ES2531885T3

ES2531885T3 - Compuestos heteroarilo como ligandos del receptor de 5-HT4

Info

Publication number: ES2531885T3
Application number: ES12716662.7T
Authority: ES
Inventors: Ramakrishna Nirogi; Abdul Rasheed Mohammed; Suresh YARLAGADDA; Srinivasa Rao Ravella; Anil Karbhari Shinde; Ramasastri Kambhampati; Praveen Kumar ROAYAPALLEY; Pradeep Jayarajan; Gopinadh Bhyrapuneni; Sriramachandra Murthy Patnala; Jyothsna Ravula; Venkateswarlu Jasti
Original assignee: Suven Life Sciences Ltd
Current assignee: Suven Life Sciences Ltd
Priority date: 2011-09-19
Filing date: 2012-01-05
Publication date: 2015-03-20
Anticipated expiration: 2032-01-05
Also published as: KR101551481B1; PL2758394T3; AP3307A; JP5714729B2; PT2758394E; BR112014001083B8; SI2758394T1; BR112014001083B1; US20150283125A1; WO2013042135A8; EA201391056A1; AU2012311057B2; US9079894B2; EA022374B1; CN103380131B; EP2758394A1; IL231305A0; SMT201500087B; CA2823548C; SG2014003560A

Abstract

Un compuesto de la fórmula general (I):**Fórmula** en donde,**Fórmula** es**Fórmula** es**Fórmula** es punto de unión; R1 es alquilo, R3-O-R3 o**Fórmula** R2 es cicloalquilo o heterociclilo, y opcionalmente sustituido con hidrógeno, alquilo o -CO-OR3; R3 es alquilo; "Y" es C u O; "m" es un entero que varía de 0 a 1; con la condición de cuando m es 0 entonces R1 es cicloalquilo o heterociclilo; "n" es un entero que varía de 0 a 2; "p" es un entero que varía de 0 a 1; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo..

Description

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4

imagen5

imagen6

imagen7

imagen8

imagen9

imagen10

5

10

15

20

25

30

35

40

E12716662

02-03-2015

Etapa (iii): Preparación de hidrazida del ácido 1-isopropil-1H-indazol-3-il carboxílico A una solución agitada de 1-isopropil-1H-indazol-3-il carboxilato de metilo (40.0 gramos, 183.5 mmol, obtenida en la etapa anterior) en etanol a temperatura ambiente, se agregó hidrato de hidrazina (130 mL, 2.56 mmol). La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida y la masa cruda se diluyó con

diclorometano, se lavó con agua, salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se eliminó bajo presión reducida para obtener el compuesto del título (37.52 gramos). Rendimiento: 93 %. 1H -RMN (CDCl3): δ 8.35 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.16 (bs, 1H), 7.47 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 7.28 (t, J = 7.4

Hz, 1H), 4.87 (m, 1H), 4.09 (s, 3H), 1.60 (d, J = 6.6 Hz, 6H); Masa (m/z): 219 (M+H)+. Preparación 3: Preparación de hidrazida del ácido 4-Amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxílico Etapa (i): Preparación de 4-amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxilato de metilo A una solución agitada del ácido 4-amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxílico (Chem. Pharm. Bull. 1998, 46(1), 42

52; 3.93 g, 18.4 mmol) en metanol (36.8 mL), enfriada a 0ºC, se agregó cloruro de tionilo (6.0 mL). La mezcla de reacción se calentó gradualmente hasta temperatura ambiente y se calentó hasta reflujo durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida; la masa cruda se diluyó con solución acuosa de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se eliminó bajo vacío para obtener 4amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxilato de metilo (3.89 gramos).

Rendimiento: 92.9 % 1H -RMN (DMSO-d6): δ 7.43 (s, 1H), 6.06 (bs, 2H), 4.60 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 2.97 (t, J = 8.8 Hz, 2H); Masa (m/z): 228.0, 230.1 (M+H)+. Etapa (ii): Preparación de hidrazida del ácido 4-amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxílico A una solución agitada de 4-amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxilato de metilo (3.88 gramos, 17.07 mmol,

obtenida en la etapa anterior) en etanol (34.1 mL), se agregó hidrato de hidrazina (11.5 mL, 236.2). La temperatura de reacción se incrementó gradualmente hasta reflujo y la mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 5 horas. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida, la masa cruda se trituró con abundancia de éter y pentano para obtener hidrazida del ácido 4-Amino-5-cloro-2,3-dihidro benzofuran-7-carboxílico (3.76 gramos).

Rendimiento: 96 %.

1H -RMN (DMSO-d6): δ 8.35 (bs, 1H), 7.44 (s, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.68 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 4.43 (bs, 2H), 3.0 (t, J = 8.7 Hz, 2H); Masa (m/z): 228.0, 230.1 (M+H)+. Preparación 4: Preparación de hidrazida del ácido 8-Amino-7-cloro-2,3-dihidro benzo[1,4]dioxano-5-carboxílico Etapa (i): Preparación de 8-amino-7-cloro-2,3-dihidro benzo[1,4]dioxano-5-carboxilato de metilo A una solución agitada del ácido 8-Amino-7-cloro-2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxina-5-carboxílico (Journal of Medicinal

Chemistry, 1993, 36, 4121; 2.2 gramos, 9.58 mmol) en metanol (38.3 mL), enfriada hasta 0ºC se agregó cloruro de tionilo

(2.78 mL). La mezcla de reacción se calentó gradualmente hasta temperatura ambiente y después se calentó hasta reflujo durante 3 horas. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida; la masa cruda se diluyó con solución de bicarbonato sódico acuoso y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se eliminó bajo vacío para obtener el compuesto del título (2.12 gramos).

