KR102038462B1 - Pi3k의 활성 또는 기능의 억제제의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및/또는 신경낭미충증으로부터 선택된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서의 면역병리상태의 치료를 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제의 신규 용도에 관한 것이다.

Description

PI3K의 활성 또는 기능의 억제제의 용도 {Use of inhibitors of the activity or function of PI3K}
본 발명은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 포스포이노시티드 3' OH 키나제 패밀리의 활성 또는 기능의 억제제 (이하 PI3K 억제제) 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물의 신규 용도에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 예를 들어 대사 안정성 및 적합한 약동학과 같은 유익한 약물유사 특성을 갖는 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태, 조절, 특히 PI3K의 억제 (여기서, PI3K 이소형 델타의 활성 또는 기능이 억제됨)를 위한 형태의 약물 후보로서의 테트라히드로-피리도-피리미딘 유도체의 신규 용도에 관한 것이다.
기생충 감염은 여전히 전 세계적으로 이환율 및 사망률의 가장 중요한 원인 중 하나를 나타낸다. 인간 및 동물 병리상태를 야기하는 기생충 중에서 아피콤플렉사(apicomplexa) 문은, 말라리아, 리슈마니아증 및 트리파노소마증을 포함하나 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 심각한 질병의 원인인 매개체-감염 기생충의 군을 포함한다. 말라리아는 단독으로 5-10%의 인간을 감염시키고, 연간 약 2백만 명의 사망을 야기한다. 문헌 [Schofield et al., "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et al., "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al., "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011].
톨-유사 수용체 (TLR)는 미생물 병원체 내의 진화적으로 보존된 구조적 관련 분자 (병원체-연관 분자 패턴 (PAMP)으로 공지됨)를 인식하는 배선 코딩된 계통발생학적 고대 분자이다. 면역계의 세포를 비롯한 여러 가지의 다양한 세포 유형은 TLR을 발현함으로써 PAMP의 존재를 검출할 수 있다. 지금까지 10종의 기능적 TLR 패밀리 구성원 (TLR1-10)이 인간에서 설명되어 왔고, 이들 모두는 특이적 PAMP 분자를 인식한다. 이들 특이적 PAMP의 인식 후에 TLR은 박테리아, 바이러스, 진균 및 기생충에 의한 감염에 대한 숙주의 면역 반응을 유도하고 조정한다. 문헌 [Hedayat et al., "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", review, Lancet Infectious disease 2011], [Kwai et al., "TLRs and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity", review, Immunity May-2011].
감염된 숙주의 면역계는 주로 T-헬퍼 1 유형 (Th1)인 염증유발 시토카인의 TLR 유발 생산으로 감염에 반응한다. 적절한 양의 이들 시토카인은 유익하고 감염을 없애는데 필요한 반면, 이들 매개인자의 과다생산은 숙주에 유해하고 면역 매개 병리상태, 예컨대 중증이고 종종 치명적인 결과를 갖는 신경병리상태 및 조직 손상과 연관된다. 이러한 면역 매개 병리상태의 중요하고 고도로 관련된 하나의 예는, 중증의 임상적 증상을 야기하고 종종 치명적인 급성 뇌 말라리아 (CM)이다. 문헌 [Schofield et al., "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et al., "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al., "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011] [Hedayat et al., "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", review, Lancet Infectious disease 2011]. 말라리아의 치료 및 박멸에서 이루어진 진전에도 불구하고, CM을 비롯한 중증 말라리아와 연관된 사망률은 여전히 허용불가능하게 높다. 따라서, 숙주 내 기생충의 박멸에서 단독으로 지시된 전략은 CM의 모든 사례에서의 신경계 합병증 및 사망을 예방하는데 충분하지 않을 수 있다. 따라서, 부분적으로 숙주-매개 면역병리상태에 의해 야기되는 CM-연관 사망률 및 이환율을 효과적으로 감소시키는 혁신적인 신규 부가 치료 전략의 개발에 대한 긴급한 의학적 필요성이 남아있다 (문헌 [Higgins et al., "Immunopathogenesis of falciparum malaria: implications for adjunctive therapy in the management of severe and cerebral malaria", Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2011]).
최근의 추가적 증거는 TLR9가 플라스모디움(Plasmodium), 리슈마니아(Leishmania), 트리파노소마(Trypanosoma) 및 톡소플라스마(Toxoplasma)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 기생충에 대한 인식 및 반응에서 핵심적인 역할을 하고 (문헌 [Gowda et al., "The Nucleosome is the TLR9-specific Immunostimulatory component of plasmodium falciparum that activates DCs" PLoS ONE, June 2011], [Peixoto-Rangel et al., "Candidate gene analysis of ocular toxoplasmosis in Brazil: evidence for a role for TLR9", Mem Inst Oswaldo Cruz 2009], [Pellegrini et al., "The role of TLRs and adoptive immunity in the development of protective or pathological immune response triggered by the Trypanosoma cruzi protozoan", Future Microbiol 2011]) TLR9를 비롯한 TLR의 활성화에 대한 간섭은 중증 뇌 말라리아에서의 유해한 염증 반응을 예방하는 유망한 전략을 나타낸다 (문헌 [Franklin et al., "Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing TLRs prevents experimental cerebral malaria", PNAS 2011])는 것을 제공한 바 있다.
말라리아는 4종의 원충성 기생충: 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum); 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax); 플라스모디움 오발레(Plasmodium ovale); 및 플라스모디움 말라리아(Plasmodium malaria)에 의해 야기되는 감염성 질환이다. 이들 4종의 기생충은 전형적으로 감염된 암컷 아노펠레스 모기 교상에 의해 전달된다. 말라리아는 세계 여러 곳에서 문제를 일으키며, 최근 수십 년에 걸쳐 말라리아 부담은 꾸준히 증가하였다. 어림잡아 1-3백만 명의 사람들이 매년 말라리아로 사망하는데, 대부분 5세 미만의 소아이다. 말라리아 사망률의 이러한 증가는, 치명적인 말라리아 기생충인 플라스모디움 팔시파룸이 아르테미시닌 유도체를 제외하고는 거의 모든 이용가능한 항말라리아 약물에 대해 내성을 획득하였다는 사실에 일부 기인한다.
리슈마니아증은 리슈마니아 속에 속하는 20종 초과의 기생 원충에 의해 야기되며, 암컷 모래 파리 교상에 의해 전달된다. 리슈마니아증은 다수의 열대 및 아열대 지역을 비롯한 약 88개국에서의 풍토병이다. 4종의 주요 형태의 리슈마니아증이 있다. 칼라-아자르로도 불리는 내장 리슈마니아증은 가장 심각한 형태이고, 기생충 리슈마니아 도노바니(Leishmania donovani)에 의해 야기된다. 내장 리슈마니아증이 발병한 환자는 치료를 받지 않으면 수 개월 내에 사망할 수 있다. 내장 리슈마니아증에 대한 2종의 주요 요법은 안티모니 유도체 소듐 스티보글루코네이트 (펜토스탐(Pentostam)®) 및 메글루민 안티모니에이트 (글루칸팀(Glucantim)®)이다. 소듐 스티보글루코네이트는 약 70년 동안 사용되어 왔고, 이 약물에 대한 내성은 점점 문제가 되고 있다. 또한, 치료는 비교적 길고 고통스러우며, 바람직하지 않은 부작용을 야기할 수 있다.
수면병으로도 알려져 있는 인간 아프리카 트리파노소마증은 매개체-감염 기생충성 질환이다. 관련 기생충은 트리파노소마 속에 속하는 원충이다. 이들은 인간 병원성 기생충을 보유한 인간 또는 동물로부터 감염된 체체 파리 (글로시나 속) 교상에 의해 인간에게 전달된다.
샤가스병 (아메리카 트리파노소마증으로도 불림)은 아메리카 대륙의 빈곤 집단 중에서의 풍토병인 또 다른 인간 기생충성 질환이다. 상기 질환은 원충성 기생충인 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)에 의해 야기되며, 이는 흡혈 곤충에 의해 인간에게 전달된다. 인간 질환은 감염 직후에 발생하는 급성 단계 및 수 년에 걸쳐 발병할 수 있는 만성 단계의 2가지 단계로 발생한다. 만성 감염은 치매, 심근 손상 및 때때로 소화관 팽창, 뿐만 아니라 체중 감소를 비롯한 다양한 신경계 장애를 유발한다. 치료되지 않은 만성 질환은 종종 치명적이다. 샤가스병을 치료하는데 현재 이용가능한 약물은 니푸르티목스 및 벤즈니다졸이다. 그러나, 이들 현행 요법의 문제는 그들의 다양한 부작용, 치료 기간, 및 치료 동안의 의료적 감독에 대한 요구를 포함한다. 또한, 치료는 실제로 질환의 급성 단계 동안에 제공된 경우에만 효과적이다. 2종의 제일선 약물에 대한 내성은 이미 발생하였다. 항진균제인 암포테리신 b가 2차 약물로 제안된 바 있지만, 이 약물은 고가이며 비교적 독성이다.
톡소플라스마증은 세계 대부분에 걸친 풍토병이고, 이는 성인 인구의 대다수를 감염시킬 수 있다. 그러나 이의 유병률은 다양한 국가에서 상이하다. 북부 온대성 국가에서의 성인 중 적어도 10% 및 지중해 및 열대성 국가에서의 성인 중 절반 초과를 감염시키는 것으로 추정된다. 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii)는 보편적인 편성 세포내 원충이고 인간에서의 감염성 망막염의 가장 흔한 원인인 것으로 간주되며, 이는 다양한 인자, 예컨대 기후, 위생 및 식습관에 의존한다. 면역적격 성인에서의 질환의 경과는 통상적으로 무증상이고 자기-제한적이다. 감염이 발생하자마자, 기생충은 망막 및 신체의 다른 기관에서, 초기 감염의 수 년 후에 재활성화하여 급성 망막맥락막염 및 새로운 망막맥락막 병변을 일으킬 수 있는 잠재성 낭포를 형성한다. 문헌 [Arevalo et al., "Ocular Toxoplasmosis in the developing world", Internat. Ophthal. Clin 2010].
신경낭미충증은 타에니아 솔리움(Taenia solium)의 유충에 의해 야기되는 CNS의 가장 흔한 기생충성 질환이다 (전 세계적으로 ~250만 명 발생). 상기 질환은 인간에서 기생충 주위의 검출가능한 염증 반응의 부재를 특징으로 하는 긴 무증상 단계를 갖는다. 무증상 단계 동안의 전체 면역 반응은 Th2 표현형의 것이다. 그러나, 치유적 치료 또는 일반적 기생충 감소에 의한 유충의 파괴는, 종종 만성 육아종성 반응 및 질환의 전형적 증상의 징후로 이루어진 강한 염증 반응을 야기한다. 증상이 있는 환자의 CNS에서의 면역 반응은, 육아종의 부재 또는 존재에 따라 명확한 Th1 표현형 또는 혼합된 Th1, Th2 및 Th3 반응으로 이루어진다. CNS에서의 증상 단계 동안의 우세한 과다염증 반응은 신경낭미충증과 연관된 중증 신경병리상태 및 사망률의 원인이다 (문헌 [Mishra et al., "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009]).
상기 관점에서, 상기 언급된 질환을 비롯한 기생충성 질환의 관리를 위한, 특히 연관된 면역병리상태를 다루기 위한 신규 유효 치료 옵션의 개발이 매우 필요하다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물은, TLR9의 기능적 억제를 비롯한 항염증 특성을 나타내고, TLR9 매개 면역병리상태 또는 염증유발 및 항염증 반응의 TLR9 매개 불균형에 의해 유발되거나 또는 그와 관련된 질환 또는 장애의 치료에 적합한 것으로 밝혀진 바 있다.
본 발명은 이에 따라, 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 플라스모디움 속의 기생충, 예를 들어 플라스모디움 팔시파룸, 플라스모디움 비박스, 플라스모디움 오발레 또는 플라스모디움 말라리아; 트리파노소마 속의 기생충, 예를 들어 트리파노소마 크루지; 리슈마니아 속의 기생충, 예를 들어 리슈마니아 도노바니; 톡소플라스마 속의 기생충, 예를 들어 톡소플라스마 곤디이 또는 연충, 예를 들어 타에니아 솔리움으로부터 선택된 기생충에 의해 유발되는 상태, 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병으로부터 선택된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서의 면역병리상태의 치료에 사용하기 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 추가로 제공한다.
본 발명은 플라스모디움 속의 기생충, 예를 들어 플라스모디움 팔시파룸, 플라스모디움 비박스, 플라스모디움 오발레 또는 플라스모디움 말라리아; 트리파노소마 속의 기생충, 예를 들어 트리파노소마 크루지; 리슈마니아 속의 기생충, 예를 들어 리슈마니아 도노바니; 톡소플라스마 속의 기생충, 예를 들어 톡소플라스마 곤디이 또는 연충, 예를 들어 타에니아 솔리움으로부터 선택된 기생충에 의해 유발되는 상태, 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 치료 유효량의 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 투여하는 것을 포함하는, 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 상기 상태, 질환 또는 장애의 치료 방법을 추가로 제공한다.
본 발명은 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병으로부터 선택된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서의 면역병리상태의 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 치료 유효량의 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 투여하는 것을 포함하는, 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 상기 면역병리상태의 치료 방법을 추가로 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 플라스모디움 속의 기생충, 예를 들어 플라스모디움 팔시파룸, 플라스모디움 비박스, 플라스모디움 오발레 또는 플라스모디움 말라리아; 트리파노소마 속의 기생충, 예를 들어 트리파노소마 크루지; 리슈마니아 속의 기생충, 예를 들어 리슈마니아 도노바니; 톡소플라스마 속의 기생충, 예를 들어 톡소플라스마 곤디이 또는 연충, 예를 들어 타에니아 솔리움으로부터 선택된 기생충에 의해 유발되는 상태, 질환 또는 장애의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병으로부터 선택된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서의 면역병리상태의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 플라스모디움 속의 기생충, 예를 들어 플라스모디움 팔시파룸, 플라스모디움 비박스, 플라스모디움 오발레 또는 플라스모디움 말라리아; 트리파노소마 속의 기생충, 예를 들어 트리파노소마 크루지; 리슈마니아 속의 기생충, 예를 들어 리슈마니아 도노바니; 톡소플라스마 속의 기생충, 예를 들어 톡소플라스마 곤디이 또는 연충, 예를 들어 타에니아 솔리움으로부터 선택된 기생충에 의해 유발되는 상태, 질환 또는 장애의 치료를 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병으로부터 선택된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서의 면역병리상태의 치료를 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물의 용도를 추가로 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 플라스모디움 속의 기생충, 예를 들어 플라스모디움 팔시파룸, 플라스모디움 비박스, 플라스모디움 오발레 또는 플라스모디움 말라리아; 트리파노소마 속의 기생충, 예를 들어 트리파노소마 크루지; 리슈마니아 속의 기생충, 예를 들어 리슈마니아 도노바니; 톡소플라스마 속의 기생충, 예를 들어 톡소플라스마 곤디이 또는 연충, 예를 들어 타에니아 솔리움으로부터 선택된 기생충에 의해 유발되는 상태, 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다.
본 발명은 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 말라리아, 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병으로부터 선택된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체에서의 면역병리상태의 치료를 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다.
도 1은 실시예 1 시트레이트 염의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 2는 실시예 1 푸마레이트 염의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 3은 실시예 1 나파디실레이트 염의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 4는 실시예 67 포스페이트 염의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 5는 실시예 67 HCl 염의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 6은 실시예 67 히푸레이트 염의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 7은 실시예 1 무수 형태의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 8은 실시예 1 3수화물의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
도 9는 실시예 67 무수 형태의 X선 분말 회절 패턴을 개시한다.
본 발명의 방법 및 조성물은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 에스테르 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 포함한다. 본 발명의 조성물에 유용한 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는, 당업계에 공지된 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 임의의 PI3K 억제제일 수 있다.
예를 들어, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
Figure 112014064974414-pct00001
에 기재된 화합물로부터 선택될 수 있거나;
또는
Figure 112014064974414-pct00002
에 기재된 화합물로부터 선택될 수 있다.
구체적 화합물은, 예를 들어
Figure 112014064974414-pct00003
Figure 112014064974414-pct00004
Figure 112014064974414-pct00005
Figure 112014064974414-pct00006
Figure 112014064974414-pct00007
Figure 112014064974414-pct00008
Figure 112014064974414-pct00009
Figure 112014064974414-pct00010
Figure 112014064974414-pct00011
Figure 112014064974414-pct00012
Figure 112014064974414-pct00013
Figure 112014064974414-pct00014
를 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 효소적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 효소적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 100 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 효소적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 0.5 nM 내지 10 nM이다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 1000 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 이소형 중 1종 이상에 비해 적어도 10배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 이소형 중 1종 이상에 비해 적어도 20배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 상이한 파라로그 PI3Kα 및 β에 비해 적어도 10배의 선택성을 나타낸다. 이러한 PI3K 억제제는 PI3K 델타 억제제로 지칭된다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K델타 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 상이한 파라로그 PI3Kα 및 β에 비해 적어도 20배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K델타 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM인 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 가지며, PI3K 이소형 델타에 대해, 상이한 파라로그 PI3Kα 및 β에 비해 적어도 20배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 저분자량 화합물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 1000 달톤 미만의 분자량을 갖는 저분자량 화합물이다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PCT/EP2011/061393에 개시되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 I의 테트라히드로-피리도-피리미딘 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 I>
Figure 112014064974414-pct00015
상기 식에서,
Y는 O 또는 NR3으로부터 선택되고;
R1은 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐,
또는
-C(O)-R4로부터 선택되고,
여기서,
R4는 C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, C1-C8-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-옥시, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-옥시, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, 히드록시, C1-C8-알콕시, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노에서의 'C1-C8-알킬'은 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
C3-C12-시클로알킬 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬에서의 'C3-C12-시클로알킬'은 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'은 옥시라닐, 아지리디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 아세티티닐, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 2,3-디히드로푸라닐, 2,5-디히드로푸라닐, 2,3-디히드로티오페닐, 1-피롤리닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페라지닐, 아제파닐, 티에파닐 또는 옥세파닐로부터 선택되고; 이들 각각은 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로시클릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자는 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
'헤테로아릴'은
푸라닐, 티오페닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐 또는 1,3,5-트리아지닐로부터 선택되고; 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; '헤테로아릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자는 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
R2는 페닐, 나프틸, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐로부터 선택되고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고;
R3은 H, C1-C4-알킬 또는 할로-C1-C4-알킬로부터 선택되고;
m은 0 또는 1로부터 선택된다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 II의 퀴나졸린 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 II>
Figure 112014064974414-pct00016
상기 식에서,
A는 N, O 또는 S로부터 선택된 1-2개의 추가의 헤테로원자를 임의로 함유하는 포화, 5-8원 모노- 또는 6-12원 비시클릭 융합, 비시클릭 가교 또는 비시클릭 스피로 헤테로시클릭 고리이고, 여기서 헤테로시클릭 고리는 비치환되거나 또는
히드록시-
할로-
C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-카르보닐-
할로-C1-C7-알킬-
할로-C1-C7-알킬-카르보닐-
C1-C7-알콕시-카르보닐-
옥소 (O=)
로부터 선택된 1-4개의 치환기에 의해 치환되고;
X1 및 X2는 CH, N, CR이고,
여기서 R은 독립적으로
할로겐-
할로-C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
로부터 선택되고;
X3은 CH, N, CR3'이고,
여기서 R3'는
시아노-
니트로-
할로겐-
할로-C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
C1-C10-시클로알킬-옥시-
페닐-옥시-
벤질-옥시-
C1-C7-알콕시-C1-C7-알콕시-
카르복실-
C1-C7-알콕시-카르보닐-
아미노-카르보닐-
N-C1-C7-알킬-아미노-카르보닐-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-카르보닐-
아미노-술포닐-
N-C1-C7-알킬-아미노-술포닐-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-술포닐-
1-피롤리디노-술포닐-
4-모르폴리노-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-아미노-
로부터 선택되고;
X4는 CH, N, CR4'이고,
여기서 R4'는
F3C-
로부터 선택되고;
R5'는
수소-
할로겐-
히드록시-
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
할로-C1-C7-알킬-
할로-C1-C7-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C7-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-
C1-C7-알킬-카르보닐-
C1-C7-알킬-카르보닐-아미노-
아미노-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-아미노-
1-피롤리디닐-
1-피페라지닐-
로부터 선택되고,
단, X4가 CH인 경우에, R3' 및 R5'가 둘 다 메톡시는 아니다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "화학식 I의 화합물" 또는 "화학식 II의 화합물"은 각각 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 그의 하위화학식의 화합물, 상기 화합물의 염, 상기 화합물의 수화물 또는 용매화물, 뿐만 아니라 모든 입체이성질체 (부분입체이성질체 및 거울상이성질체 포함), 호변이성질체 및 동위원소 표지된 화합물 (중수소 치환 포함)을 지칭한다.
본원에 사용된 단수 용어 및 본 발명의 문맥에서, 특히 특허청구범위의 문맥에서 사용된 유사한 용어들은, 본원에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형을 둘 다 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에 기재된 모든 방법은 본원에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 어휘, 예를 들어 "예컨대"의 사용은 단지 본 발명을 보다 잘 설명하기 위한 의도일 뿐이며, 달리 청구되는 본 발명의 범주에 대한 제한을 제기하지는 않는다.
본 발명은 하기 용어 해설 및 종결부의 실시예를 비롯한 하기 상세한 설명을 참조로 보다 완전하게 인지될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비롯한", "함유하는" 및 "포함하는"은 본원에서 이들의 개방적, 비제한적 의미로 사용된다. 화학식 I의 화합물 또는 화학식 II의 화합물이 언급되는 경우에, 이는 또한 각각 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물의 호변이성질체 및 N-옥시드를 포함하도록 의도된다.
호변이성질체, 예컨대 케토-와 에놀 형태, 락탐-과 락팀 형태, 아미드 형태와 이미드산 형태, 또는 엔아민 형태와 이민 형태 사이의 호변이성질체는, 예를 들어 화학식 I의 화합물의 R1 또는 R2 부분에 존재할 수 있다. 화학식 I의 화합물의 테트라히드로-피리도-피리미딘 코어의 질소 원자 뿐만 아니라 질소 함유 헤테로시클릴 및 헤테로아릴 잔기는 N-옥시드를 형성할 수 있다.
화합물, 염 등에 복수형이 사용되는 경우에, 이는 단일 화합물, 염 등을 또한 의미하고자 하는 것이다.
본원의 상기 및 하기에 사용되는 일반적 용어는 달리 나타내지 않는 한, 바람직하게는 본 개시내용의 문맥 내에서 하기 의미를 갖는다:
본원에 사용된 용어 "알킬"은 20개 이하의 탄소 원자를 갖는, 완전 포화 분지형 (단일 또는 다중 분지화 포함) 또는 비분지형 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 달리 제공되지 않는 한, 알킬은 1 내지 16개의 탄소 원자, 1 내지 10개의 탄소 원자, 1 내지 7개의 탄소 원자 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 알킬의 대표적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 전형적으로, 알킬 기는 1-7개, 보다 바람직하게는 1-4개의 탄소를 갖는다.
본원에 사용된 용어 "할로-알킬"은 본원에 정의된 바와 같은 1개 이상의 할로 기로 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 할로-알킬은 모노-할로-알킬, 디-할로-알킬, 또는 퍼-할로-알킬을 비롯한 폴리-할로-알킬일 수 있다. 모노-할로-알킬은 알킬 기 내에 1개의 아이오도, 브로모, 클로로 또는 플루오로를 가질 수 있다. 디-할로-알킬 및 폴리-할로-알킬 기는 알킬 내에 2개 이상의 동일한 할로 원자, 또는 상이한 할로 기의 조합을 가질 수 있다. 전형적으로 폴리-할로-알킬은 최대 12개 또는 10개 또는 8개 또는 6개 또는 4개 또는 3개 또는 2개의 할로 기를 함유한다. 할로-알킬의 비제한적 예는 플루오로-메틸, 디-플루오로-메틸, 트리-플루오로-메틸, 클로로-메틸, 디-클로로-메틸, 트리-클로로-메틸, 펜타-플루오로-에틸, 헵타-플루오로-프로필, 디-플루오로-클로로-메틸, 디-클로로-플루오로-메틸, 디-플루오로-에틸, 디-플루오로-프로필, 디-클로로-에틸 및 디클로로-프로필을 포함한다. 퍼-할로-알킬은 모든 수소 원자가 할로 원자로 대체된 알킬을 지칭한다.
화학식 I의 화합물에 대해, 본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릭"은 N, O 및 S로부터 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 모노시클릭 또는 7 내지 10원 포화 또는 부분 포화 고리 또는 고리계를 지칭하고, 여기서 N 및 S는 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있다. '헤테로시클릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있다. '헤테로시클릴'은 융합되거나 가교된 고리 뿐만 아니라 스피로시클릭 고리도 포함할 수 있다. 헤테로사이클의 예는 옥시라닐, 아지리디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 아세티티닐, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 2,3-디히드로푸라닐, 2,5-디히드로푸라닐, 2,3-디히드로티오페닐, 1-피롤리닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페라지닐, 아제파닐, 티에파닐 및 옥세파닐을 포함한다.
화학식 I의 화합물에 대해, 본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 고리(들) 내에 가능한 최대 개수의 공액 이중 결합을 보유하고 N, O 및 S로부터 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 함유하는 4-, 5-, 6- 또는 7-원 모노시클릭, 7-, 8-, 9-, 10-, 11- 또는 12-원 비시클릭, 또는 10-, 11-, 12-, 13-, 14- 또는 15-원 트리시클릭 불포화 고리 또는 고리계를 지칭하고, 여기서 N 및 S는 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있다. '헤테로아릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있다. '헤테로아릴'은 융합되거나 가교된 고리 뿐만 아니라 스피로시클릭 고리도 포함할 수 있다. 헤테로아릴의 예는 푸라닐, 티오페닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐 및 1,3,5-트리아지닐을 포함한다.
화학식 II의 화합물에 대해, 본원에 사용된 A에 대한 용어 "포화 헤테로시클릴"은 분자의 나머지 부분에 대한 부착 지점인 N으로부터 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 함유하는 고리계, 예를 들어 5-, 6-, 7- 또는 8-원 모노시클릭 또는 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, 11- 또는 12-원 비시클릭 계를 지칭한다. 헤테로시클릭 기는 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있다. 헤테로시클릭 고리는 N, O 또는 S로부터 선택된 1-2개의 추가의 헤테로원자를 함유할 수 있다. 헤테로시클릴은 융합되거나 가교된 고리 뿐만 아니라 스피로시클릭 고리도 포함할 수 있다. 헤테로사이클 A의 예는
Figure 112014064974414-pct00017
를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 실시양태에서, 헤테로사이클 A의 예는
Figure 112014064974414-pct00018
를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 3-12개 탄소 원자의 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭, 비시클릭 또는 트리시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 달리 제공되지 않는 한, 시클로알킬은 3 내지 10개의 고리 탄소 원자 또는 3 내지 7개의 고리 탄소 원자를 갖는 시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 예시적인 비시클릭 탄화수소 기는 옥타히드로인딜, 데카히드로나프틸을 포함한다. 예시적인 트리시클릭 탄화수소는 비시클로[2.1.1]헥실, 비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.1]헵테닐, 6,6-디메틸비시클로[3.1.1]헵틸, 2,6,6-트리메틸비시클로[3.1.1]헵틸, 비시클로[2.2.2]옥틸이다. 예시적인 테트라시클릭 탄화수소 기는 아다만틸을 포함한다.
화학식 II의 화합물에 대해, 본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은 바람직하게는 시클로프로필, 시클로펜틸 또는 시클로헥실을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "옥시"는 -O- 연결기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르복시" 또는 "카르복실"은 -COOH이다.
본원에 사용된 모든 치환기는 그들을 구성하는 관능기 (기)의 순서를 보여주는 방식으로 기재된다. 관능기는 상기 본원에 정의되어 있다. 화학식 II의 화합물에 대해 적절한 경우에, 그의 부착 지점은 하이픈 (-) 또는 등호 (=)로 표시된다.
"치료"는 질환 또는 장애의 예방적 (방지적) 및 치유적 치료 뿐만 아니라 진행의 지연을 포함한다.
