NO331947B1 - Bifenylderivat, anvendelse derav samt farmasøytisk sammensetning omfattende forbindelsen. - Google Patents

Bifenylderivat, anvendelse derav samt farmasøytisk sammensetning omfattende forbindelsen. Download PDF

Info

Publication number
NO331947B1
NO331947B1 NO20054206A NO20054206A NO331947B1 NO 331947 B1 NO331947 B1 NO 331947B1 NO 20054206 A NO20054206 A NO 20054206A NO 20054206 A NO20054206 A NO 20054206A NO 331947 B1 NO331947 B1 NO 331947B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
hydroxy
added
compound
mixture
Prior art date
Application number
NO20054206A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20054206D0 (no
NO20054206L (no
Inventor
Mathai Mammen
Yan Chen
Sarah Dunham
Adam Hughes
Craig Husfeld
Tae Weon Lee
Eric Stangeland
Original Assignee
Theravance Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32912274&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO331947(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Theravance Inc filed Critical Theravance Inc
Publication of NO20054206D0 publication Critical patent/NO20054206D0/no
Publication of NO20054206L publication Critical patent/NO20054206L/no
Publication of NO331947B1 publication Critical patent/NO331947B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/40—Oxygen atoms
    • C07D211/44—Oxygen atoms attached in position 4
    • C07D211/46—Oxygen atoms attached in position 4 having a hydrogen atom as the second substituent in position 4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/452—Piperidinium derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/12—Mucolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/40—Oxygen atoms
    • C07D211/44—Oxygen atoms attached in position 4
    • C07D211/48—Oxygen atoms attached in position 4 having an acyclic carbon atom attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/56—Nitrogen atoms
    • C07D211/58—Nitrogen atoms attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D453/00—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids
    • C07D453/02—Heterocyclic compounds containing quinuclidine or iso-quinuclidine ring systems, e.g. quinine alkaloids containing not further condensed quinuclidine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G01N33/9406—Neurotransmitters
    • G01N33/9433—(Nor)adrenaline

Abstract

Det tilveiebringes bifenylderivater med formel I: der R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, W, a, b og c er som definert i beskrivelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller et solvat eller stereoisomer derav. Bifenylderivatene ifølge oppfinnelsen har både ß2-adrenergisk reseptoragonistaktivitet og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet, og derfor kan slike bifenylderivater benyttes for behandling av pulmonære lidelser som kronisk obstruktiv pulmonær sykdom og astma.

