FI64139B - Polypeptid med inverkan pao djurens fortplantning - Google Patents
Polypeptid med inverkan pao djurens fortplantning Download PDFInfo
- Publication number
- FI64139B FI64139B FI771480A FI771480A FI64139B FI 64139 B FI64139 B FI 64139B FI 771480 A FI771480 A FI 771480A FI 771480 A FI771480 A FI 771480A FI 64139 B FI64139 B FI 64139B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mmol
- tyr
- methanol
- solution
- ser
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
- C07K5/06095—Arg-amino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
ESSr^l re] (ιΐ)κυυ·-υτυ5ίυ,-ΚΑ,δυ 64139 l J 1 ' utlAggningsskrift ^ ^ ~ ^ (51) Kv.lk.^Int.CI.3 C 07 C 103/52 SUOMI — FINLAND (21) P««nttlhtk*mu* — Patenunsttknlng 771^00 (22) Hakamlapllvl — Anaöknlnjadag 10.05.77 (23) Alkupllvt — Glltighttsdag 10.05.77 (41) Tullut |u1klt«ksi — Bllvlt offantllg 22.11.77
Patentti· ja rekisterihallitus (44) Nihavik..Panon j. kuui.|uik»i*un PvW._
Patent- och registerstyrelsen v Antökan utlagd och utl.»krift*n publiccrad 30.06.03 (32)(33)(31) Pyyd««y etuoikeus—Begird prloritet n. 05.76
Englanti-England(GB) 19327/76 (71) Imperial Chemical Industries PLC, Imperial Chemical House, Millbank,
London SW1P 3JF, Englanti-England(GB) (72) Anand Swaroop Dutta, Macclesfield, Cheshire, Barrington John Albert Furr, Macclesfield, Cheshire, Michael Brian Giles, Macclesfield,
Cheshire, Englanti-England(GB) (7*0 0y Kolster Ab (5*0 Eläinten lisääntymiseen vaikuttava polypeptidi - Polypeptid med inverkan pä djurens fortplantning
Keksinnön kohteena on polypeptidi, jolla on luliberiiniagonisti-sia ominaisuuksia. Luliberiini on kansainvälisesti hyväksytty LH-RF:n (luteinizing hormone releasing factor) triviaalinimi (J.Biol.Chern. , 1975, 250, 3215).
On tunnettua (Dutta, Furr, Giles ja Morley, Clinical Endocrinology, 1976, 5, Supplement, 291s-298s), että substituoimalla luliberiini 06-atsa-aminohapoilla 6- tai 10-asemassa saadaan yhdisteitä, joiden vaikutus keltarauhasmuodostusta ohjaavan hormonin (LH) erittymiseen aivolisäkkeestä on heikompi kuin alkuperäisellä yhdisteellä. Nyt on keksitty, että substituoimalla luliberiinin 10-asema atsaglysiinillä ja samalla 6-asema erilaisilla D- oC-aminohapoilla tai substituoimalla luliberiinin 6-asema atsaglysiinillä tai atsa-alaniinilla ja korvaamalla luliberiinin pääteasemassa oleva glysiiniamidi etyyliaminoradi-kaalilla saadaan yhdisteitä, joiden vaikutus keltarauhasmuodostusta ohjaavan hormonin erittymiseen on voimakkaampi kuin luliberiinilla. Keksinnön mukaisella polypeptidillä on kaava: 2 641 39 Π
*— Glu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F
jossa A on D-Tyr, D-Tyr(Me), D-Ser, D-SeriBu1") , D-Phe, D-Ala tai D-Trp, B on Leu tai Meleu, E on Azgly, ja F on aminoradikaali, tai A on Azgly tai Azala, B on Leu, E on suora sidos, ja F on etyyliami-noryhmä; keksintö koskee myös fysiologisesti hyväksyttäviä happoaddi-tiosuoloja.
Yllä olevassa kaavassa ja koko patenttitekstissä aminohappotähteistä käytetään niiden standardilyhennyksiä (Pure and Applied Chemistry, 1974, 40, 317-331).«^ -atsa-aminohappotähde on aminohappotähde, jossa aminohapon <*f-CH on korvattu typellä. -atsa-aminohapon lyhennys on johdettu vastaavasta aminohapon lyhennyksestä liittämällä siihen etutavu Az . Azgly tarkoittaa atsaglysiiniä ja Azala atsa-alanii-nia. Milloin määrätyn amiinihapon konfiguraatiota ei ole ilmoitettu, aminohapolla on luonnollinen L-konfiguraatio (paitsisi-atsa-amino-hapoilla, joissa ei ole asymmetriakeskusta karboksiryhmän vieressä).
Keksinnön mukaisten yhdisteiden erityisiä ryhmiä ovat seuraa- vat :
Sellaiset, joissa A on D-Tyr, D-Tyr(Me) , D-Ser, D-Ser(Bu^), D-Phe, D-Ala tai D-Trp, B on Leu tai Meleu, E on Azgly, ja F on aminoradikaali .
Sellaiset, joissa A on Azgly tai Azala, B on Leu, E on suora sido, ja F on etyyliaminoradikaali.
Sellaiset, joissa A on D-Tyr(Me), D-Ser, D-Ser(Bu^), D-Phe,D-Ala, tai D-Trp, B on Leu tai Meleu, E on Azgly, ja F on aminoradikaali.
Edullisia keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat sellaiset, joissa A on D-Tyr(Me), D-SertBu1) tai D-Phe, B on Leu tai Meleu, E on Azgly, ja F on amincryhmä.
Kolmella edullisella keksinnön yhdisteellä on seuraavat kaavat:
H
L- Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH^ Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Tyr(Me)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH^ t—"Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu1)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2
Keksinnön mukainen fysiologisesti hyväksyttävä happoadditio-suola on esimerkiksi hydrokloridi, fosfaatti, sitraatti tai ase-taatti.
Keksinnön mukainen polypeptidi voidaan valmistaa kemiallisesti analogisten yhdiste? iden valmistuksesta tunnetuilla menetelmillä, 3 64139 joista esimerkkejä ovat seuraavat valmistusmenetelmät, jolloin kaavoissa A, B, E ja F merkitsevät edellä määriteltyä: a) suojatusta polypeptidistä poistetaan yksi tai useampi tavallinen peptidisuojaryhmä, jolloin saadaan kaavan I mukainen peptidi; b) kaavan Π Π n L-Glu-OH, L— Glu-His-OH, >— Glu-His-Trp-OH , Π n 1—Glu-His-Trp-Ser-OH, 1—Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH, Π n i— Glu-His-Trp-Ser-Tyr-A-OH, 1—Glu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-OH,
Qlu -His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-OH tai Glu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-OH
mukainen yhdiste tai tällaisen sopiva aktivoitu johdannainen saatetaan reagoimaan vastaavasti kaavan H-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-Trp-Ser-Tyr- A—B-Arg-Pro-E-F, H-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F, H-A-B-Arg-Pro-E-F, Η-B-Arg-Pro-E-F, H-Arg-Pro-E-F, H-Pro-E-F tai H-Azgly-NH^ mukaisen yhdisteen tai tällaisen sopivan aktivoidun johdannaisen kanssa peptidien liittämisessä käytetyllä standardimenetelmällä, tai c) kaavan n
'—Glu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-OH II
mukaisen karboksyylihappo tai sen aktivoitu johdannainen saatetaan reagoimaan ammoniakin tai etyyliamiinin kanssa.
Menetelmässä (a) suojaryhmiä voi olla lähtöaineessa yhtä monta kuin yhdisteessä on suojausta tarvitsevia radikaaleja, joita ovat esim. kaikki yhd i.» teessä olevan vapaat OH-ryhmät; ja emäksiset NH-ryhmä t. .
Mono I ' I mässä (a) suo jaryhmä tai -ryhmät voivat olla pepl :idi- , 64139 kemian standarditeoksissa kuvattuja ryhmiä. Tällaisista teoksista voidaan mainita: M. Bodansky ja M.A. Ondetti, "Peptide Synthesis", Interscience, Mew York, 1966, luku IV; F.N. Finn ja K. Hofmann, "The Proteins", Vo 1.11, toimittanut H. Meurath ja R.L. Hill, Academic Press Inc., New York, 1976, p.106; "Amino-acids, Peptides and Proteins" (Specialist Periodical Reports), The Chemical Society, London, voi. 1-8.
Näissä kirjoissa on myös esitetty erilaisia menetelmiä näiden suoja-ryhmien poistamiseksi.
Menetelmässä (a) erityisen sopiva NH-suojaryhmä on bentsyyli-oksikarbonyyliradikaali ja erityisen sopiva OH-suojaryhmä on bentsyy-liradikaali. Kumpikin näistä ryhmistä voidaan helposti poistaa hydraa-malla, esim. käyttäen palladium-hiilikatalysaattoria.
Menetelmässä (a) erityisen sopiva NH-suojaryhmä on lisäksi t-bu-toksikarbonyyliradikaali ja erityisen sopiva OH-suojaryhmä on lisäksi t-butyyliradikaali. Kumpikin näistä ryhmistä voidaan helposti poistaa käsittelemällä hapolla, kuten kloorivetyhapolla tai trifluo-rietikkahapolla.
Menetelmässä (a) vielä eräs erityisen sopiva NH-suojaryhmä on bentsyylioksikarbonyyli- tai t-butoksikarbonyyliradikaali ja erityisen sopiva OH-suojaryhmä on t-butyyliradikaali. Nämä suojaryhmät voidaan helposti poistaa käsittelemällä HBr:llä etikkahapossa.
Menetelmässä (b) voidaan käyttää mitä tahansa peptidikemiassa käytettyä standardiliittämismenetelmää, esimerkiksi sellaisia, joita on kuvattu peptidikemian standarditeoksissa, kuten yllä mainitussa Bodansky'n ja Ondetti'n teoksessa, luku V, ja yllä mainituissa Specialist Periodical Reports of the Chemical Society, voi. 1-8.
Menetelmässä (b) sopiva liittämisreaktio on atsidiliittäminen, aktiivisen esterin liittäminen tai liittäminen käyttäen N,N'-disyklo-heksyylikarbodi-imidiä ja 1-hydroksibentsotriatsolia. Edullinen liittämisreaktio on atsidiliittäminen, ja varsinkin sellainen, jossa muodostuu His-Trp- tai Ser-Tyr-peptidisidos.
li 5 641 39
Menetelmässä (c) lähtöaineena käytettävä sopiva aktivoitu johdannainen on esimerkiksi esteri tai anhydridi. Aktivoitua johdannaista käytettäessä reaktio voidaan suorittaa saattamalla aktivoitu johdannainen kosketuksiin ammoniakin tai etyyliamiinin kanssa lai-mennusaineen tai liuottimen läsnäollessa. Niissä tapauksissa, joissa lähtöaineena on kaavan II mukainen vapaa happo, reaktio ammoniakin tai etyyliamiinin kanssa suoritetaan sopivasti käyttäen peptidiliit-tämisreaktioissa tavallisesti käytettyä reagenssia, kuten Ν,Ν'-disyk-loheksyylikarbodi-imidiä.
Valmistusmenetelmissä käytetyt lähtöaineet voidaan valmistaa tunnetuista yhdisteistä peptidien liittämisessä käytetyillä standardimenetelmillä, peptidien suojauksen standardimenetelmillä ja peptidien suojauksen poiston standardimenetelmillä, jotka kaikki ovat alan asiantuntevalle hyvin tunnettuja, ja joita on lähemmin kuvattu esimerkeissä 1-10.
Kuten yllä mainittiin, keksinnön mukaisilla yhdisteillä on luliberiiniagonistiominaisuuksia, so. niiden vaikutus on samankaltainen kuin luliberiinilla, joka on luonnollinen alanäkökukkulan (hypotalamus) erittämä hormoni, joka vaikuttaa aivolisäkkeeseen saaden sen erittämään keltarauhasmuodostusta ohjaavaa hormonia (LH) ja munarakkulaa stimuloivaa hormonia (FSH). Nämä kaksi aivolisäkehormonia säätelevät lisääntymistapahtumaa, viimeksimainitun (FSH) vaikuttaessa munasarjoihin edistäen munarakkulan kypsymistä ja edellisen (LH) saadessa aikaan munasolun irtoamisen. Kaavan I mukaisen yhdisteen vaikutus LH-eritykseen on odottamattomasti vahvempi kuin luliberiinin, ja sillä on siten käyttöä eläinten lisääntymiseen liittyvissä toimenpiteissä. Sillä on varsinkin käyttöä suurien kotieläinten siemennyksessä näiden hedelmöittymisvälivaiheen aikana ja kaikissa keinotekoisissa siemennystilanteissa munasolun irtoamisajankohdan tarkemmaksi säätämiseksi.
Keksinnön mukaisten yhdisten luliberiini-vaikutus voidaan osoittaa esimerkiksi niiden kyvyllä saada aikaan munasolun irtoaminen androgeeni-steriloiduilla, jatkuvasti kiimassa olevilla rotilla tai niiden kyvyllä saada aikaan LH- ja FSH-eritys kypsymättömien uros-rottien veriplasmaan tai hedelmöittymisvälivaiheessa olevilla tai hedelmättömillä emälampailla, jolloin LH- ja FSH-eritys mitataan kaksinkertaisella vasta-aine-radioimmuunikokeella.
