PT1259242E - Utilização de inibidores de tirosina quinase de receptores de pdgf para o tratamento da nefropatia diabética - Google Patents

Description

ΡΕ1259242 1 DESCRIÇÃO "UTILIZAÇÃO DE INIBIDORES DE TIROSINA QUINASE DE RECEPTORES DE PDGF PARA O TRATAMENTO DA NEFROPATIA DIABÉTICA" A invenção presente diz respeito a uma nova utilização de inibidores de tirosina quinase de receptores de PDGF, em especial de derivados de N-fenil-2-pirimidina-amina coma fórmula I, na qual os símbolos e os substi-tuintes têm o significado tal como é atribuído adiante neste documento, sob uma sua forma livre ou a de um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, sendo o conjunto de compostos referido colectivamente como COMPOSTOS DA invenção, no fabrico de uma composição farmacêutica para o tratamento da nefropatia diabética. A invenção presente diz respeito à utilização de inibidores de tirosina quinase de receptores de PDGF para o fabrico de um medicamento para tratar a nefropatia diabética. A invenção presente diz respeito em especial a uma nova utilização de derivados de N-fenil-2-pirimidina-mina com a fórmula I, ΡΕ1259242 2

em que

Ri seja 4-pirazinilo; 1-metil-lH-pirrolilo; feni-lo substituído com amino ou com amino-alquilo inferior, em que o grupo amino possa ser em cada instância livre, alquilado ou acilado; lH-indolilo ou lH-imidazolilo ligados por um átomo de carbono do anel com cinco membros; ou piridilo não substituído ou substituído com alquilo inferior, ligado um átomo de carbono do anel e não substituído ou substituído com oxigénio no seu átomo de azoto; R.2 e R3 sejam cada um deles independentemente do outro, hidrogénio ou alquilo inferior;

um ou dois dos grupos R4, R5, Re, R7 e Re seja nitro, alcoxilo inferior substituído com fluoro ou um grupo com a fórmula II -N(R9)-C(=X)-(Y)n-Rio (II), em que R9 seja hidrogénio ou alquilo inferior, 3 ΡΕ1259242 X seja oxo, tio, imino, N-alquil inferior-imino, hidroximino ou O-alquil inferior-hidroximino, Y seja oxiqénio ou o grupo NH, n seja 0 ou 1 e

Rio seja um grupo alifático contendo pelo menos 5 átomos de carbono, ou um grupo aromático, aromático-alifá-tico, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterocí-clico ou heterocíclico-alifático, e os restantes grupos R4, Rs, Rg, R7 e R8 sejam cada um deles independentemente dos outros, hidrogénio, alquilo inferior que seja não substituído ou seja substituído com amino livre ou alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo ou com morfolinilo, ou alcanoílo inferior, trifluorometilo, hidroxilo livre, eterificado ou esterifiçado, amino livre, alquilado ou acilado ou carboxilo livre ou esterifiçado, ou de um sal de um tal composto que contenha pelo menos um grupo formador de sal, para o fabrico de um medicamento para tratar a nefropatia diabética. 0 1-metil-lH-pirrolilo seja de preferência 1-metil-lH-pirrol-2-ilo ou l-metil-lH-pirrol-3-ilo. 0 Ri que seja fenilo substituído com amino ou com amino-alquilo inferior, em que em cada caso o grupo amino esteja livre, alquilado ou acilado, tem o fenilo substituído na posição desejada (orto, meta ou para), em que um 4 ΡΕ1259242 grupo amino alqilado seja de preferência mono-alquilamino inferior ou di-alquilamino inferior por exemplo dimetil-amino, e a espécie alquilo inferior no amino-alquilo inferior é de preferência alquilo C1-C3, tal como em particular metilo ou etilo. 0 1-indolilo ligado por um átomo de carbono do anel com cinco membros é de preferência lH-indol-2-ilo ou lH-indol-3-ilo. 0 piridilo substituído com alquilo inferior ou de preferência não substituído e ligado por um átomo de carbono é 2-, 4- ou preferivelmente 3-piridilo, por exemplo 3-piridilo, 2-metil-3-piridilo ou 4-metil-3-piridilo. O piridilo substituído com oxigénio no átomo de azoto é um grupo derivado do N-óxido de piridina, isto é, N-oxido-piridilo. 0 alcoxilo inferior substituído com fluoro é um alcoxilo inferior contendo um substituinte fluoro, mas de preferência diversos, em particular o trifluorometoxilo ou o 1,1,2, 2-tetrafluoro-etoxilo.

Quando X for oxo, tio, imino, N-alquil inferior-imino, hidroximino ou O-alquil inferior-hidroximino, o grupo C=X é, pela ordem acima, um grupo C=0, C=S, C=N-H, C=N-alquilo inferior, C=N-OH ou C=N-0-alquil inferior, respectivamente. X é preferivelmente oxo. n é preferivelmente 0, isto, é, o grupo Y não está presente. 5 ΡΕ1259242 Y, quando está presente, é preferivelmente o grupo NH. O termo "inferior", dentro do âmbito deste texto, denota grupos contendo até e incluindo 7, de preferência até 4 e incluindo, átomos de carbono.

Os alquilo inferior Ri, R2, R3 e Rg são preferivelmente metilo ou etilo.

