KR20210146956A

KR20210146956A - 피롤로헤테로고리형 유도체, 이의 제조 방법, 및 의약에서 이의 응용

Info

Publication number: KR20210146956A
Application number: KR1020217033781A
Authority: KR
Inventors: 신 리; 궈동 카이; 팡 양; 펑 허; 웨이캉 타오
Original assignee: 지앙수 헨그루이 메디슨 컴퍼니 리미티드; 샹하이 헨그루이 파마수티컬 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2020-03-27
Publication date: 2021-12-06
Also published as: EP3950690A4; JP2022528083A; MX2021011823A; CN113544131B; EP3950690A1; WO2020200069A1; BR112021018924A2; TW202102505A; AU2020251621A1; US20220185818A1; CN113544131A; CA3135070A1

Abstract

본 출원은 피롤로헤테로고리형 유도체, 이의 제조 방법, 및 의약에서 이의 응용을 제공한다. 구체적으로, 본 출원은 식(I)로 표시되는 바와 같은 신규한 피롤로헤테로고리형 유도체, 이의 제조 방법, 이 유도체를 포함하는 약학 조성물, 및 치료제, 특히, ERK 억제제로서 이 유도체의 응용을 제공하고, 여기에서 식의 치환기는 설명에 있는 것과 동일한 정의를 갖는다.

Description

피롤로헤테로고리형 유도체, 이의 제조 방법, 및 의약에서 이의 응용

본 개시내용은 의약(medicine) 분야에 속하고, 피롤로헤테로고리형 유도체, 이의 제조 방법, 및 의약에서 이의 응용에 관한 것이다. 특히, 본 개시내용은 식(I)의 피롤로헤테로고리형 유도체, 이를 제조하기 위한 방법, 이를 포함하는 약학 조성물, ERK 매개 질병 및 장애를 치료하거나 MAPK-ERK 신호 경로를 억제하기 위한 ERK 억제제로서 이의 용도에 관한 것이다.

정상 세포의 증식, 분화, 대사 및 세포 사멸(apoptosis)은 생체내 세포 신호 전달 경로에 의해 엄격하게 조절된다. 미토겐 활성화 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase, MAPK)는 신호 전달 경로에서 매우 중요한 역할을 하고, 세포외 신호 조절 키나아제(extracellular signal regulated kinase, ERK)는 MAPK 계열의 구성원이다. RAS-RAF-MEK-ERK 단계를 통해, 외인성 자극 신호(exogenous stimulation signal)가 ERK로 전달되고, 활성화된 ERK가 세포 핵으로 운반되어 전사 인자(transcription factor)의 활성을 조절함으로써, 세포 증식, 분화 및 세포 사멸과 같은 세포의 생물학적 기능을 조절하거나, 세포질(cytoplasm) 내의 세포 골격 성분의 인산화(phosphorylation)에 의해 세포 형태(cell morphology)의 조절 및 세포 골격의 재분배에 관여한다.

RAS 및 RAF 유전자의 돌연변이는 MAPK-ERK 신호전달 경로의 지속적인 활성화를 일으켜서 악성 형질전환(malignant transformation) 및 세포의 비정상적인 증식을 촉진하고, 결국 종양을 생성한다(Roberts PJ et al., Oncogene, 2007, 26(22), 3291-3310). MEK 억제제와 B-RAF 억제제의 조합은 종양 성장에 대한 B-RAF 억제제의 효과를 더욱 향상시킬 수 있고, BRAFV600E와 V600K 돌연변이가 있는 흑색종 환자의 무병 진행(disease-free progression) 및 전체 생존율을 상당히 개선할 수 있다(Frederick DT et al., Clinical Cancer Research, 2013.19(5), 1225-1231). B-RAF/MEK 억제제의 조합은 종양을 억제할 수 있지만, 이들의 효과는 단기적이다. 대부분의 환자는 2~18개월 이내에 약물 내성이 발생하고, 종양은 더욱 악화될 것이다. B-RAF/MEK 억제제에 대한 내성의 메커니즘은 매우 복잡하고, 이는 대부분 ERK 신호전달 경로의 재활성화와 직접적으로 관련되어 있다(Smalley I et al., Cancer Discovery, 2018, 8(2), 140-142). 따라서, 새로운 ERK 억제제의 개발은 MAPK 신호전달 경로에 돌연변이가 있는 환자뿐만 아니라, B-RAF/MEK 억제제에 내성이 있는 환자에 대해서도 효과적이다.

B-RAF/MEK 억제제는 종양 성장을 억제할 뿐만 아니라, 종양의 면역 미세 환경을 조절한다. B-RAF/MEK 억제제는 종양 특이적 항원의 발현을 향상시키고, 항원 특이적 T 세포에 의한 종양의 인식과 사멸을 개선하고, 면역 세포의 이동(migration)과 침윤(infiltration)을 촉진할 수 있다. 동물 모델에서, B-RAF/MEK 억제제로 처리한 후, 종양 조직에서 PD-L1의 발현이 증가한다. 체크포인트 분자(checkpoint molecule)에 대한 항체(PD-1 항체, CTLA4 항체와 같은)와 조합시, 단독으로 사용되는 B-RAF/MEK 억제제보다 종양 성장을 억제하는 데 더욱 효과적이다(Boni A et al., Cancer Research, 2010, 70(13), 5213-5219). 연구에 따르면, ERK 억제제는 B-RAF/MEK 억제제와 유사하고, 체크포인트 항체와 이들의 조합은 종양 미세 환경을 조절하고 세포 독성 T 세포의 기능을 개선하며 종양 성장을 억제하는 효과를 이룰 수 있다.

현재, 많은 화합물이 개발되었다. 이들 중에서, Biomed Valley Discoveries에 의해 개발된 BVD-523은 임상 II 단계에 있고, Merck에 의해 개발된 MK-8353과 Astex에 의해 개발된 Astex-029는 임상 I 단계에 있다. 관련 특허는 WO1999061440A1, WO2001056557A2, WO2001056993A2, WO2001057022A2, WO2002022601A1, WO2012118850A1, WO2013018733A1, WO2014179154A2, WO2015103133A1, WO2016192063A1, WO2017180817A1, 및 WO2018049127A1을 포함한다.

본 개시내용의 목적은, 식(I)의 화합물:

또는 이의 입체 이성질체(stereoisomer), 토토머(tautomer), 메소머(mesomer), 라세미체(racemate), 거울상 이성질체(enantiomer), 부분입체 이성질체(diastereomer), 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염(pharmaceutically acceptable salt)을 제공하는 것이고,

상기 식에서:

R¹은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 아미노알킬 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬은 NR⁷R⁸, 알콕시, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;

각각의 R²는 동일하거나 상이하고, 각각은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R³은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 알킬, 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시, 히드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고;

R⁴는 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

각각의 R⁵는 동일하거나 상이하고, 각각은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R⁶은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

R⁷과 R⁸은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자, 알킬, 히드록시알킬 및 할로알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;

m은 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

n은 0, 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

z는 0, 1, 2, 3 및 4로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

Q는 0, 1 및 2로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R¹은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 아미노알킬 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물은, 식(I-P)의 화합물:

또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이고,

상기 식에서, R¹ 내지 R⁶, m, n, z 및 Q는 식(I)에서 정의된 바와 같다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R⁴는 수소 원자이다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, n은 1 또는 2이다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물은, 식(II)의 화합물:

상기 식에서, R¹ 내지 R⁶, m, z 및 Q는 식(I)에서 정의된 바와 같다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물은, 식(II-P)의 화합물:

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R¹은 수소 원자, 알킬, 히드록시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R¹은 수소 원자, C_1-6 알킬, 히드록시, 아미노 C_1-6 알킬, C_1-6 알킬아미노 C_1-6 알킬 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 더 바람직하게는, R¹은 수소 원자, 메틸, 히드록시메틸, 아미노메틸 및 메틸아미노메틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R¹은 수소 원자, 알킬, 히드록시, 아미노알킬 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R¹은 수소 원자, C_1-6 알킬, 히드록시, 아미노 C_1-6 알킬 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 더 바람직하게는, R¹은 수소 원자, 메틸, 히드록시메틸 및 아미노메틸로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물은, 식(III)의 화합물:

상기 식에서:

p는 0, 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 1이고;

R², R³, R⁵, R⁶, m, n, z 및 Q는 식(I)에서 정의된 바와 같다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물은, 식(III-P)의 화합물:

상기 식에서:

R², R³, R⁵, R⁶, m, n, z, p 및 Q는 식(III)에서 정의된 바와 같다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R²는 수소 원자, 할로겐 및 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R²는 수소 원자, 할로겐 및 C_1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 더 바람직하게는, R²는 C_1-6 알킬이다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R³은 알킬, 히드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 헤테로아릴은 각각 알킬, 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고; 바람직하게는, R³은 C_1-6 알킬, C_1-6 히드록시알킬, C_3-6 시클로알킬, 3 내지 8 원 헤테로시클릴 및 5 내지 10 원 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 C_1-6 알킬, C_3-6 시클로알킬, 3 내지 8 원 헤테로시클릴 및 5 내지 10 원 헤테로아릴은 각각 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R³은 헤테로아릴이고, 여기에서 헤테로아릴은 알킬, 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고; 바람직하게는, R³은 5 내지 10 원 헤테로아릴이고, 여기에서 5 내지 10 원 헤테로아릴은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고; 바람직하게는, R³은 피라졸릴이고, 여기에서 피라졸릴은 C_1-6 알킬, 바람직하게는 메틸로 선택적으로 치환된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R⁵는 수소 원자, 알킬, 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R⁵는 수소 원자, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, R⁶은 수소 원자이다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, m은 1 또는 2이다.

본 개시내용의 바람직한 구현예에서, 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, z는 0 또는 1이다.

본 개시내용의 전형적인 화합물은 다음의 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다:

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 식(IIIA)의 화합물:

또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이고,

상기 식에서:

R_w는 히드록시 보호기이고;

R², R³, R⁵, R⁶, m, n, p, Q 및 z는 식(III)에서 정의된 바와 같다.

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 식(III-PA)의 화합물:

상기 식에서:

R_w는 히드록시 보호기이고; 그리고

본 개시내용의 식(IIIA)의 전형적인 화합물은 다음의 화합물 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다:

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 다음의 단계:

산성 조건하에 식(IIIA)의 화합물로부터 히드록시 보호기 R_w를 제거하여 식(III)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 식(III)의 화합물을 제조하기 위한 방법에 관한 것이고,

상기 식에서:

히드록시 보호기 R_w는 바람직하게는 TBS이고; 그리고

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 다음의 단계:

산성 조건하에 식(III-PA)의 화합물로부터 히드록시 보호기 R_w를 제거하여 식(III-P)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 식(III-P)의 화합물을 제조하기 위한 방법에 관한 것이고,

상기 식에서:

히드록시 보호기 R_w는 바람직하게는 TBS이고; 그리고

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 치료 유효량의 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과, 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 ERK를 억제하기 위한 약제(medicament)의 제조에서 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 암, 염증, 또는 기타 증식성 질병, 바람직하게는 암을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에서 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물의 용도에 관한 것이고; 여기에서 암은 흑색종(melanoma), 간암(liver cancer), 신장암(kidney cancer), (비소세포 폐암 또는 소세포 폐암과 같은) 폐암(lung cancer), 비인두 암(nasopharyngeal cancer), 대장암(colorectal cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 난소암(ovarian cancer), 유방암(breast cancer), 방광암(bladder cancer), 전립선암(prostate cancer), 백혈병(leukemia), 두경부 편평상피 세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 자궁경부 암종(carcinoma　of　uterine　cervix), 갑상선암(thyroid cancer), 림프종(lymphoma), 육종(sarcoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 뇌종양(brain tumor), {다발성 골수종(multiple myeloma)과 같은} 골수종(myeloma), 성상세포종(astrocytoma) 및 신경교종(glioma)으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용은 또한 치료 유효량의 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, ERK를 억제하기 위한 방법에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 치료 유효량의 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, ERK 매개 질병을 치료하거나 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 치료 유효량의 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암, 염증, 또는 기타 증식성 질병, 바람직하게는 암을 치료하거나 예방하기 위한 방법에 관한 것이고, 여기에서 암은 흑색종, 간암, 신장암, (비소세포 폐암 또는 소세포 폐암과 같은) 폐암, 비인두 암, 대장암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 유방암, 방광암, 전립선암, 백혈병, 두경부 편평상피 세포 암종, 자궁경부 암종, 갑상선암, 림프종, 육종, 신경모세포종, 뇌종양, (다발성 골수종과 같은) 골수종, 성상세포종 및 신경교종으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

본 개시내용은 또한 약제로서 사용하기 위한 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 ERK 억제제로서 사용하기 위한 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 ERK 매개 질병을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.