Rendimiento: 90.9%

1H -RMN (CDCl3): δ 7.52 (s, 1H), 4.47 (bs, 2H), 4.45 -4.30 (m, 4H), 3.84 (s, 3H).

imagen11

imagen12

imagen13

imagen14

imagen15

imagen16

imagen17

imagen18

imagen19

E12716662

02-03-2015

diclorometano. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se eliminó bajo presión reducida. La masa residual se purificó por columna en sílica gel para obtener 5-cloro-7-{5-[1-(tetrahidro piran-4-il) piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidro benzofuran-4-il amina (23.5 mg).

Rendimiento: 13.1 %.

5 1H -RMN (CDCl3): δ 7.64 (s, 1H), 4.84 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 4.31 (bs, 2H), 4.10 -4.0 (m, 2H), 3.39 (t, J = 11.4 Hz, 2H), 3.10 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 3.10 -2.95 (m, 3H), 2.62 -2.50 (m, 1H), 2.45 -2.25 (m, 2H), 2.20-1.95 (m, 4H), 1.88 -1.75 (m, 2H), 1.75

1.60 (m, 2H);

Masa (m/z): 405.2, 407.4 (M+H)+.

Etapa (ii): Preparación de sal de oxalato de 5-cloro-7-{5-[1-(tetrahidro piran-4-il) piperidin-4-il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,310 dihidro benzofuran-4-il amina

A una solución agitada de 5-cloro-7-{5-[1-(tetrahidro piran-4-il) piperidin-4-il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidro benzofuran-4ilamina (20.4 mg, 0.05 mmol) en etanol (2 mL), se agregó ácido oxálico (6.0 mg, 0.05 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora la reacción se diluyó adicionalmente con 2-propanol y se sometió a reflujo durante 2 horas. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el producto crudo obtenido se trituró con éter, se secó bajo vacío

15 para obtener sal de oxalato de 5-cloro-7-{5-[1-(tetrahidro piran-4-il) piperidin-4-il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidro benzofuran-4-ilamina (22.5 mg).

Rendimiento: 90.3 %

1

H -RMN (DMSO-d6): δ 7.49 (s, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.68 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 4.0 -3.90 (m, 2H), 3.40 -3.20 (m, 5H), 3.0 (t, J =

8.7 Hz, 2H), 2.35 -2.20 (m, 3H), 2.10 -1.90 (m, 5H), 1.70 -1.57 (m, 3H);

20 Masa (m/z): 405.1, 407.2 (M+H)+.

Ejemplos 8 -49:

Los compuestos de los Ejemplos 8-49 se prepararon siguiendo los procedimientos como se describe en los Ejemplos 1 a 7, con algunas variaciones no críticas

8.: 6-Cloro-8-{5-[1-(2-metoxi-etil)-piperidin-4il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 9.92 (bs, 1H), 7.49 (s, 1H), 4.13 (bs, 2H), 3.70 (t ,J-5.0Hz, 2H), 3.54 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.10 2.95 (m, 3H), 2.60 (t, J=5.5 Hz, 2H), 2.54 (t, J=6.6Hz, 2H), 2.30 -2.13 (m, 3H), 2.15 -1.85(m, 5H); Masa (m/z): 393.2, 395.3 (M+H)+ .

9.: 6-Cloro-8-{5-[1-(3-metil-butil)-piperidin-4il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-cromano-5-ilamina 1H-RMN (CDCl3): G 7.67(s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.28 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.05 -2.90 (m, 3H), 2.54 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.40 -2.32 (m, 2H), 2.18 -2.06 (m, 6H), 2.06 -1.92 (m, 2H), 1.65 -1.55 (m, 1H), 1.48 -1.36(m, 2H), 0.92 (d, J= 6.5 Hz,6H); Masa (m/z): 405.4, 407.4 (M+H)+ .

10.: 6-Cloro-8-[5-(1-ciclobutilmetil-piperidin-4 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.48 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.14 (t, J=

il)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina: 4.8Hz, 2H), 4.12 (s,2H), 3.12 -2.92 (m, 5H), 2.70 -2.50 (m, 4H), 2.10 -2.0 (m, H), 2.0 -1.93 (m, 2H), 1.90 -1.75 (m, 4H), 1.75-1.62 (m,2H) Masa (m/z): 443.3 , 405.3 (M+H)+ .

11.: 6-Cloro-8-[5-(1-ciclopropilmetil-piperidin4-il)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.13 (t, J=4.8 Hz, 2H), 4.10 (s, 2H), 3.30 -3.15 (m,2H), 3.15 -3.05 (m, 3H), 2.70 -2.55 (m, 4H), 2.18 -2.07 (m, 2H), 2.0 -1.80 (m, 4H), 1.0 -.090 (m,1H), 0.60 -0.50 (m, 2H), 0.25 -0.16 (m, 2H); Masa (m/z): 389.3, 391.4 (M+H)+ .

E12716662

02-03-2015 E12716662

12.: 6-Cloro-8-[5-(1-isopropil-piperidin-4-il) 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49 (s, H), 5.80 (s, 2H), 4.22 (t, J= 4.8

[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina: Hz, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.25 -3.05 (m, 6H), 2.88 -2.70 (m, 2H), 2.25 -2.10 (m, 2H), 2.0 -1.80 (m, 4H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, H); Masa (m/z): 377.3 ,379.5 (M+H)+ .

13.: 6-Cloro-8-{5-[1-(3-metoxi-propil)-piperidin4-il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-cromano-5ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.48 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.13 (bs, 4H), 3.34 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.30 -3.22 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.20 -3.0 (m, 4H), 2.70 -2.60 (m, 2H), 2.60 -2.50 (m, 2H), 2.15 -2.03(m, 2H), 2.0 -1.90 (m, 2H), 1.90 -1.70 (m, 4H); Masa (m/z): 407.3, 409.2 (M+H)+ .

14.: 6-Cloro-8-[5-(1-ciclobutil-piperidin-4-il) 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.48 (s, 1H), 4.14 (s, 2H), 4.13 (t, J=

[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina: 4.8 Hz, 2H), 3.10 -2.90 (m, 4H), 2.47 (t, J= 8.0 Hz, 2H), 2.30 2.15 (m, 2H), 2.12 -2.0 (m, 4H), 2.0 -1.85 (m, 4H), 1.85-1.72 (m, 2H), 1.70 -1.58 (m, 2H); Masa (m/z): 389.3, 391.4 (M+H)+ .

