JPH07508267A - Ｂ型肝炎表面抗原および他の抗原からなる複合ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｂ型肝炎表面抗原および他の抗原からなる複合ワクチン本発明は、新規ワクチン 製剤、その製法および治療におけるその使用に関する。

詳細には、本発明は、Ｂ型肝炎感染を治療するためのＢ型肝炎ワクチン成分を含 有する新規複合ワクチン製剤に関する。

Ｂ型肝炎（ＨＢ）ウィルス感染は広範囲にわたる問題であるが、多人数を免疫す るために用いられるワクチンが、現在、市販されている（例えば、「エンゲリッ クス（Ｅｎｇｅｒｉｘ）　−Ｂ　（スミスクライン・ビーチャム・ピーエルノー （ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｂａｍ　ｐｉｅ）　）　ａエンゲリックスー Ｂは、遺伝子組み換え法により得られたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）をＢ型 肝炎抗原成分として含有している。

しかしながら、Ｂ型肝炎ワクチンを他のワクチンと同時投与することがしばしば 必要あるいは望ましいとされており、このことは、複数回の注射を意味する。

複数改変された抗体の注射に関連する問題としては、より複雑な投与方法および 注射体積の合計量が多いことが挙げられる。

それゆえ、他の抗原と混合されたＢ型肝炎抗原からなる混合ワクチンが必要であ る。他の抗原とは、特に、ワクチン製剤中にあって、Ａ型肝炎（Ｉイル）、ジフ テリア（Ｄ）、破傷風（Ｔ）、全細胞性百日ぜき（Ｐｗ）、無細胞性百日ぜき（ Ｐａ）、ヘモフィルス・インフルエンザｂ（Ｈｉｂ）およびポリオ（Ｐ）を予防 することのできる抗原である。

水酸化アルミニウム（ＡＨ）は、ワクチン製剤においてアジュバントとして広く 用いられている。例えば、エンゲリックスＢには水酸化アルミニウムに吸着した Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）が使用されている。本発明者らも、Ａ型肝炎ワ クチンおよびＤＴＳＤＴＰｗおよびＤＴＰａｆｉ合ワクチンにＡＨをうまく使用 した。しかしながら、ＡＨ−吸着ＨＢ　ｓ　Ａ　ｇを混合製剤において他のワク チンと混合して使用する場合、ＨＢｓＡｇに対する免疫応答の実質的減少があり 、接種後、低度あるいは不十分な血清防御しか起こらない。さらに、混合ワクチ ンのＨＢｓＡｇ成分の安定性が低い。

コリアン・チェイル・シュガー・カンパニー・リミテッド（Ｋｏｒｅａｎ　Ｃｈ ｅｉｌＳｕｇａｒ　Ｃｏ　Ｌｔｄ、　）により製造されている市販１価（ｍｏｎ ｏｖａｌｅｎｔ）ワクチン（ヘバノン（ＨＥＰＰＡＣＩＩＩＥ）　）中にＨＢｓ Ａｇを吸着したリン酸アルミニウム（ＡＰ）が使用されている。本発明者らは、 ＡＨ−吸着ＨＢｓＡｇ１価ワクチン（エンゲリックスＢ）とＡＰ−吸着１価ワク チンとの間に免疫特性の有意な相違がないことを見い出している。

欧州特許出願公開第０３３９６６７号には、水酸化アルミニウムまたはリン酸ア ルミニウムいずれかをアジュバントとして用いたＨＢｓＡｇおよびＡＰ型肝炎抗 原からなる２価ワクチンが開示されている。しかしながら、ＨＢｓＡｇからなる 多価ワクチンのアジュバントとして水酸化アルミニウムを避ける必要性はないよ うに思われる。そのうえさらに、ＨＢｓＡｇ以外の少なくとも１種の抗原が水酸 化アルミニウムに吸着しており、ＨＢｓＡｇがリン酸アルミニウムに吸着してい る２価または多価Ｂ型肝炎ワクチンの開示文書または他の文書は存在しないよう である。

実際には、ＨＢｓＡｇからなる安定かつ有効な多価（■ｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ） ワクチンの先行開示はないようである。

本発明は１の態様において、ｎの値が１またはそれ以上である、１種またはそれ 以上のアルミニウム塩からなるアジュバントと混合されたＢ型肝炎表面抗原（Ｈ ＢｓＡｇ）およびｎ個の他の抗原からなり、ＨＢｓＡｇを吸着するのに用いられ るアジュバントが水酸化アルミニウムでない混合ワクチン組成物を提供する（た だし、ｎが１である場合には、他の抗原はＡ型肝炎に対する抗原ではない）。

好ましくは、ｎは２．３．４．５または６である。

本発明の利点は、ＨＢｓＡｇの免疫原性の実質的な減少が混合ワクチン製剤にお いて起こらないことである。ワクチン製剤中においてＨＢｓＡｇ成分を吸着させ るためのＡＨの使用を避けることは、製品の安定性を著しく向上させることにも なる。本発明のさらなる利点は、多数回の注射に関連する上記問題が克服ないし は軽減され、高度に免疫原のある混合製剤が提供されることである。本発明組成 物は、特に、小児への投与に適している。

好ましくは、ＨＢｓＡｇをＡＰに吸着させる。特に、本発明者らはヒトの臨床研 究において、混合ワクチンにおいてＡＰ−吸着ＨＢｓＡｇを１種またはそれ以上 のＡＨ−吸着またはＡＰ−吸着抗原と混合した場合、免疫原性の実質的な減少が 起こらないことを見いだしている。製剤中のＡＰ−吸着ＨＢｓＡｇの安定性も、 ＡＨ−吸着ＨＢｓＡｇより高い。