Um grupo Rio alifático contendo pelo menos 5 átomos de carbono não possui de preferência mais do que 22 átomos de carbono, em geral não possui mais do que 10 átomos de carbono, e um tal grupo de hidrocarboneto alifático substituído ou de preferência não substituído, isto é, um grupo alcinilo, alcenilo ou de preferência alquilo é substituído ou de preferência não substituído, tal como um alquilo C5-C7, por exemplo n-pentilo. Um grupo Ri0 aromático contém até 20 átomos de carbono e é não substituído ou substituído, por exemplo sendo em cada caso naftilo não substituído ou substituído, tal como especificamente 2-naftilo, ou preferivelmente fenilo, sendo os substituintes seleccionados de preferência de entre ciano, alquilo inferior não substituído ou substituído com hidroxilo, amino ou com 4-metil-piperazinilo, tal como em particular metilo, trifluorometilo, hidroxilo livre, eterificado ou esterifiçado, amino livre, alquilado ou acilado e carboxilo livre ou esterif içado. Num grupo R10 que seja aromático- 6 ΡΕ1259242 alifático, a espécie aromática é tal como se definiu acima e a espécie alifática é alquilo inferior, tal como em particular alquilo Ci-C2, que é substituído ou de preferência não substituído, por exemplo benzilo. Um grupo Rio cicloalifático tem em especial até 30, mais especialmente até 20, e de preferência até 10 átomos de carbono, é monocíclico ou policíclico, e é substituído ou preferivelmente não substituído, por exemplo um tal grupo cicloalquilo, em especial um tal grupo cicloalquilo com 5 ou 6 átomos no anel, é de preferência ciclo-hexilo. Num grupo Rio cicloalifático-alifático, a espécie cicloali-fática é tal como se definiu acima e a espécie alifática é de preferência alquilo inferior, tal como em especial alquilo Ci-C2, que se já substituído ou de preferência não substituído. Um grupo Rio heterocíclico contém em especial até 20 átomos de carbono e é de preferência um grupo monocíclico saturado ou insaturado com 5 ou 6 membros no anel e com 1-3 heteroátomos que são de preferência selec-cionados de entre azoto, oxigénio e enxofre, em especial, por exemplo, tienilo ou 2-, 3- ou 4-piridilo, ou um grupo bicíclico ou tricíclico no qual, por exemplo, se encontram anelados dois ou três anéis benzénicos (fundidos) ao grupo monocíclico mencionado. Num grupo Rio heterocíclica-alifática a espécie heterocíclica é tal como se definiu acima e a espécie alifática é de preferência alquilo inferior, tal como em particular alquilo Ci-C2, que é substituído ou preferivelmente não substituído. O hidroxilo eterificado é de preferência alcoxilo 7 ΡΕ1259242 inferior. 0 hidroxilo esterifiçado é preferivelmente hidroxilo esterificado com um ácido carboxilico orgânico, tal como um ácido alcanóico inferior, ou com um ácido inorgânico, tal como um ácido hidrohalogénico, por exemplo por exemplo alcanoilo inferior ou em especial halogénio tal como iodo, bromo ou preferivelmente cloro ou flúor.

Amino alquilado é, por exemplo, alquilamino inferior, tal como metilamino, ou dialquilamino inferior, tal como dimetilamino. Amino acilado é, por exemplo, alcanoil-amino inferior ou benzoil-amino.

Carboxilo esterificado é, por exemplo, alcoxicar-bonilo inferior, tal como metoxicarbonilo.

Um grupo fenilo substituído pode conter até 5 substituintes, tais como flúor, mas especialmente no caso de substituintes relativamente volumosos é em geral substituído com apenas entre 1 e 3 substituintes. São exemplos de fenilo substituído que a que pode ser feita uma menção especial, 4-cloro-fenilo, pentafluoro-fenilo, 2-carboxi-fenilo, 2-metoxi-fenilo, 4-fluoro-fenilo, 4-ciano-fenilo e 4-metil-fenilo.

Os grupos formadores de sal num composto com a fórmula I são grupos ou espécies que contenham propriedades ácidas ou básicas. Os compostos que contenham pelo menos um grupo básico ou pelo menos um grupo ácido, por exemplo um grupo amino livre, um grupo pirazinilo ou um grupo ΡΕ1259242 piridilo, podem formar sais de adição de ácidos, por exemplo com ácidos inorgânicos, tais como o ácido clorídrico, o ácido sulfúrico ou o ácido fosfórico, ou com ácidos carboxilicos ou sulfónicos apropriados, por exemplo os ácidos alifáticos monocarboxílicos ou dicarboxilicos, tais como o ácido trifluoroacético, o ácido acético, o ácido propiónico, o ácido glicólico, o ácido succinico, o ácido maleico, o ácido fumárico, o ácido hidroximaleico, o ácido málico, o ácido tartárico, o ácido citrico ou o ácido oxálico, ou aminoácidos tais como a arginina ou a lisina, ácidos carboxilicos aromáticos, tais como o ácido benzóico, o ácido 2-fenoxi-benzóico, o ácido 2-acetoxi-benzóico, o ácido salicilico, o ácido 4-aminossalicilico, ácidos aromático-alifáticocarboxilicos, tais como o ácido mandé-lico ou o ácido cinâmico, ácidos carboxilicos heteroaro-máticos, tais como o ácido nicotínico ou o ácido isonico-tínico, ácidos sulfónicos alifáticos, tais como os ácidos metanossulfónico, etanossulfónico, ou 2-hidroxietanos-sulfónico, ou ácidos sulfónicos aromáticos, tais como o ácido benzenossulfónico, o ácido p-toluenossulfónico ou o ácido 2-naftalenossulfónico. Quando estiverem presentes diversos grupos básicos podem formar-se sais de monoadição ou de poliadição.

Os compostos com a fórmula I que tenham grupos ácidos, por exemplo um grupo carboxilo livre no grupo Rio, podem formar sais com metais ou com amónio, tais como metais alcalinos ou alcalino-terrosos, por exemplo sais de sódio, potássio, magnésio ou cálcio, ou sais de amónio com 9 ΡΕ1259242 o amoníaco ou com aminas orgânicas aceitáveis, tais como as monoaminas terciárias, por exemplo trietilamina ou tri-(2-hidroxietil)-amina, ou com bases heterocíclicas, por exemplo N-etil-piperidina ou N,N'-dimetil-piperazina.

