JPH07155196A - 生体成分の測定法 - Google Patents

生体成分の測定法

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JPH07155196A
JPH07155196A JP5310126A JP31012693A JPH07155196A JP H07155196 A JPH07155196 A JP H07155196A JP 5310126 A JP5310126 A JP 5310126A JP 31012693 A JP31012693 A JP 31012693A JP H07155196 A JPH07155196 A JP H07155196A
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bilirubin
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寸未 川原
Toshikatsu Abe
俊克 阿部
Kenji Hosoi
健二 細井
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Abstract

(57)【要約】 【構成】 酵素反応により生成される過酸化水素をペル
オキシダーゼ及び被酸化性発色剤で検出する生体成分の
測定法において、検出系に両性界面活性剤及びフェロシ
アン化物を存在させる生体成分の測定法。 【効果】 酵素反応により生成される過酸化水素をペル
オキシダーゼ及び被酸化性発色剤で検出する生体成分の
測定法において、検出目的とする生体成分が微量である
場合にも、ビリルビンの影響による誤差を極めて良好に
除去することができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ビリルビンの影響を除
去した生体成分の測定方法、更に詳しくは、酵素反応に
より生成される過酸化水素をペルオキシダーゼ及び被酸
化性発色剤で検出する生体成分測定法において、ビリル
ビンの影響による誤差を除去する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】今日、臨床化学分野において、酵素を分
析試薬として用いる酵素的分析法は、化学的反応を利用
する測定法に比較して特異性に優れ、また緩和な条件で
反応が完了することから、自動化が容易であり、広く一
般に普及している。
【０００３】しかし、この酵素的分析法も厳密には生体
試料中に存在する種々の夾雑物質の干渉を受ける場合が
あり、必ずしも目的物質のみを正確に測定しているとは
いい難い。特に、被分析成分に適当な酸化酵素を作用さ
せ、生成する過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下、
過酸化水素分析用試薬にて発色させ、比色定量する方法
では、生体試料中に存在するビリルビンの影響を受ける
ことが知られており〔臨床化学第８巻，第１号，63-72
(1980)〕、特に生体微量成分の測定においては、この干
渉は無視できない大きな問題となっている。
【０００４】このビリルビンの影響を回避する方法とし
ては、ビリルビンオキシダーゼ法〔クリニカルケミスト
リー30/8 1389-1392(1984)〕、アミノピリン法〔クリニ
カルケミストリー27/11 1941-1942(1980)〕、フェロシ
アン化カリウム法〔クリニカルケミストリー26(2) 227-
231(1980)〕、アルブミン及びアミノピリン法〔特公平4
-61640号公報〕等が開発されている。また最近、フェロ
シアン化カリウムとアルブミンを組合わせて用いる方法
も報告されている〔特開昭60-228963号公報〕。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
従来の方法では、特に微量成分の測定において十分なビ
リルビン干渉除去効果が得られず、しかも試薬の着色や
蛋白変性など試薬の安定性にも問題があった。
【０００６】従って、本発明は、検出目的とする生体成
分が微量である場合にも、ビリルビンの干渉を十分に回
避することができ、試薬の安定性にも問題のない生体成
分の測定法を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】かかる実情において本発
明者らは、鋭意研究を重ねた結果、従来のフェロシアン
化物を用いた生体成分の測定方法において、両性界面活
性剤を組合わせて用いることにより、検出目的とする生
体成分が微量である場合にもビリルビンの干渉を極めて
良好に除去することができることを見出し、本発明を完
成するに至った。
【０００８】すなわち本発明は、酵素反応により生成さ
れる過酸化水素をペルオキシダーゼ及び被酸化性発色剤
で検出する生体成分の測定法において、検出系に両性界
面活性剤及びフェロシアン化物を存在させることを特徴
とする生体成分の測定法に係るものである。
【０００９】本発明方法に用いられる両性界面活性剤と
しては特に限定されないが、例えばアルキルイミダゾリ
ウムベタイン、アルキルベタイン、アルキルアミドベタ
イン、アルキルアラニン、アルキルアミンオキサイド、
これらの誘導体等が挙げられ、その市販品としては、例
えばアルキルベタイン誘導体としてアンヒトール24B
（花王社製）等が、アルキルイミダゾリウムベタイン誘
導体としてアンヒトール20Y（花王社製）、エナジコー
ルC-40H（ライオン社製）、リポミンCH（ライオン社
製）等が、アルキルアミドベタイン誘導体としてエナジ
コールC-30B（ライオン社製）等が、アルキルアミンオ
キサイド誘導体としてアンヒトール20N（花王社製）等
が挙げられる。両性界面活性剤の使用量は、検出系中に
0.01〜10重量％、特に0.1〜５重量％が好ましい。
【００１０】本発明方法に用いられるフェロシアン化物
としては、例えばフェロシアン化カリウム、フェロシア