したがって、さらなる態様において、ＨＢｓＡｇ以外の少なくとも１種の抗原が リン酸アルミニウムに吸着している本発明ワクチン組成物が提供される。

さらなる好ましい態様において、ＨＢｓＡｇ以外の少なくとも１種の抗原がＡＨ に吸着している。

さらなる態様において、本発明は、ＡＰに吸着したＢ型肝炎表面抗原（ＨＢ　ｓ Ａｇ）および以下のウィルスの１種またはそれ以上に対する免疫性を提供する抗 原から選択される、ＡＰまたはＡＨに吸着した抗原からなる混合ワクチンを提供 する。以下のウィルスとは、ジフテリア（Ｄ）、破傷風（Ｔ）、百日ぜき（Ｐ） 、不活性化ポリオ（ＩＰＶ）、ヘモフィルス・インフルエンザｂ（Ｈｉｂ）およ びＡ型肝炎である。

小児用ワクチンにおいては、例えばＢＳＡおよびＣ型脳膜炎に対して有効である ことが知られている抗原ならびに耳炎メディアのような他の併存しつる抗原を含 んでいてもよい。

本明細書に用いる「２価」なる語は、合計２種の抗原の混合からなるワクチンを いう。「多価」は、２種より多い種類の抗原、例えば３．４または５もしくは６ 種の抗原からなるワクチン組成物をいう。

「リン酸アルミニウム」および「水酸化アルミニウム」なる語は、ワクチンのア ジュバントとして安定なすべての形態の水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミ ニウムをいう。

例えば、リン酸アツベニウムは不溶性リン酸アルミニウム（非晶質、半結晶また は結晶）となり、所望により（しかし他の方法によっても）、可溶性アルミニウ ム塩とリン酸塩とを混合することにより製造されうる。「水酸化アルミニウム」 は、水酸化アルミニウムの不溶性沈澱（非晶質、半結晶または結晶）であり、所 望により（しかし他の方法によっても）、アルミニウム塩の溶液を中和すること により製造されうる。特別には、市販されている種々の形態の水酸化アルミニウ ムおよびリン酸アルミニウムゲルが適当である（例えば、デンマーク、ベトビー ク（Ｖｅｄｂｅａｋ）　２９５０のスーパーフォス（Ｓｕｐｅｒｆｏｓ）社によ り市販されているアルヒドロゲル（Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）　（水中３％水酸化 アルミニウム懸濁物）およびアジュー７オス（＾ｄｊｕ−ｆｏｓ）　（セイライ ン中２％リン酸アルミニウム懸濁物が挙げられる）。

本発明者らにより初めて、ＨＢｓＡｇからなる安定かつ有効な多価ワクチン組成 物を提供されうることが理解されよう。

したがって、本発明のさらなる態様において、ＨＢｓＡｇおよび少なくとも２ふ の他の抗原からなる、２種以上の疾患の予防に指向された安定かつ有効な混合ワ クチン組成物が提供される。

アジュバントの選択に関しては、ＨＢｓＡｇをＡＰに吸着させ、ＨＢｓＡｇ以外 の少なくとも１種の抗原をＡＨに吸着させた場合、優れた効果が得られる。しか しながら、他の適当なアジュバントを使用することもできる。例えば、ＨＢｓＡ ｇ以外の１種またはすべての抗原をＡＰに吸着させてもよい。

本発明による好ましい安定な混合ワクチンは、ジフテリア−破傷風−百日ぜき− Ｂ型肝炎（ＤＴＰ−ＨＢ）ジフテリア−百日ぜき−Ｂ型肝炎（ＤＴ−ＨＢ）ＤＴ Ｐ−ＩＰＶ（不活性化ポリオワクチン）−Ｂ型肝炎である。

Ｈ４ｂ成分を含有するワクチンについては、投与直前にワクチンを処方すること により、Ｈｉｂ抗原を一時的に使用してもよいことが理解されよう。このように して、本発明の範囲内の以下の混合ワクチン組成物を、例えば、製造することが できる。

以下の混合ワクチンとは、 Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎 ＤＴＰ−Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎 Ｉ　ＰＶ−ＤＴＰ−Ｈｉ　ｂ−Ｂ型肝炎である。

より詳細には、本発明の範囲内の特別なワクチンは、ジフテリア−破傷風−百日 ぜき（ＡＨまたはＡＰに吸着したＤＴＰ）−Ｂ型肝炎（ＡＰに吸着したＨＢｓＡ ｇ） ジフテリア−破傷風（ＡＰまたはＡＨに吸着したＤＴ）−Ｂ型肝炎（ＡＰに吸着 したＨＢｓＡｇ）である。

本明細書中、「安定な」なる語は、本発明ワクチンが３７℃で１週間、ＨＢｓＡ ｇ成分の免疫原性を何ら実質的に失わないことを意味する。

本明細書中、「有効な」なる語は、ヒト小児において、適切なワクチン接種計画 において１力月間隔でワクチン投与した場合、３回目の接種後１力月に後にヒト 小児において、混合ワクチン中のＨＢｓＡｇの免疫原性が少なくとも２００ｍＩ Ｕ／ｍ＋　、好ましくは３００ｍ１Ｕ／ｍｌまたはそれ以上の幾何平均の力価で あることにより特徴づけられるワクチン組成物をいう。

さらなる態様において本発明は、ＨＢｓＡｇおよびワクチンが３７℃で１週間、 ＨＢｓＡｇ成分の免疫原性を何ら実質的に失わないように選択された安定化アジ ュバントからなる多価ワクチン組成物を提供する。好ましくは、汰多価ワクチン 組成物を、さらに、ヒト小児において、適切なワクチン接種計画において１力月 間隔でワクチン投与した場合、３回目の接種後１力月に後にヒト小児において、 混合ワクチン中のＨＢｓＡｇの免疫原性が少なくとも２００ｍ１Ｕ／ｍ！、好ま しくは３００ｍ１Ｕ／ｍ＋またはそれ以上の幾何平均の力価であることにより特 徴づける。

本明細書で用いる「適当なワクチン接種計画」とは、特に小児の服用に関する当 業者に知られたワクチン投与量の経時変化をいう。例えば３．４および５力月の 計画を使用する。例えば、本発明ＤＴＰ−ＨＢｓＡｇ含有ワクチンに関して適当 である。

