ES2902521T3 - Derivados de aminopiridina y su uso como inhibidores selectivos de ALK-2 - Google Patents

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Abstract

Un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3- azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de aminopiridina y su uso como inhibidores selectivos de ALK-2
Antecedentes de la invención
ALK-2, también conocido como receptor de activina A, tipo I (ACVR1) o como receptor de serina treonina proteína quinasa R1 (SKR1) es una proteína quinasa que en humanos está codificada por el gen ACVR1.
ALK-2 es un receptor de BMP de tipo I que se expresa ampliamente. Comprende un dominio de unión a ligando extracelular y un dominio de serina/treonina quinasa intracelular regulado, ambos necesarios para la transducción de señales.
Las proteínas morfogénicas óseas (BMP) son factores de crecimiento multifuncionales que son miembros de la superfamilia del factor de crecimiento transformante p (TGFp). La señalización de BMP desempeña un papel en el desarrollo del corazón, neural y el cartílago, así como en la formación ósea posnatal. Las BMP inducen ectópicamente la formación de hueso endocondral y desempeñan un papel crítico en la morfogénesis articular y esquelética (Urist, Science 110:893-899 (1965); Olsen et al, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 16:191-220 (2000); Kronenberg, Nature 423:332-336 (2003); Thomas et al., Nat. Genet. 12:315-317 (1996); Thomas et al., Nat. Genet.
17:58-64 (1997); Polinkowsky et al., Nat. Genet. 17:18-19 (1997); Storm et al., Nature 368:639-643 (1994).); y Wozney, Prog. Growth Factor Res. 1:267-280 (1989)).
La señalización de BMP se controla a muchos niveles, incluyendo a través de antagonistas extracelulares como noggin (Massague, Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 1:169-178 (2000)). Se ha sugerido que la activación inoportuna o no deseada de las vías de señalización fundamentales para el desarrollo normal puede promover procesos patológicos como las espondiloartropatías. También se han descrito los efectos de la señalización de BMP sobre la iniciación y progresión de la artritis por transferencia génica de noggin (Lories et al., J. Clin. Invest., 115, 1571-1579 (2005)). Las funciones fisiológicas de las BMP y la señalización del receptor de BMP en la formación ósea normal, incluyendo el desarrollo del esqueleto y de las extremidades, se han estudiado y revisado en Zhao, Genetics 35:43-56 (2003).
Los experimentos con antagonistas de BMP demuestran que la regulación de las proteínas de señalización de BMP es fundamental para la formación ósea in vivo (Devlin et al., Endocrinology 144:1972-1978 (2003) y Wu et al., J. Clin. Invest., 112:924 (2003)).
La fibrodisplasia osificante progresiva (FOP) es un trastorno genético raro e incapacitante caracterizado por malformaciones congénitas de los dedos gordos del pie y por la osificación endoncodral heterotópica progresiva en patrones anatómicos predecibles. Se ha encontrado expresión ectópica de BMP4 en pacientes con FOP (Gannon et al., Hum. Pathol. 28:339-343 (1997) y Xu et al., Clin. Genet. 58:291-298 (2000)). Se ha demostrado que los pacientes con FOP tienen mutaciones activadoras en ALK-2 (Shore et al., Nat. Genet., 38(5) 525-7 (2006)).
Se ha establecido que la señalización de BMP excesiva lleva a una serie de condiciones descritas anteriormente. La WO2008033408 y la WO2009114180 describen inhibidores de la vía de señalización de BMP. Sin embargo, todavía hay una necesidad constante de encontrar formas alternativas en las que pueda regularse la señalización de BMP.
Esta necesidad puede satisfacerse diseñando inhibidores selectivos de ALK-2.
Los anticuerpos de ALK-2 específicos se describen, por ejemplo, en la WO1994011502 y la WO2008030611. Las proteínas osteogénicas que se unen a aLk-2 se describen en la WO2012023113 y la WO2012077031.
La WO2007123896 describe un método para tratar una patología asociada con la osificación heterotópica mediante la administración de ARNip específico contra un ácido nucleico que codifica una ALK-2 mutada.
La WO2014160203 y la WO2014138088 describen inhibidores de la vía de BMP. La WO 2015152183 describe inhibidores de ALK-2 para el tratamiento de FOP. Los inhibidores de ALK-2 también se describen en la WO2014151871.
Sumario de la invención
Hay una necesidad continua de desarrollar nuevos inhibidores de ALK-2 que sean buenos candidatos a fármacos. Tales candidatos encontrarían aplicaciones, entre otras cosas, en el tratamiento de la fibrodisplasia osificante progresiva (FOP) o la osificación heterotópica no hereditaria (HO).
La invención proporciona un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; composiciones farmacéuticas de los mismos, cuyos compuestos son inhibidores de ALK-2. La invención proporciona además un compuesto de la invención para su uso en el tratamiento de una enfermedad que puede tratarse mediante la inhibición de la actividad del receptor de ALK-2 en un sujeto con necesidad de ello, como tratando, previniendo o mejorando la fibrodisplasia osificante progresiva (FOP) o la osificación heterotópica no hereditaria (HO) que comprende administrar a un sujeto con necesidad de ello una cantidad eficaz de un inhibidor de ALK-2 de acuerdo con la invención.
En la presente se describen varias realizaciones de la invención.
Dentro de ciertos aspectos, la invención proporciona un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un aspecto adicional, la invención proporciona un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto más, la invención proporciona un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra realización, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención como se define en la presente en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un compuesto de la invención para su uso en un método de inhibición de la actividad del receptor de ALK-2 en un sujeto, en donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la invención como se define en la presente en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto más, la invención se refiere a un compuesto de la invención para su uso en un método de tratamiento de un trastorno o enfermedad seleccionada de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la invención como se define en la presente en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de la invención demuestran propiedades farmacocinéticas favorables, no son tóxicos y presentan pocos efectos secundarios. En particular, los compuestos de la invención son inhibidores selectivos de ALK-2 sobre otros receptores. Además, el fármaco candidato ideal estará en una forma que es estable, no higroscópica y de fácil formulación.
Figuras
La Figura 1 muestra la cuantificación de pCT del hueso heterotópico formado en la pata trasera derecha de ratones 6 semanas después de la inducción del brote de FOP con adenovirus/CTX y muestra el efecto del tratamiento con compuesto A durante 6 semanas sobre la formación de HO. Media /- SEM. *: p<0,05, **: p<0,01, ***: p<0,01 frente al tratado con vehículo; ANOVA de 1 vía con prueba post-hoc de Dunnett.
La Figura 2 muestra la cuantificación de pCT del hueso heterotópico formado en la pata trasera derecha de ratones 8 semanas después de la inducción del brote de FOP con adenovirus/CTX y muestra el efecto del tratamiento con compuesto A durante 6 semanas sobre la formación de HO. Media /- SEM. *: p<0,05, **: p<0,01, ***: p<0,01 frente al tratado con vehículo; Prueba t
La Figura 3 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo de cristales con Modificación Ha de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 4 muestra el diagrama de barrido diferencial de cristales con Modificación Ha de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 5 muestra el diagrama de análisis termogravimétrico de la Modificación Ha de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 6 muestra el diagrama infrarrojo de la transformada de Fourier de la Modificación Ha de la forma libre cristalina M del compuesto A.
La Figura 7 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Modificación A de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 8 muestra el diagrama de barrido diferencial de la Modificación A de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 9 muestra el diagrama de análisis termogravimétrico de la Modificación A de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 10 muestra el diagrama infrarrojo de la transformada Fourier de la Modificación A de la forma libre cristalina del compuesto A.
La Figura 11 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo de la Modificación Ha de la sal de fumarato cristalina del compuesto A.
La Figura 12 muestra el diagrama de barrido diferencial de la Modificación Ha de la sal de fumarato cristalina del compuesto A.
La Figura 13 muestra el diagrama de análisis termogravimétrico de la Modificación Ha de la sal de fumarato cristalina del compuesto A.
La Figura 14 muestra el diagrama infrarrojo de la transformada de Fourier de la Modificación Ha de la sal de fumarato cristalina del compuesto A.
La Figura 15 muestra el diagrama dinámico de absorción de vapor de la Modificación Ha de la sal de fumarato cristalina del compuesto A, a 25 grados C, método 50%-0%-90% de humedad relativa (HR).
La Figura 16 muestra el diagrama dinámico de absorción de vapor de la Modificación Ha de la sal de fumarato cristalina del compuesto A, a 40 grados C, método 50%-0%-90% de HR.
La Figura 17 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo de la sal fosfato cristalina del compuesto A. La Figura 18 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma libre cristalina anhidratada (Ejemplo 89 C)).
La Figura 19 muestra el patrón de difracción de rayos X en polvo de la forma libre cristalina trihidratada (Ejemplo 89 D)).
Descripción detallada de la invención
En particular, la invención se refiere a un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también se refiere a un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención se refiere además a un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se describe en la presente un compuesto de fórmula (I) en forma libre o en forma de sal aceptable,
Figure imgf000005_0001
en donde
L es un enlace, (CH2K -CH(CH3)-, -O-(CH2)n-, -C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)n-;
n es 1,2, 3;
R1 se selecciona de cicloalquilo C3-C7 opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de hidroxilo, halógeno, alquilo C1-C3 ; cicloalquilo C5-C10 con puente opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de hidroxilo, hidroxi alquilo1 -C3 ;
R2 y R3 se seleccionan independientemente de H, halógeno, alquilo C1-C3 ;
R4 es un anillo heterocíclico no aromático que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7 ;
R7 se selecciona independientemente de alquilo C1-C3, hidroxi alquilo C1 -C3, halo alquilo C1-C3, alcoxi C1-C3 alquilo C1-C3 , halo alcoxi C1-C3 alquilo C1-C3 , alquinilo C2-C4 , ciano alquilo C1-C3, (CH2)m-R8 ;
m es 0, 1, 2 o 3;
R8 se selecciona de
- un anillo heterocíclico no aromático saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros que comprende uno o más heteroátomos seleccionados de N, O o S, estando dicho anillo opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de oxo, SO2alquiloC1-C3, halo alquilo C1-C3 ; o
- un cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido una vez o más de una vez con halo.
A menos que se especifique lo contrario, el término "compuestos de la presente invención" o "compuestos de la invención" se refiere a un compuesto seleccionado de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida, 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida y 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida y sales de los mismos, así como todos los estereoisómeros (incluyendo diastereoisómeros y enantiómeros), rotámeros, tautómeros y compuestos marcados isotópicamente (incluyendo las sustituciones de deuterio), así como fracciones formadas inherentemente.
Como se usa en la presente, el término " alquilo C1-C3" se refiere a un radical de cadena de hidrocarburo lineal o ramificada que consiste únicamente de átomos de carbono e hidrógeno, que no contiene insaturación, que tiene de uno a tres átomos de carbono y que está unido al resto de la molécula por un enlace simple. Ejemplos de alquilo C1-C3 incluyen metilo, etilo, n-propilo, 1-metiletilo (/so-propilo).
Como se usa en la presente, el término "hidroxi alquilo C1 -C3 " se refiere a un radical de fórmula -Ra-OH, en donde Ra es alquilo C1-C3 como se ha definido anteriormente.
Como se usa en la presente, el término "cicloalquilo C3-C7" se refiere a grupos hidrocarburo monocíclicos saturados de 3-7 átomos de carbono. Los ejemplos de cicloalquilo C3-C7 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo.
Como se usa en la presente, el término "alcoxi C1-C3" se refiere a un radical de fórmula -ORa en donde Ra es un radical alquilo C1-C3 como se ha definido de manera general anteriormente. Ejemplos de alcoxi C1-C3 incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, pentoxi, y hexoxi.
Como se usa en la presente, el término "alcoxi C1-C3alquilo C1-C3" se refiere a un radical de la fórmula -Rb-ORa donde Ra es un radical alquilo C1-C3 y Rb es un radical alquilo C1-C3 como se ha definido anteriormente. El átomo de oxígeno puede estar unido a cualquier átomo de carbono en cualquier radical alquilo. Ejemplos de alcoxi C1-C3alquilo C1-C3 alquilo incluyen, por ejemplo, metoxi-metilo, metoxi-etilo, etoxi-etilo.
"Halógeno" o "halo" se refiere a bromo, cloro, flúor o yodo.
Como se usa en la presente, el término "halógeno alquilo C1-C3" o "halo alquilo C1-C3" se refiere a un radical alquilo C1-C3, como se ha definido anteriormente, sustituido con uno o más radicales halo, como se ha definido anteriormente. Ejemplos de halógeno alquilo C1-C3 incluyen, por ejemplo, trifluorometilo, difluorometilo, fluorometilo, triclorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 1-fluorometil-2-fluoroetilo, 3-bromo-2-fluoropropilo y 1-bromometil-2 -bromoetilo.
Como se usa en la presente, el término "halo alcoxiC1-C3alquilo C1-C3" se refiere a un radical de la fórmula -Rb-ORa donde Ra es un radical alquilo C1-C3 y Rb es un radical halo alquilo C1-C3 como se ha definido anteriormente.
Como se usa en la presente, el término "un anillo no aromático heterocíclico que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S" en relación con R4 se refiere a un anillo o sistema de anillos no aromático saturado o insaturado, que es un anillo monocíclico de 4, 5, 6 o 7 miembros que contiene 1,2 o 3 heteroátomos seleccionados de O, S y N en donde por lo menos un heteroátomo es N, un sistema de anillo bicíclico de 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 miembros que contiene 1, 2, 3, 4 o 5 heteroátomos seleccionados de O, S y N en donde por lo menos un heteroátomo es N, o un sistema de anillo tricíclico de 10, 11, 12, 13, 14 o 15 miembros que contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 heteroátomos seleccionados de O, S y N en donde por lo menos un heteroátomo es N, donde N y S también pueden oxidarse opcionalmente a varios estados de oxidación. El anillo heterocíclico no aromático que contiene N puede unirse mediante un heteroátomo o un átomo de carbono. El anillo heterocíclico no aromático que contiene N puede incluir anillos fusionados o con puentes así como anillos espirocíclicos. En una realización preferida, el “anillo heterocíclico no aromático que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S" es un anillo monocíclico saturado de 5 miembros que contiene N, un anillo monocíclico saturado de 5 miembros que contiene N anillo monocíclico o bicíclico saturado de 7 miembros, un anillo espirocíclico saturado de 7 miembros que contiene N. Los ejemplos de un anillo heterocíclico no aromático que contiene N incluyen morfolina, piperazina, piperidina, imidazolidina, imidazolina, pirrolina, pirrolidina, tiomorfolina, 3-azabiciclo[3.1.0]hexano.
Como se usa en la presente, el término "un anillo no aromático heterocíclico de 5 miembros que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S" en relación con 4 incluye, como ejemplos, pirrolidina, 2,3-dihidropirrolo, oxazolidina, imidazolidina. En una realización preferida, se refiere a pirrolidina. El anillo se une al resto de la molécula a través de un átomo de carbono en el anillo.
Como se usa en la presente, el término "un anillo monocíclico o bicíclico no aromático heterocíclico de 6 miembros que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S" en relación con R4 incluye, como ejemplos, morfolina, tiomorfolina, piperidina, piperazina, 3-azabiciclo[3.1.0]hexano. En una realización preferida, se refiere a 3-azabiciclo[3.1.0]hexano. El anillo se une al resto de la molécula a través de un átomo de carbono en el anillo.
Como se usa en la presente, el término "un anillo de 5 miembros que comprende opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O o S" en relación con las realizaciones en las que R5 y R6 junto con el átomo de N al que están unidos forman dicho anillo, incluye como ejemplos, pirrolidina, 2,3-dihidropirrolo, oxazolidina, imidazolidina. En una realización preferida, se refiere a pirrolidina.
Como se usa en la presente, el término "un anillo de 6 miembros que comprende opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O o S" en relación con las realizaciones en las que R5 y R6 junto con el átomo de N al que están unidos forman dicho anillo, incluye como ejemplos piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo.
Como se usa en la presente, el término "un espirociclo de 7 miembros que comprende opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, O o S" en relación con las realizaciones en las que R5 y R6 junto con el átomo de N al que están unidos forman dicho anillo, incluye como ejemplos, 2-azaespiro[3.3]heptano, 2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano.
Como se usa en la presente, el término "un cicloalquilo C5-C10 con puente" se refiere a un sistema de anillo bicíclico o tricíclico saturado que comprende por lo menos un puente. Ejemplos de cicloalquilo C5-C10 con puente incluyen, por ejemplo, biciclo[1.1.1]pentano, biciclo[2.2.2]octano, biciclo[2.2.1]heptano, triciclo[3.3.1.137 ]decano.
Como se usa en la presente, el término "alquinilo C2-C4" se refiere a un grupo radical de cadena lineal que consiste únicamente en átomos de carbono e hidrógeno, que contiene por lo menos un enlace triple, que tiene de dos a cuatro átomos de carbono, y que está unido al resto de la molécula por un enlace simple. Ejemplos de alquinilo C2-C4 incluyen, por ejemplo, etinilo, prop-1 -inilo, but-1 -inilo.
Como se usa en la presente, el término "ciano alquilo C1-C3" se refiere a un radical de fórmula -Ra-CN, en el que Ra es alquilo C1-C3 como se ha definido anteriormente.
Como se usa en la presente, el término "un anillo heterocíclico no aromático saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros que comprende uno o más heteroátomos seleccionados de N, O o S" incluye, como ejemplos, tetrahidropirano, morfolina, piperidina, oxetano. En una realización preferida, es tetrahidróxido.
Como se usa en la presente, el término "ALK-2" se refiere al receptor de activina A, tipo I (ACVRI), también conocido como ACVRLK2; SKR1; ACVR1A; receptor de activina tipo I; quinasa 2 similar al receptor de activina; receptor de serina/treonina-proteína quinasa R1; receptor tipo I de la superfamilia de TGF-B; ACTRI; TSRI; receptor de activina A, quinasa 2 similar a tipo II; receptor de activina tipo 1; hidroxialquil-proteína quinasa; ACTR-I; TSR-I.
También se divulgan en la presente los siguientes:
1. Un compuesto de fórmula (I) en forma libre o en forma de sal aceptable,
Figure imgf000007_0001
en donde
L es un enlace, (CH2)n, -CH(CH3)-, -O-(CH2)n-, -C(O)-, -C(O)-NH-(CH2)n-;
n es 1, 2, 3;
R1 se selecciona de cicloalquilo C3-C7 opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de hidroxilo, halógeno, alquilo C1-C3 ; cicloalquilo C5-C10 con puente opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de hidroxilo, hidroxi alquilo1 -C3 ;
R2 y R3 se seleccionan independientemente de H, halógeno, alquilo C1-C3 ;
R4 es un anillo heterocíclico no aromático que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7 ;
R7 se selecciona independientemente de alquilo C1-C3, hidroxi alquilo C1 -C3, halo alquilo C1-C3, alcoxi C1-C3 alquilo C1-C3 , halo alcoxi C1-C3 alquilo C1-C3 , alquinilo C2-C4 , ciano alquilo C1-C3, (CH2)m-R8 ;
m es 0, 1, 2 o 3;
R8 se selecciona de
- un anillo heterocíclico no aromático saturado o insaturado de 4, 5 o 6 miembros que comprende uno o más heteroátomos seleccionados de N, O o S, estando dicho anillo opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de oxo, SO2alquiloC1-C3, halo alquilo C1-C3 ; o
- un cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido una vez o más de una vez con halo.
2. Un compuesto de acuerdo con 1 de la fórmula (Ia) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
Figure imgf000008_0001
3. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 o 2, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R4 es NR5R6 en donde R5 y R6 junto con el átomo de N al que están unidos forman un anillo de 5 miembros que comprende opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, o o S, opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7.
4. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 o 2, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R4 es NR5 R6 en donde R5 y R6 junto con el átomo de N al que están unidos forman un anillo de 6 miembros que comprende opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, o o S, opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7.
5. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 o 2, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R4 es NR5R6 en donde R5 y R6 junto con el átomo de N al que están unidos forman un espirociclo de 7 miembros que comprende opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de N, o o S, opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7.
6. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 o 2 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R4 es un anillo no aromático heterocíclico de 5 miembros que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de N, O o S en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7 y en donde dicho anillo está unido al resto de la molécula mediante un átomo de carbono del anillo.
7. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 o 2 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R4 es un anillo monocíclico o bicíclico no aromático heterocíclico de 6 miembros que contiene N que comprende opcionalmente uno o más heteroátomos adicionales seleccionado de N, O o S, en donde dicho anillo está opcionalmente sustituido una o más de una vez con R7 y en donde dicho anillo está unido al resto de la molécula mediante un átomo de carbono del anillo.
8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1, 2 o 7 de fórmula (II) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable,
Figure imgf000008_0002
en donde R7 se selecciona independientemente de alquilo C1-C3 , hidroxi alquilo C1-C3 , halo alquilo C1-C3 , alcoxi C1-C3alquilo C1-C3, halo alcoxi C1-C3 alquilo C1-C3, alquinilo C2-C4, ciano alquilo C1-C3 , (CH2)m-Rs ;
m es 0, 1, 2 o 3.
9. Un compuesto de acuerdo con 8 de fórmula (Ila) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
Figure imgf000009_0001
10. Un compuesto de acuerdo con 8 de fórmula (IIb) en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
Figure imgf000009_0002
11. Un compuesto
Figure imgf000009_0003
aceptable, en donde
R7 es (CH2)m-R8 ;
R8 es un anillo heterocíclico de 6 miembros que comprende uno o más heteroátomos seleccionados de N, O o S, estando dicho anillo opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de oxo, SO2alquilo C1-C3 , haloalquilo C1-C3 ;
m es 0, 1, 2 o 3.
12. Un compuesto de acuerdo con 11 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R8 es tetrahidropirano sin sustituir y m es 0.
13. el compuesto A de acuerdo con 11 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R8 es morfolina no sustituida y m es 2 o 3.
14. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1-13 en la forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es ciclohexilo opcionalmente sustituido una o más de una vez con un sustituyente seleccionado independientemente de hidroxilo, halógeno, alquilo C1-C3.
15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1-14 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es
Figure imgf000010_0001
16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1-15 en la forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es
Figure imgf000010_0002
17. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 a 13 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es biciclo[2.2.2]octanilo sustituido una vez con hidroxilo.
18. Un compuesto de acuerdo con 17 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es
Figure imgf000010_0003
19. Un compuesto de acuerdo con una realización cualquiera de 1 a 13 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es biciclo[1.1.1]pentanilo sustituido con hidroximetilo.
20. Un compuesto de acuerdo con 19 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en donde R1 es
Figure imgf000010_0004
21. Un compuesto de acuerdo con 1, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable que se selecciona de
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
5-(4-(-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(3-morfolinopropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida; 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-(-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1 -il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(1 -isopropilpirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-(-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)-5-(4-(-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(3,3,3-trifluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(pirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
5-(4-(2-azaespiro[3.3]heptan-2-ilmetil)fenil)-2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;2-amino-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-(-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida; 2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)-5-(4-(-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(2-fluoro-4-(piperazin-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-5-(4-(-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octano-1-il)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(but-2-in-1-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(oxetan-3-ilmetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(1 -(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(2-(2,2,2-trifluoroetoxi)etil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(1,1-dioxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(4-metilpiperazina-1-carbonil)fenil)nicotinamida2-amino-5-(3-fluoro-4-(2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-morfolinofenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(2,2-difluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida; 2-amino-5-(4-(-3-(2-cianoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-morfolinopropoxi)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(3-(prop-2-in-1-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
5-(4-(-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)-2-clorofenil)-2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(2-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-(-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)nicotinamida; 2-amino-5-(4-(-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
5-(4-(-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(piperidin-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)carbamoil)fenil)nicotinamida;2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(-3-(2,2,2-trifluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
5-(4-(-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-(-3-hidroxiadamantan-1-il)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(morfolin-4-carbonil)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(2,3-difluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil-4-d)-5-(4-(-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(2-cloro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-(2-hidroxipropan-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)-5-(4-(-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il))-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(3-(morfolin-4-carbonil)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(3-cloro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
5-(4-(-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-(-4-hidroxi-1-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(2-metil-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)nicotinamida; y
2-amino-N-ciclohexil-5-(3-(4-(2-hidroxietil)piperazina-1-carbonil)fenil)nicotinamida.
22.Un compuesto de acuerdo con 21 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, que se selecciona de
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinam ida; 5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida; 5-(4-((S)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida; 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(3-morfolinopropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(1-isopropilpirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1- il)fenil)nicotinamida;
2- amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(3,3,3-trifluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(pirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1s,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
5-(4-(2-azaespiro[3.3]heptan-2-ilmetil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4R))-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4S))-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(2-fluoro-4-(piperazin-1-il)fenil)-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1- il)nicotinamida;
2- amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(but-2-in-1-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4S)-4 hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4s)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(oxetan-3-ilmetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinam ida;
2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-(2,2,2-trifluoroetoxi)etil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,1-dioxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida; 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(3,3,3-trifluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2,2-difluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4R))-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-cianoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(prop-2-in-1 -il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(prop-2-in-1 -il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)-2-clorofenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(2-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida; 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S))-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(but-2-in-1-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1- il)fenil)nicotinamida;
2- amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-ciclohexil-5-(4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)etil)carbamoil)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(2,2,2-trifluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 R,3R)-3-hidroxiadamantan-1-il)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(oxetan-3-ilmetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1s,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida; 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida;
2-amino-5-(2,3-difluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida; 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(2,2-difluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4S))-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2,2,2-trifluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil-4-d)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-N-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(4-metilpiperazin-1-carbonil)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan1- il)nicotinamida;
2- amino-5-(2-cloro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida; 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r,4R))-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida;
2-amino-N-(3-(2-hidroxipropan-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida;
2-amino-5-(3-cloro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida; 5-(4-((R)-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-1 -metilciclohexil)nicotinamida; y
2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(2-metil-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)nicotinam ida. 23. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 a 22 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
24. Una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 a 22 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable y uno o más agentes terapéuticamente activos.
25. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 a 22 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, para su uso como medicamento.
26. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de 1 a 22 en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, para su uso en el tratamiento de un trastorno o enfermedad seleccionada de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
En la presente se describen varias realizaciones de la invención. Se reconocerá que las características especificadas en cada realización pueden combinarse con otras características especificadas para proporcionar más realizaciones de la presente invención.
