas (CPCNP), carcinoma de células pequenas, adenocarcinoma do pulmão, cancro ósseo, do cólon, adenoma, cancro do pâncreas, adenocarcinoma, cancro da tiróide, carcinoma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e das passagens biliares, carcinoma do rim, cancro renal, pancreático, distúrbios mielóides, linfoma, dos trico-leucitos, da cavidade bucal, da naso-faringe, da faringe, dos lábios, da língua, da boca, do intestino delgado, do cólon-recto, do intestino grosso, do recto, do cérebro e do sistema nervoso central, cancro de Hodgkin ou leucemia.
Noutro aspecto da presente invenção, o cancro é um cancro do cérebro.
FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS
Para utilizar um composto de fórmula I para o tratamento terapêutico (incluindo o tratamento profiláctico) de mamíferos, incluindo seres humanos, é normalmente formulado de acordo com a prática farmacêutica normalizada, sob a forma de uma composição farmacêutica. De acordo com este aspecto da presente invenção providencia-se uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção em associação com um diluente ou um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Uma modalidade da presente invenção compreende uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção e um veículo, agente de deslizamento, diluente ou excipiente, aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Uma modalidade da presente invenção compreende um processo para a produção de uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
Uma modalidade da presente invenção inclui uma composição farmacêutica, tal como descrita antes, compreendendo ainda um agente terapêutico adicional seleccionado entre um agente quimioterapêutico, um agente anti-inflamatório, um agente imuno-regulador, um factor neurotrópico, um agente para o tratamento de doenças cardiovasculares, um agente para o tratamento de doenças do fígado, um agente anti-viral, um agente para o tratamento de distúrbios do sangue, um agente para o tratamento de diabetes e um agente para o tratamento de distúrbios de imunodeficiência.
Uma formulação típica prepara-se misturando um composto de fórmula I e um veículo, diluente ou excipiente. Os veículos, diluentes e excipientes apropriados são bem conhecidos dos especialistas na técnica e incluem materiais tal como hidratos de carbono, ceras, polímeros solúveis em água e/ou dilatáveis, materiais hidrofílicos ou hidro-fóbicos, gelatina, óleos, dissolventes, água e similares. 0 veículo, diluente ou excipiente particular utilizado dependerá dos meios e finalidades em que se aplicará o composto da presente invenção. Os dissolventes seleccionam-se, geralmente, com base nos dissolventes reconhecidos pelos especialistas na matéria como seguros (GRAS) para serem administrados a um mamífero. Em geral, os dissolventes seguros são dissolventes aquosos não tóxicos tais como água e outros dissolventes não tóxicos que são solúveis ou miscíveis com água. Os dissolventes aquosos apropriados incluem água, etanol, propilenoglicol, poli-etilenoglicóis (por exemplo, PEG 400, PEG 300), etc. e as suas misturas. As formulações também podem incluir um ou mais tampões, agentes de estabilização, tensioactivos, agentes de molhagem, agentes de lubrificação, emulsionantes, agentes de suspensão, conservantes, anti-oxidantes, agentes com conferem opacidade, agentes de deslizamento, auxiliares de processamento, corantes, adoçantes, agentes que conferem perfume, agentes que conferem gosto e outros aditivos conhecidos para providenciarem uma apresentação elegante do fármaco (isto é, um composto da presente invenção ou uma sua composição farmacêutica) ou auxiliar do fabrico do produto farmacêutico (isto é, um medicamento).
As formulações podem ser preparadas utilizando procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Por exemplo, dissolve-se a substância do fármaco a granel (isto é, o composto da presente invenção ou a fórmula estabilizada do composto de fórmula I, por exemplo, um complexo com um derivado de ciclodextrina ou outro agente de complexação conhecido) num dissolvente apropriado, na presença de um ou mais dos excipientes descritos antes. 0 composto da presente invenção é normalmente formulado em formas farmacêuticas para providenciar uma dosagem do fármaco facilmente controlável e para permitir ao doente tolerância com o regime prescrito. A composição farmacêutica (ou formulação) pode ser embalada numa variedade de formas que dependem do processo de administração do fármaco. Geralmente, um artigo para ser distribuído inclui uma embalagem com uma formulação farmacêutica numa forma apropriada. As embalagens apropriadas são bem conhecidas dos especialistas na matéria e incluem materiais tais como frascos (de plástico e de vidro), saquetas, ampolas, sacos de plástico, cilindros metálicos e similares. A embalagem ainda pode incluir uma forma de montagem inviolável para evitar o acesso imprudente ao conteúdo da embalagem. Além disso, a embalagem tem inserido um rótulo que descreve o conteúdo da embalagem. 0 rótulo pode também incluir os avisos apropriados.
As formulações farmacêuticas dos compostos da presente invenção podem ser preparadas para várias vias e tipos de administração. Por exemplo, um composto de fórmula I, com o grau desejado de pureza pode ser misturado, eventualmente, com diluentes, veículos, excipientes ou estabilizantes aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980) 16a edição, Osol, A. Ed.), sob a forma de uma formulação liofilizada, pó moído ou uma solução aquosa. A formulação pode ser produzida por mistura, à temperatura ambiente, com o pH apropriado e no grau de pureza desejado, com veículos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, isto é, veículos que não são tóxicos para os receptores, nas doses e concentrações utilizadas. 0 pH da formulação depende principalmente da utilização particular e da concentração do composto, mas pode variar entre cerca de 3 e cerca de 8. A formulação num tampão de acetato, a pH 5 é uma modalidade apropriada. 0 composto da presente invenção, para ser utilizado aqui, é preferencialmente esterilizado. Em particular, as formulações que se utilizam para administração in vivo devem ser esterilizadas. Essa esterilização consegue-se facilmente por filtração através de membranas de filtração esterilizadas. 0 composto pode ser armazenado, normalmente, sob a forma de uma composição sólida, uma formulação liofilizada ou como uma solução aquosa.
As composições farmacêuticas da presente invenção, que compreendem um composto de fórmula I, serão formuladas, doseadas e administradas numa determinada maneira, isto é nas quantidades, concentrações, esquemas, vias, veículos e formas de administração, consistentes com boas práticas médicas. Os factores a ter em consideração neste contexto incluem o distúrbio particular a ser tratado, o mamífero particular a ser tratado, o estado clínico do doente individual, a causa do distúrbio, o sítio de administração do agente, o processo de administração, o esquema de administração e outros factores conhecidos dos especialistas médicos. A "quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico" do composto a ser administrado será determinada por essas considerações e consiste na quantidade mínima necessária para prevenir, melhorar ou tratar o distúrbio mediado pelo factor de coagulação. Essa quantidade está normalmente abaixo da quantidade que é tóxica para o hospedeiro ou torna o hospedeiro significativamente mais susceptível a hemorragia.
Como proposta genérica, a quantidade inicial eficaz, sob o ponto de vista farmacêutico, por dose do composto de fórmula I, administrado parentericamente, estará no intervalo de cerca de 0,01-100 mg/kg, nomeadamente cerca de 0,1 a 20 mg/kg do peso corporal do doente, por dia, estando normalmente a quantidade de composto inicial a ser utilizado no intervalo de 0,3 a 15 mg/kg/dia.
Os diluentes, veículos, excipientes e estabilizantes aceitáveis não são tóxicos para os receptores nas doses e concentrações utilizadas e incluem tampões tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; anti-oxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de amónio e octadecildimetilbenzilo; cloreto de hexametónio; cloreto de benzalcónio, cloreto de benzetónio; fenol, álcool de butilo ou de benzilo; alcil-parabenos tais como metil ou propil-parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipéptidos de baixo peso molecular (inferior a cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina do soro, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; mono-sacáridos, dissacáridos e outros hidratos de carbono incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açúcares tais como sacarose, manitol, tre-halose ou sorbitol; contra-iões formando sais tais como os de sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn- proteína); e/ou tensioactivos não iónicos tais como TWEEN™, PLURONICS™ ou polietileno-glicol (PEG). Os princípios activos farmacêuticos podem também ser incluídos em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulose ou de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacilato), respectivamente, em sistemas coloidais de administração de fármacos (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, micro-emulsões, nano-partícuias e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Essas técnicas estão descritas em Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edição, Osol, A. Ed. (1980) .
Podem preparar-se preparações dos compostos de fórmula I de libertação sustentada. Exemplos de preparações de libertação sustentada apropriadas incluem matrizes semi-permeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo um composto de fórmula I, cujas matrizes estão sob a forma de artigos moldados, por exemplo, películas ou microcápsulas. Exemplos de matrizes de libertação sustentada incluem poliésteres, hidrogéis (por exemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato) ou poli (álcool de vinilo)), poliláctidos (US 3773919), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama-etil-L-glutamato, acetato de etileno-vinilo não degradável, copolímeros degradáveis de ácido láctico - ácido glicólico tal como LUPRON DEPOT™ (microsferas injectáveis compostas por copolímeros de ácido láctico - ácido glicólico e acetato de leuprolide) e ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.
As formulações incluem as que são apropriadas para as vias de administração que se detalham aqui. As formulações podem apresentar-se, de forma conveniente, em formas farmacêuticas unitárias e podem ser preparadas por qualquer um dos processos bem conhecidos na técnica farmacêutica. As técnicas e as formulações encontram-se geralmente em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co. , Easton, PA) . Esses processos incluem a etapa de associar o principio activo com o veiculo que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral preparam-se as formulações associando uniformemente e intimamente o principio activo com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos e depois, se necessário, moldando o produto.
As formulações de um composto de fórmula I apropriadas para administração oral podem ser preparadas como unidades discretas tais como pastilhas, cápsulas, hóstias ou comprimidos, cada um dos quais contém uma quantidade pré-determinada de um composto de fórmula I.
Os comprimidos sujeitos a compressão podem ser preparados por compressão do princípio activo, numa máquina apropriada, numa forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos, eventualmente misturados com um ligante, lubrificante, diluente inerte, conservante, tensioactivo ou agente dispersante. Os comprimidos moldados podem ser preparados por moldagem, numa máquina apropriada, de uma mistura do princípio activo em pó, humedecido com um diluente líquido inerte. Os comprimidos podem eventualmente ser revestidos ou ter incisões e eventualmente são formulados de modo a providenciarem uma libertação lenta ou controlada dos princípios activos.
Podem preparar-se, para uso oral, comprimidos, pastilhas, pastilhas expectorantes, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveis ou grânulos, emulsões, cápsulas duras ou moles, por exemplo, cápsulas de gelatina, xaropes ou elixires. As formulações dos compostos de fórmula I destinados a utilização oral podem ser preparadas de acordo com qualquer processo conhecido na técnica para o fabrico de composições farmacêuticas e essas composições podem conter um ou mais agentes incluindo agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes, de modo a providenciar uma preparação com bom sabor. São aceitáveis os comprimidos que contêm o principio activo misturado com excipientes não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, que são apropriados para o fabrico de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio ou de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou de sódio; agentes de granulação e de desintegração, tal como amido de milho ou ácido alginico; agentes de ligação tal como amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem não estar revestidos ou estar revestidos por técnicas conhecidas incluindo microencapsulação para desintegração retardada e adsorção no tracto gastrointestinal e assim providenciam uma acção sustentada ao longo de um período mais longo. Por exemplo, pode-se utilizar um material de libertação retardada no tempo tal como monoestearato de glicerol ou diestearato de glicerilo, isoladamente ou com uma cera.
Para o tratamento dos olhos ou de outros tecidos externos, por exemplo, boca e pele, as formulações podem ser aplicadas como uma pomada ou um creme tópico contendo os princípios activos, numa quantidade, por exemplo, de 0,075 a 20 % p/p. Quando formulados como uma pomada, os princípios activos podem ser utilizados quer com uma parafina, quer com uma base de pomada miscível com água.
Alternativamente, os princípios activos podem ser formulados sob a forma de um creme com uma base de creme de óleo em água.
Se desejado, a fase aquosa da base do creme pode incluir um álcool poli-hídrico, isto é, um álcool com dois ou mais grupos hidroxilo tais como propileno-glicol, butano, 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e poli-etilenoglicol (incluindo PEG 400) e as suas misturas. As formulações tópicas podem incluir, desejavelmente, um composto que aumenta a absorção ou a penetração do princípio activo através da pele ou de outras áreas afectadas. Exemplos desses intensificadores da penetração dérmica incluem dimetil-sulfóxido e análogos relacionados. A fase oleosa das emulsões da presente invenção pode ser constituída a partir de ingredientes conhecidos, de uma maneira conhecida. Embora a fase possa conter apenas um emulsionante, é desejável que contenha uma mistura de pelo menos um emulsionante com uma gordura ou um óleo ou tanto com uma gordura como com um óleo. Preferencialmente inclui-se um emulsionante hidrofílico em conjunto com um emulsionante lipofílico, que actua como um estabilizante. Em conjunto, os emulsionantes, com ou sem estabilizantes, constituem a chamada cera emulsionante e a cera, em conjunto com um óleo ou com uma gordura, constituem a chamada base de pomada emulsionante que forma a fase oleosa dispersa das formulações em creme. Os emulsionantes e os estabilizantes da emulsão, apropriados para serem utilizados na formulação da presente invenção, incluem Tween® 60, Span® 80, álcool cetoestearílico, álcool benzílico, álcool miristílico, mono-estearato de glicerilo e sulfato de laurilo e sódio.
As suspensões aquosas dos compostos de fórmula I contêm os materiais activos misturados com excipientes apropriados para o fabrico de suspensões aquosas. Esses excipientes incluem um agente de suspensão tal como carboximetilcelulose sódica, croscarmelose, povidona, metilcelulose, hidroxipropil-metilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma de acácia e agentes dispersantes ou de molhagem tais como fosfatideos de ocorrência natural (por exemplo, lecitina), um produto de condensação de um óxido de alcileno com um ácido gordo (por exemplo, estearato de polioxietileno) , um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa (por exemplo, heptadecaetilenoxi-cetanol), um produto de condensação de um óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido gordo e de anidrido de hexitol (por exemplo, mono-oleato de polioxietileno e sorbitano). A suspensão aquosa pode também conter um ou mais conservantes tais como p-hidroxibenzoato de etilo ou de n-propilo, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose ou sacarina.
As composições farmacêuticas dos compostos de fórmula I podem estar sob a forma de uma preparação injectável esterilizada, tal como uma suspensão aquosa ou oleaginosa esterilizada, injectável. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando os agentes de dispersão ou de molhagem apropriados e os agentes de suspensão mencionados antes. A preparação injectável esterilizada pode set também uma solução ou uma suspensão injectável esterilizada num diluente ou num dissolvente não tóxico, aceitável sob o ponto de vista parentérico, tal como uma solução de 1,3-butanodiol ou pode ser preparada sob a forma de um pó liofilizado. Entre os veículos e dissolventes aceitáveis que podem ser utilizados estão a água, a solução de Ringer e uma solução isotónica de cloreto de sódio. Além disso, como meio dissolvente ou de suspensão pode-se utilizar, convencionalmente, óleos não voláteis esterilizados. Com esta finalidade, podem utilizar-se óleo não voláteis insípidos incluindo mono ou diglicéridos sintéticos. Além disso, pode-se utilizar nas preparações injectáveis ácidos gordos como ácido oleico. A quantidade de princípio activo que pode ser combinada com o material veicular para produzir uma forma farmacêutica simples irá varia consoante o hospedeiro tratado e o modo particular de administração. Por exemplo, uma formulação que se liberta ao longo do tempo e que se pretende para administração oral a seres humanos contém aproximadamente 1 a 1000 mg de material activo composto com uma quantidade apropriada e conveniente de material veicular que pode variar de cerca de 5 a cerca de 95 % das composições totais (peso:peso). A composição farmacêutica pode ser preparada para providenciar quantidades para administração facilmente mensuráveis. Por exemplo, uma solução aquosa que se pretende para uma infusão intravenosa pode conter entre cerca de 3 e 500 pg de princípio activo por mililitro de solução, para que possa ocorrer uma infusão com um volume apropriado a um fluxo de cerca de 30 mL/h.
As formulações apropriadas para administração parentérica incluem soluções aquosas e não aquosas, esterilizadas, para injecção, que podem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões aquosas e não aquosas, esterilizadas que podem incluir agentes de suspensão e agentes de espessamento.
As formulações apropriadas para administração tópica nos olhos também incluem gotas para os olhos em que o principio activo está dissolvido ou suspenso num veiculo apropriado, especialmente um dissolvente aquoso para o principio activo. 0 principio activo está presente, preferencialmente, nessas formulações, numa concentração de cerca de 0,5 a 20 % p/p, cerca de 0,5 a 10 % p/p ou cerca de 1,5 % p/p.
As formulações apropriadas para administração tópica na boca incluem pastilhas expectorantes contendo o principio activo numa base aromatizada, normalmente sacarose e acácia ou tragacanto; pastilhas contendo o principio activo numa base inerte tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia; e colutórios que contêm o principio activo num veiculo liquido apropriado.
As formulações para administração rectal podem apresentar-se sob a forma de supositórios com uma base apropriada contendo, por exemplo, manteiga, de cacau ou um salicilato.
As formulações apropriadas para administração intra-pulmonar ou nasal têm uma dimensão de partícula, por exemplo, no intervalo de 0,1 a 500 mícron (incluindo dimensões de partículas num intervalo entre 0,1 e 500 mícron com incrementos em mícron tais como 0,5, 1, 30 mícron, 35 mícron, etc.), que se administram por inalação rápida através da passagem nasal ou por inalação através da boca de modo a atingir os sacos alveolares. As formulações apropriadas incluem solução aquosas ou oleosas do princípio activo. As formulações apropriadas para administração por aerossol ou pó anidro podem ser preparadas de acordo com processos convencionais e podem ser administradas com outros agentes terapêuticos tais como compostos utilizados no tratamento ou na profilaxia de distúrbios tal como os descritos a seguir.
As formulações apropriadas para administração vaginal podem apresentar-se sob a forma de pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em spray contendo, para além do principio activo, veículos que se conhecem da técnica como sendo apropriados.
As formulações podem ser embaladas em embalagens com uma única dose ou com várias doses, por exemplo, ampolas e frascos selados e podem ser armazenadas em condições de liofilização requerendo apenas a adição do veículo líquido esterilizado, por exemplo, água para injecção, imediatamente antes da sua utilização. As soluções e suspensões para injecções extemporâneas preparam-se a partir de pós esterilizados, grânulos e comprimidos do tipo previamente descrito. As formulações de doses unitárias proferidas são as que contêm uma dose diária ou uma unidade com uma sub-dose diária, como foi citado aqui antes ou uma fracção apropriada do princípio activo. A presente invenção ainda tem por objecto composições para veterinária compreendendo pelo menos um princípio activo, tal como definido antes, em conjunto com um veículo de veterinária. Os veículos de veterinária são materiais úteis para administrar a composição e podem ser materiais sólidos, líquidos ou gasosos que são inertes ou aceitáveis na técnica veterinária e são compatíveis com o princípio activo. Estas composições veterinárias podem ser administradas parentericamente, oralmente ou por qualquer outra via desejada.
TERAPÊUTICA DE COMBINAÇÃO
Os compostos de fórmula I podem ser utilizados isoladamente ou em combinação com outros agentes terapêuticos para o tratamento de uma doença ou de um distúrbio aqui descrito, tal como um distúrbio hiper-proliferativo (por exemplo, cancro). Nalgumas modalidades, combina-se um composto de fórmula I, numa formulação de combinação farmacêutica ou num regime de dosagem, como uma terapêutica de combinação, com um segundo composto que tem propriedades anti-hiperproliferativas ou que é útil para o tratamento de um distúrbio hiperproliferativo (por exemplo, cancro). 0 segundo composto da formulação da combinação farmacêutica ou do regime de dosagem preferencialmente tem actividades complementares às do composto de fórmula I, de tal modo que não se afectem adversamente um ao outro. Esses compostos apresentem-se, apropriadamente, em combinação, em quantidades que são eficazes para o fim pretendido. Numa modalidade, uma composição da presente invenção compreende um composto de fórmula I em combinação com um agente quimioterapêutico tal como aqui descrito. A terapêutica de combinação pode ser administrada num regime simultâneo ou sequencial Quando administrada sequencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais tomas. A administração combinada inclui co-administração, utilizando formulações separadas ou uma única formulação farmacêutica e a administração consecutiva, em qualquer ordem, em que preferencialmente há um período de tempo em que ambos (ou todos) os agentes activos exercem, simultaneamente as suas actividades biológicas.
As doses apropriadas para qualquer um dos agentes anteriores co-administrados são as que são actualmente utilizadas e podem ser diminuídas devido à acção combinada (sinergia) do agente recentemente identificado e outros agentes quimioterapêuticos ou outros tratamentos. A terapêutica de combinação pode providenciar "sinergia" e prova ser "sinérgica", isto é, o efeito alcançado quando os princípios activos são utilizados em conjunto é superior à soma dos efeitos que resultam da utilizam dos compostos separadamente. Pode conseguir-se um efeito sinérgico quando os princípios activos são: (1) co-formulados e administrados ou libertados simultaneamente numa formulação farmacêutica unitária combinada; (2) administrados em alternância ou em paralelo, como formulações separadas; ou (3) por qualquer outro regime. Quando administrados em terapêutica de alternância, pode-se atingir um efeito sinérgico quando os compostos são administrados ou libertados sequencialmente, por exemplo, por meio de injecções diferentes em seringas separadas, pastilhas ou cápsulas separadas ou infusões separadas. Em geral, durante a terapêutica de alternância, uma dose eficaz de cada princípio activo é administrada sequencialmente, isto é, em série, enquanto na terapêutica de combinação, as doses eficazes de dois ou mais princípios activos são administradas em conjunto.
Numa modalidade particular da terapêutica anti-cancro, pode-se combinar um composto de fórmula I ou um seu estereoisómero, isómero geométrico, tautómero, solvato, metabólito ou sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico ou um seu pró-fármaco, com outros agentes quimioterapêuticos, hormonais ou anticorpos, tal como os descritos aqui, assim como pode-se combinar com uma terapêutica cirúrgica e radioterapia. As terapêuticas de combinação, de acordo com a presente invenção, compreendem assim a administração de pelo menos um composto de fórmula I ou um seu estereoisómero, isómero geométrico, tautómero, solvato, metabólito ou sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico ou um seu pró-fármaco e a utilização de pelo menos um outro tratamento do cancro. As quantidades dos compostos de fórmula I e de outros agentes quimio-terapêuticos, activos sob o ponto de vista farmacêutico e os tempos relativos de administração serão seleccionados de forma a alcançar o efeito terapêutico combinado desejado.
METABÓLITOS DE COMPOSTOS DE FÓRMULA I
Também estão dentro do âmbito da presente invenção os produtos metabólicos de fórmula I in vivo aqui descritos. Esses produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, redução, hidrólise, amidação, desamidação, esterificação, desesterificação, clivagem enzimática e similares, do composto administrado. De acordo com isto, a presente invenção inclui metabólitos dos compostos de fórmula I, incluindo compostos produzidos por um processo que compreende o contacto de um composto da presente invenção com um mamífero, durante um período de tempo suficiente para originar o respectivo produto metabólico.
Os produtos metabólicos normalmente são identificados por meio da preparação de um isótopo radio-marcado (por exemplo, 14C ou 3H) de um composto da presente invenção, administrado parentericamente numa dose detectável (por exemplo, maior do que cerca de 0,5 mg/kg) a um animal tal como um rato, um murganho, uma cobaia, um macaco ou um ser humano, deixando tempo suficiente para que ocorra o metabolismo (normalmente cerca de 30 segundos a 30 horas) e isolando os produtos da sua conversão a partir da urina, do sangue ou de outras amostras biológicas. Estes produtos são facilmente isolados dado que estão marcados (outros são isolados pela utilização de anticorpos capazes de se ligarem aos epitopos que sobrevivem no metabólito) . As estruturas dos metabólitos são determinadas da forma convencional, por exemplo por análise por EM, CL/EM ou RMN. Em geral, a análise dos metabólitos é feita da mesma maneira que os estudos convencionais do metabolismo de fármacos, bem conhecidos dos especialistas nesta técnica. Os produtos metabólicos, desde que não sejam encontrados in vivo, podem ser úteis em ensaios de diagnóstico para o doseamento terapêutico dos compostos da presente invenção.
ARTIGOS MANUFACTURADOS
Noutra modalidade da presente invenção, providencia-se um artigo manufacturado ou um "estojo" contendo materiais úteis para o tratamento das doenças e dos distúrbios descritos antes. 0 estojo compreende uma embalagem contendo um composto de fórmula I. 0 estojo pode ainda conter um rótulo ou uma bula na embalagem ou associada à embalagem. A expressão "bula na embalagem" utiliza-se para referir as instruções habituais incluídas nas embalagens comerciais dos produtos terapêuticos que contêm informação acerca das indicações, utilização, dosagem, administração, contra-indicações e/ou avisos respeitantes à utilização dessses produtos terapêuticos.
Uma modalidade da presente invenção compreende um estojo para o tratamento de um estado clínico mediado por PI3K, compreendendo um composto da presente invenção e instruções para a sua utilização.
As embalagens apropriadas incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, embalagens em blister, etc. A embalagem pode ser formada de uma variedade de materiais tais como vidro ou plástico. A embalagem pode conter um composto de fórmula I ou uma formulação do mesmo gue é eficaz para o tratamento do estado clinico e pode ter uma porta de acesso esterilizada (por exemplo, a embalagem pode ser um saco com uma solução intravenosa ou um frasco com uma tampa gue pode ser picada por uma agulha de injecção hipodérmica) . Pelo menos um dos agentes activos da composição é um composto de fórmula I. 0 rótulo ou a bula da embalagem indica gue a composição é utilizada para o tratamento do estado clinico em causa, tal como cancro. Além disso, o rótulo ou a bula da embalagem pode indicar gue o doente a ser tratado é aguele gue tem um distúrbio tal como um distúrbio hiper-proliferativo, neuro-degeneração, hipertrofia cardíaca, dor, enxagueca ou uma doença ou um evento neurotraumático. Numa modalidade, o rótulo ou a bula da embalagem indica gue a composição, gue contém um composto de fórmula I, pode ser utilizada para tratar um distúrbio resultante do crescimento anormal de células. 0 rótulo ou a bula da embalagem pode também indicar gue a composição pode ser utilizada para tratar outros distúrbios. Alternativamente ou adicionalmente, o artigo manufacturado pode ainda conter uma segunda embalagem contendo um tampão aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, tal como água bacteriostática para injecção (ABPI), solução salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Pode ainda incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do utilizador, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas. 0 estojo pode ainda incluir instruções para a administração do composto de fórmula I e, se presente, a segunda formulação farmacêutica. Por exemplo, se o estojo compreender uma primeira composição que contém um composto de fórmula I e uma segunda formulação farmacêutica, o estojo pode ainda compreender instruções para a administração simultânea, sequencial ou separada da primeira e da segunda composições farmacêuticas, a um doente que disso necessite.
Noutra modalidade, os estojos são apropriados para formas de administração oral, sólidas, de um composto de fórmula I, tal como comprimidos ou cápsulas. Esse estojo inclui, preferencialmente, um certo número de doses unitárias. Esses estojos podem incluir um cartão com as dosagens orientadas no sentido da utilização pretendida. Um exemplo desse estojo é uma "embalagem em blister". As embalagens em "blister" são bem conhecidas na indústria das embalagens e são largamente utilizadas para a embalagem de formas farmacêuticas de dosagens unitárias. Se desejado, pode-se fornecer um auxiliar de memória, por exemplo, sob a forma de números, letras ou outras marcas ou com a inserção de um calendário designando os dias no esquema de tratamento em que se podem administrar as doses.
De acordo com uma modalidade, um estojo pode conter (a) uma primeira embalagem contendo um composto de fórmula I; e, eventualmente, (b) uma segunda embalagem contendo uma segunda formulação farmacêutica, em que a segunda formulação farmacêutica contém um segundo composto com actividade anti-hiper-proliferativa. Alternativamente ou adicionalmente, o estojo pode ainda conter uma terceira embalagem contendo um tampão aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, tal como água bacteriostática para injecção (ABPI), solução salina tamponada com fosfato, solução de
Ringer e solução de dextrose. Pode ainda incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do utilizador, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.
Noutras modalidades em que o estojo contém uma composição de fórmula I e um segundo agente terapêutico, o estojo pode conter uma embalagem que contenha as composições separadas, por exemplo, divididas por frascos ou uma embalagem em folha dividida, contudo, as composições separadas podem também estar contidas numa única embalagem não dividida. Normalmente o estojo contém instruções para a administração dos componentes separados. A forma do estojo é particularmente vantajosa quando os componentes separados são administrados, preferencialmente, em formas farmacêuticas diferentes (por exemplo, oral e parentérica), administradas em intervalos de dosagem diferentes ou quando a titulação dos componentes individuais da combinação é a desejada pelo médico prescritor.
PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS DE FÓRMULA I
Os compostos tricíclicos de fórmula I podem ser sintetizados por vias de síntese que incluem processos análogos aos bem conhecidos nas técnicas químicas, particularmente à luz da descrição aqui feita. Os materiais iniciais estão geralmente disponíveis em fontes comerciais tais como Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) ou são facilmente preparados utilizando processos bem conhecidos pelos especialistas na técnica (por exemplo, preparados por processos geralmente descritos em Louis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.) ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlim, includindo os suplementos (também disponível na base de dados em linha da Beilstein).
Nalgumas modalidades, os compostos de fórmula I podem ser facilmente preparados utilizando procedimentos bem conhecidos para preparar compostos de purina (Hammarstrom et al (2007) Tetrahedron Lett. 48(16): 2823-2827; Cerna et al (2006) Organic Letters 8(23): 5389-5392; Chang et al (2006) J. Med. Chem. 49(10): 2861-2867; Yang et al (2005) J. Comb. Chem. 7: 474-482; Liu et al (2005) J. Comb. Chem. 7: 627-636; Hocek et al (2004) Synthesis 17: 2869-2876; Hammarstrom et al (2003) Tetrahedron Lett. 44: 8361-8363; Hammarstrom et al (2002) Tetrahedron Lett. 43: 8071-8073; Booth et al (1987) J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1: Organic and Bio-Organic Chem. 7: 1521-1526; Booth et al (1981) J.
Chem. Soc., Chemical Communications 15:788-789; Yoneda et al (1976) J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1: Organic and Bio-Organic Chem. 14: 1547-1550; Taylor et al (1971) J. Org.
Chem. 36(21) : 3211-3217; Lister, J. H.; Fenn, M. D. The
Purines, Supplementary 1, John Wiley &amp; Sons, 1996, Volume 54; The Chemisty of Heterocyclic Compounds, Editors Weissberger, A.; Taylor E. C., Wiley Interscience, 1971, volume 24; Legraverend, M.; Grierson, D. S. (2006) Bioorg. Med. Chem. 14: 3987-4006; Hocek, M. (2003) Eur. J. Org. Chem. 245-254; US 7122665; US 6743919; US 5332744; US 4728644; US 3016378; US 2008/0058297; US 2003/0139427; WO 2008/043031); e outros heterociclos que estão descritos em: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, por exemplo, volume 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica
Acta, 41: 1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12): 1328-31, (1990) .
Os compostos de fórmula I podem ser preparados isoladamente ou como bibliotecas de compostos que contêm pelo menos 2, por exemplo, 5 a 1000 compostos ou 10 a 100 compostos. As bibliotecas de compostos de fórmula I podem ser preparadas por meio de uma abordagem combinatória de "separe e misture" ou por sínteses múltiplas em paralelo utilizando quer a química em fase de solução quer a química de fase sólida, por meio de procedimentos conhecidos dos especialistas nesta técnica. Assim, de acordo com um outro aspecto da presente invenção, providencia-se uma biblioteca de compostos contendo pelo menos 2 compostos ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
Para fins ilustrativos, os procedimentos gerais ilustram processos gerais que podem ser aplicados para a preparação dos compostos de fórmula I, assim como produtos-chave intermédios. As secções de esquemas e de exemplos têm uma descrição mais detalhada das etapas individuais das reacções. Os especialistas nesta técnica saberão que se podem utilizar outras vias de síntese para sintetizar os compostos da presente invenção. Embora alguns materiais iniciais e vias estejam descritos nos esquemas, procedimentos gerais e exemplos, outros materiais iniciais e vias podem ser substituídos para providenciar uma variedade de derivados e/ou de condições de reacção. Além disso, muitos dos compostos preparados pelos processos descritos a seguir podem ser ainda modificados à luz da presente memória descritiva, utilizando a química convencional bem conhecida dos especialistas na matéria.
Na preparação dos compostos de fórmula I, pode ser necessária a protecção de funcionalidades remotas (por exemplo, amina primária e secundária) de produtos intermédios. A necessidade dessa protecção variará consoante a natureza da funcionalidade remota e as condições dos processos de preparação. Os grupos de protecção de amino apropriados incluem acetilo, trifluoroacetilo, t-butoxicarbonilo (BOC), benziloxi-carbonilo (CBz) e 9-fluorenilmetileno-oxicarbonilo (Fmoc). Um especialista nesta técnica determina facilmente a necessidade dessa protecção. Para uma descrição geral dos grupos de protecção e da sus utilização, ver T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley &amp; Sons, Nova Iorque, terceira ed., 1999.