15.: 6-Cloro-8-[5-(1-ciclobutilmetil-piperidin-4 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.29 (s, 1H), 5.65 (s,2H), 4.33(s,4H),

il)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2,3-dihidro: 4.11(s, 2H), 3.15 -2.95(m,3H), 2.70 -2.55(m,3H), 2.50

benzo[1,4]dioxin-5-ilamina: 2.30(m,2H), 2.10-2.0(m, 2H); Masa (m/z): 405.3, 407.4 (M+H)+ .

16.: 6-Cloro-8-[5-(1-ciclobutil-piperidin-4-il) 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.29 (s, 1H), 5.65(s,2H), 3.10 -3.0(m,

[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2,3-dihidro: 1H), 3.0 -2.85 (m, 3H), 2.30 -2.12 (m, 2H), 2.10 -1.95 (m, 4H),

benzo[1,4]dioxin-5-ilamina: 1.95 -1.70 (m, 4H), 1.70 -1.53 (m, 2H); Masa (m/z): 391.4, 393.3 (M+H)+ .

17.: Sal de tartrato de 6-Cloro-8-[5-(1ciclopentil-piperidin-4-il)-[1,3,4]oxadiazol2-il]-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.13 (t, J= 4.6 Hz, 2H), 4.0 (s, 2H), 3.25 -3.08 (m, 3H), 3.05 -2.90 (m, 1H), 2.68 -2.53 (m, 2H), 2.47 (t, J=7.8 Hz, 2H), 2.18 -2.0 (m, 2H), 2.0 -1.80 (m, 6H), 1.70 -1.60 (m, 2H), 1.58 -1.40 (m, 4H); Masa (m/z): 403.2, 405.7 (M+H)+ .

18.: 6-Cloro-8-[5-(2-piperidin-1-il-etil)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina 1H-RMN (CDCl3): G 7.69 (s, 1H), 4.35 (bs, 2H), 4.28 (t , J= 4.5 Hz, 2H), 3.20 -3.05 (m, 2H), 2.90 -2.80 (m, 2H), 2.80 -2.70 (m, 2H), 2.65 -2.50 (m, 4H), 2.20 -2.10 (m, 2H), 2.10 -1.95 (m, 1H), 1.60 -1.48 (m, 1H), 1.50 -1.40 (m, 2H); Masa (m/z): 363.2, 365.2 (M+H)+ .

19.: Etil éster del ácido 4-[5-(5-Amino-6-cloro 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.48 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.21 (s, 2H),

cromano-8-il)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]: 4.13 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 4.10 -3.95 (m, 4H), 3.20 -3.05 (m, 4H),

[1,4’]bipiperidinil-1’-carboxílico: 2.90 -2.72 (m, 4H), 2.70 -2.60 (m, 2H), 2.20 -2.08 (m, 2H), 2.0-1.90 (m, 2H), 1.90 -1.75 (m, 4H), 1.50 -1.35 (m, 2H), 1.16 (t, J= 7.0 Hz, 3H); Masa (m/z): 490.3, 492.3 (M+H)+ .

20.: Sal de tartrato de 6-Cloro-8-[5-(3piperidin-1-il-propil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.48 (s, 1H), 5.79 (s, 2H), 4.13 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 4.07 (s, 2H), 2.90 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.85-2.70 (m, 6H), 2.47 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.08 -1.90 (m, 4H), 1.63 -1.53 (m,4H), 1.50 -1.38 (m, 2H); Masa (m/z): 349.2, 351.4 (M+H)+ .

21.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-[5-(1ciclopentil-piperidin-4-ilmetil)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.47 (s, 1H), 5.80(s, 2H), 4.13(t, J=4.8 Hz, 2H), 3.50 -3.35 (m, 3H), 3.0 -2.82 (m, 4H), 2.47 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 2.10 -1.88 (m, 7H), 1.70-1.40 (m, 8H); Masa (m/z): 417.3, 419.4 (M+H)+ .

02-03-2015 E12716662

22.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-[5-(3isopropil-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-6-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.47 (s,1H), 5.79 (s, 2H), 4.12(t, J= 4.6 Hz, 2H), 3.75 -3.55 (m, 2H), 3.40 -3.20 (m, 3H), 2.58 (s, 1H), 2.46(t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.42 (s, 2H), 2.0 -1.90(m, 2H), 1.21 (d, J= 6.0 Hz, 6H); Masa (m/z): 375.2, 377.2 (M+H)+ .

23.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-[5-(3ciclobutilmetil-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-6-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.46 (s, 1H); 5.79(s, 2H), 4.12(t, J= 4.8 Hz), 3.60-3.45 :(m, 2H), 3.20-1.90 (m, 4H), 2.55 (s,1H), 2.46 (t, J= 6.9 Hz, 2H), 2.32 (s, 2H), 2.10 -2.0(m, 2H), 2.0 -1.90 (m, 3H), 1.90 -1.80(m, 1H),1.80-1.67(m, 3H); Masa (m/z): 400.9, 403.1 (M+H)+ .

24.: 6-Cloro-8-[5-(3-ciclopropilmetil-3-aza 1H-RMN (CDCl3): G 7.65 (s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.27 (t, J= 4.9

biciclo[3.1.0]hex-6-il)-[1,3,4]oxadiazol-2-: Hz, 2H), 3.28 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 2.70 -2.63 (m, 1H), 2.53(t, J=

il]-cromano-5-ilamina: 6.5Hz ,2H),2.50-2.42(m, 2H), 2.38 -2.30(m, 2H), 2.17 -2.07 (m, 4H), 0.90 -0.80(m, 1H), 0.51 -0.42(m, 2H), 0.15 -0.06(m, 2H); Masa (m/z): 387.1, 389.1 (M+H)+ .

