FI110616B - Menetelmä fibriinimonomeerikoostumuksen valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä fibriinimonomeerikoostumuksen valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI110616B FI110616B FI934440A FI934440A FI110616B FI 110616 B FI110616 B FI 110616B FI 934440 A FI934440 A FI 934440A FI 934440 A FI934440 A FI 934440A FI 110616 B FI110616 B FI 110616B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- fibrin
- monomer
- composition
- enzyme
- thrombin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/363—Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4833—Thrombin (3.4.21.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L17/00—Materials for surgical sutures or for ligaturing blood vessels ; Materials for prostheses or catheters
- A61L17/005—Materials for surgical sutures or for ligaturing blood vessels ; Materials for prostheses or catheters containing a biologically active substance, e.g. a medicament or a biocide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L24/0015—Medicaments; Biocides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/10—Polypeptides; Proteins
- A61L24/106—Fibrin; Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
- A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
- A61L2300/254—Enzymes, proenzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents
- A61L2300/406—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/416—Anti-neoplastic or anti-proliferative or anti-restenosis or anti-angiogenic agents, e.g. paclitaxel, sirolimus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/418—Agents promoting blood coagulation, blood-clotting agents, embolising agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/45—Mixtures of two or more drugs, e.g. synergistic mixtures
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
! 110616
Menetelmä fibriinimonomeerikoostumuksen valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmä koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää ei-dynaamista fibriinimo-5 nomeeriä, fibrinogeenistä. Lisäksi tässä kuvatun fibrii-nipeiteaineen käyttö, jossa koostumusta, joka sisältää fibriinimonomeeriä, tai koostumusta, joka sisältää sil-loittumatonta fibriiniä, käytetään fibriinipeiteaineen aineosana.
10 Eräs hemostasiksen, ts. verenvuodon estymisen me kanismi nisäkkäissä on verihyytymän muodostuminen. Veri-hyytymän muodostuminen ihmisissä, ts. veren koaguloitumi-nen, aiheutuu monista monimutkaisista reaktioista, joiden loppuvaiheina on fibrinogeenin, joka on monomeeri, konver-15 sio trombiinilla, kalsiumioneilla ja aktivoidulla tekijällä XIII muodostamaan kokonaan silloittunut fibriini II -polymeeri, joka on fibriinihyytymä.
Silloittuneen fibriini II -polymeerin muodostuminen etenee niin, että fibrinogeeni muuttuu trombiinin toi-,···. 20 mesta fibriini I -monomeeriksi, joka spontaanisti polyme- roituu muodostaen fibriini I -polymeerin, johon joskus viitataan liukoisena fibriininä I, koska käsittelemällä tarkoituksenmukaisella kemikaalilla fibriini I -polymeeri ··.'· voidaan muuttaa takaisin fibriini I -monomeeriksi. Fib- : '.· 25 riini I -polymeeri muuttuu sitten trombiinin toimesta fib- ·' riini II -polymeeriksi, johon joskus viitataan liukoisena fibriininä II, koska käsittely tarkoituksenmukaisella kemikaalilla muuttaa fibriini II -polymeerin fibriini II -monomeeriksi. Fibriini II -polymeeri, tekijän XHIa vai-; 30 kutuksesta, joka tunnetaan aktivointitekijänä XIII, sil- loittuu sitten muodostamaan silloittuneen fibriinin II, . joka on fibriinihyytymä. Tekijä XIII aktivoituu trombiinin · toimesta kalsiumionien läsnä ollessa. Silloittuneeseen ·;··: fibriiniin II viitataan joskus liukenemattomana fibriininä . V 35 II, koska se ei voi muuttua fibriini II -monomeeriksi.
110616 2
On ymmärrettävä, että trombiini on muodostunut protrombiinista. Protrombiini muuttuu trombiiniksi tekijällä Xa kalsiumin ja muiden avustavien aineiden läsnä ollessa.
5 Fibrinogeeniä on läsnä n. 2 - 4 g/1 veriplasmapro- teiinia. Fibrinogeeni on monomeeri, joka koostuu kolmesta disulfidi-sitoutuneesta polypeptidiketjujen parista, jotka on merkitty (Aa) 2, (Ββ)2, Y2- "A" ja "B" kuvaavat kahta pientä aminopäätteistä peptidiä, jotka tunnetaan fibrino-10 peptidinä A ja fibrinopeptidinä B, vastaavasti. Fibrino-peptidien A lohkaisu fibrinogeenistä fibrinogeenin transformaatiossa trombiinin toimesta johtaa fibriini I -yhdisteeseen ja myöhempi fibrinopeptidien B lohkaisu johtaa fibriini II -yhdisteeseen. Tällainen fibrinopeptidien A ja 15 B lohkaisu alentaa fibrinogeenin molekyylipainoa hyvin vähän, n. 6 000 - n. 340 000 daltonia, mutta altistaa po-lymerointikohdat. Katsauksen fibrinogeenin rakenteesta ja veren hyytymisen mekanismeista löytämiseksi katso C. M. Jackson, Ann. Ref. Biochem., 49: 765 - 811 (1980) ja B.
.···. 20 Furie ja B.C. Furie, Cell, 53: 505 - 518 (1988).
*'! Fibriinipeiteaine on biologinen tartunta-aine, jo- ka vaikutuksiltaan jäljittelee koagulaation loppuvaiheita, ···’ aikaansaaden täten fibriinihyytymän. Tavalliset fibriini- ···· peiteaineet koostuvat väkevöidystä ihmisen fibrinogeenis- : ’.· 25 tä, naudan aprotiniinista ja tekijästä XIII ensimmäisenä · aineosana ja naudan trombiinista ja kalsiumkloridista toi sena aineosana. Sovellutus toteutetaan tavallisesti kaksiosaisella käsipumpulla, joka mahdollistaa molempien aineosien samanaikaisen käytön kohdalle, johon halutaan fib-.·. · 30 riinihyytymän muodostuvan. Aprotiniini on fibrinolyyttinen inhibiitti, jota lisätään fibriinipeiteaineiden stabiili-'! . suuden edistämiseksi.
Fibriinipeiteaineen fibrinogeeniaineosa valmiste-'.··’ taan yhdistetystä ihmisplasmasta. Fibrinogeeni voidaan . V 35 väkevöidä ihmisplasmasta kryosaostamalla ja saostamalla 110616 3 käyttäen eri reagensseja, esim. polyetyleeniglykolia, eetteriä, etanolia, ammoniumsulfaattia tai glysiiniä. Erinomainen kuvaus fibriinipeiteaineista löytyy julkaisuista M. Brennan, Blood Reviews, 5: 240 - 244 (1991); J. W.
5 Gibble ja P. M. Ness, Transfusion, 30: 741 - 747 (1990); H. Matras, J. Oral. Maxillofac Surg., 43: 605 - 611 (1985) ja R. Lerner ja N. Binur, J. of Surgical Research, 48: 165 - 181 (1990).
Viime aikoina on myös osoitettu kiinnostusta fib-10 riinipeiteaineiden valmistusta kohtaan, joissa voidaan käyttää autologista fibriiniä. Autologinen fibriinipeite-aine on fibriinipeiteaine, jossa fibriinipeiteaineen fib-rinogeeniaineosa on uutettu potilaiden omasta verestä. Autologisen fibriinipeiteaineen käyttö on edullista, koska 15 se poistaa verensiirtoinfektioiden, esim. hepatitis B:n, ei-A-, ei-B-hepatitiksen ja immuunikadon (AIDS), tarttu-misriskin, mikä muutoin olisi mahdollista fibrinogeeniai-neosan, joka on uutettu yhdistetystä ihmisplasmasta, tapauksessa. Katso L.E. Silberstein et ai., Transfusion, 28: ,···. 20 319 - 321 (1988); K. Laitakari ja J. Luotonen, Laryn- goscope, 99: 974 - 976 (1989) ja A. Dreslade et ai., The Annals of Thoracic Surgery, 40: 385 - 387 (1985).
• · · ·'·; Infektio voi tarttua fibriinipeiteaineesta ei ai- ··· noastaan fibrinogeenistä vaan myös naudan aprotiniinista : . 25 ja naudan trombiinista. Naudan trombiinin tiedetään sisäl- V · tävän tarttuvaa naudan aivokalvontulehdusta (bovine spongiform encephalitis) (BSE) ja muita nisäkkäille patogeenisiä viruksia. Lisäksi naudan trombiini on tehokas antigeeni, joka voi aiheuttaa immunologisia reaktioita 30 ihmisissä. Täten naudan trombiinin käyttö voi aikaansaada haitallisia vaikutuksia vastaanottajassa. Katso D. M.
‘. Taylor, J. of Hospital Infection, 18 (Supplement A): 141 - 146 (1991), S.B. Prusiner et al., Cornell Vet, 81 nro 2: 85 - 96 (1991) ja D. Matthews, J. Roy. Soc. Health, 3-5 : ,·’ 35 (helmikuu 1991) .
4 110616 Tämän mukaisesti on olemassa tarve fibriinipeite-aineelle, joka voidaan kuljettaa potilaaseen ilman virus-kontaminaation tai muiden haitallisten vaikutusten riskiä.
Tämän keksinnön kohteena on menetelmä ei-dynaa-5 mistä fibriinimonomeeriä sisältävän koostumuksen valmistamiseksi, jolle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään. Keksinnön mukaan valmistetaan myös pakkauksia, jotka sisältävät tällaista fibriinimonomeeriä.
Tässä keksinnössä käytetään seuraavia määritelmiä: 10 Fibriini - fibriini tarkoittaa mitä tahansa fib- riinin muotoa. Ei-rajoittavia esimerkkejä fibriinistä ovat fibriini I, fibriini II ja des BB -fibriini. Fibriini voi olla monomeerisessä tai polymeerisessä muodossa, jolloin polymeerinen muoto on joko silloittumaton tai silloittu-15 nut.
Fibriinimonomeeri - fibriinimonomeeri on mikä tahansa fibriinin muoto, esim. fibriini I, fibriini II tai des BB -fibriini, jossa fibriini on monomeerisessä tai oligomeerisessä muodossa, joka voidaan liuottaa koostumuk-,···. 20 seen, joka sisältää f ibriinimonomeeriä ja jossa fibriini- monomeeri voidaan muuttaa fibriinipolymeeriksi.
'"I Fibriinipolymeeri - fibriinipolymeeri on mikä ta- ···; hansa fibriinin muoto, esim. fibriini I, fibriini II tai • •d des BB -fibriini, jossa mainittu fibriini on polymeerises- : V 25 sä muodossa, joko silloittuneena tai silloittumattomana.
Silloittumaton fibriini - silloittumaton fibriini on mikä tahansa fibriinin muoto, esim. fibriini I, fibriini II tai des BB -fibriini, jossa mainittu fibriini on silloittumaton ja voidaan muuttaa silloittuneeksi fibrii-·, 30 niksi. Silloittumaton fibriini voi olla fibriinimonomeeri -·. tai silloittumaton fibriinipolymeeri.
‘. Silloittunut fibriini - silloittunut fibriini on mikä tahansa fibriinin muoto, esim. fibriini I, fibriini II tai des BB, jossa fibriini on fibriinipolymeeri, joka ; ;.· 35 on silloittunut.
• I
11)1 5 110616 Tässä kuvataan edelleen menetelmä fibriinipeiteai-neen käyttämiseksi, jossa menetelmässä: (a) saatetaan haluttu kohta kosketukseen koostumuksen kanssa, joka sisältää fibriinimonomeeriä; ja 5 (b) muutetaan mainittu fibriinimonomeeri fibriini- polymeeriksi rinnakkaisesti mainitun kontaktivaiheen kanssa aikaansaaden täten fibriinihyytymän.
Lisäksi tässä kuvataan menetelmä fibriinipeite-aineen käyttämiseksi, jossa menetelmässä: 10 (a) saatetaan haluttu kohta kosketukseen koostu muksen kanssa, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä; ja (b) muutetaan mainittu silloittumaton fibriini silloittuneeksi fibriiniksi rinnakkaisesti mainitun 15 kontaktivaiheen kanssa muodostamaan täten fibriinihyytymä.
Esitetään myös menetelmät tällaisen koostumuksen ja koostumusten ja pakkausten valmistamiseksi, jotka sisältävät tällaista silloittumatonta fibriiniä.
4.1. Koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä ,··· 20 Keksinnön mukaan fibriinikoostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä, on koostumus, joka sisältää mitä ”’· tahansa fibriinimonomeerimuotoa, joka voidaan muuttaa ···' fibriinipolymeeriksi. Ei-rajoittavia esimerkkejä fibriini- monomeeristä ovat fibriini I monomeeri, fibriini II mono-i ’. 25 meeri tai des BB -fibriinimonomeeri, fibriini I monomeerin ·/ ollessa edullinen. Tietenkin nämä voivat olla fibriinimo- nomeeriseoksia. Tämän keksinnön tarkoituksia varten fib-riinipolymeeri on myös mikä tahansa polymeeri, joka on saatu fibriinimonomeerin polymeroinnista. Täten esimerkik-30 si fibriini I monomeerin konversio fibriinipolymeeriksi voi muodostaa fibriini I polymeerin, silloittuneena tai . silloittumattomana, ja/tai fibriini II -polymeerin, sil loittuneena tai silloittumattomana, riippuen siitä, miten ':· konversiovaihe toteutetaan.
: !·’ 35 » * » · 6 110616
Fibriini I monomeeri on edullinen, koska se voidaan, poiketen fibrinogeenistä, helposti muuttaa fibriini-polymeeriksi käyttämättä trombiinia tai tekijää XIII. Tosiaan fibriini I monomeeri voi spontaanisti muodostaa fib-5 riini I polymeerin, joka voi toimia fibriinihyytymänä, riippumatta siitä, onko fibriini I polymeeri silloittunut vai silloittumaton, tai muuttua edelleen fibriini II -polymeeriksi. Täten, koska fibriini I polymeerin muodostuminen fibriini I monomeeristä on spontaani, fibriini I poly-10 meeri voidaan muodostaa ilman trombiinia tai tekijää XIII, välttäen täten ongelmat, jotka liittyvät naudan trombii-niin. (On huomattava, että mikäli fibriini I monomeeriä käytetään niin, että fibriini I monomeeri joutuu kosketukseen potilaan veren, esimerkiksi haavassa, kanssa, poti-15 laan trombiini ja tekijä XIII voivat muuttaa fibriini I
polymeerin silloittuneeksi fibriini II -polymeeriksi).
Koostumus, joka sisältää silloittumatonta fibrii-niä, on koostumus, joka sisältää mitä tahansa silloittu-mattoman fibriinin muotoa. Ei-rajoittavia esimerkkejä sil- ,··· 20 loittumattomasta fibriinistä ovat silloittumaton fibriini I, silloittumaton fibriini II ja des BB -fibriini, sil-loittumattoman fibriini I:n ollessa edullinen. Tietenkin • * •**j nämä voivat ola myös silloittumattoman fibriinin seoksia.
• ••1 Tämän keksinnön tarkoituksia varten "silloittunut fibrii- .’ 25 ni" on myös mikä tahansa fibriinin muoto, joka on saatu * · :,· silloittumattoman fibriinin konversiosta silloittuneeksi fibriiniksi. Täten silloittunut fibriini, esimerkiksi sellainen, joka on saatu silloittumattumattoman fibriinin I konversiosta silloittuneeksi fibriiniksi, voi olla sil-30 loittunut fibriini I ja/tai silloittunut fibriini II, riippuen siitä, kuinka konversiovaihe toteutetaan.
Silloittumaton fibriini I on edullinen, koska se voidaan helpommin, verrattuna fibrinogeeniin, muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi. Tosiaan uskotaan, että fibriini ; V 35 I voi muodostaa silloittuneen fibriinin I, joka voi toimia
Mil 7 110616 fibriinipeiteaineena. Täten silloittuneen fibriinin I muodostaminen silloittumattomasta fibriinistä I voidaan toteuttaa ilman trombiinia, välttäen täten ongelmat, jotka liittyvät naudan trombiiniin, vaikka aktivointitekijää 5 XIII voidaan tarvita. (On huomattava, että mikäli silloit-tumatonta fibriiniä I käytetään niin, että silloittunut fibriini I joutuu kosketukseen ihmisen veren kanssa, esimerkiksi haavassa, potilaan trombiini ja tekijä XIII voivat muuttaa fibriinin I silloittuneeksi fibriiniksi II).
10 Silloittumaton fibriini voi olla myös polymeeri, oligomeeri tai monomeeri, joskin oligomeeri tai monomeeri on edullinen, ts. fibriinimonomeeri. Tämä johtuu siitä tosiasiasta, että silloittumaton fibriini polymeerimuodos-sa on tavallisesti geeli ja täten hyvin vaikeasti kulje-15 tettavissa haluttuun kohtaan eikä ole yhtä läheisessä kosketuksessa solujen kanssa halutussa kohdassa. Tästä poiketen saatu silloittumaton fibriini oligomeerisessä tai mo-nomeerisessä muodossa on liukoinen ja täten helpommin kuljetettavissa haluttuun kohtaan ja sillä on läheisempi kos-,"· 20 ketus solujen kanssa. Koostumus voi sisältää tietenkin tällaisten silloittumattomien fibriinimuotojen seosta.
Koostumuksen lähde, joka sisältää fibriinimonomee- i · · ···; riä tai silloittumatonta fibriiniä, voi olla mikä tahansa
I I
···: tunnettu lähde tai on kehitettävissä niin kauan kun fib- » » · ; . 25 riinimonomeeri voidaan muuttaa fibriinipolymeeriksi tai > · v silloittumaton fibriini voidaan muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi. Ei-rajoittavia lähteitä fibriinimonomeerille tai silloittumattomalle fibriinille koostumuksissa ovat veri, edullisesti nisäkkään veri ja jopa edullisemmin ih-.·. 30 misen veri, soluviljelmät, jotka erittävät fibrinogeeniä ... ja rekombinanttifibrinogeeniä, joista veri on edullinen.
'!. Veri voi olla mikä tahansa veren muoto, mukaanlukien esi merkiksi kokoveri tai valmistetut fibrinogeenipreparaatit. Verta voidaan käyttää myös autologisen fibriinipeiteaineen . V 35 valmistamiseksi.
tllt 8 110616
On havaittu, että koostumuksessa, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä I, joko fibriini I monomeerinä tai fibriini I polymeerinä, valmistettuna kokoverestä, kuten edellä on kuvattu, silloittumaton fibriini I voidaan 5 muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi II ilman trombiinin lisäämistä, tekijää XIII tai muita tarpeellisia aineita veren koaguloimiseksi. Uskotaan, että tämä johtuu siitä tosiasiasta, että koostumus, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä I, joka on valmistettu kokoverestä, sisältää 10 riittäviä määriä protrombiinia, tekijää XIII ja tällaisia muita tarpeellisia aineita plasmasta, niin että silloittumaton fibriini I voidaan muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi II lisäämättä eksogeenistä trombiinia ja tekijää XIII. Tätä endogeenistä protrombiinia ja tekijää XIII voi-15 daan käyttää fibriinipeiteaineen aineosina koostumuksessa, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä.
Kuitenkin tulisi ottaa huomioon, että riittäviä määriä tätä endogeenistä trombiinia ja tekijää XIII ei ,*·· 20 saada fibrinogeenin muuttamiseksi silloittuneeksi fibrii- ’‘,’ niksi II reaktionopeudella, joka on sopiva fibriinipeite- *’*) aineelle. Uskotaan, että tarvitaan enemmän trombiinia
fibrinogeenin muuttamiseksi silloittuneeksi fibriiniksi II
· ..d kuin silloittumattoman fibriinin I muuttamiseksi silloit- • · · i *, 25 tumattomaksi fibriiniksi II samalla reaktionopeudella.
* I
Jokainen näistä kolmesta lähteestä sisältää fibri-nogeeniä, joka voidaan muuttaa fibriinimonomeeriksi tai silloittumattomaksi fibriiniksi. Tällaisen reaktiovaiheen lisäksi saadun koostumuksen, joka sisältää fibriinimono-30 meerin tai silloittumatonta fibriiniä, on oltava väkevöi-dyssä muodossa. On edullista, että fibriinimonomeerin pi-‘. toisuus on alueelta 10 mg/ml, edullisemmin n. 20 mg/ml - n. 200 mg/ml, edullisemmin jopa n. 20 mg/ml - n. 100 mg/ml ja edullisimmin n. 25 mg/ml - n. 50 mg/ml.
: V 35 f i * ‘(at i 9 110616
Keksinnön mukaisessa menetelmässä fibriinimono-meeri tai silloittumaton fibriini on ei-dynaaminen. Tämän keksinnön tarkoituksia varten ei-dynaaminen koostumus, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, tarkoittaa, että 5 silloittumaton fibriini tällaisessa koostumuksessa ei sil-loitu ainakaan n. 1,5 minuuttia, edullisesti ei ainakaan n. 3 minuuttia ja edullisemmin ei ainakaan n. 30 minuuttia tällaisen koostumuksen valmistamisen jälkeen. Tämän keksinnön tarkoitusta varten ei-dynaaminen koostumus, joka 10 sisältää fibriinimonomeeriä, tarkoittaa, että fibriini- monomeeri tällaisessa koostumuksessa ei polymeroidu ainakaan n. 1,5 minuuttia, edullisesti ei ainakaan n. 3 minuuttia, edullisemmin ei ainakaan n. 30 minuuttia ja jopa edullisemmin ei ainakaan n. 2 tuntia koostumuksen valmis-15 tamisen jälkeen. Tosiasiaan tulisi ottaa huomioon, että koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä, voi olla ei-dynaaminen useita päiviä, ts. n. 72 tuntia sen valmistamisen jälkeen.
Koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai 20 silloittumatonta fibriiniä, voidaan valmistaa verestä.