PROCESSOS DE SEPARAÇÃO
Nos processos de preparação dos compostos da presente invenção, pode ser vantajoso separar os produtos da reacção uns dos outros e/ou dos materiais iniciais. Os produtos desejados de cada etapa ou das séries de etapas separam-se e/ou purificam-se (daqui para a frente, separam-se), com o grau de homogeneidade desejado, por meio de técnicas comuns neste domínio. Normalmente, essas separações envolvem extracção de várias fases, cristalização num dissolvente ou numa mistura de dissolventes, destilação, sublimação ou cromatografia. A cromatografia pode envolver qualquer número de processos incluindo, por exemplo: fase inversa e fase normal; exclusão por dimensão; permuta iónica; processos de cromatografia em fase liquida a alta, média e baixa pressão e respectivos aparelhos; analíticos em pequena escala; cromatografia em leito móvel simulado (LMS) e cromatografia preparativa em camada fina ou espessa, assim como técnicas de cromatografia em camada fina e rápida, em pequena escala.
Outra classe de processos de separação envolve o tratamento de uma mistura com um reagente seleccionado para ligar ou de alguma forma tornar separável um produto desejado, material inicial que não reagiu, reacção por produto ou similar. Esses reagentes incluem adsorventes ou absorventes tais como carvão activado, peneiros moleculares, meios de permuta iónica ou similares. Alternativamente, os reagentes podem ser ácidos no caso de um material básico, bases no caso de um material ácido, reagentes de ligação tais como anticorpos, proteínas de ligação, agentes quelantes selectivos como éteres de coroa, reagentes de extracção iónica em líquido/líquido (XIL) ou similares. A selecção dos processos de separação apropriados depende da natureza dos materiais envolvidos. Por exemplo, o ponto de ebulição e o peso molecular na destilação e na sublimação, presença ou ausência de grupos funcionais polares na cromatografia, estabilidade de materiais em meio ácido e básico na extracção em fase múltiplas e similares. Um especialista na técnica poderá aplicar as técnicas mais apropriadas para conseguir a separação desejada.
As misturas diastereoméricas podem ser separadas nos seus diastereómeros individuais com base nas suas diferenças físico-químicas, por processos bem conhecidos dos especialistas nesta técnica, tal como por cromatografia e/ou cristalização fraccionada. Os enantiómeros podem ser separados por conversão da mistura enantiomérica numa mistura diastereomérica por reacção com um composto apropriado, activo sob o ponto de vista óptico (por exemplo, auxiliar quiral tal como um álcool quiral ou um cloreto de ácido de Mosher) , separando os diastereómeros e convertendo (por exemplo, hidrolisando) os diasterómeros individuais nos correspondentes enantiómeros puros. Alguns dos compostos da presente invenção também podem ser atropisómeros (por exemplo, biarilos substituídos) e são considerados como fazendo parte da presente invenção. Os enantiómeros também podem ser separados utilizando uma coluna quiral de CLAR.
Um estereoisómero simples, por exemplo, um enantiómero, praticamente isento do seu estereoisómero, pode ser obtido por resolução da mistura racémica, utilizando um processo tal como a formação de diastereómeros, utilizando agentes de resolução activos sob o ponto de vista óptico (Eliel, E. e Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds," John Wiley &amp; Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3): 283-302). As misturas racémicas dos compostos quirais da presente invenção podem ser separadas e isoladas por qualquer processo apropriado, incluindo: (1) formação de sais iónicos diastereoméricos com compostos quirais e separação por cristalização fraccionada ou por outros processos, (2) formação de compostos diastereoméricos com reagentes quirais de derivação, separação dos diastereómeros e conversão nos estereoisómeros puros e (3) separação dos estereoisómeros praticamente puros ou enriquecidos directamente, em condições quirais. Ver: "Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology," Irving W. Wainer, Ed., Mareei Dekker, Inc., Nova Iorque (1993).
Com o processo (1), podem formar-se sais diastereoméricos, por reacção de bases quirais, enantiomericamente puras, tais como brucina, quinina, efedrina, estriquinina, a-metίΐ-β-feniletilamina (anfetamina) e similares, com compostos assimétricos, comportando funcionalidades ácidas. Os sais diastereoméricos podem ser induzidos à separação por cristalização fraccionada ou cromatografia iónica. Para a separação dos isómeros ópticos dos compostos de amino, a adição de ácidos quirais carboxilicos ou sulfónicos, tais como ácido canforsulfónico, ácido tartárico, ácido mandélico ou ácido láctico, podem resultar na formação de sais diastereoméricos.
Alternativamente, pelo processo (2), o substrato a ser resolvido reage com um enantiómero de um composto quiral para formar um par diastereomérico (E. e Wilen, S. "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley &amp; Sons, Inc., 1994, p. 322) Os compostos diastereoméricos podem ser formados por reacção de compostos assimétricos com reagentes quirais de derivação, enantiomericamente puros, tal como derivados de mentilo, seguida de separação dos diastereómeros e hidrólise para originar enantiómeros puros ou enriquecidos. Um processo de determinação da pureza óptica envolve a produção de ésteres quirais da mistura racémica, tal como éster de mentilo, por exemplo, com (-) clorof ormiato de mentilo, na presença de uma base ou do éster de Mosher, acetato de a-metoxi-α-(trifluorometil)-fenilo (Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47: 4165) e analisando o especto de RMN do 2Η quanto à presença dos dois enantiómeros atropisoméricos ou diastereómeros. Os diasterómeros estáveis de compostos atropisoméricos podem ser separados e isolados por cromatografia normal e de fase inversa, no seguimento dos processos de separação de naftil-isoquinolinas atropisoméricas (WO 1996/015111). Pelo processo (3), pode-se separar uma mistura racémica de dois enantiómeros, por cromatografia, utilizando uma fase estacionária quiral ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) W. J. Lough, Ed., Chapman and Hall, New York; Okamoto, J. Chromatogr., (1990) 513: 375-378). Os enantiómeros enriquecidos ou purificados podem distinguir-se por
processos utilizados para distinguir outras moléculas quirais com átomos de carbono assimétricos, tais como rotação óptica e dicroismo circular.
PROCEDIMENTOS GERAIS DE PREPARAÇÃO
Procedimento geral A Acoplamento de Suzuki:
A reacção de acoplamento do tipo Suzuki é útil para ligar um heteroarilo monociclico, um heterociclo biciclico fundido, um heteroarilo biciclico fundido ou um fenilo, na posição 2 do anel de pirimidina de uma 2-cloro-purina 21. Por exemplo, pode-se combinar 21 com 1,5 equivalentes de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)lH-indazol 24 e dissolver em cerca de 3 equivalentes de carbonato de sódio numa solução cerca de 1 molar em água e cerca de um volume igual de acetonitrilo. Adiciona-se uma quantidade catalítica ou ligeiramente superior de um reagente de paládio com uma valência baixa, tal como dicloreto de bis-(trifenilfosfino)paládio (II). Pode-se utilizar uma variedade de ácidos borónicos ou ésteres borónicos em vez do éster borónico de indazol indicado. Alternativamente, o azoto do indazol também pode ser protegido, por exemplo, o composto 41 protegido com N-THP. Nalguns casos utilizou-se acetato de potássio em vez de carbonato de sódio, para ajustar o pH da camada aquosa. A reacção de acoplamento de paládio de Suzuki pode ser optimizada e/ou acelerada em condições de micro-ondas. A mistura reaccional pode ser aquecida a 100-150 °C, sob pressão, num reactor de micro- ondas, tal como o optimizador da Biotage (Biotage, Inc.) durante cerca de 10 a 30 minutos. Arrefecem-se os conteúdos, concentram-se e extraem-se com acetato de etilo ou com outro dissolvente orgânico. Após evaporação da camada orgânica, os produtos do acoplamento de Suzuki, 2-(lH-indazol-4-il)-purina 22 substituído nas posições 6, 8, 9 ou 2-(5-pirimidin-2-amina)-purina 23 substituído nas posições 6, 8, 9, podem ser purificados por CLAR em sílica ou de fase inversa. Os substituintes R2 , R3 podem ser R2, R3, tal como definido, ou podem ser formas protegidas ou os seus precursores.
Pode-se utilizar uma variedade de catalisadores de paládio durante a etapa de acoplamento de Suzuki para formar compostos, incluindo as modalidades dos exemplos 22 e 23. O acoplamento de Suzuki é uma reacção de acoplamento cruzado mediada por paládio de um halogeneto de arilo, tal como 21, com um ácido ou um éster borónico tal como 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-indazol 24 ou 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina 25. Os catalisadores de Pd (II) e de Pd (0) de valência baixa podem ser utilizados na reacção de acoplamento de Suzuki incluindo PdCl2 (PPh3) 2, Pd(t-Bu)3, PdCl2 dppf CH2C12, Pd(PPh3)4, Pd(OAc) /PPh3, Cl2Pd [ (Pet3) ] 2, Pd(DIPHOS)2, Cl2Pd(Bipy), [PdCl (Ph2PCH2PPh2) ] 2, Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2 (dba) 3/P (o-tol) 3, Pd2 (dba)/P (furilo) 3,
Cl2Pd[P (furilo)3]2, Cl2Pd (PMePh2) 2, Cl2Pd [P (4-F-Ph) 3] 2,
Cl2Pd[P (C6F6)3]2, Cl2Pd[P (2-COOH-Ph) (Ph)2]2, Cl2Pd [P (4-COOH-Ph) (Ph)2]2 e os catalisadores encapsulados Pd EnCat™ 30, Pd EnCat™ TPP30 e Pd(II)EnCat™ BINAP30 (US 2004/0254066). Um desses catalisadores de paládio de Suzuki é o [1,1'-bis-(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio (II), complexado com diclorometano, representado por Pd (dppf)Cl2.
Procedimento geral B Substituição de N em C-6
A um produto intermédio, 2,6-dicloro-purina 27, num dissolvente tal como etanol adiciona-se uma morfolino-amina (mor, 1,1 equiv.) e uma base não nucleofilica tal como trietilamina (NEt3, 1,5 equiv.). Alternativamente pode-se utilizar acetonitrilo como dissolvente e carbonato de potássio como base. Agita-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, durante cerca de 1 hora ou durante a noite, eliminam-se os voláteis in vacuo e reparte-se o resíduo entre DCM e salmoura. Se a mistura for insolúvel pode ser tratada por ultra-sons e recolhe-se o produto sólido por filtração. A secagem com sulfato de magnésio e a evaporação do dissolvente origina o produto intermédio substituído N'-(2-cloro-purin-6-il)-amina 28, muitas vezes sob a forma de um sólido cristalino ou por trituração. Os substituintes R2', R3' podem ser R2, R3, tal como definido ou podem ser formas protegidas ou os seus precursores.
Procedimento geral C Alquilação de azoto em N-9
0 produto intermédio 9-H-purina 29 é colocado em DMF e adiciona-se à mistura reaccional 2 equiv. de carbonato de césio. Aquece-se a reacção até 50 2C e depois adiciona-se à mistura reaccional 3 equivalentes de um halogeneto de alquilo R2'-X. A reacção é monitorizada por CCF ou CL/EM e agita-se até estar completa, normalmente várias horas. Extrai-se a mistura reaccional com EtOAc e água e seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se até se obter a purina 30 alquilada em 9, impura, que é utilizada directamente na reacção seguinte ou purificada por CLAR de fase inversa. Os substituintes R2', R3' e R4' podem ser R2, R3 e R4 tal como definido ou podem ser formas protegidas ou os seus precursores.
Procedimento geral D Desprotecção de THP
De um modo geral, pode-se tratar Ν-9-tetra-hidro-piranilo 31 substituído com quantidades catalíticas de ácido para-tolueno-sulfónico (PTSA), numa solução de metanol e aquece-se até cerca de 50 °C, até o grupo tetra-hidropirano (THP) ser removido para dar origem ao composto 32. A reacção pode ser monitorizada por CL-EM ou CCF. Os substituintes R3', R4' podem ser R3, R4, tal como definido ou podem ser formas protegidas ou os seus precursores.
Procedimento geral E Desprotecção de Boc
De um modo geral, trata-se Boc 33 substituído com TFA ou HC1 4 N para eliminar os grupos t-butoxicarbonilo e monitoriza-se a reacção por CL-EM até estar completa. O produto impuro é então concentrado e purificado por CLAR de fase inversa para se obter o produto 34 sob a forma de um sólido puro. Os subst ituintes R2', R3' podem ser R2, R3, tal como definido ou podem ser formas protegidas ou os seus precursores.
Procedimento geral F Acoplamento de amidas
Trata-se a 9-alquilcarboxil-purina 35, substituída nas posições 2, 6, 8, em que n representa 1 a 3, com 1,5 eq de HATU (hexafluorofosfato de 2-(7-aza-lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio) , um excesso (tal como 3 eq) de uma alquilamina (HNR10R11) e um excesso (tal como 3 eq) de carbonato de césio em dimetilformamida (DMF). Alternativamente, podem utilizar-se outros agentes de acoplamento. Agita-se a reacção até estar completa e extrai-se com acetato de etilo com uma solução saturada de bicarbonato. Seca-se a camada orgânica, filtra-se e concentra-se para se obter o produto intermédio impuro, acilado, que é purificado por via de CLAR de fase inversa, para se obter o produto 36. Os substituintes R3', R4' podem ser R3, R4, tal como definido ou podem ser formas protegidas ou os seus precursores.
Procedimento geral G Síntese de pirimido-oxazina (fórmula In)
Esquema 1
Preparam-se as pirimido-oxazinas de fórmula (In) de acordo com os procedimentos descritos a seguir, no esquema 1 anterior ou por processos conhecidos na técnica. As tricloropirimidinas protegidas, de fórmula (II), podem ser preparadas utilizando processos descritos na literatura. Os tricloretos podem reagir com uma amina cíclica de fórmula (IIA), na presença de um base tal como trietilamina, num dissolvente tal como etanol, próximo da temperatura ambiente, para se obter dicloretos de fórmula (III) . A metoxi-pirimidina pode ser desprotegida utilizando um reagente tal como LiCl, num dissolvente tal como DMF, sob uma radiação de micro-ondas para GP = Me ou por tratamento com um ácido tal como TFA, num dissolvente tal como DCM; quando o GP = p-metoxibenzilo origina fenóis de fórmula (IV). As pirimido-oxazinas triciclicas de fórmula (V) podem então ser formadas a partir de dióis de fórmula (IV) com um composto de azo tal como DIAD, na presença de uma fosfina tal como trif enil-f osf ina, num dissolvente tal como 1,4-dioxano. Alternativamente, a formação dos compostos (V) pode realizar-se em primeiro lugar transformando o grupo hidroxilo num grupo eliminável apropriado, seguido de uma reacção de substituição intramolecular facilitada pela reacção com um reagente tal como cloreto de metano-sulfonilo, na presença de uma base tal como trietilamina, num dissolvente tal como THF. Os compostos de fórmula (VI) podem ser preparados a partir dos compostoss (V) por reacção com um derivado de morfolina (incorporando os substituintes R apropriados) , na presença de uma base tal como triet ilamina, num dissolvente tal como etanol, a uma temperatura elevada. Para n = 2, A = 0, a adição de morfolina ocorre de uma maneira regio-especifica em que n = 1, A = CH2. Esta reacção também pode levar à formação do regioisómero indesejado. As pirimido-oxazinas de fórmula (I) podem ser formadas pela reacção de compostos de fórmula (VI) com um reagente de arilo ou de heteroarilo metalado tal como ácido heteroaril-borónico, éster borónico ou um estanato, na presença de um catalisador de metal de transição, tal como Pd(PPh3)2Cl2 e uma base tal como carbonato de sódio aquoso, num dissolvente tal como acetonitrilo, sob uma radição de micro-ondas, a uma temperatura até 150 °C.
Alternativamente, as pirimido-oxazinas de fórmula (In) podem ser preparadas de acordo com o esquema 2 que se segue. As tricloro-pirimidinas de fórmula (II) podem ser obtidas a partir de compostos de fórmula (VII) (preparados de acordo com os processos descritos na técnica) por reacção com um álcool tal como álcool de p-metoxibenzilo, na presença de um composto de azo, tal como DIAD, na presença de uma fosfina tal como trifenil-fosfina, num dissolvente tal como 1,4-dioxano. Alternativamente, a formação dos compostos (II) pode realizar-se pelo tratamento do composto (VII) com um halogeneto de sililo, tal como terc-butilclorodifenilsilano, na presença de uma base tal como trietilamina tendo como aditivo N,N-dimetil-aminopiridina, num dissolvente como DMF. As tricloro-primidinas (II) podem reagir com uma amina cíclica de fórmula (IIA), na presença de um base tal como trietilamina, num dissolvente tal como etanol, à temperatura ambiente, para se obter dicloretos de fórmula (VII) . Os compostos de fórmula (IX) podem ser preparados por reacção de compostos de fórmula (VIII) com um reagente de arilo ou de heteroarilo metalado, tal como ácido heteroaril-borónico, éster borónico ou um estanato borónico, na presença de um catalisador de metal de transição, tal como Pd(PPh3)2Cl2 e uma base tal como carbonato de sódio aquoso num dissolvente tal como acetonitrilo, sob uma radição de micro-ondas, a uma temperatura até 150 °C. Para os grupos de protecção, por exemplo, GP = p-metoxibenzeno ou GP = terc-butildifenil-silano, esta substituição pode ocorrer com controlo regio-específico, originando compostos de 2-arilo ou de 2-hetero-arilo, de fórmula (IX). Os fenóis de fórmula (X) podem ser formados por desprotecção dos compostos (IX), utilizando um ácido tal como TFA, num dissolvente, tal como DCM, à temperatura ambiente. Os compostos de fórmula (X) podem ser convertidos nos compostos de fórmula (XI) utilizando os processos descritos para a conversão dos compostos de fórmula (IV) em compostos de fórmula (V), no esquema 1.
Finalmente, as pirimido-oxazinas, de fórmula (In) podem ser
formadas por reacção dos compostos de fóemula (XI) com uma morfolina (incorporando os substituintes R apropriados), na presença de uma base tal como trietilamina, num dissolvente tal como etanol, a temperaturas até à temperatura de refluxo.
Esquema 2
EXEMPLOS
As reacções químicas descritas nos exemplos podem ser facilmente adaptadas para preparar um certo número de outros inibidores de PI3K da presente invenção e os processos alternativos para a preparação de compostos da presente invenção também estão dentro do âmbito da presente invenção. Por exemplo, as sínteses de compostos não exemplificados, de acordo com a presente invenção podem ser realizadas, com sucesso, por meio de modificações evidentes para os especialistas nesta técnica, por exemplo, por protecção apropriada dos grupos funcionais reactivos, utilizando outros reagentes apropriados conhecidos na técnica, diferentes dos aqui descritos e/ou fazendo modificações de rotina das condições da reacção. Alternativamente, serão reconhecidas outras reacções aqui descritas ou conhecidas na técnica, como tendo aplicação na preparação de outros compostos da presente invenção.
Nos exemplos descritos a seguir, salvo indicação em contrário, todas as temperaturas são dadas em graus Celsius. Os reagentes foram comprados a fornecedores comerciais tais como Sigma Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI ou Maybridge e foram utilizados sem mais purificação, salvo indicação em contrário. As reacções indicadas antes foram realizadas, geralmente, a uma pressão positiva de azoto ou de árgon ou com um tubo de secagem (salvo indicação em contrário), em dissolventes anidros e os frascos da reacção foram geralmente fechados com tampas de borracha para a introdução de substratos e de reagentes, por via de uma seringa. 0 equipamento de vidro foi seco num forno e/ou seco pelo calor. A cromatografia em coluna foi feita num sistema Biotage (fabricante: Dyax Corporation) com uma coluna de gel de sílica ou com um cartucho se sílica SEP PAK® (Waters) . Os espectros de RMN do 2Η foram obtidos a 400 MHz em soluções de CDC13 deuterado, d6-DMSO, CH3OD ou d6-acetona (referido em ppm), utilizando clorofórmio como padrão de referência (7,25 ppm). Quando se referem vários picos, utilizam-se as seguintes abreviaturas: s (singleto), d (dubleto), t (tripleto), m (multipleto), al (alargado), dd (dubleto de dubletos), dt (dubleto de tripletos). As constantes de acoplamento, quando indicadas, são referidas em hertz (Hz). A CLAR foi realizada pelos processos que se exemplificam a seguir: (A) Processo curto de CL/EM - ciclo de 10 min CLAR-Agilent 1200
Fase móvel A Água com TFA a 0,05 %
Fase móvel B Acetonitrilo com TFA a 0,05 %
Coluna Agilent ZORBAX SD-C18, l,8pm, 2,l*30mm
Temperatura da coluna 40 graus C
Gradiente de CL 3-95 % de B em 8,5 min, 95 % em 2,5 min
Velocidade de fluxo da CL 400 pL/min Comprimento de onda UV 220 nm e 254 nm
Espec. de massa - quádruplo Agilent 6140
Ionização IEP positiva
Intervalo de rastreio 110-800 amu (B) Waters Acquity/Processo longo de TCL - ciclo de 20 min Waters Acquity
UPLC
Fase móvel A Águas com TFA a 0,05 %
Fase móvel B Acetonitrilo com TFA a 0,05 %
Coluna Acquity UPLC BEH C18, 1,7 pm, 2,1*50 mm
Temperatura da coluna 40 graus C
Gradiente da CL 2-98 % de B em 17,0 min, 98 % em 1,5 min
Velocidade de fluxo da CL 600 pL/min Comprimento de onda UV 254 nm
Espec. de massa - Waters LCT Premier XE (B) CL/EM 2,5 min processo quiral
Fase móvel A: CO2
Fase móvel B: metanol
Condições isocráticas: 25 % de B
Velocidade de fluxo: 5 mL/min
Pressão de salda: 120 Bar
Temperatura: 40 graus C
Coluna: ChiralCel OJ (4,6x50 mm, 3 pm)
Uv: 230 nm
Sistema: Berger Analytical SFC/EM
Purificação quiral:
Condições A:
Fase móvel A: CO2
Fase móvel B: metanol
Condições isocráticas: 25 % de B
Caudal: 60 mL/min
Pressão de salda: 100 Bar
Temperatura: 40 graus C
Coluna: ChiralCel OJ (21,2x250 mm, 5 pm)
Uv: 230 nm Sistema: Berger MGII
Exemplo 1 2,6-dicloro-9-metil-9H-purina 4
Hidrolisa-se o grupo ciano de 5-amino-l-metil-lH-imidazol-4-carbonitrilo 1 com a amida em ácido sulfúrico para se obter 5-amino-l-metil-lH-imidazol-4-carboxamida 2, que foi ciclizada com ureia para se obter 9-metil-lH-purino-2,6(3H,9H)-diona 3. A cloração de 3 origina 2,6-dicloro-9-metil-9H-purina 4.
Exemplo 2 4-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)- lH-indazol 24 - via 1
A uma solução de 3-bromo-2-metil-anilina (5,0 g, 26,9 mmole) em clorofórmio (50 mL) adicionou-se acetato de potássio (1,05 eq., 28,2 mmole, 2,77 g). Adicionou-se anidrido acético (2,0 eq., 53,7 mmole, 5,07 mL) com o concomitante arrefecimento em água gelada. Depois agitou-se a mistura, à temperatura ambiente, durante 10 minutos, tempo ao fim do qual se formou um sólido gelatinoso branco. Adicionou-se 18-coroa-6 (0,2 eq., 5,37 mmole, 1,42 g) seguido de iso-amil-nitrito (2,2 eq., 59,1 mmole, 7,94 mL) e aqueceu-se a mistura, à temperatura de refluxo, durante 18 h. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer e repartiu-se entre clorofórmio (3 x 100 mL) e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL). Lavaram-se os extractos orgânicos combinados com salmoura (100 mL), separaram-se e secaram-se (MgSO4) . O produto impuro evaporou-se em silica e purificou-se por cromatografia, eluindo-se com EtOAc-petróleo a 20 % até 40 % para originar 1-(4-bromo-indazol-1-il)-etanona A (3,14 g, 49 %) de um sólido cor de laranja e 4-bromo-lH-indazol B (2,13 g, 40 %) sob a forma de um sólido cor de laranja claro. A RMN do 2Η (400 MHz, CDCI3) 2,80 (3H, s), 7,41 (1H, t, J=7,8Hz), 7,50 (1H, d, J=7,8Hz), 8,15 (1H, s), 8,40 (1H, d, J=7,8Hz). B: RMN do 2Η (400 MHz, CDCI3) 7,25 (1H, t, J=7,3Hz), 7,33 (1H, d, J=7,3Hz), 7,46 (1H, d, J=7,3Hz), 8,11 (1H, s), 10,20 (1H, s largo). A uma solução de 1-(4-bromo-indazol-l-il)-etanona A (3,09 g, 12,9 mmole) em MeOH (50 mL) adicionou-se HCL aquoso 6N (30 mL) e agitou-se a mistura, à temperatura ambiente, durante 7 h. O MeOH evaporou-se e repartiu-se a mistura entre EtOAc (2 χ 50 mL) e água (50 mL). Lavaram-se os extractos orgânicos combinados com salmoura (50 mL), separaram-se e secaram-se (MgSO4) . Eliminou-se o dissolvente por evaporação a pressão reduzida para se obter 4-bromo-lH-indazol B (2,36 g, 93 %). A uma solução de 4-bromo-lH-indazol B (500 mg, 2,54 mmole) e bis(pinacolato)diboro (1,5 eq., 3,81 mmole) em DMSO (20 mL) adicionou-se acetato de potássio (3,0 eq.,
7,61 mmole, 747 mg; secou-se numa pistola de secagem) e PdCl2 (dppf) 2 (3 mol %, 0, 076 mmole, 62 mg) . Desgaseificou- se a mistura com árgon e aqueceu-se a 80 °C, durante 40 h. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer e repartiu-se entre água (50 mL) e éter (3 X 50 mL) . Lavaram-se as camadas orgânicas combinadas com salmoura (50 mL), separaram-se e secaram-se (MgSO4) . Purificou-se o material impuro por cromatografia eluindo-se com EtOAc-petróleo a 30 % a 40 % para se obter uma mistura a 3:1 inseparável de 4-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-lH-indazol 24 (369 mg, 60 %) e indazol (60 mg, 20 %), isolou-se sob a forma de uma goma amarela que solidificou após repouso para originar um sólido esbranquiçado. RMN do 2Η (400 MHz, de~ DMSO) 1,41 (12H, s), 7,40 (1H, dd, J=8,4Hz, 6,9Hz), 7,59 (1H, d, J=8,4Hz), 7,67 (1H, d, J=6,9Hz), 10,00 (1H, s largo), 8,45 (1H, s), e indazol: 7,40 (1H, t), 7,18 (1H, t, J=7,9Hz), 7,50 (1H, d, J=9,lHz), 7,77 (1H, d, J=7,9Hz), 8,09 (1H, s); impureza a 1,25.
Exemplo 3 4-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)- lH-indazol 24 - via
A uma solução de 2-metil-3-nitroanilina (2,27 g, 14,91 mmole) em ácido acético (60 mL) adicionou-se uma solução de nitrito de sódio (1,13 g, 1,1 eq.) em água (5 mL). Passadas 2 h, verteu-se a solução vermelha escura em água gelada e recolheu-se o precipitado resultante por filtração para se obter 4-nitro-lH-indazol C (1,98 g, 81 %).
Agitou-se uma mistura de 4-nitro-lH-indazol C (760 mg, 4,68 mmole), paládio em carvão (10 %, cat.) e etanol (30 mL) , num balão de hidrogénio, durante 4 h. Depois filtrou-se a mistura reaccional através de celite e eliminou-se o dissolvente, in vacuo, para se obter lH-indazol-4-ilamina D (631 mg, 100 %).
Adicionou-se, gota a gota, uma solução aquosa de nitrito de sódio (337 mg, 4,89 mmole) em água (2 mL) a uma suspensão de lH-indazol-4-ilamina D (631 mg, 4,74 mmole) em ácido clorídrico 6M (7,2 mL) , abaixo de 0 °C. Depois de se agitar durante 30 minutos, adicionou-se à mistura reaccional tetrafluoroborato de sódio (724 mg) . Resultou uma solução viscosa que se filtrou e lavou rapidamente com água para se obter sal de tetrafluoroborato de lH-indazol-4-diazónio E (218 mg, 20 %) , sob a forma de um sólido vermelho escuro.
Purgou-se metanol anidro (4 mL) com árgon, durante 5 minutos. Adicionou-se sal de tetrafluoroborato de 1H-indazol-4-diazónio (218 mg, 0,94 mmole), bis-pinacolato de diboro (239 mg, 1,0 eq.) e cloreto de [1,1'-bis(difenil-fosfino)ferroceno]paládio (II) (20 mg). Agitou-se a mistura reaccional, durante 5 h e depois filtrou-se através de celite. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida para se obter 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-lH-indazol 24 (117 mg).
Exemplo_4 1- (Tetra-hidro-2íí-piran-2-il) -4- (4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1/í-indazol (via A)
Etapa A: Preparação de 4-cloro-lA-indazol: A um frasco de 250 ml, com barra de agitação, adicionou-se 2-metil-3-cloroanilina (8,4 ml, 9,95 g, 70,6 mmole), acetato de potássio (8,3 g, 84,7 mmole) e clorofórmio (120 ml). Arrefeceu-se esta mistura para 0 2C com agitação. Adicionou-se, gota a gota, anidrido acético (20,0 ml, 212 mmole), à mistura arrefecida, durante 2 minutos. Aqueceu-se a mistura reaccional para 25 °C e agitou-se durante 1 hora. Neste ponto, aqueceu-se a mistura reaccional para 60 °C.
Adicionou-se nitrito de isoamilo (18,9 ml, 141 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, durante a noite, a 60 °C.
Uma vez completa adicionou-se água (75 ml) e THF (150 ml) à reacção e arrefeceu-se a mistura reaccional para 0 °C.
Adicionou-se LiOH (20,7 g, 494 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, a 0 °C, durante 3 horas. Adicionou-se água (200 ml) e extraiu-se o produto com EtOAc (300 ml, 100 ml). Combinaram-se as camadas orgânicas, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se in vacuo para se obter 4-cloro-líí-indazol, 11,07 g (100 %) , sob a forma de um sólido cor de laranja. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) δ 8,18 (d, J = 1 Hz, 1H) , 7,33 (d, J = 8 Hz 1H) , 7,31 (t, J = 7 Hz, 1H) , 7,17 (dd, J = 7 Hz, 1 Hz 1H). CLEM (IEP pos) m/e 153 (M+l).
Etapa B: Preparação de 4-cloro-l-(tetra-hidro-2A- piran-2-il)-líí-indazol: A um frasco de 1 L, com agitador mecânico, adicionou-se 4-cloro-l/í-indazol (75,0 g, 0,492 mole), p-tolueno-sulfonato de piridinio (1,24 g, 4,92 mmole) , CH2C12 (500 ml) e 3,4-di-hidro-2A-pirano (98,6 ml, 1,08 mole) . Aqueceu-se esta mistura, com agitação, até 45 2C, durante 16 horas. A análise da mistura reaccional mostra a produção de ambos os isómeros do produto. Arrefeceu-se a reacção para 25 °C e adicionou-se CH2C12 (200 ml) . Lavou-se a solução com água (300 ml) e NaHCCh saturado (250 ml) . Secou-se a fase orgânica com MgSCg e concentrou-se até à secagem. Purificou-se o produto impuro dissolvendo em EtOAc/hexanos (4:6, 1 L) e adicionou-se SiO2 (1,2 L). Filtrou-se a mistura e lavou-se o bolo com EtOAc/hexanos (4:6, 2 L) . Concentraram-se as camadas orgânicas in vacuo para se obter 4-cloro-l-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-líí-indazol 110,2 g (95 %) sob a forma de um sólido cor de laranja. Isómero 1: RMN do 2Η (400 MHz, CDCI3) δ 8,10 (d, J = 1 Hz, 1H) , 7,50 (dd, J = 9 Hz, 1 Hz 1H), 7,29 (dd, J = 9 Hz, 8 Hz 1H), 7,15 (dd, J = 8 Hz, 1 Hz 1H) 5,71 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz 1H) 4,02 (m, 1H) 3,55 (m, 1H) 2,51 (m, 1H) 2,02 (m, 2H) 1,55 (m, 3H). CLEM (IEP pos) m/e 237 (M+l); isómero 2. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) δ 8,25 (d, J = 1 Hz, 1H) , 7,62 (dd, J = 9 Hz, 1 Hz 1H), 7,20 (dd, J = 9 Hz, 8 Hz 1H) , 7,06 (dd, J = 8 Hz, 1 Hz 1H) 5,69 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz 1H) 4,15 (m, 1H) 3,80 (m, 1H) 2,22 (m, 2H) 2,05 (m, 1H) 1,75 (m, 3H). CLEM (IEP pos) m/e 237 (M+l).
