PT1337521E

PT1337521E - Sais de uma isotiazole-4-carboxamida e sua utilização como agentes de anti-hiperproliferação

Info

Publication number: PT1337521E
Application number: PT01982663T
Authority: PT
Inventors: Thomas G Gant; Glenn Robert Williams
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2000-11-28
Filing date: 2001-11-19
Publication date: 2006-12-29
Also published as: PA8533801A1; HRP20030408A2; GEP20053652B; DK1337521T3; PE20020591A1; DOP2001000288A; NO20032388L; IL155371A0; WO2002044158A1; MXPA03004714A; HUP0302553A3; CY1106240T1; AU1420402A; BR0115621A; NZ525788A; YU36403A; EA005859B1; ECSP034628A; SV2002000748A; KR20050116401A

Description

ΡΕ1337521 1 DESCRIÇÃO "SAIS DE UMA ISOTIAZOLE—4—CARBOXAMIDA E SUA UTILIZAÇÃO COMO AGENTES DE ANTI-HIPERPROLIFERAÇÃO"

Antecedentes do invento

Este invento refere-se a formas de sal de amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirro-lidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico possuindo a fórmula:

A Fórmula I na sua forma de base livre é descrita na patente pendente dos Estados Unidos série N° 09/316,837, apresentada em 21 de Maio de 1999, concedida como US 6 235 764, em 22 de Maio de 2001 . O pedido de patente anterior é cessionado em comum com o presente pedido. A base livre de fórmula I é útil no tratamento de doenças hiperproliferativas, tais como os cancros. 2 ΡΕ1337521 0 presente invento proporciona as formas de sal Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotia-zole-4-carboxílico. 0 presente invento diz ainda respeito a métodos para fabricar as formas de sal Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico . 0 invento diz também respeito a composições farmacêuticas contendo os sais Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato e mesilato do composto de fórmula I. Os sais do presente invento são úteis no tratamento de doenças hiperproliferativas, tais como os cancros, em mamíferos, especialmente humanos. 0 invento diz também respeito aos sais de fórmula I para tratar doenças hiperproliferativas.

Breve Descrição dos Desenhos A FIG 1. é um espectro de difracção em pó de raios X do cloridrato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) - 5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo ilustrado no Exemplo 2. Este composto não faz parte do presente invento. 3 ΡΕ1337521 A FIG 2. é um espectro de difracção em pó de raios X do bromidrato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxilico que foi preparado e isolado de acordo com o processo do invento tal como ilustrado no Exemplo 3. A FIG 3. é um espectro de difracção em pó de raios X do hemicitrato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) - 5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo do invento tal como ilustrado no Exemplo 4. A FIG 4. é um espectro de difracção em pó de raios X do acetato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6- dif luorobenziloxi) -5-[3- (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo tal como ilustrado no Exemplo 5. Este composto não faz parte do presente invento. Este composto não faz parte do presente invento. A FIG 5. é um espectro de difracção em pó de raios X do p-tosilato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) - 5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo do invento tal como ilustrado no Exemplo 6. A FIG 6. é um espectro de difracção em pó de 4 ΡΕ1337521 raios X do L-tartarato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) —5—[3— (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo do invento tal como ilustrado no Exemplo 7. A FIG 7. é um espectro de difracção em pó de raios X do hemissuccinato, identificado como hemissuccinato Forma A, da amida do ácido 3-(4-bromo-2,β-difluorobenziloxi ) -5-[3- ( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxilico que foi preparado e isolado de acordo com o processo do invento tal como ilustrado no Exemplo 8. A FIG 8. é um espectro de difracção em pó de raios X do hemissuccinato, identificado como hemissuccinato Forma B, da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoroben-ziloxi)-5-[3-( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isot iazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo tal como ilustrado no Exemplo 9. Este composto não faz parte do presente invento. A FIG 9. é um espectro de difracção em pó de raios X do mesilato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-dif luorobenziloxi) —5—[3— ( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico que foi preparado e isolado de acordo com o processo tal como ilustrado no Exemplo 10. Este composto não faz parte do presente invento.

Nos espectros de difracção em pó de raios X mostrado nas FIGS. 1-9 o eixo horizontal mostra o ângulo de 5 ΡΕ1337521 difracção de graus 2-teta e o eixo vertical mostra a intensidade da difracção em Cps.

Sumário do Invento 0 presente invento refere-se às formas de sal Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi)-5-[3-( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotia-zole-4-carboxílico possuindo a fórmula:

0 presente invento dirige-se também a processos para preparar os sais Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato da amida do ácido 3-(4-bromo-2, β-dif luorobenziloxi )-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico compreendendo a combinação da base livre com um ou mais dos sais atrás mencionados na presença de um solvente orgânico adequado.

Os sais cloridrato, bromidrato, hemicitrato, acetato, p-tosilato, L-tartarato, hemissuccinato e mesilato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)—5—[3 — 6 ΡΕ1337521 (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico foram caracterizados por difractometria em pó de raios X.

Os cristais dos sais cloridrato, bromidrato, hemicitrato, acetato, p-tosilato, L-tartarato, hemissuc-cinato (Formas A e B) e mesilato da amida do ácido 3 — (4— bromo-2,6-dif luorobenziloxi) —5—[3— ( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico proporcionam espectros de difracção de raios X em pó praticamente iguais aos espectros de difracção de raios X em pó mostrados nas FIGS. 1-9, respectivamente. Contudo, é sabido que um espectro de difracção de raios X em pó pode ser obtido com um erro de medição dependendo das condições de medição. Em particular, é geralmente sabido que as intensidades num espectro de difracção de raios X em pó podem flutuar dependendo das condições de medição. Por isso, deve entender-se que os sais do presente invento não estão limitados aos cristais que proporcionam espectros de difracção em pó de raios X completamente idênticos aos espectros de difracção em pó de raios X mostrados nas FIGS. 1-8, e que quaisquer cristais que proporcionem espectros de difracção em pó de raios X substancialmente idênticos aos espectros de difracção em pó de raios X atrás mencionados estarão no domínio do presente invento. Os peritos na matéria no domínio da difractometria em pó de raios X podem prontamente decidir sobre a identidade substancialmente igual dos espectros de difracção em pó de raios X.

Geralmente, um erro de medição do ângulo de difracção para uma difractometria em pó de raios X usual é 7 ΡΕ1337521 de cerca de 5% ou menos, e tal grau de erro de medição deve ser tomado em consideração nos ângulos de difracção. Para além disso, deverá entender-se que as intensidades podem flutuar dependendo das condições experimentais. A forma de sal cloridrato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulo de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 8,623 [90,7], 17, 298 [95,2], 23,397 [44,7], 23,944 [51,7], 24,119 [62,7], 24, 873 [55,7], 25, 948 [100], e 28,821 [39,6]. A forma de sal cloridrato proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 1.