Menetelmä voi johtaa vetysitoutuneeseen f ibriinipolymee-riin, joka on silloittumattoman fibriinin muoto. Tällaista /1' polymeeriä voidaan sitten käyttää fibriinipeiteaineen ai- neosana tai muuttaa fibriinimonomeeriksi menetelmällä, *·'; 25 johon viitataan liuottamisena, kuten seuraavassa on esi- tetty. On myös edullista, että koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä, valmistetaan steriilissä ympäristössä.
Koostumukset, jotka sisältävät fibriinimonomeeriä 30 tai silloittumatonta fibriiniä, voidaan valmistaa koko- * *. verestä poistamalla veri luovuttajasta ja edullisesti an- ·.. tikoagulantin läsnä ollessa. Mitä tahansa antikoagulanttia ··. : voidaan käyttää. Ei-rajoittavia esimerkkejä antikoagulan- ____: teista ovat hepariini, EDTA, hirudiini, sitraatti tai mikä 35 ίο 110616 tahansa muu aine, joka voi suoraan tai epäsuorasti estää trombiinin muodostumisen ja joista sitraatti on edullinen.
Plasma, joka sisältää fibrinogeeniä, erotetaan sitten kokoverestä. Mitä tahansa erotusmenetelmää voidaan 5 käyttää, esimerkiksi sedimentaatiota, sentrifugointia tai suodattamista. Sentrifugointi voidaan toteuttaa n.
3 000 g:ssa n. 10 minuutin aikana. Kuitenkin, mikäli halutaan saada plasma hiutalerikkaana, sentrifugointi voidaan toteuttaa alemmassa g-voimassa, esim. 500 g:ssa n. 20 mi-10 nuutin aikana. Ylin kirkas kerros, joka sisältää plasmaa, voidaan poistaa standardimenetelmien avulla.
Suodattaminen voidaan toteuttaa antamalla kokoveren kulkea sopivan suodattimen läpi, joka erottaa verisolut plasmasta. On edullista, että suodatin on mikrohuokoi-15 nen kalvo, jolla on hyvä proteiinin läpäisevyys.
Saatua plasmaa käsitellään sitten fibrinogeenin muuttamiseksi fibriinimonomeeriksi tai silloittumattomaksi fibriiniksi. Tämä konversio voidaan toteuttaa millä tahansa tunnetulla tai kehitteillä olevalla menetelmällä.
20 Edullinen menetelmä fibriinimonomeerin tai sil- loittumattoman fibriinin valmistamiseksi tapahtuu trombii-nin tapaisen entsyymin avulla, mukaanlukien trombiini. Trombiinin kaltainen entsyymi on mikä tahansa entsyymi, ;· joka katalysoi fibriinin muodostumista fibrinogeenistä.
25 Tavallinen trombiinin tapaisten entsyymien lähde ovat käärmemyrkyt. Edullisesti trombiinin tapainen entsyymi puhdistetaan käärmeen myrkystä. Riippuen trombiinin tapaisen entsyymin valinnasta tällainen trombiinin tapainen entsyymi voi vapauttaa fibrinopeptidiä A, joka muodostaa 30 fibriiniä I, fibrinopeptidiä B, joka muodostaa des BB "* ' -fibriiniä tai sekä fibrinopeptidiä A että B, jotka muodostavat fibriiniä II. Tulisi huomata, että ne trom- ‘ biinin kaltaiset entsyymit, jotka vapauttavat fibrino peptidiä A ja B, voivat tehdä tämän eri nopeuksilla. Täten • 35 saatu koostumus voi olla esimerkiksi fibriinin II ja n 110616 fibriinin I seos tai fibriinin II ja des BB -fibriinin seos.
Taulukko I on ei-rajoittava taulukko käärme-myrkyistä, joita voidaan käyttää tässä keksinnössä, trom-5 biinin tapaisen entsyymin nimi ja fibrinopeptidin ja fibrinopeptidien nimet, joita vapautuu entsyymikäsit-telyllä, on annettu.
Taulukko I
1° ^SS==S=====X-—SSSSIS==^S===SSSS=S=^^ (Vapautunut Lähde Nimi fibrinopeptidi
Agkistrodon seutua__Acutin__A_ A. contortrix contortrix__Venzyroe__B, (A)*_ A. halys Pallas___B, (A)*_
A. (Calloselasma) Ancrod, Arvin A
rhodoatoma_____
Bothrops aapar (B. atrox)__Asperaae__A _
B. Atrox Batroxobin, A
Reptiiase- reagenssi 20--- : ”· B♦ insular ia____A, B_ • j B. jararaoa_______Botropase__A_
B. Moojeni (B. Atrox) Batroxobin', A
...i _·___Def ibraee___
Lachesis auta auta___A, B_
‘ ' 25 Crotalua adaaanteus Crotalase A
> · ; C. durissua terrifjcua____A_
Trlmereaurua flavoviridis__Flavoxobin__A_ T. gramineua___A_
Bltia gabonica Gabonaee A, B
3Q “ ’· ’ * ( ) tarkoittaa alhaista aktiivisuutta.
Kuvausta trombiinin tapaisista entsyymeistä käärmemyrkyistä katso H. Pirklen ja K. Stockerin julkaisua 35 Thrombosis and Haemostasis, 65 (4) : 444 - 450 (1991).
12 110616
Edullisia trombiinin kaltaisia entsyymejä ovat batroksobiini, erityisesti B. Moojenistä, B. Maranhaosta ja B. atroxista ja Ancrodista, erityisesti A. rhodosto-masta.
5 Fibriinimonomeeri tai silloittumaton fibriini voi daan valmistaa saattamalla plasma kosketukseen trombiinin tapaisen entsyymin kanssa mahdollistaen täten fibrinogee-nin konvertoitumisen fibriinimonomeeriksi plasmassa. Kuitenkin saatu fibriinimonomeeri polymeroituu spontaanisti 10 muodostaen vetysidospolymeerin geelin muodossa, joka erottuu jäljelle jääneestä seerumista, joka on liuos. Geeli on koostumuksen muodossa, joka sisältää silloittumatonta fib-riiniä.
Tämä silloittumaton fibriinigeeli voidaan ottaa 15 talteen esimerkiksi sentrifugoimalla (3000 g:ssa 10 minuuttia) , silloittumattoman fibriinin suoralla manuaalisella erottamisella seerumista, suodattamalla, suoraan tai alennetussa paineessa, mitä seuraa erotetun seerumin poistaminen. (Voidaan käyttää 1 - 100 mikronin huokoskoon suo-20 datinta, esimerkiksi sintrattua polypropyleenin 20 mikro-nin huokoskoon suodatinta Porex Incrstä, teflon 20 - 70 mikronin huokoskoon suodatinta Fluorotechniques Incrstä tai nailon 66 22 - 46 mikronin huokoskoon suodatinta Cos-i tar Incrstä) .
·*·’ 25 Tämä talteenotto erottaa silloittumattoman fibrii- * · .*.* nigeelin seerumista, joka on liuos, ja väkevöi täten sil
loittumattoman fibriinigeelin plasmasta. Tulisi huomata, että silloittumaton fibriinigeeli sisältää ainakin vähän protrombiinia, tekijää XIII ja muita tällaisia tarpeelli-30 siä aineita plasmasta niin, että silloittumaton fibriini I
• · *. ’ voidaan muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi II lisäämättä ·., eksogeenistä trombiinia tai tekijää XIII. Tätä endogeenis- tä protrombiinia ja tekijää XIII voidaan käyt-,,,· tää fibriinipeiteaineen aineosina koostumuksessa, joka 35 13 110616 sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fib-riiniä.
Sentrifugointivoima tai suodatuspaine talteenoton aikana määrittää, kuinka paljon seerumia poistuu silloit-5 tumattomasta fibriinigeelistä, niin että mitä suurempi voima tai paine on, sitä väkevämpi on saatu silloittumaton fibriinigeeli. Kuitenkin on edullista, että tällainen voima tai paine ei ole niin suuri, että protrombiini ja tekijä XIII poistuvat silloittumattomasta fibriinigeelistä.
10 Silloittumaton fibriinigeeli on nyt valmis käytet täväksi fibriinipeiteaineen aineosana koostumusmuotona, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä. On havaittu, että kun koostumus valmistetaan kokoverestä, n. 60 % - n. 90 % alkuperäisestä fibrinogeenistä on läsnä koostumukses-15 sa, mutta tietenkin silloittumattoman fibriinin muodossa.
Koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, voidaan käyttää välittömästi sen valmistuksen jälkeen. Todella on erityisen edullista käyttää tällaista koostumusta välittömästi sen valmistumisen jälkeen, kun 20 koostumus on autologinen. Mikäli koostumusta ei käytetä *·· välittömästi sen valmistumisen jälkeen, koostumus voidaan • · varastoida. Koostumuksen varastointi vaatii, että koostu- mus suojataan esimerkiksi jäädyttämällä tai kylmäkuivaa- ^j maila koostumus tai pitämällä koostumus 4 °C:ssa. Koostu- ·’·' 25 mus jäädytetyssä tai lyofilisoidussa muodossa on stabiili * « kuukausien ajan. Kun koostumus pidetään 4 °C:ssa, usko-taan, että koostumus on stabiili ainakin päivien ajan.
Mikäli koostumus on jäädytetty, koostumus on sulatettava ennen käyttöä.
30 Tämä menetelmä johtaa silloittumattoman fibriini- » ’ geelin muodostumiseen, joka muuttaa fibrinogeenin silloit- tumattomaksi fibriinigeeliksi ja väkevöi tällaisen geelin i * pääosin yhdessä vaiheessa. Vaihtoehtoisesti, eikä yhtä edullisesti, fibrinogeeni voidaan väkevöidä tavallisilla 35 menetelmillä, esim. kryosaostamalla ja saostamalla käyt- 14 110616 täen eri reagensseja, esim. polyetyleeniglykolia, eetteriä, etanolia, ammoniumsulfaattia tai glysiiniä. Väkevöity fibrinogeeni voidaan sitten muuttaa silloittumattomaksi fibriinigeeliksi edellä kuvatuilla menetelmillä, tai edul-5 lisesti, koska fibrinogeeni on jo väkevöity, fibrinogeeni voidaan muuttaa koostumukseksi, joka sisältää fibriinimo-nomeeriä, ilman tarvetta muodostaa ensin silloittumaton fibriinigeeli. Tämä voidaan toteuttaa saattamalla väkevöity fibrinogeeni kosketukseen kaotrooppisen aineen kanssa 10 antamaan fibrinogeeniliuos.
Kaotrooppinen aine on tarpeellinen estämään fib-riinimonomeerin, jota muodostuu kun fibrinogeeni on kosketuksessa trombiinin kaltaisen entsyymin kanssa, spontaani polymeroituminen. Kaotrooppinen aine sekoitetaan tällaisen 15 fibrinogeenikoostumuksen kanssa ja sitten sitä sekoitetaan n. 1-2 minuuttia fibrinogeeniliuoksen muodostamiseksi. Fibrinogeeni voidaan sitten muuttaa fibriinimonomeeriksi, esimerkiksi trombiinin kaltaiseksi entsyymiksi, kuten edellä on kuvattu, tai trombiinin kaltaiseksi entsyymiksi, .20 immobilisoituneena kantoaineelle, kuten seuraavassa on kuvattu.
"’1 Sopivia kaotrooppisia aineita ovat urea, natrium- bromidi, guanidiini hydrokloridi, KCNS, kaliumjodidi ja kaliumbromidi. Kaotrooppisen aineen edullinen pitoisuus on ·' ·' 25 n. 0,2 - n. 6,0 M ja edullisimmin n. 0,3 - n. 2,0 M. On ·.* · edullista käyttää pienintä mahdollista määrää kaotrooppis- ta ainetta, joka määrä vielä estää fibriinimonomeerin spontaanin polymeroitumisen.
Tulisi huomata, että on edullista, että kalsium-.·. : 30 ionien lähdettä ei lisätä kaotrooppiseen aineeseen ennen .··· kuin halutaan muuttaa fibriinimonomeeri fibriinipolymee- ’· · riksi, kuten seuraavassa on kuvattu. Tämä varmistaa sen, että fibriinimonomeeri ei silloitu, johtuen endogeenisten veren hyytymistekijöiden aktivoinista.
: V 35 is 110616
Edullisessa suoritusmuodossa trombiinin kaltainen entsyymi immobilisoidaan kantoaineelle. Tällainen suoritusmuoto on edullinen, koska on helppoa erottaa immobili-soitu entsyymi plasmasta, estäen täten koostumuksen, joka 5 sisältää silloittumatonta fibriiniä, entsyymikontaminaa-tio.
Mitä tahansa kantoainetta, johon trombiinin kaltainen entsyymi voi liittyä, voidaan käyttää tässä keksinnössä. Ei-rajoittavia esimerkkejä sopivista kantoai-10 neista ovat selluloosa, polydekstraanit, agaroosi, poly-styreenit, piidioksidi, polyakryylihapot, polyakryyli-amidit, polyvinyylialkoholit, lasihelmet, polytetrafluori-etyleeni, polykarbonaatti, kollageeni, selluloosajohdan-naiset, tefloni ja niiden koostumukset, joista piipoly-15 styreeni ja agaroosi ovat edullisia ja agaroosi on edullisin.
Toisessa edullisessa suoritusmuodossa trombiinin kaltainen entsyymi kiinnittyy kantoaineeseen, siis suodat-timeen tai suodattimen toiselle puolelle ja kiinnittyy 20 toiseen kantoaineeseen, esim. helmeen. Muutoin trombiinin kaltainen entsyymi kulkeutuu suodattimen läpi. Täten suo-"! dattimen huokoskoon on oltava sellainen, että immobilisoi- tu trombiinin kaltainen entsyymi ei voi läpäistä suodatin-ta, mutta silloittumaton fibriini voi läpäistä suodatti-: ·' 25 men. Silloittumaton fibriini valmistetaan saattamalla ’.· · plasma kosketukseen trombiinin kaltaisen entsyymin kanssa suodattimen toisella puolella muodostamaan fibriinimono-meeri, joka yhdessä muun plasman kanssa läpäisee suodattimen. Täten saatu koostumus, joka sisältää silloittumatonta .: 30 fibriiniä, erottuu välttämättä trombiinin kaltaisesta ent- .··· syymistä. Fibriinimonomeeri, kuljettuaan suodattimen läpi, '· · polymeroituu spontaanisti muodostaen silloittumattoman fibriinipolymeerin.
"· Trombiinin kaltaisen entsyymin immobilisoimiseksi ; ,· 35 kantoaineelle, kantoaineen on oltava aktivoitu. Tämä voi- 16 110616 daan toteuttaa millä tahansa tekniikalla. Esimerkiksi eri aktivointiaineita, joita on saatavissa kantoaineiden johtamiseksi, ovat: diatsoniumryhmät, isosyanaattiryhmät, happokloridiryhmät, happoanhydridiryhmät, sulfonyyliklori-5 diryhmät, dinitrofluorifenyyliryhmät, isotiosyanaattiryh- mät, hydroksyyliryhmät, aminoryhmät, n-hydroksisukkiini-imidiryhmät, triatsiiniryhmät, hydratsinoryhmät, karbodi-imidiryhmät, silaaniryhmät ja syaanibromidi. Katso (a) Pentapharm Patent DT 2440 254 Ai; (b) P. D. G. Dean, W. S. 10 Johnson ja F. A. Middle (julkaisijat) (1991) IRL Press
Oxford - Affinity Chromatography - A practical approach -luku 2 - Activation Procedures, jotka julkaisut on liitetty tähän viitteinä.
Edullinen aktivointimenetelmä tapahtuu hydratsidi-15 ryhmän avulla. Hydratsidilla aktivoidun kantoaineen käyttö aikaansaa maksimaalisen trombiinin kaltaisen entsyymin prosentuaalisen aktiivisuuden säilymisen pääosin ilman entsyymi vuotoa (vähintäin n. 30 % - n. 50 % mitattuna S2238-kokeella - katso Axelsson G. et ai., Thromb. .*··. 20 Haemost., 36: 517 (1976)). Voidaan käyttää myös alhaisia pH-arvoja esim. arvoa 4-6, entsyymin liittämisessä ent-syymin hajoamisen estämiseksi.
Yleensä kantoaine aktivoidaan hyvin reaktiivisella ···· yhdisteellä, joka kantoaine tämän jälkeen saatetaan rea- • · . 25 goimaan ligandin funktionaalisen ryhmän, esim. ryhmän -OH, ’.· -NH2, -SH, -COOH, -CHO kanssa, muodostamaan kovalenttinen sidos. Edullisia aktivointimenetelmiä käytettäviksi tässä keksinnössä ovat: (a) triatsiiniryhmän avulla ja edullisesti triat-.·. 30 siinihalogenidiryhmillä; .··· (b) tresyylikloridiryhmän avulla; . (c) karbonyylidi-imidatsoliryhmän avulla; (d) syaanibromidiryhmän avulla; ja (e) hydratsidi- tai aminoryhmän avulla.
: 35 17 110616
Kohdissa (a) - (d) proteiini liitetään reaktiolla NH2, -SH tai -OH-ryhmien kanssa, kun taas kohdassa (e) proteiini liitetään hapetetulla hiilihydraattiryhmällä, ts. -CHO:lla. Näiden aineiden käyttö johtaa maksimaaliseen 5 prosentuaaliseen trombiinin kaltaisen entsyymin aktiivisuuden säilymiseen pääosin ilman entsyymivuotoa (vähintäin n. 30 % - n. 50 % mitattuna S2238-kokeella).
Triatsiiniaktivoinnissa käytettiin kahta erilaista menetelmää. Ensimmäisessä menetelmässä triatsiinirengas 10 sidotaan suoraan OH-ryhmien pinnalle. Tämä vastaa käytettyä CNBr-aktivointimenetelmää, jossa pintadioliryhmät saatetaan reagoimaan CNBr:n kanssa. Triatsiiniaktivoinnissa agaroosin OH-ryhmät saatetaan reagoimaan triatsiinin (syaanivirtsahappokloridi) kanssa.
15 Yleensä kantoaine, joka aktivoidaan hyvin reaktii visella yhdisteellä, reagoi tämän jälkeen ligandin funktionaalisen ryhmän, esim. ryhmän -OH, -NH2, -SH, -CHO kanssa, muodostaen kovalenttisen sidoksen. Jäljelle jääneet aktivoidut ryhmät, joilla ei ole trombiinin kaltaista 20 entsyymiä liittyneenä, voidaan, mutta se ei ole välttämä-töntä, suojata ei-reaktiivisilla yhdisteillä, kuten etano-I liamiinilla, etikkahappoanhydridillä tai glysiinillä.
**” Edullisia aktivointimenetelmiä käytettäviksi tässä keksinnössä ovat: : · 25 (a) syaanibromidiaktivointi, mitä seuraa entsyymin • · *.· välitön kytkentä -NH2~ryhmien kautta proteiiniin.
(b) kantoaineen aktivointi monoklooritriatsii-nilla, mitä seuraa entsyymin liittäminen -NH2-, -OH- tai -SH-ryhmien kautta.
30 (c) kantoaineen aktivointi diklooritriatsiinilla, .··· mitä seuraa entsyymin liittäminen -NH2-, -OH- tai -SH-ryh- • · mien kautta.
(d) kantoaineen aktivointi tresyylikloridilla, ’·” mitä seuraa entsyymin liittäminen -NH2-, -OH- tai -SH- : ,* 35 ryhmien kautta.
« 110616 (e) kantoaineen aktivointi adipiinihappohydratsii-nilla tai hydratsiinilla, mitä seuraa hapetetun entsyymin liittäminen -CHO-ryhmien kautta.
(f) kantoaineen aktivointi aminoligandilla, mitä 5 seuraa hapetetun entsyymin liittäminen -CHO-ryhmien kautta .
Kaikissa edeltävissä edullisissa menetelmissä käytetään agaroosia kantoaineena, kuitenkin on mahdollista käyttää piidioksidia. Kun käytetään tätä kantoainetta, 10 edullisia aktivointimenetelmiä ovat: (a) gamma-glysidoksipropyylitrimetoksisilaani aktivointi trombiinin kaltaisen entsyymin välittömällä liittämisellä -NH2-ryhmien kautta proteiiniin.
(b) syaanibromidiaktivointi, mitä seuraa entsyymin 15 välitön liittäminen -NH2-ryhmien kautta proteiiniin.
(c) gamma-glysidoksitrimetoksisilaaniaktivointi, mitä seuraa epoksidirenkaan avaaminen muodostamaan dioli-ryhmä, joka voidaan tämän jälkeen aktivoida syaanibromi-dilla. Entsyymin välitön liittäminen voidaan toteuttaa ’*· 20 -NH2-ryhmien kautta proteiiniin.
(d) gammaglysidoksipropyylitrimetoksisilaaniakti- *'*; vointi, mitä seuraa amino-piidioksidin valmistus käsit- telemällä ammoniakkiliuoksella.
« ·
Amino-piidioksidi voidaan tämän jälkeen aktivoida : . 25 syaanivirtsahappokloridilla (triatsiini) ja entsyymi lii- • · ·,· tetään -NH2-, -OH- tai -SH-ryhmien kautta.
Entsyymin liittämisen aktivoituun kantoaineeseen on oltava puskuroitu tiettyyn pH:hon optimaalisen entsyy- misitoutumisen aikaansaamiseksi. Tavallisesti standardiak- .·. 30 tivointimenetelmissä, kuten entsyymin gamma-glysidoksipro- t··· pyylitrimetoksisilaani-liittämisessä aktivoituun kantoai- $ '! . neeseen ja minkä tahansa proteiinin syaanibromidiliittä- misessä aktivoituihin ryhmiin, vaaditaan puskurointia pHrssa, joka on 1 - 2 yksikköä korkeampi kuin entsyymin ; , 35 primaaristen ja sekundaaristen amiinien pKa. Kuitenkin » « i9 110616 syaanivirtsahappokloridin käyttö aktivaattorina mahdollistaa huomattavasti alhaisempien pH-puskurien käytön (optimaalinen kytkentä-pH on 4 - 6). Toinen glykoproteiinien, kuten batroksobiinin, liitäntämenetelmä inerttiin kantoai-5 neeseen tapahtuu niiden hiilihydraattiosien kautta. Tämä käsittää ensin sokeriryhmän hapettamisen -CHO-ryhmiksi, mitä seuraa välitön kytkentä happamassa pH:ssa aminoryh-mään, kuten hydratsidiin. Voidaan käyttää monia kytkentä-puskureita. Katso esimerkiksi taulukko 2.