Etapa C: Preparação de 1-(tetra-hidro-2A-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lA-indazol: A um frasco de 500 ml, com uma barra de agitação, adicionou-se 4-cloro-l-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H- indazol (10,0 g, 42,2 mmole) , DMSO (176 ml), PdCl2(PPh3)2 (6,2 g, 8,86 mmole), triciclo-hexilfosfina (0,47 g, 1,69 mmole), bis(pinacolato)diboro (16,1 g, 63,4 mmole) e acetato de potássio (12,4 g, 0,127 mole). Aqueceu-se esta mistura, com agitação, até 130 2C, durante 16 horas. Arrefeceu-se a reacção para 25 °C e adicionou-se EtOAc (600 ml) e lavou-se com água (2 x 250 ml) . Secou-se a fase orgânica com MgSO4 e concentrou-se, in vacuo, até à secagem. Purificou-se o produto impuro em SiO2 (120 g) , eluindo-se com EtOAc/hexanos a 10 % (1 L) e EtOAc/hexanos a 30 % (1 L) . Concentrou-se o filtrado in vacuo para se obter 13,9 g (100 %) de l-(tetra-hidro-2/í-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lA-indazol sob a forma de uma solução a 20 % (p/p) em acetato de etilo. A RMN do mostra a presença de cerca de 20 % (p/p) de bis(pinacolato)diboro. RMN do 2Η (400 MHz, CDCI3) δ 8,37 (s, 1H) , 7,62 (dd, J = 14 Hz, 2 Hz 1H) , 7,60 (dd, J = 7 Hz, 1 Hz 1H) , 7,31 (dd, J = 8 Hz, 7 Hz 1H) 5,65 (dd, J = 9 Hz, 3 Hz 1H) 4,05 (m, 1H) 3,75 (m, 1H) 2,59 (m, 1H) 2,15 (m, 1H) 2,05 (m, 1H) 1,75 (m, 3H) 1,34 (s, 12H). CLEM (IEP pos) m/e 245 (M+l).
Exemplo 5 1- (Tetra-hidro-2A-piran-2-il) -4- (4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1/í-indazol (via B)
Etapa A: Preparação de 4-nitro-l/í-indazol: Arrefeceu-se uma mistura de 2-metil-3-nitro-anilina (200 g, 1,315 moles), ácido acético (8 000 ml) para 15-20 °C e adicionou-se, lentamente, uma solução de nitrito de sódio (90,6 g, 1,315 moles) em água (200 ml), ao longo de 30 min. Depois da adição, aumentou-se a temp. de reacção para 25-30° C e agitou-se a mistura reaccional a esta temp., durante 2-3 h. Monitorizou-se a progressão da reacção por CCF e, depois de estar completa, filtrou-se o produto da reacção e lavou-se o resíduo com ácido acético (1000 ml) . Destilou-se o ácido acético em vácuo (550 mm de Hg), abaixo de 80 °C e adicionou-se água (8 000 ml), arrefeceu-se para 25-30 °C e agitou-se, durante 30 min. Filtrou-se a pasta e lavou-se com água (1000 ml) . Secou-se o produto impuro, sob aquecimento, a 70-80 °C, durante 2 horas, depois recolheu-se numa solução de acetato de et ilo/n-hexano a 5 % (100: 2 000 ml) e agitou-se, durante 1-1,5 h, à temperatura ambiente. Filtou-se a suspensão e lavou-se com uma mistura de acetato de etilo/n-hexano a 5 % (25:475 ml). Secou-se o produto obtido em vácuo, abaixo de 80 °C, durante 10 -12 h para se obter 4-nitro-l/í-indazol sob a forma de um sólido castanho (150 g, 70 %): pf: 200-203 °C; RMN do 2Η (200 MHz, CDC13) δ 13,4 (largo, 1H) , 8,6 (s, 1H) , 8,2-7,95 (dd, 2H) , 7,4 (m, 1H) . EMIE (espectrometria de massa com ionização por electropulverização) m/z 164 (M+l). Pureza: 95 % (CLAR)
Etapa B: Preparação de 4-amino-l/í-indazol: Hidrogenou-se uma mistura de 4-nitro-líí-indazol (200 g, 1,22 moles) e paládio em carvão a 10 % (20,0 g, ) em EtOH (3 000 ml), à temperatura ambiente (a reacção foi exotérmica e a temperatura subiu para 50 °C) . Depois de a reacção estar
completa, retirou-se o catalisador por filtração. O dissolvente evaporou-se em vácuo, abaixo de 80 °C e arrefeceu-se para a temperatura ambiente e adicionou-se ao resíduo n-hexano (1000 ml) e agitou-se durante 30 min. Filtrou-se o sólido isolado e lavou-se com n-hexano (200 ml) . Secou-se o produto em vácuo, a 70-80 °C, durante 10 - 12 h para se obter 4-amino-líí-indazol sob a forma de um sólido castanho (114 g, 70 %): p.f.: 136-143 °C. RMN do 2Η (200 MHz, CDCI3) δ 12 (largo), 8,0 (s, 1H) , 7,1-7,0 (dd, 2H), 6,5 (d, 1H), 3,9 (m, 2H). EMIE m/z 134 (M+l). Pureza: 90-95 % (CLAR)
Etapa C: Preparação de 4-iodo-lA-indazol: Arrefeceu-se, para -10 2C, uma mistura de 4-amino-líí-indazol (50,0 g, 0,375 moles) em água (100 ml) e ácido clorídrico con. (182 ml). Adicionou-se a esta solução, gota a gota, nitrito de sódio (51,7 g, 0,75 moles) em água (75 ml), a -10 °C, durante cerca de 30 - 60 min. (durante a adição observou-se a formação de espuma). Noutro frasco preparou-se uma mistura de iodeto de potássio (311 g, 1,87 moles) em água (3 000 ml), à temperatura ambiente e adicionou-se-lhe, o sal de diazónio anterior, arrefecido a 30-40 °C, durante cerca de 30-40 min. Manteve-se a reacção a 30 °C, durante lhe, depois da reacção estar completa, adicionou-se acetato de etilo (500 ml) e filtrou-se a mistura reaccional através de Celite. Separaram-se as camadas e extraiu-se a camada aq. com acetato de etilo (2 X 500 ml). Lavaram-se as camadas orgânicas combinadas com uma solução de hipo a 5 % (2 x 500 ml) , salmoura (500 ml), secou-se (Na2SO4) e concentrou-se. Purificou-se o produto impuro por cromatografia (gel de sílica, hexano, acetato de etilo/n-hexano a 15-20 %) para se obter 4-iodo-l/í-indazol sob a forma de um sólido cor de laranja (23,0 g, 25 %). Pf: 151 -177 2C: RMN do 2Η (200 MHz, CDC13) δ 12,4 (largo, 1H), 8,0 (s, 1H) , 7,6 (dd, 2H) , 7,1 (d, 1H) . EMIE m/z 245 (M+l). Pureza: 95-98 % (CLAR).
Etapa D: Preparação de 4-iodo-l-(2-tetra-hidro- piranil)-indazol: Aqueceu-se a 50 2C, durante 2 h, uma mistura de 4-amino-líí-indazol (250,0 g, 1,024 moles), 3,4-di-hidro-2H-pirano (126,0 g, 1,5 moles) e PPTS (2,57 g, 0,01 moles) em CH2CI2 (1250 ml) . Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e verteu-se em água (625 ml), separaram-se as camadas e extraiu-se a camada aquosa com CH2CI2 (250 ml). Lavaram-se as camadas orgânicas combinadas com água (625 ml), secaram-se (Na2SO4) e concentraram-se. Purificou-se o resíduo impuro por cromatografia (gel de sílica, hexano, acetato de etilo/n-hexano a 5-10 %) para se obter 4-iodo-l-(2-tetra- hidropiranil)-indazol, sob a forma de um óleo (807, 0 g, 60 %) . RMN do ΧΗ (200 MHz, CDC13) δ 8,5 (s, 1H) , 7,8 (m, 1H) , 7,6 (d, 1H), 7,25 (m, 1H), 5,7 (dd, 1H), 4,2-3,8 (dd, 1H), 2,2-2,0 (m, 4H) 2,0-1,8 (m, 4H). EMIE m/z 329 (M+l).
Etapa E: Preparação de l-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-ΙΗ-indazol: Aqueceu-se a 80 2C, durante 2-3 h, uma mistura de 4-iodo-l-
(2-tetra-hidropiranil)indazol (100 g, 0,304 moles), bis-pinacalotodiborano (96,4 g, 0,381 moles), PdCl2 (dppf) (8,91 g, 0,012 moles) e acetato de potássio (85,97 g, 0,905 moles) em DMSO (500 ml). Depois de a reacção estar completa, arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e adicionou-se água (1500 ml) . Extraiu-se a massa da reacção com acetato de etilo (3 x 200 ml) e as camadas orgânicas combinadas evaporaram-se, secaram-se (Na2SO4) e concentraram-se. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em coluna (gel de sílica, hexano, acetato de etilo/hexano a 5 %) para se obter 1- (tetra-hidro-2/í-piran-2-il) -4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1/í-indazol, sob a forma de um óleo viscoso castanho (70,0 g, 70 %) . RMN do 2Η (CDC13) δ 8,5 (s, 1H) , 7,8 (m, 1H) , 7,6 (d, 1H) , 7,25 (m, 1H) , 5,7 (dd, 1H), 4,2-3,8 (dd, 1H), 2,2-2,0 (m, 4H) 2,0-1,8 (m, 4H) 1,4- 1,2 (s, 12H). EMIE m/z 329 (M+l).
Exemplo_6 4-meti1-5-(4,4,5,5-tetrametil(1,3,2-dioxa- borolan-2-il))pirimidino-2-ilamina
A uma solução de 4-metilpirimidino-2-ilamina (8,0 g, 0, 073 mole) em clorofórmio (320 mL) adicionou-se N-bromosuccinimida (13,7 g, 0,077 mole). Agitou-se a mistura reaccional no escuro durante 18 h. A CL/EM indicou que a reacção estava completa. Diluiuse a mistura com DCM, depois lavou-se com uma solução de NaOH aq 1 N e salmoura, secou-se com MgSO4, filtrou-se e concentrou-se para se obter 5-bromo-4-metilpirimidino-2-ilamina (12 g, rendimento: 86 %).
Agitou-se, durante 20 min, em atmosfera de azoto, uma mistura de 5-bromo-4-metilpirimidino-2-ilamina (5,0 g, 26 mmole), acetato de potássio (7,83g, 79,8 mmole), 4,4,5,5- tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,3,2-dioxaborolano (7,43 g, 29,2 mmol) em dioxano (140 mL). Adicionou-se à mistura reaccional um sal de adição de ácido de diclorometano e cloreto de 1,1'-bis (difenilfosfino)ferroceno-paládio (II) (1,08 g, 1,33 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional para 115 °C, durante 18 h, em atmosfera de azoto. Com a reacção completa, arrefeceu-se a mistura e adicionou-se EtOAc. Tratou-se por ultra-sons a mistura resultante e filtrou-se. Utilizou-se mais EtOAc para lavar o sólido. Lavaram-se os extractos orgânicos combinados com água, secaram-se com MgSO4, filtraram-se e concentraram-se. Purificou-se o produto impuro por cromatografia eluindo-se com
EtOAc/hexana a 20-100 % para se obter 4,5 g de 4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil (l,3,2-dioxaborolan-2-il))pirimidino-2-ilamina (rendimento: 74 %) . RMN do 2Η (DMSO, 400 MHz) : δ 8,28 (s, 1H) , 6,86 (s largo, 2H) , 2,35 (s, 3 H) , 1,25 (s, 12 H). EM (IEP) m/e (M+H+) 236,15, 154,07.
Exemplo 7 2,4,6-Tricloro-5-hidroxi-pirimidina
Etapa 1: sal de sódio de 6-hidroxi-5-metoxi-lH-pirimidino-2,4-diona
Em atmosfera de azoto, adicionou-se sódio metálico (1,15 g, 0,05 moles), em porções, a etanol (seco em peneiros moleculares de 4 À, 50 mL), a 40 °C e agitou-se a mistura até se formar uma solução. Adicionou-se ureia (3,0 g, 0,05 moles) e aqueceu-se a mistura a 100 °C, durante 15 minutos, até a dissolução estar completa. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer lentamente e adicionou-se malonato de metoximetilo (8,1 g, 0,05 moles), formando-se imediatamente um precipitado cor de rosa/branco. Depois adicionou-se etanol anidro (10 ml) para manter uma mistura que se podia agitar. Aqueceu-se a suspensão resultante, a 100 °C (refluxo), durante 4 horas. Concentrou-se a mistura reaccional in vácuo e secou-se o resíduo em vácuo forte para se obter sal de sódio de 6-hidroxi-5-metoxi-lH-pirimidino-2,4-diona, sob a forma de um sólido cor de rosa/branco, utilizado na etapa seguinte sem análise ou purificação.
Etapa 2: 2,4,6-Tricloro-5-metoxi-pirimidina
Fez-se uma suspensão de sal de sódio de 6-hidroxi-5-metoxi-lH-pirimidino-2,4-diona (21 mmole) em oxicloreto fosforoso (20 mL) e dividiu-se a mistura entre dois frascos de reacção de micro-ondas, de 20 mL. Aqueceram-se as misturas reaccionais a 130-140°C (-10-12 bar), durante 30 minutos, utilizando uma radiação de micro-ondas (aumento significativo da pressão). Combinaram-se cuidadosamente as misturas reaccionais arrefecidas e verteram-se em água quente (aproximadamente 40 °C) e extraiu-se a mistura resultante, duas vezes, com acetato de etilo, secaram-se os extractos orgânicos combinados (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter 2,4,6-tricloro-5-metoxi-pirimidina sob a forma de um sólido cristalino amarelo/castanho (3,75 g, 84 %) . RMN do 3Η (CDC13) : 3,98 (3H, s) .
Etapa 3: Em atmosfera de azoto, arrefeceu-se uma solução de 2,4, 6-tricloro-5-metoxi-pirimidina (4,0 g, 18,7 mmole) em DCM (200 mL), até 0 °C e tratou-se, gota a gota, com tribrometo de boro (puro, 6, 6 mL, 65 mmole) . Depois de se agitar, durante 18 horas, à temperatura ambiente, a análise por CL/EM indicou que a reacção estava completa. Arrefeceu-se a mistura reaccional e diluiu-se, cuidadosamente, com metanol (25 mL) e diluiu-se a mistura reaccional com água (200 mL) . Lavou-se a camada aquosa com DCM e secaram-se os extractos orgânicos combinados (Na2SO4) filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter 2,4, 6-tricloro-5-hidroxi-pirimidina, sob a forma de um sólido acastanhado claro (2,55 g, 71 %). RMN do 13C (DMSO-d6) : 149, 23 (C) , 145,25 (C) , 145, 08 (C) . CL/EM: RT= 2, 65/2,77 [M-Hf= 197/199.
Exemplo 101 1-[4-(3a,8-dimetil-7-morfolin-4-il-3,3a, 8, 8a-tetra-hidro-2h-l-oxa-4,6,8-triaza-ciclopenta[a]inden-5-il)-fenil]-3-etil-ureia 101
Etapa 1: Agitou-se. à TA (temperatura ambiente), sob N2, durante 15 h, uma mistura de 2,4-dicloro-5/í-pirrol [3,2-d]pirimidina (2,67 g, 14,2 mmole) , éster metílico do ácido metano-sulfónico (1,26 mL, 14,9 mmole) e carbonato de césio (9,25 g, 28,4 mmole) em N, N-dimet ilf ormamida anidra (21 mL) . Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo e lavou-se a camada orgânica com água/salmoura a 1:1 (3X) e salmoura (IX), secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em gel de sílica pra se obter 2,50 g (87,1 %) de 2,4-dicloro-5-metil-5/í-pirrol [ 3,2-d] pirimidina sob a forma de um sólido branco. EM (IEP) m/z: 202,2/204,1 ([M+l]+
Etapa 2: Agitou-se, à TA, sob N2, durante 15 h, uma mistura de 2,4-dicloro-5-metil-5/í-pirrol [ 3,2-d] pirimidina (1,25 g, 6,19 mmole), morfolina (1,08 mL, 12,37 mmole) e N, N-di-isopropiletilamina (2,37 ml, 13,61 mmole) em N,N-dimetilformamida (36 mL) . Diluiu-se a mistura reaccional com éter de dietilo / acetato de etilo a 1:1 e lavou-se a camada orgânica com água/salmoura a 1:1 (3X) e salmoura (IX), secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em gel de sílica pra se obter l,47g (94,0 %) de 4-(2-cloro-5-metil-5íí-pirrol [ 3,2-d] pirimidin-4-il) -morfolina, sob a forma de um sólido branco. EM (IEP) m/z: 253,1/255,1 ([M+l]+
Etapa 3 A uma mistura agitada de 4-(2-cloro-5-metil-5í7-pirrol [3,2-d] pirimidin-4-il) morfolina (1,46 g, 5,78 mmole) em álcool terc-butílico (50 mL) e água (20 mL) , à TA, adicionou-se NBS (3,08 g, 17,33 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, a 30 °C, durante 18 h. Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo e lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o produto impuro por cromatograf ia em gel de sílica pra se obter 2,45g (99,4 %) de 7,7-dibromo-2-cloro-5-metil-4-morfolino-5íí- pirrol[3,2-d]pirimidin-6(ΊH)-ona, sob a forma de um sólido. EM (IEP) m/z: 427 [M+l]+.
Etapa 4: Adicionou-se pó de zinco (573,4 mg, 8,775 mmole) a 7,7-dibromo-2-cloro-5-metil-4-morfolino-577-pirrol-[3,2-d] pirimidin-6 (777)-ona (1,70 g, 3,99 mmole), numa solução aquosa 2M de cloreto de amónio (9,96 mL, 19,9 mmole) e THF (40 mL), a 0 °C. Agitou-se a mistura reaccional, à TA, durante 30 min e depois diluiu-se com DCM (40 mL) . Filtrou-se a mistura reaccional através de uma almofada de Celite. Separaram-se as camadas e lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, água e salmoura, secou-se com Na2SC>4, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o produto impuro por cromatografia em gel de sílica pra se obter 679 mg (63,4 %) de 2-cloro-5-metil-4-morf olino-5íí-pirrol [ 3,2-d] pirimidin-6 (777)-ona, sob a forma de um sólido. EM (IEP) m/z: 269,2 [M+l]+.
Etapa 5: Adicionou-se, gota a gota, hexametildi-silazida de lítio 1,0 M, em THF (3,8 mL, 3,8 mmole) a 2-cloro-5-met il-4-morf olino-577-pirrol [3,2-d] pirimidin-6 (777) -ona (466,0 mg, 1,73 mmole) em THF anidro (25 mL), sob N2, a -78 °C. Agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, em atmosfera de N2, durante 60 minutos. Depois adicionou-se iodeto de metilo (0,32 mL, 5,20 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, durante 18 h. Parou-se a reacção com uma solução aquosa saturada de NH4C1 e diluiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. A purificação por cromatograf ia em gel de sílica e a eluição com acetato de etilo / heptano a 20 até 100 % originou dois compostos: 2-cloro-5,7,7-trimetil-4-morfolino-5/7-pirrol [3,2-d] pirimidin- 6(7/í)-ona (169,0 mg, 32,8 %) como primeiro produto eluído; EM (IEP) m/z: 297,0 [M+l]+ e 2-cloro-5,7-dimetil-4- morf olino-5A-pirrol [ 3,2-d] pirimidin-6 (ΊH) -ons como segundo produto eluído (63,8 mg, 13,0 %) ; EM (IEP) m/z: 283,2 [M+l]+.
Etapa 6: Adicionou-se, gota a gota, hexametildi-silazida de lítio 1,0 M, em THF (0,65 mL, 0,65 mmole) a 2-cloro-5,7-dimetil-4-morf olino-5íí-pirrol [ 3,2-d] pirimidin-6(77í)-ona (92,0 mg, 0,323 mmole) em THF anidro (5 mL) , sob N2, a -78 °C. Agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, em atmosfera de N2, durante 60 minutos. Adicionou-se brometo de alilo (0,062 mL, 0,72 mmole) dissolvido em 0,5 mL de THF e agitou-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, durante 16 h. Parou-se a reacção com uma solução aquosa saturada de NH4C1 e diluiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. A purificação por cromatograf ia em gel de sílica com uma eluição de acetato de etilo / heptano a 10 até 100 % originou 84,3 mg (80,3 %) de 7-alil-2-cloro-5,7-dimetil-4-morfolino-5íí- pirrol[3,2-d]pirimidin-6(ΊH)-ona. EM (IEP) m/z : 323,1 [M+l]+.
Etapa 7: A uma solução agitada de 7-alil-2-cloro-5,7-dimetil-4-morfholino-5íí-pirrolo [3,2-d] pirimidin-6 (7H) -ona (80,0 mg, 0,25 mmole) em THF anidro (3,0 ml) e água (1,0 mL) , arrefecido a 0 °C, adicionou-se N-óxido de N- metilmorfolina (3,8 mg, 0,29 mmole), seguido de tetraóxido de ósmio a 2,5 % em terc-butanol (0,033 mL, 0,025 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, em atmosfera de N2, durante 16 h. Adicionou-se depois sulfito de sódio (312,4 mg, 2,48 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, à TA, durante 20 min. Diluiu-se a mistura reaccional com água e depois extraiu-se com acetato de etilo (2x) . Secaram-se as camadas orgânicas combinadas com Na2SO4, filtraram-se e concentraram-se in vacuo. Depois diluiu-se o produto intermédio impuro com THF anidro (3,0 mL) e água (1,0). Adicionou-se periodato de sódio (79,5 mg, 0,372 mmole) e tratou-se com ultra-sons a mistura reaccional, durante 1 minuto e depois agitou-se, à TA, durante 2 dias. Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo e lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se, in vacuo, para se obter 80,4 mg (99 %) de 2-(2-cloro-5,7-dimetil-4-morfolino-6-oxo-6,7-di-hidro-5A-pirrol[3,2-d]pirimidin-7-il)acetaldeído. EM (IEP) m/z: 325, 1 [M+l]+.
Etapa 8: A uma solução agitada de 2-(2-cloro-5,7-dimetil-4-morfolino-6-oxo-6,7-di-hidro-5A-pirrol[3,2-d]-pirimidin-7-il)acetaldeído (80,4 mg, 0,248 mmole) em THF (3,7 mL) e metanol (0,25 mL) , a 0 °C, adicionou-se boro- hidreto de sódio (20,6 mg, 0,55 mmole), numa só porção. Agitou-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, sob atmosfera de N2, durante 5 h e depois diluiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. A purificação, por cromatografia em gel de sílica, eluída com acetato de etilo/heptano a 15 a 100 % originou 76 mg (99 %) de 4- (2-cloro-5-met il - {3a, 6-dimet il-hexa-hidro-2A-furo [2,3-b]pirrol}[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina. EM (IEP) m/z : 311,2 [M+l]+.
Etapa 9: Num frasco de micro-ondas, colocou-se 4-(2-cloro-5-metil-{3 a,6-dimetil-hexa-hidro-2 H- furo[2,3-b]-pirrol}[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (70,0 mg, 0,225 mmole), éster pinacólico de ácido 4-nitrofenilborónico (70,1 mg, 0,281 mmole), tetraquis(trifenilfosfino)paládio (0) (18,2 mg, 0,016 mmole), carbonato de sódio (41,1 mg, 0,38 mmole) e carbonato de potássio (49,8 mg, 0,36 mmole). Adicionou-se acetonitrilo desgaseifiçado (3,5 mL) e água desgaseifiçada (1,0). Submeteu-se a mistura reaccional a radiação por micro-ondas, a 120 °C, durante 15 minutos. Diluiu-se a reacção arrefecida com acetato de etilo e filtrou-se a mistura reaccional através de uma almofada de Celite para eliminar o excesso de Pd. Lavou-se a camada orgânica com água e salmoura, secou-se com Na2SO4, filtrou-se e concentrou-se in vácuo. A purificação, por cromatografia em gel de sílica, eluída com acetato de etilo/heptano a 10 a 100 % originou 75,3 mg (84,1 %) de 4-(5-meti 1-2- (4-nitrofenil) -{3a, 6-dimetil-hexa-hidro-2/í-furo-[ 2,3-b]pirrol}[3,2-d]-pirimidin-4-il)morfolina. EM (IEP) m/z: 398,3 [M+l]+.
Etapa 10: A uma solução agitada de 4-(5-metil-2-(4-nitrofenil) - {3a, 6-dimetil-hexahidro-2/í-furo [2,3-b]pirrol}-[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (78,0 mg, 0,196 mmole) dissolvida em etanol (4,7 mL) e água (3,1 mL) adicionou-se cloreto de amónio (210 mg, 3, 93 mmole) seguido de ferro (54,8 mg, 0,982 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, a 95 °C, durante 2 h e depois diluiu-se com MeOH/DCM a 10 % e uma solução aquosa saturada de NaHCCb. Tratou-se com ultra-sons a mistura reaccional e depois filtrou-se através de uma almofada de Celite para libertar o ferro. Extraiu-se o filtrado com DCM (3x) e lavaram-se as camadas orgânicas combinadas com salmoura, secaram-se com Na2SO4, filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter 68,0 mg (94,2 %) de 4-(5-metil-4-morfolino-13a,6-dimetil-hexa- hidro-2H—furo-[2,3-b]pirrol][3,2-d]pirimidin-2-il)anilina sob a forma de uma espuma branca. EM (IEP) m/z: 368,2 [M+l]+.
Etapa 11: A uma solução agitada de 4-(5-metil-4-morfolino-{3a, 6-dimetil-hexa-hidro-2/í-furo [2,3-b] pirrol}-[3,2-d]pirimidin-2-il)anilina (17,4 mg, 0,047 mmole) em 1,2-dicloroetano anidro (1,4 mL) adicionou-se isocianato de etilo (0,037 mL, 0,47 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, a 50 °C, em atmosfera de N2, durante 2 h. Parou-se a reacção com MeOH (1 ml) . Eliminou-se o dissolvente volátil, a pressão reduzida e purificou-se o produto impuro por CLAR para se obter 11,50 mg (55,4 %) de 101 sob a forma de um sólido macio. RMN do :H (400 MHz,
DMSO) δ 8,57 (s, 1H) , 8,14 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 2H) , 6,12 (t, J = 5,6 Hz, 1H) , 4,98 (s, 1H) , 3,87 (t, J = 7,0 Hz, 1H) , 3, 84 - 3, 66 (m, 4H) , 3, 60 - 3,48 (m, 2H) , 3,43 - 3,36 (m, 1H) , 3,34 - 3,28 (m, 2H) , 3,16 - 3,06 (m, 2H) , 2,81 (s, 3H) , 2,15 (dd, J = 12,2, 3,4 Hz, 1H) , 2, 03 - 1, 88 (m, 1H) , 1,47 (s, 3H) , 1,06 (t, J = 7,2 Hz, 3H). EM (IEP) m/z: 439,2 [M+l]+.
Exemplo 102 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-4-metilpirimidin-2-amina 102
Aqueceu-se uma mistura de 2-(2-(2-amino-4-metil-pirimidin-5-il)-9-(2-hidroxietil)-6-morfolino-9H-purin-8-il) propan-2-ol (550 mg, 1,3 mmole) e TFA (0,36 mL, 4,7 mmole) em tolueno (9 mL) , a 110 °C e agitou-se, durante 4 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e concentrou-se in vacuo. A CL-EM analitica
indicou a conversão no produto cíclico, assim como a eliminação dos sub-produtos 2-(2-(2-amino-4-metilpirimidin-5-il)-6-morfolino-8-(prop-l-en-2-il)-9H-purin-9-il)etanol. Dissolveu-se o resíduo impuro em DMF (1 mL) e purificou-se por CLAR-ti preparativa. Este processo originou 302 mg (rendimento de 57 %) de 102. EM (IEP) : m/z; 397,4 (M+H+) RMN do 2Η NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,79 (s, 1H), 6,78 (s, 2H), 4,20 (s, 4H) , 4,12 (s, 4H) , 3,74 (s, 5H) , 2,63 (s, 4H) , 1,58 (s, 7H)
Exemplo 103 5-(6, 6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 103
Etapa 1: 2-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)propan-2-ol
Arrefeceu-se 4- (2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (20,0 g, 0,062 mole) para -42 °C, em THF (400 mL) . Adicionou-se, em porções, uma solução de n-butil-lítio (2,5 M em hexanos, 48 mL, 0,12 mole), ao longo de 10 min. A mistura tornou-se gradualmente amarela. Depois deixou-se a mistura reaccional em agitação, a -42 °C, durante 30 minutos e depois adicionou-se, de uma só vez, acetona anidra (10 mL, 0,1 mole). Aqueceu-se lentamente a mistura reaccional resultante para 0 °C, ao longo de um período de 2 horas. Em seguida parou-se a reacção com água, extr'iu-se com EtOAc e secou-se com MgSCg. Filtrou-se a pasta e concentrou-se in vacuo para se
obter 2-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)propan-2-ol (23 g, 98 %) sob a forma de um sólido amarelo. EM (IEP + ): m/z 382,1 (M+H+) 2-(2-cloro-6- morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il) -propan-2-ol
Etapa 2: 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purina
Fez-se uma suspensão de 2- (2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)propan-2-ol (23 g, 0,06 mole) em MeOH (270 mL) e adicionou-se uma quantidade catalítica de mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico (1,22 g, 7,1 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional, a 50 °C e agitou-se durante 16 h. Quando se continuou o aquecimento, a solução tornou-se homogénea. A CL-EM indicou que a conversão estava completa com o produto desprotegido de THP. Concentrou-se a mistura reaccional até eliminar completamente o MeOH e em seguida dissolveu-se o sólido resultante com água e EtOAc. Repartiram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa, três vezes, com EtOAc, secou-se com MgSO4, filtrou-se e concentrou-se. Tratou-se 2-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)propan-2-ol (aproximadamente 15,0 g, 50,4 mmole) com 1,2-dibromoetano (8,7 mL, 100 mmole) e carbonato de césio (41,0 g, 126 mmole) em DMF (200 mL) . Aqueceu-se a mistura reaccional, a 90 °C, durante 1,5 h. A CL-EM indicou a conversão completa no produto cíclico com a presença de ~10 % do produto de eliminação de E2. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e verteu-se num funil de separação conto HCL 1 N e EtOAc (50:50) . Extraiu-se a camada aquosa, várias vezes, com EtOAc e lavaram-se as porções orgânicas combinadas, uma vez, com água. A subsequente secagem com MgSO4 foi seguida de filtração e concentração para se obter um resíduo oleoso impuro. Carregou-se este material numa coluna de 300 g de ISCO e purificou-se, lentamente por cromatografia rápida (gradiente de EtOAc em heptano a 15-30 %) . Concentraram-se as fracções contendo o produto desejado e secaram-se sob uma pressão de vácuo forte, por um período de uma noite, para se obter 14,3 g (rendimento de 88 %) de 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3, 4-e] -purina. EM (IEP): m/z; 324,2 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 4,07 (m, 8H), 3,72 (m, 4H), 1,57 (s, 6H)
Etapa 3: A 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di- hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (180 mg, 0,56 mmole) em 1,2-dimetoxietano (5,1 mL) adicionou-se 5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina 25 (180 mg, 0,83 mmole) e carbonato de césio 1,0 M em água (1,7 mL) . Desgaseificou-se a mistura reaccional durante 5 min e reciclou-se em atmosfera de azoto. Em seguida, adicionou-se cloreto de 1, 1'-bis(difenilfosfino)ferrocenopaládio (II) (54 mg, 0,067 mmole) e desgaseificou-se e reciclou-se novamente a mistura. Submeteu-se então o frasco da reacção a uma radiação de micro-ondas, durante 20 mins, a 140 °C.