6 641 39
Yllämainittu koe androgeeni-steriloiduilla rotilla suoritetaan seuraavasti:
Androgeeni-steriloiduilla naarasrotilla, joita on käsitelty 3, 4 ja 5 vrk ikäisinälOO jug:lla testosteronipropionaattia, on pysyvä kiimainen emätinlima ja lukuisia munasolun irtoamista edeltäviä munarakkuloita munasarjoissa. Antamalla luliberiiniä tai sen aktiivisia analogeja saadaan aikaan LH:n ja FSH:n vahva vaikutus munasarjoihin, mikä voidaan kokeellisesti osoittaa munasolujen esiintymisestä Fallopiaputkissa ja tuoreesta keltarauhasesta munasarjoissa .
Kaikki keksinnössä esitetyt yhdisteet ovat aktiivisempia kuin liluberiini ovulaation aikaansaamisessa jatkuvakiimaisilla rotilla, eikä niillä ole osoittautunut olevan myrkkyvaikutusta niitä annettaessa vähintään 4-kertaisena minimiaktiiviannoksena. Varsinkin keksinnön esimerkeissä 4, 6,ja 7 kuvatuilla edullisilla yhdisteillä on noin 100-kertainen aktiviteetti luliberiiniin verrattuna, eikä niillä ole saatu myrkkyvaikutusta, kun niitä on annettu 100-kertainen minimiaktiiviannos.
Tulokset nähdään taulukossa 1.
li 7 64139 W ·Η +-1 3 ί-r ¢1 o oo oo
3 ¢) C OliDOtOOOO
CO ,Q H 00 St CM t—1 CM (—I tn f—1 I—(
•η Γη αι I I I I I I I I I I
> H > -3-CMCMOOOOOOOO
•H 3 O O 00 rH tn tn •Hi—I C Γ0 I—l 1—I -< Ή *H -¾ 5 Χ·Η 3 Ö < ^ c -μ +j ft!
·'—I
.¾ -μ OlOO or- or^ oo oo oo OO O CO o r- oo oo
m Ο Γ- O CD O CD O O O O O OO O CD O O
fu iH rH i—I rH rH rH rH rH ι—( rH i—1 r—i o rH μ rH ify CD :r3 H g W 3
Ϊ2 r—I rt & CO CD COCO OO CO CO CO CO CO CO (Ό OO CO COCO COCO iO CO
w N V N. \ \ X \ \ \ \ \ \ \ X \ vN \ x ^ ^ O :rö ^ O co ro oo o co ο co o cd o co cm ,o w co ο π υ 6h * Η μ ώ |i ι il__
bO
L LO
^ tn to cm I (¾ to OUMtOCMOtOCMi—ι CQ +j LncMOLnotOLncjCMi—itncMtofr) lo to
ι -μ otnocMcotncMtncMOOtDcnCbOoouorHrHOrHO
< MO lOCMi—I ι—I O CMrH CMi—I oo oo oo oo oo oo oo I Q f. rs r #> ri fs r> r «s λ fs ^ is t\ r r* λ r r λ a r* r>
L C \ OOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
rH 2 6Q
% i ^ 2 Φ ____________________ a co rH I to to
3 6* (M XCM KCM
H EH CM O O CM CM ^CM ^CM ^M ^M ^jJM >__ΓΜ
• H
33___ 3 rH ^>·> ^ >7,
CO ι—I rH rH rH rH rH >—I r~H
,W >> 6060606060606060 J Ö . , 3 3 3 ^ 3 3 CQ 3 33333333.¾^¾
JS
/-s r\ μ» <1> 3 ω S pa 51 Ö <!·^οΛώώάώάο
•H
•5 μ U rHcMooj-tncor^oocno
01 -H rH
6 Q rH
•H C 3
ΓΛ I-J
ω w
ι______I
8 64139
•H I
CO ·Η -μ 3 U 03 3| fc
•H *t—I φ uO
> Ή > I
•H 3 rH
•H«—I G TJ
<! -5 c J
+-> O 00 Γ0
HdP O 00 00 ^ 1—^ rH m I—( :m O) +-> ε
ω M
:r0 oj <x> no
--- C\1 LO i—I
w o ad
I * i—1 P
I sf j? s!
< OH
^ I -------- 3 aa 5 < +J i --.
rd P rd
•ΓΠ >0 -P O LO
^ t-ι ω H oho I 0 0 lo o o HP CP r. r* Γ.
CU C \ o o o
0 CO < bO
I 3 1 $ -- 3 1 cd co esi
Em *H [m H
K g
Dl-- w So
I—I
o 3 «a 3
< I
•H
(Λ ua li 9 64139
Keksinnön eräänä lisäpiirteenä esitetään koostumus, joka sisältää aktiiviaineena keksinnön mukaista yhdistettä yhdessä fysiologisesti hyväksyttävän laimennus- tai kantaja-aineen kanssa.
Koostumukset voidaan yleensä valmistaa tavallisella tavalla käyttäen tavanomaisia täyteaineita. Oraalisesti annettaviksi tarkoitetut koostumukset voidaan kuitenkin sopivasti päällystää suoja-päällysteellä aktiivisen polypeptidiaineosan suojaamiseksi mahalaukun entsyymien vaikutusta vastaan.
Edullinen keksinnön mukainen koostumus on oraaliseen käyttöön sopiva yksikköannos, esim. tabletti tai kapseli, joka sisältää annosta kohti 2,5 - 500 mg, edullisesti 10 - 100 mg polypeptidiä, tai parenteraalisesti annettava valmiste, joka sisältää 5 jig - 1 mg, edullisesti 10 - 100 ^ig polypeptidiä liuoksena ml:aa kohti.
Parenteraalinen koostumus on edullisesti isotoniseen suolaliuokseen tai isotoniseen dekstroosiin valmistettu liuos, joka tarvittaessa on puskuroitu PH 5 - 9:ään.
Keksintöä valaistaan seuraavilla esimerkeillä:
Esimerkeissä R^ viittaa nousevaan ohutkerroskromatografiaan (t.l.c) piihappogeelilevyillä (Kieselgel G). Kromatografiässä käytettiin seuraavia liuotinsysteemejä: butan-l-oli/etikkahappo/vesi (4:1:5 v/v) (R^A), butan-l-oli/etikkahappo/vesi/pyridiini (15:3:12:10 v/v) (R^B), butan-2-oli/3-%:inen, w/v, ammoniumhydroksidin vesiliuos (3:1 v/v) (R^C), asetonitriili/vesi (3:1 v/v) (R^D), asetoni/kloro-formi (1:1 v/v) (R^E), kloroformi/etanoli (1:4 v/v) (R^F), syklo-heksaani/etyyliasetaatti (1:1 v/v) (R^G), sykloheksaani/etyyliase-taatti/metanoli (1:1:1 v/v) (R^H), kloroformi/metanoli/vesi (11:8:2 v/v) (R^K), kloroformi/metanoli (19:1 v/v) (R^P) ja kloroformi/me-tanoli (9:1 v/v) (R^Q). Levyt tutkittiin aina UV-valossa, ja niitä käsiteltiin fluoreskamiinilla, ninhydriinillä ja kloori-tärkkelys-jodidilla. Jollei muuta ilmoiteta, niin R^-arvo tarkoittaa, että näillä menetelmillä saatiin yksi ainoa täplä.
Kaikkien tässä kuvattujen tuotteiden happohydrolysaatit valmistettiin kuumentamalla peptidiä tai suojattua peptidiä 6-n kloori-vetyhapossa, joka sisälsi 1 % w/v fenolia, suljetussa tyhjiöputkessa 16 tuntia 100°C:ssa. Kunkin hydrolysaatin aminohappokoostumus määritettiin LoCarte-aminohappoanalysaattorilla, ja kaikissa tapauksissa se täsmäsi odotetun koostumuksen kanssa. Esimerkeissä käytetyllä ilmaisulla "jatkokäsiteltiin tavallisella tavalla" tarkoitetaan, 1» 64139 että reaktion jälkeen mahdollinen kiinteä jäännös poistettiin suodattamalla, suodos haihdutettiin kuiviin alle 40°C:n lämpötilassa, etyyliasetaattiin liuotettu jäännös pestiin 20-%:isella sitruuna-hapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja etyyliasetaatti haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin haluttu yhdiste. Esimerkit 1-10 L-pyroglutamyyli-L-histidyyli-L-tryptofyyli-L-seryyli-L-tyro-syyli-A-L-leusyyli-L-arginyyli-L-prolyyli-E-F:n synteesi Yleinen menetelmä (m) (kaaviot 1 ja 2) Jäähdytettyyn (0°C) ja sekoitettuun L-pyroglutamyyli-L-histi-diinihydratsidin (0,2 mmoolia) suspensioon dimetyyliformamidissa (0,9 ml) ja dimetyylisulfoksidissa (0,7 ml) lisättiin 5-7-n kloori-vedyn dioksaaniliuosta (0,8 mmoolia). 5 minuutin voimakkaan sekoituksen jälkeen saatiin kirkas liuos. Liuos jäähdytettiin -?0°C:een, siihen lisättiin t-butyylinitriittiä (0,22 mmoolia), ja sekoitusta jatkettiin 20 minuuttia. Sitten lämpötila alennettiin -30°C:een, ja liuos neutraloitiin lisäämällä trietyyliamiinia (0,8 mmoolia). Lisättiin jäähdytetty (-20°C) L-tryptofyyli-L-seryyli-L-tyrosyyli-A-L-leusyyli-L-arginyyli-L-propyyli-E-F-dihydrokloridin (0,1 mmoolia, saatu hydraamalla N-bentsyylioksikarbonyylijohdannainen 80-%:isessa vesi/metanoliliuoksessa (v/v), joka sisälsi 2 ekvivalenttia kloori-vetyä Pd/C-katalysaattorin, 5 % w/w, länsäollessa 16 tuntia) ja tri-etyyliamiinin (0,1 mmoolia) seos dimetyyliformamidissa (1 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin 24 tuntia 4°C:ssa. Dimetyyliformamidi haihdutettiin tyhjössä, ja jäännös kromatografoitiin Sephadex LH-20-pylväällä käyttäen eluenttina dimetyyliformamidia. Peptidihydroklori-di lisäpuhdistettiin partitiokromatografiällä Sephadex G-25:llä käyttäen liuotinsysteemiä n-butanoli/etikkahappo/vesi/butanoli (5:1:5:1 v/v).
L-pyroglutamyyli-L-histidyyli-L-tryptofyyli-L-seryyli-L-tyrosyyli-A-B-L-arginyyli-L-prolyyll-atsaglysiiniamidi Yleinen menetelmä (n) (Kaaviot 3, 4 ja 5) L-pyroglutamyyli-L-histidyyli-L-tryptofyyli-L-seriini-hydrat-sidi (0,2 mmoolia) liuotettiin dimetyyliformamidiin (4 ml) ja muutettiin atsidiksi menetelmässä (m) kuvatulla tavalla. Se liitettiin menetelmässä (m) kuvatulla tavalla L-tyrosyyli-A-B-L-arginyyli-L-prolyyli- li 64139 atsaglysiini-amidihydrokloridiin (0,15 mmoolia), joka oli valmistettu pelkistämällä katalyyttisestä N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bent-syyli-L-tyrosyyli-A-L-leusyyli(N1^ -nitro)-L-arginyyli-L-prolyyli-atcaglysiini-amidi 80-%:isessa (v/v) vesipitoisessa metanolissa 20 tuntia Pd/C-katalysaattorin (5 % w/w) läsnäollessa, ja hydrokloridi-na saatu hydrokloridi puhdistettiin yllä kuvatulla tavalla.
L-pyroglutamyyli-L-histidyyli-L-tryptofyyli-L-seryyli-L-tyro- syyli-A-B-L-arginyyli-L-prolyyli-atsaglysiini-amidln synteesi
Yleinen menetelmä (o) (kaaviot 4 ja 6)
Suojatun dekapeptidijohdannaisen (jossa on SerCBu"1·) 6-asemas-sa tai Tyr(Bu"^) 5-asemassa) (50 mg) liuos valmistettiin 90-%:iseen (v/v) trifluorietikkahapon vesiliuokseen (5 ml). Lisättiin 3 tippaa /3 -merkaptoetanolia, ja liuos sai seistä huoneen lämpötilassa 4 5 minuuttia. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös kylmäkuivattiin kerran vedestä ja 2 kertaa t-butanolissa. Saanto 90-100 %.
Taulukossa 2 on lueteltu näillä yleisillä menetelmillä valmistetut esimerkkien 1-10 yhdisteet.
Esimerkki 11
Edellä esimerkeissä 1-10 kuvatuilla analogisilla menetel-mävaiheilla valmistettiin kaavan I mukainen yhdiste, jossa A on D-Ser(Bu ), B on Leu, E on Azgly ja F on NH^· Tuotteella on samat analyyttiset tunnusmerkit kuin esimerkin 7 yhdisteellä.