10
Taulukko 2
Esimerkkejä kytkentäpuskureista, joita käytetään entsyymin immobilisoinnissa silika- ja agaroosikantoaineisiin Kantoaine Aktivointimenetelmä Kytkentäpuskuri 15 silika y-glysidoksipropyy- 0,1 M natriumbikarbonaat-
litrimetoksisilaani ti, pH 8 - 9, 10 mM
HEPES, pH 7,0 silika y-glysidoksipropyy- 0,1 M natriumbikarbonaat- litrimetoksisilaani ti, pH 8 - 9, 10 mM 20 + syaanibromidi HEPES, pH 7,0 _· silika syaanibromidi vesi, pH 7,0, 0,1 M nat- t riumbikarbonaatti, pH 7 - 9 * · 10 mM HEPES, pH 7,0 • · agaroosi monoklooritriatsiini 50 mM natriumasetaat- : 25 ti/1 M NaCl, pH 4,0 * · ·.· agaroosi diklooritriatsiini 0,1 M kaliumfosfaat- ti/1 M NaCl, pH 8,0 - 9,0 agaroosi tresyylikloridi 50 mM kaliumfosfaat- ti/0,5 M NaCl pH 7,7 .·. 30 agaroosi hydratsidi 50 mM natriumasetaatti ,·.· pH 5,5 10 mM NaBH<i . agaroosi amiini 50 mM natriumasetaatti pH 5,5 10 mM NaBH4 » » • f 20 Ί10616
Aktivoinnin jälkeen kantoaineella on enemmän aktiivisia kohtia kuin entsyymin liittämiselle vaaditaan. Nämä kohdat, mikäli ne eivät ole deaktivoituja, voivat kovalen-tisesti sitoa kontaminoivia proteiineja, jotka voivat vai-5 kuttaa immobilisoidun entsyymin biologiseen toimintaan.
Ylimäärä ryhmiä voidaan deaktivoida sitomalla kovalenttisesti pienet, ei-häiritsevät amiinit, kuten etanoliamiinit.
Mikäli hydratsidi- tai aminoaktivoituja kantoai-10 neita käytetään, jäljelle jääneiden reaktiivisten ryhmien suojaus entsyymikytkennän jälkeen voidaan saavuttaa käyttäen etikkahappoanhydridiä.
Riippuen immobilisointimenetelmästä ja kantoai-neesta, entsyymin inaktivointi tapahtuu immobilisointi-15 menetelmän aikana. Käyttäen piidioksidikantoainetta halutta vimman aktivointimenetelmän (esim. syaanibromidi) kanssa jopa 80 - 90 % entsyymin aktiivisuudesta häviää. Kuitenkin agaroosin käyttö kantoaineena syaanivirtsahappoklori-diaktivoinnissa johtaa pienempään entsyymiaktiivisuus-·· 20 häviöön.
Immobilisoidun entsyymin kantoaineella tehokkuuden kuvaamiseksi voidaan käyttää kahta menetelmää aktiivisen » 1 1· · entsyymin määrän arvioimiseksi immobilisoituneena kantoai- ·. · ·1··’ neelle; Clot Time Assay - Clauss A., Acta Haematol., 17: * · 1 : . 25 237 (1957) ja S2238 koe - katso Axelsson G. et ai., V Thromb. Haemost., 3_6: 517 (1976).
Entsyymivuodon määrittämiseksi kantoaineesta voidaan tehdä seuraava koe.
Vuoto voidaan määrittää merkitsemällä radioaktii-p, 30 visesti trombiinin kaltainen entsyymi, esim. I125 batrokso- ... biinillä. Kuitenkin ennen vuotokokeen aloittamista on tar- ♦ C , peen poistaa kaikki sitoutumaton radioaktiivinen merkkiai ne. Tämä voidaan saavuttaa pesemällä kantoaine peräkkäi-‘ sesti: 50 ml :11a 50 mM natriumasetaattia, pH 5,5, 100 . V 35 ml: 11a 50 mM glysiini/1 M natriumkloridia, pH 3,0, 100 21 110616
ml :11a 50 mM natriumkarbonaatti/1 M natriumkloridia, pH
10,0, 100 ml:11a 50 mM natriumfosfaatti/1 M natriumkloridia, pH 7,0, 100 ml :11a vettä ja 100 ml :11a 50 mM natrium-fosfaatti/1 M natriumkloridia, pH 7,0. Tällaisen pesemisen 5 jälkeen ei ollut havaittavissa radioaktiivisuutta pesuissa, ja > 50 % alkuperäisestä radioaktiivisesta entsyymistä oli liittynyt kantoaineeseen.
(a) Tarvittava entsyymimäärä
Tarvittava entsyymimäärä 30 - 70 ml plasman käsit-10 telemiseksi (saatu 60 - 150 ml:sta kokoverta) on 30 - 200 yksikköä n. 10 - 15 minuutin sekoittamisen jälkeen.
Mikäli käytetään agaroosia kantoainesideaineena, 30 - 200 U batroksobiinia aikaansaa silloittumattoman fib-riinin muodostumisen n. 7-20 minuutissa. Tässä menetel-15 mässä käytetään hydratsiiniaktivointia ja 0,25 - 1,0 g kuivaa agaroosia. Tässä tapauksessa ei vaadita jäljelle jääneiden vaikuttavien ryhmien suojaamista.
(b) Immobilisoidun entsyymin reaktio plasmafibri-nogeenin kanssa 20 Tavallisesti immobilisoidun entsyymin reaktio fib- '···' rinogeenin kanssa plasmassa toteutetaan seuraavasti: n.
...t 30 - 70 ml plasmaa lisätään tunnettuun määrään haluttua kantoainetta, joka sisältää immobilisoitua trombiinin kal-täistä entsyymiä. Suspensiota sekoitetaan varovasti (pyö-25 rösekoittimessa tai sekoittamalla käsin) n. 7-20 minuut-tia. Tänä aikana fibrinogeeni plasmassa on lohkaistu immobilisoidun entsyymin toimesta vapauttamaan fibrinopeptidi A ja/tai fibrinopeptidi B, mikä johtaa vetysitoutuneen fibriini I -polymeerin, vetysitoutuneen des BB -fibriini-. . 30 polymeerin tai vetysitoutuneen fibriini II -polymeerin ; ’· muodostumiseen, joista jokainen polymeeri on liittynyt immobilisoidun entsyymin kanssa.
• ' Kuten edellä on kuvattu, vetyyn sitoutunut fibrii- —: nipolymeeri on geelin muodossa ja voidaan ottaa talteen, 35 esimerkiksi sentrifugoimalla (3000 g:ssa 10 minuuttia) tai 22 1 106 1 6 suodattamalla (1 - 50 mikronin kalvosuodattimen läpi).
Tällainen talteenotto erottaa vetyyn sitoutuneen fibriini-polymeerin seerumista ja täten polymeeri väkevöityy.
Olisi otettava huomioon, että mikäli käytetään 5 trombiinin kaltaista entsyymiä plasmassa, mikä johtaa tekijän XIII aktivoitumiseen, on edullista, että plasmakoos-tumusta modifioidaan hetkellä, jolloin trombiinin kaltaista entsyymiä käytetään, niin että estetään silloittumaton fibriini, esim. silloittumaton fibriini I tai II muodos-10 tamasta silloittunutta fibriiniä, esim. silloittunutta fibriiniä I tai II. Tietenkin voi olla tarpeellista modifioida plasmakoostumusta, mikäli tällaista koostumusta käytetään fibriinipeiteaineena, välittömästi sen jälkeen kun fibrinogeeni on muuttunut silloittumattomaksi fibrii-15 niksi.
Plasmakoostumus voidaan modifioida silloittumatto-man fibriinin silloittumisen estämiseksi millä tahansa tunnetulla tai kehitteillä olevalla menetelmällä. Tämä voidaan toteuttaa suojaamalla endogeeninen trombiini, joka ... 20 voi aktivoida tekijän XIII, esim. hirudiini- tai trombii-
’···’ ni-inhibiiteillä, tai estämällä aktivoidun tekijän XIII
··.: toimintaa, esim. raskasmetallien (Hg) , tiomerosaalin tai inhiboivien vasta-aineiden avulla. Fibriinin I tai II silli loittuminen kalsiumionien läsnäoloa. Täten, mikäli kalsium 25 poistetaan plasmakoostumuksesta, fibriinin I tai II sil- loittuminen voidaan estää. Katso Carr et ai., J. Biochem., 239: 513 (1986); Kaminski et ai., J. Biol. Chem. 258: 10530 (1983) ja Kanaide et ai. 13: 229 (1982). Kalsium- kelaattoreita voidaan lisätä koostumukseen fibriinin I tai 30 II silloittumisen estämiseksi. Tällaiset kelaattorit si- “· * toutuvat kalsiumiin estäen täten silloittumisen. Mitä ta- hansa kalsiumkelaattoria voidaan käyttää. Ei-rajoittavia . ’ esimerkkejä kalsiumkelaattoreista ovat sitruunahappo, sak- kariinihappo, etyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA), · 35 nitrilotrietikkahappo (NTA), hydroksietyleenidiamiini-tri- • t > ( 23 110616 etikkahappo (HEEDTA), etyleenidiamiinidi-[o-hydroksifenyy-lietikkahappo] (EDDHA), etyleeniglykolibis(2-aminoetyyli-eetteri)tetra-etikkahappo (EGTA), dietyleenitriamiinipen-ta-etikkahappo (DTPA), 1, 2-diaminosykloheksaanitetraetik- 5 kahappo (DCTA), Ν,Ν-bishydroksietyyliglysiini, 4-(2-hyd-roksietyyli)-1-piperatsiinietaani-sulfonihappo (HEPES) ja N-hydroksietyyli-imino-dietikkahappo (HIMDA) ja niiden suolat, joista suolat sitruunahapon kanssa ovat edullisia.
Mitä tahansa soluviljelmää, joka pystyy erittämään 10 fibrinogeeniä, voidaan käyttää tässä keksinnössä. Fibrino-geeni soluviljelmässä voidaan muuttaa fibriinimonomeeriksi tai silloittumattomaksi fibriiniksi samoilla menetelmillä, kuten edellä on kuvattu suhteessa plasmaan. Kuitenkin, ennen tällaista konversiota, on edullista, että solujään-15 nös poistetaan.
Menetelmä voidaan toteuttaa seuraavasti: HEPG2-so-luja kasvatetaan ja pidetään kuten nisäkkään soluviljelmä standardikirjoituksissa on kuvattu. Katso myös Liu et ai., Cytotechnology, 5: 129 - 139 (1991). Solut istutetaan pul-20 loihin puoliintumissuhteella 1:4 - 1:8 pienimmässä tarvittavassa vähimmäismäärässä elatusnestettä (minimal essential medium) , jossa on 10 % vasikan seerumia ja joka puskuroidaan 5-%:isella CC>2:lla.
ti‘j 24 - 36 tunnin kasvun jälkeen 37 °C:ssa väliaine 25 poistetaan ja korvataan seerumi vapaalla väliaineella, joka » · sisältää sopivaa proteaasi-inhibiittiä ja 2 IU/ml hepa-riinia. Viljelyä jatketaan vielä 24 tuntia, mitä seuraa kolme peräkkäistä seerumivapaan väliaineen vaihdosta.
Väliainetta sentrifugoidaan 3000 g:ssa 10 minuut-30 tia kaiken solujäännöksen poistamiseksi ja kirkastunutta ‘ ylintä kerrosta, joka sisältää fibrinogeeniä, sekoitetaan varovasti trombiinin tapaisen entsyymin kanssa 4 - 5 tuntia. Edullisesti trombiinin tapainen entsyymi immobi-:.· lisoidaan. Suhde n. 1,0 ml - n. 50 ml kiinnitettyä ( * 35 agaroosi-trombiinin kaltaista entsyymiä/500 ml väliainetta 24 1 10616 on sopiva. Kuten edellä on kuvattu, kantoaineita, muita kuin agaroosia, voidaan käyttää. Saatu fibriinimonomeeri polymeroituu spontaanisti ja ympäröi immobiilisen kantoaineen.
5 Ylin keros, joka nyt ei sisällä fibrinogeeniä, de- kantoidaan kantoaine/fibriinigeelistä, joka sitten pestään peräkkäisesti neljällä vaihdolla NaCl-0,15 M, suhteessa n. 10 ml - n. 100 ml/1,0 ml alkuperäisen kiinnitetyn kanto-aineen tilavuutta. Sitten pesty geeli semi-dehydrataan 10 käyttäen sintrattua lasisuppiloa tyhjössä.
Soluviljelmien käyttö, jotka voivat erittää fibri-nogeeniä, on erityisen edullista, kun käytetään koostumusta, jossa on fibriinimonomeeriä. Tämä siksi, että uskotaan, että tällaista koostumusta voidaan käyttää fibriini-15 polymeerin muodostamiseksi, joka on hyödyllinen fibriini-peiteaineena, riippumatta siitä, onko fibriinipolymeeri täysin silloittunut. Täten, koska tällainen soluviljelmä ei sisällä tekijää XIII, joka on olennainen silloittumi-selle, ei mitään eksogeenistä tekijää XIII tarvitse lisätä 20 tehokkaan fibriinipeiteaineen aikaansaamiseksi.
“··· Silloittumaton fibriinikoostumus voidaan valmistaa myös rekombinanttifibrinogeenistä. Vasta viime aikoina fibrinogeeniä on valmistettu rekombinantti-DNA-tekniikoil-"l\‘ la. Katso S. Roy et ai., The Journal of Biological 25 Chemistry, 266: 4758 - 4763 (1991), jonka sisältö on lii-tetty tähän viitteenä. Roy et ai. vaikuttaa olevan ensimmäinen ryhmä ilmaisemaan kaikki kolme fibrinogeeniketjua ja he esittävät, että COS-solut ilmaisevat, järjestävät ja erittävät ketjut muodossa, joka pystyy muodostamaan trom-. 30 biini-indusoidun hyytymän. Saatua fibrinogeenikoostumusta * voidaan sitten käyttää koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibrii-niä, samoilla menetelmillä, kuten tässä edellä on kuvattu suhteessa soluviljelmiin, jotka erittävät fibrinogeeniä.
• 35 Kuitenkin on edullista, että ennen koostumuksen muodosta- 25 1106 1 6 mistä, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittuma-tonta fibriiniä, solujäännös poistetaan samoilla menetelmillä, kuten edellä on kuvattu suhteessa soluviljelmiin. Solujäännös voidaan poistaa sentrifugoimalla tai suodat-5 tamalla.
Rekombinanttifibrinogeenin käyttö on erityisen edullista, kun käytetään koostumusta, joka sisältää fib-riinimonomeeriä. Tämä siksi, että uskotaan, että tällaista koostumusta voidaan käyttää fibriinipolymeerin muodostami-10 seksi, joka on hyödyllinen fibriinipeiteaineena, riippumatta siitä, onko fibriinipolymeeri kokonaan silloittunut. Koska rekombinanttifibrinogeenisoluviljelmä ei sisällä tekijää XIII, joka on olennainen silloittumiselle, ekso-geenistä tekijää XIII ei tarvitse lisätä tehokkaan fibrii-15 nipeiteaineen aikaansaamiseksi.
Fibrinogeenin konversio silloittumattomaksi fib-riiniksi, esimerkiksi trombiinin tapaisen entsyymin toimesta, johtaa fibriinin muodostumiseen fibriinin vety-sitoutuneen polymeerin muodossa. Kuitenkin, kuten edellä on 20 käsitelty, on edullista, että koostumus, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, mikä on olennaista koostumuk-selle, joka sisältää fibriinimonomeeriä, on oligomeerises-sä tai monomeerisessä muodossa. Tämä voidaan toteuttaa liuottamalla koostumus, joka sisältää silloittumatonta : · 25 fibriiniä.
• t
Liuottaminen on erityisen edullista, kun silloit- « tumaton fibriini muodostuu trombiinin tapaisen entsyymin toimesta, joka on immobilisoitu kantoaineelle. Tämä johtuu siitä tosiasiasta, että trombiinin tapaisen entsyymin . 30 käyttö immobilisoituna kantoaineelle tavallisesti johtaa ’· ’ silloittumattomaan vety-sitoutuneeseen fibriinipolymee- riin, joka liittyy tällaiseen immobilisoituun entsyymiin.
» t Tämä siksi, koska on edullista, että kantoainetta ei ole aikaansaadussa koostumuksessa, liuottaminen mahdollistaa • * 35 myös koostumuksesta, joka sisältää silloittumatonta f ib- 26 1 10616 riiniä, kantoaineen poistamisen yhdessä immobilisoidun entsyymin kanssa.
Liuottaminen voidaan toteuttaa millä tahansa tunnetulla tai kehitteillä olevalla menetelmällä, jolla 5 aikaansaadaan fibriinimonomeeri. Liuottaminen voidaan toteuttaa saattamalla koostumus, joka sisältää silloit-tumatonta fibriiniä, kosketukseen sopivan happopusku-riliuoksen kanssa, edullisesti happopuskurin kanssa, jonka pH on alle n. 5 ja edullisesti n. 1 - n. 5. Ei-rajoittavia 10 esimerkkejä sopivista happopuskuriliuoksista ovat etikka-happo, meripihkahappo, glukoronihappo, kysteiinihappo, krotonihappo, itakonihappo, glutamiinihappo, muurahaishappo, asparagiinihappo, adipiinihappo ja niiden suolat, joista suolat meripihkahapon, asparagiinihapon, adipii-15 nihapon ja etikkahapon kanssa ovat edullisia ja edullisin on natriumasetaatti. On havaittu, että edulliset happo-puskurit toimivat huomattavasti tehokkaammin kuin muut testatut happopuskurit.
Edullinen happopuskuripitoisuus on n. 0,02 M - n. 20 1 M ja edullisimmin n. 0,1 M - n. 0,3 M. Tällainen edul- linen pitoisuus tekee koostumuksen ionivoimakkuuden biolo-gisesti kilpailukykyisemmäksi.
« ttt’| On edullista käyttää pienintä mahdollista happo- ·;' puskuritilavuutta, joka vielä liuottaa silloittumattoman » * « t 25 fibriinin vesipitoisen liuoksen muodostamiseksi, joka si- > · sältää fibriinimonomeeriä. Tämä johtaa vesipitoiseen liuokseen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, joka on hyvin väkevöitynyt fibriinimonomeerin suhteen. Tavallisesti tarvitaan n. 1 ml - n. 4 ml happopuskuria/n. 1 ml koostumus-30 ta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä.
*> ’ Happopuskuri sekoitetaan silloittumattoman fibrii- nin kanssa ja sekoitetaan sitten voimakkaasti n. 1 - 2 * » minuuttia täydellisen liukenemisen varmistamiseksi. Liuottaminen voidaan myös toteuttaa neutraalissa pHtssa kao-, . 35 trooppisen aineen avulla. Sopivia kaotrooppisia aineita 27 1 106 1 6 ovat urea, natriumbromidi, guanidiini hydrokloridi, KCNS, kaliumjodidi ja kaliumbromidi. Edullinen pitoisuus kao-trooppista ainetta on n. 0,2 - n. 6,0 molaaria ja edullisimmin n. 3,5 - n. 5,0 molaaria.
5 Kuten happopuskurin tapauksessa, on edullista käyttää mahdollisimman pientä määrää kaotrooppista ainetta, joka vielä liuottaa silloittumattoman fibriinin. Tavallisesti n. 1,0 ml - n. 1,5 ml kaotrooppista ainetta/n. 1 ml koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibrii-10 niä, tarvitaan.
Kaotrooppinen aine sekoitetaan tällaisen koostumuksen kanssa ja sitä sekoitetaan sitten voimakkaasti n. 1-2 minuuttia täydellisen liukenemisen varmistamiseksi.
Tämän mukaisesti liuottaminen johtaa koostumuk-15 seen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, ja erityisesti vesipitoiseen liuokseen, joka sisältää fibriinimonomeeriä. On edullista, että fibriinimonomeeripitoisuus vesipitoisessa liuoksessa ei ole pienempi kuin n. 10 mg/ml, edullisemmin n. 20 mg/ml - n. 200 mg/ml, vielä edullisemmin n. 20 20 mg/ml - n. 100 mg/ml ja edullisimmin n. 25 mg/ml - n.
·“" 50 mg/ml.
····' Mikäli käytetään trombiinin kaltaista entsyymiä immobilisoituneena kantoaineelle, tämä johtaa siihen, että tällaista entsyymiä on läsnä koostumuksessa, joka sisältää : · : 25 silloittumatonta fibriiniä, liuottamisen jälkeen immobili- ;Y; soitu entsyymi voidaan poistaa koostumuksesta, joka sisäl tää fibriinimonomeeriä. Tämä voidaan toteuttaa esimerkiksi suodattamalla minkä tahansa sopivan suodattimen läpi, joka voi erottaa entsyymin. Sopivia suodattimia ovat sintrattu . , 30 polypropyleeni 20 mikronin huokoskoon suodatin Porex · Incrstä, teflon 20 - 70 mikrohuokoskoon suodatin Fluoro- techniques Incrstä tai nailon 66 22 - 46 mikronin huokos-"· : koon suodatin Costar Incrstä.
