ES2559828T3 - ARN de interferencia encapsulado en lípidos - Google Patents
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Abstract
Partícula de ácido nucleico-lípido para su uso en la administración in vivo de un siARN en un método para el tratamiento de un sujeto mamífero mediante terapia, donde dicho método comprende administrar dicha partícula de ácido nucleico-lípido a dicho sujeto mamífero, donde dicha partícula de ácido nucleico-lípido comprende: un siARN; un lípido catiónico; un lípido no catiónico; y un conjugado de polietilenglicol (PEG)-lípido; en donde dicho siARN se encuentra completamente encapsulado en dicha partícula de ácido nucleico lípido.
Description
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ejemplo, diacilfosfatidilcolina, diacilfosfatidiletanolamina, ceramida, esfingomielina, cefalina, colesterol, cerebrósidos y diacilgliceroles.
El término "lípido no catiónico " hace referencia a cualquier lípido neutro según se describe anteriormente, además de a lípidos aniónicos.
El término “lípido aniónico” hace referencia a cualquier lípido que tenga carga negativa a pH fisiológico. Estos lípidos incluyen, pero no se limitan a, fosfatidilglicerol, cardiolipina, diacilfosfatidilserina, ácido diacilfosfatídico, N-dodecanoil fosfatidiletanolaminas, N-succinil fosfatidiletanolaminas, N-glutarilfosfatidiletanolaminas, lisilfosfatidilgliceroles, palmitoiloleiolfosfatidilglicerol (POPG), y otros grupos de modificación aniónica unidos a lípidos neutros.
El término “lípido catiónico” hace referencia a cualquiera de una serie de especies de lípidos que portan una carga neta positiva a un pH seleccionado, tal como pH fisiológico. Tales lípidos incluyen, pero no se limitan a, cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio ("DODAC"); cloruro de N-(2,3-dioleiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio ("DOTMA"); bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio ("DDAB"); cloruro de N-(2,3-dioleoiloxi)propil)-N,N,N-trimetilamonio ("DOTAP"); 3 -(N-(N’,N’-dimetilaminoetano)-carbamoil)colesterol ("DC-Chol") y bromuro de N-(1,2-dimiristiloxiprop-3il)-N,N-dimetil-N-hidroxietil amonio ("DMRIE"). Los siguientes lípidos son catiónicos y tienen una carga positiva a un pH por debajo del pH fisiológico: DODAP, DODMA, DMDMA y similares.
El término “lípido hidrófobo” hace referencia a compuestos que tienen grupos apolares que incluyen, pero no se limitan a, grupos de hidrocarburos alifáticos saturados e insaturados de cadena larga y tales grupos opcionalmente sustituidos por uno o más grupos aromáticos cicloalifáticos o heterocíclicos. Ejemplos adecuados incluyen, pero no se limitan a, diacilglicerol, dialquilglicerol, N-N-dialquilamino, 1,2-diaciloxi-3-aminopropano y 1,2-dialquil-3aminopropano.
El término “fusogénico” hace referencia a la habilidad de un liposoma, una SNALP u otro sistema de administración del fármaco para fusionarse con membranas de una célula. Las membranas pueden ser la membrana plasmática o membranas que rodean orgánulos, por ejemplo, endosoma, núcleo, etc.
El término "diacilglicerol" hace referencia a un compuesto que tiene 2 cadenas de acilo graso, R1 y R2, ambos de los cuales tiene independientemente entre 2 y 30 carbonos enlazados en la posición 1 y 2 del glicerol mediante enlaces éster. Los grupos acilo pueden estar saturados o tener diversos grados de insaturación. Los diacilgliceroles tienen la siguiente fórmula general:
El término "dialquiloxipropilo" hace referencia a un compuesto que tiene dos cadenas de alquilo, R1 y R2, ambas de las cuales tienen independientemente entre 2 y 30 carbonos. Los grupos alquilo pueden estar saturados o tener diversos grados de insaturación. Los dialquiloxipropilos tienen la siguiente fórmula general:
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El término "ATTA" o "poliamida" hace referencia a, pero no se limita a, compuestos revelados en las patentes estadounidenses Nos. 6.320.017 y 6.586.559. Estos compuestos incluyen un compuesto con la fórmula
en donde: R es un miembro seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo y acilo; R1 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo; o de manera opcional, R y R1 y el nitrógeno al que están enlazados forman una fracción azido; R2 es un miembro del grupo seleccionado de hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido y una cadena lateral de un aminoácido; R3 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en hidrógeno, halógeno, hidroxi, alcoxi, mercapto, hidrazino, amino y NR4R5, en donde R4 y R5 son independientemente hidrógeno o alquilo; n es de 4 a 80; m es de 2 a 6; p es de 1 a 4; y q es 0 o 1. Resultará obvio para los expertos en el arte que otras poliamidas pueden ser utilizadas en los compuestos de la presente invención.
El término "ácido nucleico" o "polinucleótido" hace referencia a un polímero que contiene al menos dos desoxiribonucleótidos o ribonucleótidos ya sea en una forma de cadena única o de cadena doble. A menos que estén específicamente limitados, los términos abarcan ácidos nucleicos que contienen análogos conocidos de nucleótidos naturales que tienen propiedades de unión similares a las del ácido nucleico de referencia, y que se metabolizan de forma similar a los nucleótidos de origen natural. A menos que se indique de otro modo, una secuencia de ácido nucleico en particular también abarca, de forma implícita, variantes de la misma modificadas de forma conservadora (por ejemplo, sustituciones de codones degenerados), alelos, ortólogos, SNP, y secuencias complementarias además de la secuencia explícitamente indicada. Específicamente, las sustituciones de codones degenerados pueden lograrse generando secuencias en las que la tercera posición de uno o más (o todos) codones seleccionados se sustituye con residuos de bases mixtas y/o desoxiinosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); y Cassol et al. (1992); Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)). Los "Nucleótidos" contienen una a azúcar desoxirribosa (ADN) o ribosa (ARN), una base, y un grupo fosfato. Los nucleótidos se encuentran enlazados entre sí a través de grupos fosfato. Las "Bases" incluyen purinas y pirimidinas, que además incluyen los compuestos naturales adenina, timina, guanina, citosina, uracilo, inosina, y análogos naturales, y derivados sintéticos de purinas y pirimidinas, que incluyen, pero no se limitan a, modificaciones que colocan nuevos grupos reactivos tales como, pero sin limitarse a, aminas, alcoholes, tioles, carboxilatos, y haluros de alquilo. El ADN puede ser una forma antisentido, ADN de un plásmido, partes del ADN de un plásmido, ADN pre-condensado, el producto de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR), vectores (P1, PAC, BAC, YAC, cromosomas artificiales), casetes de expresión, secuencias quiméricas, ADN cromosómico, o derivados de estos grupos. El término ácido nucleico se utiliza de forma intercambiable con un gen, ADNc, ARNm codificado por un gen, y una molécula de ARN de interferencia.
El término “gen” hace referencia a una secuencia de ácido nucleico (por ejemplo, ADN o ARN) que comprende secuencias de codificación de longitud parcial o longitud total necesarias para la producción de un polipéptido o un precursor de un polipéptido (por ejemplo, polipéptidos o precursores de polipéptidos del virus de la hepatitis A, B, C, D, E, o G; o virus del herpes simple).
El término “producto génico” tal como se utiliza en la presente patente, hace referencia a un producto de un gen tal como un transcrito de ARN, incluyendo, por ejemplo, ARNm.
El término “ARN de interferencia” o “ARNi” o “secuencia de ARN de interferencia” hace referencia a un ARN de doble cadena (es decir, ARN dúplex) que es capaz de reducir o inhibir la expresión de un gen diana (es decir, mediando en la degradación de ARNm que son complementarios a la secuencia del ARN de interferencia), cuando el ARN de interferencia se encuentra en la misma célula que el gen diana. El ARN de interferencia hace referencia,
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Los términos “sustancialmente idéntico” o “identidad sustancial”, en el contexto de dos o más ácidos nucleicos, hacen referencia a dos o más secuencias o sub-secuencias que son iguales o tienen un porcentaje específico de nucleótidos que son iguales (es decir, al menos aproximadamente un 60%, preferiblemente un 65%, 70%, 75%, preferiblemente 80%, 85%, 90%, o 95% de identidad sobre una región específica), cuando se compara y alinea para determinar la correspondencia máxima sobre una ventana de comparación, o una región designada según se mide utilizando una de los siguientes algoritmos de comparación de secuencias o mediante alineamiento manual e inspección visual. Esta definición, cuando el contexto lo indica, también hace referencia de forma análoga al complemento de una secuencia. Preferiblemente, la identidad sustancial existe sobre una región que es al menos de aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, o 100 nucleótidos de longitud.
Para la comparación de secuencias, habitualmente una secuencia actúa como secuencia de referencia, son la que se comparan las secuencias de ensayo. Cuando se utiliza un algoritmo de comparación de secuencias, las secuencias de ensayo y la de referencia se introducen en un ordenador, se designan las coordenadas de la subsecuencia, si fuera necesario, y se designan los parámetros del programa del algoritmo de secuencias. Pueden utilizarse parámetros por defecto del programa, o pueden designarse parámetros alternativos. El algoritmo de comparación de secuencias calcula entonces el porcentaje de identidades de la secuencia para las secuencias de ensayo en relación a la secuencia de referencia, en base a los parámetros del programa.
Una “ventana de comparación”, tal como se utiliza en la presente patente, incluye la referencia a un segmento de cualquier número de las posiciones contiguas seleccionadas del grupo que consiste en desde 20 a 600, habitualmente de aproximadamente 50 a aproximadamente 200, de forma más habitual aproximadamente 100 a aproximadamente 150 en las que una secuencia puede ser comparada con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de que las dos secuencias sean alineadas de manera óptima. Los métodos de alineamiento de secuencias se conocen bien en el arte. El alineamiento óptimo de secuencias para su comparación puede ser realizado, por ejemplo, mediante el algoritmo de homología local de Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), mediante el algoritmo de alineamiento por homología de Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante el método de búsqueda de similitud de Pearson & Lipman, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), mediante implementaciones informatizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA, y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), o mediante alineamiento manual e inspección visual (see, e.g., Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds. Suplemento de 1995)).
Un ejemplo preferido de algoritmo que es adecuado para determinar el porcentaje de identidad de secuencia y similitud de secuencia son los algoritmos BLAST y BLAST 2.0, que se describen en Altschul et al., Nuc. Acids Res. 25:3389-3402 (1977) y en Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990), respectivamente. Se utilizan BLAST y BLAST 2.0, con los parámetros descritos en la presente patente, para determinar el porcentaje de identidad de secuencia para los ácidos nucleicos y proteínas de la invención. El software para realizar los análisis con BLAST se encuentra públicamente disponible a través del “National Center for Biotechnology Information” (Centro Nacional para la Información Biotecnológica) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Este algoritmo implica primero identificar pares de secuencia de alta puntuación (HSPs, por sus siglas en inglés) identificando palabras cortas de longitud W en la secuencia de búsqueda, que o bien coincide o satisface una puntuación umbral de valor positivo T cuando se alinea con una palabra de la misma longitud en una secuencia de una base de datos. T hace referencia al umbral de puntuación de palabras vecinas (Altschul et al., supra). Estas coincidencias iniciales de palabras vecinas actúan como semillas para iniciar las búsquedas para encontrar HSPs de mayor longitud que las contengan. Las coincidencias de palabras se extienden en ambas direcciones a lo largo de cada secuencia tanto como pueda aumentarse la puntuación de alineamiento acumulada. Las puntuaciones acumuladas se calculan utilizando, para las secuencias de nucleótidos, los parámetros M (puntuación de recompensa para un par de residuos coincidentes; siempre > 0) y N (puntuación de penalización para residuos no coincidentes; siempre < 0). Para secuencias de aminoácidos, se utiliza una matriz de puntuación para calcular la puntuación acumulada. La extensión de las coincidencias de palabras en cada dirección se detiene cuando: la puntuación de alineación acumulada disminuye en la cantidad X de su valor máximo alcanzado; la puntuación acumulada cae a cero o por debajo, debido a la acumulación de uno o más alineamientos de residuos de puntuación negativa; o se alcanza el extremo de cualquier secuencia. Los parámetros del algoritmo BLAST W, T y X determinan la sensibilidad y velocidad del alineamiento. El programa BLAST (para las secuencias de nucleótidos) utiliza por defecto una longitud de palabra (W) de 11, una expectativa (E) de 10, M=5, N=-4, y una comparación de ambas cadenas. Pata secuencias de aminoácidos, el programa BLASTP utiliza por defecto una longitud de palabra de 3, y expectativa (E) de 10, y la matriz de puntuación BLOSUM62 (ver Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)) alineamientos (B) de 50, expectativa (E) de 10, M=5, N=-4, y una comparación de ambas cadenas.
El algoritmo BLAST también realiza un análisis estadístico de la similitud entre dos secuencias (ver, por ejemplo, Karlin & Altschul, Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993)). Una medida de similitud proporcionada por el algoritmo BLAST es la probabilidad mínima de suma (P(N)), que proporciona una indicación de la probabilidad por la cual una coincidencia entre dos secuencias de aminoácidos o nucleótidos pudiera ocurrir por casualidad. Por ejemplo, un ácido nucleico se considera similar a una secuencia de referencia si la probabilidad mínima de suma en una comparación del ácido nucleico de ensayo con el ácido nucleico de referencia es menor de aproximadamente
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0,2, más preferiblemente menor de aproximadamente 0,01, y de mayor preferencia menor de aproximadamente 0,001.
La frase “inhibir la expresión de un gen diana” hace referencia a la habilidad de un siARN de la invención para iniciar el silenciamiento génico del gen diana. Para examinar el grado de silenciamiento génico, las muestras o ensayos del organismo de interés o de células en cultivo que expresan un constructo en particular se comparan con muestras de control que carecen de la expresión del constructo. A las muestras de control (que carecen de la expresión del constructo) se les asigna un valor relativo del 100%. La inhibición de la expresión de un gen diana se logra cuando el valor del ensayo en relación al control es de aproximadamente un 90%, preferiblemente un 50%, más preferiblemente 25-0%. Los ensayos adecuados incluyen, por ejemplo, el análisis de los niveles de proteína o ARNm utilizando técnicas conocidas para los expertos en el arte tales como ensayos dot blot, northern blot, hibridación in situ, ELISA, inmunoprecipitación, función enzimática, además de ensayos fenotípicos conocidos por los expertos en el arte.
El término “ácido nucleico” hace referencia a desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos y polímeros de los mismos en forma de cadena única o doble. El término abarca ácidos nucleicos que contienen análogos de nucleótidos conocidos o residuos o enlaces de estructura principal modificada, que son sintéticos, naturales, y no naturales, que tienen propiedades de unión similares al ácido nucleico de referencia, y que se metabolizan de manera similar a los nucleótidos de referencia. Ejemplos de tales análogos incluyen, sin limitación, fosforotioatos, fosforamidatos, metil fosfonatos, metil fosfonatos quirales, ribonucleótidos 2’-O-metilo, ácidos péptidonucleicos (APN).
Por “silenciamiento” o “regulación por disminución” de un gen o ácido nucleico ha de entenderse una disminución detectable de la traducción de una secuencia de ácido nucleico diana, es decir, la secuencia fijada como diana por el ARNi, o una disminución en la cantidad o actividad de la secuencia o proteína diana, en comparación con el nivel que se detecta en ausencia de ARN de interferencia o de otra secuencia de ácido nucleico. Una disminución detectable puede ser tan pequeña como aproximadamente un 5% o 10%, o tan grande como aproximadamente un 80%, 90% o 100%. De forma más habitual, una disminución detectable es de aproximadamente un 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, o 70%.
Una “cantidad terapéuticamente efectiva” o una “cantidad efectiva” de un siARN es una cantidad suficiente para producir el efecto deseado, por ejemplo, una disminución en la expresión de una secuencia diana en comparación con el nivel de expresión normal detectado en ausencia de siARN.
Tal como se utiliza en la presente patente, el término “solución acuosa” hace referencia a una composición que comprende en su totalidad, o en parte, agua.
Tal como se utiliza en la presente patente, el término “solución lipídica orgánica” hace referencia a una composición que comprende en su totalidad, o en parte, un disolvente que posee un lípido.
"Sitio distal", tal como se utiliza en la presente patente, hace referencia a un sitio físicamente separado, que no está limitado a un lecho capilar adyacente, sino que incluye sitios ampliamente distribuidos a lo largo de un organismo. En algunos modos de realización, sitio distal hace referencia a un sitio físicamente separado del sitio de la enfermedad (por ejemplo, el sitio de un tumor, el sitio de una inflamación, o el sitio de una infección).
"Estable en suero" en relación a partículas de ácido nucleico-lípido significa que la partícula no se degrada de forma significativa después de la exposición a un ensayo con suero o una nucleasa que degradaría significativamente el ADN libre. Ensayos adecuados incluyen, por ejemplo, un ensayo en suero estándar o un ensayo de ADNasa tal como los descritos en los Ejemplos más adelante.