Filtrou-se o precipitado sólido que se formou durante a reacção e lavou-se com um excesso de água. Recolheu-se o precipitado em DCM e purificou-se por FCC (40 g, MeOH a 0,5-4 % em DCM, gradiente lento) para se isolar 103 sob a forma de um pó acastanhado (56 mg, rendimento de 27 %) . EM
(IEP): m/z; 383,1 (Μ+Η+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (s, 2H) , 7,00 (s, 2H) , 4,23 (m, 4H) , 4,13 (m, 4H) , 3,79 -3,68 (m, 4H) , 2,50 (s, 6H)
Exemplo 104 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-4-(trifluorometil)piridil-2-amina 104
Fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (180 mg, 0,56 mmole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-4-(tri-fluorometil)piridin-2-amina (240 mg, 0,83 mmole), em micro-ondas, nas condições de Suzuki, com paládio, para se obter 104 (204 mg, rendimento de 70 %) . CL/EM (IEP) : m/z; 450 (M+H+) RMN do 2Η NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,47 (s, 1H) , 6,82 (s, 1H), 6,70 (s, 2H), 4,19 (s, 4H), 4,11 (s, 4H) , 3,71 (s, 4H), 1,59 (s, 6H)
Exemplo 105 5-(4-morfolino-8,9-di-hidro-7h-[1,3]oxazino- [ 2,3-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 105
Etapa 1: 4-(2-cloro-8-iodo-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)morfolina
A uma solução de 4-(2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il) morfolina (1,0 g, 3,1 mmole) e Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilenodiamina (0,7 mL, 4,6 mmole) em THF anidro (23 mL) , a -42 °C, adicionou-se, gota a gota, uma solução
2,5 M de n-butil-lítio em hexano (4,3 mL, 11,0 mmole) pelo lado do frasco da reacção. Agitou-se a mistura reaccional a uma temperatura baixa e manteve-se durante 1 h antes de se introduzir l-cloro-2-iodoetano (1,4 mL, 15 mmole). Continuou-se a agitação durante um período de 1,5 h. A CL-EM indicou que a reacção tinha atingido uma conversão completa no produto desejado. Em seguida parou-se a reacção e tratou-se com uma solução aquosa saturada de NH4C1 que se extraiu com EtOAc (3 vezes) , secou-se com MgSO4, filtrou-se e concentrou-se in vacuo para se obter 4-(2-cloro-8-iodo-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (1,4 g, rendimento de 84 %) determinando-se por CL-EM como tendo uma pureza > 90 %. EM (IEP+): m/z; 450,1 (M+H+)
Etapa 2: 4-(2-Cloro-8-iodo-9-(3-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)propil)-9H-purin-6-il)morfolina
A uma suspensão de 4- (2-cloro-8-iodo-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (0,655 g, 1,46 mmole) em metanol (6 mL) adicionou-se uma quantidade catalítica de ácido p-tolueno-sulfónico (25 mg, 0,14 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional para 50 °C, durante um período de uma noite. Passado este tempo,
arrefeceu-se a mistura para a temperatura ambiente e reduziu-se o volume de metanol por evaporação em vácuo. Diluiu-se o resíduo resultante com uma solução aquosa sat. de NaHCO3. Recolheu-se por filtração o precipitado que se formou. No total, obteve-se 295 mg (56 %) de 4-(2-cloro-8-iodo-9H-purin-6-il)morfolina, sob a forma de um sólido branco que se dissolveu em DMF anidra (2,5 mL). Adicionou-se carbonato de césio (0,53 g, 1,61 mmole) e agitou-se a mistura, em conjunto, 10 min, a 23 °C. Em seguida, introduziu-se na mistura 1-(2H-3,4,5,6-tetra-hidropiran-2-iloxi)-3-bromopropano (0,54 g, 2,42 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional resultante a 50 °C, durante 2 h.
Observou-se a conversão completa no fim deste período. Tratou-se a mistura reaccional por diluição com HC1 1 N e EtOAc. Separaram-se as fases e extraiu-se a camada aquosa, duas vezes, com EtOAc. Secaram-se as porções orgânicas combinadas com MgSO4, filtraram-se e concentraram-se in vacuo. O resíduo foi purificado por FCC (coluna de 40 g de gel de sílica, EtOAc em heptano a 0-50 %) para se obter 385 mg (rendimento de 94 %) de 4-(2-cloro-8-iodo-9-(3- (tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)propil)-9H-purin-6-il)-morfolina, sob a forma de um sólido amarelo claro. EM (IEP + ) : m/z; 508,0 (M+H+)
Etapa 3: 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-7H-[1,3]oxazino-[2,3-e]purina
Adicionou-se ácido p-tolueno-sulfónico (10 mg, 0,08 mmole) a 4-(2-cloro-8-iodo-9-(3-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)-propil)-9H-purin-6-il)morfolina (0,39 g, 0,8 mmole) em metanol (5 mL) . Aqueceu-se a mistura reaccional a 50 °C, durante 30 min, observando-se precipitação que sinalizava o fim da reacção. Tudo isto foi confirmado por análise por CL-EM. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo para se obter 3- (2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)propan-l-ol. Combinou-se iodeto de cobre (I) (9 mg, 0,05 mmole), ácido picolinico (10 mg, 0,09 mmole) e fosfato de potássio (0,4 g, 1,9 mmole) a seco, num forno, num frasco de fundo redondo, de 50 mL e evacuaram-se/reciclaram-se numa atmosfera de N2. Em seguida, dissolveu-se 3- (2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)propan-l-ol em dimetil-sulfóxido anidro (6,7 mL) e introduziu-se, por via de uma seringa. Aqueceu-se toda a mistura a 80 °C, durante 20 h. A CL-EM indicou uma boa conversão no produto desejado. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente, diluiu-se com água e EtOAc, secou-se com MgSCg, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo por FCC (coluna de 40 g de gel de sílica, EtOAc em heptano a 0-100 %) para se obter 112 mg de 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-7H-[1,3]oxazino-[2,3-e]purina (40 %) . EM (IEP + ) : m/z; 296,2 (M+H+)
Etapa 4: Colocou-se 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-7H-[1,3]oxazino[2,3-e]purina (112 mg, 0,38 mmole), 5- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina 25 (0,1 g, 0,454 mmole), carbonato de césio 1 M em água (0,8 mL, 0,8 mmole) e acetonitrilo (0,8 mL) num frasco de reacção em micro-ondas CEM de 10 mL e tapou-se. Esvaziou-se lentamente o frasco em vácuo e substituiu-se com uma atmosfera de azoto.
Introduziu-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (43,8 mg, 0,038 mmole) e repetiu-se o ciclo de esvaziamento/N2. Irradiou-se a mistura reaccional, num micro-ondas, a 140 °C, durante 20 min. A CL-EM indicou que a conversão estava completa. Filtrou-se a mistura através de uma pequena almofada de Celite®, eluindo-se com EtOAc e concentrando-se em seguida in vácuo. Purificou-se o resíduo por CLAR-ti para se obter 105 (62,3 mg, rendimento de 46 %) . EM (IEP + ) : m/z; 355, 1 (M+H+)
Exemplo 10 6 5- (4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1- e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 106
Etapa 1: 4-(8-(4-bromobutil)-2-cloro-9-(tetra-hidro-2H- piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina
Arrefeceu-se, para -42 2C, uma solução de 4-(2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (exemplo 118) (5,0 g, 15 mmole) e N,N,N',N'-tetrametil-etilenodiamina (3,5 mL, 23 mmole) em THF (110 mL) e tratou-se, gota a gota, com uma solução 2,5 M de n-butil-lítio em hexano (22 mL, 54 mmole), ao longo de 5 minutos. Passados 30 minutos a -42 °C, adicionou-se 1,4-dibromo-butano (8,9 mL, 75 mmole) e aqueceu-se lentamente a mistura
reaccional para 0 °C, ao longo de 1 h e depois aqueceu-se para a temperatura ambiente, durante 90 minutos. Parou-se a reacção com uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se com acetato de etilo. Extraiu-se a camada aquosa em acetato de etilo (3x) e secaram-se as camdas orgânicas combinadas com sulfato de sódio, filtraram-se e foram absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 4-(8-(4-bromobutil)-2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina, sob a forma de um sólido (1,1 g, 15 %). CL/EM (IEP+): m/z 459 (M+H)
Etapa 2: 4-(8-(4-bromobutil)-2-cloro-9H-purin-6-il)-morfolina
Tratou-se uma suspensão de 4-(8-(4-bromobutil)-2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (1,1 g, 2,4 mmole) em metanol (10 mL) com ácido p-tolueno-sulfónico (40 mg, 0,24 mmole) e aqueceu-se, durante a noite, a 50 °C. Eliminou-se o dissolvente in vacuo para se obter 4-(8-(4-bromobutil)-2-cloro-9H-purin-6-il)morfolina, sob a forma de um sólido branco que se utilizou na etapa seguinte sem mais purificação (880 mg, quant). CL/EM (IEP+): m/z 375 (M+H)
Etapa 3: 4-(2-cloro-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1-e]purin- 2-il)-morfolina
Tratou-se uma suspensão de 4-(8-(4-bromobutil)-2-cloro-9H-purin-6-il)morfolina (880 mg, 2,4 mmole) em DMSO (6,7 mL) com carbonato de césio (1,5 g, 4,7 mmole) e aqueceu-se, a 50 °C, durante 1 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e diluiu-se com água e DCM e separaram-se as camadas. Extraiu-se a fase aquosa em DCM (3x), secou-se com sulfaato de sódio, filtrou-se e o produto foi absorvido em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 4-(2-cloro-6,7,8,9,-(tetra-hidro-pirido[2,3-e]-2-il)-purin-4-il)morfolina, sob a forma de um sólido branco (460 mg, 67 %). RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 4,28 - 4,03 (m, 4H) , 4,00 (m, 2H) , 3,69 (m, 4H), 2,90 (m, 2H), 2,01-1,86 (m, 4H). CL/EM (IEP+): m/z 294 (M+H)
Etapa 4: Seguindo o procedimento geral A, fez-se uma suspensão de 4-(2-cloro-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1-e]-purin-4-il)morfolina (310 mg, 1,0 mmole), 5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina (300 mg, 1,4 mmole) e tetraquis(trifenilfosfina)-paládio (0) (61 mg, 52 umole, 5,0 mole %) em MeCN (2,6 mL) e Na2CO3 1,0 M (2,0 mL) , aqueceu-se sob uma radiação de micro-ondas, a 140 °C, durante 15 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional arrefecida até à secagem in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR para se obter 106 sob a forma de um sólido branco (220 mg, 60 %) . RMN do 2Η (500 MHz, DMSO) δ 9,09 (s, 2H) , 7,01 (s, 2H) , 4,23 (s, 4H) , 4,08 (s, 2H) , 3,73 (s, 4H) , 2,92 (s, 2H) , 2,00 (s, 2H) , 1,93 (s, 2H). CL/EM: RT = 6,13 min, M+H+ = 353,1
Exemplo 107 5- (4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1- e]purin-2-il)-piridin-2-amina 107
Fez-se uma suspensão de 4-(2-cloro-6,7,8,9-tetra-hidropirido [ 2, 1-e ] purin-4-il) morfolina do exemplo 106 (150 mg, 0,50 mmole), 5- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (140 mg, 0,64 mmole) e tetraquis(trifenilfosfina)-paládio (0) (29 mg, 25 umole, 5,0 mole %) em MeCN (1,2 mL) e Na2CO3(aq) 1,0 M (0,94 mL) e aqueceu-se, sob uma radiação de micro-ondas, a 140 °C, durante 15 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional arrefecida até a secagem, in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR para se obter 107 sob a forma de um sólido branco (170 mg, 63 %) . RMN do 2Η (500 MHz, DMSO) δ 8,91 (s, 1H) , 8,27 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 6,48 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,27 (s, 2H), 4,22 (s, 4H), 4,07 (s, 2H), 3,73 (s, 4H) , 2,91 (s, 2H) , 2,01 (s, 2H) , 1,92 (s, 2H) . CL/EM: RT = 6,23 min, M+H+ = 352,1
Exemplo 108 5-(4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino- [3,4-e]purin-2-il)-4-(trifluorometil)piridil-2-amina 108
Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purina (80 mg, 0,0003 mmole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-4-(trifluoro-metil)piridin-2-amina (120 mg, 0,0004 mmole), em micro-
ondas, nas condições de Suzuki com paládio para se obter 108 (40 mg, rendimento de 40%) . CL/EM (IEP) : m/z; 422 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 8,56 - 8,42 (m, 1H) , 6,81 (s, 1H) , 6,76 (s, 2H) , 4,93 (s, 2H) , 4,16 (d, J= 20, 6 Hz, 8H), 3,80- 3,58 (m, 4H)
Exemplo 10 9 5-(4-morfolino-7,8-di-hidro-6h-pirrol[2,1-e]- purin-2-il)-pirimidin-2-amina 109
Etapa 1: 4-(9-alil-2-cloro-8-iodo-9H-purin-6-il)morfolina
Agitou-se, à temperatura ambiente, durante 10 minutos, 4-(2-cloro-8-iodo-9H-purin-6-il)morfolina (500 mg, 1,0 mmole) em conjunto com carbonato de césio (890 mg, 2,7 mmole) em DMF (4,2 mL). Introduziu-se brometo de alilo (0,36 mL, 4,1 mmole) e aqueceu-se a mistura reaccional, a 50 °C, durante for 2 h. Arrefeceu-se a mistura para a temperatura ambiente e diluiu-se com salmoura e DCM e separaram-se as camadas. Extraiu-se a fase aquosa em DCM (3x), secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e foi absorvida em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 4-(9-alil-2-cloro-8-iodo-9H-purin-6-il) morfolina, sob a forma de uma espuma branca (480 mg, 90 %) . RMN do 2Η (500 MHz, DMSO) δ 5,94 (d, J= 10,6 Hz, 2H) , 5,76 (s, 1H) , 5,19 (d, J= 10,3 Hz, 2H) , 4,79 (d, J= 16,9 Hz, 2H), 4,69 (s, 2H), 3,73 (s, 4H). CL/EM (IEP+): m/z 406 (M+H)
Etapa 2: 4-(2-cloro-7,8-di-hidro-6H-pirrrol[2,1-e]purin-4- il)-morfolina
Adicionou-se 4- (9-alil-2-cloro-8-iodo-9H-purin-6-il)-morfolina (230 mg, 0,57 mmole) a uma solução 0,50 M de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano em hexano (1,7 mL) , à temperatura ambiente. Adicionou-se THF para solubilizar a mistura reaccional. Não se verificou conversão imediata com a adição de 9-borabiciclo[3.3.1]nonano 0,50 M em hexano (1,7 mL) e agitou-se a mistura reaccional, durante 15 h. Adicionou-se mono-hidrato de fosfato de potássio (200 mg, 0,85 mmole) e tetraquis(trifenilfosfino)-paládio (0) (16 mg, 14 umole, 2,5 mole %) e aqueceu-se a mistura reaccional a 60 °C, durante 15 h. Arrefeceu-se a mistura para a temperatura ambiente e diluiu-se com água e DCM e separaram-se as camadas. Extraiu-se a fase aquosa em DCM (3x) , secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e foi absorvida em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 4-(2-cloro-7,8,-(di-hidro-6H-pirrol-[ 2,3-e]-2-il)-purin-4-il)morfolina, sob a forma de um sólido branco (32 mg, 20 %). CL/EM (IEP+): m/z 280 (M+H)
Etapa 3: Fez-se uma suspensão de 4-(2-cloro-7,8-di-hidro-6H-pirrol[2,1-e]purin-4-il)morfolina (32 mg, 0,11 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina (33 mg, 0,15 mmole) e tetraquis(tri- fenilfosfina)-paládio (0) (6,6 mg, 5,7 umole, 5,0 mole %) em MeCN (0,28 mL) e Na2CO3 1,0 M (0,22 mL) , aqueceu-se sob uma radiação de micro-ondas, a 140°C, durante 15 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional arrefecida até à secagem in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR para se obter 109, sob a forma de um sólido branco (1,7 mg, 4,4 %) .RMN do (400 MHz, DMSO) δ 8,99 (s, 1H) , 7,75 (s, 1H) , 6,95 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 6,92 (s, 1H) , 6,88 (s, 1H) , 6,02 (s, 1H) , 5,85 (hept, J = 6,6 Hz, 1H) , 4,65 (s, 1H) , 4,50 - 4,36 (m, 6H), 3,73 (s, 6H), 2,24 (s, 3H) , 1,44 (d, J =6,6 Hz, 6H). CL/EM: RT = 3,48 min, M+H+ = 339,1
Exemplo 110 6, 6-dimetil-4-morfolino-2-(lH-pirrol[2,3-b]-piridin-5-il)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 110
Fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (100 mg, 0,0003 mmole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirrol-[2,3-b]piridina (110 mg, 0,00046 mole), em micro-ondas, nas condições de Suzuki com paládio para se obter 110 (54 mg, rendimento de 50 %). CL/EM (IEP): m/z; 406 (M+H+) RMN do 2H (400 MHz, DMSO) δ 11,75 (s, 1H) , 9,27 (d, J= 1,8 Hz, 1H) , 8,88 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 7,60 - 7,41 (m, 1H) , 6,57 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 4,29 (s, 4H) , 4,17 (dd, J= 18,0, 5,1 Hz, 4H) , 3, 88 - 3, 69 (m, 4H) , 1,60 (s, 6H)
Exemplo 111 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-2-amina 111
Fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (100 mg, 0,0003 mole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-2-amina (110 mg, 0,0005 mmole), em micro-ondas, nas condições de Suzuki com paládio para se obter 111 (75 mg, rendimento
de 70 %) . CL/EM (IEP) : m/z; 382 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 8,92 (d, J= 2,1 Hz, 1H), 8,27 (dd, J = 8,7, 2,2 Hz, 1H) , 8,16 (s, 1H) , 6,49 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,26 (s, 2H) , 4,22 (s, 4H) , 4,12 (s, 4H) , 3, 86 - 3, 65 (m, 4H) , 1,57 (s, 6H)
Exemplo_112 5-(4-morfolino-8,9-di-hidroespiro-[1,3]- oxazino[2,3-e]purina-7,1'-ciclopropano]-2-il)-pirimidin-2-amina 112
Etapa 1: 1-(2-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)etil)- ciclopropanol
Tratou-se uma solução de 3-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanoato de etilo (500 mg, 1,5 mmole) em éter dietílico (37 mL) com etóxido de titânio (IV) (31 uL, 0,15 mmole) seguido da adição, gota a gota, de brometo de etilmagnésio 3,0 M em éter (0,98 mL, 2,9 mmole), à temperatura ambiente, durante 90 minutos. A conversão parcial induziu a adição de etóxido de titânio (IV) (31 uL, 0,15 mmole) e brometo de etilmagnésio 3,0 M em éter (0,98 mL, 2,9 mmole). Passadas 2 h, parou-se a reacção com uma solução aquosa 1,0 M de HC1 (20 mL) e filtrou-se através de uma almofada de celite e lavou-se com acetato de etilo. Diluiu-se a mistura com água e acetato de etilo e as camadas separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa em EtOAc (3x), secaram-se com sulfato de sódio, filtraram-se e foram
absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 1-(2-(2-cloro-6-mprfolino-9H-purin-9-il)etil)ciclopropanol, sob a forma de um óleo incolor (220 mg, 46 %). CL/EM (IEP+): m/z 324 (M+H)
Etapa 2: 1-(2-(2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)- etil)ciclopropanol
Arrefeceu-se, para -42 2C, uma solução de 1-(2-(2- cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)etil)ciclopropanol (220 mg, 0,068 mmole) e N,N,N',N'-tetrametiletileno-diamina (0,15 mL, 1,0 mmole) em THF (4,9 mL) e tratou-se, gota a gota, com uma solução 2,5 M de n-but il-lit io em hexano (1,5 mL, 3,7 mmole), ao longo de 5 minutos. Passados 30 minutos, a -42 °C, adicionou-se l-cloro-2-iodoetano (0,31 mL, 3,3 mmole) e aqueceu-se lentamente a mistura reaccional para 0 °C, ao longo de 1 h. Parou-se a reacção com uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se com acetato de etilo. Extraiu-se a camada aquosa em acetato de etilo (3x) e secaram-se as camdas orgânicas combinadas com sulfato de sódio, filtraram-se e foram absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 1-(2- (2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)etil)ciclo-
propanol, sob a forma de um óleo incolor (220 mg, 71 %) . CL/EM (IEP+): m/z 450 (M+H)
Etapa 3: 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-espiro[[1,3]- oxazino[2,3-e]purino-7,1'-ciclopropano]
Combinou-se iodeto de cobre (I) (4,6 mg, 24 umole), ácido picolinico (6,0 mg, 48 mmole) e fosfato de potássio (210 mg, 0,97 mmole), num frasco de fundo redondo, seco num forno e esvaziou-se/reciclou-se com N2 (3x). Em seguida, dissolveu-se uma solução de 1-(2-(2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)etil)ciclopropanol (220 mg, 0,48 mmole) em DMSO (3,4 mL) introduzido através de uma seringa. Aqueceu-se a mistura reaccional para 80 °C, durante 20 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e diluiu-se com água e acetato de etilo e separaram-se as camadas. Extraiu-se a fase aquosa em EtOAc (3x), secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e foi absorvida em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 2-cloro-4-morfolino-8, 9-di-hidro-espiro [[-1,3]-oxazino[2,3-e]-purino-7,1'-ciclopropano], sob a forma de um sólido amarelo (41 mg, 26 %). CL/EM (IEP+): m/z 322 (M+H)
Etapa 4: Fez-se uma suspensão de 2-cloro-4-moprfolino-8,9-di-hidroespiro[[1,3]oxazino[2,3-e]purino-7,1'-ciclopropano]
(37 mg, 0,11 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa- borolan-2-il)pirimidin-2-amina (33 mg, 0,15 mmole) e tetraquis(trifenilfosfino)-paládio (0) (6,6 mg, 5,7 umole, 5,0 mole %) em MeCN (0,28 mL) e Na2CO3 1,0 M (0,22 mL) , aqueceu-se sob uma radiação de micro-ondas, a 140°C, durante 15 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional arrefecida até à secagem in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR para se obter 112 sob a forma de um sólido branco (22 mg, 50 %) . RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,07 (s, 2H) , 6,96 (s, 2H) , 4,22 (t, J = 6,0 Hz, 2H) , 4,11 (s, 4H) , 3,75 - 3, 65 (m, 4H) , 2,26 (t, J = 5,9 Hz, 2H) , 1,08 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 0,90 (t, J = 6,6 Hz, 2H) . CL/EM: RT = 3,57 min, M+H+ = 381,1.
Exemplo 113 5-(4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino- [3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 113
Etapa 1: 2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purino-8-carbaldeído
A uma mistura de 4- (2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (5 g, 20 mmole) em THF (100 mL) , a -78 °C, adicionou-se, gota a gota, tetrametil-etilenodiamina (3,5 mL, 23 mmole) seguido de n-BuLi 2,5 M (9,3 mL, 23 mmole). Agitou-se a mistura reaccional a -78 °C, durante 1 hora e depois adicionou-se N,N- dimetilformamida (2,4 mL, 31 mmole), continuou-se a agitação, durante 1 hora, a -78 °C. Parou-se a reacção com
água e extraiu-se com EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Triturou-se o material impuro com EtOAc para se obter 2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purina-8-carbaldeído puro,sob a forma de um sólido branco (4,5 g, rendimento de 80 %) . CL/EM (IEP + ) : m/z 353 (M+H)
Etapa 2: (2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hrdro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)metanol
Tratou-se 2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purina-8-carbaldeído (3,8 g, 11 mmole) em MeOH (22 mL) com tetra-hidroborato de sódio (0,817 g, 22 mmole) e agitou-se, à temperatura ambiente, durante 1 hora. Parou-se a reacção com água e extraiu-se com EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro com Isco com EtOAc/hexano a 0-80 % para se obter (2-cloro-6- morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-metanol puro (3,4 g, rendimento de 89 %) . CL/EM (IEP + ) : m/z 354 (M+H)
Etapa 3: (2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)metanol
Tratou-se (2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H- piran-2-il)-9H-purin-8-il)metanol (3,4g, 0,0096 mole) em
MeOH (20 mL) com uma quantidade catalítica de ácido p-tolueno-sulfónico (0,25 g, 0,00144 mole). Aqueceu-se a mistura reaccional a 50 2C, durante a noite e depois concentrou-se a pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se até à secagem para se obter (2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)metanol (2,6 g, rendimento de 100 %) . CL/EM (IEP + ): m/z 271 (M+H)
Etapa 4: 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina
Aqueceu-se a 90 2C, durante 12 horas, uma mistura de (2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)metanol (1 g, 0,004 mole), 1,2-dibromoetano (0,64 mL, 0,0074 mole) e carbonato de césio (3,6 g, 0,011 mole) em DMF (14 mL) . Filtrou-se a mistura reaccional e repartiu-se entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura e secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro com Isco com EtOAc/hexano a 0-50 % para se obter 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [ 1,4 ] oxazino[3,4-e]purina (0,7 g, 60 %) . CL/EM (IEP + ): m/z 297 (M+H)
Etapa 5: Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (160 mg, 0,00056 mole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-amina (180 mg, 0,00083 mole), em micro-ondas, nas condições de Suzuki com paládio para se obter 113 (40 mg, rendimento de 15 %) , em conjunto com alguns co-produtos, (2-(2- aminopirimidin-5-il)-6-morfolino-9-vinil-9H-purin-8-il)-metanol (7 mg). CL/EM (IEP): m/z; 355 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,10 (s, 2H) , 7,00 (s, 2H) , 4,91 (s, 2H) , 4,34 - 4,07 (m, 8H) , 3, 90 - 3, 63 (m, 4H) . RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,10 (s, 2H) , 7,35 (dd, J= 15, 9, 9,5 Hz, 1H) , 7,05 (s, 2H) , 6,47 (d, J = 15,9 Hz, 1H) , 5,73 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,27 (s, 4H) , 3, 88 - 3, 63 (m, 4H)
Exemplo_114 5-(4-morfoiino-8,9-di-hidroespiro-[[1,4]- oxazino[3,4-e]purina-6,3'-oxetano]-2-il)-pirimidin-2-amina 114
Etapa 1: 3-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)oxetan-3-ol
A uma mistura de 4- (2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (2,9 g, 9 mmole) em THF (50 mL) , a -78 °C, adicionou-se, gota a gota, n-BuLi 2,5 M (9 mL, 22 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, durante 30 minutos e depois adicionou-se 3-oxetanona (1,3 mL, 18 mmole), continuou-se a agitação durante 2 horas, a -78°C. Parou-se a reacção com água e extraiu-se com EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, e salmoura e secaram-se com MgSCg e concentraram-se. Purificou-se o material impuro por cromatografia em Isco com EtOAc/hexano a 0-100 % para se obter 3-(2-cloro-6- morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-oxetan-3-ol puro (2,5 g, rendimento de 70 %). CL/EM (IEP+): m/z 397 (M+H)
Etapa 2: 3-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)oxetan-3-ol
Tratou-se 3-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)oxetan-3-ol (1,8 g, 0,0045 mole) em MeOH (50 mL) com uma quantidade catalítica de ácido p-tolueno-sulfónico (78 mg, 0,00044 mole). Aqueceu-se a mistura reaccional, a 50 2C, durante a noite e depois concentrou-se a pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSCq e concentraram-se até à secagem para se obter 3- (2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)oxetan-3-ol (1,2 g, rendimento de 84 %) . CL/EM (IEP + ) : m/z 312 (M+H)
Etapa 3: 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-espiro[[1,4]- oxazino[3,4-e]purina-6,3'-oxetano]
Aqueceu-se a 90 2C, durante 12 horas, uma mistura de 3-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)oxetan-3-ol (356 mg, 0,0011 mole), 1,2-dibromoetano (0,21 mL, 0,0024 mole) e carbonato de césio (1,13 g, 0,0034 mole) em DMF (4 mL) . Filtrou-se a mistura reaccional e repartiu-se o resíduo entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura e secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro com Isco com EtOAc/hexano a 0-80 % para se obter 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro- espiro-[[1,4]oxazino[3,4-e]purina-6,3'-oxetano] (0,34 g, 85 %). CL/EM (IEP+): m/z 339 (M+H)
Etapa 4: Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-8,9-di-hidro-espiro-[[1,4]oxazino[3,4-e]purina-6,3'-oxetano] (200 mg, 0,0006 mole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-amina (210 mg, 0,00095 mole), em micro-ondas, nas condições de Suzuki com paládio, para se obter 114 (0,123 mg, rendimento de 60 %). CL/EM (IEP): m/z; 397 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9, 1 (s, 2H) , 7,02 (s, 2H) , 4,97 (d, J= 7,1 Hz, 2H) , 4,72 (d, J= 7,1 Hz, 2H) , 4,29 (s, 4H) , 4,16 (s, 4H) , 3, 90 - 3, 62 (m, 4H)
Exemplo 115 5-(7,7-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-7h- [1,3]oxazino[2,3-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 115
Etapa 1: 3-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanoato de et ilo
Tratou-se uma solução de 4-(2-cloro-9H-purin-6-il)morfolina (3,0 g, 13 mmole) em DMF (39 mL) com carbonato de césio (8,2 g, 25 mmole) e agitou-se, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. Introduziu-se éster etílico do ácido 3-bromopropanóico (6,8 g, 38 mmole) e aqueceu-se a mistura reaccional, a 50 °C, durante 2 h. A conversão parcial induziu a adição de carbonato de césio (8,2 g, 25 mmole) e éster etílico do ácido 3-bromopropanóico (6,8 g, 38 mmole) e aqueceu-se a mistura reaccional, a 70 °C. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e diluiu-se com salmoura e DCM e as camadas separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa em DCM (3x) , secaram-se com sulfato de sódio, filtraram-se e foram absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 3-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanoato de etilo, sob a forma de um sólido branco (3,5 g, 83 %) . CL/EM (IEP + ): m/z 340 (M+H)
Etapa 2: 4-(2-cloro-6-morfolin-9H-purin-9-il)-2-metilbutan-2-ol
Tratou-se, gota a gota, uma solução de 3-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanoato de etilo (500 mg,
1,5 mmole) em THF (30 mL), a 0 °C, com uma solução 3,0 M de cloreto de metilmagnésio em THF (2,0 mL) . Passados 90 minutos, a 0 °C, tratou-se a mistura reaccional com uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se com salmoura e DCM e as camadas separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa em DCM (3x) , secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e foi absorvida em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 4-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)-2-metilbutan-2-ol, sob a forma de uma espuma branca (452 mg, 94 %). CL/EM (IEP+): m/z 326 (M+H)
Etapa 3: 4-(2-cloro-8-iodo-6-morfolin-9H-purin-9-il)-2-metilbutan-2-ol
Arrefeceu-se, para -42 2C, uma solução de 4-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-9-il)-2-metilbutan-2-ol (360 mg, 1,1 mmole) e N,N,N',N'-tetrametiletilenodiamina (0,25 mL, 1,7 mmole) em THF (8,1 mL) e tratou-se, gota a gota, com uma solução 2,5 M de n-butil-lítio em hexano (BuLi, 2,0 mL, 5,0 mmole), ao longo de 5 minutos. Passados 30 minutos, a -42 °C, adicionou-se l-cloro-2-iodoetano (0,51 mL, 5,4 mmole) e aqueceu-se lentamente a mistura reaccional para 0 °C, ao longo de 1 h. Parou-se a reacção com uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se com acetato de etilo.