Vaihtoehtoinen menetelmä sen varmistamiseksi, että 35 trombiinin kaltaista entsyymiä, esim. batroksobiinia, ei 2β 110616 ole läsnä koostumuksessa, joka sisältää fibriinimonomee-riä, on käyttää liukoista trombiinin kaltaista entsyymiä järjestelmässä ja poistaa entsyymi, mitä seuraa fibriini vetyyn sitoutuneen polymeerin liuottaminen. Entsyymin 5 poistaminen voidaan toteuttaa käyttäen affiniteettiside- ainetta, esim. ligandia, joka on sitoutunut inerttiin kan-toaineeseen, jolla on spesifinen affiniteetti trombiinin kaltaiselle entsyymille, tai ioninvaihtoa tai hydrofobista vuorovaikutuskantoainetta tai tehokkaimmin käyttäen avi-10 diini-biotiinijärjestelmää. Biotiini-avidiini-vuorovai- kutuksella on eräs voimakkaimmista ei-kovalenttisista sitoutumisvakioista (Kdis = 10"15M) havaittuna luonnossa.
Katso E. A. Bayer ja M. Wilchek, Methods of Biochemical Analysis, 26: 1 (1980).
15 Tässä menetelmässä biotiini on kovalenttisesti si toutunut esimerkiksi batroksobiiniin ja biotiini-batrokso-biinikonjugaatti (joka on liukoinen) saatetaan välittömästi reagoimaan plasman kanssa, esim. 10 BU plus 50 ml plasmaa saatetaan reagoimaan 37 °C:ssa 10 minuuttia. Muodostu-20 nut fibriini I polymeeri otetaan talteen sentrifugoimalla ’··* tai suodattamalla ja liuotetaan uudestaan n. 4 ml: aan ···· 0,2 M natriumasetaattia, pH 4,0, joka sisältää 30 mM kal- siumkloridia. Fibriini I -liuokseen lisätään sitten mooli-ylimäärä avidiinia liitettynä inerttiin kantoaineeseen, j * : 25 kuten agaroosiin. Sitten agaroosi:avidiini:biotiini-bat- ;Y; roksobiinikompleksi erotetaan fibriini I:stä sentrifugoi malla tai suodattamalla aikaansaaden koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, joka on pääosin vapaa batrok-sobiinista ja joka voidaan uudelleenpolymeroida, kuten . . 30 edellä on kuvattu, muodostamaan fibriinipeiteaine.
; Tämän mukaisesti tämän keksinnön eräässä toteutus- muodossa fibriinimonomeeriä sisältävä koostumus on oleel-” ‘ lisesti vapaa trombiinin kaltaisesti entsyymistä. Oleelli- sesti vapaalla tarkoitetaan joko sitä, että kaikki trom-35 biinin kaltainen entsyymi on poistettu, tai sitä, että 29 1 10616 koostumuksessa mahdollisesti jäljellä olevaa trombiinin kaltaista entsyymiä on pitoisuuksina, jotka ovat riittämättömiä aiheuttamaan haitallista farmakologista vaikutusta. Siten tämän keksinnön mukaan koostumukset, joiden 5 halutaan olevan "oleellisesti vapaita", voivat sisältää trombiinin kaltaista entsyymiä määrinä, jotka ovat noin 0 - 10 % alkuperäisestä entsyymistä ja edullisesti noin 0 - 2 % fibriinimonomeerikoostumuksen valmistukseen käytetystä trombiinin kaltaisesta entsyymistä.
10 Vaikka nämä toteutusmuodot kuvaavat koostumuksia, joissa trombiinin kaltainen entsyymi on poistettu sen jälkeen, kun on saavutettu haluttu konversio liukoiseksi fib-riiniksi, uskotaan, että myös koostumukset, joissa on jäljellä kaikki trombiinin kaltainen entsyymi tai suurin osa 15 siitä, ovat käyttökelpoisia ja ne ovat siten osa tätä keksintöä .
Koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä, on nyt valmis käytettäväksi aineosana fibriinipeiteaineessa. On havaittu, että kun tällainen koostumus valmistetaan 20 kokoverestä, n. 60 - n. 90 % alkuperäisestä fibrinogee- '*·· nistä on läsnä koostumuksessa, mutta tietenkin fibriini- ···.' monomeerin muodossa.
Koostumusta, joka sisältää f ibriinimonomeeriä, voidaan välittömästi käyttää sen valmistuksen jälkeen.
:’·*· 25 Tosiasiassa on erityisen edullista käyttää tällaista koos- * « tumusta välittömästi sen valmistuksen jälkeen, kun koostumus on autologinen. Mikäli koostumusta ei käytetä välittömästi sen valmistuksen jälkeen, koostumus voidaan varastoida. Koostumuksen varastointi vaatii, että koostumus on . 30 suojattu, esimerkiksi jäädyttämällä tai lyofilisoimalla * koostumus, tai pitämällä koostumus 4 °C:ssa. Uskotaan, että jäädytetty tai lyofilisoitu koostumusmuoto on stabiili kuukausia. Kun koostumusta pidetään 4 °C:ssa, uskotaan, että koostumus on stabiili ainakin päivien ajan.
35
* I
30 1 10616
Mikäli koostumus on jäädytetty, koostumus on sulatettava käyttöäjankohtana. Mikäli koostumus on lyofilisoi-tu, on edullista, että käyttöäjankohtana koostumus muodostetaan uudestaan lisäämällä samaa happopuskuria, jota käy-5 tettiin liuottamisvaiheessa, mikäli happo oli haihtuva, esim. etikkahappoa, tai mikäli kaotrooppista ainetta käytettiin, lisäämällä tislattua vettä. Kuten liuottamisvaiheessa, uudelleenmuodostamisessa tulisi käyttää mahdollisimman pientä määrää happopuskuriliuosta tai tislattua 10 vettä, johon monomeeri vielä liukenee. Tosiasiassa lyofi-lisoidun koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, uudelleenmuodostaminen voi johtaa fibriinimonomeeriä sisältävään vesipitoiseen liuokseen, jossa tällaisen mono-meerin pitoisuus on jopa 200 mg/ml. Ennen lyofilisointia 15 voidaan bulkkiainetta, esim. mannitolia tai laktoosia, lisätä koostumukseen. Vaihtoehtoisesti lyofilisoitua koostumusta voidaan käyttää lyofilisoidussa muodossa. Tällainen muoto on erityisen edullinen, kun apuaineita, esim. antibiootteja, halutaan lisätä koostumukseen.
... 20 Koostumus, joka sisältää f ibriinimonomeeriä, voi ’··; käytännössä olla missä tahansa muodossa, esimerkiksi ••d liuoksena, suspensiona, emulsiona tai kiinteänä aineena, joista liuos on edullinen. Täten tällainen koostumus voi olla esimerkiksi neste, geeli, tahna tai voide. Tietenkin : * : 25 koostumus voi olla myös granulaatin muodossa, esimerkiksi jV lyofilisoitu fibriinimonomeeri, jota voidaan, mutta ei i välttämättä, käsitellä liuoksen, emulsion tai suspension muodostamiseksi välittömästi ennen käyttöä.
Mitä tahansa liuotinta voidaan käyttää liuoksen . 30 mudostamiseksi, mutta on tietenkin edullista, että liuotin on ei-myrkyllinen. Ei-rajoittavia esimerkkejä liuottimista ovat vesi, etyylialkoholi, glyseroli ja propyleeniglykoli, joista vesi on edullinen.
Esimerkki suspensiosta on koostumus, joka sisältää , ·/ 35 fibriinimonomeeriä, joka voidaan sekoittaa orgaanisten * * » • M » 3i 110616 liuottimien, esim. etanolin kanssa, muodostamaan etanolin loppupitoisuus, joka on yli 3,0 M, ja ravistellaan. Fib-riinimonomeeri saostuu ja voidaan ottaa talteen sentrifu-goimalla. Sakka tulisi pestä orgaanisella faasilla vesip-5 itoisen liuoksen poistamiseksi, jota käytettiin liuot-tamisvaiheessa. Etanolipitoinen suspensio monomeeristä fibriiniä voidaan sitten levittää suoraan siteelle tai muulle kantoaineelle tai käyttää jopa suoraan haavakohdassa. Orgaanisen faasin annetaan haihtua. Siteen tai muun 10 kantoaineen tapauksessa suspensio voidaan hydrata uudestaan saattamalla kosketukseen levityskohdan kanssa tai jollakin muulla tavalla ja fibriinin annetaan polymeroi-tua.
Vaihtoehtoisesti orgaaninen suspensio, joka sisäl-15 tää fibriinimonomeeriä, valmistettuna hyvin haihtuvaan faasiin, esim. dietyylieetteriin, voidaan sumuttaa ja kuljettaa suihkesuspensiona haluttuun kohtaan. On edullista, että haihtuva faasi on syttymätön. On mahdollista, että orgaaninen suspensio, joka sisältää fibriinimonomeeriä, 20 voidaan kuljettaa korvaan, nenään, nieluun tai keuhkoihin '·; suihkeena tai hengittämällä, tai kuljettaa vertavuotavaan . · ····' ruokatorveen tai mahalaukun vammaan nauttimalla.
Tässä kuvattua fibriinipeiteainetta käytetään saattamalla haluttu kohta kosketukseen koostumuksen kans- • · » | ' 25 sa, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta :V fibriiniä, ja muutetaan fibriinimonomeeri fibriinipolymee- » riksi tai silloittumaton fibriini silloittuneeksi fibrii-niksi rinnakkaisesti mainitun kontaktivaiheen kanssa, muodostaen täten fibriinipeiteaineen.
. 30 Tässä yhteydessä käytettynä "haluttu kohta" tar- i · |f> koittaa kohtaa, johon halutaan muodostaa fibriinipeite- ’·· ( aine. Mikä, tai missä haluttu kohta on, riippuu f ibriini peiteaineen käytöstä. Tulisi myös huomata, että uskotaan, että fibriinipeiteainetta voidaan käyttää ei pelkästään , 35 ihmisissä vaan myös muissa nisäkkäissä. Myös, mikäli fib- i t ! I » * 32 1 106 1 6 riinipeiteaineen lähde on veri, on edullista, mutta ei olennaista, että veri saadaan samasta lajista, jossa fibriinipeiteainetta käytetään.
Mainittua fibriinipeiteainetta voidaan käyttää 5 mitä tahansa käyttöä varten, joka on tunnettu tai kehitteillä fibriinipeitteaineille. Tässä esitettyjä menetelmiä, pakkauksia tai fibriinipeiteainetta voidaan käyttää kudosten tai elinten yhdistämisessä, veren vuodon pysäyttämisessä, haavojen parantamisessa, leikkaushaavan sulke-10 misessa, käytössä verisuonileikauksessa, mukaanlukien verenvuodon tyrehdyttäminen distaalisen sydänvaltimon yhdistämisen ompeleista; pistohaavaverenvuodot; sydämen vasemman kammion ompeleet; aortan avaamis- ja kanyylikohdat; tihkuvat sydänlihaksen leikkausvuodot ja tihkuminen veri-15 suonista, esim. eteiseen, onttolaskimoon tai oikeaan kammioon. Keksinnöstä on myös hyötyä suljettaessa dakronilla valtimokudokset ennen kudoksen siirtoa, sulkemaan kudoksia kehon ulkopuolella, muodostamaan fibriinisiirteitä solukasvulle, pysäyttämään verenvuotoa vaurioituneesta 20 pernasta (täten pelastaen elimen), maksasta ja muista '·; peruskudokseen liittyvistä elimistä; sulkemaan henkitorven ja keuhkoputken liitoskohdat ja keuhkojen ilmavuodot tai ...: repeämät, keuhkoputken typistykset, keuhkoputken avanteet ..(· ja ruokatorven avanteet; parantamaan ompelemattomat saumat | 25 ("zipper"-menetelmä) ja käytettäväksi aivojen sisäisessä AVMrn, maksan AVM:n verisuoniradiologiassa, paksusuolen angiodysplasiassa, ruokatorven suonikohjuissa, mahalaukun ja ohutsuolen veren vuodon, joka johtuu mahahaavasta, pumppauksessa jne. Tämä keksintö on lisäksi hyödyllinen . . 30 verenvuodon pysäyttämisessä sarveiskalvon siirteissä, nenäverenvuodossa, nielurisojen poistossa, hampaiden pois-'·· _ tossa ja muissa sovellutuksissa. Katso G. F. Gestrin ja R.
'·· · Lermer, Vascular Surgery, 294 - 304, syyskuu/lokakuu, 1983. Tässä kuvattu fibriinipeiteaine on myös erityisen . V 35 sopiva yksilöille, joilla on koagulaatiohäiriöitä.
33 1 106 1 6
Koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai koostumuksen, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, annos riippuu fibriinipeiteaineen erityisestä käytöstä, mutta annoksen tulisi olla vaikuttava määrä sen tarkoi-5 tetun suorituksen aikaansaamiseksi. Yleensä koostumukselle, joka sisältää fibriinimonomeeriä vesipitoisessa liuoksessa, uskotaan, että n. 3 ml - n. 5 ml tällaista koostumusta on riittävä ollakseen tehokas fibriinipeiteaine. Kuitenkin, riippuen koostumuksen käytöstä, annosalue voi 10 vaihdella alueella n. 0,05 ml - n. 40 ml. Mikäli käytetään koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä po-lymeerimuodossa tai koostumus on kiinteässä muodossa, silloin koostumuksen tulisi sisältää fibriiniä se määrä, joka on tällaisessa vesipitoisessa liuoksessa.
15 Tässä yhteydessä fibriinimonomeerin muuttaminen fibriinipolymeeriksi tai silloittumattoman fibriinin muuttaminen silloittuneeksi fibriiniksi "rinnakkaisesti" mainitun kontaktivaiheen kanssa tarkoittaa, että tällainen konversiovaihe ja tällainen kontaktivaihe tapahtuvat 20 jokaisen vaiheen ajanjakson sisällä, niin että muodostuu ·*;’ f ibriinihyytymä haluttuun kohtaan. Täten rinnakkaisesti ····' voi tarkoittaa, että kontaktivaiheen jälkeen, fibriini- ...: monomeeri muutetaan f ibriinipolymeeriksi tai silloit- tumaton fibriini muutetaan silloittuneeksi fibriiniksi. j ‘ : 25 Tämä toteutetaan saattamalla koostumus, joka sisältää :V; fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä, sen jälkeen kun tällainen koostumus on levitetty haluttuun kohtaan, kosketukseen koostumuksen kanssa, joka voi muuttaa fibriinimonomeerin fibriinipolymeeriksi tai . . 30 silloittumattoman fibriinin silloittuneeksi fibriiniksi.
Konversiovaiheen tulisi yleensä tapahtua n. 0,5 minuutin kuluttua kontaktivaiheesta. Muuten koostumus, joka sisäl-· ’ tää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä, erityisesti mikäli silloittumaton fibriini on fibriinimo-35 nomeeri, voi valua pois halutusta kohdasta.
• » 3< 110616
Rinnakkaisesti voi myös tarkoittaa, että kontakti-vaihe ja muuttamisvaihe tapahtuvat samanaikaisesti. Tämä toteutetaan saattamalla haluttu kohta kosketukseen koostumuksen kanssa, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai sil-5 loittumatonta fibriiniä, samaan aikaan kun tällainen koostumus on kosketuksessa koostumuksen kanssa, joka voi muuttaa fibriinimonomeerin fibriinipolymeeriksi tai silloit-tumattoman fibriinin silloittuneeksi fibriiniksi.
Lopuksi ja edullisesti rinnakkainen voi myös tar-10 koittaa, että konversiovaihe voi alkaa ennen kontaktivai-hetta, vaikkakaan ei niin paljon ennen kontaktivaihetta, että kaikki fibriinimonomeeri on muuttunut fibriinipolymeeriksi tai kaikki silloittumaton fibriini on muuttunut silloittuneeksi fibriiniksi. Muuten kaikki fibriinimono-15 meeristä muuttuu fibriinipolymeeriksi tai kaikki silloit-tumattomasta fibriinistä muuttuu silloittuneeksi fibriiniksi ennen kontaktivaihetta, mikä johtaa hyvin huonoon fibriinipeiteaineeseen. Tämä suoritusmuoto toteutetaan sekoittamalla koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä 20 tai silloittumatonta fibriiniä, koostumuksen kanssa, joka '** voi muuttaa fibriinimonomeerin fibriinipolymeeriksi tai silloittumattoman fibriinin silloittuneeksi fibriiniksi, ennen kontaktivaihetta. Koska konversiovaiheen loppuun-vieminen kestää n. 30 sekuntia, konversiovaihe ei saisi ] \ 25 alkaa enempää kuin n. 30 sekuntia, ja edullisesti ei enem- pää kuin n. 3 sekuntia ennen kontaktivaihetta. Tämä suoritusmuoto on edullinen, koska se varmistaa, että maksimimäärä koostumuksessa olevaa fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä pysyy halutussa kohdassa ja muo-. 30 dostaa myös erinomaisen fibriinipeiteaineen.
Fibriinimonomeerin konversio fibriinipolymeeriksi *·; _ tai silloittumattoman fibriinin konversio silloittuneeksi '*· fibriiniksi voidaan toteuttaa millä tahansa tunnetulla tai ;··,’ kehitteillä olevalla menetelmällä. Kuitenkin se miten kon- , V 35 versiovaihe toteutetaan, riippuu koostumuksen lähteestä,
* * I I
35 1 106 1 6 joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fib-riiniä, esim. kokoverestä tai rekombinanttifibrinogeenis-tä, fibriinimonomeerin tai silloittumattoman fibriinin, esim. fibriinin I tai des BB -fibriinin muodosta ja vähem-5 mässä määrin siitä, sisältääkö haluttu kohta potilaiden verta tai muita kehon nesteitä fibriinipeiteaineen käyttö-ajankohtana .
Myös, mikäli erillistä koostumusta, kuten emäksistä puskuria, käytetään (käsitelty seuraavassa) konver-10 siovaiheelle, silloin tässä kuvattu menetelmä voidaan toteuttaa esimerkiksi kahden säiliön käsipumpulla. Kak-soissäiliökäsipumppu voi olla Y-muotoinen mahdollistaen täten koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä, ja koostumuksen, jota käyte-15 tään konversiovaiheessa, sekoittumisen seokseksi välittömästi ennen kontaktivaihetta. Myös, mieluummin kuin Y-muotoista kaksoissäiliökäsipumppua, voidaan käyttää kaksoissäiliökäsipumppua, jossa on kaksi aukkoa. Tämä mahdollistaa sen, että kosketukseen saattaminen haluttuun 20 kohtaan ja konversio fibriinipolymeeriksi tai silloit- ") tuneeksi fibriiniksi tapahtuvat samanaikaisesti. Koostu- ····’ mukset kahden säiliön käsipumpusta voidaan myös suihkuttaa » · · haluttuun kohtaan. Katso H.B. Kram et ai., The American ..,‘1 Surgeon, 57: 381 (1991).
• · · | ' · 25 Mikäli koostumuksen lähde, joka sisältää fibriini- monomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä, on veri, kuten edellä on esitetty, uskotaan, että koostumuksessa pysyy tarpeeksi protrombiinia, tekijää XIII ja muita tarpeellisia aineita tällaisen fibriinimonomeerin tai silloittumat- . 30 toman fibriinin muuttamiseksi silloittuneeksi fibriiniksi, « * esim. protrombiinin aktivaattoreita. Mikäli silloittuma-( ton fibriini on fibriinipolymeeri, ts. silloittumaton fib- riini ei ole liuennut, silloittumaton fibriini voidaan ;· muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi aktivoimalla protrom- , ·,’ 35 biini ja tekijä XIII tällaisessa koostumuksessa muodosta-
»III
36 1 10616 maan silloittunut fibriini. Tällainen aktivointi voidaan toteuttaa saattamalla koostumus kosketukseen kalsiumionien lähteen kanssa. Ei-rajoittavia kalsiumionien lähteitä ovat kalsiumkloridi, edullisesti pitoisuutena 30 mM. Vaihtoeh-5 toisesti ja vähemmän edullisesti kalsiumioneja voidaan lisätä veren mukana haluttuun kohtaan.
Mikäli silloittumaton fibriini on liuennut, ts. on fibriinimonomeeri, se miten fibriinimonomeeri muuttuu sil-loittuneeksi fibriiniksi riippuu siitä, kuinka liuottami-10 nen toteutettiin. Mikäli silloittumaton fibriini liuotettiin happopuskurilla, silloittunut fibriini voi muodostua nostamalla koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, pH:ta niin, että tällainen fibriinimonomeeri voidaan poly-meroida. Tämä voidaan toteuttaa saattamalla koostumus kos-15 ketukseen minkä tahansa emäksisen puskurin kanssa. Ei-ra-joittavia esimerkkejä sopivista emäspuskureista ovat HEPES, natriumhydroksidi, kaliumhydroksidi, kalsiumhydrok-sidi, bikarbonaattipuskurit, kuten natriumbikarbonaatti ja kaliumbikarbonaatti, sitruunahapon tri-metallisuolat, ... 20 etikkahapon suolat ja rikkihapon suolat. Edullisia emäs- puskureita ovat: 0,5 - 0,75 M natriumkarbonaatti/bikarbo- ···· naatti, pH 10 - 10,5, 0,5 - 0,75 M natriumbikarbonaat- » ...: ti/NaOH, pH 10,0, 1,5 M glysiini/NaOH, pH 10,0, 0,5 -
1,0 M bishydroksietyyliaminoetaani sulfonihappo (BES) , pH
25 7,5, IM hydroksietyylipiperatsiinipropaani sulfonihappo (EPPS) , pH 8,5, 0,5 M trisiini, pH 8,5, IM morfolinopro- paani sulfonihappo (MOPS), pH 8,0, IM trishydroksimetyy- liaminoetaani sulfonihappo (TES), pH 8,0 ja 0,5 M syklo- heksyyliaminoetaani sulfonihappo (CHES), pH 10,0; joista . 30 0, 5 - 0, 75 M natriumkarbonaatti/bikarbonaatti, pH 10 - « · 10,5, 0,5 - 1,0 M bishydroksietyyliaminoetaani sulfonihap-'·; po (BES), pH 7,5, IM hydroksietyylipiperatsiinipropaani ··* sulfonihappo (EPPS), pH 8,5 ja 1 M trishydroksimetyyli- ·;· aminoetaani sulfonihappo (TES), pH 8,0, ovat edullisimpia.