본 발명의 다양한 실시양태가 본원에 기재되어 있다. 각 실시양태에 명시된 특징을 다른 명시된 특징과 조합하여 추가의 실시양태를 제공할 수 있음을 인지할 것이다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ia의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ia>
Figure 112014064974414-pct00019
상기 식에서, R1, R2 및 Y는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ia'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ia'>
Figure 112014064974414-pct00020
상기 식에서, R1, R2 및 Y는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ib의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ib>
Figure 112014064974414-pct00021
상기 식에서, R1 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ib'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ib'>
Figure 112014064974414-pct00022
상기 식에서, R1 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ic의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ic>
Figure 112014064974414-pct00023
상기 식에서, R1 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ic'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ic'>
Figure 112014064974414-pct00024
상기 식에서, R1 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Id의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Id>
Figure 112014064974414-pct00025
상기 식에서, R4 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Id'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Id'>
Figure 112014064974414-pct00026
상기 식에서, R4 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ie의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ie>
Figure 112014064974414-pct00027
상기 식에서, R4 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 화학식 Ie'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
<화학식 Ie'>
Figure 112014064974414-pct00028
상기 식에서, R4 및 R2는 상기 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R2가 나프틸, 피리딜 또는 피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되는 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R2가 3-피리딜 또는 5-피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 치환기에 의해 치환되고, 여기서 1개의 치환기가 화합물의 코어에 대한 R2의 연결 지점에 대하여 파라 위치에 위치하는 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R2가 3-피리딜 또는 5-피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 할로겐, 시아노, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시 또는 아미노로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 치환기에 의해 치환되고, 여기서 1개의 치환기가 화합물의 코어에 대한 R2의 연결 지점에 대하여 파라 위치에 위치하는 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R2가 3-피리딜 또는 5-피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 플루오로, 클로로, 시아노, 메틸, 트리플루오로메틸, 메톡시 또는 아미노로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 치환기에 의해 치환되고, 여기서 1개의 치환기가 화합물의 코어에 대한 R2의 연결 지점에 대하여 파라 위치에 위치하는 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R3이 H인 화학식 I, Ia 또는 Ia'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐 또는 1,3,5-트리아지닐로부터 선택되는 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 피리딜 또는 피리미디닐로부터 선택되는 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4이고, 여기서 R4가 상기 정의된 바와 같은 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4이고, 여기서 R4가 상기 정의된 바와 같은 것인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는
R4가 C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, C1-C8-알콕시 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
여기서 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노에서의 'C1-C8-알킬'이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
C3-C12-시클로알킬에서의 'C3-C12-시클로알킬'이 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐 또는 피페라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
'헤테로아릴'이
푸라닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 피리딜, 피라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있는 것인
화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는
R4가 헤테로시클릴, C4-C8-시클로알킬 또는 헤테로아릴로부터 선택되고;
여기서 'C3-C12-시클로알킬'이 비치환되거나 또는 플루오로, C1-C4-알킬, 히드록실, C1-C4-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐 또는 피페라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C4-알킬, 히드록실, C1-C4-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
'헤테로아릴'이
푸라닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 피리딜, 피라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 C1-C4-알킬, 히드록실로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있는 것인
화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는
R4가 헤테로시클릴로부터 선택되고;
여기서 '헤테로시클릴'이 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐 또는 피페라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C4-알킬, 히드록실, C1-C4-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있는 것인
화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는
R4가 C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
여기서 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노에서의 'C1-C8-알킬'이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있는 것인
화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는 R4가 C1-C8-알킬로부터 선택되는 것인 화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는
R2가 3-피리딜 또는 5-피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 플루오로, 클로로, 시아노, 메틸, 트리플루오로메틸, 메톡시 또는 아미노로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 치환기에 의해 치환되고, 여기서 1개의 치환기가 화합물의 코어에 대한 R2의 연결 지점에 대하여 파라 위치에 위치하고,
R4가 헤테로시클릴로부터 선택되고;
여기서 '헤테로시클릴'이 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐 또는 피페라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C4-알킬, 히드록실, C1-C4-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
'헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있는 것인
화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 R1이 -C(O)-R4인 화학식 I, Ia, Ia', Ib, Ib', Ic 또는 Ic'의 화합물; 또는
R2가 3-피리딜 또는 5-피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 플루오로, 클로로, 시아노, 메틸, 트리플루오로메틸, 메톡시 또는 아미노로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 치환기에 의해 치환되고, 여기서 1개의 치환기가 화합물의 코어에 대한 R2의 연결 지점에 대하여 파라 위치에 위치하고,
R4가 C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
여기서 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노에서의 'C1-C8-알킬'이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있는 것인
화학식 Id, Id', Ie 또는 Ie'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
A가 비치환되거나 또는
히드록시-
할로-
C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-카르보닐-
할로-C1-C7-알킬-
할로-C1-C7-알킬-카르보닐-
C1-C7-알콕시-카르보닐-
옥소 (O=)
로부터 선택된 1-4개의 치환기에 의해 치환된
Figure 112014064974414-pct00029
로부터 선택된 포화 헤테로사이클인 화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
A가 비치환되거나 또는
히드록시-
플루오로-
C1-C4-알킬-
C1-C4-알킬-카르보닐-
플루오로-C1-C4-알킬-
옥소 (O=)
로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환된
Figure 112014064974414-pct00030
로부터 선택된 포화 헤테로사이클인 화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
A가
Figure 112014064974414-pct00031
로부터 선택된 포화 헤테로사이클인 화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
A가
Figure 112014064974414-pct00032
로부터 선택된 포화 헤테로사이클인 화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X1이 CH, N, CR1'이고,
여기서 R1이
할로겐-
할로-C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X1이 CH, N, CR1이고,
여기서 R1이
플루오로-
C1-C4-알킬-
플루오로-C1-C4-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X1이 CH인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X1이 CR1'이고,
여기서 R1'가
플루오로-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X2가 CH, N, CR2'이고,
여기서 R2'가
C1-C7-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X2가 CH, N, CR2'이고,
여기서 R2'가
C1-C4-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X2가 CH인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
할로-C1-C7-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C7-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-
1-피롤리디닐-
1-피페라지닐-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
메톡시-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
할로-C1-C7-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C7-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-
1-피롤리디닐-
1-피페라지닐-
로부터 선택되고;
X3이 CH 또는 CR3'이고,
여기서 R3'가
시아노-
할로겐-
할로-C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
C1-C4-알킬-
C1-C4-알콕시-
플루오로-C1-C4-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C4-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-
1-피롤리디닐-
1-피페라지닐-
로부터 선택되고;
X3이 CH 또는 CR3'이고,
여기서 R3'가
시아노-
플루오로-
클로로-
플루오로-C1-C4-알킬-
C1-C4-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
메톡시-
로부터 선택되고;
X3이 CH 또는 CR3'이고,
여기서 R3'가
시아노-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
할로-C1-C7-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C7-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-
1-피롤리디닐-
1-피페라지닐-
로부터 선택되고;
X3이 N인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
C1-C4-알킬-
C1-C4-알콕시-
플루오로-C1-C4-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C4-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-
1-피롤리디닐-
1-피페라지닐-
로부터 선택되고;
X3이 N인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
메톡시-
로부터 선택되고;
X3이 N인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
수소
로부터 선택되고;
X3이 CR3'이고,
여기서 R3'가
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-카르보닐-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-술포닐-
1-피롤리디노-술포닐-
4-모르폴리노-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-아미노-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 N이고;
R5'가
수소
로부터 선택되고;
X3이 CR3'이고,
여기서 R3'가
C1-C4-알킬-술포닐-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 CH이고;
R5'가
C1-C7-알킬-
C1-C7-알콕시-
할로-C1-C7-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C7-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-
로부터 선택되고;
X3이 CR3'이고,
여기서 R3'가
시아노-
할로겐-
할로-C1-C7-알킬-
C1-C7-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 CH이고;
R5'가
C1-C4-알킬-
C1-C4-알콕시-
플루오로-C1-C7-알킬-옥시-
아미노-
N-C1-C4-알킬-아미노-
N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-
로부터 선택되고;
X3이 CR3'이고,
여기서 R3'가
시아노-
플루오로-
클로로-
플루오로-C1-C4-알킬-
C1-C4-알킬-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 CR4'이고,
여기서 R4'가
F3C-
로부터 선택되고;
R5'가
아미노-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-아미노-
로부터 선택되고;
X3이 CH인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
X4가 CR4'이고,
여기서 R4'가
F3C-
로부터 선택되고;
R5'가
수소-
로부터 선택되고;
X3이 CH 또는 CR3'이고,
여기서 R3'가
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-카르보닐-
N,N-디-C1-C7-알킬-아미노-술포닐-
1-피롤리디노-술포닐-
4-모르폴리노-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-
C1-C7-알킬-술포닐-아미노-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
A가
Figure 112014064974414-pct00033
로부터 선택된 포화 헤테로사이클이고;
X1이 CH이고;
X2가 CH이고;
X4가 N이고;
R5가
메톡시-
로부터 선택되고;
X3이 N인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
A가
Figure 112014064974414-pct00034
로부터 선택된 포화 헤테로사이클이고;
X1이 CR1이고,
여기서 R1이 플루오로-로부터 선택되고;
X2가 CH이고;
X4가 N이고;
R5'가
메톡시-
로부터 선택되고;
X3이 CH 또는 CR3'이고,
여기서 R3'가
시아노-
로부터 선택되는 것인
화학식 II의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 하기 실시예 섹션에 열거된 화합물이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{3-[6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
1-{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
1-{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
2-아미노-5-{4-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-아미노-5-{4-[1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
(S)-(3-(6-(5-플루오로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(5-플루오로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(S)-2-메톡시-5-(4-(1-(2-메톡시아세틸)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
2-메톡시-5-(4-(1-(2-메톡시아세틸)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
(S)-5-(4-(1-(시클로펜탄카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴;
5-(4-(1-(시클로펜탄카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴;
(2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
푸란-3-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
푸란-3-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
푸란-3-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
푸란-3-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
(3-메톡시-시클로부틸)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(3-메톡시-시클로부틸)-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
({(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
({3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
1-(4-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
5-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
5-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
(4,4-디플루오로-시클로헥실)-{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(4,4-디플루오로-시클로헥실)-{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(2-테트라히드로-피란-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[1-(2-테트라히드로-피란-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
5-{4-[(S)-1-(2,4-디메틸-옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
5-{4-[1-(2,4-디메틸-옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
5-{4-[(S)-1-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
5-{4-[1-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
이속사졸-3-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
이속사졸-3-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
이속사졸-5-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
이속사졸-5-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(티아졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[1-(티아졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(1-메틸-1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[1-(1-메틸-1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(1-메틸-1H-피라졸-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-{4-[1-(1-메틸-1H-피라졸-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
(S)-(2,4-디메틸옥사졸-5-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
(2,4-디메틸옥사졸-5-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(티아졸-5-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(티아졸-5-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-피라졸-5-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-피라졸-5-일)메타논;
4-((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-3-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-3-일)메타논;
(S)-(1H-이미다졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
(1H-이미다졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
5-((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
5-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-4-일)메타논;
(S)-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1H-피라졸-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1H-피라졸-4-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(5-메틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(5-메틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피라진-2-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피라진-2-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-티아졸-4-일-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-티아졸-4-일-메타논;
{(S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
(S)-(3-(6-(6-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(6-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)아제티딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
{(S)-3-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
{3-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
[(S)-3-(6-퀴놀린-3-일-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
[3-(6-퀴놀린-3-일-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(S)-1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸부탄-1-온;
1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸부탄-1-온;
1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
1-{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
2-메톡시-5-[4-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-니코티노니트릴;
2-메톡시-5-[4-(1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-니코티노니트릴;
(S)-6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
(S)-6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리미딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리미딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
(S)-1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(S)-2-메톡시-5-(4-(1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
2-메톡시-5-(4-(1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
(S)-1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-카르보닐)피페리딘-1-일)에타논;
1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-카르보닐)피페리딘-1-일)에타논;
(2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
(2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1s,4R)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1s,4R)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
((1s,4R)-4-히드록시시클로헥실)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
((1s,4R)-4-히드록시시클로헥실)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
((1r,4S)-4-히드록시시클로헥실)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
((1r,4S)-4-히드록시시클로헥실)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
(2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
(2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
(S)-1-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
1-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
(S)-(3-(6-(5-클로로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(5-클로로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
(테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-{6-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일}-메타논;
(테트라히드로-피란-4-일)-{3-{6-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일}-메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(4-메틸피페라진-1-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(4-메틸피페라진-1-일)메타논;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(모르폴리노)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(모르폴리노)메타논;
(S)-(4-히드록시피페리딘-1-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
4-히드록시피페리딘-1-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
(S)-N-(2-히드록시에틸)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미드;
N-(2-히드록시에틸)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미드;
(S)-1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피페라진-1-일)에타논;
1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피페라진-1-일)에타논;
(S)-2-메톡시-5-(4-(1-(모르폴린-4-카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
2-메톡시-5-(4-(1-(모르폴린-4-카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
(S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
1-(4-{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
{(S)-3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논; 또는
{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
으로부터 선택된 화학식 I의 화합물이다.
유리 형태의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물, 및 중간체로서 사용될 수 있는 염을 비롯한 그의 염 형태의 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 사이의 밀접한 관계의 관점에서, 예를 들어 신규 화합물의 정제 또는 확인에서, 본원의 상기 및 하기 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물들 또는 화합물에 대한 임의의 언급은 적절하게 편의상 유리 형태의 화합물 및/또는 또한 그의 하나 이상의 염, 뿐만 아니라 하나 이상의 용매화물, 예를 들어 수화물에 대해 언급하는 것으로 이해되어야 한다.
화학식 I 또는 화학식 II의 화합물 또는 그의 염은, 각각 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물의 제조에 대해 이전에 기재되지 않았을지라도 그 자체로 공지된 과정에 따라 제조된다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 염을 지칭하며, 이는 전형적으로 생물학적으로 또는 달리 바람직하다. 다수의 경우에, 본 발명에서 사용되는 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 그와 유사한 기의 존재에 의해 산 염 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
제약상 허용되는 산 부가염은 무기 산 및 유기 산으로 형성될 수 있다 (예를 들어, 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프토에이트, 납실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염).
염이 유도될 수 있는 무기 산은, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 술포살리실산 등을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가염은 무기 및 유기 염기로 형성될 수 있다.
염이 유도될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어 암모늄 염 및 주기율표의 1족 내지 12족으로부터의 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연 및 구리로부터 유도되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1급, 2급 및 3급 아민, 자연 발생의 치환된 아민을 비롯한 치환된 아민, 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.
본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상의 화학적 방법에 의해 모 화합물, 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대, Na, Ca, Mg 또는 K 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등)와 반응시키거나, 또는 이들 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매, 또는 상기 둘의 혼합물 중에서 수행한다. 일반적으로, 실행 가능한 경우에 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비-수성 매질의 사용이 바람직하다. 추가의 적합한 염의 목록은, 예를 들어 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); 및 "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾아볼 수 있다.
단리 또는 정제 목적상, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것도 또한 가능하다. 치료 용도를 위해서는, 단지 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만을 사용한다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로, 동물은 포유동물이다. 대상체는 또한, 예를 들어 영장류 (예를 들어, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 상태, 증상 또는 장애 또는 질환의 감소 또는 저해, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저 활성에서의 유의한 감소를 지칭한다.
본원에 사용된 임의의 질환 또는 장애에 대한 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는, 한 실시양태에서, 질환 또는 장애의 개선 (즉, 질환 또는 그의 하나 이상의 임상적 증상의 발달의 둔화 또는 정지 또는 감소)을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 하나 이상의 물리적 파라미터 (환자에 의해 인식가능하지 않을 수 있는 것들 포함)의 완화 또는 개선을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애를 물리적으로 (예를 들어, 인식가능한 증상의 안정화), 생리학적으로 (예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다의 방식으로 조절하는 것을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 예방 또는 진행의 지연을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체가 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어 유익할 경우에, 상기 대상체는 이러한 치료를 "필요로 한다".
대상 화합물의 "투여" 또는 대상 화합물을 "투여하는"이라는 용어는, 치료를 필요로 하는 대상체에게 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 제공하는 것을 의미한다. 하나 이상의 추가의 치료제"와 조합된" 투여는 임의의 순서 및 임의의 투여 경로로의 동시 (공동) 및 연속 투여를 포함한다.
본 발명은 또한 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 포함하는 제약 조성물의 용도를 제공한다. 본 발명은 이에 따라,
■ PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및 하나 이상의 담체 / 부형제를 포함하는 제약 조성물;
■ PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 치료 유효량의 PI3K 억제제, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 / 부형제를 포함하는 제약 조성물
의 용도를 제공한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 담체"는 당업자에게 공지된 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등, 및 이들의 조합을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 임의의 통상의 담체가 활성 성분과 상용적이지 않은 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 사용이 고려된다.
본 발명은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물의 용도를 제공한다. 제약 조성물은 특정한 투여 경로, 예컨대 경구 투여, 비경구 투여 및 직장 투여 등을 위해 제제화될 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (비제한적으로, 캡슐, 정제, 환제, 과립, 분말 또는 좌제 포함), 또는 액체 형태 (비제한적으로, 용액, 현탁액 또는 에멀젼 포함)로 제조될 수 있다. 제약 조성물은 멸균과 같은 통상적인 제약적 작업에 적용될 수 있고/거나, 통상적인 불활성 희석제, 윤활제, 또는 완충제, 뿐만 아니라 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.
전형적으로, 제약 조성물은 활성 성분을
a) 희석제, 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신;
b) 윤활제, 예를 들어 실리카, 활석, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 또한 정제의 경우에
c) 결합제, 예를 들어 규산알루미늄마그네슘, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우에
d) 붕해제, 예를 들어 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및/또는
e) 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제
와 함께 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다.
정제는 당업계에 공지된 방법에 따라 필름 코팅되거나 장용 코팅될 수 있다.
경구 투여에 적합한 조성물은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 유효량의 PI3K 억제제를 정제, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산가능한 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭시르의 형태로 포함한다. 경구 사용을 위해 의도된 조성물은 제약 조성물의 제조에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조되고, 이러한 조성물은 제약상 우아하고 맛우수한 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 활성 성분을, 정제의 제조에 적합한 비독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합하여 함유할 수 있다. 이들 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예를 들어 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석이다. 정제는 코팅되지 않거나, 또는 공지된 기술에 의해 코팅되어 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시킴으로써 보다 장기간에 걸쳐 지속되는 작용을 제공한다. 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 시간 지연 물질이 사용될 수 있다. 경구 사용을 위한 제제는, 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어 땅콩 오일, 액상 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 제공될 수 있다.
특정의 주사가능한 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액이고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 유리하게 제조된다. 상기 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용해 촉진제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 또한, 이들은 또한 다른 치료상 유익한 물질을 함유할 수 있다. 상기 조성물들은 각각 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제조되며, 약 0.1-75%의 활성 성분을 함유하거나, 또는 약 1-50%의 활성 성분을 함유한다.
경피 적용에 적합한 조성물은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 유효량의 PI3K 억제제를 적합한 담체와 함께 포함한다. 경피 전달에 적합한 담체는 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함하여 대상체의 피부를 통한 통과를 보조한다. 예를 들어, 경피 장치는 백킹 부재, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 임의로 담체와 함께 함유하는 저장소, 임의로 장기간에 걸쳐 제어되고 예정된 속도로 대상체의 피부에 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 전달하기 위한 속도 제어 장벽, 및 장치가 피부에 부착되도록 하는 수단을 포함하는 붕대 형태이다.
예를 들어 피부 및 눈으로의 국소 적용에 적합한 조성물은 수용액, 현탁액, 연고, 크림, 겔, 또는 예를 들어 에어로졸 등에 의한 전달을 위한 분무가능한 제제를 포함한다. 이러한 국소 전달 시스템은 선 크림, 로션, 스프레이 등으로 피부 적용을 위해, 예를 들어 피부암의 치료를 위해, 예를 들어 예방적 용도를 위해 특히 적절할 것이다. 이들은 따라서 당업계에 널리 공지된 국소, 예컨대 화장품 제제에 사용하기에 특히 적합하다. 이들은 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 국소 적용은 또한 흡입 또는 비강내 적용에 관한 것일 수 있다. 이는 편리하게는 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태로 (단독으로, 또는 혼합물, 예를 들어 락토스와의 건조 블렌드, 또는 예를 들어 인지질과의 혼합 성분 입자로서), 또는 적합한 추진제를 사용하거나 사용하지 않고 가압 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 제제의 형태로 전달될 수 있다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 포함하는 무수 제약 조성물 및 투여 형태의 용도를 제공하는데, 이는 물이 특정 화합물의 분해를 용이하게 할 수 있기 때문이다.
본 발명의 무수 제약 조성물 및 투여 형태는 무수 성분 또는 저수분 함유 성분, 및 저수분 또는 저습 조건을 이용하여 제조할 수 있다. 무수 제약 조성물은 그의 무수 성질이 유지되도록 제조 및 저장될 수 있다. 따라서, 물에 대한 노출을 방지하기 위해 공지된 물질을 사용하여 무수 조성물을 포장함으로써, 이들이 적합한 규정 키트 내에 포함될 수 있도록 한다. 적합한 포장의 예는 기밀 호일, 플라스틱, 단위 투여 용기, 예를 들어 바이알, 블리스터 팩 및 스트립 팩을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서의 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제가 분해될 속도를 감소시키는 하나 이상의 작용제를 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태의 용도를 제공한다. 이러한 작용제 (본원에서 "안정화제"로 지칭됨)는 항산화제, 예컨대 아스코르브산, pH 완충제 또는 염 완충제 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
생리학상 허용되는 담체의 예는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산; 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당 알콜, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)®, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 플루로닉스(PLURONICS)®를 포함한다.
적합한 부형제 / 담체는 임의의 고체, 액체, 반고체, 또는 에어로졸 조성물의 경우에 당업자에게 일반적으로 이용가능한 기체상 부형제일 수 있다.
고체 제약 부형제는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산마그네슘, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화나트륨, 건조 탈지유 등을 포함한다.
액체 및 반고체 부형제는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 및 다양한 오일, 예컨대 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 오일, 예를 들어 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 등으로부터 선택될 수 있다. 특히 주사가능한 용액을 위한 바람직한 액체 담체는 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글리콜을 포함한다.
압축 기체를 사용하여 화합물을 에어로졸 형태로 분산시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 불활성 기체는 질소, 이산화탄소 등이다. 다른 적합한 제약 부형제 및 그의 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990)]에 기재되어 있다.
활성 성분의 투여량은 치료할 질환, 종, 그의 연령, 체중, 개별 상태, 개별 약동학적 데이터 및 투여 방식에 따라 달라진다. 제제 내 활성 성분의 양은 당업자에게 이용되는 전체 범위 내에서 가변적일 수 있다.
하나 이상의 제약상 허용되는 담체 (예컨대, 부형제 및/또는 희석제)와 회합된 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 포함하는 제약 조성물은 통상적인 방식, 예를 들어 통상적인 혼합, 과립화, 코팅, 용해 또는 동결건조 공정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명은 또한 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및 하나 이상의 추가의 활성 성분을 포함하는 조합물에 관한 것이다. 본 발명은 이에 따라,
■ PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 치료 유효량의 PI3K 억제제 및 말라리아, 리슈마니아증, 톡소플라스마증, 트리파노소마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병의 치료를 위한 하나 이상의 치료 활성제를 포함하는 조합물, 특히 제약 조합물
■ 본원에 정의된 바와 같은 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 치료 유효량의 PI3K 억제제; 말라리아, 리슈마니아증, 톡소플라스마증, 트리파노소마증 및/또는 신경낭미충증; 특히 급성 뇌 말라리아 및/또는 샤가스병의 치료를 위한 치료 유효량의 하나 이상의 조합 파트너(들)를 포함하는, 동시 또는 순차적 투여에 적합화된 조합된 제약 조성물
의 용도를 제공한다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제의 "치료 유효량"이라는 용어는 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 또는 증상의 완화, 상태의 개선, 질환 진행의 둔화 또는 지연, 또는 질환의 예방 등을 도출할 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제의 양을 지칭한다.
"조합물"은 하나의 투여량 단위 형태의 고정 조합물을 지칭하거나, 또는 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및 조합 파트너 (예를 들어, "치료제" 또는 "공동-작용제"로도 또한 지칭되는 하기 설명되는 바와 같은 다른 약물)가 독립적으로 동시에 투여되거나 또는 시간 간격 내에 별도로 (특히, 이러한 시간 간격은 조합 파트너가 협력 효과, 예를 들어 상승작용 효과를 나타내도록 함) 투여될 수 있는 것인 조합 투여를 위한 부분들의 키트를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "공-투여" 또는 "조합 투여" 등은 선택된 조합 파트너를 그를 필요로 하는 단일 대상체, 예를 들어 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것으로 의도되고, 작용제들이 반드시 동일한 투여 경로에 의해 또는 동시에 투여될 필요는 없는 치료 요법을 포함하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "제약 조합물"은 1종 초과의 활성 성분의 혼합 또는 조합으로부터 생성된 생성물을 의미하고, 활성 성분의 고정 조합물 및 비-고정 조합물을 둘 다 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및 조합 파트너가 둘 다 단일 개체 또는 투여 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미한다. 용어 "비-고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제 및 조합 파트너가 둘 다 별도의 개체로서 동시에, 공동으로, 또는 구체적 시간 제한 없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미한다 (여기서, 이러한 투여는 환자 체내에서 2종의 화합물의 치료 유효 수준을 제공함). 후자는 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3종 이상의 활성 성분의 투여에 적용된다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 단독 활성 성분으로 투여되거나, 또는 예를 들어 보조제로서의 다른 약물, 예를 들어 면역억제제 또는 면역조절제 또는 다른 항염증제 (예를 들어, 동종이식편 또는 이종이식편 급성 또는 만성 거부 또는 염증성 또는 자가면역 장애의 치료 또는 예방을 위함), 또는 화학요법제 (예를 들어, 악성 세포 항증식제)와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 칼시뉴린 억제제, 예를 들어 시클로스포린 A 또는 FK 506; mTOR 억제제, 예를 들어 라파마이신, 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신, CCI779, ABT578, AP23573, TAFA-93, 비올리무스-7 또는 비올리무스-9; 면역억제 특성을 갖는 아스코마이신, 예를 들어 ABT-281, ASM981 등; 코르티코스테로이드; 시클로포스파미드; 아자티오프렌; 메토트렉세이트; 레플루노미드; 미조리빈; 미코페놀산 또는 염; 미코페놀레이트 모페틸; 15-데옥시스페르구알린 또는 그의 면역억제 동족체, 유사체 또는 유도체; 예를 들어 WO 02/38561 또는 WO 03/82859에 개시된 바와 같은 PKC 억제제, 예를 들어 실시예 56 또는 70의 화합물; JAK3 키나제 억제제, 예를 들어 N-벤질-3,4-디히드록시-벤질리덴-시아노아세트아미드 α-시아노-(3,4-디히드록시)-]N-벤질신남아미드 (티르포스틴 AG 490), 프로디기오신 25-C (PNU156804), [4-(4'-히드록시페닐)-아미노-6,7-디메톡시퀴나졸린] (WHI-P131), [4-(3'-브로모-4'-히드록실페닐)-아미노-6,7-디메톡시퀴나졸린] (WHI-P154), [4-(3',5'-디브로모-4'-히드록실페닐)-아미노-6,7-디메톡시퀴나졸린] WHI-P97, KRX-211, 3-{(3R,4R)-4-메틸-3-[메틸-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-아미노]-피페리딘-1-일}-3-옥소-프로피오니트릴의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태, 예를 들어 모노-시트레이트 (또한 CP-690,550으로 지칭됨), 또는 WO 04/052359 또는 WO 05/066156에 개시된 바와 같은 화합물; 면역억제 모노클로날 항체, 예를 들어 백혈구 수용체, 예를 들어 MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD52, CD58, CD80, CD86 또는 이들의 리간드에 대한 모노클로날 항체; 다른 면역조절 화합물, 예를 들어 CTLA4의 세포외 도메인의 적어도 일부 또는 그의 돌연변이체를 갖는 재조합 결합 분자, 예를 들어 비-CTLA4 단백질 서열에 결합된 CTLA4의 적어도 세포외 부분 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어 CTLA4Ig (예를 들어, ATCC 68629로 지정됨) 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어 LEA29Y; 부착 분자 억제제, 예를 들어 LFA-1 길항제, ICAM-1 또는 -3 길항제, VCAM-4 길항제 또는 VLA-4 길항제; 또는 항히스타민제; 또는 진해제, 또는 기관지확장제; 또는 안지오텐신 수용체 차단제; 또는 항감염제와 조합되어 사용될 수 있다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 또한 서로 조합되거나 또는 다른 치료제, 특히 다른 항말라리아제와 조합되어 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 항말라리아제는 프로구아닐, 클로르프로구아닐, 트리메토프림, 클로로퀸, 메플로퀸, 루메판트린, 아토바쿠온, 피리메타민-술파독신, 피리메타민-답손, 할로판트린, 퀴닌, 퀴니딘, 아모디아퀸, 아모피로퀸, 술폰아미드, 아르테미시닌, 아르테플렌, 아르테메터, 아르테수네이트, 프리마퀸, 흡입용 NO, L-아르기닌, 디프로필렌트리-아민 NONOate (NO 공여자), 로시글리트존 (PPARγ 효능제), 활성탄, 에리트로포이에틴, 레바미솔 및 피로나리딘을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 또한 서로 조합되거나 또는 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증의 치료에 사용되는 것과 같은 다른 치료제와 조합되어 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 작용제는 클로로퀸 술페이트, 아토바쿠온-프로구아닐, 아르테메터-루메판트린, 퀴닌-술페이트, 아르테수네이트, 퀴닌, 독시시클린, 클린다마이신, 메글루민 안티모니에이트, 소듐 스티보글루코네이트, 밀테포신, 케토코나졸, 펜타미딘, 암포테리신 B (AmB), 리포솜-AmB, 파로모마이신, 에플로르니틴, 니푸르티목스, 수라민, 멜라르소프롤, 프레드니솔론, 벤즈니다졸, 술파디아진, 피리메타민, 클린다마이신, 트리메트로핌, 술파메톡사졸, 아지트로마이신, 아토바쿠온, 덱사메타손, 프라지콴텔, 알벤다졸, 베타-락탐, 플로오로퀴놀론, 마크롤리드, 아미노글리코시드, 술파디아진 및 피리메타민을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
코드 번호, 일반명 또는 상표명에 의해 확인되는 활성제의 구조는 표준 일람 "머크 인덱스(The Merck Index)" 현행판, 또는 데이터베이스, 예를 들어 페이턴츠 인터내셔널(Patents International), 예를 들어 IMS 월드 퍼블리케이션즈(IMS World Publications)로부터 취할 수 있다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제와 조합되어 사용될 수 있는 상기 언급된 화합물은 당업계, 예컨대 상기 인용된 문헌에 기재된 바와 같이 제조 및 투여될 수 있다.
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 또한 공지된 치료 과정과 조합되어 유리하게 사용될 수 있다.
실험 상세사항:
출발 물질의 제조가 구체적으로 기재되지 않는 한, 화합물은 공지되어 있거나, 당업계에 공지된 또는 이하 기재된 바와 같은 방법과 유사하게 제조할 수 있다.
하기 실시예는 어떠한 제한도 없이 본 발명을 예시한다.
약어:
Ar 아릴
AcOH 아세트산
aq 수성
Ar 아릴
BOC tert-부틸-카르보네이트
BOP 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트
br.s. 넓은 단일선
BSA 소 혈청 알부민
CDCl3 클로로포름-d
CDI 1,1'-카르보닐디이미다졸
CH2Cl2 디클로로메탄
CH3CN 아세토니트릴
Cs2CO3 탄산세슘
d 이중선
dd 이중선의 이중선
DIPEA N-에틸디이소프로필아민
DME 1,4-디메톡시에탄
DMF N,N-디메틸포름아미드
DBU 1,8-디아자-7-비시클로[5.4.0]운데센
DMSO 디메틸술폭시드
dt 삼중선의 이중선
EDC 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드
eq. 당량
EtOAc 에틸 아세테이트
FCC 플래쉬 칼럼 크로마토그래피
h 시간
HBTU (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HCl 염산
HOBT 벤즈트리아졸-1-올
HPLC 고압 액체 크로마토그래피
HT 고처리량
H2O 물
하이플로(Hyflo) 하이플로 슈퍼 셀(Hyflo Super Cel) 배지
IFN 인터페론 (예를 들어, IFN-α=인터페론-α)
IL 인터류킨 (예를 들어, IL-6 =인터류킨-6)
이솔루트(Isolute)® SCX-2 중합체 지지된 술폰산 거대다공성 폴리스티렌
K 켈빈
K2CO3 탄산칼륨
LC 액체 크로마토그래피
M 몰
MeCN 아세토니트릴
MeOD 메탄올-d4
MeOH 메탄올
2-Me-THF 2-메틸테트라히드로푸란
MgSO4 황산마그네슘
MHz 메가 헤르츠
MS 질량 분광분석법
m 다중선
mBar 밀리바
mL 밀리리터
mm 밀리미터
mM 밀리몰
min. 분
mw 마이크로웨이브
NaOH 수산화나트륨
Na2SO4 황산나트륨
NaHCO3 탄산수소나트륨
NaOtBu 소듐 tert-부톡시드
NEt3 트리에틸아민
NH3 암모니아
NH4OH 0.88의 비중을 갖는 물 중 암모니아의 진한 용액
NMP N-메틸피롤리디논
NMR 핵 자기 공명
OBD 최적 베드 밀도
Pd(OAc)2 아세트산팔라듐
Pd(OH)2/C 탄소 상 수산화팔라듐
Pd2(dba)3 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐
Pd2(dba)3.CHCl3 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 클로로포름 착물
PL-HCO3 MP 중합체 지지된 수소 카르보네이트 거대다공성 폴리스티렌
PL-SO3H MP 중합체 지지된 술폰산 거대다공성 폴리스티렌
rt 실온
Rt 체류 시간
s 단일선
SCX-2 중합체 지지된 술폰산 거대다공성 폴리스티렌
t 삼중선
TBME tert-부틸메틸 에테르
tBuOK 포타슘 tert-부톡시드
tert-BuONa 소듐 tert-부톡시드
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
UPLC 초고성능 액체 크로마토그래피
X-Phos 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필비페닐-2-일)포스핀
사용된 마이크로웨이브 장비는 바이오타지 이니시에이터(Biotage Initiator)®였다.