Description

Oppfinnelsens bakgrunn
Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår et nytt bifenylderivater som er nyttig for behandling av pulmonære forstyrrelser. Oppfinnelsen angår også farmasøytiske preparater omfattende slike bifenylderivater, samt anvendelse av slike bifenylderivater.
Teknikkens stand
Pulmonære forstyrrelser eller lidelser som astma og kronisk obstruktiv pulmonær sykdom (COPD), behandles vanligvis med bronkodilatorer. En klasse av bronkodilatorer som er i utstrakt bruk, består av P2-adrenergisk reseptor(adrenoseptor)agonister som abuterol, formoterol og salmeterol. Disse forbindelser administreres generelt ved inhalering. En annen klasse bronkodilatorer består av muskariniske reseptorantagonister (antikolinergiske forbindelser), som ipratropium og tiotropium. Disse forbindelsene administreres også typisk ved inhalering.
Farmasøytiske preparater inneholdende både en P2-adrenergisk reseptoragonist og en muskarinisk reseptoragonist er også kjent innen teknikken for behandling av pulmonære lidelser. For eksempel beskriver US patent nr. 6,433,027 medikamentsammensetninger inneholdende en muskarinisk reseptoragonist som tiotropiumbromid, og en P2-adrenergisk reseptoragonist som formoterolfumarat.
Selv om forbindelser som har enten P2-adrenergisk reseptoragonist- eller muskarinisk reseptorantagonistaktivitet er kjent, er ingen forbindelser med både P2-adrenergisk reseptoragonist- og muskarinisk reseptorantagonistvirkning, tidligere beskrevet. Forbindelser som har både P2-adrenergiske reseptoragonist- og muskarinisk reseptoragonistaktivitet er høyt ønskelige fordi slike bifunksjonelle forbindelser ville gi bronkodilatering via to uavhengige virkningsmåter med kun et enkelt molekyls farmakokinetikk.
Oppsummering av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye bifenylderivater som er nyttige for behandling av pulmonære lidelser. Blant andre egenskaper er forbindelsene ifølge oppfinnelsen funnet å ha både P2-adrenergisk reseptoragonistvirkning og muskarinisk reseptorantagonistvirkning.
I henhold til dette er oppfinnelsen i et av sine aspekter rettet mot forbindelsen bifenyl-2-ylkarbaminsyre 1 - [2-(2-klor-4- {[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-1,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester av formel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav.
I henhold til en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er den rettet mot en forbindelse bifenyl-2-ylkarbaminsyre 1 -[2-(2-klor-4- {[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-1,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl} -5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester av formel:
I et ytterligere aspekt er foreliggende oppfinnelse rettet mot en farmasøytisk sammensetning, omfattende
a) bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav; og
b) en farmasøytisk akseptabel bærer.
I henhold til en utførelsesform er oppfinnelsen kan en slik farmasøytisk
sammenssetning omfatte et ytterligere terapeutisk middel. Foretrukket er dette ytterligere terapeutiske midlet et steroidalt anti-inflammatorisk middel. Fordelaktig er det steroidale anti-inflammatoriske midlet et kortikosteroid.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen har både P2-adrenergisk reseptoragonistaktivitet og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet. I henhold til dette er forbindelsene nyttige for behandling av pulmonære lidelser som astma og kronisk obstruktiv pulmonærsykdom.
Oppfinnelsen omfatter også forbindelsen bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-1,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl} -5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, for anvendelse i terapi.
Videre omfatter oppfinnelsen bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-1,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl} -5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, for anvendelse ved behandlingen av en pulmonal sykdom.
Den pulmonale sykdommen er fortrinnsvis kronisk obstruktiv pulmonal sykdom eller astma.
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en fremgangsmåte for å tilveiebringe bronkodilatering hos en pasient der fremgangsmåten omfatter administrering til pasienten som trenger bronkodilatering av en terapeutisk effektiv mengde av den omtalte forbindelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav.
Forbindelsen kan også anvendes i en fremgangsmåte for behandling av kronisk obstruktiv pulmonær sykdom eller astma, der fremgangsmåten omfatter administrering til en pasient som trenger behandling av en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav.
Fordi forbindelsene ifølge oppfinnelsen har både P2-adrenergisk reseptoragonistaktivitet og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet, er slike forbindelser også anvendbare som forskningsverktøy. I henhold til dette kan en forbindelse med formel I eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav anvendes som et forskningsverktøy for å studere et biologisk system eller en prøve, eller for å finne nye kjemiske forbindelser med både P2-adrenergisk agonistaktivitet og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen inneholder flere basiske grupper (for eksempel aminogrupper) og derfor kan forbindelsen foreligge som fri base, eller i forskjellige saltformer. Alle slike saltformer er inkludert innen oppfinnelsens ramme. Videre ligger solvater av forbindelsen eller salter derav innenfor oppfinnelsens ramme.
Nomenklaturen som benyttes her for å navngi forbindelsen ifølge oppfinnelsen og mellomproduktene for disse, er generelt benyttet ved bruk av det kommersielt tilgjengelige AutoNom-program (MDL, San Leandro, California).
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen og også forbindelsene ifølge
sammenligningseksempler 3 og 6 er forbindelser av formel V:
der W, R<4>, R<6>og R<7>er som definert i tabell 1; eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav.
Definisjoner
Ved beskrivelse av forbindelsen, sammensetningene og anvendelsene ifølge oppfinnelsen, har de følgende termer de følgende betydninger, hvis ikke annet er antydet.
Uttrykket "alkyl" betyr en enverdig, mettet hydrokarbongruppe som kan være rett eller forgrenet. Hvis ikke annet er angitt inneholder slike alkylgrupper typisk fra 1 til 10 karbonatomer. Representative grupper er som eksempel, metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, isobutyl, tert-butyl, n-pentyl, n-heksyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n-decyl og lignende.
Uttrykket "alkylen" betyr en toverdig, mettet hydrokarbongruppe som kan være rett eller forgrenet. Hvis ikke annet er angitt inneholder slike alkylengrupper typisk fra 1 til 10 karbonatomer. Representative alkylengrupper er som eksempel metylen, etan-1,2-diyl ("etylen"), propan-1,2-diyl, propan-1,3-diyl, butan-1,4-diyl, pentan-l,5-diyl og lignende.
Uttrykket "alkoksy" betyr en enverdig gruppe med formelen (alkyl)-0-, der alkyl er som definert her. Representative alkoksygrupper er som eksempel metoksy, etoksy, n-propoksy, isopropoksy, n-butoksy, sec-butoksy, isobutoksy, tert-butoksy og lignende.
Uttrykket "alkenyl" betyr en enverdig, umettet hydrokarbongruppe som kan være rett eller forgrenet, og som har minst en, typisk 1, 2 eller 3 karbon-karbondobbeltbindinger. Hvis ikke annet er angitt inneholder slike alkenylgrupper typisk fra 2 til 10 karbonatomer. Representative alkenylgrupper inkluderer som eksempel etynyl, n-propynyl, n-but-2-ynyl, n-heks-3-ynyl og lignende. Uttrykket "alkenylen" betyr en toverdig alkenylgruppe.
Uttrykket "alkynyl" betyr en enverdig, umettet hydrokarbongruppe som kan være rett eller forgrenet og som har minst en og typisk 1,2 eller 3 karbon-karbontrippelbindinger. Hvis ikke annet er angitt, inneholder slike alkynylgrupper typisk fra 2 til 10 karbonatomer. Representative alkynylgrupper inkluderer som eksempel etynyl, n-propynyl, n-but-2-ynyl, n-heks-3-ynyl og lignende. Uttrykket "alkynylen" betyr en toverdig alkynylgruppe.
Uttrykket "cykloalkyl" betyr en enverdig, mettet, karbocyklisk hydrokarbongruppe. Hvis ikke annet er angitt, inneholder slike cykloalkylgrupper karakteristisk fra 3 til 10 karbonatomer. Representative cykloalkylgrupper inkluderer som eksempel cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl og lignende. Uttrykket "cykloalkylen" betyr en toverdig cykloalkylgruppe.
Uttrykket "halogen" betyr klor, krom, brom og iod.
Uttrykket "farmasøytisk akseptabelt salt" betyr et salt som er akseptabelt for administrering til en pasient, som et pattedyr (for eksempel salter som har akseptabel pattedyrsikkerhet for et gitt doseregime). Slike salter kan avledes fra farmasøytisk akseptable, uorganiske eller organiske baser og fra farmasøytisk akseptable uorganiske eller organiske syrer. Salter avledet fra farmasøytisk akseptable, uorganiske baser inkluderer ammonium-, kalsium-, kobber-, jern-III-, jern-II-, litium-, magnesium-, mangan-IV-, mangan-II-, kalium-, natrium-, sinksalter og lignende. Spesielt foretrukket er ammonium-, kalsium-, magnesium-, kalium- og natriumsalter. Salter avledet fra farmasøytisk akseptable, organiske baser inkluderer salter av primære, sekundære eller tertiære aminer inkludert substituerte, sykliske eller naturlig forekommende aminer og lignende som arginin, betain, koffein, kolin, N,N'-dibenzyletylendiamin, dietylamin, 2-dietylaminoetanol, 2-dimetylaminoetanol, etanolamin, etylendiamin, N-etylmorfolin, N-etylpiperidin, glucamin, glucosamin, histidin, hydrabamin, isopropylamin, lysin, metylglukamin, morfolin, piperazin, piperadin, polyaminharpikser, prokain, puriner, teobromin, trietylamin, trimetylamin, tripropylamin, trometamin og lignende. Salter avledet fra farmasøytisk akseptable syrer inkluderer fra syrer som eddik-, askorbin-, benzensulfon-, benzo-, kamfersulfon-, sitron-, etansulfon-, edisyl-, fumar-, gentisin-, glukon-, glukoron-, glutamim-, hippur-, hydrobrom-, salt-, isetion-, melke-, laktobion-, malein-, eple-, mandel-, metansulfon-, mucin-, naftalensulfon-, naftalen-1,5-disulfon-, naftalen-2,6-disulfon-, nikotin-, salpeter-, orotin, pamoin-, pantoten-, fosfor-, rav-, svovel-, vin-, p-toluensulfon-, xinafoinsyre og lignende. Spesielt foretrukket er sitron-, hydrobrom-, salt-, isetion-, malein-, naftalen-1,5-disulfon-, fosfor-, svovel- og vinsyre. Uttrykket "salt derav" betyr en forbindelse som er dannet når hydrogenet fra en syre er erstattet med et annet kation som et metallkation eller et organiske kation og lignende. Fortrinnsvis er saltet et farmasøytisk akseptabelt salt selv om dette ikke er nødvendig for salter i mellomprodukter som ikke er ment for administrering til en pasient.
Uttrykket "solvat" betyr et kompleks eller et aggregat dannet av ett eller flere molekyler av et oppløst materiale, for eksempel en forbindelse som nevnt ovenfor eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og ett eller flere molekyler av et oppløsningsmiddel. Slike solvater er typisk krystallinske faststoffer med et i det vesentlige fast molforhold mellom oppløst stoff og oppløsningsmiddel. Representative oppløsningsmidler inkluderer for eksempel vann, metanol, etanol, isopropanol, eddiksyre og lignende. Når oppløsningsmiddelet er vann, er solvatet et hydrat.
Uttrykket "terapeutisk effektiv mengde" betyr en mengde som er tilstrekkelig til å bevirke behandling ved administrering til en pasient som trenger behandling.
Uttrykket "behandling" eller tilsvarende (eller eventuelt terapi eller tilsvarende) som benyttet her, betyr behandling av en sykdom eller en medisinsk tilstand (som COPD) hos en pasient, for eksempel et pattedyr (særlig et menneske) og inkluderer: (a) å forhindre sykdommen eller den medisinske tilstand fra å opptre, det vil si profylaktisk behandling av en pasient; (b) å forbedre sykdommen eller den medisinske tilstand, det vil si å eliminere eller forårsake tilbakegang av sykdommen eller den medisinske tilstanden hos en pasient; (c) å undertrykke sykdommen eller den medisinske tilstanden, det vil si å redusere eller stanse utviklingen av sykdommen eller den medisinske tilstanden hos en pasient; eller (d) lindre symptomene på sykdommen eller den medisinske tilstanden hos en pasient.
Uttrykket "beskyttet derivat derav" betyr et derivat av den spesifiserte forbindelse der en eller flere funksjonelle grupper av forbindelsen er beskyttet mot uønskede reaksjoner ved hjelp av en beskyttende eller blokkerende gruppe. Funksjonelle grupper som kan beskyttes inkluderer for eksempel karboksylsyregrupper, aminogrupper, hydroksylgrupper, tiolgrupper, karbonylgrupper og lignende. Representative, beskyttende grupper for karboksylsyrer inkluderer estere (som p-metoksybenzylester), amider og hydrazider; for aminogrupper, karbamater (som tert-butoksykarbonyl) og amider; for hydroksylgrupper, estere og etere; for tiolgrupper, tioeter og tioestere; for karbonylgrupper, acetaler og ketaler; og lignende. Slike beskyttende grupper er velkjente for fagfolk på området og er for eksempel beskrevet hos T. W. Greene og G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, tredje utgave, Wiley, New York, 1999, og de deri angitte referanser.
Farmasøytiske preparater og formuleringer
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen administeres typisk til en pasient i form av en farmasøytisk sammensetning eller formulering. Slike farmasøytiske sammensetninger kan administreres til pasienten på en hvilken som helst akseptabel administreringsvei inkludert inhalerings-, oral-, nasal-, topisk-(inkludert transdermalt) og parenteral administrering. Det vil være klart at enhver form av forbindelsen ifølge oppfinnelse (det vil si fri base, farmasøytisk akseptabelt salt, solvat osv) som er egnet for den spesielle administreringsmåte, kan benyttes i de her beskrevne, farmasøytiske sammensetningene.
I henhold til dette er oppfinnelsen også rettet mot en farmasøytisk sammensetning omfattende en farmasøytisk akseptabel bærer eller eksipient, og en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Eventuelt kan slike farmasøytiske sammensetninger inneholde andre terapeutiske og/eller formulerende midler hvis ønskelig.
De farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen inneholder karakteristisk en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Typisk vil slike farmasøytiske sammensetninger inneholde fra rundt 0.01 til rundt 95 vekt-% av den aktive bestanddel inkludert fra rundt 0.01 til rundt 30 vekt-%, for eksempel fra rundt 0.01 til rundt 10 vekt-% av den aktive bestanddel.
En hvilken som helst konvensjonell bærer eller eksipient kan benyttes i de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen. Valget av en spesiell bærer eller eksipient, eller en kombinasjon av bærere eller eksipienter, vil avhenge av administreringsmåten som benyttes for å behandle en spesiell pasient eller en type medisinsk tilstand eller sykdomstilstand. I denne forbindelse er fremstilling av et egnet, farmasøytisk sammensetning for en spesiell administreringsmetode godt innenfor rammen av fagmannens kunnskapsområde. I tillegg er bestanddelene for slike preparater kommersielt tilgjengelige for eksempel fra Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178. Som ytterligere illustrasjon er konvensjonelle formuleringsteknikker beskrevet i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20. utgave, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); og H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7. utgave, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).
Representative eksempler på materialer som kan tjene som farmasøytisk akseptable bærere inkluderer de følgende: (1) sukkere som laktose, glukose og sukrose; (2) stivelser som maisstivelse og potetstivelse; (3) cellulose og derivater derav som natriumkarboksymetylcellulose, etylcellulose og celluloseacetat; (4) pulverformet tragakant; (5) malt; (6) gelatin; (7) talkum; (8) eksipienter som kakaosmør og suppositorievoks; (9) olje som jordnøtt-, bomulsfrø-, safran-, sesam-, oliven- og mais-eller sojabønneolje; (10) glykoler som propylenglykol; (11) polyoler som glycerol, sorbitol, mannitol og polyetylenglykol; (12) estere som etyloleat og etyllaurat, (13) agar; (14) buffermidler som magnesiumhydroksid og aluminiumhydroksid; (15) alginsyre; (16) pyrogenfritt vann; (17) isotonisk saltoppløsning; (18) Ringers oppløsning; (19) etylalkohol; (20) fosfatbufferoppløsninger; (21) komprimerte drivgasser som klorfluorkarboner og hydrofluorkarboner og (22) andre ikke-toksiske, kompatible stoffer som benyttes i farmasøytiske preparater.
De farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen fremstilles typisk ved grundig og intim blanding eller miksing av forbindelsen ifølge oppfinnelsen med en farmasøytisk akseptabel bærer og en eller flere valgfrie bestanddeler. Hvis nødvendig eller ønskelig kan den enhetlige blandede blanding formgis eller fylles til tablett, kapsler, piller, kanistere, patroner, dispensere og lignende ved bruk av konvensjonelle prosedyrer og utstyr.
I en mulig utførelsesform er den farmasøytiske sammensetningen ifølge oppfinnelsen egnet for inhaleringsadministrering. Slike farmasøytiske sammensetninger for inhalering vil karakteristisk foreligge i form av en aerosol eller et pulver. Slike sammensetninger administreres generelt ved bruk av velkjente avleveringsinnretninger som en forstøverinhalator, en utmålt doseinhalator (MDI), en tørrpulveirnhalator (DPI) eller tilsvarende innretninger.
I en spesiell anvendelse av oppfinnelsen blir den farmasøytiske sammensetningen, omfattende den aktive bestanddel, administrert ved inhalering ved bruk av en forstøver. Slike forstøverinnretninger produserer karakteristisk en strøm av høyhastighetsluft som forårsaker at den farmasøytiske sammensetningen med det aktive middel sprayer en tåke som bæres inn i pasientens luftveier. Ved tilsvarende formulering for anvendelse i en forstøver, blir det aktive middel karakteristisk oppløst i en egnet bærer for å gi en oppløsning. Alternativt kan det aktive middel mikroniseres og kombineres med en egnet bærer, for å danne en suspensjon av mikroniserte partikler med respirerbar størrelse der størrelsen karakteristisk defineres til å ha rundt 90% eller flere av partikler med en diameter mindre enn 10 um. Egnede forstøverinnretninger er kommersielt tilgjengelige, for eksempel fra Pari GmbH (Starnberg, Tyskland). Andre forstøverinnretninger inkluderer respimat, og er for eksempel beskrevet i US patentnr. 5,123,068 og WO 97/12687.
Et representativt, farmasøytisk preparat for bruk i en forstøveirnhalator omfatter en isotonisk, vandig oppløsning omfattende fra rundt 0.05 ug/ml til rundt 10 mg/ml av forbindelsen ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat eller en stereoisomer derav.
I en annen, mulig utførelsesform av oppfinnelsen, blir den farmasøytiske sammensetningen omfattende det aktive middel administrert ved inhalering ved bruk av en tørrpulverinhalator. Slike tørrpulverinhalatorer administrerer typisk det aktive middel som et fritt rislende pulver som dispergeres i pasientens luftstrøm ved innånding. For å oppnå et frittrislende pulver blir det aktive middel typisk formulert med en egnet eksipient som laktose eller stivelse.
En representativ, farmasøytisk sammensetning for bruk i en tørrpulverinhalator omfatter tørr laktose med en partikkelstørrelse mellom 1 nm og rundt 100 um, og mikroniserte partikler av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller et solvat derav.
Slike tørrpulverformuleringer kan for eksempel oppnås ved å kombinere laktosen med de aktive middel, og så tørrblanding av komponentene. Alternativt og hvis ønskelig, kan det aktive middel formuleres uten eksipient. Den farmasøytiske sammensetningen blir så typisk fylt i en tørrpulverdispenser eller i inhaleringspatroner eller -kapsler for bruk med en tørrpulveravleveringsinnretning.
Eksempler på tørrpulverinhalatoravleveringsinnretninger inkluderer Diskhaler (GlaxoSmithKline, Research Triangle Park, NC) (se for eksempel US patentnr.
5,035,237); Diskus (GlaxoSmithKline) (se for eksempel US patentnr. 6,378,519; Turbuhaler (AstraZeneca, Wilmington, DE) (se for eksempel US patentnr. 4,524,769); Rotahaler (GlaxoSmithKline) (se for eksempel US patentnr. 4,353,365) og Handihaler (Boehringer Ingelheim).Ytterligere eksempler på egnede DPI-innretninger er beskrevet i US patentnr. 5,415,162, 5,239,993 og 5,715,810 og i de deri angitte referanser.
I nok en annen spesifikk utførelsesform av oppfinnelsen blir den farmasøytiske sammensetningen omfattende det aktive middelet administrert ved inhalering ved bruk av en inhalator med tilmålt dose. Slike inhalatorer med tilmålte doser slipper karakteristisk ut en tilmålt mengde av det aktive middel, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav ved bruk av en komprimert drivgass. I henhold til dette omfatter farmasøytiske preparater som administreres ved bruk av inhalatorer med tilmålt dose, en oppløsning eller suspensjon av det aktive middel i et flytendegjort drivmiddel. Ethvert egnet flytendegjort drivmiddel kan benyttes inkludert klorfluorkarboner som CCI3F, og hydrofluoralkaner (HFAs), som 1,1,1,2-tetrafluoretan (HFA 134a) og 1,1,1,2,3,3,3-heptafluor-w-propan, (HFA 227). På grunn av bekymringer når det gjelder klorfluorkarboner og deres påvirkning på ozonlaget, er formuleringer inneholdende HFA generelt foretrukket. Ytterligere, eventuelle komponenter i HFA-formuleringer inkluderer medoppløsningsmidler som etanol eller pentan, og surfaktanter som sorbitantrioleat, oljesyre, lecitin og glycerin. Se for eksempel US patentnr. 5,225,183, EP 0717987 A2 og WO 92/22286.
En representativ, farmasøytisk sammensetning for bruk i en inhalator med tilmålt dose omfatter rundt 0.01 til rundt 5 vekt-% av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller et solvat derav, fra rundt 0 til rundt 20 vekt-% etanol og fra rundt 0 til rundt 5 vekt-% surfaktant, idet resten er et HF A-drivmiddel.
Slike sammensetninger fremstilles typisk ved å sette avkjølt eller trykksatt hydrofiuoralkan til en egnet beholder inneholdende det aktive middel, eventuelt etanol og eventuelt surfaktant. For å fremstille en suspensjon blir det aktive middel mikronisert og så kombinert med drivmiddelet. Formuleringen blir så fylt igjen av aerosolbeholder som utgjør en del av en inhalatorinnretning for tilmålt dose. Eksempler på inhalatorer for tilmåte dose, utviklet spesielt for bruk med HFA-drivmidler, finnes i US patentnr. 6,006,745 og 6,143,277. Alternativt kan en suspensjonsformulering fremstilles ved spraytørking av et belegg av surfaktant på mikroniserte partikler av det aktive middel. Se for eksempel WO 95/53901 og WO 00/61108.
For ytterligere eksempler på fremgangsmåter for fremstilling av innåndbare partikler og formuleringer og innretninger som er egnet for inhalerindsdosering henvises til US patentnr. 6,268,544, 5,983,956, 5,874,063 og 6,221,398, og WO 99/55319 og WO 00/30614.
I en annen utførelsesform er de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen egnet for oral administrering. Egende, farmasøytiske sammensetninger for oral administrering kan foreligge i form av kapsler, tabletter, piller, sugetabletter, pulverkapsler, drageer, pulvere, granuler; eller som en oppløsning eller en suspensjon i en vandig eller ikke-vandig væske; eller som en olje-i-vann- eller vann-i-olje-emulsjon eller som en eliksir eller sirup; og lignende, hver inneholdende en på forhånd bestemt mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen som en aktiv bestanddel.
Ved tilsiktet oral administrering i en fast doseringsform (det vil si som kapsler, tabletter, piller og lignende) vil de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen omfatte forbindelsen ifølge oppfinnelsen som aktiv bestanddel, og en eller flere farmasøytisk akseptable bærere, for eksempel natriumsitrat eller dikalsiumfosfat. Eventuelt eller alternativt kan slike faste doseringsformer også omfatte: (1) fyllstoffer eller drøyemidler som stivelse, laktose, sukrose, glukose, mannitol og /eller kieselsyre; (2) bindemidler som karboksymetylcellulose, alginater, gelatin, polyvinylpyrrolidon, sukrose og/eller akasia; (3) fuktemidler som glycerol; (4) desintegranter som agar-agar, kalsiumkarbonat, potet- eller tapiokastivelse, alginsyre, visse silikater og/eller natriumkarbonat; (5) oppløsningsforsinkende midler som paraffin; (6) absorpsjonsakseleratorer som kvaternære ammoniumforbindelser; (7) fuktemidler som cetylalkohol og/eller monostearat; (8) absorbenter som kaolin og/eller bentonittleire, (9) smøremidler som talkum, kalsiumstearat, magnesiumstearat, fast polyetylenglykol, natriumlaurylsulfat og/eller blandinger derav; (10) fargestoffer og (11) buffere.
Slippmidler, fuktemidler, beleggingsmidler, søtningsstoffer, smaksstoffer og duftstoffer, konserveringsmidler og antioksidanter kan også være tilstede i de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen. Eksempler på farmasøytisk akseptable antioksidanter er: (1) vannoppløselige antioksidanter som askorbinsyre, cysteinhydroklorid, natriumbisulfat, natriummetabisulfat, natriumsulfitt og lignende; (2) oljeoppløselige antioksidanter som askorbylpalmitat, butylert hydroksyanisol (BHA), butylert hydroksytoluen (BHT), lecitin, propylgallat, a-tokoferol og lignende og (3) metallgelaterende midler som sitronsyre, etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), sorbitol, vinsyre, fosforsyre og lignende. Beleggingsmidler for tabletter, kapsler, piller og lignende inkluderer de som benyttes for enteriske belegg, for eksempel celluloseacetatftalat (CAP), polyvinylacetatftalat (PVAP), hydroksypropyl metylcelluloseftalat, metakrylsyre metakrylsyreesterkopolymerer, celluloseacetat trimellitat (CAT), karboksymetyl etylcellulose (CMEC), hydroksypropyl metylcelluloseacetatsuksinat (HPMCAS) og lignende.
Hvis ønskelig kan den farmasøytiske sammensetningen ifølge oppfinnelsen også formuleres for å gi langsom eller kontrollert frigivelse av den aktive bestanddel ved bruk av for eksempel hydroksypropylmetylcellulose i varierende andeler; eller andre polymermatriser, liposomer og/eller mikrosfærer.
I tillegg kan de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen eventuelt inneholde opasitetsgivende midler, og kan formuleres slik at de frigir den aktive bestanddelen først eller preferensielt i en viss del av fordøyelseskanalen, eventuelt på forsinket måte. Eksempler på innleiringspreparatet som kan benyttes er polymere stoffer og vokser. Den aktive bestanddel kan også foreligge i mikroinnkapslet form, for eksempel med en eller flere av de ovenfor beskrevne eksipienter.
Egnede, flytende doseringsformer for oral administrering inkluderer som illustrasjon farmasøytiske akseptable emulsjoner, mikroemulsjoner, oppløsninger, suspensjoner, siruper og eliksirer. Slike flytende doseringsformer omfatter typisk en aktiv bestanddel, og et inert fortynningsmiddel som for eksempel vann eller andre oppløsningsmidler, oppløseliggjørende midler og emulgatorer som metylalkohol, isopropylalkohol, etylkarbonat, etylacetat, benzylalkohol, benzylbenzoat, propylenglykol, 1,3-butylenglykol, olje (særlig bomullsfrø-, jordnøtt-, mais-, germ-, oliven-, risinus- og sesamolje), glycerol, tetrahydrofurylalkohol, polyetylenglykol og fettsyreestere av sorbitan og blandinger derav. Suspensjoner kan, i tillegg til den aktive bestanddel, inneholde suspendeirngsmidler som for eksempel etoksylerte isostearylalkoholer, polyoksyetylensorbitol og sorbitanestere, mikrokrystallinsk cellulose, aluminium metahydroksid, bentonitt, agar-agar og tragakant og blandinger derav.
Ment for oral administrering, er den farmasøytiske sammensetningen ifølge oppfinnelsen fortrinnsvis pakket i enhetsdoseform. Uttrykket "enhetsdoseform" betyr en fysisk diskret enhet, egnet for dosering til en pasient, det vil si at hver enhet inneholder en på forhånd bestemt mengde aktiv bestanddel, beregnet for å gi den ønskede, terapeutiske effekt, enten alene eller i kombinasjon med en eller flere ytterligere enheter. For eksempel kan slike enhetsdoseringsformer være kapsler, tabletter, piller og lignende.
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan også administreres transdermalt ved bruk av kjente, transdermale avleveringssystemer og eksipienter. For eksempel kan forbindelsen ifølge oppfinnelsen blandes med gjennomtrengningsforsterkende midler som propylenglykol, polyetylenglykolmonoleurat, azacykloalkan-2-oner og lignende, og innarbeides i en pute eller et tilsvarende avleveringssystem. Ytterligere eksipienter inkludert geldannelsesmidler, emulgatorer og buffere, kan benyttes i slike transdermale sammensetninger hvis ønskelig.
De farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan også inneholde andre, terapeutiske midler som samadministreres med forbindelsen ifølge oppfinnelsen , eller farmasøytisk akseptable salter eller et solvat derav. For eksempel kan den farmasøytiske sammensetningen ifølge oppfinnelsen videre omfatte ett eller flere terapeutiske midler valgt fra blant andre bronkodilatorer (for eksempel PDE3-inhibitorer, adenosin 2b-modulatorer og pVadrenergiske reseptoragonister); antiinflammatoriske midler (for eksempel steroidale anti-inflammatoriske midler som kortikostereoider; ikke-stereoidale antiinflammatoriske midler (NSAID'er) og PDE4-inhibitorer); andre muskariniske reseptorantagonister (for eksempel antikolinergiske midler); antiinfektive midler (for eksempel Gram positive og Gram negative antibiotika og antivirale midler); antihistaminer; proteaseinhibitorer og afferente blokkere (for eksempel D2-agonister og neurokininmodulatorer). De andre farmasøytiske midler kan benyttes i form av farmasøytisk akseptable salter eller solvater. I tillegg, og hvis hensiktsmessig, kan de andre terapeutiske midler benyttes som optiske, rene stereoisomerer.
Representative P-adrenergiske reseptoragonister som kan benyttes i forbindelse med, og i tillegg til, forbindelsen ifølge oppfinnelsen, inkluderer salmeterol, salbutamol, formoterol, salmefamol, fenoterol, terbutalin, albuterol, isoetarin, metaproterenol, bitolterol, pirbuterol, levalbuterol og lignende, eller farmasøytiske akseptable salter derav. Andre P2-adrenergiske reseptoragonister som kan benyttes i forbindelse med forbindelsen ifølge oppfinnelsen, inkluderer 3-(4-{[6-({(2R)-2-hydroksy-2-[4-hydroksy-3-(hydroksymetyl)-fenyl]etyl} amino)-heksyl]oksy}butyl)benzensulfonamid og 3-(-3-{[7-({(2R)-2-hydroksy-2-[4-hydroksy-3-(hydroksymetyl)fenyl]etyl}-amino)heptyl]oksy}-propyl)benzensulfonamid og beslektede forbindelser som beskrevet i WO 02/066422, publisert 29. august 2002; 3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-hydroksy-2-[4-hydroksy-3-(hydroksymetyl)fenyl]etyl}amino)heksyl]oksy}butyl)- fenyl]imidazolidin-2,4-dion og beslektede forbindelser som beskrevet i WO 02/070490, publisert 12. september 2002; 3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(formylamino)-4-hydroksyfenyl]-2-hydroksyetyl}amino)heksyl]oksy}butyl)-benzensulfonamid, 3-(4- {[6-({(2S)-2-[3-(formylamino)-4-hydroksyfenyl]-2-hydroksyetyl}amino)heksyl]oksy}butyl)-benzensulfonamid, 3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(formylamino)-4-hydroksyfenyl]-2-hydroksyetyl}amino)heksyl]oksy}butyl)-benzensulfonamid, N-(terr-butyl)-3-(4-{[6-({(2R)-2- [3 -(formylamino)-4-hydroksyfenyl] -2 -hydroksy etyl} amino)heksyl] - oksy}butyl)benzensulfonamid, N-( tert- butyl)- 3-( 4- {[6-( {(2S)-2-[3-(formylamino)-4-hydroksyfenyl]-2-hydroksyetyl}amino)-heksyl]oksy}butyl)-benzensulfonamid, 7V-(/er/- butyl)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(formylamino)-4-hydroksyfenyl]-2-hydroksyetyl}amino)heksyl]-oksy}butyl)benzensulfonamid og beslektede forbindelser som beskrevet i WO 02/076933, publisert 3. oktober 2002; 4-{(lR)-2-[(6-{2-[(2,6-diklorobenzyl)oksy]etoksy}heksyl)ammo]-l-hydroksyetyl}-2-(hydroksymetyl)fenol og beslektede forbindelser som beskrevet i WO 03/024439, publisert 27. mars 2003; og farmasøytisk akseptable salter derav. Når de anvendes vil pVadrenoreseptoragonisten være tilstede i den farmasøytiske sammensetningen i en terapeutisk effektiv mengde. Typisk vil pVadrenoreseptoragonisten være tilstede i en mengde tilstrekkelig til å gi fra rundt 0.05 ug til rundt 500 ug per dose.
Representative, steroide, antiiflammatoriske midler som kan benyttes i kombinasjon med forbindelsene ifølge oppfinnelsen, inkluderer metylprednisolon, prednisolon, deksametason, flutikasonpropionat, 6,9-difluoro-17 -[(2-furanylkarbonyl)oksy]-ll-hydroksy-16-metyl-3-oksoandrosta-l ,4-dien-17-karbotioinsyre S-fluorometylester, 6,9-difluoro-11-hydroksy-16 -metyl-3-okso-17 -propionyloksy- androsta-l,4-dien-17-karbotionsyre 5'-(2-okso-tetrahydrofuran-3S-yl) ester, beclometasonestere (for eksempel 17-propionatesteren eller 17,21-dipropionatesteren), budesonid, flunisolid, mometasonesteren (for eksempel furoatesteren), triamcinolonacetonid, rofleponid, ciclesonid, butiksokortpropionat, RPR-106541, ST-126 og lignende, eller farmasøytisk akseptable salter derav. Når benyttet, vil det stereoidale, antiinflammatoriske middel være tilstede i den farmasøytiske sammensetningen i en terapeutisk effektiv mengde. Typisk vil det stereoidale, antiinflammatoriske middel være tilstede i en mengde tilstrekkelig til å gi fra rundt 0.05 ug til rundt 500 ug per dose.