Os compostos com a fórmula I que contenham tanto grupos ácidos como básicos podem formar sais internos.

Para as finalidades de isolamento e de purificação, bem como no caso de compostos que se destinem a utilização como intermediários, também é possível utilizar sais inaceitáveis do ponto de vista farmacêutico. No entanto só são utilizados para fins terapêuticos os sais não tóxicos, aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, e estes sais são portanto preferidos. A nefropatia diabética é caracterizada por uma albuminúria persistente ( > 300 mg/24 h ou 200 μρ/πιίηυ^), doença esta que se pode diagnosticar clinicamente se obedecer aos seguintes critérios adicionais: presença de retino-patia diabética sem evidência clínica nem laboratorial de doença no tracto urinário nem no rim, para além da glomerulosclerose diabética. A nefropatia diabética é a causa mais comum de falha renal nos estádios terminais, no Mundo Ocidental.

Breve descrição dos desenhos

Figura 1: Celularidade glomerular tal como 10 ΡΕ1259242 avaliada pelo número de núcleos (média+DP) por corte transversal glomerular (gcs) em 50 glomérulos hilares por animal. A hipercelularidade glomerular é significativamente atenuada pelo CGP57148B. * p < 0,05.

Figura 2: Proliferação de células mesangiais tal como avaliada pelo número de células BrdU+/EDl- (média±EP) por corte transversal glomerular (gcs) em 50 glomérulos hilares por animal. A proliferação de células mesangiais é significativamente atenuada pelo CGP57148B. * p < 0,001.

Figura 3: Células mesangiais activadas, tal como avaliadas pelo número de células musculares lisas de tipo a cuja actina foi imunocontrastada (média+EP) por secção transversal glomerular (gcs) em 50 glomérulos hilares por animal, de ratazanas não tratadas e tratadas com CGP 57148B. * p < 0,05.

Figura 4: Quantificação do colagéneo de tipo IV tal como avaliado pela fracção de área (média+DP) do glomérulo que foi imunocontrastada. * p < 0,05, em relação a ratazanas não tratadas.

Pode estabelecer-se por modelos de teste estabelecidos e em especial aqueles modelos de teste que se descrevem neste documento, que os COMPOSTOS DA INVENÇÃO ou em qualquer dos casos um seu sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, resultam numa prevenção mais efectiva ou de preferência num tratamento, em especial da nefropatia 11 ΡΕ1259242 diabética, mas também da glomerulonefrite, da pielonefrite crónica ou da nefropatia devida a acumulação de igA. 0 especialista na técnica adequada está completamente habilitado para seleccionar um modelo de teste relevante para provar as indicações terapêuticas mencionadas acima e adiante neste documento, bem como os seus efeitos benéficos. A actividade farmacológica pode, por exemplo, ser demonstrada num estudo clinico ou pelos procedimentos de teste tal como se descrevem essencialmente adiante neste documento.

Exemplo de Teste 1: Acção antiproteinúrica em ratazanas com nefrectomia subtotal (a 5/6) [modelo de glomerulosclerose focal; T. W. Meyer e H. G. Renake, Am. J. Physio. 254, F856 (1988)].

Anestesiam-se ratazanas de 5 semanas de idade por injecção intraperitoneal de pentobarbital sódico, e remove-se-lhes 2/3 do rim direito. Uma semana depois, remove-se-lhes sob uma anestesia semelhantes todo o rim esquerdo. Depois de se deixarem viver durante mais duas semanas, recolhe-se a sua urina ao longo de 24 horas e determina-se o conteúdo total em proteína e o conteúdo em albumina na urina, utilizando o teste A/G-B (Wako Pure Chemical Co., Lda.). Com base na proteína presente na urina e na tensão sanguínea, repartem-se as ratazanas por dois grupos (ratazanas tratadas com veículo e ratazanas tratadas com 1 mg/kg/dia, por via oral, com um COMPOSTO DA INVENÇÃO) . As ratazanas que sofrem apenas nefrectomia do rim esquerdo são 12 ΡΕ1259242 utilizadas também como ratazanas simulando haverem sido operadas. Suspende-se o COMPOSTO DA INVENÇÃO em solução de goma-arábica e administra-se a suspensão por via oral uma vez por dia durante oito semanas. Recolhe-se urina de 24 horas nas 2a, 4a, 6a e 8a semanas do tratamento, para a determinação do conteúdo total em proteína e o conteúdo em albumina na urina.

Exemplo de Teste 2: Acção antiproteinúrica em ratazanas com diabetes não dependente de insulina (NIDD) (ratazanas gordas Wistar) [H. Ikeda et ai., Diabetes 30, 1045 (1981)].

Repartem-se ratazanas gordas Wistar com 11 semanas de idade por dois grupos (ratazanas tratadas com veículo e ratazanas tratadas com 1 mg/kg/dia, por via oral, de um COMPOSTO DA INVENÇÃO) com base no seu teor de glucose no sangue e no conteúdo em proteina na sua urina. Utilizam-se também ratazanas de controlo não diabéticas (ratazanas magras). Suspende-se um COMPOSTO DA INVENÇÃO em solução de goma-arábica e administra-se a suspensão por via oral uma vez ao dia durante dez dias. Recolhe-se urina de 24 horas nas 2a, 4a, 6a e 8a semanas do tratamento. Centrifuga-se a urina a 3.000 rpm e coloca-se parte do sobrenadante sobre uma coluna (Pharmacia PD10) para lhe retirar o sal. Determinam-se o conteúdo total em proteína e o conteúdo em albumina na urina, respectivamente pelos métodos de Lowry e ELISA. 13 ΡΕ1259242 A proliferação celular e a acumulação de matriz extra celular são aspectos caracteristicos das doenças glomerulares progressivas no homem e são uma das principais causas do falhanço renal nos estádios terminais.