모든 화합물은 오토놈(AutoNom)을 이용하여 명명하였다.
이용된 LCMS 방법:
LC 방법 1 (Rt (1)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스(Ascentis)®익스프레스(Express) 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코(Supelco))가 구비된 애질런트(Agilent) HPLC 시스템 상에서 3.7분에 걸쳐 구배 (H2O+0.05% 포름산+3.75 mM 아세트산암모늄) / (CH3CN+0.04% 포름산) 90/10 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 2 (Rt (2)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스®익스프레스 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코)가 구비된 애질런트 HPLC 시스템 상에서 3.7분에 걸쳐 구배 (H2O+0.05% 포름산+3.75 mM 아세트산암모늄) / (CH3CN+0.04% 포름산) 95/5 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 3 (Rt (3)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스®익스프레스 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코)가 구비된 애질런트 HPLC 시스템 상에서 0.5분에 걸쳐 구배 (H2O+0.05% 포름산+3.75 mM 아세트산암모늄) / (CH3CN+0.04% 포름산) 99/1 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 이어서 1.7분에 걸쳐 99/1 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 4 (Rt (4)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스®익스프레스 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코)가 구비된 애질런트 HPLC 시스템 상에서 1.7분에 걸쳐 구배 (H2O+0.05% 포름산+3.75 mM 아세트산암모늄) / (CH3CN+0.04% 포름산) 90/10 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 5 (Rt (5)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스®익스프레스 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코)가 구비된 애질런트 HPLC 시스템 상에서 3.7분에 걸쳐 구배 (H2O+0.05% TFA) / (CH3CN+0.04% TFA) 95/5 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 6 (Rt (6)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스®익스프레스 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코)가 구비된 애질런트 HPLC 시스템 상에서 0.5분에 걸쳐 구배 (H2O+TFA) / (CH3CN+0.04% TFA) 99/1 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 이어서 1.7분에 걸쳐 99/1 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 7 (Rt (7)): 체류 시간 (Rt)은 아센티스®익스프레스 칼럼 C18 30 x 2.1mm, 2.7μm (슈펠코)가 구비된 워터스(Waters) 애질런트 HPLC 시스템 상에서 1.7분에 걸쳐 구배 (H2O+0.05% TFA) / (CH3CN+0.04% TFA) 90/10 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 및 이어서 0.7분에 걸쳐 5/95 및 용매 유량으로서 1.4 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 8 (Rt (8)): 체류 시간 (Rt)은 엑스테라(XTerra) 칼럼 MS C18, 50x4.6mm, 5 μm, 역상이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT(alliance-HT) 시스템 상에서 8.0분에 걸쳐 구배 (H2O+0.1% TFA) / (CH3CN+0.1% TFA) 95/5 → 0/100 및 용매 유량으로서 2.0 mL/분 및 오븐 온도에 대해 45℃를 적용하여 수득하였다. 검출 방법 UV 220-400 nm - MS.
LC 방법 1' (Rt (1')): 체류 시간 (Rt)은 엑스브리지(XBridge) MS 칼럼 C18 30/3.0 2.5m이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 1.7분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% 포름산) / CH3CN (+0.1% 포름산) 90/10 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 2' (Rt (2')): 체류 시간 (Rt)은 엑스브리지 MS 칼럼 C18 30/3.0 2.5m이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 1.7분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% TFA) / CH3CN (+0.1% TFA) 90/10 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 3' (Rt (3')): 체류 시간 (Rt)은 엑스브리지 MS 칼럼 C18 30/3.0 2.5m이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 3.7분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% TFA) / CH3CN (+0.1% TFA) 95/5 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 4' (Rt (4')): 체류 시간 (Rt)은 선파이어(SunFire) 칼럼 C18 20X4.6mmm이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 4분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% TFA) / CH3CN (+0.1% TFA) 95/5 → 0/100 및 용매 유량으로서 1 mL/분 및 오븐 온도에 대해 45℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 5' (Rt (5')): 체류 시간 (Rt)은 액퀴티(Acquity) UPLC BEH C18 50X2.1mm, 1.7 um 칼럼이 구비된 워터스 UPLC-MS 시스템 상에서 4분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% 포름산) / CH3CN (+0.1% 포름산) 95/5 → 10/90 및 용매 유량으로서 0.7 mL/분 및 오븐 온도에 대해 30℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 6' (Rt (6')): 체류 시간 (Rt)은 액퀴티 UPLC BEH C18 50X2.1mm, 1.7 um 칼럼이 구비된 워터스 UPLC-MS 시스템 상에서 4.2분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% 포름산) / CH3CN (+0.1% 포름산) 80/20 → 5/95 및 용매 유량으로서 0.7 mL/분 및 오븐 온도에 대해 30℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 7' (Rt (7')): 체류 시간 (Rt)은 엑스브리지 MS 칼럼 C18 30/3.0 2.5m이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 3.7분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% 포름산) / CH3CN (+0.1% 포름산) 95/5 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 8' (Rt (8')): 체류 시간 (Rt)은 엑스브리지 MS 칼럼 C18 30/3.0 2.5m이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 2.2분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% 포름산) / CH3CN (+0.1% 포름산) 99/1 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 9' (Rt (9')): 체류 시간 (Rt)은 엑스브리지 MS 칼럼 C18 30/3.0 2.5m이 구비된 워터스 HPLC 얼라이언스-HT 시스템 상에서 2.2분에 걸쳐 구배 H2O (+0.1% TFA) / CH3CN (+0.1% TFA) 99/1 → 5/95 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분 및 오븐 온도에 대해 40℃를 적용하여 수득하였다.
LC 방법 10' (Rt (10')): FIA-MS (MS)는 워터스 HPLC-MS 기기 상에서 수득하였다.
정제 방법:
정제용 역상 길슨(Gilson) HPLC
● 방법 A: 워터스로부터의 칼럼 선파이어 정제용 C18 OBD 5μm, 30 x 100mm, 이동상으로서 H2O + 0.1% TFA 및 아세토니트릴 + 0.1% TFA 사용. 검출 방법 UV 220-400 nm
● 방법 B: 워터스로부터의 칼럼 아틀란티스(Atlantis) 정제용 T3 OBD 5μm, 30 x 150mm, 이동상으로서 H2O + 0.1% TFA 및 아세토니트릴 + 0.1% TFA 사용. 검출 방법 UV 220-400 nm
● 방법 C: 워터스로부터의 칼럼 엑스테라 RP18 OBD 5μm, 19 x 50mm, 이동상으로서 H2O + 0.1% TFA 및 아세토니트릴 + 0.1% TFA 사용. 검출 방법 UV 220-400 nm
X선 분말 회절
기기분석:
Figure 112014064974414-pct00035
중간체 화합물의 제조
Figure 112014064974414-pct00036
중간체 1: 5-브로모-2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘
2-메톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (20.0 g, 113.0 mmol) 및 1,3-디브로모-5,5-디메틸이미다졸리딘-2,4-디온 (43.6 g, 152.0 mmol)에 TFA (80 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 18시간 동안 교반하였다. TFA를 진공 (50 mbar, 45℃) 하에 제거하고, 잔류물을 tert-부틸 메틸 에테르 (200 mL) 중에 현탁시켰다. 생성된 무색 고체를 여과에 의해 제거하고, tert-부틸 메틸 에테르 (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, EtOAc (50 mL) 중에 현탁시켰다. 불용성 무색 고체를 여과에 의해 제거하고, EtOAc (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 헵탄/ tert-부틸 메틸 에테르 (5/1, 20 mL)로 희석하고, 불용성 무색 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc, 100/0 → 90/10을 사용하여 정제하였다. 조 생성물을 NaHCO3의 플러그 (20g)를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 증발시켜 금색 오일 (27.9 g)을 수득하였다. 오일을 헵탄 (20 mL) 중에 용해시키고, 실리카 겔의 플러그 (80 g)를 통해 여과하여 정제 (헵탄으로 용리시킴)함으로써 5-브로모-2-메톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘을 무색 오일 (22.5g, 74% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00037
Figure 112014064974414-pct00038
중간체 2: 1-((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온
(S)-피롤리딘-3-올 (10.0 g, 81.0 mmol), 트리에틸아민 (23.6 mL, 170.0 mmol) 및 CH2Cl2 (150 mL)를 배-형상의 플라스크 중에서 합하여 베이지색 현탁액을 수득하였다. 혼합물을 -10℃로 냉각시키고, 프로피오닐 클로라이드 (7.06 mL, 81.0 mmol)를 온도를 -10 내지 0℃에서 유지하면서 15분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 베이지색 현탁액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. MeOH (9.8 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 한 다음, 1시간 동안 교반하여 갈색 용액을 수득하였다. 혼합물을 진공 하에 증발시켜 베이지색 잔류물을 수득하였으며, 이를 디에틸에테르 (200 mL) 중에서 교반하고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켜 1-((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온을 황색 오일 (11.23 g, 95% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00039
Figure 112014064974414-pct00040
중간체 3: ((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
(S)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (3.69g, 29.9 mmol) 및 트리에틸아민 (6.65 g, 9.16 mL, 65.7 mmol)을 CH2Cl2 (15 mL)에 넣었다. 현탁액을 약 3℃에서 냉각시켰다. 이 혼합물에, CH2Cl2 (15 mL) 중 테트라히드로-피란-4-카르보닐 클로라이드 (4.67g, 29.9 mmol)의 용액을 천천히 첨가하였다. 이어서, 생성된 반응 혼합물을 3-10℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시켜 분말을 수득하였다. 이 분말에, EtOAc (100 mL)를 첨가하였다. 고체를 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 이어서, 회수된 여과물을 농축시켜 ((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논을 베이지색 분말 (6.77 g, 98% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00041
Figure 112014064974414-pct00042
중간체 4: [(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일]-카르밤산 tert-부틸 에스테르
CH2Cl2 (10 mL) 중 테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐 클로라이드 (0.455 g, 3.06 mmol)의 격렬히 교반 중인 용액에 실온에서 포화 NaHCO3(수성) (10 mL) 및 (S)-피롤리딘-3-일]-카르밤산 tert-부틸 에스테르의 용액 (570 mg, 3.06 mmol)을 동시에 조금씩 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 실온에서 3시간 동안 격렬히 교반하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2 / MeOH를 사용하여 정제함으로써 [(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일]-카르밤산 tert-부틸 에스테르를 무색 검 (0.623 g, 68% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00043
Figure 112014064974414-pct00044
중간체 5: (S)-3-아미노-피롤리딘-1-일-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
CH2Cl2 (2.0 mL) 중 (S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (중간체 4) (0.623 g, 2.09 mmol)에 TFA (2.0 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 8시간 동안 정치시켰다. 진공 하에 증발시키고, 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아를 사용하여 용리시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 [(S)-3-아미노-피롤리딘-1-일-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논을 무색 고체 (0.34 g, 82% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00045
Figure 112014064974414-pct00046
중간체 6: 3-(4-아세틸-피페라진-1-카르보닐)-1-메틸-3H-이미다졸-3-이움 아이오다이드
1-(피페라진-1-일)에타논 (143 mg, 1.12 mmol) 및 CDI (199 mg, 1.23 mmol)를 THF (10 mL) 중에서 아르곤 하에 밤새 환류시켰다. 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2 (20 mL) 및 물 (5 mL)로 희석하고, 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 유리 바이알 내 아세토니트릴 (5 mL) 중에 용해시키고, 메틸 아이오다이드 (0.279 mL, 4.46 mmol)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 실온에서 24시간 동안 정치시켰다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 헵탄 / EtOAc, 10/1 (10 mL)로 연화처리하여 3-(4-아세틸-피페라진-1-카르보닐)-1-메틸-3H-이미다졸-3-이움 아이오다이드를 무색 검 (400 mg)으로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014064974414-pct00047
중간체 7: (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
Pd(OH)2/C (1.2 g, 1.71 mmol)를 아르곤으로 플러싱하고, 메탄올 (25 mL) 중에 용해시킨 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (10.95 g, 26.7 mmol)를 첨가하고, 이어서 포름산암모늄 (1.68 g, 26.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2에 이어서 TBME, 이어서 TBME/MeOH 100/0 → 90/10, 이어서 TBME/MeOH/NH4OH 85/15/5)에 의해 정제하여 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (7.39 g, 87% 수율)를 황색 점착성 오일로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00048
중간체 7에 대한 대안적 합성:
Pd(OH)2/C (1.54 g, 2.2 mmol)를 질소로 플러싱하고, 메탄올 (50 mL) 중에 용해시킨 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (8.5 g, 20.67 mmol)를 첨가하고, 이어서 트리에틸암모늄 포르메이트 (7.9 g, 53.7 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 2-Me-THF (50 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시켰다. 상부 유기 상을 수집하고, 바닥 수성 상을 2-Me-THF (10 mL)로 재추출하였다. 모든 유기 층을 합하고, 진공 하에 농축시켜 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (6.2 g, 94% 수율)를 황색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00049
(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
THF (20 mL) 중 (S)-3-히드록시피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (0.94 g, 5.01 mmol)의 용액에 아르곤 하에 NaH (0.23 g, 5.78 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 25분 동안 교반한 다음, 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (1 g, 3.85 mmol)을 첨가하고, 교반을 실온에서 4시간 동안 계속하였다. 혼합물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 여과하고, 증발 건조시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / 에틸 아세테이트, 1/1)에 의해 정제하여 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.35 g, 85% 수율)를 황색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00050
(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르에 대한 대안적 합성
2-Me-THF (100 mL) 중 (S)-3-히드록시피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (6.21 g, 33.16 mmol) 및 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (9 g, 34.65 mmol)의 용액에 질소 하에 tBuOK (8.17 g, 72.95 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 25분 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O로 켄칭하였다. 유기 층을 염수로 세척하였다. 생성된 유기 용액을 진공 하에 농축시켜 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (12.6 g, 89% 수율)를 황색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00051
중간체 8: 6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
5-브로모-2,4-디메톡시-피리미딘 (89 mg, 0.41 mmol), X-Phos (46 mg, 0.09 mmol) 비스(디벤질리덴아세톤)팔라듐(0) (29 mg, 0.03 mmol), 탄산세슘 (203 mg, 0.62 mmol)을 합하고, 아르곤으로 10분 동안 플러싱하였다. 이 혼합물에 디옥산 (4 mL) 중 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (100 mg, 0.31 mmol)를 첨가하고, 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 120℃에서 4.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (10 mL), 염수 (10 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 디옥산 (4 mL) 중에 용해시키고, 5-브로모-2,4-디메톡시-피리미딘 (89 mg, 0.41 mmol), X-Phos (46 mg, 0.09 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (29 mg, 0.03 mmol), 탄산세슘 (203 mg, 0.62 mmol)을 함유하는 유리 바이알에 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 120℃에서 4.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (10 mL)에 이어서 염수 (10 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켜 (S)-3-(6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
(S)-3-(6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 CH2Cl2 (2.0 mL) 중에 용해시키고, TFA를 첨가하였다 (1 mL). 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 카트리지에 의해 중화시키고 동결건조시켜 6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 황색 분말 (11 mg, 10% 수율, 2 단계에 걸침)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00052
Figure 112014064974414-pct00053
중간체 9: 2-아미노-5-[4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]니코티노니트릴
(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (84 mg, 0.263mmol), 이미도디탄산, 2-[5-브로모-3-(시아노)-2-피리디닐]-, 1,3-비스(1,1-디메틸에틸) 에스테르 (115 mg, 0.289 mmol), X-Phos (376 mg, 0.079 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (24 mg, 0.026 mmol), 탄산세슘 (171 mg, 0.526 mmol)을 유리 바이알 중에서 합하고, 아르곤으로 10분 동안 플러싱하였다. 이 혼합물에 디옥산 (4.0 mL)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 120℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (10 mL) 및 염수 (10 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켜 (S)-tert-부틸 3-(6-(6-(비스(tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(시아노)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. (S)-tert-부틸 3-(6-(6-(비스(tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(시아노)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트를 CH2Cl2 (2.0 mL) 중에 용해시키고, TFA를 첨가하였다 (1 mL). 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 카트리지에 의해 중화시키고 동결건조시켜 2-아미노-5-[4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]니코티노니트릴을 황색 분말 (17 mg, 19% 수율, 2 단계에 걸침)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00054
Figure 112014064974414-pct00055
이미도디탄산, 2-[5-브로모-3-(시아노)-2-피리디닐]-, 1,3-비스(1,1-디메틸에틸) 에스테르
CH2Cl2 (25 mL) 중 2-아미노-5-브로모니코티노니트릴 (0.785 g, 3.96 mmol), 트리에틸아민 (0.553 mL, 3.96 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (20 mg, 0.164 mmol)에 디-tert-부틸-디카르보네이트 (2.16 g, 9.91 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 진공 하에 증발 건조시키고, 헵탄 (25 mL) 중에서 72시간 동안 연화처리하였다. 생성된 침전물을 여과하고, 헵탄 (10 mL)으로 세척하여 이미도디탄산, 2-[5-브로모-3-(시아노)-2-피리디닐]-, 1,3-비스(1,1-디메틸에틸) 에스테르를 베이지색 고체 (1.1 g, 70% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00056
Figure 112014064974414-pct00057
중간체 10: (S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (1.00 g, 3.12 mmol), 5-브로모-2,3-디메톡시피리딘 (0.82 g, 3.75 mmol), 소듐 tert-부톡시드 (0.46 g, 4.68 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.11 g, 0.13 mmol), 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐 (0.06 g, 0.18 mmol) 및 무수 톨루엔 (10 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 80℃에서 교반하면서 18시간 동안 가열하였다. 냉각되도록 하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc / MeOH, 98/2 → 92/18을 사용하여 정제함으로써 (S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 연황색 발포체 (1.05 g, 74% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00058
Figure 112014064974414-pct00059
중간체 11: (S)-3-[6-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (630 mg, 1.97 mmol), 5-브로모-2-메톡시니코티노니트릴 (419 mg, 1.97 mmol), 탄산세슘 (1281.0 mg, 3.93 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (180 mg, 0.20 mmol), X-Phos (319 mg, 0.67 mmol) 및 무수 디옥산 (10.0 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1시간 동안 가열한 다음, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (100 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 상을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc, 80/20 → 0/100을 사용하여 정제함으로써 (S)-3-[6-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 갈색 검 (350 mg, 39% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00060
Figure 112014064974414-pct00061
중간체 12: (S)-3-[6-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (150 mg, 0.47 mmol), 5-브로모-3-플루오로-2-메톡시피리딘 (96 mg, 0.47 mmol), 탄산세슘 (305 mg, 0.94 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (43 mg, 0.05 mmol), X-Phos (76 mg, 0.16 mmol) 및 무수 디옥산 (2.0 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1.5시간 동안 가열한 다음, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (25 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하여 (S)-3-[6-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 트리플루오로아세테이트를 갈색 검 (45 mg, 17% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00062
Figure 112014064974414-pct00063
중간체 13: (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (150 mg, 0.47 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (중간체 1) (120 mg, 0.47 mmol), 탄산세슘 (305 mg, 0.94 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (43 mg, 0.05 mmol), X-Phos (76 mg, 0.16 mmol) 및 무수 디옥산 (2.0 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1시간 동안 가열한 다음, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL) 및 물 (2 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 상을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 트리플루오로아세테이트 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 트리플루오로아세테이트를 갈색 검 (90 mg, 32% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00064
Figure 112014064974414-pct00065
중간체 14: 4-메톡시-6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
유리 바이알에 4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (WO 2008/130481, p 47) (0.570 g, 3.45 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (0.697 g, 3.45 mmol), 탄산세슘 (2.25 g, 6.90 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.316 g, 0.345 mmol), X-Phos (0.493 g, 1.04 mmol) 및 무수 디옥산 (5 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1시간 45분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각되도록 하고, 실온에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc, 100/0 → 0/100에 이어서 EtOAc / MeOH, 90/10을 사용하여 정제함으로써 4-메톡시-6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 갈색 검 (0.36 g, 36% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00066
Figure 112014064974414-pct00067
중간체 15: 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
유리 바이알에 4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (WO 2008/130481, p 47) (0.273 g, 1.65 mmol), 5-브로모-3-클로로-2-메톡시피리딘 (0.368 g, 1.65 mmol), 소듐 tert-부톡시드 (318 mg, 3.31 mmol), 디아세톡시팔라듐 (0.037 g, 0.17 mmol), X-Phos (0.079 g, 0.17 mmol) 및 무수 톨루엔 / tert-부탄올, 5 /1 (6 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 2시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각되도록 하고, 실온에서 5일 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL) 및 물 (2 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 상을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc 100 / 0 → 0/ 100을 사용하여 정제함으로써 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 황색 고체 (95 mg, 19% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00068
Figure 112014064974414-pct00069
중간체 16: 4-메톡시-6-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
유리 바이알에 4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (0.273 g, 1.65 mmol), 3-브로모-5-(트리플루오로메틸)피리딘 (0.373 g, 1.65 mmol), 탄산세슘 (1.08 g, 3.31 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.076 g, 0.083 mmol), X-Phos (0.079 g, 0.165 mmol) 및 무수 디옥산 (5 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1.5시간 동안 가열하였다. 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc, 100/0 → 0/100을 사용하여 정제함으로써 4-메톡시-6-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 오렌지색 검 (195 mg, 34% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00070
Figure 112014064974414-pct00071
중간체 17: 6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올
유리 바이알에서 MeOH (2.0 mL) 중 4-메톡시-6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 14) (360 mg, 1.26 mmol)에 2M NaOH(수성) (2.0 mL)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 90℃에서 24시간 동안 가열하였다. 빙초산을 사용하여 pH 6으로 산성화시키고, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 CH2Cl2 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 각각의 추출에 대해, CH2Cl2 층을 고체 잔류물로부터 경사분리하였다. CH2Cl2 층을 합하고, 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아를 사용하여 용리시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-올을 갈색 검 (260 mg, 76% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00072
Figure 112014064974414-pct00073
중간체 18: 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올
유리 바이알에서 MeOH (5.0 mL) 중 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 15) (95 mg, 0.31 mmol)에 2M NaOH(수성) (3.0 mL)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 90℃에서 24시간 동안 가열하였다. 빙초산을 사용하여 pH 6으로 산성화시키고, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 CH2Cl2 (1 x 50 mL, 교반하면서)로 추출하였다. 각각의 추출에 대해, CH2Cl2 층을 고체 잔류물로부터 경사분리하였다. CH2Cl2 층을 합하였다. 이어서, 고체 잔류물을 물 (10 mL)로 세척하고, 여과하였다. 이 여과된 고체를 CH2Cl2 층과 합하고, 진공 하에 증발시켜 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올을 황색 고체 (90 mg, 107% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00074
Figure 112014064974414-pct00075
중간체 19: 6-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올
유리 바이알에서 MeOH (2.0 mL) 중 4-메톡시-6-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 16) (190 mg, 0.612 mmol)에 2M NaOH(수성) (2.0 mL)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 90℃에서 24시간 동안 가열하였다. 빙초산을 사용하여 pH 6으로 산성화시키고, 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 CH2Cl2 (2 x 30 mL, 초음파처리하면서)로 추출하였다. 각각의 추출에 대해, CH2Cl2 층을 고체 잔류물로부터 경사분리하였다. CH2Cl2 층을 합하고, 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아를 사용하여 용리시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 6-(5-(트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올을 황색 고체 (167 mg)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00076
Figure 112014064974414-pct00077
중간체 20: (S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
아세토니트릴 (2.0 mL) 중 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올 (중간체 17) (178 mg, 0.654 mmol)에 BOP (376 mg, 0.854 mmol) 및 DBU (0.197 mL, 1.31 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2분 동안 정치시킨 다음, 아세토니트릴 (2.0 mL) 중 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (365 mg, 1.96 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 75℃에서 72시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시키고, 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하여 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 트리플루오로아세테이트 (60 mg, 17% 수율)를 갈색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00078
Figure 112014064974414-pct00079
중간체 21: (S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
아세토니트릴 (3.0 mL) 중 6-(5-클로로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올 (중간체 18) (90 mg, 0.31 mmol)에 BOP (177 mg, 0.40 mmol) 및 DBU (0.15 mL, 0.99 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 2분 동안 정치시킨 다음, (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (0.17, 0.93 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 96시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시키고, 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하여 (S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 트리플루오로아세테이트 (50 mg, 35% 수율)를 갈색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00080
Figure 112014064974414-pct00081
중간체 22: (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (5.0 g, 19.06 mmol), (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.11 g, 20.96 g) 및 트리에틸아민 (3.98 mL, 28.6 mmol)을 밀봉된 바이알에서 120℃에서 42시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각되도록 하고, tert-부틸 메틸 에테르 (100 mL)로 희석하고, 생성된 현탁액을 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, 유기 층을 분리하였다. 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 증발시켜 갈색 검을 수득하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc / MeOH, 98/2 → 82/18을 사용하여 정제함으로써 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 연황색 발포체 (7.36 g, 93% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00082
중간체 22에 대한 대안적 합성:
(S)-tert-부틸-3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 (50 g, 192.5 mmol)를 NMP (200 mL) 중 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (39.440 g, 211.8 mmol) 용액에 첨가하고, 이어서 K2CO3 (39.9 g, 288.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃로 20시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각되도록 하고, 물 (300 mL)과 에틸아세테이트 (500 mL) 사이에 분배시켰다. 바닥 수성 상을 버리고, 상부 유기 상을 염수 (150 mL)로 세척하고, 진공 하에 농축시켜 조 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 연황색 발포체 (76.44 g, 97% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00083
중간체 23: (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
MeOH (100 mL) 중 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 22) (30.1 g, 73.5 mmol)의 용액에 20% 탄소 상 수산화팔라듐 (3.3 g)에 이어서 포름산암모늄 (4.63 g, 73.5 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하였다. 포름산암모늄 (0.38 g, 6.02 mmol)을 첨가하고, 환류 하에 30분 동안 가열을 계속하였다. 반응 혼합물을 냉각되도록 하고, MeOH (50 mL)에 이어서 CH2Cl2 (50 mL)로 세척하면서 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켜 갈색 오일을 수득하였다. CH2Cl2 (100 mL) 중에 용해시키고, 고체 NaHCO3 (10 g)을 첨가하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켜 갈색 오일을 수득하였다. EtOAc (50 mL) 중에 용해시켰고, 고체가 침전되었으며, 이를 여과하여 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 베이지색 고체 (15.55 g, 66% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00084
중간체 23에 대한 대안적 합성:
Pd(OH)2/C (6.60 g, 5.3 mmol)를 질소로 플러싱하고, 메탄올 (164 mL) 중에 용해시킨 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 22)를 첨가하고, 이어서 트리에틸암모늄 포르메이트 (28.4 g, 188.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 메틸 tert-부틸 에테르 (200 mL) 및 헵탄 (50 mL)으로 재결정화하여 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 베이지색 고체 (25.7 g, 85% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00085
중간체 24: (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 23) (3.5 g, 10.96 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (중간체 1) (3.09 g, 12.05 mmol), 소듐 tert-부톡시드 (1.58 g, 16.44 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.502 g, 0.548 mmol), 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐 (0.225 g, 0.657 mmol) 및 무수 tert-부탄올 (6 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 100℃에서 교반하면서 5시간 동안 가열하였다. 냉각되도록 하고, EtOAc (100 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시키고, 2상 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 분리하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 바이오타지® 아미노 실리카 겔을 통한 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc, 100/0 → 0/100에 이어서 EtOAc/MeOH (90/10)로 용리시켜 정제함으로써 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황색 발포체 (4.00 g, 74% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00086
중간체 24에 대한 대안적 합성:
유리 플라스크에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 23) (6.331 g, 15.86 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (중간체 1) (4.465 g, 17.442 mmol), 소듐 tert-부톡시드 (2.29 g, 23.78 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.726 g, 0.793 mmol), 디-tert-부틸(2'-메틸비페닐-2-일)포스핀 (0.297 g, 0.951 mmol) 및 무수 tert-부탄올 (30 mL)을 첨가하였다. 플라스크를 질소의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 환류 하에 4시간 동안 교반하면서 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, EtOAc (100 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배시켰다. 2상 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 분리하고, 진공 하에 농축시켜 조 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황색 발포체 (7.46 g, 95% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00087
중간체 25: (S)-3-[6-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 23) (566 mg, 1.77 mmol), 5-브로모-2-메톡시니코티노니트릴 (453 mg, 2.13 mmol), 탄산세슘 (1155 mg, 3.54 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (162 mg, 0.18 mmol), X-Phos (287 mg, 0.60 mmol) 및 무수 tert-부탄올 (5 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 18시간 동안 가열하였다. 냉각되도록 하고, CH2Cl2 (20 mL)와 물 (10 mL) 사이에 분배시키고, 2상 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 헵탄 / EtOAc, 100/0 → 0/100에 이어서 EtOAc/MeOH (90/10)를 사용하여 정제함으로써 (S)-3-[6-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 갈색 검 (234 mg, 29% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00088
중간체 1': 5-브로모-2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘
Figure 112014064974414-pct00089
2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘 (2.7 g, 14.79 mmol) 및 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인 (5.28g, 18.48 mmol)을 둥근 바닥 플라스크에 넣었다. 이 혼합물에 40ml TFA를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 밤새 (16시간) 교반하였다. 반응이 완결된 후, TFA 용매를 진공 하에 증발시키고, 생성된 잔류물을 포화 NaHCO3의 첨가에 의해 pH 6-7로 중화시켰다. 수성 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 추출물을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 오일 및 백색 고체의 혼합물을 수득하였다. 잔류물을 20% 에틸아세테이트/헵탄 (50ml) 중에 재용해시키고, 불용성 백색 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시킨 다음, 실리카 겔 상에서 플래쉬-크로마토그래피 (EtOAc/헵탄 5/95)에 의해 정제하여 5-브로모-2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘을 무색 액체 (2.08 g, 52% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00090
2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘
Figure 112014064974414-pct00091
2-클로로-3-트리플루오로메틸-피리딘 (3 g, 16.53 mmol)을 메탄올 중 소듐 메톡시드 (5.4M)의 용액 30ml 중에 용해시켰다. 혼합물을 주위 온도에서 2일 동안 교반하였다. 이 기간 후, 반응물을 얼음에 넣고, DCM으로 3회 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘을 담색 액체 (2.7 g, 89% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00092
중간체 2': 5-브로모-2-에톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘
Figure 112014064974414-pct00093
중간체 2'는 중간체 1'에 대해 기재된 절차에 따라 소듐 메톡시드의 용액 대신에 에탄올 중 소듐 에톡시드의 용액을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00094
중간체 3': 1-[4-(5-브로모-2-메틸-벤조일)-피페라진-1-일]-에타논
Figure 112014064974414-pct00095
DCM (25 mL) 중 5-브로모-2-메틸벤조산 (2.0 g, 9.30 mmol)의 혼합물에 실온에서 DIPEA (3.25 mL, 18.60 mmol) 및 HBTU (4.23 g, 11.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물에 1-(피페라진-1-일)에타논 (1.311 g, 10.23 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 2회 세척하고, 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 바이오타지 이솔레라(Isolera) 시스템을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 (아민 관능화 실리카 KP-NH, 시클로헥산/EtOAc 0 → 100%로 용리시킴)에 의해 정제함으로써 표제 화합물 (2.475 g, 82% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00096
중간체 4': 1-[4-(3-브로모-5-트리플루오로메틸-벤조일)-피페라진-1-일]-에타논
Figure 112014064974414-pct00097
중간체 4'는 중간체 3'에 대해 기재된 절차에 따라 5-브로모-2-메틸벤조산 대신에 3-브로모-5-트리플루오로메틸벤조산을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00098
중간체 5': 1-[4-(3-브로모-5-메톡시-벤조일)-피페라진-1-일]-에타논
Figure 112014064974414-pct00099
중간체 5'는 중간체 3'에 대해 기재된 절차에 따라 5-브로모-2-메틸벤조산 대신에 3-브로모-5-메톡시벤조산 (중간체 17)을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00100
중간체 6': 1-[4-(3-브로모-5-메틸-벤조일)-피페라진-1-일]-에타논
Figure 112014064974414-pct00101
중간체 6'는 중간체 3'에 대해 기재된 절차에 따라 5-브로모-2-메틸벤조산 대신에 3-브로모-5-메톡시벤조산 (중간체 17)을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00102
중간체 7': 1-[4-(3-브로모-5-클로로-벤조일)-피페라진-1-일]-에타논
Figure 112014064974414-pct00103
중간체 7'는 중간체 3'에 대해 기재된 절차에 따라 5-브로모-2-메틸벤조산 대신에 3-브로모-5-메톡시벤조산 (중간체 17)을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00104
중간체 8': N-(4-브로모-2-(트리플루오로메틸)페닐)메탄술폰아미드
Figure 112014064974414-pct00105
0-5℃에서 DCM (10 mL) 중 2-아미노-5-브로모벤조트리플루오라이드 (1.0 g, 4.17 mmol)의 혼합물에 NEt3 (1.16 mL, 8.33 mmol)에 이어서 메탄술포닐 클로라이드 (0.389 mL, 5 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4일 동안 교반하였다. 2일 후, 추가의 NEt3 (1.16 mL, 8.33 mmol)을 첨가하였다. 3일 후에 진전이 전혀 없었기 때문에, 추가의 NEt3 (0.580 mL, 4.17 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드 (0.324 mL, 4.17 mmol)를 첨가하였다. 반응이 완결되지 않았으므로, 이어서 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐에서 20분 동안 110℃에서 가열하였다. 진전이 전혀 없었으므로, 반응을 중지하였다. 반응 혼합물을 물 및 DCM으로 희석하였다. 층을 분리하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 콤비플래쉬 컴패니언 이스코(CombiFlash Companion ISCO) 시스템을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 (레디셉(Redisep) 실리카 40g 칼럼, 시클로헥산/EtOAc 100:0 → 70:30으로 용리시킴)에 의해 정제하여 순수한 화합물을 수득하지 못했다. 길슨 시스템을 사용하여 정제용 HPLC (선파이어 C18 칼럼, H2O + 0.1% TFA / CH3CN 20% → 85%로 용리시킴)에 의해 정제함으로써 표제 화합물 (404 mg, 31% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00106
중간체 9': N-(3-브로모-5-(트리플루오로메틸)페닐)메탄 술폰아미드
Figure 112014064974414-pct00107
0-5℃에서 피리딘 (10 mL) 중 3-아미노-5-브로모벤조트리플루오라이드 (1.0 g, 4.17 mmol)의 혼합물에 메탄술포닐 클로라이드 (0.389 mL, 5 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4일 동안 교반하였다. 반응이 완결되지 않았기 때문에, 이어서 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐에서 15분 동안 150℃에서 가열하였다. 진전이 전혀 없었으므로, 반응을 중지하였다. 반응 혼합물을 건조될 때까지 농축시키고, 잔류물을 톨루엔과 공증발시켰다. 이어서, 잔류물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 콤비플래쉬 컴패니언 이스코 시스템을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 (레디셉 실리카 12g 칼럼, 시클로헥산/EtOAc 100:0 → 70:30로 용리시킴)에 의해 정제함으로써 표제 화합물 (1.05 g, 79% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00108
중간체 10': 2-디플루오로메톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-피리딘
Figure 112014064974414-pct00109
밀봉된 튜브에, 아세토니트릴 (5 mL) 중 2-히드록시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (300 mg, 1.357 mmol), 소듐 클로로디플루오로아세테이트 (320 mg, 2.036 mmol)를 첨가하였다. 이 현탁액을 80℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, NaHCO3의 수용액 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 실리카 겔 (CH2Cl2/MeOH, 95/5) 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (197 mg, 53% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00110
중간체 11': 6,6-디플루오로-[1,4]디아제판
Figure 112014064974414-pct00111
상기 화합물은 하기 문헌 절차에 따라 제조하였다: 문헌 [Wellner,E.; Sandin,H.; Synthesis; 2002; 2; 223-226].
