KR20170108936A - 신규한 α4β7 펩타이드 단량체 및 이량체 길항제 - Google Patents

신규한 α4β7 펩타이드 단량체 및 이량체 길항제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생체내 세포 부착 분자(MAdCAM)에서 점막 어드레스에 대한 u4137의 결합을 강력하게 저해하고, ct431 결합에 대해 높은 선택도를 보유하고, 위장관 조건 하에 높은 안정성을 가지는 펩타이드 이량체 화합물 및 펩타이드 단량체 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 현재 기술 상태에 반응하여, 특히 현재 이용 가능한 인테그린 길항제에 의해 아직 완전히 해결되지 않은, 당해 분야에서의 문제 및 수요에 반응하여 개발되었다.

Description

신규한 α4β7 펩타이드 단량체 및 이량체 길항제{NOVEL α4β7 PEPTIDE MONOMER AND DIMER ANTAGONISTS}
관련 출원에 대한 상호 참조
본원은 2014년 10월 1일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/058,506호; 2014년 10월 1일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/058,510호; 2015년 4월 17일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/149,257호; 및 2015년 7월 15일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/192,934호(이들 모두 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함됨)에 대한 우선권을 주장한다.
기술분야
본 발명은 인테그린 결합으로부터 생기거나 이에 의해 악화된 병태를 치료하기에 유용한 활성을 가지는 신규한 화합물, 이 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 이 화합물을 사용한 치료 방법, 및 인테그린 결합을 차단하거나 방해하는 방법에 관한 것이다.
인테그린은 세포 부착 및 이동으로부터 유전자 조절에 이르는 다수의 세포 과정에 관여된 비공유로 연관된 α/β 이종이량체 세포 표면 수용체이다(Dubree, et al., Selective α4β7 Integrin Antagonist and Their Potential as Anti-inflammatory Agents, J. Med . Chem . 2002, 45, 3451-3457). 인테그린의 차등적 발현은 세포의 부착 특성을 조절할 수 있어서, 상이한 염증성 신호에 반응하여 상이한 백혈구 집단이 특정한 장기에 동원되게 한다. 확인되지 않고 놔두면, 인테그린 매개 부착 과정은 만성 염증 및 자가면역 질환을 발생시킬 수 있다.
α4β1 및 α4β7인 α4 인테그린은 위장관에 걸쳐 림프구 이동에서 필수적인 역할을 한다. 이들은 B 및 T 림프구를 포함하는 대부분의 백혈구에서 발현되고, 여기서 이들은 각각 혈관 세포 부착 분자(vascular cell adhesion molecule; VCAM) 및 점막 부착분자 세포 부착 분자(mucosal addressin cell adhesion molecule; MAdCAM)인 이의 각각의 1차 리간드에 대한 결합을 통해 세포 부착을 매개한다. 단백질은 VCAM이 α4β1 및 적은 정도로 α4β7 둘 다에 결합하지만, MAdCAM이 α4β7에 매우 특이적이라는 점에서 결합 특이성이 다르다. α4 소단위(subunit)와의 쌍 지음 이외에, β7 소단위는 또한 αE 소단위와 이종이량체 복합체를 형성하여 αEβ7을 형성하고, 이것은 창자, 폐 및 비뇨생식기에서 상피내 림프구(intraepithelial lymphocyte; IEL)에서 주로 발현된다. αEβ7은 장에서 수지상 세포에서 또한 발현된다. αEβ7 이종이량체는 상피 세포에서 E-카데린에 결합한다. IEL 세포는 상피 구획 내에 면역 감시를 위한 기전을 제공하는 것으로 생각된다. 따라서, αEβ7 및 α4β7의 차단은 함께 창자에서 염증성 병태를 치료하기 위한 유용한 방법일 수 있다.
특이적 인테그린-리간드 상호작용의 저해제는 다양한 자가면역 질환의 치료를 위한 소염제로서 효과적인 것으로 나타났다. 예를 들어, α4β7에 대한 높은 결합 친화도를 나타내는 단일클론 항체는 위장관 자가염증/자가면역 질환, 예컨대 크론병 및 궤양성 결장염에 대한 치료학적 이익을 나타냈다. Id. 그러나, 이들 치료제 중 하나는 α4β1 인테그린-리간드 상호작용을 방해하여서 환자에 위험한 부작용 효과를 발생시킨다. 이중 특이적 소분자 길항제를 사용한 치료제는 동물 모델에서 유사한 부작용을 나타냈다.
따라서, 당해 분야에서 다양한 위장관 자가면역 질환에 대한 치료제로서 α4β7 인테그린에 대한 높은 친화도 및 α4β1 인테그린에 대한 높은 선택도를 가지는 인테그린 길항제 분자에 대한 수요가 있다.
이러한 인테그린 길항제 분자 및 관련 조성물 및 방법은 본 발명에 의해 제공된다.
본 발명은 현재 기술 상태에 반응하여, 특히 현재 이용 가능한 인테그린 길항제에 의해 아직 완전히 해결되지 않은, 당해 분야에서의 문제 및 수요에 반응하여 개발되었다. 따라서, 본 발명은 예를 들어 소염 및/또는 면역억제 물질로서 사용하기 위한 α4β7 길항제 단량체 및 이량체 펩타이드를 제공한다. 추가로, 본 발명은 MAdCAM을 발현하는 조직에 대한 α4β7의 생물학적 기능과 연관된 병태를 치료하는 데 사용하기 위한 α4β7 길항제 단량체 및 이량체 펩타이드를 제공한다.
본 발명은 인테그린 길항제 활성을 나타내는 신규한 펩타이드 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 α4β7 인테그린에 대한 높은 특이성 및 증가한 경구 안정성을 나타내는 신규한 펩타이드 화합물에 관한 것이다. 특정한 실시형태에서, 본 발명은 인테그린 결합에 의해 발생하거나 악화된 병태를 치료하기에 유용한 활성을 가지는 신규한 화합물, 이 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 이 화합물을 사용한 치료 방법, 및 인테그린 결합을 차단하거나 방해하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 다양한 위장관 자가면역 질환에 대한 치료제로서 사용될 수 있는 α4β7 인테그린에 대한 높은 친화도를 가지는 인테그린 길항제 분자이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화합물은 연결 모이어티를 통해 C 또는 N 말단에 의해 함께 연결된 2개의 쌍 지은 소단위를 포함하는 이량체이다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 이량체 소단위 펩타이드 중 하나 또는 둘 다는 고리화된 구조를 형성하기 위해 브릿징할 수 있는 2개의 천연 또는 비천연 아미노산을 추가로 포함한다. 따라서, 본 발명의 특정한 화합물은 이량체화 펩타이드를 포함하고, 이량체의 각각의 소단위는 다이설파이드 브릿지, 아마이드 결합 또는 또 다른 또는 동등한 연결 중 적어도 하나를 통해 고리화된 구조를 함유한다. 이 특징은 치료학적 물질로서 경구로 투여될 때 화합물에 증가한 안정성을 제공한다. 또한, 이 특징은 추가로 증가한 특이성 및 효력을 제공한다.
당해 분야의 당업자는 본 명세서에 개시된 C 및 N 말단 링커 모이어티가 적합한 링커의 비제한적인 예이고, 본 발명이 임의의 적합한 링커 모이어티를 포함할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 몇몇 실시형태는 본 명세서 및 수반된 도면 및 표에 기재된 펩타이드 분자로부터 선택된 2개의 단량체 소단위로 이루어진 동종이량체 또는 이종이량체 분자를 포함하고, 각각의 단량체의 C 또는 N 말단은 우수한 인테그린 길항제 활성을 가지는 이량체 분자를 제공하도록 임의의 적합한 링커 모이어티에 의해 연결된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 화학식 (I)의 이량체 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면 및 표에 기재된 임의의 다른 화합물을 포함하는 인테그린-길항제 치료제를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공한다.
훨씬 또 다른 양태에서, 본 발명은, 비침습적 진단학적 절차를 위한 생체내 조영제로서 사용하기 위한 킬레이팅 그룹 및 검출 가능한 라벨 중 적어도 하나에 의해 추가로 표지된, 경구로 안정한 화학식 (I)의 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면에 기재된 임의의 다른 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 질환을 시각화하거나 진단하기 위한 진단학적 방법을 제공한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 화합물은 단량체이다. 본 발명의 각각의 단량체 펩타이드는 고리화된 구조를 형성하기 위해 브릿징을 형성할 수 있는 2개의 천연 또는 비천연 아미노산을 추가로 포함한다. 따라서, 본 발명의 화합물은 단량체 펩타이드를 포함하고, 각각은 다이설파이드 염 브릿지, 아마이드 결합 또는 동등한 연결 중 적어도 하나를 통해 고리화된 구조를 형성한다. 이 특징은 치료학적 물질로서 경구로 투여될 때 화합물에 증가한 안정성을 제공한다. 이 특징은 추가로 비고리화된 유사체와 비교하여 증가한 특이성 및 효력을 제공한다.
일 실시형태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 2개의 연결된 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
(화학식 (I))
식 중,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Xaa10과 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노구아니디노), Phe(4-카보밀), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cba, 호모Leu, Cpa, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Xaa4와 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa11은 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나, Pro, 또는 임의의 아미노산이고; 그리고
Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, 호모Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
여기서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Pen 또는 Cys이고;
여기서,
Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀아미노) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 Xaa13은 Pro이고; 그리고
펩타이드 이량체 화합물의 하나 또는 둘 다의 단량체 소단위는 Xaa4과 Xaa10 사이에 결합을 포함한다.
일 실시형태에서, Xaa4는 Cys 또는 Pen이고, Xaa10은 Pen 또는 Cys이고, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합에 의해 연결된다.
화학식 (I)을 포함하는 화합물의 특정한 실시형태에서, 이 화합물은 2개의 단량체 소단위를 연결하는 링커 모이어티를 추가로 포함하고, 링커 모이어티는 임의로 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐아세트산, 3-페닐프로피온산, 숙신산, 바이오틴, 글루타르산, 아젤라산, 피멜린산, 도데칸다이온산, 지방족 아미노산, 방향족 아미노산, 헤테로방향족, 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜, 이작용성 링커, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터 및 비스-말레이미드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 I을 포함하는 화합물의 특정한 실시형태에서, 각각의 단량체 소단위의 N 말단은 N 말단 이량체 화합물을 제공하도록 링커 모이어티에 의해 연결된다.
특정한 실시형태에서, 각각의 단량체 소단위의 C 말단은 C 말단 이량체 화합물을 제공하도록 링커 모이어티에 의해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa5는 N-Me-Arg이고; Xaa6은 Ser이고, Xaa7은 Asp이고, Xaa8은 Thr이고/이거나, Xaa9는 Leu이고; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 또는 Phe(4-tBu)이다. 일 실시형태에서, Xaa5는 N-메틸-Arg이고; Xaa6은 Ser이고; Xaa7은 Asp이고; Xaa8은 Thr 또는 Val이고; Xaa9는 Leu이고; Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐 Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me) 및 호모Phe로 이루어진 군으로부터 선택되고; Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고; Xaa13은 부재하고; Xaa14는 D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, 호모Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 또한 D-Cys 및 D-Pen을 포함한다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀아미노) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 하나 또는 둘 다의 단량체 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이에 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 1,2,3-트라이아졸 고리, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 화학식 (I)는 이량체 분자의 단량체 소단위를 나타내고, 단량체 소단위는 본 발명에 따라 이량체 분자를 형성하도록 연결된다.
소정의 실시형태에서, Xaa4는 Cys 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Cys 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Cys 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa10에 바로 C 말단인 아미노산 잔기는 방향족 아미노산이다.
이 화합물이 펩타이드 이량체인 소정의 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn이다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Cys, 호모Cys, 또는 Pen이다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 이량체의 하나 또는 둘 다의 단량체 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이의 분자간 결합을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합이다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체의 C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다.
몇몇 실시형태의 경우, 임의의 Xaa1-Xaa5, Xaa7-Xaa9 및 Xaa11-Xaa12는 N(알파)메틸화된다. Xaa5는 추가로 Arg-Me-sym 또는 Arg-Me-asym일 수 있고, Xaa11은 O-Me-Tyr, N-Me-Lys(Ac) 또는 4-Me-Phe일 수 있다. 몇몇 경우에, 임의의 Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14는 아실화된다. 예를 들어, 몇몇 경우에 Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14 위치에서의 하나 이상의 잔기는 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 및/또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
몇몇 실시형태에서, 펩타이드 이량체의 펩타이드 단량체 소단위 둘 다의 N 말단 또는 C 말단 아미노산, 예를 들어 Xaa1, Xaa2, Xaa3, Xaa12, Xaa13 또는 Xaa14는 동종이량체 또는 이종이량체 분자를 형성하도록 적합한 링커 모이어티에 의해 변형되고, 화학식 (I)는 적합한 C 또는 N 말단 링커에 의해 연결된 2개의 소단위로부터 형성된 이량체를 포함한다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, 소단위 둘 다는 하기 서열 중 하나를 포함한다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys); 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys).
소정의 실시형태에서, 소단위 둘 다는 동일한 서열을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 소단위는 이의 C 말단에서 DIG를 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물은 하기 구조 중 하나를 가지고, 단량체 소단위에서 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 존재한다:
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG; 또는
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-OH]2-DIG.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물은 C 말단 OH를 포함한다.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물은 Xaa3, Xaa5, Xaa7-Xaa9 및 Xaa11-Xaa13으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서의 N(알파)메틸화; 또는 Xaa1-Xaa3 및 Xaa11-Xaa14로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서의 아실화를 포함한다. 일 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, Xaa3은 Ac이다. 일 실시형태에서, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13 중 하나 이상은 부재한다.
관련 실시형태에서, 본 발명은 하기 화학식 (IV)의 펩타이드 단량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
(화학식 (IV))
식 중,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Xaa10과 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀아미노), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Xaa4와 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa11은 부재하거나, Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐 Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(2-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg, Thr, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나, Pro, 또는 임의의 아미노산이고; 그리고
Xaa14는 임의의 아미노산이고;
여기서,
Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
Xaa13은 Pro이고; 그리고
여기서, Xaa4 및 Xaa10은 결합에 의해 연결되고;
여기서,
Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
Xaa13은 Pro이다.
특정한 실시형태에서, Xaa4는 Cys 또는 Pen이고, Xaa10은 Cys 또는 Pen이고, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합에 의해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시형태에서, Xaa13은 부재하거나 Pro이다.
특정한 실시형태에서, Xaa5는 N-Me-Arg이다.
특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, Xaa3은 Ac이고/이거나, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13 중 하나 이상은 부재한다.
화학식 (IV)의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 단량체 화합물은 Xaa4와 Xaa10 사이에 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 1,2,3-트라이아졸 고리, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 단량체 펩타이드는 Xaa4와 Xaa10 사이에 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 1,2,3-트라이아졸 고리, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함한다.
소정의 실시형태에서, Xaa4는 Cys 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Cys 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10는 둘 다 Cys 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10는 둘 다 Pen이다.
소정의 실시형태에서, Xaa10에 바로 C 말단인 아미노산 잔기는 방향족 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa14 또는 C 말단 아미노산은 유리 아민을 포함하지 않는다.
소정의 실시형태에서, Xaa14는 부재하거나, 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn이다.
이 화합물이 펩타이드 단량체인 소정의 실시형태에서, Xaa14 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체의 C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체는 Xaa4 및 Xaa10 사이에 분자간 결합을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합이다.
몇몇 실시형태의 경우, 임의의 Xaa1-Xaa5, Xaa7-Xaa9 및 Xaa11-Xaa12는 N(알파)메틸화된다. Xaa5는 추가로 Arg-Me-sym 또는 Arg-Me-asym일 수 있고, Xaa11은 O-Me-Tyr, N-Me-Lys(Ac) 또는 4-Me-Phe일 수 있다. 몇몇 경우에, 임의의 Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14는 아실화된다. 예를 들어, 몇몇 경우에, Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14 위치에서의 하나 이상의 잔기는 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
본 발명은 또한 하기 화학식 (V)의 펩타이드 단량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (V))
식 중,
펩타이드 화합물은 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합을 포함하고;
화학식 (V)의 Xaa1-Xaa10은 화학식 (IV)의 Xaa4-Xaa13에 상응하고,
Xaa1은 Pen 또는 Cys이고;
Xaa2는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa3은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa4는 Asp, D-Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa5는 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa7은 Pen 또는 Cys이고;
Xaa8은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pro이다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체 화합물은 하기 서열 또는 구조 중 하나를 포함하고,
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(β-호모-Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-(β-호모-Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-Glu-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-(β-호모-Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-NH2; 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(β-호모-Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-(β-호모-Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-(β-호모-Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2; 또는
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-NH2,
여기서 소정의 실시형태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 단량체 화합물의 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 존재한다.
소정의 실시형태에서, 임의의 화합물은 검출 가능하게 표지된다.
본 발명은 임의의 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 장용 코팅을 포함하고, 장용 코팅은 대상체의 하부 위장관계 내에서 약제학적 조성물을 보호하고 방출한다.
본 발명은 α4β7 인테그린의 생물학적 기능과 연관된 병태를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법을 추가로 포함하고, 상기 방법은 유효량의 본 발명의 화합물 또는 조성물을 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 병태는 염증성 장 질환(Inflammatory Bowel Disease; IBD), 궤양성 결장염, 크론병, 셀리악병(비열대성 스프루(nontropical Sprue)), 혈청반응음성 관절증을 가지는 장질환, 미시적 결장염, 교원성 결장염, 호산구 위장관염, 방사선요법, 화학요법, 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염, 위장관암, 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식, 원발성 경화성 담관염, GI 관에서의 인간 면역결핍 바이러스(human immunodeficiency virus; HIV) 감염, 호산구성 천식, 호산구성 식도염, 위염, 결장염, 미시적 결장염, 이식편 대 숙주 질환, 방사선치료 또는 화학치료와 연관된 결장염, 백혈구 부착분자 결핍증-1에서처럼 선천성 면역의 장애와 연관된 결장염, 만성 육아종증, 글라이코겐 저장 질환 유형 1b, 헤르만스키-푸들라크증후군(Hermansky-Pudlak syndrome), 세디아크-히가시 증후군(Chediak-Higashi syndrome), 및 비스코트-올드리치 증후군(Wiskott-Aldrich Syndrome), 또는 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염 및 다양한 형태의 위장관암, 골다공증, 관절염, 다발성 경화증, 만성 통증, 체중 증가 및 우울증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시형태에서, 병태는 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식 또는 이식편 대 숙주 질환이다. 특정한 실시형태에서, 병태는 염증성 장 질환, 예컨대 궤양성 결장염 또는 크론병이다.
특정한 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 MAdCAM에 대한 α4β7의 결합을 저해하고/하거나, MAdCAM에 대한 α4β7의 결합을 선택적으로 저해한다.
소정의 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 경구, 정맥내, 복막, 피내, 피하, 근육내, 척수강내, 흡입, 기화, 분무화, 설하, 협측, 비경구, 직장, 질 및 국소로 이루어진 군으로부터 선택된 투여의 형태에 의해 투여된다.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 초기 용량, 이어서 하나 이상의 후속하는 용량으로 투여되고, 임의의 2회의 용량 사이의 최소 간격은 1일 미만의 기간이고, 각각의 용량은 유효량의 펩타이드 이량체 화합물을 포함한다.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물의 유효량은 a) α4β7 인테그린 분자에서의 MAdCAM 결합 부위의 약 50% 이상의 포화; b) 세포 표면에서의 α4β7 인테그린 발현의 약 50% 이상의 저해; 및 c) α4β7 분자에서의 MAdCAM 결합 부위의 약 50% 이상의 포화 및 세포 표면에서의 α4β7 인테그린 발현의 약 50% 이상의 저해로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 중 적어도 하나를 달성하기에 충분하고, ⅰ) 포화는 1일 2회 이하의 투약 빈도와 일치하는 기간 동안 유지되거나; ⅱ) 저해는 1일 2회 이하의 투약 빈도와 일치하는 기간 동안 유지되거나; ⅲ) 포화 및 저해는 각각 1일 2회 이하의 투약 빈도와 일치하는 기간 동안 유지된다.
특정한 실시형태에서, 화합물 또는 약제학적 조성물은 경구로, 비경구로 또는 국소로 투여된다. 특정한 실시형태에서, 이것은 대략 시각마다, 시간마다, 4시간마다, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 1일 4회, 격일로, 주마다, 2주마다 및 개월마다로 이루어진 군으로부터 선택된 간격으로 투여된다.
본 발명의 상기 기재된 특징 및 이점 및 다른 특징 및 이점이 용이하게 이해될 수 있는 방식으로, 상기 간단히 기재된 본 발명의 더 특정한 설명이 수반된 도면에 예시된 이의 특정한 실시형태를 참조하여 이루어질 것이다. 이 도면이 본 발명의 통상적인 실시형태를 오직 도시하고 따라서 이의 범위의 제한인 것으로 고려되지 않다는 것을 이해하여, 본 발명은 수반된 도면의 사용을 통해 추가적인 특정사항 및 상세내용에 의해 기재되고 설명될 것이다.
도 1은 C 및 N 말단 이량체화를 보여주는 도식이다.
도 2는 한 쌍의 인테그린 길항제 단량체 소단위를 보여주는 도식이고, 여기서 소단위는 본 발명의 대표적인 실시형태에 따라 정렬되고 DIG 링커에 의해 이들의 각각의 C 말단에서 연결된다.
도 3은 각각 한 쌍의 인테그린 길항제 단량체 소단위를 보여주는 도식을 제공하고, 여기서 소단위는 정렬되고 링커에 의해 이들의 각각의 C 말단(3a) 또는 N 말단(3b)에서 연결된다. 소정의 실시형태에서, 링커는 2개의 황 함유 아미노산을 연결하여 펩타이드 이량체 화합물을 형성한다. 2개의 황 함유 아미노산은 다이-할라이드, 지방족 사슬 또는 PEG를 포함하는 링커에 의해 연결될 수 있다. 예를 들어, 링커는 각각의 단량체 소단위의 C 말단에서 황 함유 C 말단 아미노산을 연결함으로써 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있거나, 이것은 각각의 단량체 소단위의 N 말단에서 황 함유 N 말단 아미노산을 연결함으로써 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 링커는 2개의 아민 함유 아미노산을 연결하여 펩타이드 이량체 화합물을 형성한다. 2개의 아민 함유 아미노산은 예를 들어 다이-할라이드, 지방족 사슬 또는 PEG를 포함하는 링커에 의해 연결될 수 있다. 예를 들어, 링커는 각각의 단량체 소단위의 C 말단에서 아민 함유 C 말단 아미노산을 연결함으로서 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있거나, 이것은 각각의 단량체 소단위의 N 말단에서 아민 함유 N 말단 아미노산을 연결시킴으로써 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있다.
도 4는 펩타이드 X의 구조를 보여준다.
도 5는, 펩타이드 X가 다양한 GI 액, 대사성 효소 및 창자 박테리아에 안정하다는 것을 입증하는, 펩타이드 X에 대해 생성된 안정성 데이터의 요약을 제공한다.
도 6은 결장염 마우스에서의 용량 비례 PK-PD-효능 상관관계를 보여주는 펩타이드 X의 임상전 동물 연구의 결과를 보여준다.
도 7은, FACS에 의해 측정된, 인간 전혈에서의 다양한 세포에 대한 펩타이드 X 및 베돌리주맙의 결합 특이성을 보여주는 그래프를 제공한다. 각각의 세포 유형의 경우, 베돌리주맙 결과는 상부 그래프에 도시되어 있고, 펩타이드 X 결과는 하부 그래프에 도시되어 있다.
도 8은 비히클 또는 펩타이드 X에 의해 처리된 DSS 마우스의 평균 내시경술 점수를 보여주는 그래프이다.
도 9는 비히클 대조군 또는 펩타이드 X 처리된 DSS 마우스로부터의 내시경술 영상을 제공한다. 상이한 연구로부터의 정상 대조군이 또한 도시되어 있다. 흰색 원은 결장 무름을 표시한다.
도 10a 및 도 10b는 혈액(a) 및 비장(b)에서의 비히클 또는 펩타이드 X에 의한 처리 후 전체 α4β7+ 기억 세포를 보여주는 그래프이다. α4β7+ 기억 T 세포는 CD4+, CD45RBlow, CD44high, α4β7+로 한정된다. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시된다. n = 군마다 10 마우스.
도 11a 및 도 11b는 MLN(a) 및 파이어판(Peyer's Patch)(b)에서의 전체 세포에 대한 α4β7 기억 세포 백분율을 보여주는 그래프이다. α4β7+ 기억 T 세포는 CD4+, CD45RBlow, CD44high, α4β7+로 한정된다. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시된다. N = 군마다 1 - 마우스.
도 12는 경구 투여 후 혈장, 근위 결장 및 원위 결장에서의 펩타이드 X의 노출을 보여주는 그래프이다.
도 13a-도 13d는 마우스 DSS 결장염 모델에서 파이어판(a), 혈액(b), MLN(c) 및 비장(d)에서의 α4β7+ 기억 T 세포의 양을 보여주는 그래프를 제공한다. 파이어판, MLN, 비장 및 혈액이 수집되고, α4β7+ 기억 T 세포의 수치는 FACS에 의해 분석된다. 데이터는 평균 및 SD로 제시된다. N = 군마다 10 마우스. 통계 유의성은 일방향 ANOVA에 의해 평가된다: *: p≤0.05; **: p≤0.01. 백분율 값 및 통계 유의성은 비히클 대조군에 대한 것이다.
도 14는 cyno 원숭이에서의 7일 투약 후 펩타이드 X에 의한 CD4 기억 α4β7+ T 세포의 수용체 점유 백분율을 보여주는 그래프이다. 각각의 동물의 경우, 6일에서의 수용체 점유 백분율은 0일에서의 투약전 대조군으로 정규화된다.
도 15는 각각의 동물에 대한 펩타이드 X 혈장 농도에 대한 수용체 점유 백분율을 보여주는 그래프이다.
도 16은 cyno 혈액에서의 CD4 기억 T 세포에 대한 α4β7의 발현을 보여주는 그래프이다. 각각의 동물에 대해 0일에 투약전 대조군으로 정규화된 6일에서의 평균 형광 강도(MFI)가 도시되어 있다.
도 17은 cyno 혈액에서 전체 CD4 세포로 정규화된 순환하는 α4β7 기억 T 세포의 백분율 증가를 보여주는 그래프이다.
도 18a-도 18d는 펩타이드 XX가 쥣과 15일 만성 DSS 모델에서 항체와 필적하는 거시적인 결장 조직병리학 점수를 감소시킨다는 것을 보여주는 그래프를 제공한다. * 병리학자에 의해 평가된 전체 결장 점수(0 = 정상, 1 = 홍반, 2 = 홍반, 약간의 부종 및 작은 미란, 3 = 2개 이상의 출혈 궤양, 염증, 및 보통의 부착, 4 = 중증 궤양, 확장에 의한 협착증 및 중증 부착).
도 19는 펩타이드 XX가 15일 만성 DSS 결장염 모델에서 원위 결장의 프로프리아층(lumina propria)으로의 β7+ 세포의 침윤을 감소시킨다는 것을 보여준다. 데이터는 평균 및 SD로 표시된다. N = 군마다 10 마우스. 일방향 ANOVA에 의해 평가된 비히클 대조군에 대한 통계 유의성: *: p≤0.05; **: p≤0.005; ***: p≤0.0001; ns: 무의미.
도 20은 인테그린 길항제 펩타이드(여기서, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합에 의해 연결됨)를 보여주는 도식이다.
도 21은, 항-알렉사 488 항체에 의해 염색된, 알렉사 488에 접합된 10㎎/㎏ 또는 90㎎/㎏의 펩타이드 X에 의해 처리된 동물로부터 얻은 PFA 고정된 소장 조직 샘플의 면역조직화학을 보여준다.
도 22는 DSS의 만성 모델에서의 펩타이드 X에 의한 처리가 프로프리아층으로의 α4β7+ B 세포의 침윤을 감소시킨다는 것을 보여주는 그래프를 제공한다.
본 발명은 일반적으로, 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물 둘 다를 포함하는, 인테그린 길항제 활성을 가지는 것으로 나타난 펩타이드에 관한 것이다. 본 명세서에서 입증된 바대로, 본 발명의 펩타이드는 경구로 투여될 때 최소 전신 노출을 가지는 α4β7 인테그린의 선택적 길항제이고, IBD의 쥣과 모델에서 T 세포 호밍(homing)을 차단하고 점막 손상을 막는 데 효과적이다. 쥣과 결장염 모델에서, 본 발명의 펩타이드 화합물은 T 세포 통행을 차단하고 조직병리학을 감소시킨다.
특정한 실시형태에서, 본 발명은 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 통해 고리화된 구조를 형성하는 이종단량체 또는 동종단량체 소단위를 포함하는 다양한 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물에 관한 것이다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물의 하나 또는 둘 다의 단량체 소단위는 고리화된 펩타이드 단량체 화합물 또는 고리화된 단량체 소단위를 형성하는 분자간 결합을 포함한다. 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물의 단량체 소단위의 고리화된 구조는 효력 및 선택도를 증가시키고, 또한 경구 전달에 대한 안정성을 증가시키는 것으로 나타났다. 펩타이드 단량체 소단위 및 펩타이드 이량체 화합물의 고리화된 구조의 비제한적인 대표적인 예시는 도 2에 도시되어 있다.