Os valores 2-teta (2Θ) caracteristicos e a intensidade relativa (RI) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal cloridrato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 1. 2Θ RI(%) 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 6, 225 10,5 17,298 95, 2 23,397 44, 7 28,821 39,6 33,407 10,4 8, 623 90,7 17,868 17, 6 23,944 51, 7 29,438 19, 0 33,778 15,3 12,121 38,9 18,712 17,1 24,119 62, 7 30,543 15, 3 34,920 10,5 12,522 16,8 18,880 14, 2 24,873 55, 7 31,144 8,7 35,273 9,4 12,873 6,0 19,549 13, 8 25,948 100, 0 31,757 8,7 36,321 13,6 14,206 4,7 29,552 8,5 27,216 12,6 32,348 14, 6 38,409 15, 5 15,951 5,1 21,896 22,2 28,146 6, 0 32,640 11, 4 39,500 9,9 16,736 12,4

Tabela 1 ΡΕ1337521 A forma de sal bromidrato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 8,687 [100,0], 12,264 [35,9], 17,374 [42,3], 23,711 [24,0], 24,335 [20,7], e 25,769 [34,3]. A forma de sal bromidrato do presente invento proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 2.

Os valores 2-teta (2Θ) característicos e a intensidade relativa (RI) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal bromidrato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 2 abaixo. 2Θ RI(%) 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 3, 156 2,5 17,374 42,3 23,188 5,6 28,528 6,1 33,256 3,7 4, 615 2,4 17,767 5, 6 23,711 24, 0 28,916 9,4 33,897 7,9 6,331 9,3 18,185 3,2 24,335 20,7 29,418 7,7 34,628 2,8 8, 687 100, 0 18,913 16,6 25,435 9,1 30,266 4,6 34,999 3,3 12,264 35, 9 19,528 9,5 25,769 34,3 31,561 3,9 35,432 6,1 12,890 2,2 20,286 2,5 26,940 4,1 32,082 3,4 36,006 4,3 13,445 1,4 20,581 2,9 27,345 7,0 32,638 5,3 37,361 3,4 14,140 3,4 21,874 13,6 28,160 5,7 32,925 4,4 38,224 4,8 16,083 4,0

Tabela 2 A forma de sal hemiacetato do composto de fórmula 9 ΡΕ1337521 I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 4, 306 [79,9], 16,317 [100,0], 20, 988 [32,7], 21,476 [30,9], 22,643 [48,7], 23,384 [76,0], 27, 573 [47,9], e 27, 840 [32,3]. A forma de sal hemiacetato do presente invento proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 3.

Os valores 2-teta (2Θ) caracteristicos e a intensidade relativa (%) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal hemiacetato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 3 abaixo. 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 3,201 14,3 13,766 12, 4 18,693 15, 8 24,217 28, 8 29,630 17, 4 4, 306 79,9 14,086 7,0 19,344 23, 4 24,891 31,251 31,251 14, 6 6, 429 7,0 14,710 9,5 20,394 16, 4 25,320 31,848 31,848 14, 2 8, 620 6, 0 15,297 16,9 20,988 32, 7 25,948 32,235 32,235 11, 8 9, 589 5, 6 16,317 100, 0 21,476 30,9 26,370 34,145 34,147 11, 0 10,583 6, 8 17,309 14, 4 21,994 27, 3 27,593 35,878 35,878 16,2 11,440 20,9 17,572 16,5 22,643 48, 7 27,840 37,337 37,337 12,3 12,300 8,7 18,258 13, 7 23,384 76,9 29,609

Tabela 3 A forma de sal acetato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 6, 096 [21,7], 12,183 10 ΡΕ1337521 [21,4], 17,451 [33,3], 18,288 [100,0], 23,086 [19,9], e 24, 439 [20,7]. A forma de sal acetato proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 4.

Os valores 2-teta (2Θ) caracteristicos e a intensidade relativa (%) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal acetato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 4 abaixo. 2Θ RI(%) 2Θ Ri (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 6, 096 21,7 16,793 4,5 21,346 8,9 27,930 5, 8 32,271 4,1 8, 625 2, 8 17,121 12,8 22,441 57, 7 28,820 10,0 33,127 5,1 11,840 2,9 17,451 33,3 23,086 19,9 29,648 6,1 35,030 3,4 12,183 21,4 17,920 8,7 24,038 7,5 30,634 3,3 36,445 3,2 14,836 4,2 18,288 100,0 24,439 20, 7 31,112 3,2 37,830 3, 0 15,264 9,2 20,088 3,6 24,760 11,3 31,951 2,9 39,478 2,5 15,824 5, 0 20,458 11,3 25,861 5, 0

Tabela 4 A forma de sal p-tosilato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 20, 446 [74,0], 20, 760 [74,0], 22,092 [81,7], 22,371 [70,8], 23,190 [65,2], e 26,239 [61,5]. A forma de sal p-tosilato do presente invento proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 5. 11 ΡΕ1337521

Os valores 2-teta (2Θ) característicos e a intensidade relativa (%) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal p-tosilato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 5 abaixo. 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 6, 817 50,3 13,373 53,9 18,174 21,3 23,190 65, 2 28,167 34, 5 7, 515 28,0 14,337 18,3 18,976 40,4 24,110 30,5 29,672 19,6 7, 822 22,3 15,001 22,2 19,739 36,7 25,471 40,2 31,038 19,3 11,157 15, 0 15,601 21, 4 20,446 100,0 25,932 50, 4 31,586 21,2 12,205 24, 4 16,297 14, 0 20,760 74, 0 26,239 61,5 35,357 19,6 12,800 30,0 16,943 32,0 22,092 81,7 27,355 48, 8 36,800 16, 4 13,047 43,6 17,362 23,5 22,371 70,8 27,833 39, 0

Tabela 5 A forma de sal L-tartarato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 4,061 [82,9], 20, 821 [85,6], 21,634 [100,0], 22,179 [94,0], e 25, 858 [95,1]. A forma de sal L-tartarato do presente invento proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 6.

Os valores 2-teta (2Θ) caracteristicos e a intensidade relativa (%) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal L-tartarato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 6 abaixo. 12 ΡΕ1337521 2Θ RI(%) 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 4, 061 82,9 14,631 27, 2 20,010 53,0 24,788 53, 8 32,465 36,1 6, 678 11, 8 15,428 22,7 20,334 58,7 25,081 60,9 33,442 33,7 8, 057 29, 4 16,143 31,2 20,821 85, 6 25,858 95, 1 34,090 34, 6 9,383 8,7 16,853 65,3 21,634 100,0 26,803 59,6 34,642 26,8 10,647 8,3 17,338 56,2 22,179 94, 0 28,386 34, 3 35,635 33,7 11,711 60,2 18,400 97, 0 22,730 73,8 29,067 34, 1 36,073 28,5 12,075 27, 4 18,639 98,2 23,477 77, 1 29,844 30,5 36,771 24, 5 12,868 33, 8 18,994 52,4 24,257 67, 8 31,309 39, 4 38,080 22,6 13,320 22, 7 19,722 42,9

Tabela 6

Verificou-se que os cristais de hemissuccinato anidros da amida do ácido 3-(4-bromo-2,β-difluorobenzilo-xi) — 5 — [3 — ( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxilico tinham propriedades higroscópicas com condições de humidade de 90%. As formas cristalinas dos cristais de hemissuccinato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi) — 5 — [3 — (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico foram identificadas. Verificou-se que a forma cristalina A do hemissuccinato do composto de fórmula I possuía uma higroscopicidade de 0,6% p/p a 30°C e 90% HR. Verificou-se que a forma cristalina B do hemissuccinato do composto de fórmula I possuía uma higroscopicidade de 1,5% p/p a 30 °C e 90% HR. A forma B do hemissuccinato é convertida na forma A do hemissuccinato por refluxo em etanol em menos do que 24 horas. A Forma A do sal hemissuccinato do presente invento e a Forma B proporcionam espectros de difracção em pó de raios X substancialmente os mesmos que 13 ΡΕ1337521 os espectros de difracção de raios X nas FIGS. 7 e 8, respectivamente. A forma A do sal hemissuccinato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 4,63 4 [31,0], 16, 735 [67,2], 22, 179 [60,8], e 25, 002 [70,3]. A forma B do sal hemissuccinatodo composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 6,714 [31,0], 15,272 [100,0], 19,197 [59,3], 19, 457 [50,0], 24, 487 [99,0] e 24, 802 [79,1].

