KR910005633B1 - Ldh₁의 분석법 - Google Patents

Ldh₁의 분석법 Download PDF

Info

Publication number
KR910005633B1
KR910005633B1 KR1019890010104A KR890010104A KR910005633B1 KR 910005633 B1 KR910005633 B1 KR 910005633B1 KR 1019890010104 A KR1019890010104 A KR 1019890010104A KR 890010104 A KR890010104 A KR 890010104A KR 910005633 B1 KR910005633 B1 KR 910005633B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ldh
isozyme
protease
sample
acid
Prior art date
Application number
KR1019890010104A
Other languages
English (en)
Other versions
KR900001859A (ko
Inventor
야스시 시라하세
겐지 이스시끼
요시후미 와따즈
Original Assignee
곡사이시야꾸 가부시끼가이샤
나까모또 히로유끼
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 곡사이시야꾸 가부시끼가이샤, 나까모또 히로유끼 filed Critical 곡사이시야꾸 가부시끼가이샤
Publication of KR900001859A publication Critical patent/KR900001859A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR910005633B1 publication Critical patent/KR910005633B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

내용 없음.

Description

LDHA1의 분석법
본 발명은 시료중의 LDH1의 분별 정량법에 관한 것이다.
LDH(락테이트 데히드로게나아제)는 5개의 아이소자임(isozyme)을 갖는데, LDH1∼LDH5이다. 각 장기마다 고유한 아이소자임의 구성을 갖는다. 예를 들어, LDH1은 심근에 가장 많이 존재한다. 심근경색중의 경우에 LDH1은 심근에서 혈액으로 유출되므로, 혈청중의 LDH1의 증가는 이러한 질병의 진단기준이 될 수 있다. 따라서, LDH1아이소자임 분석법은 임상적으로 중요하다.
최근 LDH아이소자임 분석에 있어서, LDH1,LDH2,LDH3,LDH4, 및 LDH5는 전기영동법에 의하여 분별된다. 면역화확적 LDH분석법도 공지이다. 일본국 특허 공개공고 제6477/1983호에 기재된 LDH분석법의 경우에는, 보효소 유도체를 사용한다. 또한, 알칼리성 조건하에서 시료를 처리하는 LDH 분석법이 일본국 특허공고 제28280/1985 및 일본국 특허공개 공고 제278997/1987에 기재되어 있다.
상기 언급한 전기영동 분석법 또는 면역화학적 분석법은 공정이 복잡하고 조작시간이 길기 때문에 임상의 자동분석에 적합하지 않다. 또한, 전기영동법에 의해서도 LDH아이소자임이 불충분하게 분별된다.
엄밀히 말해서, 보효소 유도체를 사용하는 방법은 효소내의 M서브유니트에 대한 H서브유니트의 비율을 결정하는데는 적합하지만, LDH 아이소자임 분별분석은 불가능하다.
알칼리 처리를 하는 방법의 경우, 다른 아이소자임을 억제하는 동안 LDH1의 50%이상이 불활성화 될 수 있다. 또한, 공정이 복잡하고 오랜 시간이 걸린다.
따라서, 상기 언급된 종래의 LDH분석법은 임상시험에 있어서 불만족스럽다.
본 발명의 목적은 자동분석법을 포함한 임상시험에 유용한 LDH1분석법을 제공하는 것이다.
따라서, 본 발명은 시료중의 LDH1의 분별 정량법을 제공하는데, 단백질 변성제의 존재하에 시료중의 LDH2,LDH3,LDH4, 및 LDH5를 프로테아제로 억제한 다음 억제되지 않고 남아있는 LDH1을 정량함을 특징으로 한다.
본 발명의 방법은 혈청이나 혈장과 같은 임상 시료중의 LDH1의 분별 정량에 적합하다.
본 발명에 사용되는 프로테아제는 본 발명의 목적에 적합한 어떤 프로테아제도 사용가능하다. 예를 들면, α-키모트립신, 트립신, 트롬빈, 엘라스테아제, 엔도프로테아제, 서브틸리신, 브로멜라인, 파파인, 카르복시펩티다아제, 프로나아제, 펩신 및 카텝신이 사용될 수 있다. 또한, 일본국 특허 공개 공고 제149399/1985에 기재된 프로테아제류도 사용될 수 있다.
본 발명에서 프로테아제의 양은 결정적인 것은 아니며 기타의 분석조건에 따라서 다양하지만, α-키모트립신의 경우에 10∼1,000단위/ml의 농도범위로 사용될 수 있다.
본 발명에는, 본 발명의 공정에 적합한 활성을 가진 어떤 단백질 변성제도 사용 가능하다. 예를 들면, 콜산, 데옥시콜산, 타우로콜산, 타우로데옥시콜산, 구아니딘(히드로클로라이드), 트리클로로아세트산, 우레아, 티오우레아 및 티오시아네이트가 단독으로 또는 혼합물의 형태로 단백질 변성제로서 바람직하게 사용된다.
단백질 변성제의 양은 결정적인 것은 아니며 기타의 분석조건에 따라서 다양하지만, 한 예로 0.05∼5M의 구아니딘이 사용될 수 있다.