Andre egnede kombinasjoner inkluderer for eksempel andre inflammatoriske midler, for eksempel NSAID'er (slik som natriumkromoglykat; nedokromilnatrium; fosfodiesterase(PDE)inhibitorer (for eksempel teofyllin, PDE4-inhibitorer eller blandet PDE3/PDE4-inhibitorer); leukotrienantagonister (for eksempel monteleukast); inihibitorer av leukotriensyntese; iNOS-inhibitorer; proteaseinhibitorer som tryptase- og elastaseinhibitorer; p-2-integrinantagonister og adenosinreseptoragonister eller - antagonister (for eksempel adenosin 2a-agonister); cytokinantagonister (for eksempel kjemokinantagonister som et interleukinantistoff (IL-antistoff), spesifikt en IL-4-terapi, en IL-13-terapi eller en kombinasjon derav) eller inhibitorer av sytokinsyntese.
For eksempel inkluderer representative fosfordiesterase-4(PDE4)inhibitorer eller blandede PDE3/PDE4-inhibitorer som kan benyttes i kombinasjon med forbindelsen ifølge oppfinnelsen cis 4-cyano-4-(3-cyklopentyloksy-4-metoksyfenyl)cykloheksan-l-karboksylsyre, 2-karbometoksy-4-cyano-4-(3-cyklopropylmetoksy-4-difluorometoksyfenyl)cykloheksan-1 -on; cis- [4-cyano-4-(3 -cyklopropylmetoksy-4-difluorometoksyfenyl)cykloheksan-1 -ol]; cw-4-cyano-4-[3-(cyklopentyloksy)-4-metoksyfenyl]cykloheksan-l-karboksylsyre og lignende, eller farmasøytisk akseptable salter derav. Andre representative PDE4- eller blandede PDE4/PDE3-inhibitorer inkluderer AWD-12-281 (elbion); NCS-613 (INSERM); D-4418 (Chiroscience and Schering-Plough); CI-1018 eller PD-168787 (Pfizer); benzodioksolforbindelser som beskrevet i W099/16766 (Kyowa Hakko); K-34 (Kyowa Hakko); V-l 1294A (Napp); roflumilast (Byk-Gulden); ftalazinonforbindelser som beskrevet i WO99/47505 (Byk-Gulden); Pumafentrin (Byk-Gulden, nå Altana); arofyllin (Almirall-Prodesfarma); VM554/UM565 (Vernalis); T-440 (Tanabe Seiyaku) og T2585 (Tanabe Seiyaku).
Representative muskariniske antagonister (det vil si antikolinergiske midler) som kan benyttes i kombinasjon med, og i tillegg til forbindelsen ifølge oppfinnelsen, inkluderer, atropin, atropinsulfat, atropinoksid, metylatropinnitrat, homatropinhydrobromid, hyoscyamin { d, l) hydrobromid, skopolaminhydrobromid, ipratropiumbromid, oksitropiumbromid, tiotropiumbromid, metantelin, propantelinbromid, anisotropin metylbromid, klidiniumbromid, copyrrolat (Robinul), isopropamidiodid, mepenzolatbromid, tridiheksetylklorid (Pathilone), heksocykliummetylsulfat, cyklopentolat hydroklorid, tropikamid, triheksyfenidyl hydroklorid, pirenzepin, telenzepin, AF-DX 116 og metoktramin og lignende, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav; eller for de forbindelser som er angitt som et salt, et alternativt farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Representative antihistaminer (det vil si Hi-reseptorantagonister) som kan benyttes i kombinasjon med forbindelsen ifølge oppfinnelsen, inkluderer etanolaminer som karbinoksaminmaleat, klemastinfumarat, difenylhydraminhydroklorid og dimenhydrinat; etylendiaminer, som pyrilaminmaleat, tripelennamin hydroklorid og tripelennaminesitrat; alkylaminer, som klorfeniramin og akrivastin; piperaziner, som hydroksyzin hydroklorid, hydroksyzinpamoat, cyklizin hydroklorid, cyklizinlaktat, meclizinhydroklorid og cetirizin hydroklorid; piperidiner, som astemizol, levokabastin hydroklorid, loratadin eller dets deskarboetoksyanalog, terfenadin og feksofenadin hydroklorid, azelastinhydroklorid og lignende, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav; eller, når det gjelder de forbindelser som er angitt som et salt, et alternativt farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Egnede doser for de andre terapeutiske midler som administreres i kombinasjon med forbindelsen ifølge oppfinnelsen, ligger innen området 0.05 g/dag til rundt 100 mg/dag.
De følgende formuleringer illustrerer representative, farmasøytiske preparater ifølge oppfinnelsen:
Formuleringseksempel A
Et tørrpulver for administrering ved inhalering fremstilles som følger:
Representativ prosedyre; Forbindelsen ifølge oppfinnelsen mikroniseres og blandes så med laktose. Denne blanding fylles så i en gelatininhaleringspatron. Innholdet i patronen administreres ved bruk av en pulverinhalator.
Formuleringseksempel B
En tørrpulverformulering for anvendelse i en tørrpulverinhaleringsinnretning fremstilles som følger: Representativ prosedyre; En farmasøytisk sammensetning fremstilles med et masseformuleringsforhold mikronisert forbindelse ifølge oppfinnelsen:laktose på 1:200. Forbindelsen pakkes i en tørrpulverinhaleringsinnretning som kan avgi mellom 10 ug og rundt 100 ug av forbindelsen ifølge oppfinnelsen per dose.
Formuleringseksempel C
Et tørrpulver for administrering ved inhalering i en inhalator for tilmålt dose fremstilles som følger: Representativ prosedyre: En suspensjon inneholdende 5 vekt-% av forbindelsen ifølge oppfinnelsen og 0.1 vekt-% lecitin fremstilles ved å dispergere 10 g av forbindelsen ifølge oppfinnelsen som mikroniserte partikler med midlere størrelser mindre enn 10 Hm i en oppløsning tildannet fra 0.2 g lecitin oppløst i 200 ml demineralisert vann. Suspensjonen spraytørkes, og det resulterende materialet mikroniseres til partikler med midlere dimeter mindre enn 1.5 um. Partiklene fylles i patroner med trykksatt 1,1,1,2-tetrafluormetan.
Formuleringseksempel D
Et farmasøytisk preparat for anvendelse i en inhalator for tilmålt dose fremstilles som følger: Representativ prosedyre: En suspensjon inneholdende 5% forbindelse ifølge oppfinnelsen, 0.5% lecitin og 0.5% trehalose fremstilles ved å dispergere 5 g aktiv bestanddel som mikroniserte partikler med midlere størrelse mindre enn 10 um i en kolloidoppløsning dannet fra 0.5 g trehalose og 0.5 g lecitin oppløst i 100 ml demineralisert vann. Suspensjonen spraytørkes og det resulterende materiale mikroniseres til partikler med en midlere diameter mindre enn 1.5 um. Partiklene fylles i beholdere med trykksatt 1,1,1,2-tetrafluoretan.
Formuleringseksempel E
Et farmasøytisk preparat for bruk i en forstøvningsinhalator fremstilles som følger: Representativ prosedyre: En vandig aerosolformulering for anvendelse i en forstøver fremstilles ved å oppløse 0.1 mg av forbindelsen i 1 ml av 0.9% natriumkloridoppløsning, surgjort med sitronsyre. Blandingen omrøres og ultralydbehandles inntil den aktive bestanddel er oppløst. pH-verdien i oppløsningen justeres til en verdi i området fra 3 til 8 ved langsom tilsetning av NaOH.
Formuleringseksempel F
Hardgelatinkapsler for oral administrering fremstilles som følger:
Representativ prosedyre: Bestanddelene blandes grundig og fylles så i hardgelatinkapsler (460 mg preparat per kapsel).
Formuleringseksempel G
En suspensjon for oral administrering fremstilles som følger:
Representativ prosedyre: Bestanddelen blandes for å danne en suspensjon inneholdende 100 mg aktiv bestanddel per 10 ml suspensjon.
Formuleringseksempel H
Injiserbar formulering fremstilles som følger:
Representativ prosedyre: Bestanddelene ovenfor blandes og pH-verdien justeres til 4 ± 0.5 ved bruk av 0.5 N HC1 eller 0.5 N NaOH.
Anvendelighet
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen har både p2-adrenergisk reseptoragonist- og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet, og er derfor nyttig for behandling av medisinske tilstander mediert ved P2-adrenergiske reseptorer eller muskariniske reseptorer, det vil si medisinske tilstander som forbedres ved behandling med en p2-adrenergisk reseptoragonist eller en muskarinisk reseptorantagonist. Slike medisinske tilstander inkluderer, som eksempel, pulmonære forstyrrelser eller sykdommer assosiert med reversibel luftveisobstruksjon som kronisk obstruktiv pulmonærsykdom (for eksempel kronisk eller "wheezy" bronkitt og emfysem), astma, pulmonær fibrose og lignende. Andre tilstander som kan behandles inkluderer for tidlige veer, depresjon, kongestiv hjertesvikt, hudsykdommer (for eksempel inflammatoriske, allergiske, psoriasis- og proliferative hudsykdommer), tilstander der en senking av den peptiske aktivitet er ønskelig (for eksempel peptiske og gastriske ulcere) og muskelsvinnsykdommer.
Foreliggende oppfinnelse kan anvendes i forbindelse med en fremgangsmåte for behandling av en pulmonær lidelse, der metoden omfatter administrering til en pasient som trenger det av en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller et solvat derav. Ved anvendelse for å behandle en pulmonær lidelse, vil forbindelsen ifølge oppfinnelsen karakteristisk administreres ved inhalering i flere doser per dag, i en enkel daglig dose eller en enkelt ukentlig dose. Generelt vil dosen for behandling av pulmonær lidelse ligge i området fra rundt 10 ug/dag til rundt 200 ug/dag.
Administrert ved inhalering vil forbindelsen ifølge oppfinnelsen karakteristisk bevirke en bronkodilasjon. Forbindelsen kan følgelig anvendes i en fremgangsmåte for å tilveiebringe bronkodilatering hos en pasient der fremgangsmåten omfatter administrering til en pasient som trenger bronkodilatering av en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav. Generelt vil dosen for å tilveiebringe bronkodilatering ligge fra rundt 10 ug/dag til rundt 200 ug/dag.
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan også anvendes i en fremgangsmåte for behandling av kronisk, obstruktiv pulmonær sykdom eller astma som omfatter administrering til en pasient som trenger behandling av en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav. Ved anvendelse for behandling av COPD eller astma, vil forbindelsen ifølge oppfinnelsen typisk administreres ved inhalering i et antall doser per dag eller i en enkelt daglig dose. Generelt vil dosen for behandling av COPD eller astma, ligge fra rundt 10 ug/dag til rundt 200 ug/dag.
Som benyttet her inkluderer COPD kronisk obstruktiv bronkitt og efysem (se for eksempel Barnes, Chronic Obstructive Pulmonary Disease, NEngl J Med 2000: 343:269-78).
Ved anvendelse for å behandle en pulmonær lidelse, vil forbindelsen ifølge oppfinnelsen eventuelt administreres i kombinasjon med andre, terapeutiske midler. Ved særlig å kombinere forbindelsen ifølge oppfinnelsen med et steroid antiinflammatorisk middel (for eksempel et kortikosteroid), kan den farmasøytiske sammensetningen ifølge oppfinnelsen gi trippelterapi, nemlig p2-adrenergisk reseptoragonist-, muskarinisk reseptorantagonist- og antiinflammatorisk aktivitet, ved bruk av kun to aktive komponenter. Fordi farmasøytiske sammensetningene som inneholder to aktive komponenter typisk er lettere å formulere sammenlignet med preparater inneholdende tre aktive komponenter, gir slike tokomponentpreparater vesentlig fordel i forhold til preparater som inneholder tre aktive komponenter.
Forbindelsen ifølge oppfinnelsen viser både muskarinisk reseptorantagonist- og p2-adrenegisk reseptoragonistaktivitet. I henhold til dette er blant andre egenskaper, denne forbindelsen av spesiell interesse ettersom den viser en inhibitorisk konstant K;-verdi for binding ved den M3-muskariniske reseptor og en ECso-verdi for den p2-adrenergiske reseptoragonistaktivitet på mindre enn rundt 100 nM; særlig mindre enn 10 nM. Foreliggende oppfinnelse kan også finne anvendelse ved en fremgangsmåte for behandling av en pulmonær forstyrrelse som omfatter administrering til en pasient som trenger behandling av en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen med både muskarinisk reseptorantagonist- og p2-adrenergiske reseptoragonistaktivitet. I en spesiell utførelsesform av denne fremgangsmåten, har den administrerte forbindelse en inhibitorisk konstant K; for den M3-muskariniske reseptor som er mindre enn rundt 100 nm og en halvmaksimal effektiv konsentrasjon EC50for agonisme på den p2-adrenergiske reseptor som er mindre enn rundt 100 nm. I en annen utførelsesform omfatter metoden for behandling av en pulmonær lidelse administrering av en terapeutisk effektiv mengde av forbindelsen for hvilken forholdet mellom den inhibitoriske konstant K; for den M3-muskariniske reseptor og EC50for agonismen av den p2-adrenergiske reseptor er mellom rundt 30:1 og rundt 1:30.
Fordi forbindelsen ifølge oppfinnelsen har både p2-adrenergisk agonistaktivitet og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet, er forbindelsen også nyttig som forskningsverktøy for å undersøke eller studere biologiske systemer eller prøver med p2-adrenergiske reseptorer eller muskariniske reseptorer, eller for å finne nye forbindelser med både p2-adrenergisk agonistaktivitet og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet. Slike biologiske systemer eller prøver kan omfatte p2-adrenergiske reseptorer og/eller muskariniske reseptorer. Et hvilket som helst egnet, biologisk system eller prøve med p2-adrenergiske og/eller muskariniske reseptorer, kan benyttes i slike studier som kan gjennomføres enten in vivo eller in vitro. Representative, biologiske systemer eller prøver som er egnet for slike studier inkluderer celler, celleekstrakter, plasmamembraner, vevsprøver, pattedyr (som mus, rotter, marsvin, kaniner, hunder, griser osv) og lignende.
I denne utførelsesform blir et biologisk system eller en prøve omfattende en p2-adrenergisk reseptor eller en muskarinisk reseptor bragt i kontakt med en p2-adrenergisk reseptoragoniserende eller muskarinisk reseptorantagoniserende mengde av forbindelsen ifølge oppfinnelsen. Effektene bestemmes så ved bruk av konvensjonelle prosedyrer og utstyr som radioligand bindingsanalyser og funksjonelle analyser. Slike funksjonelle analyser inkluderer ligandmedierte forandringer i intracellulært syklisk adenosinmonofosfat (cAMP), ligandmedierte forandringer i aktiviteten av enzymet adenylylcyklase (som syntetiserer cAMP), ligandmedierte forandringer ved inkorporering av guanosin 5'-0-( -tio)trifosfat ([ S]GTP S) i isolerte membraner via reseptorkatalysert ubtytting av [<35>S]GTP S mot GDP, ligandmedierte forandringer i frie, intracellulære kalsiumioner (målt for eksempel med en fluoressenslignende billedplateleser eller FLIPR<®>fra Molecular Devices, Inc.). En forbindelse ifølge oppfinnelsen vil agonisere eller forårsake aktivering av en p2-adrenergisk reseptor og antagonisere eller redusere aktiveringen av muskariniske reseptorer i en hvilken som helst av de funksjonelle analyser som er oppsummert ovenfor, eller analyser av tilsvarende art. Mengden av forbindelsen som benyttes i disse studier, vil typisk ligge fra rundt 0.1 nanomolar til rundt 100 nanomolar.
I tillegg kan forbindelsen ifølge oppfinnelsen benyttes som forskningsverktøy for å finne nye forbindelser som har både pVadrenergiske reseptoragonist- og muskarinisk reseptorantagonistaktivitet. I denne utførelsesform sammenlignes P2-adrenergiske reseptor- og muskariniske reseptorbindingsdata (for eksempel som bestemt ved en in v/7ro-radioligandfortrengningsanalyse) for en testforbindelse eller en gruppe testforbindelser, med de P2-adrenergiske reseptor- og muskariniske reseptorbindingsdata med forbindelsen ifølge oppfinnelsen for å identifisere de testforbindelser som har omtrent lik eller overlegen p2-adrenergisk reseptor- og/eller muskarinisk reseptorbinding, hvis overhode. Dette aspekt ved oppfinnelsen inkluderer, som separate utførelsesformer, både generering av sammenligningsdata (ved bruk av egnede analyser) og analyse av testdata for å identifisere testforbindelsene av interesse.
Egenskapene og anvendeligheten for forbindelsen ifølge oppfinnelsen, kan påvises ved bruk av tallrike in vitro- og in v/vo-analyser som er velkjente for fagmannen. For eksempel er representative analyser beskrevet i større detalj i de følgende eksempler.
EKSEMPLER
Følgende fremstillinger og eksempler tilveiebringes for å illustrere spesifikke utførelsesformer av oppfinnelsen.
De følgende forkortelser har de følgende betydninger hvis ikke annet er antydet, og enhver annen forkortelse som benyttes her, og som ikke er definert, har den vanlige betydning:
AC adenylylcyklase
Ach acetylkolin
ATCC American Type Culture Collection
BSA bovint serumalbumin
cAMP 3'-5' cyklisk adenosinmonofosfat CHO kinesisk hamsterovarie
cM5klonet sjimpanse M5-reseptor DCM diklorometan (det vil si, metylenklorid) DIPEA N,.N-diisopropyletylamin dPBS Dulbecco's fosfatbufret saltoppløsning DMEM Dulbecco's modifiserte Eagle's medium DMSO dimetylsulfoksid
EDTA etylendiamintetraeddiksyre Emax maksimal effektivitet EtOAc etylacetat
EtOH etanol
FBS fetalt bovint serum
FLIPR fluorometrisk billedopptaksplateleser
Gly glycin
HATU 0(7-azabenzotriazol-1 - yl- N, N, N', N -tetrametyluronium
heksafluorofosfat
HBSS Hank's bufrede saltoppløsning HEK humane embryoniske nyreceller HEPES 4-(2-hydroksyetyl)-1 -piperazinetansulfonsyre hMiklonet human Mi-reseptor I1M2klonet human M2-reseptor I1M3 klonet human M3-reseptor hM4klonet human M4-reseptor hMjklonet human Mj-reseptor HPLC høyytelses væskekromatografi IBMX 3-isobutyl-l-metylxantin
%Eff % effektivitet
PBS fosfatbufret saltoppløsning PyBOP benzotriazol-1 -yloksytripyrrolidinofosfonium
heksafluorofosfat
rpm omdreininger per minutt TFA trifluoreddiksyre
THF tetrahydrofuran
Tris tris(hydroksymetyl)aminometan
Hvis ikke annet er angitt, ble alle reagenser, utgangsstoffer og oppløsningsmidler ervervet fra kommersielle leverandører (som Aldrich, Fluka, Sigma og lignende) og ble benyttet uten ytterligere rensing.
I eksemplene som er beskrevet nedenfor ble HPLC-analysene gjenomført ved bruk av et Agilent (Palo Alto, CA) serie 1100-instrument med Zorbax Bonus RP 2.1 mm x 50 mm kolonner, levert av Agilent (en C14-kolonne) med 3.5 mikrometer partikkelstørrelse. Detekteringen var ved UV-absorbans ved 214 nm. HPLC 10-70 data ble oppnådd med strømningshastighet på 0.5 ml/min. av 10% - 70% B over 6 minutter. Mobilfase A var 2% - 98% - 0.1% ACN-H20-TFA; og mobilfase B var 90% -10% - 0.1% ACN-H20-TFA. Ved bruk av mobilfasene A og B som beskrevet ovenfor, ble HPLC 5-35-data og HPLC 10-90-data oppnådd med en 5 minutters gradient.
Væskekromatografi massespektrometri(LCMS)data ble oppnådd med et Applied Biosystems (Foster City, CA) modell API-150EX-instrument. LCMS 10-90-data ble oppnådd med 10% - 90% mobilfase B over en 5 minutters gradient.
Småskalarensing ble gjennomført ved bruk av et API 150EX Prep Workstation-system fra Applied Biosystems. Den mobile fase var A: vann + 0.05 volum-% TF A; og B: acetonitril + 0.05 volum-% TF A. For arrays (typisk rundt 3 til 50 mg gjenvunnet prøvestørrelse) ble de følgende betingelser benyttet: 20 ml/min. strømningshastighet; 15 minutters gradienter og en 20 mm x 50 mm Prism RP-kolonne med 5 mikrometer partikler (Thermo Hypersil-Keystone, Bellefonte, PA). For rensing i større skala (typisk større enn 100 mg råprøve), ble de følgende betingelser benyttet; 60 ml/min. strømningshastighet; 30 min. gradienter og en 41.4 mm x 250 mm Mikrosorb BDS-kolonne med 10 mikrometer partikler (Varian, Palo Alto, CA).
Den spesifikke dreining for kirale forbindelser (antydet som [aruD) ble målt ved bruk av et Jasco Polarimeter (modell P-1010) med en wolfram halogenlyskilde og et 589 nm filter ved 20°C. Prøver på testforbindelser ble typisk målt ved 1 mg/ml vann.
Fremstilling 6
8-benzyloksy-5-(2,2-dihydroksyacetyl)-lH-kinolin-2-on
(a) 8-acetyl-lH-kinolin-2-on
8-hydroksykinolin-N-oksid (160.0 g, 1.0 mol), kommersielt tilgjengelig fra Aldrich, Milwaukee, Wisconsin, og eddiksyreanhydrid (800 ml, 8.4 mol) ble oppvarmet til
100°C i 3 timer og så avkjølt på is. Produktet ble samlet på en Buchner-trakt, vasket med 2 x 100 ml eddiksyreanhydrid, tørket under redusert trykk og man oppnådde 144 g 8-acetoksy-lH-kinolin-2-on som et faststoff.
(b) 5-acetyl-8-hydroksy-lH-kinolin-2-on
En oppslemming av aluminiumklorid (85.7 g, 640 mmol) i 280 ml 1,2-dikloretan ble avkjølt på is, og produktet fra trinn (a) (56.8 g, 280 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet til romtemperatur og så oppvarmet til 85°C. Etter 30 minutter ble acetylklorid (1.5 ml, 21 mmol) tilsatt og blandingen oppvarmet ytterligere 60 minutter. Reaksjonsblandingen ble så avkjølt og satt til 3 1 IN saltsyre ved 0°C under god omrøring. Etter omrøring i 2 timer ble faststoffene samlet på en Buchner-trakt, vasket med 3 x 250 ml vann og tørket under redusert trykk. Det urene produkt som ble isolert fra flere satser (135 g) ble kombinert og triturert med 4 1 triklormetan i 6 timer. Produktet ble samlet på en Buchner-trakt og tørket under redusert trykk, og man oppnådde 121 g 5-acetyl-8-hydroksy-2(lH)-kinolinon.
(c) 5-acetyl-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on
Til produktet fra trinn (b) (37.7 g, 186 mmol) ble det tilsatt 200 ml N,N-dimetylformamid og kaliumkarbonat (34.5 g, 250 mmol) fulgt av benzylbromid (31.8 g, 186 mmol). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2,25 timer og så helt i 3,5 ml mettet natriumklorid ved 0°C og omrørt i 1 time. Produktet ble samlet og tørket på en Buchner-trakt i 1 time, de resulterende faststoffer ble oppløst i 2 1 diklormetan og denne blanding ble tørket over natriumsulfat. Oppløsningen ble filtrert gjennom en pute av celite som så ble vasket med 5 x 200 ml diklormetan. Det kombinerte filtrat ble konsentrert til tørr tilstand, og de resulterende faststoffer ble triturert med 500 ml eter i 2 timer. Produktet ble samlet på en Buchner-trakt, vasket med 2 x 250 ml eter og tørket under redusert trykk og man oppnådde 44 g 5-acetyl-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on som et pulver.
(d) 8-benzyloksy-5-(2,2-dihdoksyacetyl)-lH-kinolin-2-on
Til en oppslemming av produktet fra trinn (c) (10.0 g, 34.1 mmol) i 60 ml DMSO, ble det satt 48 vekt-% hydrobromsyreoppløsning (11.8 ml, 102.3 mmol). Blandingen ble oppvarmet til 60°C i 16 timer, og så tillatt avkjøling til romtemperatur. 100 ml vann ble tilsatt, og den resulterende oppslemming omrørt ved romtemperatur i en halv time før avkjøling til 0°C. Produktet ble samlet på en Buchner-trakt og så tørket under redusert trykk, man oppnådde 12.2 g 8-benzyloksy-5-(2,2-dihydroksyacetyl)-lH-kinolin-2-on som et faststoff.
Fremstilling 8
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre piperidin-4-ylester
Bifenyl-2-isocyanat (97.5 g, 521 mmol) og 4-hydroksy-l-benzylpiperidin (105 g, 549 mmol), begge kommersielt tilgjengelige fra Aldrich, Milwaudee, Wisconsin, ble oppvarmet sammen til 70°C i 12 timer i løpet av hvilket tidsrom dannelsen av bifenyl-2-yl-karbaminsyre-l-benzylpiperidin-4-ylester ble fulgt ved LCMS. Reaksjonsblandingen ble så avkjølt til 0°C og 11 etanol tilsatt, hvoretter 191 ml 6M saltsyre langsomt ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble så avkjølt til omgivelsestemperatur og ammoniumformat (98.5 g, 1.56 mol) ble tilsatt og nitrogengass heftig boblet gjennom oppløsningen i 20 minutter. 20 g 10 tørrvekt-% palladium på aktivt kull ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 40°C i 12 timer, og så filtrert gjennom en celitpute. Oppløsningsmiddelet ble så fjernet under redusert trykk, og 40 ml IM saltsyre ble satt til den urene blanding. 10N natriumhydroksid ble så tilsatt for å justere pH-verdien til 12. Det vandige sjikt ble ekstrahert med 2 x 150 ml etylacetat, tørket over magnesiumsulfat og deretter ble oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk og man oppnådde tittelforbindelsen (155 g, 100%).
HPLC (10-70) Rt = 2.52;
MS m/ z: [M + H<+>] beregnet for C18H20N2O2297.15; funnet 297.3.
FremstiUing 13
8-benzyloksy-5-[(/f)-2-brom-l-(tert-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-l/T-kinolin-2-on
(a) 8-benzyloksy-5-(2-bromacetyl)-lH-kinolin-2-on
5-acetyl-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on (fremstilling 6) (20.0 g, 68.2 mmol) ble oppløst i 200 ml diklormetan og avkjølt til 0°C. Bortrifluorid dietyleterat (10.4 ml, 82.0 mmol) ble tilsatt via en sprøyte og blandingen oppvarmet til romtemperatur for å gi en tykk suspensjon. Suspensjonen ble oppvarmet til 45°C på et oljebad, og en oppløsning av brom (11.5 g, 72.0 mmol) i 100 ml diklormetan ble tilsatt i løpet av 40 minutter. Blandingen ble holdt ved 45°C i ytterligere 15 minutter, og så avkjølt til romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under redusert trykk, og så triturert med 200 ml 10% vandig natriumkarbonat i 1 time. Faststoffene ble samlet på en Buchnertrakt, vasket med 4 x 100 ml vann og tørket under redusert trykk. Produktet av to forsøk ble kombinert for rensing. 52 g råprodukt ble triturert med 500 ml 50% metanol i kloroform i 1 time. Produktet ble samlet på en Buchner-trakt og vasket med 2 x 50 ml 50% metanol i
kloroform, og 2 x 50 ml metanol. Faststoffet ble tørket under redusert trykk for å gi 34.1 g av tittelforbindelsen som et pulver. (b) 8-benzyloksy-5-((R)-2-brom-l-hydrkosyetyl)-lH-kinolin-2-on (R)-(+)-a,a-difenylprolinol (30.0 g, 117 mmol) og trimetylboroksin (11.1 ml, 78 mmol) ble kombinert i 300 ml toluen og omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen ble anbrakt i 150°C oljebad, og væske ble destillert av. Toluen ble tilsatt i 20 ml posjoner og destillasjonen ble fortsatt i 4 timer. Til sammen 300 ml toluen ble tilsatt. Blandingen ble så avkjølt til romtemperatur. En 500 uL porsjon ble fordampet til tørr tilstand, og veiet (246 mg) for å bestemme at konsentrasjonen av katalysator var 1.8 M.
8-benzyloksy 5-(2-bromacetyl)-l//-kinolin-2-on (90.0 g, 243 mmol) ble anbrakt under nitrogen og 900 ml tetrahydrofuran ble tilsatt fulgt av katalysatoren som beskrevet ovenfor (1.8 M i toluen, 15 ml, 27 mmol). Suspensjonen ble avkjølt til -10 Suspensjonen ble avkjølt til -10 ± 5°C i et is/isopropanolbad. Boran (1.0 M i THF, 294 ml, 294 mmol) ble tilsatt i løpet av 4 timer. Reaksjonen ble så omrørt i ytterligere 45 minutter ved -10°C, og deretter ble 250 ml metanol langsomt tilsatt. Blandingen ble konsentrert under vakuum, og resten oppløst i 1.3 liter kokende acetonitril, filtrert varm og deretter avkjølt til romtemperatur. Krystallene ble filtrert, vasket med acetonitril og tørket under vakuum og man oppnådde tittelforbindelsen (72.5 g, 196 mmol, 81% utbytte, 95% ee, 95% HPLC-renhet).
(c) 8-benzyloksy-5- [(Æ)-2-brom-l-(terf-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-l/f-kinolin-2-on
Til produktet fra trinn (b) (70.2 g, 189 mmol) ble det satt 260 ml N,N-dimetylformamid og denne blanding ble avkjølt i et isbad under nitrogen. 2,6-lutidin (40.3 g, 376 mmol) ble tilsatt i løpet av 5 minutter, og deretter ble tert-butyldimetylsilyl trifluormetansulfonat (99.8 g, 378 mmol) tilsatt langsomt mens temperaturen ble holdt under 20°C. Blandingen ble tillatt oppvarming til romtemperatur i 45 minutter. 45 ml metanol ble dråpevis satt til blandingen i løpet av 10 minutter, og blandingen ble fordelt mellom 500 ml etylacetat/cykloheksan (1:1) og 500 ml vann/saltvannsoppløsning (1:1). De organiske væsker ble vasket ytterligere to ganger med 500 ml vann/saltvannsoppløsning (1:1). De kombinerte organiske væsker ble fordampet under redusert trykk, og man oppnådde en lysegul olje. To separate porsjoner av cykloheksan (400 ml) ble satt til olje, og destillasjonen fortsatt inntil det var dannet en tykk, hvit oppslemming. 300 ml cykloheksan ble satt til denne oppslemmingen, og de resulterende, hvite krystaller ble filtrert, vasket med 300 ml cykloheksan og tørket under redusert trykk for å gi tittelforbindelsen (75.4 ml, 151 mmol, 80% utbytte, 98.6% ee).
FremstiUing 14
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(if)-2-(8-benz<y>loksy-2-okso-l,2-dih<y>drokinoUn-5-yl)-2-(rerr-butyldimetylsilanyloksy)etylamino]nonyl}piperidin-4-ylester Produktet fra fremstilling 13 (3.9 g, 8.17 mmol) ble satt til en oppløsning av produktet fra fremstilling 11 (5.0 g, 11.4 mmol) i 20 ml THF, fulgt av natriumbikarbonat (2.0 g, 24.5 mmol) og natriumiodid (1.8 g, 12.2 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 80°C i 72 timer. Reaksjonsblandingen ble så avkjølt, fortynnet med 20 ml diklormetan og den organiske fase vasket med 2 x 50 ml mettet natriumbikarbonat og 50 ml saltvannsoppløsning. Den organiske fasen ble så tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og man oppnådde 6.5 g av et råprodukt. Dette ble renset ved kromatografi på silikagel, og eluert med 3% metanol i diklormetan og man oppnådde tittelforbindelsen (1.4 g, 21% utbytte).
FremstiUing 15
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(Æ)-2-(8-benzyloksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)-2-hydroksyetylamino]nonyl}piperidin-4-ylester
Trietylaminhydrogenfluorid (376 ul, 2.3 mmol) ble satt til en oppløsning av produktet fra fremstilling 14(1.3 g, 1.5 mmol) i 8 ml THF og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur. Etter 5 timer var reaksjonen ferdig, bestemt ved LCMS-analyse. Reaksjonsblandingen ble så stoppet med IN NaOH inntil pH-verdien var 14 og deretter fortynnet med 20 ml etylacetat og vasket med 20 ml IN NaOH og 20 ml saltvannsoppløsning. Den organiske fase ble så separert, tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og man oppnådde 1.1 g av tittelforbindelsen.
Sammenligningseksempel 3
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(/?)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydro-kinolin-5-yl)etylamino]nonyl}piperidin-4-ylester ditrifluoracetat En oppløsning av produktet fra 15 (1.1 g, 1.5 mmol) ble spylt med nitrogen og 110 mg 10% palladium på karbon ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt under hydrogen ved ballongtrykk. Analyse ved LCMS viste at reaksjonen var ferdig etter 9 timer. Reaksjonsblandingen ble så filtrert og konsentrert, og man oppnådde et gult faststoff. Faststoffet ble renset ved preparativ HPLC (5-30 over 60 min.) og man oppnådde 510 mg av tittelforbindelsen.
MS m/ z: [M + H<+>] beregnet for C3gH4gN405641.36; funnet 641.
HPLC-metode 10-70: 3.207.
[a] 90d = -23.6 (c = 1.0 mg/m, vann).
Sammenligningseksempel 3A
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(/?)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydro-kinolin-5-yl)etylamino]nonyl}piperidin-4-ylester ditrifluoracetat Alternativt ble tittelforbindelsen fremstilt som følger:
(a) 8-bromnonoanal
Til en 100 ml rundkolbe utstyrt med magnetisk røreverk, tilsetningstrakt og temperaturkontroll, ble det under nitrogen satt 9-brommnonanol (8.92 g, 40 mmol) og 30 ml diklormetan. Den resulterende blanding ble avkjølt til 5°C og en oppløsning av natriumbikarbonat (0.47 g, 5.6 mmol) og kaliumbromid (0.48 g, 4 mmol) i 10 ml vann ble tilsatt. 2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloksy friradikal (TEMPO) (63 mg, 0.4 mmol) ble tilsatt og deretter ble 27 ml 10-13% blekeoppløsning tilsatt dråpevis gjennom tilsetningstrakten i en hastighet slik at temperaturen ble holdt ved rundt 8°C (+/- 2°C) med et isbad, i 40 minutter. Etter at tilsetningen av blekeoppløsningen var ferdig, ble blandingen omrørt i 30 minutter mens temperaturen ble holdt ved rundt 0°C. En oppløsning av 1.4 g natriumbisulfitt i 10 ml vann ble tilsatt, og den resulterende blanding omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. Sjiktene av blandingen ble så separert, og det melkeaktige, vandige sjiktet ekstrahert med 1 x 20 ml diklormetan. De kombinerte diklormetansjiktene ble så vasket med 30 ml vann, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under redusert trykk, og man oppnådde tittelmellomproduktet (8.3 g, 94% utbytte) som ble benyttet uten ytterligere rensing i det neste trinn.
(b) 9-brom-l,l-dimetoksynonan
Til en 100 ml rundkolbe ble det satt 9-bromnonanal (7.2 g, 32.5 mmol), 30 ml metanol og trimetylortoformat (4 ml, 36.5 mmol). En oppløsning av 4 N saltsyre i dioksan ble tilsatt, og den resulterende blanding ble brakt til tilbakeløp i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble så avkjølt til romtemperatur, og fast natriumbikarbonat ble tilsatt. Den resulterende blanding ble konsentrert til en fjerdedel av det opprinnelige volum under redusert trykk, og deretter ble 50 ml etylacetat tilsatt. Det organiske sjiktet ble vasket med 2 x 40 ml vann, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under redusert trykk og man oppnådde tittelmellomproduktet (8.44 mg, 97% utbytte) som en væske som ble benyttet i det neste trinn uten ytterligere rensing. (c) Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(9,9-dimetoksynonyl)piperidin-3-ylester Til en 50 ml trehalset rundkolbe ble det satt bifenyl-2-yl-karbaminsyre piperidin-4-ylester (1 g, 3.38 mmol) og 10 ml acetonitril for å danne en oppslemming. Til denne ble det satt 9-brom-l,l-dimetoksynonan (1.1 g, 1.3 mmol) og trietylamin (0.57 g, 4.1 mmol) og den resulterende blanding ble oppvarmet til 65°C i 6 timer (reaksjonen ble fulgt ved HPLC inntil utgangsmaterialet var <5%). Reaksjonsblandingen ble så avkjølt til romtemperatur på hvilket tidspunkt den dannet en tykk oppslemming. 5 ml vann ble tilsatt, og blandingen filtrert for å samle faststoffet på et grovfrittet glassfilter. Faststoffet ble vasket med på forhånd blandet oppløsning av 10 ml acetonitril og 5 ml vann, og så med en annen forblandet oppløsning av 10 ml acetonitril og 2 ml vann. Det resulterende faststoff ble lufttørket, og man oppnådde tittelmellomproduktet (1.37 g, 84% renhet > 96% ved LC, 1H NMR) som et hvitt faststoff. (d) Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(9-oksononyl)piperidin-4-ylester Til en 500 ml rundkolbe med magnetisk røreverk ble det satt bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(9,9-dimetoksynonyl)piperidin-4-ylester (7.7 g, 15.9 mmol) og 70 ml acetonitril og 70 ml vandig IM saltsyre. Den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur i 1 time, og deretter ble det tilsatt 200 ml diklormetan. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, og deretter ble sjiktene separert. Det organiske sjikt ble tørket over MgSCM, filtrert og konsentrert under redusert trykk, og man oppnådde 6.8 g av tittelmellomproduktet som ble benyttet i det neste trinn uten ytterligere rensing. (e) Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(9-{benzyl-[(i?)-2-(8-benzyloksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)-2-(ter/-butyldimetylsilanyloksy)etyl]amino}nonyl)-piperidin-4-ylester