본 개시내용은 또한 암, 염증, 또는 기타 증식성 질병, 바람직하게는 암을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 식(I) 또는 식(II) 또는 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이고; 여기에서 암은 흑색종, 간암, 신장암, (비소세포 폐암 또는 소세포 폐암과 같은) 폐암, 비인두 암, 대장암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 유방암, 방광암, 전립선암, 백혈병, 두경부 편평상피 세포 암종, 자궁경부 암종, 갑상선암, 림프종, 육종, 신경모세포종, 뇌종양, (다발성 골수종과 같은) 골수종, 성상세포종 및 신경교종으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

활성 화합물은 임의의 적절한 경로에 의해 투여에 적합한 형태로 제조될 수 있고, 활성 화합물은 바람직하게는 단위 용량 형태(unit dose form), 또는 환자가 단일 용량으로 자가 투여할 수 있는 형태이다. 본 개시내용의 화합물 또는 조성물의 단위 용량은 정제, 캡슐, 카셰(cachet), 병에 넣은 시럽(bottled syrup), 분말, 과립, 로젠지(lozenge), 좌약, 재생 분말 또는 액체 제제(liquid formulation)의 형태로 표현될 수 있다.

본 개시내용의 치료 방법에 사용되는 화합물 또는 조성물의 투여량(dosage)은 일반적으로 질병의 중증도(severity), 환자의 체중 및 화합물의 상대적인 효능에 따라 달라질 것이다. 그러나, 일반적인 지침으로서, 적합한 단위 용량은 0.1 내지 1000 mg일 수 있다.

활성 화합물 이외에, 본 개시내용의 약학 조성물은 또한 충전제(희석제), 결합제, 습윤제, 붕해제(disintegrant), 부형제 등을 포함하는 하나 이상의 보조제를 포함할 수 있다. 투여 방식에 따라, 조성물은 0.1 내지 99 중량%의 활성 화합물을 포함할 수 있다.

활성 성분을 함유하는 약학 조성물은 경구 투여에 적합한 형태, 예를 들어, 정제, 트로키(troche), 로젠지(lozenge), 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀션, 경질 또는 연질 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르(elixir)일 수 있다. 경구 조성물은 약학 조성물의 제조를 위해 이 기술분야의 임의의 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 만족스럽고 입에 맞는 약학 제제(pharmaceutical formulation)를 제공하기 위해 감미료(sweetener), 향미제(flavoring agent), 착색제(colorant) 및 방부제(preservative)로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분(들)을 함유할 수 있다. 정제는 정제의 제조에 적합한 무독성의 약학적으로 허용 가능한 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유한다.

수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합되어 있는 활성 성분을 포함한다. 수성 현탁액은 또한 에틸 파라벤 또는 n-프로필 파라벤과 같은 하나 이상의 방부제, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제 및 하나 이상의 감미료를 포함할 수 있다.

오일 현탁액은 활성 성분을 식물성 오일에 현탁시켜 제제화될 수 있다. 오일 현탁액은 증점제를 함유할 수 있다. 전술한 감미료와 향미제가 첨가되어 입에 맞는 제제를 제공할 수 있다.

분산제 또는 습윤제, 현탁화제 또는 하나 이상의 방부제와 혼합되어 있는 활성 성분은, 물을 첨가하여 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 또는 과립으로서 제조될 수 있다. 적합한 분산제 또는 습윤제와 현탁화제는 위에서 이미 언급한 것들에 의해 예시된다. 감미료, 향미제 및 착색제와 같은 추가 부형제가 또한 첨가될 수 있다. 이들 조성물은 아스코르브산과 같은 항산화제를 첨가하여 보존될 수 있다.

본 개시내용의 약학 조성물은 또한 수중유 에멀션(oil-in-water emulsion)의 형태일 수 있다.

약학 조성물은 주사 가능한 멸균 수용액의 형태일 수 있다. 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클(vehicle) 또는 용매는 물, 링거액, 또는 등장성 염화나트륨 용액이다. 주사 가능한 멸균 제제는 활성 성분이 오일 상에 용해되어 있는 주사 가능한 멸균 수중유 마이크로에멀션(oil-in-water micro-emulsion)일 수 있다. 예를 들어, 활성 성분은 대두유(soybean oil)와 레시틴(lecithin)의 혼합물에 용해된다. 그 다음, 오일 용액이 물과 글리세롤의 혼합물에 첨가되고, 가공되어, 마이크로에멀션을 형성한다. 주사 가능한 용액 또는 마이크로에멀션은 국소 볼루스 주사(local bolus injection)에 의해 환자의 혈류 안으로 도입될 수 있다. 대안적으로, 용액과 마이크로에멀션은 본 발명의 화합물의 일정한 순환 농도를 유지하는 방식으로 투여되는 것이 바람직하다. 이러한 일정한 농도를 유지하기 위해, 연속 정맥내 전달 장치(continuous intravenous delivery device)가 사용될 수 있다. 이러한 장치의 예는, Deltec CADD-PLUS. TM. 5400 정맥내 주사 펌프이다.

약학 조성물은 근육내 및 피하 투여를 위해 주사 가능한 멸균 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 현탁액은 공지된 기술에 따라 위에 기술된 바와 같이 적합한 분산제 또는 습윤제와 현탁화제로 제제화될 수 있다. 주사 가능한 멸균 제제는 또한 무독성의 비경구적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매로 제조된 주사 가능한 멸균 용액 또는 현탁액일 수 있다. 더욱이, 멸균 고정 오일(fixed oil)이 용매 또는 현탁화 매질(suspending medium)로서 용이하게 사용될 수 있다.

본 개시내용의 화합물은 직장 투여를 위한 좌약의 형태로 투여될 수 있다. 이들 약학 조성물은 상온에서는 고체이지만 직장 내에서는 액체인 적합한 비자극성 부형제와 약물을 혼합함으로써 제조되고, 이에 따라 직장 내에서 용해되어 약물을 방출한다. 이러한 재료는 코코아 버터, 글리세린 젤라틴, 수소 첨가 식물성 오일, 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜과 폴리에틸렌 글리콜의 지방산 에스테르의 혼합물을 포함한다.

약물의 투여량은 다음의 요인: 특정 화합물의 활성, 환자의 연령, 환자의 체중, 환자의 일반적인 건강, 환자의 행동, 환자의 식이요법, 투여 시간, 투여 경로, 배설률(excretion rate), 약물 조합(drug combination) 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 다양한 요인에 의존한다는 것이 당업자에게 잘 알려져 있다. 또한, 치료 방식, 식(I)의 화합물의 1일 용량, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유형과 같은 최적의 치료는 전통적인 치료 요법(therapeutic regimen)에 의해 확인될 수 있다.

용어 정의

달리 명시되지 않는 한, 명세서와 청구 범위에 사용되는 용어는 아래 기술된 의미를 갖는다.

"알킬"이라는 용어는 1 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 선형(straight) 또는 분지형 사슬 기, 바람직하게는 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 알킬, 더 바람직하게는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬인, 포화 지방족 탄화수소기를 나타낸다. 비제한적인 예는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2,3-디메틸부틸, n-헵틸, 2-메틸헥실, 3-메틸헥실, 4-메틸헥실, 5-메틸헥실, 2,3-디메틸펜틸, 2,4-디메틸펜틸, 2,2-디메틸펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2-에틸펜틸, 3-에틸펜틸, n-옥틸, 2,3-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 2,2-디메틸헥실, 3,3-디메틸헥실, 4,4-디메틸헥실, 2-에틸헥실, 3-에틸헥실, 4-에틸헥실, 2-메틸-2-에틸펜틸, 2-메틸-3-에틸펜틸, n-노닐, 2-메틸-2-에틸헥실, 2-메틸-3-에틸헥실, 2,2-디에틸펜틸, n-데실, 3,3-디에틸헥실, 2,2-디에틸헥실, 및 이들의 다양한 분지형 이성질체를 포함한다. 더 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 저급 알킬이고, 비제한적인 예는, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, sec-부틸, n-펜틸, 1,1-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, n-헥실, 1-에틸-2-메틸프로필, 1,1,2-트리메틸프로필, 1,1-디메틸부틸, 1,2-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸, 2-에틸부틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 2,3-디메틸부틸 등을 포함한다. 알킬은 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환시, 치환기(들)는 임의의 이용 가능한 연결 지점에서 치환될 수 있다. 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 히드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오 및 옥소로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.

"시클로알킬"이라는 용어는 3 내지 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 3 내지 12개의 탄소 원자, 더 바람직하게는 3 내지 8개의 탄소 원자, 및 가장 바람직하게는 3 내지 6개의 탄소 원자(예를 들어, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자)를 갖는 포화 또는 부분적으로 불포화된 단일고리형(monocyclic) 또는 다중고리형(polycyclic) 탄화수소 치환기를 나타낸다. 단일고리형 시클로알킬의 비제한적인 예는, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헥사디에닐, 시클로헵틸, 시클로헵타트리에닐, 시클로옥틸 등을 포함하고, 바람직하게는 시클로알킬을 포함한다. 다중고리형 시클로알킬은 스피로 고리(spiro ring), 접합 고리(fused ring) 또는 가교 고리(bridged ring)를 갖는 시클로알킬을 포함한다.

"스피로 시클로알킬"이라는 용어는 하나의 공유 탄소 원자(스피로 원자로 지칭)를 통해 연결된 개별 고리를 갖는 5 내지 20 원의 다중고리형 기를 나타내고, 여기에서 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전하게 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖지 않는다. 스피로 시클로알킬은 바람직하게는 6 내지 14 원의 스피로 시클로알킬이고, 더 바람직하게는 7 내지 10 원의 스피로 시클로알킬이다. 고리 사이에 공유된 스피로 원자의 수에 따라, 스피로 시클로알킬은 모노-스피로 시클로알킬, 디-스피로 시클로알킬, 또는 폴리-스피로 시클로알킬로 나누어질 수 있고, 스피로 시클로알킬은 바람직하게는 모노-스피로 시클로알킬 또는 디-스피로 시클로알킬이고, 더 바람직하게는 4-원/4-원, 4-원/5-원, 4-원/6-원, 5-원/5-원, 또는 5-원/6-원의 모노-스피로 시클로알킬이다. 스피로 시클로알킬의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

"접합(fused) 시클로알킬"이라는 용어는 5 내지 20 원의 모든 탄소 다중고리형 기를 나타내고, 여기에서 계 내의 각 고리는 다른 고리와 인접한 탄소 원자 쌍을 공유하고, 하나 이상의 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전하게 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖지 않는다. 접합 시클로알킬은 바람직하게는 6 내지 14 원의 접합 시클로알킬이고, 더 바람직하게는 7 내지 10 원의 접합 시클로알킬이다. 구성 고리(membered rings)의 수에 따라, 접합 시클로알킬은 이중고리형(bicyclic), 삼중고리형(tricyclic), 사중고리형(tetracyclic) 또는 다중고리형 접합 시클로알킬로 나누어질 수 있고, 접합 시클로알킬은 바람직하게는 이중고리형 또는 삼중고리형 접합 시클로알킬이고, 더 바람직하게는 5-원/5-원, 또는 5-원/6-원의 이중고리형 접합 시클로알킬이다. 접합 시클로알킬의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

"가교 시클로알킬(bridged cycloalkyl)"이라는 용어는 5 내지 20 원의 모든 탄소 다중고리형 기를 나타내고, 여기에서 계 내의 모든 두 개의 고리는 두 개의 연결되지 않은 탄소 원자를 공유하고, 고리는 하나 이상의 이중 결합을 가질 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전하게 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖지 않는다. 가교 시클로알킬은 바람직하게는 6 내지 14 원의 가교 시클로알킬이고, 더 바람직하게는 7 내지 10 원의 가교 시클로알킬이다. 구성 고리의 수에 따라, 가교 시클로알킬은 이중고리형, 삼중고리형, 사중고리형 또는 다중고리형 가교 시클로알킬로 나누어질 수 있고, 가교 시클로알킬은 바람직하게는 이중고리형, 삼중고리형 또는 사중고리형 가교 시클로알킬이고, 더 바람직하게는 이중고리형 또는 삼중고리형 가교 시클로알킬이다. 가교 시클로알킬의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

시클로알킬(단일고리형 시클로알킬, 스피로 시클로알킬, 접합 시클로알킬 및 가교 시클로알킬 포함) 고리는 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴의 고리에 접합될 수 있고, 여기에서 모 구조에 결합된 고리는 시클로알킬이다. 비제한적인 예는, 인다닐, 테트라하이드로나프틸, 벤조시클로헵틸 등을 포함하고, 바람직하게는 벤조시클로펜틸, 테트라하이드로나프틸을 포함한다.