: :· 35 I I ♦ * 37 1 106 1 6 Käytetyn emäspuskurin määrän tulisi olla riittävä silloittumattoman fibriinin polymeroimiseen. On edullista, että n. 10 osaa - n. 1 osa koostumusta, joka sisältää fib-riinimonomeeriä, sekoitetaan n. 1 osan kanssa emäspusku-5 ria. On jopa edullisempaa, että tämä suhde on n. 9:1. Tu lisi huomata, että edullinen suhde riippuu puskurin valinnasta ja fibriinipolymeerin halutusta "voimakkuudesta". Tietenkin fibriinipolymeerin haluttu voimakkuus riippuu fibriinipeiteaineen lopullisesta käytöstä.
10 Mikäli liuottaminen toteutetaan ilman kaotroop- pista ainetta, fibriinimonomeeri voidaan muuttaa silloit-tuneeksi fibriiniksi laimentamalla koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä, esimerkiksi tislatulla vedellä. Laimennus tulisi toteuttaa niin, että käytetään pienintä 15 mahdollista määrää laimenninta. Tavallisesti saadun kaotrooppisen pitoisuuuden laimennuksen jälkeen tulisi olla n. 0,5 - n. 0,1 molaaria.
Koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, kaotrooppisen aineen laimentamisen tai pH: n nostamisen 20 lisäksi on edullista, että tällaisen koostumuksen protrom-biini ja tekijä XIII aktivoidaan muodostamaan silloittunut • * fibriini. Tällainen aktivointi voidaan toteuttaa saatta- i · maila koostumus kosketukseen kalsiumionien lähteen kanssa.
,.i| Kalsiumionien lähde voi muodostaa osan emäspuskurista tai 1 > · 25 osan happopuskurista, joita käytetään liuottamisvaiheessa. Ei-rajoittavia kalsiumionien lähteitä on kalsiumkloridi, edullisesti pitoisuutena 30 mM. Vaihtoehtoisesti, eikä yhtä edullisesti, kalsiumionien lähde voidaan saada veren mukana halutussa kohdassa.
. 30 Tulisi huomata, että mikäli emäspuskuri on karbo- naatti/bikarbonaattipuskuri, kalsiumionien lähdettä on li-’·; _ sättävä happopuskuriin liuottamisvaiheen aikana. Tämä joh tuu siitä tosiasiasta, että kalsiumkloridi ei ole liukoi-;·· nen karbonaatti/bikarbonaattipuskuriin. On edullista, että 35 I · » » 38 110616 kalsiumionien pitoisuus happopuskuriliuoksessa on 5 mM -n. 150 mM ja edullisemmin n. 5 mM - n. 50 mM.
Uskotaan, että saatu fibriinipeiteaine on silloit-tunut fibriini II, riippumatta siitä mitä muotoa silloit-5 tumatonta fibriiniä, ts. fibriinimonomeeriä tai fibriini-polymeeriä on läsnä. Kuitenkin, mikäli silloittumattoman fibriinin muoto on des BB -fibriini, uskotaan, että lisäksi tarvitaan lisälähde trombiinia des BB -fibriinin muuttamiseksi silloittuneeksi fibriiniksi. Tällainen trombii-10 nilähde voi olla esimerkiksi potilaan plasma, jolloin tällaista plasmaa lisätään koostumukseen, joka sisältää sil-loittumatonta fibriiniä.
Mikäli haluttu kohta sisältää verta ja käytetään koostumusta, joka sisältää fibriinimonomeeriä, ts. sil-15 loittumaton fibriini on liuennut, silloin tätä verta voidaan käyttää kaotrooppisen aineen laimentimena koostumuksen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, pH:n nostamiseksi. Täten ei tarvitse käyttää laimenninta tai emäspuskuria. Tässä suoritusmuodossa on edullista, että kalsiumionien .. 20 lähde sisältyy happopuskuriin tai kaotrooppiseen ainee- ,i' seen, jota käytetään liuottamisvaiheessa. Tässä suoritus- ··! muodossa koostumus, joka sisältää f ibriinimonomeeriä, voi- » daan panna kiinteälle kantoaineelle, esim. siteelle, ompe- t ,,U leelle tai proteesille, jotka ovat kosketuksessa halutun ·’ 25 kohdan kanssa. Tällainen kantoaine pidetään sitten koske- tuksessa halutun kohdan kanssa niin kauan, että esimerkiksi muodostuu fibriinipeiteaine.
Kuitenkin tulisi huomata, että mikäli koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä, ei sisällä riittävästi , 30 protrombiinia ja tekijää XIII silloittuneen fibriinin muo- dostamiseksi, tällainen koostumus on kuitenkin hyödyllinen fibriinipeiteaineena, koska fibriinimonomeerin polymeri- • · sointi on sinänsä hyödyllistä fibriinipeiteaineen muodos-tamiseksi. Tällaista koostumusta voidaan myös käyttää sil-•y 35 loittuneen fibriinin muodostamiseksi lisäämällä kalsium-
‘ » i I I I I
39 110616 ionien lähdettä ja aktivointitekijää XIII (tai aktivoidun tekijän XIII prekursoreita) ja valinnaisesti trombiinia. Tällaisten kalsiumionien lähdettä, aktivoitua tekijää XIII ja trombiinia voidaan lisätä koostumuksiin, jotka sisältä-5 vät fibriinimonomeeriä. Aktivointitekijää XIII voidaan lisätä koostumukseen, joka sisältää fibriinimonomeeriä, loppupitoisuudeksi n. 1,0 - n. 20 yksikköä tekijää XIII/ml koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä. Vaihtoehtoisesti tekijää XIII voidaan lisätä veren tai 10 kehon nesteiden mukana haluttuun kohtaan tai lisäämällä autologista plasmaa koostumukseen, joka sisältää fibriinimonomeeriä. Ei-rajoittavia esimerkkejä kalsiumioneista ovat kalsiumkloridi, edullisesti pitoisuutena 30 mM. Vaihtoehtoisesti, eikä yhtä edullisesti, kalsiumioneja voidaan 15 lisätä veren tai kehon nesteiden mukana haluttuun kohtaan. N. 4 yksikköä - n. 500 yksikköä trombiinia/ml koostumusta, joka sisältää fibriinimonomeeriä, voidaan lisätä, tai trombiinia voi muodostua halutussa kohdassa.
Mikäli koostumuksen, joka sisältää silloittuma-20 tonta fibriiniä, lähde on soluviljelmät, jotka erittävät fibrinogeeniä tai rekombinanttifibrinogeeniä, ja silloit-····’ tumaton fibriini on fibriinipolymeeri, ts. silloittumaton fibriini ei ole liuennut, silloin on käytettävä kalsium-ionien lähdettä ja aktivointiteki jää XIII (tai aktivoidun j 25 tekijän XIII prekursoreita) silloittuneen fibriinin muo- ;Y: dostamiseksi. Tekijää XIII on käytettävä, koska nämä sil- loittumattoman fibriinin lähteet eivät sisällä lainkaan tekijää XIII. Aktivoitua tekijää XIII voidaan lisätä koostumukseen, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, lop-. . 30 pupitoisuudeksi n. 1,0 - n. 20 yksikköä tekijää XIII/ml koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä. Vaihtoehtoisesti tekijää XIII voidaan lisätä veren tai ’ · kehon nesteiden mukana haluttuun kohtaan tai lisäämällä · autologista plasmaa koostumukseen, joka sisältää , 35 silloittumatonta fibriiniä. Ei-rajoittavia kalsiumionien 40 1 10616 lähteitä ovat kalsiumkloridi, edullisesti pitoisuutena 30 mM. Vaihtoehtoisesti, eikä yhtä edullisesti, kalsiumioneja voidaan lisätä veren tai kehon nesteiden mukana haluttuun kohtaan. Myös, vaihtoehtoisesti, trombiinia voidaan lisätä 5 tällaiseen koostumukseen silloittuneen fibriinin II mudostumisen varmistamiseksi. N. 4 yksikköä - n. 500 yksikköä trombiinia/ml koostumusta, joka sisältää silloit-tumatonta fibriiniä, voidaan lisätä tai trombiini voi muodostua halutussa kohdassa.
10 Mikäli silloittumaton fibriini on liuennut, ts. on fibriinimonomeeri, se miten fibriinimonomeeri muutetaan fibriinipolymeeriksi riippuu siitä, kuinka liuottaminen toteutettiin, esim. happopuskurilla tai kaotrooppisella aineella. Fibriinipolymeerin muodostaminen voidaan toteut-15 taa samoilla menetelmillä kuin edellä on kuvattu. Tämä fibriinipolymeeri, haluttaessa, voidaan sitten muuttaa silloittuneeksi fibriiniksi lisäämällä kalsiumionien lähdettä ja aktivoitua tekijää XIII (tai aktivoidun tekijän XIII prekursoreita) silloittuneen fibriinin muodostamisek-20 si, ja, valinnaisesti trombiinia koostumukseen, joka si- I sältää fibriinimonomeeriä, kuten edellä on kuvattu. Teki- ···· jää XIII on käytettävä, koska nämä silloittumattoman fib- · riinin lähteet eivät sisällä lainkaan tekijää XIII. Akti- . voitua tekijää XIII voidaan lisätä koostumukseen, joka 25 sisältää silloittumatonta fibriiniä, loppupitoisuudeksi n.
1,0 - n. 20 yksikköä tekijää XIII/ml koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä. Vaihtoehtoisesti tekijää XIII voidaan lisätä veren tai kehon nesteiden mukana haluttuun kohtaan tai lisäämällä autologista plasmaa koos-. 30 tumukseen, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä. Ei- rajoittavia kalsiumionien lähteitä ovat kalsiumkloridi, ’·; % edullisesti pitoisuutena 30 mM. Vaihtoehtoisesti, eikä “· ' yhtä edullisesti, kalsiumioneja voidaan lisätä veren tai :··* kehon nesteiden mukana haluttuun kohtaan. Myös, vaihtoeh- . 35 toisesti, trombiinia voidaan lisätä tällaiseen koostumuk- 41 110616 seen silloittuneen fibriinin II mudostumisen varmistamiseksi. N. 4 yksikköä - n. 500 yksikköä trombiinia/ml koostumusta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, voidaan lisätä tai trombiini voi muodostua halutussa kohdassa.
5 Tässä kuvattu fibriinipeiteaine voi sisältää myös apuaineita, esimerkiksi antibiootteja, esim. gentamysii-niä, kefotaksiimia, nebasetiinia ja sisomisiiniä, histamiini H2 -antagonisteja, esim. ranitidiiniä ja syöpää vastustavia lääkkeitä, esim. OK-432. Tämä voidaan toteut-10 taa lisäämällä haluttu antibiootti koostumukseen, joka sisältää fibriinimonomeeriä tai silloittumatonta fibriiniä. Katso M. C. H. Gersdorff ja T. A. J. Robillard, Laryngoscope, 95: 1278 - 80 (1985); A. Ederle et ai., Ital. J. Gastroenterol., 23: 354 - 56 (1991); V. Ronfard 15 et ai., Burns, Γ7: 181 - 84 (1991); T. Sakurai et ai., J.
Control. Release, 18: 39 - 43 (1992); T. Monden et ai.,
Cancer, 69: 636 - 42 (1992); F. Greco, J. of Biomedical Materials Research, 25: 39 - 51 (1991) ja H.B. Kram et ai., Journal of Surgical Research, 50: 175 - 178 (1991), ... 20 joiden sisällöt on liitetty tähän viitteinä. Muita apuai- *" neita voidaan myös lisätä, kuten esimerkiksi fibronektii- niä, fibrinolyyttisiä inhibiittejä, kuten aprotiiniä, ai- * · ψ f a-2-atiplasmiinia, PAI-1, PAI-2, 6-aminoheksanoiinihap-poa, 4-aminometyylisykloheksanoiinihappoa, kollageeniä tai 25 keratinosyteesiä. Uskotaan, että tällaisen apuaineen annos on sama, jota käytetään tavallisissa fibriinipeiteaineis-sa.
Lisäksi seuraavassa kuvataan myös fibriinipeiteai-nepakkaukset. Pakkaus voi sisältää ensimmäisenä aineosana . 30 koostumusta, joka sisältää fibriinimonomeeriä ja toisena aineosana emäspuskuria, joka pystyy polymeroimaan fibrii-'·· > nimonomeerin, tai tislattua vettä riippuen siitä, miten liuottamisvaihe toteutettiin. Toinen aineosa voi valin- naisesti sisältää kalsiumionien lähteen. Vaihtoehtoisesti , V 35 ensimmäinen aineosa voi olla koostumus, joka sisältää sil- 42 1 106 1 6 loittumatonta fibriiniä ja toinen aineosa voi olla kal-siumionien lähde. Mikäli käytetyn fibrinogeenin lähde, jota käytetään koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, on peräisin soluviljelmistä, 5 jotka erittävät fibrinogeeniä tai rekombinanttifibrinogee-niä, ensimmäinen aineosa voi olla koostumus, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä, toinen aineosa voi olla kal-siumionien lähde ja kolmas aineosa on aktivointitekijä XIII.
10 5. Esimerkkejä 5.1. Plasman valmistus kokoverestä
Kokoveri (100 ml) kerätään standardimaiseen kaupallisesti saatavilla olevaan veripussiin, joka sisältää antikoagulanttia, kuten sitraatti/fosfaatti/dekstroosia.
15 Veri siirretään sitten säiliöön, joka on sopiva sentrifu-goimiseen, ja sentrifugoidaan huoneenlämpötilassa 10 minuuttia 3 000 g:ssa. Kirkas ylin kerros plasmasta (n. 50 ml) dekantoidaan sitten ja soluaineosat poistetaan.
Vaihtoehtoinen plasman valmistusmenetelmä kokove- 20 restä on suodattaminen. 100 ml kokoverta kerätään jälleen ’··; pussiin, joka sisältää antikoagulanttia, kuten sitraat- t t ti/fosfaatti/dekstroosia. Verta kierrätetään sitten suo- • * * ....* dattimen läpi, jolla on hyvä proteiinin läpäisevyys, suo- lan aaltomaisen liikkeen (peristaltic) aikaansaavalla pum-' ’ : 25 pulla. Paineen putous pitkin kalvoa johtaa siihen, että V plasma pakotetaan soluaineosien läpi, joita on jäljellä kierrätettävässä veressä. Plasma (50 ml) kerätään jatkokäsittelyä varten.
5.2. Batroksobiinin immmobilisointi agaroosihel- 30 mille
Agaroosihelmiä (Pharmacia) käytettiin immobili-’·· ( sointitutkimuksissa. Käytetty agaroosi oli 4-% :isesti sil- · loittunut, 45 - 165 pm (90 % partikkeleista). Tämä aines ;··' paisui viisinkertaiseksi sen tilavuuden suhteen hydratoi- , V 35 taessa. Batroksobiiniä hapetetaan ensin 0,1 M nat- 43 110616 riumperjodaatilla yksi tunti huoneenlämpötilassa suljetussa tuikeampullissa. Batroksobiini puhdistetaan antamalla sen kulkea Sephadex PD-10 geelipermeaatiopylvään läpi. Hapetettu batroksobiini liitetään sitten hydratsidiakti-5 vointi agaroosigeeliin yön ajaksi huoneenlämpötilassa 50 mM natriumasetaatissa pH 5,5 + 10 mM natriumboorihydridis-sä (30 - 200 U/1,75 g kosteaa geeliä). Ei-sitoutuneet re-aktioaineet poistetaan geelistä pesemällä seuraavilla liuoksilla: 50 ml:11a mM natriumasetaattia, pH 5,5, 100 10 ml :11a 50 mM glysiini/1 M natriumkloridia, pH 3,0, 100
ml :11a 50 mM natriumkarbonaatti/1 M natriumkloridia, pH
10,0, 100 ml:11a 50 mM natriumfosfaatti/1 M natriumklor
idia, pH 7,0, 100 ml:lla vettä, 100 ml:lla 50 mM natriumfosfaatti/1 M natriumkloridia, pH 7,0, 100 ml: 11a 50 mM
15 natriumfosfaattia, pH 7,0.
5.3. Immobilisoidun entsyymin reaktio plasmafibri-nogeenin kanssa silloittumatonta fibriiniä sisältävän koostumuksen muodostamiseksi
Immobilisoitua entsyymiä (350 mg) lisätään n. 50 ,, 20 ml:aan sentrifugoitua tai suodatettua plasmaa ja sekoite- “* taan varovasti 7-20 minuuttia, kunnes ei-sitoutunut fib- *···’ riini I polymeeripeiteaine on muodostunut.
ia.
...: Fibriini I polymeeri ja liittynyt immobilisoitu entsyymi otetaan sitten talteen joko: a) sentrifugoimalla : ' 25 3 000 g:ssa 10 minuuttia, mitä seuraa ylimmän kerroksen /:’ seerumin poistaminen dekantoimalla tai b) suodattamalla » sopivan, alhaista proteiinia sitovan suodattimen läpi, mitä seuraa suodatetun seerumin poistaminen ja jäljelle jääneen fibriini I -polymeerin ja immobilisoidun entsyymin , 30 jatkokäsittely. Tämä fibriini I -polymeeri on esimerkki s t koostumuksesta, joka sisältää silloittumatonta fibriiniä.
'·· 5.4. Fibriini I -polymeerin solubilisointi fibrii- • nimonomeeriä sisältävän koostumuksen muodostamiseksi ... Fibriini I -polymeerin liuottaminen toteutetaan , */ 35 lisäämällä n. 1 - 4 ml 0,2 M natriumasetaattia, pH 4,0,
I 1 I I
« 110616 joka sisältää 30 mM kalsiumkloridipuskuria, talteen-otettuun fibriini I polymeeriin ja immobilisoituun entsyymiin. Tämän jälkeen näytettä sekoitetaan voimakkaasti, esim. vortex-sekoittimessa, kaksi minuuttia. Immobili-5 soidun entsyymin poistaminen voidaan sitten toteuttaa suodattamalla fibriini I -liuos 1 - 20 pm alhaista proteiinia sitovan suodattimen läpi. Agaroosientsyymi jää suodattimelle mahdollistaen täten sen poistamisen järjestelmästä. Jäljelle jäänyt liuos, koostumus, joka sisältää 10 fibriini I -monomeeriä, koostuu väkevöidystä happamasta fibriini I -monomeeriliuoksesta yhdessä muiden plasma-proteiinien kanssa. Yleensä n. 100 ml kokoverta aikaansaa n. 4 ml tai 5 ml koostumusta, joka sisältää fibriini-monomeeriä, jossa fibriinimonomeeripitoisuus on n. 25 15 mg/ml - n. 35 mg/ml. Tämä voidaan nyt helposti antaa potilaalle, joko pelkästään, tai puristettuna yhteen uudelleenpolymerointipuskurin kanssa, muodostamaan fibrii-nipeiteaine.
5.5. Fibriini I -monomeeriä sisältävän koostu-20 muksen uudelleenpolymerointi
Uudelleenpolymerointi toteutetaan sekoittamalla ···' samanaikaisesti 9 osaa liuosta, joka sisältää fibriini I
-monomeeriä, yhden osan kanssa sopivaa uudelleenpolyme-rointipuskuria, esim. 0,75 M natriumkarbonaatti/natrium-: ·': 25 bikarbonaattia, pH 10,0. Sekoittamissuhdetta voidaan muut- taa; kuitenkin 9:l-suhde ylläpitää fibriinin korkean pitoisuuden lopputuotteessa. Puristettaessa yhteen fibriini I uudelleenpolymeroituu spontaanisti ja muuttuu fibriinik-si II, mitä seuraa fibriinin silloittuminen n. 30 minuutin . . 30 aikana.
; ’· Tätä keksintöä ei kuvattujen spesifisten suoritus muotojen tulisi rajoittaa, joiden tarkoituksena on ainoas-*· ' taan kuvata keksinnön yksittäisiä kohtia. Monet tämän kek- sinnön modifioinnit tässä esitettyjen ja kuvattujen lisäk-35 si ovat tosiaan ilmeisiä alaan perehtyneelle edeltävästä 45 1 10616 kuvauksesta. Tällaiset modifioinnit kuuluvat liitettyjen patenttivaatimusten piiriin.
5.6. Agaroosin hydratsidiaktivointi ja kytkentä entsyymin hiilihydraattiosan kautta 5 Batroksobiinin hiilihydraattiosan saattamiseksi reagoimaan hydratsidiaktivoidun kantoaineen kanssa sokeri on ensin hapetettava antamaan vapaita -CHO-ryhmiä. Tämä toteutetaan seuraavasti.
1 - 7 mg batroksobiinia liuotetaan 2 ml:aan vettä 10 ja 0,2 ml:aan 0,1 M natriumperjodaattia. Seosta inkuboi-daan huoneenlämpötilassa yksi tunti, minkä jälkeen suola poistetaan Sephadex G-25 geelisuodatuspylväässä. Hapetettu aktiivinen batroksobiini eluoidaan pylväästä 0,9-%:isella paino/tilav. natriumkloridilla.
15 Standardimaista kaupallisesti saatavaa hydratsidi- aktivoitua agaroosia (Bio-rad Laboratories Ltd UK) tai mitä tahansa muuta ryhmää, jolla on vapaa pääteaminoryhmä, voidaan käyttää suoraan vapaiden aldehydiryhmien (-CHO) liittämiseen. Mikäli hydratsidi-agaroosia käytetään, lii-20 täntämenetelmä on seuraavanlainen.