억제되지 않고 남아있는 LDH1아이소자임은 임상시험에서 널리 사용되는 종래의 여러 가지 분석법중의 하나인 효소분석법에 따라서 정량될 수 있다. 본 방법에서 사용된 이러한 분석법은 고도의 정밀도, 감도 및 정확도로 단시간내에 수행될 수 있다.
본 방법의 바람직한 양태로는, 아이소자임과 색소 또는 염료 전구물질을 촉매적으로 현색한 후 가시광선 범위에서 흡광도를 측정함을 특징으로 하는 효소분석법에 의해 억제되지 않고 남아있는 LDH1아이소자임을 정량한다. LDH1아이소자임의 촉매 효과에 의해 환원된 보효소 NADH의 자외부 흡광도를 측정하는 것도 역시 가능하다.
또 다른 바람직한 양태로는 중성 조건에서 수행되는 공지의 효소분석법인 로블레우스키법(Wroblewski method)에 따라서, LDH1아이소자임을 정량한다. 아이소자임 LDH2∼5의 억제는 본 발명에 있어서 광범위한 pH 범위에서 실행될 수 있다(예 : 실시예1). 따라서, 억제되지 않고 남아있는 LDH1아이소자임의 정량이 중성조건에서 수행될 때, 본 분석법은 분석기간동안 동일한 중성상태하에서 유리하게 수행될 수 있지만, 반면에 시료의 알칼리처리를 특징으로 하는 상기 언급된 종래의 분석법의 경우는 복잡한 pH조정이 필요하다.
하기 실시예로 본 발명은 더 설명된다. 그러나, 본 발명이 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1]
사람의 혈액을 정제하여 수득한 아이소자임 LDH1∼5의 각각의 표준품(0.04ml)에 α-키모트립신(450단위/ml)을 함유하는 완충액(0.2ml) 및 0.65M 구아니딘을 37℃에서 5분간 반응시킨다. 사용되는 완충액 및 그의 pH값은 하기의 제1표에 나타낸다.
다음에 2nM 소듐 파이루베이트 및 0.2nM NADH를 함유하는 0.1M 트리스(Tris) 완충액(2.5ml)를 가하여 pH값을 7.8로 조정하고, 340nm에서 1분당 흡광도의 변화율을 측정한다. 각 아이소자임의 잔류 활성률을 측정된 값으로부터 계산한다. 결과를 하기의 제1표에 나타낸다.
아이소자임 LDH1∼5중 LDH1분획만을 본 분석법에 의하여 정량할 수 있고, 다른 아이소자임의 억제중, 어떤 pH값에서도 LDH1아이소자임은 억제되지 않고 남아 있다.
따라서, 억제되지 않고 남아 있는 LDH1아이소자임을 중성조건에서 정량할 때, 본 분석법은 분석하는 동안 복잡한 pH조정없이 중성조건에서 유리하게 수행될 수 있다.
[표 1]
Figure kpo00001
[실시예 2]
실시예 1에서 사용한 것과 동일한 시료(0.04ml)에 서브틸리신(5단위/ml) 및 소듐 데옥시콜레이트(1.5%)를 함유하는 0.1M 트리스 완충액(pH 7.8 : 0.2ml)을 가하고 37℃에서 5분간 반응시킨다. 다음에 2nM 소듐 파이루베이트 및 0.2mM NADH를 함유하는 0.1M 트리스 완충액(pH 7.8 : 2.5ml)을 가한후, 각 아이소자임의 잔류 활성률울 실시예 1과 같은 방법으로 측정한다. 결과를 제2표에 나타낸다.
본 LDH1분석법은 pH 7.8에서 효과적으로 수행된다.
[표 2]
Figure kpo00002
[실시예 3]
시료로서 15명의 각각의 혈청(각 0.04ml)을 사용한다. 각 시료의 총 LDH 활성은 제3표에 나타낸 바와 같다.
실시예 1과 같은 방법으로 1분당 흡광도의 변화율을 측정한다. 다음에 제3표에 나타낸 LDH1활성을 검량선을 사용하여 환산한다.
따로, 혈청에 LDH1아이소자임의 종래의 면역화학적분석법(Rosh사 : Isomune-LD사용)을 수행한다.
결과를 역시 제3표에 나타낸다.
본 발명의 방법으로 수득된 결과는 종래 면역학적 분석법의 결과와 양호하게 대응한다.
[표 3]
Figure kpo00003
[실시예 4]
실시예 1에서 사용한 것과 동일한 시료(10μ1)에 0.5M 구아니딘 히드로클로라이드를 함유하는 50mMMES완충액(pH 6.0 : 75μl), 2% 트리톤 X-405 및 하기 제4표의 프로테아제를 가한다.
37℃에서 5분간 반응시킨 후, 2mM 소듐 파이루베이트 및 0.2mM NADH를 함유하는 0.1M트리스 완충액(pH 8.0 : 400μl)을 가한다. 다음에, 각 아이소자임의 잔류 활성률을 실시예 1과 같은 방법으로 측정한다. 결과를 제4표에 나타낸다.
LDH1분획은 어떤 프로테아제로도 정량될 수 있으나, 바람직하게는 카르복시펩티다아제 Y, 카텝신 C 또는 α-키모트립신을 사용한다.
[표 4]
Figure kpo00004
[실시예 5]
실시예 1에서 사용한 것과 동일한 시료(0.04ml)에 α-키모트립신(450단위/ml)이나 또는 0.65M 구아니딘을 함유하는 트리스 완충액(pH 8.0 : 0.2ml)을 가하고 37℃에서 5분간 반응시킨다. 다음에, 2mM 소듐파이루베이트 및 0.2mM NADH를 함유하는 0.1M 트리스 완충액(2.5ml)을 가하여 pH값을 7.8로 조정하고, 각 아이소자임의 잔류활성률을 실시예 1과 같은 방법으로 측정한다. 결과를 제5표에 나타낸다.
LDH2∼5분획은 불충분하게 불활성화된다. 따라서, 본 분석법에서는 단백질 변성제의 존재하에 프로테아제를 사용하는 것이 필수적이다.
[표 5]
Figure kpo00005