시클로알킬은 선택적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환시, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 히드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오 및 옥소로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.

"알콕시"라는 용어는 -O-(알킬) 또는 -O-(비치환된 시클로알킬) 기를 나타내고, 여기에서 알킬 또는 시클로알킬은 위에 정의된 바와 같다. 알콕시의 비제한적인 예는, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 시클로프로필옥시, 시클로부틸옥시, 시클로펜틸옥시, 시클로헥실옥시를 포함한다. 알콕시는 선택적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환시, 치환기(들)는 바람직하게는 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.

"헤테로시클릴"이라는 용어는 3 내지 20 원의 포화 또는 부분적으로 불포화된 단일고리형 또는 다중고리형 탄화수소 치환기를 나타내고, 여기에서 하나 이상의 고리 원자는 N, O, S, S(O) 및 S(O)₂로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로 원자이지만, 고리에서 -O-O-, -O-S- 또는 -S-S-는 제외하고, 나머지 고리 원자는 탄소 원자이다. 바람직하게는, 헤테로시클릴은 3 내지 12개의 고리 원자를 갖고, 여기에서 1 내지 4개의 원자는 헤테로 원자이고; 바람직하게는, 3 내지 8개의 고리 원자를 갖고, 여기에서 1 내지 3개의 원자는 헤테로 원자이고; 바람직하게는, 3 내지 6개의 고리 원자를 갖고, 여기에서 1 내지 3개의 원자는 헤테로 원자이다. 단일고리형 헤테로시클릴의 비제한적인 예는, 아제티디닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티에닐, 디하이드로이미다졸릴, 디하이드로푸라닐, 디하이드로피라졸릴, 디하이드로피롤릴, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 호모피페라지닐 등을 포함하고, 바람직하게는 테트라하이드로피라닐, 피페리디닐, 피롤리디닐을 포함한다. 다중고리형 헤테로시클릴은 스피로 고리, 접합 고리 또는 가교 고리를 갖는 헤테로시클릴을 포함한다.

"스피로 헤테로시클릴"이라는 용어는 하나의 공유 원자(스피로 원자로 지칭)를 통해 연결된 개별 고리를 갖는 5 내지 20 원의 다중고리형 헤테로시클릴기를 나타내고, 여기에서 하나 이상의 고리 원자는 N, O, S, S(O) 및 S(O)₂로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소 원자이고, 여기에서 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전하게 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖지 않는다. 스피로 헤테로시클릴은 바람직하게는 6 내지 14 원의 스피로 헤테로시클릴이고, 더 바람직하게는 7 내지 11 원의 스피로 헤테로시클릴이다. 고리 사이에 공유된 스피로 원자의 수에 따라, 스피로 헤테로시클릴은 모노-스피로 헤테로시클릴, 디-스피로 헤테로시클릴, 또는 폴리-스피로 헤테로시클릴로 나누어지고, 스피로 헤테로시클릴은 바람직하게는 모노-스피로 헤테로시클릴 또는 디-스피로 헤테로시클릴이고, 더 바람직하게는 4-원/4-원, 4-원/5-원, 4-원/6-원, 5-원/5-원, 또는 5-원/6-원의 모노-스피로 헤테로시클릴이다. 스피로 헤테로시클릴의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

"접합 헤테로시클릴"이라는 용어는 5 내지 20 원의 다중고리형 헤테로시클릴기를 나타내고, 여기에서 계 내의 각 고리는 다른 고리와 인접한 원자 쌍을 공유하고, 여기에서 하나 이상의 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전하게 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖지 않고, 여기에서 하나 이상의 고리 원자는 N, O 및 S(O)_m(여기에서 m은 0 내지 2의 정수임)으로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소 원자이다. 접합 헤테로시클릴은 바람직하게는 6 내지 14 원의 접합 헤테로시클릴이고, 더 바람직하게는 7 내지 11 원의 접합 헤테로시클릴이다. 구성 고리의 수에 따라, 접합 헤테로시클릴은 이중고리형, 삼중고리형, 사중고리형 또는 다중고리형 접합 헤테로시클릴로 나누어질 수 있고, 접합 헤테로시클릴은 바람직하게는 이중고리형 또는 삼중고리형 접합 헤테로시클릴이고, 더 바람직하게는 5-원/5-원 또는 5-원/6-원의 이중고리형 접합 헤테로시클릴이다. 접합 헤테로시클릴의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

"가교 헤테로시클릴"이라는 용어는 5 내지 14 원의 다중고리형 헤테로시클릴기를 나타내고, 여기에서 계 내의 모든 두 개의 고리는 두 개의 연결되지 않은 원자를 공유하고, 고리는 하나 이상의 이중 결합을 가질 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전하게 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖지 않고, 여기에서 하나 이상의 고리 원자는 N, O 및 S(O)_m(여기에서 m은 0 내지 2의 정수임)으로 이루어지는 군으로부터 선택된 헤테로 원자이고, 나머지 고리 원자는 탄소 원자이다. 가교 헤테로시클릴은 바람직하게는 6 내지 14 원의 가교 헤테로시클릴이고, 더 바람직하게는 7 내지 11 원의 가교 헤테로시클릴이다. 구성 고리의 수에 따라, 가교 헤테로시클릴은 이중고리형, 삼중고리형, 사중고리형 또는 다중고리형 가교 헤테로시클릴로 나누어질 수 있고, 가교 헤테로시클릴은 바람직하게는 이중고리형, 삼중고리형 또는 사중고리형 가교 헤테로시클릴이고, 더 바람직하게는 이중고리형 또는 삼중고리형 가교 헤테로시클릴이다. 가교 헤테로시클릴의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

헤테로시클릴(단일고리형 헤테로시클릴, 스피로 헤테로시클릴, 접합 헤테로시클릴 및 가교 헤테로시클릴 포함) 고리는 아릴, 헤테로아릴 또는 시클로알킬의 고리에 접합될 수 있고, 여기에서 모 구조에 결합된 고리는 헤테로시클릴이다. 이의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

헤테로시클릴은 선택적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환시, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 히드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오, 헤테로시클릴티오 및 옥소로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.

"아릴"이라는 용어는 컨쥬게이트된 π-전자계를 갖는 6 내지 20 원의 모든 탄소 단일고리형 고리 또는 다중고리형 접합 고리(즉, 계 내의 각 고리는 계 내의 다른 고리와 인접한 탄소 원자 쌍을 공유한다), 바람직하게는 6 내지 10 원의 아릴, 더 바람직하게는 6 원의 아릴, 예를 들어, 페닐과 나프틸을 나타낸다. 아릴 고리는 헤테로아릴, 헤테로시클릴 또는 시클로알킬의 고리에 접합될 수 있고, 여기에서 모 구조에 결합된 고리는 아릴 고리이다. 이의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

아릴은 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환시, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 히드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오 및 헤테로시클릴티오로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.

"헤테로아릴"이라는 용어는 O, S 및 N으로 이루어지는 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로 원자를 갖는 5 내지 20 원의 헤테로 방향족계(heteroaromatic system)를 나타낸다. 헤테로아릴은 바람직하게는 1 내지 3개의 헤테로 원자를 갖는 5 내지 10 원의 헤테로아릴이고, 더 바람직하게는 1 내지 3개의 헤테로 원자를 갖는 5 또는 6 원의 헤테로아릴이다. 비제한적인 예는, 예를 들어, 피라졸릴, 이미다졸릴, 푸릴, 티에닐, 티아졸릴, 옥사졸릴, 피롤릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 티아디아졸릴, 피라지닐 등을 포함한다. 헤테로아릴 고리는 아릴, 헤테로시클릴 또는 시클로알킬의 고리에 접합될 수 있고, 여기에서 모 구조에 결합된 고리는 헤테로아릴 고리이다. 이의 비제한적인 예는 다음을 포함한다:

헤테로아릴은 선택적으로 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환시, 치환기(들)는 바람직하게는 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 알킬티오, 알킬아미노, 할로겐, 티올, 히드록시, 니트로, 시아노, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알콕시, 헤테로시클로알콕시, 시클로알킬티오 및 헤테로시클릴티오로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기이다.

"시클로알킬옥시"라는 용어는 -O-시클로알킬기를 나타내고, 여기에서 시클로알킬은 위에 정의된 바와 같다.

"할로알킬"이라는 용어는 할로겐(들)으로 치환된 알킬기를 나타내고, 여기에서 알킬은 위에 정의된 바와 같다

"할로알콕시"라는 용어는 할로겐(들)으로 치환된 알콕시기를 나타내고, 여기에서 알콕시는 위에 정의된 바와 같다.

"히드록시알킬"이라는 용어는 히드록시(들)로 치환된 알킬기를 나타내고, 여기에서 알킬은 위에 정의된 바와 같다.

"아미노알킬"이라는 용어는 아미노(들)로 치환된 알킬기를 나타내고, 여기에서 알킬은 위에 정의된 바와 같다.

"알킬아미노알킬"이라는 용어는 알킬아미노(들)로 치환된 알킬기를 나타내고, 여기에서 알킬은 위에 정의된 바와 같다.

"히드록시"라는 용어는 -OH 기를 나타낸다.

"할로겐"이라는 용어는 플루오르, 염소, 브롬 또는 요오드를 나타낸다.

"아미노"라는 용어는 -NH₂ 기를 나타낸다.

"시아노"라는 용어는 -CN 기를 나타낸다.

"니트로"라는 용어는 -NO₂ 기를 나타낸다.

"포르밀"이라는 용어는 -C(O)H 기를 나타낸다.

"카르복시"라는 용어는 -C(O)OH 기를 나타낸다.

"알콕시카르보닐"이라는 용어는 -C(O)O(알킬) 또는 -C(O)O(시클로알킬) 기를 나타내고, 여기에서 알킬과 시클로알킬은 위에 정의된 바와 같다.

"선택적인" 또는 "선택적으로"는 뒤에 기술된 사건 또는 상황이 일어날 수 있지만, 일어날 필요는 없음을 의미하고, 이러한 설명에는 사건 또는 상황이 일어나거나 일어나지 않는 경우가 포함된다. 예를 들어, "알킬로 선택적으로 치환된 헤테로시클릴"은 알킬기가 존재할 수 있지만, 존재할 필요는 없음을 의미하고, 이러한 설명에는 헤테로시클릴이 알킬로 치환되고 헤테로시클릴이 알킬로 치환되지 않는 경우가 포함된다.

"치환된"은 상응하는 수의 치환기로 독립적으로 치환된, 기 내의 하나 이상의 수소 원자, 바람직하게는 최대 5개, 더 바람직하게는 1 내지 3개의 수소 원자를 나타내고, 여기에서 각각의 치환기는 독립적인 옵션을 갖는다(즉, 치환기는 동일하거나 상이할 수 있다). 치환기가 이들의 가능한 화학적 위치에만 존재한다는 것은 말할 필요도 없다. 당업자는 과도한 노력 없이 실험 또는 이론에 의해 치환이 가능하거나 불가능한지 여부를 결정할 수 있다. 예를 들어, 자유 수소를 갖는 아미노 또는 히드록시와 (올레핀과 같은) 불포화 결합을 갖는 탄소 원자의 조합은 불안정할 수 있다.

"약학 조성물(pharmaceutical composition)"이라는 용어는 본원에 기술된 하나 이상의 화합물 또는 이의 생리학적으로/약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그와 다른 화학 성분, 및 생리학적으로/약학적으로 허용 가능한 담체 및 부형제와 같은 다른 성분의 혼합물을 나타낸다. 약학 조성물의 목적은 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 하여, 활성 성분의 흡수를 촉진시켜 생물학적 활성을 나타내는 것이다.

"약학적으로 허용 가능한 염"은 포유동물에서 안전하고 효과적이며 원하는 생물학적 활성을 갖는 본 개시내용의 화합물의 염을 나타낸다.