Extraiu-se a camada aquosa em acetato de etilo (3x) e secaram-se as camdas orgânicas combinadas com sulfato de sódio, filtraram-se e foram absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 4- (2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)-2-metilbutan-2-ol, sob a forma de uma espuma branca (390 mg, 78 %) . CL/EM (IEP+): m/z 452 (M+H)
Etapa 4: 2-cloro-7,7-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,3]oxazino[2,3-e]purina
Combinou-se iodeto de cobre (I) (3,2 mg, 17 umole), ácido picolinico (4,1 mg, 33 umole) e fosfato de potássio (140 mg, 0,67 mmole), num frasco de fundo redondo seco num forno e esvaziou-se/reciclou-se com N2 (3x). Em seguida, dissolveu-se uma solução de 4- (2-cloro-8-iodo-6-morfolino-9H-purin-9-il)-2-metilbutan-2-ol (150 mg, 0,33 mmole) em DMSO (2,4 mL) introduzido através de uma seringa. Aqueceu-se a mistura reaccional para 80°C, durante 20 h. A conversão parcial induziu a adição de iodeto de cobre (I) (3,2 mg, 17 umole), ácido picolinico (4,1 mg, 33 umole) e fosfato de potássio (140 mg, 0,67 mmole) e continuou a agitar-se a mistura reaccional, a 80 °C, durante 20 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e diluiu-se com água e acetato de etilo e separaram-se as camadas. Extraiu-se a fase aquosa em EtOAc (3χ), secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e foo absorvida em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 2-cloro-7,7-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-7H-[1,3]-oxazino[2,3-e]-purina, sob a forma de um sólido branco (61 mg, 56 %). CL/EM (IEP+): m/z 324 (M+H)
Etapa 5: Fez-se uma suspensão de 2-cloro-7,7-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-7H-[1,3]oxazino[2,3-e]purina (61 mg, 0,19 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina (54 mg, 0,24 mmole) e tetraquis(trifenilfosfino)-paládio (0) (11 mg, 9,4 umole, 5,0 mole %) em MeCN (0,46 mL) e Na2CO3(aq) 1,0 M (0,36 mL) e aqueceu-se sob uma radiação de micro-ondas, a 140°C, durante 15 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional arrefecida até à secagem in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR para se obter 115 sob a forma de um sólido branco (27 mg, 37 %) . RMN do (400 MHz, DMSO) δ 9,06 (s, 2H) , 6,95 (s, 2H) , 4,18 - 4,06 (m, 6H) , 3,75 - 3,65 (m, 4H) , 2,15 (t, J = 6,2 Hz, 2H) , 1,46 (s, 6H) . CL/EM: RT = 2,75 min, M+H+ = 383,1
Exemplo 116 5-(4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-2-amina 116
Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, dos exemplos 139 e 140 (100 mg, 0,0003 mole) e 5- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-piridin-2-amina (120 mg, 0,00055 mole), em micro-ondas, nas condições de Suzuki com paládio, para se obter 116 (56 mg, rendimento de 56 %) . CL/EM (IEP) : m/z; 422 (M+H+) RMN do :Η (400 MHz, DMSO) δ 8,94 (d, J= 2,0 Hz, 1H) , 8,28 (dd, J= 8,7, 2,2 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,32 (s, 2H) , 5,87 (q, J= 6,9 Hz, 1H) , 4,49 - 4,10 (m, 8H) , 3,75 (t, J= 4,6 Hz, 4H)
Exemplo 117 5-(6,6-hexadeutério)dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 117
Etapa 1: 2-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)-1,3-hexadeutério-propan-2-ol
A uma mistura de 4- (2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (5 g, 0,02 mmole) em THF (100 mL) , a -78 °C adicionou-se, gota a gota, n-BuLi 2,5 M (12 mL, 0,031 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, durante 30 minutos e depois adicionou-se3-oxetanona (2,5 mL, 31 mmole), continuou-se a agitação durante 2 horas, a -78 °C. Parou-se a reacção com água e extraiu-se com EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro por cromatografia em Isco com EtOAc/hexano a 0-100 % para se obter 2-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-1,3-hexadeutério-propan-2-ol sob a forma de um sólido branco (5,7 g, rendimento de 95 %). CL/EM (IEP+): m/z 389 (M+H)
Etapa 2: 2-(2-cloro-6-morfolin-8-il)-1,3-hexadeutério- propan-2-ol
Tratou-se 2- (2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)1,3-hexadeutério-propan-2-ol (5,7g, 0,015 mole) em MeOH (59 mL) com uma quantidade catalítica de ácido p-tolueno-sulfónico (253 mg, 0,00147 mole) . Aqueceu-se a mistura reaccional a 50 2C durante a noite e depois concentrou-se a pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se até à secagem para se obter (2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-1,3-hexadeutério-propan-2-ol (4,5 g, rendimento de 100 %). CL/EM (IEP+): m/z 304 (M+H)
Etapa 3: 2-cloro-6,6-hexadeutério)dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina
Aqueceu-se a 90 2C, durante 12 horas, uma mistura de 2-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-1,3-hexadeutério-propan-2-ol (2 g, 0,006 mole), 1,2-dibromoetano (1,13 mL, 0,013 mole) e carbonato de césio (6,4 g, 0,02 mole) em DMF (4 mL). Filtrou-se a mistura reaccional e repartiu-se entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro com Isco com EtOAc/hexano a 0-80 % para se obter 2-cloro-6,6-(hexadeutério)dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (1,64 g, 82 %). CL/EM (IEP+): m/z 331 (M+H)
Etapa 4: Fez-se reagir 2-cloro-6,6-(hexadeutério)-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3, 4-e]-purina (1,6 g, 0,0048 mole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-amina (1,6 g, 0,00073 mole), nas condições de Suzuki com paládio, para se obter 117 (600 mg, rendimento de 32 %). CL/EM (IEP): m/z; 389 (M+H+) RMN do 2Η NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,23 (s, 2H) , 4,10 (t, J= 13,7 Hz, 2H) , 3, 85 - 3, 67 (m, 2H)
Exemplo 118 (S)-5-(6-etil-6-metil-4-morfolino-8,9-di-hidro- 6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 118
Etapa 1: 2-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)butan-2-ol
Arrefeceu-se, para -42 2C, uma solução de 4-(2-cloro-9-tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (5,0 g, 15 mmole) em THF (100 mL) e tratou-se, gota a gota, com uma solução 2,5 M de n-butil-lltio (nBuLi) em hexano (12,35 mL, 31 mmole), ao longo de 5 minutos. Passados 15 minutos a -42 °C, adicionou-se 2-butanona (3,1 mL, 34 mmole) e aqueceu-se lentamente a mistura reaccional para 0 °C, ao longo de 2 h. Parou-se a reacção com água e diluiu-se com acetato de etilo. Extraiu-se a camada aquosa em acetato de etilo (3x) e secaram-se as camadas orgânicas combinadas com sulfato de sódio, filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter (2- (2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-butan-2-ol, sob a forma de uma espuma cor de laranja amarelada (quant.) . CL/EM (IEP + ) : m/z 396 (M+H)
Etapa 2: 2-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)butan-2-ol
Tratou-se uma suspensão de 2- (2-cloro-6-morfoliono-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)butan-2-ol (3,87 g, 9,8 mmole) em metanol (110 mL) com ácido p-tolueno-sulfónico (170 mg, 0,98 mmole) e aqueceu-se, durante a noite, a 50 °C. Eliminou-se o dissolvente in vacuo para se obter 2- (2-cloro-6-morfolin-9H-purin-8-il)butan-2-ol, sob a forma de um sólido branco que se utilizou na etapa seguinte sem mais purificação (3, 0 g, quant). CL/EM (IEP+): m/z 312 (M+H)
Etapa 3: 2-cloro-6-etil-6-metil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina
Dissolveu-se 2-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-butan-2-ol (1,0 g, 3,3 mmole) em DMF (13 mL) e tratou-se com 1,2-dibromoetano (0,57 mL, 6,6 mmole) e carbonato de césio (3,2 g, 9,9 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional, a 90 2C, durante 2 h e arrefeceu-se para a temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura com água e DCM e as camadas separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa em DCM (3x) , secaram-se com sulfato de sódio, filtraram-se e foram absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 2-cloro-6-etil-6-metil-4-morfolino- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]-purina, sob a forma de um sólido branco (730 mg, 66 %). RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 4,22 (m, 4H) , 4,01 (m, 2H) , 3,78 - 3, 63 (m, 4H) , 2,01 (s, 2H), 1, 87 - 1,73 (m, 2H) , 1,49 (s, 3H) , 0,77 (t, J = 7,4 Hz, 3H). CL/EM (IEP+): m/z 338 (M+H)
Etapa 4: Fez-se uma suspensão de 2-cloro-6-etil-6-meti1-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (730 mg, 2,2 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa-borolan-2-il)pirimidin-2-amina (620 mg, 2,8 mmole) e tetraquis(trifenilfosfino)-paládio (0) (120 mg, 0,11 umole, 5,0 mole %) em MeCN (5,2 mL) e Na2CO3(aq) 1,0 M (4,1 mL) , aqueceu-se sob uma radiação de micro-ondas, a 140 °C, durante 15 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional
arrefecida até à secagem in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por SFC (condições A) , ao longo de 30 min, 35 mL/min] para separar os dois enantiómeros 118 e 120 para se obter 118 sob a forma de um sólido branco (120 mg e 116 mg, 30 %) . RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (s, 2H) , 7,00 (s, 2H) , 4,29 - 4,01 (m, 8H) , 3, 80 - 3, 68 (m, 4H) , 2,00 (dq, J = 14,5, 7,3 Hz, 1H) , 1,84 (dt, J = 14,4, 7,2
Hz, 1H) , 1,52 (s, 3H) , 0,82 (t, J = 7,3 Hz, 3H) . CL/EM: RT = 9,49 min, M+H+ = 397,1. Analisaram-se os enantiómeros 118 e 120 e separaram-se por CL/EM quiral, rt = 1,20 min e 1,65 min com a fase móvel A = CO2, a fase móvel B = metanol, isocrático com B a 25 %, velocidade de fluxo de 5 ml/min, 40 °C., ChiralCel OJ (4,6 x 50 mm, partículas de 3 mícron, detecção de UV a 230 nm, SFC/EM da Berger Analytical
Exemplo 119 5-(6,6,9-trimetil-4-morfolino-6h-[1,4]oxazino- [3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 119
Etapa 1: 2-(2-cloro-8-(2-hidroxipropan-2-il)-6-morfolino- 9H-purin-9-il)propanoato de metilo
Dissolveu-se 2-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-propan-2-ol (4,6 g, 15 mmole) em DMF (16 mL), tratou-se com carbonato de césio (10 g, 31 mmole) e 2-bromopropanoato de metilo (7,6 g, 46 mmole) e aqueceu-se, a 50 °C, durante 3 h. A conversão parcial induziu a adição de carbonato de
césio (10 g, 31 mmole) e 2-bromopropanoato de metilo (7,6 g, 46 mmole) e aqueceu-se a mistura reaccional, a 50 °C, durante 20 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e diluiu-se com água e acetato de etilo e separaram-se as camadas. Extraiu-se a fase aquosa em acetato de etilo (3x) , secou-se com sulfato de sódio, filtrou-se e foi absorvida em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 2- (2-cloro-8-(2-hidroxi-propan-2-il)-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanoato de metilo, sob a forma de uma espuma amarela (1,6 g, 26 %) . CL/EM (IEP+): m/z 384 (M+H)
Etapa 2: 2-(2-cloro-8-(2-hidroxipropan-2-il)-6-morfolino- 9H-purin-9-il)propanal
Dissolveu-se 2- (2-cloro-8-(2-hidroxipropan-2-il)-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanoato de metilo (1,6 g, 4,1 mmole) em THF (30 mL) e arrefeceu-se para -78 °C.
Tratou-se a mistura reaccional com uma solução 1,0 M de tetra-hidroaluminato de litio em THF (8,6 mL) e agitou-se, a -78 °C, durante 1 h. Adicionou-se uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se a mistura com DCM. Tratou-se a mistura reaccional com uma solução saturada de sal de Rochelle e agitou-se, a uma temperatura ambiente elevada, durante 1 h.
Separaram-se as camadas e extraiu-se a fase aquosa em DCM/MeOH (3x), secaram-se com sulfato de sódio, filtraram-se e foram absorvidas em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 2-(2-cloro-8- (2-hidroxipropan-2-il)-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanal, sob a forma de uma espuma branca (900 mg, 62 %). CL/EM (IEP+): m/z 384 (M+H)
Etapa 3: 2-cloro-6,6,9-trimetil-4-morfolino-6H-[1,4]-oxaz ino[3,4-e]purina
Tratou-se uma solução de 2- (2-cloro-8-(2-hidroxi-propan-2-il)-6-morfolino-9H-purin-9-il)propanal (900 mg, 2,5 mmole) em tolueno (8,1 mL) com ácido trifluoroacético (0,58 ml, 7,6 mmole) e aqueceu-se, a 110°C, durante 4 h. A conversão parcial induziu a adição de ácido trifluoro-acético (1,0 mL) e deixou-se a mistura em agitação, durante a noite, a 110 °C. Arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente e concentrou-se até à secagem in vacuo. Dissolveu-se novamente o resíduo resultante em DCM e absorveu-se em celite para purificação por cromatografia rápida para se obter 2-cloro-6,6,9-trimetil-4-morfolino-6H-[ 1,4]-oxazino[3,4-e]-purina, sob a forma de um sólido (190 mg, 22 %). CL/EM (IEP+): m/z 336/338 (M+H)
Etapa 4: Fez-se uma suspensão de 2-cloro-6,6,9-trimetil-4-morfolino-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (190 mg, 0,19 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirimidin-2-amina (160 mg, 0,71 mmole) e tetraquis(tri-fenilfosfino)-paládio (0) (32 mg, 27 umole, 5,0 mole %) em
MeCN (1,3 mL) e Na2CO3(aq) 1,0 M (1,0 mL) , aqueceu-se sob uma radiação de micro-ondas, a 140 °C, durante 15 minutos.
Concentrou-se a mistura reaccional arrefecida até à secagem in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR para se obter 119 sob a forma de um sólido branco (120 mg, 54 %) . CL/EM (IEP) : m/z; 395 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,06 (s, 2H) , 7,03 (s, 2H) , 6,34 (m, 4H) , 4,24 (s, 4H) , 3, 80 - 3, 70 (m, 4H) , 2,52 (s, 3H) , 1,62 (s, 6H) . CL/EM: RT = 4,57 min, M+H+ = 395,2
Exemplo 120 (R)-5-(6-etil-6-metil-4-morfolino-8,9-di-hidro- 6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 120
Seguindo os procedimentos do exemplo 118, isolou-se o enantiómero R 120.
Exemplo 121 5- (1-morfolin-4-il-5,6,8a,9-tetra-hidro-8h- 7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fenantren-3-il)-pirimidin-2-il-amina 121
Etapa 1: [4-(2,6-Dicloro-5-metoxi-pirimidin-4-il)-morfolin- 3-il]-metanol
UM
Agitou-se, à TA, durante 3 h, uma mistura de 2,4,6-tricloro-5-metoxi-pirimidina (1 g, 4,68 mmole), cloridrato de morfolin-3-il-metanol (0,86 g, 5,6 mmole) e trietilamina (0,9 mL, 6,5 mmole) em IMS (30 mL) e depois concentrou-se à TA, durante 3 h, depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 50 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se [4-(2,6-dicloro-5-metoxi-pirimidin-4-il)-morfolin-3-il]-metanol (614 mg, 45 %) . CL/EM (método A) : RT = 2,63 min, [M+H]+ = 294/296.
Etapa 2: 1,3-Dicloro-5,6,8a,9-tetra-hidro-8H-7,10-dioxa- 2,4,4b-triaza-fenantreno
Aqueceu-se, a 160 2C, durante 10 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de [ 4-(2,6-dicloro-5-metoxi-pirimidin-4-il)-morfolin-3-il]-metanol (614 mg, 2,09 mmole) e cloreto de lítio (246 mg, 5,80 mmole) em DMF anidro (5 mL) e depois concentrou-se in vacuo para se obter 2,4-dicloro-6-(3-hidroximetil-morfolin-4-il)-pirimidin-5-ol. Adicionou-se DIAD (452 pL, 2,3 mmole) a uma solução de 2,4-dicloro-6-(3-hidroximetil-morfolin-4-il)-pirimidin-5-ol (2 mmole) e trif enil-f osf ina (603 mg, 2,3 mmole) em 1,4-dioxano (5 mL) e agitou-se a mistura, à TA, durante lhe depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 50 % de acetato de etilo em ciclo-hexano), obtendo-se 1,3-dicloro-5, 6, 8a, 9-tetra-hidro-8H-7,10-dioxa,2,4,4b-triaza-fenantreno
(200 mg, 37 %) . CL/EM (método A) : RT = 2,91 min, [M+H]+ = 262/264.
Etapa 3: 3-Cloro-l-morfolin-4-il-5,6,8a,9-tetra-hidro-8H- 7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fenantreno
Aqueceu-se a 140 2C, durante 25 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de 1,3-dicloro-5,6,8a,9-tetra-hidro-8H-7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fenantreno (100 mg, 0,38 mmole), morfolina (80 pL, 0,92 mmole) e trietilamina (70 pL, 0,50 mmol) em IMS (5 mL) e depois concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 10 a 15 a 25 % de acetato de etilo em pentano) obtendo-se 3-cloro-l-morfolino-4-il-5,6,8a,9-tetra-hidro-8H-7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fenantreno (45 mg, 38 %) . CL/EM (método A): RT = 2,92 min, [M+H]+ = 313. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 4,37 (1H, dd, J = 13,2, 3,0 Hz), 4,19 (1H, dd, J = 10,8, 3,3 Hz), 3,99 (1H, dd, J = 11,1, 3,9 Hz), 3,88 (1H, dd, J = 10,8, 3,2 Hz), 3,80 (dd, J = 11,1, 8,4 Hz), 3,75 (4H, m) , 3, 66-3,53 (6H, m) , 3,24 (1H, t, J = 11,1 Hz), 3,00 (1H, m).
Etapa 4: Desgaseificou-se uma mistura de 3-cloro-l- morfolin-4-il-5,6,8a,9-tetra-hidro-8H-7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fenantreno (45 mg, 0,144 mmole), 5-(4,4,5,5- tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-ilamina
(60 mg, 0,271 mmole) , PdCl2 (PPh3) 2 (10 mg, 0,014 mmole) e carbonato de sódio (460 pL, 0,46 mmole, solução aquosa 1M) em acetonitrilo (2 mL) e aqueceu-se, a 120 °C, durante 30 mins, num reactor de micro-ondas. Carregou-se a mistura reaccional num cartucho de Isolute® SCX-2 que se lavou com metanol e eluiu-se o produto com amónia 2 M em metanol. Combinaram-se as fracções básicas e concentraram-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR de fase inversa (Phenomenex Gemini 08 5 pm, HCO2H em água a 0,1 % num gradiente de acetonitrilo de 5-98 %) obtendo-se 121 sob a forma de um sólido branco (3 mg, 6 %). CL/EM (método B): RT = 3,08 min, [M+H]+ = 372. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 9,11 (2H, s) , 5,18 (2H, s largo), 4,55 (1H, dd, J = 13,5, 2,4 Hz), 4,22 (1H, dd, J = 10,8, 3,1 Hz), 4,05 (1H, dd, J = 11,5, 3,5 Hz), 3,88 (2H, m) , 3,81 (4H, m) , 3, 69-3,56 (6H, m), 3,29 (1H, t, J = 11,5 Hz), 3,02 (1H, m).
Exemplo 122 5- ( (S) -6-Morfolin-4-il-2,3,3a, 4-tetra-hidro-lA-5-oxa-7,9,9b-triaza-ciclopenta[a]naftalen-8-il)-pirimidin-2-ilamina 122
Etapa 1: [ (S)-1-(2,6-Dicloro-5-metoxi-pirimidin-4-il)- pirrolidin-2-il]-metanol
Agitou-se, à TA, durante 20 min, uma mistura de 2,4,6-tricloro-5-metoxi-pirimidina (1,2 g, 5,62 mmole), (S)—l— pirrolidin-2-il-metanol (1,1 mL, 11,3 mmole) e trietilamina (1,08 mL, 7,75 mmole) em IMS (36 mL) e depois concentrou-se
in vácuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 50 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se [(S)-1-(2,6-dicloro-5-metoxi-pirimidin-4-il)-pirrolidin-2-il]-metanol (1,08 mg, 70 %) . CL/EM (método A): RT = 2,98 min, [M+H]+ = 278/280.
Etapa 2: (S)-6,8-Dicloro-2,3,3a,4-tetra-hidro-lH-5-oxa-7,9,9b-triaza-ciclopenta[a]naftaleno
Aqueceu-se, a 160 2C, durante 10 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de [(S)-1-(2,6-dicloro-5-metoxi-pirimidin-4-il)-pirrolidin-2-il]-metanol (900 mg, 3,24 mmole) e cloreto de lítio (360 mg, 8,48 mmole) em DMF anidro (10 mL) e depois concentrou-se in vacuo para se obter 2,4-dicloro-6-((S)-2-hidroximetil-pirrolidin-l-il)-pirimidin-5-ol. Adicionou-se DIAD (700 pL, 3,56 mmole) a uma solução de 2,4-dicloro-6-((S)-2-hidroximetil-pirrolidin-l-il ) -pirimidin-5-ol (3 mmole) e trifenil-fosfina (900 mg, 3,43 mmole) em 1,4-dioxano (10 mL) e agitou-se a mistura, à TA, durante lhe depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 20 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se (S)-6,8-dicloro-2,3,3a,4-tetra-hidro-lH-5-oxa-7,9,9a-triaza-ciclopenta[a]naftaleno. CL/EM (método A): RT = 2,98 min, [M+H]+ = 246/248.
Etapa 3: Aqueceu-se, a 140 2C, durante 20 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de (S)-6,8-dicloro- 2,, 3,3a, 4-tetra-hidro-lH-5-oxa-7, 9, 9b-triaza-ciclopenta [a] -naftaleno (290 mg, 1,18 mmole) , morfolina (275 pL, 3.14 mmole) e trietilamina (242 pL, 1,74 mmol) em IMS (11 mL) e depois concentrou-se in vacuo. Dissolveu-se novamente o resíduo em acetonitrilo (2 mL) e adicionou-se 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-ilamina (500 mg, 2,26 mmole), PdCl2 (PPh3) 2 (88 mg, 0,125 mmole) e carbonato de sódio (4 mL, 4,0 mmole, solução aquosa 1 M) . Desgaseificou-se a mistura reaccional, a 120 °C, durante 30 mins num reactor de micro-ondas. Carregou-se a mistura reaccional num cartucho de Isolute® SCX-2 que se lavou com metanol e eluiu-se o produto com amónia 2 M em metanol. Combinaram-se as fracções básicas e concentraram-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR de fase inversa (Phenomenex Gemini 08 5 pm, HCO2H em água a 0,1 % num gradiente de acetonitrilo de 5-60 %) obtendo-se 122 sob a forma de um sólido branco (30 mg, 8 %). CL/EM (método B): RT = 3,34 min, [M+H]+ = 356. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 9.15 (2H, s) , 5,14 (2H, s largo), 4,48 (1H, dd, J = 10,4, 3,5 Hz), 3,87-3,68 (10H, m), 3,62 (1H, m), 3,31 (1H, t, J = 10,1 Hz), 2,21-1,94 (3H, m), 1,50 (1H, m).
Também se isolou o regioisómero 5-((S)-8-morfolin-4-il-2,3,3a,4-tetra-hidro-lH-5-oxa-7,9,9b-triaza-ciclopenta-[a]naftalen-6-il)-pirimidin-2-ilamina (25 mg, 6 %) . CL/EM (método B): RT = 2,47 min, [M+H]+ = 356. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 9,09 (2H, s) , 5,14 (2H, s largo), 4,49 (1H, dd, J = 10,8, 3,8 Hz), 3, 80-3, 65 (10H, m) , 3,66 (1H, m) , 3,34 (1H, t, J = 9,7 Hz), 2,20-1,94 (3H, m), 1,48 (1H, m).
Exemplo 123 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-anilina 123
Seguindo o procedimento A, adicionou-se éster pinacólico do ácido 4-aminofenilborónico (270 mg, 1,2 mmole) e carbonato de césio 1,0 M em água (2,5 mL) a 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino-[3,4-e] purina, do exemplo 103 (266 mg, 0,82 mmole) em acetonitrilo (2,5 mL). Desgaseificou-se a mistura reaccional, durante 5 min e reciclou-se em atmosfera de azoto. Em seguida, adicionou-se dicloreto de bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfina)paládio (II) (29 mg, 0,041 mmole) e desgaseificou-se e reciclou-se novamente a mistura. Submeteu-se então o frasco da reacção a uma radiação de micro-ondas, durante 25 min, a 100 °C.
Arrefeceu-se o recipiente para a temperatura ambiente e extraiu-se, duas vezes, com EtOAc. Secou-se com MgSO4, filtrou-se e concentrou-se in vacuo. Purificou-se por CLAR-ti para se obter 123 (151 mg, rendimento de 48 %) . RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 8,08 (d, J= 8,5 Hz, 1H) , 6,59 (d, J= 8,5 Hz, 1H) , 5,42 (s, 1H) , 4,22 (s, 2H) , 4,11 (s, 2H) , 3,80 - 3,67 (m, 2H) , 1,57 (s, 3H) .
Exemplo 124 1-(4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenil)-3-metilureia 124 A uma solução de 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)anilina 123 (0,44 g, 1,2 mmole) em 1,2-dicloroetano (10 mL) adicionou-se trietilamina (0,35 mL, 2,5 mmole) e arrefeceu-se a mistura reaccional para 0 °C. Adicionou-se, lentamente, trifosgénio (0,17 g, 0,57 mmole) e em seguida aqueceu-se a mistura reaccional a 70 °C, durante 1 h. Depois arrefeceu-se a mistura reaccional para a temperatura ambiente para adição de metilamina 2,0 M em THF (2,2 mL, 4,4 mmole) e agitou-se a mistura resultante, durante 16 h, à temperatura ambiente. A CL-EM indicou a conversão completa e, como resultado, diluiu-se a mistura reaccional com água e EtOAc. Separaram-se as fases e extraiu-se a camada aquosa, 3x, com EtOAc. Recolheram-se os extractos orgânicos e secaram-se com MgSO4, filtraram-se e concentraram-se in vacuo. Purificou-se por CLAR-ti para se obter 124 (122 mg, rendimento de 25 %) . EM (IEP) : m/z; 438,2 (M+H+) RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ ,68 (s, 1H) , 8,24 (d, J= 8,7 Hz, 2H) , 7,48 (d, J= 8,7 Hz, 2H) , 6,04 (q, J= 4,4 Hz, 1H) , 4,25 (s, 4H) , 4,14 (d, J= 3,4 Hz, 4H) , 3, 82 - 3, 67 (m, 4H) , 2,66 (d, J= 4,6
Hz, 3H), 1,58 (s, 6H)
Exemplo 125 6,6-dimetil-4-morfolino-2-(lH-pirazol-4-il)- 8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 125
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 125. RMN do 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12,98 (s, 1Η) , 8,23 (s, 1H) , 8,01 (s, 1H) , 4,22 (s, 4H) , 4,10 (s, 4H) , 3, 80 - 3, 67 (m, 4H) , 1,57 (s, 6H) CL/EM: RT = 3,67 min, M+H+ = 356
Exemplo 126 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-2-amina 126
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-2-amina (0,31 mmole) e
bis (di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 126. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 7,99 (d, J = 5,3 Hz, 1H) , 7,41 (s, 1H) , 7,38 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,97 (s, 2H), 4,27 (s, 4H), 4,15 (d, J = 3,5 Hz, 4H) , 3,82 - 3,71 (m, 4H) , 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,64 min, M+H+ = 382
Exemplo_127 6, 6-dimetil-2-(1-metil-lH-pirazol-4-il)-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 127
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 1-metil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 127. RMN do 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8,23 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 4,21 (s, 4H) , 4,10 (s, 4H) , 3,88 (s, 3H) , 3,73 (dd, J = 12,3, 7,7 Hz, 4H) , 1,57 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,94 min, M+H+ = 370
Exemplo 128 3-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenol 128
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 3-(4,4,5,5-tetrametil- 1.3.2- dioxaborolan-2-il)-fenol (0,31 mmole) e bis(di-terc- butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 128. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,41 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 4,5, 2,5 Hz, 2H) , 7,28 - 7,20 (m, 1H) , 6,82 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H) , 4,26 (s, 4H) , 4,19 - 4,08 (m, 4H) , 3,82 - 3,71 (m, 4H) , 1,59 (s, 6H) CL/EM: RT = 4,46 min, M+H+ = 382
Exemplo 129 2-(lH-indazol-5-il)-6,6-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 129
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil- 1.3.2- dioxaborolan-2-il)-lH-indazol (0,31 mmole) e bis(di- terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 129. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 13,11 (s, 1H), 8,81 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 8,88 (d, J= 1,6 Hz, 1H) , 7,60 - 8,19 (m, 1H) , 7,58 (d, J= 8,8 Hz, 1H) , 4,29 (s, 4H), 4,17 (dd, J = 16,1, 5,1 Hz, 4H), 3,82 - 3,74 (m, 4H), 1,60 (s, 6H). CL/EM: RT = 4,47 min, M+H+ = 406
Exemplo_130 6, 6-dimetil-2-(2-(4-metilpiperazin-l-il)- piridin-4-il)morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3, 4-e]-purina 130
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino- [3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-2-il)piperazina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 130. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8.21 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 4.27 (s, 4H), 4.16 (d, J = 26.1 Hz, 4H), 3.77 (s, 4H), 3.55 (s, 4H), 2.46 (s, 4H) , 2.25 (s, 3H), 1.59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,40 min, M+H+ = 465
Exemplo 131 N-(2-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenil-metano-sulfonamida 131
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N-(2-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)metano-sulfonamida (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter
131. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 12,87 (s, 1H), 8,58 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,48 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,22 (t, J = 7,4 Hz, 1H) , 4,26 (s, 4H) , 4,16 (s, 4H), 3,78 (s, 4H), 3,07 (s, 3H), 1,62 (d, J = 11,5 Hz, 6H). CL/EM: RT = 5,36 min, M+H+ = 459
Exemplo 132 6,6-dimetil-4-morfolino-2-(6-morfolinopiridin- 3-il)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 132
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-2-il)morfolina (0,31 mmole) e bis (di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 132. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,11 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,89 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,24 (s, 2H), 4,14 (s, 4H) , 3,74 (d, J = 14,7 Hz, 4H) , 3,55 - 3,71 (m, 4H) , 1,60 (s, 6H). CL/EM: RT = 3,79 min, M+H+ = 452
Exemplo 133 2- (l-benzil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 133
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), l-benzil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 133. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,37 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,35 (d, J = 7,6 Hz, 2H) , 7,29 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 5,37 (s, 2H) , 4,21 (s, 4H) , 4,09 (s, 4H) , 3,74 (s, 4H) , 1,58 (d, J = 9,4 Hz, 6H). CL/EM: RT = 4,82 min, M+H+ = 446
Exemplo 134 2-(2-isopropoxipiridin-3-il)-6,6-dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 134
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 2-isopropoxi-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)di-cloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 134. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,20 (s, 1H) , 8,03 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7, 07 - 6, 99 (m, 1H) , 5,43 - 5,31 (m, 1H) , 4,22 (s, 4H), 4,11 (s, 4H) , 3,73 (s, 4H), 1,59 (s, 6H) , 1,26 (d, J = 6,1 Hz, 6H). CL/EM: RT = 4,56 min, M+H+ = 425
Exemplo 135 N-(2-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenil-acetamida 135
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N-(2-(4,4,5,5-tetra- metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)acetamida (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 135. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 12,45 (s, 1H), 8,53 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,44 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,40 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,15 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 4,23 (t, J = 18,4 Hz, 4H) , 4,16 (s, 2H), 3,78 (s, 4H) , 2,21 (s, 3H), 1,62 (d, J = 10,6 Hz, 6H) . CL/EM: RT = 5,16 min, M+H+ = 423
Exemplo 136 2-(3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 136
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 3,5-dimetil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 136. CL/EM: RT = 3, 81 min, M+H+ = 384
Exemplo 137 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-2-ol 137
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-
paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 137. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 11,82 (s, 1H), 8,34 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 8,27 (s, 1H) , 6,41 (d, J = 9,6 Hz, 1H) , 4,22 (s, 4H) , 4,12 (s, 4H) , 3,75 (s, 4H) , 1,57 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,95 min, M+H+ = 383
Exemplo 138 6-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-3-amina 138
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 6-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-3-amina (0,31 mmole) e bis (di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 138. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,20 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 8,07 (d, J = 3,8 Hz, 1H) , 7,25 (dd, J = 8,1, 4,3 Hz, 1H) , 4,25 - 3, 97 (m, 8H) , 3,74 (d, J = 3,9 Hz, 4H) , 1,55 (s, 6H). CL/EM: RT = 3,44 min, M+H+ = 382
Exemplos 139 e 140 (R)-5-(4-morfolino-6-(trifluorometil)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina 139 e (S)-5-(4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina 140
Etapa 1: 1-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)2,2,2-trifluoroetanona
A uma mistura de 4- (2-cloro-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-6-il)morfolina (1 g, 20 mmole) em THF (25 mL) , a -78 °C, adicionou-se, gota a gota, tetrametiletileno- diamina (0,93 mL, 0,0062 mole) seguido de n-BuLi 2,5 M (2,5 mL, 0,0062 mole). Agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, durante 30 minutos e depois adicionou-se trifluoro-acetato de etilo (0,74 mL, 0,0062 mole), continuou-se a agitação, durante 2 horas, a -78°C. Parou-se a reacção com água e extraiu-se com EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro por cromatografia em ISCO com EtOAc/hexano a 0-100 % para se obter 1-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanona, sob a forma de um sólido branco (2,5 g, rendimento de 70 %) . CL/EM (IEP + ) : m/z 421 (M+H)
Etapa 2: 1-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2- il)-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanol
Tratou-se 1-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanona (1,5 g, 0, 0036 mmole) em MeOH (22 mL) com tetra-hidroborato de sódio (0,27 g, 0,0072 mole) e agitou-se, à temperatura
ambiente, durante 1 hora. Parou-se a reacção com água e extraiu-se com EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmpura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro com ISCO com EtOAc/hexano a 0-80 % para se obter 1-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanol puro (1,3 g, rendimento de 86 %). CL/EM (IEP+): m/z 423 (M+H)
Etapa 3: 1-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-2,2,2-tri-fluoroetanol
Tratou-se 1-(2-cloro-6-morfolino-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanol (1,3 g, 0,0031 mole) em MeOH (12 mL) com uma quantidade catalítica de ácido p-tolueno-sulfónico (53 mg, 0,00031 mole). Aqueceu-se a mistura reaccional, a 50 2C, durante a noite e depois concentrou-se a pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se até à secagem para se obter 1-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanol (1 g, rendimento de 100 %). CL/EM (IEP+): m/z 338 (M+H)
Etapa 4: 2-cloro-4-morfolino-6-(trifluorometil)-8, 9-di- hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina
F
Aqueceu-se, a 90 2C, durante 12 horas, uma mistura de 1-(2-cloro-6-morfolino-9H-purin-8-il)-2,2,2-trifluoroetanol (1 g, 0,003 mole), 1,2-dibromoetano (0,51 mL, 0,006 mole) e carbonato de césio (2,9 g, 0, 089 mole) em DMF (18 mL) . Filtrou-se a mistura reaccional e repartiu-se entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se. Purificou-se o material impuro com Isco com EtOAc/hexano a 0-50 % para se obter 2-cloro-4-morfolino-6(trifluorometil)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina pura (0,3 g, 30 %). CL/EM (IEP+): m/z 364 (M+H)