"Administración sistémica", tal como se utiliza en la presente patente, hace referencia a un sistema de administración que conduce a una biodistribución amplia de un compuesto dentro de un organismo. Algunas técnicas de administración pueden conducir a la administración sistémica de determinados compuestos, pero no otros. Administración sistémica significa que una cantidad útil, preferiblemente terapéutica, de un compuesto es expuesta a la mayoría de las partes del organismo. Para obtener una amplia biodistribución generalmente se requiere de un tiempo de vida en sangre tal que el compuesto no se degrade o se elimine rápidamente (tal como por ejemplo, por parte de órganos de primer paso (hígado, pulmón, etc.) o por una unión celular no específica y rápida), antes de alcanzar un sitio con la enfermedad distal con respecto al sitio de administración. La administración sistémica de partículas de ácido nucleico-lípido puede ser mediante cualquier medio conocido en el arte incluyendo, por ejemplo, por vía intravenosa, subcutánea, intraperitoneal. En un modo de realización preferido, la administración sistémica de partículas de ácido nucleico-lípido se realiza mediante administración por vía intravenosa.
"Administración local", tal como se utiliza en la presente patente hace referencia a la administración de un compuesto directamente a un sitio diana dentro de un organismo. Por ejemplo, un compuesto puede administrarse
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El lípido no catiónico comprende habitualmente desde aproximadamente un 5% hasta aproximadamente un 90% del lípido total en dicha partícula, preferiblemente desde aproximadamente un 20% hasta aproximadamente un 85% del lípido total en dicha partícula. El conjugado de PEG-DAG habitualmente comprende desde un 1% hasta aproximadamente un 20% del lípido total presente en dicha partícula, preferiblemente desde un 4% hasta aproximadamente un 15% del lípido total presente en dicha partícula. Las partículas de ácido nucleico-lípido de la presente invención pueden además comprender colesterol. Si está presente, el colesterol comprende habitualmente desde un 10% hasta aproximadamente un 60% del lípido total presente en dicha partícula, preferiblemente el colesterol comprende desde aproximadamente un 20% hasta aproximadamente un 45% del lípido total presente en dicha partícula.
C. Componente de estabilización de la bicapa
La SNALP descrita en la presente invención puede además comprender un componente de estabilización de la bicapa (BSC, por sus siglas en inglés). Los BSC adecuados incluyen, pero no se limitan a, oligómeros de poliamida, péptidos, proteínas, detergentes, derivados lipídicos, PEG-lípidos, tales como PEG acoplado a dialquiloxipropilos (PEG-DAA), PEG acoplado a diacilglicerol (PEG-DAG), PEG acoplado a fosfatidiletanolamina (PE) (PEG-PE), o PEG conjugado a ceramidas, o una mezcla de los mismos (ver, Patente estadounidense Nº 5.885.613). El componente de estabilización de la bicapa puede ser un PEG-lípido, o un ATTA-lípido. El BSC puede ser un lípido conjugado que inhibe la agregación de las SNALP. Lípidos conjugados adecuados incluyen, pero no se limitan a, conjugados de PEG-lípido, conjugados de ATTA-lípido, conjugados polímero catiónico-lípido (CPL, por sus siglas en inglés) o mezclas de los mismos. Las SNALP descritas en la presente patente comprenden un conjugado de PEGlípido o bien un conjugado de ATTA-lípido, junto con un CPL. La partícula de ácido nucleico-lípido para su uso según la invención comprende un conjugado de polietilenglicol (PEG)-lípido.
Habitualmente, el componente de estabilización de la bicapa está presente en un rango desde aproximadamente un 0,5% hasta aproximadamente un 50% del lípido total presente en la partícula. En un modo de realización preferido, el componente de estabilización de la bicapa está presente desde aproximadamente un 0,5% hasta aproximadamente un 25% del lípido total en la partícula. En otros modos de realización preferidos, el componente de estabilización de la bicapa está presente desde aproximadamente un 1% hasta aproximadamente un 20%, o aproximadamente un 3% hasta aproximadamente un 15% o aproximadamente un 4% hasta aproximadamente un 10% del lípido total en la partícula. Un experto en la práctica habitual del arte apreciará que la concentración del componente de estabilización de la bicapa puede ser variada dependiendo del componente de estabilización de la bicapa empleado y la tasa a la que el liposoma se vuelve fusogénico.
Controlando la composición y la concentración del componente de estabilización de la bicapa, se puede controlar la tasa a la que el componente de estabilización de la bicapa se intercambia hacia el exterior del liposoma y, a su vez, la tasa a la cual el liposoma se vuelve fusogénico. Por ejemplo, cuando un conjugado de polietilenglicolfosfatidiletanolamina o un conjugado polietilenglicol-ceramida se utiliza como el componente de estabilización de la bicapa, la tasa a la que el liposoma se vuelve fusogénico puede ser variada, por ejemplo, variando la concentración del componente de estabilización de la bicapa, variando el peso molecular del polietilenglicol, o variando la longitud de la cadena y el grado de saturación de los grupos de la cadena acilo en la fosfatidiletanolamina o la ceramida. Además, otras variables incluyendo, por ejemplo, pH, temperatura, fuerza iónica, etc. pueden ser utilizadas para variar y/o controlar la tasa a la que el liposoma se vuelve fusogénico. Otros métodos que pueden ser utilizados para controlar la tasa a la que el liposoma se vuelve fusogénico serán obvios para los expertos en el arte al leer la presente revelación.
- 1.
- Conjugados de diacilglicerol-polietilenglicol
El componente de estabilización de la bicapa descrito en la presente patente puede ser un conjugado de diacilglicerol-polietilenglicol, es decir, un conjugado DAG-PEG o un conjugado PEG-DAG. En un modo de realización preferido, el conjugado de DAG-PEG es un conjugado de dilaurilglicerol (C12)-PEG, un conjugado de dimiristilglicerol (C14)-PEG (DMG), un conjugado de dipalmitoilglicerol (C16)-PEG o un conjugado de diestearilglicerol (C18)-PEG (DSG). Los expertos en el arte apreciarán fácilmente que pueden ser utilizados otros diacilgliceroles en los conjugados DAG-PEG de la presente invención. Los conjugados de DAG-PEG adecuados para su uso en la presente invención, y métodos para su elaboración y utilización, se revelan en la Solicitud estadounidense Nº 10/136.707 publicada como U.S.P.A. 2003/0077829, y solicitud de Patente PCT Nº CA 02/00669.
- 2.
- Conjugados dialquiloxipropilo
El componente de estabilización de la bicapa descrito en la presente patente puede comprender un conjugado de dialquiloxipropilo, es decir, un conjugado de PEGDAA. En un modo de realización preferido, el conjugado de PEG-DAA presenta la siguiente fórmula:
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En la Fórmula I, R1 y R2 se seleccionan independientemente y son grupos alquilo de cadena larga que tienen desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 22 átomos de carbono. Los grupos alquilo de cadena larga puede ser saturados o insaturados. Los grupos alquilo adecuados incluyen, pero no se limitan a, laurilo (C12), miristilo (C14), palmitilo (C16), estearilo (C18) e icosilo (C20). En modos de realización preferidos, R1 y R2 son iguales, es decir, R1 y R2 son ambos miristilo (es decir, dimiristilo), R1 y R2 son ambos estearilo (es decir, diestearilo), etc. En la Fórmula I, PEG es un polietilenglicol que tiene un peso molecular medio de aproximadamente 550 a aproximadamente 8.500
aproximadamente 5000 daltons, más preferiblemente, de aproximadamente
1.000 a aproximadamente 3.000 daltons y, más preferiblemente incluso, de aproximadamente 2.000 daltons. El PEG puede ser opcionalmente sustituido por un grupo alquilo, alcoxi, acilo o arilo. En la Fórmula I, L es una fracción conectora. Puede utilizarse cualquier
fracción conectora adecuada para acoplar el PEG a la cadena principal del dialquiloxipropilo. Las fracciones conectoras adecuadas incluyen, pero no se limitan a, amido (-C(O)NH-), amino (-NR-), carbonilo (-C(O)-), carbonato (O-C(O)O-), carbamato (-NHC(O)O-), urea (-NHC(O)NH-), succinilo (-(O)CCH2CH2C(O)-), éter, disulfuro, y combinaciones de los mismos. Se conocen bien en el arte otros conectores adecuados.
Pueden conjugarse fosfatidiletanolaminas que tienen una variedad de grupos de cadena acilo de diversas longitudes de cadena y grados de saturación, con polietilenglicol para formar el componente de estabilización de la bicapa. Tales fosfatidiletanolaminas se encuentran disponibles comercialmente, o pueden ser aisladas o sintetizadas utilizando técnicas convencionales conocidas para los expertos en el arte. Se prefieren las fosfatidiletanolaminas que contienen ácidos grasos saturados o insaturados con longitudes de cadena de carbono en un rango de C10 a C20. También se pueden utilizar fosfatidiletanolaminas con ácidos grasos mono-o di-insaturados y mezclas de ácidos grasos saturados e insaturados. Las fosfatidiletanolaminas adecuadas incluyen, pero sin limitarse a, las siguientes: dimiristoilfosfatidiletanolamina (DMPE), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE) y diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE).
Al igual que con las fosfatidiletanolaminas, las ceramidas que tienen una variedad de grupos de cadena acilo de diversas longitudes de cadena y grados de saturación, pueden acoplarse con polietilenglicol para formar el componente de estabilización de la bicapa. Resultará evidente para los expertos en el arte que, en contraste con las fosfatidiletanolaminas, las ceramidas presentan únicamente un grupo acilo que puede ser variado fácilmente en términos de su longitud de cadena y grado de saturación. Las ceramidas para su uso de acuerdo con la presente invención se encuentran disponibles comercialmente. Además, las ceramidas pueden aislarse, por ejemplo, del huevo o cerebro utilizando técnicas de aislamiento bien conocidos o, alternativamente, pueden sintetizarse utilizando los métodos y técnicas revelados en la Patente estadounidense Nº 5.820.873. Utilizando las vías sintéticas expuestas en la anterior solicitud, pueden prepararse ceramidas que tienen ácidos grasos saturados e insaturados con longitudes de la cadena de carbono en el rango de C2 a C31.
3. Lípidos poliméricos catiónicos
Pueden también utilizarse lípidos poliméricos catiónicos (CPL) en las SNALP descritas en la presente patente. Los CPL adecuados presentan habitualmente las siguientes características arquitectónicas: (1) un anclaje lipídico, tal como un lípido hidrófobo, para incorporar los CPL en la bicapa lipídica; (2) un espaciador hidrófilo, tal como un polietilenglicol, para enlazar el anclaje lipídico a un grupo de cabeza catiónico; y (3) una fracción policatiónica, tal como un aminoácido de origen natural, para producir un grupo de cabeza catiónico protonizable. Se revelan SNALP y SNALP-CPL adecuadas, y métodos para elaborar y utilizar SNALP y SNALP-CPL, por ejemplo, en las solicitudes estadounidenses Nos. 09/553.639 y 09/839.707 (publicada como U.S.P.A. 2002/0072121) y la solicitud de Patente PCT Nº CA 00/00451 (publicada como WO 00/62813).
Brevemente, la presente invención proporciona un compuesto de la Fórmula II:
A-W-Y I
en donde A, W e Y son tal y como sigue a continuación.
En referencia a la Fórmula II, "A" es una fracción lipídica tal como un lípido anfipático, un lípido neutro o un lípido hidrófobo que actúa como un anclaje lipídico. Ejemplos de lípidos adecuados incluyen lípidos formadores de
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vesículas o lípidos que adoptan la forma de vesícula e incluyen, pero no se limitan a, diacilgliceroles, dialquilgliceroles, N-N-dialquilaminos, 1,2-diaciloxi-3-aminopropanos y 1,2-dialquil-3-aminopropanos.
"W" es un polímero o un oligómero, tal como un polímero u oligómero hidrófilo. Preferiblemente, el polímero hidrófilo es un polímero biocompatible que es no inmunogénico o posee baja inmunogenicidad inherente. De manera alternativa, el polímero hidrófilo puede ser débilmente antigénico si se utiliza con adyuvantes adecuados. Los polímeros no inmunogénicos incluyen, pero no se limitan a, PEG, poliamidas, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, copolímeros de ácido poliláctico/ácido poliglicólico y combinaciones de los mismos. En un modo de realización preferido, el polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 250 hasta aproximadamente 7000 daltons.
"Y" es una fracción policatiónica. El término fracción policatiónica hace referencia a un compuesto, derivado o grupo funcional que tiene una carga positiva, preferiblemente al menos 2 cargas positivas a un pH seleccionado, preferiblemente pH fisiológico. Las fracciones policatiónicas adecuadas incluyen aminoácidos básicos y sus derivados tales como arginina, asparagina, glutamina, lisina e histidina; espermina; espermidina; dendrímeros catiónicos; poliaminas; poliamino-azúcares; y amino polisacáridos. Las fracciones policatiónicas pueden ser lineales, tales como la tetralisina lineal, de estructura ramificada o dendrimérica. Las fracciones policatiónicas presentan entre aproximadamente 2 a aproximadamente 15 cargas positivas, preferiblemente entre aproximadamente 2 a aproximadamente 12 cargas positivas, y más preferiblemente entre aproximadamente 2 a aproximadamente 8 cargas positivas en valores de pH seleccionados. La selección de la fracción policatiónica que se va a emplear, puede determinarse mediante el tipo de aplicación del liposoma que se desea.
Las cargas en las fracciones policatiónicas pueden estar o bien distribuidas alrededor de toda la fracción de liposoma, o de manera alternativa, pueden presentarse en una concentración de densidad de carga discreta en un área en particular de la fracción de liposoma, por ejemplo, en un pico de carga. Si la densidad de carga se distribuye sobre el liposoma, la densidad de carga puede distribuirse equitativamente o distribuirse no equitativamente. Todas las variaciones de la distribución de la carga de la fracción policatiónica son abarcadas por la presente invención.
El lípido "A," y el polímero no inmunogénico "W," pueden enlazarse mediante diversos métodos y preferiblemente, por enlace covalente. Pueden utilizarse métodos conocidos para los expertos en el arte, para el enlace covalente de "A" y "W". Entre los enlaces adecuados se incluyen, pero sin limitarse a, enlaces amida, amina, carboxilo, carbonato, carbamato, éster e hidrazona. Resultará obvio para los expertos en el arte que "A" y "W" deben tener grupos funcionales complementarios para efectuar el enlace. La reacción de estos dos grupos, uno en el lípido y el otro en el polímero, proporcionará el enlace deseado. Por ejemplo, cuando el lípido es un diacilglicerol y el terminal hidroxilo se activa, por ejemplo con NHS y DCC, para formar un éster activo, y a continuación se hace reaccionar con un polímero que contiene un grupo amino, tal como con una poliamida (ver, Patentes estadounidenses Nos. 6.320.017 y 6.586.559), un enlace amida se formará entre los dos grupos.
En ciertos ejemplos, la fracción policatiónica puede tener un ligando unido, tal como un ligando para la fijación de la diana o una fracción quelante para formar complejo con el calcio. Preferiblemente, después de que se enlaza el ligando, la fracción catiónica mantiene una carga positiva. En determinados casos, el ligando que está unido tiene una carga positiva. Ligandos adecuados incluyen, pero no se limitan a, un compuesto o dispositivo con un grupo funcional reactivo e incluyen lípidos, lípidos anfipáticos, compuestos portadores, compuestos de bioafinidad, biomateriales, biopolímeros, dispositivos biomédicos, compuestos analíticamente detectables, compuestos terapéuticamente activos, enzimas, péptidos, proteínas, anticuerpos, estimuladores inmunes, radiomarcadores, fluorógenos, biotina, fármacos, haptenos, ADN, ARN, polisacáridos, liposomas, virosomas, micelas, inmunoglobulinas, grupos funcionales, otras fracciones para la fijación de las dianas o toxinas.
D. siARN
El componente de ácido nucleico de las SNALP comprende un siARN.
1. Genes diana
Generalmente, se desea administrar las SNALP para regular por disminución o silenciar la traducción (es decir, la expresión) de un producto génico de interés. Los tipos de producto génico adecuados incluyen, pero no se limitan a, genes asociados a infección vírica y a la supervivencia viral, genes asociados con enfermedades y trastornos metabólicos (por ejemplo, enfermedades y trastornos en los que el hígado es la diana, y las enfermedades y trastornos hepáticos), y trastornos, genes asociados con la tumorigénesis y la transformación celular, genes angiogénicos, genes inmunomoduladores, tales como los asociados con respuestas inflamatorias y autoinmunes, genes receptores de ligandos, y genes asociados con trastornos neurodegenerativos.
Los genes asociados con una infección vírica y la supervivencia viral incluyen aquellos expresados por un virus para unirse, introducirse y replicarse en una célula. De particular interés son las secuencias víricas asociadas con enfermedades víricas crónicas. Las secuencias víricas de particular interés incluyen secuencias de virus de la
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linfoides se incluyen también en la presente invención, por ejemplo, la familia de las Tec-quinasas, tales como la tirosina quinasa de Bruton (Btk) (Heinonen, et al., FEBS Lett. 527:274 (2002)).