Claims (8)

  1. 시료중의 LDH2,LDH3,LDH4, 및 LDH5를 단백질 변성제 존재하에 프로테아제로 억제한 다음 억제되지 않고 남아있는 LDH1를 정량함을 특징으로 하는 시료중의 LDH1의 분별 정량법.
  2. 제1항에 있어서, 시료가 혈청 또는 혈장의 임상시료인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 프로테아제가 α-키모트립신, 트립신, 트롬빈, 엘라스타아제, 엔도프로테아제, 서브틸리신, 브로멜라인, 파파인, 카르복시펩티다아제, 프로나아제, 펩신 및 카텝신으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 프로테아제로서 α-키모트립신이 10∼1.000단위/ml의 농도 범위로 사용되는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 단백질 변성제가 콜산, 데옥시콜산, 타우로콜산, 타우로데옥시콜산, 구아니딘(히드로클로라이드), 트리클로로아세트산, 우레아, 티오우레아 및 티오시아네이트로 구성된 군으로부터 최소한 하나가 선택되는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 단백질 변성제로서 0.05∼5M 구아니딘이 사용되는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 아이소자임과 색소 또는 염료 전구물질을 촉매적으로 현색한 후 가시광선 범위에서 흡광도를 측정하거나, 아이소자임의 촉매 효과에 의해 환원된 보효소 NADH의 자외부 흡광도를 측정함을 특징으로 하는 효소 분석법에 따라서 억제되지 않고 남아 있는 LDH1아이소자임이 정량되는 방법.
  8. 제7항에 있어서, pH조정없이 중성 조건하에서 분석이 수행되는 방법.
KR1019890010104A 1988-07-15 1989-07-15 Ldh₁의 분석법 KR910005633B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP177579 1988-07-15
JP63177579A JPH0775556B2 (ja) 1988-07-15 1988-07-15 Ｌｄｈアイソザイムのｌｄｈ▲下１▼の分別定量法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR900001859A KR900001859A (ko) 1990-02-27
KR910005633B1 true KR910005633B1 (ko) 1991-08-01

Family

ID=16033440

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019890010104A KR910005633B1 (ko) 1988-07-15 1989-07-15 Ldh₁의 분석법