정의
본 명세서에 사용된 바와 같은, 단수 형태 "일", "및" 및 "이"는, 문맥이 달리 표시하지 않는 한, 복수 지시를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바대로, 하기 용어가 표시된 의미를 가진다:
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "펩타이드"는 광범위하게 펩타이드 결합에 의해 함께 연결된 2개 이상의 아미노산의 서열을 의미한다. 이 용어가 아미노산의 중합체의 특정한 길이를 내포하지 않고, 폴리펩타이드가 재조합 기법, 화학 합성 또는 효소 합성을 이용하여 제조되거나, 천연 발생인지를 구별하거나 이를 의미하도록 의도되지 않는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "DRP"는 다이설파이드 농후 펩타이드를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "이량체"는 광범위하게 2개 이상의 소단위를 포함하는 펩타이드를 의미하고, 소단위는 펩타이드, 예를 들어 이들의 C 또는 N 말단에서 연결된 DRP이다. 이량체는 하나 이상의 내부 아미노산 잔기 또는 이의 유도체를 통해 연결된 2개의 소단위를 포함하는 펩타이드를 또한 포함한다. 소단위의 각각은 이들의 N 말단, C 말단을 통해, 또는 2개의 소단위의 각각에 대해 상이할 수 있는 내부 아미노산 또는 이의 유도체를 통해 다른 것에 연결될 수 있다. 본 발명의 이량체는 동종이량체 및 이종이량체를 포함하고, 인테그린 길항제로서 작용할 수 있다. 펩타이드 이량체 화합물은 하기 명명법을 이용하여 본 명세서에서 기재될 수 있다: [Xn]2(여기서, 펩타이드 이량체가 괄호 내에 한정된 2개의 단량체 소단위를 포함한다는 것을 나타냄(예를 들어, Xn(여기서, X는 아미노산을 나타내고, n은 펩타이드에서의 아미노산의 수를 나타냄))). 2개의 펩타이드 소단위를 연결하는 링커 모이어티는 하기처럼 표시될 수 있다: [Xn]2 - L 또는 L-[Xn]2(여기서, L은 링커임). 다른 화학 모이어티, 예컨대 검출 가능한 라벨은 링커에 대해서와 유사한 방식으로 표시될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "L-아미노산"은 아미노산의 "L" 이성질체 형태를 의미하고, 반대로 용어 "D-아미노산"은 아미노산의 "D" 이성질체 형태를 의미한다. 본 명세서에 기재된 아미노산 잔기는 "L" 이성질체 형태에 있는 것이 바람직하지만, 펩타이드가 원하는 기능을 보유하는 한, "D" 이성질체 형태에서의 잔기는 임의의 L-아미노산 잔기에 대해 치환될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "NH2"는 폴리펩타이드의 아미노 말단에 존재하는 유리 아미노기를 의미한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "OH"는 펩타이드의 카복시 말단에 존재하는 유리 카복시기를 의미한다. 추가로, 본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "Ac"는 폴리펩타이드의 C 또는 N 말단, 또는 펩타이드에서의 임의의 아미노산의 아실화를 통한 아세틸 보호를 의미한다. 용어 "NH2"는, 예를 들어 CONH2의 맥락에서, C 말단 아마이드기를 의미하도록 본 명세서에 또한 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "카복시"는 -CO2H를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "동배체" 또는 "동배체 대체"는 기재된 아미노산과 유사한 물리화학적 특성 및/또는 구조적 특성을 가지는 임의의 아미노산 또는 다른 유사체 모이어티를 의미한다. 특정한 실시형태에서, 아미노산의 "동배체" 또는 "적합한 동배체"는 동일한 종류의 또 다른 아미노산이고, 여기서 아미노산은 물과 같은 극성 용매와 접촉하는 측쇄의 성향에 기초하여 하기 종류에 속한다: 소수성(물과 접촉하는 낮은 성향), 극성 또는 하전(에너지상 물과의 양호한 접촉). 예시적인 하전 아미노산 잔기는 라이신(+), 아르기닌(+), 아스파르테이트(-) 및 글루타메이트(-)를 포함하다. 예시적인 극성 아미노산은 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 히스티딘 및 타이로신을 포함한다. 예시적인 소수성 아미노산 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 시스테인 및 메티오닌을 포함한다. 아미노산 글라이신은 측쇄를 가지지 않고, 상기 종류 중 하나에 배정되기 어렵다. 그러나, 글라이신은, 대개 루프 내에, 대개 단백질의 표면에서 발견되어서, 이 구역에 높은 가요성을 제공하고, 동배체는 유사한 특징을 가질 수 있다. 프롤린은 반대 효과를 가져서, 폴리펩타이드 사슬의 분절에 소정의 비틀림 각도를 부여함으로써 단백질 구조에 강성율을 제공한다. 소정의 실시형태에서, 동배체는 아미노산의 유도체, 예를 들어 기준 아미노산과 비교하여 하나 이상의 변형된 측쇄를 가지는 유도체이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "고리화된"은 폴리펩타이드 분자의 일 부분이 폴리펩타이드 분자의 또 다른 부분에 연결되어서, 예컨대 다이설파이드 브릿지 또는 다른 유사한 결합, 예를 들어 락탐 결합을 형성함으로써 닫힌 고리를 형성하는 반응을 의미한다. 특정한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물의 단량체 소단위는 펩타이드 단량체 또는 단량체 소단위에 존재하는 2개의 아미노산 잔기 사이에 분자간 결합을 통해 고리화된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "소단위"는 C 또는 N 말단에서 연결되어 이량체 펩타이드 조성물을 형성하는 폴리펩타이드 단량체의 한 쌍 중 하나를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "링커"는 광범위하게 복수의 펩타이드 단량체 소단위를 함께 연결하여 이량체를 형성할 수 있는 화학 구조를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "수용체"는 특정한 화학 그룹 또는 분자에 대한 친화도를 가지는 세포 표면 상의 또는 세포 내부에서의 분자의 화학 그룹을 의미한다. 이량체 펩타이드와 표적화된 인테그린 사이의 결합은 유용한 진단학적 도구를 제공할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "인테그린 관련 질환"은, 인테그린 결합의 결과로서 나타나고, 인테그린 길항제의 투여를 통해 치료될 수 있는, 적응증을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "질환", "장애" 및 "병태"는 상호 교환적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, "저해", "치료", "치료하는" 및 "경감시키는"은 상호 교환적으로 사용되고, 대상체, 예를 들어 포유류에서의 예를 들어 증상의 정체, 생존의 연장, 증상의 부분 또는 완전 경감, 및 병태, 질환 또는 장애의 부분 또는 완전 박멸을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, "예방한다" 또는 "예방"은 (ⅰ) 특히 대상체가 병태에 대한 소인이 있지만, 아직 이것을 가지는 것으로 진단되지 않을 때, 질환, 상해 또는 병태가 대상체, 예를 들어 포유류에서 발생하는 것을 막거나 저해하는 것; 또는 (ⅱ) 질환, 상해 또는 병태가 대상체에서 발생할 것 같은 가능성을 감소시키는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 과도한 독성, 자극 및 알레르기 반응 없이 질환의 치료에 적합하고; 합당한 이익/위험 비율에 알맞고, 이의 의도된 용도에 효과적인, 수용성 또는 지용성 또는 분산성인, 본 발명의 화합물의 염 또는 양쪽성 형태를 나타낸다. 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 또는 분리하여 적합한 산에 의한 아미노기의 처리에 의해 제조될 수 있다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 뷰티레이트, 캄포레이트, 캄퍼설포네이트, 다이글루코네이트, 글라이세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 폼에이트, 퓨마레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트(이세티오네이트), 락테이트, 말레에이트, 메시틸렌설포네이트, 메탄설포네이트, 나프틸렌설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로프리오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 트라이클로로아세테이트, 트라이플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카보네이트, 파라-톨루엔설포네이트 및 운데카노에이트를 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물에서의 아미노기는 메틸, 에틸, 프로필, 및 뷰틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드; 다이메틸, 다이에틸, 다이뷰틸 및 다이아밀 설페이트; 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드; 및 벤질 및 펜에틸 브로마이드에 의해 4급화될 수 있다. 치료학적으로 허용되는 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 산의 예는 무기산, 예컨대 염산, 브롬산, 황산 및 인산, 및 유기산, 예컨대 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물은 염 형태, 예를 들어 아세테이트 염이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "N(알파)메틸화"는 또한 일반적으로 N-메틸화라 칭하는 아미노산의 알파 아민의 메틸화를 기재한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "sym 메틸화" 또는 "Arg-Me-sym"은 아르기닌의 구아니딘기의 2개의 질소의 대칭 메틸화를 기재한다. 추가로, 용어 "asym 메틸화" 또는 "Arg-Me-asym"은 아르기닌의 구아니딘기의 단일 질소의 메틸화를 기재한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "아실화 유기 화합물"은, 예를 들어 C 말단 이량체를 형성하기 전에 아미노산 소단위의 N 말단을 아실화하기 위해 사용될 수 있는, 카복실산 작용기를 가지는 다양한 화합물을 의미한다. 아실화 유기 화합물의 비제한적인 예는 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐아세트산, 3-페닐프로피온산, 숙신산, 글루타르산, 사이클로펜탄 카복실산, 3,3,3-트라이플루오로프로피온산, 3-플루오로메틸뷰티르산, 테트라헤드로-2H-피란-4-카복실산을 포함한다.
모든 펩타이드 서열은 일반적으로 인정된 관례에 따라 써지고, 이로써 α-N 말단 아미노산 잔기는 왼쪽에 있고, α-C 말단은 오른쪽에 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "α-N 말단"은 펩타이드에서의 아미노산의 유리 α-아미노기를 의미하고, 용어 "α-C 말단"은 펩타이드에서의 아미노산의 유리 α-카복실산 말단을 의미한다. 펩타이드 서열은 표에 기재될 수 있고, 이 표는 본 발명의 화합물의 소정의 실시형태에서 존재하는, 추가적인 모이어티, 예컨대 N 말단 또는 C 말단 화학 변형, 링커, 접합체 및/또는 라벨을 추가로 개시할 수 있다.
용어 "포함하는"이 개방인 것으로 의도되고, 추가적인 구성요소 또는 단계의 포함을 허용하지만 필요로 하지는 않는다는 것에 주목한다. 용어 "포함하는"이 본 명세서에 사용될 때, 용어 "이루어진"은 따라서 또한 포함되고 개시되어 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "아미노산" 또는 "임의의 아미노산"은, 천연 발생 아미노산(예를 들어, a-아미노산), 비천연 아미노산, 변형된 아미노산 및 비천연 아미노산을 포함하는, 임의의 및 모든 아미노산을 의미한다. 이것은 D-아미노산 및 L-아미노산 둘 다를 포함한다. 천연 아미노산은 자연에서 발견되는 것, 예컨대 아주 많은 단백질의 빌딩 블록을 형성하기 위해 펩타이드 사슬로 조합되는 23개의 아미노산 등을 포함한다. 이것은 주로 L 입체이성질체이지만, 아주 적은 D-아미노산이 박테리아 봉입체 및 몇몇 항생제에서 발생한다. "비표준" 천연 아미노산은 피로라이신(메탄올생성 유기체 및 다른 진핵생물에서 발견됨), 셀레노시스테인(많은 비진핵생물 및 대부분의 진핵생물에 존재함) 및 N-폼일메티오닌(박테리아, 미토콘드리아 및 엽록체에서 시작 코돈 AUG에 의해 코딩됨). "비천연" 또는 "천연이 아닌" 아미노산은 천연으로 발생하거나 화학적으로 합성된 비단백질성 아미노산(즉, 유전자 코드에서 천연으로 코딩되거나 발견되지 않은 것)이다. 140개 초과의 천연 아미노산이 공지되어 있고, 수천 개 이상의 조합이 가능하다. "비천연" 아미노산의 예는 β-아미노산(β3 및 β2), 호모-아미노산, 프롤린 및 피류브산 유도체, 3-치환된 알라닌 유도체, 글라이신 유도체, 고리 치환된 페닐알라닌 및 타이로신 유도체, 선형 코어 아미노산, 다이아미노산, D-아미노산, 알파-메틸 아미노산 및 N-메틸 아미노산을 포함한다. 비천연 또는 천연이 아닌 아미노산은 또한 변형된 아미노산을 포함한다. "변형된" 아미노산은 아미노산에서 천연으로 존재하지 않는 일 그룹, 그룹들 또는 화학 모이어티를 포함하도록 화학적으로 변형된 아미노산(예를 들어, 천연 아미노산)을 포함한다.
대부분의 경우에, 본 명세서에 사용된 천연 발생 및 비천연 발생 아미노아실 잔기의 명칭은, 문헌["Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974)" Biochemistry, 14(2), (1975)]에 기재된 바대로, 유기 화학 명명법에 대한 IUPAC 위원회 및 생화학 명명법에 대한 IUPAC-IUB 위원회가 제안한 명칭 관례를 따른다. 본 명세서 및 첨부된 청구항에 사용된 아미노산 및 아미노아실 잔기의 명칭 및 약어가 이들의 제안과 다른 정도로, 이들은 독자에게 명확해질 것이다. 본 발명을 기술하는 데 유용한 몇몇 약어는 하기 표 1에서 하기 정의되어 있다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
본 발명의 양태는 2개의 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함하고, 펩타이드 이량체 화합물은 α4β7 인테그린의 길항제이다. 본 발명의 관련 양태는 펩타이드 길항제의 단량체 소단위를 포함한다. 펩타이드 이량체 화합물에 존재하는 단량체 소단위는, 예를 들어 도 1에 도시된 바와 같이, 이들의 C 또는 N 말단에서 또는 내부 아미노산 잔기를 통해, 예를 들어 링커 모이어티에 의해 연결된다. 특정한 실시형태에서, 단량체 소단위는 둘 다 이들의 각각의 N 말단을 통해 연결되거나, 단량체 소단위는 둘 다 이들의 각각의 C 말단을 통해 연결되거나, 단량체 소단위는 둘 다 내부 아미노산 잔기를 통해 연결된다. 추가의 실시형태에서, 1개의 단량체 소단위는 임의의 이들의 N 말단, C 말단 또는 내부 아미노산을 통해 또 다른 단량체 소단위에 임의의 이들의 N 말단, C 말단, 또는 내부 아미노산을 통해 연결되고, 연결은 펩타이드 이량체 화합물의 2개의 단량체 소단위에서의 동일한 또는 상이한 아미노산 잔기를 통해 발생할 수 있다. 추가의 관련 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물의 단량체 소단위는 이들의 N 말단 및 이의 C 말단 둘 다를 통해 연결된다. 일 실시형태에서, 단량체 소단위의 2개의 N 말단은 연결되고; 일 실시형태에서, 단량체 소단위의 2개의 C 말단은 연결되고; 일 실시형태에서, 제1 단량체 소단위의 N 말단은 펩타이드 이량체 화합물의 제2 단량체 소단위의 C 말단에 연결되고, 제1 단량체 소단위의 C 말단은 펩타이드 이량체 화합물의 제2 단량체 소단위의 N 말단에 연결된다.
본 발명의 링커 모이어티는 본 명세서의 교시내용에 적합한 임의의 구조, 길이 및/또는 크기를 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 링커 모이어티는 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-Ac, IDA-아이소발레르산, ADA 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, Glu, Asp, D-Glu, D-Asp, 1,4-페닐렌다이아세트산, 바이페닐 다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 숙신산, 글루타르산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족 2산, 적합한 방향족 2산, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜로 이루어진 비제한적인 군으로부터 선택된다. 링커가 IDA, ADA 또는 유리 아민을 가지는 임의의 링커일 때, 이것은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산, 10개 내지 20개의 탄소 단위를 가지는 직쇄 지방족 산, 콜산 및 다른 담즙산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(PEG4-PEG13), Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다.
소정의 실시형태에서, 링커는 2개의 황 함유 C 또는 N 말단 아미노산을 연결함으로써 2개의 단량체 소단위를 연결한다. 몇몇 실시형태에서, 2개의 황 함유 아미노산은 다이-할라이드, 지방족 사슬 또는 PEG를 포함하는 링커에 의해 연결된다. 소정의 실시형태에서, 링커는 각각의 단량체 소단위의 C 말단에서 황 함유 C 말단 아미노산을 연결함으로써 2개의 단량체 소단위를 연결한다. 소정의 실시형태에서, 링커는 각각의 단량체 소단위의 N 말단에서 황 함유 N 말단 아미노산을 연결함으로써 2개의 단량체 소단위를 연결한다. 소정의 실시형태에서, 링커는 1개의 단량체 소단위의 황 함유 C 말단 아미노산을 다른 단량체 소단위의 황 함유 N 말단 아미노산에 연결함으로써 2개의 단량체 소단위를 연결한다. 몇몇 실시형태에서, 2개의 황 함유 아미노산은 동종이작용성 말레이미드 가교결합제, 다이-할라이드, 1,2-비스(브로모메틸)벤젠, 1,2-비스(클로로모메틸)벤젠, 1,3-비스(브로모메틸)벤젠, 1,3-비스(클로로모메틸)벤젠, 1,4-비스(브로모메틸)벤젠, 1,4-비스(클로로모메틸)벤젠, 3,3'-비스-브로모메틸-바이페닐 또는 2,2'-비스-브로모메틸-바이페닐을 포함하는 링커에 의해 연결된다. 특정한 할로아세틸 가교결합제는 아이오도아세틸 또는 브로모아세틸기를 함유한다. 이 동종이작용성 링커는 PEG 또는 지방족 사슬을 포함하는 스페이서를 함유할 수 있다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다.
소정의 실시형태에서, 링커는 DIG, PEG4, PEG4-바이오틴, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, ADA, Boc-IDA, 글루타르산, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 1,2-페닐렌다이아세트산, 트라이아진, Boc-트라이아진, IDA-바이오틴, PEG4-바이오틴, AADA, 지방족, 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다. 적합한 링커 모이어티 비제한적인 예는 표 2에 제공된다.
특정한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 이량체 화합물, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)에 따른 펩타이드 이량체 화합물은 본 명세서에 기재된 임의의 링커에 의해 연결된 2개의 단량체 소단위를 포함하고; 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 단량체 화합물, 예를 들어 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 따른 펩타이드 단량체 화합물은 본 명세서에 기재된 임의의 링커를 포함한다.
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
링커가 IDA, ADA 또는 유리 아민을 가지는 임의의 링커일 때, 이것은 예를 들어 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산, 10개 내지 20개의 탄소 단위를 가지는 직쇄 지방족 산, 콜산 및 다른 담즙산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(PEG4-PEG13), Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 링커 또는 또 다른 아미노산에 결합하면, 펩타이드 화합물의 아미노산 잔기가 구조 변화를 겪을 수 있는, 예를 들어 산이 아마이드가 될 수 있는 것으로 이해된다. 특정한 아미노산 잔기의 언급은 링커에 결합할 시에 또는 펩타이드 화합물의 또 다른 아미노산과 분자간 결합을 형성할 시에 임의의 변경된 구조 형태의 아미노산 잔기를 포함한다.
본 발명의 양태는 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 통해 고리화된 구조를 형성하는 다양한 펩타이드 단량체 화합물에 관한 것이다. 각각의 펩타이드 단량체의 고리화된 구조는 분자의 효력 및 선택도를 증가시키는 것으로 나타났다.
특정한 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물(또한 본 명세서에서 총체적으로 "펩타이드 화합물"이라 칭함)은 하나 이상의 말단 변형 기를 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 화합물의 말단 끝은 DIG, PEG4, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG4K, PEG5K, 400Da 내지 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜, IDA, ADA, 글루타르산, 숙신산, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 1,2-페닐렌다이아세트산, AADA, 및 지방족, 방향족, 및 헤테로방향족으로 이루어진 비제한적인 군으로부터 선택된 말단 변형 기를 포함하도록 변형된다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 화합물의 N 또는 C 말단은 변형 기에 연결된다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 화합물의 N 말단은 예를 들어 화학식 (I) 또는 (I-A)의, 예를 들어 Xaa1, Xaa2 및 Xaa3에 의해 표시된 바와 같은, 1개 내지 3개의 적합한 기에 의해 변형된다. N 말단은 추가로 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, N 말단은 링커 모이어티 또는 다른 변형 기를 추가로 포함한다. 유사하게, 소정의 실시형태에서, 펩타이드의 C 말단은 적합한 기에 의해 변형된다. 예를 들어, C 말단은 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, C 말단은 링커 모이어티, 예컨대 본 명세서에 개시된 임의의 것(이들로 제한되지는 않음)을 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다.
본 발명은 다양한 변형된 아미노산에 의해 치환된 펩타이드를 가지는 다양한 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물을 추가로 포함한다. 예를 들어, 몇몇 펩타이드는 Tic, Phe(2-카바모일), Phe(3-카바모일), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe), Phe(4-tBu), 호모-Phe, Aic, Cit, Glu(OMe), Dab, Dap, Pen, Sar, Cit, Cav, 호모Leu, 2-Nal, D-1-Nal, D-2-Nal, Bip, O-Me-Tyr, β-호모Trp, β-호모Phe, β-호모Glu Phe(4-CF3), 2-2-인단, 1-1-인단, 사이클로뷰틸, Gla, Phe(4-NH2), 호모Phe, 1-Nal, Nle, 호모 아미노산, D-아미노산, 3-3-다이Phe, 사이클로뷰틸-Ala, HCha, Bip, β-Glu, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀) 및 다양한 N-메틸화 아미노산을 포함한다. 본 발명에 의해 고려되는 비천연 아미노산의 추가적인 비제한적인 예는 표 1에 기재되어 있다. 당해 분야의 당업자는 유사한 원하는 결과를 달성하도록 추가적인 치환이 이루어질 수 있고, 이러한 치환이 본 발명의 교시내용 및 정신 내에 있다는 것을 이해할 것이다.
일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I)의 2개의 연결된 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
(화학식 (I))
여기서, 펩타이드 이량체 화합물의 하나 또는 둘 다의 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함하고, 추가로 화학식 (I)는 이량체 분자의 단량체 소단위를 나타내고, 단량체 소단위는 펩타이드 이량체 화합물을 형성하도록 연결되고, 식 중,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Xaa10과 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노구아니디노), Phe(4-카보밀), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa7은 Asp, D-Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cba, 호모Leu, Cpa, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Xaa4와 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa11은 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나, Pro, 또는 임의의 아미노산이고; 그리고
Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp, D-Asp 또는 N-Me-Asp이다. 화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이다. 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp 또는 N-Me-Asp이다. 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe), Phe(4-tBu), Phe(4-CF3), Phe(3-CF3), Phe(CF3), 호모-Phe, D-Phe, Phe(2,3-다이-Cl), Phe(3,4-다이-Cl), N-Me-Tyr, N-Me-Phe, Phe(4-F), Phe(3-F), Phe(4-Me), Phe(3-Me), Phe(2-Me), Phe(3,4-다이-Me), Phe(2,4-다이-Phe), 베타-메틸Phe 및 바이페닐-Ala로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, 및 D-Pen을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 일 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 또 다른 실시형태에서, Xaa14는 Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 각각의 소단위의 2개의 C 말단 아미노산은 산 작용기를 보유하고, 이들은 다이아민 링커에 의해 레트로인버스 연결을 통해 연결된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa13은 Pro이다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe), Phe(4-tBu), Phe(4-CF3), Phe(3-CF3), Phe(CF3), 호모-Phe, D-Phe, Phe(2,3-다이-Cl), Phe(3,4-다이-Cl), N-Me-Tyr, N-Me-Phe, Phe(4-F), Phe(3-F), Phe(4-Me), Phe(3-Me), Phe(2-Me), Phe(3,4-다이-Me), Phe(2,4-다이-Phe), 베타-메틸Phe, 또는 바이페닐-Ala로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp, D-Asp 또는 N-Me-Asp이고; Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, Leu, Nle, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고; Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고; Xaa13은 부재하거나 Pro이고; Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys 및 Pen을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이다.
소정의 실시형태에서, Xaa10에 바로 C 말단인 아미노산은 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa10에 바로 C 말단인 아미노산은 방향족 아미노산이다. 이 화합물이 펩타이드 이량체인 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn이다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Cys, 호모Cys, 또는 Pen이다. 소정의 실시형태에서, Xaa14 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다.
소정의 실시형태에서, C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다.
본 명세서에 기재된 임의의 화학식의 소정의 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3은, 펩타이드 화합물의 N 말단에 위치할 때, 예를 들어 펩타이드 화합물의 N 말단 아미노산에 결합할 때 오직 Ac일 수 있다. 본 명세서에 기재된 임의의 다양한 화학식의 임의의 화합물의 특정한 실시형태에서, Xaa1은 Ac이고, Xaa2 및 Xaa3은 둘 다 부재하거나 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 서로에 결합할 수 있는 아미노산 잔기이다. 서로에 결합할 수 있는 아미노산은 당해 분야에 공지되어 있고, 서로에 결합하는 특정한 아미노산 잔기 및 형성된 결합의 다양한 예는 본 명세서에서 기재되어 있다. 특정한 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 공유 결합을 통해 서로에 결합할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 공유 결합은 Xaa4 및 Xaa10에서의의 측쇄 기를 통해 발생한다. 특정한 실시형태에서, 결합은 다이설파이드 결합이다.
화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H 및 I-I를 포함)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, 하나 또는 둘 다의 펩타이드 이량체 소단위(들)는 Xaa4와 Xaa10 사이의 분자간 결합을 포함한다. 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, 하나 또는 둘 다의 펩타이드 이량체 소단위(들)는 Xaa1과 Xaa7 사이의 분자간 결합을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 결합은 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸, 셀레노에터 또는 다이셀레나이드 결합이다. 소정의 실시형태에서, 결합은 바로 2개의 아미노산 잔기 사이에 발생한다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa4는 Cys, Pen, 호모Cys, D-Cys, D-Pen, D-호모Cys, Asp, Glu, 호모Glu, β-Asp, β-Glu, Lys, 호모Lys, Orn, Dap, Dap, 2-알릴글라이신, 2-(3'-뷰테닐)글라이신, 2-(4'-펜테닐)글라이신 또는 2-(5'-헥세닐)글라이신, 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa10은 Cys, Asp, Lys, Glu, Pen, 호모Asp, 호모Glu, 호모Cys, D-Cys, D-Pen, 호모Lys, Orn, β-Asp, β-Glu, Dap, Dab, D-호모Cys, 2-알릴글라이신, 2-(3'-뷰테닐)글라이신, 2-(4'-펜테닐)글라이신 또는 2-(5'-헥세닐)글라이신, 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, 펩타이드 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합을 포함하고, Xaa4 및 Xaa10은 각각 Cys 및 Pen으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Pen이다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Asp, 호모Asp, Glu 및 호모Glu, 호모Lys로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4는 Lys, Dap, Dab, 호모Lys, Orn 및 호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Lys, Dap, Dab, 호모Lys, Orn 및 호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4는 Asp, 호모Asp, Glu, 호모Glu 및 호모Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa4는 Asp, 호모Asp, Glu, 호모Glu 및 호모Lys로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa10은 Lys, Dap, Dab, 호모Lys, Orn 및 HGlu로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4 및 Xaa10은 아마이드 결합을 통해 고리화된다.
펩타이드 소단위가 Xaa4와 Xaa10 사이의 올레핀 결합을 포함하는, 화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 각각 2-알릴글라이신, 2-(3'-뷰테닐)글라이신, 2-(4'-펜테닐)글라이신 또는 2-(5'-헥세닐)글라이신으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 펩타이드는 상응하는 올레핀/"스테이플된 펩타이드"를 생성하도록 폐환 메타시스(methasis)를 통해 고리화된다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa4는 Cys, Pen, 호모Cys, D-Pen, D-Cys 또는 D-호모Cys이다. 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Cys, Pen, 호모Cys, D-Pen, D-Cys 또는 D-호모Cys이다.
화학식 (I)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 각각 β-아지도-Ala-OH 또는 프로파길글라이신이고, 펩타이드 이량체 소단위(들)는 트라이아졸 고리를 생성시키는 클릭 화학을 통해 고리화된다.
화학식 (I)의 특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합이다.
몇몇 실시형태에서, Xaa1, Xaa2, Xaa3, Xaa11 , Xaa12, Xaa13 또는 Xaa14와 같은, 펩타이드 이량체의 펩타이드 단량체 소단위 둘 다의 N 말단 또는 C 말단 아미노산은 동종이량체 또는 이종이량체 분자를 형성하도록 적합한 링커 모이어티에 의해 변형되고, 화학식 (I)는 적합한 C 또는 N 말단 링커에 의해 연결된 2개의 소단위로부터 형성된 이량체를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (I')의 2개의 연결된 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
(화학식 I')
식 중,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Xaa10과 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Phe(4-구아니디노), Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜틸 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Xaa4와 결합을 형성하는 임의의 아미노산이고;
Xaa11은 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 Pro이고;
Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I')의 펩타이드 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물의 특정한 실시형태에서, Xaa5 및 Xaa10은 분자간 결합, 예를 들어 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I')의 소정의 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀 ) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
다양한 실시형태에서, 화학식 (I)에 대해 기재된 임의의 추가의 제한은 화학식 (I')에 존재할 수 있다. 화학식 (I)의 실시형태에 걸친 언급은 화학식 (I)의 임의의 대안적인 실시형태 및 또한 화학식 I에 또한 적용된다.
일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (II)의 2개의 연결된 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (II)
여기서, 펩타이드 이량체 화합물의 하나 또는 둘 다의 소단위는 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함하고, 추가로 화학식 (II)가 이량체 분자의 단량체 소단위를 나타내는 경우, 단량체 소단위는 본 발명에 따라 이량체 분자를 형성하도록 연결되고, 화학식 (II)의 Xaa1-Xaa10은 화학식 (I)의 Xaa4-Xaa13에 상응한다.
화학식 (II)의 특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa7은 둘 다 Cys 또는 Pen이고; 특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa7은 둘 다 Pen이다.
화학식 (II)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (II)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, 및 D-Pen을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa2는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa5는 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa6은 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa10은 Pro이다. 화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa2는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa5는 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa6은 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa8은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa9는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II)의 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Pro이다.
특정한 실시형태에서, 화학식 (I) 및 화학식 (II)의 하나 또는 둘 다의 소단위는 화학식 (I)의 Xaa4와 Xaa10, 또는 화학식 (II)의 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합이다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 이량체는 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 임의의 것으로부터 선택된 하나 이상의 단량체 소단위를 포함한다.
화학식 (I-A)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 Arg, N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀아미노), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Ile, Gly 또는 Thr이고;
Xaa7은 Asp, D-Asp 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은 Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Ile, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 부재하거나, Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(2-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, D-Asp, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산, 임의의 방향족 아미노산 및 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 임의의 아미노산이고;
Xaa14는 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn에서 유리 아미노기를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-A)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-A)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp 또는 N-Me-Asp이다.
화학식 (I-B)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu 및 Nle로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 임의의 아미노산이고;
Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 및 D-Orn으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-B)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-B)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-C)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu 및 Nle로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐 Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 임의의 방향족 아미노산 및 상응하는 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 임의의 아미노산이고;
Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 및 D-Orn으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-C)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-C)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-D)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3). Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 및 D-Orn으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-D)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-D)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-E)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3). Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-E)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-F)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐 Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 및 D-Orn으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-F)의 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-F)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-F)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-G)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-G)의 소정의 실시형태에서, Xaa14는 D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-G)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-G)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-H)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-H)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-I)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me) 및 호모Phe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I-I)의 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (I-I)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (I-J)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (I)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp이고;
Xaa8은 Thr이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Phe(4-tBu)이고;
Xaa12는 베타-호모Glu이고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 D-Lys이다.
화학식 (I-J)의 특정한 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합을 통해 연결되고, 2개의 단량체 소단위는 링커를 통해 연결된다. 특정한 실시형태에서, 이들은 이들의 각각의 C 말단을 통해 연결된다. 일 실시형태에서, 링커는 DIG이다.
화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (II), (III), (A), (B) 또는 (C)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Lys, D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J)의 임의의 것의 대안적인 실시형태에서, Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 대안적인 실시형태에서, Xaa14는 Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J)의 이 대안의 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 각각의 소단위의 2개의 C 말단 아미노산은 산 작용기를 보유하고, 이들은 다이아민 링커에 의해 레트로인버스 연결을 통해 연결된다.
화학식 (II), (III), (A), (B) 또는 (C)의 임의의 것의 대안적인 실시형태에서, Xaa10은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 대안적인 실시형태에서, Xaa10은 Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (II), (III), (A), (B) 또는 (C)의 이 대안의 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 각각의 소단위의 2개의 C 말단 아미노산은 산 작용기를 보유하고, 이들은 다이아민 링커에 의해 레트로인버스 연결을 통해 연결된다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 화학식 (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J)의 임의의 것의 2개의 펩타이드 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체를 포함하지만, Xaa4 및 Xaa10에서의 Pen 잔기의 하나 또는 둘 다는 Cys에 의해 치환된다. 특정한 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10에서의 Pen 잔기는 둘 다 Cys에 의해 치환된다. 특정한 실시형태에서, 하나 또는 둘 다의 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합을 포함한다.
화학식 (I), (II), (III) (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I), (I-J), (A), (B), (C), (S), 또는 관련 펩타이드의 임의의 것의 특정한 실시형태에서, 2개의 펩타이드 소단위는 이들의 각각의 C 말단을 통해, 예를 들어 각각의 소단위의 Xaa13 또는 Xaa14에 결합된 링커를 통해 연결된다.
화학식 (I), (II), (III), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J), (A), (B), (C), (S), 또는 관련 펩타이드의 임의의 것의 특정한 실시형태에서, 2개의 펩타이드 소단위는 이들의 각각의 N 말단을 통해, 예를 들어 각각의 소단위의 Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3에 결합된 링커를 통해 연결된다.
화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J), 또는 관련 펩타이드의 임의의 것의 특정한 실시형태에서, Xaa1은 Ac이고, Xaa2 및 Xaa3은 부재하거나 임의의 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, Xaa3은 Ac이다.
화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J), 또는 관련 펩타이드의 임의의 것의 특정한 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3 중 임의의 하나 이상은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3이 부재할 때, 펩타이드 이량체 화합물의 2개의 단량체 소단위는 N 말단 아미노산의 α-아민에 의해 연결된다. 특정한 실시형태에서, 2개의 소단위는 측쇄 아민, 티오기 또는 Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3의 아미노산 또는 α-아민기의 링커를 통해 연결할 수 있는 임의의 작용기에 의해 연결된다. 특정한 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3은 D-Lys, N-Me-Lys 또는 D-N-Me-Lys이다. 특정한 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3은 D-Lys, N-Me-Lys 또는 D-N-Me-Lys이고, 펩타이드의 N 말단에 위치한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 소단위는 둘 다 이들 잔기 중 하나로부터 선택된 Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3을 포함하고, 2개의 소단위는 이들의 각각의 N 말단을 통해 연결된다.
임의의 화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J), 또는 관련 펩타이드의 특정한 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3 중 임의의 하나 이상은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, 이 잔기는 펩타이드의 N 말단에 위치한다. 소정의 실시형태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3은 Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, 이 잔기는 펩타이드의 N 말단에 위치한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 각각의 소단위의 2개의 N 말단 아미노산은 산 작용기를 보유하고, 이들은 다이아민 링커에 의해 레트로인버스 연결을 통해 연결된다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물의 소단위 둘 다는 이들 잔기 중 하나로부터 선택된 Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3을 포함하고, 2개의 소단위는 이들의 각각의 N 말단을 통해 연결된다.
임의의 화학식 (I), (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 또는 (I-J), 또는 이들의 단량체 소단위를 포함하는 관련 펩타이드의 특정한 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 Pen이고, Xaa5는 N-Me-Arg이다. 임의의 이들 화학식 또는 펩타이드의 추가의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 Pen이고, Xaa5는 N-Me-Arg이고, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (II), (III), (A), (B) 또는 (C)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Lys, D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 하기 화학식 (A)의 하나 이상의 펩타이드 소단위 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (A))
식 중,
Xaa1은 Cys 또는 Pen이고;
Xaa2는 N-메틸-Arg이고;
Xaa3은 Ser이고;
Xaa4는 Asp이고;
Xaa5는 Thr 또는 Val이고;
Xaa6은 Leu 또는 Nle이고;
Xaa7은 Cys 또는 Pen이고;
Xaa8은 Trp, Tic, Bip, 1-Nal, 2-Nal, Phe(4-tBu), Phe, Tyr 또는 Phe(4-COOH)이고;
Xaa9는 Glu, β-호모Glu 또는 D-Glu이고,
Xaa10은 임의의 아미노산이고;
펩타이드 분자는 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합을 포함한다.