Realización 1. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en forma libre, especialmente en la Modificación Ha de la forma libre, especialmente (i) que tiene valores 2Theta en la reflexión de XRPD de los primeros 2, primeros 3, primeros 4, primeros 5, primeros 6, primeros 8, especialmente los primeros diez o en particular todos los valores de 2Theta proporcionados en la Tabla A a continuación; o (ii) que muestra un diagrama de DSC como se muestra en la Fig. 4; o (iii) tiene un diagrama de TGA como se muestra en la Fig. 5; o (iv) tiene un diagrama de FT-IR como se muestra en la Fig. 6; o tiene dos o tres o especialmente todas las propiedades de (i) a (iv) recién mencionadas; o en particular tiene un diagrama XRPD como se muestra en la Fig. 3.
Realización 2. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en forma libre, especialmente en la forma de Modificación A, especialmente (i) que tiene valores 2Theta en la reflexión de XRPD de los primeros 2, primeros 3, primeros 4, primeros 5, primeros 6, primeros 8, especialmente los primeros diez o todos los valores de 2Theta proporcionados en la Tabla B a continuación; o (ii) que muestra un diagrama de DSC como se muestra en la Fig. 8; o (iii) que tiene un diagrama de TGA como se muestra en la Fig. 9; o (iv) que tiene un diagrama de FT-IR como se muestra en la Fig. 10; o que tiene dos o tres o especialmente todas las propiedades de (i) a (iv) recién mencionadas; o en particular que tiene un diagrama de XRPD como se muestra en la Fig. 7.
Realización 3. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida como anhidrato de forma libre, en particular con un diagrama de XRPD como se muestra en la Fig. 18.
Realización 4.2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida como trihidrato de forma libre, en particular con un diagrama de XRPD como se muestra en la Fig. 19.
Realización 5. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida en forma de sal de fumarato, en particular con una relación molar de 1:1 de compuesto A a ácido fumárico, especialmente en forma de la Modificación Ha de sal fumarato, especialmente (i) que tiene valores 2Theta en la reflexión de XRPD de los primeros 2, primeros 3, primeros 4, primeros 5, primeros 6, primeros 8, especialmente los primeros diez o en particular todos los valores 2Theta proporcionados en la Tabla C a continuación; o (ii) que muestra un diagrama de DSC como se muestra en la Fig. 12; o (iii) que tiene un diagrama de TGA como se muestra en la Fig. 13; o (iv) que tiene un diagrama de FT-IR como se muestra en la Fig. 14; o (v) que tiene un diagrama de DVS a 25° C como se muestra en la Fig. 15; o (vi) que tiene un diagrama de DVS a 40° C como se muestra en la Fig. 16; o que tiene dos o tres o cuatro o cinco o especialmente todas las propiedades de (i) a (iv) recién mencionadas; o en particular que tiene un diagrama de XRPD como se muestra en la Fig. 11.
Realización 6. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en la variante 1 de la forma amorfa de sal de fumarato, en particular que tiene una relación molar de 1:1 de compuesto A a ácido fumárico, especialmente que muestra una transición vitrea a aproximadamente 143° C, cuando se analiza mediante DSC modulado a una velocidad de calentamiento de 1 K/min, temperatura de amplitud de 1 K, periodo de 60 segundos.
Realización 7. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida en la variante 2 de la forma amorfa de fumarato, en particular con una relación molar de 1:1 de compuesto A a ácido fumárico, especialmente que muestra una transición vitrea a aproximadamente 78° C cuando se analiza por DSC a una velocidad de calentamiento de 10 K/min.
Realización 8. 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida en forma de sal de fosfato, en particular con una relación molar de 1:1,5 del compuesto A a ácido fosfórico, especialmente (i) que tiene valores 2Theta en la reflexión de XRPD de los primeros 2, primeros 3, primeros 4, primeros 5, primeros 6, primeros 8, especialmente los primeros diez o en particular todos los valores 2Theta proporcionados en la Tabla D a continuación; o en particular que tiene un diagrama de XRPD como se muestra en la Fig. 17.
Realización 9. Un compuesto en una forma de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1 a 8 para su uso como medicamento.
Realización 10. Un compuesto en una forma de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1 a 8 para su uso en el tratamiento de un trastorno o enfermedad seleccionada de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
Cuando se da un valor 2Theta (o en las tablas a continuación "Ángulo") en esta divulgación, esto significa el valor respectivo ± 0,2, o especialmente el propio valor.
Cuando se usa el término "Modificación", se refiere a formas amorfas o especialmente a polimorfos cristalinos (es decir, formas de estructuras cristalinas), incluyendo también pseudopolimorfos, como solvatos o especialmente hidratos, de formas libres o de sales, respectivamente.
Dependiendo de la elección de los materiales de partida y los procedimientos, los compuestos pueden estar presentes en forma de isómeros ópticos puros o como mezclas de isómeros, como racematos y mezclas de diastereoisómeros, dependiendo del número de átomos de carbono asimétricos. Se pretende que la presente invención incluya todos estos posibles isómeros, incluyendo mezclas racémicas, mezclas diasterioméricas y formas ópticamente puras. Los isómeros (R) y (S) ópticamente activos pueden prepararse usando sintones quirales o reactivos quirales, o pueden resolverse usando técnicas convencionales. Si el compuesto contiene un enlace doble, el sustituyente puede tener una configuración E o Z. Si el compuesto contiene un cicloalquilo disustituido, el sustituyente cicloalquilo puede tener una configuración cis- o trans-. También se pretende que estén incluidas todas las formas tautoméricas.
Como se usa en la presente, los términos "sal" o "sales" se refieren a una sal de adición de ácido o de adición de base de un compuesto de la invención. Las "sales" incluyen en particular las "sales farmacéuticamente aceptables". El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y que típicamente no son biológicamente o de otro modo indeseables. En muchos casos, los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales de ácidos en virtud de la presencia de una fracción de aminopiridina básica. Cuando se menciona "forma libre", esto se refiere a la forma sin ácidos y/o bases adicionales, es decir, el compuesto como tal (que, sin embargo, puede formar sales internas si el compuesto comprende grupos básicos y ácidos).
Pueden formarse sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables con ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos.
Los ácidos inorgánicos de los que pueden derivarse sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares.
Los ácidos orgánicos de los que pueden derivarse sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico., ácido etanosulfónico, ácido toluensulfónico, ácido sulfosalicílico y similares.
En otro aspecto, la presente invención proporciona compuestos de la invención en forma de sal de acetato, ascorbato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/bromhidrato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, canforsulfonato, caprato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etandisulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, glutamato, glutarato, glicolato, hipurato, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, sebacato, estearato, succinato, sulfosalicilato, sulfato, tartrato, tosilato trifenatato, trifluoroacetato o xinafoato
Se pretende que cualquier fórmula proporcionada en la presente también represente formas no marcadas así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas proporcionadas en la presente, excepto que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa seleccionados. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 123I, 124I, 125I respectivamente. La invención incluye varios compuestos marcados isotópicamente como se definen en la presente, por ejemplo aquellos en los que están presentes isótopos radiactivos, como 3H y 14C, o aquellos en los que están presentes isótopos no radiactivos, como 2H y 13C. Tales compuestos marcados isotópicamente son útiles en estudios metabólicos (con 14C), estudios cinéticos de reacción (con, por ejemplo, 2H o 3H), técnicas de detección o imagenología, como la tomografía por emisión de positrones (PET) o la tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), que incluyen ensayos de distribución de tejido de sustrato o fármaco, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. En particular, un compuesto marcado con 18F puede ser particularmente deseable para estudios de PET o SPECT. Los compuestos de fórmula (I) marcados isotópicamente pueden prepararse generalmente mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los Ejemplos acompañantes usando reactivos marcados isotópicamente apropiados en lugar del reactivo no marcado empleado anteriormente.
Además, la sustitución con isótopos más pesados, en particular deuterio (es decir, 2H o D) pueden proporcionar ciertas ventajas terapéuticas resultantes de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una vida media in vivo aumentada o requisitos de dosificación reducidos o una mejora en el índice terapéutico. Se entiende que el deuterio en este contexto se considera un sustituyente de un compuesto de fórmula (I). La concentración de tal isótopo más pesado, específicamente deuterio, puede definirse por el factor de enriquecimiento isotópico. El término "factor de enriquecimiento isotópico" como se usa en la presente significa la relación entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo especificado. Si un sustituyente en un compuesto de esta invención se denota deuterio, dicho compuesto tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio designado de por lo menos 3500 (52,5% de incorporación de deuterio en cada átomo de deuterio designado), por lo menos 5000 (75% de incorporación de deuterio), por lo menos 5500 (82,5% de incorporación de deuterio), por lo menos 6000 (90% de incorporación de deuterio), por lo menos 6333,3 (95% de incorporación de deuterio), por lo menos 6466,7 (97% de incorporación de deuterio), por lo menos 6600 (99% de incorporación de deuterio), o por lo menos 6633,3 (99,5% de incorporación de deuterio).
Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquellos en los que el solvente de cristalización puede estar isotópicamente sustituido, por ejemplo D2O, d6-acetona, d6-DMSO.
Los compuestos de la invención que contienen grupos capaces de actuar como donantes y/o aceptores para enlaces de hidrógeno pueden ser capaces de formar cocristales con formadores de cocristales adecuados. Estos cocristales pueden prepararse a partir de compuestos de fórmula (I) mediante procedimientos conocidos de formación de cocristales. Tales procedimientos incluyen triturar, calentar, cosublimar, cofundir o poner en contacto en solución compuestos de fórmula (I) con el formador de cocristales en condiciones de cristalización y aislar cocristales formados de este modo. Los formadores de cocristales adecuados incluyen los descritos en la WO 2004/078163. Por tanto, la invención proporciona además cocristales que comprenden un compuesto de la invención.
Como se usa en la presente, el término "portador farmacéuticamente aceptable" incluye todos y cada uno de los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, surfactantes, antioxidantes, conservantes (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardadores de la absorción, sales, conservantes, estabilizadores de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes de disgregación, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, colorantes y similares y combinaciones de los mismos, como sabrán los expertos en la técnica (ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Ed. Mack Printing Company, 1990, págs. 1289-1329). Excepto en la medida en que cualquier portador convencional sea incompatible con el ingrediente activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas o farmacéuticas.
El término "una cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto de la presente invención se refiere a una cantidad del compuesto de la presente invención que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de una actividad enzimática o proteica, o mejora de los síntomas, alivio de las afecciones, ralentización o retraso de la progresión de la enfermedad, o prevención de una enfermedad, etc. En una realización no limitativa, el término "una cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a un sujeto, es eficaz para (1) aliviar, inhibir, prevenir y/o mejorar por lo menos parcialmente una afección, un trastorno o una enfermedad (i) mediada por ALK-2, o (ii) asociada con la actividad de ALK- 2, o (iii) caracterizada por la actividad (normal o anormal) de ALK-2; o (2) reducir o inhibir la actividad de ALK-2; o (3) reducir o inhibir la expresión de ALK-2. En otra realización no limitativa, el término "una cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a una célula, un tejido, un material biológico no celular o un medio, es eficaz para reducir o inhibir por lo menos parcialmente la actividad de ALK-2; o reducir o inhibir por lo menos parcialmente la expresión de ALK-2.
Como se usa en la presente, el término "sujeto" se refiere a un ser humano.
Como se usa en la presente, el término "inhibir", "inhibición" o "inhibiendo" se refiere a la reducción o supresión de una afección, síntoma o trastorno o enfermedad dados, o una disminución significativa en la actividad de referencia de una actividad o proceso biológico..
Como se usa en la presente, el término "tratar", "tratando" o "tratamiento" de cualquier enfermedad o trastorno se refiere, en una realización, a mejorar la enfermedad o trastorno (es decir, ralentizar o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o por lo menos uno de los síntomas clínicos de la misma). En otra realización, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a aliviar o mejorar por lo menos un parámetro físico incluyendo aquellos que pueden no ser discernibles por el paciente. En otra realización más, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a modular la enfermedad o trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, estabilización de un síntoma discernible), fisiológicamente (por ejemplo, estabilización de un parámetro físico), o ambos. En otra realización más, "tratar", "tratando" o "tratamiento" se refiere a prevenir o retrasar el inicio o desarrollo o progresión de la enfermedad o trastorno.
Como se usa en la presente, un tiene "necesidad de" un tratamiento si dicho sujeto se beneficiaría biológicamente, médicamente o en la calidad de vida de dicho tratamiento.
Como se usa en la presente, debe interpretarse que el término "un", "uno", "el" y términos similares usados en el contexto de la presente invención (especialmente en el contexto de las reivindicaciones) cubren tanto el singular como el plural a menos que se indique de otra manera en la presente o se contradiga claramente por el contexto.
Todos los métodos descritos en la presente pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario en la presente o que el contexto lo contradiga claramente de otro modo. Se pretende que el uso de todos y cada uno de los ejemplos, o lenguaje ejemplar (por ejemplo, "como") proporcionado en la presente simplemente ilumine mejor la invención y no supone una limitación en el alcance de la invención reivindicada por lo demás.
Cualquier átomo asimétrico (por ejemplo, carbono o similar) del compuesto o compuestos de la presente invención puede estar presente en forma racémica o enriquecida enantioméricamente, por ejemplo la configuración (R)-, (S)- o (R,S)-. En ciertas realizaciones, cada átomo asimétrico tiene por lo menos un 50% de exceso enantiomérico, por lo menos un 60% de exceso enantiomérico, por lo menos un 70% de exceso enantiomérico, por lo menos un 80% de exceso enantiomérico, por lo menos un 90% de exceso enantiomérico, por lo menos un 95% de exceso enantiomérico, o por lo menos un 99% de exceso enantiomérico en la configuración (R) o (S). Los sustituyentes en los átomos con enlaces dobles insaturados pueden, si es posible, estar presentes en forma cis-(Z)-o trans-(E)-.
Por consiguiente, como se usa en la presente, un compuesto de la presente invención puede estar en forma de uno de los posibles isómeros, rotámeros, atropisómeros, tautómeros o mezclas de los mismos, por ejemplo, como isómeros geométricos (cis o trans) sustancialmente puros, diastereómeros, isómeros ópticos (antípodas), racematos o mezclas de los mismos.
Cualquier mezcla resultante de isómeros puede separarse en base a las diferencias fisicoquímicas de los constituyentes, en isómeros geométricos u ópticos puros o sustancialmente puros, diastereómeros, racematos, por ejemplo, mediante cromatografía y/o cristalización fraccionada.
Cualquier racemato resultante de productos finales o productos intermedios puede resolverse en las antípodas ópticas por métodos conocidos, por ejemplo, por separación de las sales diastereoméricas de los mismos, obtenidas con un ácido o base ópticamente activo, y liberando el compuesto ácido o básico ópticamente activo. En particular, puede emplearse una fracción básica para disolver los compuestos de la presente invención en sus antípodas ópticas, por ejemplo, mediante cristalización fraccionada de una sal formada con un ácido ópticamente activo, por ejemplo, ácido tartárico, ácido dibenzoil tartárico, ácido diacetil tartárico, ácido di-0,0'-p-toluoil tartárico, ácido mandélico, ácido málico o ácido alcanfor-10-sulfónico. Los productos racémicos también pueden resolverse mediante cromatografía quiral, por ejemplo, cromatografía líquida de alta presión (HPLC) usando un adsorbente quiral.
Además, los compuestos de la presente invención, incluyendo sus sales, también pueden obtenerse en forma de sus hidratos, o incluir otros solventes usados para su cristalización. Los compuestos de la presente invención pueden inherentemente o por diseño formar solvatos con solventes farmacéuticamente aceptables (incluyendo agua); por lo tanto, se pretende que la invención abarque formas tanto solvatadas como no solvatadas. El término "solvato" se refiere a un complejo molecular de un compuesto de la presente invención (incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables del mismo) con una o más moléculas de solvente. Tales moléculas de solvente son las que se usan comúnmente en la técnica farmacéutica, que se sabe que son inocuas para el receptor, por ejemplo, agua, etanol y similares. El término "hidrato" se refiere al complejo en el que la molécula de solvente es agua.
Los compuestos de la presente invención, incluyendo las sales, hidratos y solvatos de los mismos, pueden formar inherentemente o por diseño polimorfos.
Típicamente, los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse de acuerdo con los esquemas proporcionados más adelante.
Esquema 1
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Paso 1: Un compuesto de fórmula (III) en el que R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) puede prepararse por acoplamiento de un compuesto de fórmula (IV) en donde la fracción B(OR)2 forma un derivado de ácido borónico (por ejemplo, en donde R es hidrógeno o pinacol) con un compuesto de fórmula (V) en donde R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) en presencia de un solvente adecuado, como por ejemplo, dioxano o 2-metil-2-butanol, una base como carbonato de potasio y un catalizador adecuado, preferiblemente un catalizador a base de paladio como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II). Los compuestos de fórmulas IV, V, III y II pueden usarse en forma libre o en forma de sales de los mismos.
Paso 2: Un compuesto de fórmula (II) en el que R2, R3 , R4 y L son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) puede prepararse tratando un compuesto de fórmula (III) en el que R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) con una base adecuada como, por ejemplo, hidróxido de litio o hidróxido de sodio en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, tetrahidrofurano o un alcanol, como metanol. La adición de un ácido, como HCl, lleva a la sal correspondiente, por ejemplo, la sal de clorhidrato, del compuesto de fórmula II.
Paso 3: Un compuesto de fórmula (I) en el que R1, R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente puede prepararse acoplando un compuesto de fórmula (II) en el que R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) con una amina adecuada que tiene la fórmula R1-NH2 en la que R1 es como se define en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I), como, por ejemplo, trans-4-aminociclohexanol, un reactivo de acoplamiento de amida adecuado como, por ejemplo, O-(7-azabenzotriazol-1-il)N,N,N',N'-tetrametiluronio-hexafluorfosfato, y una base como, por ejemplo, N-metilmorfolina o trietilamina en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida o acetonitrilo.
Los compuestos de fórmula (IV) y (V) pueden obtenerse como se describe en los ejemplos más adelante.
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Paso 1: Un compuesto de fórmula (VII) en el que R1 es como se define en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) puede obtenerse tratando un compuesto de fórmula (VIII) con una amina adecuada de fórmula R1-NH2 , como, por ejemplo, frans-4-aminociclohexanol, un reactivo de acoplamiento de amida adecuado como, por ejemplo, O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio-hexafluorfosfato, y una base como, por ejemplo, N-metilmorfolina en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, N,N-dimetilformamida.
Paso 2: Un compuesto de fórmula (VI) en el que R1 es como se define en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) y la fracción B(OR)2 forma un derivado de ácido borónico (por ejemplo, en el que R es hidrógeno o pinacola) puede obtenerse por acoplamiento de un compuesto de fórmula (VII) en el que R1 es como se define en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de boro como por ejemplo bis(pinacolato)diboro en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, dioxano, una sal como acetato de potasio y un catalizador adecuado, preferiblemente un catalizador a base de paladio como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II).
Paso 3: Un compuesto de fórmula (I) en el que R1, R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente puede obtenerse acoplando un compuesto de fórmula (VI) en el que R1 es como se define en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) y la fracción B(OR)2 forma un derivado de ácido borónico (por ejemplo, en el que R es hidrógeno o pinacola) con un compuesto de fórmula (V) en el que R2 , R3, R4 y L son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) en presencia de un solvente adecuado, como por ejemplo, dioxano, una base como el hidróxido de sodio y un catalizador adecuado, preferiblemente un catalizador a base de paladio como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II).
Figure imgf000020_0001
Paso 1: Un compuesto de fórmula (VIII) en el que R2, R3, L, R4 son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) y la fracción B(OR)2 forma un derivado de ácido borónico (por ejemplo en el que R es hidrógeno o pinacola) puede obtenerse acoplando un compuesto de fórmula (V) en el que R2, R3, L, R4 son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de boro como, por ejemplo, bis(pinacolato)diboro en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, dioxano, una sal como acetato de potasio y un catalizador adecuado, preferiblemente un catalizador a base de paladio como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II), o alternativamente en un solvente adecuado como tetrahidrofurano y una base fuerte, como n-butillitio o cloruro de isopropilmagnesio o un mezcla de los dos con un compuesto de boro como trimetilboronato.
Paso 2: Un compuesto de fórmula (I) en el que R1, R2, R3 , R4 y L son como se definen en la presente puede obtenerse acoplando un compuesto de fórmula (VIII) en el que R2, R3, L, R4 son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) y la fracción B(OR)2 forma un derivado de ácido borónico (por ejemplo, en el que R es hidrógeno o pinacola) con un compuesto de fórmula (VII) en el que R1 es como se define en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I), en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, dioxano, una base como carbonato de potasio y un catalizador adecuado, preferiblemente un catalizador a base de paladio como, por ejemplo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II).
Figure imgf000020_0002
Paso 1: Un compuesto de fórmula (IX) en el que R2 y R3 son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) pueden obtenerse por tratamiento de un compuesto de fórmula (X) en el que R2 y R3 son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) con ácido N-metiliminodiacético en presencia de un solvente adecuado, como, por ejemplo, DMF.
Paso 2: Un compuesto de fórmula (VIII-1) en el que R1, R2 , R3, R4 y L son como se definen en la presente puede obtenerse tratando un compuesto de fórmula (IX) en el que R2 y R3 son como se definen en la presente en relación con un compuesto de fórmula (I) con una amina adecuada con un agente reductor adecuado como, por ejemplo, triacetoxiborohidruro de sodio, y un ácido como ácido acético, en presencia de un solvente adecuado, como, por ejemplo, THF.
Paso 3: Un compuesto de fórmula (I) en el que R1, R2 , R3 , R4 y L son como se definen en la presente puede obtenerse acoplando un compuesto de fórmula (VIII-1) en el que R2 , R3 , L, R4 son como se definen en la presente en relación a un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de fórmula (VII) en el que R1 es como se define en la presente en relación a un compuesto de fórmula (I), en presencia de un solvente adecuado como, por ejemplo, dioxano, una base como fosfato de potasio y un catalizador adecuado, preferiblemente un catalizador a base de paladio como, por ejemplo, cloruro de (2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil)]paladio (II).
Un compuesto de fórmula (I), como un compuesto de la invención, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, puede prepararse mediante un proceso que comprende los pasos de:
a) acoplar un compuesto de fórmula (II) como se define en la presente con un compuesto de fórmula R1-NH2 como se define en la presente para dar un compuesto de fórmula (I);
b) recuperar el compuesto de fórmula (I) así obtenible en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
Un compuesto de fórmula (I), como un compuesto de la invención, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, puede prepararse mediante un proceso que comprende los pasos de:
a) acoplar un compuesto de fórmula (VI) como se define en la presente con un compuesto de fórmula (V) como se define en la presente para dar un compuesto de fórmula (I);
b) recuperar el compuesto de fórmula (I) así obtenible en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un proceso para la preparación de un compuesto de fórmula (I), en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, que comprende los pasos de:
a) acoplar un compuesto de fórmula (VIII) o un compuesto de fórmula (VIII-1) como se define en la presente con un compuesto de fórmula (VII) como se define en la presente para dar un compuesto de fórmula (I);
b) recuperar el compuesto de fórmula (I) así obtenible en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable.
La invención incluye además cualquier variante de los presentes procesos, en los que un producto intermedio obtenible en cualquier etapa del mismo se usa como material de partida y se llevan a cabo los pasos restantes, o en los que los materiales de partida se forman in situ bajo las condiciones de reacción, o en el que los componentes de reacción se usan en forma de sus sales o material ópticamente puro.
Los compuestos de la invención y los productos intermedios también pueden convertirse los unos en los otros de acuerdo con métodos generalmente conocidos por los expertos en la técnica.
En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. En una realización adicional, la composición comprende por lo menos dos portadores farmacéuticamente aceptables, como los descritos en la presente. Para los propósitos de la presente invención, a menos que se indique lo contrario, los solvatos e hidratos generalmente se consideran composiciones. Preferiblemente, los portadores farmacéuticamente aceptables son estériles. La composición farmacéutica puede formularse para vías de administración particulares como administración oral, administración parenteral, administración rectal, administración transdérmica, etc. Además, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden prepararse en forma sólida (incluyendo, sin limitación, cápsulas, comprimidos, píldoras, gránulos, polvos o supositorios) o en forma líquida (incluyendo, sin limitación, soluciones, suspensiones o emulsiones). Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales como esterilización y/o pueden contener diluyentes, agentes lubricantes o agentes tamponadores, inertes convencionales así como adyuvantes, como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y tampones, etc.
Típicamente, las composiciones farmacéuticas son comprimidos o cápsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con uno o más de:
a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina;
b) lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio y/o polietilenglicol; para comprimidos también
c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona; si se desea
d) disgregantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico o su sal sódica, o mezclas efervescentes; y e) absorbentes, colorantes, aromatizantes y edulcorantes.
Los comprimidos pueden o recubrirse con película o recubrirse entéricamente de acuerdo con métodos conocidos en la técnica.
Las composiciones adecuadas para la administración oral incluyen una cantidad eficaz de un compuesto de la invención en forma de comprimidos, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones destinadas a uso oral se preparan de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes para proporcionan preparaciones farmacéuticamente elegantes y apetitosas. Los comprimidos pueden contener el ingrediente activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes, como carbonato cálcico, carbonato sódico, lactosa, fosfato cálcico o fosfato sódico; agentes de granulación y disgregación, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos no se recubren o se recubren mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y la absorción en el tracto gastrointestinal y de este modo proporcionar una acción sostenida durante un período más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retardo temporal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo.
Las formulaciones para uso oral pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato cálcico, fosfato cálcico o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con un medio acuoso u oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Los compuestos de fórmula (I), como un compuesto de la invención, en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable, muestran propiedades farmacológicas valiosas, por ejemplo, propiedades moduladoras de ALK-2, por ejemplo, como se indica en ensayos in vitro e in vivo como se proporciona en las siguientes secciones y, por lo tanto, están indicadas para terapia o para uso como productos químicos de investigación, por ejemplo, como compuestos para herramientas.
Los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de una indicación seleccionada de: osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
Sin pretender estar limitados por ninguna teoría, se cree que los compuestos de la invención, que son inhibidores selectivos de ALK-2, reducen/inhiben la señalización de BMP y la reparación tisular anormal asociada con ella.
