EA034499B1 - Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина - Google Patents

Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина Download PDF

Info

Publication number
EA034499B1
EA034499B1 EA201791143A EA201791143A EA034499B1 EA 034499 B1 EA034499 B1 EA 034499B1 EA 201791143 A EA201791143 A EA 201791143A EA 201791143 A EA201791143 A EA 201791143A EA 034499 B1 EA034499 B1 EA 034499B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
conjugate
long
acting
oxyntomodulin
oxyntomodulin derivative
Prior art date
Application number
EA201791143A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201791143A1 (ru
Inventor
Хьюн Ок Ким
Хьюнг Кю Лим
Мюн Хюн Джан
Сан Юн Ким
Сан Мин Бэ
Се Чан Квон
Original Assignee
Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ханми Фарм. Ко., Лтд. filed Critical Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Publication of EA201791143A1 publication Critical patent/EA201791143A1/ru
Publication of EA034499B1 publication Critical patent/EA034499B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Изобретение относится к жидкой композиции, не содержащей альбумин, содержащей конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия, в котором производное оксинтомодулина, представляющее собой физиологически активный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28, связано посредством непептидильного полимера с областью Fc иммуноглобулина, что может увеличивать продолжительность физиологической активности конъюгата этого производного оксинтомодулина длительного действия и сохранять его стабильность in vivo в течение длительного периода времени по сравнению с нативным оксинтомодулином, а также изобретение относится к способу получения этой жидкой композиции. Эта жидкая композиция содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество и не содержит сывороточный альбумин человека и факторы, являющиеся потенциально вредными для организма человека, и, следовательно, нечувствительна к вирусной инфекции. Кроме того, поскольку в конъюгате производного оксинтомодулина по изобретению это производное оксинтомодулина связано с областью Fc иммуноглобулина, оно обладает большой молекулярной массой, длительной физиологической активностью и превосходной стабильностью при хранении по сравнению с нативным оксинтомодулином.

Description

Техническая область изобретения
Настоящее изобретение относится к жидкой композиции, не содержащей альбумин, содержащей конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия, в котором оксинтомодулиновый пептид, включая производное оксинтомодулина, связан с областью Fc иммуноглобулина, которая может увеличивать продолжительность физиологической активности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия и сохранять его in vivo стабильность в течение длительного периода времени по сравнению с нативным оксинтомодулином. Настоящее изобретение также относится к способу получения данной жидкой композиции.
Предшествующий уровень техники
Ожирение определяют как состояние аномального или избыточного накопления жира, которое может ухудшать состояние здоровья, и оно является результатом нарушения энергетического баланса, при котором потребление энергии превышает затраты энергии. В прошлом ожирение не представляло серьезную проблему для здоровья, но с экономическим ростом популяция людей с ожирением растет при растущем экономическом благополучии, и число различных заболеваний, связанных с ожирением, также растет. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) более 1,5 млрд взрослых людей во всем мире имеет избыточную массу тела, более 500 млн из них страдает ожирением, и между 1980 и 2008 гг. популяция людей с ожирением увеличилась приблизительно вдвое (World Health Organization, Fact sheet on obesity and overweight, 2011). В настоящее время процент людей, страдающих ожирением, растет не только в странах с высоким уровнем дохода, но также в странах с низким уровнем дохода. Избыточная масса тела и ожирение ответственны за повышение кровяного давления и уровней холестерина, а также являются причиной или вызывают ухудшение различных заболеваний. Кроме того, проблема ожирения является более серьезной у детей или подростков, повышает заболеваемость диабетом, сердечными заболеваниями, гипертензией или гиперлипидемией и может также привести к смерти или инвалидности.
Как описано выше, ожирение является глобальным заболеванием и социальной проблемой, но в прошлом считали, что с ожирением можно бороться за счет индивидуальных усилий, и, следовательно, лечению ожирения не уделяли особого внимания. Однако ожирение непросто лечить, поскольку оно представляет собой комплексное заболевание, обусловленное механизмами контроля аппетита и энергетического метаболизма. Соответственно, для лечения ожирения необходимы не только собственные усилия пациента, но также методика, способная лечить аномальные механизмы, связанные с контролем аппетита и энергетическим метаболизмом. Поэтому приложены усилия к разработке лекарственных средств для лечения ожирения.
В результате таких усилий были разработаны лекарственные средства, включающие римонабант (Sanofi-Aventis), сибутрамин (Abbott), Contrave (Takeda), орлистат (Roche) и т.п., но эти лекарственные средства имеют ограничения в том, что они оказывают побочные действия на плод или обладают недостаточными эффектами при лечении ожирения. Сообщали, что римонабант (Sanofi-Aventis) вызывал расстройства центральной нервной системы, сибутрамин (Abbott) и Contrave (Takeda) демонстрировали сердечно-сосудистые побочные эффекты, а орлистат (Roche) демонстрировал эффект снижения массы тела только приблизительно на 4 кг при введении в течение 1 года. Таким образом, в настоящее время не имеется или имеется немного терапевтических средств против ожирения, которые можно безопасно назначать пациентам с ожирением.
В последнее время значительное внимание привлекли производные глюкагона. Г люкагон продуцируется поджелудочной железой, когда уровни глюкозы в крови начинают падать за счет приема лекарственных средств, заболеваний, гормональных или дефицита ферментов или т.п. Функция глюкагона состоит в стимуляции расщепления клетками печени запасенного гликогена до глюкозы, которая затем высвобождается в кровь, чтобы повысить уровень глюкозы в крови до нормального уровня. Сообщали, что в дополнение к действию, заключающемуся в повышении уровня глюкозы в крови, глюкагон подавляет аппетит и активирует гормон-чувствительную липазу (HSL; от англ. hormone-sensitive lipase) адипоцитов, что способствует липолизу, за счет чего он проявляет эффекты против ожирения. Среди производных глюкагона глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1; от англ. glucagon-like peptide-1) находится в разработке в качестве терапевтического средства для снижения гипергликемии у пациентов с диабетом, и его функция состоит в стимуляции синтеза и секреции инсулина, ингибировании секреции глюкагона, подавлении опорожнения желудка, повышении утилизации глюкозы и ингибировании потребления пищи. Известно, что эксендин-4, выделенный из яда ящерицы, обладает приблизительно 50% аминокислотной гомологией с GLP-1 и активирует рецептор GLP-1, снижая гипергликемию у пациентов с диабетом. Тем не менее, сообщали, что терапевтические лекарственные средства против ожирения, включая GLP-1, вызывают побочные эффекты, такие как рвота и тошнота.
Следовательно, в качестве альтернативы GLP-1 внимание привлек оксинтомодулин, способный к связыванию с обоими рецепторами для двух пептидов (GLP-1 и глюкагона). Оксинтомодулин представляет собой пептид, полученный из предшественника глюкагона пре-глюкагона, и является эффективным средством против ожирения, поскольку он ингибирует потребление пищи подобно GLP-1, стимулирует насыщение и проявляет липолитическую активность подобно глюкагону.
- 1 034499
На основании этой двойной функции пептида оксинтомодулина активно проводятся исследования по разработке лекарственных средств для лечения ожирения. Например, в патенте Кореи с регистрационным № 925017 раскрыта пероральная, парентеральная, мукозальная, ректальная, подкожная или трансдермальная фармацевтическая композиция для лечения ожирения у человека, содержащая оксинтомодулин в качестве активного ингредиента. Однако сообщали, что терапевтические средства против ожирения, содержащие оксинтомодулин, обладают коротким периодом полувыведения in vivo и демонстрируют низкую эффективность при лечении ожирения даже при их введении в высокой дозе три раза в сутки. Поэтому были сделаны усилия по увеличению периода полувыведения in vivo или эффективности лечения ожирения оксинтомодулином путем модификации оксинтомодулина.
Например, двойной агонист оксинтомодулин (Merck) был получен путем замены L-серина D-серином в аминокислоте 2 оксинтомодулина с повышением устойчивости к дипептидилпептидазе-IV (DPP-IV) и путем присоединения холестериновой группировки к С-концу с увеличением периода полувыведения из крови. ZP2929 (Zealand) был получен путем замены L-серина D-серином в аминокислоте 2 оксинтомодулина с повышением устойчивости к DPP-IV, замены аргинина аланином в аминокислоте 17 с повышением устойчивости к протеазе, замены метионина лизином в аминокислоте 27 с повышением устойчивости к окислению и замены глутаминов в аминокислотах 20 и 24 и аспарагина в аминокислоте 28 аспарагиновой кислотой, аланином и серином соответственно, с повышением устойчивости к деамидированию. Двойной агонист оксинтомодулин (Merck) обладает увеличенным периодом полувыведения in vivo 1,7 ч, который является более длительным, чем период полувыведения (8-12 мин) нативного оксинтомодулина, но все же обладает очень коротким периодом полувыведения in vivo, и его вводят в очень высокой дозе, составляющей несколько мг/кг. Таким образом, оксинтомодулин и его производные обладают двумя большими недостатками, т.е. коротким периодом полувыведения и низкими лекарственными эффектами. Вследствие этих недостатков их необходимо вводить ежесуточно в высоких дозах. Для преодоления данных недостатков был исследован способ увеличения периода полувыведения оксинтомодулина в крови при сохранении его активности in vivo, и в результате было разработано производное оксинтомодулина. Кроме того, используя данную технологию, путем конъюгации носителя с производным оксинтомодулина был получен непептидильный полимер, и было обнаружено, что этот белковый конъюгат может демонстрировать лучшую эффективность против ожирения в результате увеличения его периода полувыведения в крови при сохранении активности in vivo (заявка на патент Кореи № 10-2012-0064110).
Как правило, белки и пептиды обладают очень коротким периодом полувыведения и претерпевают денатурацию, такую как осаждение в результате агрегации мономеров, и адсорбцию на поверхностях сосудов под действием различных факторов, таких как неблагоприятные температуры, поверхность раздела между воздушной и водной фазой, высокое давление, физическая/механическая нагрузка, органические растворители и заражение микроорганизмами. Эта денатурация является необратимой, и, следовательно, денатурированные белки и пептиды утрачивают собственные физико-химические свойства и физиологически активные действия. Кроме того, белки и пептиды нестабильны и чувствительны к внешним факторам, таким как температура, влажность, кислород, ультрафиолетовые (УФ) лучи и т.п., претерпевая физические или химические изменения, включающие ассоциацию, полимеризацию и окисление, приводящие в результате к значительной потере активности (патент Кореи, регистрационный № 10-0389726).
Кроме того, адсорбированные белки и пептиды легко агрегируют за счет процесса денатурации, и денатурированные белки и пептиды при введении в организм человека действуют как причина образования антител в организме человека, и в связи с этим белки и пептиды следует вводить в достаточно стабильной форме. Соответственно, исследованы различные способы предотвращения денатурации белков и пептидов в растворе (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43, No. 5, 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech. October, 34-48, 1997; Wei Wang., Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999; Willem Norde, Adv. Colloid Interface Sci., 25, 267-340, 1986; Michelle et al., Int. J. Pharm. 120, 179-188, 1995).
Чтобы достичь цели стабильности, к некоторым белковым и пептидным лекарственным средствам применяют лиофилизацию. Однако лиофилизированные композиции неудобны тем, что для применения они должны быть растворены в воде для инъекций. Кроме того, в случае лиофилизации требуются огромные инвестиции в сублимационные сушилки большой мощности или т.п., поскольку процесс лиофилизации включен в процессы изготовления. Кроме того, также применяют способ получения порошкообразных белков и пептидов с использованием распылительной сушилки, но в данном случае экономическая эффективность снижается вследствие низкого выхода, и воздействие высоких температур может неблагоприятно влиять на стабильность белков.
С целью преодоления таких ограничений проведены исследования, при которых к белкам и пептидам в растворе добавляли стабилизаторы, чтобы подавлять физико-химические изменения белков и пептидов, сохраняя при этом их эффективность in vivo даже при длительном хранении. Сывороточный альбумин человека представляет собой вид белка, широко применяемый в качестве стабилизатора для различных белковых лекарственных средств, и его эффективность доказана (Edward Tarelli et al., Biologicals (1998), 26, 331-346).
- 2 034499
Способ очистки сывороточного альбумина человека включает инактивацию биологических загрязнителей, таких как микоплазма, прион, бактерии и вирус, и скрининг или изучение одного или более биологических загрязнителей или патогенов. Однако всегда существует риск, что пациенты подвергнутся воздействию биологических загрязнителей, которые удалены или инактивированы не полностью. Например, способ скрининга включает исследование, содержит ли донорская кровь человека определенный вирус, но данный способ не всегда надежен. В частности, определенный вирус, существующий у очень малого числа доноров, невозможно обнаружить.
Различные белки могут быть постепенно инактивированы с различными скоростями при различных условиях при хранении за счет их химических различий. То есть, продление срока хранения за счет стабилизатора не идентично для различных белков. В связи с этим подходящая доля, концентрация и вид стабилизатора, применяемого для обеспечения стабильности при хранении, варьируют в зависимости от физико-химических свойств целевого белка. При применении стабилизаторов в комбинации они могут вызывать побочные эффекты, отличающиеся от желаемых эффектов, вследствие конкуренции и взаимодействия между ними. Кроме того, поскольку природа или концентрация белков может изменяться в процессе хранения, применяемые стабилизаторы могут проявлять эффекты, отличающиеся от их предназначенных эффектов. Таким образом, для стабилизации белков в растворе требуются огромные усилия и предосторожности.