본 개시내용의 화합물은 또한 이의 동위 원소 유도체(isotopic derivative)를 포함할 수 있다. "동위 원소 유도체"라는 용어는 하나 이상의 동위 원소 농축 원자(isotopically enriched atom)의 존재하에서만 구조가 상이한 화합물을 나타낸다. 예를 들어, 수소를 "중수소(deuterium)" 또는 "삼중수소(tritium)"로 대체하거나, 플루오르를 ¹⁸F-플루오르 라벨링(¹⁸F 동위 원소)으로 대체하거나, 탄소를 ¹¹C-,　¹³C-, 또는　¹⁴C-농축 탄소(¹¹C-,　¹³C-, 또는　¹⁴C-탄소 라벨링;　¹¹C-,　¹³C-, 또는　¹⁴C-동위 원소)로 대체하는 것을 제외하고, 본 개시내용의 구조를 갖는 화합물은 본 개시내용의 범위 내에 있다. 이러한 화합물은, 예를 들어, 생물학적 검정(biological assay)에서 분석 도구 또는 프로브(probe)로서, 또는 질병의 생체내 진단적 영상 검사(in vivo diagnostic imaging)를 위한 추적자(tracer)로서, 또는 약력학(pharmacodynamics), 약동학(pharmacokinetics) 또는 수용체 연구를 위한 추적자로서 사용될 수 있다. 중수소화 화합물은 일반적으로 중수소화되지 않은 화합물에 상당하는 활성을 유지할 수 있고, 어떤 특정 위치에서 중수소화될 때, 생성된 화합물은 더 나은 대사 안정성을 이루어서 특정한 치료 이점(생체내 반감기 증가 또는 투여량 요구 감소와 같은)을 얻을 수 있다.

약물 또는 약리학적 활성제에 대해, "치료 유효량(therapeutically effective amount)"이라는 용어는 무독성이지만 원하는 효과를 이룰 수 있는 충분한 양의 약물 또는 작용제를 나타낸다. 유효량의 결정은 수용자의 연령과 전반적인 상태 그리고 또한 특정 활성 물질에 따라 사람마다 다르다. 경우에 따라 적절한 유효량은 일상적인 실험에 따라 당업자에 의해 결정될 수 있다.

본 개시내용의 화합물의 합성 방법

본 개시내용의 목적을 이루기 위해, 본 개시내용은 다음과 같은 기술적 해결 방안을 적용한다:

방안(Scheme) I

본 개시내용에 따른 식(III)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제조하기 위한 방법은, 다음의 단계:

용매에서 산성 조건하에 식(IIIA)의 화합물로부터 히드록시 보호기 R_w를 제거하여 식(III)의 화합물을 수득하는 단계를

포함하고,

상기 식에서:

히드록시 보호기 R_w는 바람직하게는 TBS이고; 그리고

방안 II

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 다음의 단계:

용매에서 산성 조건하에 식(III-PA)의 화합물로부터 히드록시 보호기 R_w를 제거하여 식(III-P)의 화합물을 수득하는 단계를 포함하는, 식(III-P)의 화합물을 제조하기 위한 방법에 관한 것이고,

상기 식에서:

히드록시 보호기 R_w는 바람직하게는 TBS이고;

산성 조건을 제공하는 시약은 염화수소, 트리플루오로아세트산, 포름산, 아세트산, 염산, 황산, 메탄설폰산, 질산, 인산, p-톨루엔설폰산, Me₃SiCl 및 TMSOT_f를 포함하지만, 이에 제한되지 않고; 바람직하게는 트리플루오로아세트산을 포함한다.

알칼리성 조건을 제공하는 시약은 유기 염기와 무기 염기를 포함한다. 유기 염기는 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, n-부틸리튬, 리튬 디이소프로필아미드, 아세트산칼륨, tert-부톡시화나트륨 및 tert-부톡시화칼륨을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 무기 염기는 수소화나트륨, 인산칼륨, 탄산나트륨, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 탄산칼륨, 탄산세슘, 수산화나트륨, 수산화리튬 및 수산화칼륨을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

히드록시 보호기를 제거하기 위한 탈보호 반응은 이 기술분야에 잘 알려져 있고, 히드록기 보호기는, 예를 들어, T. Greene 등의 Protecting Group in Organic Synthesis에 기술되어 있는 보호기이다. 일반적으로 테트라하이드로피란-2-일과 tert-부틸디메틸실릴을 히드록시 보호기로 사용하는 것이 바람직하고; tert-부틸디메틸실릴(TBS)이 바람직하다.

히드록시 보호 시약은 메톡시메틸 에테르, 2-메톡시에톡시메틸 에테르, 테트라하이드로피란 에테르, 벤질 에테르, p-메톡시벤질 에테르, 트리메틸실릴 에테르, 트리에틸실릴 에테르, 트리이소프로필실릴 에테르, tert-부틸디메틸실릴 에테르, tert-부틸디메틸클로로실란, 트리페닐메틸실릴 에테르, 아세테이트, 치환된 아세테이트, 피발로에이트, 벤조에이트, 메탄설포네이트 및 p-톨루엔설포네이트를 포함하지만, 이에 제한되지 않고; 바람직하게는 tert-부틸디메틸클로로실란(TBSCl)을 포함한다.

위의 반응은 용매에서 실행되는 것이 바람직하다. 사용되는 용매는 아세트산, 메탄올, 에탄올, n-부탄올, 톨루엔, 테트라하이드로퓨란, 디클로로메탄, 석유 에테르, 아세트산에틸, n-헥산, 디메틸 설폭시드, 1,4-디옥산, 1,2-디메톡시에탄, 물 및 N,N-디메틸포름아미드 및 이의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않고; 바람직하게는 디클로로메탄을 포함한다.

본 개시내용의 하나 이상의 구현예의 세부사항은 위의 명세서에 제시되어 있다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동일한 임의의 방법 및 재료가 본 개시내용을 수행하거나 시험하는 데 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료는 아래 기술되어 있다. 명세서와 청구범위를 통해, 본 개시내용의 다른 특징, 목적 및 이점이 명백해질 것이다. 명세서와 청구범위에서, 문맥이 분명하게 달리 지시하지 않는 한, 단수형은 복수형 지시어를 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 이해되는 일반적인 의미를 갖는다. 명세서에 인용된 모든 특허 및 간행물은 참조로 포함된다. 다음의 실시예는 본 개시내용의 바람직한 구현예를 보다 충분하게 예시하기 위해 제공된다. 이러한 실시예는 어떤 식으로든 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 되고, 본 개시내용의 범위는 청구범위에 의해 정의된다.

실시예

화합물의 구조는 핵자기 공명(NMR) 및/또는 질량 분석법(mass spectrometry)(MS)에 의해 확인된다. NMR 이동(shift)(δ)은 10^-6(ppm) 단위로 주어진다. NMR은 Bruker AVANCE-400 기기에 의해 측정된다. 측정용 용매는 중수소화-디메틸 설폭시드(DMSO-d₆), 중수소화-클로로포름(CDCl₃) 및 중수소화-메탄올(CD₃OD)이고, 내부 표준물질(internal standard)은 테트라메틸실란(TMS)이다.

MS는 Agilent 1200/1290 DAD-6110/6120 Quadrupole MS 액체 크로마토그래프/질량 분석기(제조사: Agilent, MS 모델: 6110/6120 Quadrupole MS), waters ACQuity UPLC-QD/SQD(제조사: waters, MS 모델: waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector), THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(제조사: THERMO, MS 모델: THERMO Q Exactive)에 의해 측정된다.

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 Agilent HPLC 1200DAD, Agilent HPLC 1200VWD 및 Waters HPLC e2695-2489 고압 액체 크로마토그래프로 측정된다.

키랄(Chiral) HPLC는 Agilent 1260 DAD 고성능 액체 크로마토그래프로 측정된다.

분취 크로마토그래피는 Waters 2545-2767, Waters 2767-SQ Detecor2, Shimadzu LC-20AP 및 Gilson GX-281 분취 크로마토그래프로 실행된다.

키랄 제조(Chiral preparation)는 Shimadzu LC-20AP 분취 크로마토그래프로 실행된다.

사용된 CombiFlash 신속 제조 기기는 Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)이다.

Yantai Huanghai HSGF254 또는 Qingdao GF254 실리카겔 플레이트가 박층 실리카겔 크로마토그래피(TLC) 플레이트로 사용된다. TLC에 사용된 실리카겔 플레이트의 치수는 0.15 mm 내지 0.2 mm이고, 생성물 정제에 사용된 실리카겔 플레이트의 치수는 0.4 mm 내지 0.5 mm이다.

Yantai Huanghai 200 내지 300 메시 실리카겔이 실리카겔 칼럼 크로마토그래피용 담체로서 일반적으로 사용된다.

평균 키나아제 억제율(kinase inhibition rates)과 IC₅₀ 값은 NovoStar 마이크로플레이트 리더(microplate reader)(BMG 사, 독일)에 의해 측정된다.

본 개시내용의 공지된 출발 물질은 이 기술분야에 공지된 방법에 의해 제조되거나, ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., Dari Chemical Company 등으로부터 구입될 수 있다.

달리 명시되지 않는 한, 반응은 아르곤 분위기 또는 질소 분위기하에 실행될 수 있다.

"아르곤 분위기" 또는 "질소 분위기"는 반응 플라스크에 아르곤 또는 질소 풍선(약 1 L)이 장착되어 있음을 의미한다.

"수소 분위기"는 반응 플라스크에 수소 풍선(약 1 L)이 장착되어 있음을 의미한다.

고압 수소화 반응은 Parr 3916EKX 수소화 기기와 Qinglan QL-500 수소 발생기 또는 HC2-SS 수소화 기기로 수행된다.

수소화 반응에서, 반응계(reaction system)는 일반적으로 진공으로 되고 수소로 충전되며, 위의 작업은 세 번 반복된다.

CEM Discover-S 908860 유형 마이크로파 반응기가 마이크로파 반응에 사용된다.

달리 명시되지 않는 한, 용액은 수용액을 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, 반응 온도는 20℃ 내지 30℃의 실온이다.

실시예에서 반응 공정은 박층 크로마토그래피(TLC)에 의해 모니터링된다. 반응에 사용되는 전개 용매, 칼럼 크로마토그래피의 용리액계(eluent system) 및 화합물의 정제를 위한 박층 크로마토그래피의 전개 용매계(developing solvent system)는: A: 디클로로메탄/메탄올계, B: n-헥산/아세트산에틸계, 및 C: 석유 에테르/아세트산에틸계를 포함한다. 용매의 부피비는 화합물의 극성에 따라 조정되고, 조정을 위해 트리에틸아민과 같은 소량의 알칼리성 시약이나 아세트산과 같은 산성 시약이 또한 첨가될 수 있다.

실시예 1

(S)-2-(1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)-2-히드록시에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 1

단계 1

(S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에탄-1-아민 1a

(S)-2-아미노-2-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에탄-1-올 1k(2 g, 10.8 mmol, Shanghai Haohong Biomedical Technology Co., Ltd.)와 이미다졸(1.47 g, 21.6 mmol)을 80 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, tert-부틸디메틸클로로실란(TBSCl, 2.44 g, 16.19 mmol)을 빙욕(ice bath)에서 첨가하였다. 반응 용액을 14시간 동안 교반한 뒤에, 물을 첨가하고, 디클로로메탄(80 mL×3)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1a(2.0 g, 수득률: 61.8%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 300.2 [M+1].

단계 2

(S)-N-((4-브로모-1H-피롤-2-일)메틸)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에탄-1-아민 1c

(S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에탄-1-아민 1a(516 mg, 1.72 mmol)와 화합물 4-브로모-1H-피롤-2-카브알데히드 1b(300 mg, 1.72 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)를 교반하고 3시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 5 mL의 메탄올로 희석하고, 0℃로 냉각시켰다. 수소화붕소나트륨(65 mg, 1.72 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 감압하에 농축시켰다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸(10 mL×2)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1c(500 mg, 수득률: 63%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 457.1 [M+1].

단계 3

(S)-6-브로모-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 1d

화합물 1c(400 mg, 0.9 mmol)를 40 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, N,N'-카르보닐디이미다졸(219 mg, 1.36 mmol)을 빙욕에서 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 수소화나트륨(60%, 69 mg, 1.8 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 14시간 동안 교반한 뒤에, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1d(400 mg, 수득률: 94%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 483.2 [M+1].