１の態様において、ＨＢｓＡｇを水酸化アルミニウム以外のアルミニウム塩に吸 着させることができる。多価ワクチン製剤中の他の抗原をＡＰまたはＡＨに（ま たは両方に）吸着させることができ、下記実施例に示すようにＡＨに有利に吸着 する。

有利には、本発明ワクチン製剤は百日ぜきワクチンからなる。

適当には、百日ぜき成分は、部分精製または高度に精製された抗原を含有する全 細胞性百日ぜきワクチンまたは無細胞性百日ぜきワクチンである。

上記混合物が、所望によりＡ型肝炎に対して防御的な成分、すなわちＨＡＹ抗原 を含んでいてもよい。

有利には、Ｂ型肝炎混合ワクチンは小児用ワクチンである。

抗原の製造およびアジュバントとの吸着方法は当業者によく知られている。例え ば下記参照。

Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の製造は十分に開示されている。例えば、ハー フオード（Ｈａｒｆｏｒｄ）ら（１９８３年）、ディベロップ・バイオ口・スタ ンダード（Ｄｅｖｅｌｏｐ、　Ｂｉｏｌ、　５ｔａｎｄａｒｄ）第５４巻、１２ ５頁、ブレツブ（Ｇｒｅｇｇ）ら（１９８７年）、バイオテクノロジー（Ｂｉｏ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）第５巻、４７９頁、ＥＰ−Ａ第０２２６８４６号、ＥＰ −Ａ−０２９９１０８号およびそれらの引用文献参照。

本明細補中、「Ｂ型肝炎表面抗原」またはｒＨＢｓＡｇＪは、ＨＢＶ表面抗原の 抗原性を示すすべてのＨＢｓＡｇ抗原またはそのフラグメントを意味する。所望 ならば、本明細書記載のＨＢｓＡｇが、ＨＢｓＡｇの２２６個のアミノ酸配列（ チオライス（Ｔｉｏｌｌａｉｓ）ら、ネイチャー　（Ｎａｔｕｒｅ）　、第３１ ７巻、４８９頁（１９８５年）およびその中で引用された文献参照）の他に、上 記文献およびＥＰ−Ａ第０２７８９４０号記載のブレーＳ配列の全部または一部 を含んでいてもよい。

詳細には、ＨＢｓＡｇが、ａｄ血清型のＢ型肝炎つィルス上のオーブンリーディ ングフレームに対するＨＢｓＡｇのＬ−蛋白の１７５〜４００番目の残基に連結 した１３３〜１４５番目の残基に連結した１２〜５２番目の残基からなるアミノ 酸配列よりなるポリペプチドからなっていてもよい（このポリペプチドはＬ”） と呼ばれる。ＥＰ第０４１４３７４号参照）。本発明の範囲内のＨＢｓＡｇが、 ＥＰ第０１９８４７４号（エンドトロニクス（Ｅｎｄｏｔｒｏｎｉｃｓ）　）記 載のブレＳ１−ブレ５２−ＳポリペプチドまたはＥＰ第０３０４５７８　（マコ ーミック・アント′・ジジーンズ（ｉｌｃｃｏｒ＋ｎ１ｃｋ　ａｎｄ　Ｊｏｎｅ ｓ）　）記載のアナログごときそのアナログを含んでいてもよい。本明細書記載 のＨＢｓＡｇは、例えばＷＯ第９１／１４７０３号または欧州特許出願公開第０ ５１１８５５Ａ１記載の「莢膜変異株」のような変異株、あるいは特に１４５番 目のグリツジからアルギニンへのアミノ酸置換を有するＨＢｓＡｇに関するもの でかってもよい。

通常は、ＨＢｓＡｇは粒子状であろう。該粒子が、例えばＳ蛋白のみがらなって いてもよく、あるいは例えばＬＩが上記定義のものであり、ＳがＨＢｓＡｇのＳ −蛋白を意味するような（Ｌ”、Ｓ）のごとき混成粒子であってもよい。有利に は、該粒子は酵母において発現される形態である。

本発明ワクチンに使用するのに適した抗原は、すでに市販されており、その詳細 が世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）がら 得ることができる。例えば、ＩＰＶ成分がソーク（Ｓａｌｋ）不活性化ポリオワ クチンでありでもよい。百日ぜきワクチンが、全細胞性生成物、無細胞性生成物 または組換え生成物がらなっていてもよい。特に、百日ぜき成分がＰＴ（百日ぜ き毒素）またはそのサブフラクション、ＦＨＡ　（糸状血球凝集素抗原）、凝集 原（繊毛の）および６９ｋＤａ蛋白（ペルタフチン、繊毛の凝集原でない）をは じめとする外膜蛋白であってもよい。文献、ロビンソン、エイ（Ｒｏｂｉｎｓｏ ｎ、　Ａ、　）アイアンズ、エル・アイ（Ｉｒｏｎｓ、　ＬＩ）およびアシュワ ース、エイ・イー（Ａｓｈｖｏｒｔｈ、＾、Ｅ、）、ワクチンズ（Ｖａｃｃｉｎ ｅｓ）。

第３巻、１９８５年、１１〜２２頁、およびブレナン、エイチ・ジェ−（Ｂｒｅ ｎｎａｎ、ＨｏＪ、）、リー、ニスーｚム（Ｌｉ、　Ｓ、　Ｍ、　）　、カウェ ル、ジェー・エル（Ｃｏｗｅｌｌ、　Ｊ、　Ｌ、　）、ビシエン、エム・イー（ Ｂｉｓｈｅｎ、　Ｍ、　Ｅ、　）ステイーブン、エイ・シー（Ｓｔｅｖｅｎ、Ａ Ｃ）、ノポトニー、ピー（Ｎｏｖｏｔｏｎｙ、Ｐ、）　、７ンクラーク、シー・ アール（Ｍａｎｃｌａｒｃｋ、　Ｃ。