Figure 112014064974414-pct00112
본원에 기재된 보론산 또는 보론산 에스테르는 하기 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
반응식 1'
Figure 112014064974414-pct00113
a) 비스-(피나콜레이토)-디보론, PdCl2(dppf)-CH2Cl2, KOAc, 디옥산, 80℃, 16시간.
중간체 12': 2-메톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-니코티노니트릴
Figure 112014064974414-pct00114
용액 A: PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (0.958g, 1.174 mmol), KOAc (6.91g, 70.4 mmol) 및 비스-(피나콜레이토)-디보론 (7.15g, 28.2 mmol)을 250mL 플라스크에 넣고, 탈기하였다.
용액 B: 별도의 바이알에서, 5-브로모-2-메톡시 니코티니트릴 (5g, 23.47 mmol)을 무수 디옥산 100mL 중에 용해시켰다. 용액 B를 용액 A에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃로 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 나머지 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시켜 흑색 오일을 수득하였다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 95/5)에 의해 정제하여 표제 화합물 (5.7 g, 89% 수율)을 베이지색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00115
중간체 13' 내지 22'는 중간체 12'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 출발 물질로서 상응하는 아릴 브로마이드를 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00116
Figure 112014064974414-pct00117
중간체 23': 3-브로모-5-메톡시벤조산
Figure 112014064974414-pct00118
1-브로모-3-메톡시-5-메틸벤젠 (1g, 4.97 mmol), 피리딘 (3.22 mL, 39.8 mmol) 및 물 (8 ml)의 격렬히 교반된 혼합물에 105℃에서 KMnO4 (3.14g, 19.89 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 흑색 현탁액으로 변한 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 하이플로 상에서 여과하였다. 흑색 잔류물을 EtOAc로 여러 번 세척하였다. 이어서, 여과물을 EtAOc 중에 희석하고, HCl의 2M 용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (281 mg, 24% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00119
실시예의 제조
반응식 1
Figure 112014064974414-pct00120
a) 먼저 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 III을 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 (NaH) 및 극성 유기 용매, 예컨대 THF 또는 디옥산의 존재 하에 불활성 기체 조건 하에 실온에서 (S)-3-히드록시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르와 반응시켜 제조한다. b) N-탈벤질화를 가능한 팔라듐 촉매 중에서 바람직하게는 탄소 상 수산화팔라듐 Pd(OH)2/C 및 가능한 포르메이트 염 중에서 바람직하게는 포름산암모늄 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 메탄올을 사용하는 통상의 전달 수소화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 환류 조건 하에 수행한다. c) (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 IV와 화학식 R2-X의 아릴 브로마이드 (상기 식에서, X=브로모 또는 아이오도) 사이의 부흐발트-하르트비히(Buchwald-Hartwig) 교차 커플링을 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3 또는 Pd2(dba)3.CHCl3 또는 Pd(OAc)2와 함께 리간드, 예컨대 X-Phos 또는 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐, 바람직하게는 X-Phos와 함께 Pd2(dba)3, 염기, 예컨대 바람직하게는 Cs2CO3 또는 바람직하게는 tert-BuONa, 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 또는 바람직하게는 THF를 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 80-120℃, 바람직하게는 120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. d) N-BOC 탈보호를 가능한 산 중에서 바람직하게는 트리플루오로-아세트산 또는 HCl 및 적합한 유기 용매, 예컨대 CH2Cl2 또는 디에틸 에테르를 사용하는 통상의 BOC 탈보호 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행한다. e) 화학식 VI의 화합물을 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산과 반응시킨다. 당업자는 아미드를 제조하는 수많은 공지된 방식이 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 문헌 [Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852] 및 그에 인용된 참고문헌을 참조한다. 본원에 제공된 실시예는 따라서 총망라하도록 의도된 것이 아니며, 단지 예시적이다.
하기 일반적 방법 i - v를 이용하였다.
i. CH2Cl2 중 산 클로라이드 (1.3 당량)의 격렬히 교반 중인 용액에 과량의 포화 NaHCO3(수성) 및 CH2Cl2 중 화학식 VI의 아민 (1.0 당량)의 용액을 실온에서 동시에 조금씩 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 실온에서 2시간 동안 격렬히 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 농축시키고, 역상 크로마토그래피, 정상 크로마토그래피 또는 결정화에 의해 정제하였다.
ii. CH2Cl2 중 화학식 VI의 아민 (1.0 당량)에 산 클로라이드 (1.1 당량) 및 트리에틸아민 (3.0 당량)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 이어서 물과 적합한 유기 용매 사이에 분배시키고, 역상 크로마토그래피, 정상 크로마토그래피 또는 결정화에 의해 정제하였다.
iii. DMF 중 카르복실산 (1.0 당량) 및 HBTU (1.2 당량)에 트리에틸아민 (4.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, DMF 중 화학식 VI의 아민 (1.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반되도록 하고, 이어서 물과 적합한 유기 용매 사이에 분배시켰다. 유기 상을 분리하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 농축시키고, 역상 크로마토그래피, 정상 크로마토그래피 또는 결정화에 의해 정제하였다.
iv. DMF 중 카르복실산 (1.0 당량) 및 화학식 VI의 아민 (1.0 당량)에 DMF 중 DCC (1.2 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 역상 크로마토그래피, 정상 크로마토그래피 또는 결정화에 의해 정제하였다.
v. CH2Cl2 중 카르복실산 (1.1 당량) 및 화학식 VI의 아민 (1.0 당량)에 벤즈트리아졸-1-올 (1.1 당량) 및 EDC (1.6 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 이어서 물과 적합한 유기 용매 사이에 분배시켰다. 유기 상을 분리하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 농축시키고, 역상 크로마토그래피, 정상 크로마토그래피 또는 결정화에 의해 정제하였다.
반응식 2
Figure 112014064974414-pct00121
a) N-BOC 탈보호를 가능한 산 중에서 바람직하게는 트리플루오로-아세트산 및 유기 용매, 바람직하게는 CH2Cl2를 사용하는 통상의 BOC 탈보호 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행한다. b) 반응식 1, 단계 e에 기재된 바와 같은 일반적 방법 i - v를 이용하여 화학식 IX의 화합물을 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산과 반응시킨다. 당업자는 아미드를 제조하는 수많은 공지된 방식이 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 문헌 [Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852] 및 그에 인용된 참고문헌을 참조한다. 본원에 제공된 실시예는 따라서 총망라하도록 의도된 것이 아니며, 단지 예시적이다.
c) 벤질 보호기의 제거를 문헌 ["Protecting groups in Organic Synthesis" by T.W. Greene and P. Wutz, 3rd edition, 1999, John Wiley and Sons]에 기재된 바와 같은 표준 방법론을 이용하여 수행한다. 전형적인 조건은 메탄올 중 환류 하에 가열된 화학식 X의 화합물 1.0 당량, 포름산암모늄 8.0 당량 및 20% (w/w) 수산화팔라듐 Pd(OH)2/C (촉매)로 구성된다. d) 화학식 XI의 화합물과 화학식 R2-X의 화합물 (상기 식에서, X=브로모 또는 아이오도) 사이의 부흐발트-하르트비히 교차 커플링을 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3 또는 Pd2(dba)3.CHCl3 또는 Pd(OAc)2와 함께 리간드, 예컨대 X-Phos 또는 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐, 바람직하게는 X-Phos와 함께 Pd2(dba)3, 염기, 예컨대 바람직하게는 Cs2CO3 또는 바람직하게는 tert-BuONa, 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 또는 바람직하게는 THF를 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 80-150℃, 바람직하게는 120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
반응식 3
Figure 112014064974414-pct00122
화학식 XVII의 화합물은 반응식 1에서 단계 a-e에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로, 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (I) 및 tert-부틸 3-히드록시아제티딘-1-카르복실레이트 (XII)로부터 출발하여 제조할 수 있다.
반응식 4
Figure 112014064974414-pct00123
a) 먼저 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 XIX를 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 승온 (예를 들어, 120℃)에서 24-48시간 동안 (S)-3-아미노-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르와 반응시켜 제조한다. 전형적인 조건은 120℃에서 48시간 동안 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 1.0 당량, (S)-3-아미노-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 1.0 당량 및 트리에틸아민 1.5 당량으로 구성된다. b) 벤질 보호기의 제거를 문헌 ["Protecting groups in Organic Synthesis" by T.W. Greene and P. Wutz, 3rd edition, 1999, John Wiley and Sons]에 기재된 바와 같은 표준 방법론을 이용하여 수행한다. 전형적인 조건은 메탄올 중 환류 하에 가열된 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 XIX 1.0 당량, 포름산암모늄 1.1 - 8.0 당량 및 20% (w/w) 수산화팔라듐 Pd(OH)2/C (촉매)로 구성된다. c) (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 XX을 적합한 염기, 예컨대 소듐 tert-부톡시드 또는 탄산세슘 및 적합한 촉매 시스템, 예컨대 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐과 함께 Pd2(dba)3 또는 X-Phos와 함께 Pd2(dba)3의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 무수 tert-부탄올 또는 무수 디옥산 중에서 할라이드 R2-X (상기 식에서, R2는 상기 정의되어 있고, X는 할로, 바람직하게는 브로모 또는 아이오도임)와 반응시키고, 승온 (예를 들어, 100℃)에서 가열한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 100℃에서 5-24시간 동안 아르곤의 분위기 하에 무수 tert-부탄올 중 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 XX 1 당량, R2-X 1-1.5 당량, 소듐 tert-부톡시드 1.5-2.0 당량, 5-10 mol% Pd2(dba)3 및 5-10 mol% 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐로 구성된다. d) N-Boc 탈보호를 적합한 용매, 예컨대 CH2Cl2 중에서 실온에서 적합한 산, 예컨대 트리플루오로아세트산을 사용하는 통상의 Boc 탈보호 조건 하에 수행한다. 전형적인 조건은 실온에서 1-3시간 동안 CH2Cl2 중 과량의 트리플루오로아세트산 중 화학식 XII의 화합물 1 당량으로 구성된다. e) 반응식 1, 단계 e에 기재된 바와 같은 일반적 방법 i - v를 이용하여 화학식 XXII의 화합물을 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산과 반응시킨다. 당업자는 아미드를 제조하는 수많은 공지된 방식이 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 문헌 [Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852] 및 그에 인용된 참고문헌을 참조한다. 본원에 제공된 실시예는 따라서 총망라하도록 의도된 것이 아니며, 단지 예시적이다.
반응식 5
Figure 112014064974414-pct00124
a) 4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (WO 2008/130481, p 47)을 적합한 염기, 예컨대 탄산세슘 또는 소듐 tert-부톡시드 및 적합한 촉매 시스템, 예컨대 X-Phos와 함께 Pd2(dba)3 또는 X-Phos와 함께 Pd(OAc)2의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 디옥산 또는 THF 중에서 할라이드 R2-X (상기 식에서, R2는 상기 정의되어 있고, X는 할로, 바람직하게는 브로모 또는 아이오도임)와 반응시키고, 승온 (예를 들어, 110℃)에서 가열한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 110℃에서 5-24시간 동안 아르곤의 분위기 하에 디옥산 중 4-메톡시-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 1 당량, R2-X 1-1.5 당량, 탄산세슘 1.5-2.0 당량, 5-10 mol% Pd2(dba)3 및 5-10 mol% X-Phos로 구성된다. b) 화학식 XXV의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 메탄올 또는 디옥산 중에서 승온 (예를 들어, 100℃)에서 18-24시간 동안 수성 수산화나트륨과 반응시킨다. 전형적인 조건은 100℃에서 18시간 동안 메탄올 중 과량의 2N 수산화나트륨(수성) 중 화학식 XXV의 화합물 1 당량으로 구성된다. c) 화학식 XXI의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴 중 화학식 XXVI의 화합물을 염기, 예컨대 1,8-디아자-7-비시클로[5.4.0]운데센 (DBU)의 존재 하에 포스포늄 염, 예컨대 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP)와 반응시키는 염기-촉진된 포스포늄 커플링 반응에 이어서 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트의 첨가를 이용하여 제조할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 20℃ 내지 90℃의 온도에서 18-72시간 동안 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 65℃에서 72시간 동안 아르곤 하에 아세토니트릴 중 화학식 XXVI의 화합물 1 당량, BOP 1.0-1.5 당량, DBU 2.0-4.0 당량 및 (S)-tert-부틸 3-아미노피롤리딘-1-카르복실레이트 2.0-3.0 당량으로 구성된다. 단계 d) 및 e)는 반응식 1에서 단계 d) 및 e)에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 수행할 수 있다. 단계 f)는 반응식 5에서의 단계 c)와 유사한 방식으로 염기-촉진된 포스포늄 커플링 반응을 이용하여 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 90℃에서 24시간 동안 아르곤 하에 아세토니트릴 중 화학식 XXVI의 화합물 1 당량, BOP 1.0-1.5 당량, DBU 2.0-4.0 당량 및 화학식 XVII의 아민 2.0-3.0 당량으로 구성된다.
반응식 6
Figure 112014064974414-pct00125
a) 화학식 XXVIII의 알콜을 불활성 기체 조건 하에 실온에서 수소화나트륨 (NaH) 및 유기 용매 THF를 사용하는 2급 알콜의 탈양성자화에 의해 통상의 조건 하에 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘과 반응시킨다. b) N-탈벤질화를 가능한 팔라듐 촉매 중에서 바람직하게는 수산화팔라듐 Pd(OH)2 및 가능한 포르메이트 염 중에서 바람직하게는 포름산암모늄, 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 메탄올을 사용하는 통상의 전달 수소화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 환류 조건 하에 수행한다. c) 화학식 XI의 화합물과 화학식 R2-X의 화합물 사이의 부흐발트-하르트비히 교차 커플링을 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3 또는 Pd2(dba)3.CHCl3 또는 Pd(OAc)2와 함께 리간드, 예컨대 X-Phos 또는 2-디-t-부틸포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)비페닐, 바람직하게는 X-Phos와 함께 Pd2(dba)3, 염기, 예컨대 바람직하게는 Cs2CO3 또는 바람직하게는 tert-BuONa, 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 또는 바람직하게는 THF를 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 80-150℃, 바람직하게는 120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
반응식 7
Figure 112014064974414-pct00126
a) 화학식 VI의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 CH2Cl2 중에서 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 0℃ 내지 25℃의 온도에서 1-2시간 동안 포스겐과 반응시킨다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 아르곤 하에 1시간 동안 CH2Cl2 중 화학식 VI의 화합물 1.0 당량, 포스겐 1.0-5.0 당량, 트리에틸아민 3.0-4.0 당량을 포함한다. b) 화학식 XXIX의 화합물을 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 CH2Cl2 또는 N,N-디메틸포름아미드 중에서 10℃ 내지 30℃의 온도에서 1-18시간 동안 아민 R5R6NH와 반응시킨다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 아르곤 하에 2시간 동안 CH2Cl2 중 화학식 XXIX의 화합물 1.0 당량, R5R6NH 1.0-1.2 당량, 트리에틸아민 3.0-4.0 당량을 포함한다. c) 화학식 VI의 화합물을 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 CH2Cl2 또는 N,N-디메틸포름아미드 중에서 0℃ 내지 25℃의 온도에서 1-18시간 동안 카르바모일 클로라이드 R5R6NCOCl과 반응시킨다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 아르곤 하에 18시간 동안 CH2Cl2 중 화학식 VI의 화합물 1.0 당량, R5R6NCOCl 1.0-1.2 당량, 트리에틸아민 3.0-4.0 당량을 포함한다. d) 화학식 VI의 화합물을 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 CH2Cl2 또는 N,N-디메틸포름아미드 중에서 0℃ 내지 25℃의 온도에서 1-18시간 동안 화학식 XXXI의 화합물과 반응시킨다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 아르곤 하에 18시간 동안 CH2Cl2 중 화학식 VI의 화합물 1.0 당량, 화학식 XXXI의 화합물 1.0-1.2 당량, 트리에틸아민 1.0-2.0 당량을 포함한다. e) 화학식 VI의 화합물을 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 CH2Cl2 또는 N,N-디메틸포름아미드 중에서 0℃ 내지 25℃의 온도에서 1-18시간 동안 화학식 R7OCOCl의 화합물과 반응시킨다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. 전형적인 조건은 아르곤 하에 18시간 동안 CH2Cl2 중 화학식 VI의 화합물 1.0 당량, 화학식 R7OCOCl의 화합물 1.0-1.2 당량, 트리에틸아민 3.0-4.0 당량을 포함한다.
반응식 8
Figure 112014064974414-pct00127
a) 화학식 XXXIII의 3급 아민 (상기 식에서, R8 = 알킬, 예를 들어 벤질)을 유기 용매로서 특히 아세톤을 사용하는 통상의 조건 하에 화학식 R9-X의 화합물 (상기 식에서, R9 = 알킬, 예를 들어 메틸이고, X = 브로모 또는 아이오도)을 사용하여 4급화한다. b) 4급 아민 XXXIV를 사용한 화학식 R2-NH2의 아민의 알킬화를 염기, 예컨대 특히 K2CO3 및 유기 용매, 예컨대 특히 에탄올과 물의 2/1 혼합물을 사용하여 반응 혼합물을 80-100℃, 특히 80℃에서 가열함으로써 수행한다. c) 화학식 XXXV의 화합물을 염기, 예컨대 특히 NaH 및 화학식 (R10O)2CO의 화합물 (상기 식에서, R10 = 알킬, 예를 들어 탄산 디메틸 에스테르)과 반응시킨다. 반응 혼합물을 고온 (90℃) 하에 교반한다. d) 화학식 XXXVI의 화합물을 염기, 예컨대 소듐 메톡시드 및 유기 용매, 예컨대 메탄올을 사용하여 승온, 예컨대 90℃에서 2-18시간 동안 포름아미딘 아세테이트와 반응시킴으로써 피리미딘 고리를 형성한다. e) 화학식 XXVI의 화합물을 염기, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에 유기 용매, 예컨대 톨루엔 중에서 승온, 예컨대 100℃에서 12-18시간 동안 포스포릴 클로라이드와 반응시킨다. f) 화학식 XXVIII의 알콜을 불활성 기체 조건 하에 실온에서 수소화나트륨 (NaH) 및 유기 용매 THF를 사용하는 2급 알콜의 탈양성자화에 의해 통상의 조건 하에 화학식 XXXVII의 화합물과 반응시킨다.
화합물을 상기 실시예에 대해 기재된 방식으로 제조한 것으로 언급된 경우에, 당업자는 반응 시간, 시약의 당량수 및 반응 온도를 각각의 구체적 반응을 위해 변경할 수 있다는 것, 및 그럼에도 불구하고 다양한 후처리 또는 정제 조건을 이용하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
Figure 112014064974414-pct00128
실시예 1: {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
실시예 1의 합성 - 방법 1a (반응식 8에 따름)
수소화나트륨 (분산 오일 중 60%, 17.88 mg, 0.447 mmol)을 건조 THF 2mL 중 중간체 3 (75 mg, 0.378 mmol)의 용액에 아르곤 하에 첨가하였다. 현탁액을 주위 온도에서 아르곤의 분위기 하에 15분 동안 교반하였다. 4-클로로-6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (100 mg, 0.344 mmol)을 첨가하고, 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬-크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH 95/5)에 의해 정제하여 {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논을 담황색 검 (115 mg, 74% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00129
Figure 112014064974414-pct00130
4-클로로-6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올 (650 mg, 2.387 mmol), 포스포르옥시 클로라이드 (0.334 mL, 3.58 mmol), 트리에틸아민 (0.665 mL, 4.77 mmol) 및 톨루엔 (12 mL)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 고체 중탄산나트륨을 첨가하여 중화시키고, 여과하고, 용액을 진공 하에 농축시켰다. 나머지 흑색 잔류물을 CH2Cl2 및 물에 녹이고, 층을 분리하고, 유기 상을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 암갈색 고체를 수득하였다. 고체를 에틸아세테이트로 연화처리하고, 여과하고, 고진공 하에 건조시켜 4-클로로-6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (630 mg, 91% 수율)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00131
Figure 112014064974414-pct00132
6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올
6'-메톡시-5'-메틸-4-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2H-[1,3']비피리디닐-3-카르복실산 메틸 에스테르 (900 mg, 3.23 mmol), 포름아미딘 아세테이트 (521 mg, 4.85 mmol), 메탄올 (2.395 mL, 12.94 mmol) 중 소듐 메톡시드 (5.4 M) 및 메탄올 (4 mL)의 혼합물을 90℃로 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, CH2Cl2 중에 희석하고, 아세트산 (0.741 mL, 12.94 mmol)을 사용하여 중화시키고, H2O로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수층을 CH2Cl2로 2회 세척하고, 유기부를 합하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 에틸아세테이트 중에서 연화처리하여 6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-올 (669 mg, 수율 76%)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00133
Figure 112014064974414-pct00134
6'-메톡시-5'-메틸-4-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2H-[1,3']비피리디닐-3-카르복실산 메틸 에스테르
실온에서 디메틸 카르보네이트 (3.82 mL, 45.4 mmol) 중 수소화나트륨 (60%, 153 mg, 6.36 mmol)의 교반 현탁액에 6'-메톡시-5'-메틸-2,3,5,6-테트라히드로-[1,3']비피리디닐-4-온 (1 g, 4.54 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 가열 환류 (90℃)시킨 다음, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 CH2Cl2와 물 사이에 분배시키고, 1N HCl의 용액을 조심스럽게 첨가하였다. 수성 층을 분리하고, 추가 분량의 CH2Cl2로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 플래쉬-크로마토그래피 (헵탄 / 에틸아세테이트 3/1)에 의해 정제하여 6'-메톡시-5'-메틸-4-옥소-3,4,5,6-테트라히드로-2H-[1,3']비피리디닐-3-카르복실산 메틸 에스테르 (975 mg, 수율 77%)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00135
Figure 112014064974414-pct00136
6'-메톡시-5'-메틸-2,3,5,6-테트라히드로-[1,3']비피리디닐-4-온
물 (10 mL) 중 아이오다이드 염 1-벤질-1-메틸-4-옥소-피페리디늄 (참조: 문헌 [Tortolani, R.; Org. Lett., Vol. 1, No 8, 1999]) (3.61 g, 10.86 mmol)의 슬러리를 에탄올 (20 mL) 중 2-메톡시-5-아미노-3-피콜린 (1 g, 7.24 mmol) 및 탄산칼륨 (0.140 g, 1.013 mmol)의 환류 중인 용액에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 3시간 동안 가열 환류시켰다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2와 물 사이에 분배시켰다. 유기 층을 분리하고, 추가 분량의 CH2Cl2로 세척하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 플래쉬-크로마토그래피 (헵탄/에틸아세테이트 1/1)에 의해 정제하여 6'-메톡시-5'-메틸-2,3,5,6-테트라히드로-[1,3']비피리디닐-4-온 (1.15 g, 수율 72%)을 담황색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00137
실시예 1의 합성 - 방법 1b (반응식 1에 따름)
단계 3
CH2Cl2 (5 mL) 중 혼합물 6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (639 mg, 1.87 mmol)에 실온에서 산 클로라이드 테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐 클로라이드 (306 mg, 2.06 mmol) 및 트리에틸아민 (0.522 mL, 3.74 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 CH2Cl2/1N NaOH로 추출하여 중화시키고, 유기 상을 상 분리 튜브를 통해 분리하고, 증발시켜 {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (432 mg, 51% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00138
Figure 112014064974414-pct00139
6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
단계 2
(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.05 g, 4.63 mmol)를 TFA / CH2Cl2 (1/2) 중에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 CH2Cl2로 희석하고, 유기 층을 NaOH 1N에 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00140
Figure 112014064974414-pct00141
(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
단계 1
X-Phos (0.96 g, 2.01 mmol, 0.3 당량), Pd2(dba)3 (0.615 g, 0.672 mmol, 0.1 당량), Cs2CO3 (4.38 g, 13.44 mmol, 2 당량)을 합하고, 아르곤으로 10분 동안 플러싱하였다. 이 혼합물에, 디옥산 (6 mL) 중 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (2.15 g, 6.72 mmol)의 용액 및 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (1.76 g, 8.73 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물을 하이플로 상에서 여과하고, AcOEt를 첨가하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디옥산 (6 mL) 중에 용해시키고, 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (1.76 g, 8.73 mmol), X-Phos (0.96 g, 2.01 mmol), Pd2(dba)3 (0.615 g, 0.672 mmol), Cs2CO3 (4.38 g, 13.44 mmol)을 함유하는 유리 바이알에 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물을 하이플로 상에서 여과하고, AcOEt를 첨가하고, 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2에 이어서 TBME, 이어서 TBME/MeOH 99/1 → 90/10)에 의해 정제하여 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황색 발포체 (2.05 g, 69% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00142
아세토니트릴 중에서의 가열 및 냉각에 의한 실시예 1의 결정화
실시예 1 1부 (예를 들어, 100 mg)를 아세토니트릴 5부 (화합물 100 mg 각각에 대해 0.5 mL)와 교반하면서 혼합하였다. 40-60℃까지 가열하여 용액을 수득하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 천천히 냉각되도록 하였다. 밤새 추가로 냉각시킨 후 (5℃), 침전이 관찰되었다. 침전이 전혀 관찰되지 않은 경우에는, 질소 스트림을 사용하고 밤새 냉각시키는 단계를 반복하여 에탄올의 부피를 감소시킬 수 있었다. 혼합물을 원심분리하여 에탄올을 제거하였다. 고체를 진공 하에 25℃ 및 70 mbar에서 건조시켰다. 131℃의 MP를 갖는 실시예 1의 결정질 무수 형태를 수득하였다. 이 결정질 형태는 또한 다른 방법 및/또는 용매 하에, 예컨대 에탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 이소프로판올 중에서 가열 및 냉각시키거나, 헵탄 중에서 슬러리화하거나, 또는 항용매로서 헵탄을 사용하여 THF 또는 3-메틸-1-부탄올 중에서 항용매를 첨가함으로써 관찰되었다. 이들 결과는 결정질 형태의 재현성 및 확장성을 보여줄 뿐만 아니라, 상기 기재된 실험 조건과 상이한 실험 조건 하에 동일한 형태를 제조할 수 있음을 시사한다.