Til en 300 ml rundkolbe ble det satt -[(Æ)-2-benzylamino-l-(te/7-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-one (5 g, 9.73 mmol), diklorometan (100 ml), 100 ml diklormetan og iseddikk (0.6 ml, 10 mmol). Denne blanding ble avkjølt til 0°C ved bruk av et isbad, og deretter ble bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(9-oksononyl)piperidin-4-ylester (4.6 g, 9.73 mmol) tilsatt under omrøring. Denne blanding ble omrørt ved 0°C i 30 minutter, og deretter ble natriumtriacetoksyborhydrid (50 ml) tilsatt i porsjoner i løpet av 15 minutter. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0-10°C i 5 timer, og deretter ble 50 ml mettet, vandig natriumbikarbonatoppløsning tilsatt og blandingen omrørt i 15 minutter. Sjiktene ble så separert, og det organiske sjikt vasket med 50 ml 5% vandig natriumkloridoppløsning, tørket over MgSC^, filtrert og konsentrert under redusert trykk og man oppnådde tittelmellomproduktet (8.5 g, 80% renhet ved HPLC) som ble benyttet uten ytterligere rensing. (f) Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(R)-2-(tert-butyldimetylsilanyloksy)-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]nonyl}piperidin-4-ylester Til en 200 ml rundkolbe satte man mellomproduktet fra trinn E (8.5 g, 9 mmol), 100 ml etanol og iseddik (0.54 ml, 18 mmol) og denne blanding ble omrørt inntil faststoffet var oppløst. Reaksjonsblandingen ble spylt med hydrogen i 5 minutter, og deretter ble det tilsatt 1.7 g 10% palladium på karbon. Denne blanding ble omrørt ved romtemperatur mens hydrogen langsomt ble boblet gjennom reaksjonsblandingen inntil mer enn 95% omdanning ble observert ved HPLC (rundt 8-9 timer). Blandingen ble så filtrert gjennom en celitepute, og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk. Resten ble renset ved silikagelkromatografi (15 g silikag/1 g råprodukt) ved bruk av 5% MeOH i DCM/0.5% NH4OH (10 x 150 ml), 8% MeOH i DCM/0.5% NH4OH (10 x 150 ml) og 10% MeOH i DCM/0.5% NH4OH (10 x 150 ml). De riktige fraksjoner ble kombinert, og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk mens temperaturen ble holdt under 35°C og man oppnådde tittelmellomproduktet (4.05 g, 97% renhet). (g) Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9- [(Æ)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]nonyl}piperidin-4-ylester
Til en 200 ml rundkolbe satte man mellomproduktet fra trinn F (4.05 g, 5.36 mmol) og 80 ml diklormetan og den resulterende blanding ble omrørt inntil faststoffet var oppløst. Trietylamintrihydrofluorid (2.6 ml, 16 mmol) ble tilsatt, og omrøringen ble fortsatt under nitrogen i 18-20 timer. 20 ml metanol ble tilsatt, og 50 ml mettet, vandig natriumbikarbonat ble langsomt tilsatt og blandingen omrørt i 15 minutter. Sjiktene ble så separert, og det organiske sjiktet vasket med 20 ml mettet, vandig natriumkloridoppløsning, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert under redusert trykk og man oppnådde tittelforbindelsen (3.5 g, 98% renhet ved HPLC) som et gult faststoff.
Sammenligningseksempel 3B
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(Æ)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]nonyl}piperidin-4-ylester naftalen-1,5-disulfonsyresalt
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-{9-[(/?)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]nonyl}pipeirdin-4-ylester (1.0 g, 1.56 mmol, fri base) ble oppløst i 10 ml metanol med lavt vanninnhold. En oppløsning av naftalen-1,5-disulfonsyre (0.45 g, 1.56 mmol) i 5 ml metanol med lavt vanninnhold ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 30°C i 2 timer og så ved romtemperatur over natten (18 timer). Den resulterende, tykke oppslemming ble filtrert og filterkaken vasket med 5 ml metanol og så tørket, og man oppnådde tittelforbindelsen (1.16 g, 80% utbytte) som et hvitaktig, krystallinsk faststoff.
FremstiUing 19
3- [4-(bifenyl-2-ylkarb amoyloksy)piperidin-l -yl] p ropionsyremetylester Metyl 3-brompropionat (553^1, 5.07 mmol) ble satt til en omrørt oppløsning av produktet fra fremstilling 8 (1.00 g, 3.38 mmol) og DIPEA (1.76 ml, 10.1 mmol) i acetonitril (34 ml) ved 50°C og reaksjonsblandingen ble varmet ved 50°C over natten. Løsemiddelet ble så fjernet under redusert trykk, og resten oppløst i 30 ml diklormetan. Den resulterende oppløsning ble vasket med 10 ml mettet, vandig natriumdikarbonatoppløsning, tørket over magnesiumsulfat og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk. Den urene rest ble renset ved kolonnekromatografi med 5-10% MeOH/DCM og man oppnådde tittelforbindelsen (905 mg, 70%).
Fremstilling 20
3-[4-(bifenyl-2-ylkarbamoyloksy)piperidin-l-yl]propionsyre En omrørt løsning av fremstilling 19 (902 mg, 2.37 mmol) og litiumhydroksid (171 mg, 7.11 mmol) i 24 ml 50% THF/H20 ble oppvarmet til 30°C over natten, og så surgjort med konsentrert saltsyre og lyofilisert for å gi tittelforbindelsen (~100% utbytte, også inneholdende LiCl-salter).
FremstiUing 21
{5-[(/?)-2-(8-benzyloksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)-2-(terr-butyldimetyl-silanyloksy)etylamino]pentyl}karbaminsyre etrf-butylester
Produktet fra fremstilling 13 (600 mg, 1.23 mmol) og N-tert-butyoksykarbonyl-1,4-diaminopentan (622 mg, 3.07 mmol) ble oppløst i 1.23 ml dimetylsulfoksid og oppvarmet til 105°C i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble så avkjølt og fortynnet med 10 ml etylacetat og vasket med 4 ml mettet, vandig natriumbikarbonatoppløsning. Den organiske fase ble tørket over magnesiumsulfat, og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk. Den urene rest ble renset ved kolonnekromatografi med 5-10% metanol/diklormetan og man oppnådde tittelforbindelsen i et utbytte på rundt 100%.
Fremstilling 22
5-[(/?)-2-(5-aminopentylamino)-l-(/err-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on
En oppløsning av produktet fra fremstilling 21 (800 mg, 1.31 mmol) i trifluoreddiksyre/diklormetan (25%, 12 ml) ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 1 time. Oppløsningsmiddelet ble så fjernet under redusert trykk, og den urene rest oppløst i 15 ml diklormetan og vasket med 80 ml IN natriumhydroksid. Den organiske fase ble separert, tørket over magnesiumsulfat og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk og man oppnådde tittelforbindelsen (509 mg, 81% utbytte over 2 trinn).
Fremstilling 23
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(2-{5-[(/?)-2-(8-benzyloksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)-2-(etrr-butyldimetylsilanyloksy)etylamino]pentylkarbamoyl}etyl)piperidin-4-ylester
Til produktet fra fremstilling 20 (417 mg, 1.13 mmol) og HATU (430 mg, 1.13 mmol) satte man produktet fra fremstilling 22 (458 mg, 0.90 mmol) i 1.8 ml DMF, fulgt av DIPEA. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 50°C i 12 timer, og deretter ble oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk. Den urene rest ble oppløst i 10 ml diklormetan. Den resulterende oppløsning ble vasket med 4 ml mettet vandig natriumbikarbonatoppløsning, tørket over magnesiumsulfat og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk. Den urene rest ble renset ved kolonnekromatografi med 5-10% metanol/diklormetan og 0.5% NH4OH, og man oppnådde tittelforbindelsen (240 mg, 31% utbytte).
FremstiUing 24
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(2-{5-[(/?)-2-(8-benzyloksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)-2-hydroksyetylamino]pentylkarbamoyl}etyl)piperidin-4-ylester Til en omrørt oppløsning av produktet fra fremstilling 22 (240 mg, 0.28 mmol) i 2.8 ml dikloremtan ble det satt trietylamintrihydrofluorid (91 ul, 0.56 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 10 timer og så fortynnet med 10 ml diklormetan. Den resulterende oppløsning ble så vasket med 5 ml mettet, vandig natriumbikarbonatoppløsning og deretter ble den organiske fase tørket, oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk og man oppnådde tittelforbindelsen (209 mg, 100% utbytte).
Sammenligningseksempel 6
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(2-{5-[(Æ)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]pentylkarbamoyl}etyl)piperidin-4-ylester, ditrifluoracetat
Til en omrørt løsning av produktet fra fremstilling 24 (209 mg, 0.28 mmol) i 2.8 ml etanol ble det satt 18 mg 10 tørrvekt-% palladium på aktivt karbon og reaksjonsblandingen ble satt under en hydrogenatmosfære og omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble så filtrert og oppløsningsmiddelet fjernet under redusert trykk. Den urene rest ble renset ved preparativ HPLC for å gi 58 mg av tittelforbindelsen. HPLC (10-70) Rt = 2.30;
MS m/ z: [M + H<+>] beregnet for C37H45N506656.34; funnet 656.6;
[a]<20>D= -6.5 (c=1.0mg/ml, vann).
Sammenligningseksempel 6A
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(2-{5-[(Æ)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]pentylkarbamoyl}etyl)piperidin-4-ylester Alternativt kan tittelforbindelsen fremstilles som følger:
(a) 5-klorpentanal
Til en 2 liters trehalset rundkolbe med magnetrører, tilsetningstrakt og temperaturkontroll ble det under nitrogen satt 5-klorpentanol (53 g, 0.433 mol) og 300 ml diklormetan. Denne blandingen ble avkjølt til 5°C og en oppløsning av natriumbikarbonat (5 g, 0.059 mol) og kaliumbromid (5.1 g, 0.043 mol) i 225 ml vann, ble tilsatt. 2,2,6,6-trimetyl-l-piperidinyloksy friradikal (TEMPO) (63 mg, 0.4 mmol) ble tilsatt og deretter ble 275 ml av en 10-13% blekeoppløsning dråpevis tilsatt gjennom tilsetningstrakten i en hastighet slik at temperaturen ble holdt ved rundt 8°C ± 2°C ved hjelp av et iskaldt bad i rundt 45 minutter. Etter at tilsettingen av blekemiddelet var ferdig, ble blandingen omrørt i 30 minutter mens temperaturen ble holdt ved rundt 5°C. En oppløsning av 4 g natriumbisulfitt i 30 ml vann ble tilsatt, og den resulterende blanding omrørt ved romtemperatur i 30 minutter. Sjiktene i blandingen ble så separert, og det vandige sjiktet ble ekstrahert med 50 ml diklormetan. De kombinerte diklormetansjiktene ble så vasket med 50 ml vann, tørket over MgSC^, filtrert og konsentrert under redusert trykk for å gi 53 g tittelforbindelse. Produktet ble destillert ved 65°C/8 torr til man oppnådde 31.16 g av tittelforbindelsen som en orangefarget olje med en GC-renhet på 70-80%.
Produktet ble ytterligere renset ved å sette 4 g urent materiale til en blanding av 920 ml etanol, 12 ml etylacetat og 4 ml vann. 4 g natriumbisulfitt ble tilsatt, og blandingen oppvarmet til tilbakeløp i 4 timer og så avkjølt til romtemperatur og omrørt i 14 timer ved romtemperatur for å danne en meget tykk oppslemming. Faststoffene ble filtrert på et grovfrittet filter, vasket med 5 ml av oppløsningsmiddelblandingen, faststoffene tørket på filteret og man oppnådde 8.4 g av bisulfittaduktet. Dette materialet ble så satt til 20 ml MTBE og 45 ml vandig IN natriumhydroksid ble tilsatt under heftig omrøring. Den resulterende 2-faseblanding ble omrørt heftig inntil alle faststoffer var oppløst (ca 15 min.) og så ble sjiktene separert. Det vandige sjikt ble ekstrahert med 20 ml MTBE, og de kombinerte MTBE-sjikt ble tørket over MgSC>4, filtrert og konsentrert og man oppnådde 3.46 g av tittelforbindelsen som en fargeløs væske med en GC-renhet på
>90%.
(b) 5-[(/f)-2-[benzyl-(5-kloropentyl)amino]-l-(tert-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on
Til en 11 trehalset rundkolbe satte man produktet fra fremstilling 28 (48.4 g, 94 mmol), 400 ml diklormetan og 11.3 ml iseddik. Denne blanding ble omrørt ved 0°C (isbad) og produktet fra trinn (a) (12.5 g, 103.6 mmol) ble tilsatt og omrøringen fortsatt i 15 minutter. Natriumtriacetoksyborhydrid (59.8 g, 282 mmol) ble så tilsatt i porsjoner over en 15 minutters periode, og den resulterende blanding ble omrørt ved 0°C til 10°C i 2 timer. 200 ml vandig, mettet natriumbikarbonatoppløsning ble så langsomt tilsatt (gassutvikling) og omrøringen fortsatt i 15 minutter. pH-verdien i oppløsningen ble så justert med fast natriumkarbonat til en pH-verdi over 9, og sjiktene ble separert. De organiske sjiktene ble vasket med 200 ml vandig 5% natriumkloridoppløsning, tørket over MgSCU, filtrert og konsentrert under redusert trykk og man oppnådde 53 g av tittelforbindelsen.
(c) 5- [( R)- 2-[(5-AVV-diformylaminopentyl)benzylamino] -l-(etrf-butyldimetyl-silanyloksy)etyl]-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on
Til en omrørt løsning av produktet fra trinn (b) (26.5 g, 42.8 mmol) i 175 ml l-metyl-2-pyrrolidonon ble det tilsatt natriumdimetylformamid (6.1 g, 64.2 mmol) og natriumiodid
(2.13 g, 14.3 mmol). Reaksjonskolben ble spylt med nitrogen, og deretter ble
blandingen oppvarmet til 65°C i 8 timer. Blandingen ble så avkjølt til romtemperatur, og 300 ml vann og 100 ml etylacetat ble tilsatt. Denne blanding ble omrørt i 10 minutter og deretter ble sjiktene separert. Det vandige sjiktet ble ekstrahert med 150 ml etylacetat og de kombinerte, organiske sjiktene ble vasket med 300 ml vann, 300 ml vandig 50%
brineoppløsning, 300 ml vann, tørket over MgSC«4, filtrert og konsentrert og man oppnådde 23.3 g av tittelforbindelsen.
(d) 5-[(/?)-2-[(5-aminopentyl)benzylamiiio]-l-(fert-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-8-benzyloksy-lH-kinolin-2-on
Til en omrørt oppløsning av produktet fra trinn (c) (10.5 g, 16 mmol) i 75 ml metanol ble det satt p-toluensulfonsyre (7.42 g, 39 mmol). Den resulterende blanding ble oppvarmet til 40°C i 15 timer, og så konsentrert under redusert trykk til rundt det halve volum. 70 ml metanol ble tilsatt, og blandingen oppvarmet til 50°C i 2 timer og så konsentrert under redusert trykk. 100 ml vann, 50 ml metanol og 100 ml MTBE ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 15 minutter hvoretter sjiktene ble separert. Til det vandige sjiktet ble det satt 45 ml vandig IN natriumhydroksid og 100 ml MTBE og denne blanding ble omrørt i 15 minutter. Sjiktene ble så separert og det vandige sjiktet ekstrahert med 100 ml MTBE. De kombinerte MTBE-sjiktene ble tørket over MgSC«4, filtrert og konsentrert, og man oppnådde 7.3 g av tittelforbindelsen som en gul olje. Dette materialet inneholdt rundt 13% (ved HPLC) av den tilsvarende des-tert-butyldimetylsilylforbindelse. (e) 3- [4-(bifenyl-2-ylkarbamoyloksy)piperidin-l-yl] propionsyre Til en oppløsning av produktet ved fremstilling 8 (50 g, 67.6 mmol) i 500 ml diklormetan ble det satt akrylsyre (15.05 ml, 100 mmol). Den resulterende blandingen ble oppvarmet til 50°C under tilbakeløp i 18 timer hvoretter oppløsningsmiddelet ble fjernet. 600 ml metanol ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 75°C i 2 timer og så avkjølt til romtemperatur under dannelse av en tykk oppslemming. Faststoffet ble samlet ved filtrering, vasket med 50 ml metanol og lufttørket, og man oppnådde tittelforbindelsen (61 g, >96% renhet) som et hvitt pulver. (f) bifenyl-2-ylkarbaminsyre 1- [2-(5-{benzyl- [(/?)-2-(8-benzyloksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)-2-(rerr-butyldimetylsilanyloksy)etyl]amino}-pentylkarbamoyl)etyl]piperidin-4-ylester
En blanding av produktet fra trinn (e) (3.68 g, 10 mmol) og 50 ml N,N-dimetylformamid ble oppvarmet til 60°C inntil faststoffet fullstendig var oppløst, og så avkjølt til romtemperatur. Produktet fra trinn (d) (6 g, 10 mmol) og 3,5 ml diisopropyletylamin ble tilsatt og reaksjonsblandingen avkjølt til 0°C. PyBOP (6.25 g, 12 mmol) ble tilsatt i en porsjon og reaksjonsblandingen omrørt ved 0°C til romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble så helt i 500 ml kaldt vann under omrøring og pH-verdien i den resulterende blanding ble justert til 2 ved bruk av IM saltsyre. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, og så filtrert for å samle faststoffet som ble vasket med 100 ml vann og tørket for å gi tittelforbindelsen i en mengde på 8.7 g med en HPLC-renhet <95%) som et hvitaktig faststoff. (g) Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-(2-{5-[(i?)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]pentylkarbamoyl}etyl)piperidin-4-ylester Produktet fra trinn (f) kan avdebeskyttes ved bruk av i det vesentlige samme prosedyre som beskrevet i eksempel 24 og sammenligningseksempel 6 for å gi tittelforbindelsen.
Fremstilling 28
8-benzyloksy-5-[(/?)-2-(A^-benzylamino)-l-(tert-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-llT-kinolin-2-on
En omrørt oppløsning av produktet fra fremstilling 13 (1.00 g, 2.05 mmol) og benzylamin (493 ul, 4.51 mmol) i 1.7 ml DMSO ble oppvarmet ved 105°C i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble tillatt avkjøling og så fortynnet med 10 ml EtOAc, og det organiske sjiktet ble vasket med 5 ml mettet, vandig ammoniumkloridoppløsning og 5 ml IN natriumhydroksid, tørket over MgSC«4 og oppløsningsmiddelet så fjernet ved redusert trykk. Den urene rest ble renset ved kolonnekromatografi med 50% EtOAc/heksaner og man oppnådde tittelforbindelsen (700 mg, 67%).
MS m/ z: [M + H<+>] beregnet for CaiHjgNiOaSi 515.27; funnet 515.5.
Fremstilling 93
Metyl 4-amino-5-klor-2-metoksybenzoat
Til en oppløsning av 4-amino-5-klor-2-metoksybenzosyre (1.008 g, 5.0 mmol) i en blanding av 9 ml toluen og 1 ml metanol ved 0°C ble det dråpevis satt trimetylsilyldiazometan (2.0 M i heksan, 3.0 ml, 6.0 mmol). Reaksjonsblandingen ble så oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 16 timer. Overskytende trimetylsilyldiazometan ble stoppet ved tilsetning av eddiksyre, inntil den lysegule farge i reaksjonsblandingen forsvant. Blandingen ble så konsentrert under vakuum og man oppnådde tittelforbindelsen som et hvitaktig faststoff som ble benyttet uten ytterligere rensing.
FremstiUing 94
Metyl 4-akryloylamino-5-klor-2-metoksybenzoat
Til råproduktet fra fremstilling 93 ble det satt diklormetan (10 ml, 0.5 M) og trietylemin (2.1 ml, 15 mmol). Denne blanding ble avkjølt til 0°C og akryloylklorid (812 ul, 10 mmol) ble tilsatt dråpevis under omrøring. Etter 2 timer ble reaksjonen stoppet ved tilsetning av ca 2 ml metanol ved 0°C, og den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur i 15 minutter og så konsentrert under vakuum. 30 ml diklormetan og 30 ml vann ble satt til resten, og denne blanding ble blandet grundig. Sjiktene ble separert og det vandige sjiktet ekstrahert med 20 ml diklormetan. De organiske sjikt ble kombinert, tørket over Na2SC«4, filtrert og oppløsningsmiddelet ble fjernet under vakuum for å gi tittelforbindelsen som et brunt, skumaktig faststoff som ble benyttet uten ytterligere rensing.
FremstiUing 95
Metyl 4-{3-[4-(bifenyl-2-ylkarbamoyloksy)piperidin-l-yl]propionylamino}-5-kloro-2-metoksybenzoat
Til råproduktet fra fremstilling 94 ble det satt produktet fra fremstilling 8 (1.33 g, 4.5 mmol) og en blanding av 22.5 ml THF og 2.5 ml metanol. Denne blanding ble oppvarmet ved 50°C under omrøring i 16 timer, og deretter ble oppløsningsmiddelet fjernet under vakuum. Resten ble kromatografert over silikagel med EtOAc, og man oppnådde tittelforbindelsen (0.82 g; Rf = 0.4, 29% utbytte over 3 trinn) som et hvitaktig, skumaktig faststoff.
MS m/ z 566.4 (M+H, forventet 565.20 for C30H32CIN3O6).
FremstiUing 96
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-kloro-4-hydroksymetyl-5-metoksy-fenylkarbamoyl)etyl]piperidin-4-ylester
Til en oppløsning av produktet fra fremstilling 95 (0.82 mg, 1.45 mmol) i en blanding av 4.5 ml THF og 0.5 ml metanol ble det ved 0°C satt litiumborhydrid (32 mg, 1.45 mmol). Reaksjonsblandingen ble tillatt oppvarming til romtemperatur og ble omrørt i 41 timer. Reaksjonen ble så stoppet ved tilsetning av IN vandig saltsyre ved 0°C inntil ingen bobling ble observert mer, og blandingen ble så omrørt i 10 minutter. Oppløsningsmiddelet ble fjernet under vakuum, og resten oppløst i ca 2 ml acetonitril. Denne oppløsning ble renset ved preparativ RP-HPLC (gradient: 2 til 50% acetonitril i vann med 0.05% TF A). De riktige fraksjoner ble samlet, kombinert og lyofilisert, og man oppnådde tittelforbindelsen som et trifluoracetatsalt. Dette salt ble behandlet med 10 ml isopropylacetat, og 10 ml IN vandig natriumhydroksid og det organiske sjikt ble samlet, tørket over Na2S04, filtrert og oppløsningsmiddelet fjernet under vakuum for å gi tittelforbindelsen (161 mg, 21% utbytte) som et hvitt, skumaktig faststoff.
MS mlz 538.4 (M+H, forventet 537.20 for C29H32C1N305).
FremstiUing 97
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-kloro-4-formyl-5-metoksyfenylkarbamoyl)-etyl] pip eridin-4-ylester
Til en oppløsning av produktet fra fremstilling 96 (161 mg, 0.3 mmol) i 3 ml diklormetan ble det satt dimetylsulfoksid (213 ul, 3.0 mmol) og diisopropyletylamin (261 ul, 1.5 mmol). Blandingen ble avkjølt til -20°C og svoveltrioksid-pyridinkompleks (238 mg, 1.5 mmol) ble langsomt tilsatt. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen stoppet ved tilsetning av ca 3 ml vann. Sjiktene ble separert, og det organiske sjiktet tørket over Na2S04, filtrert og oppløsningsmiddelet fjernet under vakuum og man oppnådde tittelforbindelsen som en lysegul olje.
MS mlz 536.3 (M+H, forventet 535.19 for C29H3oClN305).
FremstiUing 98
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(4-{[(Æ)-2-(tert-butyldimetylsilanyloksy)-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-2-klor-5-metoksy-fenylkarbamoyl)etyl]piperidin-4-ylester
Til produktet fira fremstilling 97 i en blanding av 0.5 ml diklormetan og 0.5 ml metanol, ble det satt 5-[(/?)-2-amino-l-(/er/-butyldimetylsilanyloksy)etyl]-8-hydroksy-lH-kinolin-2-onacetat (124.1 mg, 3.1 mmol), og den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur i 1.5 timer. Natriumtriacetoksyborhydrid (190.7 mg, 0.9 mmol) ble tilsatt, og den resulterende blanding omrørt ved romtempearatur i 15 timer. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av ca 0.2 ml vann, og blandingen ble konsentrert under vakuum for å gi tittelforbindelsen som ble benyttet uten ytterligere rensing.
MS mlz 854.5 (M+H, forventet 853.36 for C46H56ClN507Si).
Eksempel 25
Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-kloro-4-{[(Æ)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperidin-4-ylester ditrifluoracetat Til en suspensjon av produktet fra fremstilling 98 i diklormetan (1.0 ml, 0.3 ml) ble det satt trietylamintrihydrofluorid (245 ul, 1.5 mmol). Denne blanding ble omrørt ved romtemperatur i 45 timer, og deretter ble blandingen konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i en blanding av 0.5 ml DMF og 0.6 ml acetonitril/vann 1:1 med 0.1% TF A, 0.3 ml TFA og ca 1 ml acetonitril og blandingen ble renset ved preparativ RPHPLC med en gradient 1-50% acetonitril i vann med 0.05% TFA. Fjernede fraksjoner ble samlet opp, kombinert og lyofilisert, og man oppnådde tittelforbindelsen (100 mg, 34% utbytte, 98.7% renhet ved HPLS) som et hvitaktig faststoff.
MS mlz 740.5 (M+H, forventet 739.28 for C4oH42ClN507).
FremstiUing A
Cellekultur- og membranpreparering fra celler som uttrykker humane Pi-, P2- eller p3-adrenergiske reseptorer
Kinesiske hamsterovarie(CHO)cellelinjer som stabilt uttrykker klonede, humane Pi., P2-henholdsvis p3-adrenergiske reseptorer ble dyrket til nær konfluens i Hams F-12-medium med 10% FBS i nærvær av 500 (il/ml Geneticin. Cellemonosjiktene ble løftet med 2 mM EDTA i PBS. Cellene ble pelletisert ved sentrifugering ved 1 000 omdreininger per minutt, og cellepelleten ble enten lagret frosset ved -80°C eller membraner ble preparert umiddelbart for bruk. For preparering av Pi_, P2-reseptoruttrykkende membraner ble cellepellets resuspendert i lyseringsbuffer (10 mM HEPES/HC1, 10 mM EDTA, pH 7.4 ved 4°C) og homogenisert ved bruk av en tettpassende Dounce-glasshomogenisator (30 slag) på is. For de mer proteasesensitive p3-reseptoruttrykkende membraner, ble cellepellets homogenert i lyseringsbuffer (10 mM Tris/HCl, pH 7.4) supplert med 1 tablett "Complete Protease Inhibitor Cocktail Tablets with 2 mM EDTA" per 50 ml buffer (Roche Catalognr. 1697498, Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN). Homogenatet ble sentrifugert ved 20 000 x g, og den resulterende pellet vasket en gang med lyseringsbuffer ved resuspensjon og sentrifugering som ovenfor. Sluttpelleten ble så resuspendert i iskald bindingsanalysebuffer (75 mM tris/HCl pH 7.4, 12.5mM MgCl2, 1 mM EDTA). Proteinkonsentreasjonen for membransuspensjonen ble bestemt ved de metoder som er beskrevet hos Lowry et al, 1951, Journal ofBiological Chemistry, 193,265 og Bradford, Analytical Biochemistry, 1976, 72,248-54. Alle membraner ble lagret frosset 1 alikvoter ved -80°C eller brukt umiddelbart.
FremstiUing B
Cellekultur- og membranpreparering fra celler som uttrykker humane Mi-, M2-, M3- og M4-muskariniske reseptorer
CHO-cellelinje som stabilt uttrykker klonede hMi-, hM2-, hM3- og hM4-muskariniske reseptorsubtyper ble dyrket til nær konfluens i HAM's F-12-medium supplert med 10% FBS og 250 ug/ml geneticin. Cellene ble dyrket i en 5% C02, 37°C-inkubator og løftet med 2 mM EDTA til dPBS. Cellene ble samlet ved 5 minutters sentrifugering ved 650 x g, og cellepellets ble enten lagret frosset ved -80°C eller preparert umiddelbart for bruk. For membranpreparering ble cellepelleten resuspendert i lyseringsbuffer og homogenisert med en polytron PT-2100 vevsoppbryter (Kinematica AG; 20 sekunder x 2 støt). Råmembranene ble sentrifugert ved 40 000 x g i 15 minutter ved 4°C. Membranpelleten ble så resuspendert med resuspensjonsbuffer og homogenisert igjen ved polytron vevsoppbryteren. Proteinkonsentrasjonen for membransuspensjonen ble bestemt ved den metode som er beskrevet av Lowry et al., 1951, Journal of Biochemistry, 193,265. Alle membraner ble lagret frosset i porsjoner ved -80°C eller brukt umiddelbart. Porsjoner av fremstilt hM5-reseptormembraner ble ervervet direkte fra Perkin Eimer og lagret ved -80°C til bruk.
Analyse testprosedyre A.
Radioligandbindingsanalyse for humane Pi-, p2- og p3-adrenergiske reseptorer. Bindingsanalyser ble gjennomført i 96 brønners mikrotiterplater i et totalt analysevolum på 100 ul med 10-15 ut membranprotein inneholdende humane Pi-, p2- eller p3-adrenergiske reseptorer i analysebuffer (75 mM tris/HCl pH 7.4 ved 25°C, 12.5 mM MgCl2,1 mM EDTA, 0.2% BSA). Metningsbindingsstudier for bestemmelser av IQ-verdiene for radioliganden ble foretatt ved bruk av [<3>H]-dihydroalprenolol (NEN-720, 100 Ci/mmol, PerkinElmer Life Science Inc., Boston, MA) for Pi- og p2-reseptorer og [<125>I]-(-)-iodocyanopindol (NEX-189,220 Ci/mmol, PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA) ved 10 eller 11 forskjellige konsentrasjoner i området 0.01 nM til 20 nM. Fortrengningsanalyser for å bestemme K;-verdien for testforbindelser ble gjennomført med [<3>H]-dihydroalprenolol ved 1 nM og [<125>I]-(-)-iodcyanopindolol ved 0.5 nM for 10 eller 11 forskjellige konsentrasjoner av testforbindelsen i området 10 pM til 10 uM. Ikke-spesifikk binding ble bestemt i nærvær av 10 uM propanolol. Analyser ble inkubert i 1 time ved 37°C, og deretter ble bindingsreaksjonene terminert ved hurtig filtrering over GF/B for Pi- og P2-reseptorene eller GF/C-glassfiberplater for p3-reseptorene (Packard BioScience Co., Meriden, CT) på forhånd bløtt i 0.3% polyetylenimin. Filterplatene ble vasket tre ganger med filtreringsbuffer (75 mM Tris/HCl pH 7.4 at 4°C, 12.5 mM MgCl2, 1 mM EDTA) for å fjerne ikke-bundet radioaktivitet. Platene ble så tørket, og 50 fil Microscint-20 væskescintillasjonsfluid (Packard BioScience Co., Meriden, CT) ble tilsatt, og platene tellet på en Packard Topcount væskescintillasjonsteller (Packard BioScience Co., Meriden, CT). Bindingsdata ble analysert ved ikke-lineære regresjonsanalyser med GraphPad Prism Software-pakken (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ved bruk av 3-parametermodellen for ensetekonkurranse. Kurveminimum ble fiksert til verdien for ikke-spesifikk binding, bestemt i nærvær av 10 uM propanolol. K;-verdiene for testforbindelsene ble beregnet for observerte IC50-verdier og IQ-verdien for radioliganden ved bruk av Cheng-Prusoff-ligningen (Cheng Y, and Prusoff WH., Biochemical Pharmacology, 1973, 22, 23, 3099-108).
I denne analyse antyder en lavere K;-verdi at en testforbindelse har høyere bindingsaffinitet for reseptoren som testes. Eksemplifisert forbindelse ifølge oppfinnelsen som ble testet i denne analyse, ble typisk funnet å ha en Ki-verdi på mindre enn rundt 300 nM for den p2-adrenergiske reseptor. For eksempel ble forbindelsene ifølge sammenligningseksemplene 3 og 6 funnet å ha K;-verdier mindre enn 10 nM.
Hvis ønskelig kan reseptor subtypeselektiviteten for en testforbindelse beregnet som forholdet Ki(Pi):Ki(<p>2) eller K;(p3):Ki(<p>2). Typisk viste forbindelse ifølge oppfinnelsen større binding til den p2-adrenergiske reseptor sammenlignet med den Pi- eller p3-adrenergiske reseptor, det vil si at Ki(Pi) eller Ki(p3) typisk er større enn Ki(p2). Generelt er forbindelser med selektivitet for den p2-adrenergiske reseptor i forhold til en Pi- eller p3-adrenergisk reseptor foretrukket; særlig forbindelser som har en selektivitet større enn rundt 5; særlig større enn rundt 8. Som eksempel har forbindelsene fra sammenligningseksemplene 3 og 6 et forhold Ki(Pi):Ki(p2) større enn 8.
Analyse testprosedyre B.
Radioligandbindingsanalyse for muskariniske reseptorer.
Radioligandbindingsananlyser for klonede humane muskariniske reseptorer ble gjenomført i 96-brønners mikrotiterplater i et totalanalysevolum på 100 ul. CHO- cellemembraner som stabilt uttrykte enten hMi-, I1M2-, I1M3-, hMt- eller I1M5-muskarinisk subtype ble fortynnet i analysebuffer til de følgende spesifikke målproteinkonsentrasjoner (ug/brønn): 10 ug for hMi, 10-15 ug for hM2, 10-20 \ ig for hM3, 10-20 fig for hMt og 10-12 fig for hM5for å få like signaler (cpm). Membranene ble kort homogenisert ved bruk av en polytron vevsoppbryter (10 sekunder) før analyseplatetilsetningen. Metningsbindingsstudier for å bestemme Kd-verdiene for radioliganden ble gjenomført ved bruk av L-[N-metyl-<3>H]skopolamin metylklorid ([<3>H]-NMS) (TRK666, 84.0 Ci/mmol, Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, England) ved konsentrasjoner i området 0.001 nM til 20 nM. Fortrengningsanalyser for bestemmelse av K;-verdier for testforbindelser ble gjenomført med [<3>H]-NMS ved 1 nM og 11 forskjellige testforbindelseskonsentrasjoner. Testforbindelsene ble i utgangspunktet oppløst til en konsentrasjon på 400 uM i fortynningsbuffer, og så seriefortynnet fem ganger med fortynningsbuffer til sluttkonsentrasjoner i området 10 pM til 100 uM. Tilsetningsrekkefølgen og volumene til analyseplaten var som følger: 25 ul radioligand, 25 ul fortynnet testforbindelse og 50 ul membraner. Analyseplater ble inkubert i 60 minutter ved 37°C. Bindingsreaksjonene ble avsluttet ved hurtig filtrering over GF/B-glassfiberfilterplater (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) som var forbehandlet i 1% BSA. Filterplater ble skyllet tre ganger med vaskebuffer (10 mM HEPES) for å fjerne ikke-bundet radioaktivitet. Platene ble så lufttørket og 50 (il Microscint-20 væskescintillasjonsvæske (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA) ble satt til hver brønn. Platene ble så tellet i en PerkinElmer Topcount væskescintillasjonsteller (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA). Bindingsdata ble analysert ved ikke-lineær regresjonsanalyse med GraphPad Prism Software-pakken (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ved bruk av ensetekonkurransemodellen. Ki-verdier for testforbindelser ble beregnet fra observerte ICjo-verdier og KD-verdien for radioliganden ved bruk av Cheng-Prusoff-ligningen (Cheng Y; Prusoff WH. (1973) Biochemical Pharmacology, 22(23):3099-108). Ki-verdiene ble konvertert til pK-verdier for å bestemme det geometriske middel og 95% konfidensintervaller. Disse statistikker ble så konvertert tilbake til K;-verdi er for datarapportering.
I denne analyse antyder en lavere Ki-verdi at testforbindelsen har en høyere bindingsaffinitet for den testede reseptor. Eksemplifisert forbindelse ifølge oppfinnelsen blitt testet i denne analyse, ble funnet å ha en Ki-verdi på mindre enn rundt 300 nM for den M3-muskariniske reseptor. For eksempel ble forbindelsene fra sammenligningseksemplene 3 og 6 funnet å ha K;-verdier mindre enn 10 nM.
Analyse testprosedyre C.
Helcelle cAMP-flashplateanalyse i CHO-cellelinje som heterologt uttrykker humane Pi-, P2- eller p3-adrenergiske reseptorer.