화학식 (A)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 D-Lys, N-Me-Lys 또는 N-Me-D-Lys이다. 특정한 실시형태에서, Xaa1 및/또는 Xaa7은 Pen이다. 화학식 (A)의 소정의 실시형태에서, Xaa10은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn을 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드의 Xaa10 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다.
실시형태는 하기 구조를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함한다:
(Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14)2-L,
여기서, Xaa1 내지 Xaa14는 (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 및 (I-J)를 포함하는 임의의 화학식 (I)에 대해 본 명세서에 기재된 바대로 정의되고, L은 2개의 단량체 소단위의 C 말단을 연결하는 임의의 링커 모이어티이다. 특정한 실시형태에서, L은 DIG, 이작용성 PEG13, 이작용성 PEG25, 이작용성 PEG1K, 이작용성 PEG2K, 이작용성 PEG3.4K, 이작용성 PEG4K, 이작용성 PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 글루타르산, 아젤라산, 피멜린산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택된다. 링커가 IDA, ADA 또는 유리 아민을 가지는 임의의 링커일 때, 이것은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산, 10개 내지 20개의 탄소 단위를 가지는 직쇄 지방족 산, 콜산 및 다른 담즙산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(PEG4-PEG13), Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다. 특정한 실시형태에서, L은 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 숙신산, 글루타르산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 적합한 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 연결은 DIG이다. 다른 실시형태에서, L은 본 명세서에 기재된 임의의 링커이다.
다른 실시형태는 하기 구조를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함한다:
L-(Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14)2
여기서, Xaa1 내지 Xaa14는 (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (I-F), (I-G), (I-H), (I-I) 및 (I-J)를 포함하는 임의의 화학식 (I)에 대해 본 명세서에 기재된 바대로 정의되고, L은 DIG, 이작용성 PEG13, 이작용성 PEG25, 이작용성 PEG1K, 이작용성 PEG2K, 이작용성 PEG3.4K, 이작용성 PEG4K, 이작용성 PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 글루타르산, 아젤라산, 피멜린산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택된다. 링커가 IDA, ADA 또는 유리 아민을 가지는 임의의 링커일 때, 이것은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산, 10개 내지 20개의 탄소 단위를 가지는 직쇄 지방족 산, 콜산 및 다른 담즙산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(PEG4-PEG13), Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다. 특정한 실시형태에서, L은 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 숙신산, 글루타르산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 적합한 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 연결은 DIG이다.
본 발명의 몇몇 서열은 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I, I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D) 또는 화학식 (S)에 제공된 일반 서열로부터 유래한다. 예를 들어, 화학식 (I)의 Xaa4-Xaa13 또는 화학식 (II)의 Xaa1-Xaa10으로 표시된 데카펩타이드의 N 말단은, 화학식 (I)의 Xaa1, Xaa2 및 Xaa3으로 표시된 바대로, 1개 내지 3개의 적합한 기에 의해 변형될 수 있다. N 말단은 추가로 아실화될 수 있다. 특정한 실시형태에서, N 말단은 2-메틸-4,4,4-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 트라이플루오로메틸 뷰틸, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, N 말단은 N 말단 이량체 분자를 형성하기 위해 2개의 단량체 소단위를 함께 연결하는 것을 수월하게 하는 적합한 링커 모이어티를 추가로 포함한다.
임의의 펩타이드 이량체 화합물의 소정의 실시형태에서, 예를 들어 펩타이드 이량체 화합물이 하나 또는 둘 다의 단량체 소단위의 N 말단을 통해 연결될 때, N 말단 아미노산은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, 단량체 소단위의 N 말단 아미노산 잔기는 아민 측쇄를 가지는 아미노산, 또는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn으로부터 선택된 아미노산이다. 특정한 실시형태에서, 이것은 D-Lys, N-Me-Lys 또는 D-N-Me-Lys이다.
또한, 화학식 (I)의 임의의 다양한 실시형태에 대해 상기 기재된 바대로, Xaa1, Xaa2 및/또는 Xaa3은 아민 측쇄를 가지는 아미노산, 또는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp로부터 선택된 아미노산일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이것은 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn이고, 이것은 연결에서 참여할 수 있다. 연결에 참여하는 잔기는 펩타이드 단량체의 N 말단에 위치할 수 있거나, 이것은 내부 아미노산일 수 있고, 즉 N 말단 또는 C 말단 아미노산이 아니다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 화학식, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D) 또는 화학식 (S)에 기초한 소단위를 가지는 펩타이드 이량체 화합물을 추가로 포함하고, 소단위는 하나 이상의 내부 아미노산 잔기를 통해 연결된다. 예를 들어, 하나 이상의 소단위의 내부 아미노산 잔기는 아미노산 또는 유도체, 예컨대 아민 측쇄를 가지는 아미노산, 또는 링커와 결합을 형성할 수 있는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, Cys, 호모Cys, Pen 및 D-Orn으로부터 선택된 아미노산을 포함하도록 변형될 수 있다. 또한, 단량체 소단위의 내부 아미노산 잔기는 펩타이드 이량체 화합물을 형성하도록 서로에(또는 링커에) 직접 연결될 수 있다. 예를 들어, 각각의 단량체 소단위에 존재하는 내부 라이신 잔기는 펩타이드 이량체 화합물을 형성하도록 서로에 결합할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 Xaa1, Xaa2 및 Xaa3은 부재한다. 다른 실시형태에서, Xaa1은 부재하고, Xaa2 및 Xaa3은 펩타이드의 N 말단을 변형시키기 위한 적합한 기, 예를 들어 화학식 (I)의 잔기 Xaa4-Xaa13, 및 화학식 (II)의 잔기 Xaa1-Xaa10으로 표시된 데카펩타이드를 나타낸다. 추가로, 몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 Xaa3은 데카펩타이드 소단위의 N 말단을 변형시키기 위한 단일의 적합한 기를 나타낸다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, 화학식 (I)의 Xaa3은 Ac이다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(2-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D) 또는 화학식 (S)의 펩타이드 이량체의 N 말단 아미노산 잔기는 아실화된다. 특정한 실시형태에서, N 말단은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
유사하게, 펩타이드의 C 말단, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (A) 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D) 또는 화학식 (S)로 표시되는 데카펩타이드는 적합한 기에 의해 변형될 수 있다. C 말단은, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은, 예를 들어 N 말단을 통해 이량체화된 펩타이드 이량체 소단위 또는 펩타이드 단량체 화합물의 맥락에서 추가로 아실화될 수 있다. 특정한 실시형태에서, C 말단은, 예를 들어 유리 아민을 가지는 아미노산에서, 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, C 말단은 C 말단 이량체 분자를 형성하기 위해 2개의 단량체 소단위를 함께 연결하는 것을 수월하게 하는 적합한 링커 모이어티를 추가로 포함한다.
화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 펩타이드의 소정의 실시형태에서, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13은 부재한다. 다른 실시형태에서, Xaa12 및 Xaa13은 부재한다. 다른 실시형태에서, Xaa13은 부재한다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 펩타이드 이량체의 펩타이드 단량체 소단위의 C 말단 아미노산이다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 변형된다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 라이신, D-라이신, N-메틸-라이신, Dap 또는 Dab이다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 Dap 또는 Dab이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4는 NH2 모이어티를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D) 또는 화학식 (S)의 N 말단 잔기는 링커 모이어티, 예를 들어 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 숙신산, 글루타르산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 적합한 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 추가로 포함한다. 추가로, 몇몇 실시형태에서, Xaa1-Xaa4의 임의의 하나 이상은 아실화된다. 특정한 실시형태에서, Xaa1-Xaa4의 임의의 하나 이상은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
Xaa4 및 Xaa10이 둘 다 Cys 또는 Pen인 소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체 또는 펩타이드 이량체의 각각의 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합을 통해 고리화된다. 바람직하게는, 일 실시형태에서 Xaa4는 Cys이다. 또 다른 실시형태에서, 바람직하게는 Xaa4는 Pen이다. 특정한 실시형태에서, Xaa4는 Pen이고; 다른 실시형태에서, Xaa10은 Pen이고; 다른 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Pen이다.
본 명세서에 기재된 임의의 화학식, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 소정의 실시형태에서, Xaa5는 N-Me-Arg이다. 소정의 실시형태에서, Xaa6은 Ser이다. 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다. 소정의 실시형태에서, Xaa8은 Thr이다. 소정의 실시형태에서, Xaa9는 Leu이다. 일 실시형태에서 Xaa10은 Pen이다. 또 다른 실시형태에서, Xaa10은 Cys이다. 특정한 실시형태에서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe-(4-OMe), Phe(4-tBu), Phe(4-CN), N-Me-Phe, N-Me-Tyr, b-호모Trp 및 펜타플루오로-Phe로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa11은 방향족 아미노산이다. 특정한 실시형태에서, Xaa12는 Aic이다. 특정한 실시형태에서, Xaa13은 Pro이고, Xaa11 및/또는 Xaa12는 존재한다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 천연 아미노산, Dap, Dab, Orn, D-Orn, N-Me-Orn, N-Me-Dap, N-Me-Dab, N-Me Lys, D-Dap, D-Dab, D-Lys, N-Me-D-Lys, 적합한 동배체 대체, 상응하는 D-아미노산 및 상응하는 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노 아실 잔기이다. 적어도 일 실시형태에서, Xaa14는 C 말단이다. Xaa14가 소단위의 C 말단일 때, Xaa14는 본 발명에 따라 링커 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 추가로, 몇몇 실시형태에서, Xaa14는 N(알파)메틸화된다. 몇몇 실시형태의 경우, 임의의 Xaa1-Xaa5, Xaa7-Xaa9 및 Xaa11-Xaa12는 N(알파)메틸화된다. Xaa5는 추가로 Arg-Me-sym 또는 Arg-Me-asym일 수 있고, Xaa11은 O-Me-Tyr, N-Me-Lys(Ac) 또는 4-Me-Phe일 수 있다. 몇몇 경우에, 임의의 Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14는 아실화된다. 예를 들어, 몇몇 경우에 Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14 위치에서의 하나 이상의 잔기는 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 펩타이드의 소정의 대안적인 실시형태에서, Xaa14는 기재된 아미노산 대신에 Cys, 호모Cys 또는 Pen이다.
화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 것(또는 화학식 (II), (II-A), (III), (A), (B), (C), (D), (S), (X) 또는 (H)의 상응하는 잔기)(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 N-Me-Ar, Phe(4-구아니디노), Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 CPA 또는 Aoc이거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다. 본 명세서에 기재된 임의의 화합물 및 종류의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함) 또는 화학식 (II)(II-A를 포함) 또는 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B) 또는 화학식 (C), 화학식 (D) 또는 화학식 (S)의 N 말단 잔기 또는 C 말단 잔기는 공액된 모이어티, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 것(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 링커 모이어티를 추가로 포함한다. 특정한 실시형태에서, 링커는 DIG, 이작용성 PEG13, 이작용성 PEG25, 이작용성 PEG1K, 이작용성 PEG2K, 이작용성 PEG3.4K, 이작용성 PEG4K, 이작용성 PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 글루타르산, 아젤라산, 피멜린산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택된다. 링커가 IDA, ADA 또는 유리 아민을 가지는 임의의 링커일 때, 이것은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산, 10개 내지 20개의 탄소 단위를 가지는 직쇄 지방족 산, 콜산 및 다른 담즙산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(PEG4-PEG13), Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다.
본 발명의 몇몇 실시형태는 펩타이드 동종이량체 또는 이종이량체 분자를 추가로 포함하고, 이량체 분자의 각각의 소단위는 수반된 도면 및 표에 기재된 적어도 하나의 서열로 표시되는 아미노산 서열을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진다.
본 발명은 (수반된 도면을 포함하는) 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 이량체의 단량체 소단위를 추가로 포함한다.
또한, 본 발명은, 예를 들어 임의의 N 말단 변형, 예컨대 Ac 또는 임의의 C 말단 변형, 예컨대 NH2의 존재를 필요로 하지 않으면서, 본 명세서에, 예를 들어 임의의 화학식에 기재되거나 임의의 수반된 표 또는 도면에 도시된 임의의 아미노산 서열 중 1개 이상(예를 들어, 2개)을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진, 펩타이드 이량체 화합물, 펩타이드 단량체 화합물 및 단량체 소단위를 포함하는, 화합물을 포함한다.
본 발명은 대안적인 N 말단 또는 C 말단 기를 가지는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물을 추가로 포함한다. 예를 들어, N 말단 Ac 기를 나타낸 이 화합물은 이의 N 말단이 아미노산의 비변경된 N 말단일 때, 또는 상이한 기가 존재할 때 또한 포함되고, C 말단 NH2 기를 나타낸 이 화합물은 이의 C 말단이 아미노산의 비변경된 C 말단일 때, 또는 상이한 기가 존재할 때 또한 포함된다.
본 발명의 추가적인 실시형태는, 본 명세서에서 임의의 화학식, 표 또는 도면에 도시되고, 하나 이상의 추가적인 아미노산 잔기를 포함할 수 있는, 임의의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 이량체 화합물, 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물, 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드의 단량체 소단위는 735개의 아미노산 잔기, 730개의 아미노산 잔기, 725개의 아미노산 잔기, 720개의 아미노산 잔기, 719개의 아미노산 잔기, 718개의 아미노산 잔기, 717개의 아미노산 잔기, 716개의 아미노산 잔기, 7개 내지 15개의 아미노산 잔기, 7개 내지 14개의 아미노산 잔기, 7개 내지 13개의 아미노산 잔기, 또는 7개 내지 12개의 아미노산 잔기를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 본 발명은 표 3의 서열 번호 1-193 또는 표 4의 서열 번호 194-218에 기재된 아미노산 잔기를 포함하는 펩타이드를 포함하고, 펩타이드는 여기에 기재된 임의의 N 말단 또는 C 말단 변형, 분자간 결합, 링커 또는 다른 변형을 반드시 포함하지는 않는다(그러나, 포함할 수 있다). 특정한 실시형태에서, 펩타이드는 2개의 잔기, 예를 들어 2개의 Pen 잔기 사이의 분자간 결합, 예를 들어 다이설파이드 결합을 포함한다. 본 발명은 본 명세서에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 단량체 화합물, 펩타이드 이량체 화합물 및 펩타이드를 포함하는 다른 화합물을 추가로 포함한다.
본 발명은, 본 명세서에 기재된 바와 같은 서열을 가지는 펩타이드를 합성하는 것, 및 펩타이드의 2개의 잔기 사이에 분자간 결합을 도입하는 것(또는 분자간 결합이 형성하게 허용하는 것)을 포함하는, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법을 추가로 포함한다. 특정한 실시형태에서, 상기 방법은 펩타이드의 C 말단 및 N 말단의 1개 또는 둘 다를 변형시키는 것을 추가로 포함한다. 추가의 실시형태에서, 상기 방법은 링커를 펩타이드에 접합하는 것을 포함한다. 관련 실시형태에서, 본 발명은, (ⅰ) 본 명세서에 기재된 바와 같은 서열을 가지는 펩타이드를 합성하는 것, 및 펩타이드의 2개의 잔기 사이에 분자간 결합을 도입하는 것(또는 분자간 결합이 형성하게 허용하는 것), 및 링커를 펩타이드에 접합하는 것; (ⅱ) 본 명세서에 기재된 바와 같은 서열(예를 들어, 단계 (ⅰ)에 대한 것과 동일한 서열)을 가지는 펩타이드를 합성하는 것, 및 펩타이드의 2개의 잔기 사이에 분자간 결합을 도입하는 것(또는 분자간 결합이 형성하게 허용하는 것); 및 (ⅲ) 단계 (ⅰ)의 펩타이드에 부착된 링커를 통해 단계 (ⅰ)의 펩타이드를 단계 (ⅱ)의 펩타이드에 접합하는 것을 포함하는, 펩타이드 이량체 화합물을 제조하는 방법을 포함한다.
특정한 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 임의의 펩타이드 서열으르 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는, 단일 가닥, 이중 가닥 폴리뉴클레오타이드 형태, 및 변형된 형태를 포함하는, DNA, RNA, cDNA 또는 mRNA이다. 소정의 실시형태에서, 장려는 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터, 예를 들어 발현 벡터 또는 유전자 치료 벡터를 포함한다. 벡터는 본 명세서에 기재된 펩타이드 서열을 코딩하는 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터 및/또는 다른 조절 서열을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명은 본 명세서에 기재된 외인성 또는 도입된 펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포를 추가로 포함한다.
특정한 실시형태에서, 본 발명은 2개의 링커 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함하고, 각각은 화학식 (S)의 하기 구조를 가진다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14-Xaa15-Xaa16-Xaa17
화학식 (S)
식 중, Xaa1-Xaa13은 본 명세서에 기재된 화학식, 예를 들어 임의의 화학식 (I), (IV) 중 하나에서 이 위치에서 정의된 잔기에 상응하고, Xaa13, Xaa14, Xaa15, Xaa16 및 Xaa17은 부재하거나 임의의 아미노산이고, 단 C 말단 아미노산은 Xaa1-Xaa13이 정의된 동일한 화학식에서 Xaa14에 대해 정의된 잔기에 상응한다. 특정한 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, 본 발명은 2개의 링커 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함하고, 각각은 화학식 (S')의 하기 구조를 가진다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13
화학식 (S')
식 중, Xaa1-Xaa9는 본 명세서에 기재된 화학식 중 하나, 예를 들어 임의의 화학식 (II), (III), A, B, C 또는 D에서 이 위치에서 정의된 잔기에 상응하고, Xaa10, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13은 부재하거나 임의의 아미노산이고, 단 C 말단 아미노산은 Xaa1-Xaa10이 정의된 동일한 화학식에서 Xaa10에 대해 정의된 잔기에 상응한다. 특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa7은 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 통해 연결된다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드는 하나 이상의 변형 그룹 및/또는 링커를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드의 N 또는 C 말단의 하나 또는 둘 다는 변형된다. 특정한 실시형태에서, N 말단은 아실화되고; 특정한 실시형태에서, C 말단은 유리 아민, 예를 들어 NH2를 포함한다. 특정한 실시형태에서, C 말단은 -OH 기를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드는 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함)의 Xaa4와 Xaa10(또는 화학식 (II), (III), (A), (B), (C) 또는 (D) 내의 Xaa1 및 Xaa7) 사이의 분자간 연결을 포함한다. 본 발명은 본 명세서에서 기재되거나 임의의 수반된 도면에 도시된 임의의 구조를 가지는 화합물을 또한 포함한다.
추가로, 본 발명의 몇몇 실시형태는 펩타이드 동종이량체 또는 동종이량체 분자를 포함하고, 이량체 분자의 각각의 소단위는 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합을 통해 고리화되고, 이량체 분자의 각각의 단량체 소단위는 수반된 도면 및 표에 기재된 서열 중 적어도 하나로 표시된 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이들로 이루어진다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 하기 화학식 (III)의 1개 또는 2개의 연결된 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (III))
여기서, 각각의 소단위는 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합을 포함하고, 추가로 화학식 (III)는 이량체 분자의 단량체 소단위를 나타내고, 단량체 소단위는 본 발명에 따라 이량체 분자를 형성하도록 연결되고, 식 중,
Xaa1은 Pen이고;
Xaa2는 N-Me-Arg이고;
Xaa3은 Ser이고;
Xaa4는 Asp이고;
Xaa5는 Thr이고;
Xaa6은 Leu이고;
Xaa7은 Pen이고;
Xaa8은 Trp이고;
Xaa9는 부재하거나, Glu, D-Glu, β-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 D-Lys 및 N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시형태에서, Xaa9는 존재한다. 화학식 (III)의 특정한 실시형태에서, Xaa1은 아실화된다. 화학식 (III)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 NH2 또는 OH를 포함한다. 화학식 (III)의 이량체의 특정한 실시형태에서, 2개의 단량체 소단위는 링커 모이어티, 예를 들어 DIG를 통해 이들의 각각의 C 말단을 통해 연결된다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물은 동종이량체이다.
일 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물은 하기 화학식 (B)의 펩타이드 분자 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (B))
식 중,
Xaa1은 Cys 또는 Pen이고;
Xaa2는 N-메틸-Arg이고;
Xaa3은 Ser이고;
Xaa4는 Asp이고;
Xaa5는 Thr이고;
Xaa6은 Leu 또는 Nle이고;
Xaa7은 Cys, Pen 또는 D-Pen이고;
Xaa8은 Trp, Tic, Bip, 1-Nal, 2-Nal, Phe(4-tBu) 또는 Phe(4-COOH)이고;
Xaa9는 Glu, β-호모Glu, D-Glu 또는 Glu(OMe)이고;
Xaa10은 임의의 아미노산이고;
펩타이드 분자는 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합을 포함한다.
화학식 (B)의 특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa7의 하나 또는 둘 다는 Pen이다.
화학식 (B)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 D-Lys 또는 N-Me-Lys이다.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체는 화학식 (B)의 2개의 단량체 소단위를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 이량체의 하나 또는 둘 다의 소단위는 Xaa1과 Xaa7 사이의 분자간 결합, 예를 들어 다이설파이드 결합을 포함한다.
본 발명의 예시적인 펩타이드 이량체 화합물은 실시예 및 수반된 도면에 기재되어 있다. 펩타이드 이량체 화합물은 괄호 안의 펩타이드 이량체 화합물의 단량체 소단위의 아미노산 서열, 이어서 소문자 2개를 제공함으로써 일반적으로 도시되고, 이것은 펩타이드 이량체 화합물이 도시된 아미노산 서열을 가지는 2개의 소단위를 포함한다는 것을 나타낸다. 링커는 또한 2개의 단량체 소단위가 이들의 C 말단을 통해 연결된다는 것을 나타내기 위해 서열의 C 말단에서 보일 수 있거나, 이것이 2개의 단량체 소단위가 이들의 N 말단을 통해 연결된다는 것을 나타내기 위해 서열의 N 말단에서 보인다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 화학식을 가지는 펩타이드 단량체 소단위를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체 소단위는 링커에 결합한다.
본 발명의 펩타이드 이량체 및 펩타이드 단량체 화합물은 유리 산일 수 있거나, 이것은 약제학적으로 허용 가능한 염일 수 있다. 특정한 실시형태에서, 이것은 아세테이트 염이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 펩타이드 이량체 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 2개의 단량체 소단위는 하기 화학식 (X)의 구조를 가지는 이들의 C 말단을 통해 연결된다:
Figure pct00011
식 중, R1 및 R2는 H 또는 Me이고;
n은 2 내지 10의 임의의 정수이고;
X는 CH2, NHCO, CONH, S-S, C=O, CHOH, S, S=O, NH 또는 O이고;
Y는 링커 모이어티이다.
특정한 실시형태에서, Y인 링커 모이어티는 임의의 하기 기재된 것(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 본 명세서에 기재된 임의의 것이다. 특정한 실시형태에서, 링커 모이어티는 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-Ac, IDA-아이소발레르산, ADA 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, Glu, Asp, D-Glu, D-Asp, 1,4-페닐렌다이아세트산, 바이페닐 다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 숙신산, 글루타르산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족 2산, 적합한 방향족 2산, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어, 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다.
Figure pct00012
소정의 실시형태에서, 화학식 (X)의 펩타이드 이량체 화합물은 하기 도시된 구조(화합물 X)를 가진다:
Figure pct00013
.
특정한 실시형태에서, 화학식 (X)의 화합물 및 화합물 X은 염 형태이다. 일 실시형태에서, 이것은 아세테이트 염이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 펩타이드 이량체 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하고, 2개의 단량체 소단위는 하기 화학식 (H)의 구조를 가지는 이들의 N 말단을 통해 연결된다:
Figure pct00014
식 중, R1 및 R2는 H 또는 Me이고;
n은 2 내지 10의 임의의 정수이고;
X는 CH2, NHCO, CONH, S-S, C=O, CHOH, S, S=O, NH 또는 O이고;
Y는 링커 모이어티이고;
Z는 NHAc, 부재하거나, H이다.
특정한 실시형태에서, 링커 모이어티는 하기 기재된 것(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 본 명세서에 임의의 기재된 것이다. 특정한 실시형태에서, 링커 모이어티는 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-Ac, IDA-아이소발레르산, ADA 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, Glu, Asp, D-Glu, D-Asp, 1,4-페닐렌다이아세트산, 바이페닐 다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 숙신산, 글루타르산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족 2산, 적합한 방향족 2산, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, 링커는 아민, 에스터, 티오에터, 다이-티오 또는 에터 결합을 통해 2개의 단량체 소단위를 연결할 수 있는 이작용성 링커, 예를 들어 2산, 다이-아민, 다이할라이드, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터, 비스-말레이미드이다.
Figure pct00015
소정의 실시형태에서, 화학식 (H)의 펩타이드 이량체 화합물은 하기 도시된 구조(화합물 H)를 가진다:
Figure pct00016
.
본 발명의 실시형태는 화합물 H의 약제학적으로 허용 가능한 염 형태, 예를 들어 화합물 H의 아세테이트 염을 포함한다.
소정의 특정한 실시형태에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 1개 또는 2개의 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함하고, 펩타이드 이량체의 단량체 소단위는 이들의 C 말단을 통해 연결되고, 단량체 소단위의 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 존재한다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys); 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys).
특정한 실시형태에서, 단량체 소단위의 펩타이드는 N 말단 Ac 및/또는 C 말단 NH2 또는 OH를 추가로 포함한다. 특정한 실시형태에서, 단량체 소단위의 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 존재한다.
소정의 특정한 실시형태에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 1개 또는 2개의 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물을 포함하고, 펩타이드 이량체의 단량체 소단위는 이들의 N 말단 또는 이들의 C 말단을 통해 연결되고, 다이설파이드 결합은 단량체 이량체 소단위 내에 Pen 잔기를 연결한다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu); 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu.
단량체 소단위가 이들의 N 말단을 통해 연결된 특정한 실시형태에서, 이것은 각각의 단량체 소단위의 N 말단 Pen 잔기에 결합하는 링커에 의해 연결된다. 단량체 소단위가 이들의 N 말단을 통해 연결된 다른 실시형태에서, 단량체 소단위는 적어도 1개의 추가적인 N 말단 아미노산을 포함하고, 단량체 소단위의 N 말단 아미노산은 링커에 의해 다른 단량체 소단위에 연결된다. 특정한 실시형태에서, 추가적인 N 말단 아미노산은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, 단량체 소단위의 펩타이드는 N 말단 Ac 및/또는 C 말단 NH2 또는 OH를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (IV)의 펩타이드 단량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
(화학식 (IV))
여기서, 펩타이드 화합물은 Xaa4 및 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함하고, 식 중,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Xaa10과 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa7은 Asp, D-Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cba, 호모Leu, Cpa, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Xaa4와 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa11은 부재하거나, Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(2-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로-Trp, Ile, Leu, Arg, Thr, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 Pro 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
화학식 (IV)의 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이다.
화학식 (IV)의 소정의 실시형태에서, Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (IV)의 소정의 실시형태에서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe), Phe(4-tBu), Phe(4-CF3), Phe(3-CF3), Phe(CF3), 호모-Phe, D-Phe, Phe(2,3-다이-Cl), Phe(3,4-다이-Cl), N-Me-Tyr, N-Me-Phe, Phe(4-F), Phe(3-F), Phe(4-Me), Phe(3-Me), Phe(2-Me), Phe(3,4-다이-Me), Phe(2,4-다이-Phe), 베타-메틸Phe 및 바이페닐-Ala로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (IV)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (IV)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (IV)의 소정의 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다. 특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합이다.
화학식 (IV)의 특정한 실시형태에서, Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고; Xaa13은 부재하거나 Pro이다.
소정의 실시형태에서, Xaa10에 바로 C 말단인 아미노산은 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa10에 바로 C 말단인 아미노산은 방향족 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa14 또는 C 말단 아미노산은 유리 아민을 포함하지 않는다.
소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab 또는 D-Orn이다.
소정의 실시형태에서, Xaa14 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다.
소정의 실시형태에서, C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드는 Xaa4와 Xaa10 사이의 분자간 결합을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 결합은 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸, 셀레노에터 또는 다이셀레나이드 결합이다. 소정의 실시형태에서, 결합은 바로 2개의 아미노산 잔기 사이에 발생한다.
소정의 실시형태에서, Xaa4는 Cys, Pen, 호모Cys, D-Cys, D-Pen, D-호모Cys, Asp, Glu, 호모Glu, β-Asp, β-Glu, Lys, 호모Lys, Orn, Dap, Dap, 2-알릴글라이신, 2-(3'-뷰테닐)글라이신, 2-(4'-펜테닐)글라이신 또는 2-(5'-헥세닐)글라이신, 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa10은 Cys, Asp, Lys, Glu, Pen, 호모Asp, 호모Glu, D-Cys, D-Pen, 호모Lys, Orn, β-Asp, β-Glu, Dap, Dab, D-호모Cys, 2-알릴글라이신, 2-(3'-뷰테닐)글라이신, 2-(4'-펜테닐)글라이신 또는 2-(5'-헥세닐)글라이신, 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합을 포함하는, 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 각각 Cys 및 Pen으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Pen이다.
사이클릭 펩타이드가 Xaa4와 Xaa10 사이의 락탐 결합을 포함하는, 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 각각 Lys, 호모Lys, Orn, Dap, Dab, Asp, Glu, 호모Glu, D-Dap, D-Dab, D-Asp, D-Glu 또는 D-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Lys, 호모Lys, Orn, Dap 또는 Dab이고; Xaa4는 Asp, Glu 또는 호모Glu이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4는 Lys, 호모Lys, Orn, Dap 또는 Dab이고; Xaa10은 Asp, Glu 또는 호모Glu이다.
사이클릭 펩타이드가 Xaa4와 Xaa10 사이의 락탐 결합을 포함하는, 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Asp, HAsp, Glu 및 HGlu, HLys로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4는 Lys, Dap, Dab, HLys, Orn 및 HGl로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, Xaa10은 Lys, Dap, Dab, HLys, Orn 및 HGlu로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4는 Asp, HAsp, Glu, HGlu 및 HLys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, Xaa4는 Asp, HAsp, Glu, HGlu 및 Hlys로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa10은 Lys, Dap, Dab, HLys, Orn 및 HGlu로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4 및 Xaa10은 아마이드 결합을 통해 고리화된다.
사이클릭 펩타이드가 Xaa4와 Xaa10 사이의 올레핀 결합을 포함하는, 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 각각 2-알릴글라이신, 2-(3'-뷰테닐)글라이신, 2-(4'-펜테닐)글라이신 또는 2-(5'-헥세닐)글라이신으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 펩타이드는 상응하는 올레핀/"스테이플된 펩타이드"를 생성하도록 폐환 메타시스를 통해 고리화된다.
소정의 실시형태에서, Xaa4는 Cys, Pen 또는 호모Cys이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 각각 β-아지도-Ala-OH 또는 프로파길글라이신이고, 펩타이드는 트라이아졸 고리를 생성시키는 클릭 화학을 통해 고리화된다.
특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합이다.
일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (IV')의 펩타이드 단량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
(화학식 (IV')),
식 중,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Xaa10과 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Ph(4-구아니디노), Phe(4-카보밀), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser Gly, Thr 또는 Ile이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸Ala, N-펜틸Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸-Ala, Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Xaa4와 결합을 형성할 수 있는 임의의 아미노산이고;
Xaa11은 부재하거나, Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, 베타-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(2-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg, Thr; 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, 및 상응하는 D-아미노산 및 적합한 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 Pro이고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
화학식 (IV')의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
다양한 실시형태에서, 화학식 (IV)에 대해 기재된 임의의 특징 또는 제한은 화학식 (IV')에 존재할 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (V)의 펩타이드 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (V))
여기서, 펩타이드 화합물은 Xaa1과 Xaa7과 사이의 다이설파이드 결합, 락탐 결합, 올레핀 결합, 트라이아졸 결합, 셀레노에터 결합 또는 다이셀레나이드 결합을 포함하고, 화학식 (V)의 Xaa1-Xaa10은 화학식 (IV)의 Xaa4-Xaa13에 상응한다.
화학식 (V)의 소정의 실시형태에서, Xaa2는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa5는 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa6은 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa10은 Pro이다. 특정한 실시형태에서, 분자간 결합은 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합이다.
화학식 (IV-A)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀아미노), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr, Ile이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Ile, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cpa, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 부재하거나, Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(2-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, D-Asp, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산, 임의의 방향족 아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 임의의 아미노산이고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-B)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen 또는 Cys이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu 및 Nle로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen 또는 Cys이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg, Thr, 임의의 치환된 방향족 아미노산 및 상응하는 D-아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 임의의 방향족 아미노산 및 상응하는 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-C)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser, Gly, Thr, Ile이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu 및 Nle로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 임의의 방향족 아미노산 및 상응하는 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하거나 임의의 아미노산이고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-D)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, 상응하는 D-아미노산 및 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-E)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3) Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 부재하거나, 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-F)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 베타-호모Glu 및 상응하는 D-아미노산 및 이들의 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-G)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-d다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg 및 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-H)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 2,3-다이하이드로Trp, Ile, Leu, Ser, Arg 또는 Thr로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다.
