PL146889B1 - Process for preparing silibinin,free of isosilibin - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania sylibininy o wzorze 1f nie zawierajacej izosylibiny. przy 146 8892 146 889 ozym wysuszone owooe Sllybum marianum L. Gaertn. uwalnia sie od glównej ilosci tlustego o- leju, rozsadzajao komórki owoców przez zastosowanie wysokiego cisnienia meohanicznegof po¬ tem wytloczyny, zawierajaoe jeszcze resztkowa ilosc oleju, wynoszaca 5 - 10% poddaje sie wyozerpujacaj ekstrakcji za pomooa octanu etylu, odparowuje sie octan etylu, potem otrzy¬ mana suoha pozostalosc w ilosci 2 prooent wagowych rozpuszcza sie w zlozonej z metanolu i wody podfazie trójskladnikowej mieszaniny rozpuszczalników, zlozonej z 95 czesci wagowych metanolu, 5 ozesoi wagowych wody i 100 czesci wagowych eteru naftowego o temperaturze wrze¬ nia 40 - 60°C, w celu usuniecia klaczkowatych ozastek eubstanoji stalej odwirowuje sie kla¬ rownie i w tym ukladzie rozpuszczalników suoha pozostalosc poddaje sie multiplikatywnemu, równomiernemu rozdzielaniu w przeciwpradzie, przy ozym zostaje utrzymany Ogólny przeplywo¬ wy stosunek objetosciowy fazy górnej do fazy dolnej równy 1 t 1, i nastepnie z odplywaja¬ cej fazy dolnej przez odparowanie pod zmniejszonym olsnieniem do sucha wyodrebnia sie 70 - 80%^wa mieszanine polihydroksyfenyloohromanonu (sylimarina I-IV = sylimarina gru¬ py I-I7) jako brunatnawy proszek, który charakteryzuje sie tym, ze otrzymany brunatnawy pro¬ szek przeprowadza sie w zawiesine w 3 - 5-krotnej ilosci wagowej metanolu, otrzymana zawie¬ sine mieszajac ogrzewa sie do wrzenia, nastepnie okolo 1/3 do 2/3 ilosci metanolu usuwa sie pod zmniejszonym olsnieniem, koncentrat pozostawia sie do odstania w temperaturze pokojowej, odsacza wytracony przy tym osad, przemywa 1-3 razy za pomooa niewielkiej ilosci zimnego metanolu, suszy, rozpuszcza w 40 - 60-krotnej ilosoi wagowej octanu etylu przy jednoczesnym ogrzewaniu 1 poddaje obróbce za pomoca wegla aktywnego pod chlodnice zwrotna, odsacza od wegla aktywnego, pod zmniejszonym cisnieniem zateza sie przesacz do okolo 1/10 pierwotnej objetosci, po ozym koncentrat, przy silnym mieszaniu, zadaje sie metanolem w ilosci okolo 1/10 objetosci koncentratu i pozostawia do odstania na kilka godzin w temperaturze pokojo¬ wej, przed odsaczeniem na nuczy wytraconego produktu miesza sie intensywnie, a odsaozony produkt przemywa sie dodatkowo 1-3 razy niewielka iloscia octanu etylu i suszy pod zmniej¬ szonym cisnieniem.Stosowany jako produkt wyjsciowy brunatnawy proszek lub surowa sylimarina stanowi mie¬ szanine zlozona z sylimarin I - IV • Przez obróbke surowej sylimarlny za pomoca nasyconego woda ootanu etylu nastepuje w zasadzie oddzielenie glównych ilosci sylimarin II do IV (sy- libinina jest sylimarina I) i 20 - 30% substanoji towarzyszacyoh w surowej sylimarinie, jak równiez czesc izosylibiny. Otrzymuje sie w ten sposób surowa sylibinine z wydajnoscia, za¬ leznie od jakosoi surowej sylimariny, 80 - 89% (w odniesieniu do zawartosci sylibininy w surowej sylimarinie) i o zawartosoi 80 - 84%. Surowa sylibinina jest, jak opisano w stanie teohnikl, mieszanina zlozona z izosylibiny 1 sylibininy w stosunku okolo 1:4.W sposobie wedlug wynalazku nastepuje oddzielenie glównych ilosci izosylibiny od syli¬ bininy, jak równiez reszty innych, wyzej wymienionych skladników. Otrzymuje sie za pomoca sposobu wedlug wynalazku sylibinine z wydajnoscia 79 - 85% (w odniesieniu do sylibininy w surowej sylibininie) i z zawartoscia 96 - 99% sylibininy. Stwierdzono, ze