25.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-{5-[1(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49(s, 1H), 5.81 (s, 2H), 4.13 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 4.0 -3.90(m, 2H), 3.60 -3.40 (m,4H), 3.30(t, J= 11.2 Hz, 2H), 3.20 -3.10 (m, 2H), 2.49(t, J= 6.7 Hz, 2H), 2.30 2.20(m, 2H), 2.10 -1.88 (m,6H), 1.70-1.58(m,2H); Masa (m/z): 419.2, 421.2 (M+H)+

26.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-{5-[1(tetrahidro-piran-4-ilmetil)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-cromano-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49 (s, 1H), 5.81 (s, 2H), 4.10 -3.9(m, 2H), 3.90 -3.80 (m, 2H), 3.27 (t, J= 11.1 Hz, 2H), 3.15 -1.90 (m, 5H), 2.49 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.30 -2.20 (m,2H), 2.181.90(m, 4H), 1.70-1.60(m, 2H), 1.30 -1.10 (m, 2H) ; Masa (m/z):433.3, 435.2 (M+H)+ .

27.: Sal de oxalato de 5-Cloro-7-[5-(1ciclopropil-piperidin-4-il)-[1,3,4]oxadiazol2-il]-2,3-dihidro-benzofuran-4-ilamina 1H-RMN (DMSO-6): G 7.49 (s, 1H), 6.02 (s, 2H), 4.68 (t, J=8.8 Hz, 2H), 3.30 -3.20 (m, 2H), 3.20 -3.10 (m, 2H), 3.05 (t, J=8.8 Hz, 2H), 2.90 -2.75 (m, 2H), 2.30 -2.20 (m, 1H), 2.18-2.07 (m, 2H), 1.90 -1.77 (m, 2H), 0.70 -0.58 (m, 4H); Masa (m/z): 361.1, 363.1 (M+H)+ .

28.: Sal de oxalato de 5-Cloro-7-[5-(1ciclobutil-piperidin-4-il)-[1,3,4]oxadiazol-2il]-2,3-dihidro-benzofuran-4-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49 (s, 1H), 6.0 (s, 2H), 4.68 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 3.60 -3.50 (m, 1H), 3.40 -3.15 (m, 3H), 3.05 (t, J=8.8 Hz, 2H), 2.90 -2.70 (m, 2H), 2.30 -2.10 (m,6H), 2.05-1.90 (m, 2H), 1.80 -1.60(m, 2H); Masa (m/z): 375.3, 377.0 (M+H)+ .

29.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-[5-(1ciclopropil-piperidin-4-il)-[1,3,4]oxadiazol2-il]-2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxin-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.29 (s, 1H), 5.65 (s, 2H), 4.33 (s, 4H), 3.35 -3.25 (m, 2H), 3.25 -3.13 (m, 1H), 2.93 -2.82 (m, 2H), 2.37 -2.28 (m, 1H), 2.20 -2.10 (m, 2H), 1.90 -1.80 (m, 2H), 0.70 -0.60 (m, 4H); Masa (m/z): 377.1, 379.0 (M+H)+ .

30.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-{5-[1(tetrahidro-piran-4-il)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidrobenzo[1,4]dioxin-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.30 (s, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.33 (s, 4H), 4.0 -3.90 (m, 2H), 3.40 -3.20(m, 6H), 3.10 -3.0(m, 2H), 2.30 -2.20 (m, 2H), 2.10 -1.92 (m, 2H), 1.92 -1.85 (m,2H), 1.70-1.55 (m, 2H) ; Masa (m/z): 421.1, 423.2 (M+H)+ .

02-03-2015 E12716662

31.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-{5-[1-(3metoxipropil)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidrobenzo[1,4]dioxin-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.30 (s, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.33 (s, 4H), 3.50 -3.40 (m, 2H), 3.37 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 3.38 -3.28 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.10 -2.95 (m, 4H), 2.30 -2.20 (m, 2H), 2.10 -1.92 (m, 2H), 1.90-1.82 (m, 2H) ; Masa (m/z): 409.1 , 411.0 (M+H)+ .

32.: Sal de oxalato de 6-Cloro-8-{5-[1(tetrahidro-piran-4-ilmetil)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidrobenzo[1,4]dioxin-5-ilamina 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.29 (s, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.33 (s, 4H), 3.90 -3.80 (m, 2H), 3.50 -3.30 (m, 2H), 3.29 (t, J= 11.4 Hz, 2H), 3.08 -2.90 (m, 1H), 2.90 -2.80 (m, 2H), 2.28 -2.16(m, 2H),2.12 -1.95 (m, 3H), 1.70 -1.60 (m, 2H), 1.28-1.10 (m,2H); Masa (m/z):435.2, 437.3 (M+H)+ .

33.: Oxalato de 5-Cloro-7-{5-[1(tetrahidropiran-4-ilmetil)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-2,3-dihidrobenzofuran-4-ilamina 1H-RMN (CDCl3): G 7.49 (s, 1H), 6.03(s, 2H), 4.68(t, J=8.8 Hz, 2H), 3.90 -3.80 (m, 2H), 3.40 -3.20 (m, 5H), 3.05 (t, J= 8.8 Hz, 2H), 3.0 -2.90 (m, 2H), 2.90 -2.80(m, 2H), 2.25-2.15 (m, 2H), 2.10 -1.92 (m, 3H), 1.70 -1.60 (m, 2H), 1.30 -1.13 (m, 2H); Masa (m/z): 419.1, 421.2 (M+H)+ .