소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (IV-I)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp 또는 D-Asp이고;
Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me) 및 호모Phe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 임의의 아미노산이다. 소정의 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다.
화학식 (IV-J)라 본 명세서에서 칭해지는, 화학식 (IV)의 일 실시형태에서,
Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
Xaa4는 Pen이고;
Xaa5는 N-Me-Arg이고;
Xaa6은 Ser이고;
Xaa7은 Asp이고;
Xaa8은 Thr이고;
Xaa9는 Leu이고;
Xaa10은 Pen이고;
Xaa11은 Phe(4-tBu)이고;
Xaa12는 베타-호모Glu이고;
Xaa13은 부재하고;
Xaa14는 D-Lys이다.
화학식 (IV-J)의 특정한 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
화학식 (IV-A), (IV-B), (IV-C), (IV-D), (IV-E), (IV-F), (IV-G), (IV-H), (IV-I) 또는 (IV-J)의 임의의 것의 소정의 실시형태에서, Xaa14는 Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물은 하기 화학식 (C)의 펩타이드 분자 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (C))
식 중,
Xaa1은 Cys 또는 Pen이고;
Xaa2는 N-메틸-Arg이고;
Xaa3은 Ser이고;
Xaa4는 Asp이고;
Xaa5는 Thr 또는 Val이고;
Xaa6은 Leu 또는 Nle이고;
Xaa7은 Cys 또는 Pen이고;
Xaa8은 Trp, Tic, Bip, 1-Nal, 2-Nal, Phe(4-tBu), Phe, Tyr 또는 Phe(4-COOH)이고;
Xaa9는 Glu, β-호모Glu 또는 D-Glu이고;
Xaa10은 임의의 아미노산이고;
펩타이드 분자는 Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합을 포함한다.
화학식 (C)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 D-Lys, N-Me-Lys 또는 N-Me-D-Lys이다. 특정한 실시형태에서, Xaa1 및/또는 Xaa7은 Pen이다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드의 Xaa10 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다.
소정의 실시형태에서, C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다.
본 발명의 예시적인 펩타이드 단량체 화합물은 실시예 및 수반된 도면에 기재되어 있다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드 단량체 화합물은 하기 기재된 구조(화합물 U)를 가진다. 특정한 실시형태에서, 화합물 U는 약제학적으로 허용 가능한 염 형태이다. 일 실시형태에서, 이것은 아세테이트 염이다.
Figure pct00017
본 발명의 몇몇 서열은 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V), 화학식 (A), (화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 제공된 일반 서열로부터 유래한다. 예를 들어, 화학식 (IV)의 Xaa4-Xaa13 또는 화학식 (V), (VI), (A), (B), (C) 또는 (D)의 Xaa1-Xaa10으로 표시되는 데카펩타이드의 N 말단은 화학식 (IV)의 Xaa1, Xaa2 및 Xaa3으로 표시되는 1개 내지 3개의 적합한 기에 의해 변형될 수 있다. N 말단은 추가로 아실화될 수 있다. 특정한 실시형태에서, N 말단은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (IV)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H 및 I-I를 포함)의 Xaa1, Xaa2 및 Xaa3은 부재한다. 다른 실시형태에서, Xaa1은 부재하고, Xaa2 및 Xaa3은 펩타이드의 N 말단을 변형시키기 위한 적합한 기, 예를 들어 화학식 (IV)의 잔기 Xaa4-Xaa13, 및 화학식 (V)의 잔기 Xaa1-Xaa10에 의해 표시된 데카펩타이드를 나타낸다. 추가로, 몇몇 실시형태에서, 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함)의 Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함)의 Xaa3은 단일 데카펩타이드 소단위의 N 말단을 변형시키기 위한 적합한 기를 나타낸다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함)의 Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, 화학식 (IV)의 Xaa3은 Ac이다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (IV), (V), (VI), (A), (B), (C) 또는 (D)의 펩타이드의 N 말단 아미노산 잔기는 아실화된다. 특정한 실시형태에서, N 말단은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
유사하게, 펩타이드, 예를 들어 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로 표시되는 펩타이드의 C 말단은 적합한 기에 의해 변형될 수 있다. C 말단은 추가로 아실화될 수 있다. 특정한 실시형태에서, C 말단은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화될 수 있다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함)의 펩타이드의 소정의 실시형태에서, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13은 부재한다. 다른 실시형태에서, Xaa12 및 Xaa13은 부재한다. 다른 실시형태에서, Xaa13은 부재한다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 펩타이드의 C 말단 아미노산이다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 변형된다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 라이신, D-라이신, N-메틸-라이신, Dap 또는 Dab이다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 Dap 또는 Dab이다. 소정의 실시형태에서, Xaa14는 NH2 모이어티를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, Xaa1-Xaa4 중 임의의 하나 이상은 아실화된다. 특정한 실시형태에서, Xaa1-Xaa4 중 임의의 하나 이상은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
Xaa4 및 Xaa10이 둘 다 Cys 또는 Pen인 소정의 실시형태에서, 펩타이드는 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합을 통해 고리화된다. 바람직하게는, 일 실시형태에서 Xaa4는 Cys이다. 또 다른 실시형태에서, 바람직하게는 Xaa4는 Pen이다. 특정한 실시형태에서, Xaa4는 Pen이고; 다른 실시형태에서, Xaa10은 Pen이고; 다른 실시형태에서, Xaa4 및 Xaa10은 둘 다 Pen이다.
본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 이량체 또는 단량체 화합물의 소정의 실시형태에서, Xaa5는 N-Me-Arg이다. 소정의 실시형태에서, Xaa6은 Ser이다. 소정의 실시형태에서, Xaa7은 Asp이다. 소정의 실시형태에서, Xaa8은 Thr이다. 소정의 실시형태에서, Xaa9는 Leu이다. 일 실시형태에서, Xaa10은 Pen이다. 또 다른 실시형태에서, Xaa10은 Cys이다. 특정한 실시형태에서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe-(4-OMe), Phe(4-tBu), Phe(4-F), Phe(4-CN), N-Me-Phe, N-Me-Tyr, β-호모Trp 및 펜타플루오로-Phe로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, Xaa12는 Glu, D-Glu, 베타 호모Glu이다. 특정한 실시형태에서, Xaa13은 Pro이고, Xaa11 및/또는 Xaa12는 존재한다. 특정한 실시형태에서, Xaa14는 천연 아미노산, Dap, Dab, Orn, D-Orn, N-Me-Orn, N-Me-Dap, N-Me-Dab, N-Me Lys, D-Dap, D-Dab, D-Lys, N-Me-D-Lys, 동배체 대체, 상응하는 D-아미노산 및 상응하는 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노 아실 잔기이다. 적어도 일 실시형태에서, Xaa14는 C 말단이다. Xaa14가 소단위의 C 말단일 때, Xaa14는 본 발명에 따른 링커 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 추가로, 몇몇 실시형태에서, Xaa14는 N(알파)메틸화된다. 몇몇 실시형태의 경우, 임의의 Xaa1-Xaa5, Xaa7-Xaa9 및 Xaa11-Xaa12는 N(알파)메틸화된다. Xaa5는 추가로 Arg-Me-sym 또는 Arg-Me-asym일 수 있고, Xaa11은 O-Me-Tyr, N-Me-Lys(Ac) 또는 4-Me-Phe일 수 있다. 몇몇 경우에, 임의의 Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14는 아실화된다. 예를 들어, 몇몇 경우에, Xaa1-Xaa4 및 Xaa11-Xaa14 위치에서의 하나 이상의 잔기는 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다.
화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H 및 IV-I를 포함)의 것(또는 화학식 (V), (IV-A), (A), (B), (C) 또는 (D)의 상응하는 잔기)(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 N-Me-Arg, Phe(4-구아니디노), Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 CPA 또는 Aoc이거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
본 명세서에 기재된 임의의 화합물 및 종류의 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드, 예를 들어 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, 및 IV-I를 포함) 또는 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)의 C 말단 잔기는 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 글루타르산, 아젤라산, 피멜린산, 도데칸다이온산, 적합한 지방족, 방향족, 헤테로방향족, 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜 기반 링커로 이루어진 군으로부터 선택된 링커 모이어티를 추가로 포함한다.
본 발명의 몇몇 실시형태는 펩타이드 단량체를 추가로 포함하고, 펩타이드 단량체는 수반된 도면 및 표에 기재된 적어도 하나의 서열로 표시되는 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이들로 이루어진다.
또한, 본 발명은 본 명세서에서 기재되거나 임의의 수반된 도면에 도시된 임의의 아미노산 서열을 포함하거나, 이들로 본질적으로 이루어지거나, 이들로 이루어진 화합물을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드는 하나 이상의 변형 기 및/또는 링커를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드의 N 또는 C 말단의 1개 또는 둘 다는 변형된다. 특정한 실시형태에서, N 말단은 아실화된다. 몇몇 실시형태에서, N 말단은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 특정한 실시형태에서, C 말단은 유리 아민, 예를 들어 NH2를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드는 예를 들어 화학식 (IV)의 Xaa4와 Xaa10 사이에(또는 화학식 (V), (VI), (A), (B), (C) 및 (D)에서 Xaa1과 Xaa7 사이에) 분자간 연결을 포함한다. 본 발명은 또한 본 명세서에서 기재되거나 임의의 수반된 도면에 도시된 임의의 구조를 가지는 화합물을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은, Xaa1과 Xaa7 사이의 다이설파이드 결합을 포함하는, 하기 화학식 (VI)의 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (VI))
식 중,
Xaa1은 Pen이고;
Xaa2는 N-Me-Arg이고;
Xaa3은 Ser이고;
Xaa4는 Asp이고;
Xaa5는 Thr이고;
Xaa6은 Leu이고;
Xaa7은 Pen이고;
Xaa8은 Trp이고;
Xaa9는 부재하거나, Glu, D-Glu, β-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Xaa10은 임의의 아미노산이다.
특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa7은 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
특정한 실시형태에서, Xaa10은 D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시형태에서, Xaa9는 존재한다.
화학식 (VI)의 특정한 실시형태에서, Xaa1은 아실화된다. 몇몇 실시형태에서, Xaa1은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 화학식 (VI)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 NH2 또는 OH를 포함한다.
일 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물은 하기 화학식 (D)의 펩타이드 분자 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
(화학식 (D))
식 중,
Xaa1은 Cys 또는 Pen이고;
Xaa2는 N-메틸-Arg이고;
Xaa3은 Ser이고;
Xaa4는 Asp이고;
Xaa5는 Thr이고;
Xaa6은 Leu 또는 Nle이고;
Xaa7은 Cys, Pen 또는 D-Pen이고;
Xaa8은 Trp, Tic, Bip, 1-Nal, 2-Nal, Phe(4-tBu) 또는 Phe(4-COOH)이고;
Xaa9는 Glu, β-호모Glu, D-Glu 또는 Glu(OMe)이고;
Xaa10은 임의의 아미노산이고;
펩타이드 분자는 Xaa1과 Xaa7 사이의 결합을 포함한다.
화학식 (D)의 특정한 실시형태에서, Xaa1 및 Xaa7 중 하나 또는 둘 다는 Pen이다.
화학식 (D)의 특정한 실시형태에서, Xaa7은 Cys 또는 Pen이다.
화학식 (D)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 D-Lys 또는 N-Me-Lys이다.
화학식 (D)의 소정의 실시형태에서, 펩타이드의 Xaa10 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다. 소정의 실시형태에서, C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다. 화학식 (D)의 특정한 실시형태에서, Xaa1은 아실화된다. 몇몇 실시형태에서, Xaa1은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 화학식 (D)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 NH2 또는 OH를 포함한다.
(IV-A)-(IV-J)을 포함하는, 화학식 (IV), 화학식 (V), 화학식 (VI), 화학식 (C) 및 화학식 (D) 중 임의의 하나의 펩타이드 단량체 화합물을 포함하는, 본 명세서에서 임의의 펩타이드 단량체 화합물의 대안적인 실시형태에서, C 말단 아미노산(예를 들어, Xaa14 또는 Xaa10)은 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. (IV-A)-(IV-J)를 포함하는, 화학식 (IV), 화학식 (V), 화학식 (VI), 화학식 (C) 및 화학식 (D) 중 임의의 하나의 펩타이드 단량체 화합물을 포함하는, 본 명세서에서 펩타이드 단량체 화합물의 다른 대안적인 실시형태에서, C 말단 잔기인 C 말단 아미노산(예를 들어, Xaa14 또는 Xaa10)은 Asp, Glu, 호모Glu, D-Asp, D-Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은 아미노산 서열을 포함하거나 실시예 또는 임의의 수반된 도면에 도시된 구조를 가지는 임의의 펩타이드 단량체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이 서열은, 특정한 유형의 결합, 예를 들어 다이설파이드, 락탐, 올레핀, 트라이아졸(예를 들어, 클릭 화학), 셀레노에터 또는 다이셀레나이드 결합의 형성을 허용하도록, 분자간 결합을 형성하는 위치에서의 상이한 아미노산 잔기, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 것을 포함하는, 화학식 (IV)의 Xaa4 및 Xaa10을 포함할 수 있다.
본 발명은 추가로 본 명세서에 기재된 임의의 아미노산 서열, 예를 들어 수반된 표 또는 도면에 도시된 임의의 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 펩타이드를 포함하지만, 임의의 링커가 부재한다. 또한, 이것은 천연 N 말단 및/또는 C 말단, 본 명세서에 도시된 N 말단 및/또는 C 말단 변형, 또는 다른 N 말단 또는 C 말단 변형을 가지는 펩타이드를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드의 Xaa10 또는 C 말단은 NH2 또는 OH를 포함한다. 소정의 실시형태에서, C 말단 아미노산에서의 유리 아민은 예를 들어 아세틸기에 의해 캡핑된다. 화학식 (B)의 특정한 실시형태에서, Xaa1은 아실화된다. 몇몇 실시형태에서, Xaa1은 2-me-트라이플루오로뷰틸, 트라이플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 팔미틴, 라우릴, 올레오일, 및 라우릴, 트라이플루오로메틸 뷰티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 숙신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 아실화 유기 화합물에 의해 아실화된다. 몇몇 경우에, 작은 PEG(예를 들어, PEG4-PEG13)는 아실화 전에 스페이서로서 사용된다. 몇몇 경우에, Glu, 아이소Glu 또는 Asp는 아실화에 대한 스페이서로서 사용된다. 화학식 (B)의 특정한 실시형태에서, Xaa10은 NH2 또는 OH를 포함한다. 화학식 (B)의 이량체의 특정한 실시형태에서, 2개의 단량체 소단위는 링커 모이어티, 예를 들어 DIG를 통해 이들의 각각의 C 말단을 통해 연결된다. 다양한 실시형태에서, 펩타이드는 예를 들어 C 및/또는 N 말단에 부착된 하나 이상의 링커 또는 다른 변형 기를 추가로 포함할 수 있다.
추가의 실시형태에서, 본 발명은 아미노산 서열을 포함하거나 임의의 실시예 또는 수반된 도면에 도시된 구조를 가지는 임의의 펩타이드 단량체를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이 서열은, 특정한 유형의 결합, 예를 들어 다이설파이드, 락탐, 올레핀, 트라이아졸(예를 들어, 클릭 화학), 셀레노에터 또는 다이셀레나이드 결합의 형성을 허용하도록, 분자간 결합을 형성하는 위치에서의 상이한 아미노산 잔기, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 것을 포함하는, 화학식 (IV)의 Xaa4 및 Xaa10을 포함할 수 있다.
추가의 실시형태에서, Xaa4는 Cys 또는 Pen으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에서, Xaa10은 Cys 또는 Pen으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시형태에서, Xaa5는 Phe(4-구아니디노), Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa9는 CPA 또는 Aoc이거나; Xaa10은 호모Cys이거나; Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; Xaa13은 Pro이다.
또한, 본 명세서에 기재된 임의의 화합물 또는 화학식에 대해 기재된 임의의 특정한 특징이 본 명세서에 기재된 임의의 다른 화합물 또는 화학식으로 도입될 수 있는 것으로 이해된다. 또한, 본 명세서에 기재된 임의의 조성물 또는 방법은 본 명세서에 기재된 임의의 화합물 또는 임의의 화학식의 화합물을 사용하여 실행될 수 있다.
본 명세서에 기재된 임의의 다양한 화학식의 특정한 실시형태에서, PCT/US2013/064439, PCT/US2014/032391 또는 PCT/US2014/032392에 개시된 것과 동일한 구조 또는 서열을 가지는 펩타이드는 배제된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드에 존재하는 임의의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하거나 이들로 이루어진 펩타이드를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하거나 이들로 이루어진 펩타이드 단량체 화합물을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 단량체 소단위를 포함하거나 이들로 이루어진 펩타이드 이량체 화합물을 포함한다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys); 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys).
소정의 실시형태에서, 본 발명의 임의의 펩타이드는 10개 내지 35개, 10개 내지 30개, 10개 내지 25개, 10개 내지 20개 또는 10개 내지 15개의 아미노산을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 내의 Pen 잔기는 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 임의의 하기 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하는 펩타이드 단량체 화합물을 포함하고, 소정의 실시형태에서 펩타이드 단량체 화합물은 N 말단 Ac 및/또는 C 말단 NH2 또는 OH를 추가로 포함한다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu;
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu); 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 단량체 화합물 내의 Pen 잔기는 다이설파이드 결합을 통해 연결된다.
펩타이드 구조 및 생물학적 활성
본 발명은 다양한 신규한 길항제 펩타이드를 제공한다. 이 화합물은 모의 창자액(simulated intestinal fluid; SIF)에서 α4β7 결합에 대한 증가한 친화도, α4β1에 대한 증가한 선택도 및 증가한 안정성을 더 명확히 규명하도록 시험되었다. 이 신규한 길항제 분자는 α4β7과의 높은 결합 친화도를 나타내어서, α4β7과 MAdCAM 리간드 사이의 결합을 막는다. 따라서, 이 길항제 펩타이드는 다양한 실험에서 염증 과정을 제거하고/하거나 감소시키는 데 효과적인 것으로 나타났다.
본 발명은 따라서 혈청 및 SIF에서 α4β7 인테그린에 결합하거나 이것과 회합하여 α4β7과 MAdCAM 리간드 사이의 결합을 방해하거나 차단하는 다양한 단량체 및 이량체 펩타이드 화합물을 제공한다. 본 발명의 다양한 펩타이드 화합물은 오직 천연 아미노산으로 구성될 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 화합물은 변형된 아미노산(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 비천연 아미노산을 포함할 수 있다. 변형된 아미노산은 아미노산에 천연으로 존재하지 않는 일 그룹, 그룹들 또는 화학 모이어티를 포함하도록 화학적으로 변형된 천연 아미노산을 포함한다. 본 발명의 펩타이드 화합물은 추가적으로 D-아미노산을 포함할 수 있다. 훨씬 추가로, 본 발명의 펩타이드 화합물은 아미노산 유사체를 포함할 수 있다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 분자는 α4β7과 MAdCAM 리간드 사이의 결합을 저해하거나 감소시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 음성 대조군 펩타이드와 비교하여 α4β7과 MAdCAM 리간드 사이의 결합을 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 감소시킨다. 결합을 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 ELISA 검정을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 분자는 예를 들어 α4β7에 대해 결합하는 것 또는 α4β7이 이의 수용체에 결합하는 것을 저해하는 것에 있어서 500nM 미만, 250nM 미만, 100nM 미만, 50nM 미만, 25nM 미만, 10nM 미만, 5nM 미만, 3nM 미만 또는 2nM 미만의 IC50을 가진다. 활성을 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 수반된 실시예에 기재된 임의의 것을 포함한다.
소정의 펩타이드 이량체 화합물 및 펩타이드 단량체 화합물, 예를 들어 다이설파이드 함유 이량체 및 단량체는 위장관에 안정한 것으로 나타났고, α4β7 인테그린에 대해 높은 수준의 특이성 및 친화도를 제공한다. 본 발명의 몇몇 실시형태는 모의 창자액(SIF)에 노출될 때 60분 초과의 반감기를 가지는 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물을 제공한다. 몇몇 실행은 SIF에서 대략 1분 내지 대략 60분의 반감기를 가지는 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물을 추가로 제공한다. 본 발명의 몇몇 실시형태는 SIF에 노출될 때 180분 초과의 반감기를 포함하는 펩타이드 분자를 제공한다. 몇몇 실행은 SIF에서 대략 60분 내지 대략 180분의 반감기를 포함하는 펩타이드 분자를 추가로 제공한다. 유사하게, 이 펩타이드는 환원 조건 하에 안정하고, 소정의 실시형태에서, DTT(다이티오트레이톨) 검정에서 시험될 때 120분 초과의 반감기를 가진다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 단량체 또는 이량체는 대조군 펩타이드와 비교하여 증가한 안정성, 증가한 위장관 안정성, 모의 창자액(SIF)에서의 증가한 안정성 또는 모의 위액(simulated gastric fluid; SGF)에서의 증가한 안정성을 가진다. 특정한 실시형태에서, 대조군 펩타이드는 펩타이드와 동일한 또는 매우 관련된 아미노산 서열(예를 들어, 90% 초과의 서열 동일성)을 가지지만, 예를 들어 다이설파이드 또는 락탐 결합을 통해 고리화된 구조를 형성하지 않는, 펩타이드이다. 특정한 실시형태에서, 대조군 펩타이드는 펩타이드와 동일한 또는 매우 관련된 아미노산 서열(예를 들어, 90% 초과의 서열 동일성)을 가지지만, (예를 들어, 2개의 Pen 잔기와 반대로) 2개의 Cys 잔기를 통해 다이설파이드 결합을 형성하는, 펩타이드이다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드와 대조군 펩타이드 사이의 유일한 차이는 펩타이드가 하나 이상의 아미노산 잔기를 펩타이드로 도입하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다는 것이고, 도입된 잔기(들)는 펩타이드에서 또 다른 잔기와 다이설파이드 또는 락탐 결합을 형성한다.
펩타이드의 안정성을 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 소정의 실시형태에서, 펩타이드의 안정성은 예를 들어 수반된 실시예에 기재된 바대로 SIF 검정, SGF 검정, DTT 검정 또는 Cys/CysS 검정을 이용하여 결정된다. 특정한 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 SIF 또는 SGF에 노출될 때 소정의 세트의 조건(예를 들어, 온도) 하에 1분 초과, 10분 초과, 20분 초과, 30분 초과, 60분 초과, 90분 초과, 120분 초가, 3시간 초과 또는 4시간 초과의 반감기를 가진다. 소정의 실시형태에서, 온도는 약 25℃, 약 4℃, 또는 약 37℃이고, pH는 생리학적 pH 또는 약 7.4의 pH이다.
몇몇 실시형태에서, 반감기는 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 시험관내 측정되고, 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드의 안정성은 펩타이드를 37℃에서 에비 가온된 인간 혈청(시그마(Sigma))과 항온처리함으로써 결정된다. 샘플은 다양한 시점에서, 통상적으로 24시간까지 취해지고, 혈청 단백질로부터 펩타이드 단량체 또는 이량체를 분리하고 이후 LC-MS를 이용하여 관심 있는 펩타이드의 존재에 대해 분석함으로써 샘플의 안정성을 분석한다.
몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 대조군 펩타이드와 비교하여 개선된 용해도 또는 개선된 응집 특징을 나타낸다. 용해도는 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 통해 결정될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 용해도를 결정하기 위한 당해 분야에 공지된 적합한 방법은 다양한 완충제(아세테이트(pH 4.0), 아세테이트(pH 5.0), Phos/시트레이트(pH 5.0), Phos 시트레이트(pH 6.0), Phos(pH 6.0), Phos(pH 7.0), Phos(pH 7.5), 강한 PBS(pH 7.5), 트리스 pH(7.5), 트리스(pH 8.0), 글라이신(pH 9.0), 물, 아세트산(pH 5.0) 및 다른 당해 분야에 공지됨) 중에 펩타이드를 항온처리하고, 표준 기법을 이용하여 응집 또는 용해도에 대해 시험하는 것을 포함한다. 이것은 예를 들어 가시적인 침강, 동적 광 산란, 원이색성(Circular Dichroism) 및 표면 소수화도를 측정하고 응집 또는 피브릴화를 검출하기 위한 형광성 염료를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 몇몇 실시형태에서, 개선된 용해도는 펩타이드가 대조군 펩타이드보다 소정의 액체 중에 더 가용성이라는 것을 의미하다.
몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 대조군 펩타이드보다 덜한 분해(즉, 더한 분해 안정성)를 가지고, 예를 들어 약 10% 초과 또는 미만, 약 20% 초과 또는 미만, 약 30% 초과 또는 미만, 약 40% 초과 또는 미만, 또는 약 50% 초과 또는 미만의 분해이다. 몇몇 실시형태에서, 분해 안정성은 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 통해 결정된다. 몇몇 실시형태에서, 분해 안정성을 결정하기 위한 당해 분야에 공지된 적합한 방법은 문헌[Hawe et al J Pharm Sci, VOL. 101, NO. 3, 2012, p 895-913](본 명세서에 그 전문이 포함됨)에 기재된 방법을 포함한다. 이러한 방법은 몇몇 실시형태에서 개선된 반감기를 가지는 강력한 펩타이드 단량체 또는 이량체 분자를 검출하기 위해 이용된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 α4β7 매개 염증을 저해하거나 감소시킨다. 관련 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 하나 이상의 사이토카인의 α4β7 매개 분비를 저해하거나 감소시킨다. 사이토카인 분비의 저해 및 신호전달 분자의 저해를 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 증가한 결합 선택도를 나타낸다. 소정의 경우에, 본 발명의 펩타이드는 펩타이드가 α4β1에 결합하는 적어도 2배, 3배, 5배, 또는 10배 더 큰 친화도로 α4β7에 결합한다.
소정의 실시형태에서, 펩타이드 길항제는 경구 투여 후 제한된 전신 노출 및/또는 GI 제한된 국소화를 나타낸다. 특정한 실시형태에서, 경구로 투여된 펩타이드 저해제의 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 80% 초과, 또는 90% 초과는 위장 장기 및 조직으로 국소화된다. 특정한 실시형태에서, 경구로 투여된 펩타이드 저해제의 혈액 혈장 수치는 소장, 결장 또는 근위 결장에서 발견되는 펩타이드 저해제의 수치의 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 2% 미만, 1% 미만 또는 0.5% 미만이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 길항제는 결장염, 예를 들어 궤양성 결장염의 치료에서 효능이 있고, ELISA 또는 T 세포 검정에 의해 결정된 바대로, 2nM 미만 또는 1nM 미만의 α4β7에 대한 IC50을 가지고, 모의 창자액(SIF), 랫트 창자액(rat intestingal fluid; RIW), 인간 창자액(human intestingal fluid; HIF), 결장 세척액(colonic wash; CW), 창자 점막 파쇄액(intestingal mucosal homogenate; IMH), 결장 점막 파쇄액(colonic mucosal homogenate; CMH), 모의 위액(SGF), 혈장, Hu S9 또는 RL S9에서 4시간 초과, 5시간 초과, 6시간 초과, 12시간 초과 또는 24시간 초과의 반감기를 가진다. 특정한 실시형태에서, 이들은 씨. 디피실(C. difficile), 비. 프라질리스(B. fragilis), 이. 콜라이, 비. 비피둠(B. bifidum) 및 엘. 액시도필루스(L. acidophilus)의 혐기성 배양물에서 12시간, 24시간 또는 48시간 항온처리 후 안정하다. 특정한 실시형태에서, 이들은 혐기성 조건 하에 성장한 창자 박테리아에 대해 무의미한 항균성 활성을 나타낸다. 특정한 실시형태에서, 경구 투여 시, 펩타이드 길항제는 혈장/뇨에서 최소 노출을 나타내고, 정상 및 결장염 이환 동물의 GI에서 대략 동일한 노출을 나타낸다.
장 특이적 호밍 림프구에 존재하는 α4β7 인테그린은 IBD에 대한 특이적이고 임상에서 검증된 표적이다. 엔티비오(Entyvio)(베돌리주맙)인 최근에 승인된 α4β7 길항성 항체 약물은 이의 조합된 효능 및 안전성 때문에 미래의 제1선 표적 치료로서 기재되었다. 본 발명은 T 세포 호밍을 차단하고, IBD의 쥣과 모델에서 점막 손상을 방지하고, 혈액 세포 및 위장관 조직에서 수용체 점유에 의해 평가된 바대로 인테그린 표적을 참여시키는 데 효과적인, 제한된 전신 노출로, α4β7 인테그린의 선택적 경구 펩타이드 길항제를 포함하는, 이 인테그린 표적에 대한 신규하고 강력하고 표적 특이적이고 경구로 안정한 펩타이드를 제공한다. 수반된 실시예에 기재된 펩타이드 X를 포함하는, 본 발명의 소정의 펩타이드 길항제는 다양한 시험관내 세포 결합 검정에서 베돌리주맙에 필적하는 효력 및 선택도를 가진다. 그러나, 펩타이드 X를 포함하는, 본 발명의 펩타이드 길항제는, 표적화된 치료에 의해 치료되는 IBD 환자의 집단을 증식시키기 위한 가능성으로, 소장 및 결장에서 이의 현저한 약물 노출에 의해 그리고 경구 약물로서 구별된다.
본 발명의 화합물은 이들의 C 또는 N 말단에서 2개의 소단위 단량체를 연결함으로써 형성된 펩타이드 동종이량체 또는 이종이량체이다. 단량체 소단위의 이량체화는 이들의 비이량체화된 단량체 유사체에 비해 증가한 효력을 나타낸다. 본 발명의 몇몇 펩타이드 단량체 및 펩타이드 이량체 화합물은 N-메틸화 유사체 잔기에 의해 다양한 천연 아미노 아실 잔기를 치환하는 것의 결과로서 증가한 효력을 추가로 나타낸다. 추가로 더욱, 본 발명의 몇몇 펩타이드 단량체 및 이량체 화합물은 독립적 고리화를 겪는 단량체 소단위를 포함하고, 이의 의해 고리화된 구조는 이들의 비고리화된 이량체 유사체에 비해 증가한 안정성을 나타낸다.
이제 표 3 및 표 4를 참조하면, 본 발명에 따라 다양한 비제한적인 펩타이드 분자에 대해 증가한 안정성을 예시하는 다양한 데이터를 포함하는 차트가 제공된다. 모의 창자액(SIF) 안정성 검정은 대부분의 본 펩타이드 분자에 대해 수행된다. 이 결과의 선택적 샘플링은 표 3 및 표 4에 제공된다.
본 명세서에 기재된 프로토콜에 따라, 본 출원인은 인테그린 길항제 펩타이드 단량체 분자를 성공적으로 합성하고 정제하고, 수반된 도면 및 표에 도시된 대부분의 인테그린 길항제 펩타이드 이량체 분자를 성공적으로 합성하고 정제하고 이량체화하였다. 데이터가 도시되지 않은 이 펩타이드의 경우, 이들이 α4β7 ELISA 또는 세포 부착 검정에서 100nM 미만의 IC50을 가질 것으로 예상된다.
추가로, N-Me-Arg에 의한 아르기닌에서의 치환은 SIF에서 반감기를 실질적으로 증가시킨다. 몇몇 실시형태에서, 페니실라민(Pen)에 의한 Cys의 치환은 모의 창자액(SIF)에서 안정성을 유의미하게 증가시킨다. Pen에 의한 Cys의 치환은 또한 환원 조건(DTT) 하에 안정성을 증가시켜 개선된 위 안정성을 나타낸다.
이제 표 3 및 표 4를 참조하면, 본 발명에 따라 다양한 비제한적인 샘플 펩타이드 이량체 분자에 대해 증가한 효력, 선택도 및/또는 안정성을 예시하는 다양한 데이터를 포함하는 차트가 제공된다. 펩타이드는 또한 α4β7과 비교할 때 α4β1에 대해 낮은 효능을 나타내어서, α4β7에 대한 선택도를 나타낸다.
단량체 펩타이드 소단위의 이량체화는 일반적으로 α4β7에 대해 증가한 친화도 및/또는 α4β1에 대해 감소한 친화도를 나타내어서, 단량체 다이설파이드 소단위 펩타이드와 비교하여 α4β1에 대해 증가한 선택도를 발생시킨다.
C 및 N 말단 이량체화 시, α4β7에 대한 효력의 유의미한 개선이 또한 흔히 관찰된다. 또한, 이량체화는 또한 α4β1에 대한 효력의 감소 또는 무의미한 효력의 변화를 발생시켜서, ELISA 및 세포 부착 검정에서 α4β7에 대한 선택도를 증가시킨다.