단계 4

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에틸)-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 1e

화합물 1d(360 mg, 0.75 mmol)를 아르곤 분위기하에 50 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 뒤에, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(189 mg, 0.76 mmol), 아세트산칼륨(219 mg, 2.23 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(109 g, 0.15 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트(Celite)를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1e(100 mg, 수득률: 25%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 531.4 [M+1].

단계 5

4-클로로-5-메틸-2-(메틸설포닐)피리미딘 1i

4-클로로-5-메틸-2-(메틸티오)피리미딘 1h(500 mg, 2.86 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)를 10 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, m-클로로퍼옥시벤조산(1.270 g, 6.3 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 포화 티오황산나트륨 용액과 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시켜 미정제 표제 화합물 1i(445 mg)를 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.

MS m/z (ESI): 207.2 [M+1].

단계 6

4-클로로-5-메틸-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 1f

N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)카르복스아미드 1j(270 mg, 2.15 mmol, "Bioorganic and Medicinal Chemistry, 1997, 5(3), 557-567"에 개시된 잘 알려진 방법에 의해 제조)를 N,N-디메틸포름아미드에 용해시킨 뒤에, 0℃에서 수소화나트륨(60%, 250 mg, 6.5 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 화합물 1i(445 mg, 2.15 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 2시간 동안 더 반응시켰다. 20 mL의 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸(20 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 감압하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 전개 용매계 C를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1f(240 mg, 수득률: 49.7%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 224.3 [M+1].

단계 7

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-플루오로-5-메톡시페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3-온 1g

화합물 1e(100 mg, 0.19 mmol), 화합물 1f(42 mg, 0.19 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(28 mg, 0.04 mmol) 및 탄산세슘(123 mg, 0.4 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 30 mL의 1,4-디옥산과 4 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(20 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1g(80 mg, 수득률: 72%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 592.1 [M+1].

단계 8

화합물 1g(80 mg, 0.14 mmol)를 20 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 5 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(20 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 1(18 mg, 수득률: 28%)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 478.3 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.79-6.68 (m, 4H), 6.32 (d, 1H), 5.23-5.22 (m, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.39-4.35 (m, 1H), 4.18-4.08 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 2.40 (s, 3H).

실시예 2

(S)-6-(5-클로로-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 2

단계 1

(S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에탄-1-아민 2b

(S)-2-아미노-2-(3-클로로페닐)에탄-1-올 2a(4 g, 23.3 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)와 이미다졸(3.2 g, 46.6 mmol)을 80 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, tert-부틸디메틸클로로실란(5.2 g, 35 mmol)을 빙욕에서 첨가하고, 반응 용액을 14시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 디클로로메탄(80 mL×3)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2b(6.5 g, 수득률: 97%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 286.1 [M+1].

단계 2

(S)-N-((4-브로모-1H-피롤-2-일)메틸)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에탄-1-아민 2c

화합물 1b(2.37 g, 13.62 mmol)와 화합물 2b(3.9 g, 13.64 mmol)를 교반하고 3시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 100 mL의 메탄올로 희석하고, 0℃로 냉각시킨 뒤에, 수소화붕소나트륨(516 mg, 13.64 mmol)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 감압하에 농축시켰다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸(40 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2c(4.8 g, 수득률: 79%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 444.2 [M+1].

단계 3

(S)-6-브로모-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 2d

화합물 2c(4.8 g, 10.81 mmol)를 100 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, N,N'-카르보닐디이미다졸(2.45 g, 15.11 mmol)을 빙욕에서 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 수소화나트륨(60%, 621 mg, 16.22 μmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 14시간 동안 교반한 뒤에, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2d(4.0 g, 수득률: 78%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 469.1 [M+1].

단계 4

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 2e

아르곤 분위기하에, 화합물 2d(4.0 g, 8.51 mmol)를 50 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 뒤에, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(3.24 g, 12.76 mmol), 아세트산칼륨(3.34 g, 34.04 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(1.24 g, 1.70 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2e(2.0 g, 수득률: 45%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 517.2 [M+1].

단계 5

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 2g

화합물 2e(430 mg, 0.83 mmol), 2,4,5-트리클로로피리미딘 2f(183 mg, 0.99 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(60 mg, 0.08 mmol) 및 탄산나트륨(175 mg, 1.65 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 2 mL의 1,4-디옥산과 1 mL의 물에 현탁시켰다. 반응계를 아르곤으로 퍼지하고, 85℃에서 마이크로파 반응기에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(10 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 C를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2g(200 mg, 수득률: 44%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 537.1 [M+1].

단계 6

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-클로로-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 2i

화합물 2g(100 mg, 0.18 mmol)를 아르곤 분위기하에 1 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 뒤에, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(25 mg, 27.30 μmol), 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크잔텐(32 mg, 55.30 μmol), 탄산세슘(121 mg, 0.37 mmol) 및 1-메틸-1H-피라졸-5-아민 2h(36 mg, 0.37 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)를 첨가하고, 반응 용액을 마이크로파 반응기에서 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 A를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2i(50 mg, 수득률: 44%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 597.9 [M+1].

단계 7

화합물 2i(50 mg, 83.52 μmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 1 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 3시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(10 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 2(16 mg, 수득률: 39%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 484.0 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.35 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.49-7.42 (m, 2H), 7.36 (m, 3H), 6.83 (s, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.24 (dd, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.34 (d, 1H), 4.25-4.15 (m, 1H), 4.12-4.04 (m, 1H), 3.76 (s, 3H).

실시예 3

(S)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 3

단계 1

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 3a

화합물 1f(800 mg, 3.57 mmol), 화합물 2e(2.03 g, 3.93 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(392 mg, 0.54 mmol) 및 탄산세슘(2.33 g, 7.15 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 30 mL의 1,4-디옥산과 4 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(40 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 3a(1.2 g, 수득률: 58%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 578.3 [M+1].

단계 2

화합물 3a(1.2 g, 2.07 mmol)를 20 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 5 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(20 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 3(600 mg, 수득률: 62%)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 464.2 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.46 (s, 2H), 7.42-7.30 (m, 3H), 6.75 (s, 1H), 6.36 (s, 1H), 5.26 (dd, 1H), 4.66 (d, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.26-4.16 (m, 1H), 4.14-4.02 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.39 (s, 3H).

실시예 4

(S)-6-(5-클로로-2-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)아미노)피리미딘-4-일)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 4

실시예 2의 합성 경로를 적용하고, 단계 6의 출발 화합물 2h를 화합물 테트라하이드로-2H-피란-4-아민(Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)으로 대체하여 화합물 5(12 mg)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 488.0 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.24 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.44-7.33 (m, 3H), 7.27 (s, 1 H), 6.82 (s, 1H), 5.17 (dd, 1H), 5.10 (d, 1H), 4.49 (d, 1H), 4.38-4.18 (m, 3H), 4.04 (d, 1H), 4.02 (d, 1H), 3.66-3.50 (m, 2H), 2.09 (d, 2H), 1.3 -1.28 (m, 2H).

실시예 5

6-(5-클로로-2-(((S)-1-히드록시프로판-2-일)아미노)피리미딘-4-일)-2-((S)-1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 5

단계 1

2-((S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-클로로-2-(((S)-1-히드록시프로판-2-일)아미노)피리미딘-4-일)-1,2-디하이드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3-온 5b

화합물 2g(30 mg, 55.77 μmol)와 (S)-2-아미노프로판-1-올 5a(21 mg, 279.59 μmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)를 1 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 반응 용액을 마이크로파 반응기에서 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시켜 미정제 표제 화합물 5b(32 mg)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.

MS m/z (ESI): 576.2 [M+1].

단계 2

화합물 5b(30 mg, 52.03 μmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 1 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 3시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(5 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 5(10.8 mg, 수득률: 44%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 462.0 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.24 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.40-7.34 (m, 3H), 6.93 (s, 1H), 5.26 (dd, 1H), 4.67 (d, 1H), 4.37 (d, 1H), 4.24-4.06 (m, 3H), 3.67-3.56 (m, 2H), 1.27 (d, 3H).

실시예 6

(S)-2-(1-(3-클로로-4-플루오로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 6

단계 1

(S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로-4-플루오로페닐)에타민 6b

(S)-2-아미노-2-(3-클로로-4-플루오로페닐)에탄-1-올 염산염 6a(250 mg, 1.1 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)을 10 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 이미다졸(225.84 mg, 3.3174 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시킨 뒤에, tert-부틸디메틸클로로실란(250 mg, 1.7 mmol)을 첨가하고, 14시간 동안 교반하였다. 20 mL의 물을 첨가하고, 반응 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6b(290 mg, 수득률: 86%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 304.1 [M+1].

단계 2

(S)-N-((4-브로모-1H-피롤-2-일)메틸)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로-4-플루오로페닐)에타민 6c

화합물 6b(290 mg, 0.95 mmol)와 화합물 1b(166.05 mg, 0.95 mmol)를 교반하고 3시간 동안 반응시킨 뒤에, 5 mL의 메탄올을 첨가하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시킨 뒤에, 수소화붕소나트륨(36 mg, 0.95 mmol)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 감압하에 농축시켰다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6c(300 mg, 수득률: 68%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 459.1 [M-1].

단계 3

(S)-6-브로모-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로-4-플루오로페닐)에틸)-1H-피롤로[1,2-c]-3(2H)-온 6d

화합물 6c(300 mg, 0.65 mmol)를 40 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, N,N'-카르보닐디이미다졸(147 mg, 0.91 mmol)을 빙욕에서 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 수소화나트륨(60%, 37 mg, 0.97 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 14시간 동안 교반한 뒤에, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6d(300 mg, 수득률: 94%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 487.2 [M+1].

단계 4

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로-4-플루오로페닐)에틸)-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 6e

화합물 6d(300 mg, 0.61 mmol)를 아르곤 분위기하에 50 mL의 디옥산에 용해시킨 뒤에, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(254 mg, 0.92 mmol), 아세트산칼륨(181 mg, 1.84 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(90 mg, 1.23 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6e(120 mg, 수득률: 36%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 534.1 [M+1].

단계 5

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로-4-플루오로페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1,2-디하이드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3-온 6f

화합물 1f(50 mg, 0.22 mmol), 화합물 6e(120 mg, 0.22 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(33 mg, 0.04 mmol) 및 탄산세슘(146 mg, 0.45 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 30 mL의 1,4-디옥산과 6 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(15 mL×2)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6f(100 mg, 수득률: 74%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 596.1 [M+1].

단계 6

화합물 6f(100 mg, 0.17 mmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 1 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(15 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 감압하에 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 A를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 6(15 mg, 수득률: 18%)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 482.2 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.19 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.52-7.44 (m, 2H), 7.41 (d, 1H), 7.22-7.13 (m, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.14 (d, 1H), 5.14 (dd, 1H), 4.42 (d, 1H), 4.32 (dd, 1H), 4.23 - 4.12 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).

실시예 7

6-(5-클로로-2-((3-플루오로-4-히드록시시클로펜틸)아미노)피리미딘-4-일)-2-((S)-1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 7

단계 1

벤질 (3-플루오로-4-히드록시시클로펜틸)카바메이트 7b

벤질 (6-옥사비시클로[3.1.0]헥산-3-일)카바메이트 7a(1 g, 4.28 mmol, "Tetrahedron, 56 (2000) 9633-9640"에 개시된 잘 알려진 방법에 의해 제조)와 플루오르화수소 피리딘 착물(1.06 g, 6.41 mmol, 순도 60%)을 1,2-디클로로에탄(5 mL)에 용해시키고, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 포화 중탄산나트륨 수용액과 포화 염화나트륨으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 C를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 화합물 7b(500 mg, 수득률: 46%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 253.6 [M+1].

단계 2

4-아미노-2-플루오로시클로펜탄올 7c

화합물 7b(150 mg, 592.25 μmol)와 10% 팔라듐-탄소 수소화 촉매(습식)(30 mg, 281.90 μmol)를 수소 분위기하에 5 mL의 메탄올에 용해시켰다. 반응 용액을 16시간 동안 교반하고 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시켜 미정제 화합물 7c(150 mg)를 수득하고, 이를 다음 반응에서 직접 사용하였다.