sylibinina nie zawierajaca izosylibiny jest bardzo przydatna do celów farmaceutycznych. Nieoczekiwanie o- kazalo sie, ze ma ona istotne zalety w porównaniu z innymi, znanymi skladnikami ekstraktów Silybum-marianum. Jest ona szczególnie przydatna do leczenia marskosci watroby i toksyczno- -metaboliczny oh uszkodzen watroby. Moze byc równiez stosowana zapobiegawczo, tak ze przed¬ stawione szkody w ogóle nie wystepuja. grodki lecznicze, które zawieraja sylibinine, otrzymana sposobem wedlug wynalazku, sa stosowane najczesciej systemioznie, np. w postaci pigulek, kapsulek, roztworów, w zwyklych nosnikach i ewentualnie razem ze zwyklymi substancjami pomocniczymi. Dawka dzienna dla do¬ roslego czlowieka wynosi okolo 50 - 500 mg, zaleznie od stanu paojenta i oiezkosci objawów choroby.Przyklad I. Wytwarzanie sylibininy nie zawierajacej izosylibiny. 500 g mie¬ szaniny polihydroksyfenyloohromanonu (sylimaryna I-IV s sylimaiyna grupy I-IV; zawartosc okolo 70%), otrzymanego wedlug kolumny 8f wiersz 14-19 opisu patentowego RFN nx 1 923 082, niniejszym przyjmuje sie odniesienie, przeprowadza sie w zawiesine w 2 kg metanolu £ 2,53 1 1 ogrzewa mieszajao w oiagu 15 minut do wrzenia. Z tak otrzymanego roztworu moze po tym oza-146 889 3 sle juz wytracic sie nieoo sylibininy. Nastepnie odciaga sie pod zmniejszonym cisnieniem 0,75 - 1,25 kg = 0,96 - 1,58 1 metanolu i pozostalosc pozostawia eie do odstania w ciagu 10 - 28 dni w temperaturze pokojowej. Wytracona sylibinine saczy sie i przemywa dodatkowo dwukrotnie za pomoca kazdorazowo 50 ml zimnego metanolu. Po wysuszeniu w temperaturze 40 C pod zmniejszonym cisnieniem wyodrebniona surowa sylibinine oczyszcza sie dalej nastepujaco; 60 g surowej sylibininy rozpuszcza sie w 3 1 technioznego octanu etylu przy jednoczesnym ogrzewaniu; nastepnie dodaje sie 20 g wegla aktywnego i miesza w ciagu nastepnych 2 godzin w warunkach chlodnicy zwrotnej. Potem saczy sie klarujaco i roztwór w temperaturze 50°C pod zmniejszonym cisnieniem zateza sie do okolo 250 ml. Koncentrat miesza sie w ciagu 15 mi¬ nut z zastosowaniem przyrzadu Ultra-Turrai i mieszajac dodaje sie 25 ml metanolu. Nastepnie pozostawia sie mieszanine do odstania w ciagu nocy w temperaturze pokojowej. Przed odsacze¬ niem na nuczy wytraconej przy tym syllbiny miesza sie ponownie w oiagu 5 minut równiez za pomoca przyrzadu Ultra-Turrax. Odsaczony na nuczy osad przemywa sie dodatkowo 2 razy za po¬ moca 50 ml octanu etylu i suszy w suszaroe prózniowej w ciagu nocy w temperaturze 40°C. Na¬ stepnie produkt poddaje sie zmieleniu i w tych samych warunkach suszy sie dodatkowo w cia¬ gu 48 godzin.Przyklad II. Wytwarzanie sylibininy nie zawierajacej lzosyllbiny* 1 kg miesza¬ niny polihydroksyfenyloohromanonu (sylimarina I-IV = sylimariiia grupy I-IV; zawartosc oko¬ lo 70%) jako brunatnawy proszek, zwany równiez surowa gy11.marinat który otrzymano wedlug ko¬ lumny 8t wiersz 14-19 opisu patentowego RPN nr 1 923 082, i który przyjmuje sie za odniesie¬ nie, przeprowadza sie w zawiesine w 1 1 nasyoonego woda octanu etylu w ciagu 30 minut za po¬ moca Turrax'u. Po odstaniu w ciagu 48 godzin w temperaturze pokojowej odsacza sie osad, prze¬ mywa za pomooa 100 ml zimnego, nasyconego woda octanu etylu w ciagu 48 godzin w temperaturze 40°C pod zmniejszonym cisnieniem.Wydajnosc tego produktu posredniego, surowej sylibininy, wynosi, zaleznie od jakosci su¬ rowej sylimariny, 80 - 85%, w odniesieniu do zawartosci sylibininy, w surowej sylimarinie, przy zawartosci 80 - 84%. Surowa