ES2738406T3 - Derivados de tieno[2,3-c]pirrol-4-ona como inhibidores de ERK - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula:**Fórmula** en la que: R1 es**Fórmula** R2 y R3 son metilo o R2 y R3 pueden tomarse juntas para formar ciclopropilo; R4 es hidrógeno, metilo, cloro, flúor o trifluorometilo; y R5 es**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de tieno[2,3-c]pirrol-4-ona como inhibidores de ERK

La presente invención se refiere a compuestos de tieno[2,3-c]pirrol-4-ona, o a sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, que inhiben la actividad de la cinasa regulada por señales extracelulares (ERK) y pueden ser útiles para tratar el cáncer.

La vía ERK/MAPK es importante para la proliferación celular y, con frecuencia, se observa que se activa en muchos tumores. Los genes RAS, que están aguas arriba de ERK1/2, están mutados en varios tipos de cáncer, incluyendo cáncer colorrectal, melanoma, cáncer de pulmón no microcítico, así como tumores de mama y pancreáticos. La elevada actividad de RAS está acompañada por una elevada actividad de ERK en muchos tumores humanos. Los estudios también han demostrado que ERK es un componente crítico de la señalización de RAS. Estas observaciones apoyan el atractivo de la vía de señalización ERK1/2 para desarrollar terapias contra el cáncer en un amplio espectro de tumores humanos.

Los inhibidores de ERK son conocidos en la técnica; véase, por ejemplo, el documento WO2013130976. Adicionalmente, otros compuestos de aminopirimidina son conocidos en la técnica; véanse, por ejemplo, los documentos WO 2010/022121, US 2003/0064982 y WO 2007/053776. Sigue habiendo una necesidad de proporcionar inhibidores de ERK alternativos, más particularmente para el tratamiento del cáncer. En consecuencia, la presente invención proporciona inhibidores de ERK1/2 que pueden ser útiles para tratar el cáncer.

La presente invención proporciona un compuesto de la fórmula siguiente:

en la que:

R1 es

R2 y R3 son independientemente metilo o R2 y R3 pueden tomarse juntas para formar ciclopropilo;

R4 es hidrógeno, metilo, cloro, flúor o triflurometilo y

R5 es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también proporciona un compuesto de la fórmula siguiente:

en la que:

R1 es

R2 y R3 son independientemente metilo o R2 y R3 pueden tomarse juntas para formar ciclopropilo; R4 es hidrógeno, metilo, cloro, flúor o trifluorometilo y

R5 es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también proporciona una realización para un compuesto de fórmula I en la que R2 y R3 son metilo.

La presente invención también proporciona otra realización para un compuesto de fórmula I en la que R4 es hidrógeno. La presente invención también proporciona otra realización para un compuesto de fórmula I en la que R4 es hidrógeno. La presente invención también proporciona otra realización más para un compuesto de fórmula I en la que R1 es

La presente invención también proporciona aún una realización más para un compuesto de fórmula I en la que R5 es

Preferentemente, la presente invención proporciona un compuesto que es 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Como una realización particular, la presente invención proporciona el compuesto que es 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona.

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma y un vehículo, un diluyente o un excipiente farmacéuticamente aceptable. La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona y un vehículo, un diluyente o un excipiente farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5.6- dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en terapia. La presente invención proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5.6- dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en el tratamiento contra el cáncer. La presente invención proporciona una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento contra el cáncer, la composición farmacéutica que comprende 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

La presente invención también proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona para su uso en terapia. La presente invención proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona para su uso en el tratamiento contra el cáncer. La presente invención proporciona una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento contra el cáncer, la composición farmacéutica que comprende 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il]-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona.

La presente invención proporciona el uso de 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2 (morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento contra el cáncer. La presente invención también proporciona el uso de 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etM]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona en la fabricación de un medicamento para el tratamiento contra el cáncer.

La presente invención proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona en una forma cristalina. La presente invención también proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona en una forma cristalina caracterizada por un patrón de difracción de rayos X en polvo que tiene picos característicos, en 20 ± 0,2°, que ocurre a 19,3° junto con uno o más de los picos seleccionados entre el grupo que consiste en 15,5°, 17,1°, 18,0°, 20,2°, 21,5° y 22,1°.

Además, la presente invención proporciona realizaciones preferentes de los usos tal como se han descrito en el presente documento, en los que el cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en melanoma, cáncer colorrectal, cáncer pancreático y cáncer de pulmón de células no pequeñas. Los cánceres preferentes son cáncer colorrectal, cáncer pancreático y cáncer de pulmón de células no pequeñas.

La presente invención también proporciona 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en administración simultánea, separada o secuencial con uno o más agentes de quimioterapia en el tratamiento del cáncer. Los agentes de quimioterapia preferidos para dicha combinación son un compuesto inhibidor de pan-RAF, más particularmente 1-(3,3-dimetilbutil)-3-(2-fluoro-4-metil-5-(7-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-6-il)fenil)urea), un compuesto inhibidor de CDK4/6, más particularmente palbociclib, ribociclib o [5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-piridin-2-il]-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il)-pirimidin-2-il]-amina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma o un anticuerpo anti-VEGFR2, más particularmente ramucirumab. Otros agentes de quimioterapia preferidos para dicha combinación son un compuesto inhibidor de la cinasa del receptor del TGF-beta, más particularmente galunisertib (véase el documento WO 2004/048382), un inhibidor de la cinasa ALK-5, más particularmente EW-7197, un compuesto inhibidor de MEK, más particularmente cobimetinib o trametinib, o un compuesto inhibidor de Notch, más particularmente 4,4,4-trifluoro-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-hidroxietil)-6-oxo-7H-pirido[2,3-d][3]benzazepin-7-il]amino]-1-metil-2-oxo-etil]butanamida (véase el documento w O 2013/016081). Otros agentes de quimioterapia preferidos más para dicha combinación son un inhibidor de PD-L1 (ligando 1 de muerte programada) o un inhibidor de PD-1 (muerte programada 1).

La presente invención contiene preferentemente compuestos de fórmula I con los siguientes sustituyentes:

a) R1 es

b) R2 es metilo;

c) R3 es metilo;

d) R4 es hidrógeno o

e) R5 es

Más preferentemente, la presente invención contiene compuestos de fórmula I con las siguientes combinaciones de sustituyentes:

a) R2 y R3 son metilo;

b) R2 es metilo, R3 es metilo y R4 es hidrógeno;

c) R1 es

d) R2 es metilo, R3 es metilo, R4 es hidrógeno y R1 es

e) R2 es metilo, R3 es metilo, R4 es hidrógeno y R5 es

o

f) R2 es metilo, R3 es metilo, R4 es hidrógeno y R1 es

y R5 es

Como se usan anteriormente y a lo largo de la descripción de la invención, los siguientes términos, a menos que se indique otra cosa, deberá entenderse que tienen los significados siguientes:

Un "transportador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable" es un medio generalmente aceptado en la técnica del suministro de agentes biológicamente activos a mamíferos, por ejemplo, seres humanos.

"Sales farmacéuticamente aceptables" o "una sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a la sal o sales, orgánicas o inorgánicas, relativamente no tóxicas, del compuesto de la presente invención.

"Cantidad eficaz" significa la cantidad del compuesto o de la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la presente invención o composición farmacéutica que contiene un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de la presente invención que provocará la respuesta biológica o médica de o el efecto terapéutico deseado sobre un tejido, sistema, animal, mamífero o ser humano que es buscada por el investigador, veterinario, médico u otro facultativo.

Los términos "tratamiento", "tratar", "que trata" y similares, pretenden incluir la ralentización o la reversión de un trastorno. Estos términos también incluyen el alivio, la mejora, la atenuación, la eliminación o la reducción de uno o más de los síntomas de un trastorno o una afección, incluso si el trastorno o afección no se elimina en realidad e incluso si la progresión del trastorno o afección no se ralentiza o revierte.

El experto en la técnica entenderá que los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales. Los compuestos de la presente invención contienen heterociclos básicos y, en consecuencia, reaccionan con cualquiera de una variedad de ácidos orgánicos e inorgánicos para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables. Dichas sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables y el procedimiento común para su preparación se conocen bien en la técnica. Véase, por ejemplo, P. Stahl y col., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008); S. M. Berge y col., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, n.° 1, enero de 1977.

Los compuestos de la presente invención se formulan preferentemente como composiciones farmacéuticas administradas por una diversidad de vías. Preferentemente, tales composiciones son para administración oral. Dichas composiciones farmacéuticas y procedimientos para la preparación de las mismas se conocen bien en la técnica. Véase, por ejemplo, REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro y col., 21a ed., Mack Publishing Co., 2005).

Los compuestos de la presente invención generalmente son eficaces en un amplio intervalo de dosificación. Por ejemplo, las dosificaciones diarias están comprendidas en el intervalo diario de aproximadamente 1 a 2000 mg. Dichas dosis están comprendidas preferentemente en el intervalo diario de 50 a 1000 mg. Más preferentemente dichas dosis están en el intervalo diario de 125 a 400 mg. En algunos casos pueden ser más que adecuados niveles de dosificación por debajo del límite inferior de los intervalos anteriormente mencionados, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis aún mayores y, por lo tanto, los intervalos de dosificación anteriores no pretenden limitar el ámbito de la invención de ningún modo. Se entenderá que la cantidad del compuesto administrada realmente será determinada por un médico, según las circunstancias relevantes, incluyendo la afección que se va a tratar, la vía de administración escogida, el compuesto o compuestos reales administrados, la edad, peso y respuesta del paciente individual y la gravedad de los síntomas del paciente.

El experto en la técnica apreciará que ciertos compuestos de la presente invención contienen al menos un centro quiral. La presente invención contempla todos los enantiómeros o diastereómeros individuales, así como las mezclas de enantiómeros y diastereómeros de dichos compuestos incluyendo los racematos. Se prefiere que los compuestos de la presente invención que contienen al menos un centro quiral existan como enantiómeros o diastereómeros individuales. Los enantiómeros o diastereómeros individuales pueden prepararse comenzando con reactivos quirales o mediante técnicas sintéticas estereoselectivas o estereoespecíficas. Como alternativa, los enantiómeros o diastereómeros individuales pueden aislarse a partir de mezclas mediante técnicas habituales de cristalización o de cromatografía quiral.

La designación de "isómero 1" en un nombre de compuesto representa que el intermedio o compuesto correspondiente de la presente invención es el primero de dos enantiómeros de elución cuando una mezcla de un par de enantiómeros se separa por cromatografía quiral. La designación de "isómero 2" en un nombre de compuesto representa que el compuesto o intermedio correspondiente de la presente invención que es el segundo de dos enantiómeros de elución cuando la mezcla de un par de enantiómeros se separa por cromatografía quiral.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con procedimientos sintéticos bien conocidos y apreciados en la técnica. Las condiciones de reacción adecuadas para las etapas de estas reacciones son bien conocidas en la técnica y las sustituciones apropiadas de disolventes y correactivos están comprendidas en las capacidades de la técnica. Asimismo, los expertos en la técnica apreciarán que los productos intermedios sintéticos se pueden aislar y/o purificar mediante diversas técnicas bien conocidas según sea necesario o deseado y que frecuentemente, será posible utilizar diferentes productos intermedios directamente en etapas sintéticas posterior con poca o ninguna purificación. Además, el experto en la técnica apreciará que, en algunas circunstancias, el orden en que se añaden los restos no es crítico. El orden concreto de las etapas necesarias para producir los compuestos de la presente invención depende del compuesto particular que se está sintetizando, del compuesto de partida y de la labilidad relativa de los restos sustituidos, como apreciará bien el químico experto. Todos los sustituyentes, a menos que se indique otra cosa, son como se han definido anteriormente y todos los reactivos son bien conocidos y apreciados en la técnica.

Tal como se usa en el presente documento, los siguientes términos tienen los significados que se indican: "ACN" se refiere a acetonitrilo; "DCM" se refiere a diclorometano; "DMF" representa N,N-dimetilformamida; "DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; "DTT" se refiere a ditiotreitol; "EDTA" se refiere a ácido etilendiaminotetraacético; "EGTA" se refiere a ácido tetraacético de etilenglicol; "ELISA" se refiere a ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas; "EtOAc" se refiere a acetato de etilo; "EtOH" se refiere a etanol; "FBS" se refiere a suero bovino fetal; "HBSS" se refiere a solución salina equilibrada de Hank; "CI⁵⁰" se refiere a la concentración inhibidora máxima; "IVTI" se refiere a inhibición del blanco in vivo; "MS" se refiere a espectroscopía de masas; "MeOH" se refiere a metanol; "RMN" se refiere a resonancia magnética nuclear; "PBST" se refiere a solución salina tamponada con fosfato que contiene Tween-20; "THF" se refiere a tetrahidrofurano; "UVW" se refiere a longitud de onda ultravioleta y "XRD" se refiere a difracción de rayos X.

A menos que se especifique lo contrario, los compuestos ilustrados en el presente documento se denominan y se numeran usando tanto ACDLABS como Accelrys Draw 4.1.

Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse tal como se ilustra en los esquemas siguientes, en los que R¹, R², R³, R⁴ y R⁵ son como se han definido anteriormente.

Esquema 1 ^: Síntesis de compuestos de formula I

El esquema 1 ilustra la síntesis general de compuestos de fórmula I. El compuesto 1 se hace reaccionar con un compuesto 2 sustituido adecuadamente en condiciones bien conocidas de acoplamiento o de sustitución aromática para proporcionar un compuesto de fórmula I. Más específicamente, el compuesto 1 se hace reaccionar con el compuesto 2 a temperatura elevada en presencia de una base adecuada tal como hidruro sódico, cloruro de isopropilmagnesio, carbonato de cesio, carbonato potásico o ferc-butóxido. Opcionalmente, la introducción de un agente ligando adecuado tal como 4,5-bis(difenilfosfin)-9,9-dimetilxanteno o 2-(di-ferc-butilfosfin)-2’,4’,6’-triisopropil-3,6-dimetoxi-1,1’-bifenilo y un catalizador adecuado tal como acetato de paladio (II), tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) o cloro[2-(di-ferc-butilfosfin)-2’,4’,6’-triisopropil-1,1’-bifenil][2-(2-aminoetil)fenil)]paladio (II) en un disolvente apropiado tal como 1,4-dioxano o alcohol de ferc-butilo también puede proporcionar un compuesto de fórmula I.

PG es grupo protector

de nitrógeno X es metoxi o ciclopropilo

desproteccion

Formu a

R5es 3-metoxi-1 H-pirazon-4-ilo o 3

ciclopropil-1 H-pirazol-4-ilo

Esquema 2: Síntesis de compuestos de fórmula I cuando R5 es 3-metoxi-1H-pirazol-4-ilo o 3-ciclopropiM H-pirazol-4-ilo

El esquema 2 ilustra la síntesis de compuestos de fórmula I cuando R5 es 3-metoxi-1H-pirazol-4-ilo o 3-ciclopropil-1H-pirazol-4-ilo. El compuesto 1 se hace reaccionar con el compuesto 3, que es una pirazol amina sustituida adecuadamente con pirazol amina con un grupo protector de nitrógeno adecuado tal como ferc-butiloxicarbonilo, en condiciones de reacción de acoplamiento bien conocidas tal como se ha descrito anteriormente para proporcionar el compuesto 4. El compuesto 4 se hace reaccionar de forma adicional con un agente desprotector de nitrógeno tal como cloruro de hidrógeno o ácido trifluoroacético en un disolvente adecuado tal como 1,4-dioxano o MeOH para proporcionar un compuesto de fórmula I cuando R5 es 3-metoxi-1H-pirazol-4-ilo o 3-ciclopropil-1H-pirazol-4-ilo.

Esquema 3: Síntesis alternativa de compuestos de fórmula I

El esquema 3 ilustra una síntesis alternativa de los compuestos de fórmula I. El compuesto 5 se hace reaccionar con (2-bromoetoxi)-ferc-butildimetilsilano en presencia de una base adecuada tal como hidruro sódico en un disolvente adecuado tal como DMF para proporcionar el compuesto 6. Después se hace reaccionar el compuesto 6 con un compuesto 2 sustituido adecuadamente (R5-NH2) en condiciones de reacción de acoplamiento bien conocidas tal como se ha descrito anteriormente para proporcionar el compuesto 7. El compuesto 7 se hace reaccionar con un agente de desprotección adecuado tal como ácido acético en un disolvente adecuado tal como una mezcla de THF y agua para proporcionar el compuesto 8. El compuesto 8 se hace reaccionar además con cloruro de metanosulfonilo en un disolvente adecuado tal como DMF en presencia de una base adecuada tal como trietilamina para proporcionar el compuesto 9. El compuesto 9 se hace reaccionar con una amina adecuada en un disolvente adecuado tal como ACN para proporcionar un compuesto de fórmula I.

Esquema 4: Síntesis del compuesto I

El esquema 4 ilustra el procedimiento para la síntesis del compuesto 1. El compuesto 10 se hace reaccionar con un agente de bromación adecuado tal como N-bromosuccinimida en un disolvente adecuado tal como ACN para proporcionar el compuesto 11. El compuesto 11 se hace reaccionar con una base adecuada tal como hidruro sódico o hidróxido sódico y un agente de N-alquilación adecuado tal como 4-(2-cloroetil)morfolina para proporcionar el compuesto 12. El compuesto 12 se hace reaccionar con bis(pinacolato)diboro, una base adecuada tal como acetato potásico y un catalizador adecuado tal como cloruro de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)paladio (II) en un disolvente adecuado tal como 1,4-dioxano a temperatura elevada para proporcionar el compuesto 13. El compuesto 13 se hace reaccionar con un compuesto de pirimidina sustituido adecuadamente tal como 2,4-dicloro-5-metilpirimidina, una base adecuada tal como carbonato potásico, un catalizador apropiado tal como tetraquis(trifenilfosfina)paladio en un disolvente adecuado tal como una mezcla de 1,4-dioxano y agua a temperatura elevada para proporcionar el compuesto 1.

Esquema 5: Síntesis alternativa del compuesto 1

El esquema 5 ilustra un procedimiento alternativo para la síntesis del compuesto 1. El compuesto 11 se hace reaccionar con un agente protector de nitrógeno adecuado tal como di-ferc-butildicarbonato en un disolvente adecuado tal como ACN en presencia de una base adecuada tal como N,N-diisopropiletilamina para proporcionar el compuesto 14. El compuesto 14 se hace reaccionar con bis(pinacolato)diboro en condiciones de reacción de acoplamiento bien conocidas tal como se ha descrito anteriormente para proporcionar el compuesto 15. El compuesto 15 se hace reaccionar con un compuesto de pirimidina sustituido adecuadamente en condiciones de reacción de acoplamiento bien conocidas tal como se ha descrito anteriormente para proporcionar el compuesto 16. El compuesto 16 se desprotege con un agente de desprotección adecuado tal como ácido trifluoroacético o cloruro de hidrógeno en un disolvente adecuado tal como DCM o 1,4-dioxano para proporcionar el compuesto 17. El compuesto 17 se hace reaccionar un agente de alquilación adecuado tal como 4-(2-bromoetil)morfolina en un disolvente adecuado tal como N-metilpirrolidona en presencia de una base adecuada tal como hidruro sódico para proporcionar el compuesto 1.

Preparación 1

6,6-dimetiltieno[2,3-c]furan-4-ona

Enfriar una solución de ácido 3-tiofenocarboxílico (250 g, 1,95 mol) en THF (9750 ml) hasta -70 °C en un matraz de 3 bocas de 20 l. Añadir a esta solución n-butillitio (2,5 M en hexano, 1872 ml, 4,68 mol) lentamente mientras se mantiene la temperatura por debajo de -55 °C. Agitar la mezcla de reacción durante una hora a -70 °C. Añadir acetona (187 ml, 2,55 mol) lentamente a -70 °C. Dejar calentar la mezcla de reacción a 0 °C y agitar durante tres horas a 0 °C. Añadir a la reacción resultante HCl 4 M (1500 ml) a 0 °C y dejar que calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Agitar la mezcla resultante durante una noche. Filtrar la mezcla de reacción a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y lavar la almohadilla con tolueno (3 x 500 ml). Concentrar el filtrado a presión reducida. Disolver el residuo en bruto resultante en tolueno (3750 ml) y agua (250 ml) y añadir ácido p-tolueno sulfónico (100,1 g, 0,526 mol) a temperatura ambiente. Calentar a reflujo la mezcla de reacción durante 16 horas a 100 °C. Enfriar la reacción a temperatura ambiente y concentrar a presión reducida a 50 °C. Disolver el residuo resultante en agua y extraer con EtOAc (2 x 10 l). Lavar la capa orgánica con bicarbonato sódico acuoso saturado y agua. Secar la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida a 50 °C para proporcionar el compuesto del título 200 g (61 %) en forma ce un líquido viscoso de color pardo. EM (m/z): 169 (M+1).

Preparación 2

6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Cargar un autoclave de 5 l con una solución de 6,6-dimetiltieno[2,3-c]furan-4-ona (150 g, 0,891 mol) en hidróxido de amonio (1000 ml). En un entorno cerrado, calentar la mezcla de reacción cuidadosamente hasta una temperatura de 200 °C y agitar durante cuatro horas a 200 °C. Después de cuatro horas, enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y liberar el gas amoniaco. Extraer la mezcla de reacción con DCM (3 x 750 ml). Lavar la capa orgánica con agua (1 x 750 ml) y secar sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida a 50 °C para dar el compuesto del título 100 g (67 %). EM (m/z): 168 (M+1).

Preparación 3

2-bromotiofen-3-carboxilato de metilo

Tratar una solución de ácido 2-bromo-3-tiofenocarboxílico (10,1 g, 49 mmol) en MeOH (100 ml) con ácido sulfúrico (2,5 ml, 45 mmol). Calentar la reacción a reflujo durante una noche. Concentrar la mezcla a presión reducida para eliminar el disolvente orgánico y verter la mezcla resultante en agua enfriada con hielo. Extraer la solución fría con EtOAc. Lavar los extractos orgánicos combinados con agua seguida de una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida para dar el compuesto del título 10,77 g (100 %). RMN 1H (400,15 MHz, DMSO-da) 5 7,65 (d, J = 6 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 6 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H).

Preparación 4

2-cianotiofen-3-carboxilato de metilo

Calentar una mezcla de 2-bromotiofen-3-carboxilato de metilo (28 g, 128 mmol) y cianuro de cobre (15 g, 167 mmol) en N-metilpirrolidona (130 ml) a 120 °C durante una noche. Enfriar la reacción a temperatura ambiente y diluir con EtOAc. Lavar la solución orgánica con NaCl saturado, secar sobre sulfato de sodio anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc al 25 % en hexano para dar el compuesto del título 15,2 g (71 %). RMN 1H (400,15 MHz, DMSO-cfe) 5 8,10 (d, J = 5 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 5 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H).

Preparación 5

Espiro[5H-tieno[2,3-c]pirrol-6,1'-ciclopropan]-4-ona

Tratar una solución a -70 °C de 2-cianotiofen-3-carboxilato de metilo (13,7 g, 79 mmol) y tetra(isopropóxido) de titanio (24,8 g, 87,4 mmol) en éter dietílico (330 ml) con una solución de bromuro de etilmagnesio (3 M en éter dietílico, 58 ml, 175 mmol). Agitar la mezcla de reacción durante 60 minutos. Eliminar el baño de refrigeración y dejar que la mezcla se caliente lentamente hasta temperatura ambiente durante una hora. Añadir eterato de trifluoruro de boro (22,6 ml, 159 mmol) y agitar la mezcla durante una hora más. Inactivar la reacción con ácido clorhídrico 1 N (240 ml) y agitar durante una noche. Separar la capa orgánica y volver a extraer la capa acuosa con más éter. Combinar los extractos orgánicos y lavar con bicarbonato sódico acuoso saturado y NaCl saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo mediante HPLC en una columna C18 (Columna: 275 g; Fase móvil: A) ácido fórmico al 0,10 % en agua, B) ácido fórmico al 0,10 % en ACN; Gradiente: 5-35 % de B; Caudal: 80 ml/min) para dar el compuesto del título 1,02 g (35 %). RMN 1H (400,15 MHz, DMSO-d6) 5 8,43 (s a, 1H), 7,53 (d, J = 5 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 5 Hz, 1H), 1,51 (m, 2H), 1,38 (m, 2H).

Preparación 6

2-bromo-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Añadir ACN (10000 ml) a un matraz de 20 l que contiene 6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (835 g, 4,99 mol) y enfriar la solución a 10 °C. Añadir N-bromosuccinimida (444,4 g, 2,49 mol) en cuatro porciones iguales a la mezcla de reacción y agitar durante seis horas a 25 °C. Concentrar la mezcla de reacción a presión reducida y suspender el compuesto resultante en agua y extraer con EtOAc (3 x 4,1 l). Lavar los extractos orgánicos combinados con agua (3 x 4,1 l) y NaCl saturado (4,1 l), secar sobre sulfato sódico anhidro y filtrar. Almacenar la solución orgánica para combinación con lotes adicionales.

Usando el mismo procedimiento de antes, preparar dos lotes más partiendo con 650 g y 835 g de 6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona respectivamente. Combinar las soluciones orgánicas de las tres series y concentrar a presión reducida a 50 °C para producir 2-bromo-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona en forma de un material pegajoso de color pardo. Suspender el producto resultante en éter dietílico/hexano (2:1 v/v) y filtrar para producir el compuesto del título 1542 g (45 %). EM (m/z): 246/248 (M+1/M+3).

El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento de preparación 6.