В частности, конъюгат оксинтомодулина и Fc иммуноглобулина представляет собой конъюгат, в котором оксинтомодулин, представляющий собой физиологически активный пептид, связан с областью Fc иммуноглобулина. Следовательно, поскольку молекулярная масса и объем конъюгата, безусловно, отличаются от молекулярной массы и объема нативного оксинтомодулина, то для стабилизации белка требуется специальная композиция.
Кроме того, поскольку оксинтомодулин (т.е. физиологически активный пептид) и область Fc иммуноглобулина представляют собой белки или пептиды, обладающие различными физико-химическими свойствами, их следует стабилизировать одновременно. Однако, как описано выше, различные белки или белки могут постепенно инактивироваться с различными скоростями в различных условиях в процессе хранения вследствие их химических различий, и при применении стабилизаторов, подходящих для белков или пептидов, в комбинации они могут вызывать побочные эффекты, отличающиеся от желаемых эффектов, вследствие конкуренции и взаимодействия между ними. Таким образом, в случае конъюгата оксинтомодулина длительного действия существуют значительные затруднения при нахождении композиции для одновременной стабилизации оксинтомодулина, представляющего собой физиологически активный пептид, и области Fc иммуноглобулина.
В таких обстоятельствах авторы изобретения приложили значительные усилия для получения стабильной жидкой композиции, которую можно хранить в течение длительного периода времени, не беспокоясь о вирусном загрязнении, и в результате обнаружили, что стабилизатор, который содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество и может дополнительно содержать добавку, такую как изотонический агент или аминокислота, и консервант для многократного применения, может повысить стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, и экономически эффективная и стабильная жидкая композиция может быть получена с использованием стабилизатора, в результате чего выполнили настоящее изобретение.
Раскрытие изобретения
Техническая задача.
Цель настоящего изобретения состоит в разработке жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, содержащей фармакологически эффективное количество конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, где производное оксинтомодулина, представляющее собой физиологически активный пептид, связано с областью Fc иммуноглобулина; и не содержащей альбумин стабилизатор.
Другая цель настоящего изобретения состоит в разработке способа получения указанной выше жидкой композиции.
Еще одна цель настоящего изобретения состоит в разработке композиции для предупреждения или лечения ожирения или диабета, включающей жидкую композицию конъюгата производного оксинтомодулина, содержащую физиологически активный пептид производного оксинтомодулина, связанный с областью Fc иммуноглобулина.
Еще одна цель настоящего изобретения состоит в разработке способа предупреждения или лечения ожирения или диабета, включающего введение субъекту указанной выше жидкой композиции.
Техническое решение.
Для достижения указанных выше целей в одном аспекте в настоящем изобретении предложена жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, содержащая фармакологически активное количество конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, где этот конъюгат производного оксинтомодулина содержит производное оксинтомодулина, представляющее собой физиологически активный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;
- 3 034499 область Fc иммуноглобулина (IgG);
непептидильный полимер, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля/пропиленгликоля, поливиниловый спирт, поливинилэтиловый эфир, полимолочную кислоту (PLA), полимолочно-гликолевую кислоту (PLGA), липидный полимер, гиалуроновую кислоту или их комбинацию и где этот непептидильный полимер ковалентно связывает производное оксинтомодулина и область Fc IgG; и не содержащий альбумин стабилизатор, который содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество.
Предпочтительной является жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по изобретению, где стабилизатор дополнительно содержит один/одну или более изотонических агентов, сахаров, многоатомных спиртов или аминокислот.
Предпочтительно в жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, как она определена выше, область Fc IgG представляет собой область Fc IgG4, более предпочтительно область Fc агликозилированного IgG4 человека.
Предпочтительно в жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по изобретению непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
Целесообразно, когда в жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по изобретению сахарный спирт представляет собой один или более чем один из маннита, сорбита или глицерина, а концентрация сахарного спирта в жидкой композиции составляет 2-15% (мас./об.).
Предпочтительно в жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по изобретению буфер представляет собой один или более из цитратного, ацетатного, гистидинового или фосфатного буфера, и буфер имеет pH в диапазоне от 4,5 до 7,0.
Предпочтительно в жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по изобретению изотонический агент представляет собой хлорид натрия.
Целесообразно, когда в жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по изобретению неионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат или полоксамер, а концентрация этого неионогенного поверхностно-активного вещества в жидкой композиции составляет 0,001-0,1% (мас./об.).
Предпочтительной является жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, как она определена выше, где аминокислота представляет собой метионин.
Еще более предпочтительной является жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, как она определена выше, где стабилизатор содержит буфер, имеющий pH в диапазоне от 4,8 до 6,0, один или более из маннита или сорбита, и полисорбат 20.
Еще один аспект жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, как она определена выше, составляет жидкая композиция, дополнительно содержащая один или более чем один консервант, представляющий собой мета-крезол, фенол или бензиловый спирт, предпочтительно мета-крезол, еще более предпочтительно в концентрации, составляющей 0,001-1% (мас./об.).
Еще один аспект указанной жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия составляет композиция для введения многократных доз.
Также предложен способ получения жидкой композиции по изобретению, как она определена выше, включающий следующие стадии:
а) получение конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, как он определен выше; и
б) смешивание конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного на стадии (а), с не содержащим альбумин стабилизатором, который содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество.
Согласно настоящему изобретению также предложена жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, содержащая фармакологически эффективное количество конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, где этот конъюгат производного оксинтомодулина содержит производное оксинтомодулина, представляющее собой физиологически активный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;
область Fc IgG;
непептидильный полимер, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля/пропиленгликоля, поливиниловый спирт, поливинилэтиловый эфир, полимолочную кислоту (PLA), полимолочно-гликолевую кислоту (PLGA), липидный полимер, гиалуроновую кислоту или их комбинацию и где этот непептидильный полимер ковалентно связывает производное оксинтомодулина и область Fc Ig; и
5-50 мМ гистидина, 2-15% (мас./об.) маннита, 0,01-1 мг/мл метионина и 0,001-0,1% (мас./об.) полисорбата 20.
- 4 034499
Предпочтительно в указанной композиции непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
Целесообразно, когда указанная жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия дополнительно содержит 0,001-1% (мас./об.) мета-крезола.
Также предложен способ получения указанной жидкой композиции конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, включающий следующие стадии:
а) получение конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, как он определен выше; и
б) смешивание конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного на стадии а), с 5-50 мМ гистидина, 2-15% (мас./об.) маннита, 0,01-1 мг/мл метионина и 0,001-0,1% (мас./об.) полисорбата 20.
Один аспект заявленных способов получения композиций по изобретению составляет способ, дополнительно включающий смешивание конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного на стадии а), с одним/одной или более изотонических агентов, сахаров, многоатомных спиртов, аминокислот, консервантов или их комбинацией.
Как используют в данном описании, термин жидкая композиция относится к лекарственной композиции, полученной в жидкой форме, и включает все жидкие композиции для внутреннего применения и композиции для наружного применения. В предшествующем уровне техники жидкая композиция по изобретению, пригодная для фармакологически эффективного количества конъюгата производного оксинтомодулина, содержащая производное оксинтомодулина, связанное с доменом Fc иммуноглобулина, не была описана.
Как используют в данном описании, термин стабилизатор относится к веществу, стабильно сохраняющему ингредиенты, такие как активные ингредиенты, в течение определенного периода времени. Для цели настоящего изобретения этот термин относится к веществу, обеспечивающему стабильное хранение конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. Стабильность при хранении белков, таких как конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия, важна не только для гарантии точной дозы, но также для ингибирования потенциального образования антигенного вещества для конъюгата производного оксинтомодулина.
Стабилизатор в настоящем изобретении предпочтительно содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество с целью придания стабильности конъюгату производного оксинтомодулина длительного действия. Кроме того, стабилизатор может предпочтительно дополнительно содержать один или более чем один ингредиент, выбранный из группы, состоящей из изотонических агентов, сахаров, многоатомных спиртов и аминокислот.
Буфер функционирует так, чтобы поддерживать pH жидкой композиции таким образом, чтобы pH жидкой композиции не изменялся быстро, для того чтобы сделать конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия стабильным. Примеры буфера могут включать фармацевтически приемлемые буферы pH, включающие соль металла (фосфат натрия, фосфат калия или их однозамещенную или двузамещенную соль), цитрат натрия, лимонную кислоту, ацетат натрия, уксусную кислоту и гистидин, либо можно также использовать смесь этих буферов. Буфер предпочтительно представляет собой цитратный или гистидиновый буфер, и более предпочтительно гистидиновый буфер. Концентрация буфера предпочтительно составляет 5-100 мМ и более предпочтительно 5-50 мМ. Значение pH буфера предпочтительно составляет 4,0-8,0, более предпочтительно 4,5-7,0 и еще более предпочтительно 5,0-6,0.
В примере настоящего изобретения была измерена стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH буфера жидкой композиции. То есть после хранения конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия при 25°C в течение 0-4 недель при изменении pH буфера анализировали остаточное количество конъюгата, и в результате было показано, что конъюгат производного оксинтомодулина был более стабилен при pH 5,6, pH 5,8 и pH 6,0 (пример 3, табл. 2-5, пример 7, табл. 18-21, пример 8 и табл. 22-25). Таким образом, было обнаружено, что pH наиболее стабильного буфера в настоящем изобретении находится в диапазоне от 5,0 до 6,0. В примере настоящего изобретения измеряли стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от вида буфера жидкой композиции. В частности, после хранения конъюгата оксинтомодулина с 0,02% полисобратом 20, 0,1 мг/мл метионина и 5% маннитом при 25°C в течение 0-4 недель анализировали остаточное количество конъюгата. Результаты анализа эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Э-ВЭЖХ) показали, что остаточное количество конъюгата значительно не различается между буферами при одном и том же значении pH. Результаты анализа с помощью ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ИО-ВЭЖХ) или высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) показали, что гистидин был наиболее стабилен при одном и том же pH (пример 8 и табл. 22-25).
Функция сахарного спирта состоит в повышении стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В настоящем изобретении сахарный спирт может представлять собой один или более чем один сахарный спирт, выбранный из группы, состоящей из маннита, сорбита и глицерина. Предпочтительно сахарный спирт может представлять собой маннит. Концентрация сахарного
- 5 034499 спирта в жидкой композиции предпочтительно составляет 1-20% (мас./об.), и более предпочтительно
2-15% (мас./об.).
В примере настоящего изобретения анализировали влияние вида сахарного спирта в качестве стабилизатора на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, конъюгат производного оксинтомодулина хранили в цитратном буфере (pH 5,6) при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В результате конъюгат был более стабильным в присутствии маннита или сорбита, чем в присутствии глицерина при одной и той же концентрации. Результаты анализа ОФ-ВЭЖХ показали, что конъюгат был несколько более стабильным в присутствии маннита по сравнению с присутствием сорбита (пример 4 и табл. 6-9). Иными словами, было показано, что добавление маннита или сорбита показало превосходную стабильность, но конъюгат был наиболее стабильным в присутствии маннита.
В примере настоящего изобретения анализировали влияние концентрации сахарного спирта в качестве стабилизатора на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, конъюгат производного оксинтомодулина хранили при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В результате в присутствии 2% маннита или 15% маннита образовывался осадок белка, а в присутствии 5% маннита или 10% маннита конъюгат был стабилен (пример 5, табл. 10-13, пример 7 и табл. 18-21).
Функции неионогенного поверхностно-активного вещества состоят в уменьшении поверхностного натяжения раствора белка для предотвращения адсорбции белка на гидрофобной поверхности или его агрегации. Предпочтительные примеры неионогенного поверхностно-активного вещества, которое можно применять в настоящем изобретении, включают неионогенные поверхностно-активные вещества на основе полисорбата и неионогенные поверхностно-активные вещества на основе полоксамера, которые можно применять отдельно или в комбинации двух или более. Неправильно использовать неионогенное поверхностно-активное вещество в жидкой композиции в высоких концентрациях. Жидкая композиция по настоящему изобретению содержит неионогенное поверхностно-активное вещество в концентрации 0,2% (мас./об.) или менее, предпочтительно 0,001-0,1% (мас./об.).
Стабилизатор по настоящему изобретению может содержать аминокислоту, такую как метионин. Функция метионина состоит в дополнительной стабилизации белка за счет ингибирования образования примесей, которое может быть вызвано, например, окислительной реакцией белка.
В примере настоящего изобретения тестировали влияние концентрации неионогенного поверхностно-активного вещества в качестве стабилизатора и присутствия или отсутствия аминокислоты на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, конъюгат производного оксинтомодулина хранили в цитратном буфере (pH 5,6) и 10% манните при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В результате конъюгат производного оксинтомодулина был наиболее стабильным в присутствии 0,02% полисорбата 20 и 0,1 мг/мл метионина (пример 6 и табл. 14-17).