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP0352547B1 (ko)
JP (1) JPH0775556B2 (ko)
KR (1) KR910005633B1 (ko)
DE (1) DE68919144T2 (ko)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5364765A (en) * 1987-05-28 1994-11-15 Abbott William A Method and reagent system for assaying isoenzyme profiles
US5158873A (en) * 1987-05-28 1992-10-27 Abbott Laboratories Method and reagent for determining LD-1 isoenzyme
DE68927381T2 (de) * 1988-07-25 1997-03-06 Boehringer Mannheim Corp Reagenz zur verwendung im ld-1-testverfahren
IE920779A1 (en) * 1991-03-13 1992-09-23 Du Pont Selective stabilization of lactate dehydrogenase isoenzyme¹ld1 by high molecular weight polyols
KR101788865B1 (ko) 2010-12-13 2017-10-20 두산공작기계 주식회사 툴 매거진의 툴 캐리어 유닛
CN114381494B (zh) * 2021-12-01 2023-12-22 天津中成佳益生物科技有限公司 一种乳酸脱氢酶同工酶1的检测试剂及检测方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2513407A1 (de) * 1975-03-26 1976-10-14 Schmidt Karlheinz Ein verfahren zur differenzierung der leber- und herzspezifischen lactatdehydrogenase im blutserum
US4224406A (en) * 1978-02-27 1980-09-23 Hoffmann-La Roche Inc. Immunochemical LDH1 assay
JPS60149399A (ja) * 1984-01-12 1985-08-06 Sawao Murao アスパラギン酸アミノトランスフエラ−ゼアイソザイムの測定法
JPS62278997A (ja) * 1986-05-29 1987-12-03 Yatoron:Kk Ｌｄｈイソ酵素測定試薬
JPH0644879B2 (ja) * 1986-09-04 1994-06-15 栄研化学株式会社 ヒト血清中のグルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナ−ゼアイソザイムの測定法
JPH06104074B2 (ja) * 1987-03-25 1994-12-21 国際試薬株式会社 アイソザイムの分別定量法
ATE80665T1 (de) * 1987-05-28 1992-10-15 Abbott Lab Verfahren und reagens zur bestimmung von ld-1isoenzym.

Also Published As

Publication number Publication date
JPH0227997A (ja) 1990-01-30
EP0352547A3 (en) 1991-07-31
KR900001859A (ko) 1990-02-27
DE68919144D1 (de) 1994-12-08
JPH0775556B2 (ja) 1995-08-16
EP0352547A2 (en) 1990-01-31
EP0352547B1 (en) 1994-11-02
DE68919144T2 (de) 1995-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0823943B1 (en) Determination of glycated proteins
CN101226198A (zh) 一种糖化血清蛋白的酶法测定方法及液体稳定试剂
EP0387784B1 (en) Quantitative determination of bilirubin and a reagent therefor
US7354732B2 (en) Method of assay with sulfonic acid compound and nitro compound
KR910005633B1 (ko) Ldh₁의 분석법
CN102692411B (zh) 一种测定糖化血红蛋白百分比的试剂
US7153666B2 (en) Methods and compositions for determination of glycated proteins
US8021855B2 (en) Method of decomposing protein with sulfonic acid compound
US6242208B1 (en) LDH1 assay
JPH07155196A (ja) 生体成分の測定法
JP4143698B2 (ja) Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミンナトリウムの誤発色防止方法および前記方法を用いた試薬溶液ならびに測定方法
JP4022799B2 (ja) 電解質測定用試薬組成物
JP3934498B2 (ja) プロテアーゼ含有試薬を用いた定量方法および定量試薬
JP2749135B2 (ja) アンモニアの定量方法およびそれに用いるキット
EP0702088A1 (en) Method of determining sodium ion
JP4014088B2 (ja) 糖化アミノ酸の消去方法
JP2006149230A (ja) 糖化タンパク質割合の測定方法
JPH03175997A (ja) 総ビリルビンの定量法及びそれに用いる試薬
JP4565807B2 (ja) 糖化タンパク質測定用プロテアーゼ
WO1990001067A1 (en) Reagent for use in ld-1 assay
JP2585723B2 (ja) 検出系の反応停止方法
JPH09168397A (ja) 硫酸抱合型胆汁酸の定量法及びそのキット
JPH09149794A (ja) 抱合ビリルビン測定試薬
JPS6340857A (ja) Ｓｈ化合物の定量方法
JPH0775553B2 (ja) 特異的な酵素活性測定法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
G160 Decision to publish patent application
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 19970721

Year of fee payment: 7

LAPS Lapse due to unpaid annual fee