sylibinine rozpuszcza sie w 40 ml suchego octanu etylu w temperaturze wrzenia, gotuje z 360 ml wegla aktywnego w oiagu 2 godzin pod chlodnica zwrot¬ na, saozy 1 zateza do ogólnej objetosoi 3330 ml w temperaturze 50°C pod zmniejszonym cisnie- niem. Do tego roztworu dodaje sie przy intensywnym mieszaniu w temperaturze pokojowej 667 ml nasyoonego woda octanu etylu. Po uplywie 1-3 godzin rozpoczyna sie nastepnie krystalizacje sylibininy. Po odstaniu w ciaga nocy oddziale.sie wytracona sylibinine przez saczenie, dwu¬ krotnie przeprowadza sie w zawiesine za pomoca po 1200 ml technicznego octanu etylu w ciagu 5-10 minut, ponownie saczy 1 suszy wstepnie w ciagu 24 godzin pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze 40°C. Po zmieleniu suszy sie dodatkowo w oiagu 48 godzin w temperaturze 40°C pod zmniejszonym cisnieniem.Wydajnosc sylibininy, w odniesieniu do sylibininy w surowej sylibininle, wynosi 79 - 85!% przy zawartosci 96 - 98,5% sylibininy, zaleznie od jakosci surowej sylibininy. Kliniczne doswiadczenia z zastosowaniem sylibininy. Toksyczne uszkodzenia watroby w ostatnich dziesie¬ cioleciach spotegowaly sie nadzwyczaj silnie. Hajozestsza przyczyna uszkodzen jest nadal al¬ kohol. Przez kontrolowane studia mozna bylo wykazac wyzszosc sylibininy w porównaniu z tera¬ pia pozorna (placebo) albo innymi terapiami porównawczymi. W podwójnym studium u 66 pacjen¬ tów z alkoholotoksycznymi uszkodzeniami watroby zbadano sylibinine (n = 31) wobec placebo (n = 35) wyrywkowo. Statystycznie obliczone wyniki wykazaly, ze sylibinina znaczaco przewyz¬ sza placebo. Uderzajacy byl przy tym znacznie krótszy czas wyleczenia w porównaniu z place¬ bo. W drugim podwójnym slepym studium u 76 pacjentów, z których 39 otrzymalo sylibinine i 37 terapie kontrolna, róznice na korzysc sylibininy byly wysoce znaczace.W przypadku watrobotoksycznyoh oddzialywan narkozy w zwiazku z operacjami narzadów brzu¬ cha mozna bylo wykazac, ze przedoperacyjne podawanie sylibininy obniza znaczaca pooperacyjny wzrost enzymów watrobowych we krwi. Równiez dzis coraz ozestsze, indukowane przez okreslone srodki lecznicze uszkodzenie watroby jest skutecznie udaremnione przez sylibinine. Mozna to bylo wykazac na przykladzie indukowanej przez fenylohydantoine hepatozy, przy której pomimo dalszego przepisania niezbednie potrzebnego, zapobiegajacego drgawkom medykamentu^ przy jed-4 146 889 noczeenym podawaniu sylibininy wszystkie wartosci laboratoryjne normalizuja sie w ciagu krótkiego czasu. Dalsze badania u chorych na schizofrenie i z ciezkimi uszkodzeniami wa¬ troby przez przepisywanie chloropromazyny wykazaly równiez dodatnie dzialanie sylibininy.Inne doswiadozenia dotycza zapobiegania dzialaniom uszkadzajacym watrobe np. chlorochininy albo asparaginazy. W zawodowych uszkodzeniach watroby mozna bylo u wszystkich leczonych pacjentów znacznie polepszyc patologicznie podwyzszone wyniki badan laboratoryjnych, nie¬ zaleznie od kazdorazowej przyczyny albo mozliwych dodatkowych schorzen.Poza tym istnieje dosc wskazówek, ze sylibinina równiez przy chroniczno-zapalnyeh schorzeniach watroby i marskosci watroby wywoluje istotna poprawe. Np. pacjentów z marsko¬ scia watroby w ramach dlugotrwalego studium poddano badaniom w podwójnym slepym studium wyrywkowym, w którym badano sylibinine wobec placebo. Kryterium oceny efektu terapeutycz¬ nego stanowil przede wszystkim czas przezycia. Tutaj okazala sie wyrazna wyzszosc sylibi¬ niny w porównaniu z leozeniem placebo. Porównanie dzialania miedzy sylibinina i