실시예 1 무수 형태의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X2):
Figure 112014064974414-pct00143
물 중 슬러리화에 의한 실시예 1의 3수화물 형태의 결정화
실온에서 실시예 1을 물 중에 슬러리화하여 (예를 들어, 물 10부 중 실시예 1 1부) 실시예 1의 3수화물 형태를 생성하였다. 결정을 원심분리에 의해 분리하고, 실내 환경에서 건조시켰다.
실시예 1 3수화물 형태의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X2):
Figure 112014064974414-pct00144
실시예 1의 시트레이트 염의 제조
실시예 1 0.5 g (검정 91.8%)을 메틸에틸케톤 5 mL 및 물 0.25 mL 중에 용해시키고, 60℃에서 가열하였다. 시트르산 213 mg을 50℃에서 첨가하고, 혼합물을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하였다. 45℃에서 결정화가 일어났다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 메틸에틸케톤 1 mL로 3회 세척한 다음, 50℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다. 시트레이트 염의 원소 분석은 1:1 (1수화물) 형태를 나타내었다.
실시예 1 시트레이트 염의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00145
실시예 1의 푸마레이트 염의 제조
실시예 1 0.5 g (검정 91.8%)을 아세토니트릴 15 mL 및 물 0.2 mL 중에 용해시키고, 76℃에서 가열하였다. 푸마르산 129 mg을 60℃에서 첨가하였다. 용액을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하였다. 염이 침전되었고, 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 1 mL로 3회 세척한 다음, 50℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다. 푸마레이트 염의 원소 분석은 1:1 (1수화물) 형태를 나타내었다.
실시예 1 푸마레이트 염의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00146
실시예 1의 나파디실레이트 염의 제조
실시예 1 0.5 g (검정 91.8%)을 60℃에서 무수 에탄올 5 mL 및 물 0.25 mL 중에 용해시켰다. 나프탈렌디술폰산 250 mg을 50℃에서 첨가하고, 혼합물을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하였다. 40℃에서 결정화가 일어났다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 에탄올 1 mL로 3회 세척한 다음, 50℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다. 나파디실레이트 염의 원소 분석은 2:1 (1수화물) 형태를 나타내었다.
실시예 1 나파디실레이트 염의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00147
실시예 2-9를 실시예 1 (방법 1b)에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00148
Figure 112014064974414-pct00149
Figure 112014064974414-pct00150
Figure 112014064974414-pct00151
Figure 112014064974414-pct00152
Figure 112014064974414-pct00153
Figure 112014064974414-pct00154
Figure 112014064974414-pct00155
Figure 112014064974414-pct00156
실시예 10: (2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
단계 1
DMF (5 mL) 중 2,4-디메틸-옥사졸-5-카르복실산 (36.4 mg, 0.258 mmol), HTBU (98 mg, 0.258 mmol), DIPEA (86μl, 0.49 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, DMF (0.4 mL) 중 6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (실시예 1, 방법 1b, 단계 2에서 제조됨) (80 mg, 0.23 mmol) 및 DIPEA (86μl, 0.49 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 길슨 HPLC에 의해 직접적으로 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 MP로 중화시켜 (2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논 (91 mg, 84% 수율)을 백색 동결건조된 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00157
실시예 11-49 및 51-53을 실시예 10, 단계 1에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00158
Figure 112014064974414-pct00159
Figure 112014064974414-pct00160
Figure 112014064974414-pct00161
Figure 112014064974414-pct00162
Figure 112014064974414-pct00163
Figure 112014064974414-pct00164
Figure 112014064974414-pct00165
Figure 112014064974414-pct00166
Figure 112014064974414-pct00167
Figure 112014064974414-pct00168
Figure 112014064974414-pct00169
Figure 112014064974414-pct00170
Figure 112014064974414-pct00171
Figure 112014064974414-pct00172
Figure 112014064974414-pct00173
Figure 112014064974414-pct00174
Figure 112014064974414-pct00175
Figure 112014064974414-pct00176
Figure 112014064974414-pct00177
Figure 112014064974414-pct00178
Figure 112014064974414-pct00179
Figure 112014064974414-pct00180
Figure 112014064974414-pct00181
Figure 112014064974414-pct00182
Figure 112014064974414-pct00183
Figure 112014064974414-pct00184
Figure 112014064974414-pct00185
Figure 112014064974414-pct00186
Figure 112014064974414-pct00187
Figure 112014064974414-pct00188
Figure 112014064974414-pct00189
Figure 112014064974414-pct00190
Figure 112014064974414-pct00191
Figure 112014064974414-pct00192
Figure 112014064974414-pct00193
Figure 112014064974414-pct00194
Figure 112014064974414-pct00195
Figure 112014064974414-pct00196
Figure 112014064974414-pct00197
Figure 112014064974414-pct00198
Figure 112014064974414-pct00199
Figure 112014064974414-pct00200
실시예 54: {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논
CH2Cl2 (1.0 mL) 중 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 13으로부터 실시예 91, 단계 1을 이용하여 제조됨) (44 mg, 0.11 mmol), 1-메틸-1H-피라졸-4-카르복실산 (15 mg, 0.12 mmol), 벤즈트리아졸-1-올 (19 mg, 0.12 mmol)의 혼합물에 EDC (34 mg, 0.18 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL)와 포화 NaHCO3(수성) (2.0 mL) 사이에 분배시키고, 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하였다. 진공 하에 농축시키고, 바이오타지® 아미노 실리카 겔을 통한 플래쉬 크로마토그래피에 의해 시클로헥산 / EtOAc, 100/0 → 0/100으로 용리시켜 정제함으로써 {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논을 백색 동결건조된 분말 (44 mg, 75% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00201
실시예 55를 실시예 54에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00202
Figure 112014064974414-pct00203
실시예 56: {(S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
CH2Cl2 (5 mL) 중 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (97 mg, 0.196 mmol)에 0-10℃ 사이의 온도에서 산 클로라이드 테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐 클로라이드 (36.7 mg, 0.235 mmol) 및 트리에틸아민 (0.035 mL, 0.254 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 약 3℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 MP로 중화시켜 {(S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (38 mg, 41% 수율)을 백색 동결건조된 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00204
Figure 112014064974414-pct00205
6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
(S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (766.2 mg, 1.66 mmol)를 TFA / CH2Cl2 (1/2) 용액 중에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 CH2Cl2로 희석하고, 유기 층을 NaOH 1N에 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00206
Figure 112014064974414-pct00207
(S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
X-Phos (0.073 g, 0.154 mmol), Pd2(dba)3 (0.100 g, 0.110 mmol), NaOtBu (0.395 g, 4.11 mmol) 및 5-브로모-3-클로로-2-메톡시-피리딘 (0.732 g, 3.29 mmol)을 합하고, 아르곤의 스트림 하에 10분 동안 플러싱하였다. 이 혼합물에, THF (6 mL) 중 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (2.15 g, 6.72 mmol)의 용액을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc를 첨가하고, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2 /MeOH 99/1 → 95/5)에 의해 정제하여 (S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황색 발포체 (0.766 g, 60% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00208
Figure 112014064974414-pct00209
실시예 57: {(S)-3-[6-(6-아미노-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
CH2Cl2 (2.0 mL) 중 (S)-tert-부틸 3-(6-(6-(비스(tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1 (120 mg, 0.18 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 정치시켰다. 진공 하에 농축시키고, 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아를 사용하여 용리시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 5-[4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아민 (61 mg, 90% 수율)을 수득하였다. 5-[4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)아민 (30 mg, 0.079 mmol)을 CH2Cl2 (2.0 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 CH2Cl2 (2.0 mL) 중 테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐 클로라이드 (15 mg, 0.10 mmol)의 격렬히 교반 중인 용액에 포화 NaHCO3(수성) (2.0 mL)과 함께 동시에 조금씩 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 {(S)-3-[6-(6-아미노-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논을 연황색 분말 (19 mg, 50% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00210
Figure 112014064974414-pct00211
(S)-tert-부틸 3-(6-(6-(비스(tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트
유리 바이알에 (S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 7) (100 mg, 0.312 mmol), 이미도디탄산, 2-[5-브로모-3-(트리플루오로메틸)-2-피리디닐]-, 1,3-비스(1,1-디메틸에틸) 에스테르 (138 mg, 0.312 mmol), 탄산세슘 (203 mg, 0.62 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (29 mg, 0.03 mmol), X-Phos (51 mg, 0.11 mmol) 및 무수 디옥산 (2 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1시간 동안 가열한 다음, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각되도록 하고, CH2Cl2 (10 mL)와 물 (2 mL) 사이에 분배시키고, 2상 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 3-(6-(6-(비스(tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 트리플루오로아세테이트를 황색 검 (120 mg, 48% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00212
Figure 112014064974414-pct00213
이미도디탄산, 2-[5-브로모-3-(트리플루오로메틸)-2-피리디닐]-, 1,3-비스(1,1-디메틸에틸) 에스테르
CH2Cl2 (50 mL) 중 5-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-아민 (1.72 g, 7.14 mmol), 트리에틸아민 (0.995 mL, 7.14 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (20 mg, 0.164 mmol)에 디-tert-부틸-디카르보네이트 (3.89 g, 17.84 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 진공 하에 증발 건조시키고, 헵탄 (25 mL) 중에서 72시간 동안 연화처리하였다. 생성된 침전물을 여과하고, 헵탄 (10 mL)으로 세척하여 이미도디탄산, 2-[5-브로모-3-(트리플루오로메틸)-2-피리디닐]-, 1,3-비스(1,1-디메틸에틸) 에스테르를 베이지색 고체 (2.23 g, 71% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00214
Figure 112014064974414-pct00215
실시예 58: {3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-아제티딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
CH2Cl2 (2.0 mL) 중 3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (186 mg, 0.312 mmol)에 TFA (1.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 진공 하에 증발시켜 4-(아제티딘-3-일옥시)-(6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디트리플루오로아세테이트를 갈색 검 (110 mg)으로서 수득하였다. CH2Cl2 중 테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐 클로라이드 (19 mg, 0.128 mmol)의 격렬히 교반 중인 용액에 실온에서 포화 NaHCO3(수성) (2.0 mL) 및 CH2Cl2 (2.0 mL) 중 4-(아제티딘-3-일옥시)-(6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디트리플루오로아세테이트 (60 mg, 0.099 mmol)의 용액을 동시에 조금씩 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬히 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, 유기 층을 분리하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 농축시키고, 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 {3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-아제티딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논을 황색 고체 (3.0 mg, 5% 수율 제2 단계)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00216
Figure 112014064974414-pct00217
3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
유리 바이알에 3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (110 mg, 0.359 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (92 mg, 0.359 mmol), 탄산세슘 (234 mg, 0.718 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (33 mg, 0.036 mmol), X-Phos (58 mg, 0.122 mmol) 및 무수 디옥산 (2.0 mL)을 첨가하였다. 바이알을 아르곤의 스트림으로 15초 동안 플러싱하고, 마개를 막았다. 혼합물을 110℃에서 교반하면서 1.5시간 동안 가열한 다음, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (50 mL)로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하여 3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 트리플루오로아세테이트를 갈색 검 (186 mg, 87% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00218
Figure 112014064974414-pct00219
3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
MeOH (20 mL) 중 3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (425 mg, 1.07 mmol)의 용액에 탄소 상 20% 수산화팔라듐 (90 mg)에 이어서 포름산암모늄 (473 mg, 7.51 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각되도록 하고, MeOH (20 mL)에 이어서 CH2Cl2 (20 mL)로 세척하면서 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 증발시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2 / MeOH / 0.88 NH4OH, 100/0/0 → 90/10/1을 사용하여 정제함으로써 3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황색 검 (220 mg, 67% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00220
Figure 112014064974414-pct00221
3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
3-히드록시-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (217 mg, 1.25 mmol)를 THF (10 mL) 중에 아르곤 하에 용해시키고, NaH (58 mg, 1.44 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 아르곤 하에 15분 동안 교반하고, 이어서 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (250 mg, 0.963 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, 물 (20 mL)로 켄칭하고, CH2Cl2로 희석하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 헵탄 / CH2Cl2, 50/50 → 0/100에 이어서 EtOAc를 사용하여 정제함으로써 3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-아제티딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황색 검 (425 mg, 111% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00222
실시예 59는 반응식 2에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00223
실시예 59: {(S)-3-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
단계 4
5-브로모-2-메톡시-피리미딘 (0.218 mmol), X-Phos (28.4 mg, 0.060 mmol), Pd2(dba)3 (18.2 mg, 0.020 mmol) 및 Cs2CO3 (129 mg, 0.397 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 플러싱한 후, 디옥산 (2 mL) 중 (테트라히드로-피란-4-일)-[(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-메타논의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 바이알 중에서 120℃에서 1시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 하이플로 상에서 여과하였다. 회수된 유기 상을 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 합한 분획을 SCX-2 카트리지로 통과시켜 (카트리지를 아세토니트릴, CH2Cl2 및 MeOH로 세척한 다음, MeOH 중 NH3 3.5 N의 용액을 사용하여 목적 생성물을 방출시켰음) 중화시킴으로써 {(S)-3-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (18.7 mg, 21% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00224
Figure 112014064974414-pct00225
(테트라히드로-피란-4-일)-[(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-메타논
단계 3
[(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (10.9 g, 25.8 mmol)의 용액을 메탄올 (300 mL) 중에 용해시키고, 탄소 상 Pd(OH)2 (2 g, 14.24 mmol) 및 포름산암모늄 (3.35 g, 51.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 환류시켰다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물을 여과하고, 고진공 하에 2시간 동안 증발시켜 (테트라히드로-피란-4-일)-[(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-메타논 (8.45 g, 95% 수율)을 담황색 발포체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00226
Figure 112014064974414-pct00227
[(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
단계 2
CH2Cl2 4mL 중 6-벤질-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (420 mg, 1.35 mmol)의 용액에 테트라히드로-피란-4-카르보닐 클로라이드 (0.210 mL, 1.637 mmol) 및 Et3N (0.380 mL, 2.73 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬-크로마토그래피 (CH2Cl2 / MeOH 95/5)에 의해 정제하여 [(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (420 mg, 73% 수율)을 황색 발포체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00228
Figure 112014064974414-pct00229
6-벤질-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
단계 1
CH2Cl2 2mL 중 (S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (560 mg, 1.364 mmol)의 용액에 TFA (1.576 mL, 20.46 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시킨 다음, 이솔루트 SCX-2 카트리지(10g)를 통해 (i) MeOH (ii) NH3/MeOH를 사용하여 과량의 TFA를 제거하고, 염기성 분획을 진공 하에 증발시켜 6-벤질-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (420 mg, 정량적 수율)을 황색 검으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00230
실시예 60-62를 실시예 59에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00231
Figure 112014064974414-pct00232
Figure 112014064974414-pct00233
실시예 63은 반응식 2에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00234
실시예 63: 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온
단계 3
1-[(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온 (47.8 mg, 0.173 mmol), X-Phos (28 mg, 0.059 mmol) 및 Pd2(dba)3.CHCl3 (17.90 mg, 0.017 mmol)을 합하고, 아르곤으로 몇분 동안 플러싱한 후, 탈기된 디옥산을 첨가하였다. 이어서, 5-브로모-2-메톡시-3-트리플루오로메틸-피리딘 (중간체 1) (54.5 mg, 0.213 mmol) 및 Cs2CO3 (113 mg, 0.346 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, 밀봉된 튜브에서 150℃에서 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 하이플로 상에서 여과하고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온 (26 mg, 33% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00235
Figure 112014064974414-pct00236
1-[(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온
단계 2
Pd(OH)2 (150 mg, 1.070 mmol)를 둥근 플라스크에 넣고, 아르곤 하에 5분 동안 플러싱하였다. MeOH 22mL 중 1-[(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온 (560 mg, 1.528 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 포름산암모늄 (482 mg, 7.64 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 (70℃) 하에 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드 상에서 여과하고, 고진공 하에 건조시켜 1-[(S)-3-(5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온을 수득하였다. 추가 정제는 없었다 (m= 420 mg, 정량적 수율).
Figure 112014064974414-pct00237
Figure 112014064974414-pct00238
1-[(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온
단계 1
THF 5mL 중 1-((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온 (중간체 2) (358 mg, 2.503 mmol)의 용액에 Ar 하에 NaH (108 mg, 2.70 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 6-벤질-4-클로로-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (500 mg, 1.925 mmol) 및 THF 5 mL를 첨가하고, 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, 에틸아세테이트로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬-크로마토그래피에 의해 이스코 컴패니언 시스템 (SiO2 12g) CH2Cl2 /MeOH(95/5)을 사용하여 정제하였다. 수집된 분획을 합하고, 증발시키고, 고진공 상에서 건조시켜 1-[(S)-3-(6-벤질-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온 (m= 560 mg, 수율 78%)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00239
실시예 64를 실시예 63에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00240
Figure 112014064974414-pct00241
실시예 65: 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-1-피리딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
유리 바이알에 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디히드로클로라이드 (중간체 13으로부터 실시예 91의 단계 1을 이용하여 제조됨) (75 mg, 0.16 mmol), 2-브로모피리딘 (1 mL, 10.25 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.14 mL, 0.80 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 마이크로웨이브에서 160℃에서 20분 동안 가열하였다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-1-피리딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 담갈색 고체 (19 mg, 25% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00242
Figure 112014064974414-pct00243
실시예 66: 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-1-피리미딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘
유리 바이알에 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디히드로클로라이드 (중간체 13으로부터 실시예 91의 단계 1을 이용하여 제조됨) (75 mg, 0.16 mmol), 2-브로모피리미딘 (55 mg, 0.342 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.15 mL, 0.85 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 마이크로웨이브에서 160℃에서 20분 동안 가열하였다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-1-피리미딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘을 갈색 고체 (17 mg, 21% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00244
실시예 67은 반응식 4에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00245
실시예 67: 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온
CH2Cl2 (100 mL) 중 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 24) (13.4 g, 27.1 mmol)의 용액에 TFA (41.8 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 진공 하에 농축시키고, 2M NaOH(수성) (300 mL)와 CH2Cl2 (200 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 CH2Cl2 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 증발시켜 갈색 발포체를 수득하였다. 발포체를 CH2Cl2 (50 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 CH2Cl2 (50 mL) 중 프로피오닐 클로라이드 (2.63 g, 28.5 mmol)의 격렬히 교반 중인 용액에 포화 NaHCO3(수성) (50 mL)과 함께 동시에 조금씩 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 추가로 프로피오닐 클로라이드 (0.566g, 6.12 mmol)를 첨가하고, 계속해서 20분 동안 격렬히 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 CH2Cl2 (100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 건조 (MgSO4)시키고, 진공 하에 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 검을 EtOAc (100 mL) 중에서 교반하고, 생성된 고체를 여과하였다 (9.4 g). 모액을 진공 하에 농축시키고, 바이오타지® 아미노 실리카 겔을 통한 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc / MeOH, 100/0 → 90/10으로 용리시켜 정제함으로써 황색 발포체를 수득하였으며, 이어서 이를 EtOAc (20 mL) 중에서 교반하고, 생성된 고체를 여과하였다 (870 mg). 고체의 두 배치 모두를 합하고, 환류 중인 EtOAc (50 mL) 중에서 1시간 동안 교반하였다. 여과하여 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온을 무색 고체 (9.42 g, 76% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00246
실시예 67에 대한 대안적 합성
2-Me-THF (100 mL) 중 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 24) (29.04 g, 58.73 mmol)의 용액을 수성 HCl 용액 (150 mL, 31%)에 15분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)과 이소프로필 아세테이트 (100 mL) 사이에 분배시키고, 상부 유기 상을 경사분리하였다. 수성 상을 25% NaOH (수성) (200 g)와 2-Me-THF (200 mL) 사이에 분배시키고, 유기 상을 수집하고, 건조시켰다. 트리에틸아민 (16.32 mL, 117.48 mmol)을 유기 상에 첨가하고, 이어서 0℃에서 프로피오닐 클로라이드 (6.0 g, 64.6 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (110 mL)로 세척하고, 생성된 유기 상을 진공 하에 농축시켜 갈색 검을 수득하였다. 잔류물을 이소프로판올 및 메틸 tert-부틸 에테르로 재결정화하여 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온을 무색 고체 (17.2 g, 65% 수율)로서 수득하였다.
아세토니트릴/물 중에서의 가열에 의한 실시예 67의 결정화
실시예 67 2.0 g (4.440 mol)을 75℃에서 아세토니트릴 10 mL 및 물 0.5 mL 중에 용해시켰다. 용액을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하여 현탁액을 생성하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 1 mL로 2회 세척한 다음, 24℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다. 물질의 원소 분석은 물이 없는 형태를 나타내었다.
실시예 67 무수 형태의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00247
실시예 67의 포스페이트 염의 제조
실시예 67 2.0 g (4.440 mol)을 75℃에서 아세토니트릴 10 mL 및 물 0.5 mL 중에 용해시켰다. 오르토-인산 85% (4.440 mol) 512 mg을 70℃에서 첨가하였다. 70℃에서 결정화가 신속하게 일어났다. 현탁액을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하였다. 현탁액을 아세토니트릴 10 ml로 희석하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 1 mL로 3회 세척한 다음, 24℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다. 포스페이트 염의 원소 분석은 1:1 (물이 없는) 형태를 나타내었다.
실시예 67 포스페이트 염의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00248
실시예 67의 히드로클로라이드 염의 제조
실시예 67 2.0 g (4.440 mol)을 70℃에서 아세토니트릴 20 mL 및 물 1.0 mL 중에 용해시켰다. 염산 37% (4.440 mol) 459 mg을 70℃에서 첨가하였다. 70℃에서 결정화가 신속하게 일어났다. 현탁액을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 1 mL로 3회 세척한 다음, 24℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다. HCl 염의 원소 분석은 1:1 (물이 없는) 형태를 나타내었다.
실시예 67 히드로클로라이드 염의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00249
실시예 67의 히푸레이트 염의 제조
실시예 67 0.4 g (0.888 mmol)을 70℃에서 아세토니트릴 8 mL 및 물 0.2 mL 중에 용해시켰다. 히푸르산 (0.888 mmol) 167 mg을 70℃에서 첨가하였다. 용액을 실온으로 30분 내에 냉각되도록 하였다. 40℃에서 결정화가 일어났다. 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 결정을 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 아세토니트릴 1 mL로 3회 세척한 다음, 50℃ 및 약 10 mbar 진공에서 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 67 히푸레이트 염의 X선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 피크의 목록 (방법 X1):
Figure 112014064974414-pct00250
실시예 68-69를 실시예 67에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00251
Figure 112014064974414-pct00252
Figure 112014064974414-pct00253
실시예 70: 1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논
(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (중간체 24) (160 mg, 0.32 mmol)를 CH2Cl2 (2.0 mL) 중에 용해시키고, TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 증발시켜 [6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일]-(S)-피롤리딘-3-일-아민 디트리플루오로아세테이트를 갈색 검 (160 mg)으로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. [6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일]-(S)-피롤리딘-3-일-아민 디트리플루오로아세테이트 (40 mg, 0.06 mmol)에 1-아세틸피페리딘-4-카르복실산 (12 mg, 0.07 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.05 mL, 0.26 mmol), CH2Cl2 (3.0 mL)에 이어서 HBTU (29 mg, 0.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반되도록 한 다음, CH2Cl2 (10 mL)와 물 (5 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 상을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논을 연황색 고체 (19 mg, 50% 수율, 제2 단계에 대한 것임)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00254
실시예 71-80을 실시예 70에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00255
Figure 112014064974414-pct00256
Figure 112014064974414-pct00257
Figure 112014064974414-pct00258
Figure 112014064974414-pct00259
Figure 112014064974414-pct00260
Figure 112014064974414-pct00261
Figure 112014064974414-pct00262
Figure 112014064974414-pct00263
실시예 81: 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온
CH2Cl2 (2.0 mL) 중 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 트리플루오로아세테이트 (중간체 20) (60 mg, 0.11 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 진공 하에 농축시켜 [6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일)]-(S)-피롤리딘-3-일)아민 디트리플루오로아세테이트 (60 mg)를 수득하였다. [6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일]-(S)-피롤리딘-3-일)아민 디트리플루오로아세테이트 (30 mg, 0.053 mmol)를 CH2Cl2 (2.0 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 CH2Cl2 (2.0 mL) 중 프로피오닐 클로라이드 (7 mg, 0.07 mmol)의 격렬히 교반 중인 용액에 포화 NaHCO3(수성) (2.0 mL)과 함께 동시에 조금씩 첨가하였다. 생성된 2상 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL) 및 포화 NaHCO3(수성) (2.0 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하여 분리하고, 진공 하에 농축시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온을 무색 분말 (7 mg, 21% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00264
실시예 82-83을 실시예 81에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00265
Figure 112014064974414-pct00266
Figure 112014064974414-pct00267
실시예 84: (테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-{6-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일}-메타논
아세토니트릴 (1.0 ml) 중 6-(5-(트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-올 (중간체 19) (59 mg)에 BOP (114 mg, 0.258 mmol) 및 DBU (0.060 ml, 0.398 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1분 동안 정치시킨 다음, 아세토니트릴 (1.0 ml) 중 [(S)-3-아미노-피롤리딘-1-일-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (중간체 5) (79 mg, 0.398 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 85℃에서 25시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 증발시키고, 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 추가로 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 EtOAc / MeOH 100 / 0 → 80 / 20을 사용하여 정제함으로써 (테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-{6-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일}-메타논 (19 mg, 6% 수율)을 무색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00268
Figure 112014064974414-pct00269
실시예 85: {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
CH2Cl2 (2 mL) 중 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 13으로부터 실시예 91, 단계 1을 이용하여 제조됨) (23.0 mg, 0.058 mmol) 및 트리에틸아민 (0.016 mL, 0.116 mmol)의 용액에 4-메틸피페라진-1-카르보닐 클로라이드 히드로클로라이드 (11.6 mg, 0.058 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (2 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제를 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 수행하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논 (25 mg, 58% 수율)을 황색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00270
실시예 86을 실시예 85에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00271
Figure 112014064974414-pct00272
실시예 87: (4-히드록시-피페리딘-1-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
둥근 바닥 플라스크에서 CH2Cl2 (5 mL)에 포스겐 (톨루엔 중 20% 용액, 0.20 mL, 0.379 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 아르곤 하에 5℃로 냉각시켰다. CH2Cl2 (1.0 mL) 중 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 13으로부터 실시예 91, 단계 1을 이용하여 제조됨) (50.0 mg, 0.126 mmol) 및 트리에틸아민 (0.053 mL, 0.380 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 교반하면서 아르곤 하에 실온으로 1시간에 걸쳐 가온되도록 하였다. 아르곤의 스트림을 혼합물 내로 버블링시켜 증발 건조시킴으로써 갈색 검을 수득하였다. CH2Cl2 (3 mL) 중에 용해시켜 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐 클로라이드를 CH2Cl2 중 용액으로서 수득하였다. LCMS: 458.4 [M+1]+, Rt (7)= 1.38 min. 상기 용액을 추가 정제 없이 사용하였다. 상기 용액 1.5 mL를 CH2Cl2 중 피페리딘-4-올 (6.4 mg, 0.063 mmol) 및 트리에틸아민 (0.053 mL, 0.380 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 아르곤 하에 1시간 동안 교반하였다. N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL)를 첨가하고, 교반을 2시간 동안 계속하였다. CH2Cl2 (2 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (2 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 (4-히드록시-피페리딘-1-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논을 연황색 분말 (22 mg, 64% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00273
실시예 88을 실시예 87에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00274
Figure 112014064974414-pct00275
실시예 89: 1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페라진-1-일)-에타논
CH2Cl2 (2 mL) 중 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 (중간체 13으로부터 실시예 91, 단계 1을 이용하여 제조됨) (25 mg, 0.063 mmol) 및 트리에틸아민 (0.013 mL, 0.095 mmol)의 용액에 3-(4-아세틸-피페라진-1-카르보닐)-1-메틸-3H-이미다졸-3-이움 아이오다이드 (중간체 6) (15 mg, 0.063 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (10 mL)와 포화 NaHCO3(수성) (2 mL) 사이에 분배시키고, 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페라진-1-일)-에타논을 연황색 분말 (9 mg, 25% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00276
Figure 112014064974414-pct00277
실시예 90: (S)-3-[6-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 메틸 에스테르
CH2Cl2 (2 mL) 중 2-메톡시-5-[4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-니코티노니트릴 (중간체 11 및 실시예 1, 방법 1b, 공정 단계 2를 이용하여 제조됨) (25.0 mg, 0.071 mmol) 및 트리에틸아민 (0.04 mL, 0.29 mmol)의 용액에 메틸 카르보노클로리데이트 (0.006 mL, 0.078 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. CH2Cl2 (2 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (1 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 튜브를 통해 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제를 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 수행하고, 이어서 합한 분획을 이솔루트® SCX-2 카트리지를 통한 용리에 의해 메탄올에 이어서 메탄올 중 2M 암모니아로 용리시킴으로써 중화시켰다. 염기성 분획을 진공 하에 농축시켜 (S)-3-[6-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 메틸 에스테르 (10 mg, 35% 수율)를 황색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00278
Figure 112014064974414-pct00279
실시예 91: {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논
단계 2
DMF (1 mL) 중 옥사졸-4-카르복실산 (27 mg, 0.24 mmol) 및 HBTU (89 mg, 0.24 mmol)에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.08 mL, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반한 다음, 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디히드로클로라이드 (100 mg, 0.214 mmol) 및 추가의 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.08 mL, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반되도록 하였다. 역상 길슨 HPLC (방법 A)에 의해 정제하고, 이어서 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논을 황색 고체 (38 mg, 36% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00280
Figure 112014064974414-pct00281
6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디히드로클로라이드
단계 1
CH2Cl2 (5 mL) 중 (S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.0g, 1.69 mmol)를 디에틸 에테르 중 2M 무수 HCl (25.3 mL, 50.5 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 침전물을 여과하고, 디에틸 에테르로 세척하여 6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-4-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘 디히드로클로라이드를 황색 고체 (1.01g, 128% 수율)로서 수득하였다. [M+H]+=396.0, Rt (4)= 0.71 min. 유리 염기는, 디히드로클로라이드 염을 디클로로메탄과 1N 수산화나트륨 용액(수성) 사이에 분배시키고, 유기 상을 분리하고, 진공 하에 증발시켜 생성할 수 있다.
Figure 112014064974414-pct00282
실시예 92를 실시예 91에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00283
Figure 112014064974414-pct00284
Figure 112014064974414-pct00285
실시예 95를 실시예 1, 방법 1a에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 반응식 8에 따라 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00286
본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50-70 kg의 대상체에 대해 약 1-2000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 1-500 mg 또는 약 1-250 mg 또는 약 1-150 mg 또는 약 0.5-100 mg 또는 약 1-50 mg의 활성 성분의 단위 투여량일 수 있다. 화합물, 제약 조성물 또는 그의 조합물의 치료 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료할 장애 또는 질환, 또는 그의 중증도에 따라 달라진다. 통상의 의사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는데 필요한 각 활성 성분의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다.