·· 1 - 5 g hydratsidi-agaroosigeeliä suspendoidaan 4 ··.: ml: aan 50 mM natriumasetaattia, pH 5,5. Tähän suspensioon lisätään 1 ml 10 mM natriumboorihydridiä yhdessä halutun L" määrän kanssa hapetettua batroksobiiniä (tavallisesti 25 100 - 200 BU/g kosteaa geeliä) .
Näytettä sekoitetaan yön yli huoneenlämpötilassa
ja pestään tämän jälkeen sintratussa lasisuppilossa 50 ml :11a 50 mM natriumasetaattia, pH 5,5, 100 ml :11a 50 mM
glysiini/1 M natriumkloridia, pH 3,0, 100 ml :11a 50 mM
, . 30 natriumkarbonaatti/1 M natriumkloridia, pH 10,0, 100 ; ’ ml :11a 50 mM natriumfosfaatti/1 M natriumkloridia, pH 7,0, 100 ml:11a vettä ja 100 ml:11a 50 mM natriumfosfaatti/1 M ·· ' natriumkloridia, pH 7,0 ja lopuksi 100 ml: 11a 50 mM nat- ...· riumfosfaattia, pH 7,0.
35 4β 110616
Immobilisoidun batroksobiinin reaktiomenetelmä plasman kanssa on seuraavanlainen.
Plasman (50 ml) pH alennetaan arvoon 5,5 lisäämällä etikkahappoa. Plasmaan lisätään 100 - 200 BU:n 5 ekvivalenttinen määrä batroksobiiniä immobilisoituneena n.
1,75 g:aan (kostean geelin paino) agaroosia. Plasmaa inkuboidaan 37 °C:ssa 10 - 15 minuuttia, minkä jälkeen pH nostetaan arvoon 7,4 lisäämällä natriumhydroksidia. Fibriinin I polymeroituminen tapahtuu lähes välittömästi. 10 Fibriini I polymeeri otetaan talteen sentrifugoimalla 3500 kierrosta minuutissa 10 minuuttia ja liuotetaan uudestaan 3 - 4 ml:aan 0,2 M natriumasetaattia, pH 4,0, joka sisältää 30 mM kalsiumkloridia. Sitten agaroosientsyymi voidaan erottaa fibriinistä I sentrifugoimalla tai suodat-15 tamalla. Tämän jälkeen fibriini I uudelleenpolymeroidaan muodostamaan fibriinipeiteaine lisäämällä 9 osaa fibriini I -liuosta 1 osaan 0,75 M natriumkarbonaatti/bi-karbonaattia, pH 10,0.
5.7. Entsyyminvangitsemissysteemi, jossa käytetään .. 20 biotiinia ja avidiinia ’·*· Entsyymin vangitseminen toteutetaan biotinyloi- ...: maila ensin batroksobiini ja vangitsemalla biotiini- entsyymi immobilisoidulla avidiinilla (avidiinilla, joka 11' on liittynyt 6-%:isesti silloittuneeseen agaroosiin).
'*·’· 25 Proteiinien biotinylointi voidaan toteuttaa käyt- täen monia reagensseja. Tässä tapauksessa käytetään N-hyd-roksisukkiini-imidi-biotiinia (veteen liukenematon) (kaupallisesti saatavissa Amershamista). NHS-biotiinia (50 μΐ) lisätään 1 mg:aan batroksobiiniä pH:ssa 8,6 ja liuosta 30 inkuboidaan huoneenlämötilassa yksi tunti. Ylimäärä bio-’· * tinylointireagenssia poistetaan geelisuodattamalla Sepha- dex G-25 pylväässä, 0,1 M kaliumfosfaatilla, pH 7,5, elu- • · enttina.
10 BU:n ekvivalenttinen määrä biotiini-batrokso-35 biiniä lisätään 50 ml:aan plasmaa ja inkuboidaan 37 °C:ssa 4V 110616 10 minuuttia. Fibriini I -polymeeri otetaan talteen sent-rifugoimalla (3 500 kierrosta minuutissa 10 minuuttia) ja liuotetaan uudestaan 3-4 ml:aan 0,2 M natriumasetaattia, pH 4,0, joka sisältää 30 mM kalsiumkloridia. Fibriiniin I 5 lisätään avidiini-agaroosia (kaupallisesti saatavissa Sigma Chemical Co:sta) 0,2 g (kostea geeli)/ml fibriiniä I. Näytettä inkuboidaan huoneenlämpötilassa 10 minuuttia ja sentrifugoidaan 2 000 kierrosta minuutissa 10 minuuttia. Muodostunut fibriini I on pääosin vapaa batroksobiinistä. 10 Fibriinin uudelleenpolymerointi suoritetaan, kuten esimerkissä 5.6 on kuvattu, muodostamaan fibriinipeiteaine.
« > t
Claims (34)
1. Menetelmä koostumuksen valmistamiseksi, joka sisältää ei-dynaamista fibriinimonomeeriä, fibrinogeenis-5 tä, tunnettu siitä, että: (a) saatetaan koostumus, joka sisältää fibrinogee-niä, kosketukseen trombiinin kaltaisen entsyymin kanssa fibrinogeenin muuttamiseksi silloittumattomaksi fib-riinipolymeeriksi; 10 (b) erotetaan silloittumaton fibriinipolymeeri koostumuksesta, joka sisältää fibrinogeeniä; ja (c) liuotetaan silloittumaton fibriinipolymeeri muodostamaan koostumus, joka sisältää ei-dynaamista fib-riinimonomeeriä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trombiinin kaltainen entsyymi immobilisoidaan kantoaineelle ja kontaktivaihe johtaa siihen, että trombiinin kaltainen entsyymi liittyy silloittu-mattoman fibriinipolymeerin kanssa ja edelleen erotetaan 20 trombiinin kaltainen entsyymi koostumuksesta, joka sisäl- '1 tää f ibriinimonomeeriä. «
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, * * "I tunnettu siitä, että kantoaine valitaan ryhmästä ·; selluloosa, polydekstraani, agaroosi, polystyreeni, piidi- . 25 oksidi, polyakryylihapot, polyakryyliamidit, polyvinyyli- alkoholit, lasihelmet, polykarbonaatti, kollageeni, selluloosa j ohdannaiset, polytetrafluorietyleeni ja niiden seokset .
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että kantoaine valitaan ryhmästä .·· agaroosi ja piidioksidi.
" . 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trombiinin kaltainen entsyymi '·' immobilisoidaan suodattimelle tai trombiinin kaltainen : .· 35 entsyymi immobilisoidaan kantoaineelle ja muodostaa toisen * · « 110616 puolen suodattimesta ja kontaktivaiheen jälkeen saadun fibriinimonomeerin annetaan kulkea suodattimen läpi.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuotinvaihe toteutetaan hap- 5 popuskuriliuoksen avulla, jonka pH on vähemmän kuin n. 5, tai kaotrooppisella aineella.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että happopuskuriliuos valitaan ryhmästä etikkahappo, meripihkahappo, glukuronihappo, kys- 10 teiinihappo, krotonhappo, itakonihappo, glutamiinihappo, muurahaishappo, asparagiinihappo, adipiinihappo ja niiden suolat.
8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että happopuskuriliuos tai kao- 15 trooppinen aine sisältää lisäksi kalsiumionien lähteen.
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että erotusvaihe toteutetaan suodattamalla .
10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, ’* 20 tunnettu siitä, että trombiinin kaltainen entsyymi j voi muuttaa fibrinogeenin fibriiniksi I.
‘ 11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trombiinin kaltainen entsyymi • valitaan ryhmästä Ancrod ja Batroksobiini. : .25
12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että poistetaan trombiinin kaltainen entsyymi koostumuksesta, joka sisältää fibriini-monomeeriä, biotinyloimalla trombiinin kaltainen entsyymi ja saattamalla koostumus, joka sisältää fibriinimonomee- .·. 30 riä, kosketukseen immobilisoidun avidiinin kanssa, poista- • · , ··* en täten trombiinin kaltaisen entsyymin koostumuksesta, ! . joka sisältää fibriinimonomeeriä.
13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan vesipitoinen 35 koostumus, joka sisältää silloittumatonta fibriinimonomee- 50 110616 riä, jossa fibriinimonomeeripitoisuus on n. 10 mg/ml - n. 200 mg/ml ja koostumuksella on pH n. 1 - n. 5.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu pitoisuus on n. 20 5 mg/ml - n. 100 mg/ml.
15. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fibriinimonomeeri valitaan ryhmästä fibriini I, des BB -fibriini ja fibriini II.
16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että fibriinimonomeeri on fibriini I.
17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan vesipitoinen koostumus, joka sisältää fibriinimonomeeriä, jonka pitoi- 15 suus on n. 20 mg/ml - n. 200 mg/ml.
18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu pitoisuus on n. 20 mg/ml - n. 100 mg/ml.
19. Patenttivaatimuksen 17 mukainen menetelmä, ·' . 20 tunnettu siitä, että fibriinimonomeeri valitaan •j ryhmästä fibriini I, des BB -fibriini ja fibriini II.
20. Patenttivaatimuksen 19 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fibriinimonomeeri on fibrii- ni I-
21. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan vesipitoinen koostumus, joka sisältää: (a) fibriinimonomeeriä ja (b) kalsiumionien lähteen, '/. 30 ja jossa kalsiumionien pitoisuus on n. 5 mM - n. 200 mM.
22. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan koostumus, joka on kiinteässä muodossa.
’ 23. Patenttivaatimuksen 22 mukainen menetelmä, ' 35 tunnettu siitä, että koostumus muodostetaan lyofi- 51 110616 lisoimalla vesipitoinen liuos, joka sisältää fib-riinimonomeeriä.
24. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan koostumus, joka 5 sisältää fibriinimonomeeriä ja yhdistettä valittuna ryhmästä antibiootti, histamiini ^-antagonisti, syöpää vastustava lääke, fibronektiini ja fibrinolyyttinen inhibiittori .
25. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että valmistetaan (a) koostumus, jossa on fibriinimonomeeriä; ja (b) koostumus, joka on valittu ryhmästä emäspus-kuri ja tislattu vesi, ja pakataan ne yhteen.
26. Patenttivaatimuksen 25 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että emäspuskuri tai tislattu vesi sisältää edelleen kalsiumionien lähteen.
27. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan , “ 20 (a) koostumus, jossa on silloittumatonta fibrii- >| niä; ja (b) koostumus, joka sisältää kalsiumionien läh->; teen, ja pakataan ne yhteen.
28. Patenttivaatimuksen 27 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että valmistetaan pakkaus, joka edelleen sisältää aktivointitekijää XIII.
29. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että koostumus, joka sisältää fib-riinimonomeeriä, laitetaan kiinteän kantoaineen pinnalle.
: ·.* 30 30. Patenttivaatimuksen 29 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kiinteä kantoaine valitaan ’ ; ryhmästä side, ommel ja proteesi. » i »
31. Patenttivaatimuksen 29 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että monomeeri valitaan ryhmästä : ;* 35 fibriini I, des BB -fibriini ja fibriini II. 52 1 106 1 6
32. Patenttivaatimuksen 31 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että monomeeri on fibriini I.
33. Patenttivaatimuksen 29 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että koostumus on kiinteässä muo- 5 dossa.
34. Patenttivaatimuksen 33 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että koostumus muodostetaan lyofi-lisoimalla vesipitoinen liuos, joka sisältää fib-riinimonomeeriä. * t · * · I · · · > t · k « · 53 1 10616
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US95821292A | 1992-10-08 | 1992-10-08 | |
US95821292 | 1992-10-08 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI934440A0 FI934440A0 (fi) | 1993-10-08 |
FI934440A FI934440A (fi) | 1994-04-09 |
FI110616B true FI110616B (fi) | 2003-02-28 |
Family
ID=25500729
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI934440A FI110616B (fi) | 1992-10-08 | 1993-10-08 | Menetelmä fibriinimonomeerikoostumuksen valmistamiseksi |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (12) | US5750657A (fi) |
EP (2) | EP0592242B1 (fi) |
JP (1) | JP3771284B2 (fi) |
KR (1) | KR940008697A (fi) |
CN (1) | CN1091315A (fi) |
AT (1) | ATE244581T1 (fi) |
AU (1) | AU676201B2 (fi) |
BR (1) | BR9304185A (fi) |
CA (3) | CA2510981C (fi) |
CZ (1) | CZ211793A3 (fi) |
DE (1) | DE69333080T2 (fi) |
DK (1) | DK0592242T3 (fi) |
ES (2) | ES2202306T3 (fi) |
FI (1) | FI110616B (fi) |
HU (1) | HU218898B (fi) |
IL (1) | IL107211A (fi) |
MX (1) | MX9306272A (fi) |
NO (1) | NO314412B1 (fi) |
NZ (3) | NZ248897A (fi) |
PL (3) | PL176202B1 (fi) |
PT (1) | PT592242E (fi) |
RU (1) | RU2143924C1 (fi) |
SG (1) | SG49640A1 (fi) |
SK (1) | SK109393A3 (fi) |
Families Citing this family (251)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6197325B1 (en) | 1990-11-27 | 2001-03-06 | The American National Red Cross | Supplemented and unsupplemented tissue sealants, methods of their production and use |
US6117425A (en) | 1990-11-27 | 2000-09-12 | The American National Red Cross | Supplemented and unsupplemented tissue sealants, method of their production and use |
US6054122A (en) | 1990-11-27 | 2000-04-25 | The American National Red Cross | Supplemented and unsupplemented tissue sealants, methods of their production and use |
US7208179B1 (en) * | 1990-11-27 | 2007-04-24 | The American National Red Cross | Methods for treating disease and forming a supplemented fibrin matrix |
CN1091315A (zh) * | 1992-10-08 | 1994-08-31 | E·R·斯奎布父子公司 | 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法 |
US6241747B1 (en) | 1993-05-03 | 2001-06-05 | Quill Medical, Inc. | Barbed Bodily tissue connector |
US8795332B2 (en) | 2002-09-30 | 2014-08-05 | Ethicon, Inc. | Barbed sutures |
ZA948564B (en) * | 1993-11-19 | 1995-07-26 | Bristol Myers Squibb Co | Liquid separation apparatus and method |
AU709134B2 (en) * | 1994-05-02 | 1999-08-19 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Recombinant fibrin chains, fibrin and fibrin-homologs |
US6946079B1 (en) * | 1994-12-02 | 2005-09-20 | Bristol-Myers Squibb Company | Centrifugal filtration method for separating fibrin monomer from blood |
CN1174515A (zh) * | 1994-12-02 | 1998-02-25 | 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 | 离心机的试剂释放*** |
CN1083284C (zh) * | 1994-12-02 | 2002-04-24 | 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 | 从血浆中分离纤维蛋白的方法和设备 |
US5733446A (en) * | 1994-12-02 | 1998-03-31 | Bristol-Myers Squibb Company | Centrifuge with annular filter |
US5585007A (en) | 1994-12-07 | 1996-12-17 | Plasmaseal Corporation | Plasma concentrate and tissue sealant methods and apparatuses for making concentrated plasma and/or tissue sealant |
US5605541A (en) | 1994-12-07 | 1997-02-25 | E. R. Squibb And Sons, Inc. | Fibrin sealant applicatoor |
DE69629010T2 (de) * | 1995-01-16 | 2004-04-15 | Baxter International Inc., Deerfield | Selbsttragende flächengebilde aus vernetztem fibrin zur hemmung von postoperativen adhäsionen |
US5733545A (en) * | 1995-03-03 | 1998-03-31 | Quantic Biomedical Partners | Platelet glue wound sealant |
US5691152A (en) * | 1995-11-09 | 1997-11-25 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Stable avidin composition |
US6551794B1 (en) * | 1995-11-09 | 2003-04-22 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Stable biotinylated biomolecule composition |
NZ500398A (en) | 1995-12-07 | 2001-02-23 | Bristol Myers Squibb Co | A sealant system for applying two or more liquid components |
WO2000062828A1 (en) | 1996-04-30 | 2000-10-26 | Medtronic, Inc. | Autologous fibrin sealant and method for making the same |
DE29723807U1 (de) * | 1996-04-30 | 1999-11-04 | Medtronic, Inc., Minneapolis, Minn. | Autologe Fibrin-Blutstillungsmittel |
EP0917444A1 (en) | 1996-07-12 | 1999-05-26 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | A fibrin delivery device and method for forming fibrin on a surface |
DE19634313A1 (de) * | 1996-08-24 | 1998-02-26 | Behringwerke Ag | Methode zur Stabilisierung von Plättchen |
US5844087A (en) * | 1996-11-05 | 1998-12-01 | Bayer Corporation | Method and device for delivering fibrin glue |
CA2583144C (en) | 1996-11-15 | 2009-03-10 | Bristol Myers Squibb Company | Devices and methods for applying a mixture of two or more liquid components to form a biomaterial |
US6613020B1 (en) | 1996-12-06 | 2003-09-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of applying a mixture of two liquid components as well as a device for carrying out the method |
FR2757770B1 (fr) * | 1996-12-30 | 1999-02-26 | Inoteb | Procede de preparation d'une colle biologique capable de coaguler par simple addition d'ions calcium |
AU721671B2 (en) * | 1997-01-08 | 2000-07-13 | Vivolution A/S | Centrifuge apparatus for separating blood |
US5955026A (en) * | 1997-01-08 | 1999-09-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Detecting the thickness of fibrin polymer using an optical device |
US6132598A (en) * | 1997-01-08 | 2000-10-17 | Bristol-Myers Squibb Company | Centrifuge apparatus with temperature control means |
CA2284679C (en) | 1997-03-27 | 2006-06-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Laparoscopic sealant applicator |
US6331172B1 (en) | 1997-04-14 | 2001-12-18 | Baxter International Inc. | Applicator for dispensing measured quantities with use of controlled suction |
US5971956A (en) * | 1997-04-15 | 1999-10-26 | Biosurgical Corporation | Medical suctioning apparatus and methods of use |
US5931855A (en) | 1997-05-21 | 1999-08-03 | Frank Hoffman | Surgical methods using one-way suture |
GB9711927D0 (en) * | 1997-06-09 | 1997-08-06 | Bristol Myers Squibb Co | Compositions useful as fibrin sealants |
US7745106B2 (en) | 1997-06-24 | 2010-06-29 | Cascade Medical Enterprises, Llc | Methods and devices for separating liquid components |
IT1292410B1 (it) * | 1997-06-24 | 1999-02-08 | Roberto Beretta | Contenitore di pronto impiego per ottenere colla di fibrina autologa |
US6979307B2 (en) | 1997-06-24 | 2005-12-27 | Cascade Medical Enterprises Llc | Systems and methods for preparing autologous fibrin glue |
US6162241A (en) * | 1997-08-06 | 2000-12-19 | Focal, Inc. | Hemostatic tissue sealants |
AT407484B (de) * | 1997-11-12 | 2001-03-26 | Bio Prod & Bio Eng Ag | Arzneimittel zur förderung der wundheilung |
EP1037659A4 (en) | 1997-12-09 | 2005-02-09 | Bristol Myers Squibb Co | FIBRINOLYTIC INHIBITOR FOR SEALANT |
JP2001526027A (ja) * | 1997-12-09 | 2001-12-18 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | フィブリノーゲン変換酵素ハイブリド |
US6478808B2 (en) * | 1997-12-17 | 2002-11-12 | Closys Corporation | Clotting cascade initiating apparatus and methods of use and methods of closing wounds |
US6159232A (en) | 1997-12-16 | 2000-12-12 | Closys Corporation | Clotting cascade initiating apparatus and methods of use and methods of closing wounds |
US6762336B1 (en) | 1998-01-19 | 2004-07-13 | The American National Red Cross | Hemostatic sandwich bandage |
WO1999056634A1 (en) * | 1998-05-06 | 1999-11-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Directional endoscopic delivery of material |
US20020022588A1 (en) * | 1998-06-23 | 2002-02-21 | James Wilkie | Methods and compositions for sealing tissue leaks |
US6083383A (en) * | 1998-06-25 | 2000-07-04 | Huang; Xun Yang | Apparatus for production of fibrin ogen or fibrin glue |
US6274090B1 (en) | 1998-08-05 | 2001-08-14 | Thermogenesis Corp. | Apparatus and method of preparation of stable, long term thrombin from plasma and thrombin formed thereby |
JP2000070241A (ja) * | 1998-08-31 | 2000-03-07 | Nissho Corp | 急速凝固用真空採血管 |
BE1012536A3 (fr) | 1998-11-04 | 2000-12-05 | Baxter Int | Element muni d'une couche de fibrine sa preparation et son utilisation. |
ATE444084T1 (de) * | 1998-11-12 | 2009-10-15 | Internat Mfg Group Inc | Hämostatische vernetzte dextranperlen verwendbar zur schnellen blutgerinnung und hämostase |
US7276235B2 (en) * | 1998-11-18 | 2007-10-02 | Zlb Behring Gmbh | Tissue glue with improved antiadhesive properties |
DE10025001A1 (de) * | 2000-05-22 | 2001-11-29 | Aventis Behring Gmbh | Gewebekleber mit verbesserten anti-adhäsiven Eigenschaften |
KR100858830B1 (ko) * | 1998-11-18 | 2008-09-17 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 조직 접합제용의 안정화된 단백질 제제 |
DE19853033A1 (de) * | 1998-11-18 | 2000-05-25 | Centeon Pharma Gmbh | Stabilisierte Proteinzubereitung für einen Gewebekleber |
NZ528340A (en) * | 1998-12-02 | 2005-07-29 | Bristol Myers Squibb Co | Spray delivery of cells |
DE19858463A1 (de) * | 1998-12-18 | 2000-06-21 | Centeon Pharma Gmbh | Verwendung eines Fibrinklebers zur Regeneration des Lebergewebes |
US6310036B1 (en) | 1999-01-09 | 2001-10-30 | Last Chance Tissue Adhesives Corporation | High strength, Bio-compatible tissue adhesive and methods for treating vigorously bleeding surfaces |
US7015198B1 (en) | 1999-05-11 | 2006-03-21 | Orentreich Foundation For The Advancement Of Science, Inc. | Materials for soft tissue augmentation and methods of making and using same |
US6921412B1 (en) | 1999-05-18 | 2005-07-26 | Cryolife, Inc. | Self-supporting, shaped, three-dimensional biopolymeric materials and methods |
AT500670A1 (de) * | 1999-05-19 | 2006-02-15 | Bio & Bio Licensing Sa | Arzneimittel zur lokalen anwendung |