Exemplo de Teste 3: Inibição da proliferação de células mesangiais in vitro

Foi já demonstrado que a interleuquina-10 estimula a proliferação de células mesangiais, tanto in vitro como in vivo (S. J. Chadban, et al. Lab. Invest 76(5), 1997, 619-627). Avalia-se a proliferação da linha de células mesangiais de ratazana 1097 (Y. Kakizaki, et al., Clin. Exp. Immunol. 85(1), 1991, 157-63) pela absorção de 3H-timidina. Utilizaram-se as células provenientes de entre a 30a e a 40a passagem. Cultivam-se as células em meio RPMI (Gibco, EUA) contendo soro fetal bovino termicamente inactivado (FCS), tampão HEPES 20 mM, 100 U/mL de penicilina e 100 μρ/ηΛ de estreptomicina, em atmosfera humidificada com 5% de C02 e a 37°C. Plaquearam-se as células mesangiais a uma densidade pequena em placas de micro titulação com 96 poços de fundo chato, em RPMI com 10% de FCS, e deixaram-se repousar de um dia para o outro. Em seguida deixaram-se as células sub confluentes sem alimentação, durante 3 dias em RPMI com 0,5% de FCS. Substituiu-se então o meio por uma solução contendo 2 μιηοΙ/L de um COMPOSTO DA INVENÇÃO, preparada de fresco dissolvendo o COMPOSTO DA INVENÇÃO em DMSO e diluindo esta solução de base a 1:10 em soro salino normal, ou controlo, com ou sem 14 ΡΕ1259242 citoquinas (R&D Systems). Cultivaram-se as células durante mais 48 horas e aplicou-se-lhes um pulso de 3H-timidina durante 6 horas antes de se colherem. Adicionou-se a poços seleccionados IL-10 (a 20-100 ng/poço). Utilizaram-se em todos os testes replicações de 6 poços e repetiram-se os testes 3 a 5 vezes.. Observa-se que o IL-10 promove, de forma consistente, a proliferação das 1097, em comparação com os controlos (aumento de 25-75%, P < 0,01 a 0,001 em relação ao controlo).Quando se utiliza como composto da invenção a N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoil-amido]-2-metilfenil}-4-(3-piridil)-2-pirimidina-amina (CGP 57148B) como COMPOSTO DA INVENÇÃO, este aumento de proliferação é completamente inibido pelo COMPOSTO DA INVENÇÃO.

Exemplo de Teste 4: Utiliza-se o anticorpo monoclonal OX-7, anti-ratazana, Thy-1,1, para a indução da glomerulonefrite proliferativa mesangial (D. W. Mason e A. F. Williams, Biochem. J., 187(1), 1980, 1-20), detectam-se os macrófagos utilizando EDI, anti-ratazana CD688 (C. D. Dijkstra et al., Immunology 54(3), 1985, 589-599), identificam-se os miofibroblastos marcando com 1A4, actina de músculo liso de tipo a anti-humana (Sigma Immunochemicals, St. Louis, MO) e utiliza-se M744, anti-BrdU (Dako, Glos-trup, Dinamarca) para identificar as células em proliferação. Utiliza-se um anticorpo policlonal de cabra contra colagéneo, anti-humano/anti-bovino(Southerm Biotechnology, Birmingham, AL), para examinar a matriz extra celular. 15 ΡΕ1259242

Induz-se a nefrite anti-Thy-1 em dois grupos de 8 ratazanas Wistar macho (150-170 g) por injecção endovenosa de 5 mg/kg de IgG de OX-7 (D. J. Nikolic-Paterson et al.r J. Am. Soc. Nefrol. 7(7), 1996, 1006-1014). Com início um dia depois da injecção de IgG de OX-7, os animais recebem diariamente injecções intraperitoneais, quer de CGP 57148B (a 50 mg/kg), quer de um veículo para controlo (DMSO a 10% em soro salino), até serem sacrificados no dia 6. Três horas antes do sacrifício, é administrada às ratazanas uma injecção intraperitoneal de 50 mg/kg de bromodesoxiuridina (BrdU) para marcar as células na fase de síntese de adn (S) no ciclo celular. Também se injectou um grupo de 8 ratazanas normais com BrdU, 3 horas antes do sacrifício.

Fazem-se recolhas de vinte e quatro horas de urina, e obtêm-se amostras de sangue, no dia -3 (antes do teste) e no dia 6. Mede-se a concentração de proteína na urina pelo método do cloreto de benzetónio (Iwata, J., et ai., Clin. Chem. 25(7), 1979, 1317-1319). Medem-se os teores em creatinina no soro e na urina utilizando a velocidade da reacção de Jaffé (Lansen, K. Clin. Chim. Acta 41, 1972, 209-217) .

Fixam-se os tecidos em formalina neutra tampo-nizada a 4%, e embebem-se em parafina. Contrastam-se secções transversais de rim (4 pm) com ácido periódico-reagente de Schiff (PAS). Leva-se a cabo a quantificação dos núcleos examinando 50 glomérulos hilares por animal. 16 ΡΕ1259242

Leva-se a cabo a imunocontrastação tal como foi descrito por Rumble et al., J. Clin. Invest. 99, 1997, 1016-1027. Leva-se a cabo uma imunocontrastação dupla em secções de tecido fixadas em formalina, utilizando uma técnica baseada em micro-ondas para impedir a reactividade cruzada de anticorpos (G. H. Tesch, et al., Am. J. Pathol. 151(1)1997, 141-150).