Prep. Nombre del compuesto Estructura EM (m/z):

Preparación 8

Bromhidrato de 4-(2-bromoetil)morfolina

H -B r

Tratar una solución de dibromuro de trifenilfosfina (124 g, 293 mmol) en DCM (2,44 l) con una solución de 4­ morfolinetanol (32 g, 244 mmol) en DCM (60 ml) gota a gota durante una hora mientras se mantiene la temperatura de reacción por debajo de 25 °C. Agitar la mezcla durante una noche a temperatura ambiente. Conducir una reacción adicional como la anterior partiendo con 4-morfolinetanol (10 g, 76 mmol), escalando apropiadamente los reactivos. Combinar las mezclas de reacción y recoger los sólidos mediante filtración al vacío para dar el compuesto del título 76,7 g (84 %). RMN 1H (399,8 MHz, DMSO-d6) 54,05 (m, 2H), 3,84 (m, 2H), 3,78 (t, J = 7 Hz, 1H), 3,67 (t, J = 7 Hz, 2H), 3,56 (m, 2H), 3,26 (m, 2H).

Preparación 9

2-bromo-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de ferc-butilo

Procedimiento sintético 1:

Tratar una solución de 2-bromo-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (25 g, 102 mmol), 4-dimetilaminopiridina (1,25 g, 10 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (24 ml, 138 mmol) en ACN (481 ml) con di-ferc-butildicarbonato (35 g, 162 mmol). Agitar la mezcla durante una noche a temperatura ambiente. Concentrar la mezcla a presión reducida. Diluir la mezcla con hexano, filtrar la mezcla a través de una almohadilla de gel de sílice y eluir la almohadilla con hexano seguido de DCM al 20 % en hexano. Concentrar el filtrado a sequedad para dar el compuesto del título 36,5 g (93 %) en forma de un aceite de color naranja. RMN 1H (399,8 MHz, CDCh) 57,19 (s, 1H), 1,74 (s, 6H), 1,58 (s, 9H). Procedimiento sintético 2:

Tratar una solución de 2-bromo-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (200 g, 813 mmol), N,N-dimetilpiridin-4-amina (9,93 g, 81 mmol) y di-ferc-butildicarbonato (266 g, 1219 mmol) en ACN (2 l) gota a gota con N,N-diisopropiletilamina (213 ml, 1219 mmol). Agitar la mezcla a temperatura ambiente durante cuatro horas. Calentar la reacción a 30 °C durante dos horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y agitar durante una noche. Concentrar la mezcla a presión reducida. Diluir la mezcla con EtOAc y lavar la solución orgánica resultante dos veces con agua (300 ml) seguida de NaCl saturado (300 ml). Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo en un lecho de gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0­ 20 % en hexano para dar el compuesto del título 253 g (90 %). EM (m/z): 290/292 (M-isobuteno 1/M-isobuteno+3). RMN 1H (399,8 MHz, CDCla) 57,19 (s, 1H), 1,74 (s, 6H), 1,58 (s, 9H).

Preparación 10

6,6-dimetil-4-oxo-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de ferc-butilo Desgasificar una mezcla de 2-bromo-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de tere-butilo (114 g, 329 mmol), bis(pinacolato)diboro (125 g, 494 mmol) y acetato potásico (97 g, 988 mmol) en 1,4-dioxano (1,6 l) con nitrógeno durante 10 minutos. Añadir cloruro de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)paladio (II) (5,38 g, 6,6 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C durante cuatro horas. Enfriar la reacción a temperatura ambiente y filtrar a través de un lecho de CELITE®. Concentrar el filtrado y después tratar el residuo con EtOAc al 10 % en hexano. Recoger el precipitado por filtración al vacío para dar el compuesto del título 65,8 g (40 %). EM (m/z): 338 (M-isobuteno+1).

Preparación 11

2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de tere-butilo

Procedimiento sintético 1:

Desgasificar una mezcla de 2-bromo-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de tere-butilo (36 g, 104 mmol), bis(pinacolato)diboro (59,8 g, 235 mmol) y acetato potásico (33,2 g, 338 mmol) en 1,4-dioxano (520 ml) con nitrógeno durante 10 minutos. Añadir cloruro de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno)paladio (II) (4,45 g, 5,5 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C. Calentar la mezcla a 90 °C durante dos horas. Enfriar la reacción a temperatura ambiente y agitar durante tres horas. Añadir 2,4-dicloropirimidina (22 g, 145 mmol) seguido de una solución de carbonato potásico (20,4 g, 147 mmol) en agua (83 ml). Desgasificar la mezcla resultante con nitrógeno durante 10 minutos. Añadir tetraquis(trifenilfosfina)paladio (1,59 g, 1,38 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C durante dos horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y filtrar a través de una capa de CELITE®. Lavar el filtrado con tres porciones de agua y una porción de NaCl saturado. Concentrar los extractos orgánicos a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-25 % en DCM para dar el compuesto del título 11 g (59 %). EM (m/z): 324 (M-isobuteno+1).

Procedimiento sintético 2

Desgasificar una mezcla de 6,6-dimetil-4-oxo-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de tere-butilo (11,7 g, 30 mmol), 2,4-dicloropirimidina (13 g, 89 mmol), carbonato potásico (20,4 g, 147 mmol) y agua (50 ml) en 1,4-dioxano (100 ml) con nitrógeno durante 10 minutos. Añadir tetraquis(trifenilfosfina)paladio (2,58 g, 2,2 mmol) y calentar la mezcla a 87 °C durante 1,5 horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente. Diluir la mezcla con EtOAc (1 l) y lavar la solución resultante con agua y NaCl saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Tratar el residuo con EtOAc al 30 % en hexano (200 ml) y recoger el precipitado resultante por filtración al vacío para dar el compuesto del título 7,6 g (67 %). EM (m/z): 324 (M-isobuteno+1).

Preparación 12

2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Agitar una mezcla de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de tere-butilo (6,36 g, 16,7 mmol) y ácido trifluoroacético (25 ml) en DCM (25 ml) a temperatura ambiente durante dos horas. Concentrar la mezcla a presión reducida y diluir el residuo con DCM. Separar la mezcla con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y recoger los sólidos de la emulsión bifásica. Lavar los sólidos con éter y secar al vacío a 50 °C durante una noche para dar el compuesto del título 4,65 g (99 %). EM (m/z): 280 (M+1).

Preparación 13

Clorhidrato de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Calentar una solución de 2-(2-doropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-carboxilato de ferc-butilo (66,7 g, 176 mmol) y cloruro de hidrógeno (4 M en 1,4-dioxano, 263 ml, 1054 mmol) en 1,4-dioxano (585 ml) a 30 °C durante cinco horas. Eliminar el elemento de calentamiento y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante una noche. Añadir lentamente hexano (800 ml) a la mezcla de reacción. Agitar la suspensión resultante durante 10 minutos y recoger los sólidos por filtración al vacío. Secar el sólido al vacío para dar el compuesto del título 56 g (100 %). e M (m/z): 280 (M+1).

Preparación 14

2-bromo-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Añadir hidróxido sódico (160 g, 4 mol) a agua (250 ml) y agitar la mezcla hasta que se produce una solución transparente. Añadir 1,4-dioxano (2 l) seguido de 2-bromo-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (215 g, 874 mmol), yoduro de tetrabutilamonio (300 g, 812 mmol) y clorhidrato de 4-(2-cloroetil)morfolina (300 g, 1564 mmol). Calentar la mezcla a 80 °C durante una hora. Enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Diluir la reacción con agua (2 l) y extraer la mezcla con EtOAc (3 x 2 l). Secar los extractos orgánicos combinados sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Añadir DCM (2 l) y hexano (2 l) y lavar la solución orgánica resultante con NaCl saturado (2 x 1 l). Concentrar la solución orgánica a presión reducida hasta un volumen mínimo. Eliminar los sólidos por filtración para dar el compuesto del título 180 g (57 %). EM (m/z): 359/361 (M+1/M+3).

Preparación 15

2-bromo-5-[2-[ferc-butil(dimetil)silil]oxietil]-6,6-dimetil-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Tratar una suspensión de hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 3,9 g, 97,5 mmol) en DMF (203 ml) a 0 °C con 2-bromo-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (20 g, 81,3 mmol) seguido de (2-bromoetoxi)-ferc-butildimetilsilano (23,3 g, 97,5 mmol). Agitar la reacción a 0 °C durante una hora. Eliminar el baño de hielo y agitar la mezcla de reacción durante una noche. Inactivar la mezcla de reacción con cloruro de amonio acuoso saturado y extraer con EtOAc. Lavar la solución orgánica con NaCl saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc al 20 % en hexano para dar el compuesto del título 26 g (79 %). EM (m/z): 404/406 (M+1/M+3).

El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento de la preparación 15.

Preparación 17

2-(2-cloro-5-metil-pirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Desgasificar una mezcla de 2-bromo-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (5,76 g, 16 mmol), bis(pinacolato)diboro (4,88 g, 19,2 mmol) y acetato potásico (4,86 g, 48 mmol) en 1,4-dioxano (80 ml) con nitrógeno durante 20 minutos. Añadir cloruro de (1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno) paladio (II) (668 mg, 0,80 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C durante una noche. Enfriar la reacción a temperatura ambiente, concentrar el filtrado y después tratar el residuo con EtOAc. El precipitado se recoge por filtración al vacío. Añadir al sólido (3,7 g) 2,4-dicloro-5-metilpirimidina (1,5 g, 9,1 mmol), 1,4-dioxano (50 ml), carbonato potásico (3,8 g, 27 mmol) y agua (33 ml). Desgasificar la mezcla resultante con nitrógeno durante 20 minutos. Añadir tetraquis(trifenilfosfina)paladio (790 mg, 0,68 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C durante dos horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y diluir con EtOAc. Lavar la solución orgánica con NaCl saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10% en EtOAc para dar el compuesto del título 1,82 g (19 %). EM (m/z): 407 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento de preparación 17.

Preparación 24

2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Procedimiento sintético 1:

Desgasificar una mezcla de 2-bromo-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (200 g, 557 mmol), bis(pinacolato)diboro (200 g, 788 mmol) y acetato potásico (200 g, 2038 mmol) en 1,4-dioxano (1 l) con nitrógeno durante 15 minutos. Añadir cloruro de (1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno) paladio (II) (20 g, 27 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C. Calentar la mezcla a 90 °C durante una hora. Enfriar la reacción a 50 °C y añadir carbonato potásico (250 g, 1809 mmol), 2,4-dicloropirimidina (230 g, 1543 mmol) y agua (300 ml). Calentar la mezcla a 90 °C durante una hora. Enfriar la mezcla a 35 °C y añadir agua (700 ml). Extraer la mezcla de reacción con DCM (2 l). La solución acuosa se extrajo de nuevo con DCM (500 ml). Secar las soluciones orgánicas combinadas sobre sulfato de magnesio anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Diluir el residuo con EtOAc al 10 % en hexano (2 l) y agitar durante una hora. Decantar la solución madre y aclarar los sólidos con hexano (500 ml). Disolver los sólidos en DCM (300 ml) y añadir lentamente hexanos (2 l). Recoger los sólidos resultante por filtración al vacío y secar para dar el compuesto del título 150 g (65 %). EM (m/z): 393 (M+1).

Procedimiento sintético 2:

Enfriar una mezcla de clorhidrato de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (10 g, 32 mmol) y yoduro de tetrabutilamonio (1,17 g, 3,16 mmol) en N-metilpirrolidona (211 ml) a 0 °C usando un baño de agua enfriada con hielo. Añadir hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 5,06 g, 126,5 mmol) en porciones. Agitar la mezcla a 0 °C durante 10 minutos y después añadir bromhidrato de 4-(2-bromoetil)morfolina (13,9 g, 50,6 mmol). Eliminar el baño de hielo y agitar la mezcla durante cuatro horas. Inactivar la mezcla de reacción con cloruro de amonio acuoso saturado y diluir la mezcla con agua (1 l). Extraer la mezcla con acetato de isopropilo (4 x 700 ml). Secar los extractos orgánicos combinados sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Añadir EtOAc al 20 % en hexano y agitar la mezcla durante una hora. Recoger el sólido por filtración al vacío y secar para dar el compuesto del título 8,6 g (69 %). EM (m/z): 393 (M+1).

Procedimiento sintético 3:

Tratar una solución de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (500 mg, 1,4 mmol) en DMF (14 ml) con hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 129 mg, 3,2 mmol). Agitar la mezcla durante 10 minutos y después añadir clorhidrato de 4-(2-bromoetil)morfolina (412 mg, 1,8 mmol). Agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante una noche. Enfriar la mezcla a 0 °C y añadir clorhidrato de 4-(2-bromoetil)morfolina (165 mg, 0,7 mmol) seguido de hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 14 mg, 0,4 mmol). Eliminar el baño de hielo y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante una noche. Añadir hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 14 mg, 0,4 mmol) y agitar la mezcla resultante a temperatura ambiente durante cinco horas. Diluir la mezcla con agua y extraer con EtOAc. Lavar los extractos orgánicos con cloruro de litio acuoso al 5 %. Concentrar la solución orgánica a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM para dar el compuesto del título 524 mg (93 %). EM (m/z): 393 (M+1).