Kaavio 7 kuvaa tätä valmistusta.
i2 641 39
oooot^t^LnLOLOLn^r <C CNOOPOCsICOCNCNICsIOOOO
QS oooooooooo
uO
c · 1)1000 I—lt^r^(0(0r~0 Φ ooot^oococncnooCT) ή£ S H ι-l »H O O O O O O O ω p u tn §.5 _ 21 -H ^ X 0) ΦΛΗ 00 c- oocni.3-j3-j3-c~-
rH *H *CDCT)CDOi-OCJ)CnCJ)00 00 <D rH CM
•HP ΟΟΌι—IOOOOO O
^ rH 30 s.w α tO 1h D-. 0i
dP
r>
o lOCNCnOlOlOi—I lO <_0 CO
^ CNjj-roj-r—( rH <r> cd jJ- cm CM ___ 'i g I—! d) 2 -h sesccccooc 8 8 .Ji__
LO lO
^ ^_JM CM ^ CM CXI OJ Cxi CM CM CXI
I I fM
W ΙΙγΗγΗ»—IrHf-Hr—IrH rH
I W bJlbObObötiOtiObObO
Jh p p < „ ppppppppcutu
4 S S
£---- EH /-\ +J r-r J 0) P 0) h ^rOfOojftscQ^^x: 0) rH r~) r—] ,£0 £2 '—r m H \—/ CO < W)(0<i0-H^S-iCOCU^ o. 3<QQnf0i/)OQH' 6 Λ A Λ 'Λ •rl------- :π :j -¾ r~< U) Ο Ή r j ff) _t I r> (O f- - rjf.) <7> c >
I—<JJ V) C rH
L_J ----
II
13 641 39
Yllä nainituissa menetelmissä käytetyt lähtöaineet voidaan valmistaa seuraavien kaavioiden 1 ja 2 (menetelmä (m)), kaavioiden 3, 4 ja 5 (menetelmä (n)) ja kaavioiden 4 ja 6 (menetelmä (o)) mukaan.
Näissä kaavioissa käytetään seuraavia lyhennyksiä: OCp= 2,4,5-trikloorifenyyliesteri Bzl = bentsyyli Z = bentsyylioksikarbonyyli Boc = t-butoksikarbonyyli DMF = dimetyyliformamidi
Ympyröidyt numerot viittaavat kulloinkin käytettyyn reaktio-vaiheeseen .
14 641 39 lpi in m in in in in in in
—r— *ητ* H|rH t-j»H ky» ky< WH ky» «—H
*-!·< > I 4 »1 « > i * 1-1 | 1 I I *-l—I kJ—< 1-1—1 nj c\j nj oj nj oo c\j nj c\j o c_> ο οουοοο g_g § £ I i £ s s g §
^ N1 0 CO X
© Q
OJX f\J r\J OJ .
OQOOO+ + + + |?_7~^j ^_±^|_=3^ 18 “ * © h ä ^ £ mx (?) (E)
3 O <5 S S o ^ ^ rH
a-1---------O
6 -H
il > O rt rt o v 0 o o PD CQ O Co fr rt < cc-x cc—e CC—§ CC—2 bi bO (0----- 1 I I 1 M 10 to c\j x g X < < < I© © ® 0 © 1—1 O (ifl) 1-11 1 (k\ rH I—I Γ-Η r-ι r-H o t. No '^-r' N Os/ to \n; t·] N N N N ^ fr m\| m^| m^[ ca^|c0^|a>^|___ COCOCO CO CO CO M CO X « © ΐ , ? g I rn® :s <d b C/0- ^
I—I
_ Π3
X I
©© @ I
& .s H-------s I tl M N1 M tx) N] X ΡΪ w fV ,
X «H
ω Oi £ C
m £ m -H
m O O X X -h 3-1----“ >1 I i—i
X bO
rt ® © « d—-- -i...........11 < li 641 39 . 15
rvjojojpjojojojrviojfM
E K P; ΙΠ K t?; Ph !5 Ρπ Ξ έ Λ 0 * - ,4 0-4 0 -4 ·' «*-Η fH f hO---------- N » g © © s__4_________ * n m * /a ^ y ©
f\JX OIX OJ
o o o o o + + + + + + 7Z x 7:: x X χ x^ X. X x g1 \| N_^_\_^_\_7_^^
X
o ® 3 5---------
(S3 M CO X
H J? lf „ ® (§) cö Ö 6 iä x
rH
---------- 3 x (§)©(§)
»-H ζΥ f—I rH rH rH
tO O to N to N
k no^j cn^ cn^ (S^ ca^
I? "| ^ I CN
M N) tsi M M X Q
•H
sf © J
0) JU X v-^ ä s Sd u o ö g x «-i-^^--^-- x B © © © o £--—|—^^^^——- ts3 hO NI (S3 N3
C\J
.« .«j jjj •2-----1 '1 I -r]—
X
@ © $ [3---1---- 15 CM CM CM ~ CM CM CM CM CM 64^139 t—l" 1 1 1 * 1 1-1 o g © ®
in I
a.-1------- M N x ® © PJ OJ OJ OJ , £0 § ci § § § +n: ^ £_N N x_ ο υ cc
O O
CQ CQ
s I I I I_:_zi ®__ x s| ! © © ®___ n ~ = (D © © r~i Cu r-C t—i I—( r—i
NO N N N CO
^ CQ O CQ al CQV CQ.
&_M_h... MS_is_is__
CM CM CM CSJ CM X
CO
CM O
ϋ I I I I ^ > s* oooaxx 2
Si_I_I_I_I_I_I_ s
X
* © © g ] I_____ cm m ad ί © μ σ ο § ςΓ p ä-1—3—^^----g x
H
a @ © © £ ['3-1—^—1—1—1—1—*— 17 641 39
CM CM CM CM
X X X X
>> s X X 2;
rH
t>0 M ------ < ©
O
P. ------ PLi
(M CM
o o + + *>J__N»_^^ <
X
CM
X
cu ο» α> X
£ ss ε: x § o o o x 2: 3 ^ g> - I_______- J | : © © _ -~v o © © © © ® © <_ί I Γ© © © © o > _. ^ H H H ^ 2 £ 8 « m « ®v * S_NJ_A_^^^__ (P 1 1 ]3 N Μ M M ►£
CM
S Γ^Λ
E Z
t, S
<U---
CO
.—\
-P
3
' CQ
0) a w t,---<
fH Q
© I
w P
•H >>
X - H
Q
II < 3 r—I - - -_ 1 _ * —
Cf 18 641 39
C\J ro CM CM
K K te K
>, z 2: z z rH i bO_______ to < © o____
CC
CM CM’ O O + + s 2. cc cc 2—_\^_N.
< *-r-«
CM
a» Φ <u oj te
s s s 2: Z
3 0 0 0 0 K
<D Z
vl 4)---------
S
T X© © © © © © t j________- ^ o Q CM CM X > fÖ
t—I Q< r~I Ή f—I r—I
N O N N N N
m o en co co co s_:4 4.-n,___ CM _.
[Sj CM N3 CSJ CC
ro cc π: κλ
Ci «e. z 4) ________I _ co a u_____
H
© m •h___
X
3 rH ----- ' ‘ ' ^*———J *
Cf 19 641 39
(M OJ (M (Μ CM
K X X X X
^ z 22 x x x #H | bO.........................1 ^ I ! © o ____—------ 5-.
X
X .
O + + + 2 X X χ .
»___\ \J \_ <
X
CM
x
φ Φ Φ <D X
3 S £ s S 35 2© (D o o o o *-. x μ-) I _I ____ <L> ------ ' s ! © © © © © ©
Qj x .CO co X _____
I------ O
Q _ X > MM 0) rtf
4-) -P 4J> +5 +L +3... X
3X33 3 3 3 3 caocQCQ x 00 ® x
- N \ \ \ N N—^_I
£ I I t I x
M M M M
CM
X K'C
I z c ________________
OJ
CO
a 5-. . _—-------- E-* © ω ---------------
X
Π 20 641 39 ro ro S g >5 ^ t? _______ < ~ ----
X
C\J
Oi ω φ φ qj 0 g
g I δ B 6 i sP
a! ' ------_ x
§<M _ ro CM CM
S ' S S β + + + + +
O 2 2 g E XX 2 V
l—S). ^ ^ \ ν^_λ_λ_Λ a o cc <s a Ά----:------ .3 o
v— *H
U > °? -------- (0 Q * I—t f—f
N N
CO CQ, t--1 N l---;-- N3 M tn
.sP
u
Ci-- 00 -- a £ -:----- w H --—______
X
3 M -------------- C3 21 - 641 39
Vaihe 1 N-bentsyylioksikarbonyyli-L-proliinia (1994· g, 80 mmoolia) ja N-metyylimorfoliinia (8,8 ml, 80 mmoolia) liuotettiin kuivaan tetrahydrofuraaniin (200 ml), ja liuos jäähdytettiin -20°C:een.
Lisättiin tipoittain etyyliklooriformiaattia (7,15 ml, 76 mmoolia), ja 2 minuutin sekoituksen jälkeen jäähdytettyä (-20°C) etyyliamii-nin vesiliuosta (20 ml, 300 mmoolia), ja sekoitusta jatkettiin 18 tuntia 4°C:ssa. Reaktioseosta jatkokäsiteltiin tavallisella tavalla, ja jäännös kiteytettiin etyyliasetaatti/petrolieetteristä (kp. 60-80°C) . Saanto 12,97 g (58,7 %),sp. 107-108°C, Λ*/25 ’5-43,88° (c, 1 metanolissa), R^D 0,69, R^E 0,53, R^F 0,67, R^H 0,62, R^P 0,57, R^-Q 0,66.
Vaihe 2
Katalyyttinen pelkistys Pd/C-katalysaattorin (5 %) läsnäollessa vesipitoisessa etanolissa, jossa on 1 ekvivalentti kloorivetyä, 5 tunnin ajan huoneen lämpötilassa.
Vaihe 3 N Qi-t-butoksikarbonyyli-NOC-nitro-L-arginiinin (13,5 g, 42,3 mmoolia), L-proliini-etyyliamidihydrokloridin (7,15 g, 47 mmoolia), 1-hydroksibentsotriatsolin (11,5 g 85 mmoolia) ja trietyyliamiinin (6,58 ml, 47 mmoolia) liuos DMF:ssä jäähdytettiin 0°C:een, ja liuokseen lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (9,13 g, 44,4 mmoolia). Reaktioseosta sekoitettiin 4°C:ssa yön yli, se suodatettiin kiinteän aineksen poistamiseksi, ja suodos haihdutettiin kui-, viin tyhjössä. Jäännös jaettiin etyyliasetaatin ja veden kesken vas- tavirtajakomenetelmällä (4 siirtoa). Vesifaasit yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin ja jäännös jaettiin n-butanolin ja 5-%:isen (v/v) etikkahapon vesiliuoksen kesken vastavirtajakomenetelmällä (12 siirtoa). Yhdistetyistä n-butanolifaaseista haihduttamalla saatu raakapeptidi puhdistettiin kromatografoimalla piihappogeelipylväällä käyttäen elu-ointiin 5-%:ista (v/v) metanoli/kloroformia ja 10-%:ista (v/v) meta-noli/kloroformia. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin, ja jäännöksen vesiliuos laskettiin anioninvaihto-hartsipylvään (AG 1-X2) lävitse n -t-butoksikarbonyyli-N*'* -nitro-arginiinin poistamiseksi. Pylväs pestiin sitten vedellä, ja yhdistetyt vesifaasit ja pesunesteet kylmäkuivattiin, jolloin saatiin atsapeptidi-johdannainen, saanto 16,67 g (89 %), sp. 109-111°C (hajoaa), /<£/p ~ 39,0° (c, 1 metanolissa), R^A 0,62, R^B 0,74, R^C 0,59, R^D 0,70, 22 64139
RfH 0,20, RfF 0,60, RfH 0,61, RfK 0,85, PfQ 0,121.
Vaihe 4 N-t-butoksikarbonyylijohdannainen liuotettiin etyyliasetaattiin, ja liuosta käsiteltiin 3-n HCl-etyyliasetaattiliuoksella (M· ekvivalenttia) tunnin ajan huoneen lämpötilassa.
Vaihe 5 (R=H) t-butoksikarbonyylihydratsid.i n (2,90 g, 22 mmoolia) ja tiheni syylioksikarbonyy li-0-bent syy li-L-tyros iini-2 , 4-, 5-trikloorifenyy-liesterin (11,71 g, 20 mmoolia) liuosta dimetyyliformamidissa (40 ml) pidettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla, ja jäännös kiteyte :tiin eetteri/petrolieette-ristä (kp. 60-80°C), jolloin suojattu hydratsidi saatiin valkeana jauheena, 3,46 g (67 %), sp. 126-1?7°C, /oc/^ = -13,2° (c, 1 meta-nolissa) , RfD 0,82, Rf.E 0,65, RfF 0,63, RfH 0,70.
Vaihe 6 (R = H) 1-(N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosyyli)- 2-t-butoksikarbonyylihydratsidi (5,19 g, 1C mmoolia) liuotettiin etyyliasetaattiin (50 ml), ja liuosta käsiteltiin 5-n kloorivedyllä etyyliasetaatissa (8 ml, 40 mmoolia) tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Etyyliasetaatti haihdutettiin tyhjössä, jäännökseen lisättiin eetteriä, hydrokloridi suodatettiin ja kuivattiin.
Vaihe 7 (R=H). Yllä saatu hydrokloridi liuotettiin tetrahydrofuraaniin (75 ml), ja liuokseen lisättiin trietyyliamiinia (1,15 g, 8 mmoolia) ja sitten N-karbonyyli-L-leusiinimetyyliesteriä (1,36 g, 8 mmoolia).
16 tunnin seisotuksen jälkeen huoneen lämpötilassa reöktioseosta jatkokäsiteltiin tavallisella tavalla, ja jäännös kiteytettiin etyy-liasetaatti/petrolieetteristä (kp. 60-80°C), jolloin saatiin atsa-tripeptidijohdannainen, 4,57 g (77,7 %), sp. 156-157°C, /= -10,3° (c, 1 metanolissa), RfD 0,81, RfE 0,45, R^p 0,26, RfQ C,47.