Arg가 N-Me-Arg에 의해 대체될 때, ELISA 및 세포 부착 검정 둘 다에서 α4β7에 대한 유의미한 효력의 개선이 나타났다. N(알파)메틸화는 증가한 분자 안정성을 추가로 나타냈다. 당해 분야의 당업자는 아르기닌의 메틸화 동배체가 유사한 효력 및/또는 안정성의 증가를 추가로 나타낼 수 있다는 것을 이해할 것이다.
본 발명은 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 안정화시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 Cys 및 Pen으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기에 의해 Xaa4 및 Xaa10을 치환하는 단계를 포함하고, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합을 통해 고리화된 구조를 형성한다.
일 실시형태는 다이설파이드 결합 또는 락탐 결합 중 적어도 하나를 통해 고리화된 구조를 형성할 수 있는 필적하는 아미노산 잔기에 의해 Xaa4 및 Xaa10(또는 화학식 (II), (III), (IV), (V), (VI), (A), (B), (C) 또는 (D)에서의 Xaa1 및 Xaa7)을 치환함으로써 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 안정화시키는 방법을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 필적하는 아미노산은 Cys 및 Pen으로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4 및 Xaa10은 다이설파이드 결합을 통해 고리화된 구조를 형성한다. 소정의 실시형태에서, Xaa4는 Lys, HLys, Orn, Dap 및 Dab로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa10은 Asp, Glu, HGlu, β-Asp 및 β-Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고, Xaa4 및 Xaa10은 락탐 결합을 통해 고리화된다.
소정의 실시형태는 하나 이상의 비메틸화 아르기닌 잔기에 대해 N-Me-Arg를 치환하는 단계를 포함하는 본 발명의 펩타이드 이량체 또는 펩타이드 단량체 화합물의 SIF 안정성을 증가시키는 방법을 포함한다. 다른 실시형태는 하나 이상의 시스테인 잔기에 대해 Pen을 치환하는 단계를 포함하는 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물의 SIF 안정성을 증가시키는 방법을 포함한다.
추가의 실시형태는 하나 이상의 시스테인 잔기에 대해 Pen을 치환하는 단계를 포함하는 본 발명에 따른 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물의 산화환원 안정성을 증가시키는 방법을 포함한다.
치료 방법 및 약제학적 조성물
상기 기재된 바대로, 인테그린은 세포 부착 분자로서 작용하는 이종이량체이다. α4β1 및 α4β7인 α4 인테그린은 위장관에 걸쳐 림프구 이동에서 필수적인 역할을 한다. 이들은 B 및 T 림프구, 단핵구 및 수지상 세포를 포함하는 대부분의 백혈구에서 발현되고, 여기서 이들은 이들의 각각의 1차 리간드, 즉 혈관 세포 부착 분자(VCAM) 및 점막 부착분자 세포 부착 분자(MAdCAM)에 대한 결합을 통해 세포 부착을 매개한다. VCAM 및 MAdCAM은 α4β1 및 α4β7 둘 다에 결합하지만, MAdCAM이 α4β7에 매우 특이적이라는 점에서 결합 특이성이 다르다.
VCAM 및 MAdCAM의 발현 프로필의 차이는 염증성 질환에서의 이의 역할의 가장 확실한 증거를 제공한다. 둘 다는 장에서 구성적으로 발현되지만; VCAM 발현은 말초 장기로 연장되고, 반면 MAdCAM 발현은 위장관의 장기로 구속된다. 또한, 장에서의 상승한 MAdCAM 발현은 크론병, 궤양성 결장염 및 C형 간염을 포함하는 몇몇 장 연관 염증성 질환과 이제 상관된다.
수반된 실시예에 기재된 것(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는 본 발명의 화합물은 인테그린-길항제 활성을 보유한다. 일 실시형태에서, 병태 또는 의학 적응증은 염증성 장 질환(IBD)(성인 IBD, 소아 IBD 및 사춘기 IBD 포함), 궤양성 결장염, 크론병, 셀리악병(예를 들어, 비열대성 스프루), 혈청반응음성 관절증을 가지는 장질환, 미시적 결장염, 교원성 결장염, 호산구 위장관염, 방사선요법, 화학요법, 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염, 위장관암, 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식, 원발성 경화성 담관염, GI 관에서의 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염, 호산구성 천식, 호산구성 식도염, 위염, 결장염, 미시적 결장염, 이식편 대 숙주 질환(GVDH)(창자 GVDH 포함), 방사선치료 또는 화학치료와 연관된 결장염, 백혈구 부착분자 결핍증-1에서처럼 선천성 면역의 장애와 연관된 결장염, 만성 육아종증, 글라이코겐 저장 질환 유형 1b, 헤르만스키-푸들라크증후군, 세디아크-히가시 증후군, 및 비스코트-올드리치 증후군, 또는 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염 및 다양한 형태의 위장관암, 골다공증, 관절염, 다발성 경화증, 만성 통증, 체중 증가 및 우울증 중 적어도 하나를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 병태는 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식 또는 이식편 대 숙주 질환이다. 또한, 이 화합물은 현재 이용 가능한 치료, 의학 절차 및 치료제와 조합되어 사용될 때 이 질환의 예방 또는 역전에서 유용할 수 있다.
본 발명의 화합물은 질환의 치료를 위한 다른 조성물 및 절차와 조합되어 사용될 수 있다. 추가적으로, 본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 담체 및 희석제, 및 임의로 지속 방출 매트릭스, 예컨대 생분해성 중합체와 조합되어 치료학적 조성물을 형성할 수 있다.
몇몇 실시형태에서, 본 발명은 인테그린 결합을 특징으로 하는 병태 또는 적응증으로 고통받는 개체를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)에 따른 인테그린 길항제 이량체 분자 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 따른 인테그린 길항제 단량체 분자, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물을 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, MAdCAM을 발현하는 세포를 포함하는 조직에 대한 α4β7을 발현하는 세포의 비적절한 통행을 특징으로 하는 병태 또는 적응증으로 고통받는 개체를 치료하는 방법이 제공되고, MAdCAM을 발현하는 세포를 포함하는 조직에 대한 α4β7을 발현하는 세포의 통행을 (부분적으로 또는 완전히) 저해하기에 충분한 양으로 적어도 하나의 화학식 (I), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)에 따른 α4β7 길항제 이량체 분자, 또는 적어도 하나의 화학식 (IV) 화학식 (V), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 따른 α4β7 길항제 단량체 분자, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물을 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
관련 실시형태에서, 본 발명은 혈액에서 MAdCAM-1 및/또는 1차 백혈구에 대한 CD4+ 기억 T 세포의 부착을 저해하는 방법을 제공하고, 유효량의 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다. 본 발명은 GI 관에서 MAdCAM-1을 발현하는 조직에 대한 CD4+ 기억 T 세포의 부착을 선택적으로 저해하거나, 소장 및 결장(예를 들어, 원위 결장)으로의 α4β7+ 세포의 침윤을 저해하는 방법을 추가로 제공하고, 유효량의 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 α4β7 인테그린에 대한 MAdCAM-1의 결합을 저해하는 방법을 제공하고, MAdCAM-1을 본 발명의 인테그린 길항제와 접촉시키는 단계를 포함한다. 본 발명의 방법의 다양한 실시형태는 시험관내, 생체외 또는 생체내 수행될 수 있다. 특정한 실시형태에서, GI 조직에서의 투여된 펩타이드 길항제의 노출은 혈액에서의 노출보다 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 또는 적어도 100배 크다.
추가의 관련 실시형태에서, 본 발명은 유효량의 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하는 단계를 포함하는 GI 관, 예를 들어 MLN, 단리된 림프구성 소낭 및/또는 파이어판에서 α4β7+ T 세포를 감소시키는 방법을 제공한다. 특정한 실시형태에서, 상기 방법은 또한 비장 및/또는 혈액에서 α4β7+ T 세포의 수반하는 증가를 발생시킨다.
추가의 관련 실시형태에서, 본 발명은 기억 T 세포를 포함하는 α4β7+ 백혈구의 수용체 점유를 증가시키고/시키거나, 혈액에서 순환하는 α4β7+ 기억 T 세포의 백분율을 증가시키는 방법을 제공하고, 유효량의 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
몇몇 실시형태에서, 본 발명은 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X), 화학식 (H)에 따른 인테그린 길항제 이량체 분자, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 따른 인테그린 길항제 단량체 분자, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이 제1 치료제로서 대상체에게 투여되는 방법을 제공한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 제2 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 제2 치료제는 약제학적 조성물이 대상체에 대한 투여 이전에 및/또는 투여와 동시에 및/또는 투여 이후에 대상체에게 투여된다. 다른 실시형태에서, 제2 치료제는 소염제를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 제2 약제학적 조성물은 비스테로이드성 소염제, 스테로이드 및 면역조절제로 이루어진 군으로부터 선택된 물질을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 제3 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, α4β7 인테그린 결합을 특징으로 하는 병태 또는 적응증으로 고통받는 개체를 치료하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 유효량의 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)의 소단위를 함유하는 α4β7 인테그린 길항제 이량체 분자, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물을 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 경우에, 화학식 (I), 화학식 (II) 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위를 가지는 α4β7 인테그린 길항제 이량체 분자, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 따른 α4β7 인테그린 길항제 단량체 분자, 또는 본 명세서에서 기재되고 α4β7에 대해 높은 특이성을 가지는 임의의 화합물은 α4β7 인테그린 결합을 특징으로 하는 병태 또는 적응증에 대한 치료학적 치료의 일부로서 개체에 투여된다.
본 발명의 훨씬 또 다른 양태는 α4β7 특이적 길항제 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하고, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합하여 화학식 (I)의 펩타이드 이량체 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면 및 표에 기재되고 α4β7 인테그린에 대해 높은 선택도를 가지는 임의의 다른 화합물을 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명의 훨씬 또 다른 양태는 α4β7 특이적 길항제 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하고, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합하여 화학식 (I)의 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면 및 표에 기재되고 α4β1 인테그린에 대항하여 α4β7에 대해 높은 선택도를 가지는 임의의 다른 화합물을 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명의 훨씬 또 다른 양태는 α4β7 특이적 길항제 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하고, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합하여 화학식 (I)의 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면 및 표에 기재되고 αEβ7 인테그린에 대항하여 α4β7에 대해 높은 선택도를 가지는 임의의 다른 화합물을 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명의 훨씬 또 다른 양태는 α4β7 특이적 길항제 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하고, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합하여 화학식 (I)의 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면 및 표에 기재되고 αEβ7 인테그린에 대항하여 α4β7에 대해 낮은 선택도를 가지는 임의의 다른 화합물을 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명의 훨씬 또 다른 양태는 인테그린-길항제 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법을 제공하고, 화학식 (I)의 화합물 또는 본 명세서 또는 수반된 도면 및 표에 기재된 임의의 다른 화합물을 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명의 몇몇 실시형태는 지속 방출 매트릭스 중에 현탁된 α4β7 인테그린 길항제 단량체 또는 이량체 분자에 의해 개체를 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 지속 방출 매트릭스는 효소 또는 산-염기 가수분해 또는 용해에 의해 분해 가능한 물질, 보통 중합체로 이루어진 매트릭스이다. 신체로 삽입되면, 매트릭스는 효소 및 체액에 의해 작용된다. 지속 방출 매트릭스는 원하는 대로 생체적합성 물질, 예컨대 리포솜, 폴리락타이드(폴리락트산), 폴리글라이콜라이드(글라이콜산의 중합체), 폴리락타이드-코-글라이콜라이드(락트산 및 글라이콜산의 공중합체) 폴리언하이드라이드, 폴리(오쏘)에스터, 폴리펩타이드, 히알우론산, 콜라겐, 콘드로이틴 설페이트, 카복실산, 지방산, 인지질, 폴리사카리이드, 핵산, 폴리아미노산, 아미노산, 예컨대 페닐알라닌, 타이로신, 아이소류신, 폴리뉴클레오타이드, 폴리비닐 프로필렌, 폴리비닐피롤리돈 및 실리콘으로부터 선택된다. 바람직한 생분해성 매트릭스는 폴리락타이드, 폴리글라이콜라이드, 또는 폴리락타이드 코-글라이콜라이드(락트산 및 글라이콜산의 공중합체) 중 하나의 매트릭스이다.
몇몇 양태에서, 본 발명은 경구 전달을 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 다양한 실시형태 및 단량체 및 이량체 조성물은 본 명세서에 기재된 임의의 방법, 기법 및/또는 전달 비히클에 따라 경구 투여를 위해 제조될 수 있다. 추가로, 당해 분야의 당업자는 본 발명의 단량체 및 이량체 조성물이 본 명세서에 개시되지 않았지만, 당해 분야에 널리 공지되고, 작은 이량체 펩타이드 분자의 경구 전달에서 사용하기에 적합한, 시스템 또는 전달 비히클로 통합되거나 변형될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
본 발명의 단량체 또는 이량체 펩타이드와 사용하기에 적합한 경구 제형 또는 단위 용량은 펩타이드 활성 약물 성분, 및 비약물 성분 또는 부형제의 혼합물, 및 성분 또는 패키징으로서 생각될 수 있는 다른 재사용 불가능 물질을 포함할 수 있다. 경구 조성물은 액체, 고체 및 반고체 제형 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위를 가지는 이량체 펩타이드 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I, IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로부터 선택되고 이에 상응하는 단량체 펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물의 유효량을 포함하는 경구 제형이 제공되고, 제형은 환제, 정제, 캡슐, 겔, 페이스트, 드링크, 시럽, 연고 및 좌제 중 적어도 하나를 포함한다. 몇몇 경우에, 대상체의 소장 및/또는 결장에서 펩타이드 이량체의 지연 방출을 달성하도록 설계되고 구성된 경구 제형이 제공된다.
일 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 화학식에 따른 경구 약제학적 조성물은 소장에서 펩타이드의 방출을 지연시키도록 설계된 장용 코팅을 포함한다. 적어도 몇몇 실시형태에서, 지연 방출 약제학적 제제 중에 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A) 또는 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위를 가지는 펩타이드 이량체 화합물, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로부터 선택되고 이에 상응하는 단량체 펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물, 및 프로테아제 저해제, 예컨대 아프로티닌을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 몇몇 경우에, 본 발명의 약제학적 조성물이 약 5.0 이상의 pH에서 위액에서 가용성인 장용 코팅을 포함하는 것이 바람직하다. 적어도 일 실시형태에서, 해리 가능한 카복실기를 가지는 중합체, 예컨대 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트 및 셀룰로스 아세테이트 트라이멜리테이트 및 셀룰로스의 유사한 유도체를 포함하는 셀룰로스의 유도체 및 다른 탄수화물 중합체를 포함하는, 장용 코팅을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A) 또는 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I, IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로부터 선택되고 이에 상응하는 단량체 펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물을 가지는 약제학적 조성물은 장용 코팅으로 제공되고, 장용 코팅은 대상체 하부 위장관계 내에 제어 방식으로 약제학적 조성물을 보호하고 방출하도록, 그리고 전신 부작용을 피하도록 설계된다. 장용 코팅 이외에, 본 발명의 단량체 또는 이량체 펩타이드는 임의의 상용성인 경구 약물 전달 시스템 또는 성분 내에 캡슐화되거나, 코팅되거나, 참여하거나, 달리 회합될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서 본 발명의 펩타이드는 중합체 하이드로겔, 나노입자, 미소구(microsphere), 마이셀(micelle) 및 다른 지질 시스템 중 적어도 하나를 포함하는 지질 담체 시스템에서 제공된다.
소장에서의 펩타이드 분해를 극복하기 위해, 본 발명의 몇몇 실행은 본 발명에 따른 펩타이드 단량체 또는 이량체가 함유된 하이드로겔 중합체 담체 시스템을 포함하여서, 하이드로겔 중합체는 소장 및/또는 결장에서 단백질분해로부터 펩타이드를 보호한다. 본 발명의 펩타이드는 용해 동역학을 증가시키고 펩타이드의 창자 흡수를 증대시키도록 설계된 담체 시스템과 적합한 사용을 위해 추가로 제제화될 수 있다. 이 방법은 펩타이드의 GI 관 침투를 증가시키기 위한 리포솜, 마이셀 및 나노입자의 용도를 포함한다.
다양한 생체반응성 시스템은 경구 전달을 위한 약제학적 물질을 제공하기 위해 본 발명의 하나 이상의 펩타이드 단량체 또는 이량체와 또한 조합될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 단량체 또는 이량체는 경구 투여를 위한 치료학적 물질을 제공하기 위해 생체반응성 시스템, 예컨대 하이드로겔 및 수소 결합 기를 가지는 점막부착 중합체(예를 들어, PEG, 폴리(메타크릴산)[PMAA], 셀룰로스, 유드라짓(Eudragit)(등록상표), 키토산 및 알기네이트)와 조합되어 사용된다. 다른 실시형태는 본 명세서에 개시된 펩타이드 단량체 또는 이량체에 대한 약물 잔류 시간을 최적화하거나 연장하는 방법을 포함하고, 펩타이드 단량체 또는 이량체의 표면은 수소 결합, 연결된 뮤신을 가지는 중합체 또는/및 소수성 상호작용을 통해 점막부착 특성을 포함하도록 변형된다. 이 변형된 단량체 또는 이량체 분자는 본 발명의 원하는 특징에 따라 대상체 내의 약물 잔류 시간을 증가시키는 것으로 나타날 수 있다. 더구나, 표적화된 점막부착 시스템은 창자세포 및 M 세포 표면에서 수용체에 특이적으로 결합하여서, 이량체 펩타이드를 함유하는 입자의 흡수를 더 증가시킬 수 있다.
다른 실시형태는 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A) 또는 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위를 가지는 이량체 펩타이드, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 I-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로부터 선택되고 이에 상응하는 단량체 펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물의 경구 전달을 위한 방법을 포함하고, 이량체 펩타이드는 세포 사이 또는 세포횡단 투과를 증가시킴으로써 창자 점막에 걸친 이량체 펩타이드의 수송을 촉진하는 투과 증대제와 조합되어 사용된다. 예를 들어, 일 실시형태에서 투과 증대제는 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A) 또는 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위를 가지는 이량체 펩타이드, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I, IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로부터 선택되고 이에 상응하는 단량체 펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물과 조합되고, 투과 증대제는 장쇄 지방산, 담즙 염, 양친매성 계면활성제 및 킬레이트화제 중 적어도 하나를 포함한다. 일 실시형태에서, 나트륨 N-[하이드록시벤조일)아미노] 카프릴레이트를 포함하는 투과 증대제는 본 발명의 이량체 펩타이드와 약한 비공유 회합을 형성하도록 사용되고, 투과 증대제는 혈액 순환에 도달하면 막 수송 및 추가의 해리를 선호한다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 이량체는 올리고아르기닌에 접합되어서, 다양한 세포 유형으로의 단량체 또는 이량체 펩타이드의 세포내 침투를 증가시킨다. 추가로, 적어도 일 실시형태에서, 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I, I-J를 포함), 화학식 (II)(II-A를 포함), 화학식 (III), 화학식 (A) 또는 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)로부터 선택되고 이에 상응하는 소단위를 가지는 단량체 또는 이량체 펩타이드, 또는 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)로부터 선택되고 이에 상응하는 단량체 펩타이드, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 화합물, 및 사이클로덱스트린(CD) 및 덴드리머로 이루어진 군으로부터 선택된 투과 증대제 사이에 비공유 결합이 제공되고, 투과 증대제는 펩타이드 응집을 감소시키고 펩타이드 분자에 대한 안정성 및 용해도를 증가시킨다.
특정한 실시형태는 본 명세서에 기재된 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서의 병태를 치료하는 방법을 포함하고, 병태는 대상체에서의 α4β7의 활성을 (부분적으로 또는 완전히) 감소시킴으로써 치료 가능하다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 소정의 실시형태에서, 병태는 위장관계의 염증성 병태이다.
다른 실시형태는 생물학적 기능 α4β7과 연관된 병태로 고생하는 인간을 치료하는 방법을 포함하고, MAdCAM을 발현하는 하나 이상의 조직에서 α4β7의 생물학적 기능을 (부분적으로 또는 완전히) 저해하기에 충분한 양으로 본 명세서에 기재된 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 병태는 염증성 장 질환이다. 소정의 실시형태에서, 병태는 염증성 장 질환(IBD)(성인 IBD, 소아 IBD 및 사춘기 IBD 포함), 궤양성 결장염, 크론병, 셀리악병(예를 들어, 비열대성 스프루), 혈청반응음성 관절증을 가지는 장질환, 미시적 결장염, 교원성 결장염, 호산구 위장관염, 방사선요법, 화학요법, 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염, 위장관암, 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식, 원발성 경화성 담관염, GI 관에서의 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염, 호산구성 천식, 호산구성 식도염, 위염, 결장염, 미시적 결장염, 이식편 대 숙주 질환(GVDH)(창자 GVDH 포함), 방사선치료 또는 화학치료와 연관된 결장염, 백혈구 부착분자 결핍증-1에서처럼 선천성 면역의 장애와 연관된 결장염, 만성 육아종증, 글라이코겐 저장 질환 유형 1b, 헤르만스키-푸들라크증후군, 세디아크-히가시 증후군, 및 비스코트-올드리치 증후군, 또는 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염 및 다양한 형태의 위장관암, 골다공증, 관절염, 다발성 경화증, 만성 통증, 체중 증가 및 우울증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시형태에서, 병태는 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식 또는 이식편 대 숙주 질환이다.
본 명세서에 기재된 임의의 치료 방법의 다양한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 경구, 정맥내, 복막, 피내, 피하, 근육내, 척수강내, 흡입, 기화, 분무화, 설하, 협측, 비경구, 직장, 질 및 국소로 이루어진 군으로부터 선택된 투여의 형태에 의해 개체에게 투여된다.
특정한 실시형태에서, α4β7 인테그린 길항제 분자는 증가한 반감기를 포함한다. 일 실시형태에서, 증가한 반감기는 시험관내 또는 생체내 적어도 1일이다. 추가의 실시형태에서, 증가한 반감기는 생체내 1일 2회 투약의 빈도와 일치하는 기간과 동일하거나 이것보다 높고, α4β7 인테그린 길항제 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 경구로 투여되는 약제학적 조성물을 포함하거나 이것에 존재한다. 소정의 실시형태에서, 증가한 반감기는 생체내 대략 12시간 내지 24시간 초과이고, α4β7 인테그린 길항제 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 비경구로 투여되는 약제학적 조성물을 포함하거나 이것에 존재한다. 소정의 실시형태에서, 증가한 반감기는 생체내 대략 12시간 내지 24시간 초과이고, α4β7 인테그린 길항제 펩타이드 단량체 화합물은 국소로 투여되는 약제학적 제제를 포함하거나 이것에 존재한다.
본 발명의 관련 실시형태는 증가한 반감기를 가지는 α4β7 인테그린 길항제 단량체 또는 이량체 분자에 의해 이를 필요로 하는 개체를 치료하는 방법을 제공한다. 일 양태에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 매일(q.d.), 1일 2회(b.i.d.) 또는 1일 3회(t.i.d.) 투약에 충분한 (예를 들어, 인간 대상체에게 투여될 때) 시험관내 또는 생체내 적어도 수 시간 내지 1일의 반감기를 가지는 인테그린 길항제 단량체 또는 이량체 분자를 제공한다. 또 다른 실시형태에서, 단량체 또는 이량체 분자는 치료학적 유효량의 매주(q.w.) 투약에 충분한 3일 이상의 반감기를 가진다. 추가로, 또 다른 실시형태에서, 단량체 또는 이량체 분자는 치료학적 유효량의 2주마다(b.i.w.) 또는 달마다 투약에 충분한 8일 이상의 반감기를 가진다. 또 다른 실시형태에서, 단량체 또는 이량체 분자는 유도체화되거나 변형되어서, 비유도체화 또는 비변형 이량체 분자와 비교하여 더 긴 반감기를 가진다. 또 다른 실시형태에서, 단량체 또는 이량체 분자는 혈청 반감기를 증가시키는 하나 이상의 화학 변형을 함유한다.
본 명세서에 기재된 적어도 하나의 치료 또는 전달 시스템에서 사용될 때, 본 발명의 화합물 중 하나의 치료학적 유효량은 순수한 형태로, 또는 이러한 형태가 존재하는 경우, 약제학적으로 허용 가능한 염 형태로 사용될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, 본 발명의 화합물의 "치료학적 유효량"은 임의의 의학 치료에 적용 가능한 원하는 이익/위험 비율에서 인테그린 관련 질환을 치료(예를 들어, IBD와 연관된 염증을 감소)하기 위한 펩타이드 단량체 또는 이량체 화합물의 충분한 양을 기술하는 것으로 의도된다. 그러나, 본 발명의 화합물 및 조성물의 전체 일일 사용이 충분한 의학 판단의 범위 내에 주치의에 의해 결정될 것이라는 것이 이해될 것이다. 임의의 특정한 대상체에 대한 특정한 치료학적 유효 용량 수준은 a) 치료되는 장애 및 장애의 중증도; b) 사용된 특정한 화합물의 활성; c) 대상체의 사용된 특정한 조성물, 연령, 체중, 일반 건강, 성별 및 식이; d) 사용된 특정한 화합물의 투여 시간, 투여 경로 및 배설 속도; e) 치료 기간; f) 사용된 특정한 화합물과 조합되어 또는 일치되어 사용된 약물, 및 의학 기술에 널리 공지된 유사한 인자를 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 원하는 치료학적 효과를 달성하기 위해 필요한 것보다 낮은 수준으로 화합물의 용량을 시작하고 원하는 효과가 달성될 때까지 투약량을 점진적으로 증가시키는 것이 당업자의 기술 내에 맞게 있다.
대안적으로, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 조합되어 관심 있는 화합물을 함유하는 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제는 비독성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화제 또는 임의의 유형의 제제 보조제를 의미한다. 조성물은 비경구로, 두개내로, 질내로, 복막내로, 직장내로, 국소로(분말, 연고, 드랍, 좌제 또는 경피 패치에 의해), 또는 협측으로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "비경구"는 정맥내, 근육내, 복막내, 흉골내, 피하, 피내 및 관절내 주사 및 점적주사를 포함하는 투여 방식을 의미한다.
비경구 주사를 위한 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 무균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액, 현탁액 또는 에멀션, 및 사용 직전에 무균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 무균 분말을 포함한다. 적합한 수성 및 비수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대 글라이세롤, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 등), 카복시메틸셀룰로스 및 적합한 이들의 혼합물, 식물성 오일(예컨대, 올리브유), 및 주사용 유기 에스터, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이 조성물은 또한 아쥬번트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 현탁제를 함유할 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로뷰탄올, 페놀 소르브산 등의 포함에 의해 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 포함하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 주사용 약제학적 형태의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 물질, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 포함에 의해 발생할 수 있다.
주사용 데포 형태는 생분해성 중합체, 예컨대 폴리락타이드-폴리글라이콜라이드, 폴리(오쏘에스터), 폴리(언하이드라이드) 및 (폴리)글라이콜, 예컨대 PEG 중의 약물의 마이크로캡슐 매트릭스를 형성함으로써 만들어진다. 약물 대 중합체의 비율 및 사용된 특정한 중합체의 성질에 따라, 약물 방출의 속도는 제어될 수 있다. 데포 주사용 제제는 신체 조직과 적합한 리포솜 또는 마이크로에멀션 중에 약물을 포획함으로써 또한 제조된다.
주사용 제제는 예를 들어 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 무균 물 또는 다른 무균 주사용 매질 중에 용해되거나 분산될 수 있는 무균 고체 조성물의 형태의 무균화제를 혼입함으로써 무균화될 수 있다.
국소 투여는 폐 및 눈의 표면을 포함하는 피부 또는 점막에 대한 투여를 포함한다. 흡입 및 비강내를 위한 것을 포함하는 국소 폐 투여를 위한 조성물은 수성 및 비수성 제제 중의 용액 및 현탁액을 포함할 수 있고, 가압 또는 비가압될 수 있는 건조 분말로서 제제화될 수 있다. 비가압 분말 조성물에서, 미세하게 분산된 형태의 활성 성분은 예를 들어 100마이크로미터 이하의 직경의 크기를 가지는 입자를 포함하는 더 큰 크기의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 혼합되어 사용될 수 있다. 적합한 불활성 담체는 당, 예컨대 락토스를 포함한다.
대안적으로, 조성물은 가압되고 압축 가스, 예컨대 질소 또는 액화 가스 추진물질을 함유할 수 있다. 액화 추진물질 매질 및 실제로 전체 조성물은, 활성 성분이 임의의 실질적인 정도로 내부에 용해되지 않게 되는 것이 바람직하다. 가압 조성물은 표면 활성 물질, 예컨대 액체 또는 고체 비이온성 표면 활성 물질을 또한 함유할 수 있거나, 고체 음이온성 표면 활성 물질일 수 있다. 나트륨염의 형태의 고체 음이온성 표면 활성 물질을 사용하는 것이 바람직하다.
국소 투여의 추가의 형태는 눈에 대한 것이다. 본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 안과용 비히클 중에 전달되어서, 이 화합물이 각막 및 눈의 내부 영역, 예를 들어 전방, 후방, 유리체, 안방수, 유리액, 각막, 홍채/모양체, 수정체, 맥락막/망막 및 공막을 침투하게 하기에 충분한 시간 동안 이 화합물은 눈 표면과 접촉하여 유지된다. 약제학적으로 허용 가능한 안과용 비히클은 예를 들어 연고, 식물성 오일 또는 캡슐화 물질일 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물은 유리액 및 안방수로 직접 주사될 수 있다.
직장 또는 질 투여를 위한 조성물은 바람직하게는 본 발명의 화합물을 적합한 비자극 부형제 또는 담체, 예컨대 코코아 버터, 폴리에틸렌 글라이콜과 혼합함으로써 제조된 좌제 또는 실온에서 고체이지만 신체 온도에서 액체이고 따라서 직장 또는 질강에서 용융하고 활성 화합물을 방출하는 좌제 왁스이다.
본 발명의 화합물은 리포솜의 형태로 또한 투여될 수 있다. 당해 분야에 공지된 바대로, 리포솜은 일반적으로 인지질 또는 다른 지질 물질로부터 유래한다. 리포솜은 수성 매질 중에 분산된 단층 또는 다층 수화 액체 결정에 의해 형성된다. 리포솜을 형성할 수 있는 임의의 비독성의 생리학적으로 허용되고 대사 가능한 지질을 사용할 수 있다. 리포솜 형태의 본 조성물은, 본 발명의 화합물 이외에, 안정화제, 보존제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 바람직한 지질은 포스파티딜 콜린(레시틴) 및 세린(둘 다 천연 및 합성)을 포함하는 인지질이다. 리포솜을 형성하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다.
단일 또는 분할 용량으로 인간 또는 다른 포유류 숙주에게 투여되는 본 발명의 조성물의 전체 일일 용량은 예를 들어 매일 0.0001 내지 300㎎/㎏(체중) 및 더 보통 1 내지 300㎎/㎏(체중)의 양일 수 있다.
창자 염증의 비침습적 검출
본 발명의 펩타이드는 본 명세서에 기재된 경구로 안정한 화합물을 사용하여 마이크로PET 영상화에 의한 창자 염증의 검출, 평가 및 진단에 사용될 수 있고, 비침습적 진단학적 절차의 일부로서 킬레이팅 그룹 및 검출 가능한 라벨 중 적어도 하나에 의해 추가로 표지된다. 일 실시형태에서, 인테그린 길항제 단량체 또는 이량체 분자는 경구로 안정한 단량체 또는 이량체 분자를 제공하도록 이작용성 킬레이터와 접합된다. 또 다른 실시형태에서, 인테그린 길항제 단량체 또는 이량체 분자는 경구로 안정한 단량체 또는 이량체 분자를 제공하도록 방사선 표지된다. 경구로 안정한, 킬레이트화 또는 방사선 표지된 단량체 또는 이량체 분자는 이후 대상체에 경구로 또는 직장으로 투여된다. 일 실시형태에서, 경구로 안정한 단량체 또는 이량체 분자는 음용수에 포함된다. 단량체 또는 이량체 분자의 흡수 이후, 마이크로PET 영샹화는 대상체의 장 및 소화관에 걸쳐 염증을 가시화하도록 이용될 수 있다.
수용체 점유 및 인테그린 발현을 결정하는 방법
본 발명의 펩타이드는 예를 들어 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포, 또는 B 세포에서의 펩타이드의 결합 및 α4β7 인테그린 수용체 점유를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 혈액 세포의 수용체 점유는, 예를 들어 화합물이 대상체에게 경구로 투여될 때, 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물이 투여된 대상체(예를 들어, 포유류 또는 인간)로부터 얻어진 혈액을 사용하여 결정될 수 있다. 대안적으로, 수용체 점유는 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물의 시험관내 결합 및 경쟁에 기초하여 결정될 수 있다.