Preparación 25

-[2-[ferc-butilo(dimetil)silil]oxietil]-6,6-dimetil-2-[2-[(2-metilpirazol-3-il)amino]pirimidin-4-il]tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Desgasificar una mezcla de 5-[2-[íerc-butil(dimetil)silil]oxietil]-2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (6 g, 13,7 mmol), 2-metilpirazol-3-amina (1,60 g, 16,4 mmol), carbonato de cesio (8,92 g, 27,4 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (790 mg, 1,37 mmol) y 1,4-dioxano (150 ml) con nitrógeno durante 10 minutos. Añadir acetato de paladio (II) (610 mg, 2,74 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C durante 2,5 horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante una noche. Diluir la mezcla de reacción con MeOH al 10 % en DCM y agitar la mezcla durante 15 minutos. Filtrar la mezcla a través de CELITE® y lavar los sólidos con MeOH al 10 % en DCM. Concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc al 60-100 % en DCM para dar el compuesto del título 5,73 g (84 %). EM (m/z): 499 (M+1).

Preparación 26

2-bromo-5-(2-hidroxietil)-6,6-dimetil-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Tratar 2-bromo-5-[2-[ferc-butil(dimetil)silil]oxietil]-6,6-dimetil-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (26 g, 64 mmol) en THF (40 ml) con ácido acético (120 ml) y agua (40 ml). Agitar la mezcla a temperatura ambiente durante una noche. Concentrar la mezcla de reacción a presión reducida. Diluir el residuo con EtOAc y lavar la solución resultante con bicarbonato sódico acuoso saturado seguido de NaCI saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado para dar el compuesto del título 18,97 g (100 %). EM (m/z): 290/292 (M+1/M+3).

El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento de preparación 26.

Preparación 28

Metanosulfonato de 2-(2-bromo-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-il)etilo

Enfriar una solución de 2-bromo-5-(2-hidroxietil)-6,6-dimetil-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (18,97 g, 65,4 mmol) en DCM (300 ml) a 0 °C. Tratar la mezcla con trietilamina (13,7 ml, 98,1 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (8,24 g, 71,9 mmol). Agitar la mezcla a 0 °C durante dos horas. Lavar la solución con agua y NaCl saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con EtOAc para dar el compuesto del título 23,8 g (99 %). EM (m/z): 368/370 (M+1/M+3).

El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento de preparación 28.

Preparación 30

3-etil-4-nitro-1H-pirazol

Disolver 3-etil-1H-pirazol (1 g, 10,4 mmol) en ácido sulfúrico (5 ml) y enfriar la mezcla a -5 °C. Después añadir nitrato potásico (1,16 g, 11,4 mmol) en porciones a la mezcla. Agitar la mezcla durante una noche mientras se la deja calentar lentamente hasta temperatura ambiente. Enfriar la mezcla a 0 °C e inactivar lentamente con hidróxido de amonio hasta que el pH sea aproximadamente 10. Recoger el sólido resultante por filtración al vacío y lavar con una pequeña cantidad de agua. Enfriar el filtrado a 0 °C y después recoger el sólido del filtrado por filtración al vacío y lavar con una pequeña cantidad de agua. Combinar los sólidos y disolver en DCM. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Coevaporar una vez con éter dietílico para dar el compuesto del título 1,34 g (91 %). EM (m/z): 140 (M-1).

Preparación 31

3-metoxi-4-nitro-pirazol-1-carboxilato de tere-butilo

Tratar una suspensión de 5-metoxi-4-nitro-1H-pirazol (3 g, 21 mmol), di-ferc-butil-dicarbonato (6,9 g, 31,6 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (1,28 g, 10,5 mmol) en DCM (300 ml) con trietilamina (5,85 ml, 42 mmol) y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante una noche. Concentrar la mezcla de reacción a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc al 1-10 % en hexano para dar el compuesto del título 3,48 g (68 %). RMN 1H (399,8 MHz, DMSO-da) 59,10 (s, 1H), 3,98 (s, 3H), 1,56 (s, 9H). Preparación 32

3-etil-1H-pirazol-4-amina

Tratar una suspensión de paladio (5 % en peso sobre carbono, 450 mg, 0,21 mmol) en EtOH (21 ml) con 3-etil-4-nitro-1H-pirazol (300 mg, 2,13 mmol). Agitar la mezcla resultante en atmósfera de hidrógeno durante 6,5 horas. Filtrar la mezcla de reacción a través de CELITE® y aclarar los sólidos con más EtOH. Concentrar el filtrado a presión reducida para dar el compuesto del título 240 g (99%). RMN ¹H (400,1 MHz, CD³CN) 57,02 (s, 1H), 2,54 (c, J = 7 Hz, 3H), 1,17 (t, J = 7 Hz, 9H).

El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento de preparación 32.

Preparación 34

N-(2-ciclopropilpirazol-3-il)carbamato de ferc-butilo

Enfriar una solución de ácido 2-ciclopropilpirazol-3-carboxílico (4 g, 26 mmol) en THF (35 ml) a 0 °C y después añadir trietilamina (5,5 ml, 39 mmol) seguido de azida difenilfosfónica (8,5 ml, 39 mmol). Agitar la mezcla durante cuatro horas mientras la temperatura de reacción se calienta lentamente hasta temperatura ambiente. Añadir alcohol de ferc-butilo (4,99 ml) y calentar la mezcla a 70 °C durante 18 horas. Concentrar la mezcla de reacción a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-20 % en DCM para dar el compuesto del título 5,39 g (92 %). EM (m/z): 224 (M+1).

Preparación 35

2-ciclopropilpirazol-3-amina

Tratar una solución de N-(2-ádopropNpirazol-3-il)carbamato de tere-butilo (5,39 g, 24 mmol) en DCM (12 ml) con ácido trifluoroacético (16 ml, 213 mmol). Agitar la solución a temperatura ambiente durante una hora. Concentrar la mezcla de reacción a presión reducida. Disolver el residuo en DCM y tratar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico hasta que el pH de la fase acuosa se mantenga a >7. Separar las fases y secar la fase orgánica sobre sulfato sódico anhidro. Filtrar la mezcla y concentrar el filtrado a presión reducida. Concentrar la fase acuosa a presión reducida. Combinar los residuos de las fases orgánica y acuosa y purificar mediante cromatografía en columna de fase inversa (Columna: 130 g C18; Fase móvil: A) agua, B) ACN; Gradiente: 0-20 % de B). Concentrar las fracciones y disolver el residuo en MeOH al 25 % en DCM. Filtrar la mezcla y concentrar el filtrado a presión reducida. Disolver el residuo en EtOAc y añadir agua. Separar las capas y volver a extraer la capa acuosa con EtOAc (8 x 100 ml). Concentrar el extracto orgánico combinado a presión reducida para dar el compuesto del título 2,27 g (76 %). RMN 1H (400,1 MHz, CD3CN) 57,02 (d, J = 2 Hz, 1H), 5,33 (d, J = 2 Hz, 1H), 4,28 (s a, 2H), 3,10 (m, 1H), 0,96 (m, 4H). Preparación 36

2-(dibencilamino)etanol

Tratar una mezcla de 2-(bencilamino)etanol (0,95 ml, 6,6 mmol) en ACN (35 ml) con carbonato potásico (1,83 g, 13,2 mmol) seguido de bromuro de bencilo (1,18 ml, 9,89 mmol). Calentar las mezclas de reacción a 80 °C durante 1,5 horas. Enfriar la reacción a temperatura ambiente y filtrar la mezcla. Concentrar el filtrado a presión reducida y purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc al 0-30 % en hexano para dar el compuesto del título 1,7 g (100 %). EM (m/z): 242 (M+1).

Preparación 37

Ácido 2-[2-(dibencilamino)etoxi]-2,2-difluoro-acético

Tratar una solución de 2-(dibencilamino)etanol (1,5 g, 6,2 mmol) y ácido cloro-2,2-difluoro-acético de sodio (950 mg, 6,19 mmol) en THF (12 ml) a 0 °C con hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 500 mg, 12,5 mmol). Calentar la mezcla de reacción a reflujo durante una noche. Añadir más hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 120 mg, 3 mmol) a la mezcla de reacción y continuar calentando durante otra hora. Enfriar la reacción a temperatura ambiente y diluir con agua. Extraer la mezcla con éter dietílico. Separar las capas y ajustar la capa acuosa a pH 6 con ácido clorhídrico 6 N. Extraer la solución acuosa con EtOAc. Combinar todas las soluciones orgánicas y secar sobre sulfato de sodio anhidro. Filtrar la mezcla y concentrar el filtrado a presión reducida para dar el compuesto del título 1,03 g (49%). EM (m/z): 336 (M+1).

Preparación 38

2-[2-(dibencilamino)etoxi]-2 ,2-difluoro-acetato de metilo

Tratar una solución de ácido 2-[2-(dibencilamino)etoxi]-2,2-difluoro-acético (100 mg, 0,298 mmol) en tolueno (9 ml) y MeOH (2 ml) con (trimetilsilil)diazometano (2 M en hexano, 0,16 ml, 0,32 mmol) gota a gota. Agitar la mezcla durante 15 minutos a temperatura ambiente. Inactivar la reacción con ácido acético (0,1 ml) y concentrar la mezcla de reacción a presión reducida para dar el compuesto del título 102 mg (98 %). EM (m/z): 350 (M+1).

Preparación 39

4-bencil-2,2-difluoro-morfolin-3-ona

Tratar una suspensión de paladio (10% sobre carbono, 50 mg, 0,141 mmol) en EtOH (15 ml) con 2-[2-(dibencilamino)etoxi]-2,2-difluoro-acetato de metilo (485 mg, 1,39 mmol) en EtOH (15 ml). Agitar la mezcla de reacción en una atmósfera de hidrógeno (globo) a temperatura ambiente durante una noche. Filtrar la mezcla de reacción a través de CELITE® y concentrar el filtrado a presión reducida para dar el compuesto del título 294 mg (93 %). EM (m/z): 228 (M+1).

Preparación 40

4-bencil-2,2-difluoro-morfolina

Tratar una solución de 4-bencil-2,2-difluoro-morfolin-3-ona (290 mg, 1,28 mmol) en THF (13 ml) con complejo de sulfuro de dimetilo y boro (2 M en THF, 3,06 ml, 6,12 mmol). Calentar la mezcla de reacción a 55 °C durante 3,5 horas y después eliminar el calor y continuar agitando durante una noche. Calentar la mezcla de reacción a 55 °C durante otras dos horas. Enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente e inactivar mediante la adición gota a gota de ácido clorhídrico (6 N, 3,06 ml, 18,4 mmol). Calentar la mezcla de reacción a 100 °C durante una hora. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y concentrar a presión reducida. Diluir la mezcla con agua y ajustar el pH a 12 con hidróxido sódico 2 N. Extraer la mezcla con EtOAc. Secar los extractos orgánicos sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida para dar el compuesto del título 120 mg (44 %). EM (m/z): 214 (M+1).

Preparación 41

2-bromo-6,6-dimetil-5-[2-(5-oxa-8-azaespiro[2,6]nonan-8-il)etil]tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Calentar una mezcla de metanosulfonato de 2-(2-bromo-6,6-dimetil-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-il)etilo (2,76 g, 6,9 mmol) y 5-oxa-8-azaespiro[2,6]nonano (2,18, 16,3 mmol) en DMF (33 ml) a 80 °C durante una noche. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y diluir con EtOAc. Lavar la solución orgánica con NaCl saturado (3 x 30 ml). Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna de fase inversa Columna: 100 g Gold C18; Fase móvil: A) ácido fórmico al 0,1 % en agua, B) ácido fórmico al 0,1 % en ACN; Gradiente: 5 % de B durante 5 minutos, 5 %-50 % de B durante 20 minutos; Caudal: 53 ml/minuto) para dar el compuesto del título 3,6 g (85 %). EM (m/z): 399/401 (M+1/M+3).

Preparación 42

4-[[4-[6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-2-il]-5-metil-pirimidin-2-il]amino]-3-metoxi-pirazol-1-carboxilato de tere-butilo

Desgasificar una mezcla de 2-(2-cloro-5-metil-pirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol4-ona (250 mg, 0,61 mmol), 4-amino-3-metoxi-pirazol-1-carboxilato de tere-butilo (157 mg, 0,74 mmol), carbonato de cesio (300 mg, 0,92 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (71 mg, 0,12 mmol) y 1,4-dioxano (6,4 ml) con nitrógeno durante 15 minutos. Añadir acetato de paladio (II) (14 mg, 0,0614 mmol) y calentar la mezcla a 110 °C durante una noche. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y diluir con EtOAc. Lavar la solución orgánica con NaCl saturado. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo mediante HPLC en una columna C18 (Columna: 150 g; Fase móvil: A) ácido fórmico al 0,10 % en agua, B) ácido fórmico al 0,10 % en ACN; Gradiente: 10-50 % de B; Caudal: 60 ml/min) para dar el compuesto del título 101 mg (28 %). EM (m/z): 584 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento de preparación 42.