Ｒ１）、インフエクション・アンド・イミユニティ−（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａ ｎｄ　Ｉｍｍｕｎｕｔｙ）　。

第５６巻、１９８８年、３１８９〜３１９５頁。

Ａ型肝炎に対する防御を提供する成分は、好ましくは、ＨＡＶのＨＭ−１７５株 由来の死滅弱毒化ワクチンである「ハブリックス（Ｈａｖｒｉｘ）　Ｊ　（スミ スクライン・ビーチャム・バイオロジカルズ（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃ ｈａｍ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）　）である［エフ・イー・アンドレ（Ｆ、　 Ｅ、＾ｎｄｒｅ）　、エイ・ヘプバーン（Ａ、　Ｈｅｐｂｕｒｎ）およびイー・ トン（Ｅ、Ｄ’Ｂｏｎｄｔ）　、　ｒインアクティベイティラド・キャンディデ ィト・ワクチンズ・フォー・ヘパタイタス　Ａ　（Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｃ ａｎｄｆｄａｔｅ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｆｏｒＨｅｐａｔｉｔｉｓ　Ａ）　、プ ログ・メディ”ライｏ　ｏ　（Ｐｒｏｇ、　１ｌｅｄ、　Ｖｉｒｏｌ、　）　、 第３７巻、７２〜９５頁（１９８０年）」参照。製品「ハブリックス」に関する 論文集（１９９１年）がスミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルズから出 版されている〕。

フレーミッヒ（Ｆｌｅｈ組ｇ）ら（上記引用文献５６〜７１頁）はＡ型肝炎の臨 床的様態、ウィルス学、免疫学および伝染病学について再調査を行い、このあり ふれたウィルス感染に対するワクチンの開発へのアプローチについて議論した。

本明細書中、ｒＨＡＶ抗原」は、ヒトのＨＡＶに対する抗体の中和を刺激するこ とのできるすべての抗原をいう。好ましくは、ＨＡＶ抗原は不活性化弱毒ウィル ス粒子からなっていてもよく、あるいは例えばＨＡＶキャプンドまたはＨＡＶウ ィルス蛋白であってもよい。便利には、それらを組換えＤＮＡ法により得ること ができる。

一般的には、ワクチン標品は、ボラ−（Ｖｏｌｌｅｒ）ら編、ニュー・トレンズ ・アンド・ディベＣｌツプメンッ・イン・ワクチンズ（１９７８年）（米国メリ ーランド州ボルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）のユニパーンティー・パーク・プ レス（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐａｒｋ　Ｐｒｅｓｓ）　）に記載されている。

個々のワクチン用量中の抗原量は、典型的なワクチンの有意かつ有害な副作用な しに免疫防御応答を誘導する量として選択される。一般的には、個々の用量は、 全免疫原１〜１０００μｇ、好ましくは２〜１００μｇ、より好ましくは１〜４ ０μｇＳ＆も好ましくは１〜５μｇからなると考えられる。特別なワクチンの最 適量は、対象中の抗体力価および他の応答の測定をはじめとする標準的研究によ り確認される。最初の接種コースには、ＤＴＰ免疫化に関するＷＨＯ推奨に従い １ないし２力月間隔で２または３回のワクチン投与が含まれる。

よって、本発明は、ヒト、特に小児のＢ型肝炎および他の感染の予防方法であっ て、上記本発明態様のいずれかに従って、処置が必要な対象のヒトを免疫学的に 有効量のワクチンで処置することからなる方法を提供する。

本発明のさらなる態様において、Ｂ型肝炎ウィルス感染の予防のための本発明混 合ワクチンの製造のためのＨＢｓＡｇの使用が提供される。

本発明のさらなる態様において、本発明多価ワクチンにおける安定剤として作用 させるため、および／またはＨＢｓＡｇの効力を維持するためのＡＰの使用が提 供される。

特別には、本発明は、ＨＢｓＡｇおよび少なくとも１種の他の抗原（好ましくは 少な（とも２種の他の抗原）からなり、そのことによって、ＨＢｓＡｇ成分の安 定性および／または免疫原性が、ＨＢｓＡｇ成分がＡＨに吸着されている対応す る混合ワクチンにおけるよりも高い安定な混合ワクチンを製造する目的の、リン 酸アルミニウムの使用を提供する。

より特別には、本発明は、ワクチンを３７℃で１週間（すなわち７日間）おいて もＨＢｓＡｇの免疫原性の実質的損失がない使用を提供する。

ヒト小児の適当な接種計画で１力月間隔で接種するコースの３回目の投与１力月 後の幾何平均力価（ＧＭＴ）が２００、好ましくは３００ｍ１Ｕ／ｍ＋より大き い使用が提供される。

本発明のさらなる態様において、下記実施例記載のＢ型肝炎の予防に効果的な混 合（すなわち２価（ｂｉｖａｌｅｎｔ）または多価）ワクチンの製造法が提供さ れる。

１の好ましい態様において、ＨＢｓＡｇ以外の抗原をすべてＡＨに吸着させる。

例えば、非常に効果的なりＴＰａ−Ｂ型肝炎ワクチンをこのようにして製造する ことができる。

一般的には、本発明のいかなる態様の混合ワクチン組成物も以下のごと（製造す ることができる。必要なりＴ、ＤＴＰｗ、ＤＴＰａＳＨＡまたは他の成分を適当 なアジュバント、特にＡＨまたはＡＰに吸着させる。ＨＢｓＡｇを、上記から選 択される適当な安定化アジュバント、特別にはＡＨ基以外アルミニウム塩上に吸 着させる。好ましくは、ＨＢｓＡｇをＡＰ上に吸着させる。それぞれの成分の吸 着を完全かつ安定にするための時間経過後、別の成分を適当な条件下で混合する 。