상기 인용된 투여량 특성은, 유리하게는 포유동물, 예를 들어 마우스, 래트, 개, 원숭이 또는 단리된 기관, 조직 및 그의 표본을 사용한 시험관내 및 생체내 시험에서 입증될 수 있다. PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 용액, 예를 들어 수용액의 형태로 시험관내에서 적용될 수 있고, 경장으로, 비경구로, 유리하게는 정맥내로, 예를 들어 현탁액 또는 수용액으로 생체내에서 적용될 수 있다. 시험관내 투여량은 약 10-3 몰 내지 10-9 몰 농도의 범위일 수 있다. 생체내 치료 유효량은 투여 경로에 따라 약 0.1-500 mg/kg 사이 또는 약 1-100 mg/kg 사이의 범위일 수 있다.
반응식 2'
Figure 112014064974414-pct00287
a) 6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온의 염소화는 희석된 (예컨대, CH2Cl2 중) 또는 순수한 옥시염화인 중에서 환류 하에 또는 130℃에서 가열함으로써 통상의 옥시염화인 조건 하에 수행한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 또는 3-(에톡시카르보닐)페닐-보로네이트 사이의 스즈키(Suzuki) 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 카르복실산 에스테르의 비누화는 가능한 수성 염기 (그중 수산화리튬이 바람직함) 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 통상의 비누화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행할 수 있다. d) 카르복실산과 화학식 R"'NHR"의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R"'NHR"의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. e) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 2'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 1': 5-{4-[3-(4-아세틸-피페라진-1-카르보닐)-페닐]-퀴나졸린-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴
Figure 112014064974414-pct00288
1-{4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논 (100 mg, 0.228 mmol), 2-메톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-니코티노니트릴 (89mg, 0.273 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (13.14 mg, 0.011 mmol)의 혼합물에 DME 3 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.455 mL, 0.455 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 140℃로 10분 동안 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (47 mg, 41% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00289
1-{4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논
Figure 112014064974414-pct00290
CH2Cl2 60 mL 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 (2g, 6.08 mmol)의 용액에 HBTU (2.53g, 6.68 mmol) 및 DIPEA (2.122 mL, 12.15 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 1-피페라진-1-일-에타논 (0.935g, 7.29 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 95/5)에 의해 정제하여 표제 화합물 (3.03 mg, 91% 순도 (HPLC), 정량적 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00291
3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산
Figure 112014064974414-pct00292
디옥산 (45 mL) 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 에틸 에스테르 (1.41g, 4.11 mmol)의 용액에 LiOH.H2O의 1M 수용액 (8.22 ml, 8.22 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl의 1M 수용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 형성된 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (880mg, 65% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. 여과물을 EtOAc로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 (555 mg, 35% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. 두 단리된 고체를 합하여 표제 화합물을 담황색 고체 (880+550 mg= 1.43g, 정량적 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00293
3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 에틸 에스테르
Figure 112014064974414-pct00294
6-브로모-4-클로로-퀴나졸린 (2g, 8.21 mmol), 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 (1.673g, 8.62 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (0.288g, 0.411 mmol) 및 K3PO4 (2.62g, 12.32 mmol)의 혼합물에 아세토니트릴 16 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, 물 2mL를 첨가하고, 튜브를 마개를 막고, 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 15분 동안 100℃로 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 형성된 황색 고체를 여과하고, 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (1.54g)을 황색 고체로서 수득하였다. 여과물을 EtOAc로 희석하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 수득된 잔류물을 MeOH 중에서 연화처리하여 표제 화합물을 황색 고체 (580 mg)로서 수득하였다. 두 고체를 합하여 표제 화합물 2.12g을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00295
6-브로모-4-클로로-퀴나졸린
Figure 112014064974414-pct00296
6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온 (20g, 89 mmol)을 POCl3 140 mL 중에 현탁시키고, 140℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 건조 CH2Cl2 500 mL 중에 용해시키고, 고체 NaHCO3 200g으로 중화시켰다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 증발시켜 표제 화합물 (21g, 95% 수율)을 베이지색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00297
실시예 2': {3-[7-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-나프탈렌-1-일]-페닐}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00298
[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논 (50 mg, 0.122 mmol), 2-메톡시-피리미딘-5-보론산 (22mg, 0.146 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (7 mg, 0.006 mmol)의 혼합물에 DME 2 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.243 mL, 0.243 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 140℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/CH2Cl2 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (38 mg, 71% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00299
[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00300
3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 (2g, 6.16 mmol) 및 HBTU (2.57g, 6.78 mmol)의 혼합물에 DMF (15mL) 및 DIPEA (2.26 mL, 12.95 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 1-메틸-피페라진 (1.23g, 12.33 mmol)을 실온에서 첨가하고, 이어서 DIPEA (2.26mL, 12.95 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 5분 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, AcOEt로 추출하였다. 유기 층을 NaHCO3, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 99/1 → 90/10)에 의해 정제하여 표제 화합물 (2.26g, 90% 순도 (HPLC), 80% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00301
실시예 3' 내지 29'는 실시예 1'에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였거나 또는 제조할 수 있다.
실시예 20', 21' 및 22'는 정제 후에 중화시키지 않았고, TFA 염으로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00302
Figure 112014064974414-pct00303
Figure 112014064974414-pct00304
Figure 112014064974414-pct00305
Figure 112014064974414-pct00306
Figure 112014064974414-pct00307
Figure 112014064974414-pct00308
Figure 112014064974414-pct00309
Figure 112014064974414-pct00310
Figure 112014064974414-pct00311
Figure 112014064974414-pct00312
Figure 112014064974414-pct00313
Figure 112014064974414-pct00314
Figure 112014064974414-pct00315
실시예 34': 2-메톡시-5-{4-[3-((R)-3-메틸-피페라진-1-카르보닐)-페닐]-퀴나졸린-6-일}-니코티노니트릴
Figure 112014064974414-pct00316
혼합물 (R)-4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조일]-2-메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (100 mg, 0.196 mmol), 2-메톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-니코티노니트릴 (76 mg, 0.235 mmol, 80% 순도) 및 Pd(PPh3)4 (11.30 mg, 0.009 mmol)에 DME 3 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.391 mL, 0.391 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 140℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 2ml 중에 용해시키고, TFA (0.301 mL, 3.91 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 기간 후, 혼합물을 농축시키고, 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (36 mg, 39% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00317
(R)-4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조일]-2-메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
Figure 112014064974414-pct00318
CH2Cl2 15 mL 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 (0.5 g, 1.519 mmol)의 용액에 HBTU (0.634 g, 1.671 mmol) 및 DIPEA (0.796 mL, 4.56 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, (R)-2-메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (0.365 g, 1.823 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 95/5)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1 g, 89% 순도, 정량적 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00319
실시예 35'는 실시예 34'에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00320
실시예 36': 1-(4-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조일}-2,2-디메틸-피페라진-1-일)-에타논
Figure 112014064974414-pct00321
(3,3-디메틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논 (117.7mg, 0.213 mmol)에 THF 4 mL를 첨가하였다. 트리에틸아민 (0.188 mL, 0.851 mmol)에 이어서 아세틸 클로라이드 (0.023 mL, 0.319 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (82.7 mg, 78% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00322
(3,3-디메틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논
Figure 112014064974414-pct00323
[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(3,3-디메틸-피페라진-1-일)-메타논 (111.9 mg, 0.263 mmol), 6-메톡시피리딘-3-일보론산 (42.4 mg, 0.263 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (30.4 mg, 0.026 mmol)의 혼합물에 아세토니트릴 2.5 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.789 mL, 0.789 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 130℃로 20분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 포화 수성 NaHCO3/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 화합물 (117.7mg, 81% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00324
[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(3,3-디메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00325
DMF 8 mL 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 (428.1mg, 1.301 mmol)의 용액에 HBTU (543 mg, 1.431 mmol) 및 DIPEA (0.477 mL, 2.73 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, 2,2-디메틸-피페라진 (163 mg, 1.431 mmol) 및 DIPEA (0.477 mL, 2.73 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 99/1 → 90/10)에 의해 정제하여 표제 화합물 (234.9mg, >99% 순도, 42.5% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00326
실시예 37'는 실시예 36'에서 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00327
실시예 38': (2,5-디아자-비시클로[2.2.1]헵트-2-일)-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논
Figure 112014064974414-pct00328
[3-(7-브로모-나프탈렌-1-일)-페닐]-(2,5-디아자-비시클로[2.2.1]헵트-2-일)-메타논 (56.8 mg, 0.139 mmol), 6-메톡시피리딘-3-일보론산 (23.35 mg, 0.153 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (16.04 mg, 0.014 mmol)의 혼합물에 아세토니트릴 1.5 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.416 mL, 0.416 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 130℃로 20분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 여과한 후, 혼합물을 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 직접적으로 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (26.7 mg, 44% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00329
[3-(7-브로모-나프탈렌-1-일)-페닐]-(2,5-디아자-비시클로[2.2.1]헵트-2-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00330
CH2Cl2 10 mL 중에 희석된 tert-부틸-5-(3-(6-브로모퀴나졸린-4-일)벤조일)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (400.4 mg, 0.786 mmol)에 TFA (4 mL, 51.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 NaHCO3의 수용액 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 화합물 (158 mg, >99% 순도, 49.1% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00331
tert-부틸 5-(3-(6-브로모퀴나졸린-4-일)벤조일)-2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트
Figure 112014064974414-pct00332
DMF 8 mL 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 (310 mg, 0.942 mmol)의 용액에 HBTU (429 mg, 1.130 mmol) 및 DIPEA (0.3455 mL, 1.98 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. tert-부틸 2,5-디아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (373 mg, 1.884 mmol) 및 DIPEA (0.3455 mL, 1.98 mmol)를 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/EtOAc, 80/20 → 0/100)에 의해 정제하여 표제 화합물 (400.4 mg, >99% 순도, 83% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00333
실시예 39'는 실시예 38'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00334
실시예 40': {3-[6-(5-메틸-6-메틸아미노-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00335
[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논 (100mg, 0.243 mmol), 메틸-[3-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-피리딘-2-일]-카르밤산 tert-부틸에스테르 (102mg, 0.292 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (14.05 mg, 0.012 mmol)의 혼합물에 DME 3 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.486 mL, 0.486 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 140℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 3ml 중에 용해시키고, TFA (0.562mL, 7.29mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시키고, 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (70 mg, 64% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00336
실시예 41'는 실시예 40'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00337
반응식 3'
Figure 112014064974414-pct00338
a) 6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온의 염소화는 희석된 (예컨대, CH2Cl2 중) 또는 순수한 옥시염화인 중에서 환류 하에 또는 130℃에서 가열함으로써 통상의 옥시염화인 조건 하에 수행한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 또는 3-(에톡시카르보닐)페닐-보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 카르복실산 에스테르의 비누화는 가능한 수성 염기 (그중 수산화리튬이 바람직함) 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 통상의 비누화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행할 수 있다. d) 카르복실산과 화학식 R"'NHR"의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R"'NHR"의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. e) 보로네이트 에스테르의 형성은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 1,1-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (PdCl2(dppf)-CH2Cl2), 수성 염기, 예컨대 바람직하게는 아세트산칼륨, 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 및 비스-(피나콜레이토)-디보론을 사용하여 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 80℃에서 수 시간 동안 교반한다. f) 아릴 브로마이드 (R-Br)와 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 3'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 42': {3-[6-(6-에톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00339
(4-메틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논 (100mg, 0.218 mmol), 5-브로모-2-에톡시-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (70.7mg, 0.262 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (12.61 mg, 0.011 mmol)의 혼합물에 DME 2 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.436 mL, 0.436 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 140℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (70 mg, 61% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00340
(4-메틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논
Figure 112014064974414-pct00341
비스-(피나콜레이토)-디보론 (463mg, 1.824mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (99mg, 0.122mmol) 및 KOAc (477mg, 4.86mmol)를 바이알에 넣고, 아르곤 스트림으로 2분 동안 탈기하였다. 별도의 바이알에서, [3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논 (500mg, 1.216mmol)을 무수 디옥산 10 mL 중에 용해시켰다. [3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-페닐]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논의 디옥산 용액을 "촉매" 바이알에 첨가한 다음, 80℃에서 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 30ml 에틸아세테이트를 첨가하고, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 암색 여과물을 농축시킨 다음 30ml 헵탄 중에 희석하였다. 암색 침전물이 형성되었고, 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시킨 다음, 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 갈색 고체 (710mg, 50% 순도, 55% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00342
실시예 43' 내지 48'는 실시예 42'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00343
Figure 112014064974414-pct00344
Figure 112014064974414-pct00345
실시예 49': 2-메톡시-N,N-디메틸-5-{4-[3-(4-메틸-피페라진-1-카르보닐)-페닐]-퀴나졸린-6-일}-벤즈아미드
Figure 112014064974414-pct00346
CH2Cl2 2 mL 중 2-메톡시-5-{4-[3-(4-메틸-피페라진-1-카르보닐)-페닐]-퀴나졸린-6-일}-벤조산 (50mg, 0.084mmol)의 용액에 HBTU (38.1mg, 0.101 mmol) 및 DIPEA (0.044 mL, 0.251 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, THF 중 디메틸 아민의 용액 (2M) (0.210mL, 0.419 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (25 mg, 58% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00347
2-메톡시-5-{4-[3-(4-메틸-피페라진-1-카르보닐)-페닐]-퀴나졸린-6-일}-벤조산
Figure 112014064974414-pct00348
(4-메틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논 (300mg, 0.655mmol), 5-브로모-2-메톡시-벤조산 (181mg, 0.785 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (37.8 mg, 0.033 mmol)의 혼합물에 DME 4mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (1.309 mL, 1.309 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 140℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 분획을 합하여 표제 화합물 (60 mg, 15% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00349
반응식 4'
Figure 112014064974414-pct00350
a) 6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온의 염소화는 희석된 (예컨대, CH2Cl2 중) 또는 순수한 옥시염화인 중에서 환류 하에 또는 130℃에서 가열함으로써 통상의 옥시염화인 조건 하에 수행한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 또는 3-(에톡시카르보닐)페닐-보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 카르복실산 에스테르의 비누화는 가능한 수성 염기 (그중 수산화리튬이 바람직함) 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 통상의 비누화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행할 수 있다. d) 카르복실산과 화학식 R"'NHR"의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R"'NHR"의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. e) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 4'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 50': 1-(4-{5-[6-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-피리딘-3-카르보닐}-피페라진-1-일)-에타논
Figure 112014064974414-pct00351
1-{4-[5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-피리딘-3-카르보닐]-피페라진-1-일}-에타논 (100 mg, 0.204 mmol, 90% 순도 (UPLC)), 보론산 3-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-5-트리플루오로메틸-피리딘 (80mg, 0.204 mmol, 70% 순도) 및 Pd(PPh3)4 (11.81 mg, 0.010 mmol)의 혼합물에 DME 2 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.409 mL, 0.409 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (55 mg, 53% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00352
1-{4-[5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-피리딘-3-카르보닐]-피페라진-1-일}-에타논
Figure 112014064974414-pct00353
CH2Cl2 10 mL 중 5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-니코틴산 (1g, 3.03 mmol)의 용액에 HBTU (1.38g, 3.63 mmol) 및 DIPEA (1.06 mL, 6.06 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 1-피페라진-1-일-에타논 (0.466g, 3.63 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 95/5)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.13 g, 90% 순도, 76% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00354
5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-니코틴산
Figure 112014064974414-pct00355
디옥산 (45 mL) 중 5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-니코틴산 에틸 에스테르 (1.34g, 3.74 mmol)의 용액에 LiOH.H2O의 1M 수용액 (7.48 ml, 7.48 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl의 1M 수용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 형성된 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득하였다. 여과물을 EtOAc로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득하였다. 두 단리된 고체를 합하여 표제 화합물을 담황색 고체 (1.1g, 81% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00356
5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-니코틴산 에틸 에스테르
Figure 112014064974414-pct00357
6-브로모-4-클로로-퀴나졸린 (6g, 23.41 mmol), 보론산 5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-니코틴산 에틸 에스테르 (6.81g, 24.58 mmol), Pd(PPh3)2Cl2 (0.822g, 1.17 mmol) 및 K3PO4 (7.45g, 35.1 mmol)의 혼합물에 아세토니트릴 96 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, 12ml 물을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 100℃로 12분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 물로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 증발시켰다. 수득된 잔류물을 MeOH 중에서 연화처리하여 표제 화합물을 담오렌지색 고체 (5.3g, 95% 순도, 60% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00358
실시예 51' 내지 74'는 실시예 50'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00359
Figure 112014064974414-pct00360
Figure 112014064974414-pct00361
Figure 112014064974414-pct00362
Figure 112014064974414-pct00363
Figure 112014064974414-pct00364
Figure 112014064974414-pct00365
Figure 112014064974414-pct00366
Figure 112014064974414-pct00367
Figure 112014064974414-pct00368
Figure 112014064974414-pct00369
실시예 75': {5-[6-(5-메틸-6-메틸아미노-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-피리딘-3-일}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00370
[5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-피리딘-3-일]-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논 (100 mg, 0.243 mmol), tert-부틸 메틸(3-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-일) (107mg, 0.291 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (14.01 mg, 0.012 mmol)의 혼합물에 DME 2 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.485 mL, 0.485 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 2ml 중에 용해시키고, TFA (0.374 mL, 4.85 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이 기간 후, 혼합물을 농축시키고, 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (32 mg, 29% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00371
반응식 5'
Figure 112014064974414-pct00372
a) 6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온의 염소화는 희석된 (예컨대, CH2Cl2 중) 또는 순수한 옥시염화인 중에서 환류 하에 또는 130℃에서 가열함으로써 통상의 옥시염화인 조건 하에 수행한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 또는 3-(에톡시카르보닐)페닐-보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. d) 카르복실산 에스테르의 비누화는 가능한 수성 염기 (그중 수산화리튬이 바람직함) 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 통상의 비누화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행할 수 있다. e) 카르복실산과 화학식 R"'NHR"의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R"'NHR"의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 5'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 76': {5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-피리딘-3-일}-(4-메틸-[1,4]-디아제판-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00373
CH2Cl2 2 mL 중 5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-니코틴산 (100 mg, 0.279 mmol)의 용액에 DIPEA (0.097 mL, 0.558 mmol) 및 프로필포스폰산 무수물 (DMF 중 용액, 50%) (0.244 mL, 0.419 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 1-메틸-[1,4]-디아제판 (65.7 mg, 0.557 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 추가의 1-메틸-[1,4]-디아제판 (49.27 mg, 0.418 mmol) 및 DIPEA (0.097 mL, 0.558 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (54 mg, 43% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00374
5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-니코틴산
Figure 112014064974414-pct00375
디옥산 (30 mL) 중 5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-니코틴산 에틸 에스테르 (0.91 g, 2.19 mmol, 93% 순도 (HPLC))의 용액에 LiOH.H2O의 1M 수용액 (4.38 mL, 4.38 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl의 1M 수용액으로 켄칭하고, 형성된 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (570 mg, 72% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. 여과물을 EtOAc로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물 (205 mg, 27% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. 두 단리된 고체를 합하여 표제 화합물 (570+205 mg= 775 mg, 99% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00376
5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-니코틴산 에틸 에스테르
Figure 112014064974414-pct00377
[5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-니코틴산 에틸 에스테르 (1 g, 2.79 mmol), 2-메톡시-5-피리딘 보론산 (0.448 g, 2.93 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (0.161 mg, 0.140 mmol)의 혼합물에 DME 15 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (5.58 mL, 5.58 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 20분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, H2O/EtOAc 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물로부터 표제 화합물 (910 mg, 93% 순도, 78% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00378
실시예 77' 내지 83'는 실시예 76'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00379
Figure 112014064974414-pct00380
Figure 112014064974414-pct00381
Figure 112014064974414-pct00382
실시예 84': {5-[6-(4-메톡시-3-트리플루오로메틸-페닐)-퀴나졸린-4-일]-피리딘-3-일}-((S)-2-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00383
CH2Cl2 3 mL 중 5-[6-(4-메톡시-3-트리플루오로메틸-페닐)-퀴나졸린-4-일)-니코틴산 (70 mg, 0.165 mmol)의 용액에 HBTU (68.7 mg, 0.181 mmol) 및 DIPEA (0.057 mL, 0.329 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, (S)-3-메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (49.4 mg, 0.247 mmol) 및 DIPEA (0.057 mL, 0.329 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 2ml 중에 용해시키고, TFA (0.120 mL, 1.646 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이 기간 후, 혼합물을 농축시키고, 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (60 mg, 68% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00384
실시예 85'는 실시예 84'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00385
반응식 6'
Figure 112014064974414-pct00386
a) 6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온의 염소화는 희석된 (예컨대, CH2Cl2 중) 또는 순수한 옥시염화인 중에서 환류 하에 또는 130℃에서 가열함으로써 통상의 옥시염화인 조건 하에 수행한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 또는 3-(에톡시카르보닐)페닐-보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. d) 카르복실산 에스테르의 비누화는 가능한 수성 염기 (그중 수산화리튬이 바람직함) 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 통상의 비누화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행할 수 있다. e) 카르복실산과 화학식 R"'NHR"의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R"'NHR"의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 6'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 86': (4-에틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논
Figure 112014064974414-pct00387
CH2Cl2 2 mL 중 3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조산 (100mg, 0.280 mmol)의 교반 용액에 HBTU (127 mg, 0.336 mmol) 및 DIPEA (0.147 mL, 0.839 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 1-에틸-피페라진 (38 mg, 0.336 mmol)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (40 mg, 35% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00388
3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조산
Figure 112014064974414-pct00389
디옥산 (20 mL) 중 3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조산 에틸 에스테르 (800mg, 1.91 mmol)의 현탁액에 LiOH.H2O의 1M 수용액 (9.55 ml, 9.55 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl의 1M 수용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 형성된 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (700mg, 90% 순도, 92% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. 화합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014064974414-pct00390
3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조산 에틸 에스테르
Figure 112014064974414-pct00391
3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-벤조산 에틸 에스테르 (845 mg, 2.176 mmol), 2-메톡시-5-피리딘보론산 (399 mg, 2.61 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (126 mg, 0.109 mmol)의 혼합물에 DME 20 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (4.35 mL, 4.35 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 15분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 염수/ CH2Cl2 사이에 분배시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2/MeOH, 95/5)에 의해 정제하여 표제 화합물 (800 mg, 92% 순도, 88% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00392
실시예 87' 내지 96'는 실시예 86'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00393
Figure 112014064974414-pct00394
Figure 112014064974414-pct00395
Figure 112014064974414-pct00396
Figure 112014064974414-pct00397
Figure 112014064974414-pct00398
실시예 97': {3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-((R)-2-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00399
DMF 2 mL 중 3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조산 (100mg, 0.254 mmol)의 교반 용액에 HBTU (144 mg, 0.381 mmol) 및 DIPEA (0.177 mL, 1.016 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, (R)-3-메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (76 mg, 0.381 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 3ml 중에 용해시키고, TFA (1ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 이 기간 후, 혼합물을 농축시키고, 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (29 mg, 26% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00400
실시예 98': {3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-((S)-2-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00401
DMF 2.5 mL 중 3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조산 (110mg, 0.308 mmol)의 교반 용액에 HBTU (175 mg, 0.462 mmol) 및 DIPEA (0.108 mL, 0.616 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, (S)-3-메틸-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (123 mg, 0.616 mmol) 및 DIPEA (0.108 mL, 0.616 mmol)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄/에틸아세테이트, 1/1)에 의해 정제하여 중간체 화합물 (170mg, 91% 순도 (UPLC), 93% 수율)을 수득하였다 (MS: 540.3 [M+1]+). 이 잔류물 (170mg, 0.287mmol)을 CH2Cl2 2ml 중에 용해시키고, TFA (0.331mL, 4.30mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 이 기간 후, 혼합물을 NaOH의 용액 (1M)으로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (58 mg, 31% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00402
실시예 99': ((S)-2,4-디메틸-피페라진-1-일)-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-메타논
Figure 112014064974414-pct00403
MeOH 1 mL 중 {3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-페닐}-((S)-2-메틸-피페라진-1-일)-메타논 (50mg, 0.091 mmol)의 용액에 포름알데히드의 37% 용액 (0.008 mL, 0.109 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, NaBH3CN (6.86 mg, 0.109 mmol)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 용액으로 켄칭하고, 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (20 mg, 48% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00404
반응식 7'
Figure 112014064974414-pct00405
a) 카르복실산과 화학식 R3NHR4의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R3NHR4의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. b) 보로네이트 에스테르의 형성은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]-디클로로팔라듐 (PdCl2(dppf)-CH2Cl2), 수성 염기, 예컨대 바람직하게는 아세트산칼륨, 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 및 비스-(피나콜레이토)-디보론을 사용하여 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 80℃에서 수 시간 동안 교반한다. c) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. d) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R5-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 7'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 100': 1-(4-{5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-2-메틸-벤조일}-피페라진-1-일)-에타논
Figure 112014064974414-pct00406
1-{4-[5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-2-메틸-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논 (150 mg, 0.331 mmol), 6-메톡시피리딘-3-일보론산 (50.6 mg, 0.331 mmol), K3PO4 (105 mg, 0.496 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (11.61 mg, 0.017 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 수 분 동안 플러싱하였다. 이어서, 이 혼합물에 아세토니트릴 4 ml에 이어서 물 0.4 ml를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 포화 중탄산염 용액으로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 SCx-2 카트리지 상에서 중화시켜 표제 화합물 (100 mg, 60% 수율)을 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00407
1-{4-[5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-2-메틸-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논
Figure 112014064974414-pct00408
6-브로모-4-클로로퀴나졸린 (1.8 g, 7.39 mmol) (상업적 공급원), 1-{4-[2-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논 (4.23 g, 7.39 mmol, 65% 순도 (UPLC)), K3PO4 (2.354 g, 11.09 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (0.259 g, 0.370 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 수 분 동안 플러싱하였다. 이어서, 이 혼합물에 아세토니트릴 15 ml에 이어서 물 1.5 ml를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 포화 중탄산염 용액으로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 바이오타지 이솔레라 시스템을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 (아민 관능화 실리카 KP-NH, 시클로헥산/EtOAc 0 → 100%로 용리시킴)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.65 g, 49% 수율)을 황색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00409
실시예 101': 1-(4-{3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-5-트리플루오로메틸-벤조일}-피페라진-1-일)-에타논
Figure 112014064974414-pct00410
1-{4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-트리플루오로메틸-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논 (120 mg, 0.19 mmol, 80% 순도 (HPLC)), 2-메톡시-5-피리딘 보론산 (34.9mg, 0.228 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (10.98 mg, 0.009 mmol)의 혼합물에 아세토니트릴 2 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.380 mL, 0.380 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-SO3H MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (48 mg, 47% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00411
실시예 102' 내지 109'는 실시예 101'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00412
Figure 112014064974414-pct00413
Figure 112014064974414-pct00414
Figure 112014064974414-pct00415
반응식 8'
Figure 112014064974414-pct00416
a) 6-브로모-3H-퀴나졸린-4-온의 염소화는 희석된 (예컨대, CH2Cl2 중) 또는 순수한 옥시염화인 중에서 환류 하에 또는 130℃에서 가열함으로써 통상의 옥시염화인 조건 하에 수행한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 3-(에톡시카르보닐)페닐-보론산 또는 3-(에톡시카르보닐)페닐-보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 카르복실산 에스테르의 비누화는 가능한 수성 염기 (그중 수산화리튬이 바람직함) 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 통상의 비누화 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행할 수 있다. d) 카르복실산과 화학식 R3NHR4의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R3NHR4의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 바람직하게는 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU)를 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. e) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R5-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 8'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 110': 1-(4-{3-플루오로-5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-벤조일}-피페라진-1-일)-에타논
Figure 112014064974414-pct00417
1-{4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-플루오로-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논 (150 mg, 0.328 mmol), 6-메톡시피리딘-3-일보론산 (50.2 mg, 0.328 mmol), K3PO4 (104 mg, 0.492 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (11.51 mg, 0.016 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 수 분 동안 플러싱하였다. 이어서, 이 혼합물에 아세토니트릴 3 ml에 이어서 물 0.3 ml를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 포화 중탄산염 용액으로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 SCx-2 카트리지 상에서 중화시켜 표제 화합물 (68 mg, 41% 수율)을 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00418
1-{4-[3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-플루오로-벤조일]-피페라진-1-일}-에타논
Figure 112014064974414-pct00419
CH2Cl2 (15 mL) 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-플루오로-벤조산 (1.36 g, 3.72 mmol)의 혼합물에 실온에서 DIPEA (1.30 mL, 7.44 mmol) 및 HBTU (1.694 g, 4.47 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 이어서, 이 혼합물에 1-(피페라진-1-일)에타논 (0.572 g, 4.47 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 2회 세척하고, 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 바이오타지 이솔레라 시스템을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 (아민 관능화 실리카 KP-NH, 시클로헥산/EtOAc 0 → 100%로 용리시킴)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.20 g, 68% 수율)을 베이지색 발포체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00420
3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-플루오로-벤조산
Figure 112014064974414-pct00421
디옥산 (15 mL) 중 3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-플루오로-벤조산 에틸 에스테르 (1.417 g, 3.78 mmol)의 용액에 LiOH.H2O의 2M 수용액 (7.55 mL, 7.55 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 HCl의 2M 수용액 (5 mL)으로 켄칭하고, 형성된 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (1.36 g, 99% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00422
3-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-5-플루오로-벤조산 에틸 에스테르
Figure 112014064974414-pct00423
6-브로모-4-클로로퀴나졸린 (1.5 g, 6.16 mmol), 3-(에톡시카르보닐)-5-플루오로페닐보론산 (1.306 g, 6.16 mmol), K3PO4 (1.961 g, 9.24 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (216 mg, 0.308 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 수 분 동안 플러싱하였다. 이어서, 이 혼합물에 아세토니트릴 24 ml에 이어서 물 2.4 ml를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, CH2Cl2로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 포화 중탄산염 용액으로 세척하고, 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 바이오타지 이솔레라 시스템을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 (아민 관능화 실리카 KP-NH, 시클로헥산/EtOAc 0 → 30%로 용리시킴)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1.417 g, 61% 수율)을 고체로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00424
실시예 111'의 화합물은 실시예 110'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용함으로써 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00425
실시예 112': 1-(4-{4-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-퀴나졸린-4-일]-피리딘-2-카르보닐}-피페라진-1-일)-에타논
Figure 112014064974414-pct00426
2-메톡시피리미딘-5-일 보론산 (36.9 mg, 0.240 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (11.56 mg, 0.010 mmol)의 혼합물에 아세토니트릴 2 mL 중 1-{4-[4-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-피리딘-2-카르보닐]-피페라진-1-일}-에타논 (88 mg, 0.200 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 플러싱하고, Na2CO3의 1M 수용액 (0.400 mL, 0.400 mmol)을 첨가하고, 바이알을 마개를 막았다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 10분 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 농축시켰다. 정제용 역상 길슨 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 PL-HCO3 MP 상에서 중화시켜 표제 화합물 (40 mg, 43% 수율)을 백색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00427
실시예 113' 및 114'의 화합물은 실시예 112'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00428
반응식 9'
Figure 112014064974414-pct00429
a) 보로네이트 에스테르의 형성은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센]-디클로로팔라듐 (PdCl2(dppf)-CH2Cl2), 수성 염기, 예컨대 바람직하게는 아세트산칼륨, 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 및 비스-(피나콜레이토)-디보론을 사용하여 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 80℃에서 수 시간 동안 교반한다. b) 6-브로모-4-클로로-퀴나졸린과 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. d) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R5-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 디클로로디페닐포스핀 팔라듐 (PdCl2(PPh3)2), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 바람직하게는, 반응물을 대략 100-120℃의 온도에서 바람직하게는 마이크로웨이브 오븐에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. c) 아릴 브로마이드와 보론산 또는 보론산 유도체, 예컨대 화학식 R5-B(OR')2의 보로네이트 사이의 스즈키 교차-커플링은 팔라듐 촉매, 예컨대 바람직하게는 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 (Pd(PPh3)4), 수성 염기 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 아세토니트릴을 사용하여 통상의 스즈키 조건 하에 수행한다. 반응물을 바람직하게는 대략 100-120℃의 온도에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다. d) 카르복실산과 화학식 R3NHR4의 아민의 축합은 바람직하게는 통상의 축합 조건 하에 수행한다. 반응은 카르복실산 및 화학식 R3NHR4의 아민을 적합한 용매, 예를 들어 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드, N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-2-메틸-피롤리돈, 메틸렌 클로라이드, 또는 2종 이상의 이러한 용매의 혼합물 중에 용해시키고, 적합한 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 (DIPEA) 또는 N-메틸모르폴린 및 계내에서 카르복실산의 반응성 유도체를 형성하는 적합한 커플링제, 예를 들어 (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 바람직하게는 프로필포스폰산 무수물을 첨가함으로써 수행할 수 있다. 반응 혼합물을 바람직하게는 대략 -20 내지 50℃, 특히 -5℃ 내지 30℃의 온도에서, 예를 들어 0℃ 내지 실온에서 교반한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예를 들어 질소 또는 아르곤 하에 수행할 수 있다.