단계 3

실시예 2의 합성 경로를 적용하고, 단계 6의 출발 화합물 2h를 화합물 7c로 대체하여 화합물 7(5 mg)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 506.1 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.18 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.36 (d, 3H), 7.27 (d, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.62 (d, 1H), 5.19 (td, 1H), 4.96 (dd, 1H), 4.50 (d, 2H), 4.38-4.15 (m, 4H), 2.60-2.48 (m, 1H), 2.46-2.29 (m, 2H), 1.85 (d, 2H).

실시예 8

6-(5-클로로-2-(((R)-1-히드록시프로판-2-일)아미노)피리미딘-4-일)-2-((S)-1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1,2-디하이드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3-온 8

실시예 5의 합성 경로를 적용하고, 단계 1의 출발 화합물 5a를 (R)-2-아미노프로판-1-올로 대체하여 화합물 8(17 mg)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 462.0 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.23 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.42-7.30 (m, 3H), 6.92 (s, 1H), 5.25 (dd, 1H), 4.67 (d, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.24 - 4.04 (m, 3H), 3.62 (t, 2H), 1.27 (d, 3H).

실시예 9

(S)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-3,4-디하이드로피롤로[1,2-c]피리미딘-1(2H)-온 9

단계 1

4-브로모-2-(2-메톡시비닐)-1-토실-1H-피롤 9c

(메톡시메틸)트리페닐포스포늄 염화물 9b(8.36 g, 24.37 mmol)를 150 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 생성된 용액을 0℃로 냉각시켰다. tert-부톡시화칼륨(2.74 g, 24.37 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 20분 동안 교반하였다. 4-브로모-1-토실-1H-피롤-2-카브알데히드 9a(4.0 g, 612.19 mmol, "Journal of Porphyrins and Phthalocyanines, 2009, 13(10), 1098-1110"에 개시된 잘 알려진 방법에 의해 제조)와 반응 용액을 밤새 교반한 뒤에, 물을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 9c(4.0 g, 수득률: 92%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 356.0 [M+1].

단계 2

2-(4-브로모-1-토실-1H-피롤-2-일)아세트알데히드 9d

화합물 9c(3 g, 8.42 mmol)를 10 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, 10 mL의 진한 염산을 첨가하고, 반응 용액을 3시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨으로 pH를 7로 조정하였다. 반응 용액을 아세트산에틸(50 mL×2)로 추출하고, 유기 상을 농축시켜 미정제 표제 화합물 9d(2.88 g)를 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.

MS m/z (ESI): 342.2 [M+1].

단계 3

(S)-N-(2-(4-브로모-1-토실-1H-피롤-2-일)에틸)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에탄-1-아민 9e

미정제 화합물 9d(2.88 g, 8.42 mmol)와 화합물 2b(2 g, 6.99 mmol)를 20 mL의 메탄올에 용해시키고, 반응 용액을 1시간 동안 교반하였다. 수소화붕소나트륨(396 mg, 10.48 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 14시간 동안 교반하고, 물로 ??치(quench)시켰다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 9e(2.2 g, 수득률: 51.4%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 611.1 [M+1].

단계 4

(S)-N-(2-(4-브로모-1H-피롤-2-일)에틸)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에탄-1-아민 9f

화합물 9e(500 mg, 0.82 mmol)를 5 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, 0℃에서 메탄올 중의 메톡시화나트륨 용액(441 mg, 8.16 mmol, 50%)을 첨가하고, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 2 N 염산으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 아세트산에틸(10 mL×2)로 추출하였다. 유기 상을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 C를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9f(280 mg, 수득률: 74.8%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 459.1 [M+1].

단계 5

(S)-6-브로모-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-3,4-디하이드로피롤로[1,2-c]피리미딘-1(2H)-온 9g

화합물 9f(280 mg, 0.61 mmol)를 10 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, N,N'-카르보닐디이미다졸(198 mg, 1.22 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 30분 동안 교반하였다. 수소화나트륨(60%, 47 mg, 1.23 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 14시간 동안 교반한 뒤에, 물을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 C를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9g(220 mg, 수득률: 74%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 483.1[M+1].

단계 6

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3,4-디하이드로피롤로[1,2-c]피리미딘-1(2H)-온 9h

화합물 9g(220 mg, 0.45 mmol)를 아르곤 분위기하에 3 mL의 1,4-디옥산에 용해시킨 뒤에, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(173 mg, 0.68 mmol), 아세트산칼륨(178 mg, 1.81 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(33 mg, 0.05 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 4시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시켜 미정제 표제 화합물 9h(240 mg)를 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.

MS m/z (ESI): 530.9 [M+1].

단계 7

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-3,4-디하이드로피롤로[1,2-c]피리미딘-1(2H)-온 9i

화합물 1f(100 mg, 0.45 mmol)를 아르곤 분위기하에 6 mL의 디옥산에 용해시킨 뒤에, 9h(241 mg, 0.45 mmol), 탄산세슘(291 mg, 0.89 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(65 mg, 0.088 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 마이크로파 반응기에서 85℃에서 1.5시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 9i(100 mg, 수득률: 37.7%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 592.2[M+1].

단계 8

화합물 9i(100 mg, 0.17 mmol)를 3 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 1 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(50 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 9(22 mg, 수득률: 27%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 478.2 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.18 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.46-7.43 (m, 2H), 7.39-7.34 (m, 3H), 6.62 (s, 1H), 6.31 (s, 1H), 5.72-5.69 (m, 1H), 4.15-4.14 (d, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.66-3.60 (m, 1H), 3.35 (m, 1H), 3.04-3.00 (m, 1H), 2.99-2.88 (m, 1H), 2.38 (s, 3H).

실시예 10

(S)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1,2-디하이드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3-온 10

단계 1

4-클로로-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 10b

N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)포름아미드 1j(324.82 mg, 2.60 mmol)를 15 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시킨 뒤에, 0℃에서 수소화나트륨(60%, 311.47 mg, 7.79 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 화합물 10a(500 mg, 2.60 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 2시간 동안 더 반응시켰다. 20 mL의 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸(20 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 감압하에 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 C를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 화합물 10b(270 mg, 수득률: 49.6%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 210.3 [M+1].

단계 2

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1,2-디하이드로-3H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 10c

화합물 2e(98.6 mg, 0.19 mmol), 4-클로로-N-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리미딘-2-아민 10b, [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(28 mg, 0.02 mmol) 및 탄산세슘(124 mg, 0.2 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 20 mL의 1,4-디옥산과 4 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(20 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 10c(100 mg, 수득률: 92%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 564.3 [M+1].

단계 3

화합물 10c(100 mg, 0.17 mmol)를 20 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 1 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(20 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 10(15 mg, 수득률: 18%)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 450.1 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.33 (d, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.41-7.33 (m, 3H), 7.28-7.24 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.32 (d, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.46 (d, 1H), 4.32 (dd, 1H), 4.27-4.17 (m, 3H), 3.82 (s, 3H).

실시예 11, 12 및 13

(S)-2-(2-아미노-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 11

(R)-2-(1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 12

(S)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-(메틸아미노)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 13

단계 1

(S)-2-(3-클로로페닐)-2-(6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-3-옥소-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-2(3H)-일)에틸 메탄설포네이트 11a

화합물 3(12.0 mg, 0.026 mmol)을 10 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 트리에틸아민(8.0 mg, 0.079 mmol)과 염화메탄설포닐(6.0 mg, 0.052 mmol)을 연속적으로 첨가하고, 반응 용액을 30분 동안 교반하였다. 소량의 물을 첨가하고, 반응 용액을 감압하에 농축시켜 표제 화합물 11a(14 mg, 수득률: 99%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 542.0[M+1].

단계 2

(S)-2-(2-아지도-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 11b

화합물 11a(14 mg, 0.026 mmol)를 7 mL의 N,N-디메틸포름아미드에 용해시킨 뒤에, 아지드화나트륨(8.4 mg, 0.130 mmol)을 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 디클로로메탄(10 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켜 화합물 11b(12 mg, 수득률: 95%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 489.0[M+1].

단계 3

화합물 11b(17 mg, 0.035 mmol)를 5 mL의 메탄올에 용해시킨 뒤에, 탄소 상의 팔라듐(palladium on carbon)(42 mg, 0.35 mmol, 10% 팔라듐)을 첨가하였다. 반응계를 수소로 세 번 퍼지(purge)하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 분취 HPLC로 정제하여 화합물 11(1.0 mg, 수득률: 6%), 화합물 12(1.0 mg, 수득률: 6%), 화합물 13(1.0 mg, 수득률: 6%)을 수득하였다.

화합물 11

MS m/z (ESI): 463.2[M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.23 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.47-7.42 (m, 3H), 6.74(s, 1H), 6.33 (s, 1H), 5.37-5.34 (dd, 1H), 4.56-4.52 (d, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.26-4.16 (m, 1H), 4.14-4.02 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.39 (s, 3H).

화합물 12

MS m/z (ESI): 448.1[M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 8.23 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.45-7.34 (m, 3H), 6.75 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 5.45-5.40 (dd, 1H), 4.58-4.54 (d, 1H), 4.20-4.16 (d, 1H), 3.77 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.74-1.72 (d, 3H).

화합물 13

MS m/z (ESI): 477.2[M+1].

¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ 8.15 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.42-7.27 (m, 4H), 6.61 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 5.39 (d, 1H), 4.41 (d, 1H), 4.21 (d, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.68-3.52 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.07-2.01 (m, 3H).

실시예 14

(S)-2-(1-(4-클로로-3-플루오로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 14

실시예 6의 합성 경로를 적용하고, 단계 1의 출발 화합물 6a를 (S)-2-아미노-2-(3-플루오로-4-클로로페닐)에탄-1-올로 대체하여 화합물 14(15 mg)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 482.2 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.19 (s, 1H), 7.61-7.48 (m, 2H), 7.47-7.36 (m, 2H), 7.22 (d, 1H), 7.13 (d, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.15 (dd, 1H), 4.42 (d, 1H), 4.32 (dd, 1H), 4.26 - 4.13 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.33 (s, 3H).

실시예 15

(S)-2-(2-히드록시-1-(m-톨릴)에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 15

단계 1

(S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(m-톨릴)에타민 15b

(S)-2-아미노-2-(m-톨릴)에탄-1-올 15a(3 g, 19.8 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)을 100 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 이미다졸(4 g, 58.7 mol)을 첨가하였다. 반응 용액을 0℃로 냉각시킨 뒤에, tert-부틸디메틸클로로실란(3.9 g, 25.9 mmol)을 첨가하고, 14시간 동안 교반하였다. 100 mL의 물을 첨가하고, 반응 용액을 디클로로메탄으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 15b(5 g, 수득률: 95%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 266.2 [M+1].

단계 2

(S)-N-((4-브로모-1H-피롤-2-일)메틸)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(m-톨릴)에탄-1-아민 15c

화합물 15b(5 g, 19.5 mmol)와 화합물 1b(3.4 g, 19.5 mmol)를 교반하고 3시간 동안 반응시켰다. 50 mL의 메탄올을 첨가하고, 반응 용액을 0℃로 냉각시킨 뒤에, 수소화붕소나트륨(800 mg, 21.1 mmol)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 감압하에 농축시켰다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 15c(7.3 g, 수득률: 88%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 423.1 [M+1].

단계 3

(S)-6-브로모-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(m-톨릴)에틸)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 15d

화합물 15c(7.3 g, 17.2 mmol)를 150 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, N,N'-카르보닐디이미다졸(8.4 g, 51.7 mmol)을 빙욕에서 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 수소화나트륨(60%, 2 g, 51.7 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 14시간 동안 교반한 뒤에, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 15d(7 g, 수득률: 90%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 450.1 [M+1].

단계 4

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(m-톨릴)에틸)-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 15e

화합물 15d(7 g, 15.5 mmol)를 아르곤 분위기하에 100 mL의 디옥산에 용해시킨 뒤에, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(5.9 g, 23.3 mmol), 아세트산칼륨(3.1 g, 31.1 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(2.3 g, 2.1 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 15e(4 g, 수득률: 51.7%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 497.2 [M+1].

단계 5

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(m-톨릴)에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 15f

화합물 10b(550 mg, 2.62 mmol), 화합물 15e(1.56 g, 3.15 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(1.7 g, 0.26 mmol) 및 탄산세슘(1.7 g, 5.2 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 30 mL의 1,4-디옥산과 6 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(15 mL×2)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 15f(1.4 g, 수득률: 98%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 544.2 [M+1].