吸着済みのＨＢｓＡｇ成分を添加する前に、ある種の成分、例えばＤＴ、ＤＴＰ ｗおよびＤＴＰａ成分を別々に混合することができる。ＨＢｓＡｇおよび他のあ るいは上記抗原に対する付加的な抗原からなる多価ワクチンを同様の方法で製造 することができる。

好ましい態様において、リン酸アルミニウムー吸着ＨＢｓＡｇを１種またはそれ 以上の水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムに吸着した抗原と混合する ことからなる、本発明混合ワクチン組成物の製造法が提供される。

以下の実施例により本発明を説明する。

実施例１〜５ 製剤 本発明の特別な製剤を下記のごとく製造した。

実施例１　混合ワクチン製剤のための濃縮物としてのＡｌＰＯ４に吸着したＨＢ ｓＡｇ 等張セイライン中のアルミニウム０．０３ないし０．３ｇ（リン酸アルミニウム として）を含有するリン酸アルミニウムの懸濁液を、最終体積１０ないし１００ ｍ１中にＨＢｓＡｇ蛋白ＩＱｍｇを含有するＨＢｓＡｇ濃縮物と混合する。ｐＨ を５〜６５に合わせた後、混合物を撹拌しながら室温で１０〜２４時間置く。

ついで、所望により、防腐剤（すなわちメルチオレート（ｍｅｒｔｈｉｏｌａｔ ｅ）　、　１　：　２ｏ、ｏｏｏないし１：１０．ＯＯＯまたは２−フェノキシ エタノール、３ないし６ｍｇ／ｍｌ）を添加してもよく、ついで、等張セイライ ンで体積を５０ｍ１とする。

実施例２　ジフテリア−破傷風−Ｂ型肝炎混合ワクチン製剤ＡＩ（水酸化アルミ ニウムまたはリン酸アルミとして）０．３５ｇに吸着したジフテリアトキソイド ２５．０ＯＯＬｆおよび破傷風トキソイド１０，０ＯＯＬｆを含有する濃縮物を 、最終体積０，１５　リットルの等張セイライン中で調製し、ついで、ＤＴおよ びＤＴＰワクチンに関してＷＨＯにより示されているようにｐＨを６ないし７の 間に合わせる。この濃縮物を、実施例１のＢ型肝炎濃縮物０゜０５　１と混合す る。

この混合物の体積を等張セイラインで０．５　リットルとする。所望により防腐 剤（メルチオレート１：２０，０００ないし１　：　１０，０００または２−フ ェノキンエタノール、３ないし６ｍｇ／ｍｌ）を添加してもよい。ＤＴおよびＤ ＴＰワクチンに関してＷＨＯにより示されているように最終ｐＨを６ないし７の 間に合わせる。

このバルクワクチンの０．５ｒｎ　］用量は、活性成分として、Ｄトキソイド　 ２５Ｌｆ Ｔトキソイド：　１０Ｌｆ ＨＢｓＡｇ：　１０ｇｇ（蛋白として）を含有する。

所望により、より多量またはより少量の活性成分を使用するために方法を修正し てもよい。

実施例３　ジフテリア−破傷風−百日ぜき（全細胞性ワクチン）−Ｂ型肝炎混合 ワクチン製剤 ＡＩ（水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして）０．４５ｍｇに吸 着したジフテリアトキソイド７．５００Ｌｆ、破傷風トキソイド３．２５０Ｌｆ およびビー・ペルランス（Ｂ、　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗原１５．０００キヤパ シテイーユニツトを含有するベーリングウェルケ（Ｂｅｈｒｉｎｇｖｅｒｋｅ） から購入した濃縮物を、最終体積０．４　リットルの等張セイライン中に調製し 、ＤＴＰワクチンに関してＷＨＯにより示されているようにｐＨを６〜７に合わ せる。この濃縮物を、実施例１のＢ型肝炎濃縮物０．０５　リットルと混合する 。

この混合物の体積を等張セイラインで最終体積０．５　リットルとする。所望に より防腐剤（メルチオレート、１：２０，０００ないし１　：　１０，０００ま たは２−フェノキンエタノール、３ないし６ｍｇ／ｍｌ）を添加してもよい。Ｄ ＴおよびＤＴＰワクチンに関してＷＨＯにより示されているように最終ｐＨを６ ないし７の間に合わせる。

このバルクワクチンの０．５ｍｌ用量は、活性成分として、Ｄトキソイド・　７ ．５Ｌｆ Ｔトキソイド・　３．２５Ｌｆ Ｐｗ抗原・　１５０Ｕ ＨＢｓＡｇ：　１０ｇｇ（蛋白として）を含有する。

所望により、より多量またはより少量の活性成分を使用するために方法を修正し てもよい。

実施例４　ジフテリア−破傷風−百日ぜき（無細胞性成分）ワクチン製剤ＡＩ（ 水酸化アルミニウムおよびリン酸塩ゲルとして）Ｏ，’３５ｍｇに吸着したジフ テリアトキソイド２５．０００Ｌｆ、破傷風トキソイド１０，０ＯＯＬｆを、最 終体積０．１５　リットルの等張セイライン中に調製し、ＤＴＰワクチンに関し てＷＨＯにより示されているように最終ｐＨを６ないし７の間に合わせる。それ ぞれＡＩ（水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして）０．０５ｇと 混合された不活性化百日ぜき毒素（ＤＴＰａ）２５ｍｇ、糸状凝集素（ＦＨＡ） ２５ｍｇおよび所望により５ＱｋＤａ外膜蛋白（ベルタフチン）　８ｍｇを添加 する。ビー・ペルランス（Ｂ、　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗原ＰＴ、ＦＨＡおよび ペルタフチンを、例えば欧州特許出願第４２７４６２号、ＰＣＴ出願ＷＯ第９１ ／１２０２０号記載の方法のような当該分野で知られた方法により、あるいは生 理学的に許容されかつ有効なビー・ペルランス抗原が得られる他の方法により調 製することができる。