본원에 기재된 최종 화합물을 반응식 9'에 기재된 일반적 절차에 따라 제조하였다.
실시예 115': {5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-2-메틸-페닐}-(4-메틸-피페라진-1-일)-메타논
Figure 112014064974414-pct00430
CH2Cl2 (2 mL) 중 5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-2-메틸-벤조산 (55 mg, 0.148 mmol)의 혼합물에 실온에서 DIPEA (0.039 mL, 0.222 mmol) 및 DMF 중 50% 프로필포스폰산 무수물 용액 (0.065 mL, 0.222 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 이 혼합물에 1-메틸피페라진 (0.016 mL, 0.148 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 NaHCO3의 포화 수용액으로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하였다. 이어서, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통해 통과시킴으로써 건조시키고, 증발시켰다. 정제용 역상 HPLC에 의해 정제하고, 후속적으로 합한 분획을 SCx-2 카트리지 상에서 중화시켜 표제 화합물 (32 mg, 46% 수율)을 황색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00431
5-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-퀴나졸린-4-일]-2-메틸-벤조산
Figure 112014064974414-pct00432
5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-2-메틸-벤조산 (318 mg, 0.741 mmol), 6-메톡시피리딘-3-일보론산 (113 mg, 0.741 mmol), K3PO4 (236 mg, 1.112 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (26.0 mg, 0.037 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 수 분 동안 플러싱하였다. 이어서, 이 혼합물에 아세토니트릴 6 ml에 이어서 물 0.8 ml를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 5분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 HCl의 2M 용액으로 세척하였다. 화합물 중 일부가 수성 상 중에 남아있었으므로, pH를 약 8로 염기성화시키고, 화합물을 EtOAc로 다시 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. EtOAc/시클로헥산 중에서 침전시켜 표제 화합물 (168 mg, 61% 수율)을 황색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00433
5-(6-브로모-퀴나졸린-4-일)-2-메틸-벤조산
Figure 112014064974414-pct00434
6-브로모-4-클로로퀴나졸린 (300 mg, 1.232 mmol), 2-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조산 (497 mg, 1.232 mmol, UPLC에 의하면 순도 65%), K3PO4 (392 mg, 1.848 mmol) 및 PdCl2(PPh3)2 (43.2 mg, 0.062 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 수 분 동안 플러싱하였다. 이어서, 이 혼합물에 아세토니트릴 8 ml에 이어서 물 0.8 ml를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 오븐을 사용하여 120℃로 5분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 유기 층을 HCl의 2M 용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. EtOAc/시클로헥산 중에서 침전시켜 표제 화합물 (318 mg, 80% 순도, 60% 수율)을 베이지색 분말로서 수득하였다.
Figure 112014064974414-pct00435
실시예 116' 내지 117'는 실시예 115'에 이용된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
Figure 112014064974414-pct00436
Figure 112014064974414-pct00437
생물학적 평가
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제의 활성은 하기 시험관내 & 생체내 방법에 의해 평가할 수 있다.
생물학적 검정
1 효소적 PI3K 알파 및 PI3K 델타 이소형 억제의 결정
1.1 지질 키나제 활성의 시험
PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제의 효능은 하기와 같이 입증할 수 있다:
절반 면적 코스타(COSTAR) 96 웰 플레이트의 웰당 50 μl의 최종 부피로 키나제 반응을 수행하였다. 검정에서 ATP 및 포스파티딜 이노시톨의 최종 농도는 각각 5 μM 및 6 μg/mL였다. PI3 키나제, 예를 들어 PI3 키나제 δ를 첨가하여 반응을 개시하였다.
p110δ. 검정의 성분을 웰마다 하기와 같이 첨가하였다:
ㆍ 칼럼 2-1에 웰당 5% DMSO 중 10 μl 시험 화합물.
ㆍ 칼럼 1의 처음 4개 웰 및 칼럼 12의 마지막 4개 웰에 5% vol/vol DMSO 10 μl를 첨가하여 총 활성을 결정하였다.
ㆍ 칼럼 1의 마지막 4개 웰 및 칼럼 12의 처음 4개 웰에 10 μM 대조군 화합물을 첨가하여 배경값을 결정하였다.
ㆍ 플레이트당 2 mL '검정 믹스'를 제조하였다:
HEPES 검정 완충제 1.912 mL
웰당 5 μM의 최종 농도를 제공하는 ATP의 3 mM 원액 8.33 μl
활성일에 웰당 0.05 μCi를 제공하는 [33P]ATP 1 μl
웰당 6 μg/mL의 최종 농도를 제공하는 1 mg/mL PI 원액 30 μl
웰당 1 mM의 최종 농도를 제공하는 MgCl2의 1 M 원액 5 μl
ㆍ 웰당 검정 믹스 20 μl를 첨가하였다.
ㆍ 플레이트당 2 mL '효소 믹스'를 제조하였다 (키나제 완충제 2 mL 중 x* μl PI3 키나제 p110β). '효소 믹스'는 검정 플레이트에 첨가하는 동안 얼음 상에 유지하였다.
ㆍ 웰당 20 μl '효소 믹스'를 첨가하여 반응을 개시하였다.
ㆍ 이어서, 플레이트를 90분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ㆍ 웰당 50 μl WGA-SPA 비드 (밀 배아 응집소-코팅된 섬광 근접 검정 비드) 현탁액을 첨가하여 반응을 종결하였다.
ㆍ 탑실-S(TopSeal-S) (폴리스티렌 마이크로플레이트를 위한 가열 밀봉, 퍼킨엘머 LAS [도이칠란트] 게엠베하(PerkinElmer LAS [Deutschland] GmbH), 독일 로트가우)를 사용하여 검정 플레이트를 밀봉하고, 적어도 60분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ㆍ 이어서, 주앙(Jouan) 벤치 탑 원심분리기 (주앙 인크.(Jouan Inc.), 프랑스 낭트)를 사용하여 검정 플레이트를 2분 동안 1500 rpm에서 원심분리하였다.
ㆍ 팩커드 탑카운트(Packard TopCount)를 사용하여 검정 플레이트를 계수하였다 (각 웰을 20초 동안 계수함).
* 효소의 부피는 사용된 배치의 효소적 활성에 따라 달라진다.
보다 바람직한 검정에서는, 저 부피 비-결합 코닝(CORNING) 384 웰 흑색 플레이트 (카탈로그 번호 #3676)의 웰당 10 μl의 최종 부피로 키나제 반응을 수행하였다. 검정에서 ATP 및 포스파티딜 이노시톨 (PI)의 최종 농도는 각각 1 μM 및 10 μg/mL였다. ATP를 첨가하여 반응을 개시하였다.
검정의 성분을 웰마다 하기와 같이 첨가하였다:
칼럼 1-20에 웰당 90% DMSO 중 50 nl 시험 화합물, 단일로 8가지 농도 (1/3 및 1/3.33 연속 희석 단계).
ㆍ 저 대조군: 칼럼 23-24의 웰 절반에 90% DMSO 50 nl (최종 0.45%).
ㆍ 고 대조군: 칼럼 23-24의 다른 절반에 참조 화합물 (예를 들어, WO 2006/122806에서의 실시예 7의 화합물) 50 nl (최종 2.5 μM).
ㆍ 표준물: 칼럼 21-22에 시험 화합물로서 희석된 직전에 언급된 바와 같은 참조 화합물 50 nl.
ㆍ 검정당 20 mL '완충제'를 제조하였다:
1M 트리스 HCl pH 7.5 200 μl (최종 10 mM)
1M MgCl2 60 μl (최종 3 mM)
2M NaCl 500 μl (최종 50 mM)
10% CHAPS 100 μl (최종 0.05%)
100mM DTT 200 μl (최종 1mM)
나노퓨어 워터(nanopure water) 18.94 mL
ㆍ 검정당 10 mL 'PI'를 제조하였다:
3% 옥틸글루코시드 중에 제조된 1 mg/mL l-알파-포스파티딜이노시톨 (소의 간, 아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids) 카탈로그 번호 840042C MW=909.12) 200 μl (최종 10 μg/mL)
'완충제' 9.8 mL
ㆍ 검정당 10 mL 'ATP'를 제조하였다:
웰당 1 μM의 최종 농도를 제공하는 ATP의 3 mM 원액 6.7 μl
'완충제' 10 mL
ㆍ 검정당 각각의 PI3K 구축물 2.5 mL를 'PI' 중에 하기 최종 농도로 제조하였다:
10 nM PI3K 알파 EMV B1075
25 nM 베타 EMV BV949
10 nM 델타 EMV BV1060
150 nM 감마 EMV BV950
ㆍ 웰당 'PI/PI3K' 5 μl를 첨가하였다.
ㆍ 웰당 5 μl 'ATP'를 첨가하여 반응을 개시하였다.
ㆍ 이어서, 플레이트를 60분 (알파, 베타, 델타) 또는 120분 (감마) 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ㆍ 10 μl 키나제-글로(Kinase-Glo) (프로메가(Promega) 카탈로그 번호 #6714)를 첨가하여 반응을 종결하였다.
ㆍ 10분 후에 시너지 2(Synergy 2) 판독기 (바이오텍(BioTek), 미국 버몬트)에서 100 밀리초의 통합 시간 및 191로 설정된 감도로 검정 플레이트를 판독하였다.
ㆍ 출력값: 고 대조군은 약 60,000 카운트였고, 저 대조군은 30,000 이하였다.
ㆍ 본 발광 검정은 0.4 내지 0.7의 유용한 Z' 비를 제공하였다.
Z' 값은 검정 견실성의 보편적인 척도이다. 0.5 내지 1.0의 Z'가 탁월한 검정으로 간주된다.
본 검정을 위해, 언급된 PI3K 구축물을 하기와 같이 제조하였다:
1.2 유전자 구축물의 생성
2개의 상이한 구축물 BV 1052 및 BV 1075를 사용하여 화합물 스크리닝을 위한 PI3 키나제 α 단백질을 생성하였다.
PI3Kα BV-1052 p85(iSH2)-Gly 링커-p110a(D20aa)-C-말단 His 태그
p85 서브유닛의 중간 SH2 도메인 (iSH2) 및 p110-a 서브유닛 (처음 20개 아미노산 결실)에 대한 PCR 생성물을 생성하고, 중복 PCR에 의해 융합시켰다.
먼저 프라이머
Figure 112014064974414-pct00438
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 iSH2 PCR 생성물을 생성하였다.
후속적으로, 2차 PCR 반응에서 게이트웨이(Gateway) (인비트로젠 아게(Invitrogen AG), 스위스 바젤) 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을, 프라이머
Figure 112014064974414-pct00439
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
또한, 먼저 프라이머
Figure 112014064974414-pct00440
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 p110-a 단편을 생성하였다.
후속적 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를, 프라이머
Figure 112014064974414-pct00441
를 사용하여 p110-a 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중복 히스티딘 태그 및 AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure 112014064974414-pct00442
를 사용하여, iSH2 단편의 3' 말단 및 p110-a 단편의 5' 말단에서 중복 링커에 의한 제3 PCR 반응으로 p85-iSH2/p110-a 융합 단백질을 조립하였다.
상기 최종 생성물을 (인비트로젠) OR 반응에서 공여자 벡터 pDONR201 내로 재조합시켜 ORF318 진입 클론을 생성하였다. 상기 클론을 서열분석에 의해 검증하고, 게이트웨이 LR 반응에서 삽입물을 바큘로바이러스 발현 벡터 LR410의 생성을 위한 게이트웨이 적합화 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터 내로 전달하는데 사용하였다.
PI3Kα BV-1075 p85(iSH2)-12 XGly 링커-p110a(D20aa)-C-말단 His 태그
벡터 pBlueBac4.5 내로 클로닝된 p85 단편 및 p110-a 단편으로 구성된 3-부분 라이게이션에 의해 바큘로바이러스 BV-1075에 대한 구축물을 생성하였다. Nhe/Spe로 소화시킨 플라스미드 p1661-2로부터 p85 단편을 유도하였다. SpeI/HindIII 단편으로서 LR410 (상기 참조)으로부터 p110-a 단편을 유도하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 Nhe/HindIII으로 소화시켰다. 이로써 구축물 PED 153.8을 생성하였다.
주형으로서의 ORF 318 (상기 기재된 것), 및 1개의 정방향 프라이머
Figure 112014064974414-pct00443
및 2개의 역방향 프라이머
Figure 112014064974414-pct00444
를 사용하여 PCR에 의해 p85 성분 (iSH2)을 생성하였다.
2개의 역방향 프라이머는 중복되고, 12x Gly 링커 및 p110a 유전자의 N-말단 서열을 SpeI 부위로 혼입시켰다. 12x Gly 링커는 BV1052 구축물에서의 링커를 대체하였다. PCR 단편을 pCR2.1 TOPO (인비트로젠) 내로 클로닝하였다. 생성된 클론 중 p1661-2가 정확한 것으로 결정되었다. 상기 플라스미드를 Nhe 및 SpeI로 소화시키고, 생성된 단편을 서브클로닝을 위해 겔-단리하고 정제하였다.
클론 LR410 (상기 참조)을 SpeI 및 HindIII으로 효소 소화시켜 p110-a 클로닝 단편을 생성하였다. SpeI 부위는 p110a 유전자의 코딩 영역에 존재하였다. 생성된 단편을 서브클로닝을 위해 겔-단리하고 정제하였다.
Nhe 및 HindIII으로 효소 소화시켜 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 제조하였다. 절단 벡터를 퀴아젠(Qiagen) (퀴아젠 엔.브이(Quiagen N.V), 네덜란드 벤로) 칼럼으로 정제한 다음, 소 장 알칼리성 포스파타제 (CIP) (뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England BioLabs), 매사추세츠주 입스위치)로 탈인산화하였다. CIP 반응의 완료 후, 절단 벡터를 다시 칼럼 정제하여 최종 벡터를 생성하였다. 로슈 래피드(Roche Rapid) 리가제 및 판매자의 설명서를 사용하여 3-부분 라이게이션을 수행하였다.
PI3Kβ BV-949 p85(iSH2)-Gly 링커-p110b(전장)-C-말단 His 태그
p85 서브유닛의 중간 SH2 도메인 (iSH2) 및 전장 p110-b 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하고, 중복 PCR에 의해 융합시켰다.
먼저 프라이머
Figure 112014064974414-pct00445
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 iSH2 PCR 생성물을 생성하였다.
후속적으로, 2차 PCR 반응에서 게이트웨이 (인비트로젠) 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을, 프라이머
Figure 112014064974414-pct00446
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
또한, 먼저 링커 서열 및 p110-b의 5' 말단을 함유하는
Figure 112014064974414-pct00447
및 히스티딘 태그에 융합된 p110-b의 3' 말단의 서열을 함유하는
Figure 112014064974414-pct00448
프라이머를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 p110-b 단편을 생성하였다.
상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중복 히스티딘 태그 및 AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure 112014064974414-pct00449
를 사용하여, iSH2 단편의 3' 말단 및 p110-b 단편의 5' 말단에서 링커의 중복 PCR 반응에 의해 p85-iSH2/p110-b 융합 단백질을 조립하였다.
상기 최종 생성물을 (인비트로젠) OR 반응에서 공여자 벡터 pDONR201 내로 재조합시켜 ORF253 진입 클론을 생성하였다. 상기 클론을 서열분석에 의해 검증하고, 게이트웨이 LR 반응에서 삽입물을 바큘로바이러스 발현 벡터 LR280의 생성을 위한 게이트웨이 적합화 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터 내로 전달하는데 사용하였다.
PI3Kδ BV-1060 p85(iSH2)-Gly 링커-p110d(전장)-C-말단 His 태그
p85 서브유닛의 중간 SH2 도메인 (iSH2) 및 전장 p110-d 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하고, 중복 PCR에 의해 융합시켰다.
먼저 프라이머
Figure 112014064974414-pct00450
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 iSH2 PCR 생성물을 생성하였다.
후속적으로, 2차 PCR 반응에서 게이트웨이 (인비트로젠) 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을, 프라이머
Figure 112014064974414-pct00451
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
또한, 먼저 프라이머
Figure 112014064974414-pct00452
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 p110-a 단편을 생성하였다.
후속적 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를, 프라이머
Figure 112014064974414-pct00453
를 사용하여 p110-d 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중복 히스티딘 태그 및 게이트웨이 (인비트로젠) AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure 112014064974414-pct00454
를 사용하여, iSH2 단편의 3' 말단 및 p110-d 단편의 5' 말단에서 중복 링커에 의한 제3 PCR 반응으로 p85-iSH2/p110-d 융합 단백질을 조립하였다.
상기 최종 생성물을 (인비트로젠) OR 반응에서 공여자 벡터 pDONR201 내로 재조합시켜 ORF319 진입 클론을 생성하였다. 상기 클론을 서열분석에 의해 검증하고, 게이트웨이 LR 반응에서 삽입물을 바큘로바이러스 발현 벡터 LR415의 생성을 위한 게이트웨이 적합화 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터 내로 전달하는데 사용하였다.
PI3Kγ BV-950 p110g(D144aa)-C-말단 His 태그
상기 구축물은 로저 윌리암스 랩(Roger Williams lab) (MRC 분자 생물학 실험실, 영국 캠브리지)으로부터 입수하였다 (2003년 11월). 구축물은 문헌 [Pacold M. E. et al. (2000) Cell 103, 931-943]에 기재되어 있다.
1.3 단백질 발현 및 정제
PI3K 이소형에 대한 재조합 바큘로바이러스 및 단백질의 생성 방법:
다양한 PI3 키나제 유전자를 함유하는 pBlue-Bac4.5 (a, b 및 d 이소형의 경우) 또는 pVL1393 (g의 경우) 플라스미드를, 판매자가 권장한 방법을 사용하여 바큘로골드(BaculoGold) WT 게놈 DNA (BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences), 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스)로 공-형질감염시켰다. 후속적으로, 형질감염으로부터 수득한 재조합 바큘로바이러스를 Sf9 곤충 세포 상에서 플라크-정제하여 재조합 단백질을 발현하는 몇몇 단리물을 수득하였다. 항-HIS 또는 항-이소형 항체 웨스턴에 의해 양성 클론을 선택하였다. PI3K 알파 및 델타 이소형의 경우에는, PI3K의 제1 클론 바이러스 원액에 대해 제2 플라크-정제를 수행하였다. 전체 바큘로바이러스 단리물의 증폭을 낮은 감염 다중도 (moi)로 수행하여 단백질 생산을 위한 고-역가, 저 계대 원액을 생성하였다. 바큘로바이러스를 BV1052 (α) 및 BV1075 (α), BV949 (β), BV1060 (δ) 및 BV950 (γ)으로 지정하였다.
단백질 생산은 2 l 유리 에를렌마이어(Erlenmyer) 플라스크 (110 rpm) 또는 웨이브-생물반응기 (22-25 rpm)에서 단백질-무함유 배지 중에 현탁된 Tn5 (트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)) 또는 TiniPro (익스프레션 시스템즈, 엘엘씨(Expression Systems, LLC), 미국 캘리포니아주 우드랜드) 세포를 2-10의 moi로 39-48시간 동안 감염시키는 것 (계대 3 이하)을 포함하였다. 먼저, 10 l 작업 부피 웨이브-생물반응기의 절반 용적 (5L)을 3e5개 세포/mL의 밀도로 시딩하였다. 반응기를 72시간의 세포 성장 단계 동안 15 rpm으로 요동시키고, 공기와 혼합한 5% 산소로 보충하였다 (분당 0.2 l). 감염 직전에, 웨이브-반응기 배양물을 밀도, 생존율에 대해 분석하고, 대략 1.5e6개 세포/mL로 희석하였다. 100-500 mL의 고 역가, 저 계대 바이러스를 첨가한 후, 2-4시간 추가 배양하였다. 39-48시간의 감염 기간 동안 산소를 35%로 증가시키고, 요동 플랫폼 rpm을 25로 증가시켰다. 감염 동안에, 세포를 생존율, 직경 및 밀도에 대해 바이셀(Vicell) 생존율 분석기 (베크만 쿨터, 인크(Beckman Coulter, Inc), 미국 캘리포니아주 풀러톤) 생물공정에 의해 모니터링하였다. 다양한 파라미터 및 대사물 (pH, O2 포화도, 글루코스 등)의 노바(Nova) 생물분석기 (노바 바이오메디칼 코포레이션(NOVA Biomedical Corp.), 미국 매사추세츠주 월섬) 판독값을, 수확할 때까지 매 12-18시간마다 취하였다. 웨이브-생물반응기 세포를 감염 후 40시간 내에 수집하였다. 원심분리 (1500 rpm, 4℃)에 의해 세포를 수집하고, 후속적으로 용해 및 정제를 위해 펠릿을 풀링하는 동안 얼음 상에 유지하였다. 펠릿 풀을 소량의 비-보충된 저온의 그레이스(Grace) 배지 (프로테아제 억제제 무함유)를 사용하여 제조하였다.
HTS (BV1052)에 대한 PI3K 알파 정제 프로토콜
PI3K 알파를 3개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스(Ni Sepharose) 수지 (제너럴 일렉트릭 캄파니(General Electric Company) 소속의 지이 헬스케어(GE Healthcare), 미국 코네티컷주 페어필드) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피, 슈퍼덱스(Superdex) 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적인 SP-XL 칼럼 (지이 헬스케어) 상에서의 양이온 교환 단계. 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다.
전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시(Coomassie) 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. GFC 칼럼으로부터의 풀을 저염 완충제 중에 희석하고, 정제용 SP-XL 칼럼에 적용하였다. 안정한 A280 기준선 흡광도가 달성될 때까지 칼럼을 저염 완충제로 세척하고, 20 칼럼 부피 구배 0 mM NaCl → 500 mM NaCl을 사용하여 용리시켰다. 다시, SP-XL 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
HTS (BV949)에 대한 PI3K 베타 정제 프로토콜
PI3K 베타를 2개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (지이 헬스케어) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 슈퍼덱스 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과 (GFC). 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다.
전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
HTS (BV950)에 대한 PI3K 감마 정제 프로토콜
PI3K 감마를 2개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (지이 헬스케어) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 슈퍼덱스 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과 (GFC). 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다. 전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
HTS (BV1060)에 대한 PI3K 델타 정제 프로토콜
PI3K 델타를 3개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (지이 헬스케어) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피, 슈퍼덱스 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적인 Q-HP 칼럼 (지이 헬스케어) 상에서의 음이온 교환 단계. 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다. 전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. GFC 칼럼으로부터의 풀을 저염 완충제 중에 희석하고, 정제용 Q-HP 칼럼에 적용하였다. 안정한 A280 기준선 흡광도가 달성될 때까지 칼럼을 저염 완충제로 세척하고, 20 칼럼 부피 구배 0 mM NaCl → 500 mM NaCl을 사용하여 용리시켰다. 다시, Q-HP 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
IC50은 "엑셀 피트(excel fit)"와 함께 4-파라미터 곡선 피팅 루틴에 의해 결정하였다. 4-파라미터 로지스틱 방정식을 사용하여 8가지 농도 (일반적으로, 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM)에서의 각 화합물의 억제 백분율의 IC50 값 (IDBS XLfit)을 계산하였다. 대안적으로는, 4-파라미터 로지스틱 모델인 idbsXLfit 모델 204를 사용하여 IC50 값을 계산하였다.
대안적으로, ATP 고갈 검정의 경우에는, 시험되는 PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 DMSO 중에 용해시키고, 웰당 0.5 μl로 백색 384-웰 플레이트에 직접 분배하였다. 반응을 개시하기 위해, 10 nM PI3 키나제 10 μl 및 5 μg/mL 1-알파-포스파티딜이노시톨 (PI)에 이어서 2 μM ATP 10 μl를 각 웰에 첨가하였다. 대략 50%의 ATP가 고갈될 때까지 반응을 수행하고, 이어서 20 μl의 키나제-글로 용액 (프로메가 코포레이션(Promega Corp.), 미국 위스콘신주 매디슨)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 중지된 반응물을 5분 동안 인큐베이션하고, 이어서 남아있는 ATP를 발광을 통해 검출하였다. 이어서, IC50 값을 결정하였다.
실시예 1-49 및 51-95의 화합물 중 일부는 상이한 파라로그 PI3K α, β, γ 및 δ에 대해 특정 수준의 선택성을 나타낸다.
적합하게는, 실시예 1-49 및 51-95의 화합물은, 예를 들어 상이한 파라로그 PI3K α 및 β에 대한 시험관내 및 생체내 시험에서 나타난 바와 같이 이소형 PI3Kδ에 대해 특정 수준의 선택성을 나타낸다.
실시예 1'-117'의 화합물 중 일부는 상이한 파라로그 PI3K α, β, γ 및 δ에 대해 특정 수준의 선택성을 나타낸다.
적합하게는, 실시예 1'-117'의 화합물은, 예를 들어 상이한 파라로그 PI3K α 및 β에 대한 시험관내 및 생체내 시험에서 적어도 10배, 보다 바람직하게는 적어도 30배의 선택성으로 나타난 바와 같이 이소형 PI3Kδ에 대해 특정 수준의 선택성을 나타낸다.
이들 검정에서, IC50으로 표현되는 활성의 범위는 바람직하게는 1 nM 내지 5000 nM, 보다 바람직하게는 1 nM 내지 약 1000 nM이다.
2. 세포 검정
2.1 Rat1 세포에서의 PI3K 알파, PI3K 베타 및 PI3K 델타 억제의 결정
PI3K/Akt 경로의 활성화를 차단하는데 있어서의 화합물의 효능은, PI3-키나제 이소형 알파, 베타 또는 델타의 활성화된 버전으로 안정하게 형질감염된 Rat1 세포에서의 Akt Ser473 인산화의 화합물 매개 억제의 민감한 정량화를 위한 퍼킨 엘머의 ALPHA 기술에 기반한 동질 샌드위치 포스포-ELISA를 이용한 세포 세팅으로 입증하였다:
2.1.1 세포 및 세포 배양 조건
인간 촉매 PI3K 부류 I p110 이소형 α, β 또는 δ의 myr-HA-태그부착된 구성적 활성 서브유닛을 안정하게 발현하는 Rat1 세포주 (p110 이소형의 N-말단에서의 미리스틸화 신호의 부가는 PI3K 및 상응하는 하류 신호, 예컨대 Ser473에서의 Akt의 인산화의 구성적 활성화를 일으키는 것으로 나타난 바 있음)를 10% 열 불활성화 태아 소 송아지 혈청 (아미메드(Amimed), 카탈로그 번호 2-01F16-I), 1% L-글루타민 (인비트로젠, 카탈로그 번호 25030-02), 1% 페니실린-스트렙토마이신 (깁코(GIBCO), 카탈로그 번호 15140-114) 및 10 μg/ml 퓨로마이신 (시그마(Sigma), 카탈로그 번호 P9620)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM 고 글루코스, 깁코, 카탈로그 번호 41956-039) 중에서 배양하였다.
2.1.2 세포의 화합물 처리 및 샘플의 제조
Rat1-myr-HA-p110 알파, 베타 및 델타 세포를 트립신처리하고, CASY TT 세포 계수기 (셰르페 시스템 게엠베하(Schaerfe System GmbH), 독일 로이트링겐)로 계수하였다. 인간 포스포이노시티드-3 키나제 (PI3K) myr-HA-p110 알파, 베타 및 델타의 촉매 서브유닛을 발현하는 Rat 세포를 완전 성장 배지 (10% (v/v) 태아 소 혈청, 1% (v/v) MEM 비 필수 아미노산, 10mM HEPES, 2mM L-글루타민, 10 μg/mL 퓨로마이신 및 1% (v/v) 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM 고 글루코스)) 40ul 중 7500개 (PI3K 알파), 6200개 (PI3K 베타) 또는 4000개 (PI3K 델타) 세포의 밀도로 384-웰 플레이트에 시딩하고, 시험 화합물에 노출시키기 전에 37℃ / 5% CO2 / 95% 습도에서 48-72시간 동안 인큐베이션하였다.
화합물을 90% DMSO (머크, # 8.02912.2500) 중 10 mM 원액으로서 384 웰 플레이트 (그라이너(Greiner) PP-마이크로플레이트, #781201)에서 10 mM에서 출발하여 8가지 농도로 90% DMSO (머크, #8.02912.2500) 중 3배 연속 희석물로 제조하였다. 화합물을 384-웰 화합물 플레이트에서 희석하여 40종의 시험에 대한 8-지점 연속 희석물, 뿐만 아니라 4종의 참조 화합물 + 16종의 고 대조군 및 16종의 저 (억제) 대조군을 수득하였다. 허밍웰(Hummingwell) 나노리터 디스펜서를 사용하여 384-웰 폴리프로필렌 플레이트 내로 각각의 화합물 용액 250 nl를 분배함으로써 예비희석 플레이트를 제조하였다. 이어서, 49.75 ul 완전 성장 배지를 첨가하여 화합물을 추가로 희석하였다. 예비희석된 화합물 용액 10ul를 384-웰 피펫터를 사용하여 세포 플레이트로 옮김으로써, 대조군 세포 (고 및 저 대조군)를 포함하여 50 ul의 최종 부피 및 0.11%의 DMSO 농도를 생성하였다. 화합물 희석은 10, 3.333, 1.111, 0.370, 0.123, 0.041, 0.014 및 0.005 μM의 상기 특정된 8가지 최종 농도를 생성하였다.