34.: Oxalato de etil éster del ácido 4-[5-(4Amino-5-cloro-2,3-dihidrobenzofuran-7il)-[1,3,4]oxadiazol-2il]-[1,4’]bipiperidinil1’-carboxílico 1H-RMN (DMSO-d6): G 7.49 (s, 1H), 6.03 (s,2H), 4.68(t, J= 8.7 Hz, 2H), 4.15 -4.00 (m, 4H), 3.40 -3.15(m, 4H), 3.05(t, J= 8.7 Hz, 2H), 3.05 -2.92 (m, 2H), 2.90 -2.70(m, 2H), 2.30-2.20 (m,2H), 2.10 -1.90(m, 4H), 1.60 -1.42(m,2H), 1.17(t, J= 7.0 Hz, 3H); Masa (m/z): 476.1, 478.2 (M+H)+ .

35.: 3-[5-(1-Ciclobutilmetil-piperidin-4-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1-isopropil-1Hindazol 1H-RMN (DMSO-d6): G 8.17 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.90(J=8.56 Hz, 1H), 7.54(t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.38(t, J= 7.6 Hz, 1H), 5.2 -5.13(m, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.3 -3.2(m, 2H), 3.12 -3.02(m, 2H), 2.7 -2.62(m, 2H), 2.6 -2.55(m, 1H), 2.48 -2.43(m, 1H), 2.2 -2.1 (m, 2H), 2.1 -2.0 (m, 2H), 1.98-1.87(m, 2H), 1.86 -1.72 (m, 1H), 1.71 -1.63 (m, 2H), 1.54(d, J= 6.5 Hz, 6H); Masa (m/z): 380 (M+H)+ .

36.: 1-Isopropil-3-{5-[1-(2-metoxi-etil)piperidin-4-il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-1Hindazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.35(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.53 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.47 (t, J=6.9 Hz, 1H), 7.33(t, J=7.3 Hz, 1H), 5.0 -4.91(m,1H), 3.55(t, J=5.3 Hz, 2H), 3.38(s, 3H), 3.12 -3.1(m, 3H), 2.63(t, J=5.2Hz, 2H), 2.25 -2.12 (m,6H), 1.66 (d, J=6.6 Hz, 6H); Masa (m/z): 370 (M+H)+ .

37.: 3-[5-(1-Ciclobutil-piperidin-4-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1-isopropil-1Hindazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.33 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.52(d, J= 8.5 HZ, 1H), 7.47(t, J= 7.9 Hz, 1H), 7.33(t, J=7.5 Hz, 1H), 5.0 -4.93(m, 1H), 3.15-3.08(m, 1H), 2.98 -2.96(m,2H), 2.8 -2.7(m, 1H), 2.3 -2.2(m, 2H), 2.16 -2.05 (m, 5H), 2.0 -1.9 (m,3H), 1.75 -1.69 (m, 2H), 1.67(d, J= 6.7 Hz, 6H); Masa (m/z): 366.4 (M+H)+ .

02-03-2015 E12716662

38.: 1-Isopropil-3-[5-(1-isopropil-piperidin-4-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1H-indazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.35(d, J= 8.16 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 8.48 Hz, 1H), 7.47 9t, J= 7.97 Hz, 1H), 7.33(t, J= 7.48 Hz, 1H), 5.00 -4.93(m, 1H), 3.06 -2.96 (m, 3H), 2.8 -2.75(m, 2H), 2.35 -2.30(m, 2H), 2.25 -2.17 (m, 2H), 2.12 -2.03(m,2H), 1.65(d, J= 6.8 Hz, 6H), 1.87(d, J= 6.5 Hz, 6H); Masa (m/z): 354 (M+H)+ .

39.: 3-[5-(1-Ciclopropilmetil-piperidin-4il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1-isopropil-1Hindazol 1H-RMN (CDCl3): δ8.35 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.53(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.47(t, J= 6.7 Hz, 1H),7.33(t, J=7.46 Hz, 1H), 5.03 -4.95(m, 1H), 3.18 -3.15 (m, 2H), 3.15 -3.07(m, 1H), 2.31 (d, J=6.5 Hz, 2H), 2.22 -2.1(m, 6H), 1.67(d, J=6.68 Hz,6H), 0.98 -0.91(m,1H), 0.57 -0.52 (m, 2H), 0.14 -0.11(m, 2H); Masa (m/z): 366 (M+H)+ .

40.: 1-Isopropil-3-{5-[1-(3-metil-butil)-piperidin4-il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-1H-indazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.35(d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.53(d, J= 8.46 Hz, 1H), 7.47(t, J= 6.91 Hz, 1H), 7.33(t, J=7.6 Hz, 1H), 5.0 -4.93(m,1H), 3.10 -2.98(m, 3H), 1.67(d,J=6.68 Hz, 6H), 1.45 -1.40(m, 2H), 0.92(d, J=6.57 Hz, 6H); Masa (m/z): 382 (M+H)+ .

41.: 3-[5-(1-Ciclopropil-piperidin-4-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1-isopropil-1Hindazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.35(d, J= 8.17 Hz, 1H), 7.53(d, J=8.48 Hz, 1H), 7.47(t, J=6.96 Hz, 1H), 7.33(t, J= 7.47 Hz, 1H), 5.0 -4.93(m,1H), 3.16 -3.05(m, 3H), 2.37 (t, J= 11.3 Hz,2H), 2.19 -2.16(m,2H), 2.07-1.98(m, 2H), 1.67(d, J= 6.6 Hz,6H), 1.63 -1.57 (m, 1H), 051 -046 (m. 4H); Masa (m/z): 352 (M+H)+ .

42.: 3-[5-(1-Ciclopentil-piperidin-4-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1-isopropil-1Hindazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.35 (d, J= 9.39 Hz, 1H), 7.53(d, J= 8.49 Hz, 1H), 7.47(t, J=8.0 Hz, 1H), 7.33 (t, J=7.43 Hz), 5.0-4.93 (m, 1H), 3.15 -3.05(m, 3H), 2.6 -2.53(m, 1H), 2.22 -2.10(m, 6H), 1.98 -1.90(m, 2H), 1.74 -1.69(m, 2H), 1.67(d, J=6.69Hz, 6H), 1.60-1.55 (m,2H), 1.45 -1.38 (m, 2H); Masa (m/z): 380 (M+H)+ .