Etapa 5: Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-6-(tri-fluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (140 mg, 0,0004 mole) e 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxa-borolan-2-il)pirimidin-2-amina (130 mg, 0,00058 mole), nas condições de Suzuki com paládio, num micro-ondas, para se obter 5-(4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[ 1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina (36 mg, rendimento de 32 %) que se separou no enantiómero (R) 139 e no enantiómero (S) 140. CL/EM (IEP): m/z; 423 (M+H+) 2H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,11 (s, 2H) , 7,05 (s, 2H) , 5.88 (d, J= 6,8 Hz, 1H) , 4,38 (t, J= 12,2 Hz, 2H) , 4,35 - 4, 09 (m, 6H) , 3,76 (s, 4H)
Exemplo_141 2- (1-etil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 141
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), l-etil-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino) dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 141. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 1H) , 7,95 (s, 1H) , 4,28 - 4,12 (m, 6H) , 4,10 (s, 4H) , 3,78 - 3, 69 (m, 4H) , 1,58 (s, 6H) , 1,40 (t, J = 7,3 Hz, 3H). CL/EM: RT = 4,13 min, M+H+ = 384
Exemplo 142 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N,N-dimetilbenzamida 142
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N,N-dimetil-4(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-benzamida (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 142. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,42 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,49 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 4,28 (s, 4H) , 4,16 (m, 4H) , 3,81 - 3,73 (m, 4H) , 3, 06 - 2,87 (m, 6H) , 1,60 (s, 6H) . CL/EM: RT = 4,60 min, M+H+ = 437
Exemplo 143 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenil(metil)carbamato de terc-butilo 143
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), metil-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)carbamato de terc-butilo (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetil-aminofenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 143. CL/EM: RT = 6,07 min, M+H+ = 495
Exemplo 144 2-(3-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenil)acetonitrilo 144
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)acetonitrilo (0,31 mmole) e bis (di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 144. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,37 (s, 1H), 8,35 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,50 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,43 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 4,28 (s, 4H), 4,21 - 4,11 (m, 6H) , 3, 84 - 3,70 (m, 4H) , 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 5,11 min, M+H+ = 405
Exemplo 145 6, 6-dimetil-4-morfolino-2-(3-morfolinofenil)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 145
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(3-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)morfolina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 145. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 7,96 (s, 1H) , 7,86 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,32 (t, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,04 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H) , 4,25 (s, 4H) , 4,15 (m, 4H) , 3,77 (m, 8H) , 3,21 - 3,12 (m, 4H) , 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 4,66 min, M+H+ = 451
Exemplo 146 6,6-dimetil-4-morfolino-2-(3-morfolinometil)- fenil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 146
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(3-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-benil)morfolina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(5-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 146. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,30 (s, 1H) , 8,27 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 7, 46 - 7,34 (m, 2H) , 4,27 (s, 4H) , 4,16 (m, 4H) , 3, 83 - 3,72 (m, 4H) , 3,58 (m, 4H) , 3,55 (s, 2H) , 2,38 (m, 4H), 1,59 (s, 6H). CL/EM: RT = 3,84 min, M+H+ = 465
Exemplo 147 2-(3-benziloxi)fenil)-6,6-dimetil-4-morfolino- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 147
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 2-(3-(benziloxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 147. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,00 - 7,94 (m, 2H), 7,50 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 7,44 - 7,37 (m, 3H) , 7,37 - 7,30 (m, 1H) , 7,14 - 7,07 (m, 1H) , 5,20 (s, 2H) , 4,21 (s, 4H) , 4,15 (m, 4H) , 3,82 - 3,69 (m, 4H) , 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 6,33 min, M+H+ = 472
Exemplo 148 2-(1-isobutil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 148
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino- [3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole) , l-isobutil-4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 148. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (s, 1H) , 7,95 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4,22 (s, 4H), 4,10 (s, 4H), 3,95 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 3,78 - 3,69 (m, 4H) , 2,15 (dp, J = 13,8, 6,8 Hz, 1H) , 1,57 (s, 6H) , 0,86 (d, J = 6,7 Hz, 6H) . CL/EM: RT = 4,67 min, M+H+ = 412
Exemplo 149 6,6-dimetil-2-(4-metilpiperazin-l-il)-piridin- 3-il)-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 149
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 1-metil-4—(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-indazol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 149. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,08 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 8,39 (dd, J = 9,0, 2,3 Hz, 1H) , 6,89 (t, J = 7,1 Hz, 1H) , 4,24 (s, 4H) , 4,14 (t, J = 5,2 Hz, 4H) , 3,81 - 3,70 (m, 4H) , 3,64 - 3,52 (m, 4H) , 2,44 - 2,36 (m, 4H) , 2,23 (s, 3H) , 1,58 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,45 min, M+H+ = 465
Exemplo 150 2-(lH-indazol-4-il)-6,6-dimetil-4-morfolino- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 150
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-indazol 24 (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino) dicloro- paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 150. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 13,16 (d, J = 20,9 Hz, 1H) , 8,91 (s, 1H) , 8,20 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,64 (t, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 4,28 (m, 6H) , 4,17 (m, 2H) , 3,85 -3,75 (m, 4H) , 1,61 (s, 6H) . CL/EM: RT = 4,61 min, M+H+ = 406
Exemplo 151 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-benzonitrilo 151
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 4-(4,4,5,5-tetrametil- 1.3.2- dioxaborolan-2-il)-benzonitrilo (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 151. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,94 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 4,28 (m, 4H) , 4,16 (m, 4H) , 3,77 (m, 4H) , 1,60 (s, 6H). CL/EM: RT = 5,53 min, M+H+ = 391
Exemplo 152 5-(6, 6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-nicotinamida 152
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil- 1.3.2- dioxaborolan-2-il)-nicotinamida (0,31 mmole) e bis (di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino) dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 152. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,61 (dd, J = 5,2, 2,0 Hz, 1H) , 9,08 (t, J = 2,7 Hz, 1H) , 9,02 (t, J = 2,1 Hz, 1H) , 8,30 (s, 1H) , 7,65 (s, 1H) , 4,30 (s, 4H) , 4,18 (dt, J = 9,7, 4,5 Hz, 4H) , 3,81 - 3,71 (m, 4H) , 1,60 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,71 min, M+H+ = 410
Exemplo 153 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N-metilpicolinamida 153
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-picolinamida (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)di-cloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 153. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,51 (s, 1H) , 8,81 (d, J = 6,1 Hz, 1H) , 8,79 - 8,72 (m, 1H) , 8,13 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4,28 (m, 4H) , 4,17 (m, 4H) , 3,78 (m, 4H) , 2,86 (d, J = 4,9 Hz, 3H) , 1,60 (s, 6H) . CL/EM: RT = 4,64 min, M+H+ = 424
Exemplo 154 2-(4-benziloxi)fenil)-6,6-dimetil-4-morfolino- 8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 154
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 2-(4-(benziloxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 154. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,31 (t, J = 7,6 Hz, 2H) , 7,48 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 7,41 (t, J = 7,4 Hz, 2H) , 7,34 (t, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,10 (t, J = 7,4 Hz, 2H) , 5,17 (s, 2H) , 4,25 (s, 4H), 4,14 (dd, J = 6,7, 2,6 Hz, 4H) , 3,81 - 3,71 (m, 4H) , 1,58 (s, 6H). CL/EM: RT = 6,21 min, M+H+ = 472
Exemplo 155 3-(6, 6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N,N-dimetilanilina 155
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4] oxazino- [3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N,N-dimetil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-anilina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 155. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 7,80 (s, 1H) , 7,71 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,26 (t, J = 7,9 Hz, 1H) , 6,82 (dd, J = 8,2, 2,5 Hz, 1H) , 4,25 (s, 4H) , 4,23 - 4, 06 (m, 4H) , 3, 84 - 3, 69 (m, 4H) , 2,96 (s, 6H) , 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,88 min, M+H+ = 409
Exemplo_156 6, 6-dimetil-2-(4-(4-metilpiperazin-l-il)- fenil)-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]-purina 156
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 1-metil-4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)piperazina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)di-cloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 156. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 88,22 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 6,98 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 4,24 (s, 4H) , 4,13 (d, J = 3,2 Hz, 4H) , 3,80 - 3,72 (m, 4H) , 3,26 - 3,20 (m, 4H), 2,48 - 2,43 (m, 4H) , 2,23 (s, 3H), 1,58 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,76 min, M+H+ = 464
Exemplo_157 6, 6-dimetil-4-morfolino-2-(4-piperidin-l- il)fenil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 157
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)piperidina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)di-
cloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 157. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,21 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 9,0 Hz, 2H) , 4,23 (s, 4H) , 4,13 (t, J = 4,8 Hz, 4H) , 3,81 - 3,69 (m, 4H) , 3,27 - 3,21 (m, 4H) , 1,61 (m, 6H) , 1,58 (s, 6H). CL/EM: RT = 4,13 min, M+H+ = 449
Exemplo 158 N-5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-2-il)-acetamida 158
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[ 3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N-(5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-2-il)acetamida (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)di-cloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 158. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 10,64 (s, 1H), 9,23 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 8,63 (dd, J = 8,7, 2,3 Hz, 1H) , 8,17 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,27 (s, 4H), 4,15 (dd, J = 15,2, 5,1 Hz, 4H), 3,81 - 3,71 (m, 4H) , 2,12 (s, 3H), 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,95 min, M+H+ = 424
Exemplo 159 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-picolinamida 159
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-picolinamida (0,31 mmole) e
bis (di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 159. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 9,52 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,81 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H) , 8,14 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 8,12 (s, 1H) , 7,69 (s, 1H) , 4,29 (s, 4H) , 4,18 (m, 4H) , 3,83 - 3,71 (m, 4H) , 1,60 (s, 6H) . CL/EM: RT = 4,39 min, M+H+ = 410
Exemplo 160 6-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)-piridin-3-ol 160
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), 6-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)-piridin-3-ol (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)dicloro-paládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 160. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,24 (m, 2H) , 7,24 (dd, J = 8,6, 2,9 Hz, 1H) , 6,62 (s, 1H) , 4,25 (s, 4H), 4,14 (d, J = 2,5 Hz, 4H), 3,81 - 3,70 (m, 4H) , 1,59 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,73 min, M+H+ = 383
Exemplo 161 (4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)4-metilpiperazin-1-il)metanona 161
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), (4-metilpiperazin-1-il)-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenil)-metanona (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilamino-fenil)fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 161. RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 8,43 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,47 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 4,28 (s, 4H) , 4,21 - 4,08 (m, 4H) , 3,82 - 3,71 (m, 4H) , 3,62 (s, 4H) , 2,33 (s, 4H) , 2,20 (s, 3H) , 1,60 (s, 6H) . CL/EM: RT = 3,64 min, M+H+ = 492
Exemplo 162 N-ciclopropil-3-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-benzamida 162
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N-ciclopropil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-benzamida (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 162. RMN do (400 MHz, DMSO) δ 8,77 (s, 1H), 8,53 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,53 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 4,28 (s, 4H), 4,17 (dt, J = 9,5, 4,4 Hz, 4H) , 3, 84 - 3, 70 (m, 4H) , 2,88 (tq, J = 7,8, 4,0 Hz, 1H) , 0,76 - 0, 67 (m, 2H) , 0, 64 - 0,54 (m, 2H) . CL/EM: RT = 4,68 min, M+H+ = 449
Exemplo 163 5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N,N-dimetilpirazin-2-amina 163
Seguindo o procedimento geral A, fez-se reagir 2-cloro-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino-[ 3,4-e]purina (102 mg, 0,31 mmole), N,N-dimetil-5-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-pirazin-2-amina (0,31 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)fosfino)-dicloropaládio (II) (11 mg, 16 umole) para se obter 163. RMN do 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9,04 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 4,24 (s, 4H) , 4,14 (t, J = 5,3 Hz, 4H) , 3,81 - 3,66 (m, 4H), 3,15 (s, 6H), 1,59 (s, 6H). CL/EM: RT = 3,93 min, M+H+ = 411
Exemplo 167 2-(2-aminopirimidin-5-il)-7-metil-4-morfolino- 8,9-di-hidropirazino[2,1-e]purin-6(7H)-ona 167
Etapa 1: Metilamida do ácido 2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina-8-carboxllico
Arrefeceu-se, para -78 2C, uma solução de 2-cloro-6- morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina (0,50 g, 1,55 mmole) e N,N,N',N-tetrametiletilenodiamina (0,35 mL, 2,33 mmole) em THF anidro (14 mL) . Adicionou-se, gota a gota, butil-lítio (2,5 M em hexanos, 1,22 mL, 3,05 mmole) e agitou-se a solução amarela escura, a -78 °C, durante 45 min. Adicionou-se N-metilcarbamato de N-succinimidilo (0,4 g, 2,33 mmole), sob a forma de uma suspensão num pequeno volume de THF e deixou-se a mistura aquecer, até à temperatura ambiente, enquanto se agitou durante 18 h. Diluiu-se a mistura reaccional com água, neutralizou-se com ácido clorídrico 1 M e extraiu-se, três vezes, com acetato de etilo. Secaram-se os extractos combinados (Na2SC>4) filtraram-se e concentraram-se in vacuo. Submeteu-se o resíduo resultante a cromatografia rápida (SiO2, gradiente de 0-100 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) para se obter metilamida do ácido 2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purino-8-carboxílico (104 mg, 18 %). CL/EM RT = 3,26 min, [M+H]+ = 381/383.
Etapa 2: Metilamida do ácido 2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purina-8-carboxilico
Fez-se uma suspensão de metilamida do ácido 2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina-8-carboxílico (104 mg, 0,27 mmole) em metanol (6 mL) e adicionou-se mono-hidrato do ácido p-tolueno-sulfónico (10 mg, 0,05 mmole). Agitou-se a mistura, à temperatura ambiente, durante 68 h, depois diluiu-se com água e neutralizou-se com bicarbonato de sódio aguoso. Filtrou-se o precipitado sólido e secou-se, a 50 °C, em vácuo, para se obter metilamida do ácido 2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purina-8-carboxilico (56 mg, 70 %) . CL/EM RT = 2,43 min, [M+H]+ = 297/299.
Etapa 3: 3-Cloro-7-metil-l-morfolin-4-il-6,7-di-hidro-5H-2,4,4b,7,9-penta-azafluoren-8-ona
Aqueceu-se, a 100 2C, durante 2 h, uma mistura de metilamida do ácido 2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purina-8-carboxílico (56 mg, 0,19 mmole), 1,2-dibromoetano (0,058 mL, 0,68 mmole) e carbonato de césio (0,25 g, 0,76 mmole) em DMF (2 mL) , depois arrefeceu-se, diluiu-se com água e extraiu-se, cinco vezes, com acetato de etilo. Secaram-se os extractos combinados (Na2SO4) e concentraram-se in vácuo. Triturou-se o resíduo resultante, duas vezes, com éter dietílico e secou-se o sólido em vácuo para se obter 3-cloro-7-metil-l-morfolin-4-il-6,7-di-hidro-5H- 2,4,4b,7,9-penta-azafluoren-8-ona (47 mg, 77 %). CL/EM RT = 2,36 min, [M+H]+ = 323/325.
Etapa 4: Fez-se uma purga, com árgon, de uma mistura de 3-cloro-7-metil-l-morfolin-4-il-6,7-di-hidro-5H- 2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoren-8-ona (47 mg, 0,15 mmole), éster pinacólico do ácido 2-aminopirimidino-5-borónico (39 mg, 0,18 mmole) e carbonato de césio (131 mg, 0,40 mmole) em 1,4-dioxano (1,5 mL) e água (1,5 mL) . Adicionou-se tetraquis(trifenilfosfino)paládio (0) (9 mg,
0,008 mmole), purgou-se novamente a mistura com árgon e depois aqueceu-se, a 100 °C, durante a noite. Arrefeceu-se a mistura e diluiu-se com água. Filtrou-se o precipitado, lavou-se com água e depois triturou-se com etanol. Filtrou-se o sólido e secou-se (vácuo, 50 °C) para se obter 167 (15 mg, 26 %) . CL/EM RT = 2,47 min, [M+H]+ = 382. RMN do 1H (DMSO-d6 + dl-TFA, 400MHz): δ 9,38 (2H, s), 4,79 -4,06 (4H, v, largo), 4,44 (2H, t, J = 6,0 Hz), 3,90 (2H, t, J = 6,0
Hz), 3,80 (4H, t, J = 4,7 Hz), 3,11 (3H, s).
Exemplo 168 5-(8,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,8-di-hidro-6H-7-oxa-9-tia-2,4-diaza-fluoren-3-il)-pirimidin-2-ilamina 168
Etapa 1: 7-bromotieno[3,2-d]pirimidino-2,4(1H,3H)-diona
Dissolveu-se tieno[3,2-d]pirimidino-2,4(1H,3H)-diona (10,38 g, 61,72 mmole) em ácido acético (230 mL) e adicionou-se bromo (11,13 mL, 216 mmole). Aqueceu-se a reacção, a 80 °C, durante 3,5 h. Confirmou-se que a reacção estava completa por CL/EM. Verteu-se a mistura reaccional, lentamente, em água gelada e filtrou-se o precipitado que secou durante a noite em vácuo para se obter 7-bromotieno-[3,2-d]pirimidino-2,4(1H,3H)-diona (9,1 g, rendimento de 60 %)
Etapa 2: 7-bromo-2,4-diclorotieno[3,2-d]pirimidina
Dissolveu-se 7-bromotieno[3,2-d]pirimidino-2,4(1H, 3H) -diona (9,1 g, 37 mmole) em POC13 (140 mL, 1 500 mmole) e aqueceu-se, a 110 °C, com uma coluna de condensação vigorosa, ligada durante 20 h. Confirmou-se que a reacção estava completa por CL/EM. Verteu-se em água gelada e filtrou-se o precipitado. Purificou-se o produto por cromatografia em gel de sílica (0 a 100 % de acetato de
etilo/heptanos) num sistema de Rf CombiFlash® (Teledyne Isco Co. ) e concentrou-se in vacuo para se obter 7-bromo-2,4-diclorotieno[3,2-d]pirimidina (8,4 g, rendimento de 80 %)
Etapa 3: 4-(7-bromo-2-clorotieno-[3,2-e]pirimidin-4-il)-morfolina
Dissolveu-se 7-bromo-2,4-diclorotieno[3,2-d]pirimidina (2,9 g, 10,0 mmole) em metanol (100 mL, 2 000 mmole) e adicionou-se morfolina (2 mL, 22 mmol) e deixou-se a mistura reaccional em agitação, durante 1,5 h. Confirmou-se que a reacção estava completa por CL/EM. Concentrou-se in vacuo e diluiu-se com água. Extraiu-se com DCM e concentrou-se novamente in vacuo. Purificou-se o produto por cromatografia em gel de sílica (0 a 100 % de acetato de etilo/heptanos) num sistema de Rf CombiFlash® e concentrou-se in vacuo para se obter 4-(7-bromo-2-clorotieno[3,2-d]-pirimidin-4-il)morfolina (1,2 g, rendimento de 35 %) RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) δ 7,78 (s, 1H) , 4,01 (m, 4H) , 3,85 (m, 4H) .
Etapa 4: 4-(2-cloro-7-viniltieno-[3,2-e]pirimidin-4-il)- morfolina
Combinou-se 4-(7-bromo-2-clorotieno[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (3,55 g, 10,6 mmole), (2-etenil)tri-n-butil-estanho (3,41 mL, 11,7 mmole), Pd(PPh3)4 (613 mg, 0,53 mmole) e 1,4-dioxano (30 mL, 400 mmole) num tubo selado e aqueceu-se, a 100° C, durante 19,5 h. Confirmou-se que a reacção estava completa por CL/EM. Concentrou-se in vácuo e purificou-se o produto por cromatografia em gel de sílica (0 a 50 % de acetato de etilo/heptanos) num sistema de Rf CombiFlash® e concentrou-se in vacuo para se obter 4-(2-cloro-7-viniltieno[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (1,18 g, rendimento de 39,5 %)
Etapa 5: 2-(2-cloro-4-morfolinotieno-[3,2-e]pirimidin-7- il)-etanol
Dissolveu-se 4 - (2-cloro-7-viniltieno[3,2-d]pirimidin-4-il)morfolina (170 mg, 0,6 mmole) em tetra-hidrofurano (10 mL, 100 mmole) e arrefeceu-se para 0 °C, em atmosfera de azoto. Adicionou-se 9-BBN em hexanos 0,5 M (3,4 mL, 2 mmole) e deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante a noite. A CL/EM indicou principalmente material inicial de modo que se arrefeceu novamente a mistura reaccional para 0 2C e adicionou-se 9-BBN em hexanos 0,5 M (8,0 mL, 4 mmole) e deixou-se novamente a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante a noite.
Adicionou-se peróxido de hidrogénio 20 M (1,4 mL, 20 mmole) seguido de hidróxido de sódio em água 5 M (2,4 mL, 10 mmole). Diluiu-se a mistura reaccional com água e extraiu-se com acetato de etilo, secou-se com sulfato de magnésio e concentrou-se in vácuo e purificou-se por cromatografia em gel de silica (acetato de etilo/heptanos a 0 até 50 %) no sistema Rf CombiFlash® e concentrou-se in vacuo para se obter 2-(2-cloro-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-7-il)etanol (110 mg, rendimento de 61 %)
Etapa 6: 2-(2-cloro-7-(2-hidroxietil)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)propan-2-ol
Dissolveu-se 2-(2-cloro-4-morfolinoltieno[3,2-d]- pirimidin-7-il)etanol (70 mg, 0,2 mmole) em tetra-hidro-furano (5 mL, 60 mmole) e arrefeceu-se, para -40 °C, em atmosfera de azoto. Adicionou-se n-butil-lítio 2,5 M em hexanos (370 mL, 0,93 mmole) e deixou-se em agitação, durante 1 h. Adicionou-se acetona (86 uL, 1,2 mmole) e agitou-se novamente, a -40 0 C, durante 5 h. A reacção nunca ficou completa e parou-se com cloreto de amónio saturado e extraiu-se com acetato de etilo, secou-se com sulfato de magnésio e concentrou-se in vacuo para se obter uma mistura não purificada de material inicial e 2- (2-cloro-7-(2-hidroxietil)-4-morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)propan-2-ol (30 mg)
Etapa 7: 3-Cloro-8,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,8-di-hidro-6H-7-oxa-9-tia-2,4-diaza-fluoreno
Dissolveu-se o 2-(2-cloro-7-(2-hidroxietil)-4- morfolinotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)propan-2-ol impuro (30 mg) em tolueno (5 mL, 50 mmole) . Adicionou-se ácido trifluoroacético (0,5 mL, 6 mmole) e aqueceu-se a mistura reaccional, a 120 °C, durante duas h. Confirmou-se que a reacção estava completa por CL/EM. Diluiu-se com água e extraiu-se com acetato de etilo, secou-se com sulfato de magnésio e concentrou-se in vacuo e purificou-se por cromatografia em gel de sílica (acetato de etilo/heptanos a 0 até 100 %) no sistema Rf CombiFlash® utilizando uma coluna de amina e concentrou-se in vacuo para se obter 3-cloro-8,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,8-di-hidro-6H-7-oxa-9-tia-2,4-diaza-fluoreno (10 mg, rendimento de 10 %)
Etapa 8: Dissolveu-se 3-cloro-8,8-dimetil-l-morfolin-4-Í1-5,8-di-hidro-6H-7-oxa-9-tia-2,4-diaza-fluoreno (10 mg, 0,03 mmole) em acetonitrilo (2 mL, 40 mmole) e adicionou-se carbonato de sódio 1 M em água (2 mL, 2 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3-dioxolan-2-il)pirimidin-2-amina (9,0 mg, 0,041 mmole) e bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)-fosfino)dicloropaládio (II) (1,1 mg, 0,0016 mmole). Colocou-se a mistura reaccional no micro-ondas da Biotage, a 120 2C, durante 15 minutos. Pipetou-se a camada aquosa e concentrou-se a camada orgânica in vacuo e purificou-se por cromatografia em gel de sílica (acetato de etilo/heptanos a 0 até 100 %) no sistema Rf CombiFlash® utilizando uma coluna básica de alumina e concentrou-se in vacuo para se obter 168 (85 % puro) (2,7 mg, rendimento de 20 %) M+l: 399, 3. RMN do 2Η (400 MHz, DMSO) δ 9,30 (s, 2H) , 5,34 (s largo, 2H) , 4,08 (t, 2H), 4,01 (m, 4H), 3,87 (m, 4H), 2,95 (t, 2H) , 1,62 (s, 6H)
Exemplo_16 9 2- (lH-indazol-4-il) -4-morfolino-6- (trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina 169
Etapa 1: 4-morfolino-2-(l-tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H- indazol-4-il)-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxaz ino[3,4-e]purina
Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, dos exemplos 139 e 140 (90 mg, 0,0002 mole) e 1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)- 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-indazol (160 mg, 0,0005 mole) com Pd(dppf)Cl2 ([l,l'-bis(difenil-fosfino)ferroceno]dicloropaládio (II), complexado com diclorometano) e carbonato de césio, nas condições de Suzuki, em micro-ondas, com paládio, para se obter 4-morfolino-2-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-lH-indazol-4-il)-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]-purina (90 mg, rendimento de 90 %) . CL/EM (IEP + ) : m/z 530 (M+H)
Etapa 2: Tratou-se 4-morfolino-2-(1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-lH-indazol-4-il)-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina (100 mg, 0,0002 mole) em MeOH (1 mL) com uma guant idade catalítica de ácido p-tolueno-sulfónico (3 mg, 0,02 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional a 50 2C, durante a noite e depois concentrou-se a pressão reduzida. Repartiu-se o resíduo entre água e EtOAc. Lavaram-se os extractos orgânicos com água e salmoura, secaram-se com MgSO4 e concentraram-se até à secagem para se obter 169 (13 g, rendimento de 16 %). CL/EM (IEP) : m/z; 446 (M+H+) RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 13,16 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,22 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 7,66 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 7,47 (t, J= 7,8 Hz, 1H) , 5,93 (g, J= 6,8 Hz, 1H) , 4,55 - 4,17 (m, 8H) , 3,80 (t, J= 4,6 Hz, 4H)
Exemplo 170 3-(4-morfolino-6-(trifluorometil)-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-fenol 170
Fez-se reagir 2-cloro-4-morfolino-6-(trifluorometil)-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, dos exemplos 139 e 140 (50 mg, 0,00015 mole) e 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-fenol (76 mg, 0,00034 mole), com Pd(dppf)Cl2 e carbonato de césio, em micro-ondas, nas condições de Suzuki com paládio, para se obter 170 (10 mg, rendimento de 15 %). CL/EM (IEP): m/z; 422 (M+H+) RMN do 1H (400 MHz, DMSO) δ 7, 96 - 7,74 (m, 2H) , 7,26 (t, J = 8,1 Hz, 1H) , 6,83 (dt, J = 23,4, 11,6 Hz, 1H) , 5,89 (g, J= 6,9 Hz, 1H) , 4,51 - 4,08 (m, 8H) , 3,77 (t, J= 4,6 Hz, 4H) , 1,23 -0,98 (m, 1H)
Exemplo 171 5-(4-((2S,6R)-2,6-dimetilmorfolino-6,6-dimetil-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 171
Etapa 1: 2,6-Dicloro-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina
Aqueceu-se uma mistura de 2,6-dicloro-9H-purina (10,0 g, 53 mmole), 3,4-di-hidro-2H-pirano (9,5 mL, 93 mmole) e mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico (1,0 g, 5,0 mmole) em THF (100 mL), a 100 °C, durante 18 h e depois arrefeceu-se para a TA e concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em
coluna (SiO2, 0 a 10% de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se 2,6-dicloro-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H- purina, sob a forma de um sólido de cor creme (10,9 g, 75 %) . RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 8,33 (1H, s), 5,77 (1H, dd, J = 10,4, 2,4 Hz), 4,19 (1H, m), 3,78 (1H, dt, J = 11,6, 2,9 Hz), 2,17 (1H, m) , 2,09 (1H, m) , 1,98 (1H, m) , 1,87-1,69 (3H, m).
Etapa 2: 2-[2,6-Dicloro-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H- purin-8-il]propan-2-ol
Adicionou-se, gota a gota, BuLi (20 mL, 40,0 mmole, 2 M em pentano) a uma solução de 2,6-dicloro-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina (8,0 g, 29,3 mmole) e TMEDA (6,4 mL, 42,4 mmole) em THF anidro (100 mL) , a -78 °C.
Agitou-se a solução escura resultante, a -78 °C, durante 45 min, depois adicionou-se acetona (4 mL, 54,5 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, durante 30 min,
depois à TA, durante 30 min. Parou-se a reacção com água e extraiu-se com acetato de etilo. Secaram-se os extractos orgânicos combinados (MgSO4) e concentraram-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 20 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se 2-[2,6-dicloro-9-(tetra-hidro-piran-2-il) -9H-purina-8-il]-propan-3-ol sob a forma de um sólido escuro (6,0 g, 62 %) . RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 6,1 (1H, dd, J
= 11,2, 2,8 Hz), 4,26 (1H, m), 3,77 (1H, m), 2,87 (1H, m), 2,09 (1H, m), 1,90-1,71 (11H, m).
Etapa 3: 2-(2,6-Dicloro-9H-purin-8-il)propan-2-ol
Adicionou-se HC1 (5 mL, 5 mmole, solução aquosa 1 M) a uma solução de 2-[2,6-dicloro-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-propan-2-ol (6,0 g, 20,66 mmole) numa mistura de DCM (15 mL) e metanol (15 mL) e agitou-se a solução resultante, à TA, durante lhe depois concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatograf ia em coluna (SiCg, gradiente de 0 a 50 % de metanol em DCM) obtendo-se 2-(2,6-dicloro-9H-purin-8-il)-propan-2-ol sob a forma de um sólido escuro (3,38 g, 66 %). CL/EM (método A): RT = 2,12 min, [M-H]+ = 245/247. RMN do 1H (400 MHz, CDC13) : δ 1,50 (6H, s)
Etapa 4: 1,3-Dicloro-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa- 2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno
Adicionou-se carbonato de césio (9,3 g, 28,5 mmole) e 1,2-dibromoetano (4,1 mL, 47,6 mmole) a uma solução de 2-
(2,6-dicloro-9H-purin-8-il)-propan-2-ol (3,3 g, 13,36 mmole) em DMF (100 mL) e aqueceu-se a mistura reaccional, a 100 °C, durante 2 h, depois repartiu-se entre água e acetato de etilo. Separou-se o extracto orgânico e lavou-se com salmoura, depois secou-se (MgSO4) e concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, 0 a 10 a 20 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se l,3-dicloro-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno, sob a forma de um sólido amarelo (1,0 g, 27 %) . RMN do 1H (400 MHz, CDC13) : δ 4,26 (2H, dd, J = 6, 4 Hz), 4,19 (2H, dd, J = 6, 4 Hz) .
Etapa 5: 3-Cloro-l-((2R,6S)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)-8, 8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno
Aqueceu-se a 140 2C, durante 20 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de l,3-dicloro-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno (100 mg, 0,366 mmole), (2R,6S)-2,6-dimetil-morfolina (84 mg, 0,732 mmole) e trietilamina (77 pL, 0,55 mmole) em IMS (2 mL) e depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de etilo em ciclo-hexano a 10 %) obtendo-se 3-cloro-l-((2R,6S)-2,6-di-metil-morfolin-4-il)-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno, sob a forma de um sólido branco (128 mg, 99 %) . CL/EM (método A) : RT = 3,62 min, [M+H]+ = 352.
Etapa 6: Desgaseificou-se uma mistura de 3-cloro-l-((2R,6S)-2,6-dimetil-morfolin-4-il)8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno (128 mg, 0,36 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)- pirimidin-2-ilamina (121 mg, 0,55 mmole), PdCl2(PPh3)2 (26 mg, 0,036 mmole) e carbonato de sódio (1 mL, 1,0 mmole, solução aquosa 1M) em acetonitrilo (4 mL) e aqueceu-se, a 120 °C, durante 30 mins, num reactor de micro-ondas e depois aqueceu-se, termicamente, a 100 2C, durante 18 horas. Carregou-se a mistura reaccional num cartucho de Isolute® SCX-2 que se lavou com metanol e se eluiu o produto com amónia 2 M em metanol. Combinaram-se as fracções básicas e concentraram-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR de fase inversa (Phenomenex Gemini 08 5 pm, HCO2H em água num gradiente de acetonitrilo de 5-98 %) obtendo-se 171 sob a forma de um sólido branco (10 mg, 7 %) . CL/EM (método B) : RT = 4,14 min, [M+H]+ = 411. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 9,26 (2H, s) , 5,49-5,30 (2H, v, broad s) , 5,20 (2H, broad s) , 4,21 (2H, m) , 4,15 (2H, m) , 3,75 (2H, m) , 2,80 (2H, m) , 1,67 (6H, s), 1,30 (6H, d, J = 6,8 Hz)
Exemplo 172 5-(4-(2,2-dimetilmorfolino-6,6-dimetil-8,9-di- hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 172
Etapa 1: 3-Cloro-l-(2,2-dimetil-morfolin-4-il)-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno
Aqueceu-se, a 140 2C, durante 20 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de l,3-dicloro-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno (100 mg, 0,366 mmole), 2,2-dimetil-morfolina (84 mg, 0,732 mmole) e trietilamina (77 pL, 0,55 mmol) em IMS (2 mL) e depois concentrou-se in vácuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de etilo em ciclo-hexano a 10 %) obtendo-se 3-cloro-l-(2,2-dimetil- morfolin-4-il)-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno, sob a forma de um sólido branco (110 mg, 85%) . CL/EM (método A) : RT = 3,51 min, [M+H]+ = 352 .