Los ligandos receptores de células incluyen ligandos que son capaces de unirse a los receptores de la superficie celular (por ejemplo, receptor de la insulina, receptor EPO, receptores acoplados a la proteína G, receptores con actividad tirosina quinasa, receptores de citoquinas, receptores del factor de crecimiento, etc.), para modular (por ejemplo, inhibir, activar, etc.) la vía fisiológica en la que el receptor está implicado (por ejemplo, modulación del nivel de glucosa, desarrollo de las células sanguíneas, mitogénesis, etc.). Ejemplos de ligandos receptores de célula incluyen citoquinas, factores de crecimiento, interleucinas, interferones, eritropoyetina (EPO), insulina, glucagón, ligandos de receptores acoplados a la proteína G, etc.). Los modelos que codifican una expansión de repeticiones de trinucleótidos (por ejemplo, repeticiones de CAG), son de utilidad en el silenciamiento de secuencias patogénicas en trastornos neurodegenerativos causados por la expansión de repeticiones de trigonucleótidos, tales como la atrofia muscular espinobulbar y la enfermedad de Huntington (Caplen, et al., Hum. Mol. Genet. 11:175 (2002)).
IV. Preparación de las SNALP
También se describen en la presente patente métodos para preparar las partículas de ácido nucleico-lípido estables en suero, de tal manera que el ácido nucleico, que es un siARN, se encapsule en una bicapa lipídica y se proteja de la degradación. Las SNALP realizadas mediante dichos métodos son habitualmente de aproximadamente 50 a 150 nm de diámetro. Generalmente, estas partículas tienen un diámetro medio de menos de 150 nm, más habitualmente un diámetro de menos de aproximadamente 100 nm, con una mayoría de las partículas con un diámetro de aproximadamente 65 a 85 nm. Las partículas pueden formarse utilizando cualquier método conocido en el arte incluyendo, por ejemplo, un método de diálisis con detergente o mediante modificación de un método de fase reversa que utiliza disolventes orgánicos para proporcionar una fase única durante el mezclado de los componentes. Sin la intención de estar sujetos a ningún mecanismo de formación en particular, un plásmido u otro ácido nucleico (es decir, siARN) se hace contactar con una solución detergente de lípidos catiónicos para formar un complejo de ácidos nucleicos recubiertos. Estos ácidos nucleicos recubiertos pueden agregarse y precipitarse. Sin embargo, la presencia de un detergente reduce esta agregación y permite que los ácidos nucleicos recubiertos reaccionen con el exceso de lípidos (habitualmente, lípidos no catiónicos) para formar partículas en las que el plásmido u otro ácido nucleico está encapsulado en una bicapa lipídica. Los métodos descritos a continuación para la formación de partículas de ácido nucleico-lípido que utilizan disolventes orgánicos siguen un esquema similar. Ejemplos de métodos de elaboración de SNALP se revelan en las patentes estadounidenses Nos. 5.705.385; 5.981.501; 5.976.567; 6.586.410; 6.534.484; solicitud de patente estadounidense Nº 09/553.639; U.S.P.A. Publicación Nos. 2002/0072121 y 2003/0077829) WO 96/40964; y WO 00/62813.
En un modo de realización, se describen en la presente patente partículas de ácido nucleico-lípido producidas a través de un proceso que incluye proporcionar una solución acuosa en un primer depósito, y proporcionar una solución de lípidos orgánicos en un segundo depósito, y mezclar la solución acuosa con la solución de lípidos orgánicos, de tal manera que la solución de lípidos orgánicos se mezcle con la solución acuosa para producir de forma sustancialmente instantánea un liposoma que encapsule el ácido nucleico. Este proceso y el aparato para realizar este proceso se describe en detalle en la Solicitud de Patente estadounidense Nº 10/611, 274 presentada el 30 de junio de 2003.
La acción de introducir continuamente soluciones de lípidos y soluciones tampón en un entorno de mezclado, tal como por ejemplo una cámara de mezclado, causa una dilución continua de la solución de lípidos con la solución tampón, produciendo de ese modo un liposoma de forma sustancialmente instantánea después del mezclado. Tal como se utiliza en la presente patente, la frase “diluir de forma continua una solución de lípidos con una solución tampón” (y sus variaciones) generalmente significa que la solución de lípidos se diluye de forma suficientemente rápida en un proceso de hidratación con la suficiente fuerza para efectuar la generación de vesículas. Al mezclar la solución acuosa con la solución de lípidos orgánicos, la solución de lípidos orgánicos sufre una dilución continua en etapas en presencia de la solución tampón (acuoso) para producir un liposoma.
En algunos modos de realización, las partículas se forman utilizando diálisis con detergente. Por tanto, se describe en la presente patente un método para la preparación de partículas de ácido nucleico-lípido, que comprende:
- (a)
- combinar un ácido nucleico con lípidos catiónicos en una solución detergente para formar un complejo de ácido nucleico-lípido recubierto;
- (b)
- poner en contacto lípidos no catiónicos con el complejo de ácido nucleico-lípido recubierto para formar una solución detergente que comprenda un complejo de ácido nucleico-lípido y lípidos no catiónicos; y
c) dializar la solución detergente de la etapa (b) para proporcionar una solución de partículas de ácido nucleico-lípido estables en suero, en donde el ácido nucleico se encapsula en una bicapa lipídica y las partículas son estables en suero y tienen un tamaño de aproximadamente 50 a aproximadamente 150 nm.
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Se forma una solución inicial de complejos de ácido nucleico-lípido recubiertos combinando el ácido nucleico con los lípidos catiónicos en una solución detergente.
En estos modos de realización, la solución detergente es preferiblemente una solución de un detergente neutro con una concentración crítica de micelas de 15-300 mM, más preferiblemente de 20-50 mM. Ejemplos de detergentes adecuados incluyen, por ejemplo, N,N’-((octanoilimino)-bis-(trimetileno))-bis-(D-gluconamida) (BIGCHAP); BRIJ 35; Desoxi-BIGCHAP; polietilenglicol dodecil éter; Tween 20; Tween 40; Tween 60; Tween 80; Tween 85; Mega 8; Mega 9; Zwittergent® 3-08; Zwittergent® 3-10; Triton X-405; hexil-, heptil-, octil-y nonil-β-D-glucopiranósido; y heptil-tioglucopiranósido; siendo octil β-D-glucopiranósido y Tween-20 los de mayor preferencia. La concentración de detergente en la solución detergente es habitualmente de aproximadamente 100 mM a aproximadamente 2 M, preferiblemente de aproximadamente 200 mM a aproximadamente 1,5 M.
Los lípidos catiónicos y los ácidos nucleicos se combinarán habitualmente para producir una relación de la carga (+/) de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 20:1, preferiblemente en una relación de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 12:1, y más preferiblemente en una relación de aproximadamente 2:1 a aproximadamente 6:1. Adicionalmente, la concentración total de ácido nucleico en solución será generalmente de aproximadamente 25 mg/mL a aproximadamente 1 mg/mL, preferiblemente de aproximadamente 25 mg/mL a aproximadamente 200 mg/mL, y más preferiblemente de aproximadamente 50 mg/mL a aproximadamente 100 mg/mL. La combinación de ácidos nucleicos y lípidos catiónicos en solución detergente se mantiene, habitualmente a temperatura ambiente, durante un periodo de tiempo que sea suficiente para que se formen los complejos recubiertos. De manera alternativa, los ácidos nucleicos y los lípidos catiónicos pueden combinarse en la solución detergente y calentarse a temperaturas de hasta aproximadamente 37°C. Para los ácidos nucleicos que son particularmente sensibles a la temperatura, los complejos recubiertos pueden formarse a temperaturas más bajas, habitualmente hasta aproximadamente 4°C.
En un modo de realización preferido, las relaciones de ácido nucleico con respecto a los lípidos (relaciones de masa/masa) en una SNALP formada estarán en un rango de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,08. La relación de materiales de partida también se encuentra dentro de este rango ya que la etapa purificación habitualmente elimina el ácido nucleico encapsulado además de los liposomas vacíos. En otro modo de realización preferido, la preparación de la SNALP utiliza aproximadamente 400 µg de ácido nucleico por 10 mg de lípido total o una relación de ácido nucleico con respecto a lípidos de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 0,08 y, más preferiblemente, aproximadamente 0,04, lo que corresponde a 1,25 mg de lípidos totales por 50 µg de ácido nucleico.
La solución detergente de los complejos de ácido nucleico-lípido se pone en contacto entonces con lípidos no catiónicos para proporcionar una solución detergente de complejos de ácido nucleico-lípido y lípidos no catiónicos. Los lípidos no catiónico que son útiles en esta etapa incluyen, diacilfosfatidilcolina, diacilfosfatidiletanolamina, ceramida, esfingomielina, cefalina, cardiolipina, y cerebrósidos. En modos de realización preferidos, los lípidos no catiónicos son diacilfosfatidilcolinea, diacilfosfatidiletanolamina, ceramida o esfingomielina. Los grupos acilo en estos lípidos son preferiblemente grupos acilo obtenidos a partir de ácidos grasos que tienen cadenas de carbono C10-C24. Más preferiblemente los grupos acilo son lauroilo, miristoilo, palmitoilo, estearoilo u oleoilo. En modos de realización particularmente preferidos, el lípido no catiónico será 1,2-sn-dioleoilfosfatidiletanolamina (DOPE), palmitoil oleoil fosfatidilcolina (POPC), fosfatidilcolina de huevo (EPC), distearoilfosfatidilcolina (DSPC), colesterol, o una mezcla de los mismos. En los modos de realización de mayor preferencia, las partículas de ácido nucleico-lípido serán partículas fusogénicas con propiedades mejoradas in vivo y el lípido no catiónico será DSPC o DOPE. Además, las partículas de ácido nucleico-lípido de la presente invención pueden además comprender colesterol. En otros modos de realización preferidos, los lípidos no catiónicos comprenderán además polímeros a base de polietilenglicol tales como PEG 2000, PEG 5000 y polietilenglicol conjugado con un diacilglicerol, una ceramida o un fosfolípido, tal como se describe en la Patente estadunidense Nº 5.820.873 y en la Solicitud de Patente en tramitación junto con la presente Nº 10/136.707 (publicada como U.S.P.A. Nº de publicación 2003/0077829. En modos de realización preferidos adicionales, los lípidos no catiónicos comprenderán además polímeros a base de polietilenglicol tales como PEG 2000, PEG 5000 y polietilenglicol conjugado con un dialquiloxipropilo.
La cantidad de lípido no catiónico que se utiliza en los presentes métodos es habitualmente de 2 a aproximadamente 20 mg de lípidos totales hasta 50 µg de ácido nucleico. Preferiblemente, la cantidad de lípidos totales es de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mg per 50 µg de ácido nucleico.
A continuación de la formación de la solución detergente de complejos de ácido nucleico-lípido y lípidos no catiónicos, se retira el detergente, preferiblemente mediante diálisis. La retirada del detergente tiene como resultado la formación de una bicapa lipídica que rodea el ácido nucleico, lo que proporciona partículas de ácido nucleicolípido estables en suero que tienen un tamaño desde aproximadamente 50 nm a aproximadamente 150 nm. Las partículas formadas de este modo no se agregan y se dimensionan opcionalmente para lograr un tamaño de partícula uniforme.
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policationes adecuados incluyen, por ejemplo, sales de poli-L-ornitina, poli-L-arginina, poli-L-lisina, poli-D-lisina, polialilamina y polietilenimina.
En determinados modos de realización, la formación de partículas de ácido nucleico-lípido puede realizarse ya sea en un sistema monofásico (por ejemplo, una monofase por el método de Bligh y Dyer monophase o una mezcla similar de disolventes acuosos y orgánicos) o en un sistema bifásico con un mezclado adecuado.
Cuando la formación de los complejos se lleva a cabo en un sistema monofásico, cada uno de los lípidos catiónicos y los ácidos nucleicos se disuelven en un volumen de la mezcla monofásica. La combinación de dos soluciones proporciona una única mezcla en la que los complejos se forman. De manera alternativa, los complejos pueden formarse en mezclas bifásicas en las que los lípidos catiónicos se unen al ácido nucleico (que está presente en la fase acuosa), y lo “atraen” hacia la fase orgánica.
En otro modo de realización, se describe en la presente patente un método para la preparación de partículas de ácido nucleico-lípido, que comprende:
- (a)
- poner en contacto ácidos nucleicos con una solución que comprende lípidos no catiónicos y un detergente para formar una mezcla de ácido nucleico-lípido;
- (b)
- poner en contacto ácidos lípidos catiónicos con la mezcla de ácido nucleico-lípido para neutralizar una parte de la carga negativa de los ácidos nucleicos y formar una mezcla de carga neutra de ácidos nucleicos y lípidos; y
- (c)
- eliminar el detergente de la mezcla de carga neutra para proporcionar las partículas de ácido nucleicolípido en las que los ácidos nucleicos están protegidos de la degradación.
En un grupo de modos de realización, la solución de lípidos no catiónicos y detergente es una solución acuosa. Se logra poner en contacto los ácidos nucleicos con la solución de lípidos no catiónicos y detergente habitualmente mezclando entre sí una primera solución de ácidos nucleicos y una segunda solución de lípidos y detergente. Un experto en el arte entenderá que esta mezcla puede llevarse a cabo mediante un gran número de métodos, por ejemplo, mediante medios mecánicos tales como utilizando agitadores vórtex. Preferiblemente, la solución de ácido nucleico es también una solución detergente. La cantidad de lípido no catiónico que se utiliza en el presente método se determina habitualmente en base a la cantidad de lípido catiónico utilizado, y es habitualmente de aproximadamente 0,2 a 5 veces la cantidad de lípido catiónico, preferiblemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 veces la cantidad de lípido catiónico utilizado.
En algunos modos de realización, los ácidos nucleicos se encuentran previamente condensados según se describe en, por ejemplo, la Solicitud de Patente estadounidense Nº 09/744.103.
La mezcla de ácido nucleico-lípido formada de este modo se pone en contacto con lípidos catiónicos para neutralizar una parte de la carga negativa que está asociada con los ácidos nucleicos (u otros materiales polianiónicos) presentes. La cantidad de lípidos catiónicos utilizados será habitualmente suficiente para neutralizar al menos el 50% de la carga negativa del ácido nucleico. Preferiblemente, la carga negativa será al menos un 70% neutra, más preferiblemente al menos un 90% neutra. Los lípidos catiónicos que son útiles en la presente invención, incluyen, por ejemplo, DODAC, DOTMA, DDAB, DOTAP, DC-Chol y DMRIE. Estos lípidos y análogos relacionados han sido descritos en las patentes estadounidenses Nos. 5.208.036, 5.264.618, 5.279.833, 5.283.185, 5.753.613 y 5.785.992.
Se puede lograr poner en contacto lípidos con la mezcla de ácido nucleico-lípido mediante una gran cantidad de técnicas, preferiblemente mezclando entre sí una solución de lípido catiónico y una solución que contiene la mezcla de ácido nucleico-lípido. Tras mezclas las dos soluciones (o ponerlas en contacto de alguna otra manera), se neutraliza una parte de la carga negativa asociada con el ácido nucleico. Sin embargo, el ácido nucleico permanece en un estado no condensado y adquiere características hidrófilas.
Después de que los lípidos catiónicos se han puesto en contacto con la mezcla de ácido nucleico-lípidos, el detergente (o una combinación de detergente y un disolvente orgánico) se elimina, formando de este modo las partículas de ácido nucleico-lípido. Los métodos utilizados para eliminar el detergente implicarán habitualmente diálisis. Cuando los disolventes están presentes, la retirada se lleva a cabo habitualmente por evaporación a presiones reducidas o inyectando una corriente de gas inerte (por ejemplo, nitrógeno o argón) a través de la mezcla.
Las partículas así formadas tendrán un tamaño habitual de aproximadamente 100 nm a diversas micras. Para lograr una reducción de tamaño y homogeneidad adicionales de las partículas, las partículas de ácido nucleico-lípido pueden ser sonicadas, filtradas o sometidas a otras técnicas de dimensionamiento que se utilizan en las formulaciones liposomales y que son conocidas por los expertos en el arte.
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incorporación de la parte de ácido nucleico de la partícula puede tener lugar a través de cualquiera de estas vías. En particular, cuando la fusión tiene lugar, la membrana de la partícula se integra en la membrana celular y los contenidos de la partícula se combinan con el fluido intracelular.
Entre los tipos de célula establecidos como diana con más frecuencia para la administración intracelular de un SiARN, se encuentran las células neoplásicas (por ejemplo, células tumorales) y hepatocitos. Otras células que pueden fijarse como diana son, por ejemplo, células precursoras (madres) hematopoyéticas, fibroblastos, queratinocitos, hepatocitos, células endoteliales, células del músculo liso y esquelético, osteoblastos, neuronas, linfocitos quiescentes, células terminales diferenciadas, células primarias lentas o no cíclicas, células parenquimales, células linfoides, células epiteliales, células óseas, y similares. En un modo de realización preferido, se fijan como diana los hepatocitos.
Se conoce bien en el arte en qué grado el cultivo de células puede ser requerido. Freshney (1994) (Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, third edition Wiley-Liss, New York), Kuchler et al. (1977) Biochemical Methods in Cell Culture and Virology, Kuchler, R.J., Dowden, Hutchinson y Ross, Inc., y las referencias citadas en los mismos proporcionan una guía general de cultivo de células. Los sistemas celulares cultivados estarán con frecuencia en forma de monocapas de células, aunque también se utilizan suspensiones celulares.