Por tanto, como una realización adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable en terapia. En una realización adicional, la terapia se selecciona de una enfermedad que puede tratarse mediante la inhibición del receptor de ALK-2. En otra realización, la enfermedad se selecciona de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
Por tanto, como una realización adicional, la presente invención proporciona un compuesto de la invención en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable para su uso en terapia. En una realización adicional, la terapia se selecciona de una enfermedad que puede tratarse mediante la inhibición del receptor de ALK-2. En otra realización, la enfermedad se selecciona de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
En otra realización, la invención proporciona un compuesto de la invención para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad que se trata mediante la inhibición del receptor de ALK-2 que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente aceptable de un compuesto de la invención en forma libre o farmacéuticamente. forma de sal aceptable. En una realización adicional, la enfermedad se selecciona de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
Por tanto, como una realización adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención en forma libre o en forma de sal farmacéuticamente aceptable para la fabricación de un medicamento. En una realización adicional, el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad que puede tratarse mediante la inhibición del receptor de ALK-2. En otra realización, la enfermedad se selecciona de osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
En una realización de la presente invención, se proporciona 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en forma libre o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, especialmente en una de las Modificaciones mencionadas en la presente, para su uso en el tratamiento de la osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante. progresiva.
En una realización, se proporciona 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en forma libre o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, especialmente en una de las Modificaciones mencionadas en la presente, para su uso en el tratamiento de la osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva.
En una realización, se proporciona 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en forma libre o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, especialmente en una de las Modificaciones mencionadas en la presente, para su uso en el tratamiento de la osificación heterotópica o fibrodisplasia osificante progresiva. Se pretende que los siguientes ejemplos ilustren la invención y no debe interpretarse que son limitaciones de la misma. Las temperaturas se dan en grados Celsius. Si no se menciona lo contrario, todas las evaporaciones se realizan a presión reducida, típicamente entre aproximadamente 15 mm Hg y 100 mm Hg (= 20-133 mbar). La estructura de los productos finales, productos intermedios y materiales de partida se confirma mediante métodos analíticos estándar, por ejemplo, microanálisis y características espectroscópicas, por ejemplo, MS, IR, NMR. Las abreviaturas usadas son las convencionales en la técnica.
Todos los materiales de partida, bloques de construcción, reactivos, ácidos, bases, agentes deshidratantes, solventes y catalizadores usados para sintetizar los compuestos de la presente invención están disponibles comercialmente o pueden producirse mediante métodos de síntesis orgánica conocidos por un experto en la técnica., o por procesos como se describe o en analogía, respectivamente, a los de los Ejemplos. Además, los compuestos de la presente invención pueden producirse mediante métodos de síntesis orgánica conocidos por un experto en la técnica como se muestra en los siguientes ejemplos.
Ejemplos
Abreviaturas
5 cambio químico
AcOH ácido acético
aq o aq. acuoso
APCI-MS espectroscopia de masas de ionización química a presión atmosférica
BH3 DMS complejo de sulfuro de dimetilo de borano
Salmuera solución saturada de cloruro de sodio
n-BuLi n-butillitio
DCM diclorometano
DMAP 4 (dimetilamino)piridina
DMF N,N-dimetilformamida
DIPEA diisopropiletilamina
DMSO dimetilsulfóxido
DSC Calorimetría diferencial de barrido
DVS Absorción dinámica de vapor
eq equivalente(s)
Et etilo
Et3N trietilamina
EtOAc acetato de etilo
EtOH etanol
ESI-MS espectroscopia de masas de ionización por pulverización de electrones
FIA-MS espectroscopia de masas de análisis de inyección de flujo
FT-IR Espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier
h hora
HATU Hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento
HRMS espectroscopia de masas de alta resolución
IPA isopropanol
IPAc acetato de isopropilo
i-PrOH isopropanol
IT Temperatura interna
K2CO3 Carbonato de potasio
K3 PO4 fosfato de potasio
KOAc acetato de potasio
l litro
LC-MS Espectrometría de masas de cromatografía líquida
LiAlH4 hidruro de litio y aluminio
LiOH hidróxido de litio
M molar
MCC celulosa microcristalina
mg miligramo
mM milimolar
MeOH metanol
min minutos
ml mililitro
MgSO4 sulfato de magnesio
MHz megahercio
MTBE metil terc-butil éter
N normal
Na2SO4 sulfato de sodio
NaHCO3 bicarbonato de sodio
NaHMDS sodio-bis(trimetilsilil))am ida
NaOH hidroxido de sodio
NH4Cl cloruro amónico
NH4OH hidróxido de amonio
NH4OAc acetato de amonio
NMR resonancia magnética nuclear
PdCl2(dppf) o Pd(dppf)Cl2 [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II)
PdCl2(PPh3)2 cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II)
prepHPLC cromatografía líquida de alto rendimiento preparativa
ppm partes por millón
TA o ta temperatura ambiente (23 ± 3° C)
sat. saturado
SFC cromatografía de fluidos supercríticos
SPE extracción de fase sólida
TEA trietilamina
TFA ácido trifluoroacético
THF tetrahidrofurano
TGA Análisis termogravimétrico
tR tiempo de retención
UPLC-MS espectroscopia de masas de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento
XPhos Pd Cloruro de (2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-1,1'-bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil)]paladio (II) XRPD Difracción de rayos X en polvo
MÉTODOS ANALÍTICOS
1H-NMR
Las mediciones se realizaron en un espectrómetro Bruker Ultrashield™ 400 (400 MHz), Bruker Ultrashield™ 600 (600 MHz), DRX Bruker CryoProbe de 400 MHz (400 MHz) o un DRX Bruker CryoProbe de 500 MHz (500 MHz) usando o no trimetilsilano como un estándar interno. Los cambios químicos (valores 5) se informan en ppm campo abajo del tetrametilsilano, el patrón de división de espectros se designa como singlete (s), doblete (d), triplete (t), cuarteto (q), multiplete, señales no resueltas o más superpuestas (m), señal amplia (bs). Los solventes se dan entre paréntesis.
UPLC-MS
Columna: Waters Acquity HSS T3, C18, 1,8 pm, 2,1 x 50 mm, horno a 60° C. Flujo: 1,0 ml/min. Gradiente: 5% a 98% de B en 1,40 min, luego 98% de B durante 0,40 min, 98% a 5% de B en 0,10 min, 5% de B durante 0,10 min; A = agua ácido fórmico al 0,05% NH4ÜAc 3,75 mM, B = acetonitrilo ácido fórmico al 0,04%. Detección UV/VIS (DAD), ESI (+/-). Rango del espectrómetro de masas: 100-1200 Da.
Para los Ejemplos 46, 56, 74, 81,85 y 87:
Columna: Waters Acquity BEH, C18, 1,7 pm, 2,1 x 50 mm, horno a 50° C. Flujo: 1,0 ml/min. Gradiente: 2% a 98% de B en 4,40 min, luego 98% de B durante 0,75 min, 98% a 2% de B en 0,04 min; A = agua ácido fórmico al 0,1%, B = acetonitrilo ácido fórmico al 0,1%. Detección UV/VIS (DAD), ESI (+/-). Rango del espectrómetro de masas: 100­ 1200 Da.
UPLC-HRMS:
Waters Acquity SDS, C18, 1,7 gm, 2,1 x 50 mm, horno a 50° C. Gradiente: 5% a 98% de B en 7,50 min, luego 98% de B durante 0,40 min, 98% a 5% de B en 0,15 min; A = agua NH4OH 5 mM, B = acetonitrilo NH4OH 5 mM. Detección UV/VIS (DAD), ESI (+/-). Rango del espectrómetro de masas: 100-1200 Da.
HPLC-MS
Columna: Waters Symmetry C8, 3,5 gm, 2,1 x 50 mm, horno a 50° C Flujo: 1,0 ml/min.
Gradiente: 10% a 95% de B en 2 min, luego 95% de B durante 1 min, 95% a 10% de B en 0,5 min, 10% de B durante 0,50 min; A = agua TFA al 0,1%, B = Acetonitrilo TFA al 0,1%. Detección UV/VIS (DAD), APCI(+). Rango del espectrómetro de masas: 100-1200 Da.
Medición de rotación óptica
La rotación óptica se midió usando un polarímetro Perkin Elmer PE241 Serie N° 5325 que operaba a 589 nm usando cloroformo como solvente.
MÉTODOS DE PURIFICACIÓN
prepHPLC
Gilson GX-281, bombas 331/332.
Columna: Waters Sunfire C18, 30x100 mm, 5 gm. Flujo: 30 ml/min.
Fase móvil: agua (que contiene TFAal 0,1%) y acetonitrilo (método 1a)
o:
Columna: X-Bridge C18, 30x50 mm, 5 gm. Flujo: 75 ml/min
Fase móvil: agua (que contiene NH4OH 5 mM) y acetonitrilo (método 1b)
Cromatografía ultrarrápida en fase normal
Teledyne ISCO CombiFlash:
Columna: Redisep Rf Silica Flash
Fase móvil: ciclohexano/EtOAc (Método 2a) o DCM/MeOH (Método 2b).
Biotage Flash-Master II:
Columna: precargada con gel de sílice 60 (40-63 gm) de Merck
Fase móvil: DCM y MeOH (que contiene NH4OH 7,3 mM) (Método 2c).
Cromatografía ultrarrápida de fase inversa:
Teledyne ISCO Com
Columna Redisep Rf Gold C18 High Performance, columnas preempaquetadas de 15,5 g, 50 g o 240 g, 20-40 gm, 100 A
Fase móvil: agua y acetonitrilo (que contiene NH4OH 7,3 mM) (método 3a) o agua (que contiene TFA al 0,1%) y acetonitrilo (método 3b).
Ejemplo de referencia 1: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(1 -(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000026_0001
A una solución de sal de TFA 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a, 80 mg, 0,158 mmol) en DCM (4 ml) se le añadió 1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona (30,8 mg, 0,174 mmol) y AcOH (0,018 ml, 0,316 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 45° C durante 30 min. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (84 mg, 0,395 mmol) a TA y la mezcla de la reacción se agitó a 45° C durante 1 h. Luego, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 8.39 (d, 1 H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.24 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.58 (d, 1H), 3.80 - 3.63 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 3.15 (dd, 1H), 2.89 - 2.83 (m, 5H), 2.65 (dd, 1H), 2.35 - 2.29 (m, 1H), 1.98 - 1.81 (m, 7H), 1.57 -1.18 (m, 8H), 0.83 - 0.70 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 554 [M+H]+.
Producto______ intermedio 1 a: 5-(4-((1 R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
A una solución de 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-Seañadióazabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b, 940 mg, 1,55 mmol) en dioxano (10 ml) se le añadió una solución de HCl 4M en dioxano (1,55 ml, 6,20 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 5 h y luego se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como una sal de clorhidrato. Ocasionalmente, el compuesto del título se purificó adicionalmente mediante prepHPLC (Método 1a) para dar una sal de TFA después de la evaporación de los solventes. (UPLC-MS) tR 0,45 min; ESI-MS 393 [M+H]+ .
Producto_____ intermedio______1b: 1 -(4-(6-amino-5-(((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo
A una solución de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbon//)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c, A 630 mg, 1,59 mmol) en DMF (10 ml) se le añadió trans-4-aminociclohexanol (290 mg, 1,91 mmol), HATU (909 mg, 2,39 mmol) y N-metilmorfolina (0,53 ml, 4,78 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó durante 2 h, se diluyó con una solución saturada acuosa de NaHCO3 y se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. (UPLC-MS) tR 1,00 min; ESI-MS 493 [M+H]+.
Producto intermedio 1c: ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(terc-butox/carboni7)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico
A una solución de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1d, 1,00 g, 2,44 mmol) en THF (15 ml) se le añadió una solución acuosa 2M de LiOH (3,66 ml, 7,33 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 2 h y luego se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título. (UPLC-MS)tR 0,92 min; ESI-MS 396 [M+H]+ .
Producto intermedio 1d: 1 -(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo
Se resolvió 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-aza-biciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico (Producto intermedio 1e, 13,5 g, 33,0 mmol) mediante SFC preparativa quiral (Waters SFC 200, Waters SFC 200, c HiRALPAK AD-H 5 ^m 30*250 mm, fase móvil CO2/i-PrOH 70:30, caudal 120 g/min; detección UV a 278 nm). El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanquecino después de la concentración a presión reducida. SFC analítica quiral (CHIRALPAK AD-3 3 pm 2*100 mm, fase móvil Co2/MeOH 0,1% de DEA 60:40, caudal 1 ml/min; detección UV a 274 nm): tR 2,30 min, ee = 98,6%, [a]D20 = 90°.
Producto intermedio 1e: 1 -(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo
A una solución de 1-(4-bromofenil)-3-aza-biciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butWo (preparado de manera análoga a la descripción en la WO2007/022935) (3,34 g, 9,38 mmol) en dioxano (75 ml) se le añadió 2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)nicotinato de metilo (preparado de manera análoga a una descripción en la WO2012/087938) (3,91 g, 14,1 mmol). Se añadieron una solución ac. 2M de K2CO3 (9,38 ml, 18,8 mmol) y aducto de Pd(dppf)Cl2-DCM (0,766 g, 0,938 mmol) en una atmósfera de nitrógeno y la mezcla se calentó a 80° C en una atmósfera de nitrógeno durante 18 h. La mezcla de la reacción se diluyó con 150 ml de agua y se extrajo tres veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino. (UPLC-MS) tR 1,29 min; ESI-MS 410 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 2: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000027_0001
A una solución de sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2a, 117 mg, 0,259 mmol) en DMF (3 ml) se le añadió clorhidrato de trans-4-aminociclohexanol (39,3 mg, 0,259 mmol), HATU (148 mg, 0,389 mmol) y N-metilmorfolina (0,085 ml, 0,778 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a TA durante 2 h y luego se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.38 (d,1H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.58 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.58 (d, 1 H), 3.82 - 3.66 (m, 1 H), 3.48 - 3.34 (m, 3H), 3.07 (d, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 2H), 1.96 - 1.77 (m, 5H), 1.50 - 1.19 (m, 5H), 1.04 (dd, 6H), 0.75 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.50 min; ESI-MS 435 [M+H]+.
Producto intermedio 2a: sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico
A una solución de 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 2b, 660 mg, 1,22 mmol) en THF (10 ml) se le añadió una solución ac. 2M de LiOH (1,22 ml, 2,44 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65°C durante 2 h y luego se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como una sal de TFA. (UPLC-MS) tR 0,37 min; ESI-MS 338 [M+H]+ .
Producto intermedio 2b: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
A una solución de 2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)nicotinato de metilo (preparado de manera análoga a la descripción en la WO 2012/087938) (462 mg, 1,663 mmol) en acetonitrilo (7 ml) se le añadió (1R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (Producto intermedio 2c, 466 mg, 1,66 mmol), K2CO3 2m ac. (1,66 ml, 3,33 mmol) y aducto de PdCl2(dppf)-DCM (67,9 mg, 0,083 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se selló y se irradió en un reactor de microondas a 120° C durante 10 min, luego se enfrió, se filtró sobre celite y se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,62 min; ESI-MS 352 [M+H]+ .
Producto intermedio 2c: (1 R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano
A una solución de (1R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (preparado de manera análoga a la descripción en la WO2007/022935) (525 mg, 2,21 mmol) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió 2-yodopropano (0,420 ml, 2,65 mmol) y K2CO3 (609 mg, 4,41 mmol) a TA en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 3 h, luego se diluyó con EtOAc y se mezcló con una solución sat. ac. de NaHCO3. Después de la separación de fases, la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino. (UPLC-MS) tR 0,72 min; ESI-MS 280/282 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 3: 5-(4-((R)-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000028_0001
A una solución de ácido (6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 3a, 300 mg, 0,645 mmol) en dioxano (5 ml) se le añadió (R)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 3b, 420 mg, 0,774 mmol), PdCl2(dppf) (23,6 mg, 0,032 mmol) y NaOH 2N ac. (0,645 ml, 1,29 mmol) en atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 2 h, luego se diluyó con EtOAc y agua. Después de dos extracciones con EtOAc, las capas orgánicas se lavaron con una solución sat. ac. de NaHCO3 y salmuera, respectivamente, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se disolvió en MeOH y se pasó a través de un cartucho de sílice-tiol (carga de 500 mg; preacondicionado con MeOH) para eliminar el paladio. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido pardusco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.37 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 8.09 - 8.14 (m, 1H), 7.57 (bs, 2H), 7.33 (bs, 2H), 7.12 (bs, 2H), 4.54 - 4.58 (m, 1H), 4.51 - 4.66 (m, 3H), 3.55 - 3.81 (m, 1H), 3.35 - 3.54 (m, 2H), 3.20 - 3.24 (m, 1 H), 3.20 - 3.27 (m, 2H), 3.15 (bs, 1H), 1.78 - 1.91 (m, 4H), 1.14 - 1.41 (m, 5H), 1.11 (bs, 3H). (UPLC-MS) tR 0.45 min; ESI-MS 437 [M+H]+ .
Producto intermedio 3a: ácido (6-amino-5-(((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico.
A una solución de 2-amino-5-bromo-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c, 1,00 g, 2,67 mmol) en dioxano (25 ml) se le añadió bis(pinacolato)diboron (0,815 g, 3,21 mmol), PdCl2(dppf) (0,098 g, 0,134 mmol) y KOAc (0,525 g, 5,35 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 18 h, se enfrió, se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (el éster de pinacolato se había hidrolizado en las condiciones de reacción) como un sólido parduzco bruto que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,32 min; ESI-MS 280 [M+H]+ .
Producto intermedio 3b: (R)-6-(1 -(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano.
A una solución de (R)-1 -(4-bromofenil)etanamina (0,216 ml, 1,499 mmol) en DMF (7 ml) se le añadió DIPEA (0,524 ml, 3,00 mmol) y 3,3-bis(bromometil)oxetano (439 mg, 1,80 mmol) en atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 100° C durante 5 h, se enfrió y se diluyó con agua y EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título como un aceite amarillo que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,52 min; ESI-MS 282/284 [M+H]+ .
Producto intermedio 3c: 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida.
A una solución de ácido 2-amino-5-bromonicotínico (2,00 g, 9,22 mmol) en DMF (30 ml) se le añadió trans-4-aminociclohexanol (1,68 g, 11,1 mmol), HATU (7,01 g, 18,4 mmol) y N-metilmorfolina (4,05 ml, 36,9 mmol) a TA. Después de agitar durante 2 h, la mezcla de la reacción se diluyó con EtOAc y una solución sat. ac. de NaHCO3. La fase acuosa se extrajo dos veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2a) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. (UPLC-MS) tR 0,62 min; ESI-MS 314/316 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 4: 5-(4-((S)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000029_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 3) excepto que se usó (S)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 4a) en lugar de (R)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 3b). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.37 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 8.09 - 8.14 (m, 1H), 7.57 (bs, 2H), 7.33 (bs, 2H), 7.12 (bs, 2H), 4.54 - 4.58 (m, 1H), 4.51 - 4.66 (m, 3H), 3.55 - 3.81 (m, 1H), 3.35 - 3.54 (m, 2H), 3.20 - 3.24 (m, 1H), 3.20 - 3.27 (m, 2H), 3.15 (bs, 1H), 1.78 - 1.91 (m, 4H), 1.14 - 1.41 (m, 5H), 1.11 (bs, 3H). (UPLC-MS) tR 0.45 min; ESI-MS 437 [M+H]+ .
Producto intermedio 4a: (S)-6-(1 -(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano
El compuesto del título se preparó de manera análoga a (R)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 3b) excepto que se usó (S)-1-(4-bromofenil)etanamina en lugar de (R)-1 -(4-bromofenil)etanamina. (UPLC-MS) tR 0,55 min; ESI-MS 282/284 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 5: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(3-morfolinopropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000029_0002
A una solución de sal de TFA de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 5a, 70 mg, 0,138 mmol) en acetonitrilo (3 ml) se le añadió K2CO3 (47,7 mg, 0,345 mmol) y 4-(3-bromopropil)morfolina (47,9 mg, 0,166 mmol) a temperatura ambiente.. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 2 h. Después, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.58 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.58 (d, 1H), 3.82 - 3.67 (m, 1H), 3.61 - 3.50 (m, 4H), 3.41 (s, 2H), 3.05 (d, 1H), 2.48 - 2.24 (m, 9H), 1.93 - 1.76 (m, 5H), 1.61 (m, 2H), 1.46 - 1.17 (m, 6H), 0.76 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.40 min; ESI-MS 520 [M+H]+.
Producto______ intermedio______ 5a: 5-(4-((1 S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
A una solución de 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1S,5R)-terc-butilo (Producto intermedio 5b, 1,18 g, 1,95 mmol) en dioxano (10 ml) se le añadió una solución 4M de HCl en dioxano (1,95 ml, 7,78 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 5 h y luego se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como una sal de clorhidrato. Ocasionalmente, el producto se purificó adicionalmente mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como una sal de TFA después de la evaporación de los solventes. (UPLC-MS) tR 0,45 min; ESI-MS 393 [M+H]+.
Producto intermedio 5b: 1 -(4-(6-amino-5-(((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 S,5R)-terc-butilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 5c) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3 azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c). (UPLC-MS) tR 1,00 min; ESI-MS 493 [M+H]+ .
Producto intermedio 5c: ácido 2-amino-5-(4-((IS,5R)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) excepto que se usó 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1S,5R)-terc-butilo (Producto intermedio 5d) en lugar de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1 d). (UPLC-MS) tR 0,92 min; ESI-MS 396 [M+H]+ .
Producto intermedio 5d: 1 -(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1S,5R)-terc-butilo
Se resolvió 1 -(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-aza-biciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de terc-butilo racémico (Producto intermedio 1e, 13,5 g, 33,0 mmol) mediante SFC preparativa quiral (Chiralpak AD-H 5 m 30*250 mm, fase móvil CO2/i-PrOH 70:30, caudal de 120 g/min; detección uV a 278 nm). El compuesto del título se obtuvo como un sólido blanquecino después de la concentración a presión reducida. HPLC analítica quiral (CHIRALPAK AD-33 ^m 2*100 mm, fase móvil CO2/MeOH 0,1% de DEA 60:40, caudal 1 ml/min; detección Uv a 274 nm): tR 2,90 min, ee = 98,7%, [a]o 20 = -87°.
Ejemplo de referencia 6: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000030_0001
A una solución de sal de TFA de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a, 70 mg, 0,138 mmol) en acetonitrilo (3 ml) se le añadió K2CO3 (38,2 mg, 0,276 mmol) y trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a) (37,8 mg, 0,166 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a TA durante 1 h, luego se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.41 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.62 (s, 2H), 7.35 (d, 1 H), 7.25 (m, 3H), 4.64 (d, 3H), 3.74 (m, 4H), 2.89 (d, 4H), 1.87 (t, 5H), 1.34 (m, 6H), 0.82 (s, 1 H). (UPLC-MS) tR 0.68 min; ESI-MS 471 [M+H]+ .
Producto intermedio 6a: trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo
A una solución de 1,3-difluoropropan-2-ol (300 mg, 3,12 mmol) en DCM (8 ml) se le añadió DMAP (26,7 mg, 0,219 mmol) y TEA (0,522 ml, 3,75 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se enfrió a 0° C y se añadió anhídrido trifluorometanosulfónico (0,630 ml, 3,75 mmol). Después de agitar a 0° C durante 60 min y a TA durante 3 h, la mezcla de la reacción se diluyó con DCM. La capa orgánica se lavó con agua, dos veces con una solución ac. de ácido cítrico y dos veces con una solución sat. ac. de NaHCO3 , se secó sobre MgSO4 y se concentró a 500 mbar. El compuesto del título se obtuvo como un aceite bruto que se usó sin purificación adicional.
Ejemplo de referencia 7: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000031_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 7a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1 c) y clorhidrato de 4-aminobiciclo[2.2.2]octan-1 -ol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.34 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.32 (s, 1H), 3.45 (t, 2H), 3.41 - 3.29 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.08 (d, 1H), 2.68 - 2.51 (m, 3H), 2.07 - 2.03 (m, 6H), 1.83 - 1.79 (m, 1H), 1.65 - 1.61 (m, 6H), 1.33 (t, 1H), 0.77 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 477 [M+H]+ .
Producto intermedio 7a: ácido 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2c) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (producto intermedio 7b) en lugar de 1 -(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1d). (UPLC-MS) tR 0,32 min; ESI-MS 354 [M+H]+ .
Producto intermedio 7b: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
A una solución de clorhidrato de 5- (4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (Producto intermedio 7c, 210 mg, 0.607 mmol) en acetonitrilo (6 ml) se le añadió K2CO3 (168 mg, 0,729 mmol) y 1-bromo-2-metoxietano (0,068 ml, 0,729 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 3 h. Luego, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional. (UPLC-m S) tR 0,62 min; ESI-MS 368 [M+H]+ .
Producto intermedio 7c: clorhidrato de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo
A una solución de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1S,5R)-terc-butilo (Producto intermedio 5d, 500 mg, 1,22 mmol) en dioxano (7 ml) se le añadió una solución 4M de HCl en dioxano (1,22 ml, 4,88 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 60° C durante 3 h y luego se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como una sal de clorhidrato. (UPLC-MS) tR 0,58 min; ESI-MS 310 [M+H]+ .
Ejemplo______de______referencia______8: 2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1 -il)fenil)-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000031_0002
A una solución de 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c, 230 mg, 0,731 mmol) en dioxano (4 ml) se le añadió 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a, 463 mg, 0,731 mmol), K2CO32N ac. (0,73 ml, 1,46 mmol) y aducto de PdCÍ2(dppf)-DCM (29,9 mg, 0,037 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 60 min, luego se diluyó con EtOAc y NaHCO3 ac.. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se lavaron con una solución sat. ac. de NaHCO3 y salmuera, respectivamente, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.24 - 8.16 (m, 2H), 7.95 (d, 1 H), 7.39 (t, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.86 (d, 2H), 4.54 (d,1 H), 3.69 (m, 1 H), 3.41 - 3.33 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.66 (q, 3H), 1.82 (m, 4H), 1.42 - 0.88 (m, 10H). (UPLC-MS) tR 0.48 min; ESI-MS 456 [M+H]+ .