Etapa 2: Desgaseificou-se uma mistura de 3-cloro-l-(2,2-dimetil-morfolin-4-il-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno (110 mg, 0,31 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-ilamina (104 mg, 0,47 mmole), PdCl2(PPh3)2 (22 mg, 0,031 mmole) e carbonato de sódio (1 mL, 1,0 mmole, solução aquosa 1M) em acetonitrilo (4 mL) e aqueceu-se, a 120 °C,
durante 30 mins, num reactor de micro-ondas e depois aquece-se, a 100 2C, durante 18 horas. Carregou-se a mistura reaccional num cartucho de Isolute® SCX-2 que se lavou com metanol e eluiu-se o produto com amónia 2 M em metanol. Combinaram-se as fracções básicas e concentraram-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR de fase inversa (Phenomenex Gemini 08 5 pm, HCO2H em água num gradiente de acetonitrilo de 5-98 %) obtendo-se 172 sob a forma de um sólido branco (11 mg, 9 %). CL/EM (método B): RT = 4,00 min, [M+H]+ = 411. RMN do (400 MHz, CDC13) : δ 9,25 (2H, s) , 5,20 (2H, s largo), 4,46-4,13 (8H, m) , 3,88 (2H, m), 1,66 (6H, s), 1,28 (6H, s).
Exemplo 174 5-(4-( (lS,4S)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan- 5-il)-6,6-dimetil-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina 174
Etapa 1: 3-Cloro-8,8-dimetil-l-(lS,4S)-2-oxa-5-aza-biciclo-[2.2.1]hept-5-il-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno
Aqueceu-se, a 140 2C, durante 20 min, num reactor de micro-ondas, uma mistura de 1,3-dicloro-8,8-dimetil-5, 6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno (100 mg, 0,366 mmole), (IS, 4S)-2-oxa-5-aza-biciclo[2.2.1]heptano (73 mg,
0,732 mmole) e trietilamina (77 pL, 0,55 mmole) em IMS (2 mL) e depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, acetato de etilo em ciclo-hexano a 10 %) obtendo-se 3-cloro-8,8-dimetil-l-(IS,4S)-2-oxa-5-aza-biciclo[2.2.1]hept-5-Í1-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno, sob a forma de um sólido branco (120 mg, 98 %). CL/EM (método A): RT = 2,81 min, [M+H]+ = 336.
Etapa 2: Desgaseificou-se uma mistura de 3-cloro-8,8-dimetil-1-(lS,4S)-2-oxa-5-aza-biciclo[2.2.1]hept-5-il-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b,9-tetra-aza-fluoreno (120 mg, 0,36 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)- pirimidin-2-ilamina (87 mg, 0,39 mmole), Pd(PPh3)4 (21 mg, 0,018 mmole) e carbonato de césio (163 mg, 0,5 mmole), numa mistura de 1,4-dioxano (1,5 mL) e água (0,5 mL) e aqueceu-se, a 130 °C, durante 20 mins, num reactor de micro-ondas. Carregou-se a mistura reaccional num cartucho de Isolute® SCX-2 que se lavou com metanol e eluiu-se o produto com amónia 2 M em metanol. Combinaram-se as fracções básicas e concentraram-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por CLAR de fase inversa (Phenomenex Gemini 08 5 pm, HCO2H em água num gradiente de acetonitrilo de 5-98 %) obtendo-se 174 sob a forma de um sólido branco (45 mg, 32 %) . CL/EM (método B): RT = 3,31 min, [M+H]+ = 395. RMN do (400 MHz, DMSO-d6, 80 °C) : δ 9,08 (2H, s) , 6,54 (2H, broad s) , 5,75 (1H, broad s), 4,71 (1H, s), 4,12 (4H, m), 3,87 (1H, dd, J= 7,4, 1,4 Hz), 3,79 (2H, s), 3,75 (1H, d, J = 7,4 Hz), 1,95 (2H, s), 1,59 (6H, d, J = 6,7 Hz)
Exemplo 175 2-(2-aminopirimidin-5-il)-6-metil-4-morfolino- 6,7-di-hidropirazino[ 2,1-e]purin-8(9H)-ona 175
Etapa 1: 1-[2-Cloro-5-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanona
Arrefeceu-se, para -78 2C, uma solução de 2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina (0,50 g, 1,55 mmole) e N,N,N',N-tetrametiletilenodiamina (0,35 mL, 2,33 mmole) em THF anidro (14 mL) . Adicionou-se, gota a gota, n-BuLi (2,5 M em hexanos, 1,22 mL, 3,05 mmole) e agitou-se a mistura, a -78 °C, durante 40 min. Adicionou- se, gota a gota, N-metil-N-metoxiacetamida (0,25 mL, 2,33 mmole) e agitou-se a mistura, a -78 °C, durante 1,5 h, depois deixou-se aquecer até -30 °C. Adicionou-se água seguida de HC1 aquoso 1 M e extraiu-se a mistura, sete vezes, com acetato de etilo. Secaram-se os extractos orgânicos combinados (Na2SC>4) , filtraram-se e concentraram-se in vácuo. Submeteu-se o resíduo resultante a cromatografia rápida (SiCq) , com um gradiente de 0-50 % de acetato de etilo em ciclo-hexano, para se obter l-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanona (0,47g, 83 %) . CL/EM RT = 3,57 min, [M+H]+ = 366/368.
Etapa 2: 1-[2-Cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanol
A uma suspensão agitada de 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanona (0,47 g, 1,29 mmole) em etanol (8 mL) e THF (8 mL) adicionou-se boro-hidreto de sódio (49 mg, 1,30 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, durante 1,5 h e depois concentrou-se in vácuo. Dissolveu-se o resíduo resultante em acetato de etilo e bicarbonato de sódio aquoso e as fases separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa, duas vezes, com acetato de etilo. Secaram-se as fracções combinadas (Na2SO4), filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanol (0,50 g, quantitativa). CL/EM RT = 3,20 min, [M+H]+ = 368/370.
Etapa 3: 8-(1-Azido-etil)-2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina
Dissolveu-se 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra- hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanol (0,37 g, 1,01 mmole) em tolueno anidro (5,6 mL) e DMF (0,9 mL) e arrefeceu-se a solução em gelo. Adicionou-se azida de difenilfosforilo (0,56 mL, 2,54 mmole), seguida da adição, gota a gota, de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (0,37 mL, 2,54 mmole). Agitou-se a mistura reaccional, à temperatura ambiente, durante 16 h, depois diluiu-se com acetato de etilo seguido de água e as fases separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa, duas vezes, com acetato de etilo e secaram-se as fracções orgânicas combinadas (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo. Submeteu-se o residuo resultante, em conjunto com o produto impuro de uma reacção realizada de forma semelhante, a uma escala menor (0,10 g, 0,27 mmole de 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etanol), a uma cromatografia rápida (SiO2) com um gradiente de acetato de etilo em ciclo-hexano a 0-50 %, para se obter 8-(l-azido-etil)-2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina, como dois pares, separados, de diastereómeros (0,25 g e 0,27 g, total 0,52 g, 100 %). CL/EM RT= 4.05 min, [M+H]+= 393/395. CL/EM RT = 4,16 min, [M+H]+ = 393/395.
Etapa 4: 1-[2-Cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etilamina
A uma solução de 8-(1-azido-etil)-2-cloro-6-morfolin-4-H-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina (0,47 g, 1,20 mmole) em THF (13 mL) e água (4 mL) adicionou-se trifenilfosfina (0,33 g, 1,28 mmole). Aqueceu-se a mistura reaccional, a 70 °C, durante 2 h e depois arrefeceu-se para a TA. Adicionou-se acetato de etilo e as fases separaram-se. Extraiu-se a fase aquosa, três vezes, com acetato de etilo. Secaram-se as fracções orgânicas combinadas (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo.
Submeteu-se o resíduo resultante, em conjunto com o produto impuro de uma reacção realizada de forma semelhante, a uma escala menor (0,05 g, 0,14 mmole de 8-(1-azido-etil)-2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purina), a cromatografia rápida (SiO2) com um gradiente de metanol em DCM a 0-10 %) . Submeteu-e o material eluído, contendo o composto do título e óxido de trifenilfosfina, a uma cromatografia rápida (SiO2) com um gradiente de metanol em TBME a 0-20 %) e combinou-se o material limpo das duas colunas para se obter 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etilamina (0,41 g, 84 %,
mistura de dois pares de diastereómeros). CL/EM RT= 2,15 min, 2,19 min, [M+H]+= 367/369
Etapa 5: 2-Bromo-N-{1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra- hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil}-acetamida
A uma solução de 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etilamina (0,25 g, 0,68 mmole) em DCM anidro adicionou-se brometo de bromoacetilo (62 pL, 0,74 mmole) e trietilamina (0,13 mL, 0,93 mmole) . Agitou-se a mistura, à TA. Passadas 2 h, adicionou-se outra porção de brometo de bromoacetilo (12 pL) e agitou-se continuadamente durante 1,5 h. Adicionou-se água, as fases separaram-se e extraiu-se a fase aquosa, duas vezes, com DCM. Secaram-se as fracções orgânicas combinadas (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter 2-bromo-N-{1-[2-cloro-6-morfolin-4-Í1-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil} -acetamida (385 mg, mistura de dois pares de diastereómeros), que se utilizou na etapa seguinte sem mais purificação. CL/EM RT= 3,45 min e 3,52 min, [M+H]+= 487/489/491
Etapa 6: 2-Bromo-N-[1-(2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]-acetamida
Dissolveu-se 2-bromo-N-{1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil}-acetamida (impura, a partir da etapa 5, 385 mg) em metanol (15 mL) e adicionou-se mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico (35 mg). Agitou-se a mistura, à TA, durante 16 h. Adicionou-se água, adicionou-se bicarbonato de sódio aquoso para se obter um pH de 7 e filtrou-se o precipitado, lavou-se com água e secou-se (in vácuo, 50 °C) para se obter 2-bromo-N-[1-(2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]-acetamida (207 mg, 76 %) . Extraiu-se o filtrado aquoso, três vezes, com acetato de etilo. Separou-se a camada orgânica e secou-se (Na2SO4) , depois concentrou-se in vacuo para se obter mais uma colheita de 2-bromo-N-[1-(2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]-acetamida (39 mg) menos pura. CL/EM RT= 2,57 min, [M+H]+= 403/405/407
Etapa 7 3-Cloro-8-metil-l-morfolin-4-il-7,8-di-hidro-2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoren-6-ona
Agitou-se, à TA, durante 2 h, uma mistura de 2-bromo-N-[1-(2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]-acetamida (275 mg, 0,68 mmole) e carbonato de césio (0,48 g, 1,36 mmole) em DMF (10 mL) anidro, depois diluiu-se com água e extraiu-se, cinco vezes, com acetato de etilo. Secaram-se os extractos orgânicos combinados (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo. Submeteu-se o resíduo resultante a cromatografia rápida (SiO2) com um gradiente de 0-5 % de metanol em DCM) para se obter 3-cloro-8-metil-l-morfolin-4-il-7,8-di-hidro- 2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoren-6-ona (93 mg, 42 %) . CL/EM RT = 2,41 min, [M+H]+ = 323/325.
Etapa 8: Aqueceu-se, a 100 2C, durante 16 h, uma mistura de éster pinacólico do ácido 3-cloro-8-metil-l-morfolin-4-il-7,8-di-hidro-2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoren-6-ona (46 mg, 0,14 mmole), éster pinacólico do ácido 2-amino-pirimidino-5-borónico (78 mg, 0,36 mmole), fluoreto de potássio (46 mg, 0,80 mmole) e Pd(PPh3)4 (18 mg, 0,016 mmole) em 1,4-dioxano anidro (5 mL) . Depois de se arrefecer para a TA, diluiu-se a mistura com água e filtrou-se o precipitado formado e lavou-se com água.
Triturou-se o sólido com metanol, DCM e finalmente com acetonitrilo, para se obter 175 (8 mg, 15 %) . CL/EM RT= 2,59 min, [M+H]+= 382. RMN do 2Η (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9,11 (2H, s), 8,68 (1H, s), 7,05 (2H, s), 4,84 (1H, q, J = 6,9 Hz), 4,76 (1H, d, J = 17,2 Hz), 4 69 (1H, d, J = 17,2 Hz), 4,25 (4H, largo), 3,75 (4H, t, J = 4,5 Hz), 1,56 (3H, d, J = 6,9 Hz) .
Exemplo 176 5-(6,7-dimetil-4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidro-pirazino[2,1-e]purin-2-il)-pirimidin-2-amina 176
Etapa 1: Éster terc-butilico do ácido {1-[2-Cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil}-carbâmico
A uma solução de 1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etilamina (0,41 g, 1,12 mmole) em DCM anidro (10 mL) adicionou-se trietilamina (0,17 mL, 1,23 mmole) e dicarbamato de di-terc-butilo (0,268 g, 1,23 mmole) . Agitou-se a mistura, à TA, durante 2 h e depois lavou-se com ácido cítrico aquoso a 10 %.
Extraiu-se a fase aquosa, três vezes, com DCM e secaram-se as fracções orgânicas combinadas (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vácuo. Triturou-se o resíduo resultante com éter dietílico, recolheu-se por filtração e secou-se
(in vácuo, 50 °C) para se obter éster terc-but í lico do ácido {1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil}-carbâmico (0,425 g, 81 %, mistura de dois pares de diastereómeros). CL/EM RT= 4,06 min, 4,13 min, [M+H]+= 467/469
Etapa 2: Éster terc-butilico do ácido {1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil]-metil}-carbâmico
Arrefeceu-se, para 0 °C, uma solução de {1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil}-carbâmico (218 mg, 0,47 mmole) em THF anidro (15 mL). Adicionou-se hidreto de sódio (suspensão a 60 % em óleo, 22 mg, 0,56 mmole) e agitou-se a mistura, a 0 °C, durante 30 min. Adicionou-se iodometano (10 vol. % de uma solução em THF, 0,35mL, 0,56 mmole) e agitou-se a mistura, durante 16 h, à TA. Combinou-se a mistura reaccional com outra mistura, preparada de uma maneira semelhante, a partir de 210 g do material inicial de carbamato e diluiu-se com água. Depois de se ajustar o pH para 7 por adição de HC1 aquoso 1 M e bicarbonato de sódio aquoso, extraiu-se a mistura, três vezes, com acetato de etilo. Secaram-se os extractos combinados (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo, para se obter uma mistura a 2:1 do composto do
título e o material inicial de carbamato (0,46 g) . Dissolveu-se esta mistura em THF anidro (20 mL) e tratou-se com hidreto de sódio (19 mg) e iodometano (solução a 10 % em vol. em THF, 0,29 mL), tal como antes. Depois da adição de mais iodometano (puro, 0,050 mL) e da agitação durante mais 8 h, diluiu-se a mistura reaccional com água, neutralizou-se e extraiu-se, tal como antes. Secaram-se os extractos orgânicos (Na2SO4) filtraram-se e concentraram-se in vácuo. Submeteu-se o resíduo resultante a cromatografia rápida (SiO2) , com um gradiente de 0-20 % de acetato de etilo em ciclo-hexano), para se obter éster terc-butílico do ácido {l-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]etil}-metil-carbâmico (316 mg, 72 %). CL/EM RT = 4,48 min, [M+H]+ = 481/483.
Etapa 3: [1-(2-Cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]- metil-amina
Agitou-se, à temperatura ambiente, durante 3 h, uma mistura de éster terc-butílico do ácido {1-[2-cloro-6-morfolin-4-il-9-(tetra-hidro-piran-2-il)-9H-purin-8-il]-etil}-metil-carbâmico (316 mg, 0,66 mmole) e mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico (30 mg) em metanol e depois deixou-se em repouso durante 56 h. Concentrou-se a mistura reaccional in vacuo até a um pequeno volume, depois adicionou-se DCM (3 mL) e ácido trifluoroacético (3 mL) e agitou-se a mistura reaccional, durante 4,75 h à TA.
Adicionou-se mais uma porção de ácido trifluoroacético (3 mL) e agitou-se continuamente durante 2 h. Concentrou-se a mistura, in vacuo e triturou-se o resíduo resultante, três vezes, com éter dietílico. Repartiu-se o sólido resultante entre uma solução de metanol em DCM a 10 % e bicarbonato de sódio aquoso. Separaram-se as fases e extriu-se a fase aquosa, quatro vezes, com uma solução de metanol em DCM a 10 %. Secaram-se as fracções orgânicas combinadas (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo para se obter [1-(2-cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]-metil-amina (0,19 g, 97 %) . CL/EM RT= 1,68 min, [M+H]+= 297.
Etapa 4: 3-Cloro-7,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5, 6,7, 8-tetra-hidro-2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoreno
Agitou-se, à TA, durante 4 h, uma mistura de: [1— (2 — cloro-6-morfolin-4-il-9H-purin-8-il)-etil]-metil-amina (95 mg, 0,32 mmole), carbonato de césio (652 mg, 2 mmole) e 1,2-dibromoetano (0,030 mL, 0,35 mmole) em DMF (5 mL) . Adicionou-se uma outra porção de 1,2-dibromoetano (0,030 mL, 0,35 mmole) e agitou-se continuadamente durante 20 h. Diluiu-se a mistura reaccional com água e extraiu-se, sete vezes, com éter. Secaram-se os extractos combinados (Na2SO4) , filtraram-se e concentraram-se in vacuo. Submeteu-se o resíduo resultante a cromatografia rápida (SiO2) com um gradiente de 0-4 % de metanol em DCM) para se obter 3-cloro-7,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,6,7,8-tetra-hidro-2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoreno (76 mg, 74 %). CL/EM RT = 1,82 min, [M+H]+ = 323/325.
Etapa 5: Fez-se uma purga, com árgon, de uma mistura de 3-cloro-7,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,6,7,8-tetra-hidro-2,4,4b,7,9-penta-aza-fluoreno (70 mg, 0,22 mmole), éster pinacólico do ácido 2-aminopirimidino-5-borónico (57 mg, 0,26 mmole) e carbonato de césio (216 mg, 0,66 mmole) em 1,4-dioxano (2,5 mL) e água (2,5 mL) . Adicionou-se Pd(PPh3)4 (12 mg, 0,011 mmole), purgou-se novamente a mistura com árgon e depois aqueceu-se, a 100 °C, durante 16 h. Adicionou-se mais porções de éster de boronato (29 mg) e Pd(PPh3)4 (6 mg) e aqueceu-se cont inuamente durante 5,5 h. Diluiu-se a mistura com água e extraiu-se, cinco vezes, com acetato de etilo. Secaram-se os extractos orgânicos combinados (Na3SO4), filtraram-se e concentraram-se in vácuo. Submeteu-se o resíduo resultante a cromatografia rápida (SiCq) com um gradiente de 0-10 % de metanol em DCM) para se obter 176 (58 mg, 69 %). CL/EM RT= 2,11 min, [M+H]+= 382. RMN do 2H (DMSO-d6, 400 MHz): δ 9,08 (2H, s) , 7,01 (2H, s) , 4,24 (4H, broad) , 4,20 (1H, m) , 4,00 (1H, m) , 3,75 (4H, t, J = 4,8 Hz), 3,55 (1H, q, J = 6,6 Hz), 3,21 (1H, m), 2,78 (1H, m), 2,43 (3H, s), 1,50 (3H, d, J = 6,6 Hz) .
Exemplo 177 5-(8,8-Dimetil-l-morfolin-4-il-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b-triaza-fluoren-3-il)-pirimidin-2-ilamina 177
Etapa 1: 7-Benzeno-sulfonil-2,4-dicloro-7H-pirrol[2,3-d]-pirimidina
Adicionou-se uma solução de 2,4-dicloro-7H-pirrol[2,3-d] pirimidina (1 g, 5,3 mmole) em THF anidro (5 mL) a uma suspensão de hidreto de sódio (234 mg, 5,83 mmole, dispersão a 60 % em óleo mineral) em THF anidro (15 mL) , a 0 °C. Agitou-se a mistura resultante, a 0 °C, durante 45 min e adicionou-se, gota a gota, cloreto de benzeno-sulfonilo (1,12 g, 6,36 mmole). Deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e agitou-se, à TA, durante 1 h. Parou-se a reacção com cloreto de amónio aquoso saturado e extraiu-se com acetato de etilo. Secaram-se os extractos orgânicos combinados (Na2SO4) e concentraram-se in vacuo. Triturou-se o resíduo resultante com ciclo-hexano para se obter 7-benzeno-sulfonil-2,4-di-cloro-7H-pirrol[2,3-d]pirimidina, sob a forma de um sólido amarelo (1,52 g, 87 %) . RMN do (400 MHz, CDC13) : δ 8,24 (2H, m) , 7,76 (1H, d, J = 4,0 Hz), 7,69 (1H, m) , 7,58 (2H, m) , 6,69 (1H, d, J = 4, 0 Hz) .
Etapa 2: 2-(2,4-Dicloro-7H-pirrol-[2,3-e]pirimidin-6-il)- propan-2-ol
Adicionou-se, gota a gota, di-isopropilamida de litio (2 mL, 4,0 mmole, 2 M em THF) a uma solução de 7-benzeno-sulfonil-2,4-dicloro-7H-pirrol[2,3-d]pirimidina (656 mg, 2,0 mmole) em THF anidro (15 mL) , a -78 °C. Agitou-se a solução resultante, a -78 °C, durante 90 min, depois adicionou-se acetona (0,4 mL, 5,5 mmole) e agitou-se a mistura reaccional, a -78 °C, durante 30 min. Parou-se a reacção com cloreto de amónio aquoso saturado e extraiu-se com acetato de etilo. Secaram-se os extractos orgânicos combinados (MgSO4) e concentraram-se in vacuo para se obter 2- (7-benzeno-sulfonil-2,4-dicloro-7H-pirrol[2,3-d]-pirimidin-6-il)-propan-2-ol. A uma solução de 2-(7-benzeno-sulfonil-2,4-dicloro-7H-pirrol[2,3-d]pirimidin-6-il) -propan-2-ol (2 mmole) numa mistura de álcool isopropilico (11 mL) e água (3 mL) adicionou-se hidróxido de sódio (6 mL, 36 mmole, solução aquosa 6 M) . Agitou-se a mistura reaccional, à TA, durante 2 h e depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiCh, gradiente de 0 a 40 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se 2-(2,4-dicloro-7H-pirrol [2,3-d]pirimidin-6-il)-propan-2-ol (304 mg, 64 %) . CL/EM (método A): RT = 2,70 min, [M] _ = 244/246.
Etapa 3: 3-Cloro-8,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b-triaza-fluoreno
Adicionou-se carbonato de césio (1,2 g, 3,7 mmole) e 1,2-dibromoetano (316 mL, 3,7 mmole) a uma solução de 2-(2,4-dicloro-7H-pirrol-[2,3-d]pirimidin-6-il)-propan-2-ol (304 mg, 1,23 mmole) em DMF (4 mL) e aqueceu-se a mistura reaccional a 100 °C, durante 45 min depois repartiu-se entre água e acetato de etilo. Separou-se o extracto orgânico e lavou-se com salmoura, depois secou-se (Na2SCp) e concentrou-se in vacuo para se obter 1,3-dicloro-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b-triaza-fluoreno. Aqueceu-se à temperatura de refluxo, durante 3 h, uma mistura de 1,3-dicloro-8,8-dimetil-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b-triaza-fluoreno (1,23 mmole), morfolina (236 pL, 2,69 mmole) e trietilamina (342 pL, 2,46 mmol) em IMS (3 mL) e depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, gradiente de 0 a 40 % de acetato de etilo em ciclo-hexano) obtendo-se 3-cloro-8,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b-triaza-fluoreno (159 mg, 40 %). CL/EM (método A): RT = 3,13 min, [M+H]+ = 323.
Etapa 4: Desgaseificou-se uma mistura de 3-cloro-8,8-dimetil-l-morfolin-4-il-5,6-di-hidro-8H-7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fluoreno (75 mg, 0,23 mmole), 5-(4,4,5,5-tetrametil- [ 1,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirimidin-2-ilamina (115 mg, 0,52 mmole), bis(di-terc-butil(4-dimetilaminofenil)- fosfino)dicloropaládio (II) (25 mg, 0,014 mmole) e carbonato de sódio (1 mL, 1,0 mmole, solução aquosa 1M) em acetonitrilo (3 mL) e aqueceu-se, a 150 °C, durante 30 min., num reactor de micro-ondas e depois concentrou-se in vacuo. Purificou-se o resíduo resultante por cromatografia em coluna (SiO2, gradiente de 0 a 40 % de acetato de etilo em ciclo-hexano), seguido de CLAR de fase inversa (Phenomenex Gemini C18 5 pm, HCO2H a 0,1 % em água com um gradiente em acetonitrilo a 5-98 %) obtendo-se 177 sob a
forma de um sólido esbranquiçado (13 mg, 15 %) . CL/EM (método B): RT = 3,50 min, [M+H]+ = 382. RMN do 2Η (400 MHz, CDC13) : δ 9,27 (2H, s) , 6,12 (1H, s) , 5,27 (2H, broad s) , 4,21 (2H, m) , 4,14 (2H, m) , 3,97 (4H, m) , 3,88 (4H, m) , 1,62 (6H, s)
Exemplo 901 Ensaio de ligação de PI3K pllOa (alfa)
Ensaios de ligação: Fizeram-se experiências de polarização inicial num Analyst HT® 96-384 (Molecular Devices Corp, Sunnyvale, CA.). Prepararam-se amostras para as medições da afinidade de polarização por fluorescência por adição de diluições em série a 1:3 de PI3K de pllO alfa (Upstate Cell Signaling Solutions, Charlottesville, VA) começando numa concentração final de 20 ug/mL em tampão de polarização (10 mM tris a pH 7,5, NaCl 50 mM, MgCl24 mM, Chaps a 0,05 % e DTT 1 mM) até a uma concentração final de PIP2 de 10 mM (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT. ) . Depois de um tempo de incubação de 30 minutos, à temperatura ambiente, a reacção parou por adição das sondas GRP-1 e PIP3-TAMRA (Echelon-Inc., Salt Lake City, UT.) com a concentração dinal de 100 nM e 5 nM respectivamente. Leitura com filtros padrão de corte para o fluoróforo rodamina (Àex = 530 nm; Àem = 590 nm) em 384 poços de pequeno volume Proxiplates® (PerkinElmer, Wellesley, MA.) Fez-se um gráfico dos valores de polarização por fluorescência em função da concentração de proteína e obtiveram-se os valores de CE50 ajustando os dados a uma equação de 4 parâmetros utilizando o programa informático KaleidaGraph® (Synergy software, Reading, PA) . Esta experiência também estabelece a concentração apropriada de proteína que se deve utilizar em subsequentes experiências comparativas com os inibidores.
Determinaram-se os valores de CI50 do inibidor por adição de 0,04 mg/mL de PI3K d pllO alfa (concentração final) combinado com PIP2 (concentração final de 10 mM) em poços contendo diluições em série a 1:3 dos antagonistas numa concentração final de ATP de 25 mM (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA) no tampão de polarização. Depois de um tempo de incubação de 30 minutos, à temperatura ambiente, a reacção parou por adição das sondas GRP-1 e PIP3-TAMRA (Echelon-Inc. , Salt Lake City, UT.) com a concentração dinal de 100 nM e 5 nM respectivamente. Leitura com filtros padrão de corte para o fluoróforo rodamina (Àex = 530 nm; Àem = 590 nm) em 384 poços de pequeno volume Proxiplates® (PerkinElmer, Wellesley, MA.) Fez-se um gráfico dos valores de polarização por fluorescência em função da concentração do antagonista e obtiveram-se os valores de CE50 ajustando os dados a uma equação de 4 parâmetros utilizando o programa informático Assay Explorer® (MDL, San Ramon, CA.).
Alternativamente, determinou-se a inibição de PI3K num ensaio radiométrico utilizando enzima recombinante purificada e ATP numa concentração de 1 uM. O composto de fórmula I foi diluído em série em DMSO a 100 %. Fez-se a incubação da mistura reaccional de cinase, durante 1 h, à temperatura ambiente e terminou-se a reacção por adição de STF. Em seguida determinaram-se os valores de CI50 utilizando a curva de ajustamento de resposta à dose sigmoidal (inclinação variável). Os exemplos estão ilustrados no quadro 1.
Exemplo 902 Ensaio de proliferação de células in vitro
Mediu-se a eficácia dos compostos de fórmula I por meio de um ensaio de proliferação de células utilizando o protocolo que se segue (Promega Corp. Technical Bulletin TB288; Mendoza et al (2002) Câncer Res. 62: 5485-5488): 1. Depositou-se uma aliquota de 100 μΐ de uma cultura de células contendo cerca de 104 células (PC3, Detroit562 ou MDAMB361.1) num meio em cada um dos poços de uma placa de 384 poços, de paredes opacas. 2. Prepararam-se poços de ocntrolo contendo meio e sem células . 3. Adicionou-se o composto aos poços das experiências e incubou-se durante 3-5 dias. 4. Equilibraram-se as placas, à temperatura ambiente, durante aproximadamente 30 minutos. 5. Adicionou-se, a cada poço, um volume do reagente CellTiter-Glo® igual ao volume do meio de cultura presente em cada poço. 6. Misturaram-se os conteúdos, durante 2 minutos, num agitador orbital, para induzir a lise das células. 7. Fez-se a incubação da placa, à temperatura ambiente, durante 10 minutos, para estabilizar o sinal de luminescência. 8. Registou-se a luminescência e desenhou-se em gráficos como URL = unidades relativas de luminescência.
Alternativamente, semearam-se as células, com uma densidade optimizada, numa placa de 95 poços e fez-se a sua incubação, durante 4 dias, na presença de um composto de ensaio. Em seguida adicionou-se Alamar Blue™ ao meio de ensaio e fez-se a incubação das células, durante 6 h, antes de se fazer a leitura a uma excitação de 544 nm e a uma emissão de 590 nm. Calcularam-se os valores de CE50 utilizando uma curva de ajustamento de resposta à dose sigmoidal. O termo CE50 refere-se a metade da concentração máxima eficaz e é a concentração à qual um fármaco induz uma respeita a meio caminho entre o valor de base e o valor máximo, após um tempo de exposição especifico. É normalmente utilizado como uma medida da potência do fármaco.
Os efeitos anti-proliferativos dos compostos de fórmula I dos exemplos foram medidos por meio de um ensaio CellTiter-Glo®, em função de várias linhas de células de tumor, incluindo as seguintes:
Exemplo 903 Permeabilidade de Caco-2
Semeiam-se células de Caco-2 em placas Multiscreen® a 1 x 105 células/cm2 e faz-se a sua cultura durante 20 dias. Em seguida avalia-se a permeabilidade dos compostos. Aplicam-se os compostos na superfície apical (A) de mono-camadas de células e mede-se a permeação do composto no compartimento (B) da base lateral. Faz-e o mesmo na direcção inversa (B-A) para investigar o transporte activo. Calcula-se o valor do coeficiente de permeabilidade, Papp, para cada composto, uma medida da permeação do composto através da membrana. Os compostos agrupam-se em compostos de potencial de absorção baixo (Papp </= 1,0 x 106cm/s) ou elevado (Papp >/= 1,0 x 106cm/s), em comparação com a absorção humana já estabelecida.
Para avaliar a capacidade de um composto para sofrer um efluxo activo, determinou-se a proporção entre o transporte basolateral (B) e o apical (A) , em comparação com a proporção entre A e B. Valores de B-A/A-B >/= 1,0 indicam a ocorrência de efluxo celular activo.
Exemplo 904 Depuração de hepatócitos
Utilizam-se suspensões de hepatócitos humanos crio-preservados. As incubações fazem a uma concentração do composto de 1 mM ou 3 μΜ, a uma densidade celular de 0,5 x 106 células viáveis/mL. A concentração final de DMSO na incubação é de cerca de 0,25 %. Fazem-se incubações de controlo, na ausência de células, para revelar qualquer degradação enzimática. As amostras em duplicado (50pL) retiram-se da mistura de incubação a 0, 5, 10, 20, 40 e 60 minutos (amostra de controlo apenas aos 60 minutos) ae adicionam-se ao padrão interno contendo metanol (100 pL) -para terminar a reacção. Podem utilizar-se, como compostos de controlo, tolbutamida, 7-hidroxicoumarina, e testosterona. Centrifugam-se as amostras e reunem-se os sobrenadantes, de cada intervalo de tempo, para análise por CL-EMEM. A partir de um gráfico da proporção da área do pico ln (área do pico do composto parental / área do pico do padrão interno), em função do tempo, calcula-se a área da depuração intrínseca (DPint) tal como se segue: A DPint (μΐ/min/milhão de células) = V x k, em que k representa a constante da taxa de eliminação obtida a partir de um gradiente de concentração de ln, num gráfico em função do tempo; V representa um termo de volume derivado do volume de incubação e é expresso como uL 106 células-1.