A. Transferencia de genes in vitro
Para aplicaciones in vitro, la administración de siARN puede realizarse en cualquier cultivo celular, ya sea de origen animal o vegetal, vertebrado o invertebrado, y de cualquier tejido o tipo. En modos de realización preferidos, las células serán células animales, más preferiblemente células de mamíferos, y de mayor preferencia células humanas.
El contacto entre las células y las partículas de ácido nucleico-lípido, cuando se realiza in vitro, tiene lugar en un medio biológicamente compatible. La concentración de partículas varía dependiendo de la aplicación en particular, pero es generalmente de entre aproximadamente 1µmol y aproximadamente 10 mmol. El tratamiento de las células con las partículas de ácido nucleico-lípido se realiza generalmente a temperaturas fisiológicas (aproximadamente 37°C) durante periodos de tiempo de aproximadamente 1 a 48 horas, preferiblemente de aproximadamente 2 a 4 horas.
En un grupo de modos de realización preferidos, se añade una suspensión de partículas de ácido nucleico-lípido a células en placas confluentes en un 60-80% con una densidad celular de aproximadamente 103 a aproximadamente 105 células/mL, más preferiblemente aproximadamente 2 x 104 células/mL. La concentración de la suspensión añadida a las células es preferiblemente de aproximadamente 0,01 a 0,2 µg/mL, más preferiblemente aproximadamente 0,1 µg/mL.
Utilizando un ensayo de parámetros de liberación endosomal (ERP), puede optimizarse la eficacia del sistema de administración de la SNALP o de otro sistema portador a base de lípidos. Un ensayo de ERP se describe en detalle en la Solicitud de Patente estadounidense Nº 10/136.707 (publicada como U.S.P.A. Nº de Publicación 2003/0077829). Más en particular, el propósito de un ensayo de ERP es distinguir el efecto de diversos lípidos catiónicos y componentes lipídicos auxiliares de las SNALP en base a su efecto relativo sobre la unión/captación o fusión con/desestabilización de la membrana endosomal. Este ensayo nos permite determinar cuantitativamente cómo cada componente de la SNALP o de otro sistema portador a base de lípidos logra la eficacia de la administración, optimizando de ese modo las SNALP o los otros sistemas portadores a base de lípidos. Habitualmente, un ensayo de ERP mide la expresión de una proteína indicadora (por ejemplo, luciferasa, βgalactosidasa, proteína verde fluorescente, etc.), y en algunos casos, una formulación de SNALP optimizada para un plásmido de expresión será apropiada también para encapsular un ARN de interferencia. En otros casos, un ensayo de ERP puede adaptarse para medir la regulación por disminución de la traducción de una secuencia diana en presencia o ausencia de un ARN de interferencia. Comparando los ERP para cada uno de los diversos SNALP u otras formulaciones a base de lípidos, se puede determinar fácilmente el sistema optimizado, por ejemplo, la SNALP u otra formulación a base de lípidos que presente la mayor captación en la célula.
Los marcadores adecuados para realizar el ensayo de ERP descrito en la presente patente incluyen, pero no se limitan a, marcadores espectrales, tales como colorantes fluorescentes (por ejemplo, fluoresceína y derivados, tales como isotiocianato de fluoresceína (FITC) y verde Oregón™; rodamina y derivados, tales como rojos Texas, isotiocianato de tetrametilrodamina (TRITC), etc., digoxigenina, biotina, ficoeritrina, AMCA, CyDyes™, y similares; radiomarcadores, tales como 3H, 125I, 35S, 14C 32P 33P etc.; enzimas, tales como peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, etc.; marcadores colorimétricos espectrales, tales como oro coloidal o vidrio coloreado o perlas plásticas, tales como poliestireno, polipropileno, látex, etc. El marcador puede ser acoplado directamente o indirectamente a un componente de la SNALP u otro sistema portador a base de lípidos, utilizando métodos bien conocidos en el arte. Tal como se indica anteriormente, puede utilizarse una amplia variedad de marcadores, donde la elección del marcador depende de la sensibilidad requerida, facilidad de conjugación con el componente SNALP, requerimientos de estabilidad, e instrumentación disponible y previsiones para la eliminación.
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D. Detección de SNALP
En algunos modos de realización, las partículas de ácido nucleico-lípido se pueden detectar en plasma y/o células del sujeto 8, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84, o 96 horas después de la administración de las partículas. La presencia de partículas puede ser detectada mediante cualquier medio conocido en el arte incluyendo, por ejemplo, la detección directa de partículas, detección de la secuencia de ARN de interferencia, detección de la secuencia diana de interés (es decir, detectando la expresión o la expresión reducida de la secuencia de interés), o una combinación de los mismos.
- 1.
- Detección de partículas
Las partículas de ácido nucleico-lípido se detectan en la presente patente utilizando métodos conocidos en el arte. Por ejemplo, un marcador puede acoplarse directa o indirectamente a un componente de la SNALP u otro sistema portador que utiliza métodos bien conocidos en el arte. Puede utilizarse una amplia variedad de marcadores, donde la elección del marcador depende de la sensibilidad requerida, facilidad de conjugación con el componente SNALP, requerimientos de estabilidad, e instrumentación disponible y previsiones para la eliminación. Entre los marcadores adecuados se incluyen, pero sin limitarse a, marcadores espectrales, tales como colorantes fluorescentes (por ejemplo, fluoresceína y derivados, tales como isotiocianato de fluoresceína (FITC) y verde Oregón™; rodamina y derivados, tales como rojo Texas, isotiocianato de tetrametilrodamina (TRITC), etc., digoxigenina, biotina, ficoeritrina, AMCA, CyDyes™, y similares; radiomarcadores, tales como 3H, 125I, 35S, 14C 32P 33P etc.; enzimas, tales como peroxidasa de rábano, fosfatasa alcalina, etc.; marcadores colorimétricos espectrales, tales como oro coloidal o vidrio coloreado o perlas plásticas, tales como poliestireno, polipropileno, látex, etc. El marcador puede ser acoplado utilizando cualquier medio conocido en el arte.
- 2.
- Detección de ácidos nucleicos
Los ácidos nucleicos se detectan y cuantifican en la presente patente mediante una serie de medios bien conocidos para los expertos en el arte. La detección de ácidos nucleicos se desarrolla mediante métodos bien conocidos tales como análisis Southern, análisis northern, electroforesis en gel, PCR, radiomarcadores, conteo de centelleo, y cromatografía de afinidad. También pueden emplearse métodos bioquímicos analíticos adicionales, tales como espectrofotometría, radiografía, electroforesis, electroforesis capilar, cromatografía de alto rendimiento (HLPC), cromatografía de capa fina (TLC), cromatografía de hiperdifusión.
La selección de un formato de hibridación de un ácido nucleico no es algo crítico. Se conocen bien por parte de los expertos en el arte una variedad de formatos de hibridación del ácido nucleico. Por ejemplo, formatos comunes incluyen ensayos tipo sándwich y ensayos de competición o desplazamiento. Las técnicas de hibridación se describen en general en "Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach," Ed. Hames, B.D. y Higgins, S.J., IRL Press, 1985.
La sensibilidad de los ensayos de hibridación puede incrementarse mediante el uso de un sistema de amplificación de ácidos nucleicos que multiplica el ácido nucleico que está siendo detectado. Son conocidas las técnicas de amplificación in vitro adecuadas para amplificar las secuencias para su uso como sondas moleculares o para generar fragmentos de ácido nucleico para su posterior sub-clonación. Ejemplos de técnicas suficientes para dirigir a los expertos a través de tales métodos de amplificación in vitro, que incluyen la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la reacción en cadena de la ligasas (LCR), amplificación por Qβ-replicasa y otras técnicas mediadas por la ARN polimerasa (por ejemplo, NASBA™) se encuentran en Sambrook, et al., en Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2000, y Ausubel et al., SHORT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, eds., Current Protocols, una empresa conjunta entre Greene Publishing Associates, Inc. y John Wiley & Sons, Inc., (2002), además de Mullis et al. (1987), Patente estadounidense Nº 4.683.202; PCR Protocols A Guide to Methods and Applications (Innis et al. eds) Academic Press Inc. San Diego, CA (1990) (Innis); Arnheim & Levinson (October 1, 1990), C&EN 36; The Journal Of NIH Research, 3:81 (1991); (Kwoh et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:1173 (1989); Guatelli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:1874 (1990); Lomell et al., J. Clin. Chem., 35:1826 (1989); Landegren et al., Science, 241:1077 (1988); Van Brunt, Biotechnology, 8:291 (1990); Wu and Wallace, Gene,
4:560 (1989); Barringer et al., Gene, 89:117 (1990), y Sooknanan y Malek, Biotechnology, 13:563 (1995). Se describen métodos mejorados de clonación in vitro de ácidos nucleicos amplificados en Wallace et al., patente estadounidense Nº 5.426.039. Otros métodos descritos en el arte son la amplificación basada en la secuencia de ácido nucleico (NASBA™, Cangene, Mississauga, Ontario) y sistemas de Q Beta-Replicasa.
Los oligonucleótidos para su uso como sondas, por ejemplo, en métodos de amplificación in vitro, para su uso como sondas génicas, o como componentes inhibidores se sintetizan habitualmente químicamente de acuerdo con el método de triéster de fosforamidita en fase sólida descrito por Beaucage y Caruthers, Tetrahedron Letts., 22(20):1859 1862 (1981), por ejemplo, utilizando un sintetizador automático, según se describe en Needham VanDevanter et al., Nucleic Acids Res., 12:6159 (1984). La purificación de oligonucleótidos, cuando es necesaria, se realiza habitualmente mediante electroforesis en gel de acrilamida nativa o bien mediante HPLC con intercambio de aniones, según se describe en Pearson y Regnier, J. Chrom., 255:137 149 (1983). La secuencia de los
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Mezcla post dilución e incubada = 90%
Posterior a diálisis durante la noche = 90%
Posterior a filtrado estéril = 90%
Tamaño de partícula = 111,6 nm
Polidispersidad = 0,24
Ejemplo 2. Regulación por disminución de la expresión intracelular en células mediante la administración in vitro de una formulación de SNALP que encapsulan siARN.
Este ejemplo muestra la regulación por disminución de la expresión de la β-Gal en células CT26.CL25 a las que se administró in vitro liposomas de DSPC:Colesterol:DODMA:PEG-DMG que encapsulan siARN anti-β-Gal. Los resultados se representan en la Figura 1.
La administración in vitro de 0,2 µg de siARN anti-β-Gal encapsulado en Oligofectamina disminuyó la actividad de la β-Gal en aproximadamente un 60% en comparación con las células de control no expuestas. La encapsulación de 1,5 µg siARN anti-β-Gal en liposomas de DSPC:Colesterol:DODMA:PEG-DMG disminuyó la actividad de la β-Gal en aproximadamente un 30% en comparación con las células de control no expuestas.
Ejemplo 3. Ensayos para la estabilidad en suero
Las partículas de ácido nucleico/lípidos formuladas de acuerdo a las técnicas señaladas anteriormente pueden ser sometidas a ensayo para determinar su estabilidad en suero mediante una variedad de métodos.
Por ejemplo, en la digestión habitual de una ADNasa 1, se incuba 1 µg de ADN encapsulado en la partícula de interés en un volumen total de 100 µL de 5 mM de HEPES, 150 mM de NaCl, 10,0 mM de MgCl2 pH 7,4. Las muestras tratadas con ADNasa se trataron o bien con 100 o 10 U de ADNasa I (Gibco -BRL). Puede añadirse Triton X-100 al 1,0% en los experimentos de control para asegurar que las formulaciones de lípidos no van a desactivar la enzima directamente. Las muestras se incuban a 37°C durante 30 min, donde después de este tiempo el ADN es aislado mediante la adición de 500 µL de DNAZOL seguido de 1,0 mL de etanol. Las muestras se centrifugan durante 30 min a 15.000 rpm en una microcentrifugadora de sobremesa. El sobrenadante se decanta y el granulado de ADN resultante se lava dos veces con etano al 80% y se seca. Este ADN es resuspendido en 30 µL de tampón TE. 20 µL de esta muestra se carga en un 1,0% de gel de agarosa y se somete a electroforesis en tampón TAE.
En un ensayo habitual de suero, 50 µg de ADN se alícuota en Triton X100 libre, encapsulado, o encapsulado + 0,5%, en tubos Eppendorf de 1,5 mL. A los tubos se añadió 45 µl de suero fisiológico murino o humano, dH2O (para hacer un volumen final de 50 µL). Los tubos se sellaron con película parafilm y se incubaron a 37°C. Una muestra de Triton X100 libre, encapsulado, o encapsulado +0,5% no digerido por la nucleasa (estándar), se congeló en nitrógeno líquido en un tubo Eppendorf y se almacenó a -20°C. Los alícuotas se tomaron en diversos puntos de tiempo, se añadieron al tampón GDP que contenía proteinasa K (133 µg/mL) y se congelaron inmediatamente en nitrógeno líquido para detener la reacción. Una vez que todos los puntos de tiempo se recogieron, las muestras se incubaron a 55ºC en un baño de agua para activar la proteinasa K permitiendo que desnaturalizara cualquier exonucleasa restante. Las muestras de Proteinasa K digeridas se aplicaron a geles de poliacrilamida para evaluar los niveles de degradación por exonucleasa.
Las partículas reveladas anteriormente muestran una estabilidad en suero, mostrando cantidades de degradación del ADN (parcial o total) de menos del 5% y preferiblemente indetectables como resultado de un tratamiento de este tipo, incluso en presencia de 100 U de ADNasa 1. Este resultado se compara favorablemente con el ADN libre, que se degrada completamente, y los complejos plásmido/lípidos (tales como los complejos de DOTMA o DODAC:DOPE), en donde el ADN se degrada sustancialmente (es decir, más de un 20%, a menudo un 80%) después de dicho tratamiento.
Ejemplo 4. Caracterización de las SNALPs
Este ejemplo describe la fijación como diana del sitio con la enfermedad y la expresión de genes que es el resultado de la administración por vía intravenosa de SNALP en ratones portadores de tumores. En este ejemplo, el ácido nucleico encapsulado es un plásmido.
El método de SNALP tuvo como resultado la encapsulación del plásmido de ADN en “partículas de ácido nucleicolípido estabilizadas” (SNALP) pequeñas (diámetro ~70 nm). Las SNALP consisten en un plásmido por partícula,
5
10
15
20
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30
35
40
45
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encapsulado dentro de una bicapa lipídica estabilizada por la presencia de un componente estabilizador bicapa, tal como un recubrimiento de poli(etilenglicol) (PEG). Las SNALP mostraron tiempos de vida en circulación prolongados a continuación de la administración por vía intravenosa y promovieron la administración del plásmido intacto a los sitios con tumor distales, lo que tiene como resultado la expresión de genes indicadores en el sitio con la enfermedad.
Las SNALP con tiempos en circulación largos acumulados en niveles correspondientes a un cinco por ciento al 10 por ciento de la dosis total inyectada por gramo de tumor o mayor que 1000 copias de ADN plasmídico por célula, dando lugar a niveles de expresión de genes que fueron más de dos órdenes de magnitud mayores que las observadas en cualquier otro tejido. De forma interesante, aunque el hígado acumuló un 20-30% de la dosis total inyectada, se observaron niveles muy bajos de expresión de genes en el hígado. Se cree que este hecho responde a la limitada captación hepatocelular de la SNALP PEG-ilada SNALP. Ver, Figuras 7-9.
La administración y la transfección in vivo potencial de partículas de ácido nucleico-lípido que contienen un componente estabilizador bicapa, se mejoró adicionalmente mediante la incorporación de un PEG-lípido catiónico (CPL) que consiste en un anclaje con DSPE, cadena espaciadora de PEG3400 y un grupo de cabeza catiónico. Cuando se incorporaron los CPL en las SNALP a concentraciones de 2 a 4 mol%, los resultantes CPL-SNALP eran de un tamaño y estabilidad similar a la de las SNALP nativas. La incorporación de CPL tuvo como resultado un incremento dramático de la administración intracelular y un incremento concomitante en la actividad de transfección medida tanto in vitro como in vivo. De manera específica, el CPL-SNALP produjo 105-veces más expresión de genes in vitro que la SNALP nativa. Cuando se administró el CPL-SNALP por vía intravenosa produjeron un incremento sustancial (250 veces) en la expresión de genes hepáticos en comparación con la SNALP nativa. El incremento de la potencia de CPL-SNALP fue específico para el hígado. Los niveles de la expresión de genes medidos en el pulmón, riñón, bazo o corazón permanecieron inalterados, lo que contribuye a un diferencial de magnitud de más de dos órdenes en la expresión de genes medida en el hígado versus otros órganos.
Estos resultados ilustran el potencial para modular las propiedades de administración de los sistemas que contienen PEG-lípidos, a la vez que mantienen la estabilidad y el tamaño pequeño uniforme requerido para lograr la administración sistémica. En particular, demuestran que la fijación de diana del sitio y la expresión de genes específica puede ser reprogramada alterando la composición de lípidos de los sistemas de administración de genes no virales.