FACS 분석을 위한 소정의 실시형태에서, 동물, 예를 들어 cyano로부터의 헤파린화 전혈을 (1) 본 명세서에 기재된 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물에 의해 처리된 샘플에서의 α4β7 수용체 점유의 정도; 및 (2) 순환하는 α4β7+, αEβ7+ 및 α4β7+αEβ7+ 림프구 하위세트의 존재비를 평가하기 위해 항체의 2개의 패널의 각각에 의해 염색한다. 수용체 점유 및 인테그린 발현을 기억 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및 B 세포 내에서 평가한다. 수용체 점유를 평가하기 위해, 전혈 샘플을 처음에 1mM MnCl2에 의해 처리하여 펩타이드 결합을 허용하고, 이후 1μM의 비표지된 펩타이드와 같이/이것 없이 예비 항온처리하여 α4β7 수용체를 완전히 점유(즉, 차단)시킨다. 차단 샘플 및 비차단 샘플을 1nM의 알렉사(Alexa) 647 표지된 펩타이드에 의해 염색한 후, α4β7, CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대해 항체에 의해 염색한다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어진다. 인테그린 발현 및 세포 하위세트 존재비를 평가하기 위해, 전혈 샘플을, CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대한 항체 이외에, α4, β7 및 αE에 대한 항체에 의해 염색한다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어진다. 염색된 샘플을 유세포측정법에 의해 분석하고, 절대 세포 계수의 계산을 허용하도록 일정한 샘플 용적을 수집한다.
수용체 점유를 결정하기 위한 일 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물이 (예를 들어, 경구로) 투여된 대상체로부터 얻어진 혈액 샘플을, 혈액 샘플 내에 세포에 대한 표지된 펩타이드의 결합을 허용하기에 충분한 시간 동안 및 그러한 조건 하에 검출 가능하게 표지된 버전의 동일한 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물과 항온처리한다. 이후, 샘플을 α4β7 인테그린에 결합하는 항체 및/또는 다른 시약, 및 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및/또는 B 세포의 다른 마커에 의해 염색한다. 이후, 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 예를 들어 항체 검출 및/또는 세포 분류를 허용하도록 제2단계 시약에 의해 염색하고, 세척하고 유세포측정법에 의해 분석하여 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및/또는 B 세포에 대한 경쟁자 펩타이드 결합의 양을 결정한다. 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물의 수용체 점유는, 임의로 추가로 세포에서 검출된 α4β7의 양의 관점에서, 세포에 결합된 검출된 표지된 펩타이드의 양에 기초하여 결정될 수 있다.
수용체 점유를 결정하기 위한 또 다른 실시형태에서, 공여자 동물(예를 들어, 펩타이드에 의해 처리되지 않은 포유류 또는 인간)로부터 얻어진 혈액 샘플을, 혈액 샘플 내에 세포에 대한 비표지된 펩타이드의 결합을 허용하기에 충분한 시간 동안 및 그러한 조건 하에 본 발명의 비표지된 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물과, 또는 음성 대조군(예컨대, 오직 완충제 또는 비연관 펩타이드)과 항온처리한다. 이후, 샘플을 (혈액 샘플 내에 세포에 대한 표지된 펩타이드의 결합을 허용하기에 충분한 시간 동안 및 그러한 조건 하에) 본 발명의 동일한 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물의 검출 가능하게 표지된 버전에 의해 염색한 후, α4β7 인테그린에 결합하는 항체 및/또는 다른 시약, 및 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및/또는 B 세포의 다른 마커에 의해 염색한다. 이후, 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리하고, 예를 들어 항체 검출 및/또는 세포 분류를 허용하도록 제2단계 시약에 의해 염색하고, 세척하고 유세포측정법에 의해 분석하여 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및/또는 B 세포에 대한 경쟁자 펩타이드 결합의 양을 결정한다. 시험 펩타이드의 수용체 점유는, 임의로 추가로 세포에서 검출된 α4β7의 양의 관점에서, 세포에 결합된 검출된 표지된 펩타이드의 양에 기초하여 결정될 수 있다.
시험 펩타이드의 수용체 점유를 평가하기 위한 또 다른 실시형태에서, 혈액 샘플을 혈액 샘플 내에 세포에 대한 시험 펩타이드의 결합을 허용하기에 충분한 시간 동안 및 그러한 조건 하에 비표지된 시험 펩타이드 또는 음성 대조군(예컨대, 오직 완충제 또는 비연관 펩타이드)과 항온처리한다. 이후, 샘플을 본 발명의 검출 가능하게 표지된 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물(경쟁자 펩타이드)에 의해 염색한 후, α4β7 인테그린에 결합하는 항체 및/또는 다른 시약, 및 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및/또는 B 세포의 다른 마커에 의해 염색한다. 이후, 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리하고, 예를 들어 항체 검출 및/또는 세포 분류를 허용하도록 제2단계 시약에 의해 염색하고, 세척하고 유세포측정법에 의해 분석하여 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및/또는 B 세포에 대한 경쟁자 펩타이드 결합의 양을 결정한다. 시험 펩타이드의 수용체 점유는, 임의로 추가로 세포에서 검출된 α4β7의 양의 관점에서, 세포에 결합된 검출된 경쟁자 펩타이드의 양에 기초하여 결정될 수 있다.
일 예에서, 전혈 샘플(예를 들어, 마우스, 랫트 또는 인간 혈액)을 처음에 1mM MnCl2에 의해 처리하여 시험 펩타이드 결합을 허용하고, 이후 α4β7 수용체를 결합(즉, 차단)시키도록 1μM의 비표지된 펩타이드 X와 같이/이것 없이, 또는 펩타이드 없이 또는 음성 대조군 펩타이드(비차단됨)와 예비 항온처리한다. 차단 샘플 및 비차단 샘플을 1nM의 알렉사 647 표지된 펩타이드 X에 의해 염색한 후, α4β7, CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대해 항체에 의해 염색한다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어진다. 모든 염색된 샘플을 유세포측정법에 의해 분석하고, 절대 세포 계수의 계산을 허용하도록 일정한 샘플 용적을 수집한다.
인테그린 발현 및 세포 하위세트 존재비를 평가하기 위해, 전혈 샘플을 CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대한 항체 이외에, α4, β7 및 αE에 대한 항체에 의해 염색한다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어진다. 모든 염색된 샘플을 유세포측정법에 의해 분석하고, 절대 세포 계수의 계산을 허용하도록 일정한 샘플 용적을 수집한다.
특정한 실시형태에서, 수용체 내재화를 막기 위해, 세포를 고정 전에 모든 단계 동안 차갑게 유지시키고, 항온처리를 (적혈구 용해를 제외하고) 4℃에서 수행한다.
검정의 일 실시형태의 상세한 설명이 이하 기재되어 있다.
MnCl2를 약 1mM의 최종 농도로 각각의 혈액 샘플(약 100㎕)에 첨가한다; 샘플을 혼합하고 10-15분 동안 4℃에서 항온처리한다.
비표지된 펩타이드(또는 대조군)를 1μM의 최종 농도로 샘플에 또는 DMSO 비히클 대조군(DMSO의 일치 농도)을 적절한 혈액 샘플에 첨가하고, 혼합하고 60분 동안 4℃에서 항온처리한다.
표지된 펩타이드를 적절한 혈액 샘플에 1nM의 최종 농도로 첨가하고, 혼합하고 60분 동안 4℃에서 항온처리한다.
항체 염색 칵테일을 각각의 혈액 샘플, 예를 들어 CD45(C45 V500), CD4(CD4 Ax700), CD45RA(CD45RA FITC), CD19(C19 PE-CF594), 인테그린 α4(인테그린 α4 바이오틴), 인테그린 β7(인테그린 β7 PE), 또는 인테그린 αE(인테그린 αE PE-Cy7)에 결합하는 표지된 항체를 포함하는 인테그린 a4/b7/ae 칵테일; 또는 CD45 V500, CD4 Ax700, CD45Ra FITc, CD19 PE-CF594, 베돌리주맙-바이오틴, 및 인테그린 αE PE-Cy7을 포함하는 수용체 점유 염색 칵테일에 첨가하고; 혼합하고 30분 동안 4℃에서 항온처리한다.
이후, 샘플을 (10배 스톡으로부터 희석된) 10용적 과량의 1x FACS 용해 용액에 의해 처리하여 적혈구를 용해시키고, 완전히 혼합하고, 10분 동안 실온에서 항온처리한다. 샘플을 5분 동안 400 x g에서 원심분리하고, 제거하고, 세포를 PBS/BSA/MnCl2 중에 재현탁시켜 세척한다. 세포를 다시 유사하게 원심분리하고 상청액을 제거하고; 세척을 반복한다.
세포를 PBS/BSA/MnCl2 중에 1:1000의 최종 희석으로 스트렙타비딘 BV421에 의해 염색하고, 완전히 혼합하고, 30분 동안 4℃에서 항온처리한다.
세포를 상기대로 PBS/BSA/MnCl2에 의해 2회 세척하고, 이후 PBS/BSA/MnCl2 중에 재현탁시킨다.
샘플을 유세포분석기에서 실행하고, FAC 분석에 걸쳐 절대 사건 계수의 계산을 허용하도록 모든 샘플에 걸쳐 일정한 샘플 용적을 수집한다. 시험 펩타이드의 수용체 점유는 시험 펩타이드에 의해 차단된 샘플과 비교하여 비차단 샘플에 결합하는 경쟁자 펩타이드의 상대 양에 기초하여 결정될 수 있다.
또 다른 구체적인 예에서, 인간 공여자로부터의 헤파린화 전혈을 (1) 펩타이드 처리된 샘플에서의 α4β7 수용체 점유의 정도; 및 (2) 순환하는 α4β7+, αEβ7+ 및 α4β7+aEβ7+ 림프구 하위세트의 존재비를 평가하기 위해 항체의 2개의 패널의 각각에 의해 염색한다. 수용체 점유 및 인테그린 발현을 기억 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및 B 세포 내에서 평가한다.
수용체 점유를 평가하기 위해, 전혈 샘플을 처음에 1mM MnCl2에 의해 처리하여 시험 펩타이드 결합을 허용하고, 이후 α4β7 수용체를 완전히 점유(즉, 차단)시키도록 1μM의 비표지된 펩타이드와 같이/이것 없이 예비 항온처리한다. 차단 샘플 및 비차단 샘플을 1nM의 알렉사 647 표지된 펩타이드에 의해 염색한 후, α4β7, CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대해 항체에 의해 염색한다. 이후, 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어진다.
인테그린 발현 및 세포 하위세트 존재비를 평가하기 위해, 전혈 샘플을 CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대한 항체 이외에, α4, β7 및 αE에 대한 항체에 의해 염색한다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어진다.
모든 염색된 샘플을 유세포측정법에 의해 분석하고, 절대 세포 계수의 계산을 허용하도록 일정한 샘플 용적을 수집한다. 일 예에서, 혈액 세포가 비표지된 펩타이드와 접촉한 후 혈액 세포에 결합하는 표지된 펩타이드의 양을 결정하고, 세포에 존재하는 α4β7의 양을 결정함으로써 수용체 점유를 결정하고, 세포에 존재하는 α4β7의 양과 표지된 펩타이드가 결합한 양 사이의 차이는 비표지된 펩타이드에 의한 수용체 점유를 나타낸다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은, 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 이량체 화합물, 예를 들어 화학식 (I)(임의의 I-A, I-B, I-C, I-D, I-E, I-F, I-G, I-H, I-I 및 I-J를 포함), 화학식 (II), 화학식 (III), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C), 화학식 (D), 화학식 (S), 화학식 (X) 또는 화학식 (H)에 따른 펩타이드 이량체 화합물, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 단량체 화합물, 예를 들어 화학식 (IV)(임의의 IV-A, IV-B, IV-C, IV-D, IV-E, IV-F, IV-G, IV-H, IV-I 및 IV-J를 포함), 화학식 (V)(V-A를 포함), 화학식 (VI), 화학식 (A), 화학식 (B), 화학식 (C) 또는 화학식 (D)에 따른 펩타이드 단량체 화합물(이들로 제한되지는 않음)을 포함하는, 본 명세서에 기재된 표지된(예를 들어, 검출 가능하게 표지된) 화합물 또는 펩타이드를 포함한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 화합물 또는 펩타이드를 형광으로 표지한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드에 존재하는 임의의 아미노산 서열을 포함하는 본 발명의 검출 가능하게 표지된 펩타이드, 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물을 포함한다. 특정한 실시형태에서, 펩타이드 화합물 또는 펩타이드를 형광으로 표지한다.
특정한 실시형태에서, 본 발명은 임의의 하기 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드, 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물을 포함하고, 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 임의로 존재한다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys); 또는
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys).
특정한 실시형태에서, 펩타이드 이량체 화합물은 하기 서열 또는 구조 중 하나를 포함하고, 소정의 실시형태에서, 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 존재한다:
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-NH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH2]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG; 또는
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-OH]2-DIG.
특정한 실시형태에서, 펩타이드 단량체 화합물은 하기 서열 또는 구조 중 하나를 포함하고, 소정의 실시형태에서, 2개의 Pen 잔기 사이에 다이설파이드 결합이 존재한다:
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys);
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-OH;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2; 또는
Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-NH2.
특정한 실시형태에서, 펩타이드, 펩타이드 단량체 화합물 또는 펩타이드 이량체 화합물을 표지, 예를 들어 검출 가능하게 표지, 예를 들어 형광단에 의해 형광으로 표지하거나, 방사성 동위원소에 의해 방사선 표지한다. 다양한 검출 가능한 분자, 예컨대 방사성 동위원소, 형광색소, 염료, 효소, 나노입자, 화학발광성 마커, 바이오틴, 또는 (예를 들어, 광 방출에 의해) 간접적으로 또는 (예를 들어, 형광으로 표지된 항체의 결합에 의해) 직접적으로 검출될 수 있는 당해 분야에 공지된 다른 단량체를 사용할 수 있다.
검출 가능한 라벨의 용도는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 검출 가능한 라벨은 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 폴리펩타이드 및 검출 가능한 라벨을 접합하는 방법은 검출 가능한 라벨을 사용하여 영상화하는 방법이 그런 것처럼 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 매우 다양한 라벨을 사용하여 매우 다양한 검정에서 검출 가능한 라벨과 태그화된 키메라 폴리펩타이드 센서를 사용할 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시형태에서, 유비퀴틴 단백질 또는 유비퀴틴 유사 단백질의 종의 검출은 검출 가능한 라벨을 키메라 폴리펩타이드 센서에 부착함으로써 수월해질 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 유비퀴틴 단백질의 종 또는 유비퀴틴 유사 단백질의 종의 검출은 검출 가능한 라벨을 경쟁자 유비퀴틴 단백질 또는 경쟁자 유비퀴틴 유사 단백질에 부착함으로써 수월해질 수 있다.
검출 가능한 라벨의 예는 방사성 핵종, 효소, 조효소, 형광물질, 화학발광물질, 발색체, 효소 기질 또는 보조인자, 효소 저해제, 보결 분자단 복합체, 자유 라디칼, 입자, 염료 등을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 몇몇 방사성 동위원소는 예를 들어 32P, 33P, 35S, 3H 및 125I를 포함하는 펩타이드를 표지하기 위한 검출 가능한 분자로서 사용될 수 있다. 적합한 효소의 예는 겨자무과산화효소, 알칼리 포스파타제, β-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스터라제를 포함하고; 적합한 보결 분자단 복합체의 예는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴을 포함하고; 적합한 형광성 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오사이아네이트, 로다민, 다이클로로트라이아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린, 쿠마린, 알렉사 488, 오레건(Oregon) 그린 488, 로다민 그린, 알렉사 532, Cy3, 보디피(Bodipy) 588/586, 알렉사 586, TAMRA, Rox, 알렉사 594, 텍사스 레드, 보디피 630/650, Cy5, 알렉사 647, 아이알 염료(IR Dye) 680, 아이알 염료 680, 아이알 염료 700 DX, Cy5.5, 알렉사 750, 아이알 염료 800CW, 아이알 염료 800, 아토(Atto) 532, 아토 465를 포함하고; 발광성 물질의 예는 루미놀이고; 생체발광성 물질의 예는 루시퍼라제, 루시페린 및 에쿼린을 포함하고; 적합한 방사성 물질의 예는 125 I, 131 I, 35 S 또는 3 H를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 검출 가능한 라벨은 형광성 단백질을 포함한다. 적합한 형광성 단백질은 TagBFP, mTagBFP2, 아주리트(Azurite), EBFP2, mKalama1, 시리우스(Sirius), 사파이어(Sapphire), T-사파이어, ECFP, 세룰린(Cerulean), SCFP3A, mTurquoise, mTurquoise2, 단량체성 미도리쉬-시안(Midoriishi-cyan), TagCFP, mTFP1, GFP, EGFP, 에메랄(Emeral), 슈퍼폴더(Superfolder) GFP, 단량체성 아자미(Azami) 그린, TagGFP2, mUKG, mWasabi, 클로버(Clover), mNeonGreen, EYFP, YFP, 시트린(Citrine), 비너스(Venus), SYFP2, TagYFP, 단량체성 쿠사비라(Kusabira) 오렌지, MKOK, mKO2, mOrange, mOrange2, mRaspberry, mCherry, mStrawberry, mTangerine, tdTomato, TagRFP, TagRFP1, mApple, mRuby, mRuby2, TagRFP675, IFP1.4, iFRP, mKeima 레드, LSS-mKate1, LSS-mKate2, mBeRFP, PA-GFP, PAmCherry1, PATagRFP, 카에드(Kaede) 그린, 카에드 레드, KikGR1 그린, KikGR1 레드, PS-CFP2, mEos2 그린, mEos2 레드, mEos3.2 그린, mEos3.2 레드, PSmOrange를 포함한다. 본 발명의 몇몇 실시형태에서, 검출 가능한 라벨은 형광 공명 에너지 전이(fluorescence resonance energy transfer; FRET) 쌍 짓기에 적합한 켄칭제를 또한 포함한다. 적합한 켄칭제의 예는 Dabcyl, BHQ1, BHQ2, BHQ3, CY5Q, CY7Q, 이오와블랙(Iowablack) FQ, 이오와블랙 RQ, 아이알 염료 QC-1, QSY35, QSKY7, QXL570, QXL610, QXL680을 포함한다.
실시예
실시예 1
펩타이드 분자의 합성
당해 분야의 당업자에게 공지된 많은 기법에 의해 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물을 합성할 수 있다. 본 명세서에 제공된 기법을 이용하여 신규한 펩타이드 단량체 및 펩타이드 이량체 소단위를 합성하고 정제하고 이량체화하였다.
합성
표준 Fmoc 화학을 이용하여 프로테인 테크놀로지(Protein)의 심포니 다중 채널 합성장치(Symphony multiple channel synthesizer)에서 메리필드(Merrifield) 고상 합성 기법을 이용하여 본 발명의 펩타이드를 합성하였다. 사용된 아미노산은 Fmoc 화학에 알맞은 표준 측쇄 보호 그룹을 가지는 Fmoc 아미노산이다. 펩타이드를 HBTU(O-벤조트라이아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오로-포스페이트), 다이아이소프로필에틸아민(DIEA) 커플링 조건을 이용하여 어셈블링하였다. 일부 아미노산 커플링을 위해, PyAOP(7-아자벤조트라이아졸-1-일옥시)트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트) 및 DIEA 조건을 이용하였다. 일부 아미노산 커플링을 위해, 옥시마(Oxyma)(에틸(하이드록시이미노)사이아노아세테이트) 및 DIC 조건을 이용하였다. 링크(Rink) 아마이드 MBHA 수지(100-200메쉬, 0.57mmol/g)를 C 말단 아마이드를 가지는 펩타이드에 사용하고, N-a-Fmoc 보호 아미노산을 가지는 예비 로딩된 왕(Wang) 수지를 C 말단 산을 가지는 펩타이드에 사용하였다. 커플링 시약(예비 혼합된 HBTU 및 DIEA)을 100mmol 농도에서 제조하였다. 유사하게, 아미노산 용액을 100mmol 농도에서 제조하였다.
어셈블리
Fmoc 화학에 대한 표준 심포니 합성장치 프로토콜을 이용하여 펩타이드를 어셈블링하였다. 펩타이드 서열을 하기와 같이 어셈블링하였다: 각각의 반응 바이알에서 수지(250㎎, 0.14mmol)를 4㎖의 DMF에 의해 2회 세척한 후, 10분 동안 2.5㎖의 20% 4-메틸 피페리딘(Fmoc 탈보호)에 의해 처리하였다. 이후, 수지를 여과시키고 DMF(4㎖)에 의해 2회 세척하고 추가적인 30분 동안 N-메틸 피페리딘에 의해 재처리하였다. 수지를 DMF(4㎖)에 의해 다시 3회 세척한 후, 2.5㎖의 아미노산 및 2.5㎖의 HBTU-DIEA 혼합물을 첨가하였다. 45분의 빈번한 교반 후, 수지를 여과시키고 DMF에 의해 3회 세척하였다(각각 4㎖). 커플링 반응을 완료한 후, 수지를 DMF에 의해 3회 세척한 후(각각 4㎖), 다음의 아미노산 커플링으로 진행시켰다. Fmoc 탈보호 및 아미노산 커플링 사이클을 펩타이드 서열에서 아미노산의 특정한 수에 대해 반복하였다. N-Me-Arg에 대한 Pen(Trt) 커플링을 위해, 2.0당량의 아미노산, 2.2당량의 옥시마 및 2.0당량의 DIC를 사용하고, 클로라닐(Chloranil) 시험을 이용하여 반응의 완료를 모니터링하였다.
절단
펩타이드 어셈블리의 완료 후, 절단 시약, 예컨대 시약 K(82.5% 트라이글라이세로아세트산, 5% 물, 5% 티오아니솔, 5% 페놀, 2.5% 1,2-에탄다이티올)에 의한 처리에 의해 수지로부터 펩타이드를 절단하였다. 절단 시약은 수지, 및 모든 남은 측쇄 보호기로부터 펩타이드를 성공적으로 절단할 수 있었다.
절단된 펩타이드를 에틸 에터에 의한 2회 세척에 의해 차가운 다이에틸 에터 중에 침전시켰다. 여과액을 붓고, 차가운 에터의 제2 분취량을 첨가하고, 절차를 반복하였다. 미정제 펩타이드를 아세토나이트릴:물의 용액(1% TFA와 함께 7:3) 중에 용해시키고 여과시켰다. 이후, 선형 펩타이드의 분량을 전자분무 이온화 질량 분광법(ESI-MS)(마이크로매스/워터스(Waters) ZQ)을 이용하여 검증한 후 정제하였다.
산화를 통한 다이설파이드 결합 형성
50㎎의 미정제 절단된 펩타이드를 20㎖의 물:아세토나이트릴 중에 용해시켰다. 이후, 아세트산 중의 포화 요오드를 황색 색상이 지속할 때까지 교반하면서 적하하였다. 용액을 15분 동안 교반하고, 반응을 분석용 HPLC 및 LCMS에 의해 모니터링하였다. 반응이 완료한 때, 고체 아스코르브산을 용액이 깨끗해질 때까지 첨가하였다. 이후, 처음에 물에 의해 희석한 후 역상 HPLC 기기(Luna C18 지지체, 10μ, 100A, 이동상 A: 0.1% TFA를 함유하는 물, 이동상 B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토나이트릴(ACN), 구배는 5% B에 의해 시작하고, 15㎖/분의 유속으로 60분에 걸쳐 50% B로 변함)에 로딩함으로써 용매 혼합물을 정제하였다. 이후, 순수한 생성물을 함유하는 분획을 동결건조기에서 동결 건조시켰다.
락탐 결합 형성
100㎎의 미정제 절단된 펩타이드(대략 0.12mmol)를 100㎖의 무수 다이클로로메탄 중에 용해시켰다. HOBt(1-하이드록시벤조트라이아졸 수화물)(0.24mmol, 2당량), 이어서 DIEA(N,N-다이아이소프로필에틸아민)(1.2mmol, 10당량) 및 TBTU(O-(벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트)(0.24mmol, 2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반한 후, HPLC에 의해 반응을 모니터링하였다. 반응을 완료된 때, 다이클로로메탄을 증발시키고 물 및 아세토나이트릴에 의해 희석한 후, 역상 HPLC 기기(Luna C18 지지체, 10μ, 100A, 이동상 A: 0.1% TFA를 함유하는 물, 이동상 B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토나이트릴(ACN), 구배는 5% B에 의해 시작하고, 15㎖/분의 유속으로 60분에 걸쳐 50% B로 변함)에 로딩하였다. 이후, 순수한 생성물을 함유하는 분획을 동결건조기에서 동결 건조시켰다.
정제
Gemini C18 칼럼(4.6㎜ x 250㎜)(Phenomenex)에서 분석 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 수행하였다. Gemini 10㎛ C18 칼럼(22㎜ x 250㎜)(Phenomenex) 또는 Jupiter 10㎛, 300Å C18 칼럼(21.2㎜ x 250㎜)(Phenomenex)에서 반분취용 역상 HPLC를 수행하였다. 1㎖/분(분석) 및 15㎖/분(분취용)의 유속으로 A 중의 완충제 B(이동상 A: 0.15% TFA를 함유하는 물, 이동상 B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토나이트릴(ACN))의 선형 구배를 이용하여 분리를 달성하였다. 1㎖/분(분석) 및 15㎖/분(분취용)의 유속으로 A 중의 완충제 B(이동상 A: 0.15% TFA를 함유하는 물, 이동상 B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토나이트릴(ACN))의 선형 구배를 이용하여 분리를 달성하였다.
링커 활성화 및 이량체화
소규모 DIG 링커 활성화 절차: 5㎖의 NMP를 IDA 2산(304.2㎎, 1mmol), N-하이드록시숙신이미드(NHS, 253.2㎎, 2.2당량. 2.2mmol) 및 교반 막대를 함유하는 바이알에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 교반하여 고체 출발 물질을 완전히 용해시켰다. 이후, N,N'-다이사이클로헥실카르보다이이미드(DCC, 453.9㎎, 2.2당량, 2.2mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 침전은 10분 내에 나타났고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 추가로 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 여과시켜 침전된 다이사이클로헥실유레아(DCU)를 제거하였다. 활성화 링커를 이량체화에 사용하기 전에 밀봉 바이알에서 유지시켰다. 활성화 링커의 공칭 농도는 대략 0.20M이었다.
PEG 링커를 위한 이량체화의 경우, 수반된 예비 활성화 단계가 없었다. 상업적으로 구입 가능한 예비 활성화 이작용성 PEG 링커를 사용하였다.
이량체화 절차: 2㎖의 무수 DMF를 펩타이드 단량체(0.1mmol)를 함유하는 바이알에 첨가하였다. 펩타이드의 pH를 DIEA에 의해 8 내지 9로 조정하였다. 이후, 활성화 링커(DIG, IDA 또는 PEG13, PEG 25)(단량체에 대해 0.48당량, 0.048mmol)를 단량체 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 분석 HPLC를 이용하여 이량체화 반응의 완료를 모니터링하였다. 이량체화 반응의 완료에 대한 시간은 링커에 따라 변했다. 반응의 완료 후, 펩타이드를 차가운 에터 중에 침전시키고 원심분리하였다. 상처액 에터 층을 버렸다. 침전 단계를 2회 반복하였다. 이후, 역상 HPLC(Luna C18 지지체, 10μ, 100A, 이동상 A: 0.1% TFA를 함유하는 물, 이동상 B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토나이트릴(ACN), 15% B의 구배로 시작하고, 60분에 걸쳐 45%B로 변함, 유속 15㎖/분)를 사용하여 미정제 이량체를 정제하였다. 이후, 순수한 생성물을 함유하는 분획을 동결건조기에서 동결 건조시켰다.
실시예 2
펩타이드 이량체 분자의 규명
다양한 시험관내 및 생체내 검정을 이용하여 소정의 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물의 안정성, 효력 및 선택도를 결정하였다.
α4β7 - MAdCAM 경쟁 ELISA
니켈 코팅된 플레이트(피어스(Pierce) 15442호)를 800ng/웰에서 rh 인테그린 α4β7(일앤디 시스템즈(R&D Systems) 5397-A30호)에 의해 코팅하고, 1시간 동안 진탕시키면서 실온에서 항온처리하였다. 이후, 용액을 진탕에 의해 제거하고, 250㎕/웰로 검정 완충제(50mM 트리스-HCl(pH 7.6), 150mM NaCl, 1mM MnCl2 또는 MgCl2, 0.05% Tween-20 및 0.5% BSA)에 의해 차단하였다. 이후, 플레이트를 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 각각의 웰을 세척 완충제(50mM 트리스-HCl(pH 7.6), 100mM NaCl, 1mM MnCl2 또는 MgCl2, 0.05% Tween-20)에 의해 3회 세척하였다. 각각의 웰에 20μM에서 시작하여 펩타이드의 25㎕의 연속 희석액(검정 완충제 중의 3배 희석)을 첨가하였다. 이후, 25㎕의 재조합 인간 MAdCAM-1(일앤디 시스템즈 6056-MC호)을 20nM의 고정 농도로 각각의 웰에 첨가하였다. 최종 시작 펩타이드 농도는 10μM이고, 최종 MAdCAM-1 농도는 10nM이었다. 이후, 플레이트를 1시간 동안 실온에서 항온처리하여 결합 평형에 도달하였다. 이후, 웰을 세척 완충제에 의해 3회 세척하였다. 이후, 검정 완충제 중에 1:2000 중에 희석된 50㎕의 마우스 항-인간 IgG1-HRP(인비트로겐(Invitrogen) A10648호)을 각각의 웰에 첨가하였다. 웰을 진탕시키면서 실온에서 45분 동안 항온처리하였다. 이후, 웰을 세척 완충제에 의해 3회 세척하였다. 이후, 100㎕의 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB)을 각각의 웰에 첨가하고, 전개 시간 동안 면밀히 관찰하였다. 2N H2SO4에 의해 반응을 중단시키고, 450㎚에서 흡광도를 판독하였다.
TMB는 겨자무과산화효소 접합체를 이용하는 ELISA 절차에서 사용하기에 적합한 색원체 기질이다. 이 기질은 색상이 청색인 가용성 최종 생성물을 생성하고, 370 또는 655㎚에서 분광광도법으로 판독될 수 있다. 2M H2S04에 의해 반응을 중단시킬 수 있어서, 450㎚에서 판독되는 황색의 용액이 생겼다. 각각의 정제는 1㎎의 TMB 기질을 함유한다. TMB 기질 용액을 제조하기 위해, 1㎖의 DMSO 중에 하나의 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘 정제를 용해시키고, 9㎖의 0.05M 포스페이트-시트레이트 완충제(pH 5.0)에 첨가하였다. 사용 직전에 10㎖의 기질 완충제 용액당 2㎕의 새로운 30% 과산화수소(제품 번호 H 1009)를 첨가하였다.
α 4β1 - VCAM 경쟁 ELISA
Nunc Maxisorp 플레이트를 1xPBS 중에 웰마다 50㎕ 중의 400ng/웰로 rh VCAM-1/CD106 Fc 키메라(R&D 862-VC호)에 의해 코팅하고, 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 용액을 진탕에 의해 제거하고, 이후 웰마다 1xPBS 중에 250㎕의 1% BSA에 의해 차단하였다. 이후, 웰을 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이후, 각각의 웰을 세척 완충제(50mM 트리스-HCl(pH 7.6), 100mM NaCL, 1mM MnCl2 또는 MgCl2, 0.05% Tween-20)에 의해 1회 세척하였다. 검정 완충제(검정 완충제: 50mM 트리스-HCl(pH 7.6), 100mM NaCl, 1mM MnCl2 또는 MgCl2, 0.05% Tween-20) 중의 200μM에서 시작하여 펩타이드의 25㎕의 연속 희석액을 각각의 웰에 첨가하였다. 추가적으로, 25㎕의 α4β1(일앤디 시스템즈 5668-A4호)을 120nM의 고정된 농도에서 각각의 웰에 첨가하였다. 최종 펩타이드 및 α4β1 농도는 각각 100μM 및 60nM이었다. 이후, 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다. 이후, 용액을 진탕에 의해 제거하고, 각각의 웰을 세척 완충제에 의해 3회 세척하였다. 이후, 4㎍/㎖에서의 50㎕의 9F10 항체(정제된 마우스 항-인간 CD49d, 비디 바이오사이언스(BD Bioscience) 카탈로그 555502호)를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 용액을 진탕에 의해 다시 제거하고, 각각의 웰을 세척 완충제에 의해 3회 세척하였다. 검정 완충제 중에 1:5000 중에 희석된 50㎕의 퍼옥시다제 접합된 아피니퓨어(AffiniPure) 염소 항-마우스 IgG(잭슨 이뮤노 리서치(Jackson immune research) 카탈로그 115-035-003호)를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 진탕시키면서 실온에서 30분 동안 항온처리한다. 이후, 각각의 웰을 세척 완충제에 의해 3회 세척하였다. 이후, 100㎕의 TMB를 각각의 웰에 첨가하고, 전개 시간 동안 면밀히 관찰하였다. 2N H2SO4에 의해 반응을 중단시키고, 450㎚에서 흡광도를 판독하였다.