Функция изотонического агента состоит в поддержании подходящего уровня осмотического давления при введении конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в растворе in vivo, и его дополнительная функция может состоять в дополнительной стабилизации конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в растворе. Характерные примеры изотонического агента включают водорастворимые неорганические соли, такие как хлорид натрия, сульфат натрия, цитрат натрия и тому подобное. Концентрация изотонического агента предпочтительно составляет 0-200 мМ, и его содержание можно надлежащим образом контролировать.
Стабилизатор по настоящему изобретению не содержит альбумин. Сывороточный альбумин человека, который можно использовать в качестве стабилизатора белка, получают из крови человека, и, следовательно, он может быть заражен патогенным вирусом человека, а желатин или бычий сывороточный альбумин может вызвать заболевания или вызвать аллергические реакции у некоторых пациентов. Не содержащий альбумин стабилизатор по настоящему изобретению не содержит инородный белок, такой как сывороточный альбумин человека или животного или очищенный желатин, и, следовательно, нечувствителен к вирусной инфекции.
Предпочтительные примеры сахаров среди сахаров и многоатомных спиртов, которые можно дополнительно использовать для повышения стабильности конъюгата оксинтомодулина длительного действия при хранении, включают моносахариды, такие как манноза, глюкоза, фукоза и ксилоза, и полисахариды, такие как лактоза, мальтоза, сахароза, раффиноза и декстран, и предпочтительные примеры многоатомных спиртов включают полипропилен, низкомолекулярный полиэтиленгликоль, глицерин, низкомолекулярный полипропиленгликоль и т.п. Эти сахара и многоатомные спирты можно использовать сами по себе или в комбинации двух или более.
В дополнение к вышеописанному буферу, изотоническому агенту, сахарному спирту, аминокислоте и неионогенному поверхностно-активному веществу жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать другие компоненты или вещества, известные в данной области техники, в диапазоне, не уменьшающем эффективность настоящего изобретения.
- 6 034499
Жидкая композиция конъюгата оксинтомодулина длительного действия по изобретению содержит фармакологически эффективное количество конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, содержащего физиологически активный пептид производного оксинтомодулина, связанный с областью Fc иммуноглобулина, и не содержащий альбумин стабилизатор, который может содержать буфер, имеющий pH в диапазоне от 4,8 до 7,0, один или более чем один сахарный спирт, выбранный из группы, состоящей из маннита и сорбита, и полисорбат 20. Более конкретно стабилизатор может содержать буфер, имеющий pH в диапазоне от 5,0 до 6,0, маннит и полисорбат 20. Кроме того, стабилизатор может дополнительно содержать один или более чем один компонент, выбранный из группы, состоящей из изотонических агентов, сахаров, многоатомных спиртов и аминокислот.
Не содержащая альбумин жидкая композиция по изобретению, которая содержит высокую концентрацию конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, придает стабильность конъюгату производного оксинтомодулина длительного действия, нечувствительна к вирусной инфекции, является простой и обладает превосходной стабильностью при хранении, и, следовательно, может быть экономично получена по сравнению с другими стабилизаторами или лиофилизированными композициями.
Кроме того, поскольку жидкая композиция по настоящему изобретению содержит конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия, обладающий физиологической активностью в течение продолжительного периода времени по сравнению с нативным оксинтомодулином, она может сохранять активность белка в организме человека в течение продолжительного периода времени по сравнению с традиционными препаратами оксинтомодулина, и, следовательно, ее можно применять в качестве эффективного лекарственного препарата. Кроме того, жидкая композиция по настоящему изобретению обладает превосходной стабильностью даже при высокой концентрации конъюгата оксинтомодулина длительного действия.
Как используют в данном описании, термин оксинтомодулин относится к пептиду, продуцируемому из пре-глюкагона, являющегося предшественником глюкагона. В настоящем изобретении подразумевают, что оксинтомодулин включает нативный оксинтомодулин и его предшественник, производное, фрагмент и вариант. Предпочтительно оксинтомодулин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 (HSQGTFTSDYSKYFDSRRAQDFVQWFMNTKRNRNNIA).
Как используют в данном описании, термин производное оксинтомодулина включает пептид, производное пептида или пептидомиметик, который получен путем добавления, делеции или замены аминокислот в аминокислотной последовательности оксинтомодулина и может активировать рецепторы глюкагона и GLP-1 на более высоком уровне, чем при активации нативным оксинтомодулином. Как оно раскрыто в данном описании, производное оксинтомодулина может иметь любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 2-34. Производное оксинтомодулина по настоящему изобретению имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
Как используют в данном описании, термин фрагмент оксинтомодулина относится к фрагменту, имеющему одну или более аминокислот на амино- или карбокси-конце нативного оксинтомодулина, в котором добавленные аминокислоты могут также представлять собой неприродные аминокислоты (например, аминокислоту D-типа). Этот фрагмент оксинтомодулина обладает функцией регулирования уровней глюкозы в крови in vivo.
Как используют в данном описании, термин вариант оксинтомодулина представляет собой пептид, имеющий один или более чем один аминокислотный остаток, отличающийся от остатков аминокислотной последовательности нативного оксинтомодулина, и обладает функцией активации рецепторов GLP-1 и глюкагона.
Вариант оксинтомодулина может быть получен любым путем из следующих: замены, добавления, делеции, модификации или их комбинации некоторых аминокислот в аминокислотной последовательности нативного оксинтомодулина.
Способы получения варианта, производного и фрагмента оксинтомодулина можно применять по отдельности или в комбинации. Например, в данном описании раскрыт также пептид, имеющий одну или более аминокислот, отличающихся от аминокислот нативного оксинтомодулина, и дезаминированные N-концевые аминокислотные остатки, и обладающий функцией активации рецептора GLP-1 и рецептора глюкагона.
Аминокислоты, упоминаемые в данном описании, сокращают согласно правилам номенклатуры IUPAC-IUB, как описано ниже:
Алании A; Аргинин R;
Аспарагин N; Аспарагиновая кислота D;
Цистеин C; Глутаминовая кислота E;
Глутамин Q; Глицин G;
Гистидин H; Изолейцин I;
Лейцин L; Лизин K;
Метионин M; Фенилаланин F
Пролин P; Серин S;
- 7 034499
Треонин T; Триптофан W;
Тирозин Y; Валин V.
Как раскрыто в данном описании, производное оксинтомодулина включает любой пептид, который получен путем замены, добавления, делеции или посттрансляционной модификации (например, метилирования, ацилирования, убиквитинирования или внутримолекулярного ковалентного связывания) аминокислот в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и может активировать и рецептор глюкагона, и рецептор GLP-1. При замене или добавлении аминокислот можно использовать не только 20 аминокислот, обычно находящихся в белках человека, но также атипичные или неприродные аминокислоты. Коммерческие источники атипичных аминокислот включают фирмы Sigma-Aldrich, ChemPep Inc. и Genzyme Pharmaceuticals. Пептиды, включающие эти аминокислоты, и атипичные пептидные последовательности могут быть синтезированы и приобретены у коммерческих поставщиков, например American Peptide Company или Bachem (USA) или Anygen (Korea).
Как раскрыто в данном описании, производное оксинтомодулина представляет собой новый пептид, содержащий аминокислотную последовательность следующей формулы 1:
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (SEQIDNO:50) (Формула 1), где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, диметил-гистидил (N-диметил-гистидил), бета-гидроксиимидазопропионил, 4-имидазоацетил, бета-карбоксиимидазопропионил или тирозин;
XI представляет собой Aib (аминоизомасляную кислоту), d-аланин, глицин, Sar (N-метилглицин), серин или d-серин;
X2 представляет собой глутаминовую кислоту или глутамин;
X3 представляет собой лейцин или тирозин;
X4 представляет собой серин или аланин;
X5 представляет собой лизин или аргинин;
X6 представляет собой глутамин или тирозин;
X7 представляет собой лейцин или метионин;
X8 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
X9 представляет собой глутаминовую кислоту, серин или альфа-метил-глутаминовую кислоту или отсутствует;
X10 представляет собой глутамин, глутаминовую кислоту, лизин, аргинин или серин или отсутствует;
XII представляет собой аланин, аргинин или валин или отсутствует;
X12 представляет собой аланин, аргинин, серин или валин или отсутствует;
X13 представляет собой лизин, глутамин, аргинин или альфа-метил-глутаминовую кислоту или отсутствует;
X14 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или лейцин или отсутствует;
X15 представляет собой фенилаланин или отсутствует;
X16 представляет собой изолейцин или валин или отсутствует;
X17 представляет собой аланин, цистеин, глутаминовую кислоту, лизин, глутамин или альфаметил-глутаминовую кислоту или отсутствует;
X18 представляет собой триптофан или отсутствует;
X19 представляет собой аланин, изолейцин, лейцин, серин или валин или отсутствует;
X20 представляет собой аланин, лизин, метионин, глутамин или аргинин или отсутствует;
X21 представляет собой аспарагин или отсутствует;
X22 представляет собой аланин, глицин или треонин или отсутствует;
X23 представляет собой цистеин или лизин или отсутствует;
X24 представляет собой пептид, имеющий от 2 до 10 аминокислот, состоящий из комбинации аланина, глицина и серина, или отсутствует; и
R2 представляет собой KRNRNNIA(SEQ Ш NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 36), GPSSGAPPPSK(SEQ Ш NO: 37),
HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID NO: 38), HSQGTFTSDYSRYLDK(SEQ ID N0:39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO: 40) или отсутствует (за исключением случая, где аминокислотная последовательность формулы 1 идентична SEQ ID NO: 1).
С целью повышения активности оксинтомодулина дикого типа по отношению к рецептору глюкагона и к рецептору GLP-1 производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, может быть замещено 4-имидазоацетилом, полученным путем делеции альфа-углерода гистидина в положении 1 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, дезамино-гистидилом, полученным путем делеции N-концевой аминогруппы, диметил-гистидилом (N-диметил-гистидилом), полученным путем модификации N-концевой аминогруппы двумя метальными группами, бета-гидроксиимидазопропионилом, полу
- 8 034499 ченным путем замещения N-концевой аминогруппы гидроксильной группой, или бетакарбоксиимидазопропионилом, полученным путем замещения N-концевой аминогруппы карбоксильной группой. Кроме того, рецептор-связывающая область GLP-1 может быть замещена аминокислотами, усиливающими гидрофобные и ионные связи или их комбинацию. Кроме того, часть последовательности оксинтомодулина может быть замещена аминокислотной последовательностью GLP-1 или эксендина-4, чтобы повысить активность рецептора GLP-1.
Кроме того, часть последовательности оксинтомодулина может быть замещена последовательностью, усиливающей альфа-спираль. Предпочтительно аминокислоты в положениях 10, 14, 16, 20, 24 и 28 аминокислотной последовательности формулы 1 могут быть замещены аминокислотами или производными аминокислот, состоящими из следующих: Tyr(4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-Cl), Phe(4-CN), Phe(4NO2), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, А1а(2-тиенил) и Ala(бензотиенил), о которых известно, что они стабилизируют альфа-спираль, и тип и число встраиваемых аминокислот или производных аминокислот, стабилизирующих альфа-спираль, не ограничено. Предпочтительно аминокислоты в положениях 10 и 14, 12 и 16, 16 и 20, 20 и 24 и 24 и 28 аминокислотной последовательности могут быть также замещены глутаминовой кислотой или лизином, чтобы образовать кольца, и число встраиваемых колец не ограничено. Наиболее предпочтительно производное оксинтомодулина может иметь аминокислотную последовательность, выбранную из формул 2-6.
Как раскрыто в данном описании, производное оксинтомодулина представляет собой, в частности, новый пептид, включающий аминокислотную последовательность формулы 2, полученной путем замещения аминокислотной последовательности оксинтомодулина последовательностью эксендина или GLP-1:
R1-A-R3 (SEQIDN0:51) (Формула?),
Другое производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, представляет собой новый пептид, включающий аминокислотную последовательность формулы 3, полученную путем связывания части аминокислотной последовательности оксинтомодулина и части аминокислотной последовательности эксендина или GLP-1 посредством соответствующего аминокислотного линкера:
R1-B-C-R4 (SEQ ID N0:52) (Формула 3),
Другое производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, представляет собой новый пептид, включающий аминокислотную последовательность формулы 4, где часть аминокислотной последовательности оксинтомодулина замещена аминокислотой, усиливающей гидрофобное связывание с рецептором GLP-1. Например, он представляет собой пептид, где Leu в положении 26 замещен аминокислотой He или Val, усиливающей гидрофобность:
R1-SQGTFTSDYSKYLD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3 (SEQ ID N0:53) > (Формула 4).