43.: Sal de oxalato de 1-Isopropil-3-{5-[3-(3metoxi-propil)-3aza-biciclo[3.1.0]hex-6il]-[1,3,4]oxadiazol-2-il}-1H-indazol 1H-RMN (DMSO-d6): G 8.15(d, J=8.2 Hz, 1H), 7.89(d, J=8.1 Hz, 1H), 7.53(t, J=7.5Hz, 1H), 7.36 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.205.10 (m, 1H), 3.60 -3.50 (m, 2H), 3.36 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.10 -3.0 (m, 2H), 3.0-2.86 (m, 2H), 2.68 (s, 1H), 2.43 (s, 2H), 1.85-1.72 (m, 2H), 1.53 (d, J = 6.3 Hz, 6H); Masa (m/z): 382.3 (M+H)+ .

44.: Sal de oxalato de 3-[5-(3-Ciclobutil-3-azabiciclo[3.1.0]hex-6-il)-[1,3,4]oxadiazol-2il]-1-isopropil-1H-indazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.34 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.0 4.90 (m, 1H), 3.11 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.10 -3.0 (m, 1H), 2.73 (s, 1H), 2.41 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 2.2 (s, 2H), 2.06 -1.95 (m, 2H), 1.95-1.80 (m, 2H), 1.75 -1.65 (m, 2H), 1.67 (d, J = 6.7 Hz, 6H); Masa (m/z): 364.2 (M+H)+ .

02-03-2015

45.: Sal de oxalato de 3-[5-(3-Ciclobutilmetil-3aza-biciclo[3.1.0]hex-6-il)-1,3,4]oxadiazol2-il]-1-isopropil-1H-indazol 1H-RMN (DMSO-d6): G 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.36 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.20 -5.10 (m, 1H), 3.55 -3.40 (m, 2H), 3.10 -3.0 (m, 2H), 2.95 -2.85 (m, 2H), 2.67 (s, 1H), 2.60 2.50 (m, 1H), 2.41 (s, 2H), 2.10 -1.98 (m, 2H), 1.90 -1.80 (m, 1H), 1.85 -1.65 (m, 3H), 1.52 (d, J = 6.0 Hz, 6H); Masa (m/z): 378.2 (M+H)+ .

46.: Sal de oxalato de 3-[5-(3-Ciclopropilmetil3-aza-biciclo[3.1.0]hex-6-il)[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1-isopropil-1Hindazol 1H-RMN (CDCl3): G 8.34 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.0 4.90 (m, 1H), 3.30 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 2.77 (s, 1H), 2.48 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 2.20 (s, 2H), 1.67 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 0.90 -0.80 (m, 1H), 0.50 -0.40 (m, 2H), 0.18 -0.08 (m, 2H); Masa (m/z): 364.1 (M+H)+ .

47.: Sal de oxalato de 1-Isopropil-3-{5-[1(tetrahidropiran-4-ilmetil)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-1H-indazol 1H-RMN (DMSO-d6): G 8.18 (d, J = 8.03 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.20 -5.14 (m, 1H), 3.90 -3.80 (m, 2H), 3.37 -3.27 (m, 5H), 2.98 -2.89 (m, 2H), 2.88 -2.77 (m, . 2H), 2.29 -2.23 (m, 2H), 2.27-2.03 (m, 3H), 1.67 -1.63 (m, 2H), 1.54 (d, J = 6.4 Hz, 6H), 1.22-1.15 (m, 2H); Masa (m/z): 410.1 (M+H)+ .

48.: Sal de oxalato de 1-Isopropil-3-{5-[1(tetrahidropiran-4-il)-piperidin-4-il][1,3,4]oxadiazol-2-il}-1H-indazol 1H-RMN (DMSO-d6): G 8.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.9 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.20 -5.14 (m, 1H), 4.0 -3.90 (m, 2H), 3.47 -3.40 (m, 3H), 3.40 -3.20 (m, 3H), 3.15 -3.01 (m, 2H), 2.38 -2.25 (m, 2H), 2.11 -2.06 (m, 2H), 1.95 -1.86 (m, 2H), 1.66 -1.60 (m, 2H), 1.54 (d, J = 6.5 Hz, 6H); Masa (m/z): 396.2 (M+H)+ .

49.: Oxalato de 1-Isopropil-3-[5-(2-piperidin-1il-etil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-1H-indazol 1H-RMN (DMSO-d6): G 8.19(d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.91(d, J= 8.5 Hz,1H), 7.55(t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.38(t,J= 7.6 Hz, 1H), 5.21 -5.14(m, 1H), 3.49-3.41(m,4H), 3.15 -3.06(m, 4H), 1.76 -1.64(m, 4H), 1.54(d, J=6.59 Hz, 6H), 1.54 -1.45(m, 2H); Masa (m/z): 340(M+H)+ .

Ejemplo 50: Determinación de los valores de EC50 para el receptor de 5-HT4:

Ensayos biológicos

Una línea celular CHO estable que expresa el receptor de 5-HT4 humano recombinante y el sistema informador de pCRE

5 Luc se utilizaron para el ensayo basado en células. El ensayo ofrece una metodología no basada en radioactividad para determinar el enlazamiento de un compuesto a GPCRs. En este ensayo específico, se mide el nivel de AMP cíclico intracelular que es modulado por la activación o inhibición del receptor. Las células recombinantes albergan el gen informador de luciferasa bajo el control del elemento de respuesta de cAMP

Las células anteriores fueron cultivadas en placas blancas de fondo claro de 96 pozos en medio F12 de Ham que contenía

10 suero bovino fetal al 10% (FBS). Antes de la adición de compuestos o agonista estándar, las células fueron privadas de suero durante la noche. Se agregaron concentraciones crecientes de los compuestos de prueba en medio OptiMEM para las células. La incubación se continuó a 37ºC en una incubadora de CO2 durante 4 horas. El medio se retiró y las células se lavaron con solución salina regulada con fosfato. Las células se sometieron a lisis y la actividad de luciferasa se midió en un luminómetro. Las unidades de luminiscencia se representaron frente a las concentraciones de compuestos que utilizan el

E12716662

02-03-2015

software Graphpad. Los valores de EC50 de los compuestos se definieron como la concentración requerida en la estimulación de la actividad de luciferasa en un 50%.