この混合物を等張セイラインで最終体積０５　リットルとする。所望により防腐 剤（メルチオレート１　：　２０．０００ないし１　：　１０，０００または２ −フェノキ／エタノール、３ないし５ｍｇ／ｍｌ）を添加してもよい。ＤＴおよ びＤＴＰワクチンに関してＷＨＯにより示されているように最終ｐＨを６ないし ７の間に合わせる。

このバルクワクチンのＱ、５ｍｌ用量は、活性成分として、Ｄトキソイド：　２ ５Ｌｆ Ｔトキソイド：　１０Ｌｆ ＤＴｄトキソイド・２５μｇ ＦＨＡ　トキソイド＝２５μｇ ６９ｋＤａＯＭＰ　：　Ｂｕｇ　（所望による）所望により、より多量またはよ り少量の活性成分を使用するために方法を修正してもよい。

実施例５　ジフテリア−破傷風−百日ぜき（無細胞性成分）−Ｂ型肝炎混合ワク チン製剤 実施例１で調製したＨＢｓＡｇ吸着濃縮物５０ｍ１を最終混合物にさらに添加す ること以外は実施例４の方法を適用する。

得られた混合物を等張セイラインで最終体積１５　リットルとする。所望により 防腐剤（メルチオレート、１・２０．０００ないし１：１０．ＯＯＯまたは２− フェノキンエタノール、３ないし６ｍｇ／ｍｌ）を添加してもよい。ＤＴおよび ＤＴＰワクチンに関してＷＨＯにより示されているように最終ｐＨを６ないし７ の間に合わせる。

このバルクワクチンのＱ、５ｍｌ用量は、活性成分として、Ｄトキソイド　２５ Ｌｆ Ｔトキソイド　１０Ｌｆ ＤＴｄ　ｌ−キンイド：２５μｇ ＦＨＡ）キンイド、２５μｇ ６９ｋＤａＯＭＰ　：　Ｂｕｇ　（所望による）所望により、より多量またはよ り少量の活性成分を使用するために方法を修正してもよい。

実施例６〜１０ 動物およびヒトでの研究 実施例６　Ａ型肝炎−Ｂ型肝炎混合ワクチン製剤最終体積約１２５ｍ１中、ＡＩ （水酸化アルミニウムとして）０．０２ないし０、２　ｇ、好ましくは０．０４ 〜０．１ｇに吸着した不活性化Ａ型肝炎ウィルス濃縮物（４６０，０ＯＯＥＩｉ ｓａユニツト）を、実施例１記載のリン酸アルミ二一りムに吸着したＨＢｓＡｇ ｌＯｒｎｇを含有する濃縮物５０ｍ１と混合する。

得られた混合物に等張セイラインおよびアミノ酸濃縮物（ドラバソール（Ｔｒａ ｖａｓｏｌ）　、バクスターートラベノール・インク（Ｂａｘｔｅｒ−Ｔｒａｖ ｅｎｏｌ　Ｉｎｃ）製）を添加して最終体積０５　リットル（アミノ酸１５ｇ含 有）とする。その結果ｐＨは６ないし７の間となる。

バルクワクチン１ｍｌ用量中には、活性成分として、Ａ型肝炎つィルス抗原＋　 ８ＱＱＥＩｉｓａユニットＨＢｓＡｇ：　２０１１ｇ　（蛋白） 所望により、より多量またはより少量の活性成分を使用するために方法を修正し てもよい。

結果： ＨＢｓＡｇ　（１価ワクチン）を吸着した水酸化アルミニウム（ＡＨ）とリン酸 アルミニウム（ＡＰ）とを比較する臨床的研究最初は血清反応陰性の健康な成人 ボランティアを、２０μｇのＨＢｓＡｇ蛋白を１力月間隔で３回接種して免疫化 した。２回目および３回目の接種１力月後に得た血清中の抗体レベルをオーサブ （アボット）　（Ａｕｓａｂ（Ａｂｂｏｔｔ）ｔｅｓｔ）試験を用いて測定した 。バックグラウンドよりも有意に高い力価を有する対象について応答があるもの とした。力価をミリＩＵ／ｍｌで表した。

結果をミリＩＵ／ｍｌで表した幾何平均（ＧＭＴ）として示す。

実施例７ マウス免疫原性試験およびアジュバントとしての水酸化アルミニウム（ＨＡ）ま たはリン酸アルミニウム（ＡＰ）を伴ったＨＢｓＡｇからなる混合ワクチンに関 する加速安定性試験の結果 １０匹のＯＦＩマウスの群を、皮下注射により、２．５μｇのＨＢｓＡｇ　（単 一成分または混合）で２回（０回目、１４日目）免疫化した。２１日目の血液を 抜き取り、オーサブ（アボット）試験を用いて抗−ＨＢｓＡｇ力価を測定した。

抗体力価をミリＩＵ／ｍｌとして計算した。バックグラウンドよりも有意に高い 力価を有する動物について応答があるものとした。また結果を幾何平均（ＧＭＴ ）で計算した。

ＤＴ−ＨＢ、ＤＴＰｗ−ＨＢＳＤＴＰａ−ＨＢの結果により、ＨＢｓＡｇを吸着 したＡＰが、応答を示した動物およびＧＭＴの両方においてＨＢｓＡｇを吸着し たＡＨよりも良好な結果を示した。ＨＢｓＡｇを吸着したＡＰに対する応答は、 １価のＨＢｓＡｇ投与により得られる応答と比肩しうるものであった。

ｎｄ　試験せず 実施例８ サルにおけるＤＴＰｗと混合したＨＢｓＡｇの免疫原性水酸化アルミニウム（Ａ 　Ｈ）およびリン酸アルミニウム（Ａ　Ｐ）吸着抗原についての結果 セルコピテヌス・エチオブス（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｎｕｓ　ａｅｔｈｉｏｐｓ ）のサルに、０日目および３０日目に１０μｇのＨＢｓＡｇ　（単独または混合 ）を２回注射した。３０日目および５７日目の血清を取り、抗−ＨＢｓＡｇ力価 を測定（アーサブ、アボット試験）した。バックグラウンド（接種前の血清）よ りも有意に高いレベルの抗体を有する動物を応答したものと見なした。ＧＭＴを ミ！ＪＩＵ／ｍｌで計算した。