WO2000072856A1 (en) * | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibrin sealants providing less inflammatory response and methods using same |
CA2373738A1 (en) | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibrin polymer structure |
WO2000072852A1 (en) * | 1999-06-01 | 2000-12-07 | Bristol-Myers Squibb Company | Prevention of post surgical adhesions using a fibrin monomer sealant |
US6472162B1 (en) | 1999-06-04 | 2002-10-29 | Thermogenesis Corp. | Method for preparing thrombin for use in a biological glue |
WO2000077227A1 (en) * | 1999-06-16 | 2000-12-21 | Bristol-Myers Squibb Company | Fibrin sealant as a transfection/transformation vehicle for gene therapy |
US7654998B1 (en) * | 1999-08-23 | 2010-02-02 | Aeris Therapeutics, Inc. | Tissue volume reduction |
US6610043B1 (en) * | 1999-08-23 | 2003-08-26 | Bistech, Inc. | Tissue volume reduction |
CA2316554C (en) | 1999-08-25 | 2007-10-23 | Bristol-Myers Squibb Company | Applicator and electro-mechanical applicator drive system |
US6463335B1 (en) | 1999-10-04 | 2002-10-08 | Medtronic, Inc. | Temporary medical electrical lead having electrode mounting pad with biodegradable adhesive |
DE60017463T2 (de) * | 1999-10-29 | 2006-03-02 | Bristol-Myers Squibb Co. | Verfahren zur herstelung von lösungen mit blut- oder plasma-komponenten mit erhöhten konzentrationen |
CA2396628A1 (en) | 2000-01-25 | 2001-08-02 | Edwards Lifesciences Corporation | Delivery systems for treatment of restenosis and anastomotic intimal hyperplasia |
US6187347B1 (en) | 2000-02-09 | 2001-02-13 | Ecosafe, Llc. | Composition for arresting the flow of blood and method |
JP3576063B2 (ja) * | 2000-02-22 | 2004-10-13 | 株式会社ホギメディカル | 凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維とその製造方法 |
EP1155706A1 (en) * | 2000-05-19 | 2001-11-21 | Xun Yang Huang | Apparatus for production of fibrin glue and its medical application |
WO2001097872A1 (en) * | 2000-06-22 | 2001-12-27 | Austin Sam L | Bioadhesive compositions and methods of preparation and use |
US6921532B1 (en) * | 2000-06-22 | 2005-07-26 | Spinal Restoration, Inc. | Biological Bioadhesive composition and methods of preparation and use |
US20020147462A1 (en) * | 2000-09-11 | 2002-10-10 | Closure Medical Corporation | Bronchial occlusion method and apparatus |
JP4199004B2 (ja) * | 2000-11-07 | 2008-12-17 | クライオライフ、インコーポレイテッド | 起泡性泡沫様生体材料および方法 |
US6942880B1 (en) * | 2001-04-09 | 2005-09-13 | Medtronic, Inc. | Autologous platelet gel having beneficial geometric shapes and methods of making the same |
US7795218B2 (en) | 2001-04-12 | 2010-09-14 | Bioaxone Therapeutique Inc. | ADP-ribosyl transferase fusion variant proteins |
US20030012818A1 (en) * | 2001-04-25 | 2003-01-16 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich And Universitat Zurich | Drug delivery matrices to enhance wound healing |
US7056331B2 (en) | 2001-06-29 | 2006-06-06 | Quill Medical, Inc. | Suture method |
US6994722B2 (en) | 2001-07-03 | 2006-02-07 | Scimed Life Systems, Inc. | Implant having improved fixation to a body lumen and method for implanting the same |
US6848152B2 (en) | 2001-08-31 | 2005-02-01 | Quill Medical, Inc. | Method of forming barbs on a suture and apparatus for performing same |
US6692515B2 (en) * | 2001-11-07 | 2004-02-17 | Frank H. Boehm, Jr. | Surgical kit for repairing leaks in fluid carrying vessels and organs and method thereof |
AU2002361902A1 (en) * | 2001-12-31 | 2003-07-24 | Ares Medical, Inc. | Hemostatic compositions and methods for controlling bleeding |
DE10204405A1 (de) * | 2002-02-04 | 2003-08-21 | Surface Care Gmbh | Plasmagel |
US6998510B2 (en) * | 2002-02-04 | 2006-02-14 | Damage Control Surgical Technologies, Inc. | Method and apparatus for improved hemostasis and damage control operations |
US7992725B2 (en) | 2002-05-03 | 2011-08-09 | Biomet Biologics, Llc | Buoy suspension fractionation system |
US7832566B2 (en) | 2002-05-24 | 2010-11-16 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating and concentrating a component from a multi-component material including macroparticles |
US20030205538A1 (en) | 2002-05-03 | 2003-11-06 | Randel Dorian | Methods and apparatus for isolating platelets from blood |
US7845499B2 (en) | 2002-05-24 | 2010-12-07 | Biomet Biologics, Llc | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
WO2003099412A1 (en) | 2002-05-24 | 2003-12-04 | Biomet Manufacturing Corp. | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
US20060278588A1 (en) | 2002-05-24 | 2006-12-14 | Woodell-May Jennifer E | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
US6773450B2 (en) | 2002-08-09 | 2004-08-10 | Quill Medical, Inc. | Suture anchor and method |
US20060155234A1 (en) * | 2002-09-10 | 2006-07-13 | American National Red Cross | Hemostatic dressing |
US8100940B2 (en) | 2002-09-30 | 2012-01-24 | Quill Medical, Inc. | Barb configurations for barbed sutures |
US20040088003A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-05-06 | Leung Jeffrey C. | Barbed suture in combination with surgical needle |
JP3640655B2 (ja) * | 2002-10-23 | 2005-04-20 | 一知 井上 | 血管新生誘導剤 |
US20050004599A1 (en) * | 2003-06-30 | 2005-01-06 | Mcnally-Heintzelman Karen M. | Non-light activated adhesive composite, system, and methods of use thereof |
US7943810B2 (en) | 2003-02-04 | 2011-05-17 | Buckman Robert F | Method and apparatus for hemostasis |
JP4585743B2 (ja) * | 2003-02-13 | 2010-11-24 | 独立行政法人物質・材料研究機構 | 生体内分解吸収性粘着性医用材料 |
US8394397B2 (en) * | 2003-03-28 | 2013-03-12 | Ed. Geistlich Soehne Ag Fuer Chemische Industrie | Adhesive antineoplastic compositions |
US20040224006A1 (en) * | 2003-04-21 | 2004-11-11 | Samn Raffaniello | Ancrod irradiated, impregnated or coated sutures and other first aid or wound management bandaging materials for minimizing scarring and/or preventing excessive scar formation |
US7624487B2 (en) | 2003-05-13 | 2009-12-01 | Quill Medical, Inc. | Apparatus and method for forming barbs on a suture |
US20070073338A1 (en) * | 2003-09-04 | 2007-03-29 | Roy Raghunandan | Supercutaneous method and device for promoting hemostasis in cannulated patient |
NZ546204A (en) * | 2003-09-12 | 2009-12-24 | Marinepolymer Tech Inc | Vascular access preservation in haemodialysis patients |
EP3821852A3 (en) | 2003-10-06 | 2021-09-22 | Medtronic 3F Therapeutics, Inc. | Minimally invasive valve replacement system |
US20050075717A1 (en) | 2003-10-06 | 2005-04-07 | Nguyen Tuoc Tan | Minimally invasive valve replacement system |
ES2367694T3 (es) | 2003-12-11 | 2011-11-07 | Isto Technologies Inc. | Sistema de cartílago particulado. |
NZ588140A (en) | 2004-05-14 | 2012-05-25 | Quill Medical Inc | Suture methods and device using an enlongated body with cut barbs and a needle at one end and a loop at the other |
EP1759718A4 (en) * | 2004-05-21 | 2011-03-02 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | PREPARATION OF TISSUE COLLAGE |
JP4767252B2 (ja) | 2004-06-14 | 2011-09-07 | ヌームアールエックス・インコーポレーテッド | 肺のアクセス装置 |
US7608579B2 (en) * | 2004-06-16 | 2009-10-27 | Pneumrx, Inc. | Lung volume reduction using glue compositions |
US7553810B2 (en) * | 2004-06-16 | 2009-06-30 | Pneumrx, Inc. | Lung volume reduction using glue composition |
US20050281798A1 (en) * | 2004-06-16 | 2005-12-22 | Glen Gong | Targeting sites of damaged lung tissue using composition |
US20050281799A1 (en) * | 2004-06-16 | 2005-12-22 | Glen Gong | Targeting damaged lung tissue using compositions |
US7678767B2 (en) | 2004-06-16 | 2010-03-16 | Pneumrx, Inc. | Glue compositions for lung volume reduction |
US20050281740A1 (en) * | 2004-06-16 | 2005-12-22 | Glen Gong | Imaging damaged lung tissue |
US20050281739A1 (en) * | 2004-06-16 | 2005-12-22 | Glen Gong | Imaging damaged lung tissue using compositions |
JP2008503254A (ja) | 2004-06-16 | 2008-02-07 | ヌームアールエックス・インコーポレーテッド | 気管支内肺容量減少システム |
US7766891B2 (en) | 2004-07-08 | 2010-08-03 | Pneumrx, Inc. | Lung device with sealing features |
US7766938B2 (en) | 2004-07-08 | 2010-08-03 | Pneumrx, Inc. | Pleural effusion treatment device, method and material |
US7597687B2 (en) * | 2004-10-29 | 2009-10-06 | Spinal Restoration, Inc. | Injection of fibrin sealant including an anesthetic in spinal applications |
US8403923B2 (en) * | 2004-10-29 | 2013-03-26 | Spinal Restoration, Inc. | Injection of fibrin sealant in the absence of corticosteroids in spinal applications |
US8124075B2 (en) * | 2004-07-16 | 2012-02-28 | Spinal Restoration, Inc. | Enhanced biological autologous tissue adhesive composition and methods of preparation and use |
US8419722B2 (en) * | 2004-10-29 | 2013-04-16 | Spinal Restoration, Inc. | Apparatus and method for injection of fibrin sealant in spinal applications |
US8206448B2 (en) * | 2004-10-29 | 2012-06-26 | Spinal Restoration, Inc. | Injection of fibrin sealant using reconstituted components in spinal applications |
CA2583867C (en) * | 2004-10-18 | 2014-12-23 | Frank J. Viola | Adhesive suture structure and methods of using the same |
EP1807514A1 (en) * | 2004-10-22 | 2007-07-18 | Benitec, Inc. | Therapeutic rnai agents for treating psoriasis |
US20110213464A1 (en) * | 2004-10-29 | 2011-09-01 | Whitlock Steven I | Injection of fibrin sealant in the absence of corticosteroids in spinal applications |
JP4874259B2 (ja) | 2004-11-23 | 2012-02-15 | ヌームアールエックス・インコーポレーテッド | 標的部位にアクセスするための操縦可能な装置 |
ATE419019T1 (de) * | 2005-01-14 | 2009-01-15 | Eska Implants Gmbh & Co | Verfahren zur herstellung einer osteoinduktiv- antiseptischen implantatbeschichtung |
US7866485B2 (en) | 2005-02-07 | 2011-01-11 | Hanuman, Llc | Apparatus and method for preparing platelet rich plasma and concentrates thereof |
JP4974902B2 (ja) | 2005-02-07 | 2012-07-11 | ハヌマン リミテッド ライアビリティ カンパニー | 血小板に富んだ血漿の濃縮装置および濃縮方法 |
US7708152B2 (en) | 2005-02-07 | 2010-05-04 | Hanuman Llc | Method and apparatus for preparing platelet rich plasma and concentrates thereof |
US7766900B2 (en) | 2005-02-21 | 2010-08-03 | Biomet Manufacturing Corp. | Method and apparatus for application of a fluid |
WO2007025290A2 (en) | 2005-08-26 | 2007-03-01 | Isto Technologies, Inc. | Implants and methods for repair, replacement and treatment of joint disease |
US20070110788A1 (en) * | 2005-11-14 | 2007-05-17 | Hissong James B | Injectable formulation capable of forming a drug-releasing device |
RU2308287C2 (ru) * | 2005-12-26 | 2007-10-20 | Владимир Александрович Макаров | Гемостатическое средство |
US9402633B2 (en) | 2006-03-13 | 2016-08-02 | Pneumrx, Inc. | Torque alleviating intra-airway lung volume reduction compressive implant structures |
US8888800B2 (en) | 2006-03-13 | 2014-11-18 | Pneumrx, Inc. | Lung volume reduction devices, methods, and systems |
US8157837B2 (en) | 2006-03-13 | 2012-04-17 | Pneumrx, Inc. | Minimally invasive lung volume reduction device and method |
US20070248653A1 (en) * | 2006-04-20 | 2007-10-25 | Cochrum Kent C | Hemostatic compositions and methods for controlling bleeding |
US9096839B2 (en) | 2006-04-26 | 2015-08-04 | Arteriocyte Medical Systems, Inc. | Compositions and methods of preparation thereof |
WO2007127390A2 (en) * | 2006-04-28 | 2007-11-08 | Biolife, L.L.C. | Materials and methods for wound treatment |
US7976873B2 (en) | 2006-05-10 | 2011-07-12 | Medtronic Xomed, Inc. | Extracellular polysaccharide solvating system for treatment of bacterial ear conditions |
US7993675B2 (en) | 2006-05-10 | 2011-08-09 | Medtronic Xomed, Inc. | Solvating system and sealant for medical use in the sinuses and nasal passages |
US20070264296A1 (en) * | 2006-05-10 | 2007-11-15 | Myntti Matthew F | Biofilm extracellular polysachharide solvating system |
US7959943B2 (en) * | 2006-05-10 | 2011-06-14 | Medtronics Xomed, Inc. | Solvating system and sealant for medical use in the middle or inner ear |
US8567609B2 (en) | 2006-05-25 | 2013-10-29 | Biomet Biologics, Llc | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
CN101516301B (zh) * | 2006-08-04 | 2014-10-15 | Stb有限公司 | 用于处理受伤组织的固体敷料 |
DE07825069T1 (de) * | 2006-09-07 | 2010-04-08 | Ed Geistlich Söhne Ag Für Chemische Industrie | Verfahren zur behandlung von knochenkrebs |
EP2064300A4 (en) * | 2006-09-20 | 2013-05-22 | Pneumrx Inc | ADHESIVE FABRIC COMPOSITIONS AND RELATED METHODS |
US7968682B2 (en) * | 2006-12-12 | 2011-06-28 | Oregon Health & Science University | Degradation-resistant fibrinogen sealants |
US20080154233A1 (en) * | 2006-12-20 | 2008-06-26 | Zimmer Orthobiologics, Inc. | Apparatus for delivering a biocompatible material to a surgical site and method of using same |
US8163549B2 (en) | 2006-12-20 | 2012-04-24 | Zimmer Orthobiologics, Inc. | Method of obtaining viable small tissue particles and use for tissue repair |
WO2008081463A2 (en) * | 2007-01-04 | 2008-07-10 | Hepacore Ltd. | Water soluble reactive derivatives of carboxy polysaccharides and fibrinogen conjugates thereof |
US8088095B2 (en) | 2007-02-08 | 2012-01-03 | Medtronic Xomed, Inc. | Polymeric sealant for medical use |
GB2447012B (en) * | 2007-02-21 | 2011-03-16 | Pharmacure Health Care Ab | Composition for combating epistaxis |
WO2008128075A1 (en) | 2007-04-12 | 2008-10-23 | Isto Technologies, Inc. | Compositions and methods for tissue repair |
US8328024B2 (en) | 2007-04-12 | 2012-12-11 | Hanuman, Llc | Buoy suspension fractionation system |
WO2008127639A1 (en) | 2007-04-12 | 2008-10-23 | Biomet Biologics, Llc | Buoy suspension fractionation system |
US8915943B2 (en) | 2007-04-13 | 2014-12-23 | Ethicon, Inc. | Self-retaining systems for surgical procedures |
US20090075891A1 (en) * | 2007-08-06 | 2009-03-19 | Macphee Martin | Methods and dressings for sealing internal injuries |
EP2526975B1 (en) | 2007-09-27 | 2014-06-04 | Ethicon, LLC | Self-retaining sutures including tissue retainers having improved strength |
US8916077B1 (en) | 2007-12-19 | 2014-12-23 | Ethicon, Inc. | Self-retaining sutures with retainers formed from molten material |
US8771313B2 (en) | 2007-12-19 | 2014-07-08 | Ethicon, Inc. | Self-retaining sutures with heat-contact mediated retainers |
US8118834B1 (en) | 2007-12-20 | 2012-02-21 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Composite self-retaining sutures and method |
CA2710798A1 (en) * | 2007-12-28 | 2009-07-09 | Kuros Biosurgery Ag | Pdgf fusion proteins incorporated into fibrin foams |
EP2242430B1 (en) | 2008-01-30 | 2016-08-17 | Ethicon, LLC | Apparatus and method for forming self-retaining sutures |
US8615856B1 (en) | 2008-01-30 | 2013-12-31 | Ethicon, Inc. | Apparatus and method for forming self-retaining sutures |
BRPI0907787B8 (pt) | 2008-02-21 | 2021-06-22 | Angiotech Pharm Inc | método para formar uma sutura de autorretenção e aparelho para elevar os retentores em um fio de sutura a um ângulo desejado |
US8216273B1 (en) | 2008-02-25 | 2012-07-10 | Ethicon, Inc. | Self-retainers with supporting structures on a suture |
US8641732B1 (en) | 2008-02-26 | 2014-02-04 | Ethicon, Inc. | Self-retaining suture with variable dimension filament and method |
PL2259774T3 (pl) | 2008-02-27 | 2013-04-30 | Biomet Biologics Llc | Sposoby i kompozycje dla wprowadzania antagonisty receptora interleukiny-1 |
US8337711B2 (en) | 2008-02-29 | 2012-12-25 | Biomet Biologics, Llc | System and process for separating a material |
US8518272B2 (en) | 2008-04-04 | 2013-08-27 | Biomet Biologics, Llc | Sterile blood separating system |
US20090259263A1 (en) | 2008-04-11 | 2009-10-15 | Biomet Microfixation, Inc. | Apparatus and methods of fixating bone |
CA2720847C (en) | 2008-04-15 | 2016-06-28 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Self-retaining sutures with bi-directional retainers or uni-directional retainers |
US8012077B2 (en) | 2008-05-23 | 2011-09-06 | Biomet Biologics, Llc | Blood separating device |
RU2513142C2 (ru) | 2008-06-12 | 2014-04-20 | Медтроник Ксомед Инк. | Способ лечения хронических ран |
US8632605B2 (en) | 2008-09-12 | 2014-01-21 | Pneumrx, Inc. | Elongated lung volume reduction devices, methods, and systems |
WO2010042427A2 (en) * | 2008-10-06 | 2010-04-15 | Microbial Defense Systems, Llc | Antimicrobial composition and methods of making and using same |
EP2352440B1 (en) | 2008-11-03 | 2019-02-20 | Ethicon LLC | Length of self-retaining suture and device for using the same |
US8187475B2 (en) | 2009-03-06 | 2012-05-29 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for producing autologous thrombin |
US8110208B1 (en) | 2009-03-30 | 2012-02-07 | Biolife, L.L.C. | Hemostatic compositions for arresting blood flow from an open wound or surgical site |
US8313954B2 (en) | 2009-04-03 | 2012-11-20 | Biomet Biologics, Llc | All-in-one means of separating blood components |
US20100256671A1 (en) * | 2009-04-07 | 2010-10-07 | Biomedica Management Corporation | Tissue sealant for use in noncompressible hemorrhage |
WO2010129258A2 (en) | 2009-04-27 | 2010-11-11 | Mallinckrodt Inc. | Tissue sealant compositions, vascular closure devices, and uses thereof |
JP5809621B2 (ja) | 2009-05-18 | 2015-11-11 | ヌームアールエックス・インコーポレーテッド | 患者の肺を治療するインプラント |
US8367802B2 (en) * | 2009-06-18 | 2013-02-05 | Biomedica Management Corporation | Method to produce fibrin monomer in acid media for use as tissue sealant |
US9011800B2 (en) | 2009-07-16 | 2015-04-21 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating biological materials |
WO2011040888A1 (en) * | 2009-10-01 | 2011-04-07 | Singapore Health Services Pte Ltd | A biodegradable composition or combination and uses thereof |
US20110171285A1 (en) * | 2009-10-28 | 2011-07-14 | The Texas A&M University System | Design of Fibrinogen and Fibrinogen Derived Products with Reduced Bacterial Binding by Using Modified Sequences of Fibrinogen Chains |
WO2011090628A2 (en) | 2009-12-29 | 2011-07-28 | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | Bidirectional self-retaining sutures with laser-marked and/or non-laser marked indicia and methods |
US8591391B2 (en) | 2010-04-12 | 2013-11-26 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating a material |
BR112012028331B1 (pt) | 2010-05-04 | 2020-04-28 | Ethicon Endo Surgery Llc | sutura de autorretenção |
BR112012031606B1 (pt) | 2010-06-11 | 2020-11-10 | Ethicon Llc | distribuidor de sutura |
US10231721B2 (en) | 2010-06-24 | 2019-03-19 | St. Croix Surgical Systems, Llc | Failsafe percutaneous wound barrier |
NZ610341A (en) | 2010-11-03 | 2015-05-29 | Tissuegen Inc | Drug-eluting self-retaining sutures and methods relating thereto |
BR112013011582B1 (pt) | 2010-11-09 | 2020-10-20 | Ethicon Llc | sistema de autorretenção multidirecional removível |
CN103889340B (zh) | 2011-03-23 | 2018-09-28 | 伊西康有限责任公司 | 自固位式可变套环缝合线 |
WO2012140650A2 (en) | 2011-04-12 | 2012-10-18 | Hepacore Ltd. | Conjugates of carboxy polysaccharides with fibroblast growth factors and variants thereof |
AU2012253476B2 (en) | 2011-05-10 | 2015-09-24 | Next Science IP Holdings Pty Ltd | Antimicrobial solid and methods of making and using same |
US20130172931A1 (en) | 2011-06-06 | 2013-07-04 | Jeffrey M. Gross | Methods and devices for soft palate tissue elevation procedures |
DE102011122227A1 (de) * | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Medizinische Hochschule Hannover | Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung eines bioartifiziellen Gewebekonstrukts |
US8999376B2 (en) | 2012-02-03 | 2015-04-07 | Xcede Technologies, Inc. | Tissue patch |
US9642956B2 (en) | 2012-08-27 | 2017-05-09 | Biomet Biologics, Llc | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
EP2900297B1 (en) | 2012-09-25 | 2018-05-23 | Stem Cell Partners LLC | Method and apparatus for preparing single donor thrombin serum |