Ejemplo de referencia 5: SNALP que contienen conjugados de PEG-DAG
Este ejemplo muestra la preparación de una serie de SNALP de lípidos PEG-diacilglicerol (PEG-DAG). En este ejemplo, el ácido nucleico encapsulado es un plásmido.
Las SNALP de PEG-DAG se prepararon incorporando 10 mol en tanto por ciento de PEG-dilaurilglicerol (C12), PEGdimiristilglicerol (C14), PEG-dipalmitoilglicerol (C16) o PEG-diesterilglicerol (C18) y se evaluó para determinar la actividad de transfección in vitro, la farmacocinética y la biodistribución de la expresión de genes que es resultado de la administración sistémica en ratones portadores de tumores. La SNALP que contiene un lípido PEG-DAG demostró una relación similar entre la longitud de la cadena de acilo y la actividad de transfección in vitro que los que contienen PEG-ceramidas. Los anclajes de cadenas de acilo más cortas (dimiristil (C14) y dipalmitoil (C16)) tuvo como resultado partículas SNALP que fueron menos estables pero tienen mayor actividad de transfección in vitro que las que incorporan anclajes de cadenas acilo más largas (disterilo (C18)). La evaluación de la farmacocinética de SNALP que contienen PEG-DAG confirmó una correlación entre la estabilidad del componente lipídico PEG y el tiempo de vida en circulación de la SNALP. Las SNALP que contenían PEG-dimiristilglicerol (C14), PEG-dipalmitoilglicerol (C16) y PEG-disterilglicerol (C18) demostraron vidas medias en la circulación de 0,75, 7 y 15 horas respectivamente. Una vida en la circulación prolongada, a su vez, se correlaciona con un incremento en su administración al tumor y con la expresión de genes concomitante.
Después de la administración por vía intravenosa, las SNALP que contienen PEG-disterilglicerol (C18) evitan los llamados órganos de “primer paso”, incluyendo el pulmón, y provocan la expresión de genes en el tejido tumoral distal. El nivel de expresión del gen indicador observado en los tumores representa un diferencial de 100 a1000 veces sobre el observado en cualquier otro tejido. Esto es comparable con el comportamiento de las SNALP que contienen PEG-ceramida C20. La incorporación del PEG-DAG en la SNALP confirmó que un tamaño pequeño, una carga de superficie baja y tiempos de vida en la circulación prolongados son requisito previo al establecimiento como diana del sitio con la enfermedad pasivo (targeting pasivo) lo que conduce a una acumulación de ADN plasmídico y expresión de genes en tumores después de la administración sistémica de sistemas de transfección no virales. Ver las Figuras 3-9.
Materiales y métodos
Materiales
- 1
- 3 PBS / PBS 48 h IV
- 1
- 24A
- 4 Mezcla de L055-SPLP / PBS 24 h
- 24B
- 4 Mezcla de L055-SPLP / Liposomas de siARN anti-luc
- 48A
- 4 Neuro2a SQ Mezcla de L055-SPLP / PBS 48 h
- 48B
- 4 Mezcla de L055-SPLP / liposomas de siARN anti-luc
- 72A
- 4 Mezcla de L055-SPLP / PBS 72 h
- 72B
- 4 Mezcla de L055-SPLP / liposomas de siARN anti-luc
- Grupo
- # de ratones Fecha de sembrado Vía Tratamiento IV Punto de tiempo Fecha de inyección Fecha de recolección
- 1
- 3 Día 0 SQ PBS / PBS 48 h Día 13 Día 15
- 24A
- 4 Mezcla de L055-SPLP / PBS 24 h Día 14
- 24B
- 4 Mezcla de L055-SPLP / Liposomas de siARN anti-luc Día 14
- 48A
- 4 Mezcla de L055-SPLP / PBS 48 h Día 13
- 48B
- 4 Mezcla de L055-SPLP / liposomas de siARN anti-luc Día 13
- 72A
- 4 Mezcla de L055-SPLP / PBS 72 Día 12
- 72B
- 4 Mezcla de L055-SPLP / liposomas de siARN anti-luc Día 12
Se implantaron a 36 ratones A/J machos (Jackson Laboratories) por vía subcutánea células de Neuro 2A en una dosis de 1,5 x 106 células en un volumen total de 50 µL de solución tampón de fosfatos en el día cero. Una vez que 5 los tumores alcanzaron el tamaño adecuado (habitualmente en el día 9 o más tarde), formulaciones de 200-240 µl de PBS, SPLP, o SNALP (100 µg de ácido nucleico total), preparados según se describe en el Ejemplo 6 anterior, se administraron por vía intravenosa. 24, 48, o 72 horas después de la administración de PBS, SPLP o una mezcla de SPLP y SNALP, los ratones se sacrificaron y los órganos (por ejemplo, hígado, pulmón, bazo, riñón, corazón) y se recogieron los tumores y se evaluaron para determinar la actividad de la luciferasa. Los resultados se muestran en
10 las Figuras 18-22.
Los resultados demuestran que la administración conjunta de SPLP pL055 y SNALP con siARN anti-luc (ambos con PEG-A-DMA en su contenido), disminuye al máximo la expresión del gen luciferasa en un 40% cuarenta y ocho horas después de una única dosis IV.
Ejemplo 9. Síntesis de PEG-Dialquiloxipropilos (PEG-DAA)
15 El siguiente ejemplo ilustra la síntesis de tres PEG-lípidos, PEG-A-DMA (7), PEG-C-DMA (8), y PEG-S-DMA (9). Tienen un precursor común, la lipoamina 1,2-dimiristiloxipropilamina (5). Este lípido tiene cadenas alquilo de 14 unidades de carbono (C14) de longitud. Pueden sintetizarse otras PEG DAA adecuadas para su uso en la presente invención utilizando protocolos similares. Por ejemplo, PEG-A-DSA y PEG-C-DSA pueden ser sintetizados utilizando el análogo C18 de (5). El análogo C18 puede sintetizarse simplemente sustituyendo una cantidad equimolar de
20 bromuro de estearilo por bromuro de miristilo en la primera etapa (síntesis del compuesto (1)).
1. Preparación de 1,2-Dimiristiloxi-3-aliloxipropano (1)
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-
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---|---|---|---|---|
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DE60334618D1 (de) | 2002-06-28 | 2010-12-02 | Protiva Biotherapeutics Inc | Verfahren und vorrichtung zur herstellung von liposomen |
US9228186B2 (en) | 2002-11-14 | 2016-01-05 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
EP1648519B1 (en) | 2003-07-16 | 2014-10-08 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
US7803397B2 (en) * | 2003-09-15 | 2010-09-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof |
CA2549720C (en) * | 2003-12-19 | 2013-10-15 | Chiron Corporation | Cell transfecting formulations of small interfering rna, related compositions and methods of making and use |
US7947659B2 (en) | 2004-03-12 | 2011-05-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | iRNA agents targeting VEGF |
JP4635046B2 (ja) * | 2004-04-20 | 2011-02-16 | マリナ・バイオテック・インコーポレーテッド | 哺乳類の細胞における遺伝子発現を調節するための、二本鎖rnaまたは二本鎖ハイブリッド核酸の送達を増強するための方法および組成物 |
US20060040882A1 (en) * | 2004-05-04 | 2006-02-23 | Lishan Chen | Compostions and methods for enhancing delivery of nucleic acids into cells and for modifying expression of target genes in cells |
ATE536418T1 (de) | 2004-06-07 | 2011-12-15 | Protiva Biotherapeutics Inc | Lipidverkapselte interferenz-rna |
WO2005120152A2 (en) | 2004-06-07 | 2005-12-22 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods of use |
WO2006002538A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-01-12 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Immunostimulatory sirna molecules and uses therefor |
WO2006020182A2 (en) * | 2004-07-16 | 2006-02-23 | Smart Medical Technologies, Llc | Centrifuge system |
GB0418172D0 (en) * | 2004-08-13 | 2004-09-15 | Ic Vec Ltd | Vector |
JP2008509205A (ja) * | 2004-08-13 | 2008-03-27 | アイシー・ベック・リミテッド | ポリマー修飾siRNAリポソームを含むベクター |
JP5101288B2 (ja) | 2004-10-05 | 2012-12-19 | カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー | アプタマー調節される核酸及びその利用 |
WO2007001448A2 (en) | 2004-11-04 | 2007-01-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals |
AU2005306533B2 (en) * | 2004-11-17 | 2012-05-31 | Arbutus Biopharma Corporation | siRNA silencing of apolipoprotein B |
US9393315B2 (en) | 2011-06-08 | 2016-07-19 | Nitto Denko Corporation | Compounds for targeting drug delivery and enhancing siRNA activity |
WO2006074546A1 (en) * | 2005-01-13 | 2006-07-20 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
WO2006113679A2 (en) * | 2005-04-15 | 2006-10-26 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Delivery of sirna by neutral lipid compositions |
US7404969B2 (en) | 2005-02-14 | 2008-07-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
JP5042863B2 (ja) * | 2005-02-14 | 2012-10-03 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 生物学的に活性な分子をデリバリーするための脂質ナノ粒子系組成物および方法 |
US20070213293A1 (en) * | 2005-04-08 | 2007-09-13 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Rnai therapeutic for respiratory virus infection |
US9095630B2 (en) | 2005-05-19 | 2015-08-04 | L'oreal | Vectorization of dsRNA by cationic particles and use of same on a skin model |
FR2885813B1 (fr) * | 2005-05-19 | 2008-01-11 | Oreal | Vectorisation de dsrna par des particules cationiques et leur utilisation sur modele de peau. |
US20070054873A1 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-08 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation |
JP5571308B2 (ja) * | 2005-09-15 | 2014-08-13 | マリーナ バイオテック,インコーポレイテッド | 両性リポソームにおけるまたはそれに関する改善 |
TW200800235A (en) * | 2005-10-18 | 2008-01-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Carrier composition for nucleic acid transport |
US7838658B2 (en) * | 2005-10-20 | 2010-11-23 | Ian Maclachlan | siRNA silencing of filovirus gene expression |
US8101741B2 (en) | 2005-11-02 | 2012-01-24 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
US9267937B2 (en) | 2005-12-15 | 2016-02-23 | Massachusetts Institute Of Technology | System for screening particles |
EP2007435B1 (en) | 2006-03-31 | 2019-12-18 | Massachusetts Institute Of Technology | System for targeted delivery of therapeutic agents |
ES2392478T3 (es) | 2006-05-11 | 2012-12-11 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Composiciones y métodos para inhibir la expresión del gen PCSK9 |
EP2019691B1 (en) | 2006-05-15 | 2020-08-12 | Massachusetts Institute of Technology | Polymers for functional particles |
US8598333B2 (en) | 2006-05-26 | 2013-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SiRNA silencing of genes expressed in cancer |
US7915399B2 (en) * | 2006-06-09 | 2011-03-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
US9381477B2 (en) | 2006-06-23 | 2016-07-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Microfluidic synthesis of organic nanoparticles |
AU2007284036A1 (en) * | 2006-08-16 | 2008-02-21 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Nucleic acid modulation of Toll-like receptor-mediated immune stimulation |
CA2661292A1 (en) * | 2006-08-24 | 2008-02-28 | British Columbia Cancer Agency Branch | Compositions and methods for treating myelosuppression |
AU2014200915A1 (en) * | 2006-10-03 | 2014-03-13 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Lipid containing formulations |
EP3192788A1 (en) * | 2006-10-03 | 2017-07-19 | Arbutus Biopharma Corporation | Lipid containing formulations |
US8158595B2 (en) | 2006-11-09 | 2012-04-17 | California Institute Of Technology | Modular aptamer-regulated ribozymes |
CN101563458A (zh) * | 2006-12-14 | 2009-10-21 | 诺瓦提斯公司 | 治疗肌肉和心血管病症的组合物和方法 |
JP2010513354A (ja) | 2006-12-19 | 2010-04-30 | ノヴォソム アクチェンゲゼルシャフト | トランスフェクションエンハンサー要素を含む脂質および脂質集合体 |
US7985058B2 (en) * | 2007-01-12 | 2011-07-26 | Mark Gray | Method and apparatus for making uniformly sized particles |
US20080171078A1 (en) * | 2007-01-12 | 2008-07-17 | Mark Gray | Uniformly sized liposomes |
JP5415283B2 (ja) | 2007-02-07 | 2014-02-12 | グラダリス インク. | シアル酸産生を調節し、遺伝性封入体ミオパチーを治療する方法及び組成物 |
EP2134830A2 (en) | 2007-02-09 | 2009-12-23 | Massachusetts Institute of Technology | Oscillating cell culture bioreactor |
JP2010519203A (ja) * | 2007-02-16 | 2010-06-03 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 生物活性分子の活性を強化するための組成物及び方法 |
US8067390B2 (en) * | 2007-03-02 | 2011-11-29 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Therapeutic targeting of interleukins using siRNA in neutral liposomes |
TWI428135B (zh) * | 2007-03-26 | 2014-03-01 | Hirofumi Takeuchi | And a carrier composition for quick-acting nucleic acid delivery |
WO2008124634A1 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymer-encapsulated reverse micelles |
JP2010523595A (ja) | 2007-04-04 | 2010-07-15 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | ポリ(アミノ酸)ターゲッティング部分 |
DK2494993T3 (en) | 2007-05-04 | 2018-11-12 | Marina Biotech Inc | Amino acid lipids and uses thereof |
CN101790384B (zh) * | 2007-06-29 | 2013-12-11 | 国立血清研究所 | 单分枝酰基甘油(mmg)作为佐剂的应用 |
US20090082217A1 (en) * | 2007-07-16 | 2009-03-26 | California Institute Of Technology | Selection of nucleic acid-based sensor domains within nucleic acid switch platform |
WO2009021325A1 (en) | 2007-08-10 | 2009-02-19 | British Columbia Cancer Agency Branch | Microrna compositions and methods for the treatment of myelogenous leukemia |
US8367815B2 (en) * | 2007-08-28 | 2013-02-05 | California Institute Of Technology | Modular polynucleotides for ligand-controlled regulatory systems |
US20120165387A1 (en) | 2007-08-28 | 2012-06-28 | Smolke Christina D | General composition framework for ligand-controlled RNA regulatory systems |
US8865667B2 (en) | 2007-09-12 | 2014-10-21 | California Institute Of Technology | Higher-order cellular information processing devices |
CN105770878A (zh) | 2007-10-12 | 2016-07-20 | 麻省理工学院 | 疫苗纳米技术 |
CA2707042A1 (en) | 2007-12-10 | 2009-06-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor vii gene |
US9029524B2 (en) * | 2007-12-10 | 2015-05-12 | California Institute Of Technology | Signal activated RNA interference |
EP2229445B1 (en) * | 2007-12-13 | 2012-12-05 | Polyplus Transfection | Means for delivery of nucleic acids active for gene silencing using synthetic polymers |
AU2008342535B2 (en) | 2007-12-27 | 2015-02-05 | Arbutus Biopharma Corporation | Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA |
MX2010008394A (es) * | 2008-01-31 | 2010-11-12 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Metodos optimizados para administracion de arndc focalizando el gen pcsk9. |
KR101397407B1 (ko) * | 2008-03-05 | 2014-06-19 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Eg5 및 VEGF 유전자의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법 |
CA2721380A1 (en) | 2008-04-15 | 2009-10-22 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Silencing of csn5 gene expression using interfering rna |
HUE034483T2 (en) | 2008-04-15 | 2018-02-28 | Protiva Biotherapeutics Inc | New lipid preparations for introducing a nucleic acid |
CA2724408A1 (en) * | 2008-05-19 | 2009-11-26 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions comprising novel cationic lipids |
CN102112110A (zh) * | 2008-06-06 | 2011-06-29 | 米尔纳医疗股份有限公司 | 用于RNAi试剂体内递送的新型组合物 |
US8889640B1 (en) * | 2008-06-20 | 2014-11-18 | Jill P. Smith | Composition and method for the treatment of gastrin mediated cancers |
WO2010008582A2 (en) | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Phagocytic cell drug delivery system |
US8034922B2 (en) | 2008-08-22 | 2011-10-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for modulating activity of capped small RNAs |
EP2331690B1 (en) | 2008-09-02 | 2016-01-13 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of mutant egfr gene |
WO2010030730A1 (en) * | 2008-09-10 | 2010-03-18 | Abbott Laboratories | Polyethylene glycol lipid conjugates and uses thereof |
CA2743981C (en) | 2008-09-22 | 2019-01-29 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering rnai compounds |
EP3109321B1 (en) | 2008-09-25 | 2019-05-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene |
CA2740125A1 (en) * | 2008-10-09 | 2010-04-15 | Northeastern University | Multifunctional self-assembling polymeric nanosystems |
CA2984026C (en) | 2008-10-09 | 2020-02-11 | Arbutus Biopharma Corporation | Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
US8591905B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-11-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Nicotine immunonanotherapeutics |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
US8343498B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics |
US8277812B2 (en) | 2008-10-12 | 2012-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen |
US20100112042A1 (en) | 2008-10-16 | 2010-05-06 | Mdrna, Inc. | Processes and Compositions for Liposomal and Efficient Delivery of Gene Silencing Therapeutics |
WO2010048228A2 (en) | 2008-10-20 | 2010-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin |
AU2009320006A1 (en) | 2008-10-30 | 2010-06-03 | Peixuan Guo | Membrane-integrated viral DNA-packaging motor protein connector biosensor for DNA sequencing and other uses |
EP3225281A1 (en) | 2008-12-10 | 2017-10-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression |
WO2010074540A2 (ko) | 2008-12-26 | 2010-07-01 | 주식회사 삼양사 | 음이온성 약물 함유 약제학적 조성물 및 그 제조방법 |
US10292932B2 (en) * | 2008-12-26 | 2019-05-21 | Samyang Biopharmaceuticals Corporation | Polymeric micelle particle comprising anionic drugs and method of preparing the same |
US9493774B2 (en) | 2009-01-05 | 2016-11-15 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of PCSK9 through RNAi |
WO2010083615A1 (en) | 2009-01-26 | 2010-07-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression |
US9745574B2 (en) | 2009-02-04 | 2017-08-29 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | RNA duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
US8329882B2 (en) | 2009-02-18 | 2012-12-11 | California Institute Of Technology | Genetic control of mammalian cells with synthetic RNA regulatory systems |
US20120041051A1 (en) | 2009-02-26 | 2012-02-16 | Kevin Fitzgerald | Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of MIG-12 Gene |
US8975389B2 (en) | 2009-03-02 | 2015-03-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid chemical modifications |
SG174452A1 (en) | 2009-03-19 | 2011-10-28 | Merck Sharp & Dohme | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF BTB AND CNC HOMOLOGY 1, BASIC LEUCINE ZIPPER TRANSCRIPTION FACTOR 1 (BACH 1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) SEQUENCE LISTING |
JP2012520685A (ja) | 2009-03-19 | 2012-09-10 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 低分子干渉核酸(siNA)を用いたGATA結合タンパク質3(GATA3)遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2012520686A (ja) | 2009-03-19 | 2012-09-10 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 低分子干渉核酸(siNA)を用いたシグナル伝達性転写因子6(STAT6)遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
JP2012520683A (ja) | 2009-03-19 | 2012-09-10 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | 低分子干渉核酸(siNA)を用いた結合組織増殖因子(CTGF)遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
US8460696B2 (en) * | 2009-03-20 | 2013-06-11 | Egen, Inc. | Polyamine derivatives |
US20120004281A1 (en) | 2009-03-27 | 2012-01-05 | Merck Sharp & Dohme Corp | RNA Interference Mediated Inhibition of the Nerve Growth Factor Beta Chain (NGFB) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
EP2411517A2 (en) | 2009-03-27 | 2012-02-01 | Merck Sharp&Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE 1 (ICAM-1)GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
EP2411516A1 (en) | 2009-03-27 | 2012-02-01 | Merck Sharp&Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF APOPTOSIS SIGNAL-REGULATING KINASE 1 (ASK1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20120022142A1 (en) | 2009-03-27 | 2012-01-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA Interference Mediated Inhibition of Signal Transducer and Activator of Transcription 1 (STAT1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
EP2411520A2 (en) | 2009-03-27 | 2012-02-01 | Merck Sharp&Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE THYMIC STROMAL LYMPHOPOIETIN (TSLP) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US9145555B2 (en) | 2009-04-02 | 2015-09-29 | California Institute Of Technology | Integrated—ligand-responsive microRNAs |
EP2416652B1 (en) | 2009-05-05 | 2018-11-07 | Arbutus Biopharma Corporation | Methods of delivering oligonucleotides to immune cells |
CN102985548B (zh) * | 2009-05-16 | 2016-10-26 | 崔坤元 | 用于递送治疗分子的包含阳离子两亲物和辅脂质的组合物 |
WO2010148013A2 (en) * | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene |
WO2010147992A1 (en) | 2009-06-15 | 2010-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for increasing efficacy of lipid formulated sirna |
GB0910723D0 (en) | 2009-06-22 | 2009-08-05 | Sylentis Sau | Novel drugs for inhibition of gene expression |
US9018187B2 (en) | 2009-07-01 | 2015-04-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
IL292615B2 (en) * | 2009-07-01 | 2023-11-01 | Protiva Biotherapeutics Inc | Nucleic acid-lipid particles, preparations containing them and their uses |
US8569256B2 (en) | 2009-07-01 | 2013-10-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
EP2449106B1 (en) | 2009-07-01 | 2015-04-08 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Compositions and methods for silencing apolipoprotein b |
US8716464B2 (en) | 2009-07-20 | 2014-05-06 | Thomas W. Geisbert | Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression |
US9029338B2 (en) | 2009-08-14 | 2015-05-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus |
US9415059B2 (en) | 2009-08-31 | 2016-08-16 | Nanocarrier Co., Ltd. | Particulate composition and pharmaceutical composition containing the same |
WO2011038031A1 (en) | 2009-09-22 | 2011-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dual targeting sirna agents |
US9222086B2 (en) | 2009-09-23 | 2015-12-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer |
US20130079382A1 (en) | 2009-10-12 | 2013-03-28 | Larry J. Smith | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro |
JP5723378B2 (ja) | 2009-11-03 | 2015-05-27 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | トランスサイレチン(ttr)を阻害する脂質製剤化組成物及び方法 |
MX339050B (es) | 2009-12-18 | 2016-05-09 | Novartis Ag | Composiciones organicas para tratar las enfermedades relacionadas con hsf1. |
WO2011091396A1 (en) * | 2010-01-25 | 2011-07-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of mylip/idol gene |
CN106074591B (zh) | 2010-03-24 | 2020-01-14 | 菲奥医药公司 | 眼部症候中的rna干扰 |
EP3560503B1 (en) | 2010-03-24 | 2021-11-17 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Rna interference in dermal and fibrotic indications |
WO2011120023A1 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Marina Biotech, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting survivin gene expression uses thereof |
JP2013528665A (ja) | 2010-03-26 | 2013-07-11 | メルサナ セラピューティックス, インコーポレイテッド | ポリヌクレオチドの送達のための修飾ポリマー、その製造方法、およびその使用方法 |
CA2792291A1 (en) | 2010-03-29 | 2011-10-06 | Kumamoto University | Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis |
US8455455B1 (en) | 2010-03-31 | 2013-06-04 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes involved in hemorrhagic fever |
KR100986604B1 (ko) * | 2010-04-01 | 2010-10-08 | 충남대학교산학협력단 | 신규한 아미노지질을 함유하는 에스아이알엔에이 수송용 유전자 조성물 및 제조방법 |
WO2011133584A2 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-27 | Marina Biotech, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting hras gene expression and uses thereof |
DK2561077T3 (en) | 2010-04-23 | 2016-08-01 | Arrowhead Res Corp | Organic compositions for the treatment of beta-ENaC-related diseases |
WO2011139843A2 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-10 | Marina Biotech, Inc. | Multi-sirna compositions for reducing gene expression |
CA2799091A1 (en) | 2010-05-12 | 2011-11-17 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods of use thereof |
WO2011141704A1 (en) | 2010-05-12 | 2011-11-17 | Protiva Biotherapeutics, Inc | Novel cyclic cationic lipids and methods of use |
KR101198715B1 (ko) | 2010-05-14 | 2012-11-13 | 한국생명공학연구원 | 핵산 및 친수성 음이온 화합물의 고효율 포획을 위한 비대칭 리포솜 및 이의 제조방법 |
AU2011261434B2 (en) | 2010-06-02 | 2015-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods directed to treating liver fibrosis |
WO2012000104A1 (en) | 2010-06-30 | 2012-01-05 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Non-liposomal systems for nucleic acid delivery |
US9770463B2 (en) | 2010-07-06 | 2017-09-26 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Delivery of RNA to different cell types |
HUE047796T2 (hu) | 2010-07-06 | 2020-05-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | RNS bevitele több immunútvonal bekapcsolására |
SI2591114T1 (sl) | 2010-07-06 | 2016-10-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Imunizacija velikih sesalcev z majhnimi odmerki RNA |
HUE026646T2 (en) | 2010-07-06 | 2016-07-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Preferred liposomes containing lipids of PKA value for delivery of RNA |
SI2590676T1 (sl) | 2010-07-06 | 2016-11-30 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Virionu podobni delci za dajanje za samorepliciranje RNA molekul |
CA2805265A1 (en) | 2010-08-02 | 2012-02-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Rna interference mediated inhibition of catenin (cadherin-associated protein), beta 1 (ctnnb1) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
WO2012018881A2 (en) * | 2010-08-03 | 2012-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the regulation of rna |
WO2012027206A1 (en) | 2010-08-24 | 2012-03-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | SINGLE-STRANDED RNAi AGENTS CONTAINING AN INTERNAL, NON-NUCLEIC ACID SPACER |
EP2609106A4 (en) | 2010-08-26 | 2014-03-19 | Merck Sharp & Dohme | RNA INTERFERENCE-MEDIATED INHIBITION OF EXPRESSION OF PHD2 GENE (PROLYL HYDROXYLASE DOMAIN 2) USING SMALL INTERFERING NUCLEIC ACID (PANI) |
HUE060524T2 (hu) | 2010-08-31 | 2023-03-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pegilált liposzómák immunogén kódoló RNS beszállítására |
EP3520813B1 (en) | 2010-10-11 | 2023-04-19 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Antigen delivery platforms |
EP2632472B1 (en) | 2010-10-29 | 2017-12-13 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acids (sina) |
WO2012079046A2 (en) | 2010-12-10 | 2012-06-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of klf-1 and bcl11a genes |
US9193973B2 (en) | 2010-12-10 | 2015-11-24 | Alynylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for increasing erythropoietin (EPO) production |
CA2831284C (en) | 2011-03-29 | 2023-12-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of tmprss6 gene |
US10196637B2 (en) | 2011-06-08 | 2019-02-05 | Nitto Denko Corporation | Retinoid-lipid drug carrier |
US9011903B2 (en) | 2011-06-08 | 2015-04-21 | Nitto Denko Corporation | Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations |
RU2631805C2 (ru) | 2011-06-21 | 2017-09-26 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | Композиции и способы ингибирования экспрессии генов аполипопротеина с-iii (арос3) |
EP3564393A1 (en) | 2011-06-21 | 2019-11-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Assays and methods for determining activity of a therapeutic agent in a subject |
US9068184B2 (en) | 2011-06-21 | 2015-06-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of protein C (PROC) genes |
EP4092120A1 (en) | 2011-06-21 | 2022-11-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (anglptl3) irna compositions and methods of use thereof |
US20140235693A1 (en) | 2011-06-23 | 2014-08-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment |
EP3854413A1 (en) | 2011-07-06 | 2021-07-28 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Immunogenic combination compositions and uses thereof |
US20140328811A1 (en) | 2011-08-01 | 2014-11-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method for improving the success rate of hematopoietic stem cell transplants |
JP2014525435A (ja) | 2011-09-02 | 2014-09-29 | ノバルティス アーゲー | Hsf1関連疾患を処置するための有機組成物 |
RU2014117690A (ru) * | 2011-10-05 | 2015-11-10 | Протива Байотерапьютикс Инк. | Композиции и способы для сайленсинга альдегид-дегидрогеназы |
KR20220045091A (ko) | 2011-11-18 | 2022-04-12 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스티레틴(TTR) 관련 질병을 치료하기 위한 RNAi 제제, 조성 및 그의 사용방법 |
CA3165769A1 (en) | 2011-12-07 | 2013-06-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Biodegradable lipids for the delivery of active agents |
US9035039B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-05-19 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing SMAD4 |
WO2013105022A2 (en) | 2012-01-09 | 2013-07-18 | Novartis Ag | Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases |
PT2817287T (pt) | 2012-02-24 | 2018-12-28 | Arbutus Biopharma Corp | Lípidos catiónicos trialquílicos e seus métodos de utilização |
KR101480055B1 (ko) | 2012-04-04 | 2015-01-09 | 주식회사 삼양바이오팜 | 음이온성 약물 전달체의 제조 방법 |
US9133461B2 (en) | 2012-04-10 | 2015-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene |
US9127274B2 (en) | 2012-04-26 | 2015-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpinc1 iRNA compositions and methods of use thereof |
MX2014013367A (es) | 2012-05-02 | 2014-12-08 | Novartis Ag | Composiciones organicas para tratar enfermedades relacionadas con kras. |
CA2891911C (en) | 2012-12-07 | 2023-03-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Improved nucleic acid lipid particle formulations |
IL239317B (en) | 2012-12-12 | 2022-07-01 | Broad Inst Inc | Providing, engineering and optimizing systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications |
US10227589B2 (en) * | 2013-01-28 | 2019-03-12 | Council Of Scientific And Industrial Research | Method for inhibiting tumor growth through RNA-interference using liposomally associated CDC20 siRNA |
JP6507102B2 (ja) | 2013-02-05 | 2019-04-24 | 1グローブ ヘルス インスティテュート エルエルシー | 薬物送達キャリアとしての生分解性でかつ臨床上適合性のナノ粒子 |
US20150366890A1 (en) | 2013-02-25 | 2015-12-24 | Trustees Of Boston University | Compositions and methods for treating fungal infections |
EP2961843A2 (en) | 2013-02-28 | 2016-01-06 | Arrowhead Research Corporation | Organic compositions to treat epas1-related diseases |
EP2994167B1 (en) | 2013-05-06 | 2020-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dosages and methods for delivering lipid formulated nucleic acid molecules |
TWI492751B (zh) * | 2013-06-04 | 2015-07-21 | Univ Kaohsiung Medical | 柴胡皂苷製備之醫藥組合物、其用途及其製備方法 |
EP3620524A1 (en) | 2013-06-17 | 2020-03-11 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for targeting and modeling diseases and disorders of post mitotic cells |
EP3597755A1 (en) | 2013-06-17 | 2020-01-22 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using viral components |
CN113425857A (zh) | 2013-06-17 | 2021-09-24 | 布罗德研究所有限公司 | 用于肝靶向和治疗的crispr-cas***、载体和组合物的递送与用途 |
CA2919226A1 (en) | 2013-07-23 | 2015-01-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for delivering messenger rna |
CN109536493A (zh) | 2013-10-02 | 2019-03-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制lect2基因表达的组合物和方法 |
WO2015051135A2 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Novartis Ag | Organic compositions to treat hepcidin-related diseases |
UA124961C2 (uk) | 2013-10-04 | 2021-12-22 | Елнілем Фармасьютикалз, Інк. | ДВОНИТКОВА РИБОНУКЛЕЇНОВА КИСЛОТА (dsRNA) ДЛЯ ІНГІБУВАННЯ ЕКСПРЕСІЇ ALAS1 |
US10772974B2 (en) | 2013-11-18 | 2020-09-15 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Compositions and methods for cardiac regeneration |
WO2015085113A1 (en) | 2013-12-04 | 2015-06-11 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treatment of wound healing utilizing chemically modified oligonucleotides |
BR112016013547A2 (pt) | 2013-12-12 | 2017-10-03 | Broad Inst Inc | Composições e métodos de uso de sistemas crispr-cas em distúrbios de repetições de nucleotídeos |
EP4219699A1 (en) | 2013-12-12 | 2023-08-02 | The Broad Institute, Inc. | Engineering of systems, methods and optimized guide compositions with new architectures for sequence manipulation |
CA2932478A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | Massachusetts Institute Of Technology | Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for genome editing |
EP3080261B1 (en) | 2013-12-12 | 2019-05-22 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for hbv and viral diseases and disorders |
SG10201804977UA (en) | 2013-12-12 | 2018-07-30 | Broad Inst Inc | Delivery, Use and Therapeutic Applications of the Crispr-Cas Systems and Compositions for Targeting Disorders and Diseases Using Particle Delivery Components |
WO2015089486A2 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | The Broad Institute Inc. | Systems, methods and compositions for sequence manipulation with optimized functional crispr-cas systems |
US11279934B2 (en) | 2014-04-28 | 2022-03-22 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating cancer using nucleic acids targeting MDM2 or MYCN |
JP2017514908A (ja) | 2014-05-01 | 2017-06-08 | アールエックスアイ ファーマシューティカルズ コーポレーション | 核酸分子を利用する目の前部における障害の処置のための方法 |
CA2952121A1 (en) | 2014-06-13 | 2015-12-17 | Childrens' Medical Center Corporation | Products and methods to isolate mitochondria |
EP3160938B1 (en) | 2014-06-25 | 2020-09-16 | Acuitas Therapeutics Inc. | Novel lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids |
WO2016011123A1 (en) | 2014-07-16 | 2016-01-21 | Arrowhead Research Corporation | Organic compositions to treat apoc3-related diseases |
EP3180426B1 (en) | 2014-08-17 | 2019-12-25 | The Broad Institute, Inc. | Genome editing using cas9 nickases |
HUE059857T2 (hu) | 2014-08-29 | 2023-01-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Patizirán transztiretin által közvetített amiloidózis kezelésében történõ alkalmazásra |
KR20230037676A (ko) | 2014-09-05 | 2023-03-16 | 피오 파마슈티칼스 코프. | Tyr 또는 mmp1을 표적화하는 핵산을 사용한 노화 및 피부 장애의 치료 방법 |
EP3191592A1 (en) | 2014-09-11 | 2017-07-19 | Novartis AG | Inhibition of prmt5 to treat mtap-deficiency-related diseases |
WO2016049163A2 (en) | 2014-09-24 | 2016-03-31 | The Broad Institute Inc. | Use and production of chd8+/- transgenic animals with behavioral phenotypes characteristic of autism spectrum disorder |
WO2016049258A2 (en) | 2014-09-25 | 2016-03-31 | The Broad Institute Inc. | Functional screening with optimized functional crispr-cas systems |
AU2015328012A1 (en) | 2014-10-02 | 2017-05-11 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions and methods for silencing Hepatitis B virus gene expression |