ＡＰ吸着ＨＢｓＡｇがＡＨ吸着ＨＢｓＡｇよりも良好な結果を示した。その応答 は、１価のＨＢｓＡｇ投与により得られる応答と比肩しうるものであった。

実施例９ 水酸化アルミニウム（Ａ　Ｈ）またはリン酸アルミニウム（ＡＰ）に吸着したＨ ＢｓＡｇを用いた混合ＤＴＰｗワクチンでの臨床的研究３．４および５力月齢に おいて、対象に、ＤＴＰｗおよびｌｏｕｇｆ）ＨＢｓＡｇ蛋白を含有する０、５ ｍｌ用量を３回接種した。６力月目に採血し、オーサブ試験で血清の力価を測定 した。応答した対象（血清変換）のパーセント値は、バックグラウンドよりも有 意に抗体レベルが上昇した対象数と関連する。防御のパーセント値は、力価が１ ０ミリｆＵ／ｍｌに等しいか、またはそれより高い対照数と関連する。ＧＭＴは ミリＩＵ／ｍ＋である。

ＤＴＰｗ−ＨＢに関する結果により、ＡＰ吸着ＨＢｓＡｇが、ＡＨ吸着ＨＢｓＡ ｇと比較して満足な応答を引き起こしたことが示される。血清変換速度およびＧ ＭＴ　は、１価のＨＢｓＡｇワクチン（エンゲリックスＢ）で典型的に見られる データと比肩するものであった。

実施例１０ Ａ型肝炎−Ｂ型肝炎混合ワクチンにおける水酸化アルミニウム（ＡＨ）またはリ ン酸アルミニウム（ＡＰ）に吸着したＨＢｓＡｇの免疫原性および安定性１０匹 の０Ｆ１ｖウスに、Ｏ日月および１４日目に、２．５ｕｇのＨＢｓＡｇを皮下注 射により２回投与して免疫化した。２１日目に採血し、実施例７のごとく抗−Ｈ ＢｓＡｇの力価を測定した。

ＨＡ−ＨＢ混合品の免疫原性および安定性の結果により、ＡＰ吸着ＨＢｓＡｇが より高い抗体レベルおよびより安定な形態を提供したことが示された。

実施例１１．ヒトにおけるさらなる臨床結果コ　小児におけるＤＴＰｗ−Ｂ型肝 炎ワクチンの免疫原性実験Ａ スロバキアでの研究　計画　３−４−５力月。ＨＢｓＡｇｌＯμｇ；ベーリング ウエルケから購入したＤＴＰｗ　（ＡＨ上のＤＴ；ＡＨとＡＰからなる混合物上 のＰｗ） 抗−Ｈｂｓ力価 この実施例および他の実施例において、ＩＩ１回目後は２回目の接種の後を意味 し、ＨＩ回目の後は３回目の接種の後を意味する。つねに計画に示された注射時 期の１力月後にＧＭＴを測定した。ＳＰは血清変換率である。

実験Ｂ ギリシャでの研究・計画　２−４−６力月（実験Ａと同じワクチン）実験Ｃ スロバキアでの実験：計画　３−４−５力月（１ノン酸アルミニウム上のＨＢｓ Ａｇ＝５μｇ：実験Ａと同様ベーリングウエルケから購入したＤＴＰ）実験Ｄ スロバキアでの研究、計画　３−４−５力月齢（リン酸アルミニウム上のＨＢｓ Ａｇ＝１０μｇ、実験Ａと同様ベーリングウエルケから購入したＤＴＰｗ）抗− ＨＢｓ力価 抗−ジフチリア抗体 抗−破傷風抗体 抗−Ｂ百日ぜき抗体 ２、ＤＴＰａの免疫原性−小児におけるＢ型肝炎ワクチン実験Ａ トルコでの研究。ＡＰ上ＨＢｓＡｇｌＯμｇ、ＡＨ上ＤＴＰ　（無細胞性）。

予備試験の結果 グループ１　（ＤＴＰａ−エンゲリックスＢ混合）キー二Ｎ＝試験対象数、Ｓ＋ ＝所定の採血時期に血清変換していた対照数；％＝血清変換率、ＧＭＴ＝血清変 換体の幾何平均抗体力価［ｌｆｌ瞭珈審報牛 、、、、、ＰＣＴ／［ミＰ９３１０１２７６フロントページの続き ＳＥ、ＳＫ、ＵＡ ュ・デュ・ランスティチュー５８９番、スミスクライン・ビーチャム・バイオロ ジカルレス（ソシエテ・アノニム）

Claims (31)