α 4β7 - MAdCAM 세포 부착 검정
1㎖당 100단위의 페니실린 및 100㎍의 스트렙토마이신에서 10% 혈청(소 태아 혈청, 인비트로겐 16140-071호), 1mM 피루브산나트륨(인비트로겐 11360-070호), 2mM L-글루타민(인비트로겐 25030-081호) 및 페니실린-스트렙토마이신(인비트로겐 15140-122호)이 보충된 RPMI 1640 HEPES 배지(인비트로겐 22400-089호) 중에 RPMI 8866 인간 세포(시그마 95041316호)를 배양하였다. 0.1% BSA, 10mM HEPES(pH 7) 및 1 mM MnCl2가 보충된 DMEM 배지(ATCC 30-2002호)에서 세포를 2회 세척하였다. 세포를 4x106개의 세포/㎖의 밀도로 보충된 DMEM 배지 중에 재현탁시켰다.
Nunc Maxisorp 플레이트를 1xPBS 중에 웰마다 50㎕ 중의 웰마다 200ng으로 rh MAdCAM-1/Fc 키메라(R&D 6065-MC호)에 의해 코팅하고, 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 이후, 용액을 진탕에 의해 제거하고, 웰마다 1% BSA를 함유하는 250㎕의 PBS에 의해 차단하고, 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 용액을 진탕에 의해 제거하였다. 펩타이드를 웰당 50㎕의 최종 용적(2배 농도)으로 연속 희석에 의해 희석하였다. 각각의 웰에, 50㎕의 세포(200,000개의 세포)를 첨가하고, 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 30-45분 동안 항온처리하여 세포 부착을 허용하였다. 웰을 보충된 DMEM에 의해 수동으로 3회 세척하였다(세척마다 100㎕). 최종 세척 후, 100㎕/웰의 보충된 DMEM 및 10㎕/웰의 MTT 시약(ATTC 카탈로그 30-1010K호)을 첨가하였다. 플레이트를 자주색의 침전물이 보일 때까지 37℃, 5% CO2에서 2-3시간 동안 항온처리하였다. 100㎕의 디터전트 시약(Detergent Reagent)(ATTC 카탈로그 30-1010K호)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 광으로부터 차단하고, 파라필름(Parafilm)에 싸서 증발을 막고, 암소에서 실온에서 밤새 두었다. 플레이트를 5분 동안 진탕시키고, 570㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 용량 반응을 계산하기 위해, 각각의 시험 웰로부터 세포를 함유하지 않는 대조군 웰의 흡광도 값을 공제하였다.
α 4β1 - VCAM 세포 부착 검정
1㎖당 100단위의 페니실린 및 100㎍의 스트렙토마이신에서 10% 혈청(소 태아 혈청, 인비트로겐 16140-071호), 1mM 피루브산나트륨(인비트로겐 11360-070호), 2mM L-글루타민(인비트로겐 25030-081호) 및 페니실린-스트렙토마이신(인비트로겐 15140-122호)이 보충된 RPMI 1640 HEPES 배지(인비트로겐 22400-089호) 중에 주카트(Jurkat) E6.1 인간 세포(시그마 88042803호)를 배양하였다. 0.1% BSA, 10mM HEPES pH 7 및 1mM MnCl2가 보충된 DMEM 배지(ATCC 30-2002호)에서 세포를 2회 세척하였다. 세포를 4x106개의 세포/㎖의 밀도로 보충된 DMEM 배지 중에 재현탁시켰다.
Nunc Maxisorp 플레이트를 1xPBS 중에 웰마다 50㎕ 중의 웰마다 400ng으로 rh VCAM-1/CD106 Fc 키메라(R&D 862-VC호)에 의해 코팅하고, 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 이후, 용액을 진탕에 의해 제거하고, 웰마다 1% BSA를 함유하는 250㎕의 PBS에 의해 차단하고, 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 용액을 진탕에 의해 제거하였다. 펩타이드를 웰당 50㎕의 최종 용적(2배 농도)으로 연속 희석에 의해 희석하였다. 각각의 웰에, 50㎕의 세포(200,000개의 세포)를 첨가하고, 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 30-45분 동안 항온처리하여 세포 부착을 허용하였다. 웰을 보충된 DMEM에 의해 수동으로 3회 세척하였다(세척마다 100㎕). 최종 세척 후, 100㎕/웰의 보충된 DMEM 및 10㎕/웰의 MTT 시약(ATTC 카탈로그 30-1010K호)을 첨가하였다. 플레이트를 자주색의 침전물이 보일 때까지 37℃, 5% CO2에서 2-3시간 동안 항온처리하였다. 100㎕의 디터전트 시약(ATTC 카탈로그 30-1010K호)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 광으로부터 차단하고, 파라필름에 싸서 증발을 막고, 암소에서 실온에서 밤새 두었다. 플레이트를 5분 동안 진탕시키고, 570㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 용량 반응을 계산하기 위해, 각각의 시험 웰로부터 세포를 함유하지 않는 대조군 웰의 흡광도 값을 공제하였다.
α 4β7 세포 부착 검정(마우스)
1㎖당 100단위의 페니실린 및 100㎍의 스트렙토마이신으로 1.5g/ℓ의 중탄산나트륨, 4.5g/ℓ의 글루코스, 10mM HEPES 및 1.0mM 피루브산나트륨(ATCC 30-2001호)를 함유하고 0.1mM 비필수 아미노산(ATCC 30-2116호), 0.05mM 2-머캅토에탄올(인비트로겐 21985호) 및 10% 혈청(소 태아 혈청, 인비트로겐 16140-071호) 및 페니실린-스트렙토마이신(인비트로겐 15140-122호)이 보충되도록 조정된 2mM L-글루타민을 가지는 RPMI 1640 중에 TK1 세포(ATCC ATCC-CRL-2396호)를 배양하였다. 세포를 0.1% BSA, 10mM HEPES(pH 7) 및 1mM MnCl2가 보충된 DMEM 배지(ATCC 30-2002호)에서 2회 세척하였다. 세포를 4x106개의 세포/㎖의 밀도로 보충된 DMEM 배지 중에 재현탁시켰다.
Nunc Maxisorp 플레이트를 1xPBS 중에 웰마다 100㎕ 중의 웰마다 200ng으로 재조합 인간 MAdCAM-1 Fc 키메라(R&D 6065-MC호)에 의해 코팅하고, 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 이후, 용액을 진탕에 의해 제거하고, 웰마다 1% BSA를 함유하는 250㎕의 PBS에 의해 차단하고, 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 용액을 진탕에 의해 제거하였다. DATK 32(항-마우스 α4β7) 및 펩타이드를 웰마다 50㎕의 최종 용적으로(2배 농도) 연속 희석에 의해 희석하였다. 각각의 웰에, 50㎕의 세포(200,000개의 세포)를 첨가하고, 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 30-45분 동안 항온처리하여 세포 부착을 허용하였다. 플레이트를 보충된 DMEM에 의해 수동으로 3회 세척하였다(세척마다 100㎕). 최종 세척 후, 100㎕/웰의 보충된 DMEM 및 10㎕/웰의 MTT 시약(ATTC 카탈로그 30-1010K호)을 각각의 웰에 첨가하였다. 웰을 자주색의 침전물이 보일 때까지 37℃에서 5% CO2에 의헤 2-3시간 동안 항온처리하였다. 100㎕의 디터전트 시약(ATTC 카탈로그 30-1010K호)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 파라필름에 싸서 증발을 막고, 암소에서 실온에서 밤새 두었다. 플레이트를 5분 동안 진탕시키고, 570㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 용량 반응을 계산하기 위해, 각각의 시험 웰로부터 세포를 함유하지 않는 대조군 웰의 흡광도 값을 공제하였다.
PBMC 기억 T 세포 부착 검정
아라겐 바이오사시언스 인크.(Aragen Bioscience Inc.)(캘리포니아주 모간 힐)사의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 공여자로부터 새로운 CD4+/CD45RO+ 기억 T 세포를 단리하였다. 그레이너 플루오트랙(Greiner Fluotrac) 플레이트(웰마다 100㎕)로 50mM 중탄산나트륨 완충제(pH 9.5, 밤새, 4℃) 중의 500ng/웰에서 부동화된 IgG Fc 포획 항체(당나귀 항 인간)를 사용하여 검정 플레이트를 제조하였다. 플레이트를 차단 완충제(25mM 트리스 HCl(pH 7.5), 150mM NaCl, 1.5% BSA, 0.05% Tween)에 의해 2회 세정하고, 웰마다 200㎕를 사용하여 차단 완충제에 의해 37℃에서 2시간 동안 또는 실온에서 5시간 동안 차단하였다. 차단 완충제를 제거하고, 차단 완충제 중의 400ng/웰의 MAdCAM-1 또는 VCAM-1을 첨가하고, 플레이트를 4℃에서 밤새 항온처리하였다(웰마다 100㎕). 플레이트를 차단 완충제에 의해 2회 세척하고, 200㎕의 결합 배지(DMEM 페놀 레드 무, 10mM HEPES, 1xNa 피류베이트, 1x 글루타민, 그리고 사용 전 1mM MnCl2에 의해 보충)에 의해 1회 세정하였다. 세포를 제조하기 위해, 대략 2500만개의 CD4+/CD45RO+ 기억 T 세포를 혈구계산기를 사용하여 트립판 블루 배제에 의해 계수하여 생존능력 및 세포 계수를 결정하였다. 세포를 50㎖의 원뿔 관으로 옮기고, 10분 동안 1200rpm에서 원심분리하였다. 배지를 호기시키고, 세포 펠렛을 15㎖의 결합 배지 중에 재현탁시켰다. 세포를 다시 원심분리하고, 검정에 사용된 적절한 양의 결합 배지 중에 재현탁시켰다(최종 밀도의 2배로 웰마다 50㎕의 세포). 각각의 웰에, 동일한 용적(50㎕)의 시험 화합물을 첨가하고, 플레이트를 37C, 5% CO2에서 1.5시간 동안 항온처리하였다. 각각의 웰을 결합 배지의 웰당 150㎕에 의해 3회 세정하였다. CyQuant NF 시약을 제조사가 제안한 바대로 준비하고, 100㎕의 CyQuant NF 시약을 웰마다 첨가하였다. 플레이트를 37C, 5% CO2에서 45분 동안 항온처리하였다. 검정 접착 시일을 사용하여 플레이트를 광으로부터 보호하였다. 몰레큘라 디바이시스(Molecular Devices) 제미니(Gemini) EM 형광성 플레이트 판독기(Ex485/Em530, 하부 판독, 판독 민감도 = 20)를 사용하여 형광 강도를 측정하였다. 그래프패드 프리즘(Graph Pad Prism)을 사용하여 IC50 곡선을 생성하고, 비선형 회귀(4개의 매개변수) 알고리즘을 이용하여 곡선을 분석하였다. RFU(Ex485/Em530)에 대한 로그(농도)를 작도하여 IC50 값을 결정하였다.
모의 창자액 ( SIF ) 안정성 검정
모의 창자액(SIF)에서 연구를 수행하여 본 발명의 펩타이드 분자의 창자 안정성을 평가하였다. SIF 시약을 준비하기 위해, 1리터의 물(최종 pH = 6.5)의 최종 용적 중에 0.348g의 NaOH, 3.954g의 인산나트륨 일염기성 일수화물 및 6.186g의 NaCl을 용해시킴으로써 블랭크 FASSIF를 준비하였다. 이 용액에, 24g의 돼지 판크레아틴(시그마 카탈로그 P7545)을 첨가하고 30분 동안 교반하였다(최종 판크레아틴 농도는 2.4%임). 용액을 치즈 천 및 1호 왓트만 필터를 통해 통과시키고, 10㎖의 분취량을 -70℃에서 저장하였다. 반응을 실행하기 위해, 10㎖의 분취량을 37℃에서 해동하고, 125㎕의 분취량을 제거하고 동일한 용적의 블랭크 FASSIF와 혼합하였다. 펩타이드 스톡 용액(100% DMSO 중의 10mM)을 블랭크 FASSIF에서 75배 희석하였다. 희석된 펩타이드의 50㎕의 분취량을 125㎕의 판크레아틴(2.4%) 및 125㎕의 블랭크 FASSIF와 합하여 1% 판크레아틴 및 22μM의 펩타이드의 최종 농도를 생성하였다. 반응물을 37℃에서 항온처리하고, 다양한 시점에서 50㎕의 분취량을 제거하고, 50% 아세토나이트릴, 50% 메탄올, 5% 폼산 및 1㎍/㎖의 내부 표준품을 함유하는 200㎕의 켄칭 용액에 첨가하였다. 켄칭된 샘플을 10분 동안 10,000rpm에서 원심분리하고, 상청액을 LCMS/MS에 의해 분석하였다. 내부 표준품에 대한 화합물의 피크 면적 반응에 기초하여 각각의 시점에 남은 백분율을 계산하였다. 그래프패드를 이용한 1차 지수 감소 방정식에 작도함으로써 반감기를 계산하였다.
창자 세척 검정
적어도 6시간 전에 공복한 랫트로부터 창자 세척 검정 용액을 준비하였다. 동물을 안락사시키고, 턱의 지점으로부터 두덩뼈로 중앙선 절제를 만들었다. 양측에서 전방 흉부 벽에 걸쳐 2개의 절제를 만들어서 복부 및 흉부를 개복하였다. 헤모스테이트(hemostat)를 사용하여 동물의 위의 끝 둘 다를 클램핑하였고, 여기서 식도는 위와 만나고, 위는 십이지장과 만났다. 헤모스테이트를 또한 사용하여 창자 2-3㎝ 아래로 클램핑하였고, 여기서 위는 위는 십이지장과 만났다.
몸으로부터 창자의 20㎝를 분리함으로써 창자 세척 검정 용액을 준비하였다. 20㎝ 분리하면, 끝을 헤모스테이트에 의해 클램핑하고, 절편을 몸으로부터 절단하여, 헤모스테이트가 제거된 절편에 제자리에 남았다. 1㎖의 차가운 식염수를 1㎖의 주사기에 의해 빼냈다. 창자의 한쪽 끝을 붙잡고, 클램프를 제거하였다. 위관영양 바늘의 대략 2-2.5㎝를 창자로 삽입하고, 식염수를 천천히 주입하였다. 글러브 손가락을 사용하여 창자의 길이 아래로 유체를 마사지시켰다. 위관영양 바늘을 제거하고 클램프를 창자의 끝에 다시 위치시켰다. 창자를 똑바로 놓고, q-팁이 창자의 밖의 길이에 위 및 아래로 대략 3-6회 확고히 이어져서 효소를 식염수와 혼합하였다. 창자의 한쪽 끝을 붙잡고, 유체의 일부를 조심스럽게 위에서 아래로 이동시켰다. 클램프를 제거하고, 창자의 이 끝을 얼음에서 작은 웨이 보트(weigh boat)로 놓았다. 창자의 다른 끝을 조심스럽게 집고, 수직으로 붙잡았다. 글러브 손가락으로 이것을 온화하게 쳐서 유체를 용기로부터 짜냈다. 오직 0.5㎖의 차가운 식염수를 사용하여 이전의 단계 식염수 주사 및 유체 조달 단계를 2회 반복하였다. 샘플을 웨이 보트로부터 원심분리 관으로 피펫팅하고, 얼음에 위치시켰다. 모든 창자 세척액 샘플을 10분 동안 12,000xg에서 차가운 원심분리기에서 스핀 다운하였다. 각각의 원심분리된 샘플의 상부로부터의 상청액을 저온관에 피펫팅하고 사용까지 얼음에서 유지시켰다.
상기 기재된 바대로 제조된 창자 세척 검정 용액을 사용하여 창자 세척 검정을 수행하였다. 충분한 양의 랫트 창자 세척액을 해동하였다. 각각의 샘플의 경우, 200㎕의 랫트 창자 세척 유체를 1.5㎖의 에펜도르프 관에 피펫팅하였다(실험에 대한 관의 수 = 시험 펩타이드의 수 x N). 관을 37℃에서 물 욕에서 약 10분 동안 예비 항온처리하였다.
2㎕의 10mM DMSO 스톡을 128㎕의 100mM 트리스(pH 7.5)와 조합함으로써 펩타이드 워킹 용액(2mM)을 준비하였다.
펩타이드 켄칭 용매(50% ACN-50% MeOH-5% 폼산) + IS(5㎍/㎖; 2㎖의 켄칭 용매당 1㎕의 10㎎/㎖의 IS)를 준비하고, 켄칭 플레이트를 준비하고, 얼음에 위치시켰다. T = 0, 10, 20, 30, 60 및 180분 수집 동안 200㎕의 켄칭 용액을 켄칭 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다.
각각의 시험 샘플 및 양성 대조군의 경우, 30㎕의 펩타이드 워킹 용액을 창자 세척 유체의 관에 첨가하였다. 관을 온화하게 와류시키고, 30㎕를 즉시 제거하고, 켄칭 플레이트의 T = 0 웰에서 켄칭하였다(켄칭 용액으로 직접 피펫팅). 이 웰을 증발을 막도록 단단히 덮었다. 30㎕의 분취량을 T = 10분, T = 20분, T = 30분, T = 60분 및 T = 180분에서 제거하고 켄칭하였다. 모든 시점을 수집할 때, 켄칭 플레이트를 10분 동안 10,000rpm에서 원심분리하였다. 150㎕의 각각의 상청액을 폴리프로필렌 96웰 수집 플레이트로 옮겼다. 300㎕의 이동상 A를 각각의 수집에 첨가하고, 각각의 시험 샘플 및 양성 대조군에 남은 펩타이드의 양 또는 농도를 결정하기 위해 LC/MS/MS 분석을 수행하였다.
모의 위액( SGF ) 검정
20㎎의 NaCl, 32㎎의 돼지 펩신(엠피 바이오케미컬즈(MP Biochemicals), 카탈로그 02102599) 및 70㎕의 HCl을 10㎖의 물(최종 pH = 2)에 첨가함으로써 SGF를 제조하였다. SGF의 분취량(각각 0.5㎖)을 37℃에서 예비 가온시켰다. 시험된 각각의 펩타이드의 경우, 반응을 시작시키기 위해, 1㎕의 펩타이드 스톡 용액(DMSO 중의 10mM)을 0.5㎖의 SGF에 첨가하고 완전히 혼합하여서, 최종 펩타이드 농도가 20μM이었다. 반응물을 온화한 진탕에 의해 37℃에서 항온처리하였다. 각각의 시점(0, 15, 30, 60분)에, 50㎕의 분취량을 제거하고, 0.1% 폼산을 함유하는 200㎕의 아세토나이트릴에 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 샘플을 실험의 종료까지 4℃에서 저장하고, 5분 동안 10,000rpm에서 원심분리하였다. 상청액의 분취량을 제거하고, 내부 표준품을 함유하는 증류수로 1:1 희석하고, LCMS/MS에 의해 분석하였다. 내부 표준품에 대한 시험 화합물의 피크 면적 반응에 기초하여 각각의 시점에 남은 백분율을 계산하였다. 0 시간은 100%로 설정되고, 0 시간에 대해 모든 후의 시점을 계산하였다. 그래프패드를 이용한 1차 지수 감소 방정식에 작도함으로써 반감기를 계산하였다.
혈장 안정성 검정
0.5㎖의 랫트 혈장(펩타이드마다 1개의 관, 용적은 얼마나 많은 시점이 수집되는지에 따라 달라짐, 시험마다 50㎕)을 96웰 폴리프로필렌 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 관을 온화한 진탕에 의해 37℃로 설정된 가열된 물 욕 중에 항온처리하였다. 1㎕의 10mM 펩타이드 스톡 용액을 각각의 관에 첨가하고, 이후 200㎕의 아세토나이트릴과 함께 0.1% 폼산을 각각의 관에 첨가하였다(1:4). 샘플을 하기 시점에 수집하였다: 0, 10, 30, 45, 60, 120, 180분. 모든 시점을 수집할 때, 플레이트를 5분 동안 5000rpm에서 원심분리하였다. 100㎕의 각각의 샘플을 96웰 깊은 플레이트의 적절한 웰에 피펫팅함으로써 LCM 분석을 수행하였다. 100㎕의 내부 표준 펩타이드(1㎍/㎖)를 각각의 웰에 이동상 A 중에 첨가하였다. 플레이트를 와류하고 주입하였다.
다이티오트레이톨 ( DTT ) 산화환원 안정성 검정
시험된 각각의 펩타이드에 대해, DMSO 중의 5㎕의 10mM 펩타이드 스톡 용액을 1㎖의 100mM 트리스-Cl(pH 7.5)(최종 펩타이드 농도는 50μM임)에 첨가함으로써 DTT 안정성 검정을 수행하였다. 0분 시간에, 5㎕의 새로 해동된 100mM DTT 용액을 펩타이드를 함유하는 항온처리 관에 첨가하여서, 최종 DTT 농도는 0.5mM이었디. 반응물을 실온에서 항온처리하였다. 120분까지의 상이한 시점(20분, 40분, 80분, 120분)에, 50㎕의 분취량을 제거하고, 10㎕의 5M 아세트산을 첨가함으로써 반응물을 켄칭하였다. 모 펩타이드의 사라짐을 측정하기 위해, 역상 HPLC 및 220㎚에서의 UV 흡광도에 의해 켄칭된 샘플(30㎕)을 분석하였다. 남은 산화된 분획을 시간에 대해 그래프 표시하고, 엑셀을 이용한 1차 지수 감소 방정식에 작도함으로써 반감기를 계산하였다.
시스테인/시스틴 산화환원 안정성 검정
4.545㎕의 10mM 펩타이드 DMSO 스톡을 495.45㎕의 100mM 트리스-Cl(pH 7.5)에 첨가함으로써 펩타이드를 90μM으로 희석하였다. 75㎕의 분취량을 96웰 플레이트의 칼럼 아래의 8개의 웰로 옮겼다. 100mM 트리스-Cl(pH 7.5) 중의 20㎕의 2.5mM 시스틴을 각각의 웰에 첨가하였다. 100mM 트리스-Cl(pH 7.5) 중의 시스테인 스톡 용액을 하기 농도에서 새로 제조하였다: 400mM, 200mM, 80mM, 44mM, 22mM, 11mM, 5.5mM 및 블랭크. 0시간에, 25㎕의 각각의 시스테인 스톡 용액을 55㎕의 시스틴/펩타이드 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 40분 동안 항온처리하였다. 샘플을 20㎕의 5M 아세트산을 첨가함으로써 켄칭하고, 역상 HPLC에 의해 분석하였다. 산화된 펩타이드의 분획은 계산하고, Nernst 방정식에 의해 결정된 바대로 계산된 산화 환원 전위(oxidation reduction potential; ORP)에 대해 작도된다. 산화된 펩타이드의 절반이 남은 ORP가 하기 기재되어 있다.
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표 3은 본 발명의 다양한 펩타이드 단량체 및 이량체의 효력, 선택도 및 안정성을 입증하는 데이터를 제공한다. 펩타이드 단량체 또는 펩타이드 이량체 소단위의 아미노산 서열은 왼쪽으로부터 오른쪽으로 N 말단으로부터 C 말단으로 표시되고 서열 식별자 번호에 확인된 표 3A에 제공된다. 각각의 펩타이드에 대한 수반된 데이터는 표 3B 및 표 3C에 기재되어 있다. 이량체는 괄호와 뒤이은 첨자 2로 표시된다. N 말단 및 C 말단 기는 각각 예를 들어 Ac 및 NH2로 표시된다. 이량체는 이들의 단량체 소단위의 C 말단에서 연결되고, 링커는 펩타이드 서열의 오른쪽에 표시된다. 펩타이드 서열의 각각은 4번 위치 및 10번 위치에 위치한 아미노산 잔기, 예를 들어 Pen 및 Pen 사이의 다이설파이드 연결을 포함한다. 표 4는 본 발명의 펩타이드 단량체 화합물 및 펩타이드 이량체 화합물의 더 높은 효력, 선택도 및 안정성을 입증하는 필적하는 데이터를 제공한다. 펩타이드 단량체 또는 펩타이드 이량체 소단위의 아미노산 서열은 오른쪽으로부터 왼쪽으로 N 말단으로부터 C 말단으로 표시되고 서열 식별자 번호에 확인된 표 4A에 제공된다. 각각의 펩타이드에 대한 수반된 데이터는 표 4B 및 표 4C에 기재되어 있다. 이량체는 괄호와 뒤이은 첨자 2로 표시된다. N 말단 및 C 말단 기는 각각 예를 들어 Ac 및 NH2로 표시된다. 도시된 펩타이드 서열의 각각은 4번 위치 및 10번 위치에 위치한 아미노산 잔기, 예를 들어 Pen 및 Pen 사이의 다이설파이드 연결을 포함한다. 안정성 검정 데이터의 경우, 다양한 시간의 기간 동안 검정을 수행하여, t1/2가 소정의 값보다 크다는 것의 표시는 반감기가 결정되기 전에 검정이 그 시간에 중단되었다는 것을 의미한다. 2개의 Pen 잔기를 포함하는 펩타이드에 대해 데이터가 표시되지 않은, DTT 검정의 경우, 예측된 DTT 검정 안정성은 2시간 초과이다.
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실시예 3
생화학 및 세포 결합 검정에서의
예시적인 펩타이드 이량체 분자의 규명
본 발명의 소정의 실시형태는 하기 기재된 아미노산 서열을 각각 가지는 2개의 펩타이드 단량체 소단위의 α4β7 인테그린 길항제 펩타이드 이량체에 관한 것이다:
Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-[Phe(4-tBu)]-(β-호모Glu)-(D-Lys).
2개의 펩타이드 단량체 소단위는 각각의 펩타이드 단량체 소단위에 존재하는 2개의 Pen 잔기 사이에 분자간 다이설파이드 결합을 각각 함유한다. 2개의 펩타이드 단량체 소단위의 각각은 N 말단 아세틸기를 함유하고, 2개의 펩타이드 단량체 소단위는 DIG 링커에 의해 이들의 C 말단의 각각에 이량체화되어 하기 도해된 본 명세서에 펩타이드 X라 칭하는 펩타이드 이량체를 생성한다:
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-(β-호모Glu)-(D-Lys)]2-DIG.
시험관내 생화학 및 세포 결합 검정을 수행하여 펩타이드 X를 추가로 규명하였다.
생화학 및 세포 결합 검정
α4β7 및 α4β1 인테그린에 대해 생화학 경쟁 ELISA 검정을 수행하였다. α4β7에 대한 ELISA 검정은 부동화된 α4β7에 대한 MAdCAM-1의 결합에 기초하지만, α4β1 ELISA는 부동화된 VCAM-1에 대한 가용성 α4β1의 결합에 의존한다. 이들 검정은 실시예 2에 기재되어 있다. 1mM Mg2 + 결합 조건 하에, 펩타이드 X에 대한 IC50은 α4β7 및 α4β1에 대해 각각 3nM 및 10,000nM 초과였다. 또한, 펩타이드 X에 대한 IC50은 α4β1 및 αLβ2 둘 다에 대해 100μM 초과였다. α4β7 T 세포에 대한 펩타이드 X의 IC50은 1nM이었다.
펩타이드 X는 또한 α4β7 인테그린을 발현하는 형질전환된 세포주에 대한 MAdCAM-1의 부착을 차단하였다. MAdCAM-1에 대한 인간 B 세포 림프아구 RPMI8866 또는 마우스 T 세포 TK1 세포주의 부착을 차단하기 위한 펩타이드 X IC50은 각각 0.72nM 및 0.50nM이었다.
펩타이드 X는 세포 부착 검정에서 매우 선택적이었다. 인간 주카트 세포주는 각각 VCAM-1 또는 ICAM-1에 특이적 접착을 위해 α4β1 및 αLβ2 인테그린 둘 다를 발현한다. 주카트/VCAM-1 또는 주카트/ICAM-1 세포 부착 검정에서, 펩타이드 X는 시험된 최대 농도(IC50>100,000nM)에서 불활성이었다. 종합하면, 이 결과는 펩타이드 X가 α4β7에 특이적이고, α4β1 및 αLβ2 인테그린을 차단하지 않는다는 것을 나타낸다.
펩타이드 X는 또한 인간 PBMC 공여자로부터 단리된 기억 T 세포의 부착을 차단하였다. 펩타이드 X는 MAdCAM-1에 대한 기억 T 세포의 부착을 차단하였다. 펩타이드 X 평균 IC50은 4개의 상이한 공여자로부터 단리된 세포를 사용하여 1.3nM이었다. 반대로, 펩타이드 X는 α4β1 및 αLβ2에 특이적인 세포 부착 검정에서 시험된 최고 농도에서 불활성이었다(표 5).
Figure pct00048
펩타이드 X의 결합 특성을 추가로 평가하기 위해 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance; SPR)을 이용하였다. PEG 링커를 통해 펩타이드 X에 부착된 바이오틴 기를 함유하는 펩타이드 X의 유사체(펩타이드 X-바이오틴)를 합성하였다. 펩타이드 X와 밀접히 연관된 하기 구조를 가지는 또 다른 펩타이드 이량체를 또한 합성하고 바이오틴 표지하였다:
(Ac-Pen-(N-Me-Arg)-S-D-T-L-Pen-W-E-k-NH2)2-DIG
(펩타이드 Z).
베돌리주맙을 또한 화학적으로 바이오티닐화하였다. 펩타이드 X-바이오틴, 펩타이드 Z 바이오틴 또는 바이오틴 표지된 베돌리주맙 항체를 스트렙타비딘 코팅된 SPR 칩에 부동화하고, 가용성 α4β7 인테그린의 결합을 측정하였다. 센서그램은 α4β7 인테그린으로부터의 펩타이드 X-바이오틴의 해리에 계산된 반감기가 667분 또는 약 11시간이라는 것을 나타낸다. 이 반감기는 꽤 길고, 인테그린에서의 결합 Mn2+ 금속 이온과 펩타이드 사이의 단단한 결합에 의해 생길 수 있다. 이 SPR 연구는 펩타이드 X-바이오틴에 대한 KD가 바이오틴 표지된 베돌리주맙에 대한 것(59nM; 표 6)보다 3.8배 낮은 15nM이라는 것을 또한 보여준다. 또한, 펩타이드 X-바이오틴에 대한 KD는 펩타이드 Z 바이오틴에 대한 것보다 실질적으로 낮았다. 결론으로, 이 데이터는 펩타이드 X에 대한 결합 상수가 항체 베돌리주맙 또는 밀접히 관련된 펩타이드 이량체에 대한 것보다 우수하는 것을 나타낸다. 펩타이드 X-바이오틴의 Kon/Koff는 SPR에 의해 베돌리주맙의 것에 필적하거나 우수하였다.
Figure pct00049
쉴드(Schild) 분석을 이용하여 펩타이드 X가 단순한 경쟁적 기전에 의해 α4β7 인테그린에 대한 MAdCAM 결합을 차단하는지를 결정하였다. ELISA에 의해 상이한 펩타이드 X 농도에서 부동화된 α4β7 인테그린 단백질에 대한 가용성 MAdCAM의 결합을 측정하고, 결과는 길항작용이 증가하는 MAdCAM 농도에 의해 극복 가능하다는 것을 보여준다. 이 결과는 α4β7 인테그린에 대한 펩타이드 X의 결합이 가역적이라는 것을 나타낸다. 용량-반응 이동에 기초하여, 전체 피트 쉴드 분석을 이용하여 쉴드 기울기 및 평행 해리 상수(KB)를 결정하였다. 기울기는 약 1이고, 이것은 저해가 알로스테릭 길항작용이 아니라 MAdCAM에 대해 오쏘스테릭 길항작용이라는 것을 나타낸다. 이것은 펩타이드 X 및 MAdCAM이 α4β7 인테그린에서 동일한 부위에 결합한다는 것을 제안한다. 예상된 KB 값은 1nM이고, 이것은 상이한 검정에서 다른 펩타이드 X 효력 값과 유사하였다.
시험관내 FACS 연구
인간 혈액에서의 펩타이드 X의 선택도를 추가로 평가하기 위해, 형광성 염료 알렉사 647을 바이오틴을 부착하기 위해 사용된 동일한 위치에서 펩타이드 X에 접합하였다. 펩타이드 X 알렉사 647 접합체(펩타이드 X-알렉사647)는 RPMI8866/MAdCAM 세포 부착 검정에서 활성이었다(IC50 = 0.15nM). 헤파린화 인간 전혈을 1mM MnCl2로 보충하고, 펩타이드 X-알렉사647 접합체 또는 바이오티닐화 베돌리주맙에 의해 실온에서 1시간 동안 염색하였다. 샘플을 고정하고(적혈구 용해), 세척하였다. 실온에서의 30분 동안의 염색을 위해 베돌리주맙 샘플을 스트렙타비딘 알렉사 647에 의해 분리하여 염색하였다. FACS 분석을 이용하여 NK 세포, 호염구, 단핵구, 호산구, 호중구, CD4 미경험 T 세포, CD4 기억 T 세포, CD8 미경험 T 세포, CD8 기억 T 세포 및 B 세포를 포함하는 광범위한 일련의 세포 유형에 대한 펩타이드 또는 베돌리주맙의 결합을 평가하였다. 도 10은, 1mM MnCl2의 존재 하에 인간 전혈과 항온처리된, 펩타이드 X-알렉사 647, 또는 알렉사 플루오르 647에 접합된 베돌리주맙의 결합 특이성을 보여준다. 표 3은 베돌리주맙 및 펩타이드 X의 결합 특이성이 전혈에서 거의 동일하다는 것을 보여준다. 표 7에 기재된 베돌리주맙에 대한 결합 특이성은 또한 문헌에 보고된 것과 매우 유사하였다(Soler et al, JPET 330:864-875, 2009).