cAMP-analyser ble gjenomført i et radioimmunoanalyseformat ved bruk av Flashplate Adenylyl Cyclase Activation Assey System med [<125>I]-cAMP (NEN SMP004, PerkinElmer LifeSciences Inc., Boston, MA), i henhold til produsentens instruksjoner. For bestemmelse av P-reseptoragonistpotensen (EC50), ble CHO-K1-cellelinje som stabilt uttrykte klonede, human Pi-, p2- eller p3-adrenergiske reseptorer dyrket til nær konfluens i HAM's F-12 medium supplert med 10% FBS og 250 ug/ml geniticin. Celler ble skyllet med PBS og løsgjort i dPBS (Dulbecco's fosfatbuffret saltoppløsning, uten CaCl2og MgCl2) inneholdende 2 mM EDTA eller trypsin-EDTA-oppløsning (0.05% trypsin/0.53 mM EDTA). Etter telling av cellene i en Coulter celleteller ble cellene pelletisert ved sentrifugering ved 1 000 omdreininger per minutt, og resuspendert i stimuleringsbuffer inneholdende IBMX (PerkinElmer Kit), på forhånd oppvarmet til romtemperatur til en konsentrasjon på 1.6 x IO6 til 2.8 x IO6 celler per ml. Rundt 60 000 til 80 000 celler per brønn ble benyttet i denne analyse. Testforbindelser (10 mM i DMSO) ble fortynnet i PBS inneholdende 0.1% BSA i Beckman Biomek-2000 og testet ved 11 forskjellige konsentrasjoner i området 100 uM til 1 pM. Reaksjonsblandingene ble inkubert i 10 minutter ved 37°C, og stanset ved tilsetning av 100 ul kald deteksjonsbuffer inneholdende [<125>I]-cAMP (NEN SMP004, PerkinElmer Life Sciences, Boston, MA). Mengden cAMP som fremstilles (pmol/brønn) ble beregnet basert på tellingene observert for prøvene, og cAMP-standarder som beskrevet i produsentens bruksmanual. Data ble analysert ved ikke-lineær regresjonsanalyse med GraphPad Prism Software-pakken (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) med den sigmoidale ligning. Cheng-Prusoff-ligningen (Cheng Y. og Prusoff WH., Biochemical Pharmacology, 1973, 22,23, 3099-108) ble benyttet for å beregne EC50-verdiene. I denne analyse antyder en lavere ECso-verdi at testforbindelsen har en høyere, funksjonell aktivitet enn den testede reseptoren. Eksemplifisert forbindelse ifølge oppfinnelsen som ble testet i denne analyse, ble funnet å ha en ECjo-verdi på mindre enn rundt 300 nM for den p2-adrenergiske reseptor. For eksempel ble forbindelsene ifølge sammenligningseksemplene 3 og 6 funnet å ha EC50-verdier på mindre enn 10 nM.
Hvis ønskelig kan reseptorsubtypeselektiviteten for en testforbindelse beregnes som forholdet EC5o(Pi):ECso(P2) eller EC5o(P3):ECso(P2). Forbindelsen ifølge oppfinnelsen viste en høyere funksjonell aktivitet ved den p2-adrenergiske reseptor sammenlignet med den Pi- eller p3-adrenergiske reseptor, det vil si at ECso(Pi) eller ECso(p3) typisk er større enn ECsoCfø). Generelt er forbindelser som har selektivitet for den P2-adrenergiske reseptor i forhold til de Pi- eller P3-adrenergiske reseptorer foretrukket, særlig forbindelser som har en selektivitet større enn rundt 5, og særlig større enn rundt 10. Som eksempel har forbindelsene ifølge sammenligningseksemplene 3 og 6 forhold EC5o(Pi)/EC5o(P2) som er større enn 10.
Analyse testprosedyre D.
Funksjonelle analyser på antagonisme for muskariniske reseptorsubtyper.
A. Blokkering av agonistmediert inhibering av cAMP-akkumulering.
I denne analyse ble den funksjonelle potens for en testforbindelse bestemt ved å måle evnen hos testforbindelsen til å blokkere oksotremorininhibering av forskolinmediert cAMP-akkumulering i CHO-K1-celler ved å uttrykke hM2-reseptoren. cAMP-analyse ble gjennomført i et radioimmunoanalyseformat ved bruk av Flashplate Adenylyl Cyclase Activation Assay System" med<125>I-cAMP (NEN SMP004B, PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA), i henhold til produsentenes instruksjoner. Cellene vaskes en gang med dPBS, og løftes med trypsin EDTA-oppløsning (0.05% trypsin/0.53 nm mM EDTA) som beskrevet i avsnittet om cellekultur og membranpreparering ovenfor. De løsgjorte celler vaskes to ganger ved sentrifugering ved 650 x g i fem minutter i 50 ml dPBS. Cellepelletene blir så resuspendert i 10 ml dPBS, og cellene telles med en Coulter XI Dual partikkelteller (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Cellene sentrifugeres igjen ved 650 x g i fem minutter, og resuspenderes i stimuleringsbuffer til en analysekonsentrasjon på 1.5 x IO6 til 2.9 x IO6 celler/ml.
Testforbindelsene blir i utganspunktet oppløst til en konsentrasjon på 400 uM i fortynningsbuffer (dPBS-supplert med 1 mg/ml BSA (0.1%), og så seriefortynnet med fortynningsbuffer til en endelig molar konsentrasjon i området 100 uM til 0.1 nM. Oksotremorin fortynnes på tilsvarende måte.
For å måle oksotremorininhiberingen av adenylylcyklase(AC)aktiviteten ble 25 (il forskolin (25 uM sluttkonsentrasjon fortynnet i dPBS), 25 (il fortynnet oksotremorin og 50 ul celler satt til agonistanalysebrønner. For å måle evnen hos en testforbindelse til å blokkere oksotremorininhibiert AC-aktivitet ble 25 (il forskolin og oksotremorin (25 uM henholdsvis 5 uM sluttkonsentrasjon, fortynnet i dPBS), 25 (il fortynnet testforbindelse og 50 ul celler, satt til de gjenværende analysebrønner. Reaksjonsblandingene inkuberes i 10 minutter ved 37°C, og stanses ved tilsetning av 100 ul iskald detekteringsbuffer. Platene forsegles, inkuberes over natten ved romtemperatur og telles den neste morgen på en PerkinElmer TopCount væskescintillasjonsteller (PerkinElmer Inc., Wellesley, MA). Mengden cAMP som fremstilles (pmol/brønn) beregnes basert på tellingene observert for prøvene og cAMP-standarder som beskrevet i produsentens brukermanual. Data analyseres ved ikke-lineær regresjonsanalyse med GraphPad Prism Software-pakken (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ved bruk av ikke-lineær regresjon, ensetekonkurranseligning. Chen-Prusoff-ligningen benyttes for å beregnet Ki ved bruk av EC50for oksotremorinkonsentrasjonsresponskurve og oksotremorinanalysekonsentrasjonen som Kd, henholdsvis [L].
Ved denne analyse antyder en lavere Ki-verdi at testforbindelsen har en høyere, funksjonell aktivitet på den testede reseptor. Eksemplifiserte forbindelser ifølge oppfinnelsen som ble testet ved denne analyse ble typisk funnet å ha en Ki-verdi mindre enn rundt 300 nM for blokkering av oksotremorininhibering av forskolinmediert cAMP-akkumulering i CHO-K1-celler som uttrykker hM2-reseptoren. For eksempel ble forbindelsen ifølge sammenligningseksempel 3 funnet å ha en Ki-verdi på mindre enn 10 nM.
B. Blokkering av agonistmediert [<35>S]GTPyS-binding.
I en andre, funksjonell analyse kan den funksjonelle potens for testforbindelsene bestemmes ved å måle evnen hos forbindelsene til å blokkere oksotremorinstimulert<35>S]GTPyS-binding i CHO-K1 -celler som uttrykker hM2-reseptor.
På brukstidspunktet ble frosne membraner tint og så fortynnet i analysebuffer med en sluttmålvevkonsentrasjon på 5-10 ug protein per brønn. Membranene ble kort homogenisert ved bruk av en polytron PT-2100 vevsoppbryter og så satt til analyseplatene.
EC90-verdien (effektiv konsentrasjon for 90% maksimal respons) for stimulering av [ S]GTPyS-binding med agonist oksotremorin ble bestemt i hvert forsøk. For å bestemme evnen hos en testforbindelse til å inhibere oksotremuirnstimulert [<35>S]GTPyS-binding ble det følgende satt til hver brønn i 96-brønners platene: 25 ul analysebuffer med [<35>S]GTPyS (0.4nM), 25 av oksotremorin(EC90) og GDP (3uM), 25 av fortynnet testforbindelse og 25 CHO-cellemembraner som uttrykker hM2-reseptoren. Analyseplatene ble så inkubert ved 37°C i 60 minutter. Analyseplatene ble filtrert over 1% BSA-forbehandlede GF/B-filteret ved bruk av en PerkinElmer 96-brønners høster. Platene ble renset med iskald vaskebuffer i 3 x 3 sekunder, og så luft-eller vakuumtørket. 50 (il Microscint-20 scintillasjonsvæske ble satt til hver brønn, og hver plate ble forseglet og radioaktiviteten tellet på en Topcounter (PerkinElmer). Data ble analysert ved ikke-lineær regresjonsanalyse med GraphPad Prism Software-pakken (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ved bruk av den ikke-lineære regresjons-, ensetekonkurranseligningen. Cheng-Prusoff-ligningen ble benyttet for å beregne K; ved bruk av IC50-verdiene for konsentrasjon-responskurve for testforbindelsen, og oksotremorinkonsentrasjonen i analysen som Kdhenholdsvis [L], ligandkonsentrasjonen.
I denne analyse antyder lavere K;-verdier at testforbindelsen har en høyere, funksjonell aktivitet på den testede reseptor. Eksemplifiserte forbindelser ifølge oppfinnelsen som ble testet i denne analyse ble typisk funnet å ha en Ki-verdi på mindre enn rundt 300 nM for blokkade av oksotremorinstimulert [<35>S]GTPyS-binding i CHO-K1 -celler som uttrykker hM2-reseptoren. For dette eksempel ble forbindelsen ifølge sammenligningseksempel 3 funnet å ha en K;-verdi på mindre enn 10 nM. C. Blokkade av agonistmediert kalsiumfrigivning via FLIPR-analyser. Muskariniske reseptorsubtyper (Mi-, M3- og M5-reseptorer) som kobler til Gq-proteiner, aktiverer fosfolipase C (PLC)-veien ved agonistbinding til reseptoren. Som et resultat hydrolyserer aktivert PLC fosfatylinositolfosfatase (PIP2) til diacylglycerol (DAG) og fosfatidyl-l,4,5-trifosfat (IP3), som i sin tur genererer kalsiumfrigivning fra intracellulære forhold, det vil si endoplasmisk og sarkoplasmisk retikulum. FLIPR (Molecular Devices, Sunnyvale, CA)analyse trekker fordel av denne økning i intracellulært kalsium ved å bruke et kalsiumsensitivt fargestoff (Fluo-4AM, Molecular Probes, Eugene, OR) som fluorescerer når fritt kalsium binder. Denne fluoressenshendelsen måles i sann tid ved FLIPR som detekterer forandringen i fluorescens fra et monosjikt av celler klonet med humane Mi- og M3- og sjimpanse M5-reseptorer. Antagonistpotensen kan bestemmes ved evnen hos antagonistene til å inhibere agonistmedierte økninger i intracellulært kalsium.
For FLIPR kalsium stimuleringsanalyser blir CHO-celler som stabilt uttrykker hMi_, I1M3- og cM5-reseptorer sådd i 96-brønners FLIPR-plater natten før analysene foretas. Sådde celler vaskes to ganger med Cellwash (MTX Labysystems, Inc.) med FLIPR-buffer (10 mM HEPES, pH 7.4, 2 mM kalsiumklorid, 2.5 mM probenecid i Hanks buffret saltoppløsning (HBSS) uten kalsium og magnesium) for å fjerne vekstmedium og etterlate 50 ul per brønn FLIPR-buffer. Cellene inkuberes så med 50 ul/brønn 4 uM FLUO-4AM (en 2X-oppløsning ble laget) i 40 minutter ved 37°C, 5% karbondioksid. Etter fargestoffinkuberingsperioden ble cellene vasket to ganger med FLIPR-buffer, og man oppnådde et sluttvolum på 50 ul/brønn.
For å bestemme antagonistpotensen ble den doseavhengige stimulering av intracellulær Ca<2+->frigivning for oksotremorin først bestemt slik at antagonistpotensen senere kan måles mot oksotremolinstimuleringen ved en ECgo-konsentrasjon. Cellene inkuberes først med forbindelsesfortynningsbuffer i 20 minutter, fulgt av agonisttilsetting som gjennomføres ved denne FLIPR. En EC9o-verdi for oksotremorin genereres i henhold til metoden som er detaljert i FLIPR-målinger og datareduksjonsdelene nedenfor, i forbindelse med formelen ECf = ((F/100-F)<A>1/H)<*>EC50. En oksotremorinkonsentrasjon på 3 x ECffremstilles i stimuleringsplater slik at en ECgo-konsentrasjon av oksotremorin settes til hver brønn i antagonistinhiberingsanalyseplatene.
Parametrene som benyttes for FLIPR er: eksponeringslengde på 0.4 sekunder, laserstyrke på 0.5 Watt, eksiteringsbølgelengde på 488 nm og emiteringsbølgelengde 550 nm. Basislinjer bestemmes ved å måle forandringen i fluorescens i 10 sekunder før tilsetning av agonist. Etter agoniststimulering måler FLIRP kontinuerlig forandringen av fluorescens hvert 0.5 til 1 sekund i 1.5 minutt for å oppfange den maksimale fluorescensforandring.
Forandringen i fluorescens uttrykkes som maksimumfluorescens minus basislinjefluorescens for hver brønn. Rådata analyseres mot logaritmen for medikamentkonsentrasjoner ved ikke-lineær regresjon med GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ved bruk av den innebyggede modell for sigmoidal doseringsrespons. Antagonistiske Ki-verdier bestemmes ved Prism ved bruk av oksotremorin ECso-verdiene som Kdog oksotremorin EC90for ligandkonsentrasjonen i henhold til Chen-Prosoff-ligningen (Cheng & Prusoff, 1973).
I denne analyse antyder en lavere Ki-verdi at testforbindelsen har en høyere, funksjonell aktivitet ved den testede reseptor. Eksemplifiserte forbindelser ifølge oppfinnelsen som ble testet ved denne analyse ble typisk funnet å ha en Ki-verdi på mindre enn rundt 300 nM for blokkade av agonistmediert kalsiumfrigivning i CHO-celler som stabilt uttrykker hMi-, hM3og cM5-reseptorene. For eksempel ble forbindelsene ifølge sammenligningseksempel 3 funnet å ha en Ki-verdi på mindre enn 10 nM for hMi-, I1M3- og cMj-reseptor.
Analyse testprosedyre E.
Helcelle cAMP-flashplateanalyse med en lungeepitelcellelinje som endogent uttrykker human pVadrenergisk reseptor.
For bestemmelse av agonistpotenser og -effektiviteter (iboende aktiviteter) i en cellelinje som uttrykker endogene nivåer av P2-adrenergisk reseptor, ble det benyttet en humanlungeepitelcellelinje (ATCC CRL-9609, American Type Culture Collection, Manassas, VA) (January B, et al., British Journal of Pharmacology, 1998, 123, 4,701-11). Celler ble dyrket til 75-90% konfluens i komplett, serumfritt medium (LHC-9 MEDIUM inneholdende epinefrin og retinonsyre, katalognr. 181-500, Biosource International, Camarillo, CA). Dagen før analysen ble medium forandret til LHC-8 (intet epinefrin eller retinonsyre, katalognr. 141-500, Biosource International, Camarillo, CA). cAMP-analyser ble gjenomført i et radioimmunoanalyseformat ved bruk av Flashplate Adenylyl Cyclase Activation Assay System med [<125>I]-cAMP (NEN SMP004, PerkinElmer Life Sciences Inc., Boston, MA), i henhold til produsentens instruksjoner. På analysedagen ble cellene vasket med PBS, løftet ved skraping med 5 mM EDTA i PBS, og tellet. Cellene ble pelletisert ved sentrifugering ved 1 000 rpm og resuspendert i stimuleringsbuffer som på forhånd var oppvarmet til 37°C med en sluttkonsentrasjon på 600 000 celler/ml. Cellene ble benyttet ved en sluttkonsentrasjon på 100 000 til 120 000 celler/brønn i denne analyse. Testforbindelsene ble seriefortynnet til analysebuffer (75 mM Tris/HCl pH 7.4 at 25°C, 12.5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 0.2% BSA) i Beckman Biomek-2000. Testforbindelsene ble testet i analysen ved 11 forskjellige konsentrasjoner i området 10 uM til 10 pM. Reaksjonsblandingene ble inkubert i 10 minutter ved 37°C og stanset ved 100 ul iskald detekteringsbuffer. Platene ble forseglet, inkubert over natten ved 4°C og tellet til neste morgen i en Topcount scintillasjonsteller (Packard BioScience Co., Meriden, CT). Mengden produsert cAMP per ml reaksjonsblanding ble beregnet, basert på tellingene som var observert for prøver og cAMP-standarder som beskrevet i produsentens bruksmanual. Data ble analysert ved ikke-lineær regresjonsanalyse med GraphPad Prism Software-pakke (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) ved bruk av 4-paramatermodellen for sigmoidal doserespons.
I denne analyse antyder en lavere ECso-verdi at testforbindelsen har en høyere, funksjonell aktivitet på den testede reseptor. Eksemplifiserte forbindelser ifølge oppfinnelsen som ble testet i denne analyse ble typisk funnet å ha en ECso-verdi på mindre enn rundt 300 nM for den p-adrenergiske reseptor. For eksempel ble forbindelsene ifølge sammenligningseksemplene 3 og 6 funnet å ha ECso-verdier på mindre enn 10 nM.
Hvis ønskelig, ble testforbindelseeffektiviteten (%eff) beregnet fra forholdet mellom observert Emax (TOP for den tilpassede kurve) og den maksimale respons som ble oppnådd for isoproterenol doseresponskurve, og ble uttrykt som %Eff relativt til isoproterenol. Eksemplifiserte forbindelser ifølge oppfinnelsen som ble testet i denne analyse, viste typisk en %Eff større enn rundt 40.
Analyse testprosedyre F.
Varighet av bronkobeskyttelse i marsvinmodeller på acetylkolinindusert- eller histaminindusert bronkokonstriksj on.
Disse in vivo-analyser ble benyttet for å bedømme de bronkobeskyttende effekter av testforbindelser som viser både muskarinisk reseptorantagonist- og p2-adrenergisk reseptor agonistaktivitet. For å isolere muskarinisk antagonistaktivitet i den acetylkolininduserte bronkokonstriksjonsmodell, ble dyrene administrert propanolol, en forbindelse som blokkerer p-reseptoraktiviteten, før administrering av acetylkolin. Varigheten av bronkobeskyttelse i den histamininduserte bronkokonstriksjonsmodellen reflekterer p2-adrenergiske reseptoragonistaktivitet.
Grupper på 6 marsvin (Duncan-Hartley (HsdPoc:DH) Harlan, Madison, WI) med vekt mellom 250 og 350 g ble identifisert individuelt ved burkort. Gjennom hele studien ble dyrene tillatt adgang til næring og vann ad libitum.
Testforbindelsene ble administrert via inhalering over 10 minutter i et helkropps eksponeringsdoseringskammer (R&S Molds, San Carlos, CA). Doseringskamrene ble anordnet slik at en aerosol samtidig ble avlevert til seks individuelle kammere fra en sentral manifold. Marsvinene ble eksponert til en aerosol av en testforbindelse eller vehikkel (WFI). Disse aerosoler ble generert fra vandige oppløsninger ved bruk av et LC Star Nebulizersett (modell 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc.
Midlothian, VA) drevet av en blanding av gass (C02= 5%, 02= 21% og N2= 74%) ved et trykk på 22 psi. Gasstrømmen gjennom forstøver ved dette driftstrykk var rundt 3 l/min. De genererte aerosoler ble drevet inn i kamrene ved positivt trykk. Ingen fortynningsluft ble benyttet under avleveringen av aerosoliserte oppløsninger. Under den 10 minutters fortåkning ble rundt 1.8 ml oppløsning fortåket. Denne verdi ble målt gravimetrisk ved å sammenligne pre- og postnebuliseringsvektene for den fyllte appuratur.
De bronkobeskyttende effekter for testforbindelsene som ble administrert via inhalering, ble evaluert ved bruk av helkroppspletysmografi 1.6,24,48 og 72 timer etter dosering.
Førtifem minutter etter starten av den pulmonære evaluering ble hvert marsvin anestisert med en intramuskulær injeksjon av ketamin (43.75 mg/kg), xylazin (3.50 mg/kg) og acepromazin (1.05 mg/kg). Etter at det kirurgiske stedet var barbert med 70% alkohol, ble det foretatt et 2-3 cm midtlinjeinnsnitt av det ventrale aspekt av halsen. Deretter ble jugulærvenene isolert og kanylert med saltoppløsningsfylt polyetylenkateter (PE-50, Becton Dickinson, Sparks, MD) for å tillat intravenøs infusjon av acetylkolin (Ach) eller histamin i saltoppløsning. Trakea ble så dissektert fri og kanylert med et 14G teflonrør (nr. NE-014, Small Parts, Miami Lakes,FL). Hvis nødvendig ble anestesi opprettholdt ved ytterligere, intramuskulær injeksjon av den ovenfor nevnte anestetiske blanding. Anestesidybden ble overvåket og justert hvis dyret responderte på stikking i potene, eller hvis respirasjonshastigheten var høyere enn 100 åndedrag per minutt.
Når kanyleringene var ferdig ble dyrene plassert i en pletysmograf (#PLY3114, Buxco Electronics, Inc., Sharon, CT) og en øsofagealtrykkanyle(PE-160, Becton Dickinson, Sparks, MD) ble innført for å måle det pulmonære drivtrykk (trykket). Teflontrakealrør ble festet til åpningen av pletysmografen for å tillate marsvinet å puste romluft fra utsiden av kammeret. Kammeret ble så forseglet. En oppvarmingslampe ble benyttet for å opprettholde kroppstemperaturen, og marsvinets lunge ble inflatert tre ganger med 4 ml luft ved bruk av en 10 ml kalibreringssprøyte (#5520 Series, Hans Rudolph, Kansas City, MO) for å sikre at de nedre luftveier ikke kollapset og at dyret ikke led under hyperventilering.
Når det var fastslått at bunnlinje verdiene lå innenfor området 0.3 til 0.10 ml per cm H20 for kompliance og innen området 0.1 til 0.199 cm H20/ml per sekund for resistens, ble den pulmonære evaluering initiert. Et Buxco pulmonært målingscomputerprogram muliggjør en samling og derivatisering av pulmonære verdier.
Start av programmet initierte forsøksprotokollen og datas amlingen. Volumforandringer over tid som inntrådte med pletysmografen med hvert åndedrag, ble målt via en Buxco trykktransduser. Ved å integrere dette signal over tid ble en måling av flow beregnet for hvert åndedrag. Dette signal, sammen med de pulmonære trykkforandringer som ble samlet ved bruk av en Sensymtrykktransduser (nr. TRD4100), ble forbundet via en Buxco (MAX 2270) forsterker til en datasamlingsgrenseflate (nr. SFT3400 og SFT3813). Alle andre pulmonære parametere ble avledet fra disse to innganger.
Basislinjeverdiene ble samlet i 5 minutter, hvoretter marsvinene ble utfordret med Ach eller histamin. Ved evaluering av de muskariniske antagonisteffekter, ble propanolol (t mg/kg, iv) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) administrert 15 minutter før utfordring med Ach. Ach (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) (0.1 mg/ml) ble infusert intravenøst i 1 minutt fra en sprøytepumpe (sp210iw, World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL) ved de følgende doser og de foreskrevne tider fra starten av forsøket: 1.9 ug/minutt ved 5 minutter, 3.8 ug/minutt ved 10 minutter, 7.5 ug/minutt ved 15 minutter,
15.0 ug/minutt ved 20 minutter, 30 ug/minutt ved 25 minutter og 60 ug/minutt ved
30 minutter. Alternativt ble bronkobeskyttelsen til testforbindelsene bedømt i acetylkolinutfordringsmodellen uten forbehandling med P-blokkerende forbindelse.
Ved evaluering av den p2-adrenergiske reseptoragonisteffektivitet hos testforbindelsene, ble histamin (25 ug/mL) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) infusert intravenøst i 1 minutt fra en sprøytepumpe med følgende doser og de foreskrevne tider fra forsøksstart: 0.5Hg/minutt, 0.9 ug/minutt ved 10 minutter, 1.9 ug/minutt ved 15 minutter, 3.8 ug/minutt ved 20 minutter, 7.5 ug/minutt ved 25 minutter og 15 ug/minutt ved 30 minutter. Hvis resistensen eller komplience ikke hadde vendt tilbake til basislinjeverdiene etter 30 minutter etter hver av Ach- eller histamindose, ble marsvinets lunger inflatert 3 ganger med 4 ml luft fra en 10 ml kalibreringssprøyte. Noterte pulmonære parametere inkludert i respirasjonsfrekvens (åndedrag/minutt), komplience (ml/cm H20) og pulmonær resistens (cm H20/ml per sekund). Etter at de pulmonære fraksjonsmålinger ble fullført ved denne protokolls 35 minutt, ble marsvinet fjernet fra pletysmograf og eutanisert ved karbondioksidinnånding.
De oppnådde data ble beregnet på en av to måter:
(a) Pulmonær resistens (Rl, cm H20/ml per sekund) ble beregnet fra forholdet "trykkforandring" til "flowforandring". RL-responsen på ACh (60 ug/min, IH) ble beregnet for vehikkel og for testforbindelsesgruppene. Midlere ACh-respons i vehikkelbehandlede dyr, ved hvert forbehandlingstidspunkt, ble beregnet og benyttet for å beregne prosent inhibering av ACh-respons ved de tilsvarende forbehandlingstider, ved hver testforbindelsesdose. Inhiberingsdose-responskurvene for "Rl" ble tilpasset med en fire parameters logistisk ligning ved bruk av GraphPad Prism, version 3.00 for Windows (GraphPad Software, San Diego, California) for å estimere bronkoprotektiv ID50(dose som er nødvendig for å inhibere ACh (60 ug/min) bronkokonstriktorrespons med 50%). Den benyttede ligning er som følger:
der X er logaritmen av dosen, Y er responsen (% inhibering av ACh indusert økning i Rl). Y starter ved Min og nærmer seg asymptotisk Max med sigmoidform. (b) Mengden PD2som er definert som mengden Ach eller histamin, som er nødvendig for å gi en dobling av basislinjepulmonær resistens, ble beregnet ved bruk av de pulmonære resistensverdier som er avledet fra flow og trykk over et område av Ach-eller histaminutfordringer ved bruk av den følgende ligning (avledet fra ligningen som ble benyttet for å beregnet PC2o-verdiene i hospitalet (se Am. Thoracic Soc, 2000):
der
Ci= konsentrasjonen av Ach eller histamin før C2
C2= konsentrasjonen av Ach eller histamin som resulterer i minst en 2-gangers økning i pulmonær resistens (RL)
Ro = basislinje RL-verdi
Rj = RL.verdi etter Cj
Rj<=>RL.verdi etter C2
Statistisk analyse av data ble gjennomført ved bruk av tohalet - students t-test. En P-verdi < 0.05 ble overveiet signifikant.
Forbindelser ifølge oppfinnelsen som blir testet i denne analyse, ga typisk en
doseavhengig, bronkobeskyttende effekt mot MCh-indusert bronkokonstriksj on og His-indusert bronkokonstriksj on. Generelt er testforbindelser med en potens (ID50halvannen time etter passering) på mindre enn 300 ug/ml for ACh-indusert bronkokonstriksj on og mindre enn rundt 300 ug/ml His-indusert bronkokonstriksj on i denne analyse, foretrukket. For eksempel ble forbindelsene ifølge sammenligningseksemplene 3 og 6 funnet å ha en ID50mindre enn rundt 100 ug per ml for ACh-indusert
bronkokonstriksj on og en ID50mindre enn rundt 100 ug/ml for His-indusert bronkokonstriksj on halvannen time etter dosering.
I tillegg er testforbindelser med en varighet (PD Ti/2) for den bronkobeskyttende aktivitet på minst 24 timer i denne analyse, generelt foretrukket. Som eksempel ble forbindelsene ifølge sammenligningseksemplene 3 og 6 funnet å ha en PD T1/2på minst rundt 24 timer etter dosering.
Analyse testprosedyre G.
Einthovenmodell for måling av forandringer i ventilasjonen i marsvin. Bronkodilatoraktiviteten for testforbindelsene ble evaluert i en anestisert marsvinmodell (Einthovenmodellen), som benytter ventilasjonstrykk som surrogatmål på luftveismotstand, se for eksempel Einthoven (1892) Pfugers Arch. 51: 367 - 445; and Mohammed et al. (2000) Pulm Pharmacol Ther. l 3 ( 6) :2S7- 92.1 denne modell ble muskariniske antagonist- og pYagonistaktivitet bedømt ved bestemmelse av de beskyttende effekter mot metakolin (MCh)- og histamin (His)-indusert bronkokonstriksjon.
Denne analyse ble gjennomført i Duncan-Hartley-marsvin (Harlan, Indianapolis, IN), med en vekt mellom 300 og 400 g.
Testforbindelse eller vehikkel (det vil si sterilt vann) ble dosert ved inhalering (IH) i løpet av en ti minutters periode i et helkroppseksponeringsdoseringskammer (R+S Molds, San Carlos, CA) ved bruk av 5 ml doseringsoppløsning. Dyrene ble eksponert til en aerosol som ble generert fra et LC Star Nebulizer Set (Model 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian, VA) drevet av Bioblend, en blanding av gassene (5% CO2; 21% O2og 74% N2) ved et trykk på 22 psi. Pulmonære funksjoner ble evaluert ved forskjellige tidspunkter etter inhaleringsdoseringen.
Førtifem minutter før starten av den pulmonære funksjonsevaluering, ble marsvinene anestisert med en intramuskulær (IM) injeksjon på en blanding av ketamin (13.7 mg/kg/xylazin (3.5 mg/kg) acepromazin (1.05 mg/kg). En supplementsdose av denne blanding (50% av utgangsdosen) ble administrert etter behov. Jugulærvenen og karotidarterien ble isolert og kanylert med saltoppløsningsfylte polyetylenkatetere (mikrorenatan henholdsvis PE-50, Beckton Dickinson, Sparks, MD). Karotidarterien ble forbundet med en trykktransduser for å tillate måling av blodtrykket, og jugulærvenekanylen ble benyttet for IV-injeksjon av enten MCh eller His. Trakea ble så dissektert fri og kanylert med en 14G-nål (nr. NE-014, Small Parts, Miami Lakes, FL). Etter at kanyleringene var fullstendige, ble marsvinene ventilert ved bruk av en respirator (Model 683, Harvard Apparatus, Inc., MA), satt til et slagvolum på 1 ml/100 g kroppsvekt, men ikke over 2.5 ml volum, og en hastighet på 100 slag/minutt. Ventilasjonstrykket (VP) ble målt i den trakeale kanyle ved bruk av en Biopac-transduser som var forbundet med en Biopac (TSD 137C) forforsterker. Kroppstemperaturen ble holdt ved 37°C ved bruk av en varmepute. Før initiering av datasamling ble pentoparbital (25 mg/kg) administrert intraperitonealt (IP) for å undertrykke spontanånding og oppnå en stabil basislinje. Forandringene i VP ble notert på en Biopac Windows datasamlingsgrenseflate. Basislinjeverdiene ble samlet i minst 5 minutter, hvoretter marsvinene ble utfordret IV ikke-kumulativt med 2-ganger inkrementdosene av biokonstriktoren (MCh eller His). Når MCh ble benyttet som biokonstriktormiddel, ble dyrene forbehandlet med propanolol (5 mg/kg, IV) for å isolere de antimuskariniske effekter av testforbindelsen. Forandringer i VP ble notert ved bruk av Acknowledge Data Collection Software (Santa Barbara, CA). Etter ferdig studium ble dyrene eutanisert.
Forandringer i VP ble målt i cm vann. Forandring i VP (cm H2O) = topptrykk (etter bronkokonstriktorutfordring) - minus toppbasislinjetrykk. Dose-reseponskurven for MCh eller His, ble tilpasset til en fire parameters logistisk ligning ved bruk av GraphPad Prism, versjon 3.00 for Windows (GraphPad Software, San Diego, California). Ligningen var som følger:
der X er logaritmen av dosen, Y er responsen, Y starter ved Min og nærmer seg asymptotisk til Max med en sigmoidform.
Prosent inhibering av bronkokonstriktorresponsen til en submaksimal dose av MCh eller His, ble beregnet ved hver dose av testforbindelsen ved bruk av følgende ligning: %inhibering av responsen = 100-((topptrykk (etter bronkokonstriktorutfordring, behandlet) - topp basislinjetrykk (behandlet)<*>100%/ (topptrykk (etter bronkokonstriktorutfordring, vann) - topp basislinjetrykk og (vann)). Inhiberingskurvene ble tilpasset ved bruk av fire parameterlogistikkligninger fra GraphPad Software. ID50(den dose som kreves for å gi 50% inhibering av bronkokonstriktorresponsen) og Emax (maksimal inhibering) ble også estimert der det var hensiktsmessig.
Størrelsesordenen av bronkobeskyttelsen ved forskjellige tidspunkter etter inhalering av testforbindelsene ble benyttet for å estimere den farmakodynamiske halveringstid (PD Ti/2). P T1/2ble bestemt ved bruk av en ikke-lineær regresjonstilpasning ved bruk av en enfaseeksponentiell reduksjonsligning (GraphPad Prism, versjon 4.00); Y=Span<*>exp(-K<*>X) + platå; starter ved Span+platå og synker (reduseres) til platå med en hastighetskonstant K. PD Tm = 0.69/K. Platå var begrenset til 0.
Eksemplifiserte forbindelser ifølge oppfinnelsen som ble testet i denne analyse produserte typisk en doseavhengig bronkokonprotektiv effekt mot MCh-indusert bronkokonstriksj on og His-indusert bronkokonstriksj on. Generelt er testforbindelser med en ID50mindre enn rundt 300 ug/ml for MCh-indusert bronkokonstriksj on og en ID50mindre enn rundt 300 ug/ml for His-indusert bronkokonstriksj on halvannen time etter dose, i denne analyse, foretrukket. I tillegg er generelt testforbindelser med en varighet (PD T1/2) for den bronkobeskyttende aktivitet på minst rundt 24 timer i denne analyse, generelt foretrukket.
Analyse testprosedyre H.
Marsvininhaleringssaliverings(spyttavsondrings)analyse.
Marsvin (Charles River, Wilmington, MA) med en vekt på fra 200-350 g ble akklimatisert i in-house-marsvinkolonien i minst 3 dager etter ankomst. Testforbindelsene eller vehikel ble dosert via inhalering (IH) i løpet av en 10 minutters periode i et kakeformet doseringskammer (R+S Molds, San Carlos, CA). Testoppløsningene ble oppløst i sterilt vann og avgitt ved hjelp av en forstøver fylt med 2.0 ml doseringsoppløsning. Marsvinene ble holdt i inhaleringskammere i 30 minutter. I løpet av dette tidsrom ble marsvinene holdt på et areal på rundt 110 cm<2>. Dette rommet var tilstrekkelig til at dyrene kunne snu seg fritt, reposisjonere seg selv og tillate stell. Etter 20 minutters akklimatisering ble marsvinene eksponert til en aerosol generert fra en LS Star Nebulizer Set (Model 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian, VA), drevet av husluft med trykk på 22 psi. Etter ferdig forstøvning ble marsvinene evaluert 1, 5,6,12,24,48 eller 72 timer etterbehandling.
Marsvinene ble anestisert i en time før testing med en intramuskulær (IM) injeksjon av en blanding av ketamin 43.75 mg/kg, xylazin 3.5 mg/kg og acepromazin 1.05 mg/kg i et volum på 0.88 ml/kg. Dyrene ble anbrakt med den ventrale side opp på et varme (teppe), skrådd 20 grader med hodet nedover. Et 4-sjikt 5 cm x 5 cm gassbind (Nu- Gauze General-use svamper, Johnson and Johnson, Arlington, TX) ble anbrakt i marsvinets munn. 5 minutter senere ble den muskariniske agonisten pilokarpin (3.0 mg/kg, s.c.) administrert og puten umiddelbart kassert og erstattet med en ny på forhånd veiet gassbindpute. Spytt ble samlet i 10 minutter på hvilket tidspunkt puten ble veiet og differansen i vekt skrevet opp for å bestemme mengden akkumulert spytt (i mg). Den midlere mengde spytt som var samlet for dyrene som fikk vehikkel og hver dose av testforbindelsen ble beregnet. Vehikkelgruppegjenomsnittet ble ansett som 100 % spyttutsondring. Resultatene ble beregnet ved bruk av resultatgjenomsnitt (n = 3 eller større). Konfidensintervaller (95%) ble beregnet for hver dose på hvert tidsrom ved bruk av toveis ANOVA. Denne modell er en modifisert versjon av den prosedyre som er beskrevet av Rechter, "Estimation of anticholinergic drug effects in mice by antagonism against pilocarpine-induced salivation" Ata Pharmacol Toxicol, 1996, 24:243-254.
Den midlere vekt av spytt hos vehikkelbehandlede dyr på hvert
forbehandlingstidspunkt, ble beregnet og benyttet for å beregnet prosent inhibering av spyttutsondring ved den tilsvarende forbehandlingstid, ved hver dose. Inhiberingsdose-responsdata ble tilpasset en fire parameters logistisk ligning ved bruk av GraphPad Prism, versjon 3.00 for Windows (GraphPad Software, San Diego, California) for å estimere antisialagog ID50(den dose som kreves for å inhibere 50% pilokarpin-evokert spyttutsondring). Ligningen som ble benyttet var som følger:
der X er dosens logaritme, Y er responsen (%inhibering av spyttutsondring). Y starter ved Min og nærmer seg asymptotisk Max med en sigmoidform.
Forholdet mellom antisialagog ID50og bronkoprotektiv ID50ble benyttet for å beregne den tilsynelatende lunge-selektivitetsindeks for testforbindelsen. Generelt er forbindelser med en tilsynelatende lungeselektivitetsindeks større enn rundt 5, foretrukket. I denne analyse hadde forbindelsen ifølge sammenligninseksempel 3 en tilsynelatende lungeselektivitetsindeks på større enn 5.