【特許請求の範囲】
1. １．ｎの値が１またはそれ以上であって、ＨＢｓＡｇを吸着すりための用いられ るアジュバントが水酸化アルミニウムでない、１種またはそれ以上のアルミニウ ム塩からなるアジュバントと混合されたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）および ｎ個の他の抗原からなる混合ワクチン組成物（ただし、ｎが１である場合には、 他の抗原はＡ型肝炎に対する抗原ではない）。
2. ２．ＨＢｓＡｇがリン酸アルミニウムに吸着している請求項１記載のワクチン組 成物。
3. ３．少なくとも１種の他の抗原がリン酸アルミニウムに吸着している請求項２記 載のワクチン組成物。
4. ４．少なくとも１種の他の抗原が水酸化アルミニウムに吸着している請求項２記 載のワクチン組成物。
5. ５．ｎが２、３、４、５または６である上記請求項のいずれかに記載のワクチン 組成物。
6. ６．水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムに吸着している抗原が、ジフ テリア（Ｄ）、破傷風（Ｔ）、百日ぜき（Ｐ）、不活性化ポリオ（ＩＰＶ）、ヘ モフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ）ｂ（Ｈｉｂ）およびＡ型肝炎（ＡＨ）に対する免疫性を提供する抗原から選択 される請求項５記載の混合ワクチン組成物。
7. ７．２種より多い疾患の予防に指向された、ＨＢｓＡｇおよび少なくとも２種の 他の抗原からなる安定かつ有効な混合ワクチン組成物。
8. ８．ＨＢｓＡｇがリン酸アルミニウムに吸着している請求項７記載のワクチン組 成物。
9. ９．ＨＢｓＡｇ以外の少なくとも１種の抗原が水酸化アルミニウムに吸着してい る請求項８記載のワクチン組成物。
10. １０．ジフテリアー破傷風−百日ぜき（ＤＴＰ）−Ｂ型肝炎；またはジフテリア −破傷風（ＤＴ）−Ｂ型肝炎；またはＤＴＰ−ＩＰＶ（不活性化ポリオワクチン ）−Ｂ型肝炎である請求項７ないし９のいずれか１つに記載の混合ワクチン組成 物。
11. １１．ワクチンの安定性が、ＨＢｓＡｇ成分の免疫性の実質的な操失なしにワク チンを３７℃で１週間保つことのできるものである上記請求項のいずれかに記載 の混合ワクチン組成物。
12. １２．適切なワクチン接種計画において１ヵ月間隔でワクチン投与コースを行っ た場合、混合ワクチン中のＨＢｓＡｇの免疫性が、ヒト・幼児における３回目の 接種の１ヵ月後において２００ミリＩＵ／ｍｌまたはそれより大きい幾何平均力 価が見い出されるものであることを特徴とする上記請求項のいずれかに記載の混 合ワクチン組成物。
13. １３．Ａ型肝炎に対して防御的である抗原成分からなる上記請求項のいずれかに 記載の混合ワクチン組成物。
14. １４．百日ぜき成分からなる上記請求項のいずれかに記載の混合ワクチン組成物 。
15. １５．百日ぜき成分が、部分精製もしくは高度に精製された抗原を含有する全細 胞性百日ぜきワクチンまたは無細胞性百日ぜきワクチンである請求項１４記載の 混合ワクチン。
16. １６．ＨＢｓＡｇおよび安定化アジュバントからなり、ＨＢｓＡｇ成分の免疫性 の実質的な損失なしにワクチンを３７℃で１週間保つことができるように安定化 アジュバントが選択される多価ワクチン組成物。
17. １７．適切なワクチン接種計画において１ヵ月間隔でワクチン投与コースを行っ た場合、混合ワクチン中のＨＢｓＡｇの免疫性が、ヒト・幼児における３回目の 接種の１ヵ月後において２００ミリＩＵ／ｍｌまたはそれより大きい幾何平均力 価を提供することをさらに特徴とする請求項１６記載の多価ワクチン組成物。
18. １８．アジュバントが１種またはそれ以上のアルミニウム塩から選択される請求 項１６または１７に記載の多価ワクチン（ただし、ＨＢｓＡｇ成分は水酸化アル ミニウムに吸着していない）。
19. １９．ＨＢｓＡｇがリン酸アルミニウムに吸着している請求項１８記載の多価ワ クチン。
20. ２０．抗原がワクチン製剤中に存在し、ＨＢｓＡｇ以外は水酸化アルミニウムに 吸着している請求項１８または１９記載の多価ワクチン。
21. ２１．ジフテリアー破傷風−百日ぜき（無細胞性）−ＨＢｓＡｇである請求項２ ０記載のワクチン製剤。
22. ２２．抗原がワクチン製剤中に存在し、ＨＢｓＡｇ以外はリン酸アルミニウムに 吸着している請求項１８または１９記載の多価ワクチン製剤。
23. ２３．ジフテリアー破暢風−百日ぜき（全細胞性）−ＨＢｓＡｇである請求項２ ２記載のワクチン組成物。
24. ２４．医薬用途の請求項１ないし２３のいずれか１つに記載の組成物。
25. ２５．Ｂ型肝炎ウイルス感染予防のための請求項１ないし２３のいずれか１つに 記載の混合ワクチンの製造におけるＨＢｓＡｇの使用。
26. ２６．ＨＢｓＡｇがＡＰに吸着している請求項１ないし２３に記載の混合ワクチ ン組成物の製造方法であって、リン酸アルミニウムに吸着しているＨＢｓＡｇを １種またはそれ以上の水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムに吸着して いる抗原と混合することを特徴とする製造方法。
27. ２７．ＨＢｓＡｇおよび少なくとも１種の他の抗原からなる安定かつ有効な混合 ワクチンを製剤することを目的とし、それによりＨＢｓＡｇ成分の安定性および ／または免疫原性がＨＢｓＡｇが水酸化アルミニウムに吸着している混合ワクチ ン中におけるよりも高いことを特徴とする、ＨＢｓＡｇを吸着するためのアジュ バントとしてのリン酸アルミニウムの使用。
28. ２８．ワクチンの安定性が、ＨＢｓＡｇ成分の免疫性の実質的な損失なしにワク チンを３７℃で１週間保つことができるものである請求項２７記載の使用。
29. ２９．混合ワクチン中のＨＢｓＡｇの免疫原性が、適切なワクチン接種計画にお いて１ヵ月間隔でワクチン投与コースを行った場合、混合ワクチン中のＨＢｓＡ ｇの免疫性が、ヒト・幼児における３回目の接種の１ヵ月後において２００ミリ ＩＵ／ｍｌまたはそれより大きい幾何平均力価を提供するものである請求項２７ 記載の使用。
30. ３０．少なくとも２種の他の抗原が混合物ワクチン中に存在する請求項２７ない し２９のいずれか１つの記載の使用。
31. ３１．ヒトにおけるＢ型肝炎を予防する方法であって、予防が必要なヒト対象を 請求項１ないし２３のいずれか１つに記載の有効量のワクチンで処理することか らなる方法。