As secções contrastadas quer com anticorpo contra BrdU quer contra EDI são classificadas como BrdU+ e ED1+. Leva-se a cabo a contagem utilizando um reticulado para medir a área dos tufos glomerulares, limitando-se à área dos tufos glomerulares omitindo as células dentro do lúmen capilar. Classificam-se cinquenta glomérulos para cada animal, e exprimem-se as células marcadas sob a forma de média ±DP por mm2. Para além disto, classificam-se também como ED+BrdU+, ED+BrdU- e EDl-BrdU+, e contam-se, as células das secções duplamente marcadas. Uma vez que os podócitos não proliferam e que o endotélio glomerular corresponde a <3% das células em crescimento neste modelo de doença, identificam-se as células em proliferação quer como macrófagos EDl+BrdU+, quer como células mesangiais em proliferação como EDl-BrdU+.

Quantifica-se a intensidade da imunocontrastação do colagéneo de tipo IV utilizando análise de imagem assistida por computador, tal como foi previamente descrito (Η. A. Lehr, et al. J. Histochem. Cytochem. 45(11), 1997, 1559-1565). 17 ΡΕ1259242 A proteinúria aumenta ligeiramente nos animais que recebem o IgG de OX-7, em comparação com as ratazanas de controlo, e não é afectada pelo tratamento com CGP 57148B (controlo normal: 2,110,2 mg/24 horas; nefrite a Thy-1 tratada com controlo: 13,417,2 mg/24 horas, nefrite a Thy-1 tratada com 57148B: 16,417,0 mg/24 horas). Em secções contrastadas com pas, anota-se a hipercelularidade mesangial e o aumento da matriz mesangial nos glomérulos das ratazanas não tratadas. Estas alterações patológicas não são observadas nas ratazanas a que é administrada a CGP 57148B.

Descrição das Figuras: Os animais com nefrite anti-Thy-1 evidenciam uma hipercelularidade glomerular moderada quando são comparados com os animais de controlo, tal como se avalia pela contagem de núcleos, a qual é significativamente reduzida em ratazanas tratadas com CGP 57148B (Figura 1) . A proliferação das células mesangiais (BrdU+EDl-) é aumentada 5 vezes em comparação com a das ratazanas de controlo, e é significativamente diminuída por tratamento com CGP 57148B (Figura 2). De forma semelhante, o número de células mesangiais activadas (positivas em relação à actina de tipo a de músculo liso) também é aumentado nas ratazanas não tratadas e com nefrite anti-Thy-1, e é significativamente diminuído pelo tratamento com CGP 57148B (Figura 3). Esta presente nas ratazanas não tratadas e com nefrite anti-Thy-1 uma acumulação na matriz de colagéneo de tipo IV imunocontrastável, a qual é 18 ΡΕ1259242 significativamente diminuída pela administração da CGP 57148B (Figura 4).

Exemplo de Teste 5: Efeito de um COMPOSTO DA INVENÇÃO sobre uma nefropatia diabética experimental em ratazanas Sprague-Dawley pesando entre 200 e 250 g

Induz-se a diabetes nas ratazanas descritas acima por injecção de estreptozocina (STZ, a 55 mg/kg). Utilizam-se no teste seguinte todos os animais que desenvolvem diabetes (glucose aleatória > 15 mmol/L) nos 7 dias seguintes. Todas as ratazanas diabéticas recebem insulina (ultralenta humana), a 2 unidades/dia para manter a massa corporal e evitar a cetonúria sem euglicémia levando a teores de glucose de 20-25 mM. As ratazanas de controlo são apenas injectadas com tampão. Um COMPOSTO DA INVENÇÃO, por exemplo a CGP 57148B, é administrado por alimentação forçada a uma dose de 20 mg/kg/dia. Distribuem-se aleatoriamente as ratazanas diabéticas STZ para lhes ser administrado o COMPOSTO DA INVENÇÃO ou o veículo. Os grupos de controlo contendo 16 ratazanas cada um são como se segue:(I) ratazanas de controlo, nenhum fármaco, (II) ratazanas de controlo, O COMPOSTO DA INVENÇÃO, (III) ratazanas diabéticas STZ, nenhum fármaco, (IV) ratazanas diabéticas STZ, O COMPOSTO DA INVENÇÃO. Nas semanas 0, 1, 4, 8, 12, 24 e 32 determinaram-se a massa corporal, a tensão sanguínea, a glucose, o valor de HbA, o valor de C, o consumo de água e o consumo de alimentos. Levam-se a cabo no fim do estudo avaliações histológicas dos glomérulos e 19 ΡΕ1259242 de tubulointerstício. Avalia-se a estrutura glomerular por histomorfometria utilizando microscopia electrónica quantitativa. Os rins removidos das ratazanas são analisados quanto à sua espessura de GBM e quanto à fracção de volume mesangial.

Pelos resultados obtidos, por exemplo pela melhoria das constatações histológicas quanto à glomerulonefrite proliferativa mesangial, em especial a melhoria da hipercelularidade mesangial e da acumulação na matriz, mostra-se que os COMPOSTOS DA INVENÇÃO podem ser utilizados para a prevenção, ou de preferência para o tratamento, em especial da nefropatia diabética, mas também da glomerulonefrite, da pielonefrite crónica ou da nefropatia em resultado de acumulação de IgA. É atribuida preferência aos COMPOSTOS DA INVENÇÃO com a fórmula I nos quais um ou dois dos grupos R4, R5, R6, R7 e R8 sejam cada um deles nitro ou um grupo com a fórmula II no qual R9 seja hidrogénio ou alquilo Ci-7, X seja oxo, tio, imino, N-alquil inferior-imino, hidroximino ou O-alquil inferior-hidroximino, Y seja oxigénio ou o grupo NH, n seja 0 ou 1 e 20 ΡΕ1259242