Número de Ejemplo: EC50 (nM)

1.: 28.5

2.: 47

3.: 27.5

4.: 38

5.: 18

6.: 4.2

7.: 7

8.: 15.6

9.: 2.4

10.: 5.7

11.: 10.2

12.: 15.3

13.: 20.4

14.: 1.3

15.: 6.2

16.: 13.3

17.: 2.3

18.: 53

19.: 6.8

20.: 104

21.: 71.2

22.: 48

23.: 20

24.: 25

25.: 5.7

26.: 18

imagen20

E12716662

02-03-2015

Los parámetros farmacocinéticos Cmax, Tmax, AUCt, T1/2 y Biodisponibilidad fueron calculados por el modelo no compartimental utilizando el modelo no compartimental estándar utilizando el paquete de software WinNonLin versión 5.0.1

o Phoenix WinNonlin versión 6.2.

E12716662

02-03-2015 E12716662

Número de Ejemplo: Cepa / Género Dosis (mg/kg) Vehículo Ruta de administración Cmax (ng/mL) Tmax (h) AUCt (ng.hr/mL) T1/2 (h) Biodisponibilidad (%)

3.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 360 ± 46 0.42 ± 0.12 709 ± 120 1.27 ± 0.23 34 ± 13

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 811 ± 181 0.08 ± 0.00 1117 ± 285 1.66 ± 0.06

8.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 918 ± 46 0.33 ± 0.14 1765 ± 89 1.01 ± 0.08 72 ± 22

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 1284 ±239 0.08 ± 0.00 1324 ± 527 1.03 ± 0.14

9.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 412 ± 177 0.67 ± 0.24 1214 ± 941 1.49 ± 0.64 66 ± 21

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 792 ± 111 0.08 ± 0.00 836 ± 374 1.38 ± 0.66

14.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 513 ± 125 0.25 ± 0.00 645 ± 136 0.96 ± 0.11 42 ± 10

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 783 ± 124 0.08 ± 0.00 773 ± 45 1.22 ± 0.26

19.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 1758 ±264 0.50 ± 0.00 4814 ± 30 1.48 ± 0.18 101 ± 1

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 1858 ±115 0.08 ± 0.00 2373 ± 90 2.21 ± 0.23

20.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 602 ± 35 0.25 ± 0.00 790 ± 153 1.03 ± 0.02 46 ± 9

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 976 ± 305 0.08 ± 0.00 867 ± 173 0.80 ± 0.06

02-03-2015 E12716662

21.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 553 ± 53 0.42 ± 0.12 1490 ± 72 1.57 ± 0.11 85 ± 4

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 750 ± 14 0.08 ± 0.00 876 ± 65 1.79 ± 0.43

37.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 248 ± 43 0.33 ± 0.12 392 ± 103 2.03 ± 0.44 22 ± 3

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 612 ± 59 0.08 ± 0.00 878 ± 209 1.68 ± 0.30

39.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 179 ± 80 0.42 ± 0.12 394 ± 174 1.38 ± 0.07 19 ± 8

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 865 ± 122 0.08 ± 0.00 1060 ± 163 1.65 ± 0.47

47.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 587 ± 340 0.50 ± 0.43 1323 ± 364 1.84 ± 0.39 66 ± 18

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 815 ± 125 0.08 ± 0.00 1004 ± 109 1.44 ± 0.22

48.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 521 ± 111 0.25 ± 0.00 695 ± 119 1.21 ± 0.04 40 ± 7

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus) 711 ± 163 0.08 ± 0.00 863 ± 95 1.66 ± 0.33

02-03-2015

Ejemplo 52: Estudio de penetración en el cerebro del roedor

Se utilizaron ratas Wistar macho (225 ± 25 gramos) como animales de experimentación. Se alojaron tres animales en cada jaula. Los animales recibieron agua y comida ad libitum durante todo el experimento, y se mantuvieron en un ciclo de 12 5 horas de luz/oscuridad.

Se determinó la penetración en el cerebro en forma discreta en ratas. Un día antes del día de la dosificación, se aclimataron las ratas Wistar macho (225 250 gramos). Después de aclimatarse, las ratas se agruparon de acuerdo con el peso de cada grupo, 3 animales se mantuvieron en jaulas individuales y se les permitió el libre acceso a la comida y el agua. En cada punto de tiempo se utilizaron (0.50, 1, y 2 horas) n = 3 animales.

10 Los compuestos de fórmula (I) se preformularon adecuadamente y se administraron por vía oral a 10 mg/kg (base libre equivalente). Las muestras de sangre se extrajeron vía, punción cardiaca mediante el uso de anestesia con isoflurano, los animales se sacrificaron para recoger el tejido cerebral. Se separó el plasma y las muestras de cerebro se homogeneizaron y se almacenaron congeladas a -20ºC hasta su análisis. Las concentraciones del compuesto NCE en plasma y cerebro se determinaron utilizando el método LC-MS/MS.

15 Los compuestos de fórmula (I) se cuantificaron en el plasma y en el cerebro homogeneizado por el método LC-MS/MS calificado utilizando la técnica de extracción adecuada. Los compuestos de fórmula (I) se cuantificaron en el rango de calibración de 1-500 ng/mL en plasma y homogeneizado de cerebro. Muestras del estudio fueron analizadas utilizando muestras de calibración en el lote y muestras de control de calidad esparcidas por todo el lote. Se calculó el grado de la relación cerebro-plasma (Cb/Cp).