Producto intermedio 8a: 1 -(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina
A una solución de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8b, 212 mg, 0,662 mmol) en dioxano (8 ml) se le añadió bis(pinacolato)diboro (202 mg, 0,794 mmol), KOAc (130 mg, 1,323 mmol) y aducto de PdCL(dppf)-DCM (27 mg, 0,033 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 90° C durante 2 h, luego se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,79 min; ESI-MS 349 [M+H]+ .
Producto intermedio 8b: 1 -(4-bromo-3-fluorofenil)-4-isopropilpiperazina
A una solución de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)piperazina (Producto intermedio 8c, 215 mg, 0,797 mmol) en acetonitrilo (7 ml) se le añadió 2-yodopropano (0,095 ml, 0,956 mmol) y K2CO3 (220 mg, 1,593 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 4 h, luego se diluyó con EtOAc y NaHCO3 ac.. Después de la separación de fases, la capa ac. se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título como un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,66 min; ESI-MS 302 [M+H]+ .
Producto intermedio 8c: 1 -(4-bromo-3-fluorofenil)piperazina
A una solución de 4-(4-bromo-3-fluorofenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butWo (300 mg, 0,835 mmol) en dioxano (8 ml) se le añadió HCl 4N en dioxano (0,84 ml, 3,34 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó durante 2 h, luego se diluyó con EtOAc y NaHCO3 ac.. Después de la separación de fases, la capa ac. se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,60 min; ESI-MS 260 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 9: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000032_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 2) excepto que se usó sal de TFA de ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1,0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 9a) en lugar de sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1R,5s)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.38 (d,1 H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.58 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.58 (d, 1 H), 3.82 - 3.66 (m, 1 H), 3.48 - 3.34 (m, 3H), 3.07 (d, 1 H), 2.64 - 2.55 (m, 2H), 1.96 -1.77 (m, 5H), 1.50 - 1.19 (m, 5H), 1.04 (dd, 6H), 0.75 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.50 min; ESI-MS 435 [M+H]+.
Producto intermedio 9a: sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2a) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 9b) en lugar de 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 2b). (UPLC-MS) tR 0,37 min; ESI-MS 338 [M+H]+ .
Producto intermedio 9b: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (producto intermedio 2b) excepto que se usó (1S,5R)-1-(4-bromofenií)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (Producto intermedio 9c) en lugar de (1R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (Producto intermedio 2c). (UPLC-MS) tR 0,62 min; ESI-MS 352 [M+H]+.
Producto intermedio 9c: (1 S,5R)-1 -(4-bromofenil)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano
El compuesto del título se preparó de manera análoga a (1R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (Producto intermedio 2c) excepto que se usó (1S,5R)-1-(4-bromofenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (preparado de manera análoga a la descripción en la WO2007/022935) en lugar de (1 R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano. (UPLC-MS) tR 0,70 min; ESI-MS 280/282 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 10: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000033_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó 4- (2-bromoetil)morfolina en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-il (producto intermedio 6a) y la mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 1 h. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1 H), 7.59 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1 H), 3.84 - 3.67 (m, 1 H), 3.63— 3.51 (m, 4H), 3.46 - 3.39 (m, 2H), 3.09 (d, 1 H), 2.71 — 2.57 (m, 3H), 2.42 (s, 6H), 1.95 — 1.75 (m, 5H), 1.53 - 1.15 (m, 5H), 0.77 (d, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 506 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 11: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1 r),4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000033_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 1-bromo-2-fluoroetano en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a 60°C durante 5 h. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1 H), 8.31 (d, 1 H), 8.11 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.59 (d, 2H), 4.50 (s,1 H), 3.73 (d, 1 H), 3.41 (d, 3H), 2.83 - 2.78 (m, 3H), 1.85 (t, 5H), 1.47 - 1.16 (m, 6H), 0.78 (s, 1 H). (UPLC-MS) tR 0.47 min; ESI-MS 439 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 12: 2-amino-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(1 -isopropilpirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000034_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 8) excepto que se usó 1-isopropil-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)pirrolidina (Producto intermedio 12a) en lugar de 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.36 (d,1H), 8.26 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.62 - 7.51 (m, 2H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.09 (s, 2H), 4.55 (d, 1H), 3.70 (dq, 1H), 3.44 -3.34 (m, 2H), 3.03 (d, 1H), 2.75 (s, 2H), 2.29 - 2.06 (m, 2H), 1.87 - 1.68 (m, 5H), 1.42 - 1.17 (m, 5H), 1.06 (t, 6H). (UPLC-MS) tR 0.48 min; ESI-MS 423 [M+H]+.
Producto intermedio 12a: 1 -isopropil-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)pirrolidina El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a) excepto que se usó 3-(4-bromofenil)-1-isopropilpirrolidina (producto intermedio 12b) en lugar de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-4-isopropilpiperazina (producto intermedio 8b). (UPLC-MS) tR 0,79 min; ESI-MS 316 [M+H]+.
Producto intermedio 12b: 3-(4-bromofenil)-1 -isopropilpirrolidina
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8b) excepto que se usó clorhidrato de 3-(4-bromofenil)pirrolidina en lugar de 1-(4-bromo)-3-fluorofenil)piperazina (Producto intermedio 8c). (UPLC-MS) tR 0,62 min; ESI-m S 269 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 13: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000034_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 4-(2-bromoetil)morfolina en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina. 1h NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1H), 8.31 (d, 1 H), 8.11 (d, 1 H), 7.59 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1 H), 3.84 - 3.67 (m, 1 H), 3.63 - 3.51 (m, 4H), 3.46 -3.39 (m, 2H), 3.09 (d, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 3H), 2.42 (s, 6H), 1.95 - 1.75 (m, 5H), 1.53 — 1.15 (m, 5H), 0.77 (d, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 506 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 14: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000035_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 14a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y trans-4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.53 (d, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.72 (d, 2H), 7.71 (bs, 2H), 7.41 (d, 2H), 4.06 (dd, 1H), 3.98 (dd, 2H), 3.85 - 3.43 (m, 5H), 3.27 (t, 2H), 2.26 (dd, 1 H), 1.99 (d, 2H), 1.83 - 1.76 (m, 4H), 1.68 - 1.56 (m, 3H), 1.51 - 1.45 (m, 5H), 1.21 - 1.13 (m, 5H). (UPLC-MS) tR 0.51 min; ESI-MS 491 [M+H]+ .
Producto intermedio 14a: ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico (sal TFA)
A una solución de 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 14b, 1,30 g, 2,97 mmol) en THF anhidro (16 ml) se le añadió una solución acuosa 2M de LiOH (4,46 ml, 8,92 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 65° C durante 140 min y luego se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Método 3b). Las fracciones puras se concentraron y liofilizaron para dar el compuesto del título como una sal de TFA blanquecina. (UPLC-MS) tR 0,40 min; ESI-MS 380 [M+H]+ .
Producto intermedio 14b: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
A una solución de clorhidrato de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (Producto intermedio 14c, 1,18 g, 3,28 mmol) en DCM (16 ml) se le añadió dihidro-2H-piran-4 (3H)-ona (0,33 ml, 3,60 mmol) y AcOH (0,38 ml, 6,55 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 45° C durante 30 min. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (1,74 g, 8,19 mmol) a TA y la mezcla de la reacción se agitó a 45° C durante 1 h. Luego, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución sat. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa acuosa se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,67 min; ESI-MS 394 [M+H]+.
Producto intermedio 14c: clorhidrato de 5-(4-((1 R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo
A una solución de (1R,5S)-terc-butil-1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato (Producto intermedio 1d, 1,50 g, 3,66 mmol) en dioxano (25 ml) se le añadió una solución 4M de HCl en dioxano (3,66 ml, 14,7 mmol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 60° C durante 3 h y luego se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como una sal de clorhidrato. (UPLC-MS) tR 0,58 min; ESI-MS 310 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 15: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000036_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 15a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó 4-aminobiciclo[2.2.2]octan-1-olclorhidrato en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.34 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.31 (s, 1 H), 3.58 - 3.56 (m, 4H), 3.09 (d, 1 H), 2.64 - 2.62 (m, 2H), 2.59 - 2.41 (m, 9H), 2.07 - 2.04 (m, 6H), 1.82 - 1.79 (m, 1H), 1.65 - 1.61 (m, 6H), 1.31 (t, 1H), 0.75 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.53 min; ESI-MS 532 [M+H]+.
Producto intermedio 15a: ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2c) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (producto intermedio 15b) en lugar de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-tercbutilo (Producto intermedio 1d). (UPLC-MS) tR 0,39 min; ESI-MS 409 [M+H]+.
Producto intermedio 15b: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 7b) excepto que se usó 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (Producto intermedio 14c) en lugar de clorhidrato de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (Producto intermedio 7c) y se usó 4-(2-bromoetil)morfolina en lugar de 1 -bromo-2-metoxietano. (UPLC-MS) tR 0,62 min; ESI-MS 423 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 16: 2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000036_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 2) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1,0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (producto intermedio 9a) en lugar de la sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2a) y se usó (3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)metanol (Producto intermedio 16a) en lugar de clorhidrato de trans-4-aminociclohexanol. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.05 (s, 1H), 8.41 (d,1H), 8.18 (d,1H), 7.61 (d, 2H), 7.48 (dd, 1 H), 7.33 — 7.17 (m, 4H), 4.55 (t, 1 H), 3.51 (d, 3H), 3.31 (s, 2H), 3.08 (s, 2H), 2.07 — 1.99 (m, 1 H), 1.41 - 1.22 (m, 3H), 1.17 - 0.98 (m, 9H), 0.79 (d, 1H). (UPLC-MS) tR 0.54 min; ESI-MS 433 [M+H]+ .
Producto intermedio 16a: (3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)metanol
A una solución de sal de HCl de 3-aminobiciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo (218 mg, 1,23 mmol) en THF (7 ml) se le añadió LiAlH4 (140 mg, 3,68 mmol) en pequeñas porciones a 0° C. La mezcla de la reacción se agitó a TA durante 2 h y se inactivó a 0° C con una mezcla de THF y agua, luego se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como un aceite amarillo que se usó sin purificación adicional. FIA-Ms 114 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 17: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(3,3,3-trifluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000037_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 3,3,3-trifluoropropil trifluorometanosulfonato en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a TA durante 60 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.79 — 3.66 (m, 1H), 3.39 (m, 3H), 3.09 (s, 1H), 2.72 - 2.59 (m, 4H), 1.86 (m, 5H), 1.52 — 1.18 (m, 6H), 0.79 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.59 min; ESI-MS 489 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 18: 2-amino-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(pirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000037_0002
A una solución de 3-(4-(6-amino-5-(((1R,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo (Producto intermedio 18a, 120 mg, 0,140 mmol) en dioxano (3 ml) se le añadió HCl 4N en dioxano (0,210 ml, 0,839 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA y la mezcla resultante se agitó durante 4 h. Después de concentrar a presión reducida, el producto bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Método 3a). Las fracciones puras se repartieron entre una solución sat. ac. de NaHCO3 y EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título como una mezcla de diastereómeros. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 8.26 (d,1 H), 8.09 (d, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.35 - 7.29 (m, 2H), 7.09 (s, 2H), 4.55 (d, 1H), 3.77 - 3.69 (m, 2H), 3.22 - 3.15 (m, 2H), 3.12 - 2.91 (m, 2H), 2.74 - 2.62 (m, 2H), 2.24 - 2.07 (m, 1H), 1.83 (dd, 4H), 1.42 - 1.16 (m, 5H). (UPLC-MS) tR 0.42 min; ESI-MS 381 [M+H]+ .
Producto intermedio 18a: 3-(4-(6-amino-5-(((1 R,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)pirrolidina-1 -carboxilato de terc-butilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 8) excepto que se usó 3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (Producto intermedio 18b) en lugar de 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a). (UPLC-MS) tR 0,95 min; ESI-MS 481 [M+H]+ .
Producto intermedio 18b: 3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)pirrolidina-1 -carboxilato de terc-butilo El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 1- (3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a) excepto que se usó 3-(4-bromofenil)pirrolidin-1-carboxilato de ¿ere-butilo (Producto intermedio 18c) en lugar de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8b). (UPLC-MS) tR 1,43 min; ESI-MS 374 [M+H]+ .
Producto intermedio 18c: 3-(4-bromofenil) pirrolidina-1-carboxilato de tere -butilo
A una solución de 3-(4-bromofenil)pirrolidina (200 mg, 0,885 mmol) en DCM (7 ml) se le añadió dicarbonato de di-tere-butilo (0,308 ml, 1,327 mmol) y TEA (0,247 ml, 1,769 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó durante 2 h. Después, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con DCM. Después de la separación de fases, se extrajo de nuevo la capa ac. con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título como un aceite incoloro que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 1,33 min; ESI-MS 270 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 19: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000038_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó dihidro-2H-piran-4(3H)-ona en lugar de 1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (s, 1 H), 8.31 (d, 1 H), 8.12 (d, 1H), 7.62 (dd, 2H), 7.25 (s, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.97 - 3.63 (m, 4H), 3.40 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.19 - 3.03 (m, 2H), 1.99 - 1.65 (m, 8H), 1.51 - 1.16 (m, 8H). (UPLC-MS) tR 0.48 min; ESI-MS 477 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 20: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3,1,0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000038_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 1-bromo-2-metoxietano en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a 60°C durante 4 h.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (s, 1 H), 8.11 (s, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.60 (d, 1 H), 3.73 (d, 1 H), 3.54 - 3.36 (m, 4H), 3.27 (s, 3H), 2.64 (m, 4H), 1.87 (m, 6H), 1.40-1.27 (m, 6H), 0.76 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 451 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 21: 2-amino-N-((1 R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000039_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 14a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c), y clorhidrato de (1R,2S,4R)-4-amino-2-fluorociclohexanol (Producto intermedio 21a) en lugar de frans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1 a) para dar el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.60 (bs, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.64 (bs, 2H), 7.36 (bs, 2H), 7.14 (s, 2H), 4.94 (t, 1H), 4.80 (d, 1 H), 4.16 - 3.82 (m, 4H), 3.81 - 3.45 (m, 4H), 3.30 - 3.25 (m, 4H), 2.15 (bs, 1H), 1.88 - 1.85 (m, 2H), 1.65 -1.59 (m, 5H), 1.76 - 1.27 (m, 3H), 1.18 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.48 min; ESI-MS 495 [M+H]+ .
Producto intermedio 21a: clorhidrato de (1 R,2S,4R)-4-amino-2-fluorociclohexanol
A una solución de ((1R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)carbamato de bencilo (Producto intermedio 21b, 376 mg, 1,41 mmol) en EtOH (20 ml) se le añadió paladio sobre carbón (10%) (80 mg, 0,075 mmol) en atmósfera de nitrógeno. El recipiente de reacción se purgó tres veces con nitrógeno y luego se purgó dos veces con hidrógeno. Después de agitar a TA durante 17 h, la mezcla de la reacción se pasó a través de una almohadilla de celite y la torta del filtro se lavó con EtOH para producir una solución incolora. Se añadió lentamente ácido clorhídrico (1,25 M en EtOH, 14 ml, 17,5 mmol) y la mezcla se agitó a TA durante 5 h. La concentración a presión reducida produjo el compuesto del título como un sólido higroscópico blanquecino. FIA ESI-MS 134 [M+H]+ .
Producto intermedio 21b: ((1 R,3S,4R)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)carbamato de bencilo
A una solución de ((1R,3S)-3-fluoro-4-oxociclohexil)carbamato de bencilo (Producto intermedio 21c, 768 mg, 2,90 mmol) en MeOH (15 ml) se le añadió en porciones NaBH4 (274 mg, 7,24 mmol) a 0° C. Después de agitar durante 30 min a 0° C, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución sat. ac. de NH4Cl y se dejó que alcanzara TA. El solvente se eliminó a presión reducida y se añadieron DCM y agua. Después de la separación de fases, la capa ac. se extrajo tres veces con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para proporcionar un sólido blanco. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. (UPLC-MS) tR 0,76 min; ESI-MS 268 [M+H]+ . La configuración absoluta como se muestra fue confirmada por cristalografía de rayos X.
Producto intermedio 21c: ((1 R,3S)-3-fluoro-4-oxociclohexil)carbamato de bencilo
A una solución de ((1R,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)carbamato de bencilo (Producto intermedio 21d, 710 mg, 2,66 mmol) en DCM (26 ml) se le añadió clorocromato de piridinio (859 mg, 3,98 mmol). La mezcla de la reacción se agitó durante 6 h a TA. Se añadió otra porción de clorocromato de piridinio (573 mg, 2,66 mmol) y la mezcla de la reacción se agitó durante otras 18 h. Después de la adición de DCM y una solución sat. ac. de NaHCO3 , ambas fases se separaron, la capa acuosa se extrajo dos veces con DCM, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un aceite incoloro. (UPLC-MS) tR 0,82 min; ESI-MS 266 [M+H]+ .
Producto intermedio 21d: ((1 R,3S,4S)-3-fluoro-4-hidroxiciclohexil)carbamato de bencilo
Se cargó un vial con (1R,3R,6S)-7-oxabiciclo[4.1.0]heptan-3-ilcarbamato de bencilo (Producto intermedio 21e, 1,50 g, 6,07 mmol) y se añadió trihidrofluoruro de TEA (4,94 ml, 30,3 mmol). El vial se selló y se agitó a 100° C durante 2 h. Después de enfriar, la mezcla de la reacción se vertió lentamente en una solución agitada de K2CO3 (5,87 g, 42,5 mmol) en agua (400 ml) y se extrajo tres veces con DCM. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera, se secaron sobre MgSO4 anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El material bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para producir una mezcla de regioisómeros, que se resolvió mediante HPLC quiral preparativa (columna: ChiralPak AD, 20 pm, 50 x 5 cm, caudal: 90 ml/min, longitud de onda de detección: 220 nm, fase móvil: n-heptano: EtOH 90:10 hasta t = 52 min, 85:15 hasta t = 69 min, luego 80:20). El compuesto del título se aisló como un aceite incoloro y se caracterizó por UPLC-MS (SQ13, columna: Acquity HSS T3 1,8 pm 2,1 x 50 mm a 60° C, eluyente A: agua 0,05% de ácido fórmico 3,75 mM NH4OAc, eluyente B: 0,04% de ácido fórmico en acetonitrilo, gradiente: de 5 a 98% de B en 1,4 min, caudal 1,0 ml/min, tR 0,81 min; ESI-MS 268 [M+H]+).
Producto intermedio 21e: (1 R,3R,6S)-7-oxabiciclo[4.1.0]heptan-3-ilcarbamato
Se resolvió (7-oxabiciclo[4.1.0]heptan-3-il)carbamato de sin-bencilo (preparado como se describe por Gómez-Sánchez et al, Tetrahedron 2005, 61(5), 1207-1219) mediante HPLC quiral preparativa (columna: ChiralPak AY, 10 um, 25 x 5 cm, caudal: 30 ml/min, longitud de onda de detección: 214 nm, fase móvil: n-heptano: isopropanol 80:20). El compuesto del título se aisló como un aceite incoloro y se caracterizó por HPLC quiral (ChiralPak AY-H, 5 um, 15 x 0,46 cm, caudal: 1 ml/min, longitud de onda de detección: 214 nm, fase móvil: hexano: isopropanol 70: 30, tR 2,24 min, 99,2% ee). (UPLC-MS) tR 0,90 min; ESI-MS 248 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 22: 2-amino-N-((1 s,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000040_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-ferc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 14a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tert-ácidobutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c), y se usó c/s-4-aminociclohexanol en lugar de frans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 59.50 (bs, 1H), 8.41 - 8.33 (m, 2H), 8.17 (d, 1H), 7.62 (bs, 2H), 7.26 (bs, 2H), 7.14 (s, 1H), 4.42 (d, 1H), 4.05 - 3.79 (m, 5H), 3.34 - 3.24 (m, 4H), 3.11 (bs, 1H), 2.70 - 2.50 (m, 1H), 1.83 - 1.71 (m, 7H), 1.62 - 1.47 (m, 7H), 1.35 - 1.29 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 477 [M+H]+. Ejemplo______de______referencia_____ 23: 5-(4-(2-azaespiro[3.3]heptan-2-ilmetil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000040_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 8) excepto que se usó 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)-2-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 23a) en lugar de 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 58.40 (d, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.61 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.14 (s, 2H), 4.58 (d, 1H), 3.79 — 3.66 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.41 (dt, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.07 (t, 4H), 1.94 — 1.72 (m, 6H), 1.47 — 1.20 (m, 5H) (UPLC-MS) tR 0.51 min; ESI-MS 421 [M+H]+ .
Producto intermedio 23a: 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)bencil)-2-azaespiro[3.3]heptano
A una solución de 2-(4-(bromometil)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano(300mg,1,01mmol)enacetonitrilo (8 ml) se le añadió 2-azaespiro[3.3]heptano (148 mg, 1,11 mmol) y carbonato de cesio (428 mg, 1,31 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó durante 60 min, luego se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y EtOAc. Después de la separación de fases, la capa ac. se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional (UPLC-MS) tR 0,82 min; ESI-MS 314 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 24: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000041_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 2) excepto que se usó trans-4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de clorhidrato de trans-4-aminociclohexanol. 1H Nm R (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.43 (d, 1 H), 8.34 (d, 1 H), 8.16 (d, 1H), 7.68 (d, 2H), 7.39 (d, 2H), 4.06 (dd, 1H), 3.86 - 3.41 (m, 9H), 2.26 (dt, 1H), 1.78 (d, 2H), 1.68 - 1.55 (m, 2H), 1.47 (t, 4H), 1.33 (dd, 6H), 1.18 (s, 4H). (UPLC-MS) tR 0.53 min; ESI-MS 449 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 25: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000041_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó 4,4-difluorociclohexanona en lugar de 1 -(metilsulfonil) piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.38 (d, 1 H), 8.32 (d, 1 H), 8.11 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.73 (d, 1H), 3.39 (d, 2H), 3.09 (d, 1 H), 2.68 — 2.55 (m, 2H), 2.37 (d, 2H), 2.00 (s, 2H), 1.84 (d, 8H), 1.64 (d, 2H), 1.46 - 1.16 (m, 5H), 0.78 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.56 min; ESI-MS 511 [M+H]+.
Ejemplo de____ referencia 26: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000041_0003
A una solución sal de TFA de 5- (4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4S)-4hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 5a, 70 mg, 0,138 mmol) en DCM (4 ml) se le añadió oxetan-3-ona (12,0 mg, 0,166 mmol) y AcOH (0,012 ml, 0,207 mmol) en una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 45° C durante 30 min. Se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (58,6 mg, 0,276 mmol) a TA y la mezcla de la reacción se agitó a 45° C durante 3 h. Luego, la mezcla de la reacción se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se mezcló con EtOAc. Después de la separación de fases, la capa ac. se extrajo de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4., se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. (UPLC-MS) tR 0,48 min; ESI-MS 449 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 27: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000042_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 26) excepto que se usó 4,4-difluorociclohexanona en lugar de oxetan-3-ona. Después de la purificación, se obtuvo el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.50 (bs, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 4.12 (bs, 1H), 3.73 (d, 1H), 3.39 (d, 2H), 3.09 (d, 1H), 2.68 - 2.55 (m, 2H), 2.37 (d, 2H), 2.00 (s, 2H), 1.84 (d, 8H), 1.64 (d, 2H), 1.46 - 1.16 (m, 5H). (UPLC-MS) tR 0.56 min; ESI-MS 511 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 28: 2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000042_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 28a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c), y se usó (3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)metanol (Producto intermedio 16a) en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1 a) y luego por cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.35 (bs, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.19 (s,1H), 7.68 (d, 2H), 7.37 (d, 2H), 7.26 (bs, 2H), 4.57 (t, 1H), 4.12 (d, 1H), 3.97 (bs, 1H), 3.80 — 3.56 (m, 2H), 3.51 (d, 2H), 3.35 - 3.20 (m, 6H), 2.29 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.99 (bs, 1H), 1.97 (s, 6H), 1.67 - 1.61 (m, 1H), 1.19 -1.14 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.50 min; ESI-MS 475 [M+H]+.
Producto intermedio 28a: ácido 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2c) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 28b) en lugar de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1 d). (UPLC-MS) tR 0,37 min; ESI-MS 380 [M+H]+.
Producto intermedio 28b: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-il)fenil)nicotinato de metilo (producto intermedio 14b) excepto que se usó clorhidrato de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (producto intermedio 7c) en lugar de clorhidrato de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (Producto intermedio 14c). (UPLC-MS) tR 0,62 min; ESI-MS 394 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 29: 2-amino-5-(2-fluoro-4-(piperazin-1 -il)fenil)-N-((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000043_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(pirrolidin-3-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 18) excepto que se usó 4-(4-(6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)-3-fluorofenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 29a) en lugar de 3-(4-(6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)pirrolidin-1-carboxilato (Producto intermedio 18a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.29 - 8.16 (m, 2H), 7.95 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.88 -6.75 (m, 2H), 4.54 (d, 1H), 3.69 (m,1H), 3.42 - 3.32 (m, 2H), 3.17 (dd, 4H), 2.92 (dt, 4H), 1.88 - 1.73 (m, 4H), 1.43 — 1.15 (m, 4H). (UPLC-MS) tR 0.42 min; ESI-MS 414 [M+H]+.
Producto intermedio 29a: 4-(4-(6-amino-5-(((1 r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)-3-fluorofenil)piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Ejemplo 8) excepto que se usó 4-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (Producto intermedio 29b) en lugar de 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a). La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 60 min y la purificación se realizó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido pardusco. (UPLC-MS) tR 0,96 min; ESI-MS 514 [M+H]+.
Producto intermedio 29b: 4-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 4-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (producto intermedio 8a) excepto que se usó 4-(4-bromo-3-fluorofenil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo en lugar de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)piperazina (producto intermedio 8b). (UPLC-MS) tR 1,38 min; ESI-MS 407 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 30: 2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000044_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 14a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3- (terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-yl)fenil)nicotínico (producto intermedio 1c), y se usó (3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)metanol (Producto intermedio 16a) en lugar de frans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 9.05 (s, 1H), 8.41 (d,1H), 8.18 (d,1 H), 7.61 (d, 2H), 7.24 - 7.22 (m, 4H), 4.55 (t, 1 H), 3.87 - 3.84 (m, 2H), 3.51 (d, 2H), 3.48 - 3.25 (m, 2H), 3.10 (bs, 1H), 2.56 - 2.47 (m, 4H), 1.97 (s, 6H), 1.96 - 1.74 (m, 3H), 1.39 - 0.30 (m, 3H), 0.77 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.51 min; ESI-MS 475 [M+H]+.
Ejemplo_____ de_____ referencia_____ 31 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000044_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(2-fluoro-4-(4-isopropilpiperazin-1-il)fenil)-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 8) excepto que se usó ácido (R)-(4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)borónico (Producto intermedio 31a) en lugar de 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a). La purificación se realizó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.75 (d, 1 H), 8.65 (d, 1 H), 8.48 (d, 1H), 7.81 (dd, 2H), 7.63 (d, 2H), 4.52 (dd, 1H), 4.18 (dd, 1H), 3.69 (ddt, 1H), 3.51 - 3.31 (m, 2H), 3.25 - 3.04 (m, 3H), 2.19 (ddt, 1H), 1.82 (td, 6H), 1.64 - 1.52 (m, 1H), 1.39 - 1.15 (m, 7H). (UPLC-MS) tR 0.44 min; ESI-MS 409 [M+H]+ .
Producto intermedio 31a: ácido (R)-(4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)borónico
A una solución de ácido (4-(bromometil)fenil)borónico (125 mg, 0,582 mmol) en acetonitrilo (4 ml) se le añadió K2CO3 (161 mg, 1,164 mmol) y (R)-2-metilpirrolidina (54,5 mg, 0,640 mmol) en atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó durante 60 min y luego se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino que se usó sin purificación adicional. (UPLC-MS) tR 0,33 min; ESI-MS 220 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 32: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 2) excepto que se usó sal de TFA de ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1,0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 9a) en lugar de sal de TFA de ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2a) y se usó frans-4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de clorhidrato de frans-4-aminociclohexanol. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.43 (d, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.68 (d, 2H), 7.39 (d, 2H), 4.06 (dd, 1H), 3.86 -3.41 (m, 9H), 2.26 (dt, 1H), 1.78 (d, 2H), 1.68 - 1.55 (m, 2H), 1.47 (t, 4H), 1.33 (dd, 6H), 1.18 (s, 4H). (UPLC-MS) tR 0.50 min; ESI-MS 449 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 33: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000045_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 26) excepto que se usó dihidro-2H-piran-4(3H)-ona en lugar de oxetan-3-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.62 (dd, 2H), 7.25 (s, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.97 - 3.63 (m, 4H), 3.40 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.19 - 3.03 (m, 2H), 1.99 - 1.65 (m, 8H), 1.51 - 1.16 (m, 8H). (UPLC-MS) tR 0.47 min; ESI-MS 477 [M+H]+.
Ejemplo_______ 34: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida (también denominado compuesto A en la presente)
Figure imgf000045_0002
A una solución de sal de TFA del ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 14a, 4,10 g, 8,14 mmol) y clorhidrato de 4-aminobiciclo[2.2.2]octan-1-ol (2,17 g, 12,2 mmol) en DMF anhidro (60 ml) se le añadió N-metilmorfolina (2,24 ml, 20,4 mmol) y HATu (4,64 g, 12,2 mmol) bajo una atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó durante 2 h y luego se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y se extrajo tres veces con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía de fase inversa (Método 3b). Las fracciones puras se trataron con una solución sat. aq. de NaHCO3 y se extrajeron tres veces con EtOAc. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido de color blanquecino. La configuración absoluta representada se confirmó mediante cristalografía de rayos X del compuesto del título en un complejo con el dominio quinasa de ALK-2. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.34 (d, 1 H), 7.98 (d, 1H), 7.79 (s, 1 H), 7.57 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.31 (s, 1 H), 3.91 - 3.78 (m, 2H), 3.40 (bs, 1 H), 3.33 - 3.24 (m, 2H), 3.11 (d, 1 H), 2.57 (bs, 1 H), 2.50 — 2.34 (m, 1H), 2.34 (bs, 1H), 2.12 - 1.94 (m, 6H), 1.90 - 1.72 (m, 3H), 1.71 - 1.51 (m, 6H), 1.51 - 1.34 (m, 2H), 1.31 (t, 1H), 0.82 -0.68 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.54 min; ESI-MS 503 [M+H]+ . T: HPLC quiral ((ChiralPak Id, 5 Mm,: caudal 1 ml/min, longitud de onda de detección: 270 nm, fase móvil: heptano: isopropanol 60:40 (+ 0,1% de dietilamina): tR 18,7 min, 92,3% ee.
Ejemplo alternativo 34A: A una solución de clorhidrato del ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-p¡ran-4-¡l)-3-azab¡ciclo[3.1.0]hexan-1-¡l)fen¡l)n¡cotín¡co (1 kg, 1,683 mol) y clorhidrato de 4-aminobiciclo[2.2.2]octan-1 -ol (343,9 g, 1,935 mol) en DMF (3500 ml) se le añadió Et3N (681,2 g, 6,732 mol) y HATU (767,9 g, 2,019 mol) a TA. La mezcla de la reacción se agitó a TA durante 1 h. La mezcla se calentó a IT = 45° C, se añadió una solución de NH3H2O al 5% (5200 g). Se agitó durante aproximadamente 30 minutos y se añadió otra solución de NH3.H2O al 5% (1800 g). La mezcla se calentó a IT = 45°C durante 2 h. La mezcla se enfrió a IT = 22°C. Se filtró, la torta húmeda se lavó con H2O (1500 ml x 3). La torta húmeda se secó al vacío a 45° C durante 24 h. El producto bruto se disolvió en acetona (3000 ml), luego se filtró para eliminar algo de sólido no disuelto. El filtrado se calentó a IT = 50° C. Se añadió H2O (2000 ml). La mezcla se agitó a IT = 50° C durante 30 min hasta que se formó un precipitado blanco. Se añadió lentamente H2O (4000 ml). La mezcla se agitó a IT = 50° C durante 2 h. La mezcla se enfrió a IT = 22° C en 2 h, se filtró, la torta húmeda se lavó con acetona: H2O = 1:2 (v/v, 1,000 ml x 2). La torta húmeda se secó al vacío a 45° C durante 24 h. Se obtuvieron un total de 760 g de sólido blanco (rendimiento del 89%, 99,4% ee ).
1H NMR (DMSO-d6) 5: 8.32 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.97 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.54 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.20 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.90 (s, 2H), 4.31 (s, 1H), 3.82 (m, 2H), 3.29 (m, 2H), 3.07 (d, J=8.5 Hz, 1H), 2.54 (d, J=8.3 Hz, 1H), 2.44 (dd, J=8.5, 3.5 Hz, 1H), 2.37 (m, 1H), 2.31 (td, J=10.2, 5.0 Hz, 1H), 2.04 (m, 6H), 1.80 (dt, J=7.9, 3.8 Hz, 1H), 1.71 (d, J=12.3 Hz, 1H), 1.65 (d, J=11.5 Hz, 1H), 1.62 (m, 6H), 1.38 (m, 1H), 1.34 (m, 1H), 1.29 (t, J=3.9 Hz, 1H), 0.73 (dd, J=7.9, 3.6 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) 5: 167.80, 157.69, 148.28, 141.27, 134.91, 134.79, 126.40, 125.66, 123.53, 111.01, 66.22, 65.59, 59.10, 55.46, 52.04, 33.72, 31.92, 31.77, 30.59, 29.61,24.14, 17.20.
MS(ESI-TOF): 503.3018 [M+H]+.
El material de partida (sal de clorhidrato) se obtuvo como sigue:
Se suspendió diclorhidrato de 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2Hpiran-4-il)-3-azabiciclo[3.10]hexan-1-il)fenil)nicotinato (10 g, 19,5 mmol, 1,0 eq) en MeOH (31,7 g). Luego se añadió una solución de NaOH (2,9 g, 72,2 mmol, 3,7 eq) en H2O (10 g). La mezcla de la reacción se calentó a 45 ± 5° C y se agitó durante más de 3 h, produciendo una suspensión.
A otro matraz que contenía acetona (200 g), se añadió HCl 5~6 N en i-PrOH (14,8 g, 97,6 mmol, 5 eq). La solución se calentó a 47 ± 3° C. Luego, se añadió gota a gota la suspensión de MeOH anterior a la mezcla y se agitó a 47 ± 3°C durante 3 h. La mezcla se enfrió a 23 ± 3° C y se agitó durante 3 h. Después de la filtración, la torta húmeda se lavó con acetona (40 g). La torta húmeda se secó al vacío a 55° C durante 8 h. Se obtuvo clorhidrato de ácido 2-amino-5-(4-((1 fí,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (12,3 g, 99,3% de pureza por HPLC, 62,1% de rendimiento del ensayo) como un sólido blanquecino.
1H NMR (DMSO-d6) 5: 11.53 (br s, 1H), 8.64 (br s, 1H), 8.54 (br s, 1H), 7.72-8.42 (m, 2H), 7.64 (br d, J=7.9 Hz, 2H), 7.38 (br d, J=7.8 Hz, 2H), 3.85-4.04 (m, 3H), 3.40-3.73 (m, 4H), 3.15-3.33 (m, 2H), 2.18 (br d, J=3.9 Hz, 1H), 1.95-2.12 (m, 4H), 1.88 (br d, J=10.0 Hz, 1H), 1.05 (br t, J=6.4 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) 5: 167.2, 155.8, 144.3, 142.0, 139.6, 133.8, 127.7, 126.3, 124.1, 110.0, 65.8, 62.5, 55.7, 53.2, 29.9, 28.8, 28.7, 23.5, 16.6.
MS(ESI-TOF): 380.1974 [M+H]+.
El material de partida, diclorhidrato de 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato, se obtuvo de la siguiente manera:
En un matraz de fondo redondo de 500 ml se cargó cloruro de 1 R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-io (20 g, 1 eq), EA (200 ml), y K2CO3 al 25% (62 g). La mezcla se agitó durante 30 min hasta que se disolvieron todos los sólidos. Después de la separación de fases, se concentró la capa orgánica. Se añadió 2-metil-2-butanol (48 g, 60 ml). La capa orgánica se concentró. Se añadió 2-metil-2-butanol (144 g, 180 ml).
La mezcla se transfirió a un Redlay de 500 ml. Se añadieron K2CO3 (18,8 g, 2,5 eq) y 2-amino-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)nicotinato de metilo (16,8 g, 1,04 eq; ver Producto intermedio 1e). La mezcla se desgasificó con N2 tres veces. La mezcla se calentó a IT = 50 ± 5° C en 1 h. Se añadió Pd(dppf)Cl2 (1,2 g, 0,03 eq). La mezcla se calentó a IT = 70 ± 3° C y se agitó durante 2 h. Después de enfriar a 22° C, se añadieron H2O (120 g) y EA (180 g) y se agitaron durante 30 min. Se añadió MCC (6 g) y la mezcla se filtró a través de MCC. La torta se lavó con EA (54 g). Después de la separación de fases, la capa orgánica se lavó con NaCl al 5% (124 g). Luego, se añadió Quadrasil MP (eliminador de metales pesados de Johnson Matthey, 6 g) a la capa orgánica. La mezcla se calentó a IT = 55° C durante 8 h, se filtró a través de MCC y se lavó con EA (54 g). Se añadió Quadrasil MP (2 g) a la capa orgánica. La mezcla se calentó a IT = 55°C durante 6 h, se filtró a través de CMC y se lavó con EA (54 g). La capa orgánica se concentró. Se añadió acetona (158 g, 200 ml). Después de agitar a IT = 22 ± 3° C durante 30 min, la mezcla se calentó a IT = 40 ± 3° C. Se añadió gota a gota HCl al 15,5% (38,4 g) con IT <50° C. La mezcla se agitó a IT = 45 ± 3° C durante 1 h. La mezcla se enfrió a 22 ± 3° C. La mezcla se agitó a 22 ± 3° C durante 1 hora y se filtró. La torta se lavó con acetona (32 gx 2). La torta húmeda se secó al vacío a 50° C durante por lo menos 8 h. Se obtuvo el material de partida, se obtuvieron 22,5 g de un sólido blanco (97,1% de pureza por HPLC, 5,2% de contenido de agua, 87% de rendimiento del ensayo).
1H NMR (DMSO-d6) ó: 11.43 (br d, J=5.7 Hz, 1H), 8.62-8.80 (m, 2H), 7.85-8.58 (m, 2H), 7.67 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.39 (d, J=8.4 Hz, 2H), 3.85-4.06 (m, 6H), 3.60-3.69 (m, 2H), 3.50-3.59 (m, 1H), 3.44 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 3.14­ 3.31 (m, 2H), 2.21 (dt, J=8.4, 4.2 Hz, 1H), 1.94-2.12 (m, 4H), 1.76-1.93 (m, 1H), 1.07 (br t, J=7.1 Hz, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ó: 165.0, 154.0, 143.5, 142.0, 140.1, 132.8, 127.7, 126.5, 124.2, 110.7, 65.8, 62.5, 55.6, 53.3, 53.3, 29.9, 28.
MS(ESI-TOF): 394.2071 [M+H]+.
El material de partida, cloruro de 1 fí,5S)-1-(4-bromofenil)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-io, se obtuvo de la siguiente manera:
En un Redlay de 1 l se cargaron cloruro de (1R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-3-io (30 g, 1 eq), dihidro-2H-piran-4(3H)-ona (13,13 g, 1,2 eq) y THF (300 ml). La mezcla se agitó a IT = 22 ± 5° C durante 1 h. Se añadió en porciones NaBH(OAc)3 (30,1 g, 1,3 eq) mientras se mantenía IT <30°C. La mezcla se agitó a IT = 22 ± 5° C durante 2 h. Se añadió HCl al 6,2% (93 g, 90 ml, 1,5 eq) mientras se mantenía IT <30°C y pH <2. La mezcla se agitó durante 10 min. Se añadió K2CO3 al 25% (259 g, 210 ml) para ajustar el pH = 8-9. Se añadió IPAc (300 ml). La mezcla se agitó durante 10 min. Después de la separación de fases, se añadió H2O (150 g) a la capa orgánica. La mezcla se agitó durante 10 min. Después de la separación de fases, la capa orgánica se concentró al vacío (50-100 mbar, baño de agua a 50° C). Se añadió IPA (120 g, 150 ml). La capa orgánica se concentró al vacío (50-100 mbar, baño de agua a 50° C). Se añadió IPA (144 g, 180 ml). La mezcla se filtró a través de CMC. La torta se lavó con IPA (24 g x 2). Se añadió H2O (5 g) a la capa orgánica. Se añadió gota a gota HCl al 31% (19,3 g) con IT <35°C. La mezcla se agitó a IT = 22 ± 5° C durante 2 h y se filtró. La torta se lavó con IPA (48 g x 2). La torta húmeda se secó al vacío a 50° C durante por lo menos 6 h. Se obtuvo el producto deseado (31,4 g, 98% de pureza por HPLC, 78% de rendimiento) como un sólido blanco.
1H NMR (DMSO-d6 and D2O) ó: 7.46 (br d, J=8.4 Hz, 2H), 7.15 (br d, J=8.4 Hz, 2H), 3.90 (br d, J=7.8 Hz, 3H), 3.62 (br s, 1H), 3.51 (br s, 2H), 3.16-3.38 (m, 3H), 2.05-2.21 (m, 1H), 1.93 (br s, 2H), 1.49-1.71 (m, 2H), 1.05­ 1.30 (m, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) ó: 138.3, 131.9, 129.2, 120.4, 65.5, 62.3, 56.2, 53.9, 29.1,28.9, 24.8, 23.0.
MS(ESI-TOF): 322.0761 [M+H]+
La forma completa de fabricación del Ejemplo alternativo 34 A se muestra en la siguiente reacción.
Es uema 34A:
El primer compuesto de este esquema, A1, se puede obtener de la siguiente manera:
Paso 1-2 Síntesis de 1c y 1d
Figure imgf000048_0001
Procedimiento de reacción (ver también Xu, Feng et al., Org. Lett. Vol 8, No 17, 2006, páginas 3885-3888): Se añadió gota a gota NaHMDS (2,0 M en THF, 19,2 l, 38,4 mol, 2,5 eq) a una solución de 1 a (3,00 kg, 15,3 mol, 1,0 eq, obtenible, por ejemplo, de Sigma-Aldrich) y 1b (1,80 kg, 19,47 mmol, 1,27 eq;
obtenible por ejemplo, de Sigma-Aldrich) en THF (30 l) a-15-20° C bajo N2 durante 5 h. La mezcla de la reacción se agitó durante 3 h adicionales a -15°C, luego se calentó a ta gradualmente y se agitó durante 16 h. La HPLC mostró que el 4-bromofenilacetonitrilo se había consumido completamente.
Se añadió lentamente BF3.Et2O (4,74 kg, 15,3 mol, 1,0 eq) a 20~40°C. Después de la adición, se añadió lentamente BH3.DMS (19,2 l, 38,4 mol, 2,5 eq) a 20~40°C. Después de la adición, la mezcla se agitó a 50-55° C durante 16 h. La HPLC mostró que el producto intermedio se había consumido completamente.
La mezcla se enfrió a -5-0° C, se añadió lentamente AcOH (4,5 kg, 74,4 mol, 4,86 eq). Después de la adición, se añadió lentamente HCl 3 N (36 kg). La mezcla se agitó durante 1 hora y la mayor parte del THF se eliminó al vacío a 40-45° C. Luego, el residuo se extrajo con MTBE (3 x 10 l). La fase de MTBE se lavó con HCl 3N (4 x 5 l). La capa acuosa combinada se enfrió a 0° C. Luego, la capa acuosa se neutralizó con NaOH al 30% a pH >10, se extrajo con IPAc (3 x 15 kg), se lavó con salmuera (5 l), se evaporó al vacío para ofrecer el compuesto bruto 1d (3,71 kg) que se usó directamente para el paso siguiente.
Paso 3-4 Síntesis de 1e y 1f
Figure imgf000048_0002
Procedimiento de reacción:
Se enfrió IPAc (12 l) a 0° C y se añadió SOCl2 (5,46 kg, 45,9 mol, 1,5 eq), manteniendo la temperatura a 0-4° C. Después de la adición, se añadió lentamente una solución de compuesto bruto 1d (7,46 kg, dos lotes combinados de 6 kg de 1a) en IPAc (24 l). Después de la adición, la mezcla se agitó durante 1 h a 0° C, luego se calentó a TA y se agitó durante 4 h. La HPLC mostró que el producto intermedio se había consumido completamente.
La mezcla se enfrió a -5-0°C y se inactivó con agua (30 l), luego se añadió lentamente una solución acuosa de NaOH al 30% para ajustar el pH a 8,5~9 y se agitó durante la noche a 0-5°C. La HPLC mostró que el producto intermedio se había consumido completamente.
Se añadió lentamente una solución acuosa de NaOH al 30% para ajustar el pH a 11~12 a 0-10° C y se agitó a ta durante 30 min. Separación de las fases, la capa acuosa se extrajo con IPAc (10 kg), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (5 l), se secó sobre Na2SO4 y se filtró. Luego, el filtrado se enfrió a 0-5° C. Se añadió lentamente HCl/IPA 4 M (8,0 kg, 151 mol) a 0-5° C. Después de la adición, la mezcla de la reacción se agitó durante 4 h a 0-5° C. Se filtró la mezcla, se recogió el sólido, se lavó con MTBE (6 l) y se secó al vacío para dar el compuesto 1f (3,10 kg, ensayo 98%, rendimiento 37%) Ejemplo alternativo 34B:
El material de partida A5 en el Esquema 34A también puede obtenerse, a modo de alternativa, como sigue (Esquema de reacción 34B), y luego usarse como se muestra en el Ejemplo alternativo 34A anterior:
Figure imgf000049_0001
En detalle, el procedimiento es el siguiente:
Figure imgf000049_0002
En un matraz de tres bocas de 100 ml, una solución de (1 R,5S)-1-(4-bromofenil)-3-tetrahidropiran-4-il-3-azabiciclo[3.1.0]hexano (5,00 g, 15,52 mmol, 1,00 eq) en THF anhidro (50,00 ml) a -78° C bajo N2. Se añadió gota a gota n-BuLi (2,5 M en hexano, 7,45 ml, 1,20 eq) a -78°C y se agitó durante 1 h a -78°C. Se añadió gota a gota una solución de borato de trimetilo (4,84 g, 46,56 mmol, 5,26 ml, 3,00 eq) en THF anhidro (10,00 ml) a -78° C. Después de la adición, la mezcla de la reacción se dejó calentar a 25° C y se agitó a 25° C durante 16 h. Después de que el material de partida se hubo consumido completamente, siguió la monitorización por LC-MS y se observó el 74,23% del compuesto objetivo. La mezcla de la reacción se enfrió a 0° C en un baño de hielo y se inactivó con solución NH4Cl saturado (50 ml). El pH de la mezcla se ajustó a 12-13 con una solución de NaOH (1 M) y se extrajo con EtOAc (30 ml x 3). La capa acuosa se concentró a presión reducida para dar el residuo (18 g). El residuo se purificó mediante prep-HPLC (condición de TFA) para proporcionar ácido [4-[(1R,5S)-3-tetrahidropiran-4-il-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il]fenil]borónico (4,60 g, 11,47 mmol, 73,88% de rendimiento, sal de TFA) como un sólido blanco.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5: 7.72 (d, 2H), 7.24 (d, 2H), 4.13 (d, 1H), 4.06-4.03 (m, 2H), 3.86 (d, 1H), 3.70-3.67 (m, 2H), 3.45-3.32 (m, 3H), 2.26-2.23 (m, 1H), 2.11-2.05 (m, 2H), 1.81-1.77 (m, 2H), 1.34-1.20 (m, 2H). ESI-MS 288 [M+H]+.
Figure imgf000049_0003
Se calentó una mezcla de ácido [4-[(1 R,5S)-3-tetrahidropiran-4-il-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il]fenil]borónico (500,00 mg, 1,25 mmol, 1,00 eq, Sal TFA), 2-amino-5-bromo-piridin-3-carboxilato de metilo (433,22 mg, 1,88 mmol, 1,50 eq), Pd(dppf)Cl2 (91,46 mg, 0,125 mmol, 0,10 eq) y K2CO3 (518,29 mg, 3,75 mmol, 3,00 eq) en dioxano (5,00 ml) y H2O (1,00 ml) a 100°C y se agitó durante 16 h a 100° C bajo N2. La mezcla de la reacción se enfrió a 30° C y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (condición neutra) para dar 2-amino-5-[4-[(1 R,5S)-3-tetrahidropiran-4-il-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il]fenil]piridin-3-carboxilato de metilo (100,00 mg, 20,02% de rendimiento, 98,47% de pureza por HPLC) como un sólido marrón 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5: 8.49 (d, 1H), 8.35 (d, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.24 (d, 2H), 4.01-3.98 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.47-3.41 (m, 3H), 3.19 (d, 1H), 2.65 (d, 1H), 2.50-2.55 (m, 1H), 2.45-2.35 (m, 1H), 1.81-1.76 (m, 3H), 1.64-1.46 (m, 2H), 1.45-1.40 (m, 1H), 0.86-0.83 (m, 1H).
ESI-MS 394 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 35: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida
Figure imgf000050_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 35a) en lugar de ácido 2-am\no-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó clorhidrato de 4-aminobiciclo[2.2.2]octan-1-ol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1 a) para dar el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.05 (bs, 1 H), 8.42 (d, 1 H), 8.22 (s, 1H), 8.02 (s, 1 H), 7.69 (d, 2H), 7.50 (bs, 2H), 7.39 (d, 2H), 4.83 (bs, 1 H), 4.08 (dd, 1 H), 3.80 - 3.25 (m, 6H), 2.31 - 2.09 (m, 4H), 2.09 - 1.99 (m, 6H), 1.98 - 1.71 (m, 4H), 1.70 - 1.56 (m, 6H), 1.42 - 1.40 (m, 1H), 1.10 (t, 1H). (UPLC-MS) tR 0.62 min; ESI-MS 537 [M+H]+.
Producto intermedio 35a: ácido 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2c) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinatometilo (Producto intermedio 35b) en lugar de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-tercbutil (Producto intermedio 1d). (UPLC-MS) tR 0,46 min; ESI-MS 414 [M+H]+.
Producto intermedio 35b: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-il)fenil)nicotinato de metilo (producto intermedio 14b) excepto que se usó clorhidrato de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (producto intermedio 7c) en lugar de clorhidrato de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-aminonicotinato de metilo (Producto intermedio 14c), y se usó 4,4-difluorociclohexanona en lugar de dihidro-2H-piran-4(3H)-ona. (UPLC-MS) tR 0,73 min; ESI-MS 428 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 36: 2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000050_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 2) excepto que se usó (3aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)metanol (Producto intermedio 16a) en lugar de clorhidrato de trans-4-aminociclohexanol. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.05 (s, 1H), 8.41 (d,1H), 8.18 (d,1H), 7.61 (d, 2H), 7.48 (dd, 1 H), 7.33 — 7.17 (m, 4H), 4.55 (t, 1H), 3.51 (d, 3H), 3.31 (s, 2H), 3.08 (s, 2H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.41 - 1.22 (m, 3H), 1.17 - 0.98 (m, 9H), 0.79 (d, 1H). (UPLC-MS) tR 0.54 min; ESI-MS 433 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 37: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(but-2-in-1 -il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000051_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 1-bromobut-2-ino en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a TA durante 30 min. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.21 (s, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.60 (d1H), 3.72 (s, 1 H), 3.39 (s, 3H), 3.21 (s,1H), 2.98 - 2.58 (m, 3H), 1.84 (dd, 8H), 1.49 - 1.17 (m, 5H), 0.78 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.54 min; ESI-MS 445 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 38: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(oxetan-3-ilmetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000051_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 3-(yodometil)oxetano en lugar de 4-(3-bromopropil) morfolina, y la mezcla de la reacción fue se agitó a 60° C durante 60 min. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.73 - 4.61 (m, 2H), 4.58 (d, 1 H), 4.29 (s, 2H), 3.84 - 3.67 (m, 1 H), 3.52 - 3.38 (m, 2H), 3.27 - 3.12 (m, 2H), 2.94 (d, 1H), 2.80 (s, 2H), 1.95 - 1.76 (m, 5H), 1.54 - 1.14 (m, 6H), 0.76 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 463 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 39: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(1 -(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó 1-(2,2,2-trifluoroetil)piperidin-4-onaenlugarde1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 8.38 (d, 1 H), 8.31 (d,1H), 8.11 (d, 1H), 7.58 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.55 (bs, 1H), 3.80 — 3.62 (m, 1H), 3.20 — 3.04 (m, 3H), 2.88 (d, 2H), 2.57 (d, 1H), 2.46 (dd, 1H), 2.41 — 2.29 (m, 2H), 2.15 (t, 1H), 1.99 — 1.69 (m, 8H), 1.49 — 1.17 (m, 7H), 1.15 (t, 1H), 0.75 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.62 min; ESI-MS 558 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 40: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-morfolinoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000052_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó sal de HCl de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)nicotinamida (Producto intermedio 40a) en lugar de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 5a), y se usó 4-(2-bromoetil)morfolina en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a 60° C durante 3 h. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.34 (d, 1 H), 7.98 (d, 1 H), 7.79 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.32 (s, 1H), 3.65 - 3.49 (m, 4H), 3.08 (d, 1 H), 2.61 (t, 2H), 2.59 - 2.39 (m, 9H), 2.15 - 1.98 (m, 6H), 1.85 - 1.73 (m, 1H), 1.70 - 1.54 (m, 6H), 1.31 (t, 1H), 0.75 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 532 [M+H]+.