Rio seja um grupo alifático contendo pelo menos 5 átomos de carbono, ou um grupo aromático, aromático-alifá-tico, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterocí-clico ou heterocíclico-alifático, e os restantes grupos R4, R5, R6, R7 e R8 sejam cada um deles independentemente dos outros, hidrogénio, alquilo Ci-7 que seja não substituído ou seja substituído com amino livre ou alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo ou com morfolinilo, ou alcanoílo C1-7, tri-fluorometilo, hidroxilo livre, eterificado ou esterifiçado, amino livre, alquilado ou acilado ou carboxilo livre ou esterifiçado, sendo os substituintes restantes tal como se definiram acima. É dada especial preferência aos COMPOSTOS DA INVENÇÃO com a fórmula I nos quais

Ri seja piridilo ou n-oxido-piridilo, cada um dos quais esteja ligado por um átomo de carbono, R2 e R3 sejam ambos hidrogénio, R4 seja hidrogénio ou alquilo inferior, R5 seja hidrogénio, alquilo inferior ou trifluorometilo, 21 ΡΕ1259242 R.6 seja hidrogénio, R7 seja nitro, alcoxilo inferior substituído com fluoro ou um grupo com a fórmula II na qual

Rg seja hidrogénio, X seja oxo, n seja 0, e

Rio seja piridilo ligado por um átomo de carbono, fenilo que seja não substituído ou seja substituído com halogéneo, ciano, alcoxilo inferior, carboxilo, alquilo inferior ou com 4-metil-piperazinil-metilo, ou com alquilo C5-C7, tienilo, 2-naftilo ou ciclo-hexilo, e

Re seja hidrogénio. É atribuída uma preferência especial aos COMPOSTOS DA INVENÇÃO com a fórmula I nos quais pelo menos um dos grupos R4 e R8 seja alquilo inferior, e os restantes substituintes sejam tal como se definiram acima. É atribuída preferência superior à de todos os outros, aos COMPOSTOS DA INVENÇÃO com a fórmula I nos quais ΡΕ1259242 22

Ri seja piridilo que esteja ligado por um átomo de carbono, R2, R3, R5, R6 e R8 sejam todos hidrogénio, R4 seja alquilo inferior, R7 seja um grupo com a fórmula II na qual R9 seja hidrogénio, X seja oxo, n seja 0, e

Rio seja 4-metil-piperazinil-metilo. É atribuída preferência máxima em especial ao COMPOSTO DA INVENÇÃO com a fórmula I que seja o CGP 57148B {N—{5 —[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoil-amido]-2-metilfenil}-4-(3-piridil)-2-pirimidina-amina}.

Muito preferivelmente, um COMPOSTO DA INVENÇÃO será utilizado sob a forma do seu sal monomesilato.

Os COMPOSTOS DA INVENÇÃO com a fórmula I estão genérica e especificamente descritos nos pedidos de patente EP 0 564.409 Al e WO 99/03.854, em especial nas reivindicações de produto e nos produtos finais dos exemplos de 23 ΡΕ1259242 trabalho, e portanto incorporam-se neste documento por citação destes documentos os assuntos que incluem os produtos finais, as preparações farmacêuticas e as reivindicações destes documentos. Estão de igual forma incluídos os estereoisómeros correspondentes, bem como as formas polimórficas correspondentes, por exemplo modificações cristalinas, que se descrevem nesses documentos.

Os COMPOSTOS DA INVENÇÃO com a fórmula I estão descritos na EP 0 564.409 Al como sendo úteis para a terapia do cancro, da trombose, da psoríase, da fibrose, da dermatosclerose e da aterosclerose. De acordo com a invenção presente verificou-se agora que os COMPOSTOS DA INVENÇÃO apresentam um efeito benéfico surpreendente sobre a nefropatia diabética, a glomerulonefrite, a pielonefrite crónica e a nefropatia devida a IgA.

Numa concretização preferida da invenção, utilizam-se os COMPOSTOS DA INVENÇÃO para o fabrico de um medicamento para tratar a nefropatia diabética, a glomerulonefrite, a pielonefrite crónica ou a nefropatia devida a IgA, utilização essa que é acompanhada por uma diminuição dos efeitos colaterais, quando se compara com os provenientes de outros medicamentos para tratar a nefropatia diabética, a glomerulonefrite, a pielonefrite crónica ou a nefropatia devida a IgA, que eram já conhecidos na técnica.

Os COMPOSTOS DA INVENÇÃO são utilizados 24 ΡΕ1259242 preferivelmente para o fabrico de um medicamento para o tratamento da nefropatia diabética.

Numa concretização preferida da invenção, a administração do medicamento que contenha um COMPOSTO DA INVENÇÃO leva a cabo uma diminuição da hipercelularidade glomerular, da proliferação de células mesangiais ou do número de células mesangiais activadas, quando se comparam com as quantidades da hipercelularidade glomerular, da proliferação de células mesangiais ou do número de células mesangiais activadas em animais com sangue quente, por um dos sistemas de teste descritos neste documento ou, preferivelmente, em seres humanos que sofram de uma doença glomerular progressiva.

Noutra concretização preferida da invenção, a administração de um medicamento que contenha um COMPOSTO DA INVENÇÃO leva a cabo uma diminuição da acumulação na matriz glomerular de colagéneo de tipo IV imunocontratável, em comparação com a quantidade de acumulação na matriz glomerular em animais de sangue quente que apresentem um aumento da quantidade acumulada de colagéneo de tipo IV imunocontrastável na matriz glomerular, num dos sistemas de teste descritos neste documento, por exemplo em ratazanas com nefrite anti-Thy-1, ou, preferivelmente, em seres humanos que sofram de uma doença glomerular progressiva. A expressão "método de tratamento" que se utilize neste documento diz respeito em especial também a um método 25 ΡΕ1259242 de prevenção das doenças mencionadas neste documento, isto é, inclui a administração profilática de uma composição farmacêutica que inclua um COMPOSTO DA INVENÇÃO a pacientes saudáveis para impedir que apareçam as doenças mencionadas neste documento, em especial a nefropatia diabética. A invenção presente diz também respeito a uma composição farmacêutica para o tratamento da glomerulo-nefrite, da pielonefrite crónica, da nefropatia devida a IgA ou, preferivelmente, da nefropatia diabética.