Другое производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, представляет собой новый пептид, включающий аминокислотную последовательность формулы 5, где часть аминокислотной последовательности нативного оксинтомодулина делетирована, добавлена или замещена другими аминокислотами с целью повышения способностей нативного оксинтомодулина к активации рецептора GLP-1 и рецептора глюкагона:
R1-E1-QGTFTSDYSKYLD-E2-E3-RA-E4-E5-FV-E6-WLMNT-E7-R5 (SEQ ID N0:54) (Формула 5),
В формулах 2-5
R1 является таким, как описано в формуле 1;
А выбран из группы, состоящей из SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT (SEQ ID NO: 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ГО NO: 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID NO: 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 45), GFGTFTSDT SRQMFFF A VRI FTF.W A A (SEQ ID NO: 46) и SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID NO: 47);
В выбран из группы, состоящей из SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT (SEQ ID NO: 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID NO: 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID NO: 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO: 45), GFGTFTSDT SRQMFFFA VRI FTF.W A A (SEQ ID NO: 46) , SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID NO: 47); GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW (SEQ ID NO: 48) и SQGTFTSDYSRYLD (SEQ ID N0:49);
С представляет собой пептид, имеющий от 2 до 10 аминокислот, состоящий из комбинации аланина, глицина и серина;
D1 представляет собой серин, глутаминовую кислоту или аргинин;
D2 представляет собой аргинин, глутаминовую кислоту или серин;
D3 представляет собой аргинин, аланин или валин;
D4 представляет собой аргинин, валин или серин;
D5 представляет собой глутамин, аргинин или лизин;
D6 представляет собой изолейцин, валин или серин;
D7 представляет собой метионин, аргинин или глутамин;
D8 представляет собой треонин, глицин или аланин;
- 9 034499
E1 представляет собой серин, Aib, Sar, d-аланин или d-серин;
Е2 представляет собой серин или глутаминовую кислоту;
E3 представляет собой аргинин или лизин;
E4 представляет собой глутамин или лизин;
E5 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
E6 представляет собой глутамин, цистеин или лизин;
E7 представляет собой цистеин или лизин или отсутствует;
R3 представляет собой
KRNRNNIA (SEQ Ш NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 36) или GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37); R4 представляет собой
HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID N0:38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID N0:39) или HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID N0:40);
R5 представляет собой KRNRNNIA (SEQ ID NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID
NO: 36) или GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37) или делетирован (за исключением случая, где аминокислотные последовательности формул 2-5 идентичны SEQ ID NO: 1).
Еще одно производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, может представлять собой новый пептид формулы 6
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (SEQIDNO:55) (Формула 6), где R1 представляет собой гистидин, дезамино-гистидил, 4-имидазоацетил или тирозин;
XI представляет собой Aib (аминоизомасляную кислоту), глицин, серин или серин;
X2 представляет собой глутаминовую кислоту или глутамин;
X3 представляет собой лейцин или тирозин;
X4 представляет собой серин или аланин;
X5 представляет собой лизин или аргинин;
X6 представляет собой глутамин или тирозин;
X7 представляет собой лейцин или метионин;
X8 представляет собой аспарагиновую кислоту или глутаминовую кислоту;
X9 представляет собой глутаминовую кислоту или альфа-метил-глутаминовую кислоту или отсутствует;
X10 представляет собой глутамин, глутаминовую кислоту, лизин или аргинин или отсутствует;
XII представляет собой аланин или аргинин отсутствует;
X12 представляет собой аланин или валин или отсутствует;
X13 представляет собой лизин, глутамин, аргинин или альфа-метил-глутаминовую кислоту или отсутствует;
X14 представляет собой аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту или лейцин или отсутствует;
X15 представляет собой фенилаланин или отсутствует;
X16 представляет собой изолейцин или валин или отсутствует;
X17 представляет собой аланин, цистеин, глутаминовую кислоту, глутамин или альфа-метилглутаминовую кислоту или отсутствует;
X18 представляет собой триптофан или отсутствует;
X19 представляет собой аланин, изолейцин, лейцин или валин или отсутствует;
X20 представляет собой аланин, лизин, метионин или аргинин или отсутствует;
X21 представляет собой аспарагин или отсутствует;
X22 представляет собой треонин или отсутствует;
X23 представляет собой цистеин, лизин или отсутствует;
X24 представляет собой пептид, имеющий от 2 до 10 аминокислот, состоящий из глицина, или отсутствует;
R2 представляет собой
KRNRNNIA (SEQ ID NO: 35), GPSSGAPPPS (SEQ Ш
NO: 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID NO: 38),
HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ Ш NO: 39) or HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ Ш Νθ 40) или отсутствует (за исключением случая, где аминокислотная последовательность формулы 6 идентична последовательности SEQ ID NO: 1).
Производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, может быть выбрано из группы, состоящей из пептидов SEQ ID NO: 2-34. Также производное оксинтомодулина, как оно раскрыто в данном описании, может представлять собой производное оксинтомодулина, описанное в табл. 1 примера 1.
Оксинтомодулин обладает активностями двух пептидов, GLP-1 и глюкагона. GLP-1 обладает эф
- 10 034499 фектом, снижающим уровни глюкозы в крови посредством секреции инсулина, а глюкагон обладает эффектом, повышающим уровни глюкозы в крови. Кроме того, GLP-1 ингибирует потребление пищи и подавляет опорожнение желудка, а глюкагон обладает эффектом, снижающим массу тела посредством стимуляции липолиза и повышения энергетического метаболизма. Таким образом, GLP-1 и глюкагон обладают различными биологическими эффектами. Следовательно, в случае, когда оба пептида присутствуют в виде конъюгата, если эффект любого из этих двух пептидов превышает эффект другого, может произойти побочное действие. Например, если эффект глюкагона выше, чем эффект GLP-1, уровни глюкозы в крови могут увеличиться, а, если эффект GLP-1 выше, чем эффект глюкагона, могут встречаться побочные эффекты, такие как тошнота и рвота. Кроме того, эффект этих двух пептидов может варьировать в зависимости от соотношения активностей этих двух пептидов. Следовательно, производные оксинтомодулина и их конъюгаты не ограничены только производными, обладающими повышенными активностями.
Как используют в данном описании, термин конъюгат производного оксинтомодулина относится к конъюгату, содержащему производное оксинтомодулина и другой элемент. Этот другой элемент может представлять собой любое вещество, обладающее полезными функциями, включающими увеличение периода полувыведения производного оксинтомодулина в крови или замедление высвобождения производного оксинтомодулина в почках. Конъюгат по настоящему изобретению может ковалентно связываться с производным оксинтомодулина или образовывать микросферы, что повышает сывороточную стабильность производного оксинтомодулина, или замедляет высвобождение производного оксинтомодулина в почках, или изменяет связывающую активность производного оксинтомодулина с его рецептором. Носитель, который может образовать конъюгат, содержащий производное оксинтомодулина, может быть выбран из группы, состоящей из альбумина, трансферрина, антител, фрагментов антител, эластина, гепарина, полисахарида, такого как хитин, фибронектин и тому подобное, который может связываться с производным оксинтомодулина, повышая сывороточную стабильность производного оксинтомодулина. Предпочтительно носитель представляет собой область Fc иммуноглобулина.
Fc иммуноглобулина, который можно применять в настоящем изобретении, может представлять собой область Fc иммуноглобулина человека, область Fc иммуноглобулина, имеющий последовательность его аналога, или область Fc иммуноглобулина, происходящую из животных, включая коров, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс и морских свинок. Кроме того, область Fc иммуноглобулина может происходить из IgG, IgA, IgD, IgE, IgM или их комбинации, или их гибрида. Кроме того, каждый домен области Fc иммуноглобулина по настоящему изобретению может представлять собой гибрид доменов, происходящих из разных иммуноглобулинов, выбранных из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM. Альтернативно область Fc иммуноглобулина представляет собой димер или мультимер, состоящий из одноцепочечных иммуноглобулинов, состоящих из доменов одинавого происхождения. Предпочтительно область Fc иммуноглобулина представляет собой область, полученную из IgG или IgM, являющихся самыми распространенными белками в крови человека. Наиболее предпочтительно она представляет собой Fc иммуноглобулина, происходящую из IgG, о которой известно, что она увеличивает периоды полувыведения лиганд-связывающих белков. Fc иммуноглобулина может быть получена либо путем обработки нативного IgG специфичной протеазой, либо из трансформированных клеток с помощью рекомбинантного метода. Предпочтительно она представляет собой рекомбинантную Fc иммуноглобулина человека, полученную в E.coli.
В то же время IgG может быть также разделен на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и в настоящем изобретении также возможны комбинация или гибрид этих подклассов. Предпочтительно IgG относится к подклассам IgG2 и IgG4 и наиболее предпочтительно к IgG4, у области Fc которого, по существу, отсутствуют эффекторные функции, такие как комплементзависимая цитотоксичность (complementdependent cytotoxicity; CDC). Иными словами, наиболее предпочтительной областью Fc иммуноглобулина, используемой в качестве носителя лекарственного средства в настоящем изобретении, является негликозилированная область Fc, происходящая из IgG4 человека. Область Fc человеческого происхождения более предпочтительна, чем область Fc происхождения, отличающегося от человеческого, которая может действовать в качестве антигена в организме человека и вызывать нежелательные иммунные ответы, такие как продуцирование нового антитела против антигена.
Конъюгат производного оксинтомодулина может быть получен путем использования непептидильного полимера или методом генной рекомбинации. В настоящем изобретении конъюгат получают путем связывания производного оксинтомодулина с областью Fc иммуноглобулина посредством непептидильного полимера.
Непептидильный полимер может быть связан с каждой из молекул: производным оксинтомодулина и областью Fc иммуноглобулина. Каждый конец непептидильного полимера может быть связан с областью Fc иммуноглобулина и аминной или тиольной группой производного оксинтомодулина соответственно.
Как используют в данном описании, термин конъюгат производного оксинтомодулина относится к конъюгату, обладающему пролонгированным длительным эффектом по сравнению с нативным оксинтомодулином. Примеры конъюгата длительного действия включают, но не ограничены ими, конъюгат, в
- 11 034499 котором производное оксинтомодулина, полученное в результате модификации, замены, добавления или делеции аминокислот в аминокислотной последовательности нативного оксинтомодулина, связано с биоразлагаемым полимером, таким как полиэтиленгликоль (ПЭГ), конъюгат, в котором белок, обладающий превосходными свойствами длительного действия, такой как альбумин или иммуноглобулин, связан с производным оксинтомодулина, конъюгат, в котором жирная кислота, обладающая способностью к связыванию с альбумином in vivo, связана с производным оксинтомодулина, или конъюгат, в котором производное оксинтомодулина инкапсулировано в биоразлагаемых наночастицах.
Как используют в данном описании, термин непептидильный полимер относится к биосовместимому полимеру, включающему два или более повторяющихся звеньев, связанных друг с другом любой ковалентной связью вместо пептидной связи. В настоящем изобретении непептидильный полимер можно использовать взаимозаменяемо с непептидильным линкером.
Пептидный линкер, используемый в слитом белке, полученном традиционным способом слияния в рамке считывания, имеет недостатки, состоящие в том, что он легко расщепляется протеиназой in vivo, и, следовательно, желаемый эффект увеличения периода полувыведения активного лекарственного средства в сыворотке за счет носителя не может быть получен. Тем не менее, в настоящем изобретении можно использовать полимер, обладающий устойчивостью к протеиназе, для поддержания периода полувыведения пептида в сыворотке, аналогично носителю. Таким образом, в настоящем изобретении можно использовать любой непептидильный полимер без ограничения, если он представляет собой полимер, обладающий упомянутой выше функцией, т.е. полимер, обладающий устойчивостью к протеиназе in vivo. Непептидильный полимер имеет молекулярную массу в диапазоне от 1 до 100 кДа и предпочтительно от 1 до 20 кДа. Непептидильный полимер по настоящему изобретению, связанный с областью Fc иммуноглобулина, может представлять собой один вид полимера или комбинацию разных полимеров.
Непептидильный полимер, используемый в настоящем изобретении, может иметь активную группу, способную к связыванию с областью Fc иммуноглобулина и белковым лекарственным средством. Активная группа на обоих концах непептидильного полимера предпочтительно выбрана из группы, состоящей из активной альдегидной группы, пропиональдегидной группы, бутиральдегидной группы, малеимидной группы и производного сукцинимида.
Производное сукцинимида может представлять собой сукцинимидилпропионат, гидроксисукцинимидил, сукцинимидилкарбоксиметил или сукцинимидилкарбонат. В частности, когда непептидильный полимер имеет активную альдегидную группу на его обоих концах, неспецифические взаимодействия можно свести к минимуму, и физиологически активный полипептид и иммуноглобулин могут быть эффективно связаны с обоими концами непептидильного полимера соответственно. Конечный продукт, образованный путем восстановительного алкилирования альдегидной связью, значительно более стабилен, чем связанный амидной связью. Альдегидная активная группа селективно связывается с N-концом при низком pH и может образовать ковалентную связь с остатком лизина при высоком pH, таком как pH 9,0.