단계 6

화합물 15f(1.3 g, 2.4 mmol)를 10 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 3 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 4시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(30 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 전개 용매계 A를 사용한 박층 크로마토그래피로 정제하여 화합물 15(500 mg, 수득률: 48.6%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 430.1 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.29 (d, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.43 (d, 1H), 7.32-7.24 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.19-7.12 (m, 2H), 7.10 (d, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.31 (d, 1H), 5.23 (dd, 1H), 4.61 (d, 1H), 4.29 (d, 1H), 4.19 (dd, 1H), 4.11-3.99 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.34 (s, 3H).

실시예 16

(S)-2-(1-(3-클로로-4-플루오로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 16

실시예 6의 합성 경로를 적용하고, 단계 5의 출발 화합물 1f를 화합물 10b로 대체하여 화합물 16(20 mg)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 468.0 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.31 (d, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.21-7.13 (m, 1H), 6.90 (d, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 5.14 (dd, 1H), 4.45 (d, 1H), 4.35-4.24 (m, 1H), 4.24-4.13 (m, 2H), 3.80 (s, 3H).

실시예 17

(S)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-(이소프로필아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 17

단계 1

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 17b

2,4-디클로로-5-메틸피리미딘 17a(76.3 mg, 0.47 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.), 화합물 2e(220 mg, 0.43 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(62.3 mg, 0.08 mmol) 및 탄산세슘(277.3 mg, 0.85 mmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 10 mL의 1,4-디옥산과 2 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(10 mL×3)로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 17b(100 mg, 수득률: 45.4%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 517.1 [M+1].

단계 2

(S)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(3-클로로페닐)에틸)-6-(2-(이소프로필아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 17d

화합물 17b(80 mg, 154.5 μmol)와 이소프로필아민 17c(91.4 mg, 1.5 mmol, Shanghai Bide Pharmatech Ltd.)를 2 mL의 N,N-디메틸아세트아미드에 용해시키고, 반응 용액을 마이크로파 반응기에서 150℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 17d(20 mg, 수득률: 24%)를 수득하였다.

단계 3

(S)-2-(1-(3-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-(이소프로필아미노)-5-메틸피리미딘-4-yl)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 17

화합물 17d(20 mg, 37 μmol)를 5 mL의 디클로로메탄에 용해시킨 뒤에, 0.5 mL의 트리플루오로아세트산을 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응 용액을 1시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액으로 pH를 7로 조정하고, 반응 용액을 디클로로메탄(20 mL×2)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 17(5 mg, 수득률: 32%)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 426.2 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.08 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.34 (d, 3H), 7.25 (d, 2H), 6.70 (s, 1H), 5.13 (dd, 1H), 4.45 (d, 1H), 4.36-4.25 (m, 2H), 4.23-4.14 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.26 (d, 6H).

실시예 18

2-(3,4-디플루오로벤질)-6-(5-메틸-2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 18

단계 1

1-(4-브로모-1H-피롤-2-일)-N-(3,4-디플루오로벤질)포름아미드 18b

화합물 (3,4-디플루오로페닐)메탄아민 18a(863 mg, 6.0 mmol)와 화합물 1b(1 g, 5.7 mmol)를 교반하고 3시간 동안 반응시켰다. 20 mL의 메탄올을 첨가하고, 반응 용액을 0℃로 냉각시켰다. 수소화붕소나트륨(361 mg, 5.7 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 감압하에 농축시켰다. 물을 첨가하고, 반응 용액을 아세트산에틸로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 18b(1.7 g, 수득률: 98.2%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 301.0 [M+1].

단계 2

6-브로모-2-(3,4-디플루오로벤질)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 18c

화합물 18b(0.5 g, 1.7 mmol)를 50 mL의 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 뒤에, N,N'-카르보닐디이미다졸(286 mg, 2.0 mmol)을 빙욕에서 첨가하고, 반응 용액을 0.5시간 동안 교반하였다. 수소화나트륨(60%, 15 mg, 0.63 mmol)을 첨가하고, 반응 용액을 실온에서 14시간 동안 교반한 뒤에, 포화 염화암모늄 용액을 첨가하였다. 반응 용액을 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 18c(220 mg, 수득률: 40.5%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 327.0 [M+1].

단계 3

2-(3,4-디플루오로벤질)-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 18d

화합물 18c(100 mg, 0.31 mmol)를 아르곤 분위기하에 10 mL의 디옥산에 용해시킨 뒤에, 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비스(1,3,2-디옥사보롤란)(95 mg, 0.37 mmol), 아세트산칼륨(60 mg, 0.61 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(22 mg, 30 μmol)을 연속적으로 첨가하였다. 반응 용액을 90℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 용리액계 C를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 18d(28 mg, 수득률: 24.5%)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 375.0 [M+1].

단계 4

화합물 18d(27 mg, 72 μmol), 화합물 1f(15 mg, 67 μmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 이염화물(6 mg, 8.2 μmol) 및 탄산세슘(18 mg, 130 μmol)의 혼합물을 아르곤 분위기하에 5 mL의 1,4-디옥산과 1 mL의 물에 현탁시켰다. 반응 용액을 80℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 수집하고, 아세트산에틸(10 mL×2)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 용리액계 A를 사용한 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 18(10 mg, 수득률: 34%)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 435.9 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.23 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.63-7.54 (m, 1H), 7.36-7.22 (m, 2H), 7.19 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.48 (d, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.42 (s, 3H).

실시예 19

(S)-2-(1-(3-플루오로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 19

실시예 15의 합성 경로를 적용하고, 단계 1의 출발 화합물 (S)-2-아미노-2-(3-메틸페닐)에탄-1-올 15a를 (S)-2-아미노-2-(3-플루오로페닐)에탄-1-올로 대체하여 화합물 19(50 mg)를 수득하였다.

MS m/z (ESI): 434.1 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.29 (d, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.51-7.34 (m, 2H), 7.28-7.15 (m, 2H), 7.14-6.99 (m, 2H), 6.65 (s, 1H), 6.32 (d, 1H), 5.26 (dd, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.34 (d, 1H), 4.26-4.14 (m, 1H), 4.13-4.03 (m, 1H), 3.75 (s, 3H).

실시예 20

(S)-2-(1-(3-플루오로-4-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 20

실시예 14의 합성 경로를 적용하고, 단계 5의 출발 화합물 1f를 화합물 10b로 대체하여 화합물 20(50 mg)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 468.1 [M+1].

¹H NMR (400MHz, CD₃OD) δ 8.29 (d, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.49 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.32 (d, 1H), 5.24 (dd, 1H), 4.64 (d, 1H), 4.36 (d, 1H), 4.21-4.13 (m, 1H), 4.11-4.03 (m, 1H), 3.75 (s, 3H).

실시예 21

(S)-2-(1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-6-(2-((1-메틸-1H-피라졸-5-일)아미노)피리미딘-4-일)-1H-피롤로[1,2-c]이미다졸-3(2H)-온 21

실시예 15의 합성 경로를 적용하고, 단계 1의 출발 화합물 15a를 (S)-2-아미노-2-(4-클로로페닐)에탄-1-올로 대체하여 화합물 21(10 mg)을 수득하였다.

MS m/z (ESI): 450.1 [M+1].

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.33 (d, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.42-7.35 (m, 2H), 7.31 (d, 2H), 6.94 (d, 1H), 6.54 (s, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.14 (dd, 1H), 4.44 (d, 1H), 4.30 (dd, 1H), 4.25-4.14 (m, 2H), 3.82 (s, 3H).

생물학적 검정(Biological Assay)

시험예 1: ERK1 효소 활성 시험

1. 시험 목적

이 실험의 목적은 ERK1 효소 활성에 대한 화합물의 억제 능력을 검출하고, IC₅₀에 기반하여 화합물의 시험관내 활성(in vitro activity)을 평가하는 것이다. 이 실험에서 ADP-Glo™ 키나아제 분석 키트(Kinase Assay Kit)를 사용한다. 효소의 작용하에, 기질(substrate)이 인산화되고, ADP가 이와 동시에 생성된다. ADP-Glo 시약을 첨가하여 반응계에서 미반응된 ATP를 제거하고, 키나아제 검출 시약을 사용하여 반응에 의해 생성된 ADP를 검출한다. 화합물의 존재하에, 신호 값을 측정하여 화합물의 억제율을 계산한다.

2. 실험 방법

효소 및 기질의 제제화(formulation): ERK1(1879-KS-010, R&D)과 기질(AS-61777, anaspec)을 완충액(40 mM Tris, 20 mM MgCl₂, 0.1 mg/ml BSA, 50 μM DTT)에서 각각 0.75 ng/㎕와 100 ㎕가 되도록 제제화한 다음, 효소 용액과 기질 용액을 나중에 사용하기 위해 2:1의 부피비로 혼합 용액으로 제조하였다. ATP를 완충액을 사용하여 300 μM로 희석하였다. 화합물을 DMSO에 용해시켜 초기 농도가 20 mM인 스톡 용액(stock solution)을 제조한 다음, Bravo(SGC120TH34702, Agilent Technologies)를 사용하여 스톡 용액을 원하는 농도로 희석하였다. 마지막으로, 3 ㎕의 효소와 기질의 혼합 용액과, 1 ㎕의 각기 다른 농도의 화합물(초기 농도는 50 μM, 4배 희석)을 384-웰 플레이트(well plate)의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 10분 동안 인큐베이션하고, 마지막으로 1 ㎕의 300 μM ATP 용액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 5 ㎕의 ADP-Glo를 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 10 ㎕의 키나아제 검출 완충액을 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 384-웰 플레이트를 꺼내서 마이크로플레이트 리더(BMG labtech, PHERAstar FS)에 넣고, 마이크로플레이트 리더로 화학발광(chemiluminescence)을 측정하였다.

3. 데이터 분석

Microsoft Excel, Graphpad Prism 5를 사용하여 데이터를 처리하고 분석하였다. 화합물의 IC₅₀ 값을 구하고, 그 결과를 아래 표 1에 제시한다.

표 1. ERK1 효소 활성 억제에 대한 본 화합물의 IC₅₀ 값

결론: 본 개시내용의 화합물은 ERK1 효소 활성에 상당한 억제 효과를 갖는다.

시험예 2: ERK2 효소 활성 시험

1. 시험 목적

이 실험의 목적은 ERK2 효소 활성에 대한 화합물의 억제 능력을 검출하고, IC₅₀에 기반하여 화합물의 시험관내 활성을 평가하는 것이다. 이 실험에서 ADP-Glo™ 키나아제 분석 키트를 사용한다. 효소의 작용하에, 기질이 인산화되고, ADP가 이와 동시에 생성된다. ADP-Glo 시약을 첨가하여 반응계에서 미반응된 ATP를 제거하고, 키나아제 검출 시약으로 반응에 의해 생성된 ADP를 검출한다. 화합물의 존재하에, 신호 값을 측정하여 화합물의 억제율을 계산한다.

2. 실험 방법

효소 및 기질의 제제화: ERK2(1879-KS-010, R&D)와 기질{맞춤형 펩티드(custom peptide), Gill Biochemical}을 완충액(40 mM Tris, 20 mM MgCl₂, 0.1 mg/ml BSA, 50 μM DTT)에서 0.75 ng/㎕와 1500 ng이 되도록 제제화한 다음, 효소 용액과 기질 용액을 나중에 사용하기 위해 2:1의 부피비의 혼합 용액으로 제조하였다. ATP를 완충액을 사용하여 500 μM로 희석하였다. 화합물을 DMSO에 용해시켜 초기 농도가 20 mM인 스톡 용액을 제조한 다음, Bravo(SGC120TH34702, Agilent Technologies)를 사용하여 스톡 용액을 원하는 농도로 희석하였다. 마지막으로, 3 ㎕의 효소와 기질의 혼합 용액과, 1 ㎕의 각기 다른 농도의 화합물(초기 농도는 50 μM, 4배 희석)을 384-웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 10분 동안 인큐베이션하고, 마지막으로 1 ㎕의 500 μM ATP 용액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 5 ㎕의 ADP-Glo를 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 10 ㎕의 키나아제 검출 완충액을 첨가하고, 플레이트를 30℃에서 40분 동안 인큐베이션하였다. 384-웰 플레이트를 꺼내서 마이크로플레이트 리더(BMG labtech, PHERAstar FS)에 넣고, 마이크로플레이트 리더로 화학발광을 측정하였다.