Producto intermedio 40a: 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2- amino-N-((1r,4R))-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 5a) excepto que se usó 1-(4-(6-amino-5-((4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)carbamoílo)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1S,5R)-tercbutilo (Producto intermedio 40b) en lugar de 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3- azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1S,5R)-terc-butilo (Producto intermedio 5b). Se obtuvo una fracción del compuesto del título como una sal de clorhidrato después de la evaporación del dioxano; se obtuvo otra fracción como una sal de TFA después de una purificación adicional por prepHPLC (Método 1a). (UPLC-MS) tR 0,48 min; ESI-MS 419 [M+H]+.
Producto intermedio 40b: 1 -(4-(6-amino-5-((4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 S,5R)-terc-butilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1,0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(terc-butox/'carbon/7)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 5c) en lugar ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(terc-butox/carbon/l)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó clorhidrato de 4-aminobiciclo[2.2.2]octan-1-ol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. (UPLC-MS) tR 1,05 min; ESI-MS 519 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 41: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-(2,2,2-trifluoroetoxi)etil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000053_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó 2-trifluorometanosulfonato de (2,2,2-trifluoroetoxi)etilo (Producto intermedio 41a) en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a). Después de la purificación, se obtuvo el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.15 (bs, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.63 (d, 2H), 7.23 (s, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.80 - 3.63 (m, 3H), 3.40 (m, 4H), 2.75 - 2.60 (m, 3H), 1.86 (m, 5H), 1.51 - 1.15 (m, 6H). (UPLC-MS) tR 0.60 min; ESI-MS 519 [M+H]+.
Producto intermedio 41a: trifluorometanosulfonato de 2-(2,2,2-trifluoroetoxi)etilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a) excepto que se usó 2-(2,2,2-trifluoroetoxi etanol en lugar de 1,3-difluoropropan-2-ol, y se obtuvo como un aceite bruto que se usó sin purificación adicional.
Ejemplo_______ 42: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000053_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó sal de HCl de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)nicotinamida (Producto intermedio 40a) en lugar de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a) y se usó dihidro-2H-piran-4(3H)-ona en lugar de 1 -(metilsulfonil)piperidin-4-ona. Después de la purificación, se obtuvo el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.62 (bs, 1H), 8.38 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.65 (d, 2H), 7.37 (d, 2H), 6.95 (s, 2H), 4.33 (s, 1H), 4.06 - 3.97 (m, 3H), 3.75 - 3.43 (m, 4H), 3.29 - 3.26 (m, 2H), 2.28 - 2.19 (m, 1H), 2.07 - 2.03 (m, 6H), 2.03 - 1.96 (m, 2H), 1.75 - 1.63 (m, 1H), 1.63 - 1.61 (m, 6H), 1.63 - 1.61 (m, 1H), 1.25 - 1.17 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 503 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 43: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1 -il)propoxi)fenil)nicotinamida
A una solución de 2-amino-5-bromo-N-ciclohexilnicotinamida (Producto intermedio 43a, 50 mg, 0,168 mmol) en 2 ml de DMF/EtOH/agua (2:1:1) se le añadió 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina (60,9 mg, 0,168 mmol), K2CO3 (69,5 mg, 0,503 mmol) y PdCl2 (PPh3)2 (11,8 mg, 0,017 mmol). La mezcla de la reacción se agitó durante 15 min a 80° C, luego se enfrió y se diluyó con 5 ml de EtOAc y se filtró sobre una almohadilla de Na2SO4.. Después de concentrar a presión reducida, el producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. H Nm R (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.34 (d, 1 H), 8.33 (d, 1 H), 8.09 (d, 1 H), 7.59 (d, 2H), 7.06 (s, 2H), 7.01 (d, 2H), 4.03 (t, 2H), 3.75 (s, 1 H), 2.50 - 2.22 (m, 6H), 1.95 - 1.65 (m, 6H), 1.62 (d, 1H), 1.52 - 1.48 (m, 4H), 1.46 - 1.34 (m, 6H), 1.32 - 1.15 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.46 min; APCI-MS 437.3 [M+H]+ .
Producto intermedio 43a: 2-amino-5-bromo-N-ciclohexilnicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-bromonicotínico en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R, 5S)-3-(terc-butox/'carbon/T)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó ciclohexanamina en lugar de frans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se usó sin purificación adicional. (HPLC-MS) tR 0,98 min; ESI-MS 208/300 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 44: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(1,1 -dioxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000054_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó 1,1 -dióxido de dihidro-2H-tiopiran-4(3H)-ona en lugar de 1 -(metilsulfonil) piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.39 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.24 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.58 (d, 1H), 3.82 — 3.65 (m, 1H), 3.48 - 3.35 (m, 2H), 3.19 - 2.91 (m, 5H), 2.62 - 2.51 (m, 2H), 2.17 - 1.97 (m, 4H), 1.89 - 1.83 (m, 5H), 1.45 - 1.19 (m, 6H), 0.81 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.48 min; ESI-MS 525 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 45: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(4-metilpiperazina-1 -carbonil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000054_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó (4-metilpiperazin-1-il)(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)metanona en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.46 (d, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.76 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.22 (s, 2H), 3.82 - 3.55 (m, 1 H), 3.35 (t, 4H), 2.31 - 2.22 (t, 4H), 2.21 (s, 3H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 1H), 1.35 - 1.29 (m, 4H), 1.28 - 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.29 min; APCI-MS 422 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 46: 2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000055_0001
Se cargó un vial de microondas con 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 59b, 33 mg, 0,10 mmol), (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a, 38,3 mg, 0,11 mmol) y XPhos Pd (7,39 mg, 0,01 mmol). Se añadió dioxano (1 ml) seguido de una solución ac. 3N de K3PO4 (0,10 ml, 0,30 mmol). La mezcla de la reacción se purgó con una corriente de nitrógeno durante 5 min y luego se irradió en un reactor de microondas a 120° C durante 30 min. Después de enfriar, la mezcla de la reacción se concentró a presión reducida y se purificó por prepHPLC (Método 1 b) para dar el compuesto del título. UPLC-HRMS tR 3,21 min; IEN 441,26 [M+H]+ .
Producto intermedio 46a: (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona
Se agitó una solución de 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b, 112 mg, 0,40 mmol), (R)-(2)-metilpirrolidina (37,5 mg, 0,44 mmol) y ácido acético (2,4 mg, 0,040 mmol) en THF (2 ml) n durante 2 h a TA y se añadió triacetoxiborohidruro de sodio (110 mg, 0,52 mmol). La mezcla de la reacción resultante se agitó durante 18 h y luego se filtró a través de un cartucho de carbonato SPE seguido de lavado con THF. El filtrado y las soluciones de lavado se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional. ESI-MS 349 [M+H]+.
Producto intermedio 46b: 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído
Se agitó una solución de ácido (3-fluoro-4-formilfenil)borónico (67 mg, 0,40 mmol) y ácido N-metiliminodiacético (65 mg, 0,44 mmol) en DMF (2 ml) a 90° C durante 18 h. La mezcla de la reacción se enfrió y se filtró a través de un cartucho de carbonato SPE seguido de lavado tres veces con acetonitrilo. El filtrado y las soluciones de lavado se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional. ESI-MS 558 [2M+H]+.
Ejemplo de referencia 47: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(3,3,3-trifluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000055_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de 3,3,3-trifluoropropilo en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (producto intermedio 6a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.74 (m, 1H), 3.40 (m, 3H), 3.09 (m, 1H), 2.72 - 2.64 (m, 4H), 1.86 (m, 5H), 1.49 -1.14 (m, 6H), 0.78 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.60 min; ESI-MS 489 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 48: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r),4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000056_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó 1-bromo-2-fluoroetano en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a), y la mezcla de la reacción se agitó a 60°C durante 3 h. Después de la purificación, se obtuvo el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.95 (bs, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.32 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 7.70 -7.57 (m, 2H), 7.36 (bs, 2H), 7.16 (s, 2H), 4.80 - 4.62 (m, 2H), 4.59 (d, 1H), 4.08 (bs, 1 H), 3.77 - 3.52 (m, 4H), 3.51 -3.35 (m, 3H), 2.24 (bs, 1H), 1.87 (t, 4H), 1.59 - 1.13 (m, 6H). (UPLC-MS) tR 0.46 min; ESI-MS 439 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 49: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-morfolinofenil)nicotinamida
Figure imgf000056_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó 4-(4-(4),4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)morfolina en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.35 (d, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.55 (d, 2H), 7.03 (d, 2H), 7.03 (s, 2H), 3.85 - 3.65 (m, 1 H), 3.77 (t, 4H), 3.14 (t, 4H), 1.90 — 1.80 (m, 2H), 1.80 — 1.70 (m, 2H), 1.80 (dd, 1H), 1.38 — 1.20 (m, 4H), 1.19 — 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.60 min; APCI-MS 381 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 50: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2,2-difluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000056_0003
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoropropilo en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a) y la mezcla de la reacción se agitó a TA durante 60 min. 1H NMR (400 MHz, DMSo-d6) 6 8.39 (s, 1 H), 8.33 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.32 — 7.11 (m, 4H), 4.58 (bs, 1H), 3.74 (bs, 1H), 3.11 (bs, 1H), 3.00 - 2.66 (m, 5H), 1.86 (bs, 5H), 1.63 (t, 3H), 1.48 - 1.18 (m, 6H), 0.81 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.81 min; ESI-MS 471 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 51: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-cianoetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r),4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000057_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 3-bromopropanonitrilo en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a 60° C durante 24 h.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1 H), 8.30 (d, 1 H), 8.12 (d, 1 H), 7.60 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1 H), 3.73 (d, 1 H), 3.18 (d, 1 H), 3.09 (d, 1 H), 2.81 — 2.62 (m, 6H), 1.99 — 1.78 (m, 5H), 1.48 — 1.18 (m, 6H), 0.80 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.50 min; ESI-MS 446 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 52: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-morfolinopropoxi)fenil)nicotinamida
Figure imgf000057_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó 4-(3-(4)-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)morfolina en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.35 (d, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.06 (s, 2H), 7.01 (d, 2H), 4.04 (t, 2H), 3.82 - 3.68 (m, 1 H), 3.58 (t, 4H), 2.50 - 2.22 (m, 6H), 1.90 - 1.78 (m, 4H), 1.78 - 1.69 (m, 2H), 1.63 (dd, 1 H), 1.38 - 1.20 (m, 4H), 1.19 - 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.40 min; APCI-MS 439 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 53: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(prop-2-in-1 -il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000057_0003
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1S,5R)-3-(3-morfolinopropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó 3-bromoprop-1 -ino en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina. 1H n Mr (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.13 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.73 (d, 1H), 3.52 — 3.38 (m, 2H), 3.21 (d, 1H), 2.93 (d, 1 H), 2.83 (d, 1H), 2.72 (d, 1H), 2.40 (s, 3H), 1.95 — 1.75 (m, 4H), 1.44 — 1.19 (m, 5H), 0.80 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 431 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 54: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(prop-2-in-1 -il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000058_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó 3-bromoprop-1-ino en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-il (Producto intermedio 6a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.76 - 3.70 (m, 1H), 3.46 (s, 2H), 3.45 - 3.37 (m, 1H), 3.22 (d, 1H), 2.83 (d, 1H), 2.72 (d, 1H), 2.71 - 2.69 (m, 2H), 1.92 - 1.77 (m, 5H), 1.51 - 1.17 (m, 5H), 0.80 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 431 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 55: 5-(4-((R)-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)-2-clorofenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000058_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 3) excepto que se usó (R)-6-(1-(4-bromo-3-clorofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 55a) en lugar de (R)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 3b). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.17 (m, 2H), 8.00 (s, 1H), 7.42 - 7.44 (m, 2H), 7.40 (m, 1H), 7.34 (bs, 2H), 4.62 (s, 3H), 4.55 -4.57 (m, 1H), 3.72 (m, 1H), 3.35 - 3.54 (m, 4H), 3.20 - 3.24 (m, 2H), 3.15 (bs, 1H), 1.78 - 1.88 (m, 4H), 1.20 - 1.41 (m, 4H), 1.11 (bs, 3H). (UPLC-MS) tR 0.47 min; ESI-MS 471/473 [M+H]+.
Producto intermedio 55a: (R)-6-(1 -(4-bromo-3-clorofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano
El compuesto del título se preparó de manera análoga al (R)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 3b) excepto que se usó (R)-1-(4-bromo-3-clorofenil)etanamina en lugar de (R)-1-(4-bromofenil)etanamina. (UPLC-MS) tR 0,63 min; ESI-MS 316/318 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 56: 2-amino-5-(2-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000058_0003
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 46) excepto que se usó (R)-2-(2-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 56a) en lugar de (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a). UPLC-HRMS tR 3,22 min; IEN 441,26 [M+H]+.
Producto intermedio 56a: (R)-2-(2-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocan-4,8-diona (Producto intermedio 46a) excepto que se usó 3-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 56b) en lugar de 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b). ESI-MS 349 [M+H]+ .
Producto intermedio 56b: 3-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b) excepto que se usó ácido (2-fluoro-4-formilfenil)borónico en lugar de ácido (3-fluoro-4-formilfenil)borónico. ESI-MS 576 [2M+H2O+H]+.
Ejemplo de referencia 57: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida
Figure imgf000059_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó sal de HCl de 5-(4-((1 R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida(Producto intermedio 34a) en lugar de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a), y se usó 1-bromo-2-fluoroetano en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a). Después de la purificación, se obtuvo el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 610.00 (bs, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.04 (d, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.77 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 7.08 (s, 2H), 4.83 (td, 2H), 4.74 (bs, 1H), 4.08 (bs, 1H), 3.89 - 3.57 (m, 4H), 3.18 (d, 1 H), 2.24 (bs, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 6H), 1.74 - 1.53 (m, 6H), 1.48 (bs, 1H), 1.17 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.53 min; ESI-MS 465 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 58: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000059_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 35a) en lugar de ácido 2-am\no-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó trans-4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) y se pasó a través de un cartucho de intercambio iónico (PL-HCO3) para desalar para dar el compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.10 (d,1H), 7.59 (d, 2H), 7.25 (d, 2H), 7.10 (s, 2H), 4.33 (s, 1H), 3.81 (bs, 1 H), 3.39 (d, 2H), 2.62 - 2.56 (m, 1H), 2.00 (bs, 2H), 1.88 - 1.76 (m, 8H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.50 - 1.43 (m, 4H), 1.30 (t, 1H), 1.17 (s, 3H), 0.86 — 0.68 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.61 min; ESI-MS 525 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 59: 5-(4-((R)-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000060_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 3) excepto que se usó ácido (6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 59a) en lugar de ácido (6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 3a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (s, 1 H), 8.25 (bs, 1 H), 8.11 (d, 1 H) 7.71 - 7.54 (m, 2H), 7.49 - 7.28 (m, 2H), 7.12 (bs, 2H), 4.61 (bs, 4H), 4.31 (s, 1 H), 3.89 - 3.68 (m, 2H), 3.31 (s, 15H), 3.27 - 2.99(m, 2H), 1.86 - 1.69 (m, 2H), 1.66 - 1.52 (m, 2H), 1.51 - 1.35 (m, 5H), 1.16 (s, 1H), 1.30 - 0.95 (m, 2H). (UPLC-MS) tR 0.47 min; ESI-MS 451 [M+H]+ .
Producto intermedio 59a: ácido (6-amino-5-(((1 r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido (6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 3a) excepto que se usó 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 59b) en lugar de 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c). (UPLC-MS) tR 0,33 min; ESI-MS 394 [M+H]+ .
Producto intermedio 59b: 2-amino-5-bromo-N-((1 r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c) excepto que se usó frans-4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de frans-4-aminociclohexanol. (UPLC-MS) t r 0,68 min; Es I-MS 328/330 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 60: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(but-2-in-1 -il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000060_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó 1-bromobut-2-ino en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.58 (d, 1H), 3.77 - 3.71 (m, 1H), 3.43 - 3.37 (m, 3H), 3.22 (d, 1H), 2.92 (d, 1H), 2.80 (d, 1H), 1.93 - 1.78 (m, 8H), 1.44 — 1.19 (m, 6H), 0.79 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.54 min; ESI-MS 445 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 61: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(piperidin-1-il) fenil) nicotinamida
Figure imgf000060_0003
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó ácido 4-(piperidin-1-il)fenilborónico en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.33 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.51 (d, 2H), 7.01 (s, 2H), 7.00 (d, 2H), 3.82 - 3.68 (m, 1H), 3.17 (t, 4H), 1.90 - 1.78 (m, 2H), 1.78 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.49 (m, 7H), 1.38 - 1.20 (m, 4H), 1.19 - 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.40 min;
Ejemplo de referencia 62: 2-amino-N-(3-(hidroximetil)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000061_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 28a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó trans-4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.92 (d, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.22 (s,1H), 7.61 (d, 2H), 7.25 (d, 2H), 7.18 (s, 2H), 4.15 - 4.09 (m, 1H), 3.88 - 3.82 (m, 2H), 3.42 - 3.36 (m, 3H), 3.10 (bs, 1H), 2.65 - 2.34 (m, 12H), 1.85 - 1.75 (m, 3H), 1.45 - 1.31 (m, 6H), 0.77 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.49 min; ESI-MS 491 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 63: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 S,5R)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000061_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó sal de HCL de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)nicotinamida (Producto intermedio 40a) en lugar de 5-(4-((1 R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a), y se usó oxetan-3-ona en lugar de 1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.34 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.61 - 4.56 (m, 2H), 4.52 - 4.48 (m, 2H), 4.32 (s, 1H), 3.80 - 3.74 (m, 1H), 3.03 (d, 1H), 2.57 - 2.51 (m, 3H), 2.14 - 1.98 (m, 6H), 1.88 - 1.85 (m, 1H), 1.71 - 1.55 (m, 6H), 1.45 - 1.35 (m, 1H), 0.83 - 0.80 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.51 min; ESI-MS 475 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 64: 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(oxetan-3-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000062_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó sal de HCl de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)nicotinamida (Producto intermedio 34a) en lugar de 5-(4-((1 R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a), y se usó oxetan-3-ona en lugar de 1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.34 (d, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.61 - 4.56 (m, 2H), 4.52 - 4.48 (m, 2H), 4.31 (s, 1H), 3.81 - 3.76 (m, 1H), 3.03 (d, 1H), 2.57 - 2.51 (m, 3H), 2.07 - 2.03 (m, 6H), 1.88 - 1.85 (m, 1H), 1.65 - 1.61 (m, 6H), 1.45 - 1.35 (m, 1H), 0.83 - 0.80 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 0.55 min; ESI-MS 475 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 65: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-((2-(4-metilpiperazin-1 -il)etil)carbamoil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000062_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 4-(6-amino-5-(ciclohexilcarbamoil)piridin-3-il)benzoico (Producto intermedio 65a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butox/carbon/7)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c), y se usó 2-(4-metilpiperazin-1-il)etanamina en lugar de frans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2c) para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.50 (d, 1H), 8.42 (t, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.23 (d, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.80 (d, 2H), 7.25 (s, 2H), 3.82 - 3.65 (m, 1 H), 3.40 (q, 2H), 3.32 - 3.13 (m, 3H), 2.99 - 2.83 (m, 1 H), 2.43 - 2.31 (m, 6H), 2.17 (s, 3H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 1H), 1.40 - 1.25 (m, 4H), 1.20 - 1.10 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.28 min; APCI-MS 465 [M+H]+.
Producto intermedio 65a: ácido 4-(6-amino-5-(ciclohexilcarbamoil)piridin-3-il)benzoico
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoico en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. El producto bruto se trituró con 2-propanol para dar un sólido parduzco que se purificó mediante prepHPLC (Método 1a). Se recogieron las fracciones puras y se concentraron a presión reducida, luego se basificaron con Na2CO3, tras lo cual precipitó el compuesto del título como un sólido incoloro que se filtró y se secó a presión reducida. (HPLC-MS) tR 1,52 min; ESI-MS 340 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 66: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000063_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a) en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.24 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.68 (t, 2H), 4.57 (dd, 3H), 3.81 — 3.65 (m, 1 H), 3.46 — 3.35 (m, 2H), 3.08 (d, 1 H), 2.93 (d, 1 H), 2.83 (dd, 1 H), 2.05 -1.76 (m, 5H), 1.53 - 1.16 (m, 6H), 0.78 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.68 min; ESI-MS 471 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 67: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-(2,2,2-trifluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000063_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 8.46 - 8.31 (m, 2H), 8.18 (bs, 1H), 7.59 (d, 2H), 7.29 (bs, 1H), 7.23 (d, 2H), 3.83 - 3.54 (m, 1H), 3.51 - 3.24 (m, 5H), 3.11 (d, 1H), 2.92 (d, 1H), 2.86 (m, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 5H), 1.29 - 1.21 (m, 1H), 1.42 - 1.18 (m, 4H), 1.14 (bs, 1H), 0.85 — 0.79 (m, 1H). (UPLC-MS) tR 1.04 min; ESI-MS 475 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 68: 5-(4-((R)-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,3R)-3-hidroxiadamantan-1 -il)nicotinamida
Figure imgf000063_0003
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 5-(4-((R)-1-(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 3) excepto que se usó ácido (6-amino-5-(((1r,3r)-3-hidroxiadamantan-1-il)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 68a) en lugar de ácido (6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 3a). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.65 (bs, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.87 (d, 2H), 7.59 (d, 2H), 4.73 (dd, 2H), 4.65 - 4.54 (m, 4H), 4.45 - 4.39 (m, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.90 (bs, 1H), 2.21 (s, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 6H), 1.60 (bs, 2H), 1.49 - 1.43 (m, 3H). (UPLC-MS) tR 0.56 min; ESI-MS 489 [M+H]+ .
Producto intermedio 68a: ácido 6-amino-5-(((1 r,3r)-3-hidroxiadamantan-1 -il)carbamoil)piridin-3-il)borónico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido (6-amino-5-(((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)borónico (Producto intermedio 3a) excepto que se usó 2-amino-5- bromo-N-((1r, 3r) -3-hidroxiadamantan-1-il) nicotinamida (Producto intermedio 68b) en lugar de 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c). (UPLC-MS) tR 0,47 min; ESI-MS 332 [M+H]+ .
Producto intermedio 68b: 2-amino-5-bromo-N-((1 r,3r)-3-hidroxiadamantan-1 -il)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c) excepto que se usó 3-amino-1-adamantanol en lugar de frans-4-aminociclohexanol. (u PlC-MS) tR 0,82 min; ESI-MS 366/368 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 69: 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(morfolin-4-carbonil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000064_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó ácido 4-(morfolin-4-carbonil)fenilborónico en lugar de 1 -(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 8.47 (d, 1 H), 8.42 (s, 1H), 8.30 (d, 1 H), 7.78 (d, 2H), 7.51 (d, 2H), 7.49 (s, 2H), 3.85 - 3.70 (m, 1 H), 3.70 -3.50 (m, 8H), 1.90 -1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 1H), 1.35 - 1.29 (m, 4H), 1.28 - 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.51 min; APCI-MS 409 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 70: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(oxetan-3-ilmetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000064_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de oxetan-3-ilmetilo (Producto intermedio 70a) en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a) y la mezcla de la reacción se agitó a 60°C durante 3 h. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.58 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.66 (dt, 2H), 4.58 (d, 1 H), 4.28 (t, 2H), 3.90 - 3.66 (m, 1H), 3.43 - 3.35 (m, 1H), 3.25 (dd, 1H), 3.19 - 3.09 (m, 1H), 2.97 (d, 1H), 2.79 (d, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 2H), 1.98 - 1.75 (m, 5H), 1.48 — 1.13 (m, 5H), 0.75 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.46 min; ESI-MS 463 [M+H]+.
Producto intermedio 70a: trifluorometanosulfonato de oxetan-3-ilmetilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a), excepto que se usó oxetan-3-ilmetanol en lugar de 1,3-difluoropropan-2-ol, y se obtuvo como un aceite bruto que se usó sin purificación adicional.
Ejemplo de referencia 71: 2-amino-N-((1 s,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga ao 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-terc-buti o (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 71a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]ácidohexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c), y se usó clorhidrato de cis-4-aminociclohexanol en lugar de frans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó por prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo. 1H Nm R (400 MHz, DMSO-d6) 68.49 - 8.34 (m, 2H), 8.17 (s, 1 H), 7.67 (s, 2H), 7.36 (s, 2H), 7.16 (s, 2H), 4.43 (d, 1H), 3.81 (s, 2H), 3.81-3.59 (m, 4H), 1.88 — 1.62 (m, 5H), 1.61 - 1.44 (m, 5H), 1.35 (s, 6H), 1.16 (s, 2H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 435 [M+H]+.