Активные группы на обоих концах линкера, т.е. непептидильного полимера, могут быть одинаковыми или разными. Например, непептидильный полимер может содержать на одном конце малеимидную группу, а на другом конце - альдегидную группу, пропиональдегидную группу или бутиральдегидную группу. Для получения конъюгата длительного действия по настоящему изобретению при использовании в качестве непептидильного полимера полиэтиленгликоля, содержащего активную гидроксигруппу на его обоих концах, эта гидроксигруппа может быть активирована с образованием различных активных групп с помощью известных химических реакций, либо можно использовать полиэтиленгликоль, содержащий имеющуюся в продаже модифицированную активную группу.
Конъюгат по настоящему изобретению может представлять собой конъюгат, в котором каждый конец непептидильного полимера связан с областью Fc иммуноглобулина и с аминной или тиольной группой производного оксинтомодулина соответственно.
При этом в настоящем изобретении оба конца непептидильного полимера включают активные группы, с которыми может быть связана область Fc иммуноглобулина и белковое лекарственное средство. Примеры активных групп включают, но не ограничены ими, альдегидную группу, пропиональдегидную группу или бутиральдегидную группу, малеимидную группу, производное сукцинимида (сукцинимидилпропионат, гидроксисукцинимидил, сукцинимидилпропионат-карбоксиметил или сукцинимидилкарбонат) и т.п.
Активные группы на обоих концах линкера, т.е. непептидильного полимера, могут быть одинаковыми или разными. Например, непептидильный полимер может содержать на одном конце малеимидную группу, а на другом конце - альдегидную группу, пропиональдегидную группу или бутиральдегидную группу. Например, когда непептидильный полимер содержит активную альдегидную группу на одном конце и активную малеимидную группу на другом конце, неспецифические взаимодействия можно свести к минимуму, и физиологически активный полипептид и иммуноглобулин могут быть эффективно связаны с обоими концами непептидильного полимера. Непептидильный полимер, который можно использовать в настоящем изобретении, может быть выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимера этиленгликоля/пропиленгликоля, поливинилового спирта, поливини- 12 034499 лэтилового эфира, биоразлагаемых полимеров, таких как PLA (полимолочная кислота) и PLGA (полимолочно-гликолевая кислота), липидных полимеров, гиалуроновой кислоты и их комбинаций. Предпочтительно непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль. Кроме того, его производные, известные в данной области техники, и производные, которые могут быть легко получены способом, известным в данной области техники, также включены в объем настоящего изобретения.
В примере настоящего изобретения конъюгат синтезировали путем связывания оксинтомодулина или его производного с областью Fc иммуноглобулина посредством ковалентной связи, используя непептидильный полимер ПЭГ, включающий одну пропиональдегидную группу или обе группы, малеимидную и альдегидную.
Конъюгат по настоящему изобретению обладает превосходными активностями по отношению к рецептору GLP-1 и к рецептору глюкагона по сравнению с нативным оксинтомодулином. Кроме того, он связан с областью Fc, что увеличивает период полувыведения из крови in vivo для поддержания его активности in vivo в течение длительного периода времени.
Как используют в данном описании, термин консервант относится к веществу, используемому для предотвращения аномальных взаимодействий или распада, вызванных микробным загрязнением. Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать консервант. Консервант, как правило, применяют в композициях многократного дозирования, которые с наибольшей вероятностью загрязняются микроорганизмами, но не только в них и может также применяться в лиофилизированных композициях или композициях однократного дозирования для предотвращения загрязнения микроорганизмами. Жидкая композиция по настоящему изобретению может содержать один или более чем один консервант, выбранный из мета-крезола, фенола и бензилового спирта. Концентрация консерванта в жидкой композиции может составлять 0,001-1% (мас./об.). В частности, консервант, включенный в жидкую композицию по настоящему изобретению, предпочтительно представляет собой мета-крезол. Жидкая композиция по настоящему изобретению может представлять собой композицию для введения многократных доз.
В данном описании также раскрыта фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения ожирения или диабета, содержащая описанную выше жидкую композицию.
Как используют в данном описании, термин предупреждение относится ко всем действиям, ингибирующими или замедляющим развитие заболевания-мишени. Как используют в данном описании, термин предупреждение означает введение конъюгата по настоящему изобретению для ингибирования или замедления развития диабетических состояний, таких как аномальные уровни глюкозы в крови или аномальная секреция инсулина, или состояний ожирения, таких как увеличение массы тела или жировой ткани.
Как используют в данном описании, термин лечение относится ко всем действиям, облегчающим, улучшающим или ослабляющим симптомы развившегося заболевания. Как используют в данном описании, термин лечение означает введение конъюгата по настоящему изобретению для облегчения, улучшения или ослабления описанных выше диабетических состояний или состояний ожирения для нормализации уровней глюкозы в крови и секреции инсулина, а также уменьшения массы тела или жировой ткани.
Как используют в данном описании, термин ожирение относится к избыточному количеству жировой ткани. Индекс массы тела (= масса (кг), деленная на рост (м)), равный 25 или более, определяют как ожирение. Ожирение, как правило, является результатом нарушения энергетического баланса, при котором потребление энергии превышает затраты энергии. Ожирение представляет собой метаболическое заболевание, влияющее на весь организм и с высокой вероятностью приводящее к диабету и гиперлипидемии. Кроме того, ожирение связано с половой дисфункцией, артритом и повышенным риском развития сердечно-сосудистых заболеваний, а также в некоторых случаях связано с развитием рака.
Как используют в данном описании, термин диабет представляет собой вид метаболического заболевания, при котором секреция инсулина недостаточна или нормальные функции не выполняются. Диабет характеризуется повышенными уровнями глюкозы в крови и вызывает различные проблемы со здоровьем. В случае диабета глюкоза выводится с мочой.
Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или разбавитель. Как используют в данном описании, термин фармацевтически приемлемый означает количество, достаточное для проявления терапевтических эффектов и не вызывающее побочных эффектов. Доза активного ингредиента фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть легко определена специалистами в данной области техники в зависимости от типа заболевания, возраста пациента, массы, состояния здоровья, пола и чувствительности к лекарственному средству, пути введения, режима введения, частоты введения, продолжительности лечения, лекарственных средств, применяемых в комбинации или одновременно с композицией по данному изобретению, и от других факторов, известных в области медицины.
Также в данном описании раскрыт способ предупреждения или лечения ожирения или диабета, включающий введении субъекту жидкой композиции.
В данном случае жидкая композиция, ожирение и диабет являются такими, как описано выше.
- 13 034499
Как используют в данном описании, термин субъект относится к субъекту с подозрением на ожирение или диабет. В частности, этот термин означает млекопитающих, включая людей, крыс и домашних животных, страдающих или обладающих риском развития описанного выше заболевания. Кроме того, субъект может представлять собой любого субъекта, которого можно лечить жидкой композицией производного по настоящему изобретению.
Терапевтический способ может включать введение фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей жидкую композицию. Суммарная суточная доза композиции может быть определена на основании соответствующего медицинского заключения врача, и композицию можно вводить один раз или несколько раз. Однако в свете цели настоящего изобретения конкретная терапевтически эффективная доза композиции для какого-либо конкретного пациента может варьировать в зависимости от различных факторов, хорошо известных в области медицины, включающих вид и степень ответа, который должен быть достигнут, конкретные композиции в том отношении, применяют ли совместно с ними другие ингредиенты, возраст пациента, массу тела, состояние здоровья, пол и режим питания, время и путь введения, скорость секреции композиции, продолжительность лечения, другие лекарственные средства, применяемые в комбинации или одновременно с композицией по настоящему изобретению, а также другие факторы, известные в области медицины.
Полезные эффекты изобретения
Жидкая композиция по изобретению, содержащая конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия, содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество и не содержит сывороточный альбумин человека и факторы, являющиеся потенциально вредными для организма человека, и, таким образом, нечувствительна к вирусной инфекции. Кроме того, конъюгат производного оксинтомодулина по настоящему изобретению содержит производное оксинтомодулина, связанное с областью Fc иммуноглобулина, и, таким образом, обладает большой молекулярной массой, длительной физиологической активностью и превосходной стабильностью при хранении по сравнению с нативным оксинтомодулином.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1а показан график, на котором представлены результаты, полученные при очистке монопэгилированного производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) на колонке для очистки SOURCE S.
На фиг. 1b показан график, на котором представлены результаты, полученные при очистке конъюгата моно-пэгилированного производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина на колонке для очистки SOURCE 15Q.
На фиг. 1с показан график, на котором представлены результаты, полученные при очистке конъюгата моно-пэгилированного производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина на колонке для очистки SOURCE ISO.
На фиг. 2а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 3 после 0-2 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 2а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 2b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH с помощью Э-ВЭЖХ в примере 3 после 0-2 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 2b демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 2с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 3 после 0-2 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 2с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 3 а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от вида сахарного спирта и присутствия или отсутствия изотонического агента с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 4 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 3а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 3b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от вида сахарного спирта и присутствия или отсутствия изотонического агента с помощью Э-ВЭЖХ в примере 4 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 3b демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
- 14 034499
На фиг. 3 с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от вида сахарного спирта и присутствия или отсутствия изотонического агента с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 4 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 3с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 4а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации сахарного спирта с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 5 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 4а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 4b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации сахарного спирта с помощью Э-ВЭЖХ в примере 5 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 4b демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 4с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации сахарного спирта с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 5 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 4с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 5а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации поверхностно-активного вещества и присутствия или отсутствия аминокислоты с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 6 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 5а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 5b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации поверхностно-активного вещества и присутствия или отсутствия аминокислоты с помощью Э-ВЭЖХ в примере 6 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 5b показывает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 5с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации поверхностно-активного вещества и присутствия или отсутствия аминокислоты с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 6 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 5с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 6а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и концентрации сахарного спирта с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 7 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 6а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 6b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и концентрации сахарного спирта с помощью Э-ВЭЖХ в примере 7 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 6b демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 6с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и концентрации сахарного спирта с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 7 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 6с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 7а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и вида буфера с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 8 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 7а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 7b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и вида буфера с помощью Э-ВЭЖХ в примере 8 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график
- 15 034499 на фиг. 7b демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 7с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и вида буфера с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 8 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 7с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 8а показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от присутствия или отсутствия консерванта и концентрации производного оксинтомодулина длительного действия с помощью ИО-ВЭЖХ в примере 9 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 8а демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 8b показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от присутствия или отсутствия консерванта и концентрации производного оксинтомодулина длительного действия с помощью Э-ВЭЖХ в примере 9 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 8b демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
На фиг. 8с показана графическая диаграмма, на которой представлены результаты, полученные при оценке стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от присутствия или отсутствия консерванта и концентрации производного оксинтомодулина длительного действия с помощью ОФ-ВЭЖХ в примере 9 после 0-4 недель хранения при 25°C. Каждый график на фиг. 8с демонстрирует процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины.
Осуществление изобретения
Далее настоящее изобретение описано более подробно со ссылкой на примеры. Тем не менее, понятно, что эти примеры предназначены только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Пример 1. Синтез оксинтомодулина и производных оксинтомодулина.
С целью измерения стабильностей оксинтомодулина и производных оксинтомодулина в жидкой композиции были синтезированы производные оксинтомодулина, имеющие аминокислотные последовательности, показанные в табл. 1.
- 16 034499
Таблица 1 Оксинтомодулин и производные оксинтомодулина
SEQ Ю NO Последовательность
SEQ ID NO: 1 HSQGTFTSDYSKYLD SRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 2 CA-SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 3 CA-SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNTGPSSGAPPPS
SEQ ID NO: 4 CA-GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS
SEQ ID NO: 5 C A-GQGTFTSD YSRQMEEEAVRLFIEWLKNGGP S SGAPPPS
SEQ ID NO: 6 CA-GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAAHSQGTFTSDYSKYLD
SEQ ID NO: 7 CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWLMNTK
SEQ ID NO: 8 CA-SQGTFTSDLSRQLEEEAVRLFIEWLMNK
SEQ ID NO: 9 CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVXLFIEWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 10 CA-SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNGGPSSGAPPPSK
SEQ ID NO: 11 CA-GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAAHSQGTFTSDYSRYLDK
SEQ ID NO: 12 CA-SQGTFTSDYSRYLDGGGHGEGTFTSDLSKQMEEEAVK
SEQ ID NO: 13 CA-SQGTFTSDYSRYLDXEAVXLFIEWLMNTK
SEQ ID NO: 14 CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVXLFIXWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 15 CA-GQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIXWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 16 CA-SQGTFTSDLSRQLEGGGHSQGTFTSDLSRQLEK
SEQ ID NO: 17 CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWIRNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 18 CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVRLFIEWIRNGGPSSGAPPPSK
SEQ ID NO: 19 CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVKLFIEWIRNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 20 CA-SQGTFTSDYSRYLDEEAVKLFIEWIRNGGPSSGAPPPSK
SEQ ID NO: 21 CA-SQGTFTSDYSRQLEEEAVRLFIEWVRNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 22 DA-SQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTK
SEQ ID NO: 23 SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 25 SEQ ID NO: 26 SEQ ID NO: 27 SEQ ID NO: 28 SEQ ID NO: 29 HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVCWLMNT HAibQGTFTSDY SKYLDEKRAK EFVQWLMNTC HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC HAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC HAibQGTFTSDYSKYLDEQAAKEFICWLMNT HAibQGTFTSDY SKYLDEKRAK EFVQWLMNT H(d)SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 30 CA-SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 31 CA-(d)SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA
SEQ ID NO: 32 CA-AibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC
SEQ ID NO: 33 HAibQGTFTSDYAKYLDEKRAKEFVQWLMNTC
SEQ ID NO: 34 YAibQGTFTSDYSKYLDEKRAKEFVQWLMNTC
В приведенной выше таблице аминокислотные остатки, указанные полужирным шрифтом, обозначают аминокислоты, образующие кольца, и аминокислотные остатки, указанные как X, означают альфаметил-глютаровую кислоту, не являющуюся нативной аминокислотой. Кроме того, CA означает 4-имидазоацетил, DA означает дезамино-гистидил a (d)S означает d-серин.