Exemplo 905 Inibição do citocroma P450
Os compostos de fórmula I podem ser rastreados em função de alvos de CYP450 (1A2, 2C9, 209, 2D6, 3A4) em cerca de 10 concentrações em duplicado, com uma concentração máxima de cerca de 100 uM. Podem utilizar-se, como controlo, inibidores-padrão (furafilina, sulfafenazol, tranilcipromina, quinidina, cetoconazol). As placas podem ser lidas utilizando um BMG LabTechnologies PolarStar™ em modo de fluorescência.
Exemplo 906 Indução do citocroma P450
Pode fazer-se uma cultura de hepatócitos humanos isolados recentemente de um único dador, durante cerca de 48 h, antes da adição do composto de fórmula I, em três concentrações e fazer a sua incubação, durante 72 h. Adicionam-se substratos de sondas para CYP3A4 e CYP1A2, durante 30 minutos e 1 h antes do fim da incubação. Às 72 h, retiram-se as células e o meio e quantifica-se o grau de metabolismo de cada substrato de sonda por CL-EM/EM. A experiência é controlada pela utilização de indutores dos P450s individuais incubados a uma concentração em triplicado.
Exemplo 907 Ligação da proteína do plasma
Preparam-se as soluções do composto de fórmula I (5 um, concentração final de DMSO de 0,5 %) num tampão e plasma a 10 % (v/v em tampão) . Junta-se uma placa de diálise HT de 96 poços de modo que cada poço é dividido em dois por uma membrana de celulose semi-permeável. Adiciona-se a solução de tampão a um dos lados da membrana e a solução de plasma ao outro lado; as incubações realizam-se a 37 °C, ao longo de 2 h, em triplicado. Em seguida esvaziam-se as células e combinam-se as soluções de cada lote de compostos em dois grupos (isento de plasma e contendo plasma) e depois analisam-se por CL-EM/EM utilizando dois conjuntos de padrões de calibração para soluções isentas de plasma (6 pontos) e soluções contendo plasma (7 pontos) . Calcula-se o valor da fracção não ligada para o composto.
Exemplo 908 Bloqueio do canal de hERG
Avaliam-se os compostos de fórmula I quanto à sua capacidade para regular o efluxo de rubldio dos canais de potássio hERG que expressão de forma estável células HEK-294, utilizando uma metodologia de fluxo já estabelecida. Preparam-se as células num meio contendo RbCl, colocam-se em placas de 96 poços e deixa-se crescer, durante a noite, para formarem mono-camadas. A experiência do efluxo inicia-se por aspiração do meio e lavagem de cada poço com 3 x 100 pL de tampão de pré-incubação (com uma [K+] baixa) , à temperatura ambiente. No seguimento da aspiração final, adiciona-se, a cada poço, 50 pL do composto de trabalho concentrado (2x) e faz-se a sua incubação, à temperatura ambiente, durante 10 minutos. Adicionou-se a seguir, a cada poço, 50 pL de tampão de estimulação (contendo um elevado teor de [K+]) originando as concentrações finais do composto do ensaio. As placas com as células são então incubadas, à temperatura ambiente, durante mais 10 minutos. Transfere-se então 80 pL do sobrenadante de cada poço para poços equivalentes de uma placa de 96 poços e analisado por via de espectroscopia de emissão atómica. O composto é rastreado como as curvas de CI5o de duplicados de 10 pt, n=2, desde uma concentração máxima de 100 pM.
Exemplo 909 Xeno-enxerto de tumor in vivo
Inocularam-se, subcutaneamente, murganhos pelados NCR (Taconic Farms, IN) no tórax lateral direito com 5 milhões de células U-87 MG Merchant (uma variante interna derivada de células U-87 MG da ATCC, Manassas, VA) em SSHE/Matrigel (1:1, v/v). Os murganhos portadores de xeno-enxertos de tumores tomaram, diariamente uma dose oral, por administração forçada, durante < 28 dias, de fármaco ou de veículo, depois de se terem separado em diferentes grupos de doses com tumores com uma dimensão semelhante. Registaram-se as dimensões dos tumores pelo menos duas vezes por semana, ao longo do estudo. Também se registaram os pesos corporais dos murganhos, pelo menos duas vezes por semana e observaram-se os murganhos diariamente. Mediu-se o volume do tumor em duas dimensões perpendiculares (comprimento e largura) utilizando calibradores Ultra Cal-IV (modelo 54-10-111; Fred V. Fowler Co., Inc.; Newton, MA) e analisou-se utilizando o Excel v. 11.2 (Microsoft Corporation; Redmond, WA) . Desenharam-se os gráficos de inibição do tumor utilizando o GraphPad Prism™, versão 5.0c (GraphPad Software, Inc.; La Jolla, CA) . Calculou-se o volume do tumor com a fórmula: Dimensão do tumor (mm3) = (medida mais longa x medida mais curta2) x 0,5.
Mediram-se os pesos corporais do animal utilizando uma escala Pro™ AV812 (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ). Os gráficos foram gerados utilizando o GraphPad Prism™, versão 5.0c. A alteração percentual do peso foi calculada utilizando a fórmula: alteração percentual do peso individual = ((novo peso / peso inicial)-1) x 100.
Os murganhos cujos volumes do tumor excederam 2000 mm3 ou cuja perda de peso excedeu 20 % do seu peso inicial, foram eutanizados de acordo com as orientações reguladoras. A inibição percentual do crescimento do tumor (% ICT) no final do estudo (FDE) foi calculada utilizando a fórmula: % ICT= (1- [ (ASC/dia) Tratamento t (AS C / dí a ) controlo ] ) X 100, em que a ASC/dia é a área sob a curva de crescimento do tumor na escala natural, dividida pelo número de dias do estudo. Os traços de crescimento Log2 (volume do tumor) foram ajustados a cada grupo de dose com splines cúbicas para um período de tempo fixo e o efeito da dose em cada grupo. 0 ajustamento foi feito por via de um modelo de efeitos mistos, utilizando o pacote de R 'nome', versão 3.1-97 (11) em R na versão 2.12.0 (R Development Core Team 2008; R Foundation for Statistical Computing; Viena, Áustria).
Definiu-se uma resposta parcial (RP) como uma redução > 50 % em relação ao volume inicial do tumor que nunca se tornou uma resposta completa (RC) em nenhum dia do estudo. Definiu-se RC como uma redução de 100 % no volume inicial do tumor, em nenhum dia do estudo. A incidência do tumor no estudo (ITE) reflectiu o número de animais num grupo com um tumor mensurável em relação à última medição do volume do tumor.
Também se utilizou uma análise linear do efeito misto para o modelo da alteração percentual do peso corporal ao longo do tempo, em resposta à dose.
Exemplo 910 Ensaio de indução de fosfo AKT.
Semearam-se células numa placa de cultura de tecidos de 6 poços, a 5 x 105 células por poço durante a noite. Trataram-se as células com uma CE80 do composto de fórmula I. No seguimento do tratamento, lavaram-se as células, uma vez, com STF frio e fez-se a lise em IX tampão de extracção de células da Biosource (Carlsbad, CA) complementado com inibidores de protease (Roche, Mannheim, Alemanha), PMSF 1 mM, e os cocktails 1 e 2 de inibidor de fosfatase da Sigma (St. Louis, MO) . A determinação da concentração de proteína foi feita utilizando o estojo de ensaio de proteínas BCA da Pierce (Rockford, IL) . Os níveis de pAkt (Ser473 ) e de Akt total foram avaliados utilizando estojos de pérolas da Biosource (Carlsbad, CA) e o sistema Luminex™ Bio-Plex (Bio-Rad, Hercules, CA).
Exemplo 911 Ensaios de actividade/penetração da barreira cérebro/sangue RCMDI-MDR1 e RCMDII-Bcrpl.
Utilizaram-se células de rim de caninos Madin-Darby (RCMD) que expressam heterologamente quer Pgp humano, quer Bcrpl de murino, para determinar se os compostos eram substratos destes transportadores e assim avaliar o potencial de permeação da barreira cérebro/sangue. As células MDR1-RCMDI foram licenciadas pelo NCI (National Câncer Institute, Bethesda, MD) enquanto as células Bcrpl-RCMDII foram obtidas no Netherlands Câncer Institutes (Amsterdão, Holanda). Semearam-se as células em placas de filtro de 24 poços da Millipore, 4 dias antes da sua utilização (membrana de poliéster, dimensão de poro de 1 μΜ; Millipore; Billerica, MA) a uma densidade de sementeira de l,3xl05 células/mL. Os compostos foram ensaiados a 5 μΜ nas direcções apical para basolateral (A-B) e basolateral para apical (B-A). Dissolveram-se os compostos em tampão de transporte que consistia em solução salina de Hank equilibrada (SSHE) com HEPES 10 mM (Invitrogen Corporation, Grand Island, NY). Utilizou-se amarelo de lucifer (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) como marcador para-celular. A permeabilidade aparente (Pap) nas direcções A-B e B-A foi calculada após 2 horas de incubação utilizando a seguinte equação:
Pap = (dQ/dt) x 1/Co x 1/A em que dQ/dt representa a taxa de aparecimento do composto no compartimento receptor, Co representa a concentração no compartimento dador e A representa a área da superfície da inserção. A proporção do efluxo, definida como Pap (β-α)/Ρ3Ρα-b) , foi utilizada para determinar a o grau do efluxo activo sofrido pelos compostos com o transportador ensaiado (P-glicoproteína ou bcrpl). Os compostos foram analisados por CL-EM/EM.
Exemplo 912 Determinação da concentração do composto no cérebro
Recolheram-se os cérebros 1 e 6 horas após a dose a partir de 3 animais diferentes em cada momento, lavaram-se com uma solução salina arrefecida com gelo, pesaram-se e armazenaram-se a -80 °C até à análise. Para a quantificação do composto, homogeneizaram-se os cérebros dos murganhos em 3 volumes de água. Extrairam-se os produtos homogeneizados por precipitação de proteínas com acetonitrilo contendo o padrão interno. Fez-se a análise por CL-EM/EM. Converteram-se as concentrações dos homogeneizados do cérebro nas concentrações do cérebro, para o cálculo das proporções entre o cérebro e o plasma.
Exemplo 913 Medição da regulação da via de PI3K no cérebro
Para a análise da regulação por via de PI3K, complementou-se tampão de extracção de células (Invitrogen, Camarillo, CA) contendo Tris 10 mM, a pH 7,4, NaCl 100 mM, EDTA 1 mM, EGTA 1 mM, NaF 1 mM, Na4P2O7 2 0 mM, Na3VO4 2 mM, Triton X—100 a 1 %, glicerol a 10 %, SDS a 0,1 % e desoxicolato a 0,5 % com fosfatase, inibidores de protease (Sigma, St. Louis, MO) e PMSF 1 mM e adicionou-se a biópsias de cérebro congeladas. Os cérebros recolhidos à 1 e às 6 h após a dose foram homogeneizados com um pequeno almofariz (Konte Glass Company, Vineland, NJ), foram tratados com ultra-sons brevemente em gelo e centrifugados a 20 000 g, durante 20 minutos, a 4 °C. Determinou-se a concentração de proteínas utilizando um ensaio de proteínas da BCA (Pierce, Rockford, IL) . Separaram-se as proteínas por electroforese e transferiram-se para membranas de nitrocelulose NuPage (Invitrogen, Camarillo, CA). Utilizou-se o sistema de detecção por infra-vermelhos Licor Odyssey™ (Licor, Lincoln, NE) para avaliar e quantificar a expressão de proteínas. Avaliaram-se os marcadores da via de PI3K por imuno-mancha utilizando anticorpos contra pAktser473 e Akt total (Invitrogen, Camarillo, CA e sinalização celular, Danvers, MA).
Exemplo 914 Ensaio da eficácia do tumor do cérebroin vivo.
Inocularam-se ratos pelados CD-I (Charles River Laboratories, Hollister, CA) , intracranianamente, sob cirurgia estereotáctica com células GS-2 (glioblastoma humano muliforme) tratadas internamente por engenharia para expressar luciferase em SSHE. Ratos com xeno-enxertos do cérebro confirmados por imagiologia de ressonância magnética (IRM), receberam, quatro semanas após a inoculação de células, receberam, por ingestão forçada, uma dose diária de fármaco ou de veículo, durante 28 dias, depois de terem sido separados por grupos com dimensões e tumores semelhantes. Repetiu-se a IRM (4.7T, Varian, Inc., Paio Alto, CA) no fim do período de dosagem de 28 dias, para avaliar a resposta ao tratamento.
Registaram-se os pesos corporais dos murganhos, pelo menos duas vezes por semana e observaram-se os murganhos diariamente. Mediram-se os pesos corporais do animal utilizando uma escala Pro™ AV812 (Ohaus Corporation; Pine Brook, NJ). Os gráficos foram gerados utilizando o GraphPad Prism™, versão 5.0c. A alteração percentual do peso foi calculada utilizando a fórmula: alteração percentual do peso individual = ((novo peso / peso inicial)-1) x 100. Os murganhos cujos volumes do tumor excederam 20 % do seu peso inicial, foram eutanizados de acordo com as orientações reguladoras. A alteração do volume do tumor foi modelada sob a forma de um modelo linear nas duas vezes em que se fez a imagiologia do animal. Ajustou-se o modelo dos efeitos mistos, utilizando o pacote de R 'nome', versão 3.1-97 em R na versão 2.12.0 (R Development Core Team 2010; R Foundation for Statistical Computing; Viena, Áustria). Um modelo de efeito misto tem em conta medições repetidas em murganhos individuais ao longo do tempo e trata apropriadamente as correlações intra-murganhos. Também se utilizou a análise linear do efeito misto para o modelo da alteração percentual do peso corporal ao longo do tempo.
Recolheram-se amostras de plasma e de cérebro 2 e 8 horas após a administração do tratamento final para as análises fármaco-cinética (FC), fármaco-dinâmica (FD) e/ou immuno-histoquimica (IHC).
Exemplo 915 Estudo do xeno-enxerto de tumor PK/PD in vivo
Inocularam-se, subcutaneamente, murganhos pelados NCR (Taconic Farms, IN) no tórax lateral direito com 5 milhões de células U-87 MG Merchant (uma variante interna derivada de células U-87 MG da ATCC, Manassas, VA) em SSHE/Matrigel™, BD Biosciences (1:1, v/v). Os murganhos portadores de xeno-enxertos de tumor > 600 mm3 tomaram uma dose de fármaco ou de veículo depois de terem sido separados em grupos com tumores de dimensão semelhante. Recolheram-se amostras de plasma, xeno-enxerto subcutâneo de tumor, músculo do esqueleto e cérebro às 1, 4, 12 e 24 horas após a administração do tratamento, para análise FC, FD e/ou IHC.
As palavras "compreende," "compreendendo," "inclui," e "incluindo", quando utilizadas na presente memória descritiva e nas reivindicações que se seguem, entendem-se como especificando a presença de características fixas, números inteiros, componentes ou etapas, mas não excluem a presença ou a adição de uma ou mais características, números inteiros, componentes, etapas ou os respectivos grupos .
Lisboa, 30 de Dezembro de 2014.

Claims (26)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto caracterizado pelo facto de se seleccionar nos compostos de fórmula I:
    e os seus estereoisómeros, isómeros geométricos, tautómeros e sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, em que: as linhas a tracejado indicam uma ligação dupla opcional e pelo menos uma linha a tracejado representa uma ligação dupla; X' representa N, CR1 ou -C(R1)2O-; X2 representa N; X3 representa C ou CR3; A representa um anel de carbociclilo ou de heterociclilo com 5, 6 ou 7 átomos no núcleo fundido com X2 e X3, eventualmente substituídos com um ou mais grupos R5; R1 e R3 seleccionam-se, independentemente entre H, F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C(CH3)3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -CONHCHs, -CON(CH3)2, -c (ch3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, -nhs(O)2ch3, -n (CH3) c (CH3) 2conh2, -n (CH3) ch2ch2s (0) 2ch3, =0, -OH, -och3, -s (0) 2n (CH3) 2, -sch3, -s(O)2ch3, ciclo- propilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; R4 selecciona-se entre arilo C6-C20, heterociclilo com 3-20 átomos no anel e heteroarilo com 5-20 átomos no anel, cada um dos quais está eventualmente substituído com um ou mais grupos R6, seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -ch2ch3, -ch2cn, -cn, -cf3, -ch2oh, -co2h, -conh2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, -nhcoch3, -oh, -och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -sh, -NHC (=0) nhch3, -NHC (=0) nhch2ch3, -NHC (=0) NHCH (CH3) 2, -NHS (0) 2CH3, -N (CH3) C (=0) OC (CH3) 3, -S(O)2CH3, benzilo, benziloxi, morfolinilo, morfolinometilo e 4-metilpiperazin-l-ilo; e R5 selecciona-se, independentemente, entre alquilo Ci-Ci2, alcenilo C2-C8, alcinilo C2-C8, - (alcileno C2- Ci2) - (carbociclilo C3-Ci2) , -(alcileno Ci-Ci2) - (heterociclilo com 3-20 átomos no anel), -(alcileno C2-Ci2)-C(=0)-(heterociclilo com 3-20 átomos no anel), -(alcileno Ci-Ci2) - (arilo C6-C20) e -(alcileno Ci-Ci2)-(heteroarilo com 5-20 átomos no anel); ou dois grupos R5 geminais formam um anel de carbociclilo ou de heterocicliclo com 3, 4, 5 ou 6 átomos no núcleo, em que alquilo, alcenilo, alcinilo, alcileno, carbociclilo, heterociclilo ou arilo e heteroarilo estão eventualmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -C(CH3)3, -CH2OH, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -ch2och3, -cn, -ch2f, -chf2, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -NHCOCH3, -NHS(O)2CH3, -N (CH3) C (CH3) 2conh2, -N(CH3)CH2CH2S (O)2CH3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2,
    -SCH3, —S(0)2CH3, ciclopropilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo; mor selecciona-se entre:
    eventualmente substituído com um ou mais grupos R7 seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -ch3, -ch2ch3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -ch2och3. -chf2. -cn, -cf3, -ch2oh, -ch2och3, -ch2ch2oh, -ch2c (CH3) 20H, -CH(CH3)OH, -CH (CH2CH3) oh, -ch2ch (OH) ch3, -C(CH3)2OH, -c (CH3) 2och3, -CH(CH3)F, -C(CH3)F2, -CH (CH2CH3)F, -c (ch2ch3) 2f, -co2h, -conh2, -CON(CH2CH3)2, -coch3, -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhch2ch3, -NHCH(CH3)2, -nhch2ch2oh, -nhch2ch2och3, -nhcoch3, -nhcoch2ch3, -nhcoch2oh, -NHS(O)2CH3, -N(CH3) s (O)2ch3, =0, -OH, -och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -sh, -NHC (=0) nhch3, -NHC (=0) nhch2ch3, -S(O)CH3, -S(O)CH2CH3, -S(O)2CH3, -S(O)2NH2, -S(O)2NHCH3, -s (O)2N(CH3)2 e -ch2s (O)2ch3.
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre as fórmulas Ia, Ib e In:
  3. 3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de a fórmula Ia se seleccionar entre as estruturas:
    em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
  4. 4. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de a fórmula Ia se seleccionar entre as estruturas:
    em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
  5. 5. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de a fórmula Ia representar:
    em que o anel de heterociclilo A está eventualmente substituído com um ou mais grupos R5.
  6. 6. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-5, caracterizado pelo facto de R4 representar fenilo substituído com um ou mais grupos seleccionados entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -CN, -CF3, -ch2oh, -co2h, -CONH2, -CONH(CH3), -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, nhcoch3, -oh, - och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC (=0) NHCH3, -NHC (=0) NHCH2CH3, -NHS (0) 2CH3, -N (CH3) C (=0) OC (CH3) 3 e -S(O)2CH3.
  7. 7. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-5, caracterizado pelo facto de R4 estar eventualmente substituído com um grupo heteroarilo bicíclico eventualmente substituído seleccionado entre 1H-indazol, lH-indol, indolin-2-ona, 1-(indolin-l-il)-etanona, lH-benzo[d][1,2,3]triazol, lH-pirazol[3,4-b]-piridina, lH-pirazol[3,4-d]pirimidina, lH-benzo[d]-imidazol, ΙΗ-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona, lH-pirazol-[3,4-c]piridina, lH-pirrol[2,3-c]piridina, 3H-imidazo-[4,5-c]piridina, 7H-pirrol[2,3-d]pirimidina, 7H-purina, lH-pirazol[4,3-d]pirimidina, 5H-pirrol[3,2-d]- pirimidina, 2-amino-lH-purin-6(9H)-ona, quinolina, quinazolina, quinoxalina, isoquinolina, isoquinolin-l(2H)-ona, 3,4-di-hidroisoquinolin-l(2H)-ona, 3,4-di-hidroquinolin-2(1H)-ona, quinazolin-2(1H)-ona, quinoxalin-2(1H)-ona, 1,8-naftiridina, pirido[3,4-d]-pirimidina e pirido[3,2-b]pirazina.
  8. 8. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 -5, caracterizado pelo facto de R4 eventualmente substituído se seleccionar entre:
    em que a linha ondulada indica o sítio de ligação.
  9. 9. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de R4 representar lH-indazol-4-ilo.
  10. 10. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1- 5, caracterizado pelo facto de R4 representar um grupo heteroarilo monocíclico eventualmente substituído, seleccionado entre 2-furanilo, 3-furanilo, 2- imidazolilo, 4-imidazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-pirazolilo, 4-pirazolilo, 2-pirazinilo, 3- piridazinilo, 4-piridazinilo, 5-piridazinilo, 2- pirimidinilo, 5-pirimidinilo, 6-pirimidinilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirrolilo, 3- pirrolilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 5-tetrazolilo, 1-
    tetrazolilo, 2-tetrazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 3-triazolilo e 1-triazolilo.
  11. 11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo facto de R4 representar 2-amino-pirimidin-5-ilo.
  12. 12. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-5, caracterizado pelo facto de R4, eventualmente substituído, se seleccionar entre:
    em que a linha ondulada indica o sítio de ligação.
  13. 13. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-12, caracterizado pelo facto de ou um mais grupos R5 se seleccionarem, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -ch3, -ch2ch3, -C(CH3)3, -ch2oh, -ch2ch2oh, -C(CH3)2OH, -ch2och3, - cn, -ch2f, -chf2, -cf3, -co2h, -coch3, -COC(CH3)3, -co2ch3, -conh2, -conhch3, -CON(CH3)2, -c (CH3) 2conh2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhcoch3, - NHS(O)2CH3, -N(CH3)C(CH3)2CONH2, -N(CH3)CH2CH2S (O)2ch3, =0, -OH, -och3, -s (O)2N(CH3)2, -sch3, -S(O)2CH3, Ciclo-propilo, ciclobutilo, oxetanilo, morfolino e 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo.
  14. 14. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-13, caracterizado pelo facto de dois grupos R5 geminais formarem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclo-pentilo, tetra-hidrofurilo, tetra-hidropiranilo, oxetanilo, azetidinilo, pirrolidinilo, piperidilo, piperazinilo, ciclo-hexilo, morfolino ou 1,1-dioxo-tiopiran-4-ilo.
  15. 15. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-14, caracterizado pelo facto de mor representar
    em que a linha ondulada indica o sitio de ligação, eventualmente substituído com um ou mais grupos R7 seleccionados, independentemente, entre F, Cl, Br, I, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -C(CH3)3, -ch2och3, -chf2, -cn, -cf3, -ch2oh, -ch2och3. -ch2ch2oh, -CH2C (CH3) 2oh, -CH(CH3)OH, -CH (CH2CH3) oh, -CH2CH (OH) ch3, -C(CH3)2OH, -C(CH3)2OCH3, -CH(CH3)F, -C(CH3)F2, -CH (CH2CH3)F, -C(CH2CH3)2F, -co2h, -conh2, -CON(CH2CH3)2, -coch3, -CON(CH3)2, -no2, -nh2, -nhch3, -N(CH3)2, -nhch2ch3, -NHCH(CH3)2, -nhch2ch2oh, -nhch2ch2och3, -nhcoch3, -nhcoch2ch3, -nhcoch2oh, -NHS(O)2CH3, -N(CH3)S(O)2CH3, =0, -OH, -och3, -och2ch3, -OCH(CH3)2, -SH, -NHC (=0) NHCH3, -NHC (=0) NHCH2CH3, -S (0) CH3, -S(O)CH2CH3, -S(O)2CH3, -S(O)2NH2, -S(O)2NHCH3, -S(O)2N(CH3)2 e -CH2S (0) 2CH3.
  16. 16. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se seleccionar no grupo que consiste em: 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)-4-metilpirimidin-2-amina, 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)-4-(trifluorometil)piridil- 2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidro-7h-[1,3]oxazino[2,3-e]-purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1-e]-purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1-e]-purin-2-il)piridin-2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino[3,4-e]-purin-2-il)-4-(trifluorometil)piridil-2-amina, 5-((4-morfolino-7,8-di-hidro-6h-pirrolo[2,1-e]purin- 2-il)pirimidin-2-amina, 6,6-dimeti1-4-morfoiino-2-(lH-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridin-2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidrospiro[[1,3]oxazino[2,3-e]-purino-7,1'-ciclopropano]-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino[3,4-e]-purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidrospiro[[1,4]oxazino[3, 4-e]-purino-6,3'-oxetano]-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((7,7-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-7h-[1,3]-oxazino[2,3-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridin-2-amina, 5-((6,6-(hexadeutério)dimeti1-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, (S)-5-(6-etil-6-metil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((6,6,9-trimetil-4-morfolino-6h-[1,4]oxazino[3, 4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, (R)-5-(6-etil-6-metil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((1-morfolin-4-il-5,6,8a,9-tetra-hidro-8h-7,10-dioxa-2,4,4b-triaza-fenantren-3-il)-pirimidin-2-il-amina, 5-(((S)-6-morfolin-4-il-2,3,3a,4-tetra-hidro-lH-5-oxa-7,9,9b-triaza-ciclopenta[a]naftalen-8-il)-pirimidin-2-ilamina, 4-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)anilina, 1-((4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)-3-metilureia, 6,6-dimetil-4-morfolino-2-(lH-pirazol-4-il)-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purine, 4- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridin-2-amina, 6.6- dimetil-2-(1-metil-lH-pirazol-4-il)-4-morfolino- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 3-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenol, 2-((lH-indazol-5-il)-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 6.6- dimetil-2-(2-(4-metilpiperazin-l-il)iridino-4-il)-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]-purina, N-(2-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)metano-sulfonamida, 6.6- dimetil-4-morfolino-2-(6-morfolinopiridin-3-il)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 2- ( (l-benzil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4- morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 2- ( (2-isopropoxipiridin-3-il)-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, N-(2-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)acetamida, 2-((3,5-dimetil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 5- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridino-2-ol, 6- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridino-3-amina, (R) -5-(4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, (S) -5-(4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 2- ( (1-etil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4-morfolino- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 4-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N,N-dimetilbenzamida, 4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil(metil)carbamato terc-butilo, 2-((3-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)acetonitrilo, 6.6- dimetil-4-morfolino-2-(3-morfolinofenil)-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 6.6- dimetil-4-morfolino-2-(3-(morfolinometil)fenil)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 2- ( (3- (benziloxi)fenil)-6,6-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 2- ( (1-isobutil-lH-pirazol-4-il)-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 6.6- dimetil-2-(6-(4-metilpiperazin-l-il)iridino-3-il)-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 2-((lH-indazol-4-il)-6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 4- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)benzonitrilo, 5- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)nicotinamida, 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N-metilpicolinamida, 2- ( (4- (benziloxi)fenil)-6,6-dimetil-4-morfolino-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 3- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N,N-dimetilanilina, 6.6- dimetil-2-(4-(4-metilpiperazin-l-il) fenil) -4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 6.6- dimetil-4-morfolino-2-(4-(piperidin-l-il)fenil)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, Ν-(5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridino-2-il)acetamida, 5- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)picolinamida, 6- ((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)piridino-3-ol (4-((6,6-dimeti1-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)(4-metilpiperazin-l-il)metanona, N-ciclopropil-3-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)benzamida, 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)-N,N-dimetilpirazin-2-amina, 1-((4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)-3-etilureia, 1- ((4-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenil)-3-isopropil-ureia, 2- ((2-aminopirimidin-5-il)-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina-6,6-di-il)dimetanol, 2-((2-aminopirimidin-5-il)-7-metil-4-morfolino-8,9-di-hidropirazino[2,1-e]purin-6(7H)-ona, 2- ((lH-indazol-4-il)-4-morfolino-6-(trifluorometil)- 8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purina, 3- ((4-morfolino-6-(trifluorometil)-8,9-di-hidro-6H- [1.4] oxazino[3,4-e]purin-2-il)fenol, 5-((4-((2S,6R)-2,6-dimetilmorfolino)-6,6-dimetil-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-(2,2-dimetilmorfolino)-6,6-dimetil-8, 9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, N-(5-(6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H-[1,4]— oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-il)acetamida, 5-( (4-( (lS,4S)-2-oxa-5-azabiciclo[2.2.1]heptan-5-il) - 6,6-dimetil-8,9-di-hidro-6H-[1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 2-((2-aminopirimidin-5-il)-6-metil-4-morfolino-6, 7-di-hidropirazino[ 2,1-e]purin-8(9H)-ona, 5-((6,7-dimetil-4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidro-pirazino[2,1-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina; e (5-((8,8-Dimetil-l-morfolin-4-il-5,6-di-hidro-8H-7-oxa-2,4,4b-triaza-fluoren-3-il)-pirimidin-2-ilamina.
  17. 17. Composição farmacêutica caracterizada pelo facto de conter um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16 e um veículo, agente de deslizamento, diluente ou excipiente, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
  18. 18. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo facto de conter ainda um agente terapêutico adicional seleccionado entre um agente quimioterapêutico, um agente anti-inflamatório, um agente imuno-regulador, um factor neurotrópico, um agente para o tratamento de doenças cardiovasculares, um agente para o tratamento de doenças do fígado, um agente anti-viral, um agente para o tratamento de distúrbios do sangue, um agente para o tratamento de diabetes e um agente para o tratamento de distúrbios de imunodeficiência.
  19. 19. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo facto de se utilizar como uma substância activa sob o ponto de vista terapêutico.
  20. 20. Utilização de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo facto de se destinar à preparação de um medicamento para o tratamento de cancro.
  21. 21. Utilização, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo facto de o cancro ser cancro da mama, do ovário, do colo do útero, da próstata, dos testículos, do tracto genito-urinário, do esófago, da laringe, um glioblastoma, um neuroblastoma, cancro do estômago, da pele, queratoacantoma, cancro do pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma do pulmão de células grandes, carcinoma do pulmão de células não pequenas (CPCNP), carcinoma de células pequenas, adenocarcinoma do pulmão, cancro ósseo, do cólon, adenoma, cancro do pâncreas, adenocarcinoma, cancro da tiróide, carcinoma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e das passagens biliares, carcinoma do rim, cancro renal, cancro pancreático, distúrbios mielóides, linfoma, carcinoma dos tricoleucitos, da cavidade bucal, da naso-faringe, da faringe, dos lábios, da língua, da boca, do intestino delgado, do cólon-recto, do intestino grosso, do recto, do cérebro e do sistema nervoso central, cancro de Hodgkin ou leucemia.
  22. 22. Utilização, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o cancro ser cancro do cérebro.
  23. 23. Utilização, de acordo com a reivindicação 21 ou 22, caracterizada pelo facto de compreender ainda um agente terapêutico adicional seleccionado entre um agente quimioterapêutico, um agente terapêutico anti-angiogénese, um agente anti-inflamatório, um agente imuno-regulador, um factor neurotrópico, um agente para o tratamento de doenças cardiovasculares, um agente para o tratamento de doenças do fígado, um agente anti-viral, um agente para o tratamento de distúrbios do sangue, um agente para o tratamento de diabetes e um agente para o tratamento de distúrbios de imunodeficiência.
  24. 24. Utilização, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pelo facto de o agente terapêutico adicional ser bevacizumabe.
  25. 25. Composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo facto de se utilizar no tratamento de cancro.
  26. 26. Composto de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo facto de se seleccionar no grupo que consiste em: 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((6,6-dimetil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]-oxazino[3,4-e]purin-2-il)-4-(trifluorometil)piridil-2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidro-7h-[1,3]oxazino[2,3-e]-purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-6,7,8,9-tetra-hidropirido[2,1-e]-purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-7,8-di-hidro-6h-pirrol[2,l-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina, 5-((4-morfolino-8,9-di-hidro-6h-[1,4]oxazino[3,4-e]-purin-2-il)pirimidin-2-amina, (S)-5-(6-etil-6-metil-4-morfolino-8,9-di-hidro-6H- [1,4]oxazino[3,4-e]purin-2-il)pirimidin-2-amina e 5-((6,6,9-trimetil-4-morfolino-6h-[1,4]oxazino[3, 4-e]zpurin-2-il)pirimidin-2-amina.
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