As composições farmacêuticas para o tratamento da nefropatia diabética, da glomerulonefrite, da pielonefrite crónica ou da nefropatia devida a IgA incluem uma quantidade efectiva de COMPOSTOS DA INVENÇÃO em conjunto com veículos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico que sejam adequados para a administração por via tópica, entérica, por exemplo oral ou rectal, ou parentérica, e podem ser inorgânicos ou orgânicos, sólidos ou líquidos. Para a administração por via oral são utilizados em especial comprimidos ou cápsulas de gelatina que incluam os COMPOSTOS DA INVENÇÃO em conjunto com diluentes, por exemplo lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicerol, e/ou lubrificantes, por exemplo ácido silícico, talco, ácido esteárico ou os seus sais, tais como o estearato de magnésio ou o de cálcio, e/ou polietilenoglicol. Os comprimidos podem também incluir aglomerantes, por exemplo silicato de alumínio e magnésio, amidos, tais como o amido de milho, o de trigo ou o de arroz, gelatina, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica 26 ΡΕ1259242 e/ou polivinilpirolidona, e, se tal se pretender, desintegrantes, por exemplo amidos, agar, ácido algínico ou um seu sal, tal como o alginato de sódio, e/ou misturas efervescentes, ou adsorventes, corantes, saborizantes e edulcorantes. Também se podem utilizar os COMPOSTOS DA invenção sob a forma de composições administráveis por via parentérica ou sob a forma de soluções para infusão. Essas soluções são preferivelmente soluções aquosas isotónicas ou suspensões, as quais, por exemplo no caso de composições liofilizadas que incluam pelo menos um COMPOSTO DA INVENÇÃO por si só ou em conjunto com um veiculo, por exemplo o manitol, podem ser preparadas antes da sua utilização. As composições farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou podem conter excipientes, por exemplo conservantes, estabilizadores, agentes molhantes e/ou emulsionantes, solubilizantes, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões. As composições farmacêuticas presentes que, se tal se pretender, podem incluir mais substâncias farmacolo-gicamente activas, tais como antibióticos ou compostos activos como antidiabéticos, são preparadas por um processo conhecido por si próprio, por exemplo recorrendo às operações habituais de mistura, granulação, confecção, dissolução ou liofilização, e incluem aproximadamente entre 1 % e 100 %, em particular entre aproximadamente 1 % e aproximadamente 20 % de ingrediente(s) activo(s).

Os COMPOSTOS DA INVENÇÃO podem ser formulados, por exemplo tal como se descreve nos Exemplos 4 e 6 do WO 99/03.854. 27 ΡΕ1259242 A gama de dosagens dos COMPOSTOS DA INVENÇÃO que se irá utilizar depende de factores conhecidos dos especialistas da técnica incluindo a espécie de animais com sangue quente, a massa corporal e a idade, o modo de administração, a substância específica que se vai empregar e a doença que se está a tratar. A não ser quando se afirmar algo em contrário neste documento, administram-se os COMPOSTOS DA invenção preferivelmente entre uma e quatro vezes ao dia. Para além disto, administram-se preferivelmente os COMPOSTOS DA INVENÇÃO, e em especial a N—{5—[4— (4-metil-piperazino-metil)-benzoil-amido]-2-metilfenil}-4-(3-piridil)-2-pirimidina-amina (CGP57148B), ao animal com sangue quente, numa dosagem dentro da gama de entre cerca de 1 e 1000 mg, mais preferivelmente de entre 50 e 500 mg e de preferência de entre 25 e 250 mg/dia, em especial quando o animal com sangue quente for um ser humano com cerca de 70 kg de massa corporal.

Lisboa, 29 de Outubro de 2007

Claims (12)

1. ΡΕ1259242 1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de um inibidor de tirosina quina-se dos receptores de PDGF com a fórmula I,