2.1.3 Rat-1 세포에서의 포스포이노시티드-3 키나제 (PI3K)-매개 Akt 1/2 (S473) 인산화
p-Akt(Ser473)의 검출을 위해, 슈어파이어(SureFire)® p-Akt 1/2 (Ser473) 검정 키트 (퍼킨엘머, 미국)를 사용하였다. 비처리된 세포를 저 대조군으로 사용하고, 화합물의 부재 하에 자극된 세포를 고 대조군으로 사용하였다. 37℃ / 5% CO2 / 95% 습도에서 화합물과 함께 1시간 동안 인큐베이션한 후, 0.72 % BSA로 보충된 알파스크린(AlphaScreen)® 슈어파이어® 검출용 용해 완충제 20ul를 첨가하여 세포를 용해시켰다. 세포 용해물을 즉시 사용하거나 또는 사용할 때까지 -20℃에서 (밀봉된 플레이트에서) 결빙시켜 저장하였다.
세포 용해물 5 ul를 384-웰 피펫터를 사용하여 검출을 위한 384-웰 저 부피 프록시플레이트(Proxiplate)로 옮겼다. 알파스크린® 슈어파이어® 시약의 첨가를 제조업체의 프로토콜에 따라 수행하였다. 첫째로, 알파스크린® 수용자 비드를 함유하는 반응 완충제 + 활성화 완충제 믹스 5ul를 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, 플레이트 진탕기 상에서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 둘째로, 알파스크린® 공여자 비드를 함유하는 희석 완충제 2ul를 첨가하고, 플레이트를 플레이트 진탕기 상에서 실온, 암실에서 추가로 2시간 동안 상기와 같이 인큐베이션하였다. 이어서, 발광을 엔비전 판독기 (퍼킨 엘머)를 사용하여 측정하였다. 고 대조군과 저 대조군 사이의 차이를 100%로 잡고 화합물 효과를 억제 퍼센트로 나타내었다. IC50 값을 그래픽 외삽에 의해 용량 반응 곡선으로부터 결정하였다.
2.2 뮤린 비장세포에서의 TLR9-유도된 IL-6의 결정
2.2.1 마우스 비장으로부터의 단세포 현탁액의 제조
비장을 안락사 직후에 C57BL/6 마우스로부터 절제하였다. 과도한 지방을 비장으로부터 다듬은 후에, 5 ml 시린지로부터의 플런저를 사용하여 0.4 μM 세포 여과기를 통해 비장을 으깼다. 단세포 현탁액을 제조하고, 저온의 PBS를 사용하여 50 ml 팔콘 튜브에서 부피를 15 ml로 조정하였다. 세포를 1500 rpm으로 5분 동안 4℃에서 원심분리한 후에, 상청액을 제거하고, 비장당 적혈구 용해 완충제 5 ml 중에 재현탁시키고, 5분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 빙냉 PBS (30 ml)를 세포에 첨가한 후에, 1500 rpm으로 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, 세포를 뮤린 비장세포 배양 배지 (MSCM) 40 ml로 2회 세척하였다. MSCM은 100 유닛/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신, 1 x 비필수 아미노산, 1 mM 피루브산나트륨, 0.05 mM β-메르캅토에탄올 및 10% 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS)으로 보충된 RPMI로 이루어졌다. 세포를 MSCM 10-20 ml 중에 재현탁시키고, 카운테스(Countess) 세포 계수기를 사용하여 계수하였다. 대략 60x106개 비장세포를 단일 C57BL/6 마우스 비장으로부터 수득하였다.
2.2.2 C57BL/6 뮤린 비장세포의 자극 및 특이적 억제제로의 처리
비장세포를 96 웰 편평 바닥 플레이트에 100 μl 부피 중 2x105개 세포/웰의 최종 밀도로 플레이팅하고, 37℃ 가습 인큐베이터 내에서 2-4시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 이전에 제조한 화합물 원액 플레이트를 사용하여 시험되는 화합물을 자동화 액체 취급 기계를 사용하여 분배하였다. 원액 플레이트는 3배 희석물을 사용하여 9 지점에 배열된 화합물 (90%/10% DMSO/ddH2O 중의 것)로 이루어졌다. 액체 취급 기계로 이전에 제조한 화합물 공급원 플레이트로부터의 각 희석물 1 μl를 96-웰 플레이트에 분배하였다. 세포 배양물 중 화합물의 최종 출발 농도는 10 μM이었다. 세포 배양물 중 DMSO의 최종 농도는 0.5%였다. 세포를 1시간 동안 화합물과 함께 인큐베이션한 후, TLR 리간드를 첨가하였다. 이어서, 10x EC80 농도의 CpG1826을 (200 μl의 최종 배양물 부피를 위해) 20 μl 부피로 첨가하고, 그 후 배양물을 37℃ 가습 인큐베이터 내에서 밤새 인큐베이션하였다.
2.2.3 ELISA에 의한 인터류킨-6의 결정
밤새 배양한 후에, 세포를 96-웰 V-바닥 플레이트로 옮기고, 2000 rpm으로 5분 동안 실온에서 원심분리하였다. 후속적으로, 각 배양물 상청액 150 μl를 96-웰 편평-바닥 플레이트에 옮기고, 상업적으로 입수가능한 마우스 IL-6 샌드위치 ELISA 키트 (알앤디 시스템즈(R&D systems))를 사용하여 IL-6 수준을 측정하였다. 간략하게, 플레이트를 포획 항체로 밤새 코팅한 후, PBS/0.1% BSA로 1시간 동안 차단하였다. 샘플 및 표준물을 50 μl 부피로 첨가하고, 플레이트를 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 표준물/샘플의 제거 후에, 플레이트를 PBS/0.05% 트윈을 사용하여 세척한 후, 비오티닐화 검출 항체 50 μl를 첨가하고, 그 후 플레이트를 2시간 동안 실온에서 교반하면서 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS/0.05% 트윈을 사용하여 다시 세척한 후, 웰당 50 μl 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제를 20분 동안 첨가하였다. 추가의 플레이트 세척 후에, 50 μl TMB 기질을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 20분 동안 인큐베이션한 후, 25 μl/웰 정지 용액을 첨가하였다. IL-6 수준을 스펙트라맥스(SpectraMax) 190 플레이트 판독기 (450 nm)를 사용하여 측정하고, 소프트맥스 프로(SoftMax Pro) 및 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
2.3 뮤린 비장세포에서의 TLR9-유도된 IFN-알파의 결정
2.3.1 마우스 비장으로부터의 단세포 현탁액의 제조
비장을 안락사 직후에 129/Sv 마우스로부터 절제하였다. 과도한 지방을 비장으로부터 다듬은 후에, 5 ml 시린지로부터의 플런저를 사용하여 0.4 μM 세포 여과기를 통해 비장을 으깼다. 단세포 현탁액을 제조하고, 저온의 PBS를 사용하여 50 ml 팔콘 튜브에서 부피를 15 ml로 조정하였다. 세포를 1500 rpm으로 5분 동안 4℃에서 원심분리한 후에, 상청액을 제거하고, 비장당 적혈구 용해 완충제 5 ml 중에 재현탁시키고, 5분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 빙냉 PBS (30 ml)를 세포에 첨가한 후에, 1500 rpm으로 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, 세포를 뮤린 비장세포 배양 배지 (MSCM) 40 ml로 2회 세척하였다. MSCM은 100 유닛/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신, 1 x 비필수 아미노산, 1 mM 피루브산나트륨, 0.05 mM β-메르캅토에탄올 및 10% 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS)으로 보충된 RPMI로 이루어졌다. 세포를 MSCM 10-20 ml 중에 재현탁시키고, 카운테스 세포 계수기를 사용하여 계수하였다. 대략 60x106개 비장세포를 단일 C57BL/6 마우스 비장으로부터 수득하였다.
2.3.2 129/Sv 뮤린 비장세포의 자극 및 특이적 억제제로의 처리
비장세포를 96 웰 편평 바닥 플레이트에 100 μl 부피 중 2x105개 세포/웰의 최종 밀도로 플레이팅하고, 37℃ 가습 인큐베이터 내에서 2-4시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 이전에 제조한 화합물 원액 플레이트를 사용하여 시험되는 화합물을 자동화 액체 취급 기계를 사용하여 분배하였다. 원액 플레이트는 3배 희석물을 사용하여 9 지점에 배열된 화합물 (90%/10% DMSO/ddH2O 중의 것)로 이루어졌다. 액체 취급 기계로 이전에 제조한 화합물 공급원 플레이트로부터의 각 희석물 1 μl를 96-웰 플레이트에 분배하였다. 세포 배양물 중 화합물의 최종 출발 농도는 10 μM이었다. 세포 배양물 중 DMSO의 최종 농도는 0.5%였다. 세포를 1시간 동안 화합물과 함께 인큐베이션한 후, TLR 리간드를 첨가하였다. 이어서, 10x EC80 농도의 CpG1585를 (200 μl의 최종 배양물 부피를 위해) 20 μl 부피로 첨가하고, 그 후 배양물을 37℃ 가습 인큐베이터 내에서 밤새 인큐베이션하였다.
2.3.3 ELISA에 의한 IFN-알파의 결정
밤새 배양한 후에, 세포를 96-웰 V-바닥 플레이트로 옮기고, 2000 rpm으로 5분 동안 실온에서 원심분리하였다. 후속적으로, 각 배양물 상청액 150 μl를 96-웰 편평-바닥 플레이트에 옮기고, 상업적으로 입수가능한 마우스 IFN-알파 샌드위치 ELISA 키트 (PBL 인터페론 소스(PBL Interferon Source))를 사용하여 IL-6 수준을 측정하였다. 간략하게, 사전-코팅된 플레이트를 100 μl 표준물/샘플 및 50 μl 검출 항체 용액과 함께 약하게 진탕시키면서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 진탕 없이 4도에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 PBS/0.05% 트윈을 사용하여 세척한 후, 웰당 100 μl 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제를 약하게 진탕시키면서 실온에서 2시간 동안 첨가하였다. 새로운 세척 단계 후, 100 μl TMB 기질을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 15분 동안 인큐베이션 (암실에서 진탕 없이)한 후, 100 μl/웰 정지 용액을 첨가하였다. IFN-알파 수준을 스펙트라맥스 190 플레이트 판독기 (450 nm)를 사용하여 5분 내에 측정하고, 소프트맥스 프로 및 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
2.4 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 단리된 형질세포양 수지상 세포 (pDC)에서의 TLR9-유도된 IFN알파의 결정
2.4.1 신선 인간 혈액으로부터의 PBMC의 제조
인간 혈액 (약 75 ml)을 헤파린을 함유하는 10개의 S-모노벳(S-Monovette) 튜브 (S-모노벳 7.5 mL NH 헤파린 16 IU/mL 혈액; 슈타르슈테트(Starstedt))에 수집하였다. 류코셉(Leucosep)™ 튜브 (30 mL #227290; 그라이너 바이오-원(Greiner Bio-one))를 튜브당 15 ml 림프구 분리 배지 LSM1077™ (#J15-004; PAA 래보러토리즈(PAA Laboratories))의 첨가 및 30초 동안 1000g로의 원심분리에 의해 제조하였다. 일부 25 ml 혈액을 류코셉™ 튜브로 옮긴 후, 동일한 부의 PBS (Ca2+/Mg2+ 무함유; #14190-094)로 희석하였다. 샘플을 에펜도르프(Eppendorf) 5810R 원심분리기를 사용하여 브레이크 없이 800g로 20분 동안 22℃에서 원심분리하였다. PBMC 층을 조심스럽게 혈장:분리 배지 계면으로부터 제거하고, 깨끗한 50 ml 튜브 내로 옮겼다. 세포를 PBS의 첨가 (45 ml 이하)에 의해 1회 세척하고, 에펜도르프 5810R을 사용하여 브레이크 (속도 9로 설정)를 포함하여 원심분리하였다 (1400rpm, 22℃에서 10분). 펠릿화된 세포를 조심스럽게 배지 (RPMI 1640+글루타맥스-I (GlutaMAX-I), 0.05 mM 2-메르캅토에탄올, 10 mM HEPES 및 5% v/v FCS) 중에 재현탁시키고, 샘플을 풀링하였다. 배지 성분 2-메르캅토에탄올 (#31350-010; 50 mM), Hepes (#15630-056, 1M) 및 RPMI 1640 (1x) + 글루타맥스-I (#61870-010)는 깁코로부터 입수하였다. FCS (#2-01F36-1)는 아미메드로부터 입수하였다. PBMC를 카운테스® 자동화 세포 계수기를 사용하여 계수하였다 (샘플을 배지 중에 1:10으로 예비희석한 후, 트리판 블루(Trypan Blue) 동등 부피 (10 μl)를 첨가하였음). 세포를 4 x 106개 세포/ml로 희석하고, 384-웰 플레이트 (#353962; 벡톤 디킨슨 AG(Becton Dickinson AG))에 시딩하여 최종 부피 25 μl (즉, 1 x 105개 세포/웰)를 제공하였다.
2.4.2 백혈구 연층/PBMC로부터의 신선 인간 pDC의 단리
인간 PBMC를 건강한 공여자로부터의 공급원 물질로서의 백혈구 연층 (블루츠펜데첸트룸 SRK 바젤(Blutspendezentrum SRK Basel)로부터 대략 50 ml를 얻음)을 사용하여 제조하고, 상기 제시된 바와 같이 가공하였다. 신선한 PBMC를 로보셉(RoboSep)™ 완충제 (2% v/v FBS, 1 mM EDTA (깁코 #15575-038)를 함유하는 PBS) 중에 재현탁시키고 희석하여 50 x 106개 PBMC/ml의 최종 농도를 얻었다. 자동화 로브셉™ 스테이션을 제조업체 프로토콜에 따라 기재된 바와 같이 사용하고 형질세포양 DC 농축 키트 (스템셀(Stemcell), #19062)를 사용하여 인간 pDC (음성 선택)를 단리하였다. 전형적인 pDC 수율은 >90%의 순도로 전체 PBMC의 대략 0.1%였다. 단리된 pDC를 4 x 105개 세포/ml로 희석하고, 384-웰 플레이트 (#353962; 벡톤 디킨슨 AG)에 시딩하여 25 μl (즉, 1 x 104개 세포/웰)의 최종 부피를 생성하였다. 말라리아 핵 추출물 (하기 참조)을 사용한 자극을 위해, pDC를 5 x 104개 세포/웰의 최종 농도로 시딩하였다.
2.4.3 플라스모디움 팔시파룸 핵 추출물의 제조
플라스모디움 팔시파룸의 핵 추출물의 제조는 가우다(Gowda) 등 (문헌 [Gowda et al. "The Nucleosome (Histone-DNA Complex) Is the TLR9-Specific Immunostimulatory Component of Plasmodium falciparum That Activates DCs", PLoS ONE 2011])에 따라 수행하였다. 간략하게, 플라스모디움 팔시파룸 3D7 기생충을 2% 적혈구용적률로 인간 적혈구 중에서 배양하였다. 기생충이 후기 영양형 및 분열체 단계에 있을 때, 감염된 적혈구 (IRBC)를 원심분리에 의해 수확하고, 펠릿을 20 부피의 PBS 중 0.1% 사포닌 (m/v), pH 7.2 중에 재현탁시켰다. 재현탁액을 10분 동안 얼음 상에서 인큐베이션하고, 15분 동안 4℃에서 2,500 g로 원심분리하였다. 펠릿을 상기 용액 중에 재현탁시키고, 10분 동안 얼음 상에서 인큐베이션하고, 15분 동안 4℃에서 2,500 g로 원심분리하였다. 이에 따라 수득한 기생충 펠릿을 원심분리에 의해 차가운 PBS, pH 7.2로 3회 세척하였다. 매번 차가운 PBS 35ml를 사용하였다. 최종 원심분리 후 수득한 펠릿을 10 부피의 용해 완충제 (20 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM 디티오트레이톨, 1 mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF) 및 1% 트리톤(Triton) X-100) 중에 현탁시키고, 5분 동안 얼음 상에서 인큐베이션하였다. 현탁액을 10분 동안 4℃에서 5,000 g로 원심분리하고, 핵 물질을 용해 완충제로 3회 세척하여 막 성분을 제거하였다. 핵 물질을 PBS, pH 7.2 중에 재현탁시켰다. 불용성 물질을 후속적으로 수조 소니케이터를 사용하여 가용화시켰다.
2.4.4 PBMC 또는 pDC의 자극 및 특이적 억제제로의 처리
화합물을 100% v/v DMSO (#41640-100 mL; 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 중에 예비희석하고, 이어서 배지로 옮겼다 (0.25%의 최종 DMSO 농도가 달성됨). 세포를 적절한 화합물 희석물 (5 μl) 또는 비히클 대조군 (5 μl)으로 처리하고, 가습 인큐베이터 내의 5% (v/v) CO2를 포함하는 공기 중에서 37℃로 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 CpG2216 (0.3 μM; #tlrl-hodna; 인비보젠(Invivogen)), 말라리아 핵 추출물 (2.5 μg/ml; 제조에 대해서는 상기 참조) 또는 비히클 대조군 (10 μl/웰)으로 자극하고, 20시간 동안 인큐베이션하였다. IFNα 수준의 정량화를 위해 플레이트를 간략하게 원심분리하고 (2분 동안 22℃에서 200 x g), 상청액 샘플 (30 μl)을 제거하였다.
2.4.5 알파리사(AlphaLisa) 기술을 사용한 IFNα의 정량화
IFN알파의 정량화를 위해, 퍼킨엘머로부터의 인간 인터페론 알파리사 키트 (#AL264F)를 사용하였다. 항-IFNα 수용자 비드 (최종 5 μg/ml) 및 비오티닐화 항체 항-IFNα (최종 0.5 nM)를 함유하는 항체 믹스를 새로이 제조하고, 384-웰 옵티플레이츠(Optiplates)™ (#6007299; 퍼킨엘머) 내로 분배하였다 (5 μl). 공지된 IFNα 표준물 (인간 IFNα B (2b))의 희석물을 제조하고, 세포 상청액 (5 μl)과 함께 상기 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 간략하게 원심분리하고 (200g로 펄스), 접착성 밀봉 필름으로 덮고, 와동시키고, 암실에서 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 스트렙타비딘-코팅된 공여자 비드 (최종 20 μg/ml)를 제조하고, 어두운 조명의 구역에서 (광 민감성 믹스) 각 웰 (5 μl)에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 인큐베이션하였다 (플레이트는 원심분리되거나 또는 덮이지 않아야 함). 인큐베이션 후에, 알파 옵션이 구비된 엔비전(EnVision)™ 다중플레이트 판독기를 기기 자체의 "알파스크린 표준 설정" (예를 들어, 총 측정 시간: 550 ms, 레이저 680 nm 여기 시간: 180 ms, 거울: D640 as, 방출 필터: M570w, 중심 파장 570 nm, 대역폭 100 nm, 투과율 75%)으로 사용하여 플레이트를 판독하였다. IFNα 수준의 분석 및 정량화를 위해 데이터를 수집하였다.
2.4.6 데이터 평가 및 분석
XLfit 애드-인 (IDBS; 버전 4.3.2)을 포함하는 엑셀 XLfit 4.0 (마이크로소프트(Microsoft))을 사용하여 데이터를 분석하였다. 인간 IFNα B (2b)를 사용한 표준 곡선에 대한 외삽에 따라 특정한 IFNα 농도를 결정하였다. 실험 데이터에 대한 곡선의 피팅 후 비선형 회귀에 의해 화합물의 개별 IC50 값을 결정하였다.
생물학적 데이터
효소적 검정
Figure 112014064974414-pct00455
Figure 112014064974414-pct00456
Figure 112014064974414-pct00457
Figure 112014064974414-pct00458
Figure 112014064974414-pct00459
Figure 112014064974414-pct00460
Figure 112014064974414-pct00461
세포적 검정
Rat1-myr-HA-p110 델타 세포에서의 PI3K 델타 억제
Figure 112014064974414-pct00462
Figure 112014064974414-pct00463
뮤린 비장세포에서의 TLR9-유도된 시토카인 생산의 억제
Figure 112014064974414-pct00464
인간 PBMC 및 pDC에서의 TLR9-유도된 시토카인 생산의 억제
Figure 112014064974414-pct00465
인간 pDC에서의 피.팔시파룸 핵 추출물-유도된 시토카인 생산의 억제
Figure 112014064974414-pct00466
SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> Use of inhibitors of the activity or function of PI3K <130> PAT054921P1 <160> 21 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 1 cgagaatatg atagattata tgaagaat 28 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 2 tggtttaatg ctgttcatac gtttgtcaat 30 <210> 3 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 3 gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctac gaaggagata tacatatgcg agaatatgat 60 agattatatg aagaat 76 <210> 4 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 4 taccataatt ccaccaccac caccggaaat tccccctggt ttaatgctgt tcatacgttt 60 gtcaat 66 <210> 5 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 5 ctagtggaat gtttactacc aaatgg 26 <210> 6 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 6 gttcaatgca tgctgtttaa ttgtgt 26 <210> 7 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 7 gggggaattt ccggtggtgg tggtggaatt atggtactag tggaatgttt actaccaaat 60 gga 63 <210> 8 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 8 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc gttcaatgca tgctgtttaa ttgtgt 56 <210> 9 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 9 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 10 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 10 gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42 <210> 11 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 11 gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 12 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 12 tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42 <210> 13 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 13 actgaagcat cctcctcctc ctcctcctgg tttaatgctg ttcatacgtt tgtc 54 <210> 14 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 14 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc agatctgtag tctttccgaa ctgtgtg 57 <210> 15 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 15 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 16 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 16 tcctcctcct cctcctcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 17 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 17 atgccccctg gggtggactg ccccat 26 <210> 18 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 18 ctactgcctg ttgtctttgg acacgt 26 <210> 19 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 19 attaaaccag gaggaggagg aggaggaccc cctggggtgg actgccccat gga 53 <210> 20 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 20 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc ctgcctgttg tctttggaca cgttgt 56 <210> 21 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 21 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61

Claims (22)

  1. 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 급성 뇌 말라리아로부터 선택된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 하기 화학식 I의 테트라히드로-피리도-피리미딘 화합물, 그의 호변이성질체, N-옥시드, 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 이들의 조합으로부터 선택되는, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제를 포함하는 제약 조성물.
    <화학식 I>
    Figure 112019018641318-pct00480

    상기 식에서,
    Y는 O 또는 NR3으로부터 선택되고;
    R1은 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐,
    또는
    -C(O)-R4로부터 선택되고,
    여기서,
    R4는 C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, C1-C8-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-옥시, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-옥시, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, 히드록시, C1-C8-알콕시, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
    여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노에서의 'C1-C8-알킬'은 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
    C3-C12-시클로알킬 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬에서의 'C3-C12-시클로알킬'은 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
    '헤테로시클릴'은 옥시라닐, 아지리디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 아세티티닐, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 2,3-디히드로푸라닐, 2,5-디히드로푸라닐, 2,3-디히드로티오페닐, 1-피롤리닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페라지닐, 아제파닐, 티에파닐 또는 옥세파닐로부터 선택되고; 이들 각각은 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고;
    '헤테로시클릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 또는 S 헤테로원자 또는 둘다 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
    '헤테로아릴'은
    푸라닐, 티오페닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐 또는 1,3,5-트리아지닐로부터 선택되고; 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; '헤테로아릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 또는 S 헤테로원자 또는 둘다 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
    R2는 페닐, 나프틸, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐로부터 선택되고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고;
    R3은 H, C1-C4-알킬 또는 할로-C1-C4-알킬로부터 선택되고;
    m은 0 또는 1로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, PI3K 억제제가 하기 화학식 Id'의 화합물, 그의 호변이성질체, N-옥시드, 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 이들의 조합인 제약 조성물.
    <화학식 Id'>
    Figure 112019018641318-pct00481
  3. 제1항에 있어서, PI3K 억제제가 하기 화학식 Ie'의 화합물, 그의 호변이성질체, N-옥시드, 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 이들의 조합인 제약 조성물.
    <화학식 Ie'>
    Figure 112019018641318-pct00482
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 나프틸, 피리딜 또는 피리미디닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되는 것인
    제약 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 존재할 경우에 -C(O)-R4이고, 여기서
    R4가 헤테로시클릴, C4-C8-시클로알킬 또는 헤테로아릴로부터 선택되고;
    여기서 'C4-C8-시클로알킬'이 비치환되거나 또는 플루오로, C1-C4-알킬, 히드록실, C1-C4-알콕시로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
    '헤테로시클릴'이 피롤리디닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐 또는 피페라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C4-알킬, 히드록실, C1-C4-알킬-카르보닐로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
    '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 또는 S 헤테로원자 또는 둘다 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있고;
    '헤테로아릴'이
    푸라닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 피리딜, 피라지닐로부터 선택되고; 이들 각각이 비치환되거나 또는 C1-C4-알킬, 히드록실로부터 독립적으로 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
    '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 또는 S 헤테로원자 또는 둘다 또한 다양한 산화 상태로 임의로 산화될 수 있는 것인,
    제약 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 존재할 경우에 -C(O)-R4이고,
    R4가 C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
    여기서 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노에서의 'C1-C8-알킬'이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있는 것인,
    제약 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(2,4-디메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    1-{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    {(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    2-아미노-5-{4-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-아미노-5-{4-[1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    (S)-(3-(6-(5-플루오로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(5-플루오로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (S)-2-메톡시-5-(4-(1-(2-메톡시아세틸)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-(4-(1-(2-메톡시아세틸)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
    (S)-5-(4-(1-(시클로펜탄카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴;
    5-(4-(1-(시클로펜탄카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴;
    (2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    푸란-3-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    푸란-3-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    푸란-3-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    푸란-3-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
    (3-메톡시-시클로부틸)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (3-메톡시-시클로부틸)-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    ({(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
    ({3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
    1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
    1-(4-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
    5-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
    5-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
    {3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
    {(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    {3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    {(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
    {3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(2,4-디메틸-옥사졸-5-일)-메타논;
    (4,4-디플루오로-시클로헥실)-{(S)-3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (4,4-디플루오로-시클로헥실)-{3-[6-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(2-테트라히드로-피란-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[1-(2-테트라히드로-피란-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    5-{4-[(S)-1-(2,4-디메틸-옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{4-[1-(2,4-디메틸-옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{4-[(S)-1-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{4-[1-(2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-옥사졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(5-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-이속사졸-4-일)-메타논;
    이속사졸-3-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    이속사졸-3-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    이속사졸-5-일-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    이속사졸-5-일-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(티아졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[1-(티아졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(1-메틸-1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[1-(1-메틸-1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[(S)-1-(1-메틸-1H-피라졸-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{4-[1-(1-메틸-1H-피라졸-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일}-니코티노니트릴;
    (2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-{3-[6-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (S)-(2,4-디메틸옥사졸-5-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    (2,4-디메틸옥사졸-5-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(티아졸-5-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(티아졸-5-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-피라졸-5-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-피라졸-5-일)메타논;
    4-((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
    4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-3-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-3-일)메타논;
    (S)-(1H-이미다졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    (1H-이미다졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    5-((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
    5-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피롤리딘-2-온;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피리딘-4-일)메타논;
    (S)-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    (1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1H-피라졸-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1H-피라졸-4-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(5-메틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(5-메틸-1,3,4-옥사디아졸-2-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피라진-2-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(피라진-2-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-티아졸-4-일-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-티아졸-4-일-메타논;
    {(S)-3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    (S)-(3-(6-(6-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-아미노-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)아제티딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    {(S)-3-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(2-메톡시-피리미딘-5-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    [(S)-3-(6-퀴놀린-3-일-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    [3-(6-퀴놀린-3-일-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (S)-1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸부탄-1-온;
    1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)-3,3-디메틸부탄-1-온;
    1-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    2-메톡시-5-[4-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-[4-(1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로-5H-피리도[4,3-d]피리미딘-6-일]-니코티노니트릴;
    (S)-6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
    6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
    (S)-6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리미딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
    6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-4-(1-(피리미딘-2-일)피롤리딘-3-일옥시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘;
    (S)-1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
    1-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (S)-2-메톡시-5-(4-(1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-(4-(1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일아미노)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
    (S)-1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-카르보닐)피페리딘-1-일)에타논;
    1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-카르보닐)피페리딘-1-일)에타논;
    (2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    (2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
    ((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1s,4R)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1s,4R)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
    ((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)((1r,4S)-4-메톡시시클로헥실)메타논;
    ((1s,4R)-4-히드록시시클로헥실)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    ((1s,4R)-4-히드록시시클로헥실)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    ((1r,4S)-4-히드록시시클로헥실)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    ((1r,4S)-4-히드록시시클로헥실)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-5-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
    (2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)((S)-3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    (2,2-디메틸테트라히드로-2H-피란-4-일)(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)메타논;
    (S)-1-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
    1-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)프로판-1-온;
    (S)-(3-(6-(5-클로로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(5-클로로-6-메톡시피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    (테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-{6-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일}-메타논;
    (테트라히드로-피란-4-일)-{3-{6-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일아미노)피롤리딘-1-일}-메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(4-메틸피페라진-1-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(4-메틸피페라진-1-일)메타논;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(모르폴리노)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(모르폴리노)메타논;
    (S)-(4-히드록시피페리딘-1-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    4-히드록시피페리딘-1-일)(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)메타논;
    (S)-N-(2-히드록시에틸)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미드;
    N-(2-히드록시에틸)-3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)-N-메틸피롤리딘-1-카르복스아미드;
    (S)-1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피페라진-1-일)에타논;
    1-(4-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-카르보닐)피페라진-1-일)에타논;
    (S)-2-메톡시-5-(4-(1-(모르폴린-4-카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-(4-(1-(모르폴린-4-카르보닐)피롤리딘-3-일옥시)-7,8-디히드로피리도[4,3-d]피리미딘-6(5H)-일)니코티노니트릴;
    (S)-(3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
    (3-(6-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일)(옥사졸-4-일)메타논;
    1-(4-{(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
    1-(4-{3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로-피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    {(S)-3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {3-[6-(6-메톡시-피리딘-3-일)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[4,3-d]피리미딘-4-일옥시)피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논; 및
    그의 호변이성질체, N-옥시드, 제약상 허용되는 염, 용매화물 또는 이들의 조합
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
  8. 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서, PI3K 억제제가
    a) 시트레이트, 푸마레이트 또는 나파디실레이트; 또는
    b) 포스페이트, 히드로클로라이드 또는 히푸레이트
    로부터 선택된 염 형태인 제약 조성물.
  9. 감염된 대상체의 TLR9의 기능적 억제를 통한 급성 뇌 말라리아로부터 선택된 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제, 제약상 허용되는 염 또는 용매화물과 하나 이상의 추가의 활성 성분을 포함하며, 상기 PI3K 억제제는 제1항 내지 제3항 및 제7항 중 어느 한 항에 따라 정의된 것인 조합물.
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