Ejemplo 1

,6-dimetil-2-{2-[(1 -metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etM]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Procedimiento sintético 1:

Añadir lentamente 2-metilpirazol-3-amina (75 g, 772 mmol) a una suspensión de hidruro sódico (60 % en peso en aceite mineral, 30 g, 750 mmol) en N-metilpirrolidona (500 ml). Agitar la mezcla resultante durante 90 minutos. Añadir una solución de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (145 g, 369 mmol) en N-metilpirrolidona (200 ml). Enfriar la reacción exotérmica a temperatura ambiente y verter la reacción en agua (3 l). Ajustar el pH a ~3 con ácido clorhídrico concentrado (200 ml). Extraer la mezcla con DCM (4 x 2 l). Neutralizar la capa acuosa usando hidróxido sódico 5 M. Extraer esta solución acuosa con DCM (2 x 2 l). Combinar estos extractos orgánicos y lavar con agua (2 l). Secar los extractos orgánicos sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo en un lecho de gel de sílice (2 kg) eluyendo sucesivamente con DCM (2 l), EtOH al 2,5 % en DCM (2 l), EtOH al 5 % en DCM (2 l), EtOH al 7,5 % en DCM (2 l) y finalmente EtOH al 10 % en DCM (10 l). Concentrar las fracciones apropiadas a presión reducida. Añadir EtOAc (1 l) y concentrar a presión reducida. Añadir EtOAc (1 l) y concentrar a presión reducida. Añadir EtOAc (500 ml) y hexano (500 ml). Recoger el sólido por filtración al vacío y lavar el sólido con hexano (500 ml). Secar el sólido al vacío a 50 °C para dar el compuesto del título 65,7 g (39 %). EM (m/z): 454 (M+1).

Procedimiento sintético 2:

Desgasificar una mezcla de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (20,8 g, 52,9 mmol), 2-metilpirazol-3-amina (5,7 g, 58,2 mmol), carbonato de cesio (37,9 g, 116,5 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (2,6 g, 4,5 mmol) y 1,4-dioxano (529 ml) con nitrógeno durante 10 minutos. Añadir tris(dibencilidenoacetona)dipaladio (0) (2,4 g, 2,6 mmol) y calentar la mezcla a 85 °C durante cuatro horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y filtrar la mezcla a través de un filtro de papel. Concentrar el filtrado a presión reducida. Repetir la reacción partiendo con 8 g de 2-(2-doropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona y combinar los dos residuos. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice (330 g) eluyendo con un gradiente de MeOH al 5-25 % en (EtOAc al 10 % en DCM). Reunir las fracciones y concentrar a presión reducida. Volver a purificar el residuo mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (330 g) eluyendo con un gradiente de MeOH al 5-25 % en EtOAc al 10 % en DCM. Reunir las fracciones y concentrar a presión reducida. Disolver el residuo en DCM (400 ml) y después añadir acetona (1 l). Concentrar lentamente la mezcla a presión reducida hasta aproximadamente 700 ml. Recoger los sólidos por filtración al vacío para dar el compuesto del título 14,8 g (48 %). EM (m/z): 454 (M+1).

Procedimiento sintético 3:

Desgasificar una mezcla de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (250 mg, 0,64 mmol), 2-metilpirazol-3-amina (124 mg, 1,3 mmol), carbonato de cesio (622 mg, 1,9 mmol), 4,5-bis(difenilfosfin)-9,9-dimetilxanteno (55 mg, 0,095 mmol) y 1,4-dioxano (6,4 ml) con nitrógeno durante 15 minutos. Añadir acetato de paladio (II) (14,3 mg, 0,0636 mmol) y calentar la mezcla a 90 °C durante una noche. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y filtrar la mezcla a través de un filtro de papel. Lavar los sólidos con MeOH al 10 % en DCM. Concentrar el filtrado a presión reducida. Repetir la reacción y combinar los dos residuos. Purificar el residuo por HPLC en una columna C18 (30 x 75 mm, 5 um, xbridge ODB) eluyendo con un gradiente a 85 ml/minuto de ACN al 9-28% en carbonato de amonio 10 mM (pH 10) en agua. Reunir las fracciones y concentrar a presión reducida para eliminar el ACN. Liofilizar la solución acuosa para dar el compuesto del título 100 mg (18 %). e M (m/z): 454 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento sintético 3 del ejemplo 1.

(continuación)

continuación

(continuación)

Ejemplo 20

4-[(4-{6,6-dimetil-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-4-oxo-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-2-il}pirimidin-2-il)amino]-1H-pirazol-5-carbonitrilo

Calentar una solución de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (350 mg, 0,89 mmol), 4-amino-1H-pirazol-5-carbonitrilo (116 mg, 1,07 mmol), carbonato potásico (320 mg, 2,32 mmol), 2-(diferc-butilfosfin)-2’,4’,6’-triisopropil-3,6-dimetoxi-1,1’-bifenilo (87 mg, 0,18 mmol), alcohol de tere-butilo (2,3 ml) y ácido acético (una gota) a 90 °C durante dos horas. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente. Diluir la mezcla con MeOH al 10 % en DCM y filtrar la solución a través de una columna de CELITE® con una pequeña cantidad de gel de sílice en la parte superior. Lavar la columna con MeOH al 10 % en DCM y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna de fase inversa Columna: C18, 275 g Gold; Fase móvil: A) bicarbonato de amonio 10 mM en agua con MeOH al 5 %, B) ACN; Gradiente: 10 % de B durante 5 minutos, gradiente al 40 % de B durante 25 minutos; Caudal: 125 ml/min) para dar el compuesto del título 240 mg (58 %). EM (m/z): 465 (M+1). El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 20.

Ejemplo 22

6,6-dimetil-2-{2-[(5-metil-1H-pirazol-4-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Purgar una mezcla de 2-(2-cloropirimidin-4-il)-6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (230 mg, 0,59 mmol), 3-metil-1H-pirazol-4-amina (142 mg, 0,73 mmol), cloro[2-(di-fe/'c-butilfosfin)-2’,4’,6’-triisopropil-1,1’-bifenil][2-(2-aminoetil)fenil)]paladio (II) (8 mg, 0,012 mmol), 2-di-fe/'c-butilfosfin-2’,4’,6’-triisopropilbifenilo (5 mg, 0,012 mmol) y ferc-butóxido de sodio (118 mg, 1,2 mmol) tres veces con nitrógeno. Añadir alcohol de ferc-butilo (2 ml), cerrar herméticamente la reacción y agitar la mezcla a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Tratar la mezcla de reacción con EtOAc y agitar la mezcla durante una noche. Concentrar a presión reducida. Disolver el residuo en EtOAc y lavar la solución orgánica con cloruro de amonio acuoso saturado. Volver a extraer la capa acuosa dos veces con EtOAc. Secar los extractos orgánicos combinados sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en DCM para dar el compuesto del título 164 mg (62 %). EM (m/z): 454 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 22.

Ejemplo 25

6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(tiomorfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Calentar una mezcla de metanosulfonato de 2-[6,6-dimetil-2-[2-[(2-metilpirazol-3-il)amino]pirimidin-4-il]-4-oxotieno[2,3-c]pirrol-5-il]etilo (260 mg, 0,56 mmol), tiomorfolina (116 mg, 1,12 mmol) y trietilamina (0,18 ml, 0,38 mmol) en ACN (2 ml) a 60 °C durante una noche. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente y filtrar la solución a través de CELITE®. Lavar los sólidos con MeOH al 10 % en DCM y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna de fase inversa Columna: C18, 275 g Gold; Fase móvil: A) amoniaco al 10 mM en MeOH al 5 % en agua, B) ACN; Gradiente: 10 % de B durante 5 minutos, gradiente de B a 10-65 % B durante 25 min; Caudal: 200 ml/min) para dar el compuesto del título 170 mg (64 %). EM (m/z): 470 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 25.

Ejemplo 32

5-[2-(2,2-difluoromorfolin-4-il)etil]-6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Tratar una suspensión de hidróxido de paladio (20 % sobre carbono, 63 mg, 0,09 mmol) en EtOAc (5 ml) con 4-bencil-2,2-difluoro-morfolina (95 mg, 0,45 mmol) en EtOAc (5 ml). Agitar la mezcla de reacción en atmósfera de hidrógeno (globo) a temperatura ambiente durante cinco horas. Filtrar la mezcla de reacción a través de CELITE® y asilar el filtrado. Al filtrado, añadir trietilamina (0,11 ml, 0,79 mmol) y metanosulfonato de 2-[6,6-dimetil-2-[2-[(2-metNpirazol-3-il)amino]pirimidin-4-il]-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-il]etilo (306 mg, 0,66 mmol). Calentar la mezcla a 80 °C durante una hora. Añadir ACN (15 ml) y calentar la mezcla a 80 °C durante dos días. Enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y concentrar a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de MeOH al 0-10 % en EtOAc. Concentrar las fracciones a presión reducida. Volver a purificar el residuo por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc al 50-100 % en hexano seguido de un segundo gradiente de MeOH al 0-10 % en EtOAc para dar el compuesto del título 47 mg (30 %). EM (m/z): 490 (M+1).

Ejemplo 33

5-[2-(6,6-difluoro-1,4-oxazepan-4-il)etil]-6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Tratar clorhidrato de 6,6-difluoro-1,4-oxazepano (200 mg, 0,15 mmol) con resina de carbonato (3 equivalentes molares) en DCM (5 ml). Rotar la suspensión de resina durante una hora. Eliminarlos sólidos por filtración y tratar el filtrado con ácido p-toluenosulfónico (250 mg, 1,45 mmol). Agitar la mezcla resultante durante dos horas y después concentrar la mezcla a presión reducida. Añadir ACN (2 ml) y metanosulfonato de 2-[6,6-dimetil-2-[2-[(2-metilpirazol-3-il)amino]pirimidin-4-il]-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-5-il]etilo (200 mg, 0,43 mmol). Tratar la solución resultante con trietilamina (0,15 ml, 1,08 mmol). Cerrar al vacío el recipiente de reacción y calentar la mezcla a 80 °C durante tres horas. Enfriar a temperatura ambiente y concentrar la mezcla de reacción. Purificar el residuo por cromatografía en columna de fase inversa Columna: 50 g C-18; Fase móvil: A) TFA al 0,1 % en agua, B) TFA al 0,1 % en ACN; Gradiente 10-80 % de B). Concentrar las fracciones que contienen producto. Disolver el residuo en DCM y lavar con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. Secar la solución orgánica sobre sulfato sódico anhidro, filtrar y concentrar el filtrado a presión reducida. Purificar el residuo por cromatografía en columna de fase inversa Columna: 15 g Gold C-18; Fase móvil: A) carbonato de amonio 10 mM en agua con MeOH al 10 %, B) ACN; Gradiente 10-80 % de B) para dar el compuesto del título 16 mg (7 %). EM (m/z): 504 (M+1).

Ejemplo 34

5-{2-[ciclopropil(metil)amino]etil}-6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Calentar una solución de metanosulfonato de 2-[6,6-dimetil-2-[2-[(2-metilpirazol-3-il)amino]pirimidin-4-il]-4-oxotieno[2,3-c]pirrol-5-il]etMo (70 mg, 0,16 mmol) y N-metilciclopropanamina (77 mg, 1,08 mmol) en DMF (1,7 ml) a 90 °C durante una noche. Enfriar la mezcla a temperatura ambiente. Purificar la solución mediante cromatografía de fase inversa (Columna: 100 g Gold C-18; Fase móvil: A) ácido fórmico al 0,1% en agua, B) ácido fórmico al 0,1% ACN; Gradiente: 5 % de B durante 5 minutos, gradiente al 65 % de B durante 25 minutos; Caudal: 60 ml/min) para dar el compuesto del título 70 mg (37 %). EM (m/z): 438 (M+1).

El compuesto siguiente se prepara esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 34.

Ejemplo 36

Clorhidrato de 2-{2-[(3-metoxi-1H-pirazol-4-il)amino]-5-metilpirimidin-4-il}-6,6-dimetil-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona

Agitar una solución de 4-[[4-[6,6-dimetil-5-(2-morfolinoetil)-4-oxo-tieno[2,3-c]pirrol-2-il]-5-metil-pirimidin-2-il]amino]-3-metoxi-pirazol-1-carboxilato de ferc-butilo (101 mg, 0,173 mmol) y cloruro de hidrógeno (4,0 M en 1,4-dioxano, 2 ml, 8 mmol) en MeOH (20 ml) a temperatura ambiente durante 12 horas. Concentrar la mezcla a sequedad para dar el compuesto del título 80 mg (89 %). EM (m/z): 484 (M+1).

Los compuestos siguientes se preparan esencialmente mediante el procedimiento del ejemplo 36.

(continuación)

Ejemplo 40

6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-{2-[2-oxa-5-azabicido[4.1.0]hept-5-il]etil}-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona, isómero 2

Purificar 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(2-oxa-5-azabiciclo[4.1.0]hept-5-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (Ejemplo 30) mediante cromatografía en columna quiral (Columna: Lux Cellulose-4 21,2 x 250 mm; Fase móvil: alcohol de isopropilo al 40% (isopropilamina al 0,2%)/CO2); Tiempo de elución: 11 minutos) para dar el compuesto del título 24 mg (34 %). EM (m/z): 466 (M+1).