izosylibi- na i sylibina (mieszanina sylibininy i izosylibiny) w modelu intoksykacji falloidynowej i praze odymowej u myszy po podaniu dozylnym.Dzialanie antyhepatotoksyozne sylibininy, izosylibiny, sylibiny jako soli N-metylo- gllkaminowyoh badano w dawkach 50 i 100 mg • kg , w odniesieniu do sylibininy, w modelu zatrucia falloidynowego i prazeodymowego myszy po aplikaoji dozylnej. Aplikacje substan- oji próbnej przeprowadzono 1 godzine przed falloidyna lub 1 godzine przed i 6 godzin 24 godziny i 48 godzin po prazeodymie. Oceniono w przypadku zatrucia falloidynowego wskaz¬ nik przezycia i w przypadku zatrucia prazeodymowego rózne parametry surowicy i watroby 72 godziny po intoksykacji. W przypadku intoksykacji falloidynowej wskaznik przezycia po sylibininie wynosil w obydwóch dawkach 100%, przy zastosowaniu pozostalych substancji wskaznik przezycia nie przekroczyl wartosci 40$, jaki uzyskano u nieleczonyeh, uszkodzo¬ nych zwierzat kontrolnych. Izo sylibina okazala sie, w zwiazku z intoksykacja prazeodymowa, —1 bardziej nietolerowana, tak ze dawka 100 mg • kg musiala byc podzielona na dwie apli¬ kacje czesoiowe.Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania sylibininy o wzorze 1, nie zawierajacej izosylibiny, przy czym wy¬ suszone owoce Silybum marianum L. Gaertn. uwalnia sie od glównej ilosci tlustego oleju, rozsadzajac komórki owoców przez zastosowanie wysokiego cisnienia mechanicznego, nastep¬ nie wytloczyny zawierajace jeszcze resztkowa ilosc oleju wynoszaca 5 - 10$ poddaje sie wyczerpujacej ekstrakcji za pomoca ootanu etylu, odparowuje sie octan etylu, potem otrzy¬ mana sucha pozostalosc rozpuszcza sie w ilosci 2 procent wagowych w zlozonej z metanolu i wody podfazie trójskladnikowej mieszaniny rozpuszczalników, zlozonej z 95 czesci wago¬ wy oh metanolu, 5 czesoi wagowych wody i 100 czesci wagowych eteru naftowego o temperatu¬ rze wrzenia 40 - 60 C, usuwa sie klaczkowate czastki substancji stalej przez odwirowanie i w tym ukladzie rozpuszczalników suoha pozostalosc poddaje sie multiplikatywnemu, równo¬ miernemu rozdzielaniu w przeciwpradzie, przy czym zostaje utrzymany ogólny przeplywowy stosunek objetosciowy fazy górnej do fazy dolnej równy 1 : 1 i nastepnie z odplywajacej fazy dolnej przez odparowanie pod zmniejszonym cisnieniem do sucha wyodrebnia sie 70 - 80J5-wa mieszanine polihydroksyfenylochromanonu jako brunatnawy proszek, zna¬ mienny tym, ze brunatnawy proszek przeprowadza sie w zawiesine w 3 - 5-krotnej ilosci wagowej metanolu, a otrzymana zawiesine mieszajac ogrzewa sie do wrzenia, nastep¬ nie okolo 1/3 do 2/3 ilosci metanolu usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem, a konoentrat pozostawia sie do odstania w temperaturze pokojowej, po czym sie odsacza wytracony pro¬ dukt, przemywa go 1 - 3 razy za pomoca niewielkiej ilosci zimnego metanolu, suszy, roz¬ puszcza w 40 - 60 krotnej ilosoi wagowej ootanu etylu przy jednoczesnym ogrzewaniu i pod¬ daje obróbce za pomoca wegla aktywnego pod chlodnice zwrotna, odsacza sie od wegla aktyw¬ nego, a przesaoz zateza do okolo 1/10 pierwotnej objetosci, pod zmniejszonym cisnieniem, po czym koncentrat, przy silnym mieszaniu, zadaje sie metanolem w ilosci okolo 1/10 obje-146 889 5 tosol koncentratu i pozostawia do odstania na kilka godzin w temperaturze pokojowej, na¬ stepnie miesza sie intensywnie i odsacza na nuozy produkt, który przemywa sie dodatkowo 1-3 razy niewielka iloscia octanu etylu 1 suszy pod zmniejszonym olsnieniem. 0 CH2OH 0^W0CH3 OH 0 WZÓR 1 OH 0 WZdR 2 PL PL PL