EP3227446A1 (en) | 2014-12-01 | 2017-10-11 | Novartis AG | Compositions and methods for diagnosis and treatment of prostate cancer |
EP3230451B1 (en) | 2014-12-12 | 2021-04-07 | The Broad Institute, Inc. | Protected guide rnas (pgrnas) |
WO2016094880A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of crispr systems and compositions for genome editing as to hematopoietic stem cells (hscs) |
WO2016094874A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Escorted and functionalized guides for crispr-cas systems |
WO2016094872A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | The Broad Institute Inc. | Dead guides for crispr transcription factors |
CA2970795A1 (en) | 2014-12-18 | 2016-06-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Reversir compounds |
WO2016100974A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | The Broad Institute Inc. | Unbiased identification of double-strand breaks and genomic rearrangement by genome-wide insert capture sequencing |
WO2016106236A1 (en) | 2014-12-23 | 2016-06-30 | The Broad Institute Inc. | Rna-targeting system |
EP3702456A1 (en) | 2014-12-24 | 2020-09-02 | The Broad Institute, Inc. | Crispr having or associated with destabilization domains |
US11389407B2 (en) * | 2015-03-03 | 2022-07-19 | Matinas Biopharma Nanotechnologies, Inc. | Cochleates and methods of using the same to enhance tissue penetration of pharmacologically active agent |
CN104922141B (zh) * | 2015-05-28 | 2016-05-25 | 厦门成坤生物技术有限公司 | 一种用于治疗乙型病毒性肝炎的siRNA组合物 |
US20180245074A1 (en) | 2015-06-04 | 2018-08-30 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Treating hepatitis b virus infection using crispr |
US20180296537A1 (en) | 2015-06-05 | 2018-10-18 | Novartis Ag | Methods and compositions for diagnosing, treating, and monitoring treatment of shank3 deficiency associated disorders |
EP3666895A1 (en) | 2015-06-18 | 2020-06-17 | The Broad Institute, Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
US9790490B2 (en) | 2015-06-18 | 2017-10-17 | The Broad Institute Inc. | CRISPR enzymes and systems |
EP3929287A3 (en) | 2015-06-18 | 2022-04-13 | The Broad Institute, Inc. | Crispr enzyme mutations reducing off-target effects |
WO2016205745A2 (en) * | 2015-06-18 | 2016-12-22 | The Broad Institute Inc. | Cell sorting |
EP3436575A1 (en) | 2015-06-18 | 2019-02-06 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
EP3313829B1 (en) | 2015-06-29 | 2024-04-10 | Acuitas Therapeutics Inc. | Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids |
KR20180026739A (ko) | 2015-07-06 | 2018-03-13 | 알엑스아이 파마슈티칼스 코포레이션 | 슈퍼옥시드 디스뮤타제 1 (sod1)을 표적화하는 핵산 분자 |
US10808247B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-10-20 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
US20180208932A1 (en) | 2015-07-29 | 2018-07-26 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions and methods for silencing hepatitis b virus gene expression |
HUE051998T2 (hu) | 2015-07-31 | 2021-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Transztiretin (TTR) iRNS készítmények és eljárások azok alkalmazása TTR-asszociált betegségek kezelésére vagy megelõzésére |
US9856481B2 (en) | 2015-08-13 | 2018-01-02 | Ann & Robert H. Lurie Children's Hospital | MicroRNA treatment of fibrosis |
US11214800B2 (en) | 2015-08-18 | 2022-01-04 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for altering function and structure of chromatin loops and/or domains |
WO2017069958A2 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Modulation of novel immune checkpoint targets |
US11021707B2 (en) | 2015-10-19 | 2021-06-01 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding RNA |
KR20180133374A (ko) | 2015-10-22 | 2018-12-14 | 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 | 타입 vi-b crispr 효소 및 시스템 |
EP3368687B1 (en) | 2015-10-27 | 2021-09-29 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for targeting cancer-specific sequence variations |
WO2018081480A1 (en) | 2016-10-26 | 2018-05-03 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle formulations |
WO2017075451A1 (en) | 2015-10-28 | 2017-05-04 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting pou2af1 |
WO2017075478A2 (en) | 2015-10-28 | 2017-05-04 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by use of immune cell gene signatures |
WO2017075465A1 (en) | 2015-10-28 | 2017-05-04 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting gata3 |
HRP20230209T1 (hr) | 2015-10-28 | 2023-04-14 | Acuitas Therapeutics Inc. | Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina |
EP3397261A4 (en) | 2015-11-30 | 2019-07-03 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS RELATING TO THE CHONDRISOMES |
WO2017096326A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for efficient generation of neurons from non-neuronal cells |
WO2017106657A1 (en) | 2015-12-18 | 2017-06-22 | The Broad Institute Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
WO2017123588A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Merrimack Pharmaceuticals, Inc. | Inhibiting ataxia telangiectasia and rad3-related protein (atr) |
CA3026055A1 (en) | 2016-04-19 | 2017-10-26 | The Broad Institute, Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
CA3026110A1 (en) | 2016-04-19 | 2017-11-02 | The Broad Institute, Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
EP3445853A1 (en) | 2016-04-19 | 2019-02-27 | The Broad Institute, Inc. | Cpf1 complexes with reduced indel activity |
CA3028158A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | The Broad Institute, Inc. | Type vi crispr orthologs and systems |
WO2018005873A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | The Broad Institute Inc. | Crispr-cas systems having destabilization domain |
CA3034681A1 (en) | 2016-06-30 | 2018-01-04 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions and methods for delivering messenger rna |
WO2018035387A1 (en) | 2016-08-17 | 2018-02-22 | The Broad Institute, Inc. | Novel crispr enzymes and systems |
US11352647B2 (en) | 2016-08-17 | 2022-06-07 | The Broad Institute, Inc. | Crispr enzymes and systems |
MA45999A (fr) * | 2016-08-22 | 2019-06-26 | Arbutus Biopharma Corp | Anticorps anti-pd-1, ou leurs fragments, pour le traitement de l'hépatite b |
WO2018049025A2 (en) | 2016-09-07 | 2018-03-15 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses |
WO2018047148A1 (en) | 2016-09-12 | 2018-03-15 | Novartis Ag | Compounds for the inhibition of mirna |
WO2018067991A1 (en) | 2016-10-07 | 2018-04-12 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Modulation of novel immune checkpoint targets |
WO2018083606A1 (en) | 2016-11-01 | 2018-05-11 | Novartis Ag | Methods and compositions for enhancing gene editing |
US10526284B2 (en) * | 2016-12-21 | 2020-01-07 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipid for RNA delivery |
EP4361261A2 (en) | 2017-03-15 | 2024-05-01 | The Broad Institute Inc. | Novel cas13b orthologues crispr enzymes and systems |
US11840711B2 (en) | 2017-04-12 | 2023-12-12 | The Broad Institute, Inc. | Type VI CRISPR orthologs and systems |
US11357856B2 (en) | 2017-04-13 | 2022-06-14 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Lipids for delivery of active agents |
WO2018191719A1 (en) | 2017-04-13 | 2018-10-18 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Lipid delivery of therapeutic agents to adipose tissue |
US20200405639A1 (en) | 2017-04-14 | 2020-12-31 | The Broad Institute, Inc. | Novel delivery of large payloads |
CA3061612A1 (en) | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Novel carbonyl lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids |
WO2018204777A2 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | The Broad Institute, Inc. | Methods for identification and modification of lncrna associated with target genotypes and phenotypes |
WO2018208728A1 (en) | 2017-05-08 | 2018-11-15 | Flagship Pioneering, Inc. | Compositions for facilitating membrane fusion and uses thereof |
JP2020524993A (ja) | 2017-06-13 | 2020-08-27 | フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ, インコーポレイテッド | クロンを含む組成物及びその使用 |
EP3655004A2 (en) | 2017-07-21 | 2020-05-27 | Novartis AG | Compositions and methods to treat cancer |
JP7355731B2 (ja) | 2017-08-16 | 2023-10-03 | アクイタス セラピューティクス インコーポレイテッド | 脂質ナノ粒子製剤における使用のための脂質 |
WO2019036030A1 (en) | 2017-08-17 | 2019-02-21 | Acuitas Therapeutics, Inc. | LIPIDS FOR USE IN LIPID NANOPARTICLE FORMULATIONS |
US11542225B2 (en) | 2017-08-17 | 2023-01-03 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Lipids for use in lipid nanoparticle formulations |
WO2019046809A1 (en) * | 2017-08-31 | 2019-03-07 | Modernatx, Inc. | METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES |
CA3074303A1 (en) | 2017-09-11 | 2019-03-14 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Rnai agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) |
MA50267A (fr) | 2017-09-19 | 2020-07-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions et méthodes de traitement de l'amylose médiée par la transthyrétine (ttr) |
CA3073848A1 (en) | 2017-09-21 | 2019-03-28 | The Broad Institute, Inc. | Systems, methods, and compositions for targeted nucleic acid editing |
US20200255828A1 (en) | 2017-10-04 | 2020-08-13 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for altering function and structure of chromatin loops and/or domains |
WO2019089828A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Lamellar lipid nanoparticles |
WO2019089803A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for studying cell evolution |
US20200339987A1 (en) | 2017-11-09 | 2020-10-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Assays and methods for determining expression of the lect2 gene |
EP3710039A4 (en) | 2017-11-13 | 2021-08-04 | The Broad Institute, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR CANCER TREATMENT BY TARGETING THE CLEC2D-KLRB1 PATH |
TW201936201A (zh) | 2017-12-14 | 2019-09-16 | 美商堅固生物科技公司 | 基因之非病毒生產及遞送 |
US11021692B2 (en) | 2017-12-19 | 2021-06-01 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Hepatitis B virus (HBV) vaccines and uses thereof |
WO2019150309A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Hammack Scott | Modulators of gpr68 and uses thereof for treating and preventing diseases |
US20210123016A1 (en) | 2018-05-02 | 2021-04-29 | Novartis Ag | Regulators of human pluripotent stem cells and uses thereof |
KR20190127277A (ko) * | 2018-05-04 | 2019-11-13 | 주식회사 삼양바이오팜 | mRNA 전달용 고분자 나노입자 조성물 및 그 제조방법 |
AU2019318079A1 (en) | 2018-08-07 | 2021-01-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Novel Cas12b enzymes and systems |
WO2020037125A1 (en) | 2018-08-16 | 2020-02-20 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
WO2020041380A1 (en) | 2018-08-20 | 2020-02-27 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for optochemical control of crispr-cas9 |
EP3852911A2 (en) | 2018-09-21 | 2021-07-28 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Systems and methods for manufacturing lipid nanoparticles and liposomes |
WO2020069445A1 (en) * | 2018-09-28 | 2020-04-02 | Nutcracker Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle formulations comprising lipidated cationic peptide compounds for nucleic acid delivery |
KR20210093232A (ko) | 2018-10-09 | 2021-07-27 | 더 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아 | 유기용매와 세제가 없는 형질감염 적격 소포를 포함하는 조성물과 시스템 및 관련 방법 |
CA3118557A1 (en) * | 2018-11-09 | 2020-05-14 | Arbutus Biopharma Corporation | Negatively charged peg-lipid conjugates |
US11166996B2 (en) | 2018-12-12 | 2021-11-09 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | Anellovirus compositions and methods of use |
EP4285929A3 (en) | 2018-12-20 | 2024-03-06 | Humabs Biomed SA | Combination hbv therapy |
US11453639B2 (en) | 2019-01-11 | 2022-09-27 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Lipids for lipid nanoparticle delivery of active agents |
US20220177863A1 (en) | 2019-03-18 | 2022-06-09 | The Broad Institute, Inc. | Type vii crispr proteins and systems |
US20220220469A1 (en) | 2019-05-20 | 2022-07-14 | The Broad Institute, Inc. | Non-class i multi-component nucleic acid targeting systems |
JP2022536945A (ja) | 2019-06-18 | 2022-08-22 | ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー | B型肝炎ウイルス(HBV)ワクチンおよびHBVを標的化するRNAiの組合せ |
AU2020296372A1 (en) | 2019-06-18 | 2022-02-17 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Combination of hepatitis B virus (HBV) vaccines and anti-PD-1 antibody |
MA56520A (fr) | 2019-06-18 | 2022-04-27 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Co | Construction de l'interleukine 12 recombinante et ses utilisations |
WO2020255010A1 (en) | 2019-06-18 | 2020-12-24 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Combination of recombinant interleukin 12 construct and hepatitis b virus (hbv) vaccines |
MA56523A (fr) | 2019-06-18 | 2022-04-27 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Co | Combinaison de vaccins contre le virus de l'hépatite b (vhb) et d'anticorps anti-pd-1 ou anti-pd-l1 |
CA3143631A1 (en) | 2019-06-20 | 2020-12-24 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Lipid nanoparticle or liposome delivery of hepatitis b virus (hbv) vaccines |
JOP20220037A1 (ar) | 2019-08-14 | 2023-01-30 | Acuitas Therapeutics Inc | جسيمات نانوية دهنية محسنة لتوصيل الأحماض النووية |
WO2021046122A1 (en) | 2019-09-03 | 2021-03-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
US20220389429A1 (en) | 2019-10-04 | 2022-12-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing ugt1a1 gene expression |
EP4051796A1 (en) | 2019-11-01 | 2022-09-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajb1-prkaca fusion gene expression |
CN115135765A (zh) | 2019-11-08 | 2022-09-30 | 菲奥医药公司 | 用于免疫治疗的靶向含布罗莫结构域之蛋白4(brd4)的经化学修饰的寡核苷酸 |
WO2021138537A1 (en) | 2019-12-31 | 2021-07-08 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Chemically modified oligonucleotides with improved systemic delivery |
WO2021163066A1 (en) | 2020-02-10 | 2021-08-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing vegf-a expression |
EP4127171A2 (en) | 2020-03-30 | 2023-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajc15 gene expression |
EP4126947A1 (en) | 2020-03-30 | 2023-02-08 | BioNTech SE | Rna compositions targeting claudin-18.2 |
AR121769A1 (es) | 2020-04-06 | 2022-07-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para el silenciamiento de la expresión de myoc |
MX2022012561A (es) | 2020-04-07 | 2022-11-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para silenciar la expresion de la subunidad alfa tipo ix dependiente del voltaje del canal de sodio (scn9a). |
CN111494641B (zh) * | 2020-04-22 | 2021-08-03 | 南开大学 | 肿瘤微环境响应性的表面电荷可反转纳米药物递送载体 |
WO2021237097A1 (en) | 2020-05-21 | 2021-11-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting marc1 gene expression |
EP4164668A1 (en) | 2020-06-15 | 2023-04-19 | Research Institute at Nationwide Children's Hospital | Adeno-associated virus vector delivery for muscular dystrophies |
IL299201A (en) | 2020-06-24 | 2023-02-01 | Vir Biotechnology Inc | Transgenic hepatitis B virus neutralizing antibodies and their uses |
EP4178613A1 (en) | 2020-07-08 | 2023-05-17 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Rna replicon vaccines against hbv |
EP4182297A1 (en) | 2020-07-16 | 2023-05-24 | Acuitas Therapeutics, Inc. | Cationic lipids for use in lipid nanoparticles |
WO2022099003A1 (en) | 2020-11-06 | 2022-05-12 | Sanofi | Lipid nanoparticles for delivering mrna vaccines |
CA3200234A1 (en) | 2020-11-25 | 2022-06-02 | Daryl C. Drummond | Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use |
WO2022133230A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for treating hepatitis b virus infection |
AU2021412833A1 (en) | 2020-12-28 | 2023-07-06 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Transcription activator-like effector nucleases (talens) targeting hbv |
EP4319803A1 (en) | 2021-04-08 | 2024-02-14 | Vaxthera SAS | Coronavirus vaccine comprising a mosaic protein |
AU2022290278A1 (en) | 2021-06-11 | 2024-01-04 | LifeEDIT Therapeutics, Inc. | Rna polymerase iii promoters and methods of use |
CA3226019A1 (en) | 2021-07-20 | 2023-01-26 | Ags Therapeutics Sas | Extracellular vesicles from microalgae, their preparation, and uses |
TW202328445A (zh) | 2021-08-03 | 2023-07-16 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | 甲狀腺素運載蛋白(TTR)iRNA組成物及其使用方法 |
WO2023015264A1 (en) | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Immunotherapy of cancer utilizing natural killer cells treated with chemically modified oligonucleotides |
WO2023015265A2 (en) | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Chemically modified oligonucleotides |
WO2023023055A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Renagade Therapeutics Management Inc. | Compositions and methods for optimizing tropism of delivery systems for rna |
WO2023044343A1 (en) | 2021-09-14 | 2023-03-23 | Renagade Therapeutics Management Inc. | Acyclic lipids and methods of use thereof |