Producto intermedio 71a: ácido 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 71b) en lugar de 1 -(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1d). (UPLC-MS) tR 0,40 min; ESI-MS 338 [M+H]+.
Producto intermedio 71b: 2-amino-5-(4-((1S, 5R) -3-isopropil-3-azabiciclo [3.1.0] hexan-1-il) fenil) nicotinato de metilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 7b) excepto que se usó 2-yodopropano en lugar de 1 -bromo-2-metoxietano. (UPLC-MS) tR 0,65 min; ESI-MS 352 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 72: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000065_0001
A una solución de ácido (4-(bromometil)fenil)borónico (73,1 mg, 0,340 mmol) en acetonitrilo (2 ml) se le añadió (R)-2-metilpirrolidina (29,0 mg, 0,340 mmol) y K2CO3 (78 mg, 0,567 mmol) a TA en atmósfera de nitrógeno y la suspensión blanca resultante se agitó a 60° C durante 2 h. Se añadió agua (1 ml) a TA, seguido de la adición de 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 59b, 150 mg, 0,283 mmol) en acetonitrilo (2 ml). Luego se añadió PdCl2(dppf) (10,37 mg, 0,014 mmol) y la mezcla de la reacción se agitó a 90° C durante 60 min. Después de filtrar a través de una capa de celite y concentrar a presión reducida, el producto bruto se diluyó con una solución sat. ac. de NaHCO3 y EtOAc. Después de la separación de fases, la capa ac. se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 , se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto obtenido se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.75 (d, 1 H), 8.52 (t, 1 H), 8.41 (d, 1 H), 8.27 (d, 1 H), 7.85 (d, 2H), 7.66 (d, 2H), 7.38 (bs, 2H), 4.67 - 4.53 (m, 1 H), 4.25 (dd, 1 H), 3.85 (s, 1 H), 3.58 — 3.49 (m, 1 H), 3.37 - 3.18 (m, 3H), 2.29 (m, 1 H), 2.06 - 1.88 (m, 2H), 1.83 (s, 2H), 1.65 (dd, 2H), 1.51 (d, 4H), 1.39 (dd, 3H), 1.22 (d, 3H). (UPLC-MS) tR 0.47 min; ESI-MS 423 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 73: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2-fluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó sal de HCl de 5-(4-((1 S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida (Producto intermedio 40a) en lugar de 5-(4-((1S,5R)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 5a), y en se usó 1-bromo-2-fluoroetano en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina, y la mezcla de la reacción se agitó a 60° C durante 3 h. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.35 (d, 1 H), 7.98 (d, 1 H), 7.79 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 6.92 (s, 2H), 4.55 (td, 2H), 4.31 (s, 1H), 3.38 (d, 1H), 3.10 (d, 1 H), 2.84 (t, 1 H), 2.76 (t, 1H), 2.64 (d, 1H), 2.54 - 2.51 (m, 1H), 2.13 — 1.96 (m, 6H), 1.83 (dd, 1H), 1.73 -1.54 (m, 6H), 1.34 (t, 1H), 0.78 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.51 min; ESI-MS 465 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 74: 2-amino-5-(2,3-difluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000066_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 46) excepto que se usó (R)-2-(2,3-difluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 74a) en lugar de (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a). (UPLC-MS) tR 0,76 min; ESI-MS 459 [M+H]+.
Producto intermedio 74a: (R)-2-(2,3-difluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona
El compuesto del título se preparó de manera análoga a (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a) excepto que se usó 2,3-difluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 74b) en lugar de 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b). ESI-Ms 367 [M+H]+.
Producto intermedio 74b: 2,3-difluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b) excepto que se usó ácido (2,3-difluoro-4-formilfenil)borónico en lugar de ácido(3-fluoro-4-formilfenil)borónico. ESI-MS 595 [2M+H]+.
Ejemplo de referencia 75: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2-metoxietil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000066_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó 1-bromo-2-metoxietano en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (Producto intermedio 6a), y la mezcla de la reacción se agitó a 60° C durante 3 h. Después de la purificación, se obtuvo el compuesto del título como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 69.70 (bs, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 7.66 -7.60 (m, 2H), 7.30 (bs, 2H), 7.14 (s, 2H), 4.59 (d, 1H), 3.81 - 3.38 (m, 8H), 3.31 (s, 3H), 2.75 - 2.25 (m, 4H),1.86 (t, 4H), 1.50 - 1.21 (m, 6H). (UPLC-MS) tR 0.48 min; ESI-MS 451 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 76: 2-amino-5-(4-((1 S,5R)-3-(2,2-difluoropropil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000067_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 5) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de 2,2-difluoropropilo en lugar de 4-(3-bromopropil)morfolina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.39 (d, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.32 - 7.09 (m, 4H), 4.59 (bs, 1H), 3.74 (bs, 1H), 3.11 (d, 1H), 2.98 - 2.63 (m, 5H), 1.89 - 1.83 (m, 5H), 1.63 (t, 3H), 1.42 - 1.25 (m, 6H), 0.81 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.82 min; ESI-MS 471 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 77: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1 R,5S)-3-(2,2,2-trifluoroetil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000067_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(1,3-difluoropropan-2-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 6) excepto que se usó trifluorometanosulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo en lugar de trifluorometanosulfonato de 1,3-difluoropropan-2-ilo (producto intermedio 6a) y la mezcla de la reacción se agitó a 60°C durante 1 h. 1H NMR (400 MHz, DMSo-d6) 6 8.39 (d, 1 H), 8.32 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.24 (d, 2H), 7.16 (s, 2H), 4.58 (s, 1H), 3.73 (dt, 1H), 3.41 (m, 4H), 3.13 (d, 1 H), 2.93 (d, 1H), 2.84 (dd, 1H), 1.92 - 1.77 (m, 5H), 1.51 - 1.15 (m, 5H), 0.84 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 1.03 min; ESI-MS 475 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 78: 2-amino-N-((1 r,4S)-4-hidroxiciclohexil-4-d)-5-(4-((1 S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000067_0003
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1S,5R)-3-isopropil-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 71a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó clorhidrato de trans-4-aminociclohexan-1-d-1-ol (Producto intermedio 78a) en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó primero por prepHPLC (Método 1a) y luego mediante cromatografía ultrarrápida de fase inversa (Método 3a) para dar el compuesto del título como un sólido incoloro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.38 (d, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1 H), 7.58 (d, 2H), 7.22 (d, 2H), 7.12 (s, 2H), 4.56 (s, 1H), 3.73 (dt, 1H), 3.37 (s, 1H), 3.06 (d, 1H), 2.57 (d, 1H), 2.49 — 2.41 (m, 2H), 1.93 - 1.73 (m, 5H), 1.31 (m, 5H), 1.04 (dd, 6H), 0.74 (dd, 1H). (UPLC-MS) tR 0.50 min; ESI-MS 436 [M+H]+ .
Producto intermedio 78a: clorhidrato de trans-4-aminociclohexan-1-cM-ol
Los materiales de partida de aminociclohexilo deuterados pueden prepararse usando métodos similares a los conocidos en la técnica (por ejemplo, Quirante, J. et al, J. Org. Chem. 67(7):2323-2328 (2002)). Por ejemplo, el bencil(4-oxociclohexil)carbamato de tere-butilo puede reducirse con BDAN4 para proporcionar bencil((1r,4r)-4-hidroxi-ciclohexil)carbamato de tere-butilo deuterado que, después de la desprotección del tere-butiloxicarbonilo y los grupos protectores de bencilo, puede incorporarse mediante los métodos de síntesis descritos en la presente.
Ejemplo de referencia 79: sal de TFA de 2-amino-N-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-(4-metilpiperazina-1-carbonil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000068_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó 2-amino-5-bromo-N-((1s,4s)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 79a) en lugar de 2-amino-5-bromo-N-ciclohexilnicotinamida (Producto intermedio 43a) y se usó (4-metilpiperazin-1-il)(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)metanona en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. La reacción se llevó a cabo en un reactor de microondas (tiempo de irradiación de 15 min a 80° C). El compuesto del título se obtuvo como una sal de TFA. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 610.01 (s, 2H), 8.56 (d, 1H), 8.51 (d, 1 H), 8.43 (d, 1 H), 7.85 (d, 2H), 7.57 (d, 2H), 3.86 - 3.55 (m, 3H), 3.55 - 3.20 (m, 4H), 3.40 - 3.15 (m, 3H), 2.85 (s, 3H), 1.85 - 1.70 (m, 2H), 1.70 - 1.65 (m, 2H), 1.65 - 1.40 (m, 4H). (HPLC-MS) tR 0.35 min; ESI-MS 438 [M+H]+.
Producto intermedio 79a: 2-amino-5-bromo-N-((1 s,4s)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c) excepto que se usó c/s-4-aminociclohexanol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. (u PlC-MS) tR 0,53 min; ESI-MS 314/316 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 80: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)nicotinamida
Figure imgf000068_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)-5-(4-((1R,5S)-3-(1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida (Ejemplo 1) excepto que se usó sal de THF de 5-(4-((1R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1il)nicotinamida (Producto intermedio 34a) en lugar de 5-(4-((1 R,5S)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)-2-amino-N-((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 1a), y se usó 4,4-difluorociclohexanona en lugar de 1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.32 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.55 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 6.88 (s, 2H), 4.28 (s, 1 H), 3.36 (s, 1 H), 3.07 (s, 1 H), 2.55 (s, 1 H), 2.45 (s, 1 H), 2.32 (d, 1 H), 2.30 - 1.95 (m, 8H), 1.77 (d, 5H), 1.70 - 1.32 (m, 8H), 1.27 (t, 1H), 0.75 (s, 1H). (UPLC-MS) tR 0.63 min; ESI-MS 537 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 81: sal de TFA de 2-amino-5-(2-cloro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000069_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 46) excepto que se usó (R)-2-(2-cloro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 81a) en lugar de (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a). UPLC-HRMS tR 3,45 min 457,24/459,24 [M+H]+.
Producto intermedio 81a: (R)-2-(2-cloro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocan-4,8-diona (Producto intermedio 46a) excepto que se usó 3-cloro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 81b) en lugar de 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b). ESI-MS 365/367 [M+H]+.
Producto intermedio 81b: 3-cloro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b) excepto que se usó ácido (2-cloro-4-formilfenil)borónico en lugar de ácido (3-fluoro-4-formilfenil)borónico. ESI-MS 313/315 [M+H2O+H]+.
Ejemplo de referencia 82: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000069_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 82a) en lugar de ácido 2-am\no-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c), y se usó trans 4-amino-1-metilciclohexanol en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título que se obtuvo como una sal de TFA. 1h NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.37 (s, 1H), 8.26 (d, 1 H), 8.09 (d,1 H), 7.57 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 7.08 (s, 2H), 4.33 (s, 1 H), 3.81 (bs, 1 H), 3.39 (d, 2H), 2.62 - 2.56 (m, 2H), 2.00 (bs, 2H), 1.88 - 1.76 (m, 8H), 1.67 - 1.53 (m, 4H), 1.50 - 1.43 (m, 4H), 1.30 (t, 1 H), 1.17 (s, 3H), 0.76 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.61 min; ESI-MS 525 [M+H]+ .
Producto intermedio 82a: ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotínico
El compuesto del título se preparó de manera análoga al ácido 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(tercbutoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 2c) excepto que se usó 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 82b) en lugar de 1-(4-(6-amino-5-(metoxicarbonil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1R,5S)-tercbutilo (Producto intermedio 1 d). (UPLC-MS) tR 0,46 min; ESI-MS 414 [M+H]+.
Producto intermedio 82b: 2-amino-5-(4-((1 R,5S)-3-(4,4-difluorociclohexil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinato de metilo
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-1-il)fenil)nicotinato de metilo (Producto intermedio 14b) excepto que se usó 4,4-difluorociclohexanona en lugar de dihidro-2H-piran-4 (3H)-ona. (UPLC-MS) tR 0,72 min; ESI-MS 428 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 83: 2-amino-N-(3-(2-hidroxipropan-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida
Figure imgf000070_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 1-(4-(6-amino-5-(((1r,4R)-4-hidroxiciclohexil)carbamoil)piridin-3-il)fenil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato de (1 R,5S)-terc-butilo (Producto intermedio 1b) excepto que se usó ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 14a) en lugar de ácido 2-amino-5-(4-((1R,5S)-3-(terc-butoxicarbonil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotínico (Producto intermedio 1c) y se usó clorhidrato de 2-(3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)propan-2-ol (Producto intermedio 83a) en lugar de trans-4-aminociclohexanol. El producto bruto se purificó mediante prepHPLC (Método 1a) para dar el compuesto del título. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.98 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.57 (d, 2H), 7.20 (d, 2H), 7.18 (s, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.85 - 3.79 (m, 2H), 3.38 (bs, 1H), 3.08 (bs, 1H), 2.55 - 2.25 (m, 5H), 1.90 (s, 6H), 1.89 - 1.71 (m, 3H), 1.39 - 1.22 (m, 3H), 1.06 (s, 6H), 0.75 (bs, 1H). (UPLC-MS) tR 0.59 min; ESI-MS 503 [M+H]+.
Producto intermedio 83a: clorhidrato de 2-(3-aminobiciclo[1.1.1]pentan-1-il)propan-2-ol
Se agitó (3-(2-hidroxipropan-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)carbamato de terc-butilo (Producto intermedio 83b, 298 mg, 1.235 mmol) en una solución etanólica saturada con HCl (3,8 ml) durante 29 h a TA. La mezcla de la reacción se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título como una sal de clorhidrato bruta que se usó sin purificación adicional. 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 68.51 (s, 3H), 1.78 (s, 6H), 1.03 (s, 6H).
Producto intermedio 83b: (3-(2-hidroxipropan-2-il)biciclo[1.1.1]pentan-1-il)carbamato de terc-butilo
A una solución de 3-((terc-butoxicarbonil)amino)biciclo[1.1.1]pentano-1-carbox\lato de metilo (679 mg, 2,81 mmol) en THF anhidro se le añadió gota a gota bromuro de metil magnesio 3M en THF (4,13 ml, 12,4 mmol) a -78° C bajo atmósfera de argón. Se dejó que la mezcla de la reacción alcanzara TA y se agitó durante 4 h, luego se diluyó lentamente con 2 ml de MeOH bajo control de temperatura. La mezcla se concentró a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2a) para dar el compuesto del título. (UPLC-MS) tR 0,22 min; ESI-MS 142 [M+H]+ que indica pérdida del grupo BOC en condiciones de ionización.
Ejemplo de referencia 84: 2-amino-N-ciclohexil-5-(3-(morfolin-4-carbonil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000071_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-N-ciclohexil-5-(4-(3-(piperidin-1-il)propoxi)fenil)nicotinamida (Ejemplo 43) excepto que se usó ácido 3-(morfolin-4-carbonil)fenilborónico en lugar de 1 -(3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)propil)piperidina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 68.45 (s, 1H), 8.38 (d, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 7.78 (d, 1 H), 7.71 (s, 1H), 7.52 (t, 1 H), 7.34 (d, 1 H), 7.20 (s, 2H), 3.85 - 3.70 (m, 1 H), 3.70 -3.50 (m, 8H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 1H), 1.35 - 1.29 (m, 4H), 1.28 - 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.52 min; APCI-MS 409 [M+H]+.
Ejemplo de referencia 85: 2-amino-5-(3-cloro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000071_0002
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 46) excepto que se usó (R)-2-(3-cloro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 85a) en lugar de (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a). (UPLC-MS) tR 0,79 min; ESI-MS 457/459 [M+H]+.
Producto intermedio 85a: (R)-2-(3-cloro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocan-4,8-diona (Producto intermedio 46a) excepto que se usó 2-cloro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 85b) en lugar de 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b). ESI-MS 365/367 [M+H]+.
Producto intermedio 85b: 2-cloro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b) excepto que se usó ácido (3-cloro-4-formilfenil)borónico en lugar de ácido (3-fluoro-4-formilfenil)borónico. ESI-MS 591 [2M+H]+.
Ejemplo de referencia 86: 5-(4-((R)-1 -(2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptan-6-il)etil)fenil)-2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-1 -metilciclohexil)nicotinamida
Figure imgf000071_0003
A una solución de 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxi-1-metilciclohexil)nicotinamida )Producto intermedio 86a, 100 mg, 0,152 mmol en dioxano (3 ml) se le añadió (R)-6-(1-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 86b, 100 mg, 0,152 mmol), PdCl2(dppf) (5,57 mg, 7,62 |jmol) y NaOH acuoso 2N (0,152 ml, 0,305 mmol) en atmósfera de nitrógeno a TA. La mezcla de la reacción se agitó a 80° C durante 2 h, luego se diluyó con EtOAc y agua. Después de dos extracciones con EtOAc, las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución sat. ac. de NaHCO3 y salmuera, respectivamente. Después de secarlo sobre MgSO4 , filtrarlo y concentrarlo a presión reducida, el producto bruto se purificó mediante cromatografía en fase normal (Método 2b) para dar el compuesto del título. 1H n Mr (400 MHz, DMSO-d6) ó 8.37 (s, 1H), 8.05 (bs, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 7.62 (bs, 2H), 7.38 (bs, 2H), 6.92 (bs, 2H), 4.62 (s, 4H), 4.47 (s, 1H), 3.48 — 3.42 (m, 1H), 3.40 -3.35 (m, 4H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 3.15 (bs, 1H), 1.60 (m, 2H), 1.65 - 1.16 (m, 13H). (UPLC-MS) tR 0.52 min; ESI-MS 451 [M+H]+ .
Producto intermedio 86a: 2-amino-5-bromo-N-((1 r,4r)-4-hidroxi-1 -metilciclohexil)nicotinamida.
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-bromo-N-((1r,4r)-4-hidroxiciclohexil)nicotinamida (Producto intermedio 3c) excepto que se usó f r a n s -4-amino-4-metilciclohexanol en lugar de f r a n s -4-aminociclohexanol. (UPLC-MS) t r 0,70 min; Es I-MS 328/330 [M+H]+ .
Producto______ intermedio______86b: (R)-6-(1 -(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 1-(3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8a) excepto que se usó (R)-6-(1-(4-bromofenil)etil)-2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano (Producto intermedio 3b) en lugar de 1-(4-bromo-3-fluorofenil)-4-isopropilpiperazina (Producto intermedio 8b). (UPLC-MS) tR 0,70 min; ESI-MS 330 [M+H]+ .
Ejemplo de referencia 87: 2-amino-N-((1 r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-5-(2-metil-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)nicotinamida
Figure imgf000072_0001
El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-amino-5-(3-fluoro-4-(((R)-2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-N-((1r,4R)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)nicotinamida (Ejemplo 46) excepto que se usó (R)-6-metil-2-(2-metil-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 87a) en lugar de (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona (Producto intermedio 46a). (UPLC-MS) tR 0,65 min; ESI-MS 437 [M+H]+.
Producto intermedio 87a: (R)-6-metil-2-(2-metil-4-((2-metilpirrolidin-1 -il)metil)fenil)-1,3,6,2-dioxazaborocano-4,8-diona El compuesto del título se preparó de manera análoga a la (R)-2-(3-fluoro-4-((2-metilpirrolidin-1-il)metil)fenil)-6-metil-1,3,6,2-dioxazaborocan-4,8-diona (Producto intermedio 46a) excepto que se usó 3-metil-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 87b) en lugar de 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b). ESI-MS 345 [M+H]+ .
Producto intermedio 87b: 3-metil-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído
El compuesto del título se preparó de manera análoga al 2-fluoro-4-(6-metil-4,8-dioxo-1,3,6,2-dioxazaborocan-2-il)benzaldehído (Producto intermedio 46b) excepto que se usó ácido (4-formil-2-metilfenil)borónico en lugar de ácido (3-fluoro-4-formilfenil)borónico. ESI-MS 568 [2M+H2O+H]+ .
Ejemplo de referencia 88: 2-amino-N-ciclohexil-5-(3-(4-(2-hidroxietil)piperazina-1 -carbonil)fenil)nicotinamida El compuesto del título se preparó de manera análoga a la 2-am¡no-N-c¡clohex¡l-5-(4-(3-(p¡per¡d¡n-1-¡l)propox¡)fen¡l)n¡cotinam¡da (Ejemplo 43) excepto que se usó ác¡do 3-(4-(2)-h¡drox¡et¡l)p¡peraz¡n-1-carbon¡l)fen¡lborón¡co en lugar de 1-(3-(4-(4,4,5,5-tetramet¡l-1,3,2-d¡oxaborolan-2-¡l)fenox¡)prop¡l)p¡per¡d¡na. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 58.44 (s, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.51 (t, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.19 (s, 2H), 4.44 (t, 1H), 3.85 - 3.70 (m, 1H), 3.70 -3.58 (m, 2H), 3.58 - 3.48 (m, 2H), 3.48 - 3.35 (m, 2H), 2.50 - 2.32 (m, 6H), 1.90 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 1.70 (m, 2H), 1.70 - 1.55 (m, 1H), 1.35 - 1.29 (m, 4H), 1.28 - 1.05 (m, 1H). (HPLC-MS) tR 1.31 m¡n; APCI-MS 452 [M+H]+.
Ejemplo 89 Sales, formas amorfas y pol¡morfos y pdeudopol¡morfos cr¡stal¡nos del compuesto del ejemplo 34:
A) Modificación Ha de forma libre: Se d¡solv¡eron 800 g de la forma l¡bre de 2-am¡no-N-(4-h¡drox¡b¡c¡clo[2.2.2]octan-1 -¡l)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-de3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexan-1 -¡l)fen¡l)n¡cot¡nam¡da en 3 l¡tros de acetona. La soluc¡ón resultante se ag¡tó a 50°C y se añad¡eron gradualmente 2 l¡tros de agua. La mezcla se ag¡tó a 50° C durante 30 m¡n, luego se añad¡eron gradualmente 4 l¡tros de agua. La mezcla se ag¡tó a 50° C durante 2 horas y se enfr¡ó a 22° C durante un período de 2 horas. El sól¡do se separó med¡ante f¡ltrac¡ón con succ¡ón, se lavó dos veces con 1 l¡tro de acetona: agua 1:2 y se secó a 45° C durante 24 horas s¡n vacío. Se obtuv¡eron aprox¡madamente 660 g de la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre de 2-am¡no-N-(4-h¡drox¡b¡c¡clo[2.2.2]octan-1-¡l)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexan-1-¡l)fen¡l)n¡cot¡nam¡da como un sól¡do blanco. La mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre es un monoh¡drato.
La F¡g. 3 muestra el d¡agrama de XRPD para la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre.
En la s¡gu¡ente Tabla A se proporc¡onan en detalle los p¡cos correspondentes y sus valores 2Theta ("Ángulo"), junto con sus ¡ntens¡dades relat¡vas (todos los valores 2Theta son /- 0,2):
Tabla A:
Figure imgf000073_0001
La F¡g. 4muestra un d¡agrama de calor¡metría d¡ferenc¡al de barr¡do (DSC) de bandeja ab¡erta de la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre de. El pr¡mer p¡co endotérm¡co en el d¡agrama DSC corresponde a la desh¡dratac¡ón de la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre. El segundo p¡co endotérm¡co corresponde a la fus¡ón de la forma anh¡dra resultante de la desh¡dratac¡ón.
La F¡g. 5 muestra un D¡agrama de anál¡s¡s termograv¡métr¡co (TGA) de la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre. El resultado de TGA muestra que la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre cont¡ene aprox¡madamente un 3,5% de agua en peso, lo que corresponde a aprox¡madamente 1 molécula de agua.
La F¡g. 6 es el d¡agrama de FT-IR de la Mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre. Los p¡cos encontrados son:
Número de onda (en cm-1): 3481 (w), 3328 (m), 2931 (m), 2886 (w), 2863 (w), 2787 (w), 1632 (s), 1617 (m), 1584 (w), 1524 (s), 1459 (s), 1242 (m), 1090 (m), 885 (m), 769 (m). (s = fuerte, m = med¡o, w = déb¡l)
B) Modificación A de la Forma libre: Se añad¡eron 0,5 g de la mod¡f¡cac¡ón Ha de la forma l¡bre de 2-am¡no-N-(4-h¡drox¡b¡c¡clo[2.2.2]octan-1-¡l)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrah¡dro-2H-p¡ran-4-¡l)-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexan-1-¡l)fen¡l)n¡cot¡nam¡da a 3,5 ml de acetona. La mezcla se ag¡tó a 40° C durante 1 hora y se enfr¡ó a 22° C. El sól¡do se f¡ltró y se secó a 40° C durante 12 horas. Se obtuv¡eron aprox¡madamente 0,4 g de la Mod¡f¡cac¡ón A de la forma l¡bre como un sól¡do blanco.
La F¡g. 7 muestra el d¡agrama de XRPD de la Mod¡f¡cac¡ón A de la forma l¡bre.
La s¡gu¡ente Tabla B def¡ne los p¡cos correspondentes y sus valores 2Theta ("Ángulo") en detalle, junto con sus intensidades relativas (todos los valores 2Theta son /- 0,2):
Tabl a B:
Figure imgf000074_0001
La Fig. 8 muestra un diagrama de calorimetría diferencial de barrido (DSC) de bandeja abierta de la Modificación A de la forma libre.
La Fig. 9 muestra un diagrama de análisis termogavimétrico (TGA) de la modificación A de la forma libre. El resultado del TGA sugiere que la modificación A de la forma libre es un anhidrato.
La Fig. 10 es el diagrama FT-IR de la Modificación A de la forma libre. Los picos encontrados son:
Número de onda (en cm-1): 3480 (w), 3436 (w), 3401 (w), 3301 (m), 2944 (w), 2864 (w), 2805 (w), 1644 (s), 1615 (m), 1583 (w), 1520 (segundos), 1459 (m), 1247 (m), 1098 (m), 883 (m), 801 (m). (s = fuerte, m = medio, w = débil) C) Anhidrato de la Forma libre: Se expusieron 100 mg de la modificación Ha de la forma libre de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida a una atmósfera de N2 a 25° C durante 6 horas. El sólido resultante se caracterizó por XRPD bajo protección de N2. El sólido es el anhidrato de la forma libre de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-pirano-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida.
La Figura 18 muestra el diagama XRPD de esta forma de anhidrato.