Claims (9)

1. Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l ,2-dmydrokinolin-5-yl)etylamino]me1yl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)e1yl]piperdin-4-yl ester av formel:
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav.
2. Forbindelse ifølge krav 1, som utgjøres av bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-1,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl} -5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester av formel:
3. Farmasøytisk sammensetning, omfattende a) bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav; og b) en farmasøytisk akseptabel bærer.
4. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 3, hvori sammensetningen omfatter et ytterligere terapeutisk middel.
5. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 4, hvor det ytterligere terapeutiske midlet er et steroidalt anti-inflammatorisk middel.
6. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 5, hvor det steroidale anti-inflammatoriske midlet er et kortikosteroid.
7. Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l ,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, for anvendelse i terapi.
8. Bifenyl-2-ylkarbaminsyre l-[2-(2-klor-4-{[(R)-2-hydroksy-2-(8-hydroksy-2-okso-l ,2-dihydrokinolin-5-yl)etylamino]metyl}-5-metoksyfenylkarbamoyl)etyl]piperdin-4-yl ester eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller solvat derav, for anvendelse ved behandlingen av en pulmonal sykdom.
9. Anvendelse ifølge krav 8, hvor den pulmonale sykdommen er kronisk obstruktiv pulmonal sykdom eller astma.
NO20054206A 2003-02-14 2005-09-09 Bifenylderivat, anvendelse derav samt farmasøytisk sammensetning omfattende forbindelsen. NO331947B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US44784303P 2003-02-14 2003-02-14
US46703503P 2003-05-01 2003-05-01
PCT/US2004/004449 WO2004074246A2 (en) 2003-02-14 2004-02-13 Biphenyl derivatives having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20054206D0 NO20054206D0 (no) 2005-09-09
NO20054206L NO20054206L (no) 2005-10-19
NO331947B1 true NO331947B1 (no) 2012-05-07