   na qual Ri seja 4-pirazinilo; 1-metil-lH-pirrolilo; fenilo substituído com amino ou com amino-alquilo Ci_7, em que o grupo amino possa ser em cada instância livre, alquilado ou acila-do; lH-indolilo ou lH-imidazolilo ligados por um átomo de carbono do anel com cinco membros; ou piridilo não substituído ou substituído com alquilo C1-7, ligado um átomo de carbono do anel e não substituído ou substituído com oxigénio no seu átomo de azoto; R2 e R3 sejam cada um deles independentemente do outro, hidrogénio ou alquilo Ci_7; um ou dois dos grupos R4, R5, R6, R7 e R8 seja nitro, alcoxilo C1-7 substituído com fluoro ou um grupo com a fórmula II ΡΕ1259242 2 —Ν (Rg) —C (=X) — (Y) n-Ri0 (II), em que R9 seja hidrogénio ou alquilo Ci_7, X seja oxo, tio, imino, N-alquil inferior-imino, hidroximino ou O-alquil Ci_7-hidro-imino, Y seja oxigénio ou o grupo NH, n seja 0 ou 1 e Rio seja um grupo alifático contendo pelo menos 5 átomos de carbono, ou um grupo aromático, aromático-ali-fático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterocí-clico ou heterociclico-alifático, e os restantes grupos R4, R5, R6, R7 e Re sejam cada um deles independentemente dos outros, hidrogénio, alquilo Ci-7 que seja não substituído ou seja substituído com amino livre ou alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo ou com morfolinilo, ou alcanoílo Ci_7, trifluorometilo, hidroxilo livre, eterificado ou esterifi-cado, amino livre, alquilado ou acilado ou carboxilo livre ou esterificado 3 ΡΕ1259242 ou de um sal de um tal composto que contenha pelo menos um grupo formador de sal, para o fabrico de um medicamento para tratar a nefropatia diabética.
2. 2. Utilização de um inibidor de tirosina quina-se dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com a reivindicação 1, no qual um ou dois dos grupos R4, R5, R6, R7 e R8 seja nitro, ou um grupo com a fórmula II em que R9 seja hidrogénio ou alquilo C1-7, X seja oxo, tio, imino, N-alquil inferior-imino, hidroximino ou O-alquil Ci_7-hidroxi-mino, Y seja oxigénio ou o grupo NH, n seja 0 ou 1 e Rio seja um grupo alifático contendo pelo menos 5 átomos de carbono, ou um grupo aromático, aromático-alifático, cicloalifático, cicloalifático-alifático, heterociclico ou heterociclico-alifático, e os restantes grupos R4, R5, R6, R7 e Rg sejam cada um deles independentemente dos outros, hidrogénio, 4 ΡΕ1259242 alquilo C1-7 que seja não substituído ou seja substituído com amino livre ou alquilado, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo ou com morfolinilo, ou alcanoílo Ci_7, tri-fluorometilo, hidroxilo livre, eterificado ou esterifiçado, amino livre, alquilado ou acilado ou carboxilo livre ou esterifiçado, ou de um sal de um tal composto que contenha pelo menos um grupo formador de sal, para 0 fabrico de um medicamento para tratar a nefropatia diabética.
3. 3. Utilização de um inibidor de tirosina qui-nase dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que Ri seja piridilo ou N-oxido-piridilo, qualquer um dos quais ligado por um átomo de carbono, R.2 e R3 sejam ambos hidrogénio, R4 seja hidrogénio ou alquilo Ci_7, R5 seja hidrogénio, alquilo Ci_7 ou tri-fluorometilo, R6 seja hidrogénio 5 ΡΕ1259242 R7 seja nitro, alcoxilo Ci_7 substituído com fluoro, ou um grupo com a fórmula II no qual Rg seja hidrogénio, X seja oxo, n seja 0 e Rio seja piridilo ligado por um átomo de carbono, fenilo que seja não substituído ou seja substituído com halogéneo, ciano, alcoxilo Ci/7, carboxilo, alquilo Ci_7, ou com 4-metil-piperazinil-metilo, ou alquilo C5-C7, tienilo, 2-naftilo ou ciclo-hexilo, e Re seja hidrogénio, ou um sal aceitável do ponto de vista farma cêutico de um tal composto, que contenha pelo menos um grupo formador de sal.
4. 4. Utilização de um inibidor de tirosina quina-se dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que pelo menos um dos grupos R4 e Rg seja alquilo Ci-7, e os substituintes restantes sejam tal como se definiram na reivindicação genérica correspondente, 6 ΡΕ1259242 ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto, que contenha pelo menos um grupo formador de sal.
5. 5. Utilização de um inibidor de tirosina quina-se dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que Ri seja piridilo ligado por um átomo de carbono, R2, R3, R5, R6 e R8 sejam todos hidrogénio, R4 seja alquilo C1-7, r7 seja um grupo com a fórmula II no qual R9 seja hidrogénio, X seja oxo, n seja 0 e Rio seja 4-metil-piperazinil-metilo, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto. ΡΕ1259242 7
6. 6. Utilização de um inibidor de tirosina quina se dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com a reivindicação 1, inibidor esse que seja a N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoil-amido]-2-metilfenil}-4-(3-piridil)-2-pirimidina-amina ou seu um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.
7. 7. Utilização de um inibidor de tirosina quina-se dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o composto seja utilizado sob a forma do seu sal monomesilato.
8. 8. Utilização de um inibidor de tirosina quinase dos receptores de PDGF com a fórmula I, R, K

   em que Ri seja piridilo ligado por um átomo de carbono, R2, R3, R5, R6 e Rg sejam todos hidrogénio, R4 seja alquilo C1-7 ΡΕ1259242 R.7 seja um grupo com a fórmula II no qual R9 seja hidrogénio, X seja oxo, n seja 0 e Rio seja 4-metil-piperazinil-metilo, ou de um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico de um tal composto, para o fabrico de um medicamento para o tratamento da glomerulonefrite, da pielonefri-te crónica ou da nefropatia devida a IgA.
9. 9. Utilização de um inibidor de tirosina qui-nase dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com a reivindicação 8, inibidor esse que seja a N-{5-[4-(4-metil-piperazino-metil)-benzoil-amido]-2-metilfenil}-4-(3-piri-dil)-2-pirimidina-amina ou seu um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.
10. 10. Utilização de um inibidor de tirosina quinase dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 ou 9, em que o inibidor de tirosina quinase dos receptores de PDGF seja utilizado sob a forma do seu sal monomesilato.
11. 11. Utilização de um inibidor de tirosina qui- 9 ΡΕ1259242 nase dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 8, 9 ou 10, em que a administração do medicamento leve a cabo uma diminuição da hipercelularidade glomerular, da proliferação das células mesangiais ou do número de células mesangiais activadas, em animais de sangue quente que sofram de uma doença glomerular progressiva
12. 12. Utilização de um inibidor de tirosina quina-se dos receptores de PDGF com a fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 8, 9 ou 10, em que a administração do medicamento leve a cabo uma diminuição da acumulação na matriz glomerular de colagéneo de tipo IV detectável por imunocontrastação em animais de sangue quente que sofram de uma doença glomerular progressiva. Lisboa, 29 de Outubro de 2007