Os valores 2-teta (2Θ) característicos e a intensidade relativa (%) em percentagem para o espectro de difracção das formas A e B do sal hemissuccinato do composto de fórmula I são mostrados na Tabela 7 e 8 abaixo, respectivamente. 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 2Θ Ri (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 4, 634 100,0 13,683 13, 8 17,760 20,6 22,866 38, 7 27,609 23,7 6, 149 15, 5 14,440 13,5 18,679 18,4 23,255 39,5 30,106 14,3 9, 843 6,2 14,896 21,9 19,421 30,2 24,079 44, 6 30,797 13,7 11,392 11,3 15,996 14, 4 20,586 29,2 25,002 70,3 37,769 11,4 11,937 19,2 16,735 67, 2 22,179 60,8 26,549 26, 8

Tabela 7 14 ΡΕ1337521 2Θ RI(%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 6, 714 31, 0 15,272 100,0 19,197 59,3 24,487 99,0 29,732 14,1 8, 666 7,3 15,813 19,8 19,457 50,0 24,802 79, 1 30,796 17,5 11,092 8,6 16,551 17,5 20,597 17,2 25,640 15,9 33,484 9,4 11,696 21,9 16,875 26,4 21,160 28,8 26,641 20,1 34,594 11, 4 12,008 15,9 17,365 12,6 21,648 21,7 27,090 15, 1 37,212 15,5 12,630 7,3 17,986 8,6 22,988 15, 0 27,843 21,5 37,905 8,9 13,466 17,2 18,710 26,4 23,568 18,6 28,552 19, 7 39,023 8,9 13,774 13,9

Tabela 8 A forma de sal mesilato do composto de fórmula I é caracterizada por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção 2-teta de cerca de, [% intensidade relativa]: 4,417 [99,3], 17,288 [45,5], 20, 828 [39,6], 21,677 [43,5], 22, 148 [68,3], 25, 427 [100,0], e 27, 006 [37,5]. A forma de sal mesilato proporciona um espectro de difracção de raios X em pó substancialmente o mesmo que o espectro difracção de raios X mostrado na FIG. 9.

Os valores 2-teta (2Θ) caracteristicos e a intensidade relativa (%) em percentagem para o espectro de difracção da forma de sal mesilato do composto de fórmula I é mostrado na Tabela 9 abaixo. 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 2Θ RI (%) 4, 417 99,3 15,619 9,1 21,667 43,5 27,006 37, 5 32,337 9,0 8, 806 7,2 17,288 445, 5 22,148 68,3 28,757 8, 8 32,940 7,8 11,664 7,0 17,654 17, 2 23,231 14, 1 29,564 6,7 33,796 11,8 12,267 18, 7 17,993 15, 9 23,966 28, 8 30,560 6,2 34,550 8,7 12,610 8,3 18,728 9,8 24,602 30,2 31,173 9,7 35,308 7,6 13,224 5,4 20,358 15, 0 25,427 100, 0 31,722 13,3 36,883 9,1 14,915 27, 1 20,828 39,6 26,226 16, 1

Tabela 9 15 ΡΕ1337521 0 padrão de difracção em pó de raios X é apenas uma das muitas maneiras de caracterizar o arranjo dos átomos que compreendem os sais da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)— 5 — [3 —(4-pirrolidin-l-ilbutil)-urei-do]-isotiazole-4-carboxílico Outros métodos são bem conhecidos na técnica, tais como a difracção de cristais por raios X que pode ser usada para identificar das formas de sal atrás mencionadas.

Verificou-se agora inesperadamente que as formas de sal Forma A bromidrato e hemissuccinato do composto de fórmula I possuem uma elevada cristalinidade, ou seja, estão praticamente livres de material amorfo. Tais sais possuem a vantagem de proporcionarem resultados de dosagem mais reprodutíveis. As formas de sal bromidrato e hemissuccinato do composto de fórmula I são praticamente estáveis higroscopicamente, o que alivia problemas potenciais associados a mudanças de peso do ingrediente activo durante o fabrico das cápsulas ou dos comprimidos. A forma bromidrato do composto de fórmula I possui a vantagem adicional de possuir uma baixa tendência em concentrações aquosas concentradas de formar misturas viscosas em repouso. Para além disso, a forma de sal bromidrato do composto de fórmula I apresenta um ligeiro efeito sedativo com um doseamento baixo a moderado.