Difracción de rayos X en polvo

Los patrones XRD de los sólidos cristalinos se obtuvieron en un difractómetro de rayos X en polvo Bruker D4 Endeavor, equipado con una fuente CuKa A = 1,54060 A) y un detector Vantec, funcionando a 35 kV y 50 mA. La muestra se exploró entre 4 y 40° en 20, con un tamaño de paso de 0,009° en 20 y una velocidad de barrido de 0,5 segundos/paso, y con una divergencia de 0,6 mm, 5,28 de fijación antidispersión, ranuras del detector de 9,5 mm. El polvo seco se empaquetó en un portamuestras de cuarzo y se obtuvo una superficie lisa usando un porta de vidrio. Los patrones de difracción de la forma cristalina se recogieron a temperatura y humedad relativa ambiente. Es bien conocido en la técnica cristalográfica que, para cualquier forma cristalina dada, las intensidades relativas de los picos de difracción pueden variar debido a una orientación preferida resultado de factores tales como la morfología del cristal y el hábito cristalino. Cuando están presentes efectos de orientación preferida, las intensidades de los picos están alteradas, pero las posiciones características de los picos del polimorfo se mantienen inalteradas. Además, es también bien conocido en la técnica de la cristalografía que para cualquier forma cristalina dada, las posiciones de los picos angulares pueden variar ligeramente. Por ejemplo, las posiciones de los picos se pueden desplazar debido a una variación en la temperatura o la humedad a la que se analiza la muestra, desplazamiento de la muestra, o la presencia o ausencia de un patrón interno. En este caso, una variabilidad en la posición del pico de ± 0,2 en 20 tendrá en cuenta estas variaciones potenciales sin impedir la identificación inequívoca de la forma cristalina indicada. La confirmación de una forma cristalina se puede hacer basándose en cualquier combinación única de picos distintivos (en unidades de ° 20), típicamente los picos más prominentes. Los patrones de difracción de una forma cristalina, recogidos a una temperatura y humedad ambiente, se ajustan basándose en los picos patrón de NIST 675 a 8,853 y 26,774 grados 2 theta.

Difracción de rayos X en polvo del Ejemplo 1, Forma cristalina 1

6,6-Dimetil-2-{2-[(1-metil-1H-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (Forma cristalina 1)

Agregar 6,6-dimetil-2-{2-[( 1-metiMH-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona (103 mg) a una solución de ACN (1 ml) y agua (1 ml) y calentar la mezcla a 7o °C durante 10 minutos. Filtrar y dejar enfriar la solución a temperatura ambiente durante la noche. Agregar agua (2 ml) lentamente a la solución en el transcurso de cinco horas. Recoger los sólidos por filtración al vacío y lavar con agua. Secar al aire los sólidos para dar 94 mg del compuesto del título (92 %).

Una muestra preparada de la Forma cristalina 1 del Ejemplo 1, se caracteriza por un patrón XRD que utiliza radiación CuKa con picos de difracción (valores de 2-theta) como se describe en la Tabla 1 a continuación, y en particular con picos de 19,3 grados en combinación con uno o más de los picos seleccionados del grupo que consiste en 15,5, 17,1, 18,0, 20,2, 21,5 y 22,1 grados; con una tolerancia para los ángulos de difracción de 0,2 grados.

Tabla 1: Picos de difracción de rayos X en polvo de la Forma cristalina 1 del Ejemplo 1

Varias líneas de evidencia indican que los procesos involucrados en la iniciación del tumor, el crecimiento y la progresión están mediados por la activación de una o más vías de señalización en las células cancerosas. La vía de la proteína cinasa activada por mitógeno (MAPK) es un regulador clave de la proliferación y supervivencia celular. ERK es un miembro aguas abajo de esta vía y desempeña un papel central en la transmisión de señales extracelulares de los receptores tirosina cinasa (RTK), como EGFR, FGFR, PDGFR, VEGFR etc. Esta vía es una cascada escalonada de cinasa de tres niveles que consiste en las cinasas RAF, MEK y ERK (cinasas reguladas por señales extracelulares) y la activación de esta vía comienza con la activación de RAS, una pequeña GTPasa. La activación de RAS lleva al reclutamiento de RAF, una serina/treonina cinasa y a su activación. A continuación, el RAF activado se fosforila y activa MEK1/2, que a su vez fosforila y activa ERK1/2. Cuando se activa, ERK1/2 fosforila varias dianas citoplasmáticas y nucleares aguas abajo implicadas en la proliferación celular, el crecimiento, la supervivencia y EMT (transición epitelio a mesénquima).

La vía RAS/MAPK es una de las vías más importantes para la proliferación celular y se cree que esta vía se activa con frecuencia en el -30% de todos los cánceres humanos. La activación de la vía MAPK constitutiva puede ser resultado de la activación de mutaciones en RAS, BRAF, MEK1, la pérdida del supresor de tumores NF1 o la activación aguas arriba mediada por mutaciones, amplificaciones o activación mediada por ligando de los RTK. Se ha demostrado que los tres genes de la familia RAS (KRAS, NRAS y HRAS) están mutados somáticamente en varios cánceres, entre ellos el colorrectal, melanoma, pulmonar y de páncreas, más comúnmente como resultado de mutaciones puntuales únicas en los codones 12, 13 y 61. Estas mutaciones provocan la activación constitutiva de RAS que se acompaña de una mayor actividad de ERK1/2 y señalización de crecimiento. Las mutaciones en los codones 12, 13 y 61 de KRAS confieren resistencia a los compuestos y anticuerpos monoclonales que inhiben el EGFR. Las mutaciones KRAS se encuentran en el 30 % de los cánceres de pulmón, el 90 % de los cánceres de páncreas, el 10 % de los cánceres gástricos y el 50 % de los cánceres colorrectales. Se detectaron mutaciones NRAS en aproximadamente el 10-25 % de los melanomas. Además, se han identificado mutaciones RAS (HRAS, KRAS y NRAS) se han identificado en el -55-60 % de los cánceres de tiroides. Las mutaciones puntuales somáticas en BRAF tienen lugar en aproximadamente el 8 % de los tumores humanos, con mayor frecuencia en el melanoma (60 %), en cánceres colorrectales (10 %) y de tiroides (50 %). En el melanoma, todas las mutaciones BRAF parecen estar dentro del dominio cinasa y una sola sustitución (T-> A, V600E) representa el 80 % de las mutaciones. Las mutaciones de BRAF se encuentran, con raras excepciones, en un patrón mutuamente exclusivo con mutaciones RAS, sugiriendo que estas alteraciones genéticas activan los efectores comunes aguas abajo.

Ensayos Biológicos

Los siguientes ensayos demuestran que los compuestos ejemplificados de la presente invención son inhibidores de la actividad cinasa de ERK1 y ERK2. Los resultados de los siguientes ensayos también demuestran que los compuestos ejemplificados de la presente invención inhiben la señalización de ERK en células cancerosas. Adicionalmente, el compuesto del Ejemplo 1 demuestra la inhibición de la diana de la vía ERK en ciertos modelos de cáncer de xenoinjerto de tumor. Además, el compuesto del Ejemplo 1 inhibe el crecimiento tumoral en ciertos modelos de cáncer de xenoinjerto de tumor.

Ensayo de ERK1 cinasa

El fin de este ensayo es medir la capacidad de los compuestos para inhibir la actividad cinasa de ERK1. Realizar el ensayo de ERK1 cinasa in vitro utilizando un ensayo TR-FRET. Iniciar las reacciones (12,5 j l ) añadiendo 5 j l de enzima ERK1 (Invitrogen, n.° PR5254B, concentración final de 100 ng/ml) más el sustrato GFP-ATF2 (Invitrogen, n.° PV4445, concentración final de 0,2 jM), 5 j l de solución de ATP (Invitrogen, n.° PV3227, concentración final de 10 mM) preparado en tampón de cinasa (Hepes 50 mM a pH 7,4, MgCl ^2, 5 mM, EGTA 0,1 mM, Triton X-100 al 0,01 %, DTT 1 mM) y 2,5 j l de compuestos de ensayo en solución DMSO (4% final, v/v) en un PROXIPLATE ™ de 384 pocillos (Perkin Elmer, n.° GRN6260). Incubar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 60 minutos. Detener la reacción mediante la adición de 12,5 j l de tampón de parada (EDTA 10 mM, anticuerpo Tb-anti-pATF2 (pThr71) 2 nM, Invitrogen, n.° PV4448) en el tampón de dilución TR-FRET (Invitrogen, n.° PV3574). Incubar las placas a temperatura ambiente durante 60 minutos adicionales y leer en un lector de placas ENVISION® (PerkinElmer) a la longitud de onda de excitación de 340 nm. Calcular la proporción de TR-FRET dividiendo la señal de emisión del aceptor de GFP (a 520 nm) entre la señal de emisión del donador de Tb (a 495 nm). Calcular el porcentaje de inhibición utilizando los pocillos tratados con compuesto en relación con los datos de la proporción TR-FRET de los pocillos de control de la placa Máx (control DMSO) y Mín (sin enzima añadida) {% de inhibición = 100 - [(compuesto de ensayo - Mín media) / (Máx media - Mín media) X 100]}. Probar todos los compuestos en 10 concentraciones (20 jM a 0,001 jM ) utilizando un esquema de dilución de 1:3. Obtener los valores de Abs_CI⁵⁰ ajustando el porcentaje de inhibición y los datos de concentración de diez puntos a una ecuación logística no lineal de 4 parámetros (ecuación 205) utilizando ACTIVITYBASE® 7.3 (ID Business Solutions Limited).

Los compuestos ejemplificados dentro del ámbitode la invención se ensayan en este ensayo sustancialmente como se describe anteriormente. Los resultados de este ensayo demuestran que todos los compuestos ejemplificados inhiben la actividad cinasa de ERK1, con valores de CI ⁵⁰ inferiores a 0,15 jM . Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 tiene un valor de CI ⁵⁰ de 4,86 nM (± 0,20, n=7).

Ensayo de ERK2 cinasa

El fin de este ensayo es medir la capacidad de los compuestos para inhibir la actividad cinasa de ERK2. Realizar el ensayo de ERK2 cinasa in vitro utilizando un ensayo t R-FRET. Iniciar todas las reacciones (12,5 j l ) añadiendo 5 j l de enzima ERK2 (Invitrogen, n.° PV3595B, concentración final de 50 ng/ml) más sustrato GFP-ATF2 (Invitrogen, n.° PV4445, conc. final de 0,2 jM), 5 j l de solución de ATP (Invitrogen, n.° PV3227, concentración final de 10 jM ) preparado en tampón de cinasa (Hepes 50 mM a pH 7,4, MgCl ²5 mM, EGTA 0,1 mM, Triton X-100 al 0,01 %, d Tt 1 mM) y 2,5 j l de compuestos de ensayo en solución DMSO (4% final, v/v) en un PROXIPLATE ™ de 384 pocillos (Perkin Elmer, n.° GRN6260). Incubar las reacciones a temperatura ambiente durante 60 minutos. Detener las reacciones mediante la adición de 12,5 j l de tampón de parada (EDTA 10 mM, anticuerpo Tb-anti-pATF2 (pThr71) 2 nM, Invitrogen, n.° PV4448) en el tampón de dilución TR-FRET (Invitrogen, n.° PV3574). Incubar las placas a temperatura ambiente durante 60 minutos adicionales y leer en un lector de placas ENVISION® (PerkinElmer) a la longitud de onda de excitación de 340 nm. Calcular una proporción TR-FRET dividiendo la señal de emisión del aceptor de GFP (a 520 nm) entre la señal de emisión del donador de Tb (a 495 nm). Calcular el porcentaje de inhibición utilizando los pocillos con compuesto en relación con los datos de la proporción TR-FRET de los pocillos de control de la placa Máx (control DMSO) y Mín (sin enzima añadida) {% de inhibición = 100 - [(compuesto de ensayo - Mín media) / (Máx media - Mín media) X 100]}. Probar todos los compuestos en 10 concentraciones (20 jM a 0,001 jM ) utilizando un esquema de dilución de 1:3. Obtener los valores de Abs_CI50 ajustando el porcentaje de inhibición y los datos de concentración de diez puntos a una ecuación logística no lineal de 4 parámetros (ecuación 205) utilizando ACTIVITYBASE 7.3 (ID Business Solutions Limited).

Los compuestos ejemplificados dentro del ámbitode la invención se ensayan en este ensayo sustancialmente como se describe anteriormente. Los resultados de este ensayo demuestran que todos los compuestos ejemplificados inhiben la actividad cinasa de ERK2, con valores de CI ⁵⁰ inferiores a 0,15 pM. Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 tiene un valor de CI ⁵⁰ de 5,24 nM (± 0,24, n=7).