ン化ナトリウム等が挙げられる。フェロシアン化物の使
用量は、検出系中に１〜100μＭ、特に５〜50μＭが好
ましい。
【００１１】また、本発明方法に用いられる被酸化性発
色剤としては、4-アミノフェナゾン（特に4-アミノアン
チピリン）とフェノール系、アニリン系等の水素供与体
との組合わせが好ましい。
【００１２】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１３】参考例１ 図１に、ビリルビンの吸収曲線(a)、及びビリルビンに
両性界面活性剤を添加した場合の吸収曲線(b)を示す。
すなわち、(a)はビリルビン溶液70μｌに、緩衝液2.6ml
を添加した場合の吸収曲線を、(b)はビリルビン溶液70
μｌに、0.39重量％のラウリルベタインを含む緩衝液2.
6mlを添加した場合における300〜700nmの吸収曲線を示
す。図１から明らかなように、ビリルビンにラウリルベ
タインを添加するとビリルビンの吸収曲線(a)は特異な
別の吸収曲線(b)へと変化する。このことから、ビリル
ビンは両性界面活性剤によりその立体構造が変化し、ペ
ルオキシダーゼの基質になりにくくなることにより、被
酸化性発色剤との競合が解消されるものと推察される。
更に両性界面活性剤とフェロシアン化物とを併用する本
発明方法においては、これらが相乗して本発明効果を発
揮する。
【００１４】実施例１ ビリルビンを各種濃度になるように添加したヒト血清を
検体とし、表１に示す組成の尿酸測定試薬を使用して尿
酸値を測定し、ビリルビンの影響を比較検討した。
【００１５】
【表１】
【００１６】（測定方法）検体70μｌに第１試薬260μ
ｌを加えて攪拌後、37℃で５分間加温し、波長546nmに
おける吸光度を、試薬盲検を対照として測定する（吸光
度Ｉ）。その後、更に第２試薬130μｌを加えて37℃で
５分間加温し、波長546nmにおける吸光度を、試薬ブラ
ンクを対照として測定する（吸光度II）。なお、試薬ブ
ランクは検体の代わりに精製水を用いる。吸光度Ｉ及び
IIから、次式に従って試料の吸光度を算出する。
【００１７】
【数１】
【００１８】また、濃度既知の尿酸溶液を上記と同様に
操作して吸光度を求め、これと試料の吸光度とを比較
し、尿酸濃度を算出する。
【００１９】（結果）この結果を表２に示す。表２から
明らかなように、無添加（比較例１）、フェロシアン化
カリウム単独添加（比較例２）、フェロシアン化カリウ
ム及びウシ血清アルブミン添加（比較例３）の従来の方
法では、検体中のビリルビン量の増加に伴い、測定値が
著しく低下するのに対し、フェロシアン化カリウムと両
性界面活性剤を用いる本発明方法（発明例１〜３）では
ビリルビンの干渉が極めて良好に除去されている。
【００２０】
【表２】
【００２１】実施例２ 実施例１で用いた尿酸測定試薬において、表１中の界面
活性剤の代わりに表３に示す各種界面活性剤を、第１試
薬及び第２試薬の双方にそれぞれ0.5重量％加えた以外
は同様の組成の試薬を用いて、実施例１と同様の方法で
試験を行い、各種界面活性剤のビリルビン干渉回避効果
を比較した。この結果を表３に示す。なお、表中の効果
判定の基準は以下に従った。 〈判定基準〉検体中のビリルビン濃度が０mg/dlの場合
の尿酸測定値と50mg/dlの場合の尿酸測定値との差によ
り判定した。 0〜0.5・・・・・◎ 0.6〜1.0・・・・・○ 1.1〜3.0・・・・・△ 3.1以上 ・・・・・× 表３から明らかなように、両性界面活性剤は他の界面活
性剤に比較して極めて良好にビリルビンの干渉を回避す
る。
【００２２】
【表３】
【００２３】実施例３ ビリルビンを各種濃度になるように添加したヒト血清を
検体とし、表４に示す組成の試薬を使用し実施例２と同
様にしてトリグリセリド値を測定し、ビリルビンの影響
を比較検討した。この結果を表５に示す。
【００２４】
【表４】
【００２５】
【表５】
【００２６】表５から明らかなように、従来の方法（比
較例４）では、検体中のビリルビン量の増加に伴い、測
定値の低下がみられるのに対し、フェロシアン化カリウ
ムと両性界面活性剤を用いる本発明方法（発明例４，
５）ではビリルビンの干渉が完全に除去されている。
【００２７】実施例４ ビリルビンを各種濃度になるように添加したヒト血清を
検体とし、表６に示す組成の試薬を使用し実施例２と同
様にして総コレステロール値を測定し、ビリルビンの影
響を比較検討した。この結果を表７に示す。
【００２８】
【表６】
【００２９】
【表７】
【００３０】表７から明らかなように、従来の方法（比
較例５）では、検体中のビリルビン量の増加に伴い、測
定値の低下がみられるのに対し、フェロシアン化カリウ
ムと両性界面活性剤を用いる本発明方法（発明例６，
７）ではビリルビンの干渉が完全に除去されている。
【００３１】
【発明の効果】本発明方法によれば、酵素反応により生
成される過酸化水素をペルオキシダーゼ及び被酸化性発
色剤で検出する生体成分の測定法において、検出目的と
する生体成分が微量である場合にも、ビリルビンの影響
による誤差を極めて良好に除去することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ビリルビンに対し、界面活性剤を添加した場合
(b)と添加しない場合(a)の300〜700nmの吸収曲線を示す
図である。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 酵素反応により生成される過酸化水素を
    ペルオキシダーゼ及び被酸化性発色剤で検出する生体成
    分の測定法において、検出系に両性界面活性剤及びフェ
    ロシアン化物を存在させることを特徴とする生体成分の
    測定法。
JP5310126A 1993-12-10 1993-12-10 生体成分の測定法 Pending JPH07155196A (ja)

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