20

Número de Ejemplo: Cepa / Género Dosis (mg/kg ) Vehículo Ruta de administración Penetración en el cerebro en dosis individual (Cb/Cp)

3.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 3.88 ± 0.26

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

8.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 0.56 ± 0.08

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

14.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 2.24 ± 0.09

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

20.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 0.50 ± 0.07

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

E12716662

02-03-2015

21.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 0.62 µ 0.05

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

37.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 5.68 ± 1.74

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

39.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 4.69 ± 0.69

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

47.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 3.15 ± 0.57

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

48.: Wistar/ Macho 10 Agua grado reactivo oral (ingesta) 2.55 ± 0.32

Wistar/ Macho: 5 Agua estéril para inyección intravenosa (bolus)

Ejemplo 53: Modelo de tarea de reconocimiento de objetos

Las propiedades que potencian la cognición de los compuestos de esta invención se estimaron mediante el uso de este modelo.

5 Se usaron ratas Wistar macho (230 -280 gramos) como animales de experimentación. Se alojaron cuatro animales en cada jaula. Los animales se mantuvieron en privación del 20% de alimentos un día antes y se les dio agua ad libitum durante todo el experimento y se mantuvieron en un ciclo de 12 horas de luz/oscuridad. También las ratas se habituaron a escenarios individuales durante 1 hora en ausencia de cualquier objeto.

Un grupo de 12 ratas recibió el vehículo (1 mL/kg) por vía oral y otro grupo de animales recibió compuesto de la fórmula (I), 10 bien sea por vía oral o i.p., una hora antes de lo familiar (T1) y el ensayo de elección (T2).

El experimento se llevó a cabo en un campo abierto de 50 x 50 x 50 cm, hecho de acrílico. En la fase de familiarización, (T1), las ratas fueron colocadas individualmente en el campo abierto durante 3 minutos, en el que se colocaron dos objetos idénticos (botellas de plástico, 12.5 cm de alto x 5.5 cm de diámetro) recubiertos solo en cinta de enmascarar de color amarillo (a1 y a2) que se posicionaron en dos esquinas adyacentes, a 10 cm de las paredes. Después de 24 horas del 15 ensayo (T1) para la prueba de memoria a largo plazo, las mismas ratas se colocaron en el mismo escenario en el que fueron colocadas en el ensayo T1. A las ratas de la fase de elección (T2) se les permitió explorar el campo abierto durante 3 minutos en presencia de un objeto familiar (a3) y un objeto novedoso (b) (botella de vidrio de color ámbar, de 12 cm de

E12716662

02-03-2015

altura y 5 cm de diámetro). Los objetos familiares presentan texturas, colores y tamaños similares. Durante el ensayo T1 y T2, las exploraciones de cada objeto (definidos como oler, lamer, masticar o que tienen las vibrisas en movimiento, mientras que dirige la nariz hacia el objeto a una distancia de menos de 1 cm) se registraron separadamente por cronómetro. Sentado en un objeto no es considerado como actividad exploratoria, sin embargo, se observa raramente.

T1 es el tiempo total empleado a explorar los objetos familiares (a1 + a2).

T2 es el tiempo total empleado a explorar el objeto familiar y el objeto novedoso (a3 + b)

Se realizó la prueba de reconocimiento de objetos tal como se describe por Ennaceur, A., Delacour, J., 1988, A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats -Behavioural data, Behav. Brain Res., 31,47-59.

Número de ejemplo: Dosis mg/kg, p.o. Tiempo medio de exploración ± S.E.M (seg) Inferencia

Objeto familiar: Objeto novedoso

1.: 3 mg/kg, p.o. 5.08 ± 0.1 13.80 ± 2.20 Activa

3.: 3 mg/kg, p.o. 6.88 ± 0.97 12.86 ± 1.32 Activa

8.: 3 mg/kg, p.o. 10.45 ± 1.162 17.59 ± 2.95 Activa

9.: 3 mg/kg, p.o. 11.21 ± 2.18 16.47 ± 1.18 Activa

14.: 1 mg/kg, p.o. 5.06 ± 1.32 12.68 ± 1.14 Activa

15.: 1 mg/kg, p.o. 12.03 ± 1.73 19.14 ± 3.02 Activa

16.: 10 mg/kg, p.o. 8.03 ± 1.58 13.94 ± 1.76 Activa

19.: 10 mg/kg, p.o. 7.19 ± 0.65 13.21 ± 2.1 Activa

20.: 3 mg/kg, p.o. 4.69 ± 0.79 11.04 ± 1.33 Activa

25.: 3 mg/kg, p.o. 5.93 ± 0.87 14.70 ± 2.34 Activa

26.: 3 mg/kg, p.o. 7.12 ± 1.44 14.42 ± 2.22 Activa

37.: 1 mg/kg, p.o. 5.84 ± 1.11 20.19 ± 2.67 Activa

Ejemplo 54: Laberinto de brazo radial

10

El laberinto de brazo radial consiste de un eje central de 45 cm de diámetro. Cada brazo era de dimensión de 42.5 x 15 x 24

15 cm. El laberinto fue elevado a una altura de 1 m por encima del suelo. Los animales se colocaron en una dieta restringida hasta que alcanzaron a aproximadamente el 85% de su peso en alimentación libre. Durante este período de restricción de la dieta los animales se habituaron a la alimentación novedosa (pellas). Una vez que las ratas alcanzaron aproximadamente el 85% de su peso en alimentación libre, las ratas se habituaron al laberinto en el primero y segundo día. Los animales que no comieron las pellas fueron rechazadas del estudio. Los animales fueron asignados al azar en el día 2. En los días

20 subsecuentes, el tratamiento se administra según la asignación. Cada animal se introdujo en el laberinto individualmente un período de 10 minutos. Los brazos fueron cebadas solamente una vez y el animal tuvo que aprender la regla de las entradas repetidas a los brazos no serían recompensadas. El ensayo terminó una vez, la rata había visitado 16 brazos o terminó en

imagen21

Claims

REIVINDICACIONES

imagen1

imagen2

imagen3

imagen4