Os sais p-tosilato, L-tartarato e hemicitrato possuem maior solubilidade cinética do que a base livre ou 16 ΡΕ1337521 a forma de sal cloridrato do composto de fórmula I. Adicionalmente, as formas de sal p-tosilato, L-tartarato e hemicitrato do composto de fórmula I são menos higroscópicas do que a forma de sal mesilato do composto de fórmula I. De acordo com isto, as formas de sal p-tosilato, L-tartarato e hemicitrato do composto de fórmula I são mais estáveis ao ar e podem ser usadas sem deliquescência. 0 invento refere-se também a uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença hiperprolife-rativa num mamífero, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto de fórmula I, e um portador farmaceuticamente aceitável. Numa forma de concretização, a referida composição farmacêutica é para o tratamento do cancro tal como o cancro do cérebro, do pulmão, de células escamosas, da bexiga, gástrico, pancre-ático, da mama, da cabeça, do pescoço, renal, da próstata, colo-rectal, esofágico, genicológico (tal como dos ovários) e da tiróide. Noutra forma de concretização, a referida composição farmacêutica é para o tratamento de doenças hiperproliferativas não cancerosas tais como a hiperplasia benigna da pele (por exemplo, psoríase) ou da próstata (por exemplo, hipertrofia prostática benigna (BPH)). 0 invento refere-se também a uma composição farmacêutica para o tratamento da pancreatite ou doença do rim (incluindo a glomerulonefrite proliferativa e doença renal induzida pela diabetes) num mamífero que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um 17 ΡΕ1337521 composto de fórmula I e um portador farmaceuticamente aceitável. 0 invento refere-se também a uma composição farmacêutica para a prevenção da implantação de blastócitos num mamifero que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto de fórmula I e um portador farmaceuticamente aceitável. 0 invento refere-se também a uma composição farmacêutica para tratar uma doença relacionada com com a vasculogénese ou angiogénese num mamifero que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto de fórmula I e um portador farmaceuticamente aceitável. Numa forma de concretização, a referida composição farmacêutica é para tratar uma doença seleccionada do grupo constituído por angiogénese de tumores, doença inflamatória crónica tal como a artrite reumatóide, a ateroesclerose, doenças da pele como a psoríase, excema e escleroderma, diabetes, retinopatia diabética, retinopatia de prematuridade, degeneração macular dos idosos, hemangioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi e cancro dos ovários, da mama, do pulmão, pancreático, da próstata, do cólon e epider-móide. 0 pedido de patente revela também a um método para tratar uma doença hiperproliferativa num mamifero que compreende a administração ao referido mamifero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal de um composto 18 ΡΕ1337521 de fórmula I ou de um hidrato deste. Numa forma de concretização, o referido método refere-se ao tratamento do cancro tal como cancro do cérebro, de células escamosas, da bexiga, gástrico, pancreático, da mama, da cabeça, do pescoço, osofágico, da próstata, colo-rectal, do pulmão, renal, genicológico (tal como dos ovários) ou da tiróide. Noutra forma de concretização o referido método refere-se ao tratamento de doenças hiperproliferativas não cancerosas tais como a hiperplasia benigna da pele (por exemplo, psoriase) ou da próstata (por exemplo, hipertrofia prostá-tica benigna (BPH)). 0 pedido de patente revela também a utilização de um composto sal de fórmula I para o tratamento de uma doença hiperproliferativa num mamífero em combinação com um agente anti-tumoral seleccionado do grupo constituído por inibidores mitóticos, agentes de alguilação, antimetabo-litos, antibióticos de intercalação, inibidores de factores de crescimento, inibidores dos ciclos das células, enzimas, inibidores da topoisomerase, modificadores da resposta biológica, anti-hormonas e antiandrogénios. 0 pedido de patente revela também a utilização de um composto sal de fórmula I para tratar a pancreatite ou doença do rim num mamífero. 0 pedido de patente revela também a utilização de um composto sal de fórmula I para prevenir a implantação de blastócitos num mamífero. 19 ΡΕ1337521 0 pedido de patente revela também a utilização de um composto sal de fórmula I para tratar vasculogénese ou angiogénese num mamifero. Numa forma de concretização, a referida utilização é para tratar uma doença seleccionada do grupo consistindo de angiogénese de tumores, doença inflamatória crónica tal como a artrite reumatóide, atero-esclerose, doenças da pele como a psoríase, excema e escleroderma, diabetes, retinopatia diabética, retinopatia de prematuridade, degeneração macular dos idosos, heman-gioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi e cancro dos ovários, da mama, do pulmão, pancreático, da próstata, do cólon e epidermóide.

Para além disto os compostos do presente invento podem ser utilizados como contraceptivos em mamíferos. Numa concretização preferida os compostos do presente invento podem ser utilizados para evitar a gravidez num mamífero fêmea. 0 pedido de patente revela também a utilização de um composto sal de fórmula I para tratar psoríase, BPH, cancro do pulmão, cancro ósseo, cancro pancreático, cancro da pele, cancro da cabeça e do pescoço, melanoma cutâneo ou intraocular, cancro uterino, cancro dos ovários, cancro rectal ou cancro da região anal, cancro do estômago, cancro do cólon, cancro da mama, tumores ginecológicos (por exemplo, sarcomas uterinos, carcinoma das trompas de falópio, carcinoma do endométrio, carcinoma cervical, carcinoma da 20 ΡΕ1337521 vagina ou carcinoma da vulva), doença de Hodgkin, cancro do esófago, cancro do intestino delgado, cancro do sistema endócrino (por exemplo, cancro da tiróide, paratiróide glândulas adrenais), sarcomas dos tecidos moles, cancro da uretra, cancro do pénis, cancro da próstata, leucemia crónica ou aguda, tumores sólidos da infância, linfomas linfociticos, cancro da bexiga, cancro do rim ou uretra (por exemplo, carcinoma das células renais, carcinoma da pélvis renal) ou neoplasmas do sistema nervoso central (por exemplo, linfoma CNS primário, tumores da espinal medula, gliomas de células indiferenciadas do cérebro ou adenomas pituitários).

Este invento refere-se também a uma composição farmacêutica para o tratamento de uma infecção num mamífero, incluindo um humano, que é facilitado pela farnesil proteina transferase, tal como a malária ou o virus delta da hepatite, compreendendo uma quantidade de um sal do composto de fórmula I, tal como definido atrás, uma pró-droga ou um solvato deste, que seja eficaz no tratamento do crescimento anormal de células, e um portador farmaceu-ticamente aceitável. "Crescimento anormal de células", tal como aqui usado, a menos que indicado em contrário, refere-se a um crescimento de células que é independente dos mecanismos reguladores normais (por exemplo, perda de inibição de contacto). Isto inclui o crescimento anormal de: (1) células de tumor (tumores) expressando um oncogénio Ras 21 ΡΕ1337521 activado; (2) células de tumores em que a proteína Ras é activada como resultado de mutação oncogénica noutro gene; (3) células benignas e malignas de outras doenças proli-ferativas em que ocorre uma activação de Ras aberrante; e (4) quaisquer tumores que proliferem por virtude da farnesil proteína transferase. 0 termo "tratar", tal como aqui usado, a menos que indicado em contrário, significa, reverter, aleviar, inibir o progresso de, ou evitar a doença ou condição a que esse termo se aplica, ou um ou mais sintomas de tal doença ou condição. 0 termo "tratamento", tal como aqui usado, a menos que indicado em contrário, refere-se ao acto de tratar tal como "tratar" foi aqui definido imediatamente atrás.

Descrição Detalhada do Invento 0 presente invento refere-se às formas de sal Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi) —5—[3— (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico. 0 invento refere-se ainda a um método para fabricar os sais Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinatoo da amida do ácido 3- ( 4-bromo-2,6-dif luorobenziloxi) —5—[3— (4-pirrolidin-l-ilbutil ) -ureido]-isotiazole-4-carboxí lico. As formas de sal 22 ΡΕ1337521 do presente invento são úteis no tratamento de doenças hiperproliferativas, tais como cancros, em mamíferos, especialmente humanos e para composições farmacêuticas contendo tais compostos.

As formas de sal do composto de fórmula I têm sido caracterizadas usando difractometria em pó de raios X. Os sais cloridrato, bromidrato, hemicitrato, acetato, p-tosilato, L-tartarato, hemissuccinato (Forma A) , hemis-succinato (Forma B) e mesilato do composto de fórmula I proporcionam padrões de difracção em pó de raios X substancialmente os mesmos que os mostrados nas FIGS. 1-9. 0 sal cloridrato da amida do ácido 3-(4-bromo- 2.6- difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-urei- do]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é caracte-rizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 8,623, 12, 121, 17,298, 23,397, 23,944, 24,119, 24,873, 25,948 e 28,821. 0 sal bromidrato da amida do ácido 3-(4-bromo- 2.6- difluorobenziloxi)— 5 — [3 —(4-pirrolidin-l-ilbutil)-urei- do]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é carac-terizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 8,687, 12,264, 17,374, 23,711, 24,335, e 25,769. 23 ΡΕ1337521 0 sal hemicitrato da amida do ácido 3-(4-bromo- 2.6- difluorobenziloxi)— 5 — [3 —(4-pirrolidin-l-ilbutil)-urei- do]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é carac-terizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 4, 306, 16,317, 20,988, 21,476, 22,643, 23,384, 24,891, 27,573 e 27,840. O sal acetato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-dif luorobenziloxi) —5 —[3— ( 4-pirrolidin-l-ilbut il) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é caracteri-zado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 6,096, 12,183, 17,451, 18,288, 22,441, 23,086 e 24,439. O sal p-tosilato da amida do ácido 3-(4-bromo- 2.6- difluorobenziloxi) - 5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-urei-do]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é carac-terizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 20,446, 20,760, 22,092, 22,371, 23,190 e 26,239. O sal L-tartarato da amida do ácido 3-(4-bromo- 2.6- difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-urei-do]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é carac-terizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro - 24 - ΡΕ1337521 de difracção em pó de raios X de cerca de 4, 061, 20,821, 21.634, 22,179 e 25,858. O sal hemissuccinato (Forma A) da amida do ácido 3- ( 4-bromo-2,6-dif luorobenziloxi) - 5-[3- ( 4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é caracterizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de