US10016527B2 (en) | 2012-10-23 | 2018-07-10 | Orthovita, Inc. | Materials and methods for repair of cartilage defects |
US20140178343A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Jian Q. Yao | Supports and methods for promoting integration of cartilage tissue explants |
WO2014106136A1 (en) * | 2012-12-31 | 2014-07-03 | Falus George David | Lyophilized fibrin sealant for high volume hemorrhage |
US8906856B2 (en) * | 2012-12-31 | 2014-12-09 | Biomedica Mangement Corporation | Single component fibrin hemostat |
WO2014121000A1 (en) * | 2013-02-01 | 2014-08-07 | Xcede Technologies, Inc. | Minimally invasive surgery, including vascular closure, and associated sealants |
AU2014216300B2 (en) | 2013-02-12 | 2020-02-27 | Replicel Life Sciences Inc. | Compositions and methods for treating and repairing tendons |
US10143725B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-12-04 | Biomet Biologics, Llc | Treatment of pain using protein solutions |
US9950035B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-04-24 | Biomet Biologics, Llc | Methods and non-immunogenic compositions for treating inflammatory disorders |
US10208095B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-02-19 | Biomet Manufacturing, Llc | Methods for making cytokine compositions from tissues using non-centrifugal methods |
US20140271589A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Biomet Biologics, Llc | Treatment of collagen defects using protein solutions |
US9895418B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-02-20 | Biomet Biologics, Llc | Treatment of peripheral vascular disease using protein solutions |
RU2522879C1 (ru) * | 2013-04-23 | 2014-07-20 | ОАО "Научно-исследовательский институт текстильных материалов" (ОАО "НИИТМ") | Биодеградируемое гемостатическое лекарственное средство для остановки капиллярных и паренхиматозных кровотечений |
IL230150A0 (en) | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One-component fibrin glue containing zymogens |
IL230151A0 (en) | 2013-12-24 | 2014-09-30 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | One-component fibrin glue containing a polymerization inhibitor |
TW201538730A (zh) | 2014-02-12 | 2015-10-16 | Replicel Life Sciences Inc | 用於治療骨骼、關節及軟骨之組合物及方法 |
IL231230A0 (en) | 2014-02-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Fibrinogen preparation |
IL231792A0 (en) | 2014-03-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Device and method for the preparation and administration of one-component fibrin glue |
BR102014011436A8 (pt) * | 2014-05-12 | 2018-01-09 | Univ Estadual Paulista Julio De Mesquita Filho | selante de fibrina para uso tópico, método de formação do mesmo e seu uso |
US10390838B1 (en) | 2014-08-20 | 2019-08-27 | Pneumrx, Inc. | Tuned strength chronic obstructive pulmonary disease treatment |
US9932388B2 (en) | 2014-11-13 | 2018-04-03 | Hemarus Therapeutics Limited | Chromatographic process for producing high purity fibrinogen and thrombin |
US9713810B2 (en) | 2015-03-30 | 2017-07-25 | Biomet Biologics, Llc | Cell washing plunger using centrifugal force |
US9757721B2 (en) | 2015-05-11 | 2017-09-12 | Biomet Biologics, Llc | Cell washing plunger using centrifugal force |
US9540548B1 (en) | 2015-08-07 | 2017-01-10 | Xcede Technologies, Inc. | Adhesive compositions and related methods |
US9833538B2 (en) | 2015-08-07 | 2017-12-05 | Xcede Technologies, Inc. | Adhesive compositions and related methods |
EP3331577A4 (en) | 2015-08-07 | 2019-07-17 | Xcede Technologies, Inc. | ADHESIVE COMPOSITIONS AND ASSOCIATED METHODS |
US10501715B1 (en) | 2015-09-11 | 2019-12-10 | Mark H. Widick | System for the formation of fibrin foam |
RU2628809C1 (ru) * | 2016-06-30 | 2017-08-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение Гематологический научный центр Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздрава России) | Гемостатическая губка и способ ее получения |
FR3055805B1 (fr) | 2016-09-09 | 2020-05-15 | Assistance Publique - Hopitaux De Paris (Ap-Hp) | Biomateriau a usage therapeutique |
CN108220233B (zh) * | 2016-12-21 | 2021-07-09 | 上海透景诊断科技有限公司 | 细胞分离器具表面处理方法、相关器具、外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞快速高效分离方法 |
CN107589246B (zh) * | 2017-03-07 | 2019-10-01 | 上海原科实业发展有限公司 | 一种纤维蛋白激活剂、其制备方法,包括该激活剂的试剂盒及采用该试剂盒的检测方法 |
RU179063U1 (ru) * | 2017-07-03 | 2018-04-25 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Амурская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Салфетка с фибрином |
EP3694322B1 (en) | 2017-10-09 | 2024-07-03 | Terumo BCT Biotechnologies, LLC | Lyophilization container and method of using same |
US11154637B2 (en) | 2018-11-07 | 2021-10-26 | Industrial Technology Research Institute | Biodegradable sealant and use of a biodegradable sealant in manufacture of an agent for biological tissue adhesion or repair |
CN109679946B (zh) * | 2019-01-04 | 2020-11-13 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 一种血液病毒rna保护剂及采血管 |
WO2020185909A2 (en) | 2019-03-14 | 2020-09-17 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | Lyophilization loading tray assembly and system |
RU2749983C1 (ru) * | 2020-11-09 | 2021-06-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ герметизации панкреато-кишечного анастомоза с применением фибринового композита |
WO2022150361A1 (en) * | 2021-01-07 | 2022-07-14 | Baxter International Inc. | Thrombin-free hemostatic materials, methods of manufacture, and uses thereof |
WO2023222770A1 (en) | 2022-05-17 | 2023-11-23 | Julius-Maximilians-Universitaet Wuerzburg | Novel recombinant fibrinogen variants for fibrin sealants for surgical wound care |
Family Cites Families (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2533004A (en) * | 1943-10-27 | 1950-12-05 | John D Ferry | Fibrin clots and methods for preparing the same |
CH586233A5 (fi) * | 1971-01-18 | 1977-03-31 | Pentapharm Ag | |
GB1417003A (en) * | 1972-06-22 | 1975-12-10 | Radiochemical Centre Ltd | Stabilisation of fibrinogen |
US3915640A (en) * | 1974-08-06 | 1975-10-28 | Warner Lambert Co | Method and composition for detecting fibrin monomers and fibrin degradation products |
SU663404A1 (ru) * | 1976-12-30 | 1979-05-25 | Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова | Способ получени фибрин-мономера |
US4442650A (en) * | 1977-12-15 | 1984-04-17 | Sivachenko Eugene W | Girder construction |
US4167823A (en) * | 1978-06-21 | 1979-09-18 | Kumming Deborah G | Coagulation puzzle for teaching coagulation theory |
JPS5598196A (en) * | 1979-01-16 | 1980-07-25 | Meito Sangyo Kk | Fractionation of fibrinogen or its constituents and their use |
SE417342B (sv) * | 1979-02-05 | 1981-03-09 | Nya Asfalt Ab | Forfarande och anordning for grundleggning av for tillverkade anleggningar i land |
AT359653B (de) * | 1979-02-15 | 1980-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines gewebekleb- stoffes |
DE3017707A1 (de) * | 1980-05-08 | 1981-11-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zum nachweis von fibrinmonomer |
US4488198A (en) * | 1981-01-15 | 1984-12-11 | Sundstrand Corporation | Protective circuit for clutchless parallel generating system |
US4455290A (en) * | 1981-04-02 | 1984-06-19 | Research Corporation | Inhibition of fibrin polymerization by a peptide isolated from fibrin Fragment D1 |
US4480029A (en) * | 1981-04-27 | 1984-10-30 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Biological indicators and their use |
US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
US4442655A (en) * | 1981-06-25 | 1984-04-17 | Serapharm Michael Stroetmann | Fibrinogen-containing dry preparation, manufacture and use thereof |
EP0068149A3 (de) * | 1981-06-25 | 1983-07-20 | Serapharm GmbH & Co. KG | Fibrinogen-haltiges Trockenpräparat, dessen Herstellung und Verwendung |
ATE20824T1 (de) * | 1981-06-25 | 1986-08-15 | Serapharm Gmbh & Co Kg | Angereichertes plasmaderivat zur unterstuetzung von wundverschluss und wundheilung. |
DE3175003D1 (en) * | 1981-06-25 | 1986-08-28 | Serapharm Gmbh & Co Kg | Enriched plasma derivative for promoting wound sealing and wound healing |
US4438198A (en) * | 1981-09-30 | 1984-03-20 | Trimedyne, Inc. | Biochemically active matrix for use in a bio-artificial organ |
DE3203775A1 (de) * | 1982-02-04 | 1983-08-11 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Fibrinogenzubereitung, verfahen zu ihrer herstellungund ihre verwendung |
DE3230849A1 (de) * | 1982-08-19 | 1984-02-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Pasteurisiertes human-fibrinogen (hf) und verfahren zu dessen herstellung |
US4927916A (en) * | 1984-04-23 | 1990-05-22 | The General Hospital Corporation | Method of producing fibrin-specific monoclonal antibodies lacking fibrinogen-cross-reactivity using fibrin-specific peptides |
US5357042A (en) * | 1984-04-23 | 1994-10-18 | The General Hospital Corporation | Synthetic peptides capable of eliciting fibrin-specific monoclonal antibodies lacking fibrinogen-cross-reactivity |
DE3430906A1 (de) * | 1984-08-22 | 1986-02-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur bestimmung von fibrinmonomer in plasma |
US4627879A (en) * | 1984-09-07 | 1986-12-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Fibrin adhesive prepared as a concentrate from single donor fresh frozen plasma |
US4928603A (en) * | 1984-09-07 | 1990-05-29 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method of preparing a cryoprecipitated suspension and use thereof |
US5223420A (en) * | 1985-03-01 | 1993-06-29 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Elastin-based product, a procedure for its preparation and its biological applications; in particular as biomaterials and artificial supports |
SE447579B (sv) * | 1985-04-01 | 1986-11-24 | Biopool Ab | Solubiliserbar, fibrinbaserad komposition och anvendning av kompositionen vid bestemning av fibrinolysparametrar |
DE3622642A1 (de) * | 1986-07-05 | 1988-01-14 | Behringwerke Ag | Einkomponenten-gewebekleber sowie verfahren zu seiner herstellung |
DD261844A1 (de) * | 1986-07-09 | 1988-11-09 | Adw Ddr | Verfahren zur praezipitation von fibrinmonomeren |
US4714457A (en) * | 1986-09-15 | 1987-12-22 | Robert Alterbaum | Method and apparatus for use in preparation of fibrinogen from a patient's blood |
DK475386D0 (da) * | 1986-10-03 | 1986-10-03 | Weis Fogh Ulla Sivertsen | Fremgangsmaade og apparat til fremstilling af biologiske stoffer |
US4915847A (en) * | 1987-08-04 | 1990-04-10 | Baxter International Inc. | Cryoglobulin separation |
GB8628398D0 (en) * | 1986-11-27 | 1986-12-31 | Central Blood Lab Authority | Pharmaceutically-active conjugates |
US4709037A (en) * | 1987-02-17 | 1987-11-24 | Hoechst Celanese Corporation | Biotinylating agents |
US5175087A (en) * | 1987-07-06 | 1992-12-29 | Biopool International, Inc. | Method of performing tissue plasminogen activator assay |
DE3808048A1 (de) * | 1988-03-11 | 1989-09-21 | Behringwerke Ag | Verfahren zum affinitaetschromatografischen reinigen von faktor xiii |
US5290552A (en) * | 1988-05-02 | 1994-03-01 | Matrix Pharmaceutical, Inc./Project Hear | Surgical adhesive material |
AT397203B (de) * | 1988-05-31 | 1994-02-25 | Immuno Ag | Gewebeklebstoff |
DE3819923A1 (de) * | 1988-06-11 | 1989-12-21 | Behringwerke Ag | Fibrin(ogen)derivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
EP0390910B1 (en) * | 1988-10-17 | 1995-12-13 | Molecular Devices Corporation | Hapten derivatized capture membran and assays using such membrane |
JPH02129234A (ja) * | 1988-11-09 | 1990-05-17 | Kanebo Ltd | 難燃性フェノール系樹脂プリプレグ |
JPH02129224A (ja) * | 1988-11-10 | 1990-05-17 | Terumo Corp | フィブリンの製造法 |
DE3900493A1 (de) * | 1989-01-10 | 1990-07-12 | Thomae Gmbh Dr K | Verfahren zur bestimmung der fibrinolytischen gesamtaktivitaet im plasma |
US5026785A (en) * | 1989-05-12 | 1991-06-25 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Avidin and streptavidin modified water-soluble polymers such as polyacrylamide, and the use thereof in the construction of soluble multivalent macromolecular conjugates |
CA1335361C (en) * | 1989-05-24 | 1995-04-25 | Andrei Z. Budzynski | Thrombus-targeted complexes of plasminogen activator and fibrin fragments |
US5226877A (en) * | 1989-06-23 | 1993-07-13 | Epstein Gordon H | Method and apparatus for preparing fibrinogen adhesive from whole blood |
FR2649982B1 (fr) * | 1989-07-20 | 1991-09-27 | Inst Nat Sante Rech Med | Membrane biologique artificielle |
DK0423938T3 (da) * | 1989-09-29 | 1994-03-28 | Rohm & Haas | Ligandholdigt medium til kromatografisk adskillelse, fremgangsmåde til fremstilling af mediet og anvendelse af mediet til isolering af syntetiske eller naturlige molekyler fra en fluidumblanding |
US5252743A (en) * | 1989-11-13 | 1993-10-12 | Affymax Technologies N.V. | Spatially-addressable immobilization of anti-ligands on surfaces |
US5318524A (en) * | 1990-01-03 | 1994-06-07 | Cryolife, Inc. | Fibrin sealant delivery kit |
US5030215A (en) * | 1990-01-03 | 1991-07-09 | Cryolife, Inc. | Preparation of fibrinogen/factor XIII precipitate |
US5219328A (en) * | 1990-01-03 | 1993-06-15 | Cryolife, Inc. | Fibrin sealant delivery method |
US5185001A (en) * | 1990-01-18 | 1993-02-09 | The Research Foundation Of State University Of New York | Method of preparing autologous plasma fibrin and application apparatus therefor |
US5180828A (en) * | 1990-02-09 | 1993-01-19 | Molecular Devices Corporation | Chromophoric reagents for incorporation of biotin or other haptens into macromolecules |
US5420250A (en) * | 1990-08-06 | 1995-05-30 | Fibrin Corporation | Phase transfer process for producing native plasma protein concentrates |
JPH04233458A (ja) * | 1990-08-23 | 1992-08-21 | New York Blood Center Inc | 可溶性フィブリン様モノマーを使ったアッセイ |
DE69127345D1 (de) * | 1990-11-13 | 1997-09-25 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Mitomycinderivate |
US5206023A (en) * | 1991-01-31 | 1993-04-27 | Robert F. Shaw | Method and compositions for the treatment and repair of defects or lesions in cartilage |
CH681693A5 (fi) * | 1991-02-28 | 1993-05-14 | Pentapharm Ag | |
EP0534178B1 (en) * | 1991-09-27 | 2001-04-18 | Omrix Biopharmaceuticals S.A. | Improved tissue glue prepared by using cryoprecipitate |
US5527692A (en) * | 1991-12-31 | 1996-06-18 | Zymogenetics, Inc. | Methods for producing thrombin |
US5272074A (en) * | 1992-04-23 | 1993-12-21 | Mcmaster University | Fibrin coated polymer surfaces |
US5443959A (en) * | 1992-09-09 | 1995-08-22 | Tokuyama Corporation | Method of assaying fibrinogen, dry reagent therefor, and process for the preparation thereof |
CN1091315A (zh) * | 1992-10-08 | 1994-08-31 | E·R·斯奎布父子公司 | 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法 |
US5292416A (en) * | 1992-11-13 | 1994-03-08 | Indiana University Foundation | Pulsed-field separation of polysaccharides in capillaries |
US5520885A (en) * | 1993-01-19 | 1996-05-28 | Thermogenesis Corporation | Fibrinogen processing apparatus, method and container |
US5330974A (en) * | 1993-03-01 | 1994-07-19 | Fibratek, Inc. | Therapeutic fibrinogen compositions |
CA2158134C (en) * | 1993-03-12 | 2010-05-04 | Hernan A. Nunez | Supplemented tissue sealant |
US5464471A (en) * | 1994-11-10 | 1995-11-07 | Whalen Biomedical Inc. | Fibrin monomer based tissue adhesive |
US5510102A (en) * | 1995-01-23 | 1996-04-23 | The Regents Of The University Of California | Plasma and polymer containing surgical hemostatic adhesives |
EP0841108A1 (en) * | 1996-11-06 | 1998-05-13 | Norsk Hydro ASA | Process for connecting metal members |
-
1993
- 1993-09-30 CN CN93114438A patent/CN1091315A/zh active Pending
- 1993-10-06 RU RU93058414A patent/RU2143924C1/ru active
- 1993-10-07 HU HU9302839A patent/HU218898B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-10-07 KR KR1019930020710A patent/KR940008697A/ko not_active Application Discontinuation
- 1993-10-08 CZ CZ932117A patent/CZ211793A3/cs unknown
- 1993-10-08 EP EP93308029A patent/EP0592242B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-10-08 CA CA002510981A patent/CA2510981C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-10-08 ES ES93308029T patent/ES2202306T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-10-08 PL PL93320659A patent/PL176202B1/pl unknown
- 1993-10-08 AT AT93308029T patent/ATE244581T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-10-08 PT PT93308029T patent/PT592242E/pt unknown
- 1993-10-08 CA CA002566574A patent/CA2566574A1/en not_active Abandoned
- 1993-10-08 SK SK1093-93A patent/SK109393A3/sk unknown
- 1993-10-08 CA CA002108104A patent/CA2108104C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-10-08 IL IL107211A patent/IL107211A/xx not_active IP Right Cessation
- 1993-10-08 SG SG1996002271A patent/SG49640A1/en unknown
- 1993-10-08 BR BR9304185A patent/BR9304185A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-10-08 NZ NZ248897A patent/NZ248897A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-10-08 DK DK93308029T patent/DK0592242T3/da active
- 1993-10-08 JP JP28409793A patent/JP3771284B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-10-08 EP EP02019700A patent/EP1266666A3/en not_active Withdrawn
- 1993-10-08 NZ NZ280264A patent/NZ280264A/xx not_active IP Right Cessation
- 1993-10-08 DE DE69333080T patent/DE69333080T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-10-08 AU AU48878/93A patent/AU676201B2/en not_active Ceased
- 1993-10-08 PL PL93320660A patent/PL175443B1/pl unknown
- 1993-10-08 ES ES09302126A patent/ES2065294B1/es not_active Expired - Fee Related
- 1993-10-08 MX MX9306272A patent/MX9306272A/es not_active IP Right Cessation
- 1993-10-08 NO NO19933624A patent/NO314412B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-10-08 PL PL93300647A patent/PL173858B1/pl unknown
- 1993-10-08 FI FI934440A patent/FI110616B/fi active
- 1993-10-18 US US08/138,674 patent/US5750657A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-05-25 US US08/450,829 patent/US5770194A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-26 US US08/451,321 patent/US5739288A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-31 US US08/456,127 patent/US5962026A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-02 US US08/489,521 patent/US5763411A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-02 US US08/460,738 patent/US5763410A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-03-26 US US08/832,320 patent/US6077507A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-11 NZ NZ328064A patent/NZ328064A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-11-20 US US08/975,095 patent/US5773418A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-23 US US08/997,265 patent/US6048966A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-03-31 US US09/052,340 patent/US5804428A/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-13 US US09/059,068 patent/US5962420A/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-02-28 US US09/514,169 patent/US6262236B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI110616B (fi) | Menetelmä fibriinimonomeerikoostumuksen valmistamiseksi | |
US5330974A (en) | Therapeutic fibrinogen compositions | |
JP4965805B2 (ja) | フィブリノゲンの精製 | |
CN105899242B (zh) | 包含聚合抑制剂的一组分纤维蛋白胶 | |
WO1992013495A1 (en) | Fibrinogen based adhesive | |
US20120156284A1 (en) | Enhanced biological autologous tissue adhesive composition and methods of preparation and use | |
RU2719562C2 (ru) | Пептидные дендримеры, содержащие фибриноген-связывающие пептиды | |
CN113925997B (zh) | 一种含止血微胶囊的明胶海绵及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: VIVOLUTION A/S Free format text: VIVOLUTION A/S |