Family

ID=32912274

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20054206A NO331947B1 (no) 2003-02-14 2005-09-09 Bifenylderivat, anvendelse derav samt farmasøytisk sammensetning omfattende forbindelsen.
NO20120150A NO333394B1 (no) 2003-02-14 2012-02-15 Bifenylderivat, farmasøytisk sammensetning omfattende samme samt anvendelse av samme til behandling av en pulmonal lidelse

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20120150A NO333394B1 (no) 2003-02-14 2012-02-15 Bifenylderivat, farmasøytisk sammensetning omfattende samme samt anvendelse av samme til behandling av en pulmonal lidelse

Country Status (28)

Country Link
US (15) US7141671B2 (no)
EP (5) EP2246345B1 (no)
JP (6) JP4555283B2 (no)
KR (3) KR101224497B1 (no)
AR (1) AR043176A1 (no)
AT (1) ATE482934T1 (no)
AU (2) AU2004213411B2 (no)
BR (1) BRPI0407508B8 (no)
CA (1) CA2515777C (no)
CY (2) CY1111276T1 (no)
DE (1) DE602004029347D1 (no)
DK (2) DK1615889T3 (no)
ES (2) ES2566155T3 (no)
HK (3) HK1086266A1 (no)
HU (1) HUE027380T2 (no)
IL (1) IL169922A (no)
IS (1) IS2847B (no)
MX (1) MXPA05008528A (no)
MY (1) MY148487A (no)
NO (2) NO331947B1 (no)
NZ (1) NZ541579A (no)
PE (1) PE20040950A1 (no)
PL (1) PL216397B1 (no)
PT (1) PT1615889E (no)
RU (1) RU2330841C2 (no)
SI (2) SI1615889T1 (no)
TW (1) TWI331995B (no)
WO (3) WO2004074246A2 (no)

Families Citing this family (163)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6693202B1 (en) * 1999-02-16 2004-02-17 Theravance, Inc. Muscarinic receptor antagonists
ES2165768B1 (es) 1999-07-14 2003-04-01 Almirall Prodesfarma Sa Nuevos derivados de quinuclidina y composiciones farmaceuticas que los contienen.
AR040962A1 (es) * 2002-08-09 2005-04-27 Novartis Ag Compuestos derivados de tiazol 1,3-2-ona, composicion farmaceutica y proceso de preparacion del compuesto
US7407955B2 (en) 2002-08-21 2008-08-05 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg 8-[3-amino-piperidin-1-yl]-xanthines, the preparation thereof and their use as pharmaceutical compositions
PE20040950A1 (es) * 2003-02-14 2005-01-01 Theravance Inc DERIVADOS DE BIFENILO COMO AGONISTAS DE LOS RECEPTORES ADRENERGICOS ß2 Y COMO ANTAGONISTAS DE LOS RECEPTORES MUSCARINICOS
JP4767842B2 (ja) 2003-04-01 2011-09-07 セラヴァンス， インコーポレーテッド β２アドレナリン作用性レセプターアゴニスト活性およびムスカリン性レセプターアンタゴニスト活性を有するジアリールメチル化合物および関連化合物
ATE435862T1 (de) * 2003-05-28 2009-07-15 Theravance Inc Azabicycloalkanverbindungen als muscarinrezeptor antagonisten
ATE459359T1 (de) * 2003-06-06 2010-03-15 Arexis Ab Verwendung von kondensierten heterozyklischen verbindungen als scce-hemmern zur behandlung von hautzuständen
US20050026948A1 (en) * 2003-07-29 2005-02-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medicaments for inhalation comprising an anticholinergic and a betamimetic
CN100569760C (zh) * 2003-11-21 2009-12-16 施万制药 具有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱性受体拮抗剂活性的化合物
TW200531692A (en) 2004-01-12 2005-10-01 Theravance Inc Aryl aniline derivatives as β2 adrenergic receptor agonists
WO2005080375A1 (en) * 2004-02-13 2005-09-01 Theravance, Inc. Crystalline form of a biphenyl compound
JP2007528415A (ja) * 2004-03-11 2007-10-11 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリンレセプターアンタゴニストとしての有用なビフェニル化合物
JP2007528408A (ja) * 2004-03-11 2007-10-11 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリンレセプターアンタゴニストとしての有用なビフェニル化合物
EP1723115A1 (en) 2004-03-11 2006-11-22 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
JP2007528412A (ja) * 2004-03-11 2007-10-11 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリンレセプターアンタゴニストとして有用なビフェニル化合物
US7456199B2 (en) * 2004-03-11 2008-11-25 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
TW200538095A (en) * 2004-03-11 2005-12-01 Theravance Inc Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
TWI341836B (en) 2004-03-11 2011-05-11 Theravance Inc Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
WO2005087739A1 (en) * 2004-03-11 2005-09-22 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
ES2257152B1 (es) * 2004-05-31 2007-07-01 Laboratorios Almirall S.A. Combinaciones que comprenden agentes antimuscarinicos y agonistas beta-adrenergicos.
CA2568571C (en) * 2004-05-31 2012-12-18 Almirall Prodesfarma S.A. Combinations comprising antimuscarinic agents and corticosteroids
EP1833822A2 (en) * 2004-08-16 2007-09-19 Theravance, Inc. Compounds having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
EP1778626A1 (en) * 2004-08-16 2007-05-02 Theravance, Inc. Compounds having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
TWI374883B (en) * 2004-08-16 2012-10-21 Theravance Inc Crystalline form of a biphenyl compound
GT200500281A (es) 2004-10-22 2006-04-24 Novartis Ag Compuestos organicos.
US20090258858A1 (en) * 2004-10-29 2009-10-15 Jakob Busch-Petersen Muscarinic acetylcholine receptor antagonists
DE102004054054A1 (de) 2004-11-05 2006-05-11 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Herstellung chiraler 8-(3-Amino-piperidin-1-yl)-xanthine
GB0426164D0 (en) * 2004-11-29 2004-12-29 Novartis Ag Organic compounds
TW200714587A (en) * 2005-03-10 2007-04-16 Theravance Inc Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
US7642355B2 (en) 2005-03-10 2010-01-05 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
EP1856112A1 (en) * 2005-03-10 2007-11-21 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
US7659403B2 (en) * 2005-03-10 2010-02-09 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
WO2006099031A1 (en) * 2005-03-10 2006-09-21 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
GB0507577D0 (en) 2005-04-14 2005-05-18 Novartis Ag Organic compounds
ES2265276B1 (es) 2005-05-20 2008-02-01 Laboratorios Almirall S.A. Derivados de 4-(2-amino-1-hidroxietil)fenol como agonistas del receptor beta2 adrenergico.
JP2008546695A (ja) 2005-06-13 2008-12-25 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリン受容体アンタゴニストとして有用なビフェニル化合物
US8429052B2 (en) * 2005-07-19 2013-04-23 Lincoln National Life Insurance Company Method and system for providing employer-sponsored retirement plan
NZ566068A (en) 2005-08-08 2011-03-31 Argenta Discovery Ltd Bicyclo[2.2.1]hept-7-ylamine derivatives and their uses
GB0516313D0 (en) 2005-08-08 2005-09-14 Argenta Discovery Ltd Azole derivatives and their uses
TW200738658A (en) 2005-08-09 2007-10-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
EP2532678A1 (en) 2005-10-21 2012-12-12 Novartis AG Human antibodies against il13 and therapeutic uses
GB0601951D0 (en) 2006-01-31 2006-03-15 Novartis Ag Organic compounds
GB0602778D0 (en) * 2006-02-10 2006-03-22 Glaxo Group Ltd Novel compound
US7973055B2 (en) * 2006-03-09 2011-07-05 Theravance, Inc. Crystalline forms of a biphenyl compound
TW200745067A (en) 2006-03-14 2007-12-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
NZ570693A (en) 2006-03-20 2011-02-25 Pfizer Ltd Amine derivatives
PT2013211E (pt) 2006-04-21 2012-06-21 Novartis Ag Derivados de purina para utilização como agonistas de receptores a2a de adenosina
TW200811104A (en) * 2006-04-25 2008-03-01 Theravance Inc Crystalline forms of a dimethylphenyl compound
TW200811105A (en) 2006-04-25 2008-03-01 Theravance Inc Dialkylphenyl compounds having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
ES2296516B1 (es) * 2006-04-27 2009-04-01 Laboratorios Almirall S.A. Derivados de 4-(2-amino-1-hidroxietil)fenol como agonistas del receptor beta2 adrenergico.
PE20080251A1 (es) 2006-05-04 2008-04-25 Boehringer Ingelheim Int Usos de inhibidores de dpp iv
EA030606B1 (ru) 2006-05-04 2018-08-31 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Способы приготовления лекарственного средства, содержащего полиморфы
EP1852108A1 (en) 2006-05-04 2007-11-07 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co.KG DPP IV inhibitor formulations
GB0613154D0 (en) * 2006-06-30 2006-08-09 Novartis Ag Organic Compounds
CA2665385A1 (en) * 2006-10-04 2008-04-10 Pfizer Limited Sulfonamide derivatives as adrenergic agonists and muscarinic antagonists
ES2302447B1 (es) * 2006-10-20 2009-06-12 Laboratorios Almirall S.A. Derivados de 4-(2-amino-1-hidroxietil)fenol como agonistas del receptor beta2 adrenergico.
TW200833670A (en) 2006-12-20 2008-08-16 Astrazeneca Ab Novel compounds 569
WO2008085608A1 (en) 2007-01-10 2008-07-17 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
JP4720909B2 (ja) * 2007-01-31 2011-07-13 東レ株式会社 ベンジルアミン誘導体またはその薬学的に許容される酸付加塩、およびその医薬用途
GB0702458D0 (en) 2007-02-08 2007-03-21 Astrazeneca Ab Salts 668
ES2306595B1 (es) 2007-02-09 2009-09-11 Laboratorios Almirall S.A. Sal de napadisilato de 5-(2-((6-(2,2-difluoro-2-feniletoxi)hexil)amino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1h)-ona como agonista del receptor adrenergico beta2.
US7974728B2 (en) * 2007-05-04 2011-07-05 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. System for extraction of key process parameters from fault detection classification to enable wafer prediction
PL2155721T3 (pl) 2007-05-07 2011-07-29 Novartis Ag Związki organiczne
ES2320961B1 (es) * 2007-11-28 2010-03-17 Laboratorios Almirall, S.A. Derivados de 4-(2-amino-1-hidroxietil)fenol como agonistas del receptor adrenergico beta2.
CL2008003651A1 (es) 2007-12-10 2009-06-19 Novartis Ag Compuestos derivados de 3,5-diamino-6-cloropirazinamida sustituida; composicion farmaceutica; combinacion farmaceutica; y uso en el tratamiento de una condición inflamatoria o alergica, en particular una enfermedad inflamatoria u obstructiva de las vias respiratorias.
PL2231642T3 (pl) 2008-01-11 2014-04-30 Novartis Ag Pirymidyny jako inhibitory kinazy
EP2242759B1 (en) * 2008-02-06 2012-09-12 AstraZeneca AB Compounds
EP2096105A1 (en) * 2008-02-28 2009-09-02 Laboratorios Almirall, S.A. Derivatives of 4-(2-amino-1-hydroxyethyl)phenol as agonists of the b2 adrenergic receptor
EP2100598A1 (en) 2008-03-13 2009-09-16 Laboratorios Almirall, S.A. Inhalation composition containing aclidinium for treatment of asthma and chronic obstructive pulmonary disease
EP2100599A1 (en) 2008-03-13 2009-09-16 Laboratorios Almirall, S.A. Inhalation composition containing aclidinium for treatment of asthma and chronic obstructive pulmonary disease
PE20140960A1 (es) 2008-04-03 2014-08-15 Boehringer Ingelheim Int Formulaciones que comprenden un inhibidor de dpp4
BRPI0915018A2 (pt) 2008-06-10 2015-10-27 Novartis Ag compostos orgânicos
UY31905A (es) 2008-06-18 2010-01-29 Astrazeneca Ab Derivados de benzoxazinona, procesos de preparación, composiciones farmacéuticas conteniéndolos y aplicaciones.
US8263623B2 (en) 2008-07-11 2012-09-11 Pfizer Inc. Triazol derivatives useful for the treatment of diseases
WO2010007561A1 (en) * 2008-07-15 2010-01-21 Pfizer Limited Novel compounds active as muscarinic receptor antagonists
CA2727769A1 (en) * 2008-07-15 2010-01-21 Pfizer Limited Novel compounds active as muscarinic receptor antagonists
BRPI0916997A2 (pt) 2008-08-06 2020-12-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Inibidor de dpp-4 e seu uso
US20200155558A1 (en) 2018-11-20 2020-05-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Treatment for diabetes in patients with insufficient glycemic control despite therapy with an oral antidiabetic drug
UY32297A (es) 2008-12-22 2010-05-31 Almirall Sa Sal mesilato de 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-fenilitoxi) hexil]amino}-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2( 1h)-ona como agonista del receptor b(beta)2 acrenérgico
BRPI0923121A2 (pt) 2008-12-23 2015-08-11 Boehringer Ingelheim Int Formas salinas de compostos orgânico
TW201036957A (en) 2009-02-20 2010-10-16 Astrazeneca Ab Novel salt 628
EP2228368A1 (en) 2009-03-12 2010-09-15 Almirall, S.A. Process for manufacturing 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy) hexyl]amino}-1-hydroxyethyl)-8-hydroxyquinolin-2(1H)-one
CN102439007A (zh) 2009-03-17 2012-05-02 第一三共株式会社 酰胺衍生物
WO2010119064A1 (en) * 2009-04-14 2010-10-21 Glaxo Group Limited Process for the preparation of a biphenyl-2-ylcarbamic acid ester
AU2015234331B2 (en) * 2009-04-23 2017-08-03 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Diamide compounds having muscarinic receptor antagonist and beta2 adrenergic receptor agonist activity
SI2599778T1 (sl) * 2009-04-23 2017-08-31 Theravance Respiratory Company, Llc Diamidne spojine, ki imajo muskarinski receptor-antagonistično in beta 2 adrenergični receptor-agonistično aktivnost
WO2010126025A1 (ja) * 2009-04-30 2010-11-04 帝人ファーマ株式会社 四級アンモニウム塩化合物
AU2010310449A1 (en) 2009-10-22 2012-05-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions for treatment of cystic fibrosis and other chronic diseases
WO2011061527A1 (en) 2009-11-17 2011-05-26 Astrazeneca Ab Combinations comprising a glucocorticoid receptor modulator for the treatment of respiratory diseases
ES2760917T3 (es) 2009-11-27 2020-05-18 Boehringer Ingelheim Int Tratamiento de pacientes diabéticos genotipificados con inhibidores DPP-IV como la linagliptina
WO2011081937A1 (en) 2009-12-15 2011-07-07 Gilead Sciences, Inc. Corticosteroid-beta-agonist-muscarinic antagonist compounds for use in therapy
US8247436B2 (en) 2010-03-19 2012-08-21 Novartis Ag Pyridine and pyrazine derivative for the treatment of CF
JP6034781B2 (ja) 2010-05-05 2016-11-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 併用療法
ITRM20110083U1 (it) 2010-05-13 2011-11-14 De La Cruz Jose Antonio Freire Piastra per la costruzione di carrelli per aeroplani
EP2386555A1 (en) 2010-05-13 2011-11-16 Almirall, S.A. New cyclohexylamine derivatives having beta2 adrenergic agonist and m3 muscarinic antagonist activities
PL2593429T3 (pl) * 2010-07-13 2015-10-30 Theravance Biopharma R&D Ip Llc Sposób otrzymywania kwasu bifenyl-2-ylokarbaminowego
ES2622519T3 (es) 2010-07-14 2017-07-06 Novartis Ag Componentes heterocíclicos agonistas del receptor IP
WO2012032546A2 (en) * 2010-09-08 2012-03-15 Cadila Healthcare Limited Process for the preparation of salmeterol and its intermediates
US8637516B2 (en) 2010-09-09 2014-01-28 Irm Llc Compounds and compositions as TRK inhibitors
WO2012034095A1 (en) 2010-09-09 2012-03-15 Irm Llc Compounds and compositions as trk inhibitors
US8372845B2 (en) 2010-09-17 2013-02-12 Novartis Ag Pyrazine derivatives as enac blockers
AR083115A1 (es) * 2010-09-30 2013-01-30 Theravance Inc Sales oxalato cristalinas de un compuesto diamida
GB201016912D0 (en) 2010-10-07 2010-11-24 Astrazeneca Ab Novel combination
US9034883B2 (en) 2010-11-15 2015-05-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Vasoprotective and cardioprotective antidiabetic therapy
JP6060242B2 (ja) * 2010-11-30 2017-01-11 株式会社日立国際電気 基板処理装置、半導体装置の製造方法及びバッフル構造
CA2828219A1 (en) 2011-02-25 2012-08-30 Irm Llc Pyrazolo [1,5-a] pyridines as trk inhibitors
EP2510928A1 (en) 2011-04-15 2012-10-17 Almirall, S.A. Aclidinium for use in improving the quality of sleep in respiratory patients
ME02297B (me) 2011-06-10 2016-02-20 Chiesi Farm Spa Jedinjenja koja imaju aktivnost antagonista muskarinskih receptora i agonist beta2 adrenergičnog receptora
EP2718281B1 (en) 2011-06-10 2015-09-09 Chiesi Farmaceutici S.p.A. Compounds having muscarinic receptor antagonist and beta2 adrenergic receptor agonist activity
MX366629B (es) 2011-07-15 2019-07-17 Boehringer Ingelheim Int Quinazolinas sustituidas, su preparación y su uso en composiciones farmacéuticas.
UY34305A (es) 2011-09-01 2013-04-30 Novartis Ag Derivados de heterociclos bicíclicos para el tratamiento de la hipertensión arterial pulmonar
WO2013038390A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Novartis Ag N-substituted heterocyclyl carboxamides
WO2013038381A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Novartis Ag Pyridine/pyrazine amide derivatives
WO2013038378A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Novartis Ag Pyridine amide derivatives
WO2013038386A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Novartis Ag Heterocyclic compounds for the treatment of cystic fibrosis
WO2013038373A1 (en) 2011-09-16 2013-03-21 Novartis Ag Pyridine amide derivatives
EP2578570A1 (en) 2011-10-07 2013-04-10 Almirall, S.A. Novel process for preparing 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy)hexyl]amino}-1(r)-hydroxyethyl)-8-hydroxyquinolin-2(1h)-one via novel intermediates of synthesis.
EP2592078A1 (en) 2011-11-11 2013-05-15 Almirall, S.A. New cyclohexylamine derivatives having beta2 adrenergic agonist and M3 muscarinic antagonist activities
WO2013105066A1 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Novartis Ag Salts of an ip receptor agonist
EP2802582A1 (en) 2012-01-13 2014-11-19 Novartis AG Fused dihydropyrido [2,3 -b]pyrazines as ip receptor agonists for the treatment of pulmonary arterial hypertension (pah) and related disorders
US9115129B2 (en) 2012-01-13 2015-08-25 Novartis Ag Substituted pyrido[2,3-B]pyrazines as IP receptor agonists
US20140378463A1 (en) 2012-01-13 2014-12-25 Novartis Ag IP receptor agonist heterocyclic compounds
WO2013105063A1 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Novartis Ag Fused piperidines as ip receptor agonists for the treatment of pulmonary arterial hypertension (pah) and related disorders
ES2565826T3 (es) 2012-01-13 2016-04-07 Novartis Ag Pirroles fusionados como agonistas del receptor IP para el tratamiento de hipertensión arterial pulmonar (PAH) y trastornos relacionados
US9555001B2 (en) 2012-03-07 2017-01-31 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical composition and uses thereof
US8809340B2 (en) 2012-03-19 2014-08-19 Novartis Ag Crystalline form
EP2641900A1 (en) 2012-03-20 2013-09-25 Almirall, S.A. Novel polymorphic Crystal forms of 5-(2-{[6-(2,2-difluoro-2-phenylethoxy) hexyl]amino}-1-(R)-hydroxyethyl)-8-hydroxyquinolin-2(1h)-one, heminapadisylate as agonist of the ß2 adrenergic receptor.
EP3685839A1 (en) 2012-05-14 2020-07-29 Boehringer Ingelheim International GmbH Linagliptin for use in the treatment of albuminuria and kidney related diseases
WO2013174767A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh A xanthine derivative as dpp -4 inhibitor for use in modifying food intake and regulating food preference
WO2014044288A1 (en) * 2012-09-21 2014-03-27 Crystal Pharma Sa Methods for the preparation of indacaterol and pharmaceutically acceptable salts thereof
MA38147B1 (fr) 2012-12-06 2018-09-28 Chiesi Farm Spa Composés ayant une activité antagoniste du récepteur muscarinique et agoniste du récepteur bêta2 adrénergique
CN104854105B (zh) 2012-12-06 2017-05-17 奇斯药制品公司 具有毒蕈碱受体拮抗剂和β2肾上腺素能受体激动剂活性的化合物
SG11201504452WA (en) * 2012-12-18 2015-07-30 Almirall Sa New cyclohexyl and quinuclidinyl carbamate derivatives having beta2 adrenergic agonist and m3 muscarinic antagonist activity
US9604981B2 (en) 2013-02-13 2017-03-28 Novartis Ag IP receptor agonist heterocyclic compounds
TWI643853B (zh) 2013-02-27 2018-12-11 阿爾米雷爾有限公司 同時具有β2腎上腺素受體促效劑和M3毒蕈鹼受體拮抗劑活性之2-氨基-1-羥乙基-8-羥基喹啉-2(1H)-酮衍生物之鹽類
US9073921B2 (en) 2013-03-01 2015-07-07 Novartis Ag Salt forms of bicyclic heterocyclic derivatives
CZ306252B6 (cs) 2013-03-15 2016-10-26 Zentiva, K.S. Způsob přípravy 5-[(R)-2-(5,6-diethylindan-2-ylamino)-1-hydroxyethyl]-8-hydroxy-(1H)-chinolin-2-onu (indacaterolu)
WO2015008229A1 (en) 2013-07-18 2015-01-22 Novartis Ag Autotaxin inhibitors
JP6424219B2 (ja) 2013-07-18 2018-11-14 ノバルティス アーゲー 複素芳香環−ベンジル−アミド−サイクルコアを含むオートタキシン阻害剤
TWI641373B (zh) 2013-07-25 2018-11-21 阿爾米雷爾有限公司 具有蕈毒鹼受體拮抗劑和β２腎上腺素受體促效劑二者之活性的２－胺基－１－羥乙基－８－羥基喹啉－２（１Ｈ）－酮衍生物之鹽
TW201517906A (zh) 2013-07-25 2015-05-16 Almirall Sa 含有ｍａｂａ化合物和皮質類固醇之組合
US9526728B2 (en) 2014-02-28 2016-12-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Medical use of a DPP-4 inhibitor
EA032075B1 (ru) 2014-04-24 2019-04-30 Новартис Аг Производные аминопиразина в качестве ингибиторов фосфатидилинозитол-3-киназы
BR112016024484A2 (pt) 2014-04-24 2017-08-15 Novartis Ag derivados de aminopiridina como inibidores de fosfatidilinositol 3-quinase
CA2945257A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 Novartis Ag Pyrazine derivatives as phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
TW201617343A (zh) 2014-09-26 2016-05-16 阿爾米雷爾有限公司 具有β２腎上腺素促效劑及Ｍ３蕈毒拮抗劑活性之新穎雙環衍生物
TWI703138B (zh) 2015-02-12 2020-09-01 義大利商吉斯藥品公司 具有蕈毒鹼受體拮抗劑及β２腎上腺素受體促效劑活性之化合物
AR104828A1 (es) 2015-06-01 2017-08-16 Chiesi Farm Spa COMPUESTOS CON ACTIVIDAD ANTAGONISTA DE LOS RECEPTORES MUSCARÍNICOS Y ACTIVIDAD AGONISTA DEL RECEPTOR b2 ADRENÉRGICO
WO2017001907A1 (en) * 2015-06-29 2017-01-05 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Biocatalytic processes for the preparation of vilanterol
EP3383867B1 (en) 2015-12-03 2021-04-14 Chiesi Farmaceutici S.p.A. Compounds having muscarinic receptor antagonist and beta2 adrenergic receptor agonist activity
TW201730150A (zh) * 2016-01-22 2017-09-01 Sichuan Haisco Pharmaceutical Co Ltd 氮雜環醯胺衍生物、其製備方法及醫藥用途
JP2019517542A (ja) 2016-06-10 2019-06-24 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング リナグリプチンおよびメトホルミンの組合せ
EP3484879B1 (en) 2016-07-13 2020-12-30 Chiesi Farmaceutici S.p.A. Hydroxyquinolinone compounds having muscarinic receptor antagonist and beta2 adrenergic receptor agonist activity
CN106706868B (zh) * 2016-11-15 2018-12-04 河南省农业科学院 人工表达HSP27蛋白在检测β2-肾上腺素受体激动剂类药物残留方面的应用
MY196804A (en) 2016-12-14 2023-05-03 Beijing Showby Pharmaceutical Co Ltd Class of bifunctional compounds with quaternary ammonium salt structure
CN106632257B (zh) * 2016-12-15 2019-02-12 上海市奉贤区中心医院 Gsk961081及其中间体的合成方法
US11866482B2 (en) 2018-02-07 2024-01-09 Duke University System and method for homogenous GPCR phosphorylation and identification of beta-2 adrenergic receptor positive allosteric modulators
US11484531B2 (en) 2018-08-30 2022-11-01 Theravance Biopharma R&D Ip, Llc Methods for treating chronic obstructive pulmonary disease
CN113891744A (zh) 2019-06-10 2022-01-04 诺华股份有限公司 用于治疗cf、copd和支气管扩张的吡啶和吡嗪衍生物
EP4021572A1 (en) 2019-08-28 2022-07-06 Novartis AG Substituted 1,3-phenyl heteroaryl derivatives and their use in the treatment of disease
WO2022175982A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Gbr Laboratories Private Limited A process for preparing batefenterol and intermediates thereof
CN114409890A (zh) * 2022-02-28 2022-04-29 中国科学院长春应用化学研究所 一种氨基功能化的聚乙二醇衍生物及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999064035A1 (en) * 1998-06-08 1999-12-16 Advanced Medicine, Inc. β2-ADRENERGIC RECEPTOR AGONISTS
WO2001042212A1 (en) * 1999-12-07 2001-06-14 Theravance, Inc. Carbamate derivatives having muscarinic receptor antagonist activity
WO2001042213A1 (en) * 1999-12-07 2001-06-14 Theravance, Inc. Urea compounds having muscarinic receptor antagonist activity