Пример 2. Получение конъюгата, содержащего производное оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина (производное оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25), связанное с областью Fc иммуноглобулина).
Во-первых, для пэгилирования MAL-10K-ALD PEG по остатку цистеина в аминокислотном положении 30 производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) давали возможность взаимодействовать друг с другом производному оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и MAL-10K-ALD PEG в молярном отношении 1:3 и при концентрации белка 3 мкг/мл при комнатной температуре в течение 3 ч. В данном случае реакцию проводили в 50 мМ Трис-буфере (pH 8,0) в присутствии 1 М гуанидина. После завершения реакции реакционный раствор наносили на колонку SOURCE S для очистки производного оксинтомодулина, моно-пэгилированного по остатку цистеина (колонка: SOURCE S, скорость тока: 2,0 мл/мин, градиент: А 0^100% 50 мин В (А: 20 мМ Na-цитрат, pH 3,0 + 45% этанол, В: А + 1 М KCl)) (фиг. 1а). Фиг. 1а представляет собой график, на котором представлены результаты, полученные при очистке монопэгилированного производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) на колонке для очистки SOURCE S.
Затем очищенное моно-пэгилированное производное оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина подвергали взаимодействию друг с другом при молярном отношении 1:5 и концентрации
- 17 034499 белка 20 мг/мл при 4°C в течение 16 ч. Реакцию проводили в 100 мМ калий-фосфатном буфере (pH 6,0) в присутствии 20 мМ цианоборгидрида натрия (SCB) в качестве восстанавливающего агента. После завершения реакции реакционную смесь наносили на колонку для очистки SOURCE 15Q (колонка: SOURCE 15Q, скорость тока: 2,0 мл/мин, градиент: А 0^-4% 1 мин В^-20% 80 мин В (А: 20 мМ TrisHCl, pH 7,5, В: А + 1 М NaCl)) (фиг. 1b) и на колонку для очистки SOURCE ISO (колонка: SOURCE ISO, скорость тока: 2,0 мл/мин, градиент: В 0^-100% 100 мин А (А: 20 мМ Трис-HCl, pH 7,5, В: А + 1,1 М сульфат аммония (СА)) (фиг. 1с) для очистки конъюгата, содержащего производное оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина. Фиг. 1b представляет собой график, на котором представлены результаты, полученные в результате очистки конъюгата моно-пэгилированного производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина на колонке для очистки SOURCE 15Q, и фиг. 1с представляет собой график, на котором представлены результаты, полученные в результате очистки конъюгата моно-пэгилированного производного оксинтомодулина (SEQ ID NO: 25) и Fc иммуноглобулина на колонке для очистки Source ISO.
Конъюгат производного оксинтомодулина, полученный, как описано выше, был разработан для увеличения периода полувыведения производного оксинтомодулина из крови. Он содержит область Fc иммуноглобулина, непептидильный полимер и производное оксинтомодулина, ковалентно связанные друг с другом сайт-специфическим путем, и обладает значительно увеличенным периодом полувыведения из крови.
Пример 3. Оценка стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH.
С целью оценки стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия (полученного в примере 2) в жидких композициях конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, показанных в табл. 2 при 25°C в течение 0-2 недель, а затем анализировали с помощью ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ИО-ВЭЖХ), эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (Э-ВЭЖХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ). Для хранения конъюгата производного оксинтомодулина использовали цитратный буфер в качестве буфера, маннит в качестве сахарного спирта и полисорбат 20 в качестве неионогенного поверхностно-активного вещества. В табл. 3-5 ИО-ВЭЖХ (%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ (%) показана площадь %/исходная площадь %, что означает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 3 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 4 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 5 показана площадь (%) ОФ-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
Таблица 2
pH Буфер Изотонический агент Сахарный спирт Поверхностноактивное вещество Другое Оксинтомодулин длительного действия
#1 4,8 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#2 5,2 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#3 5,6 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#4 6,0 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#5 6,4 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
Таблица 3
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
2 недели 97,6 97,2 96,8 94,0 85,2
- 18 034499
Таблица 4
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
2 недели 99,7 99,8 99,8 99,3 99,4
Таблица 5
ОФ-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
2 недели 83,0 84,4 86,7 65,5 74,0
Как видно из результатов ИО-ВЭЖХ (%) в табл. 3, конъюгат производного оксинтомодулина был более стабильным при более низком pH. В результатах Э-ВЭЖХ в табл. 4 конъюгат производного оксинтомодулина был наиболее стабилен при pH 5,2, и по результатам ОФ-ВЭЖХ в табл. 5 конъюгат производного оксинтомодулина был наиболее стабилен при pH 5,6. Хотя стабильность при pH не различалась между способами анализа, различие в удержании между значениями pH была самой высокой при анализе с помощью ОФ-ВЭЖХ. Это позволяет предположить, что конъюгат производного оксинтомодулина был наиболее стабилен при pH 5,6.
Пример 4. Оценка стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от вида сахарного спирта и от присутствия или отсутствия изотонического средства.
Авторы настоящего изобретения исследовали влияние вида сахарного спирта в качестве стабилизатора и присутствия или отсутствия хлорида натрия в качестве изотонического агента на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, используя цитратный буфер (pH 5,6), выбранный в примере 3, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, представленных в табл. 6, при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В табл. 7-9 ниже ИО-ВЭЖХ (%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ показана площадь %/исходная площадь %, что означает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 7 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 8 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 9 показана площадь (%) ОФ-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
Таблица 6
pH Буфер Изотонический агент Сахарный спирт Поверхностноактивное вещество Другое Оксинтомодулин длительного действия
#1 5,6 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#2 5,6 20 мМ NaЦитрат - 10% Сорбит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#3 5,6 20 мМ Na- цитрат - 10% Глицерин 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#4 5,6 20 мМ Na- цитрат 150 мМ NaCl 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
- 19 034499
Таблица 7
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 98,8 98,8 88,3 98,3
2 недели 97,2 96,9 79,0 95,0
3 недели 94,4 94,5 63,0 93,8
4 недели 91,6 91,8 55,8 91,6
Таблица 8
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 99,9 100,0 92,0 100,0
2 недели 99,7 99,8 84,7 99,9
3 недели 99,2 99,4 79,2 99,5
4 недели 98,4 98,6 76,0 98,8
Таблица 9
ОФ-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 98,9 98,7 90,0 98,4
2 недели 96,0 95,6 80,6 95,0
3 недели 94,0 93,6 75,2 92,9
4 недели 92,6 91,1 70,0 90,1
Как видно из табл. 6-9, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был более стабильным в манните или сорбите, чем в глицерине, при одной и той же концентрации. Результаты ОФ-ВЭЖХ показали, что конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был немного стабильнее в манните, чем в сорбите. Кроме того, стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия значимо не различалась в зависимости от присутствия и отсутствия хлорида натрия в качестве изотонического средства.
Пример 5. Оценка стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации сахарного спирта.
Авторы настоящего изобретения исследовали влияние концентрации сахарного спирта в качестве стабилизатора на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, используя цитратный буфер (pH 5,6) и маннит, выбранные в приведенных выше примерах, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, представленных в табл. 10, при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В табл. 11, 12 и 13 ниже ИО-ВЭЖХ (%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ (%) показана площадь %/исходная площадь %, что показывает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 11 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 12 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 13 показана площадь (%) ОФ-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
- 20 034499
Таблица 10
pH Буфер Изотонический агент Сахарный спирт Поверхностноактивное вещество Другое Оксинтомодулин длительного действия
#1 5,6 20 мМ NaЦитрат - 2% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#2 5,6 20 мМ NaЦитрат - 5% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#3 5,6 20 мМ NaЦитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#4 5,6 20 мМ NaЦитрат - 15% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
Таблица 11
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 79,7 98,7 98,8 79,0
2 недели 57,6 97,6 97,9 61,0
3 недели 39,8 97,1 97,2 49,2
4 недели 34,9 95,5 95,5 43,4
Таблица 12
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 97,3 99,4 100,0 99,5
2 недели 89,0 99,4 99,8 95,4
3 недели 79,4 99,3 99,4 90,5
4 недели 74,7 98,4 99,1 83,5
Таблица 13
ОФ-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 89,8 93,2 98,2 95,2
2 недели 80,3 85,3 94,7 90,9
3 недели 71,9 78,5 91,1 84,1
4 недели 66,0 71,0 89,1 76,5
Как видно из табл. 10-13, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был стабилен в присутствии 5% маннита или 10% маннита. Однако в присутствии 2% маннита или 15% маннита образовывался осадок белка. Результаты ИО-ВЭЖХ или Э-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия был сходным между 10% маннитом и 5% маннитом. Результаты ОФ-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия была выше в 10% маните, чем в 5% манните.
Пример 6. Оценка стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от концентрации поверхностно-активного вещества и присутствием или отсутствием аминокислоты.
Авторы настоящего изобретения протестировали влияние концентрации поверхностно-активного вещества в качестве стабилизатора и присутствия или отсутствия аминокислоты на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. Используя цитратный буфер (pH 5,6) и цитратный буфер и 10% маннит, выбранные в приведенных выше примерах, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, представленных в табл. 14, при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В табл. 15-17 ИОВЭЖХ (%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ (%)показана площадь %/исходная площадь %, что показывает
- 21 034499 процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 15 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 16 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 17 показана площадь (%) ОФВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
Таблица 14
pH Буфер Изотонический агент Сахарный спирт Поверхностноактивное вещество Другое Оксинтомодулин длительного действия
#1 5,6 20 мМ Na- цитрат - 10% Маннит 0,005% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#2 5,6 20 мМ Na- цитрат - 10% Маннит 0,02% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#3 5,6 20 мМ Naцитрат - 10% Маннит 0,05% Полисорбат 20 - 10 мг/мл
#4 5,6 20 мМ Na- цитрат - 10% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл метионин 10 мг/мл
Таблица 15
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 96,0 96,5 96,4 96,2
2 недели 95,1 94,7 95,1 95,3
3 недели 92,7 92,0 92,2 92,7
4 недели 89,7 89,1 89,2 89,7
Таблица 16
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 99,4 99,7 99,7 99,6
2 недели 99,3 99,5 99,2 99,3
3 недели 98,3 98,1 98,3 99,1
4 недели 97,3 97,1 97,3 97,9
Таблица 17
ОФ-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 97,3 97,8 98,1 97,4
2 недели 79,2 79,2 77,5 79,7
3 недели 71,5 71,6 69,5 73,3
4 недели 65,1 65,0 65,0 67,8
Как видно из результатов в табл. 14-17, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был наиболее стабильным в композиции, содержащей 0,02% полисорбат 20 и 0,1 мг/мл метионина.
Пример 7. Оценка стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и концентрации сахарного спирта.
Авторы настоящего изобретения исследовали влияние pH и концентрации сахарного спирта в качестве стабилизатора на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, используя 0,02% полисорбат 20 и 0,1 мг/мл метионина, выбранных в описанных выше Примерах, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, представленных в табл. 18, при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В табл. 19-21 ИО-ВЭЖХ (%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ (%) показана площадь
- 22 034499 %/исходная площадь %, что показывает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 19 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 20 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 21 показана площадь (%) ОФ-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
Таблица 18
pH Буфер Изотонический агент Сахарный спирт Поверхностноактивное вещество Другое Оксинтомодулин длительного действия
#1 5,2 20 мМ Na- цитрат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#2 5,2 20 мМ Na- цитрат - 10% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#3 5,2 20 мМ Na- цитрат - 15% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#4 5,6 20 мМ Na- цитрат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#5 5,6 20 мМ Na- цитрат - 10% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#6 5,6 20 мМ Na- цитрат - 15% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#7 6,0 20 мМ Na- цитрат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#8 6,0 20 мМ Na- цитрат - 10% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#9 6,0 20 мМ Na- цитрат - 15% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
Таблица 19
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5 #6 #7 #8 #9
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 99,4 99,6 97,1 97,2 97,6 98,0 90,6 92,9 93,4
2 недели 97,5 97,8 90,5 93,8 94,1 93,2 81,5 83,6 85,6
3 недели 93,0 93,6 82,6 86,0 86,9 87,1 71,2 74,6 77,0
4 недели 90,0 90,5 71,1 85,0 85,6 85,7 62,7 66,3 68,9
Таблица 20
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5 #6 #7 #8 #9
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 98,8 99,5 98,8 99,5 99,3 98,5 99,6 100,0 100,7
2 недели 98,8 99,1 91,1 98,4 97,1 96,9 97,3 98,3 97,9
3 недели 97,7 98,3 96,4 98,1 98,4 98,2 98,1 99,1 100,8
4 недели 98,0 98,5 94,9 97,9 98,3 98,3 97,6 98,2 99,0
- 23 034499
Таблица 21
ОФ-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5 #6 #7 #8 #9
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 78,2 78,2 42,1 88,2 90,7 89,4 99,9 99,1 100,7
2 недели 60,7 58,6 - 80,4 80,2 80,6 96,8 93,4 92,0
3 недели 47,5 41,9 - 79,4 77,3 69,8 97,6 92,8 93,6
4 недели 34,8 28,0 - 72,8 65,0 62,6 96,9 91,1 88,9
Как видно из результатов в приведенных выше таблицах, результаты ИО-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия была выше при значениях pH порядка pH 5,2, pH 5,6 и pH 6,0. Результаты ОФ-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия была выше при значениях pH порядка pH 6,0, pH 5,6 и pH 5,2.