Vaihe 8 N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosyylistsaglysyyli-L-l le us nnime t yy 1 i gs Lsnn (2,95 g, 5 nunoo lie) liuokseen tie t anoi isse (50 ml) lisättiin hydratsiinihydraattia (5 ml, ICO mmoolia). 2 tunnin seisotuksen jälkeen huoneen lämpötilassa hydratsidi säestettiin vedellä ja kiteytettiin uudelleen metanoli/eetteristä, jolloin saatiin 2,74 g.
23 641 39 (92,8 %), sp. 169-170°C., /^/^-9,05° (c, 1 dimetyyliformamidissa),
RfA 0,76, RfB 0,75, RfC 0,73, RfD 0,63, R F 0,60, RfH 0,55.
Vaiheet 9 ja 10 (R=H). N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosyyli-atsaglysyyli-L-leusiinihydratsidia (1,18 g, 2,0 mmoolia) liuotettiin dimetyyliformamidiin (10 ml), liuos jäähdytettiin -20°C:seen, ja siihen lisättiin 5,49-m kloorivedyn liuos dioksaanissa (1,46 ml, 8 mmoolia) ja sitten t-butyylinitriittiä (0,25 ml, 2,2 mmoolia).
5 minuutin kuluttua liuos jäähdytettiin -30°C:seen, ja siihen lisättiin jäähdytetty N1*3 -nitro-L-arginyyli-L-proliini-etyyliamidihydro-kloridin (0,836 g, 2,2 mmoolia) ja trietyyliamiinin (1,43 ml, 10,2 mmoolia) seos dimetyyliformamidissa (10 ml ). Reaktioseosta sekoitettiin tunnin ajan -10°C:ssa ja 48 tuntia 4°C:ssa. Jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla ja pentapeptidi puhdistettiin pii-happogeelipylväällä kromatografoimalla käyttäen eluointiin kloroformia ja 3 % (v/v) metanolia sisältävää kloroformia, saanto 0,695 g (38,5 %), R^ 0,71, RfB 0,72, RfC 0,84.
Vaihe 11 (R=H). Katalyyttinen pelkistys käyttäen katalysaattorina Pd/C (5 % w/w) 80-%:isessa (v/v) vesipitoisessa etikkahapossa, joka sisälsi 2 ekvivalenttia HC1.
Vaihe 12 N-bentsyylioksikarbonyyli-L-tryptofaanin (33,84 g, ICO mmoolia) ja N-metyylimorfoliinin (11,0 ml, 100 mmoolia) voimakkaasti sekoitettuun, jäähdytettyyn (~20°C) liuokseen tetrahydrofuraanissa (200 ml), lisättiin etyyliklooriformiaattia (9,0 ml, 95 mmoolia). 2 minuutin kuluttua lisättiin L-seriini-metyyliesterihydrokloridin (17,10 g 110 mmoolia) ja N-metyylimorfoliinin (12,1 ml, 110 mmoolia) esi-jäähdytetty (-20°C) liuos dimetyyliformamidissa (150 ml), ja sekoitusta jatkettiin -20°C:ssa 30 minuuttia ja huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Tavallisella tavalla suoritetulla jatkokäsittelyllä saatiin öljy. Kiteyttämällä 2 kertaa etyyliasetaatti/petrolieetteristä (kp. 60-80°C) saatiin dipeptidijohdannainen (30,53 g, 69,5 %), sp. 140,5-141°C, /Gi/p4 = -22,13° (c, 1,4 dimetyyliformamidissa).
Vaihe 13
Edellä saatu esteri (30,53 g, 69,5 mmoolia) liuotettiin meta-noliin (1 litra), ja liuokseen lisättiin 62-%:ista (w/v) hydratsiini- ., 2^ 64139 hydraatin liuosta (15 ml). 16 tunnin kuluttua hydratsidi koottiin, pestiin metanolilla ja eetterillä ja kiteytettiin kuumasta etanolista (23,18 g, 75,8 %), sp. 178-179°C, /06/^4 = -25,27° (c, 1 dimetyyli-formamidissa) , R^D 0,65, R^E 0,20, R^F 0,43, R^-H 0,50.
Vaiheet 14 ja 15 N-bentsyylioksikarbonyyli-L-tryptofyyli-L-seriinihydratsidin (0,502 g, 1,16 mmoolia) jäähdytettyyn (-20°C) ja sekoitettuun liuokseen dimetyyliformamidissa (5 ml) lisättiin 6,02-n kloorivedyn di-oksaaniliuosta (0,77 ml, 4,64 mmoolia) ja senjälkeen t-butyylinit-riittiä (0,14 ml, 1,22 mmoolia). 30 minuutin kuluttua liuos jäähdytettiin -30°C:seen ja neutraloitiin lisäämällä trietyyliamiinia (0,65 ml, 4,65 mmoolia). Lisättiin L-tyrosyyliatsaglysyyli-L-leusyyli-L-arginyyli-L-proliini-etyyliamididihydrokloridin (0,547 g, 0,77 mmoolia) ja trietyyliamiinin (0,108 ml, 0,77 mmoolia) esijäähdytetty (-20°C) seos dimetyyliformamidissa (5 ml), ja sekoitusta jatkettiin tunnin ajan -20°C:ssa ja 48 tuntia 4°C:ssa. Reaktioseos suodatettiin, ja suodos haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Raakapeptidi puhdistettiin pylväskromatografiällä piihappogeelillä käyttämällä eluoin-tiin kloroformia, 10-%:ista (v/v) metanoli/kloroformia ja kloroformi/ metanoli/vesiseosta (11:8:2 v/v), saanto 0,424 g (52,9 %), /oc/j^ = -16,84° (c, 1,5 metanolissa), R^A 0,61, R^C 0,36, R^D 0,67, R^K 0,90.
Vaihe 18 o 24 (R=Me). Samoin kuin vaihe 5, saanto 66 %, sp. 102-104 C, /oc/^ = -15,5° (c, 1 metanolissa), R^D 0,76, R^E 0,68, R^F 0,76, R^H 0,74.
Vaihe 19 (R=Me). Samoin kuin vaihe 6.
Vaihe 20 (R=Me). Samoin kuin vaihe 7, saanto 93 %, sp. 145-146°C, /oi/^s + 8,7° (c, 1,2 metanolissa), R^-A 0,88, R^B 0,88, R^C 0,83, R^D 0,80,
RfE 0,59, RfF 0,78, RfH 0,73.
Vaihe 21 N-bentsyylioksikarbonyyli-0-bentsyyli-L-tyrosyyli-atsa-ala-nyyli-L-leusiini-metyyliesterin (2,41 g, 4 mmoolia) sekoitettuun liuokseen metanolissa (36 ml) lisättiin 1-n natriumhydroksidia (12 ml, 12 mmoolia) huoneen lämpötilassa, ja sekoitusta jatkettiin 3 tuntia. Metanoli poistettiin tyhjössä, ja jäännöksen vesiliuos (40 ml) tentiin happameksi sitruunahapolla (pH 3) ja uutettiin etyyliasetaa- 11 64139 25 tiliä. Etyyliasetaatti pestiin vedellä ja kuivattiin (^£50^), liuotin poistettiin, ja jäännös liuotettiin dimetyyliformamidi/vesiseokseen (3:2 v/v, 200 ml) ja vietiin AG 1 x-2-hartsipylväälle (100 ml). Pylväs pestiin yllä mainitulla liuottimena (50 ml), ja tripeptidi eluoi-tiin 0,2-m etikkahapolla dimetyyliformamdi/vesiseoksessa (3:2 v/v). Tripeptidiä sisältävät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin tyhjössä, ja jäännöstä trituroitiin eetterin kanssa. Tuotetta saatiin 1,22 g (51,7 %), sp. 195°C (hajoaa), /(y/^4 = -25,4° (c, 1 dimetyyliformami-dissa).
Vaihe. 7 7 (R=Me). Samoin kuin vaihe 10, saanto 43 %, /(37^5 = -25,9° (c, 1 metanolissa), R^A 0,72, R^B 0,76, R^C 0,85.
Vaihe 23 (R = Me). Samoin kuin vaihe 11.
Vaihe 2 4 (R = Me). Samoin kuin vaihe 15 paitsi, että lopputuote puhdistettiin piihappogeeli-pylväskromatografoinnin jälkeen lisäksi geelisuodatuksella Sephadex LH-20:llä dimetyyliformamidissa. Saanto C O Λ l J ^ ^
bcs *, _ -24,76° (c, 0,8 metanolissa), RfA 0,58, RfC 0,42, RfD
0,65, RfK 0,95.
Vaihe 25 N-bentsyylioksikarbonyyli-L-proliinin (24,9 g, 100 mmoolia), semikarbatsidihydrokloridin (11,2 g, 100 mmoolia) ja trietyyliamiinin (14,5 ml, 100 mmoolia) sekoitettuun ja jäähdytettyyn (0°C) suspensioon dimetyyliformamidissa (200 ml) lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (20,6 g, 100 mmoolia), ja sekoitusta jatkettiin 16 tuntia 4°C:ssa. Disykloheksyyliurea poistettiin suodattamalla, ja suodos haihdutettiin pieneen tilavuuteen. Lisättiin vettä (200 ml), ja liuos uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 50 ml). Tuote saostui vesiliuoksesta noin tunnin kuluessa. Uudelleenkiteyttämällä vesipitoisesta metanolista saatiin dipeptidiamidi (16,5 g, 53,9 %), sp. 189-190°C, /θ(/^ = -43,6° (c, 1,4 dimetyyliformamidissa), R^.D 0,54, R^F 0,52, R^H 0,38, R^K 0,78.
Vaihe 26
Katalyyttinen pelkistys 80-%:isessa (v/v) vesipitoisessa dimetyyliformamidissa 5-%:isen (w/w) Pd/C-katalysaattorin avulla 6 tunnin ajan huoneen lämpötilassa HCl:n läsnäollessa (2 ekvivalenttia).
26 6 4 1 39
Vaihe 27 N-bentsyylioksikarbonyyli-L-leusiinin (8,24 g, 31 mmoolia) ja trietyyliamiinin (4,55 ml, 32,5 mmoolia) liuokseen tetrahydro-furaanissa (100 ml) lisättiin -10 - -15°C:ssa etyyliklooriformiaattia (2,83 ml, 29,5 mmoolia). Reaktioseosta sekoitettiin 3 minuuttia tässä lämpötilassa, ja sitten se kaadettiin N^-nitro-L-arginiinin (5,79g, 31 mmoolia) voimakkaasti sekoitettuun liuokseen 2-n natriumhydroksi-dissa (15,5 ml, 31 mmoolia) ja dimetyyliformamidissa (50 ml) -10°C:ssa. Sekoitusta jatkettiin -10°C:ssa. Sekoitusta jatkettiin -10°C:ssa 30 minuuttia ja sitten huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Liuottimet poistettiin tyhjössä, ja jäännös jaettiin etyyliasetaatin (50 ml) ja veden (50 ml) ja veden (50 ml) kesken. Vesifaasi erotettiin ja uutettiin vielä kahdella etyyliasetaattiannoksella. Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin vielä kerran vedellä (25 ml) ja hyljättiin.
Yhdistetyt vesifaasit tehtiin happameksi sitruunahappoliuoksella ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 100 ml). Etyyliasetaattiuutteet yhdistettiin, pestiin vedellä, kuivattiin (Ν32304) ja haihdutettiin kuiviin. Kiteyttämällä jäännös etyyliasetaatti/petrolieetteristä (kp. 60-80°C) saatiin dipeptidi (8,98 g, 62 %), sp. 150-165°C (hajoaa).
Vaihe 28 N-bentsyylioksikarbonyyli-L-leusyyli-(Nw-nitro)-L-arginiinin (9,2 g, 20 mmoolia), L-prolyyliatsaglysiiniamidihydrokloridin (4,2 g, 20 mmoolia), 1-hydroksibentsotriatsolin (5,4 g, 40 mmoolia) ja trietyyliamiinin (3 ml, 20 mmoolia) liuos dimetyyliformamidissa (200 ml) jäähdytettiin 0°C:seen, ja liuokseen lisättiin disyklohek-syylikarbodi-imidiä (8,2 g, 40 mmoolia). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Disykloheksyyliurea poistettiin suodattamalla, ja suodos haihdutettiin kuiviin. Uudelleenkiteyttämällä jäännös metanoli/eetteristä saatiin tetrapeptidijohdannainen (12,2 g, 98 %), sp. 88-90°C, /Oc/^ = -30,2° (c, 1,6 dimetyyliformamidissa),
RfD 0,57, RfF 0,40, RfH 0,26, RfK 0,63.
Vaihe 29
Hydraus 5 % risen (w/w) Pd/C-katalysaattorin avulla vesipitoisessa etanolissa kloorivedyn (2 ekvivalenttia) läsnäollessa 16 tunnin ajan.
Vaihe 30 N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosiini-2,4,5-triklo-rifenyyliesteriä (6,484 g, 11,0 mmoolia) ja D-alaniinimetyyliesteri- 2? 64139 hydrokloridia (1,396 g, 10 mmoolia) liuotettiin dimetyyliformamidiin (50 ml) ja liuokseen lisättiin trietyyliamiinia (1,4 ml, 10,0 mmoolia), ja liuosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Reak-tioseoksen jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla, ja jäännös kiteytettiin kuumasta etyyliasetaatista, jolloin saatiin 3,782 g, 77,2 % suojattua dipeptidimetyyliesteriä, sp. 163°C, = -12,84° (c, 1,1 dimetyyliformamidissa).