Ensayo de mecanismo celular de ERK1/2 (Ensayo Alphascreen de pRSK1)

El fin de este ensayo es medir la capacidad de los compuestos para inhibir la señalización de ERK en células cancerosas in vitro. Llevar a cabo el ensayo Alphascreen de pRSK1 utilizando la línea celular de cáncer colorrectal HCT116 (ATCC, n.° CCL-247). Cultivar de manera rutinaria células HCT116 en medio de crecimiento Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (Hyclone, n.° SH30022) que contiene suero bovino fetal (FBS) al 5 % (Gibco, n.° 16000-044) en matraces T-150 e incubar en una incubadora con CO² al 5 % a 37 °C. Recolectar las células cuando se vuelvan confluentes y congelar en medio de congelación a 1x10e ⁷ células/ml como "células congeladas listas para el ensayo" y almacenarlas en nitrógeno líquido. Para ejecutar el ensayo, colocar 40.000 células HCT116/pocillo en una placa de cultivo tisular de 96 pocillos e incubar a 37 °C en un incubador de CO² al 5% durante la noche. Probar los compuestos a 10 concentraciones comenzando con una concentración máxima de 20 pM y utilizar un esquema de dilución de 1:3 (20 pM a 0,001 pM) con una concentración final de DMSO del 0,5 % (v/v). Añadir compuestos en 20 pl de medio de crecimiento sin suero e incubar a 37 °C durante dos horas. Eliminar el medio de crecimiento y añadir 50 pl de tampón de lisis a 1x [Tecnología de señalización celular, n.° 9803] que contiene proteasa de detención a 1x y cóctel de inhibidor de fosfato [Thermo, n.° 78441] a cada pocillo e incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos en un agitador. Transferir 4 pl de lisado celular de cada pocillo a los pocillos respectivos en una placa de ensayo de 384 pocillos [Perkin Elmer, n.° 6006280] y agregar 5 pl de mezcla de reacción [2000 partes de tampón de ensayo a 1x (Perkin Elmer, n.° A1000), 1 parte de anticuerpo de biotina-RSK1 (Santa Cruz, n.° sc-231-p-G), 4 partes de anticuerpo pRSK1 (Abcam, n.° ab32413), perlas de aceptor de 35 partes (Perkin Elmer, n.° 6760617R)]. Sellar la placa con un sello de lámina de aluminio (Beckman Coulter, n.° 538619) e incubar a temperatura ambiente durante dos horas. Añadir 2 pl de perlas de donador [20 partes de tampón de ensayo a 1x, 1 parte de perlas donadoras] a cada pocillo y sellar la placa con un sello de placa transparente (Applied Biosystems, n.° 4311971) e incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante dos horas. Medir la intensidad de la fluorescencia en cada pocillo leyendo las placas en el lector de placas ENVISION® (PerkinElmer). Obtener los valores de CI⁵⁰ mediante el ajuste del porcentaje de inhibición de pRSK1 [% de inhibición = 100 - [(compuesto de prueba - Mín media) / (Máx media-Mín media X 100] y datos de concentración de diez puntos a una ecuación logística no lineal de 4 parámetros (Abase ecuación 205) utilizando ACTIVITYBASE® 7.3 (ID Business Solutions Limited).

Los compuestos ejemplificados dentro del ámbitode la invención se ensayan en este ensayo sustancialmente como se describe anteriormente. Los resultados de este ensayo demuestran que todos los compuestos ejemplificados inhiben la fosforilación del sustrato ERK (RSK) en células tumorales, con valores de CI⁵⁰ menores de 3 pM. Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 tiene un valor de CI ⁵⁰ de 0,429 pM (± 0,173, n=8).

Ensayo de inhibición de la diana in vivo (IVTI) (ensayo de ELISA de pRSK1)

El fin de este ensayo es medir la capacidad de un compuesto de ensayo para inhibir la fosforilación del sustrato ERK1/2 en un modelo animal. Implantar hembras de ratones desnudos atímicos (22-25 g) de Harlan Laboratories con 5x10e ⁶ células de cáncer colorrectal HCT116 (ATCC, n.° CCL-247) subcutáneamente en la región del flanco derecho en 200 pl de solución salina equilibrada de Hank 1:1 (HBSS) Solución Matrigel. Medir el crecimiento del tumor y el peso corporal dos veces por semana comenzando desde el séptimo día tras la implantación. Cuando los tamaños tumorales alcanzan los 300-500 mm ³, asignar al azar los animales y agruparlos en grupos de cinco animales. Administrar dosis a los animales de cualquier compuesto a una dosis apropiada en un vehículo específico del compuesto o solo vehículo (vehículo: HEC al 1%/Tween 80 al 0,25 %/antiespumante al 0,05 % por vía oral y recolectar tumores y sangre en los intervalos de tiempo deseados después de la dosificación. Sacrificar a los animales con anestesia con isoflurano y dislocación cervical. Congelar al instante los tumores y almacenar a -80 °C hasta el procesamiento para los niveles de pRSK1 mediante un ensayo ELISA. Recolectar sangre en tubos de EDTA y centrifugar para plasma y congelar a -80 °C en una placa de 96 pocillos. Determinar exposiciones compuestas utilizando procedimientos convencionales.

Pulverizar los tumores en nitrógeno líquido y lisar en tampón de lisis a 1x (MSD, n.° R60TX-3) que contiene mezcla de proteasa de detención a 1x e inhibidor de fosfatasa (Thermo Scientific, n.° 0861281), fluoruro de fenilmetanosulfonilo (PMSF) a 1 mM (Sigma, n.° 93482-50ML-F) y metavanadato de sodio 1 pM (Sigma, n.° 590088) utilizando perlas Matrix D (MP Biomedical, n.° 6913-500) en una máquina FastPrep-24™ Cell Disrupter (MP Biomédica) en una habitación fría (4 °C). Transferir los lisados tumorales a tubos nuevos después de centrifugar a 14000 rpm durante 20 minutos a 4 °C. Determinar la concentración de proteína del tumor o los lisados celulares utilizando el kit de ensayo de proteínas Pierce BCA (n.° de cat 23225, Thermo Scientific). Este kit contiene tres componentes principales - (1) Reactivo A de BCA, que contiene carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, ácido bicinconínico y tartarato de sodio en hidróxido de sodio 0,1 M, (2) Reactivo B de BCA, que contiene sulfato cúprico al 4 %, y (3) ampollas convencionales de albúmina, que contienen 2 mg/ml en solución salina al 0,9 % y azida sódica al 0,05 %. En una placa de 96 pocillos, agregar el patrón de proteína de albúmina de suero bovino para un intervalo de concentración de 20-2000 ug/ml en 25 |jl en pocillos duplicados para generar una curva estándar. Agregar las células o los lisados de tumores diluidos en 25 j l de PBS a 1x para duplicar los pocillos de ensayo. Prepare el reactivo BCA de trabajo añadiendo Reactivo B al 2 % al Reactivo A (2 ml de B 98 ml de A), mezclar bien y añadir 200 j l a cada muestra o patrón. Mezclar bien, cubrir la placa e incubar a 37 °C durante 30 minutos. Enfriar la placa a temperatura ambiente y medir la absorbancia en o cerca de 562 nm en un lector de placas (lector de placas Envision de Perkin Elmer). Restar la medición de absorbancia promedio de 562 nm de las réplicas del patrón del blanco a las mediciones de 562 nm de todas las demás réplicas de muestra de patrón y desconocidas (lisado de tumor o célula). Prepare una curva estándar representando la medida promedio de 562 nm corregida con el blanco para cada estándar de albúmina de suero bovino en función de su concentración en jg/ml. Use la curva estándar para determinar la concentración de proteína de cada muestra desconocida utilizando logaritmos de ajuste de curva en Microsoft Excel. Congelar los lisados tumorales restantes a -80 °C. Utilizar una vez lisados de tumores congelados y descongelados para medir la expresión de pRSKI mediante un ELISA de tipo sándwich.

Recubrir las placas de 96 pocillos (Thermo, n.° 15042) durante la noche a 4 °C con 40 ng de anticuerpo RSK1 de cabra (Santa Cruz, n.° sc-231-G) e incubar a temperatura ambiente durante una hora y luego a 4 °C durante la noche. Lavar las placas tres veces con 300 j l de PBST (solución salina tamponada con fosfato (PBS) a 1x que contiene Tween-20 al 0,05 %), bloquear con 100 j l por pocillo de tampón de bloqueo (Thermo Scientific, n.° 37532) e incubar a temperatura ambiente durante dos horas. Lavar las placas tres veces con 300 j l de PBST y transferir 20 jg de lisado tumoral a cada pocillo e incubar a 4 °C durante la noche. Lavar las placas tres veces con 300 j l de PBST e incubar con 100 j l de pRSKI (T359/S363) anticuerpo de conejo (dilución a 1:1000 en tampón de bloqueo) a temperatura ambiente durante cuatro horas. Lavar las placas tres veces con 300 j l de PBST e incubar con 100 j l de anticuerpo secundario anti-conejo conjugado con HRP (GE Healthcare UK, n.° NA934V; diluido a 1:10000 en tampón de bloqueo). Incubar a temperatura ambiente durante una hora. Lavar las placas tres veces con 300 j l de PBST, añadir 100 j l de sustrato de máxima sensibilidad SUPERSIGNAL® ELISA Femto (Thermo, n.° 37075) e incubar en un agitador durante un minuto. Determinar la señal de luminiscencia utilizando un lector de placas ENVISION®. Determine el nivel de pRSK1 en cada lisado tumoral considerando los lisados tumorales de animales tratados con vehículo solo como el 100 %. Analice cada muestra por duplicado y usar números promedio para los cálculos. Calcule el TED ⁵⁰ usando Excel y XL Fit.

Un compuesto dentro del ámbito de la invención se ensaya en este ensayo sustancialmente como se describe anteriormente. Los resultados de este ensayo demuestran que el compuesto del Ejemplo 1 inhibe la fosforilación de RSK1 en un modelo de xenoinjerto tumoral. Por ejemplo, el compuesto del Ejemplo 1 tiene un valor TED ⁵⁰ de 16 mg/kg.

Modelos de xenoinjerto tumoral

El fin de este ensayo es medir la reducción en el volumen del tumor en respuesta a la administración del compuesto de ensayo. Expandir las células de cáncer colorrectal humano HCT116 (ATCC, n.° CCL-247) en cultivo, recolectar e inyectar 5x10e ⁶ células en 200 j l de solución de HBSS matrigel a 1:1 por vía subcutánea en el flanco posterior derecho de ratones hembra desnudos atímicos (22-25 g, Harlan Laboratories). Expandir las células cancerosas pancreáticas humanas MIA PACA-2 (ATCC, n.° CRL-1420) o las células de cáncer de pulmón no microcítico CALU-6 (ATCC, n.° HTB-56) o las células cancerosas colorrectales humanas COLO-205 (ATCC, n.° CCL -222) en cultivo, recolectar e inyectar 5x10e ⁶ células en 200 j l de solución de HBSS matrigel a 1:1 por vía subcutánea en el flanco posterior derecho de ratones hembra desnudos atímicos (22-25 g, Harlan Laboratories). Medir el crecimiento del tumor y el peso corporal dos veces por semana comenzando desde el séptimo día tras la implantación. Cuando los tamaños tumorales alcanzan los 200-400 mm ³, asignar al azar animales y agrupar en grupos de ocho a diez animales. Prepare el compuesto de ensayo en un vehículo apropiado (vehículo: h Ec al 1 %/ Tween 80 al 0,25 %/ antiespumante al 0,05 %) y administrar por sonda oral durante 14 a 21 días. La respuesta del tumor se determina mediante la medición del volumen del tumor realizada dos veces por semana durante el trascurso del tratamiento. El peso corporal se toma como una medida general de toxicidad.

Un compuesto dentro del ámbito de la invención se ensaya en este ensayo realizado sustancialmente como anteriormente. Se descubrió que el compuesto del Ejemplo 1 tiene valores delta T/C% como se proporciona en la Tabla 2 a continuación. Estos resultados indican que el compuesto del Ejemplo 1 demuestra una actividad antitumoral significativa en varios modelos de xenoinjerto de tumor humano, incluido e1HCT116, MIA PACA-2, CALU-6 y COLO-205.

Tabla 2: Eficacia del ejemplo 1 en modelos de xenoinjerto

continuación

Estudios de Combinación in vivo

Debido a la heterogeneidad del tumor, la terapia de combinación ha llegado a ser esencial en ciertos tipos de tratamiento del cáncer para una terapia eficaz o para superar la resistencia adquirida. Se plantea la hipótesis de que una combinación de terapias dirigidas tiene el potencial de ser más eficaz para reducir o incluso detener los cánceres. En ese contexto, el compuesto del Ejemplo 1 se analiza para determinar la inhibición del crecimiento tumoral en combinación con un compuesto inhibidor de pan-RAF (véase el documento WO 2013/134243, 1-(3,3-dimetilbutil)-3-(2-fluoro-4-metil-5-(7-metil-2-(metilamino)pirido[2,3-d]pirimidin-6-il)fenil)urea, en lo sucesivo "el compuesto inhibidor de pan-RAF"), un compuesto inhibidor de CDK4/6 (véase el documento W o 2010/075074, [5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-piridin-2-il]-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il)-pirimidin-2-il]-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo), en lo sucesivo en el presente documento "el compuesto inhibidor de CDK4/6"), o DC101 (véase, por ejemplo, Witte L., y col. Cancer Metastasis Rev., 17, 155-161, 1998, anticuerpo monoclonal de rata dirigido contra VEGFR2 de ratón que se puede usar en experimentos como sustituto en ratones para un Ab anti-VEGFR2, preferentemente ramucirumab (véase el documento WO 2003/075840, también conocido como Cyramza®, IMC-1121b, Número de registro CAS 947687-13-0)). Más específicamente, el compuesto del Ejemplo 1 se prueba en combinación con el compuesto inhibidor de pan-RAF o el compuesto inhibidor de CDK4/6 en HCT116, Un modelo de xenoinjerto de cáncer colorrectal mutante KRAS. Asimismo, el compuesto del Ejemplo 1 se prueba en combinación con el compuesto inhibidor de CDK4/6 o DC101 en NCI-H441, A549, y NCI-H2122, modelos de xenoinjerto de cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) de mutantes de KRAS.

El estudio de eficacia de combinación de HCT116 se realiza en ratas atímicas desnudas. Expandir las células de cáncer colorrectal humano HCT116 (ATCC, n.° CCL-247) en cultivo, recolectar e inyectar 5x10e 6 células en 200 pl de solución de HBSS matrigel a 1:1 por vía subcutánea en el flanco posterior derecho de ratas desnudas NIH hembra (120-145 gm, Taconic Farms). Medir el crecimiento del tumor y el peso corporal dos veces por semana comenzando desde el séptimo día tras la implantación. Cuando el tamaño medio de los tumores alcanza 200-300 mm 3, asignar al azar los animales y agrupar en grupos de cinco a siete animales. Preparar el compuesto de ensayo en un vehículo apropiado (véase a continuación) y administrar por sonda oral durante 21 a 28 días. La respuesta del tumor se determina mediante la medición del volumen del tumor realizada dos veces por semana durante el trascurso del tratamiento. El vehículo usado en este estudio es HEC al (hidroxietil celulosa) al 1 %/ Tween® 80 al 0,25 %/ antiespumante al 0,05 %. El compuesto del Ejemplo 1 y el compuesto inhibidor de pan-RAF se formulan en HEC al 1 %/Tween® 80 al 0,25 %/ antiespumante al 0,05 %. El compuesto inhibidor de CDK4/6 se formula en HEC al 1% en tampón de fosfato de sodio 25 mM, a pH 2. La administración del compuesto del Ejemplo 1 a 10 mpk y 20 mpk QD da como resultado una actividad de agente único del 52 % y del 64 % de inhibición del crecimiento tumoral respectivamente (Tabla 3). En cambio, la administración del compuesto inhibidor pan-RAF a 10 mpk y 20 mpk BID da como resultado una actividad de agente único del 29 % y 68 %, respectivamente. Todos los tratamientos son estadísticamente significativos (p <0,05) del control del vehículo, excepto el compuesto inhibidor de pan-RAF a 10 mpk BID. La administración del compuesto del Ejemplo 1 a 10 mpk, QD en combinación con el compuesto inhibidor de pan-RAF a 10 mpk, BID da como resultado un 94 % de inhibición del crecimiento tumoral (p <0,001) y el resultado de la combinación es "sinérgico", según lo calculado por el procedimiento de independencia de Bliss (Tabla 3). Esta combinación parece ser tolerada ya que no hay una pérdida significativa de peso corporal. La administración del compuesto del Ejemplo 1 a 10 mpk, QD en combinación con el compuesto inhibidor de pan-RAF a 20 mpk, BID también produce una inhibición significativa del crecimiento del tumor (p <0,05) (95 %) y el resultado de la combinación es "aditivo", según lo calculado por el procedimiento de independencia de Bliss (Tabla 3). Esta combinación parece ser tolerada ya que no hay una pérdida significativa de peso corporal. En el mismo estudio, la administración del compuesto del Ejemplo 1 a 10 mpk, QD con el compuesto inhibidor de CDK4/6 a 20 mpk QD da como resultado una inhibición del crecimiento del tumor del 98 %, mientras que la eficacia de un agente único del compuesto del Ejemplo 1 y el compuesto inhibidor de CDK4/6 son el 52 % y el 76 % de inhibición del crecimiento del tumor, respectivamente. La combinación de estos dos agentes muestra un resultado "aditivo" estadísticamente significativo, calculado por el procedimiento de independencia de Bliss (Tabla 3). Esta combinación parece ser tolerada ya que no hay una pérdida significativa de peso corporal. Estos resultados sugieren que la combinación del compuesto del Ejemplo 1 con el compuesto inhibidor de pan-RAF o el compuesto inhibidor de CDK4/6 puede proporcionar un mayor beneficio a los pacientes que tienen cáncer colorrectal mutante KRAS.

Tabla 3: Estudios de combinación del compuesto del Ejemplo 1 con el compuesto inhibidor de pan-RAF, o el compuesto inhibidor de CDK4/6 en el modelo de xenoinjerto de cáncer colorrectal KRAS mutante de HCT116

La eficacia de la combinación también se prueba en tres modelos de xenoinjerto de NSCLC de mutantes de KRAS que incluyen A549 (KRAS_G12S) en ratones SCID, así como NCI-H441 (KRAS_G12V) y NCI-H2122 (KRAS_G12C) en ratones atímicos. Ampliar células de cáncer de pulmón no microcítico humano NCI-H441 (ATCC, n.° CRL-5807) y NCI-H2122 (ATCC, n.° Cr L-5985) en cultivo, recolectar e inyectar 5x10e6 células en 200 pl de solución de HBSS matrigel a 1:1 por vía subcutánea en el flanco posterior derecho de ratones atímicos hembras (20-22 gm, Harlan Laboratories). Expandir las células humanas de cáncer de pulmón no microcítico A549 (ATCC, n.° CCl-185) en cultivo, recolectar e inyectar 5x10e 6 células en 200 pl de solución de HBSS matrigel a 1:1 por vía subcutánea en el flanco posterior derecho de ratones hembra SCID CB-17 (18-20 gm, Taconic Farms). Para todas las líneas celulares, medir el crecimiento del tumor y el peso corporal dos veces por semana comenzando desde el séptimo día trás la implantación. Cuando el tamaño medio de los tumores alcanza 200-300 mm 3, asignar al azar los animales y agrupar en grupos de cinco a siete animales. Preparar el compuesto de ensayo en un vehículo apropiado (véase a continuación) y administrar por sonda oral (compuesto del Ejemplo 1 y el compuesto inhibidor de CDK4/6) o por vía intraperitoneal (DC101) durante 21 a 28 días. La respuesta del tumor se determina mediante la medición del volumen del tumor realizada dos veces por semana durante el trascurso del tratamiento. El vehículo utilizado en estos estudios es HEC al 1 %/ Tween® 80 al 0,25 %/ antiespumante al 0,05 %. El compuesto del Ejemplo 1 está formulado en HEC al 1 %/ Tween® 80 al 0,25 %/ antiespumante al 0,05 % y el compuesto inhibidor de CDK4/6 se formula en HEC al 1 % en tampón de fosfato de sodio 25 mM, a pH 2. La administración del compuesto del Ejemplo 1 como agente único a 50 mpk da como resultado una inhibición del crecimiento tumoral del 41 % y del 91 % en los tumores NCI-H2122 y A549, respectivamente; y lleva a un 101 % de inhibición del crecimiento tumoral (es decir, 1 % de regresión tumoral) en tumores NCI-H441. La administración del compuesto inhibidor de CDK4/6 como agente único a 50 mpk da como resultado un 53 %, 51 % y 81 % de inhibición del crecimiento tumoral en los modelos NCI-H2122, A549 y NCI-H441, respectivamente. Asimismo, la combinación del compuesto del Ejemplo 1 (50 mpk) con el compuesto inhibidor de CDK4/6 (50 mpk) da como resultado un 151 % (es decir, regresión del 51 %) y un 147 % (es decir, regresión del 47 %) de inhibición del crecimiento tumoral en los tumores A549 y NCI-H441, respectivamente; y un 82 % de inhibición del crecimiento tumoral en tumores NCI-H2122. El resultado de la combinación en los tres modelos de tumores es "aditivo", según lo calculado por el procedimiento de independencia de Bliss (Tabla 4). En general, todos los tratamientos parecen ser tolerados en estos estudios, como lo indica una pérdida de peso corporal no significativa. En el mismo modelo de xenoinjerto NCI-H441, DC101 en tampón fosfato también se administra por vía intraperitoneal dos veces por semana (BIW) como agente único o en combinación con el compuesto del Ejemplo 1, a 50 mpk, QD durante 28 días. La administración de DC101 a 20 mpk BIW da como resultado una actividad de un solo agente del 102 % de inhibición del crecimiento tumoral (es decir, regresión del 2 %). La combinación del compuesto del Ejemplo 1 a 50 mpk, QD con DC101 a 20 mpk, BIW da como resultado una inhibición del crecimiento tumoral del 146 % (es decir, regresión del 46 %). El resultado de esta combinación es "aditivo", calculado por el procedimiento de Independencia de Bliss (Tabla 4). Esta combinación parece ser tolerada ya que no hay una pérdida significativa de peso corporal. Estos resultados sugieren que la combinación del compuesto del Ejemplo 1 con el compuesto inhibidor de CDK4/6 o un anticuerpo anti-VEGFR2 puede proporcionar un mayor beneficio a los pacientes con cáncer de pulmón no microcítico con mutación KRAS.

Tabla 4: Estudios de combinación del compuesto del Ejemplo 1 con el compuesto inhibidor de CDK4/6 o DC101 en modelos de xenoinjerto de cáncer de pulmón no microcítico mutantes KRAS

(continuación)

El análisis del volumen del tumor se basa en la transformación de Log 10 y un ANOVA de medidas repetidas con una estructura de covarianza de potencia especial

*: significativo (p <0,05)

**El efecto estadístico de la combinación de dos agentes está determinado por el procedimiento de independencia de Bliss: En primer lugar, un modelo de mediciones repetidas se ajusta para registrar el volumen del tumor en función del grupo, el tiempo y el grupo por tiempo. Luego, las declaraciones de contraste se utilizan para probar un efecto de interacción en cada punto temporal. La respuesta aditiva esperada (EAR) para la combinación se calcula en la escala de volumen del tumor como, Volumen EAR = V1 * V2 / V0, donde V0, V1 y V2 son los volúmenes medios estimados de tumores para el control del vehículo, tratamiento 1 solo, y tratamiento 2 solo, respectivamente. Si la prueba de interacción es significativa (p <0,05), el efecto de combinación se declara sinérgico si el volumen de combinación observado es menor que el volumen de EAR, antagonista si el volumen de combinación observado es mayor que el volumen EAR, o aditivo de lo contrario, a las dosis y regímenes que se ensayan.

NA: No aplicable

Delta T/C% se calcula cuando el volumen del tumor final en un grupo tratado está en o por encima del volumen basal del tumor. La fórmula es 100 * (T-Tq)/(C-Cq), donde T y C son volúmenes tumorales promedio final en el grupo tratado o de control, respectivamente. Tq y Cq son los volúmenes tumorales medios iniciales en esos grupos.

Las condiciones de partida (aleatorización) el día 11 (HCT116), el día 25 (NCI-H441), el día 22 (A549), el día 18 (NCI-H2122) se utilizan para calcular el % de cambio de T/C.

Dosis durante 28 días en todos los estudios.

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula:

en la que:

R1 es

R2 y R3 son metilo o R2 y R3 pueden tomarse juntas para formar ciclopropilo;

R4 es hidrógeno, metilo, cloro, flúor o trifluorometilo; y

R5 es

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1 en el que R2 y R3 son independientemente metilo.

3. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 2 en el que R4 es hidrógeno.

4. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 3 en el que R1 es

5. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 4 en el que R5 es

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 que es 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metiMH-pirazol1-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 6 que es 6,6-dimetil-2-{2-[(1-metiMH-pirazol-5-il)amino]pirimidin-4-il}-5-[2-(morfolin-4-il)etil]-5,6-dihidro-4H-tieno[2,3-c]pirrol-4-ona.

8. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto o la sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

9. El compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en terapia.

10. El compuesto o sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en el tratamiento contra el cáncer.

11. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 6 para su uso en la administración en combinación simultánea, separada o secuencial con ramucirumab en el tratamiento contra el cáncer.

12. El compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 6 para su uso en la administración en combinación simultánea, separada o secuencial con [5-(4-etil-piperazin-1-ilmetil)-piridin-2-il]-[5-fluoro-4-(7-fluoro-3-isopropil-2-metil-3H-benzoimidazol-5-il)-pirimidin-2-il]-amina o una sal farmacéuticamente aceptable en el tratamiento contra el cáncer.

13. El compuesto o sal para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10-12 en el que cáncer se selecciona entre el grupo que consiste en melanoma, cáncer colorrectal, cáncer pancreático y cáncer de pulmón de células no pequeñas.

14. El compuesto o sal para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que el cáncer es cáncer colorrectal.

15. El compuesto o sal para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que cáncer es cáncer pancreático.

16. El compuesto o sal para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que el cáncer es cáncer de pulmón de células no pequeñas.