Результаты Э-ВЭЖХ показали, что стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия значимо не различаются при pH 5,2, pH 5,6 и pH 6,0. Иными словами, результаты ИО-ВЭЖХ, ОФ-ВЭЖХ и Э-ВЭЖХ показали, что конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был стабилен при pH 5,6.
В то же время, результаты ИО-ВЭЖХ и Э-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия значимо не различаются между концентрациями маннита при pH 5,6. Однако результаты ОФ-ВЭЖХ показали, что конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был более стабильным в 5% манните, чем в 10% или 15% манните при pH 5,6.
Пример 8. Оценка стабильности конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия в зависимости от pH и вида буфера.
Авторы настоящего изобретения исследовали влияния pH и вида буфера в качестве стабилизатора на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, используя 0,02% полисорбат 20, 0,1 мг/мл метионина и 5% маннит, выбранные в приведенных выше примерах, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, представленных в табл. 22 ниже, при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ.
В табл. 23-25 ниже ИО-ВЭЖХ (%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ (%) показана площадь %/исходная площадь %, что показывает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 23 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 24 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 25 показана площадь (%) ОФ-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
Таблица 22
pH Буфер Изотонический агент Сахарный спирт Поверхностноактивное вещество Другое Оксинтомодулин длительного действия
#1 5,6 20 мМ Naцитрат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#2 5,8 20 мМ Naцитрат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#3 5,8 20 мМ Naацетат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#4 5,8 10 мМ гистидин - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
#5 5,8 10 мМ Naфосфат - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метионин 10 мг/мл
- 24 034499
Таблица 23
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 97,6 96,8 96,5 97,2 96,1
2 недели 93,9 91,4 90,6 92,6 89,6
3 недели 90,4 88,1 86,9 89,2 84,4
4 недели 90,1 87,0 84,8 87,4 81,7
Таблица 24
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4 #5
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 99,4 99,8 99,8 99,7 99,7
2 недели 100,5 100,2 100,0 100,0 99,3
3 недели 100,4 100,2 99,1 99,6 98,2
4 недели 100,1 99,2 99,0 98,8 97,7
Таблица 25
0 недель 1 неделя 2 недели #1 100,0 99,1 97,6 ( #2 100,0 97,2 97,7 )Ф-ВЭЖХ (% #3 100,0 99,4 99,4 ) #4 100,0 99,5 99,8 #5 100,0 99,0 99,3
3 недели 96,1 98,7 97,2 98,9 97,4
4 недели 98,0 96,6 97,6 98,3 98,1
Как видно из результатов в табл. 23-25, результаты Э-ВЭЖХ или ОФ-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия значимо не различается между pH 5,6 и pH 5,8. Результаты ИО-ВЭЖХ показали, что конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был более стабильным при pH 5,6, чем при pH 5,8. Результаты Э-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия значимо не различается между буферами при одном и том же pH. Кроме того, результаты ИО-ВЭЖХ или ОФ-ВЭЖХ показали, что конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия был наиболее стабильным в гистидине при одном и том же pH.
Пример 9. Оценка влияний присутствия или отсутствия консерванта и концентрации конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия.
Авторы настоящего изобретения исследовали влияния присутствия или отсутствия консерванта в качестве стабилизатора и конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия на стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия. В частности, используя гистидиновый буфер (pH 5,6), 0,02% полисорбат 20, 0,1 мг/мл метионина и 5% маннит, выбранные в приведенных выше Примерах, конъюгат производного оксинтомодулина длительного действия хранили в композициях, представленных в табл. 26 ниже, при 25°C в течение 0-4 недель, а затем анализировали с помощью ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ и ОФ-ВЭЖХ. В табл. 27-29 ИО-ВЭЖХ(%), Э-ВЭЖХ (%) и ОФ-ВЭЖХ (%) показана площадь %/исходная площадь %, что показывает процент удерживания конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия относительно исходной величины. В табл. 27 показана площадь (%) ИО-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, в табл. 28 показана площадь (%) Э-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения, и в табл. 29 показана площадь (%) ОФ-ВЭЖХ конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия после хранения.
- 25 034499
Таблица 26
pH Буфер Изотонически й агент Сахарны й спирт Поверхностно -активное вещество Другое Оксинтомодули н длительного действия
# 1 5, 6 10 мМ Г истиди н - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метиони и 10 мг/мл
# 2 5, 6 10 мМ Гистиди н 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метиони н 0,27% метакрезол 10 мг/мл
# 3 5, 6 10 мМ Г истиди и - 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метиони н 40 мг/мл
# 4 5, 6 10 мМ Г истиди и 5% Маннит 0,02% Полисорбат 20 0,1 мг/мл Метиони н 0,27% метакрезол 40 мг/мл
Таблица 27
ИО-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 97,9 98,2 97,7 97,1
2 недели 95,3 95,7 95,1 94,3
3 недели 93,6 92,9 93,4 91,8
4 недели 91,3 90,4 90,2 88,4
Таблица 28
Э-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 99,7 99,6 99,5 99,4
2 недели 99,3 99,1 99,0 97,9
3 недели 99,1 98,9 98,7 97,0
4 недели 98,8 98,0 98,0 95,4
Таблица 29
ОФ-ВЭЖХ (%)
#1 #2 #3 #4
0 недель 100,0 100,0 100,0 100,0
1 неделя 100,1 100,0 99,8 99,7
2 недели 99,4 99,5 99,2 99,1
3 недели 98,3 98,3 98,8 98,5
4 недели 98,8 97,9 97,7 97,4
Как видно в табл. 26-29, результаты ИО-ВЭЖХ, Э-ВЭЖХ или ОФ-ВЭЖХ показали, что стабильность конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия не изменилась даже в присутствии консерванта и не различалась в зависимости от его концентрации.
Хотя в иллюстративных целях раскрыты предпочтительные воплощения настоящего изобретения, специалистам в данной области техники понятно, что возможны различные модификации, дополнения и замены без отклонения от объема и сущности изобретения, раскрытого в прилагаемой формуле изобретения.

Claims (22)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, содержащая фармакологически активное количество конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, где этот конъюгат производного оксинтомодулина содержит производное оксинтомодулина, представляющее собой физиологически активный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;
    область Fc иммуноглобулина (Ig);
    непептидильный полимер, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля/пропиленгликоля, поливиниловый спирт, поливинилэтиловый эфир, полимолочную кислоту (PLA), полимолочно-гликолевую кислоту (PLGA), липидный полимер, гиалуроновую кислоту или их комбинацию и где этот непептидильный полимер ковалентно связывает производное оксинтомодулина и область Fc Ig;
    и не содержащий альбумин стабилизатор, который содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество.
  2. 2. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п.1, где стабилизатор дополнительно содержит один/одну или более изотонических агентов, сахаров, многоатомных спиртов или аминокислот.
  3. 3. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п. 1 или 2, где область Fc Ig представляет собой область Fc IgG4, предпочтительно область Fc агликозилированного IgG4 человека.
  4. 4. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-3, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
  5. 5. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-4, где сахарный спирт представляет собой один или более чем один из маннита, сорбита или глицерина.
  6. 6. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п.5, где концентрация сахарного спирта в жидкой композиции составляет 2-15% (мас./об.).
  7. 7. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-6, где буфер представляет собой один или более чем один из цитратного, ацетатного, гистидинового или фосфатного буфера.
  8. 8. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-7, где буфер имеет pH в диапазоне от 4,5 до 7,0.
  9. 9. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.2-8, где изотонический агент представляет собой хлорид натрия.
  10. 10. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-9, где неионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат или полоксамер.
  11. 11. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п.10, где концентрация неионогенного поверхностно-активного вещества в жидкой композиции составляет 0,001-0,1% (мас./об.).
  12. 12. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.2-11, где аминокислота представляет собой метионин.
  13. 13. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-12, где стабилизатор содержит буфер, имеющий pH в диапазоне от 4,8 до 6,0, один или более чем один из маннита или сорбита, и полисорбат 20.
  14. 14. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.1-13, дополнительно содержащая один или более чем один консервант, где этот консервант представляет собой мета-крезол, фенол или бензиловый спирт, предпочтительно мета-крезол.
  15. 15. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п.14, где концентрация консерванта в жидкой композиции составляет 0,001-1% (мас./об.).
  16. 16. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п.14, представляющая собой композицию для введения многократных доз.
  17. 17. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, содержащая фармакологически эффективное количество конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, где этот конъюгат производного оксинтомодулина содержит производное оксинтомодулина, представляющее собой физиологически активный пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;
    область Fc Ig;
    - 27 034499 непептидильный полимер, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля/пропиленгликоля, поливиниловый спирт, поливинилэтиловый эфир, полимолочную кислоту (PLA), полимолочно-гликолевую кислоту (PLGA), липидный полимер, гиалуроновую кислоту или их комбинацию и где этот непептидильный полимер ковалентно связывает производное оксинтомодулина и область Fc Ig; и
    5-50 мМ гистидина; 2-15% (мас./об.) маннита; 0,01-1 мг/мл метионина и 0,001-0,1% (мас./об.) полисорбата 20.
  18. 18. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по п.17, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
  19. 19. Жидкая композиция конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия по любому из пп.17 или 18, дополнительно содержащая 0,001-1% (мас./об.) мета-крезола.
  20. 20. Способ получения жидкой композиции по любому из пп.1-13, включающий следующие стадии:
    а) получение конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия;
    б) смешивание конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного на стадии а), с не содержащим альбумин стабилизатором, который содержит буфер, сахарный спирт и неионогенное поверхностно-активное вещество.
  21. 21. Способ получения жидкой композиции по п.17 или 18, включающий следующие стадии:
    а) получение конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия;
    б) смешивание конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного на стадии а), с 5-50 мМ гистидина; 2-15% (мас./об.) маннита; 0,01-1 мг/мл метионина и 0,001-0,1% (мас./об.) полисорбата 20.
  22. 22. Способ по п.20 или 21, дополнительно включающий смешивание конъюгата производного оксинтомодулина длительного действия, полученного на стадии а), с одним/одной или более изотонических агентов, сахаров, многоатомных спиртов, аминокислот, консервантов или их комбинацией.