4.634, 16,735, 22,179 e 25,002. O hemissuccinato Forma A absorve 0,6% de água a 90% de humidade relativa. O sal hemissuccinato (Forma ) da amida do ácido 3- ( 4-bromo-2,6-dif luorobenziloxi) —5 —[3— ( 4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é caracterizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 6,714, 15,272, 19,197, 19,457, 24,487 e 24,802. O hemis succinato Forma B absorve 1,5% de água a 90% de humidade relativa. O sal mesilato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) - 5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico do presente invento é caracterizado por o cristal proporcionar picos de difracção de alta intensidade com ângulos de difracção (2Θ) num espectro de difracção em pó de raios X de cerca de 4,417, 17,288, 20,828, 21,677, 22,148, 25,427 e 27,006. 25 ΡΕ1337521 A actividade in vitro dos compostos de fórmula I na inibição do receptor KDR/VEGF pode ser determinada através do procedimento seguinte. A capacidade dos compostos do presente invento de inibirem a actividade da tirosina cinase pode ser medida usando um enzima recombinante num teste que mede a capacidade dos compostos de inibirem a fosforilação do substrato exógeno, poliGlutyr (PGT, Sigma™, 4:1). 0 domínio de cinase do receptor KDR/VEGF humano (aminoácidos 805-1350) é expresso em células de insecto Sf9 sob a forma de gluta-tiona S-transferase proteína (GST)-fusão usando o sistema de expressão de baculovirus. A proteína é purificada a partir de lisados destas células usando colunas de afinidade com glutationa agarose. O teste de enzima é realizado em placas com 96 buracos que são revestidas com o substrato PGT (0,625 μρ PGT por buraco). Os compostos de teste são diluídos em sulfóxido de dimetilo (DMSO) e então adicionados às placas de PGT de modo a que a concentração final do DMSO no teste é de 1,6% (v/v). O enzima recombinante é diluído num tampão de fosforilação (50 mM Hepes, pH 7,3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) . A reacção é iniciada pela adição de ATP até uma concentração final de 10 μΜ. Após uma incubação de 30 minutos à temperatura ambiente com agitação, a mistura reaccional é aspirada e as placas são lavadas com tampão de lavagem (Tween-20 0,1% contendo PBS) . A quantidade de PGT fosforilada é quanti- 26 ΡΕ1337521 ficada por incubação com um conjugado HRP (HRP é uma peroxidase de armorácia) de anticorpo PY-54 (Transduction

Labs), desenvolvido com peroxidase TMB (TMB é a 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina), e a mistura reaccional é quantificada num leitor BioRad™ Microplate a 450 nm. A inibição da actividade enzimática da cinase com o composto do teste é detectado como uma absorvância reduzida, e a concentração do composto que é requerida para inibir o sinal em 50% é registada como o valor IC50 para o composto em teste.

Para mediar a capacidade dos compostos de inibirem a actividade da tirosina cinase KDR para a proteina completa que existe no contexto celular, podem ser usadas as células endoteliais aórticas do porco (PAE) transfec-tadas com KDR humano (Waltenberger et al., J. Biol. Chem. 269: 26988, 1994). As células são colocadas em placas e deixadas a ligarem-se em placas de 96 buracos no mesmo meio (F12 Ham) com 10% v/v de FBS (soro bovino fetal) . As células são então lavadas, re-alimentadas com meio com soro esgotado (0,1% v/v FBS) (sem BSA) . Os compostos de teste, dissolvidos em DMSO, são diluídos no meio (concentração final em DMSO 0,5% (v/v)) . No final de uma incubação de 2 horas, é adicionado ao meio VEGF165 (50 ng/ml final) para uma incubação de 8 minutos. As células são lavadas e lisadas em 50 μΐ de tampão lisis contendo 20 mM de Tris-HCL (pH 8), 150 mM NaCl, 1% v/v NP 40, 2mM NaV04, 500 μΜ EDTA, 1 mM PMSF, e 1 comprimido/25 ml EDTA free complete® Protease Inhibitor Table, Roche. O lisado das células é 27 ΡΕ1337521 então diluído até um volume final de 150 μΐ em PBS/1 mM NaV04. A extensão da fosforilação do KDR é medida usando um teste ELISA. As placas Reactibind Goat-anti Rabbit (Pierce) são bloqueadas com tampão Superblock (Pierce) antes da adição do anticorpo anti-flk-1 C-so (0,5 μρ por buraco, Santa Cruz). Qualquer anticorpo não ligado é lavado das placas antes da adição de 100 μΐ de lisado de células. Após 2 horas de incubação dos lisados com o anticorpo flk-1, a fosfotirosina associada a KDR é quantificada pelo desenvolvimento com o anticorpo PY-54 HRP-conjugado e TMB, tal como descrito atrás. A capacidade dos compostos de inibirem a reacção de autofosforilação estimulada por VEGF em 50%, em relação aos controlos estimulados por VEGF é registado como o valor IC50 para o composto de teste. A capacidade dos compostos de inibirem a mito-génese em células endoteliais humanas é medida pela sua capacidade de inibirem a incorporação de 3H-timidina em células HUVE (células endoteliais de veia umbilical humana, Clonetics™) . Este ensaio foi bem descrito na literatura (Waltenberger J et al. J. Biol. Chem. 269: 26988, 1994; Cao Y et al. J. Biol. Chem. 271:3154, 1996). Resumidamente, 104 células são plaqueadas em placas com 24 buracos revestidas com colagénio e deixou-se a ligar. As células são realimentadas num meio livre de soro, e 24 horas depois são tratadas com várias concentrações do composto (preparado em DMSO, concentração final de DMSO no ensaio é de 0,2% v/v), e 2-30 ng/ml VEGFi65. Durante as últimas 3 horas das 24 28 ΡΕ1337521 horas de tratamento do composto, as células são pulsadas com 3H-timidina (NEN, 1μ(2ΐ por buraco) : os meios são então removidos, e as células são lavadas extensivamente com uma solução de sal de Hank equilibrada arrefecida com gelo, e então 2 vezes com ácido tricloroacético arrefecido com gelo (10% v/v) . As células são lisadas por adição de 0,2 ml de NaOH 0,1 N, e os lisados são transferidos para frascos de cintilação. A extensão da incorporação de 3H-timidina é medida através de uma contagem de cintilação. A capacidade dos compostos de inibirem a incorporação em 50%, em relação ao controlo (tratamento de VEGF apenas com o veiculo DMSO) é registada como o valor IC50 para o composto de teste. A actividade dos compostos de fórmula 1 in vivo, pode ser determinada pela quantidade de inibição do crescimento de tumores de um composto de teste em relação a um controlo. Os efeitos inibidores de crescimento de tumores de vários compostos são medidos de acordo com os métodos de Corbett T. H., et al. "Tumor Induction Relationships in Development of Transplantable Cancers of the Colon in Mice for Chemotherapy Assays, with a Note on Carcinogen Structure", Câncer Res. 35, 2434-2439 (1975) e Corbett T. H., et al. "A Mouse Colon-tumor Model for Experimental Therapy", Câncer Chemother. Rep. (part 2), _5, 169-186 (1975), com ligeiras modificações. Os tumores são induzidos no flanco esquerdo por injecção sub-cutânea de 1 x 106 log fase de células de tumor cultivadas (células de carcinoma humanas da mama MDA-MB-468 ou humanas da cabeça e 29 ΡΕ1337521 do pescoço HN5) suspensas em 0,10 ml de RPMI 1640. Após um tempo suficiente se ter passado para os tumores se tornarem palpáveis (2-3 mm de diâmetro) os animais de teste (ratos atimicos) são tratados com o composto activo (formulado por dissolução em DMSO tipicamente com uma concentração de 50 a 100 mg/ml seguida de uma diluição 1:9 em água salgada, ou alternativamente, diluição 1:9 em 0,1% Pluronic™ P 105 em água salgada a 0,9%) através das vias de administração intraperitoneal (ip) ou oral (po) duas vezes por dia (ou seja, todas as 12 horas) durante 5 dias consecutivos. Para se determinar um efeito anti-tumoral, o tumor é medido em milímetros com paquímetros de Vernier ao longo de dois diâmetros e o tamanho do tumor (mg) é calculado usando a fórmula: Peso do tumor = (comprimento x [largura]2)/2, de acordo com os métodos de Geran, R.I. et al. "Protocols for Screening Chemical Agents and Natural Products Against Animal Tumors and Other Biological Systems", Terceira Edição, Câncer Chemother. Rep., _3, 1-104 (1972). Os resultados são expressos como percentagem de inibição, de acordo com a fórmula: Inibição (%) = (TuWcontrolo - TuWteste) /