TW202328067A (zh) | 2021-09-14 | 2023-07-16 | 美商雷納嘉德醫療管理公司 | 環狀脂質及其使用方法 |
US20230277600A1 (en) | 2021-10-20 | 2023-09-07 | University Of Rochester | Treatment Of Age-Related White Matter Loss By Competitive Replacement Of Glial Cells |
WO2023081756A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | The J. David Gladstone Institutes, A Testamentary Trust Established Under The Will Of J. David Gladstone | Precise genome editing using retrons |
WO2023091490A1 (en) | 2021-11-16 | 2023-05-25 | Senda Biosciences, Inc. | Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same |
WO2023091787A1 (en) | 2021-11-22 | 2023-05-25 | Senda Biosciences, Inc. | Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same |
WO2023122752A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Renagade Therapeutics Management Inc. | Constrained lipids and methods of use thereof |
WO2023141602A2 (en) | 2022-01-21 | 2023-07-27 | Renagade Therapeutics Management Inc. | Engineered retrons and methods of use |
WO2023147090A1 (en) | 2022-01-27 | 2023-08-03 | BioNTech SE | Pharmaceutical compositions for delivery of herpes simplex virus antigens and related methods |
WO2023144798A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Genevant Sciences Gmbh | Ionizable cationic lipids for lipid nanoparticles |
WO2023144127A1 (en) | 2022-01-31 | 2023-08-03 | Ags Therapeutics Sas | Extracellular vesicles from microalgae, their biodistribution upon administration, and uses |
WO2023183616A1 (en) | 2022-03-25 | 2023-09-28 | Senda Biosciences, Inc. | Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same |
WO2023196818A1 (en) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | The Regents Of The University Of California | Genetic complementation compositions and methods |
WO2023196931A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Renagade Therapeutics Management Inc. | Cyclic lipids and lipid nanoparticles (lnp) for the delivery of nucleic acids or peptides for use in vaccinating against infectious agents |
WO2023215481A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | INTERFERING RNA THERAPY FOR PLN-R14del CARDIOMYOPATHY |
WO2023218431A1 (en) | 2022-05-13 | 2023-11-16 | BioNTech SE | Rna compositions targeting hiv |
WO2023218420A1 (en) | 2022-05-13 | 2023-11-16 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Mrna compositions for inducing latent hiv-1 reversal |
WO2023230295A1 (en) | 2022-05-25 | 2023-11-30 | BioNTech SE | Rna compositions for delivery of monkeypox antigens and related methods |
WO2023229535A1 (en) | 2022-05-27 | 2023-11-30 | Engine Biosciences Pte. Ltd. | Bet polypeptide therapeutic agents for generating synthetic lethality in tumors |
WO2023232747A1 (en) | 2022-05-30 | 2023-12-07 | BioNTech SE | Complexes for delivery of nucleic acids |
WO2023233290A1 (en) | 2022-05-31 | 2023-12-07 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Rnai agents targeting pd-l1 |
WO2023232976A1 (en) | 2022-06-03 | 2023-12-07 | Ags Therapeutics Sas | Extracellular vesicles from genetically-modified microalgae containing endogenously-loaded cargo, their preparation, and uses |
WO2024033901A1 (en) | 2022-08-12 | 2024-02-15 | LifeEDIT Therapeutics, Inc. | Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use |
WO2024049979A2 (en) | 2022-08-31 | 2024-03-07 | Senda Biosciences, Inc. | Novel ionizable lipids and lipid nanoparticles and methods of using the same |
WO2024063788A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | BioNTech SE | Compositions for delivery of malaria antigens and related methods |
WO2024064934A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | BioNTech SE | Compositions for delivery of plasmodium csp antigens and related methods |
WO2024063789A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | BioNTech SE | Compositions for delivery of malaria antigens and related methods |
WO2024064931A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | BioNTech SE | Compositions for delivery of liver stage antigens and related methods |
WO2024074211A1 (en) | 2022-10-06 | 2024-04-11 | BioNTech SE | Rna compositions targeting claudin-18.2 |
WO2024074634A1 (en) | 2022-10-06 | 2024-04-11 | BioNTech SE | Rna compositions targeting claudin-18.2 |
WO2024088808A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-02 | Ags Therapeutics Sas | Extracellular vesicles from microalgae, their biodistribution upon intranasal administration, and uses thereof |
Family Cites Families (98)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4394448A (en) * | 1978-02-24 | 1983-07-19 | Szoka Jr Francis C | Method of inserting DNA into living cells |
ATE8584T1 (de) * | 1980-01-16 | 1984-08-15 | Hans Georg Prof. Dr. Weder | Verfahren und dialysiereinrichtung zur herstellung von bilayer-vesikeln und verwendung der bilayer-vesikel. |
US4598051A (en) * | 1980-03-12 | 1986-07-01 | The Regents Of The University Of California | Liposome conjugates and diagnostic methods therewith |
US4436052A (en) * | 1980-09-15 | 1984-03-13 | Schall William R | Globe-shaped bells with single-piece shells |
US4515736A (en) * | 1983-05-12 | 1985-05-07 | The Regents Of The University Of California | Method for encapsulating materials into liposomes |
US5545412A (en) * | 1985-01-07 | 1996-08-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-[1, (1-1)-dialkyloxy]-and N-[1, (1-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-n,n,n-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4897355A (en) * | 1985-01-07 | 1990-01-30 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N[ω,(ω-1)-dialkyloxy]- and N-[ω,(ω-1)-dialkenyloxy]-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US5208036A (en) * | 1985-01-07 | 1993-05-04 | Syntex (U.S.A.) Inc. | N-(ω, (ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω, (ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4737323A (en) | 1986-02-13 | 1988-04-12 | Liposome Technology, Inc. | Liposome extrusion method |
US5320906A (en) * | 1986-12-15 | 1994-06-14 | Vestar, Inc. | Delivery vehicles with amphiphile-associated active ingredient |
US5703055A (en) * | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
FR2645866B1 (fr) * | 1989-04-17 | 1991-07-05 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi |
US5725871A (en) | 1989-08-18 | 1998-03-10 | Danbiosyst Uk Limited | Drug delivery compositions comprising lysophosphoglycerolipid |
JPH03126211A (ja) | 1989-10-12 | 1991-05-29 | Nippon Chemicon Corp | 電解コンデンサ用電解液 |
US5225212A (en) * | 1989-10-20 | 1993-07-06 | Liposome Technology, Inc. | Microreservoir liposome composition and method |
US5013556A (en) * | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5707644A (en) | 1989-11-04 | 1998-01-13 | Danbiosyst Uk Limited | Small particle compositions for intranasal drug delivery |
US5279833A (en) | 1990-04-04 | 1994-01-18 | Yale University | Liposomal transfection of nucleic acids into animal cells |
US5264618A (en) * | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
US5399363A (en) | 1991-01-25 | 1995-03-21 | Eastman Kodak Company | Surface modified anticancer nanoparticles |
JP2774417B2 (ja) | 1991-08-07 | 1998-07-09 | 株式会社ディ・ディ・エス研究所 | ペプチド骨格を有する分枝鎖型糖複合体及び微粒子キャリヤー |
US5283185A (en) * | 1991-08-28 | 1994-02-01 | University Of Tennessee Research Corporation | Method for delivering nucleic acids into cells |
US5756353A (en) | 1991-12-17 | 1998-05-26 | The Regents Of The University Of California | Expression of cloned genes in the lung by aerosol-and liposome-based delivery |
EP0625207A1 (en) | 1991-12-17 | 1994-11-23 | The Regents Of The University Of California | Gene therapy for cystic fibrosis transmembrane conductance regulator activity (cftr) |
US5858784A (en) * | 1991-12-17 | 1999-01-12 | The Regents Of The University Of California | Expression of cloned genes in the lung by aerosol- and liposome-based delivery |
CA2130264A1 (en) * | 1992-02-19 | 1993-09-02 | Harris Busch | Oligonucleotide modulation of cell growth |
WO1993023011A1 (en) | 1992-05-18 | 1993-11-25 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Transmucosal drug delivery device |
JP3285355B2 (ja) | 1992-06-04 | 2002-05-27 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | invivo遺伝子治療のための方法及び組成物 |
US5792451A (en) | 1994-03-02 | 1998-08-11 | Emisphere Technologies, Inc. | Oral drug delivery compositions and methods |
JP2854203B2 (ja) | 1992-09-03 | 1999-02-03 | 株式会社ディ・ディ・エス研究所 | リポソームの製造法 |
JP3626187B2 (ja) | 1993-06-07 | 2005-03-02 | バイカル インコーポレイテッド | 遺伝子治療に適するプラスミド |
WO1995002698A1 (en) | 1993-07-12 | 1995-01-26 | Life Technologies, Inc. | Composition and methods for transfecting eukaryotic cells |
US5543158A (en) | 1993-07-23 | 1996-08-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable injectable nanoparticles |
US5426039A (en) | 1993-09-08 | 1995-06-20 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Direct molecular cloning of primer extended DNA containing an alkane diol |
FR2714830B1 (fr) | 1994-01-10 | 1996-03-22 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations. |
AU696881B2 (en) | 1994-06-22 | 1998-09-24 | Megabios Corporation | Cationic amphiphiles |
FR2722506B1 (fr) | 1994-07-13 | 1996-08-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations |
US5885613A (en) | 1994-09-30 | 1999-03-23 | The University Of British Columbia | Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes |
US5753613A (en) | 1994-09-30 | 1998-05-19 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells |
US5820873A (en) * | 1994-09-30 | 1998-10-13 | The University Of British Columbia | Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof |
CA2200952C (en) | 1994-09-30 | 2006-04-11 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Novel compositions comprising quaternary ammonium compounds and neutral lipids for the introduction of polyanionic materials into cells |
US5580579A (en) | 1995-02-15 | 1996-12-03 | Nano Systems L.L.C. | Site-specific adhesion within the GI tract using nanoparticles stabilized by high molecular weight, linear poly (ethylene oxide) polymers |
US5962428A (en) | 1995-03-30 | 1999-10-05 | Apollon, Inc. | Compositions and methods for delivery of genetic material |
IE80468B1 (en) | 1995-04-04 | 1998-07-29 | Elan Corp Plc | Controlled release biodegradable nanoparticles containing insulin |
JP3488340B2 (ja) * | 1995-05-15 | 2004-01-19 | 株式会社リコー | 可逆性感熱発色組成物およびそれを用いた可逆性記録媒体 |
US5981501A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers |
US7422902B1 (en) * | 1995-06-07 | 2008-09-09 | The University Of British Columbia | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
US5705385A (en) * | 1995-06-07 | 1998-01-06 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
US5811406A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | Regents Of The University Of California | Dry powder formulations of polynucleotide complexes |
IL122290A0 (en) | 1995-06-07 | 1998-04-05 | Inex Pharmaceuticals Corp | Lipid-nucleic acid complex its preparation and use |
US5817856A (en) * | 1995-12-11 | 1998-10-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Radiation-protective phospholipid and method |
US6284267B1 (en) * | 1996-08-14 | 2001-09-04 | Nutrimed Biotech | Amphiphilic materials and liposome formulations thereof |
US6210707B1 (en) | 1996-11-12 | 2001-04-03 | The Regents Of The University Of California | Methods of forming protein-linked lipidic microparticles, and compositions thereof |
WO1998051278A2 (en) * | 1997-05-14 | 1998-11-19 | Inex Pharmaceuticals Corporation | High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles |
WO1998051285A2 (en) | 1997-05-15 | 1998-11-19 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile formulations |
US20030073640A1 (en) | 1997-07-23 | 2003-04-17 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Novel compositions for the delivery of negatively charged molecules |
ATE355826T1 (de) | 1997-10-10 | 2007-03-15 | Inex Pharmaceuticals Corp | Verfahren zur verkapselung von nukleinsäuren in lipiddoppelschichten |
US6320017B1 (en) | 1997-12-23 | 2001-11-20 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Polyamide oligomers |
US6410328B1 (en) | 1998-02-03 | 2002-06-25 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Sensitizing cells to compounds using lipid-mediated gene and compound delivery |
AUPP249298A0 (en) | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
CA2271582A1 (en) | 1998-05-14 | 1999-11-14 | Sean C. Semple | Method for administration of therapeutic agents, including antisense, with repeat dosing |
US6429200B1 (en) | 1998-07-17 | 2002-08-06 | Mirus Corporation | Reverse micelles for delivery of nucleic acids |
CA2335393C (en) | 1998-07-20 | 2008-09-23 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal encapsulated nucleic acid-complexes |
US6900049B2 (en) * | 1998-09-10 | 2005-05-31 | Cell Genesys, Inc. | Adenovirus vectors containing cell status-specific response elements and methods of use thereof |
US6649780B1 (en) * | 1998-12-22 | 2003-11-18 | Valentis, Inc. | Cationic lipids |
AU783647B2 (en) | 1999-04-20 | 2005-11-17 | University Of British Columbia, The | Cationic peg-lipids and methods of use |
US6696424B1 (en) * | 1999-05-28 | 2004-02-24 | Vical Incorporated | Cytofectin dimers and methods of use thereof |
US20010048940A1 (en) * | 1999-06-18 | 2001-12-06 | Jennifer D. Tousignant | Cationic amphiphile micellar complexes |
RU2250911C2 (ru) | 1999-07-14 | 2005-04-27 | Элзэ Копэрейшн | Липосомальная композиция, нейтральный липополимер и способ увеличения времени циркуляции липосомы |
CA2378438C (en) * | 1999-07-15 | 2010-05-04 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Methods for preparation of lipid-encapsulated therapeutic agents |
US6458382B1 (en) | 1999-11-12 | 2002-10-01 | Mirus Corporation | Nucleic acid transfer complexes |
WO2001051003A2 (en) | 2000-01-10 | 2001-07-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of disease |
US20070026394A1 (en) * | 2000-02-11 | 2007-02-01 | Lawrence Blatt | Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies |
AU2001249622B2 (en) * | 2000-03-30 | 2007-06-07 | Massachusetts Institute Of Technology | RNA sequence-specific mediators of RNA interference |
US7189705B2 (en) | 2000-04-20 | 2007-03-13 | The University Of British Columbia | Methods of enhancing SPLP-mediated transfection using endosomal membrane destabilizers |
US20030082103A1 (en) | 2000-10-11 | 2003-05-01 | Targesome, Inc. | Targeted therapeutic lipid constructs having cell surface targets |
DE60126801T2 (de) * | 2000-10-25 | 2007-12-06 | The University Of British Columbia, Vancouver | Lipidformulierungen zur zielgerichteten abgabe |
US20020081736A1 (en) | 2000-11-03 | 2002-06-27 | Conroy Susan E. | Nucleic acid delivery |
KR100909681B1 (ko) * | 2000-12-01 | 2009-07-29 | 막스-플랑크-게젤샤프트 츄어 푀르더룽 데어 비쎈샤프텐 에.파우. | Rna 간섭을 매개하는 작은 rna 분자 |
US20030026831A1 (en) | 2001-04-20 | 2003-02-06 | Aparna Lakkaraju | Anionic liposomes for delivery of bioactive agents |
US20030077829A1 (en) | 2001-04-30 | 2003-04-24 | Protiva Biotherapeutics Inc.. | Lipid-based formulations |
US20040142892A1 (en) * | 2001-04-30 | 2004-07-22 | The University Of British Columbia | Autogene nucleic acids encoding a secretable RNA polymerase |
US20040063654A1 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-01 | Davis Mark E. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
WO2003097805A2 (en) | 2002-05-15 | 2003-11-27 | California Pacific Medical Center | Delivery of nucleic acid-like compounds |
DE60334618D1 (de) * | 2002-06-28 | 2010-12-02 | Protiva Biotherapeutics Inc | Verfahren und vorrichtung zur herstellung von liposomen |
EP2251434B1 (en) * | 2003-01-16 | 2014-07-30 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Compositions and methods for siRNA inhibition of ICAM-1 |
US7803781B2 (en) * | 2003-02-28 | 2010-09-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression |
BRPI0411505A (pt) | 2003-06-18 | 2006-07-25 | Yissum Res Dev Co | uso de um composto, método para modular a resposta imune de um indivìduo, composição farmacêutica, vacina, complexo, e, kit para a captura de uma molécula biologicamente ativa |
EP1648519B1 (en) * | 2003-07-16 | 2014-10-08 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
US7803397B2 (en) * | 2003-09-15 | 2010-09-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof |
WO2005120152A2 (en) | 2004-06-07 | 2005-12-22 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods of use |
ATE536418T1 (de) * | 2004-06-07 | 2011-12-15 | Protiva Biotherapeutics Inc | Lipidverkapselte interferenz-rna |
WO2006002538A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-01-12 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Immunostimulatory sirna molecules and uses therefor |
JP5639338B2 (ja) * | 2005-07-27 | 2014-12-10 | プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド | リポソームの製造システムおよび製造方法 |
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