D) Trihidrato de la forma libre: Se xpusieron 100 mg de la modificación Ha de la forma libre de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida a una humedad relativa del 80% a 25°C durante la noche. El sólido se caracterizó por XRPD bajo 80% de humedad relativa a 25° C. El sólido es el trihidrato de la forma libre de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-pirano-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida.
La Figura 19 muestra el diagrama XRPD de la forma de trihidrato.
E) Modificación Ha de la sal de fumarato: A 3,03 g de la forma libre de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida se añadieron 30 ml de acetona: agua (80:20, v/v). La mezcla se agitó a 50° C durante 0,5 horas y se obtuvo una solución transparente. A la solución se le añadió lentamente una solución de 708,4 mg de ácido fumárico en 15 ml de acetona: agua (80:20, v/v). La suspensión resultante se enfrió gradualmente a 25° C y se mantuvo en agitación durante 12 horas. El sólido se separó mediante filtración con succión, se lavó con 10 ml de acetona una vez y se expuso a un entorno ambiental (aproximadamente 25°C, 50% de HR) durante la noche. Se obtuvieron 3,3 g de la Modificación Ha de la sal de fumarato de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida como un sólido blanco. La modificación Ha de la sal de fumarato es un dihidrato.
La Fig. 11 muestra el diagrama de XRPD de la modificación Ha de la sal de fumarato.
La siguiente Tabla C define los picos correspondientes y sus valores 2Theta ("Ángulo") en detalle, junto con sus intensidades relativas (todos los valores 2Theta son /- 0,2):
Tabla C:
Figure imgf000075_0001
La Fig. 12 muestra el diagrama de DSC de la Modificación Ha de la sal fumarato.. El amplio pico endotérmico antes de 150° C corresponde a la deshidratación de la Modfication Ha de la sal fumarato.
La Fig. 13 muestra un diagrama de análisis termogravimétrico (TGA) para la Modificación Ha de la sal fumarato. Los resultados del TGA muestran que la Modificación Ha de la sal de fumarato contiene aproximadamente un 5,9% de agua en peso, lo que corresponde a aproximadamente 2 moléculas de agua.
La Fig. 14 es el diagrama de FT-IR de la modificación Ha de la sal fumarato. Los picos encontrados son: Número de onda (en cm-1): 3241 (m), 2951 (w), 2867 (w), 1669 (m), 1538 (m), 1456 (w), 1355 (m), 1249 (m), 1087 (w), 979 (w), 885 (w), 797 (w). (s = fuerte, m = medio, w = débil)
La Fig. 15 muestra el diagrama de DVS de la modificación Ha de la sal fumarato a 25° C. De esto puede deducirse que la modificación Ha de la sal de fumarato es físicamente estable por lo menos del 0% al 90% de HR a 25° C. La Fig. 16 muestra el diagrama de DVS de la modificación Ha de la sal fumarato a 40° C. De esto puede deducirse que la modificación Ha de la sal de fumarato es físicamente estable por lo menos del 10% al 90% de HR a 40° C. Cabe señalar que la modificación Ha de la sal de fumarato es estable en un intervalo de humedad más amplio que los polimorfos de la forma libre (datos no mostrados).
F) Forma amorfa de la sal de fumarato (variante 1): Se añadieron 500 mg de la Modificación Ha de la sal fumarato de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabi-ciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida en 10 ml de etanol a 25° C para formar una solución transparente. Luego se añadieron 3 ml de heptano a la solución. Se precipitó un sólido blanco. El sólido se separó mediante filtración con succión y se secó a 40° C al vacío durante la noche. Se obtuvieron 380 mg de una forma amorfa de la sal fumarato de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-Seobtuvopiran-4-il)-3-azabi-ciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida como un sólido blanco. La forma amorfa muestra una transición vitrea a aproximadamente 143° C cuando se analiza mediante DSC modulado a una velocidad de calentamiento de 2 K/min, temperatura de amplitud de 1 K, período de 60 segundos.
G) Forma amorfa de la sal de fumarato (variante 2): Se calentó Modificación Ha de la sal de fumarato de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)-nicotinamida mediante DSC a 150°C a 10 K/min y después se enfrió a -20° C a 20 K/min. El material resultante fue una forma amorfa de la sal de fumarato de 2-amino-N-(4-hidroxibicic-lo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida que es un sólido blanco y muestra una transición vítrea a aproximadamente 78° C cuando se analiza por DSC a una velocidad de calentamiento de 10K/min.
H) Sal de fosfato: a 3,01 g de la forma libre de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1-il)fenil)nicotinamida se añadieron 30 ml de acetona: agua (75:25, v/v). La mezcla resultante se agitó a 50° C durante 0,5 horas y se obtuvo una solución transparente. A la solución se le añadió lentamente una solución de 695,2 mg en 10 ml de acetona: agua (95: 5, v/v). La suspensión resultante se enfrió gradualmente a 25° C y se mantuvo en agitación durante 24 horas. Se añadieron 1,5 ml de agua a la suspensión. La mezcla se mantuvo en agitación a 50° C durante 12 horas y se enfrió lentamente a 25° C. El sólido se separó mediante filtración con succión, se lavó con 10 ml de acetona: agua (90:10, v/v) una vez y se expuso a un entorno ambiental (aproximadamente 25°C, 50% de HR) durante la noche. Se obtuvieron 2,7 g de sal de fosfato de 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida como un sólido blanco.
La Fig. 17 muestra el diagrama de XRPD de la sal fosfato.
La siguiente Tabla D define los picos correspondientes y sus valores 2Theta ("Ángulo") en detalle, junto con sus intensidades relativas (todos los valores 2Theta son /- 0,2):
Tabla D:
Figure imgf000076_0002
I) La Modificación Ha de la sal de fumarato (F) anterior) muestra mejor solubilidad que la Modificación Ha de la i forma libre en al unos tam ones acuosos
Figure imgf000076_0001
FeSSIF
Figure imgf000077_0001
FaSSIF
Figure imgf000077_0002
Figure imgf000077_0004
SGF
Figure imgf000077_0003
J) La sal de lactato, sal de ácido tartárico y sal de ácido málico del compuesto A pueden obtenerse mediante procesos análogos a los proporcionados anteriormente.
K) Pueden obtener varios solvatos a partir de muchas de las sales y formas de sal del compuesto A mencionadas anteriormente (no se muestran los detalles).
Donde se mencionan en los ejemplos anteriores, los datos de XRPD, TGA, DSC, FT-IR y DVS se han obtenido usando los métodos siguientes:
a) Método TGA
Instrumento TA Discovery, TA Discovery, New Castle, DE, USA
Rango de temperatura de 30 a 300° C
Velocidad de escaneo 10° C/min
Flujo de nitrógeno 20 ml/min
Masa de muestra ~2-10 mg
b) Método DSC
Descubrimiento de TA del instrumento
Rango de temperatura de 30 a 250 o 300° C
Velocidad de escaneo 10° C/min
Flujo de nitrógeno 50 ml/min
Masa de muestra ~2 mg
c) Método de XRPD: Todos los diagramas de XRPD se obtuvieron en el modo de reflexión.
(i) Método 1 de XRPD (Fig. 3, 11, 17)
Instrumento Bruker D8 Advance (Bruker, Bruchsal, Alemania))
Detector LYNXEYE (modo 1D), ángulo abierto: 1.996°
Radiación CuKa (0,15406 nm)
Filtro de níquel monocromador
Potencia del generador de rayos X 40 kV, 40 mA
Tamaño de paso, resolución 0,041 grados
Rango de escaneo de 2° a 45° (valor 2 theta)
Tiempo de escaneo 36 min
Hendiduras primarias: tamaño de muestra fijo iluminado 5 mm, hendidura secundaria: 5 mm, soller axial: 2,5°
(ii) Método 2 de XRPD (Figura 7)
Instrumento Bruker D8 Advance
Detector LYNXEYE (modo 1D), ángulo abierto: 1,996°
Radiación CuKa (0,15406 nm)
Filtro de níquel monocromador
Potencia del generador de rayos X 40 kV, 40 mA
Tamaño de paso, resolución 0,041 grados
Rango de escaneo de 2° a 45° (valor 2 theta)
Tiempo de escaneo 330 segundos
Hendiduras primarias: tamaño de muestra fijo iluminado 5 mm, hendidura secundaria: 5 mm, soller axial: 2,5
Método 3 de XRPD (Figura 18, 19)
Instrumento Bruker D8 Advance XRPD con cámara Cryo-RH (Bruker, Bruchsal, Alemania) Detector VANTEC-1 (detector 1D)
Radiación CuKa (0,15406 nm)
Filtro de níquel monocromador
Potencia del generador de rayos X 40 kV, 40 mA
Tamaño de paso, resolución de 0,0165 grados
Rango de escaneo de 2° a 45° (valor 2 theta)
Tiempo de escaneo 17 min
Hendiduras hendidura divergente: V12, hendidura antidispersión: 10,0 mm, hendidura del detector: 17,43 mm, hendidura soller primaria: 2,5°, hendidura soller secundaria: 2,5°
d) DVS
Ventaja del instrumento (sistemas de medición de superficies, Londres, Reino Unido)
Masa de muestra ~10 mg
Temperatura 25° C
dm/dt 0,002%/min
e) FT-IR
Thermo Fisher Nicolet 6700 con reflectancia total atenuada (ATR), Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA Ensayos bioquímicos (ejemplos 90 y 91)
Para todos los ensayos bioquímicos, las proteínas recombinantes humanas se expresaron y purificaron a partir de células de insectos transfectadas con baculovirus. Los constructos comprendían el dominio GS y el dominio quinasa de ALK2 de tipo salvaje (aa172-499), mutante ALK2 FOP (aa172-499 R206H), ALK3 (aa198-525), ALK5 (aa162-503) y ALK6 (aa168-495).
Ejemplo 90: Inhibición enzimática in vitro usando un ensayo de autofosforilación bioquímica (ensayo de actividad de quinasa ADPGlo basado en luminiscencia) - "ensayo ADPGlo"
Se configuró un panel de selectividad de quinasa que mide la autofosforilación usando el ensayo de quinasa ADP-Glo™ (Promega, V9101) para ALK2 de tipo salvaje (aa172-499) y ALK3 (aa198-525).
Los ensayos se realizaron en placas de ensayo de microtitulación de bajo volumen de 384 pocillos en un volumen de reacción final de 6 ul. Se generaron curvas de respuesta a la dosis incubando 10 nM de cada quinasa en Hepes 50 mM pH 7,5, Tween 20 al 0,02%, BSA al 0,02%, Dt T 1 mM, Na3VO410 gm, p-glicerolfosfato 10 mM, MgCl2 1 mM, MnCl2 12 mM y 15 gm de ATP durante 60 min a 32° C en presencia o ausencia de compuesto diluido en DMSO. La cantidad de ADP generado es una medida de la actividad de la quinasa y se cuantifica usando el ensayo de quinasa ADP-Glo™ (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El ADP se convierte en a Tp añadiendo 3 ul de reactivo ADP-Glo™ e incubación a 32° C durante 60 min. Posteriormente, el ATP se convierte en una señal bioluminiscente mediante la adición de 6 ul de reactivos de ensayo de luciferasa (tampón de detección de quinasa sustrato de detección de quinasa (Promega)) y luego se incuba a 32° C durante 60 min. Para la medición de la luminiscencia se usó un lector de múltiples etiquetas PHERAstar™ en un intervalo de medición de tiempo de 0,1 segundos (módulo óptico para mediciones de luminiscencia en el intervalo de longitud de onda de 230 nm a 750 nm). La señal luminiscente se correlaciona positivamente con la actividad de quinasa.
Las actividades específicas se muestran en la tabla siguiente.
Figure imgf000079_0001
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Ejemplo 91: Inhibición enzimática in vitro usando un ensayo de fosforilación de péptidos bioquímicos -"Ensayo Caliper"
Se estableció un panel de selectividad de quinasa que mide la fosforilación del péptido del sustrato para ALK2 de tipo salvaje (aa172-499), mutante de ALK2 FOP (aa172-499 R206H), ALK1 (aa166-493), ALK5 (aa162-503) y ALK6 (aa168-495). La tecnología usada para el ensayo descrito se basa en la separación y cuantificación de sustrato y producto en un campo eléctrico. En el curso de la reacción de la quinasa, el sustrato peptídico es fosforilado por una quinasa. La transferencia de un residuo de fosfato también provoca la introducción de dos cargas negativas adicionales y, por tanto, un cambio en la carga neta del fosfopéptido en comparación con el péptido no fosforilado. Debido a esta diferencia de carga, los péptidos fosforilados y no fosforilados migran con diferentes velocidades en un campo eléctrico.
En el método aplicado, esta separación se realiza dentro de un chip que contiene un sistema capilar complejo para el análisis simultáneo de 12 muestras ("chip de 12 sorbedores", Caliper Technologies Corp., Mountain View, USA). Para permitir la detección y cuantificación de los péptidos en el sistema capilar, los péptidos llevan un marcador fluorescente (fluoresceína). Con este marcador pueden cuantificarse los péptidos por intensidad de fluorescencia a través del láser de los instrumentos y el sistema de detección (LC3000, Caliper Life Sciences).
Los ensayos se realizaron en placas de ensayo de microtitulación de bajo volumen de 384 pocillos en un volumen de reacción final de 9 ul. Las curvas de respuesta a la dosis se generaron incubando 10 nM de cada quinasa junto con 2 pm del péptido sustrato marcado con fluorescencia 5-Fluo-Ahx-KKYQAEEN-T-YDEYENKK-amid (solución madre 10 mM en dMsO) en Hepes 50 mM pH 7,5, Tween 20 al 0,02%, BSA al 0,02%, DTT 1 mM, 10 pm de Na3VO4, p-glicerolfosfato 10 mM, MgCl2 1 mM, MnCl2 12 mM (ALK1 y ALK6 7 mM) y ATP 15 pm durante 60 min a 30° C en presencia o ausencia del compuesto diluido en DMSO.
La reacción de quinasa se terminó añadiendo 15 ul de tampón STOP (HEPES 100 mM pH 7,5, DMSO al 5%, reactivo de recubrimiento Caliper al 0,1%, EDTA 10 mM y Brij35 al 0,015%.
Las placas con reacciones de quinasa terminadas se transfirieron a la estación de trabajo Caliper LC3000 (Caliper Technologies Corp., Mountain View, USA) para su lectura. La cantidad relativa de péptido fosforilado r, se calculó usando las alturas del pico del sustrato, s, y el pico del producto, p: r = p/(p s).
Las actividades es ecíficas se muestran en la tabla si uiente.
Figure imgf000081_0002
continuación
Figure imgf000082_0001
continuación
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Ejemplo 92: Ensayo del gen indicador de señalización de BMP
Se generó una línea celular de carcinoma hepatocelular de hígado humano (HuH7) transfectada de manera estable con un plásmido indicador que consiste del elemento de respuesta de BMP (BRE) del promotor Id 1 fusionado a un gen indicador de luciferasa mediante transducción lentiviral.
Las células se mantuvieron en DMEM (GIBCO # 41965 con alto contenido de glucosa más L-glutamina), FCS al 10% (Amimed N° 2-01F10-I), Pen/Strp al 1% (Amimed N° 4-01F00) y 5ug/ml de blastidicina (InvivoGen N° ant-bl-1) a 37° C, 5% de CO2. Los ensayos se realizaron en placas de microtitulación de poliestireno de fondo plano de 384 pocillos (cultivo celular tratado) con tapa estéril. Las células se privaron de alimento mediante intercambio de medio en medio libre de blasticidina y FCS 16 h antes del ensayo. Antes del ensayo, las células se separaron del matraz de reserva usando tripsina/EDTA y se contaron. Se preparó una suspensión celular en el mismo medio sin blasticidina y FCS. Se añadieron 2 x 104 células en un volumen total de 40 ul a cada pocillo de una placa que ya contenía diluciones en serie de cada compuesto en DMSO (concentración final de DMSO del 0,5%). Las células y el compuesto se incuban durante 1 hora a 37° C, 5% de CO2 antes de la estimulación con 5 ul/pocillo BMP6 recombinante (R&D Systems N° 507-BP/CF) a una concentración final de 100 ng/ml. Las placas de ensayo se incuban durante otras 5 horas a 37° C, 5% de CO2 antes de que se midiesen los niveles de luciferasa.
La cantidad de luciferasa expresada se cuantifica usando el sistema de ensayo de luciferasa Steady-Glo® (Promega N° E2520). Se añaden 5 ul del Reactivo Steady-Glo® a cada pocillo, las muestras se mezclaron agitando vigorosamente la placa antes de medir la luminiscencia en un lector de múltiples marcadores PHERAstar™ durante 1 segundo/pocillo (módulo óptico para mediciones de luminiscencia en el intervalo de longitud de onda de 230 nm a de 750 nm).
En la tabla siguiente se describen actividades adicionales específicas de los compuestos de la invención.
Figure imgf000084_0001
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Figure imgf000085_0001
Ejemplo 93: Eficacia in vivo en un modelo de ratón de FOP (fibrodisplasia osificante progresiva) pediátrico La expresión heterocigótica ubicua de la FOP que provoca el muíante Alk2 R206H del receptor de BMP tipo I en ratones da como resultado letalidad perinatal (Chakkalakal et al., 2012).
Para estudiar el papel posnatal de Alk2 (R206H) en el organismo juvenil como un modelo de ratón preclínico para FOP, se requiere un ratón mutante inducible Alk2 (R206H) (Prof. D. Goldhamer, UConn, ASBMR abstract, 2013) con un casete de parada floxed insertado en sentido ascendente del exón mutante, que hace que la expresión del alelo mutante Cre-recombinasa sea dependiente. Se cruzaron con ratones Rosa26-CreERt2, lo que permitió la expresión heterocigótica definida temporal y espacialmente de Alk2 (R206H).
Aquí, se usaron ratones heterocigotos ubicuos Alk2 (R206H) inducibles con la tecnología CreER-loxP inducible por tamoxifeno (tam). La inducción con éxito de la expresión de Alk2 (R206H) se consigue tras la administración de tamoxifeno a ratones Alk2 (R206H); Rosa26-CreERt2 macho y hembra de 1 semana de edad.
Los brotes de FOP se inducen a través de una lesión muscular profunda mediante una inyección intramuscular (im.) local de cardiotoxina (CTX) e inyección im concomitante. de un adenovirus para generar un brote de FOP local dependiente de Alk2 (R206H). CTX induce lesión en el músculo esquelético a través de la inhibición de la Ca/Mg-ATPasa en la membrana plasmática y la inducción de la liberación de calcio del retículo sarcoplásmico.
Al comienzo del experimento y posteriormente a diario, se midió el peso corporal de Alk2 (R206H); Rosa26-CreERt2 machos y hembras de 1 semana de edad. Todas las crías fueron tratadas una vez al día por vía subcutánea (sc.) con 20 mg/kg de tamoxifeno (base libre de tamoxifeno (Sigma T5648), disuelto en etanol absoluto al 10%, aceite de girasol al 90% (Sigma S5007) a 8 mg/ml) a partir de 1 semana de edad durante 10 días.
En el tercer día de la inyección de tamoxifeno, todas las crías fueron sometidas a lesión muscular local mediante una única inyección intramuscular de 100 ul de adenovirus cardiotoxina (CTX) en el músculo gastrocnemio de la pata trasera derecha, teniendo cuidado de no inyectar en ningún vaso sanguíneo y de no inyectar tocar los huesos con la aguja. Para ello, se mezclaron 90 ul de adenovirus (Ad-GFP-2A-iCre, N° de cat.
1772, Vector Biolabs; título: 1 x 1010 PFU (unidades formadoras de placa)/ml) con 10 gl de una solución madre de cardiotoxina de 100 gm (preparada a partir de Cardiotoxina, N° de cat. L8102, Latoxan o Cardiotoxina, N° de cat. C9759, Sigma, usando solución salina estéril). Los animales se anestesiaron mediante inhalación de isoflurano a dosis bajas, se afeitó la pata trasera derecha y se desinfectó la piel con betaseptic antes de la inyección intramuscular, que se realizó lenta y cuidadosamente con una jeringuilla de insulina.
El tratamiento oral b.i.d. terapéutico de ratones heterocigotos Alk2 (R206H) se inició 3 días después de la lesión muscular con 2, 5, 10 y 25 mg/kg de compuesto A (compuesto del ejemplo 34 = 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1 -il)-5-(4-((1 R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo-lo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida) o el vehículo correspondiente durante 6 semanas. Se evaluó la osificación heterotópica cada dos semanas mediante radiografía de cuerpo entero y de las patas traseras (dispositivo Faxitron) e imagenología de micro tomografía computarizada (gCT) in vivo comenzando 2 semanas después de la aplicación de Ad/CTX en todos los ratones.
En la necropsia, se recogieron las patas traseras derechas para imagenología de micro-TC ex vivo para determinar la extensión total de la HO. Toda la pata trasera derecha con el músculo adherido se diseccionó lo más rápido posible y se transfirió a etanol al 70% a 4° C. Después de 24 h, las muestras se transfirieron a etanol fresco al 70% para imagenología de gCT de alta resolución usando el dispositivo gCT40 de Scanco Medical (tamaño de voxel: 16 gm, tiempo de integración: 250 ms, resolución media, 55 E (kVp), 145 gA, modo: rotación continua de haz cónico, umbral 275, Filtro Gauss: Sigma 0.7, Soporte 1). Se determinó el volumen óseo total (mm3) del hueso ectópico en la pata trasera. Los resultados se muestran en la Fig. 1. La figura muestra que el compuesto A (compuesto del ejemplo 34) suprime el volumen del hueso de la pata trasera derecha ex vivo.
Para investigar el efecto del compuesto A (compuesto del ejemplo 34) sobre la progresión de la osificación heterotópica después del inicio del proceso, se inyectaron de manera similar a ratones heterocigotos Alk2 (R206H) 100 ul de adenovirus cardiotoxina (CTX), pero se les permitió desarrollar hueso heterotópico durante 2,5 semanas. Tras la confirmación de la formación de HO después de 2 semanas, las crías se asignaron aleatoriamente en función de la presencia de HO, los antecedentes genéticos y el sexo. El tratamiento se inició 2,5 semanas después de la lesión con vehículo o 10 mg/kg b.i.d. de compuesto A y se continuó durante 6 semanas. Se evaluó la osificación heterotópica cada dos semanas mediante radiografía de cuerpo entero y de las patas traseras (dispositivo Faxitron) e imagenología de micro tomografía computarizada (gCT) in vivo comenzando 2 semanas después de la aplicación de Ad/CTX en todos los ratones.
En la necropsia, se recogieron las patas traseras derechas para imagenología de micro-TC ex vivo para determinar la extensión total de HO. Toda la pata trasera derecha con el músculo adherido se diseccionó lo más rápido posible y se transfirió a etanol al 70% a 4° C. Después de 24 h, las muestras se transfirieron a etanol fresco al 70% para imagenología de gCT de alta resolución usando el dispositivo gCT40 de Scanco Medical (tamaño de voxel: 16 gm, tiempo de integración: 250 ms, resolución media, 55 E (kVp), 145 gA, modo: rotación continua de haz cónico, umbral 275, Filtro Gauss: Sigma 0.7, Soporte 1). Se determinó el volumen óseo total (mm3) del hueso ectópico en la pata trasera. Los resultados se muestran en la Fig. 2. Los resultados muestran que el compuesto A (compuesto del ejemplo 34) previene la progresión del volumen óseo de la pata trasera derecha ex vivo.
Los resultados mostrados en las Figuras 1 y 2 muestran que un compuesto de la invención (compuesto A) suprime la osificación heterotópica cuando se dosifica temprano después de la lesión muscular y previene la progresión adicional de la osificación heterotópica en crías de ratón ALK2 (R206H), cuando se dosifica después de que ya haya comenzado la osificación heterotópica.
Ejemplo 94: Osificación heterotópica inducida por tenotomía del punto medio de Aquiles en ratas
Para probar si los compuestos de la invención son capaces de prevenir la osificación heterotópica (HO) del tejido blando inducida por trauma, puede usarse la eficacia terapéutica en un modelo de rata de tenotomía unilateral del punto medio de Aquiles (Rooney et al., Matrix 12: 274- 281, 1992). Con este fin, se secciona completamente el tendón de Aquiles izquierdo de ratas Wistar hembra de 8 semanas de edad (peso corporal entre 190-265 g) usando un bisturí estéril (número de cuchilla 11) bajo narcosis por inhalación de isoflurano con tratamiento analgésico concomitante aplicando 0,03 mg/kg de buprenorfina durante 48 horas cada 10-12 h por vía subcutánea. Se administra un tratamiento oral preventivo con un compuesto de la invención (10 mg/kg q.d.) o vehículo (carboximetilcelulosa sódica: agua: Tween 80, 0,5:99:0,5) durante 10 semanas a partir del día de la cirugía (n = 11­ 12 ratas por grupo). Las ratas se alojan individualmente durante 3-4 días después de la cirugía y posteriormente se alojan en grupos de dos animales por jaula a 25° C con un ciclo de luz-oscuridad de 12:12 h y se alimentaron con una dieta estándar para roedores que contenía un 18,2% de proteína y un 3,0% de grasa con un contenido energético de 15,8 MJ/kg (3890, Provimi Kliba SA) con alimento y agua proporcionado a voluntad. La eficacia del tratamiento se evalúa longitudinalmente tomando radiografías de la pierna distal operada (sistema Faxitron LX-60) a las 4 y 10 semanas posteriores a la tenotomía. El volumen óseo heterotópico se cuantifica in vivo mediante micro tomografía computarizada (micro-CT) bajo narcosis por inhalación de isoflurano (instrumento vivaCT40, Scanco Medical AG; resolución de 17,5 pm) a las 6 y 9 semanas después de la cirugía.

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-(3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1R,5S)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. Un compuesto que es 2-amino-N-(4-hidroxibiciclo[2.2.2]octan-1-il)-5-(4-((1S,5R)-3-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-3-azabiciclo[3.1.0]hexan-1 -il)fenil)nicotinamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.
5. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.
6.. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.
7. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad que puede tratarse mediante la inhibición de la actividad del receptor de ALK-2 en un sujeto con necesidad de ello.
8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la osificación heterotópica en un sujeto con necesidad de ello.
9. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la fibrodisplasia osificante progresiva en un sujeto con necesidad de ello.
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