TuWcontroio x 100%. O local do flanco da implantação do tumor proporciona efeitos reprodutíveis dose/resposta para uma variedade de agentes quimioterapêuticos, e o método de medição (diâmetro do tumor) é um método em que se pode confiar para avaliar as taxas de crescimento de tumores. A administração dos compostos do presente invento (daqui para a frente "composto(s) activo(s)") pode ser 30 ΡΕ1337521 efectuada através de qualquer método que permita a entreqa dos compostos no local de acção. Estes métodos incluem vias orais, vias intraduodenais, injecção parentérica (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão), tópica e administração rectal. A quantidade do composto activo administrado será dependente do sujeito a ser tratado, da qravidade da doença ou condição, da velocidade de administração e da avaliação do médico que prescreve. Contudo, uma dosaqem eficaz está na gama de cerca de 0,001 até cerca de 100 mg por kg de peso corporal por dia, preferencialmente cerca de 1 até cerca de 35 mg/kg/dia, em doses únicas ou divididas. Para um humano de 70 kg, esta quantidade será de cerca de 0,05 até cerca de 7 g/dia. Preferencialmente cerca de 0,2 até cerca de 2,5 g/dia. Nalguns casos, os níveis de dosagem abaixo do limite inferior da gama atrás mencionada podem ser mais do que adequados, enquanto que noutros casos doses ainda maiores podem ser empregues sem causar quaisquer efeitos laterais indesejados, desde que as tais maiores doses sejam primeiro divididas em várias pequenas doses para administração ao longo do dia. O composto activo pode ser aplicado como terapia única ou pode envolver uma ou mais substâncias anti-tumorais, por exemplo os seleccionados de, por exemplo, inibidores mitóticos, por exemplo vinblastina; agentes de alquilação, por exemplo cis-platin, carboplatin e ciclo- 31 ΡΕ1337521 fosfamida; antimetabolitos, por exemplo 5-fluorouracilo, citosina arabinoside e hidroxiureia, ou por exemplo, um dos preferidos antimetabolitos descritos no Pedido de Patente Europeia N° 239362 tal como o ácido N- (5-[N- (3,4-di-hidro-2-metil-4-oxoquinazolin-6-ilmetil) -N-metilamino]-2-tenoil) -L-glutâmico; inibidores de factores de crescimento; inibi-dores de ciclos de células; antibióticos de intercalação, por exemplo, adriamicina e bleomicina; enzimas, por exemplo interferon; e anti-hormonas, por exemplo antiestrogénios tais como a Nolvadex™ (tamoxifen) ou, por exemplo antian-drogénios tais como o Casodex™ (4'-ciano-3-(4-fluoro-fenilsulfonil)-2-hidroxi-2-metil-3'-(trifluorometil)pro-pionanilida). Tal tratamento conjunto pode ser conseguido através de uma dosagem simultânea, sequencial ou em separado dos componentes individuais do tratamento. A composição farmacêutica pode, por exemplo, estar numa forma adequada para administração oral como um comprimido, cápsula, pílula, pó, formulações de libertação sustentada, solução, suspensão, para injecção parentérica como solução estéril, suspensão ou emulsão, para administração tópica como um unguento ou creme ou para administração rectal como um supositório. A composição farmacêutica pode estar sob a forma de formas de dosagem unitárias adequadas para uma única administração de doses precisas. A composição farmacêutica incluirá um portador ou excipiente farmacêutico convencional e um composto de acordo com o invento como ingrediente activo. Adicionalmente, esta pode 32 ΡΕ1337521 incluir outros agentes portadores, auxiliares etc. medicinais ou farmacêuticos.

Exemplos de formas de administração parentérica incluem soluções ou suspensões de compostos activos em soluções aquosas estéreis, por exemplo, propilenoglicol aquoso ou soluções de dextrose. Tais formas de dosagem podem ser adequadamente tamponadas, se desejado.

Portadores farmacêuticos adequados incluem dilu-entes ou cargas inertes, água e vários solventes orgânicos. As composições farmacêuticas podem, se desejado conter ingredientes adicionais tais como agentes de sabor, ligan-tes, excipientes e outros do género. Deste modo, para administração oral, os comprimidos contendo vários excipientes, tais como ácido cítrico podem ser empregues em conjunto com vários desintegrantes tais como amido, ácido alginico e certos silicatos complexos e com agentes de ligação tais como a sacarose, gelatina e goma arábica. Adicionalmente, agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, laurilsulfato de sódio e talco, são frequentemente úteis para fins de fabrico de comprimidos. Podem também ser empregues composições sólidas de tipo semelhante em cápsulas de gelatina moles ou duras. Os materiais preferidos, deste modo, incluem a lactose ou açúcar do leite e polietilenoglicóis de alto peso molecular. Quando são desejados suspensões aquosas ou elixires para administração oral o composto activo destes pode ser 33 ΡΕ1337521 combinado com vários agentes adoçantes ou de sabor, matérias corantes ou pigmentos e, se desejado, agentes de emulsificação ou agentes de suspensão, em conjunto com diluentes tais como a água, etanol, propilenoglicol, glicerina ou combinações destes.

Os métodos para preparar várias composições farmacêuticas com uma quantidade especifica de composto activo são conhecidos, ou tornar-se-ão aparentes dos peritos nesta técnica. Por exemplo, ver Remington's Pharma-ceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa. 15th Edition (1975).

Os exemplos e preparações proporcionados abaixo ilustram ainda e exemplificam os compostos do presente invento e métodos para preparar tais compostos. Deve entender-se que o domínio do presente invento não está limitado de qualquer modo pelo domínio dos exemplos e preparações seguintes.

Os espectros nas FIGS. 1-9 foram registados usando um difractómetro de pó Siemens Θ/2Θ equipado como se segue: posição quarenta no autoamostrador, goniómetro com fendas fixas, fonte de raios X de lâmpada de cobre (Cu) (comprimento de onda 1:1,54056, comprimento de onda 2: 1,54439), e detector de estado sólido Kevex. Potência do tubo: 40-mA x 50-kV, ou como apropriado. Fendas: 1 x 1 x 0,6 mm (respectivamente fonte, antidispersor, e fenda do detector ). Tamanho do passo: 0,04 graus em 2T. Tempo por 34 ΡΕ1337521 passo: 1 segundo. Início do varrimento: 3 graus em 2T. Paragem do varrimento: 40 graus em 2T.

Exemplo 1

Base livre do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoroben-ziloxi)-5-[3-( 4-pirrolidin-l-ilbut il) -ureido]-isot iazole-4-carboxílico A base livre do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi) -5-[3- ( 4-pirrolidin-l-ilbut il) -ureido]-isot iazo-le-4-carboxílico é preparada de acordo com o procedimento descrito no Exemplo 30 da Patente dos Estados Unidos N° série 09/316837, apresentada em 21 Maio de 1999, concedida como US 6 235 764. P.f. 208°C (DSC). Picos de difracção em pó de raios X característicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: 9,314 [100,0], 11,356 [44,8], 15, 897 [49,6], 22,059 [84.5] , 22,520 [63,3], 22, 726 [70,0], 23,927 [67,6], 24,307 [60.5] , 25,310 [64,8], e 26,551 [86,6].

Exemplo 2 (não faz parte do invento)

Sal cloridrato do amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)— 5 — [3 —(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico A amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) -5-[3- (4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico (500 mg, 0,939 mmol) foi dissolvida em EtOH (20 35 ΡΕ1337521 ml) sob refluxo, deixou-se a arrefecer até à temperatura ambiente e tratou-se com HC1 (0,94 ml numa solução 1,0 M em Et20) enquanto se gira o balão. A mistura foi então agitada suavemente com aquecimento a 50°C durante 3 horas e à temperatura ambiente durante 3 dias. O sólido foi filtrado, seco com alto vácuo para originar um sólido branco (468 mg, 0,823 mmol, 82%). Ponto de fusão 230°C (DSC). Higroscopi-cidade: 1% (em peso) com 90% de humidade relativa, à temperatura ambiente (RH) . Picos de difracção em pó de raios X caracteristicos (2-teta, [% intensidade relativa]: 8,623 [90,7], 12,121 [38,9], 17,298 [95,2], 23,397 [44,7], 23,944 [51,7], 24,119 [62,7], 24, 873 [55,7], 25, 948 [100], e 28, 821 [39,6].

Exemplo 3

Sal bromidrato do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi) —5—[3— (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico

Foi adicionado ácido bromídrico (1,0 ml de solução aquosa 47-49% 8,9 M) a ~4 ml de MeOH e então encheu-se até à marca de 8,9 ml com MeOH num cilindro graduado. Separadamente, o ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxi-lico (500 mg, 0,938 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (10 ml) e MeOH (4 ml) e tratado com HBr (1,0 ml da solução descrita atrás). Esta solução foi então colocada numa câmara de difusão envolvida com Et20. Após 16 horas, apresentou-se 36 ΡΕ1337521 sólido. 0 Et20 foi substituído com Et20 fresco e a difusão continuou durante a noite. Foi obtido um sólido branco (529 mg, 0,863 mmol, 86%). Ponto de fusão 201,0°C (DSC). Higroscopicidade: 0,1% a 87% de humidade relativa. Picos de difracção em pó de raios X característicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: 8,687[100, 0], 12,264 [35,9], 17,374 [42,3], 23,711 [24,0], 24,335 [20,7], e 25, 769 [34,3].

Exemplo 4

Sal hemicitrato do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi)-5-[3-( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico O ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico (532 mg, 1,00 mmol), ácido cítrico (96 mg, 0,50 mmol) e MeOH (8 ml) foram combinados num frasco de 16 ml com um septo no topo e aquecidos, com agitação, a 75°C durante 24 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. 0 sólido foi lavado com MeOH e seco por passagem contínua de ar sobre o sólido. Foi obtido um sólido branco (530 mg, 0,843 mmol, 84%) . Ponto de fusão 201,7°C (DSC). Higroscopicidade: 0,43% a 87% de humidade relativa RH. Picos de difracção em pó de raios X característicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: 4, 306 [79,9], 16,317 [100,0], 20 , 998 [32,7], 21,476 [30,9], 21, 476 [30,9], 22,643 [48, 7], 23, 384 [76,9], 24,891 [76,9], 24, 891 [76,0], 27, 573 [47,9], e 27, 840 [32,3]. 37 ΡΕ1337521

Exemplo 5 (nao faz parte do invento)

Sal acetato do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi) —5 —[3— ( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico 0 ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico (532 mg, 1,00 mmol), ácido acético (57 μΐ, 1,0 mmol) e MeOH (3 ml) foram combinados num frasco de 16 ml com um septo no topo e aquecidos, com agitação, a 75°C durante 24 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e colocada numa câmara com Et20. Após 5 horas foram recolhidos grandes cristais, por decantação do líquido, com lavagem do sólido com MeOH e então com Et20. O sólido foi seco por passagem breve de ar sobre o sólido. Foi obtido um sólido branco (330 mg, 0,557 mmol, 56%) . Ponto de fusão 175°C (DSC). Higroscopicidade: 0,43% a 87% de humidade relativa RH. Picos de difracção em pó de raios X caracteristicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: 6,096 [21.7] , 12,183 [21,4], 17,451 [33,3], 18,288 [100,0], 22, 441 [57.7] , 23,086 [19,9], e 24, 439 [20,7].

Exemplo 6

Sal p-tosilato do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi) -5-[3- (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico 0 ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)—5—[3 — 38 ΡΕ1337521 (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico (532 mg, 1,00 mmol), mono-hidrato do ácido p-toluenossul-fónico (179 mg, 1,00 mmol), MeOH (10 ml), e CH2CI2 (1 ml) foram combinados e filtrados para remover pequenas quantidades de partículas finas e lavadas com CH2CI2 adicional (3 ml) . A solução foi adicionada a CH2CI2 adicional (4 ml) mais MeOH (1 ml) e colocada numa câmara de difusão com Et20 durante a noite. Não se formaram cristais pelo que o Et20 foi substituído por pentano durante a noite. O sólido foi lavado com Et20 e seco por passagem contínua de ar através do sólido. Foi obtido um sólido branco (572 mg, 0,812 mmol, 81%). Ponto de fusão 140°C e 174°C (DSC). Higroscopicidade: -0,9% a 87% de humidade relativa RH. Picos de difracção em pó de raios X característicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: 20,446 [100,0], 20, 760 [74,0], 22,092 [81,7], 22,371 [70,8], 23, 190 [65,2], e 26,239 [61,5].

Exemplo 7

Sal L-tartarato do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluoro-benziloxi) -5-[3- (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico O ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico (532 mg, 1,00 mmol), ácido L-tartárico (150 mg, 1,00 mmol) e MeOH (8 ml) foram combinados num frasco de 16 ml com um septo no topo e aquecidos, com agitação, a 75°C durante 24 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente 39 ΡΕ1337521 , foi lavado com MeOH e seco por e filtrada. 0 solido passagem continua de ar sobre o sólido. Foi obtido um 0, 904 mmol, 90%) . Ponto de fusão sólido branco (617 mgi ^r-d cidade: 0,3% a 100% de RH. Picos de 206 °C (DSC) . Higroscopio r-aios X característicos (2-teta, [% difracçao em po de . . H , . · .,->1 · 4,061 [82,9], 20,821 [85,6], 21,634 intensidade relativaj· · [100,0], 22,179 [94,0], 25, 858 [95,1].

Exemplo

Sal hemissuccinato do ácido 3-(4-bromo-2,6-di-fluorobenziloxi)— 5 — [3 —(4-pirrolidin—1 —ilbutil)-ureido]- isotiazole-4-carboxílico (Forma A) O ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico (532 mg, 1,00 mmol), ácido succinico (59 mg, 0,50 mmol) e MeOH (8 ml) foram combinados num frasco de 16 ml com um septo no topo e aquecidos, com agitação, a 75°C durante 24 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada. O sólido foi lavado com MeOH e seco por passagem continua de ar sobre o sólido. Foi obtido um sólido branco (500 mg, 0,845 mmol, 85%). Ponto de fusão da Forma A 216°C (DSC). Higroscopicidade: 0,6% a 90% de humidade relativa RH. Picos de difracção em pó de raios X característicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: Forma A: 4, 634 [100,0], 16, 735 [67,2], 22,179 [60,8], 22,179 [60,8], e 25, 002 [70,3]. 40 ΡΕ1337521

Exemplo 9 (nao faz parte do invento)

Sal hemissuccinato do ácido 3-(4-bromo-2,6-dif luorobenziloxi) —5—[3— (4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico (Forma B) O ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico (100 mg) foi dissolvido com calor em 6 ml de EtOH:MeOH (2:1). Ácido succinico (11,1 mg, 0,5 eg) dissolvido em EtOH foi adicionado à solução precedente. A mistura foi deixada a arrefecer até à temperatura ambiente e agitou-se durante 20 minutos. O sólido foi filtrado, lavado com EtOH e seco por passagem continua de ar sobre o sólido. Foi obtido um sólido branco (800 mg, 70%) . Higroscopicidade da Forma B: 1,5% a 90% de humidade relativa RH. Picos de difracção em pó de raios X caracteristicos (2-teta, [% intensidade relativa]: Forma B: 6,714 [31,0], 15,272 [100,0], 19,197 [59,3], 19,457 [50,0], 24, 487[99, 0] e 24, 802 [79,1].

Exemplo 10 (não faz parte do invento)

Sal mesilato do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi ) — 5 — [3 — ( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazo-le-4-carboxílico O ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-( 4-pirrolidin-l-ilbutil) -ureido]-isotiazole-4-carboxílico (10,9 g, 20,5 mmol) , foi dissolvido em MeOH (150 ml) e 41 ΡΕ1337521 arrefeceu-se a 0°C. Num balão separado, H3CSO3H (1,33 ml) foi adicionado a MeOH (15 ml) a 0°C. A solução ácida foi adicionada gota a gota durante 10 minutos à solução de material de partida de amina. A solução foi aquecida até à temperatura ambiente, filtrada e removeram-se impurezas sólidas menores, diluiu-se com Et20 (1 1) e agitou-se durante 1 hora. A mistura foi ainda diluída com hexano (500 ml) e arrefeceu-se até 0°C com agitação continuada. Após assentar durante a noite, os cristais foram filtrados, lavados com hexano, e secos sob vácuo para originar um sólido branco (11,1 g, 17,7 mmol, 86%). Picos de difracção em pó de raios X característicos (2-teta, , [% intensidade relativa]: Forma A: 4,417 [99,3], 17, 288 [45,5], 20,828 [39,6], 21,677 [43,5], 22, 148 [68,3], 25, 427 [100,0] e 27, 006 [37,5].

Lisboa, 6 de Outubro de 2006

Claims

ΡΕ1337521 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um sal do composto amida do ácido 3 — (4 — bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico, em que o sal é seleccio-nado a partir da Forma A bromidrato, hemicitrato, p-tosilato, L-tartarato e hemissuccinato.
2. Um sal de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal bromidrato e possui um espectro de difracção de raios X de cerca de 2-teta substancialmente igual a: 8,687, 12,264, 17,374, 23,711, 24,335, e 25,769.
3. Um sal de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal hemicitrato e possui um espectro de difracção de raios X de cerca de 2-teta substancialmente igual a: 4,306, 16,317, 20,988, 21,476, 22,643, 23,384, 24,891, 27,573 e 27,840.
4. Um sal de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal hemicitrato e possui um espectro de difracção de raios X de cerca de 2-teta substancialmente igual a: 20,446, 20,760, 22,092, 22,371, 23,190 e 26,239.
5. Um sal de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal L-tartarato e possui um espectro de difracção de raios X de cerca de 2-teta substancialmente igual a: 4,061, 20,821, 21,634, 22,179 e 25,858. 2 ΡΕ1337521
6. Um sal de acordo com a reivindicação 1, em que o referido sal é o sal hemissuccinato de Forma A e possui um espectro de difracção de raios X de cerca de 2-teta substancialmente igual a: 4,634, 16,735, 22,179 e 25,002.
7. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 para o fabrico de um medicamento para o tratamento de doenças hiperproli- ferativas num mamífero.
8. A utilização da reivindicação 7, em que a utilização é para o tratamento de um cancro seleccionado de cancro do cérebro, de células escamosas, da bexiga, gástrico, pancreático, da mama, da cabeça, do pescoço, osofágico, da próstata, colo-rectal, do pulmão, renal, do rim, ovários, ginecológico e da tiróide.
9. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 eficaz para tratar uma doença hiperproliferativa num mamífero, e um portador farmaceu-ticamente aceitável.
10. A composição farmacêutica da reivindicação 9, em que a doença hiperproliferativa é um cancro seleccionado de cancro do cérebro, do pulmão, de células escamosas, da bexiga, gástrico, pancreático, da mama, da cabeça, do pescoço, renal, do rim, ovários, da próstata, colo-rectal, osofágico, ginecológico e da tiróide. 3 ΡΕ1337521
11. Um método para preparar um sal bromidrato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico, compreendendo a reacção de ácido bromidrico com a amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-1-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico.
12. Método para preparar um sal hemicitrato da amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-l-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico, compreendendo a reacção de ácido cítrico com a amida do ácido 3-(4-bromo-2,6-difluorobenziloxi)-5-[3-(4-pirrolidin-1-ilbutil)-ureido]-isotiazole-4-carboxílico. Lisboa, 6 de Outubro de 2006