3. 데이터 분석

Microsoft Excel, Graphpad Prism 5를 사용하여 데이터를 처리하고 분석하였다. 화합물의 IC₅₀ 값을 구하고, 그 결과를 아래 표 2에 제시한다.

표 2. ERK2 효소 활성 억제에 대한 본 화합물의 IC₅₀ 값

결론: 본 개시내용의 화합물은 ERK2 효소 활성에 상당한 억제 효과를 갖는다.

시험예 3: Colo205 종양 세포에 대한 화합물의 시험관내 증식 억제 시험

1. 시험 목적

이 실험의 목적은 Colo205 세포(CCL-222, ATCC)의 시험관내 증식에 대한 화합물의 억제 활성을 시험하는 것이다. 세포를 각기 다른 농도의 화합물로 시험관 내에서 처리하였다. 3일 배양 후, CTG{CellTiter-Glo^® 발광 세포 생존력 검정(Luminescent Cell Viability Assay), Promega, 품목 번호 G7573} 시약을 사용하여 세포 증식을 시험하였다. IC₅₀ 값에 따라 화합물의 시험관내 활성을 평가하였다.

2. 실험 방법

다음에는, Colo205 세포의 시험관내 증식 억제 시험 방법을 하나의 예로 들어서, 본 개시내용의 화합물의 시험관내 증식 억제 활성을 시험하기 위한 본 개시내용의 방법을 기술한다. 이 방법은 또한 다른 종양 세포에 대한 시험관내 증식 억제 활성 시험에도 적용 가능하지만, 이에 제한되지는 않는다.

Colo205 세포를 소화하고 원심분리한 다음, 재현탁시켰다. 단일 세포 현탁액을 잘 혼합하고, 생존 세포(viable cell)의 밀도를 세포 배양 배지(RPMI1640 + 2% FBS)로 5.0×10⁴ 세포/ml로 조정하고, 95 ㎕/웰을 96-웰 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 96-웰 플레이트의 주변 웰(peripheral well)에 100 ㎕의 배지만을 첨가하였다. 배양 플레이트를 인큐베이터에서 24시간 동안 인큐베이션하였다(37℃, 5% CO₂).

화합물을 DMSO에 용해시키고 초기 농도가 20 mM인 스톡 용액으로 제조하였다. 저분자 화합물의 초기 농도는 2 mM이고, 그 다음에 4배 희석하여 9 포인트가 되고, 10번째 포인트가 DMSO이다. 또 다른 96-웰 플레이트를 취하고, 각 웰에 90 ㎕의 세포 배양 배지(RPMI1640 + 2% FBS)를 첨가한 다음, 각 웰에 10 ㎕의 각기 다른 농도의 시험 샘플을 첨가하였다. 혼합물을 잘 혼합한 다음, 5 ㎕의 각기 다른 농도의 시험 샘플을 각 샘플에 대해 두 개의 중복 웰(duplicate well)이 있는 세포 배양 플레이트에 첨가하였다. 배양 플레이트를 인큐베이터에서 3일 동안 인큐베이션하였다(37℃, 5% CO₂). 96-웰 세포 배양 플레이트를 꺼내어, 각 웰에 50 ㎕의 CTG 용액을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 마이크로플레이트 리더(BMG labtech, PHERAstar FS)에서, 마이크로플레이트 리더로 화학발광을 측정하였다.

3. 데이터 분석

Microsoft Excel, Graphpad Prism 5를 사용하여 데이터를 처리하고 분석하였다. 그 실시예 결과를 아래 표 3에 제시한다.

표 3. 시험관내 Colo205 종양 세포 증식 억제에 대한 본 화합물의 IC₅₀ 값

약동학적 평가(Pharmacokinetics Evaluation)

시험예 4. 본 개시내용의 화합물의 마우스에서의 약동학 검정

1. 요약

마우스를 시험 동물로 사용하였다. 마우스에 실시예 3, 실시예 10, 실시예 15 및 실시예 20의 화합물을 위내(intragastrical) 투여한 후 LC/MS/MS 방법으로 상이한 시점에 혈장 중의 약물 농도를 측정하였다. 마우스에서 본 개시내용의 화합물의 약동학적 거동을 연구하고, 약동학적 특징을 평가하였다.

2. 시험 프로토콜(Test protocol)

2.1 시험 화합물

실시예 3, 실시예 10, 실시예 15 및 실시예 20의 화합물.

2.2 시험 동물

36마리의 C57 마우스(암컷, 4개의 군으로 동등하게 나누어짐)를 Shanghai Jiesijie Laboratory Animal Co., LTD.(허가 번호: SCXK(Shanghai)2013-0006)에서 구입하였다.

2.3 시험 화합물의 제조

일정량의 시험 화합물을 칭량하고, 5%의 DMSO와 5%의 tween 80을 첨가하여 용해시켰다. 그 다음에, 90%의 생리 식염수를 첨가하여 0.1 mg/ml의 무색의 맑고 투명한 용액을 제조하였다.

2.4 투여

밤새 금식시킨 후, C57 마우스에게 2 mg/kg의 투여량과 0.2 ml/10 g의 부피로 시험 화합물을 위내 투여하였다.

3. 프로세스

마우스에게 시험 화합물을 위내 투여하였다. 투여 전 및 투여 후 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 11.0 및 24.0 시간에 0.1 mL의 혈액을 채취하였다. 샘플을 헤파린 처리된 관(heparinized tube)에 보관하고, 3500 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 혈장 샘플을 -20℃에서 보관하였다.

각기 다른 농도의 시험 화합물을 위내 투여한 후 마우스의 혈장 내 시험 화합물의 함량을 측정하였다: 투여 후 각 시점에서 25 ㎕의 쥐(rat) 혈장을 채취한 뒤에, 50 ㎕의 내부 표준 캄토테신(camptothecin) 용액{중국 식품 의약품 검정 연구원(National Institutes for Food and Drug Control of China)}과 200 ㎕의 아세토니트릴을 첨가하였다. 생성된 용액을 5분 동안 와류 혼합(vortex-mix)하고, 10분 동안 원심 분리하였다(4000 rpm). LC/MS/MS 분석을 위해 혈장 샘플로부터 4 ㎕의 상청액을 채취하였다.

4. 약동학적 파라미터의 결과

본 개시내용의 화합물의 약동학적 파라미터를 아래에 제시한다:

결론: 본 개시내용의 화합물은 잘 흡수되고, 상당한 약동학적 이점이 있다.

Claims

일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체(stereoisomer), 토토머(tautomer), 메소머(mesomer), 라세미체(racemate), 거울상 이성질체(enantiomer), 부분입체 이성질체(diastereomer), 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염(pharmaceutically acceptable salt)으로서,

상기 식에서:
R¹은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 아미노알킬 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬은 NR⁷R⁸, 알콕시, 할로겐, 시아노, 니트로, 히드록시 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 치환되고;
R²는 동일하거나 상이하고, 각각은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R³은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 각각 알킬, 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시, 히드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고;
R⁴는 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R⁵는 동일하거나 상이하고, 각각은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 니트로, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R⁶은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
R⁷과 R⁸은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자, 알킬, 히드록시알킬 및 할로알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
m은 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
n은 0, 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
z는 0, 1, 2, 3 및 4로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 그리고
Q는 0, 1 및 2로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
R¹은 수소 원자, 할로겐, 알킬, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 히드록시, 히드록시알킬, 시아노, 아미노, 아미노알킬 및 니트로로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 또는 제2항에 있어서,
일반식(I-P)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이고,

상기 식에서, R¹ 내지 R⁶, m, n, z 및 Q는 제1항 또는 제2항에서 정의된 바와 같은, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
R⁴는 수소 원자인, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
n은 1 또는 2인, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 또는 제2항에 있어서,
식(II) 또는 식(II-P)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이고,

상기 식에서, R¹ 내지 R⁶, m, z 및 Q는 제1항 또는 제2항에서 정의된 바와 같은, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
R¹은 수소 원자, 알킬, 히드록시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R¹은 수소 원자, C_1-6 알킬, 히드록시, 아미노 C_1-6 알킬, C_1-6 알킬아미노 C_1-6 알킬 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 더 바람직하게는, R¹은 수소 원자, 메틸, 히드록시메틸, 아미노메틸 및 메틸아미노메틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
R¹은 수소 원자, 알킬, 히드록시, 아미노알킬 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R¹은 수소 원자, C_1-6 알킬, 히드록시, 아미노 C_1-6 알킬 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 더 바람직하게는, R¹은 수소 원자, 메틸, 히드록시메틸 및 아미노메틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 또는 제2항에 있어서,
식(III) 또는 식(III-P)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이고,

상기 식에서:
p는 0, 1, 2 및 3으로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 1이고;
R², R³, R⁵, R⁶, m, n, z 및 Q는 제1항 또는 제2항에서 정의된 바와 같은, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
R²는 수소 원자, 할로겐 및 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R²는 수소 원자, 할로겐 및 C_1-6 알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 더 바람직하게는, R²는 C_1-6 알킬인, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
R³은 알킬, 히드록시알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴 및 헤테로아릴은 각각 알킬, 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고; 바람직하게는, R³은 C_1-6 알킬, C_1-6 히드록시알킬, C_3-6 시클로알킬, 3 내지 8 원 헤테로시클릴 및 5 내지 10 원 헤테로아릴로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기에서 C_1-6 알킬, C_3-6 시클로알킬, 3 내지 8 원 헤테로시클릴 및 5 내지 10 원 헤테로아릴은 각각 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
R³은 헤테로아릴이고, 여기에서 헤테로아릴은 알킬, 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고; 바람직하게는, R³은 5 내지 10 원 헤테로아릴이고, 여기에서 5 내지 10 원 헤테로아릴은 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시, 옥소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 히드록시 및 C_1-6 히드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 선택적으로 추가 치환되고; 바람직하게는, R³은 피라졸릴이고, 여기에서 피라졸릴은 C_1-6 알킬, 바람직하게는 메틸로 선택적으로 치환되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
R⁵는 수소 원자, 알킬, 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R⁵는 수소 원자, C_1-6 알킬, C_1-6 알콕시 및 할로겐으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
R⁶은 수소 원자인, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,

로
이루어지는 군으로부터 선택되는, 일반식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
식(IIIA) 또는 식(III-PA)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로서,

상기 식에서:
R_w는 히드록시 보호기이고; 그리고
R², R³, R⁵, R⁶, m, n, p, Q 및 z는 제9항에서 정의된 바와 같은, 식(IIIA) 또는 식(III-PA)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제16항에 있어서,

로
이루어지는 군으로부터 선택되는, 식(IIIA) 또는 식(III-PA)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
제9항에 따른 식(III) 또는 식(III-P)의 화합물을 제조하기 위한 방법으로서,
다음의 단계:

산성 조건하에 식(IIIA) 또는 식(III-PA)의 화합물로부터 히드록시 보호기 R_w를 제거하여 식(III) 또는 식(III-P)의 화합물을 수득하는 단계를
포함하고,
상기 식에서:
히드록시 보호기 R_w는 바람직하게는 TBS이고; 그리고
R², R³, R⁵, R⁶, m, n, p, Q 및 z는 제9항에서 정의된 바와 같은, 식(III) 또는 식(III-P)의 화합물을 제조하기 위한 방법.
치료 유효량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과,
하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를
포함하는, 약학 조성물.
ERK를 억제하기 위한 약제(medicament)의 제조에 있어서의, 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제19항에 따른 약학 조성물의 용도.
암, 염증, 또는 기타 증식성 질병, 바람직하게는 암을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 식(I)의 화합물, 또는 이의 입체 이성질체, 토토머, 메소머, 라세미체, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 또는 이의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 제19항에 따른 약학 조성물의 용도로서,
암은 흑색종(melanoma), 간암(liver cancer), 신장암(kidney cancer), 폐암(lung cancer), 비인두 암(nasopharyngeal cancer), 대장암(colorectal cancer), 결장암(colon cancer), 직장암(rectal cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 난소암(ovarian cancer), 유방암(breast cancer), 방광암(bladder cancer), 전립선암(prostate cancer), 백혈병(leukemia), 두경부 편평상피 세포 암종(head and neck squamous cell carcinoma), 자궁경부 암종(carcinoma　of　uterine　cervix), 갑상선암(thyroid cancer), 림프종(lymphoma), 육종(sarcoma), 신경모세포종(neuroblastoma), 뇌종양(brain tumor), 골수종(myeloma), 성상세포종(astrocytoma) 및 신경교종(glioma)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.