Vaihe 31 N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosyyli-D-alanii-nimetyyliesteriä (3,453 g, 7,0 mmoolia) liuotettiin lämpimään metanoliin (400 ml), ja liuosta käsiteltiin 62 %:isella (w/v) hydrat-siinihydraatilla (10 ml, 120 mmoolia), ja seos jätettiin yöksi 25°C: seen. Hydratsidi suodatettiin, pestiin metanolilla ja eetterillä ja kiteytettiin 2 kertaa kiehuvasta metanolista, saanto 3,068 g, 89,2 %, sp. 217°C, AV/^4 -20,44° (c, 1,1 dimetyyliformamidissa) R^A 0,73 RfB 0,75, RfC 0,67, RfD 0,70, RfE 0,50, RfF 0,54, RfH 0,67, RfK 0,85, RfQ 0,25.
Vaiheet 32 ja 33 Jäähdytettyyn (-20°C) ja sekoitettuun N-bentsyylioksikar-bonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosyyli-D-alaniinihydratsidin (1,18 g, 2,4 mmoolia) liuokseen lisättiin 6,02-m kloorivetyliuos dioksaanissa (1,6 ml, 9,6 mmoolia) ja sitten t-butyylinitriittiä (0,29 ml, 2,52 mmoolia). 15 minuutin kuluttua lisättiin esijäähdytetty (-20°C) L-leusyyli-L-arginyyli-L-prolyyliatsaglysiiniamididihydrokloridin (1,03 g, 2,0 mmoolia) ja trietyyliamiinin (1,62 ml, 11,6 mmoolia) liuos dimetyyliformamidissa (15 mml/. Sekoitusta jatkettiin 4°C:ssa 24 tuntia. Trietyyliamiinihydrokloridi poistettiin suodattamalla, ja suodos haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Jäännös vietiin piihappo-geelipylväälle, ja pylväs eluoitiin 5-%:isella (v/v) metanoli/kloro-formiseoksella, 10-%:isella metanoli/kloroformiseoksella ja kloro-formi/metanoli/vesiseoksella (11:8:2 v/v). Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin ja kromatografoitiin uudelleen piihappogeelipylväällä käyttäen eluointiliuottimena asetonitriili/ve-siseosta (3:1 v/v), jolloin saatiin 890 mg /<v/j^ = -45,7° (c, 1,1 metanolissa), R^A 0,54, R^B 0,69, R^C 0,41.
Vaihe 34
Samoin kuin vaihe 11.
Vaihe 35
Samoin kuin vaihe 15, saanto 43 %, /^/^ = -41,4° (c, 1,3 28 641 39 metanolissa), R^A 0,80, R^-C 0,47, R^D 0,65, R^K 0,95.
Vaihe 38
Samoin kuin vaihe 3, saanto 69 %, sp. 135°C, R^A 0,49, Rj.B 0,65, RfC 0,46, RfD 0,64, R F 0,35, RfH 0,19, RfK 0,86.
Vaihe 39
Samoin kuin vaihe 4.
Vaihe 40 (A = D-Phe). N-bentsyylioksikarbonyyli-D-fenyylialaniinin (7,41 g, 24,8 mmoolia) ja L-leusiinimetyyliesterin (3,62 g, 25 mmoo-lia) liuos etyyliasetaatissa (100 ml) jäähdytettiin 0°C:seen, ja liuokseen lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (5,15 g, 25 mmoo-lia). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli 4°C:ssa. Tavallisella jatkokäsittelyllä ja kiteyttämällä jäännös etyyliasetaatti/petrolieette-ristä (kp. 60-80°C) saatiin dipeptidi (9,1 g, 86 %), sp. 123-124°C, - “18,7° (c, 2,1 metanolissa), R^D 0,76, R^E 0,65, R^F 0,74,
RfH 0,73.
Vaihe 41 (A = D-Phe) Katalyyttinen pelkistys 5 tunnin aikana käyttäen 5 %:ista (w/w) Pd/hiiltä etanolissa, joka sisälsi 1 ekvivalentin kloorivetyä.
Vaihe 4_2 (A = D-Phe). N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosii-ni-2,4,5-trikloorifenyyliesterin (4,89 g, 8,36 mmoolia) ja D-fenyyli-alanyyli-L-leusiinimetyyliesterihydrokloridin (2,5 g, 7,6 mmoolia) sekoitettuun liuokseen dimetyyliformamidissa lisättiin trietyyliamii-nia (1,1 ml, 7,6 mmoolia), ja sekoitusta jatkettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Trietyyliamiinihydrokloridi suodatettiin, ja suodos haihdutettiin kuiviin. Uudelleenkiteytt ämällä jäännös vesipitoisesta metanolista saatiin tripeptidijohdannainen (3,6 g, 69,7 %), sp. 183-184°C, RfD 0,82, RfE 0,69, RfH 0,78, RfP 0,71, RfQ 0,82.
Vaihe 43 (A = D-Phe). Edellä saadun metyyliesterin (3,42 g, 5,04 mmoolia) ja hydratsiinihydraatin (60 mmoolia) liuosta dimetyyliformamidissa (30 ml) sekoitettiin huon-en lämpötilassa 4 tuntia, sitten liuos haihdutettiin pienempään tilavuuteen ja hydratsidi saostettiin lisäämällä vettä (500 ml). Se koottiin, pestiin vedellä metanoli/eette-rillä (1:4 v/v) ja eetterillä ja kuivattiin. Saanto 2,94 g (85,9 %), sp. 179-180°C, RfA 0,81, RfB 0,79, RfC 0,88, RfD 0,69, RfE 0,49, li 29 641 39
RfF 0,65, RfH 0,67, RfP 0,25, RfQ 0,57.
Vaiheet 44 ja 45 (A = D-Phe). N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyro-syyli-D-fenyylialanyyli-L-leusiinihydratsidin (1,86 g, 2,75 mmoolia) liuokseen dimetyyliformamidissa (5 ml) lisättiin -20°C:ssa 6,02-m kloorivetyliuos dioksaanissa (1,83 ml, 11 mmoolia) ja senjälkeen t-butyylinitriittiä (0,33 ml, 2,89 mmoolia). 2 minuutin kuluttua lisättiin esijäähdytetty (-20°C) trietyyliamiinin (1,89 ml, 13,5 mmoolia) ja NU> -nitro-L-arginyyli-L-prolyyliatsaglysiiniamidihydro-kloridin (1,02 g, 2,5 mmoolia) liuos dimetyyliformamidissa (10 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli 4°C:ssa. Jatkokäsittelemällä tavallisella tavalla saatiin heksapeptidijohdannainen, joka puhdistettiin edelleen piihappogeelillä (120 g) pylväskromatografiällä käyttämällä eluointiliuottimina 5-%:ista (v/v) metanoli/kloroformiseosta, 10-%:ista (v/v) metanoli/kloroformiseosta ja kloroformi/metanoli/vesi-seosta (11:8:2 v/v). Saanto 0.74 g (29,3 %), sp. 137-139°C, RfA 0,68, RfB 0,72, RfC 0,58, RfD 0,62, RfH 0,39, RfK 0,95.
Vaiheet 46, 47 ja 48 L-pyroglutamyyli-L-histidiinihydratsidi (10 mmoolia) muutettiin atsidiksi yleisessä menetelmässä (m) kuvatulla tavalla ja liitettiin L-tryptofyyli-L-seriinimetyyliesteriin (11 mmoolia, valmistettu hydraamalla N-bentsyylioksikarbonyylijohdannainen dimetyyliformamidissa 5-%:isen Pd/C:n, w/w, läsnäollessa reaktion tapahtuessa -10°C:ssa 30 minuutin ajan ja 4°C:ssa 24 tuntia. Trietyyliamiinihyd-rokloridi poistettiin suodattamalla, ja suodos haihdutettiin kuiviin. Raaka peptidi puhdistettiin piihappogeeliä sisältävällä pylväällä käyttäen eluointiin 10-%:ista (v/v) metanoli/kloroformiseosta, 20-%:ista (v/v) metanoli/kloroformiseosta ja kloroformi/metanoli/vesiseosta (11:8:2 v/v), saanto 70 %, sp. 142-145°C (hajoaa), R^A 0,39, R^-B 0,72, RfC 0,45, RfD 0,48, RfK 0,61.
Vaihe 49 L-pyroglutamyyli-L-histidyyli-L-tryptofyyli-L-seriinimetyyli-esteriä (5,4 mmoolia) liuotettiin dimetyyliformamidiin (70 ml) ja käsiteltiin hydratsiinihydraatilla (100 mmoolia) 4 tuntia. Dimetyy-liformamidi poistettiin tyhjössä, ja jäännöstä trituroitiin etanolissa, suodatettiin, pestiin etanolilla ja eetterillä ja kuivattiin (88,2 %), sp. 184-189°C, RfA 0,18, RfB 0,55, RfC 0,39, RfD 0,27,
RfK 0,58.
641 39 30
Vaihe 50 (A = D-Trp). N-bentsyylioksikarbonyyli-D-tryptofaanin (7,27 g, 21,5 mmoolia), leusiinimetyyliestErin (3,12 g, 21,5 mmoolia) ja 1-hydroksibentsotriatsolin (5,8 g, 4 3 mmoolia) liuokseen dimetyyli-formamidissa (50 ml) lisättiin 0°C:ssa disykloheksyylikarbodi-imi-diä (4,87 g, 23,6 mmoolia). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli, sitten sitä jatkokäsiteltiin tavallisella tavalla. Kiteyttämällä etyyliasetaatti/petrolieetteristä (kp. 60-80°C) saatiin dipeptidijohdannainen (9,55 g), jossa ohutkerroskromatografiän mukaan oli hieman epäpuhtauksia. Se puhdistettiin kromatografoimalla pii-happogeeliä (300 g) sisältävällä pylväällä käyttäen eluointiin kloroformia ja 5-%:ista (v/v) metanoli/kloroformiseosta. Saanto 9,18 g (91,7 %), sp. 151-153°C, RfA 0,84, RfB 0,80, RfC 0,86, RfD 0,78, RfE 0,61, RfF 0,68, RfH 0,73, RfP 0,55, RfQ 0,73.
Vaihe 51 (A = D-Trp). Katalyyttinen pelkistys 80-%:isessa (v/v) vesipitoisessa dimetyyliformamidissa 5-%:isen (w/w) Pd/C:n avulla 5 tunnin aikana.
Vaihe 52 (A = D-Trp). N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyro-siini-2,4,5-trikloorifenyyliesterin (11,69 g, 20 mmoolia), D-trypto-fyyli-L-leusiinimetyyliesterin (6,28 g, 19 mmoolia) liuosta dimetyyliformamidissa (100 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 60 tuntia. Reaktioseoksen jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla ja jäännös kiteytettiin etyyliasetaatti/petrolieetteristä (kp. 60-80°C), jolloin saatiin 8,52 g tripeptidijohdannaista (62,5 %), sp. 165-166°C, RfA 0,78, RfB 0,73, RfC 0,84, RfD 0,80, RfE 0,62, RfF 0,70, RfH 0,76, RfP 0,58, RfQ 0,68.
Vaihe 53 (A = D-Trp). N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyrosyyli-D-tryptofyyli-L-leusiinimetyyliesterin (7,26 g, 10,1 mmoolia) liuosta metanolin (200 ml) ja dimetyyliformamidin (50 ml) seoksessa käsiteltiin hydratsiinihydraatilla (100 mmoolia) huoneen lämpötilassa.
24 tunnin kuluttua liuos väkevöitiin (noin 30 ml:ksi) ja siihen lisättiin vettä (500 ml). Tripeptidihydratsidi koottiin, pestiin vedellä, metanoli/eetterillä (1:4 v/v) ja eetterillä ja kuivattiin, jolloin saatiin 6,86 g (94,6 %) , sp. 200-202°C, RfA 0,90, RfB 0,95, RfC 0,90 RfD 0,74, RfQ 0,59.
I! 3i 6413 9
Vaiheet 54 ja 55 (A = D-Trp). N-bentsyylioksikarbonyyli-O-bentsyyli-L-tyro-syyli-D-tryptofyyli-L-leusiinihydratsidin (1,97 g, 2,75 mmoolia) sekoitettua ja jäähdytettyä (-20°C) liuosta dimetyyliformamidissa (10 ml) käsiteltiin 6,0-m kloorivedyn dioksaaniliuoksella (1,83 ml, 11 mmoolia) ja senjälkeen t-butyylinitriitillä (0,33 ml, 2,89 mmoo-lia). 2 minuutin kuluttua lisättiin esijäähdytetty (-20°C) N^-nitro-L-arginyyli-L-propyyliatsaglysiiniamidihydrokloridin (1,02 g, 2,5 mmoolia) ja trietyyliamiinin (1,89 ml, 13,5 mmoolia) jäähdytetty (-20°C) liuos dimetyyliformamidissa (10 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli 4°C:ssa. Sen jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla, ja jäännös vietiin piihappogeeliä (230 g) sisältävälle pylväälle, joka eluoitiin kloroformilla ja 5-%:isella (v/v) metanoli/kloroformiseoksella. Saanto 0,91 g (34,H %) , sp. 139-140°C (hajoaa), RfA 0,67, RfB 0,72, RfC 0,58, RfD 0,62, RfH 0,34, RfK 0,95.
Vaihe 56 (A = D-Tyr(Me)). Z-D-Tyr(Me)-OH:n (3,17 g, 9,64 mmoolia, H-Leu-OMe.HC1:n (1,92 g, 10,6 mmoolia), 1-hydroksibentsotriatsolin (2,6 g, 19,2 mmoolia) ja trietyyliamiinin (1,6 ml, 11 mmoolia) liuos dimetyyliformamidissa (30 ml) jäähdytettiin 0°C:seen, ja siihen lisättiin N,N-disykloheksyylikarbodi-imidiä (2,29 g, 11,1 mmoolia). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli 4°C:ssa, jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla. Uudelleenkiteyttämällä kuumasta syk-loheksaanista saatiin suojattu dipeptidijohdannainen. Saanto 1,41 g (95,2 %), RfD 0,83, RfE 0,69, RfP 0,72, RfQ 0,76.
Vaihe 57 (A = D-Tyr(Me)). Katalyyttinen pelkistys 3 tunnin ajan meta-noli/dimetyyliformamidi/vesiseoksessa (8:1:1), joka sisältää 1,2 ekvivalenttia kloorivetyä. Katalysaattorina Pd/C (5 % w/w).
Vaihe 58 (A = D-Tyr(Me)). Z-Tyr(Bzl)-OCp:n (8,2 mmoolia), H-D-Tyr(Me)-Leu-OMe.HC1:n (8,2 mmoolia) ja trietyyliamiinin (8,2 mmoolia) liuosta dimetyyliformamidissa (60 ml) sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, sitten reaktioseosta jatkokäsiteltiin tavallisella tavalla. Tuote suodatettiin eetterin kanssa, pestiin eetterillä ja kuivattiin. Saanto 81,2 %, sp. 191-192°C, RfD 0,85, RfE 0,73, RfF 0,72, RfQ 0,78.
Vaihe 59 (A = D-Tyr(Me)). Z-Tyr(Bzl)-D-Tyr(Me)-Leu-OMe:n (4,59 g, 32 64139 6,4 imnoolia) liuokseen dimetyyliformamidissa (25 ml) ja metanolissa (50 ml) lisättiin hydratsiinihydraattia (12,9 mmoolia), ja reak-tioseos sai seistä huoneen lämpötilassa yön yli. Metanoli poistettiin tyhjössä, ja tuote saostettiin vedellä, koottiin, pestiin vedellä ja kuivattiin, sp. 212-213°C, RfE 0,49, RfF 0,66, RfH 0,69, RfH 0,69, RfQ 0,70.
Vaiheet 60 ja 61 (A = D-Tyr(Me)). Vaiheesta 59 saatu hydratsidi (3,54 g, 5,0 mmoolia) liuotettiin DMF:ään (10 ml), ja sekoitettu liuos jäähdytettiin -20°C:seen. Siihen lisättiin 5,92-m HC1 dioksaanissa (3,38 ml, 20 mmoolia) ja sitten t-butyylinitriittiä (0,6 ml, 5,25 mmoolia). 2 minuutin kuluttua lisättiin H-Arg(NC>2 )-Per-Azgly-NH^ .HC1:n (2,04 g, 5 mmoolia) ja trietyyliamiinin (3,55 ml, 25 mmoolia) jäähdytetty liuos DMF:ssä (10 ml), ja sekoitusta jatkettiin yön yli 4°C: ssa. Reaktioseoksen jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla, ja raakatuote puhdistettiin kromatografoimalla piihappogeeli-pylväällä käyttäen eluointiin kloroformia, 5-%:ista (v/v) metanoli/klo-roformiseosta ja 10-%:sta (v/v) metanoli/kloroformiseosta. Saanto 3,72 g (70,9 %), RfA 0,64, RfB 0,72, RfC 0,55, RfD 0,66, RfF 0,40,
RfH 0,52.
Vaihe 62 (A = D-Ser(But)). Samoin kuin vaihe 56. Tuote kiteytettiin vesipitoisesta metanolista. Saanto 90,4 %, sp. 107-108°C, R^D 0,80,
RfE 0,68, RfF 0,73, RfH 0,73, RfH 0,72, RfP 0,72, RfQ 0,74.
Vaihe 63 (A = D-Ser(Bu^)). Katalyyttinen pelkistys 5 tunnin aikana DMF/vesiseoksessa (8:2), katalysaattorina Pd/C, 5 % (w/w) .
Vaihe 64 (A = D-Ser ( Bu^" ) ) . Z-Tyr (Bzl)-OCp: n (19,17 g, 32,7 mmoolia) ja H-D— Ser(Bu1:)-Leu-OMe :n (32,7 mmoolia) liuos DMF:ssa (100 ml) jätetyin huoneen lämpötilaan 72 tunniksi. Jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla, saatu kiinteä aine pestiin eetterillä ja kuivattiin. Saanto 17,6 g (79,4 %), sp. 135-137°C, R^D 0,80, R^H 0,77,
RfQ 0,81.
Vaihe 65 (A = D-SeriBu1")). Samoin kuin vaihe 59. Uudelleenkiteytys vesipitoisesta metanolista. Saanto 56,2 %, sp. 134-136°C, R^D 0,66,
RfH 0,64, R Q 0,64.
I! 33 641 39
Vaiheet 66 ja 67 (A = D-Ser(Bu^)). Samoin kuin vaiheet 60 ja 61. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla piihappopylväällä käyttäen eluointiin kloroformia, 5-%:ista (v/v)metanoli kloroformiseosta. Saanto 38,5 %, sp. 142-145°C, RfA 0,64, R B 0,71, RfC 0,55, RfD 0,65, RfF 0,46,
RfH 0,43, RfQ 0,16.
Vaihe 68 (A = D-Tyr(Me)-OH:n (22,6 mmoolia), H-MeLeu-OMe.HBr:n (5,98 g, 24,9 mmoolia), trietyyliamiinin (3,5 ml, 24,9 mmoolia) ja 1-hydrok-sibentsotriatsolin (6,12 g, 45,2 mmoolia) jäähdytettyyn (0°C) ja sekoitettuun liuokseen DMF:ssä (50 ml) lisättiin disykloheksyyli-karbodi-imidiä (5,13 g, 24,9 mmoolia), ja sekoitusta jatkettiin yön yli 4°C:ssa. Reaktioseoksen jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla, ja tuote puhdistettiin kromatografoimalla piihap-pogeelipylväällä käyttäen eluenttina kloroformia. Saanto 55,2, öljy,
RfD 0,83, RfE 0,78, RfH 0,79, RfP 0,80, RfQ 0,79.
Vaihe 69 (A = D-Tyr(Me)). Katalyyttinen pelkistys 6 tunnin aikana meta-noli/vesiseoksessa (8:2 v/v), joka sisältää 1 ekvivalentin kloori-vetyä, katalysaattorina Pd/C, 5 % (w/w).
Vaihe 70 (A = D-Tyr(Me)). Samoin kuin vaihe 58. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla piihappogeelipylväällä käyttäen eetteriliuotintä.
Vaihe 71 (A = D-Tyr(Me)). Z-Tyr(Bzl)-D-Tyr(Me)-MeLeu-OM:n (4,85 g, 6,69 mmoolia) ja hydratsiinihydraatin (120,7 mmoolia) liuos meta-nolissa (150 ml) jätettiin huoneen lämpötilaan yön yli. Hydratsidi saostettiin lisäämällä vettä, se koottiin ja kiteytettiin metanoli/-vesiseoksesta. Saanto 91,1 %, sp. 129-131°C, R^D 0,79, R^E 0,60, R^F 0,68, RfH 0,73, RfQ 0,77.
Vaiheet 72 ja 73 (A = D-Tyr(Me). Samoin kuin vaiheet 60 ja 61. Uudelleenkitey-tys metanoli/eetteristä, saanto 23,8 %, sp. 152-154°C, R^-A 0,67, R^-B 0,68, RfC 0,58, RfD 0,59, RfH 0,50, RfK 0,94, RfQ 0,35.
Vaihe 74 Z-D-Phe-OH:n (5,99 g, 20 mmoolia) ja N-metyylimorfoliinin (2,2 ml, 20 mmoolia) jäähdytettyyn (-15°C) ja sekoitettuun liuokseen DMFrssä (60 ml) lisättiin etyyliklooriformiaattia (1,8 ml, 18 mmoolia).
64139 34 2 minuutin kuluttua lisättiin H-MeLeu-OMe.HBr:n (4,8 g, 20 mmoolia) ja trietyyliamiinin (2,8 ml, 20 mmoolia) jäähdytetty (-15°C) liuos DMFrssä (20 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia 0°C:ssa ja yön yli huoneen lämpötilassa. Jatkokäsittely suoritettiin tavallisella tavalla. Saanto 7,54 g (90 %) öljyä.
Vaihe 75
Katalyyttinen pelkistys 3 tunnin aikana metanolissa, joka sisälsi 1 ekvivalentin kloorivetyä, katalysaattorina Pd/C, 5 %, w/w.
Vaihe 76
Valmistus liittämällä Z-Tyr (Bu1")-OH (16,02 g, 43,2 mmoolia) ja H-D-Phe-MeLeu-OMe.HC1 (13,15 g, 40,0 mmoolia) yhteen samoin kuin vaiheessa 74. Tuote puhdistettiin kromatografoimalla piihappogeeli-pylväällä käyttäen eluointiin kloroformia ja 5-%:ista (v/v) metanoli/-kloroformiseosta. Saanto 60 %, öljy, RfG 0,48, R^P 0,71, RfQ 0,73.
Vaihe 77 Z-Tyr(Bu"t)-D-Phe-MeLeu-OMe :n (6,52 g, 9,76 mmoolia) ja hydrat-siinihydraatin (97,6 mmoolia) liuos metanolissa (50 ml) jätettiin yöksi huoneen lämpötilaan. Metanoli poistettiin tyhjössä, ja hydrat-sidi kiteytettiin metanoli/eetteriseoksesta, pestiin metanoli/vesi-seoksella (1:1 v/v) ja eetterillä ja kuivattiin. Saanto 5,2 g (80 %), sp. 135°C, RfD 0,75, RfE 0,69, RfF 0,66, RfH 0,79, RfQ 0,73.
Vaiheet 78 ja 79
Samoin kuin vaiheet 60 ja 61. Jatkokäsittelyssä tuote saostui etyyliasetaatista. Se suodatettiin, pestiin etyyliasetaatilla ja eetterillä ja kuivattiin. Saanto 58,5 %, sp. 145-148°C, R^D 0,72,
RfF 0,40, RfH 0,53, RfQ 0,18.
Claims (5)
1. Eläinten lisääntymiseen vaikuttava polypeptidi, tunnet-t u siitä, että sillä on kaava I: ^-“Llu-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F I jossa A on D-Tyr, D-Tyr(Me), D-Ser, D-SerCBu^), D-Phe, D-Ala tai D-Trp, B on Leu tai Meleu, E on Azgly, ja F on aminoryhmä, tai A Azgly tai Azala, B on Leu, E on suona sidos, ja F on etyyliami-noryhmä, ja sen fysiologisesti hyväksyttävät happoaddit.iosuolat.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen polypeptidi, tunnettu siitä, että se on n *— Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH^.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen polypeptidi, tunnettu siitä, että se on n 1— Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Tyr(Me)-Leu-Ang-Pro-Azgly-NH2.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen polypeptidi, tunnettu siitä, että se on Glu-His -Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bu1") -Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2 .