Figure pct00050
FACS에 의해 사이노몰거스 원숭이로부터의 혈액을 또한 분석하였다. 이 연구는 α4β7을 발현하는 세포가 베돌리주맙 및 펩타이드 X에 동시에 결합할 수 있다는 것을 보여준다. 따라서, 펩타이드 X는 베돌리주맙에 대한 결합 부위와 구별되는 α4β7에서의 부위에 결합한다.
cyno 혈액에서의 αEβ7 인테그린에 대한 결합을 또한 시험하였다. cyno 혈액을 1nM 펩타이드 X-알렉사 647과 항온처리하고, FACS에 의해 α4β7 또는 αEβ7을 발현하는 세포를 분석하였다. CD4 기억 T 세포의 경우, 펩타이드 X-알렉사 647은 αEβ7+ 세포가 아니라 α4β7+에 결합하였다. α4β7이 많은 초과(1μM)의 비표지된 펩타이드 X의 존재 하에 차단될 수 있으므로 이에 대한 결합은 특이적이었다. 따라서, 이 조건 하에, 펩타이드 X가 αEβ7이 아니라 α4β7에 결합한다고 결론지어졌다.
실시예 4
예시적인 펩타이드 이량체 분자의 생체내 규명
사이노몰거스 원숭이에서의 약물동력학 연구 및 DSS 결장염의 마우스 모델에서의 효능 연구를 포함하는 동물 연구에서 펩타이드 X의 생체내 약물동력학 및 효능 특징을 또한 결정하였다.
사이노몰거스 원숭이에서의 약물동력학 연구
펩타이드 X의 경구 투여 후 조직 노출을 결정하기 위해, 사이노몰거스 원숭이에 8일 동안 12.5㎎/㎏, 25㎎/㎏ 또는 75㎎/㎏로 펩타이드 X를 PO QD 투약하였다. 비히클은 50mM 인산염 완충제(pH 7)이었다. cyno에서의 경구 생체이용률(%F)은 약 0.3%이었다. 샘플을 마지막 투약 후 4시간에 수집하였다. 펩타이드 X 수치는 질량 분광법에 의해 측정되고, nM 단위로 표 8에 기재되어서, 펩타이드 X 노출이 혈장과 비교하여 창자 조직에서 훨씬 더 크다는 것을 입증한다.
Figure pct00051
더 고등의 종에서의 펩타이드 X의 생체내 특성을 추가로 평가하기 위해, 사이노몰거스 원숭이에 7일 동안 펩타이드 X를 투약하였다. 투약은 매일 경구(코위삽관)였다. PK 및 PD 분석을 위해 전혈(약 3.5㎖)을 0일(투약 전) 및 6일(마지막 투약 후 1시간)에 수집하였다. 6일에, 투약되지 않은 동물로부터 혈액을 또한 수집하였다. PD를 위해, FACS 분석을 이용하여 수용체 점유, α4β7 발현의 하향조절 및 인테그린 α4β7을 발현하는 T 세포의 순환 수치를 측정하였다. 표 9는 시험 그룹의 체계화를 보여준다.
Figure pct00052
FACS 분석을 위해, cyno로부터의 헤파린화 전혈을 (1) 펩타이드 X 처리된 샘플에서의 α4β7 수용체 점유의 정도; 및 (2) 순환하는 α4β7+, αEβ7+ 및 α4β7+αEβ7+ 림프구 하위세트의 존재비를 평가하기 위해 항체의 2개의 패널의 각각에 의해 염색하였다. 수용체 점유 및 인테그린 발현을 기억 CD4 T 세포, 미경험 CD4 T 세포 및 B 세포 내에서 평가하였다. 수용체 점유를 평가하기 위해, 전혈 샘플을 처음에 펩타이드 X 결합을 허용하도록 1mM MnCl2에 의해 처리하고, 이후 α4β7 수용체를 완전히 점유(즉, 차단)시키도록 1μM의 비표지된 펩타이드 X와 같이/이것 없이 예비 항온처리하였다. 차단 샘플 및 비차단 샘플을 1nM의 알렉사 647 표지된 펩타이드 X에 의해 염색한 후, α4β7, CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대해 항체에 의해 염색하였다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어졌다. 인테그린 발현 및 세포 하위세트 존재비를 평가하기 위해, 전혈 샘플을 CD45, CD4, CD45RA 및 CD19에 대한 항체 이외에, α4, β7 및 αE에 대한 항체에 의해 염색하였다. 샘플을 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정하도록 처리한 후, 제2단계 시약(스트렙타비딘-BV421)에 의한 염색 및 세척 단계가 이어졌다. 모든 염색된 샘플을 유세포측정법에 의해 분석하고, 절대 세포 계수의 계산을 허용하도록 일정한 샘플 용적을 수집하였다.
도 14는 혈액에서의 수용체 점유 백분율이 경구 용량에 따라 증가하고, 수용체 점유가 최고 용량에서 90%를 초과한다는 것을 보여준다.
도 15는 각각의 동물에 대한 펩타이드 X 혈장 농도에 대한 수용체 점유 백분율을 보여준다. 외삽에 의해, 약 0.35nM의 펩타이드 X 혈장 농도가 혈액에서의 α4β7 수용체의 50%를 점유하기에 충분한 것으로 예상되었다.
도 16은 CD4 기억 T 세포에서의 α4β7 발현이 모든 용량에서 감소한다는 것을 보여준다. 이것은 α4β7의 약간의 내재화를 유도하는 펩타이드 X의 결합과 일치한다.
순환하는 α4β7+ 기억 T 세포의 수치를 또한 측정하였다. 도 17은 펩타이드 X 투약이 전체 CD4 세포로 정규화된 α4β7+ 기억 T 세포의 백분율을 증가시켰다는 것을 보여준다. 이것은 마우스 연구와 유사하였다. 장으로의 α4β7+ 기억 T 세포의 호밍의 차단은 혈액으로의 이의 재분포화를 발생시켰다.
DSS 마우스에서의 α4β7 기억 T 세포의 통행에 대한 펩타이드 X의 영향
기억 T 세포 통행에 대한 펩타이드 X의 영향이 마우스 DSS 결장염 모델에 기재되어 있다. 이 연구는 펩타이드 X가 α4β7 기억 T 세포를 장 림프구성 조직으로부터 혈액 및 비장으로 바꿈으로써 T 세포 호밍에 영향을 미친다는 것을 보여준다.
동물이 일반 음용수로 이동할 때, 0일로부터 5일로 3% DSS 처리된 음용수에 대한 노출에 의해 C57BL/6 수컷 마우스(군마다 10마리의 동물)에서 결장염을 유도하였다. 매일, 동물 사망을 기록하고, 생존한 동물을 체중재고 설사 및/또는 혈변의 존재에 대해 가시적으로 평가하였다. 9일에 희생 직후, 비디오 내시경술을 이용하여 결장염 중증도를 평가하고, 그룹 동일성에 맹검인 관찰자가 생성된 영상을 결장염 중증도에 대해 점수매겼다.
0일에 시작하여, 마우스는 비히클/샴 대조군(그룹 1) 또는 펩타이드 X(그룹 2: 10㎎/㎏, PO, BID)의 1일 2회 경구 용량을 받았다. 9일에, 오직 AM 치료 용량을 투여하였다. 동물에 또한 그룹 2에서의 0.2㎎/㎖의 농도로 음용수에서 펩타이드 X를 투여하였다. 그룹 1 및 2에 대한 음용수 병 중량을 측정하고, 물 소비량을 사용하여 음용수를 통해 섭취된 펩타이드 용량을 예상하였다. 매일의 물 소모에 기초하여, 경구 위관영양 및 음용수의 조합으로부터 평균 매일의 펩타이드 X 용량은 49㎎/㎏인 것으로 예상되었다.
마우스를 위관영양 용량 투여의 마지막 후 대략 4시간에 9일에 희생시켰다. 각각의 동물로부터 비장, 파이어판(PP), 장간막 림프절(MLN) 및 혈액을 수집하고 TH 기억 세포에서 α4 및 β7 발현의 FACS 분석을 위해 처리하였다. 동일 날짜에 제거(takedown) 및 FACS 분석이 발생했다.
이 연구는 펩타이드 X에 의한 처리가 체중 감소, 유체 흡수, 결장 중량 또는 길이, 또는 혈변 및 설사의 존재(데이터 비기재)에 대해 무의미한 영향을 가진다는 것을 보여준다. 펩타이드 X에 의한 처리는 내시경술 점수에 유의미한 영향을 가져서, 점수를 2.60±1.6(비히클)으로터 1.78±1.5(펩타이드 X)로 32% 감소시켰다(평균 ± SD; 도 8). 내시경술 영상의 가시적인 평가는 펩타이드 X가 대조군과 비교하여 결장 무름을 감소시키고 비히클 점막 치유를 개선한다는 것을 나타낸다(도 9).
펩타이드 X에 의한 처리는 혈액 및 비장에서 기억 T 세포 집단에 유의미한 영향을 가졌다(도 10). 1㎖ 혈액당 전체 α4β7 기억 세포의 42% 증가(10A) 및 비장으로부터 회수된 전체 α4β7 기억 세포의 73% 증가(10B)가 있었다. 혈액 및 비장 둘 다에 대해, (TH 세포의 백분율로서) 기억 세포 및 전체 기억 세포의 수의 유의미한 증가가 또한 있었다. 혈액 또는 비장에서 세포의 전체 수에서 무의미한 차이가 관찰되었다.
펩타이드 X에 의한 처리는 MLN 및 파이어판에서 α4β7+ 기억 T 세포 집단에 대해 유의미한 영향을 가졌다(도 11). 비히클 대조군과 비교하여, 각각 MLN(11A) 및 파이어판(11B)에서 전체 세포에 비해 α4β7+ 기억 세포의 백분율의 23% 및 55% 감소가 있었다.
PK 측정을 위해, 마지막 AM 투약 후 약 4시간에 근위 및 원위 결장으로부터의 결장 절편을 수집하고 질량 분광법에 의해 분석하였다. 근위 결장에서의 노출은 원위 결장에서의 노출보다 대략 3배 높았다(도 12). 혈액 중의 펩타이드 X의 농도는 각각 근위 및 원위 결장과 비교하여 84배 및 31배 더 낮았다. 그럼에도 불구하고, 이 시점에서, 혈장 농도는 MAdCAM에 대한 α4β7 결합을 차단하기 위해 펩타이드 IC50 값보다 약 80배 높았다.
추가적인 DSS 결장염 연구를 수행하고, 이것은 펩타이드 X에 의한 처리가 장 림프구성 조직에서 α4β7+ T 세포를 감소시키고 이들을 혈액으로 재지향시켰다(도 13). 이 9일 DSS 결장염 연구에서, C57BL/6 마우스를 1일로부터 6일로 3% DSS에 의해 처리하고, 10일까지 일반 물로 전환시켰다. 매일의 투약은 PO BID와 펩타이드 X에 대한 음용수이고, 항-α4β7 항체 DATK32에 대해 3일마다 25㎎/㎏ IP이었다. PP 및 혈액을 수집하고, α4β7+ 기억 T 세포의 수치를 FACS에 의해 분석하였다.
만성 DSS 결장염 마우스 모델에서의 펩타이드 저해제의 효능
결장염을 치료하는 데 있어서의 본 발명의 펩타이드의 효능을 추가로 평가하기 위해, 만성 DSS 결장염 마우스 모델을 사용하여 비히클 대조군 또는 항체, MECA 367 및 DATK32와 비교하여 경구로 투여된 펩타이드 X 또는 펩타이드 XX인 또 다른 펩타이드의 영향을 조사하였다. 펩타이드 XX는 하기 구조를 가지는 이량체(여기서, DIG는 이들의 C 말단에 의해 2개의 펩타이드 단량체를 연결함)이다:
[Ac-Pen-(N-Me-Arg)-S-D-T-L-Pen-W-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG.
이 15일 만성 DSS 결장염 연구에서, BALB/c 마우스를 2.5% DSS에 의해 연속적으로 처리하였다. 펩타이드 X 투약은 음용수 중에 55㎎/㎏/일, 17㎎/㎏/일 또는 6㎎/㎏/일이었다. 펩타이드 XX 투약은 10㎎/㎏의 PO BID와 음용수 중에 0.2㎎/㎖이었다. 항-α4β7 Ab DATK32를 3일마다 25㎎/㎏ IP 투약하고, 항-MAdCAM Ab MECA 367을 매일 8㎎/㎏ IP 투약하였다. 제거 후, 원위 결장 절편을 조직병리학을 위해 고정하고, 항-β7 항체 M293을 사용한 β7+ 세포 IH에 대한 염색에 처리하였다.
도 18은 펩타이드 XX가 쥣과 15일 만성 DSS 모델에서 항체와 필적하는 결장 거시적인 및 조직병리학 점수를 감소시킨다는 것을 보여준다.
도 19는 펩타이드 XX가 원위 결장의 프로프리아층으로의 B7+ 세포의 침윤을 감소시킨다는 것을 보여준다.
도 22는 펩타이드 X의 모든 용량이 원위 결장의 프로프리아층으로의 B7+ 세포의 침윤을 감소시킨다는 것을 보여준다.
정상 C57BL6 마우스(n = 군마다 2마리의 마우스)에 대한 비히클 또는 10㎎/㎏ 또는 90㎎/㎏의 알렉사 488에 접합된 펩타이드 X의 경구 투여 후 형광 영상화를 수행하였다. 마우스를 투약 후 3시간에 수확하고, 하기 조직을 수집하였다: 근위 창자의 3.8㎝ 및 원위 결장의 3.8㎝. 샘플을 PFA 중에 고정하고 OCT 중에 동결시키고, 포말린 고정하고 파라핀 포매하였다. 5마이크론 슬라이스를 DAPI 대조염색하여 핵을 가시화하고 40X에서 형광 현미경관찰로 처리하였다.
비히클 처리된 동물은 소장 또는 결장에서의 형광 신호를 나타내지 않았다. 10㎎/㎏ PO 처리된 동물은 낭(선상 세포)에 응집된 채 소장에서 신호를 나타냈다. 90㎎/㎏ PO 처리된 동물은 상피, 간질성 세포 및 선상 세포의 약한 신호, 및 소장의 점막에서 낭 및 선상 세포에서의 신호의 더 강한 응집체를 나타냈다. 약한 신호가 결장의 상피에 존재하였다.
PFA 고정된 조직의 항-알렉사 488 항체를 사용하여 면역조직화학에 의해 소장 샘플을 또한 조사하였다. 도 21에 도시된 바대로, 10㎎/㎏ 또는 90㎎/㎏의 알렉사 488에 접합된 화합물 X에 의해 처리된 동물의 프로프리아층 및 간질성 세포에 걸쳐 화합물 X 염색이 관찰되었다.
이 실시예는 본 발명의 펩타이드 X 및 다른 펩타이드가 최소 전신 노출로 α4β7 인테그린의 선택적 경구 펩타이드 길항제이고, IBD의 쥣과 모델에서 T 세포 호밍을 차단하고 점막 손상을 막는 데 효과적이라는 것을 확립하였다. 펩타이드 X 및 임상적으로 검증된 항-α4β7 항체 베돌리주맙이, 세포 부착 및 인간 CD4+ 기억 T 세포에 대한 결합을 포함하는, 다양한 검정에서 필적하는 효력 및 선택도를 가진다. 정상 또는 덱스트란 황산 나트륨(DSS) 처리된 마우스 및 랫트에서의 PK 연구는 경구 투약이 소장, 파이어판, 결장 및 장간막 림프절(MLN)의 현저한 약물 노출, 그러나 무의미한 측정 가능한 혈액 및 뇨 수치를 발생시킨다는 것을 보여준다. 내인성 기억 T 세포의 통행에 대한 경구 투약의 영향을 측정하기 위해, DSS 마우스에 9일 동안 펩타이드 X를 매일 경구로 투약하고, FACS에 의해 수확된 조직을 분석하였다. FACS 분석은 MLN 및 파이어판에서의 CD4+ CD44high CD45RBlow β7+ T 세포의 용량 의존적 감소, 및 비장 및 혈액의 동시적 증가를 나타냈다. 내시경술에 의해 평가된 바대로 체중 감소 및 점막 손상의 용량 의존성 감소가 또한 존재하였다. 펩타이드 X는 다양한 위장관(GI)액, 대사성 효소 및 창자 박테리아에 안정성을 또한 나타냈다. 펩타이드 X는 α4β7 인테그린에 선택적인 효과적인 경구 길항제인 것으로 나타났다. 쥣과 결장염 모델에서, 펩타이드 X 및 유사한 유사체는 T 세포 통행을 차단하고, 조직병리학을 경로 특이적 항체와 유사한 수치로 감소시켰다. 사이노몰거스 원숭이의 혈액에서, 펩타이드 X는 혈액 수용체 점유를 포화시키고 α4β7 CD4 T 세포의 순환 수치를 증가시켰다. 펩타이드 X의 낮은 혈액 노출 및 높은 GI 노출은 이것이 장 림프구성 구획 내에 국소로 작용하여 기억 T 세포 병리학을 차단한다는 것을 제안한다.
본 명세서에 기재된 모든 공보 및 특허 출원은 그 전문이 참고문헌으로 본 명세서에 포함된다.
본 발명은 본 명세서에 광범위하게 기재되고 이하 청구된 바와 같은 이의 구조, 방법, 또는 다른 필수적인 특징으로부터 벗어나지 않으면서 다른 구체적인 형태로 구현될 수 있다. 기재된 실시형태는 모든 면에서 오직 예시적이고 제한적이 아닌 것으로 생각되어야 한다. 본 발명의 범위는 따라서 이전에 설명에 의하기보다는 첨부된 청구항에 의해 표시된다. 청구항의 균등물의 의미 및 범위 내에 있는 모든 변화는 이의 범위 내에 포함되어야 한다.

Claims (41)

  1. 하기 화학식 (I)의 2개의 연결된 단량체 소단위(linked monomer subunit)를 포함하는 펩타이드 이량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
    (화학식 (I))
    식 중,
    Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
    Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
    Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
    Xaa4는 Pen 또는 Cys이고;
    Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노구아니디노), Phe(4-카보밀), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
    Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
    Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cba, 호모Leu, Cpa, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa10은 Pen이고;
    Xaa11은 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa13은 부재하거나, Pro, 또는 임의의 아미노산이고; 그리고
    Xaa14는 아민 측쇄, Lys, D-Lys, N-Me-Lys, D-N-Me-Lys, Orn, Dab, Dap, 호모Lys, D-Dap, D-Dab, D-Orn, Cys, 호모Cys, Pen, D-호모Cys, D-Cys, D-Pen, Asp, Glu, D-Asp, D-Glu 및 호모Ser, 호모Glu, D-호모Glu, N-Me-Glu, N-Me-Asp, N-Me-D-Glu 및 N-Me-D-Asp를 가지는 임의의 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    여기서,
    Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀아미노) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    Xaa13은 Pro이고; 그리고
    펩타이드 이량체 화합물의 하나 또는 둘 다의 단량체 소단위는 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합을 포함하는, 펩타이드 이량체 화합물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 2개의 단량체 소단위를 연결하는 링커 모이어티를 추가로 포함하고, 상기 링커 모이어티는 임의로 DIG, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, IDA-Boc, IDA-아이소발레르산, 트라이아진, 트라이아진-Boc, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐아세트산, 3-페닐프로피온산, 숙신산, 바이오틴, 글루타르산, 아젤라산, 피멜린산, 도데칸다이온산, 지방족 아미노산, 방향족 아미노산, 헤테로방향족, 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글라이콜, 이작용성 링커, N-하이드록시 숙신아민(NHS) 활성화 다이에스터 및 비스-말레이미드로 이루어진 군으로부터 선택된, 펩타이드 이량체 화합물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 각각의 단량체 소단위의 N 말단은 N 말단 이량체 화합물을 제공하도록 상기 링커 모이어티에 의해 연결된, 펩타이드 이량체 화합물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 각각의 단량체 소단위의 C 말단은 C 말단 이량체 화합물을 제공하도록 상기 링커 모이어티에 의해 연결된, 펩타이드 이량체 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Xaa5는 N-Me-Arg인, 펩타이드 이량체 화합물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, Xaa6은 Ser이고/이거나, Xaa7은 Asp이고/이거나, Xaa8은 Thr이고/이거나, Xaa9는 Leu인, 펩타이드 이량체 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 또는 Phe(4-tBu)인, 펩타이드 이량체 화합물.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    Xaa5는 N-메틸-Arg이고;
    Xaa6은 Ser이고;
    Xaa7은 Asp이고;
    Xaa8은 Thr 또는 Val이고;
    Xaa9는 Leu이고;
    Xaa11은 Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3). Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐 Ala, Tic, β-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Tyr(Me) 및 호모Phe로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa12는 임의의 방향족 아미노산, Glu, D-Glu 및 베타-호모Glu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa13은 부재하고;
    Xaa14는 D-Lys, N-Me-Lys 및 D-N-Me-Lys로 이루어진 군으로부터 선택된, 펩타이드 이량체 화합물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 소단위 둘 다는
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys); 또는
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)의 서열 중 하나를 포함하고,
    상기 소단위는 이의 C 말단을 통해 연결된, 펩타이드 이량체 화합물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 소단위 둘 다는
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu); 또는
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu의 서열 중 하나를 포함하고,
    상기 소단위는 이의 N 말단을 통해 연결된, 펩타이드 이량체 화합물.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 소단위는 DIG 링커를 통해 연결된, 펩타이드 이량체 화합물.
  12. 제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물은
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-NH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-OH2]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH]2-DIG;
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH]2-DIG; 또는
    [Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-OH]2-DIG의 구조 중 하나를 가지는, 펩타이드 이량체 화합물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물은 아세테이트 염인, 펩타이드 이량체 화합물.
  14. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물은 C 말단 OH인, 펩타이드 이량체 화합물.
  15. 제1항에 있어서, Xaa3, Xaa5, Xaa7-Xaa9 및 Xaa11-Xaa13으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 N(알파)메틸화를 추가로 포함하는, 펩타이드 이량체 화합물.
  16. 제1항에 있어서, Xaa1-Xaa3 및 Xaa11-Xaa14로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 아실화를 추가로 포함하는, 펩타이드 이량체 화합물.
  17. 제1항에 있어서, Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, Xaa3은 Ac인, 펩타이드 이량체 화합물.
  18. 제1항에 있어서, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13 중 하나 이상은 부재한, 펩타이드 이량체 화합물.
  19. 하기 화학식 (IV)의 펩타이드 단량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-Xaa14
    (화학식 (IV))
    식 중,
    Xaa1은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
    Xaa2는 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
    Xaa3은 부재하거나, Ac, 또는 임의의 아미노산이고;
    Xaa4는 Pen 및 Cys이고;
    Xaa5는 N-Me-Arg, Arg, N-Me-Lys, Phe(4-구아니디노), Phe(4-카보밀아미노), Cit, Phe(4-NH2), N-Me-호모Arg, 호모Arg, Tyr, Dap, Dab, Arg-Me-sym, Arg-Me-asym, Cav 및 His로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa6은 Ser, Gly, Thr 또는 Ile이고;
    Xaa7은 Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
    Xaa8은, N-Me-Thr을 포함하여, Thr, Val, Ile, Leu, 호모Leu, Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, His, Ala, Phe, Lys, Arg, Asn, Glu, Tyr, Trp, Met, Nle 및 N-메틸 아미노산으로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa9는 Gln, Ser, Asp, Pro, Gly, Ala, Phe, Glu, Ile, Val, N-뷰틸 Ala, N-펜탈 Ala, N-헥실 Ala, 사이클로뷰틸 Ala, 사이클로펜틸 Ala, Leu, Nle, Cpa, Cba, 호모Leu, Aoc 및 N-Me-Leu로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa10은 Pen 또는 Cys이고;
    Xaa11은 부재하거나, Trp, Phe, 2-Nal, 1-Nal, Tyr, His, Phe(4-F), Phe(4-CF3), Phe(4-CH3), Phe(4-tBu), Bip, Phe(4-COOH), Gly, 3,3-다이페닐 Gly, 3,3-다이페닐 Ala, Tic, b-호모Trp, D-1-Nal, D-2-Nal, Phe(2,4-다이Cl), Phe(3,4-다이Cl), Phe(4-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(2-카보밀), Tyr(Me), 호모Phe, N-Me-Phe, N-Me-Tyr, Ser, Sar, 다이하이드로Trp, Ile, Leu, Arg, Thr, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산 및 Tic로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa12는 부재하거나, 방향족 아미노산, 치환된 방향족 아미노산, Glu, D-Glu, 호모Glu, Asp, D-Asp, D-호모Glu, Gla, 베타-호모Glu, Tic, Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), Asn, D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-Tyr, D-Lys, D-Ile, D-His, N-Me-Glu, N-Me-Asp, 알파-호모Glu, 바이페닐-Gly, 바이페닐-Ala, 호모-Phe, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr 및 Val, 및 상응하는 D-아미노산 및 동배체로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa13은 부재하거나, Pro, 또는 임의의 아미노산이고; 그리고
    Xaa14는 임의의 아미노산이고;
    여기서,
    Xaa5는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa8은 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa9는 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa11은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    Xaa12는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    Xaa13은 Pro이고; 그리고
    상기 펩타이드 단량체 화합물은 Xaa4와 Xaa10 사이의 다이설파이드 결합을 포함하는, 펩타이드 이량체 화합물.
  20. 하기 화학식 (V)의 펩타이드 단량체 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10
    (화학식 (V))
    식 중,
    상기 펩타이드 화합물은 다이설파이드 결합 Xaa1 및 Xaa7을 포함하고;
    화학식 (V)의 Xaa1-Xaa10은 화학식 (IV)의 Xaa4-Xaa13에 상응하고,
    Xaa1은 Pen 또는 Cys이고;
    Xaa2는 Cit, Phe(4-카보밀) 및 N-Me-호모Arg로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa3은 Ser Gly, Thr 또는 Ile이고;
    Xaa4는 Asp, D-Asp, Asp(OMe) 또는 N-Me-Asp이고;
    Xaa5는 Leu, 호모Leu, Nle 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa6은 Cba, 호모Leu 및 Cpa로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa7은 Pen 또는 Cys이고;
    Xaa8은 Tic, Phe(2-카보밀), Phe(3-카보밀), Phe(4-COOH), Phe(4-OMe) 및 Phe(4-tBu)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa9는 Aic, Gln, Cit, Glu(OMe), D-His, Tic, Phe(3-COOH), D-Arg, Bip, D-Trp, Phe, D-Phe, D-Val, D-Thr, D-1-Nal, D-2-Nal, Thr, Val로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Xaa10은 Pro인, 펩타이드 단량체 화합물.
  21. 제20항에 있어서, Xaa5는 N-Me-Arg인, 펩타이드 단량체 화합물.
  22. 제19항 또는 제21항에 있어서, Xaa1 및 Xaa2는 부재하고, Xaa3은 Ac이고/이거나, Xaa11, Xaa12 및 Xaa13 중 하나 이상은 부재한, 펩타이드 단량체 화합물.
  23. 제19항 또는 제21항에 있어서, 상기 펩타이드 단량체 화합물은
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(β-호모-Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-(β-호모-Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-Glu-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-(β-호모-Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys);
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-(N-Me-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-(N-Me-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-(D-Lys)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-(N-Me-D-Lys)-NH2; 또는
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-COOH))-(β-호모-Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-(β-호모-Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe(4-tBu))-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Bip-(β-호모-Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu;
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu);
    Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-OH;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-(Phe-(4-COOH)-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-Glu-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Phe(4-tBu)-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-2-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-1-Nal-(β-호모Glu)-NH2;
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-(β-호모Glu)-NH2; 또는
    Ac-Pen-(N-Me-Arg)-Ser-Asp-Thr-Leu-Pen-Trp-Glu-NH2의 서열 또는 구조 중 하나를 포함하는, 펩타이드 단량체 화합물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 검출 가능하게 표지된, 화합물.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  26. 제24항에 있어서, 장용 코팅을 추가로 포함하고, 상기 장용 코팅은 대상체의 하부 위장관계 내에 상기 약제학적 조성물을 보호하고 방출하는, 약제학적 조성물.
  27. α4β7 인테그린의 생물학적 기능과 연관된 병태를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 유효량의 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제25항 또는 제26항의 조성물을 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 병태는 염증성 장 질환(Inflammatory Bowel Disease; IBD), 궤양성 결장염, 크론병, 셀리악병(비열대성 스프루(nontropical Sprue)), 혈청반응음성 관절증을 가지는 장질환, 미시적 결장염, 교원성 결장염, 호산구 위장관염, 방사선요법, 화학요법, 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염, 위장관암, 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식, 원발성 경화성 담관염, GI 관에서의 인간 면역결핍 바이러스(human immunodeficiency virus; HIV) 감염, 호산구성 천식, 호산구성 식도염, 위염, 결장염, 미시적 결장염, 이식편 대 숙주 질환, 방사선요법 또는 화학요법과 연관된 결장염, 백혈구 부착분자 결핍증-1에서처럼 선천성 면역의 장애와 연관된 결장염, 만성 육아종증, 글라이코겐 저장 질환 유형 1b, 헤르만스키-푸들라크증후군(Hermansky-Pudlak syndrome), 세디아크-히가시 증후군(Chediak-Higashi syndrome), 및 비스코트-올드리치 증후군(Wiskott-Aldrich Syndrome), 또는 결장절제술 및 회장 문합 후 생긴 낭염 및 다양한 형태의 위장관암, 골다공증, 관절염, 다발성 경화증, 만성 통증, 체중 증가 및 우울증으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 또 다른 실시형태에서, 상기 병태는 췌장염, 인슐린 의존성 진성 당뇨병, 유방염, 담낭염, 담관염, 담관주위염, 만성 기관지염, 만성 부비강염, 천식 또는 이식편 대 숙주 질환인, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 병태는 염증성 장 질환인, 방법.
  30. 제28항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 궤양성 결장염인, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 크론병인, 방법.
  32. 제27항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 MAdCAM에 대한 α4β7의 결합을 저해하는, 방법.
  33. 제30항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 MAdCAM에 대한 α4β7의 결합을 선택적으로 저해하는, 방법.
  34. 제27항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 경구, 정맥내, 복막, 피내, 피하, 근육내, 척수강내, 흡입, 기화, 분무화, 설하, 협측, 비경구, 직장, 질 및 국소로 이루어진 군으로부터 선택된 투여의 형태로 투여되는, 방법.
  36. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 초기 용량, 이어서 하나 이상의 후속하는 용량으로 투여되고, 임의의 2회의 용량 사이의 최소 간격은 1일 미만의 기간이고, 상기 각각의 용량은 유효량의 펩타이드 이량체 화합물을 포함하는, 방법.
  37. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물의 유효량은 a) α4β7 인테그린 분자에서의 MAdCAM 결합 부위의 약 50% 이상의 포화; b) 상기 세포 표면에서의 α4β7 인테그린 발현의 약 50% 이상의 저해; 및 c) α4β7 분자에서의 MAdCAM 결합 부위의 약 50% 이상의 포화 및 상기 세포 표면에서의 α4β7 인테그린 발현의 약 50% 이상의 저해로 이루어진 군으로부터 선택된 상기 중 적어도 하나를 달성하기에 충분하고, ⅰ) 상기 포화는 1일 2회 이하의 투약 빈도와 일치하는 기간 동안 유지되거나; ⅱ) 상기 저해는 1일 2회 이하의 투약 빈도와 일치하는 기간 동안 유지되거나; ⅲ) 상기 포화 및 상기 저해는 각각 1일 2회 이하의 투약 빈도와 일치하는 기간 동안 유지되는, 방법.
  38. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 경구로 투여되는, 방법.
  39. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 비경구로 투여되는, 방법.
  40. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 국소로 투여되는, 방법.
  41. 제34항에 있어서, 상기 펩타이드 이량체 화합물 또는 펩타이드 단량체 화합물은 대략 시각마다, 시간마다, 4시간마다, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회, 1일 4회, 격일로, 주마다, 2주마다 및 개월마다로 이루어진 군으로부터 선택된 간격으로 투여되는, 방법.
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