Family Cites Families (80)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4022776A (en) * 1974-01-31 1977-05-10 Otsuka Pharmaceutical Company Limited 5-[1-Hydroxy-2-(substituted-amino)]ethyl-8-hydroxycarbostyril derivatives
BR8007911A (pt) 1979-12-06 1981-06-16 Glaxo Group Ltd Inalador aperfeicoado
DE3274065D1 (de) 1981-07-08 1986-12-11 Draco Ab Powder inhalator
DE3134590A1 (de) 1981-09-01 1983-03-10 Boehringer Ingelheim KG, 6507 Ingelheim Neue benzo-heterocyclen
US4460581A (en) * 1982-10-12 1984-07-17 Boehringer Ingelheim Kg (1-Hydroxy-2-amino-alkyl)-substituted benzoxazinones and benzoxazolinones
ZW6584A1 (en) * 1983-04-18 1985-04-17 Glaxo Group Ltd Phenethanolamine derivatives
FI88112C (fi) 1985-07-30 1993-04-13 Glaxo Group Ltd Anordning foer administrering av laekemedel till patienter
US4894219A (en) * 1988-03-29 1990-01-16 University Of Florida Beta-agonist carbostyril derivatives, assay method and pharmacological composition
US5225183A (en) 1988-12-06 1993-07-06 Riker Laboratories, Inc. Medicinal aerosol formulations
DK443489D0 (da) 1989-09-08 1989-09-08 Ferrosan As Substituerede urinstofforbindelser, deres fremstilling og anvendelse
SK280967B6 (sk) 1990-03-02 2000-10-09 Glaxo Group Limited Inhalačný prístroj
US6006745A (en) 1990-12-21 1999-12-28 Minnesota Mining And Manufacturing Company Device for delivering an aerosol
US5874063A (en) 1991-04-11 1999-02-23 Astra Aktiebolag Pharmaceutical formulation
WO1992022286A1 (en) 1991-06-12 1992-12-23 Minnesota Mining And Manufacturing Company Albuterol sulfate suspension aerosol formulations
US5337740A (en) 1991-08-01 1994-08-16 New England Pharmaceuticals, Inc. Inhalation devices
NZ246421A (en) 1991-12-18 1996-05-28 Minnesota Mining & Mfg Aerosol formulation containing a drug and a propellant and which is substantially free of surfactant
HUT72321A (en) 1992-03-31 1996-04-29 Glaxo Group Ltd Substituted phenylcarbamate and phenyl-urea derivatives, pharmaceutical compositions containing them and process for their preparation
US5239993A (en) 1992-08-26 1993-08-31 Glaxo Inc. Dosage inhalator providing optimized compound inhalation trajectory
CA2123728A1 (en) * 1993-05-21 1994-11-22 Noriyoshi Sueda Urea derivatives and their use as acat inhibitors
US5497763A (en) 1993-05-21 1996-03-12 Aradigm Corporation Disposable package for intrapulmonary delivery of aerosolized formulations
WO1995006635A1 (fr) 1993-09-02 1995-03-09 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Derive de carbamate et medicament le contenant
US5415162A (en) 1994-01-18 1995-05-16 Glaxo Inc. Multi-dose dry powder inhalation device
KR970701174A (ko) 1994-02-10 1997-03-17 오노다 마사요시 신규한 카바메이트 유도체 및 이의 의약 조성물(Novel carbamate derivative and medicinal composition containing the same)
US5495054A (en) 1994-05-31 1996-02-27 Sepracor, Inc. Tetrahydroindeno[1,2-D][1,3,2]oxazaboroles and their use as enantioselective catalysts
US5983956A (en) 1994-10-03 1999-11-16 Astra Aktiebolag Formulation for inhalation
SE9501384D0 (sv) 1995-04-13 1995-04-13 Astra Ab Process for the preparation of respirable particles
BR9604977A (pt) 1995-04-14 1998-06-09 Glaxo Wellcome Inc Inalador de dose medida sistema inalador de dose medida e uso do mesmo
DE19536902A1 (de) 1995-10-04 1997-04-10 Boehringer Ingelheim Int Vorrichtung zur Hochdruckerzeugung in einem Fluid in Miniaturausführung
WO1997013766A1 (fr) 1995-10-13 1997-04-17 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Derives heteroaromatiques substitues
PE92198A1 (es) 1996-08-01 1999-01-09 Banyu Pharma Co Ltd Derivados de 1,4-piperidina disustituida que contienen fluor
US6040344A (en) 1996-11-11 2000-03-21 Sepracor Inc. Formoterol process
AU9281298A (en) 1997-10-01 1999-04-23 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. Benzodioxole derivatives
CA2313125A1 (en) 1997-12-12 1999-06-24 Laramie Mary Gaster Quinolinepiperazine and quinolinepiperidine derivatives, their preparation and their use as combined 5-ht1a, 5-ht1b and 5-ht1d receptor antagonists
US6255303B1 (en) 1998-03-14 2001-07-03 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Phthalazinone PDE III/IV inhibitors
AP2000001961A0 (en) 1998-04-18 2000-12-31 Glaxo Group Ltd Pharmaceutical aerosol formulation.
GB9808802D0 (en) 1998-04-24 1998-06-24 Glaxo Group Ltd Pharmaceutical formulations
GB9812088D0 (en) 1998-06-05 1998-08-05 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US6713651B1 (en) * 1999-06-07 2004-03-30 Theravance, Inc. β2-adrenergic receptor agonists
CA2315883A1 (en) 1998-06-08 1999-12-16 Advanced Medicine, Inc. Muscarinic receptor antagonists
SE9804000D0 (sv) 1998-11-23 1998-11-23 Astra Ab New composition of matter
AU2056800A (en) * 1998-12-18 2000-07-03 Du Pont Pharmaceuticals Company Heterocyclic piperidines as modulators of chemokine receptor activity
US6693202B1 (en) * 1999-02-16 2004-02-17 Theravance, Inc. Muscarinic receptor antagonists
DE19921693A1 (de) 1999-05-12 2000-11-16 Boehringer Ingelheim Pharma Neuartige Arzneimittelkompositionen auf der Basis von anticholinergisch wirksamen Verbindungen und ß-Mimetika
GB9913083D0 (en) 1999-06-04 1999-08-04 Novartis Ag Organic compounds
PT1169019E (pt) 1999-04-14 2003-07-31 Glaxo Group Ltd Formulacao farmaceutica em aerossol
US6593497B1 (en) * 1999-06-02 2003-07-15 Theravance, Inc. β2-adrenergic receptor agonists
UA73965C2 (en) * 1999-12-08 2005-10-17 Theravance Inc b2 ADRENERGIC RECEPTOR ANTAGONISTS
AU6233201A (en) 2000-06-05 2001-12-17 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Compounds effective as beta-2-adrenoreceptor agonists as well as pde4-inhibitors
CA2441896A1 (en) 2000-12-22 2002-07-04 Almirall Prodesfarma Ag Quinuclidine carbamate derivatives and their use as m3 antagonists
GB0103630D0 (en) 2001-02-14 2001-03-28 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
ATE365720T1 (de) 2001-03-08 2007-07-15 Glaxo Group Ltd Agonisten von beta-adrenorezeptoren
ATE381537T1 (de) 2001-03-22 2008-01-15 Glaxo Group Ltd Formanilid-derivative als beta2-adrenorezeptor- agonisten
US20030018019A1 (en) * 2001-06-23 2003-01-23 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Pharmaceutical compositions based on anticholinergics, corticosteroids and betamimetics
SI1425001T1 (sl) 2001-09-14 2009-04-30 Glaxo Group Ltd Glaxo Welcome Fenetanolaminski derivati za zdravljenje respiratornih bolezni
US6653323B2 (en) 2001-11-13 2003-11-25 Theravance, Inc. Aryl aniline β2 adrenergic receptor agonists
TWI249515B (en) * 2001-11-13 2006-02-21 Theravance Inc Aryl aniline beta2 adrenergic receptor agonists
NZ536337A (en) 2002-04-12 2007-05-31 Boehringer Ingelheim Pharma Medicaments containing betamimetic drugs and a novel anticholinesterase drug
US6747043B2 (en) 2002-05-28 2004-06-08 Theravance, Inc. Alkoxy aryl β2 adrenergic receptor agonists
US6711451B2 (en) * 2002-07-02 2004-03-23 3D Systems, Inc. Power management in selective deposition modeling
GB0217225D0 (en) 2002-07-25 2002-09-04 Glaxo Group Ltd Medicinal compounds
TW200410951A (en) 2002-08-06 2004-07-01 Glaxo Group Ltd M3 muscarinic acetylcholine receptor antagonists
PE20040950A1 (es) * 2003-02-14 2005-01-01 Theravance Inc DERIVADOS DE BIFENILO COMO AGONISTAS DE LOS RECEPTORES ADRENERGICOS ß2 Y COMO ANTAGONISTAS DE LOS RECEPTORES MUSCARINICOS
JP4767842B2 (ja) 2003-04-01 2011-09-07 セラヴァンス， インコーポレーテッド β２アドレナリン作用性レセプターアゴニスト活性およびムスカリン性レセプターアンタゴニスト活性を有するジアリールメチル化合物および関連化合物
ATE435862T1 (de) * 2003-05-28 2009-07-15 Theravance Inc Azabicycloalkanverbindungen als muscarinrezeptor antagonisten
TW200510298A (en) * 2003-06-13 2005-03-16 Theravance Inc Substituted pyrrolidine and related compounds
JP2007524641A (ja) * 2003-07-11 2007-08-30 セラヴァンス， インコーポレーテッド 置換４−アミノ−１−ベンジルピペリジン化合物
CN100569760C (zh) * 2003-11-21 2009-12-16 施万制药 具有β2肾上腺素能受体激动剂和毒蕈碱性受体拮抗剂活性的化合物
WO2005080375A1 (en) * 2004-02-13 2005-09-01 Theravance, Inc. Crystalline form of a biphenyl compound
WO2005087739A1 (en) * 2004-03-11 2005-09-22 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
US7456199B2 (en) * 2004-03-11 2008-11-25 Theravance, Inc. Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
TW200538095A (en) * 2004-03-11 2005-12-01 Theravance Inc Biphenyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
JP2007528408A (ja) * 2004-03-11 2007-10-11 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリンレセプターアンタゴニストとしての有用なビフェニル化合物
JP2007528412A (ja) * 2004-03-11 2007-10-11 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリンレセプターアンタゴニストとして有用なビフェニル化合物
JP2007528415A (ja) * 2004-03-11 2007-10-11 セラヴァンス， インコーポレーテッド ムスカリンレセプターアンタゴニストとしての有用なビフェニル化合物
EP1725525A1 (en) * 2004-03-11 2006-11-29 Theravance, Inc. Diphenylmethyl compounds useful as muscarinic receptor antagonists
TWI374883B (en) * 2004-08-16 2012-10-21 Theravance Inc Crystalline form of a biphenyl compound
EP1778626A1 (en) * 2004-08-16 2007-05-02 Theravance, Inc. Compounds having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
EP1833822A2 (en) * 2004-08-16 2007-09-19 Theravance, Inc. Compounds having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
TW200811105A (en) * 2006-04-25 2008-03-01 Theravance Inc Dialkylphenyl compounds having beta2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
TW200811104A (en) * 2006-04-25 2008-03-01 Theravance Inc Crystalline forms of a dimethylphenyl compound

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999064035A1 (en) * 1998-06-08 1999-12-16 Advanced Medicine, Inc. β2-ADRENERGIC RECEPTOR AGONISTS
WO1999064031A1 (en) * 1998-06-08 1999-12-16 Advanced Medicine, Inc. β2-ADRENERGIC RECEPTOR AGONISTS
WO2001042212A1 (en) * 1999-12-07 2001-06-14 Theravance, Inc. Carbamate derivatives having muscarinic receptor antagonist activity
WO2001042213A1 (en) * 1999-12-07 2001-06-14 Theravance, Inc. Urea compounds having muscarinic receptor antagonist activity

Also Published As

Publication number Publication date
EP3012254A1 (en) 2016-04-27
US7345175B2 (en) 2008-03-18
JP2011225617A (ja) 2011-11-10
WO2004074246A3 (en) 2004-11-18
WO2004074246A2 (en) 2004-09-02
US20110312994A1 (en) 2011-12-22
US7521561B2 (en) 2009-04-21
NO333394B1 (no) 2013-05-27
ES2636480T3 (es) 2017-10-05
EP1594860A2 (en) 2005-11-16
JP5247757B2 (ja) 2013-07-24
EP3012254B1 (en) 2017-05-17
DK1615889T3 (da) 2010-12-20
ATE482934T1 (de) 2010-10-15
HK1216892A1 (zh) 2016-12-09
BRPI0407508A (pt) 2006-02-14
US20080015220A1 (en) 2008-01-17
DE602004029347D1 (de) 2010-11-11
HUE027380T2 (en) 2016-09-28
US20040209915A1 (en) 2004-10-21
NO20054206D0 (no) 2005-09-09
JP4555283B2 (ja) 2010-09-29
JP5436503B2 (ja) 2014-03-05
KR20050102114A (ko) 2005-10-25
KR101223991B1 (ko) 2013-01-21
US20130150404A1 (en) 2013-06-13
US7141671B2 (en) 2006-11-28
MY148487A (en) 2013-04-30
US20140235864A1 (en) 2014-08-21
CY1111276T1 (el) 2015-08-05
US7514558B2 (en) 2009-04-07
HK1086266A1 (en) 2006-09-15
HK1149548A1 (zh) 2011-10-07
EP1615889A2 (en) 2006-01-18
US20060223860A1 (en) 2006-10-05
US20070088054A1 (en) 2007-04-19
KR20110053393A (ko) 2011-05-20
SI1615889T1 (sl) 2011-01-31
EP2246345A1 (en) 2010-11-03
KR101224497B1 (ko) 2013-01-23
US20040167167A1 (en) 2004-08-26
JP2007119496A (ja) 2007-05-17
WO2004074276B1 (en) 2004-10-07
TW200424173A (en) 2004-11-16
US8969571B2 (en) 2015-03-03
SI2246345T1 (sl) 2016-06-30
ES2566155T3 (es) 2016-04-11
TWI331995B (en) 2010-10-21
US7879879B2 (en) 2011-02-01
IS7964A (is) 2005-07-28
US20040209860A1 (en) 2004-10-21
JP2010159291A (ja) 2010-07-22
BRPI0407508B1 (pt) 2015-12-01
NO20120150L (no) 2005-10-19
PT1615889E (pt) 2010-12-09
CA2515777C (en) 2013-01-22
US20060229334A1 (en) 2006-10-12
US20060223858A1 (en) 2006-10-05
DK2246345T3 (en) 2016-05-02
CY1117459T1 (el) 2017-04-26
EP1615889B1 (en) 2010-09-29
US20070276003A1 (en) 2007-11-29
NO20054206L (no) 2005-10-19
RU2005128557A (ru) 2006-03-20
WO2004074276A1 (en) 2004-09-02
PL378025A1 (pl) 2006-02-20
EP2246345B1 (en) 2016-02-10
JP2006517978A (ja) 2006-08-03
AU2004213411B2 (en) 2010-06-24
BRPI0407508B8 (pt) 2021-05-25
US8618131B2 (en) 2013-12-31
WO2004074812A2 (en) 2004-09-02
KR20110132634A (ko) 2011-12-08
MXPA05008528A (es) 2005-10-20
WO2004074812A3 (en) 2004-11-04
US7507751B2 (en) 2009-03-24
PE20040950A1 (es) 2005-01-01
NZ541579A (en) 2008-08-29
IL169922A (en) 2013-08-29
JP2006518739A (ja) 2006-08-17
JP2006517971A (ja) 2006-08-03
US8242135B2 (en) 2012-08-14
US20060223859A1 (en) 2006-10-05
US20070037984A1 (en) 2007-02-15
US7524959B2 (en) 2009-04-28
EP1592685A1 (en) 2005-11-09
US20070208176A1 (en) 2007-09-06
CA2515777A1 (en) 2004-09-02
US7829583B2 (en) 2010-11-09
RU2330841C2 (ru) 2008-08-10
US7355046B2 (en) 2008-04-08
AU2010219338A1 (en) 2010-09-30
PL216397B1 (pl) 2014-03-31
AU2004213411A1 (en) 2004-09-02
IS2847B (is) 2013-09-15
AU2010219338B2 (en) 2012-07-12
AR043176A1 (es) 2005-07-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO331947B1 (no) Bifenylderivat, anvendelse derav samt farmasøytisk sammensetning omfattende forbindelsen.
US7842704B2 (en) Compounds having β2 adrenergic receptor agonist and muscarinic receptor antagonist activity
NO338770B1 (no) Krystallinsk form av en bifenylforbindelse, fremgangsmåte for fremstilling derav, farmasøytisk preparat samt anvendelse
JP2006517971A5 (no)
JP2006517978A5 (no)

Legal Events

Date Code Title Description
CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: THERAVANCE BIOPHARMA R&D IP, US

CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: THERAVANCE RESPIRATORY COMPANY, US

CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: THERAVANCE BIOPHARMA R&D IP, US

MM1K Lapsed by not paying the annual fees