5. Eläimille tarkoitettu, eläinten lisääntymiseen vaikuttava koostumus, tunnettu siitä, että se sisältää patenttivaatimuksen 1 mukaista polypeptidiä yhdessä fysiologisesti hyväksyttävän laimennus- tai kantaja-aineen kanssa.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FI830601A FI75579C (fi) | 1976-05-11 | 1983-02-23 | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbar polypeptid. |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB19327/76A GB1524747A (en) | 1976-05-11 | 1976-05-11 | Polypeptide |
GB1932776 | 1976-05-11 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI771480A FI771480A (fi) | 1977-11-12 |
FI64139B true FI64139B (fi) | 1983-06-30 |
FI64139C FI64139C (fi) | 1983-10-10 |
Family
ID=10127509
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI771480A FI64139C (fi) | 1976-05-11 | 1977-05-10 | Polypeptid med inverkan pao djurens fortplantning |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4100274A (fi) |
JP (1) | JPS52136172A (fi) |
AT (2) | AT379400B (fi) |
AU (1) | AU508025B2 (fi) |
BE (1) | BE854467A (fi) |
BG (1) | BG60740B2 (fi) |
CA (1) | CA1101844A (fi) |
CH (2) | CH627151A5 (fi) |
CS (1) | CS199673B2 (fi) |
DD (1) | DD136738A5 (fi) |
DE (1) | DE2720245C2 (fi) |
DK (1) | DK149596C (fi) |
ES (1) | ES458691A1 (fi) |
FI (1) | FI64139C (fi) |
FR (1) | FR2351092A1 (fi) |
GB (1) | GB1524747A (fi) |
HU (1) | HU179990B (fi) |
IE (1) | IE44426B1 (fi) |
IL (1) | IL52014A (fi) |
NL (2) | NL191793C (fi) |
NO (2) | NO147304C (fi) |
NZ (1) | NZ183931A (fi) |
PL (2) | PL104362B1 (fi) |
SE (2) | SE437837B (fi) |
SU (1) | SU910116A3 (fi) |
YU (1) | YU40672B (fi) |
ZA (1) | ZA772433B (fi) |
Families Citing this family (136)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4234571A (en) * | 1979-06-11 | 1980-11-18 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Nonapeptide and decapeptide derivatives of luteinizing hormone releasing hormone |
DE3411224A1 (de) * | 1984-03-27 | 1985-10-10 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur racematarmen herstellung von peptidzwischenprodukten der gonadorelin- und gonadorelinanaloga-synthese und neue zwischenprodukte bei diesem verfahren |
US4666885A (en) * | 1985-02-08 | 1987-05-19 | Fernand Labrie | Combination therapy for treatment of female breast cancer |
US4760053A (en) * | 1984-08-02 | 1988-07-26 | Fernand Labrie | Combination therapy for selected sex steroid dependent cancers |
US4705778A (en) * | 1985-10-22 | 1987-11-10 | Sri International | Orally active LHRH analogs |
JPH0284272U (fi) * | 1988-12-20 | 1990-06-29 | ||
JP2672677B2 (ja) * | 1989-02-09 | 1997-11-05 | タツプ・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド | Lhrh同族体 |
US5372996A (en) * | 1989-03-10 | 1994-12-13 | Endorecherche, Inc. | Method of treatment of androgen-related diseases |
EP0462189B1 (en) * | 1989-03-10 | 1995-09-27 | Endorecherche Inc. | Combination therapy for treatment of estrogen sensitive diseases |
EP0485392B1 (en) * | 1989-07-07 | 1998-09-09 | Endorecherche Inc. | Androgen derivatives for use in the inhibition of sex steroid activity |
WO1991000733A1 (en) * | 1989-07-07 | 1991-01-24 | Endorecherche Inc. | Method of treatment of androgen-related diseases |
GB9112859D0 (en) * | 1991-06-14 | 1991-07-31 | Ici Plc | Peptide process |
WO1993023053A1 (en) * | 1992-05-21 | 1993-11-25 | Endorecherche Inc. | INHIBITORS OF TESTOSTERONE 5α-REDUCTASE ACTIVITY |
US7833543B2 (en) * | 1995-06-07 | 2010-11-16 | Durect Corporation | High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device |
US6413536B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-07-02 | Southern Biosystems, Inc. | High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device |
CA2192782C (en) | 1995-12-15 | 2008-10-14 | Nobuyuki Takechi | Production of microspheres |
CA2192773C (en) | 1995-12-15 | 2008-09-23 | Hiroaki Okada | Production of sustained-release preparation for injection |
WO1999007874A1 (fr) * | 1996-06-13 | 1999-02-18 | Itoham Foods Inc. | Procede de production de derives de lh-rh |
US20060025328A1 (en) * | 1997-05-28 | 2006-02-02 | Burns Patrick J | Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs |
US6051558A (en) * | 1997-05-28 | 2000-04-18 | Southern Biosystems, Inc. | Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs |
US6242421B1 (en) | 1997-11-06 | 2001-06-05 | Richard Lloyd Bowen | Methods for preventing and treating Alzheimer's disease |
US6833373B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-12-21 | G.D. Searle & Co. | Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia |
US6858598B1 (en) | 1998-12-23 | 2005-02-22 | G. D. Searle & Co. | Method of using a matrix metalloproteinase inhibitor and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia |
US20050020524A1 (en) * | 1999-04-15 | 2005-01-27 | Monash University | Hematopoietic stem cell gene therapy |
US20040258672A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration |
US20040265285A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-30 | Monash University | Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration |
US20040259803A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-23 | Monash University | Disease prevention by reactivation of the thymus |
US20040241842A1 (en) * | 1999-04-15 | 2004-12-02 | Monash University | Stimulation of thymus for vaccination development |
US20070274946A1 (en) * | 1999-04-15 | 2007-11-29 | Norwood Immunoloty, Ltd. | Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation |
AUPR074500A0 (en) * | 2000-10-13 | 2000-11-09 | Monash University | Treatment of t cell disorders |
ES2154590B1 (es) | 1999-05-20 | 2001-11-01 | Lipotec Sa | Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida |
AR023940A1 (es) | 2000-05-03 | 2002-09-04 | Eriochem Sa | Procedimiento para la produccion de microcapsulas de liberacion prolongada de peptidos solubles en agua |
DE10032256C2 (de) * | 2000-07-03 | 2003-06-05 | Infineon Technologies Ag | Chip-ID-Register-Anordnung |
US20060088512A1 (en) * | 2001-10-15 | 2006-04-27 | Monash University | Treatment of T cell disorders |
PT2762140T (pt) | 2001-02-19 | 2017-07-04 | Novartis Ag | Resumo |
MXPA03010401A (es) | 2001-05-16 | 2004-03-09 | Novartis Ag | Combinacion que comprende n-[5-[4- (4-metil- piperazino-metil) -benzoilamido] -2-metilfenil] -4-(3-piridil)-2 -pirimidin-amina, y un agente quimioterapeutico. |
US20060287282A1 (en) * | 2001-06-25 | 2006-12-21 | Steiner Mitchell S | Compositions comprising a SARM ad GnRH agonist or a GnRH antagonist, and methods of use thereof |
US7812044B2 (en) | 2001-11-13 | 2010-10-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Anticancer agents |
GB0128510D0 (en) * | 2001-11-28 | 2002-01-23 | Novartis Ag | Organic compounds |
US20030144203A1 (en) * | 2001-12-19 | 2003-07-31 | Voyager Pharmaceutical Corporation | Methods for slowing senescence and treating and preventing diseases associated with senescence |
GB0206215D0 (en) | 2002-03-15 | 2002-05-01 | Novartis Ag | Organic compounds |
DE60324416D1 (de) | 2002-05-16 | 2008-12-11 | Novartis Ag | Verwendung von edg rezeptor bindenden wirkstoffen für die krebstherapie |
US20040001889A1 (en) | 2002-06-25 | 2004-01-01 | Guohua Chen | Short duration depot formulations |
SI2218448T1 (sl) * | 2002-12-13 | 2016-01-29 | Durect Corporation | Sistem za oralno dajanje zdravila, ki obsega tekoči nosilec materialov z visoko viskoznostjo |
KR101204247B1 (ko) | 2003-07-22 | 2012-11-22 | 아스텍스 테라퓨틱스 리미티드 | 3,4-이치환된 1h-피라졸 화합물 및 그의 시클린 의존성키나제 (cdk) 및 글리코겐 합성효소 키나제-3(gsk-3) 조정제로서 용도 |
GB0320806D0 (en) * | 2003-09-05 | 2003-10-08 | Astrazeneca Ab | Therapeutic treatment |
US20080279812A1 (en) * | 2003-12-05 | 2008-11-13 | Norwood Immunology, Ltd. | Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation |
EP2253614B1 (en) | 2004-04-07 | 2012-09-19 | Novartis AG | Inhibitors of IAP |
GB0512324D0 (en) | 2005-06-16 | 2005-07-27 | Novartis Ag | Organic compounds |
NZ552029A (en) * | 2004-06-25 | 2009-01-31 | Takeda Pharmaceutical | Metastin derivatives and use thereof |
ES2378671T3 (es) * | 2004-09-17 | 2012-04-16 | Durect Corporation | Composición anestésica local prolongada que contiene SAIB |
GB0425854D0 (en) * | 2004-11-25 | 2004-12-29 | Astrazeneca Ab | Therapeutic treatment |
JP5475235B2 (ja) | 2005-01-21 | 2014-04-16 | アステックス・セラピューティクス・リミテッド | 医薬化合物 |
US8404718B2 (en) | 2005-01-21 | 2013-03-26 | Astex Therapeutics Limited | Combinations of pyrazole kinase inhibitors |
AR054425A1 (es) | 2005-01-21 | 2007-06-27 | Astex Therapeutics Ltd | Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico. |
ES2336826T3 (es) * | 2005-05-03 | 2010-04-16 | Novetide, Ltd. | Procedimientos para la produccion de un peptido que presenta una amida c-terminal. |
GB0510390D0 (en) | 2005-05-20 | 2005-06-29 | Novartis Ag | Organic compounds |
US20070027105A1 (en) | 2005-07-26 | 2007-02-01 | Alza Corporation | Peroxide removal from drug delivery vehicle |
EP1996550A2 (en) | 2005-09-27 | 2008-12-03 | Novartis AG | Carboxyamine compounds and their use in the treatment of hdac dependent diseases |
GB0605120D0 (en) | 2006-03-14 | 2006-04-26 | Novartis Ag | Organic Compounds |
AU2007247112B2 (en) | 2006-05-09 | 2010-08-26 | Novartis Ag | Combination comprising an iron chelator and an anti-neoplastic agent and use thereof |
ATE502943T1 (de) | 2006-09-29 | 2011-04-15 | Novartis Ag | Pyrazolopyrimidine als pi3k-lipidkinasehemmer |
WO2008044045A1 (en) | 2006-10-12 | 2008-04-17 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
EP2073803B1 (en) | 2006-10-12 | 2018-09-19 | Astex Therapeutics Limited | Pharmaceutical combinations |
EP2117521B1 (en) | 2006-11-03 | 2012-06-27 | Durect Corporation | Transdermal delivery systems comprising bupivacaine |
MX2009008584A (es) | 2007-02-15 | 2009-08-18 | Novartis Ag | Combinacion de lbh589 con otros agentes terapeuticos para el tratamiento de cancer. |
CA2706931C (en) * | 2007-12-06 | 2015-05-12 | Durect Corporation | Oral pharmaceutical dosage forms |
US8222424B2 (en) | 2008-03-24 | 2012-07-17 | Novartis Ag | Arylsulfonamide-based matrix metalloprotease inhibitors |
EP2628726A1 (en) | 2008-03-26 | 2013-08-21 | Novartis AG | Hydroxamate-based inhibitors of deacetylases b |
US20100260844A1 (en) | 2008-11-03 | 2010-10-14 | Scicinski Jan J | Oral pharmaceutical dosage forms |
RU2519673C2 (ru) * | 2008-11-28 | 2014-06-20 | Новартис Аг | Комбинации ингибитора hsp90 |
WO2010083617A1 (en) | 2009-01-21 | 2010-07-29 | Oncalis Ag | Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors |
JP2012516345A (ja) | 2009-01-29 | 2012-07-19 | ノバルティス アーゲー | 星細胞腫治療用置換ベンゾイミダゾール |
UA105794C2 (uk) | 2009-06-26 | 2014-06-25 | Новартіс Аг | 1,3-ДИЗАМІЩЕНІ ПОХІДНІ ІМІДАЗОЛІДИН-2-ОНУ ЯК ІНГІБІТОРИ Cyp17 |
US8389526B2 (en) | 2009-08-07 | 2013-03-05 | Novartis Ag | 3-heteroarylmethyl-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl derivatives |
AU2010283806A1 (en) | 2009-08-12 | 2012-03-01 | Novartis Ag | Heterocyclic hydrazone compounds and their uses to treat cancer and inflammation |
AU2010284972A1 (en) | 2009-08-20 | 2012-03-08 | Novartis Ag | Heterocyclic oxime compounds |
EA201200321A1 (ru) | 2009-08-26 | 2012-09-28 | Новартис Аг | Тетразамещенные гетероарильные соединения и их применение в качестве модуляторов mdm2 и/или mdm4 |
IN2012DN02139A (fi) | 2009-09-10 | 2015-08-07 | Novartis Ag | |
MX2012005293A (es) | 2009-11-04 | 2012-06-19 | Novartis Ag | Derivados de sulfonamida heterociclicos utiles como inhibidores de mek. |
WO2011064211A1 (en) | 2009-11-25 | 2011-06-03 | Novartis Ag | Benzene-fused 6-membered oxygen-containing heterocyclic derivatives of bicyclic heteroaryls |
JP5456908B2 (ja) | 2009-12-08 | 2014-04-02 | ノバルティス アーゲー | ヘテロ環式スルホンアミド誘導体 |
CU24130B1 (es) | 2009-12-22 | 2015-09-29 | Novartis Ag | Isoquinolinonas y quinazolinonas sustituidas |
US8440693B2 (en) | 2009-12-22 | 2013-05-14 | Novartis Ag | Substituted isoquinolinones and quinazolinones |
BR112012032189B1 (pt) | 2010-06-16 | 2020-11-03 | Endorecherche, Inc | usos de um agonista ou antagonista de lhrh em associação com um modulador de receptor de estrogênio seletivo e com um precursor de esteróide sexual para a preparação de uma medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças relacionadas com estrogênio e kits |
CN102947274A (zh) | 2010-06-17 | 2013-02-27 | 诺瓦提斯公司 | 联苯基取代的1,3-二氢-苯并咪唑-2-亚基胺衍生物 |
WO2011157793A1 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Novartis Ag | Piperidinyl substituted 1,3-dihydro-benzoimidazol-2-ylideneamine derivatives |
UA112517C2 (uk) | 2010-07-06 | 2016-09-26 | Новартіс Аг | Тетрагідропіридопіримідинові похідні |
JP2013537210A (ja) | 2010-09-16 | 2013-09-30 | ノバルティス アーゲー | 17α−ヒドロキシラーゼ/C17,20−リアーゼ阻害剤 |
EP2673277A1 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-18 | Novartis AG | [1, 2, 4]triazolo [4, 3 -b]pyridazine compounds as inhibitors of the c-met tyrosine kinase |
CN103492390A (zh) | 2011-03-08 | 2014-01-01 | 诺瓦提斯公司 | 氟苯基双环杂芳基化合物 |
JP6002210B2 (ja) | 2011-04-28 | 2016-10-05 | ノバルティス アーゲー | 17α−ヒドロキシラーゼ/C17,20−リアーゼ阻害剤 |
BR112013029482A2 (pt) | 2011-05-16 | 2016-08-09 | Genzyme Corp | utilização de antagonistas cxr4 |
CA2838029A1 (en) | 2011-06-09 | 2012-12-13 | Novartis Ag | Heterocyclic sulfonamide derivatives |
US8859535B2 (en) | 2011-06-20 | 2014-10-14 | Novartis Ag | Hydroxy substituted isoquinolinone derivatives |
WO2012175487A1 (en) | 2011-06-20 | 2012-12-27 | Novartis Ag | Cyclohexyl isoquinolinone compounds |
KR20140025530A (ko) | 2011-06-27 | 2014-03-04 | 노파르티스 아게 | 테트라히드로-피리도-피리미딘 유도체의 고체 형태 및 염 |
BR112014006223A8 (pt) | 2011-09-15 | 2018-01-09 | Novartis Ag | 3-(quinolin-6-iltio)-[1,2,4-triazol[4,3-a] piradinas 6-substituídas, seus usos, composições farmacêuticas, e combinação |
EP2785717B1 (en) | 2011-11-29 | 2016-01-13 | Novartis AG | Pyrazolopyrrolidine compounds |
PE20141598A1 (es) | 2011-12-22 | 2014-11-14 | Novartis Ag | Derivados de dihidro-benzo-oxazina y dihidro-pirido-oxazina |
WO2013093850A1 (en) | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Novartis Ag | Quinoline derivatives |
MX2014007729A (es) | 2011-12-23 | 2015-01-12 | Novartis Ag | Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace. |
KR20140107578A (ko) | 2011-12-23 | 2014-09-04 | 노파르티스 아게 | Bcl2와 결합 파트너의 상호작용을 억제하기 위한 화합물 |
MX2014007730A (es) | 2011-12-23 | 2015-01-12 | Novartis Ag | Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace. |
WO2013096060A1 (en) | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Novartis Ag | Compounds for inhibiting the interaction of bcl2 with binding partners |
CN104136429A (zh) | 2011-12-23 | 2014-11-05 | 诺华股份有限公司 | 用于抑制bcl2与结合配偶体相互作用的化合物 |
US8815926B2 (en) | 2012-01-26 | 2014-08-26 | Novartis Ag | Substituted pyrrolo[3,4-D]imidazoles for the treatment of MDM2/4 mediated diseases |
US20130310387A1 (en) | 2012-05-16 | 2013-11-21 | Novartis Ag | Monocyclic Heteroaryl Cycloalkyldiamine Derivatives |
EP2855483B1 (en) | 2012-05-24 | 2017-10-25 | Novartis AG | Pyrrolopyrrolidinone compounds |
JP6427097B2 (ja) | 2012-06-15 | 2018-11-21 | ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッドThe Brigham and Women’s Hospital, Inc. | 癌を処置するための組成物および該組成物を製造するための方法 |
JP6236083B2 (ja) | 2012-08-13 | 2017-11-22 | ノバルティス ティーアゲズントハイト アーゲー | 脾臓チロシンキナーゼ(syk)の阻害剤としての二環式ヘテロアリールシクロアルキルジアミン誘導体 |
MD20150043A2 (ro) | 2012-10-02 | 2015-08-31 | Epitherapeutics Aps | Inhibitori ai histon-demetilazelor |
TW201422625A (zh) | 2012-11-26 | 2014-06-16 | Novartis Ag | 二氫-吡啶并-□衍生物之固體形式 |
EP2948453B1 (en) | 2013-01-22 | 2017-08-02 | Novartis AG | Pyrazolo[3,4-d]pyrimidinone compounds as inhibitors of the p53/mdm2 interaction |
WO2014115077A1 (en) | 2013-01-22 | 2014-07-31 | Novartis Ag | Substituted purinone compounds |
WO2014128612A1 (en) | 2013-02-20 | 2014-08-28 | Novartis Ag | Quinazolin-4-one derivatives |
PL2961736T3 (pl) | 2013-02-27 | 2018-08-31 | Gilead Sciences, Inc. | Inhibitory demetylaz histonowych |
AU2014233453A1 (en) | 2013-03-15 | 2015-10-01 | Durect Corporation | Compositions with a rheological modifier to reduce dissolution variability |
US20150018376A1 (en) | 2013-05-17 | 2015-01-15 | Novartis Ag | Pyrimidin-4-yl)oxy)-1h-indole-1-carboxamide derivatives and use thereof |
UY35675A (es) | 2013-07-24 | 2015-02-27 | Novartis Ag | Derivados sustituidos de quinazolin-4-ona |
WO2015022664A1 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of mek |
WO2015022663A1 (en) | 2013-08-14 | 2015-02-19 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of mek |
US9227969B2 (en) | 2013-08-14 | 2016-01-05 | Novartis Ag | Compounds and compositions as inhibitors of MEK |
CA2920059A1 (en) | 2013-09-22 | 2015-03-26 | Calitor Sciences, Llc | Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use |
BR112016012141A2 (pt) | 2014-01-15 | 2017-08-08 | Novartis Ag | "combinações farmacêuticas, uso das mesmas, e embalagem comercial" |
EP3327006B1 (en) | 2014-03-28 | 2020-05-20 | Calitor Sciences, LLC | Substituted heteroaryl compounds and methods of use |
CA2943824A1 (en) | 2014-03-31 | 2015-10-08 | Gilead Sciences, Inc. | Inhibitors of histone demethylases |
JP2017513931A (ja) | 2014-04-03 | 2017-06-01 | インビクタス オンコロジー ピーヴィティー.リミテッド | 超分子コンビナトリアル治療薬 |
SG11201701182VA (en) | 2014-08-27 | 2017-03-30 | Gilead Sciences Inc | Compounds and methods for inhibiting histone demethylases |
WO2017044434A1 (en) | 2015-09-11 | 2017-03-16 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | Substituted heteroaryl compounds and methods of use |
JP7254076B2 (ja) | 2017-11-19 | 2023-04-07 | サンシャイン・レイク・ファーマ・カンパニー・リミテッド | 置換ヘテロアリール化合物及び使用方法 |
JP7021356B2 (ja) | 2017-12-21 | 2022-02-16 | ヘフェイ インスティテューツ オブ フィジカル サイエンス, チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシーズ | ピリミジン誘導体系キナーゼ阻害剤類 |
AU2019209960B2 (en) | 2018-01-20 | 2023-11-23 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use |
WO2021059266A1 (en) * | 2019-09-26 | 2021-04-01 | S.I.S. Shulov Innovative Science Ltd. | Anti-aging compositions and methods of use thereof |
US20220395553A1 (en) | 2019-11-14 | 2022-12-15 | Cohbar, Inc. | Cxcr4 antagonist peptides |
CA3167217A1 (en) | 2020-01-13 | 2021-07-22 | Durect Corporation | Sustained release drug delivery systems with reduced impurities and related methods |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3914412A (en) * | 1973-10-11 | 1975-10-21 | Abbott Lab | {8 Des{13 Gly{9 {0 10 -Gn{13 RH nonapeptide amide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity |
US4005063A (en) * | 1973-10-11 | 1977-01-25 | Abbott Laboratories | [Des-gly]10 -GnRH nonapeptide anide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity |
US3901872A (en) * | 1974-03-13 | 1975-08-26 | American Home Prod | P-glu-his-trp-ser-tyr-d-pgl-leu-arg-pro-gly-nh' 2 'and intermediates |
JPS50142563A (fi) * | 1974-04-26 | 1975-11-17 | ||
US3896104A (en) * | 1974-05-22 | 1975-07-22 | American Home Prod | P-glu-his-trp-ser-tyr-d-lys-leu-arg-pro-gly-nh' 2 'and intermediates |
DE2438350C3 (de) * | 1974-08-09 | 1979-06-13 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Peptide mit starker LH-RH/FSH-RH-Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen |
US3971737A (en) * | 1975-03-24 | 1976-07-27 | American Home Products Corporation | [2-Methyl-Ala6 ]LRH |
US4010125A (en) * | 1975-06-12 | 1977-03-01 | Schally Andrew Victor | [D-Trp6 ]-LH-RH and intermediates therefor |
US4018726A (en) * | 1975-06-12 | 1977-04-19 | Andrew Victor Schally | [D-Phe6 ]-LH-RH and intermediates therefor |
US4024121A (en) * | 1976-01-27 | 1977-05-17 | Schally Andrew Victor | (Pyro)-Glu-His-Trp-D-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHR and intermediates |
US3992530A (en) * | 1975-12-08 | 1976-11-16 | American Home Products Corporation | [D-2-(1,4-Cyclohexadienyl)gly]6 -des-gly10 -lrh nonapeptide amides |
-
1976
- 1976-05-11 GB GB19327/76A patent/GB1524747A/en not_active Expired
-
1977
- 1977-04-20 IE IE808/77A patent/IE44426B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-04-22 US US05/790,003 patent/US4100274A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-04-22 ZA ZA00772433A patent/ZA772433B/xx unknown
- 1977-04-26 NZ NZ183931A patent/NZ183931A/xx unknown
- 1977-04-26 CA CA277,003A patent/CA1101844A/en not_active Expired
- 1977-04-28 AU AU24681/77A patent/AU508025B2/en not_active Expired
- 1977-05-04 HU HU77IE777A patent/HU179990B/hu unknown
- 1977-05-05 DE DE2720245A patent/DE2720245C2/de not_active Expired
- 1977-05-05 IL IL52014A patent/IL52014A/xx unknown
- 1977-05-05 CS CS772980A patent/CS199673B2/cs unknown
- 1977-05-05 PL PL1977197889A patent/PL104362B1/pl unknown
- 1977-05-05 PL PL1977212706A patent/PL108860B1/pl unknown
- 1977-05-09 CH CH578677A patent/CH627151A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-09 YU YU1172/77A patent/YU40672B/xx unknown
- 1977-05-10 BE BE177448A patent/BE854467A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-10 FR FR7714262A patent/FR2351092A1/fr active Granted
- 1977-05-10 NL NL7705130A patent/NL191793C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-10 NO NO771644A patent/NO147304C/no unknown
- 1977-05-10 FI FI771480A patent/FI64139C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-05-10 SE SE7705432A patent/SE437837B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-11 AT AT0335877A patent/AT379400B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-11 ES ES458691A patent/ES458691A1/es not_active Expired
- 1977-05-11 DD DD77198869A patent/DD136738A5/xx unknown
- 1977-05-11 JP JP5418677A patent/JPS52136172A/ja active Granted
- 1977-05-11 DK DK207977A patent/DK149596C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-05-11 SU SU772480485A patent/SU910116A3/ru active
-
1979
- 1979-03-23 AT AT0217979A patent/AT365562B/de not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-11-05 SE SE8007763A patent/SE437993B/sv not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-07-07 CH CH447281A patent/CH629475A5/de not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-09-03 NO NO822984A patent/NO149586C/no unknown
-
1993
- 1993-09-24 BG BG98123A patent/BG60740B2/bg unknown
-
1997
- 1997-01-15 NL NL970002C patent/NL970002I2/nl unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI64139B (fi) | Polypeptid med inverkan pao djurens fortplantning | |
FI60553B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
FI71567B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av gonadoliberinderivat | |
RU2602042C2 (ru) | Способ производства дегареликса и его промежуточных соединений | |
US3842064A (en) | Psychopharmacologically active tetra-,penta-,hexa-,and hepta-peptides | |
US3853836A (en) | Psychopharmacologically active peptides related to acth | |
HU186877B (en) | Process for preparing new hormone antagonists releasing luteinizing hormone and acid addition salts thereof | |
JPS6317839B2 (fi) | ||
JPS61197595A (ja) | 胃液分泌を阻害するトリペプチド及びテトラペプチドのエステル,並びに当該成分を活性成分として含む薬剤組成物の製造方法 | |
US4124703A (en) | Luliberin analogs | |
US3856770A (en) | Psychopharmacologically active tetra-, penta-, hexa-, and heptapeptides | |
US4636490A (en) | Novel peptidic derivatives inhibiting gastric secretion, process for preparing them and drugs containing them | |
US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
US3862927A (en) | Process for preparation of vasoactive intestinal peptide | |
US3850904A (en) | Psychopharmacologically active d-glu or d-his containing peptides | |
US3795666A (en) | Method of synthesizing peptides in the presence of a carbodiimide and of 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazine | |
Dutta et al. | Polypeptides. Part 15. Synthesis and biological activity of α-aza-analogues of luliberin modified in positions 6 and 10 | |
CH641152A5 (en) | Process for preparing thymosin alpha-1 and an analogue | |
GB2125408A (en) | Luteinizing and follicle-stimulating hormones releasing factor analogs | |
FI75579C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbar polypeptid. | |
US4128540A (en) | Pyroglutamyl-histidyl-tryptophanyl-seryl-tyrosyl hydrazides | |
CA1131217A (en) | Psycho-pharmacological peptides | |
HU187503B (en) | Process for preparing gonadoliberine derivatives containing beta-aspartyl group | |
JPH047360B2 (fi) | ||
DK149272B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af lhrh-analoge nona- eller decapeptider eller farmaceutisk anvendelige syreadditionssalte deraf |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MA | Patent expired | ||
PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: ZENECA LIMITED |
|
MA | Patent expired |
Owner name: ZENECA LIMITED |