EA201791143A 2012-11-06 2013-11-06 Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина EA034499B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20120124725 2012-11-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201791143A1 EA201791143A1 (ru) 2017-11-30
EA034499B1 true EA034499B1 (ru) 2020-02-13

Family

ID=50684883

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201791143A EA034499B1 (ru) 2012-11-06 2013-11-06 Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
EA201590758A EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2013-11-06 Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
EA201992760A EA039082B1 (ru) 2012-11-06 2013-11-06 Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201590758A EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2013-11-06 Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
EA201992760A EA039082B1 (ru) 2012-11-06 2013-11-06 Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина

Country Status (27)

Country Link
US (3) US9724420B2 (ru)
EP (2) EP2916819B1 (ru)
JP (2) JP6363612B2 (ru)
KR (2) KR102311517B1 (ru)
CN (1) CN104884045B (ru)
AR (2) AR093387A1 (ru)
AU (3) AU2013342321B2 (ru)
BR (1) BR112015010235B1 (ru)
CA (1) CA2890324C (ru)
CL (1) CL2015001206A1 (ru)
DK (1) DK2916819T3 (ru)
EA (3) EA034499B1 (ru)
ES (1) ES2748158T3 (ru)
HK (1) HK1210044A1 (ru)
IL (2) IL238626B (ru)
MX (2) MX2015005698A (ru)
MY (2) MY168536A (ru)
NZ (3) NZ708103A (ru)
PE (1) PE20151421A1 (ru)
PH (2) PH12018501454A1 (ru)
PL (1) PL2916819T3 (ru)
PT (1) PT2916819T (ru)
SG (2) SG11201503370WA (ru)
TW (3) TWI602583B (ru)
UA (2) UA126651C2 (ru)
WO (1) WO2014073842A1 (ru)
ZA (1) ZA201503998B (ru)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2718318T3 (en) 2011-06-10 2018-11-05 Hanmi Science Co Ltd New oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical compositions for the treatment of obesity comprising these
WO2012173422A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Hanmi Science Co., Ltd. A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
KR101993393B1 (ko) * 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
EA034499B1 (ru) 2012-11-06 2020-02-13 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
KR20150096433A (ko) 2012-12-21 2015-08-24 사노피 이중 glp1/gip 또는 삼중 glp1/gip/글루카곤 효능제
EP3080152A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP3080154B1 (en) 2013-12-13 2018-02-07 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
MA43289B1 (fr) 2014-01-20 2019-12-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insuline à action prolongée et utilisation associée
AU2015242657B2 (en) * 2014-03-31 2020-05-21 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin Fc fragment linkage
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
AR100695A1 (es) 2014-05-30 2016-10-26 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para el tratamiento de diabetes mellitus que comprende insulina y un agonista dual glp-1 / glucagón
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
CN105435221B (zh) * 2014-09-22 2021-09-28 正大天晴药业集团股份有限公司 一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
WO2016108586A1 (ko) 2014-12-30 2016-07-07 한미약품 주식회사 안정성이 증가된 글루카곤 유도체
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
PE20240215A1 (es) 2015-06-30 2024-02-16 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Derivado de glucagon y una composicion que comprende un conjugado de accion prolongada del mismo
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
US10702606B2 (en) * 2015-12-10 2020-07-07 Menicon Co., Ltd. Peptide composition
TN2018000231A1 (en) 2015-12-31 2019-10-04 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Long-acting conjugate of triple glucagon/glp-1/gip receptor agonist
EP3479841A4 (en) * 2016-06-29 2020-03-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. GLUCAGON DERIVATIVE, CONJUGATE THEREOF, COMPOSITION COMPRISING SAME, AND THERAPEUTIC USE THEREOF
WO2018056764A1 (ko) 2016-09-23 2018-03-29 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
JOP20190097A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv الجلوبولينات المناعية واستخداماتها
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
TWI798209B (zh) 2017-03-23 2023-04-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 對胰島素受體有降低親和性之胰島素類似物之接合物及其用途
CN112912095A (zh) 2018-07-19 2021-06-04 D&D制药技术股份有限公司 包括多肽的药物组合物
US20200262887A1 (en) * 2018-11-30 2020-08-20 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
EP3939990A4 (en) * 2019-02-15 2023-05-24 Hanmi Fine Chemical Co., Ltd. NEW INTERMEDIATE USED FOR A BIOLOGICALLY ACTIVE POLYPEPTIDE AND METHOD FOR PREPARING IT
WO2021235915A1 (ko) 2020-05-22 2021-11-25 한미약품 주식회사 액상 제제

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100105494A (ko) * 2009-03-20 2010-09-29 한미홀딩스 주식회사 위치특이적 생리활성 폴리펩타이드 결합체의 제조방법
WO2012011752A2 (en) * 2010-07-21 2012-01-26 Hanmi Holdings Co., Ltd. Novel long-acting glucagon conjugate and pharmaceutical composition comprising the same for the prevention and treatment of obesity
KR20120043208A (ko) * 2010-10-26 2012-05-04 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
US8263084B2 (en) * 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
DE69731289D1 (de) 1996-03-18 2004-11-25 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
WO1999044630A1 (fr) 1998-03-06 1999-09-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparations exemptes de proteines
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7217845B2 (en) 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
EP1594530A4 (en) 2003-01-22 2006-10-11 Human Genome Sciences Inc HYBRID PROTEINS OF ALBUMIN
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
KR101135244B1 (ko) 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
ES2372495T3 (es) 2003-11-13 2012-01-20 Hanmi Holdings Co., Ltd Método para la producción en masa de la región constante de inmunoglobulina.
JP5185624B2 (ja) 2004-12-02 2013-04-17 ドマンティス リミテッド 血清アルブミンおよびｇｌｐ−１またはｐｙｙを標的とする二重特異性抗体
BRPI0606992A2 (pt) 2005-02-11 2009-07-28 Amylin Pharmaceuticals Inc análogo e polipeptìdeos hìbridos de gip com propriedades selecionáveis
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
KR101349808B1 (ko) 2005-06-13 2014-02-13 임페리얼 이노베이션스 리미티드 섭취행동에 관한 신규 화합물들 및 이들의 효능
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
EP2330124B1 (en) 2005-08-11 2015-02-25 Amylin Pharmaceuticals, LLC Hybrid polypeptides with selectable properties
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
CN101389648B (zh) 2006-02-22 2013-07-17 默沙东公司 肽胃泌酸调节素衍生物
CA2654055A1 (en) 2006-06-07 2007-12-21 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
GB0624868D0 (en) 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
EP2111414B1 (en) 2007-02-15 2014-07-02 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
CN101730523A (zh) * 2007-07-10 2010-06-09 伊莱利利公司 GLP-1-Fc融合蛋白质制剂
CN106106497B (zh) 2007-07-27 2022-02-22 拜耳知识产权有限责任公司 三元活性化合物结合物
KR20100058550A (ko) 2007-09-11 2010-06-03 몬도바이오테크 래보래토리즈 아게 녹농균 감염 치료시 치료제로서의 밴드 ３ 단백질 （８２４－８２９） 및／또는 멜라닌세포－자극 호르몬 방출－저해 인자의 용도
MX2010004298A (es) 2007-10-30 2010-05-03 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos que exhiben actividad antagonista de glucagon y agonista de glp-1.
US20090181037A1 (en) 2007-11-02 2009-07-16 George Heavner Semi-Synthetic GLP-1 Peptide-FC Fusion Constructs, Methods and Uses
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
MX2010012695A (es) 2008-06-17 2011-03-15 Univ Indiana Res & Tech Corp Analogos de glucagon que exhiben solubilidad y estabilidad aumentadas en soluciones reguladoras de ph fisiologico.
PA8830501A1 (es) 2008-06-17 2010-07-27 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonistas del receptor de glucagon/glp-1
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
EP2350118B1 (en) 2008-09-19 2016-03-30 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
BRPI0823379A2 (pt) 2008-12-15 2015-07-14 Zealand Pharma As Análogos de glucagon
RU2550696C2 (ru) 2008-12-19 2015-05-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Основанные на амидах пролекарства пептидов глюкагонового надсемейства
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
MX347295B (es) * 2009-03-20 2017-04-20 Amgen Inc Inmunoglobulinas portadoras y usos de las mismas.
WO2010148089A1 (en) 2009-06-16 2010-12-23 Indiana University Research And Technology Corporation Gip receptor-active glucagon compounds
JP6054742B2 (ja) 2009-07-13 2016-12-27 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ アシル化グルカゴン類似体
WO2011056713A2 (en) 2009-11-03 2011-05-12 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
US20120269830A1 (en) 2009-12-07 2012-10-25 Lawrence Horowitz Conjugates with improved pharmacokinetic properties
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
KR20120123443A (ko) 2010-01-27 2012-11-08 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 대사 장애 및 비만 치료용 글루카곤 길항제-ｇｉｐ 항진제 콘쥬게이트
JP6054861B2 (ja) 2010-03-26 2016-12-27 ノヴォ ノルディスク アー／エス 新規のグルカゴン類似体
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
EP2568993A4 (en) 2010-05-13 2014-02-19 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES EXPRESSING G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR ACTIVITY
CN103179979A (zh) 2010-06-24 2013-06-26 印第安纳大学研究及科技有限公司 基于酰胺的胰高血糖素超家族肽前药
KR101314865B1 (ko) * 2010-07-06 2013-10-04 김덕중 모바일 환경에서 ｔｖ 화면과 연동하는 증강 현실을 제공하는 방법, 이를 위한 부가 서비스 서버 및 방송 시스템
KR101337797B1 (ko) * 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
JP5282146B2 (ja) 2010-09-06 2013-09-04 パナソニック株式会社 表示装置及びその制御方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101303388B1 (ko) * 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
CN102010473A (zh) * 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
WO2012088379A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Marcadia Biotech, Inc. Methods for treating metabolic disorders and obesity with gip and glp-1 receptor-active glucagon-based peptides
JP6118500B2 (ja) 2011-02-28 2017-04-19 ローム アンド ハース エレクトロニック マテリアルズ エルエルシーＲｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＬＬＣ フォトレジスト組成物、およびフォトリソグラフィパターンを形成する方法
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
DK2718318T3 (en) 2011-06-10 2018-11-05 Hanmi Science Co Ltd New oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical compositions for the treatment of obesity comprising these
WO2012173422A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Hanmi Science Co., Ltd. A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
RU2014101697A (ru) * 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2013157002A1 (en) 2012-04-19 2013-10-24 Prolor Biotech Inc. Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
AR091477A1 (es) 2012-06-21 2015-02-04 Univ Indiana Res & Tech Corp Analogos de glucagon que presentan actividad de receptor de gip
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
EA034499B1 (ru) 2012-11-06 2020-02-13 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8263084B2 (en) * 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR20100105494A (ko) * 2009-03-20 2010-09-29 한미홀딩스 주식회사 위치특이적 생리활성 폴리펩타이드 결합체의 제조방법
WO2012011752A2 (en) * 2010-07-21 2012-01-26 Hanmi Holdings Co., Ltd. Novel long-acting glucagon conjugate and pharmaceutical composition comprising the same for the prevention and treatment of obesity
KR20120043208A (ko) * 2010-10-26 2012-05-04 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체

Also Published As

Publication number Publication date
US20190269779A1 (en) 2019-09-05
CA2890324A1 (en) 2014-05-15
EP3610856B1 (en) 2021-08-18
EA201791143A1 (ru) 2017-11-30
JP2018162299A (ja) 2018-10-18
EP2916819B1 (en) 2019-07-10
EA031852B1 (ru) 2019-03-29
CN104884045B (zh) 2018-06-15
PT2916819T (pt) 2019-10-28
EP3610856A1 (en) 2020-02-19
IL264360A (en) 2019-02-28
KR20210125453A (ko) 2021-10-18
PH12015501008A1 (en) 2015-07-27
MX2020004114A (es) 2020-07-24
TW201740924A (zh) 2017-12-01
JP2015536942A (ja) 2015-12-24
US9724420B2 (en) 2017-08-08
CA2890324C (en) 2021-02-23
AU2013342321A1 (en) 2015-05-28
TWI602583B (zh) 2017-10-21
JP6363612B2 (ja) 2018-07-25
IL238626A0 (en) 2015-06-30
EP2916819A4 (en) 2016-08-17
UA126651C2 (uk) 2023-01-11
CN104884045A (zh) 2015-09-02
EP2916819A1 (en) 2015-09-16
TWI652071B (zh) 2019-03-01
US10279041B2 (en) 2019-05-07
UA116364C2 (uk) 2018-03-12
MX2015005698A (es) 2015-08-20
TW201919585A (zh) 2019-06-01
ZA201503998B (en) 2016-09-28
EA201992760A2 (ru) 2020-03-31
NZ739063A (en) 2019-11-29
SG11201503370WA (en) 2015-05-28
PH12018501454A1 (en) 2020-02-17
AU2017279583A1 (en) 2018-01-18
BR112015010235A2 (pt) 2017-08-22
US20170360939A1 (en) 2017-12-21
US11071785B2 (en) 2021-07-27
MY168536A (en) 2018-11-12
BR112015010235B1 (pt) 2021-05-18
AU2020200626A1 (en) 2020-02-20
AU2020200626B2 (en) 2022-02-10
AU2013342321B2 (en) 2017-09-28
IL238626B (en) 2019-02-28
AR093387A1 (es) 2015-06-03
ES2748158T3 (es) 2020-03-13
MY197849A (en) 2023-07-20
JP6694013B2 (ja) 2020-05-13
WO2014073842A1 (en) 2014-05-15
AU2017279583B2 (en) 2019-11-21
KR102311517B1 (ko) 2021-10-14
KR20140058387A (ko) 2014-05-14
PH12015501008B1 (en) 2015-07-27
SG10201602801YA (en) 2016-05-30
PE20151421A1 (es) 2015-09-24
NZ708103A (en) 2018-07-27
EA201992760A3 (ru) 2020-06-30
NZ731658A (en) 2020-05-29
TW201427716A (zh) 2014-07-16
KR102434280B1 (ko) 2022-08-23
EA201590758A1 (ru) 2015-10-30
US20150290324A1 (en) 2015-10-15
TWI816739B (zh) 2023-10-01
IL264360B (en) 2019-11-28
EA039082B1 (ru) 2021-12-01
AR121939A2 (es) 2022-07-27
HK1210044A1 (en) 2016-04-15
CL2015001206A1 (es) 2015-07-03
PL2916819T3 (pl) 2020-01-31
DK2916819T3 (da) 2019-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102434280B1 (ko) 옥신토모듈린과 면역글로불린 단편을 포함하는 단백질 결합체의 액상 제제
JP6345216B2 (ja) オキシントモジュリンと免疫グロブリン断片とを含む結合体及びその用途
US20230192800A1 (en) Liquid formulation of long-acting conjugate of glucagon derivative
NZ742400B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU