BR112015010235B1 - formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração e método para a preparação da mesma - Google Patents

formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração e método para a preparação da mesma Download PDF

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Abstract

FORMULAÇÃO LÍQUIDA DE UM CONJUGADO DE PROTEÍNA COMPREENDENDO A OXINTOMODULINA E UM FRAGMENTO DE IMUNOGLOBULINA. A presente invenção se refere a uma formulação líquida livre de albumina compreendendo um conjugado de oxintomodulina de longa duração, em que um peptídeo oxintomodulina compreendendo um derivado, variante, fragmento ou precursor da oxintomodulina é ligado a uma região Fc da imunoglobulina, que pode aumentar a duração da atividade fisiológica do conjugado de oxintomodulina de longa duração e manter a estabilidade in vivo deste por um longo período de tempo, em comparação com oxintomodulina nativa, bem como um método para a preparação da formulação líquida. A formulação líquida compreende um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico e não contém uma albumina de soro humano e fatores que são potencialmente prejudiciais para o corpo humano, e, portanto, não é susceptível a infecções virais. Além disso, o conjugado de oxintomodulina da invenção compreende a oxintomodulina ligada a uma região Fc da imunoglobulina e, portanto, tem um grande peso molecular, atividade fisiológica prolongada, e uma excelente estabilidade de armazenamento, em comparação com a oxintomodulina nativa.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere a uma formulação líquida livre de albumina, compreendendo um conjugado da oxintomodulina de longa duração em que um peptídeo da oxintomodulina compreendendo um derivado, variante, fragmento ou precursor da oxintomodulina é ligado a uma região Fc da imunoglobulina, que pode aumentar a duração da atividade fisiológica do conjugado da oxintomodulina de longa duração e manter a estabilidade in vivo do mesmo por um período de tempo prolongado, em comparação com oxintomodulina nativa. A presente invenção também se relaciona com um método para a preparação da formulação líquida.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] A obesidade é definida como uma condição de acúmulo de gordura anormal ou excessivo que pode prejudicar a saúde e resultada de um desequilíbrio energético no qual o consumo de energia excede o gasto de energia. A obesidade não era um grave problema de saúde no passado, mas com o crescimento econômico, a população de obesos está aumentando com o aumento da riqueza econômica, e o número de várias doenças relacionadas com a obesidade também está aumentando. De acordo com o relatório da Organização Mundial da Saúde (OMS), mais de 1,5 mil milhões de adultos em todo o mundo estão acima do peso, mais de 500 milhões deles são obesos, e a população obesa aumentou em cerca de duas vezes entre 1980 e 2008 (Organização Mundial da Saúde, Fact sheet on obesity and overweight, 2011). Não só nos países de alta renda, mas também em países de baixa renda, a porcentagem de pessoas obesas está aumentando. O sobrepeso e obesidade são responsáveis pelo aumento da pressão arterial e níveis de colesterol e causam ou agravam várias doenças. Além disso, o problema da obesidade é mais grave em crianças ou adolescentes, aumenta a incidência de diabetes, doenças cardíacas, hipertensão ou hiperlipidemia, e também pode causar mortes ou incapacidades.
[003] Como descrito acima, a obesidade é uma doença global e problema social, mas, no passado, se acreditava que a obesidade poderia ser superada através do esforço individual, e, assim, nenhuma ênfase particular foi dada ao tratamento da obesidade. No entanto, a obesidade não é fácil de tratar, uma vez que é uma doença complexa associada com os mecanismos de controle do apetite e metabolismo energético. Consequentemente, o tratamento da obesidade requer não apenas esforços próprios do paciente, mas também um método capaz de tratar os mecanismos anormais associados com o controle do apetite e metabolismo energético. Assim, vêm sendo feitos esforços para desenvolver fármacos para o tratamento da obesidade.
[004] Como resultado de tais esforços, fármacos, incluindo Rimonabant (Sanofi-Aventis), sibutramina (Abbott), Contrave (Takeda), Orlistat (Roche) e semelhantes, foram desenvolvidos, mas estes fármacos têm deficiências, pois, eles mostram efeitos adversos fetais ou têm um efeito insuficiente sobre o tratamento da obesidade. Foi relatado que o Rimonabant (Sanofi-Aventis) apresentou distúrbios do sistema nervoso central, a Sibutramina (Abbott) e Contrave (Takeda) apresentaram efeitos adversos cardiovasculares, e o Orlistat (Roche) mostraram um efeito de redução de peso de apenas cerca de 4 kg, quando administrado durante 1 ano. Assim, existem atualmente poucos ou nenhuns agentes terapêuticos para obesidade que possam ser prescritos com segurança para pacientes com obesidade.
[005] Recentemente, derivados do glucagon têm recebido muita atenção. O glucagon é produzido pelo pâncreas quando os níveis da glicose no sangue começam a cair devido a medicamentos, doenças, hormônios ou deficiências enzimáticas, ou semelhantes. A função do glucagon é estimular as células do fígado para quebrar o glicogênio armazenado em glicose, que é então liberada para o sangue aumentando o nível da glicose no sangue a um nível normal. Além do efeito de aumentar o nível da glicose no sangue, o glucagon foi relatado como supressor do apetite e ativador do hormônio sensível a lipase (HSL) de adipócitos para facilitar a lipólise, mostrando, assim, efeitos anti obesidade. Entre os derivados do glucagon, o peptídeo semelhante a glucagon-1 (GLP-1) está sendo desenvolvido como um agente terapêutico para reduzir a hiperglicemia em pacientes diabéticos e funciona estimulando a síntese e secreção de insulina, inibe a secreção do glucagon, suprime o esvaziamento gástrico, e aumenta a utilização da glicose inibindo a ingestão de alimentos. É sabido que a exendina- 4, que é isolada a partir de veneno de lagarto tem uma homologia de aminoácidos de cerca de 50%, com GLP-1 e ativa o receptor de GLP-1 para reduzir a hiperglicemia em pacientes diabéticos. No entanto, fármacos terapêuticos contra a obesidade, incluindo a GLP-1, foram relatadas como causadores de efeitos adversos tais como náuseas e vômitos.
[006] Assim, como uma alternativa ao GLP-1, a oxintomodulina capaz de se ligar a ambos os receptores dos dois peptídeos (GLP-1 e glucagon) vem recebendo atenção. A oxintomodulina é feita a partir de um peptídeo pré- glucagon, um precursor do glucagon, e é um agente anti-obesidade potente, porque ele inibe a ingestão de alimentos, como o GLP-1, promove a saciedade, e apresenta uma atividade lipolítica, semelhante ao glucagon.
[007] Com base na dupla função do peptídeo oxintomodulina, os estudos sobre o desenvolvimento de fármacos para o tratamento da obesidade têm sido ativamente conduzidos. Por exemplo, o pedido de patente coreano N° KR 925.017 divulga uma composição farmacêutica oral, parentérica, mucosal, retal, subcutânea ou transdérmica para o tratamento de obesidade humana, a qual compreende oxintomodulina como um ingrediente ativo. No entanto, foi relatado que os agentes terapêuticos contra obesidade compreendendo a oxintomodulina tem uma meia-vida curta in vivo e mostram um efeito menor sobre o tratamento da obesidade, mesmo quando estes são administrados a uma dose elevada, três vezes por dia. Assim, foram feitos esforços para aumentar a meia-vida curta in vivo ou o efeito de tratamento da obesidade da oxintomodulina pela modificação da oxintomodulina.
[008] Por exemplo, o agonista duplo da oxintomodulina (Merck) é obtido através da substituição de L-serina por D-serina no aminoácido 2 da oxintomodulina para aumentar a resistência a dipeptidil peptidase-IV (DPP-IV) e unindo uma parte de colesterol ao C-terminal para aumentar a meia-vida no sangue. O ZP2929 (Zealand) é obtido através da substituição de L-serina por D- serina no aminoácido 2 da oxintomodulina para aumentar a resistência a DPP- IV, substituindo a arginina por alanina no aminoácido 17 para aumentar a resistência a protease, substituindo a metionina com lisina no aminoácido 27 para aumentar a estabilidade oxidativa, e substituindo as glutaminas nos aminoácidos 20 e 24 e asparagina no aminoácido 28 por ácido aspártico, alanina e serina, respectivamente, para aumentar a estabilidade de desamidação. O agonista duplo da oxintomodulina (Merck) tem um aumento in vivo da meia-vida de 1,7 horas, o que é mais longo do que a meia-vida (8-12 minutos) da oxintomodulina nativa, mas ainda tem uma meia-vida in vivo muito curta e é administrado a uma dose muito elevada de várias mg/kg. Assim, a oxintomodulina ou os seus derivados possuem duas grandes desvantagens, ou seja, uma meia-vida curta e baixos efeitos medicinais. Devido a estas desvantagens, ela deve ser administrada diariamente em doses elevadas. De modo a ultrapassar estas desvantagens, foi estudado um método para aumentar a meia-vida no sangue da oxintomodulina, se mantendo ao mesmo tempo a sua atividade in vivo, e, como resultado, foi desenvolvido um derivado de oxintomodulina. Além disso, utilizando esta tecnologia, um polímero não peptídico foi preparado pela conjugação de um veículo com o derivado da oxintomodulina, e foi verificado que o conjugado de proteína pode exibir um melhor efeito anti-obesidade como um resultado do aumento da meia-vida no sangue do mesmo mantendo ao mesmo tempo a atividade in vivo (pedido de patente coreano N° KR 10-2012-0064110).
[009] Geralmente, as proteínas e peptídeos têm uma meia-vida muito curta, e sofrem de desnaturação tais como precipitação através da agregação de monômeros, e a adsorção nas superfícies dos vasos, após a exposição a vários fatores tais como temperaturas desfavoráveis, interface ar-água, alta pressão, estresse físico/mecânico, solventes orgânicos e contaminação microbiana. Esta desnaturação é irreversível, e, portanto, as proteínas e peptídeos desnaturados perdem propriedades físico-químicas intrínsecas e efeitos fisiologicamente ativos. Além disso, as proteínas e peptídeos são instáveis e sensíveis a fatores extrínsecos, tais como temperatura, humidade, oxigênio, raios UV ou semelhantes, sofrendo alterações físicas ou químicas, incluindo associação, polimerização ou oxidação, o que resulta em perda substancial da atividade (pedido de patente coreano n° KR 10-0.389.726).
[010] Além disso, as proteínas e peptídeos adsorvidos são facilmente agregados pelo processo de desnaturação, e as proteínas e peptídeos desnaturados, quando administrados ao corpo humano, agem como a causa da formação de anticorpos no corpo humano, e por esta razão, as proteínas e peptídeos devem ser administrados em uma forma suficientemente estável. Assim, vários métodos para a prevenção da desnaturação de proteínas e peptídeos em solução têm sido estudados (John Geigert, J. Parenteral Sci. Tech., 43, No5, 220-224, 1989; David Wong, Pharm. Tech. October, 34-48, 1997; Wei Wang., Int. J. Pharm., 185, 129-188, 1999; Willem Norde, Adv. Colloid Interface Sci., 25, 267-340, 1986; Michelle et al., Int. J. Pharm. 120, 179-188, 1995).
[011] A liofilização é aplicada a alguns fármacos de proteína e peptídeo para atingir o objetivo da estabilidade. No entanto, os produtos liofilizados são inconvenientes na medida em que tem de ser redissolvidos em água para uso injetável. Além disso, no caso da liofilização, é necessário investimento enorme em congeladores-secadores de grande capacidade ou semelhantes, porque o processo de liofilização é incluído nos processos de produção. Além disso, um método para a produção de proteínas e peptídeos usando um secador por pulverização em pó também está também sendo utilizado, mas neste caso, a eficiência econômica é diminuída devido a um rendimento baixo, e a exposição a temperaturas elevadas pode afetar adversamente a estabilidade das proteínas.
[012] De forma a ultrapassar tais limitações, foram realizados estudos em que os estabilizantes foram adicionados a proteínas e peptídeos em solução para suprimir as alterações físico-químicas das proteínas e peptídeos, enquanto mantém a eficiência in vivo mesmo após armazenamento em longo prazo. A albumina de soro humano, um tipo de proteína, tem sido amplamente utilizada como um estabilizante para vários fármacos de proteína, e o desempenho da mesma foi provado (Edward Tarelli et al., Biologicals (1998) 26, 331-346).
[013] Um processo para purificar a albumina do soro humano inclui a inativação de contaminantes biológicos tais como o micoplasma, príons, bactérias e vírus e o rastreio ou análise de um ou mais contaminantes biológicos ou agentes patogênicos. No entanto, há sempre o risco de que os pacientes serão expostos aos contaminantes biológicos que não são completamente removidos ou inativados. Por exemplo, o processo de rastreio inclui examinar se o sangue humano a partir de doadores contém um certo vírus, mas este processo não é sempre confiável. Particularmente, um vírus específico existente em um pequeno número de doadores pode não ser detectado.
[014] Proteínas diferentes podem ser gradualmente inativadas a taxas diferentes em diferentes condições durante o armazenamento, devido às suas diferenças químicas. Ou seja, o alargamento do tempo do armazenamento por um estabilizante não é idêntico para proteínas diferentes. Por este motivo, a proporção apropriada, a concentração e o tipo de agente estabilizante que é usado para fornecer estabilidade durante o armazenamento variam dependendo das propriedades físico-químicas da proteína alvo. Quando estabilizantes são usados em combinação, podem causar efeitos adversos diferentes dos efeitos desejados devido a competição e interação entre os mesmos. Além disso, devido à natureza ou a concentração de proteínas pode mudar durante o armazenamento, os estabilizantes utilizados podem mostrar efeitos diferentes dos pretendidos. Assim, uma grande quantidade de esforço e precauções é necessária para estabilizar proteínas em solução.
[015] Particularmente, um conjugado de oxintomodulina e Fc da imunoglobulina é um conjugado em que a oxintomodulina que é um peptídeo fisiologicamente ativo é ligado a uma região Fc da imunoglobulina. Deste modo, pela razão do peso molecular e o volume do conjugado certamente diferirem dos da oxintomodulina nativa, é necessário uma composição especial para a estabilização da proteína.
[016] Deste modo, pela razão de a oxintomodulina (que é um peptídeo fisiologicamente ativo) e a região Fc da imunoglobulina serem peptídeos ou proteínas com diferentes propriedades físico-químicas, elas devem ser simultaneamente estabilizadas. No entanto, como descrito acima, diferentes proteínas ou proteínas podem ser gradualmente inativadas a taxas diferentes em diferentes condições durante o armazenamento, devido às suas diferenças químicas, e quando os estabilizantes adequados para as proteínas ou peptídeos são utilizados em combinação, podem causar efeitos adversos diferentes dos efeitos pretendidos, devido à concorrência e interação entre as mesmos. Assim, no caso de um conjugado de oxintomodulina de longa duração, não existe grande dificuldade em encontrar uma composição para a estabilização da oxintomodulina simultaneamente, o que é um peptídeo fisiologicamente ativo, e a região Fc da imunoglobulina.
[017] Sob tais circunstâncias, os presentes inventores têm feito esforços extensos para proporcionar uma formulação líquida estável que pode ser armazenada durante um longo período de tempo, sem a preocupação com a contaminação viral, e, como resultado, descobriram que um estabilizante, que inclui um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico e pode ainda incluir um aditivo, tal como um agente isotônico ou um aminoácido, e um conservante para utilização repetida, pode aumentar a estabilidade de um derivado de oxintomodulina de longa duração, e uma formulação líquida de custo eficaz e estável pode ser preparada utilizando o estabilizante, completando assim a presente invenção.
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO PROBLEMA TÉCNICO
[018] É um objeto da presente invenção proporcionar uma formulação líquida de um conjugado de oxintomodulina de longa duração, que compreende uma quantidade farmacologicamente eficaz de um conjugado de oxintomodulina de longa duração, em que uma oxintomodulina que é um peptídeo fisiologicamente ativo é ligada a uma região Fc da imunoglobulina; e um estabilizante livre de albumina.
[019] Um outro objeto da presente invenção consiste em proporcionar um método para a preparação da formulação líquida acima.
[020] Ainda um outro objetivo da presente invenção é proporcionar uma composição para a prevenção ou tratamento da obesidade ou diabetes, que compreende uma formulação líquida de um conjugado de oxintomodulina oxintomodulina que compreende um peptídeo fisiologicamente ativo ligado a uma região Fc da imunoglobulina.
[021] Ainda um outro objetivo da presente invenção é proporcionar um método para a prevenção ou tratamento da obesidade ou diabetes, que compreende a administração da formulação líquida acima a um sujeito.
SOLUÇÃO DO PROBLEMA
[022] Para atingir os objetivos acima, em um aspecto, a presente invenção proporciona uma formulação líquida de um conjugado de oxintomodulina de longa duração, que compreende uma quantidade farmacologicamente eficaz de um conjugado de oxintomodulina de longa duração, em que um oxintomodulina que é um peptídeo fisiologicamente ativo está ligado a uma região Fc da imunoglobulina; e um estabilizante isento de albumina, em que o estabilizante contém um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico.
[023] Tal como aqui utilizado, o termo "formulação líquida" se refere a uma formulação farmacêutica processada em uma forma líquida e se destina a incluir todas as formulações líquidas para uso interno e formulações para uso externo. Na técnica anterior, a formulação líquida da invenção adequada para uma quantidade farmacologicamente eficaz do conjugado de oxintomodulina que compreende oxintomodulina ligada ao domínio Fc da imunoglobulina não foi relatado. Assim, a formulação líquida da presente invenção pode compreender uma quantidade farmacologicamente eficaz do conjugado de oxintomodulina que compreende oxintomodulina ligada ao domínio Fc da imunoglobulina e um estabilizante isento de albumina, em que o estabilizante contém um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico. Além disso, a formulação líquida da presente invenção pode compreender ainda um conservante.
[024] Na presente invenção, o estabilizante pode compreender ainda um ou mais componentes selecionados a partir do grupo que consiste em agentes isotônicos, açúcares, álcoois poli-hídricos, e aminoácidos. O álcool de açúcar pode ser um ou mais selecionados do grupo que consiste em manitol, sorbitol e glicerol, e a concentração do álcool de açúcar na formulação líquida pode ser 215% (p/v). Além disso, o tampão pode ser um ou mais selecionados do grupo que consiste em citrato, acetato, histidina e tampões fosfato e pode ter um pH entre 4,5 e 7,0. O agente isotônico pode ser cloreto de sódio, e o tensoativo não iônico pode ser polissorbato ou poloxâmero e estar presente em uma concentração de 0,001-0,1% (p/v). O aminoácido pode ser metionina. Assim, a formulação líquida da presente invenção pode compreender um estabilizante que contém um tampão com um pH entre 4,8 e 6,0, um ou mais álcoois de açúcar selecionados de entre o grupo que consiste em em manitol e sorbitol, e o polissorbato 20.
[025] Além disso, a formulação líquida da presente invenção pode ainda compreender um ou mais agentes conservantes selecionados a partir do grupo que consiste em m-cresol, fenol e álcool benzílico. A concentração do conservante na formulação líquida pode ser 0,001-1% (p/v).
[026] Particularmente, a formulação líquida da presente invenção pode compreender uma quantidade farmacologicamente eficaz do conjugado de oxintomodulina de longa duração, 5-50 mM de histidina, 2-15% (p/v) de manitol, de 0,01-1 mg/mL de metionina e 0,001-0,1% (p/v) de polissorbato 20. Adicionalmente a estes componentes, a formulação líquida pode ainda compreender 0,001-1% (p/v) de m-cresol.
[027] Tal como aqui utilizado, o termo "estabilizante" se refere a uma substância que mantém estável os ingredientes tais como ingredientes ativos durante um determinado período de tempo. Para a finalidade da presente invenção, o termo se refere a uma substância que permite que o conjugado de oxintomodulina de longa duração possa ser estavelmente armazenado. A estabilidade durante o armazenamento de proteínas, tais como o conjugado de oxintomodulina de longa duração é importante não só para assegurar uma dose exata, mas também para inibir o potencial de produção de uma substância antigênica para o conjugado de oxintomodulina derivado.
[028] O estabilizante na presente invenção contém, preferivelmente, um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico, a fim de conferir estabilidade ao conjugado de oxintomodulina de longa duração. Além disso, o estabilizante pode compreender, ainda, Preferencialmente, um ou mais componentes selecionados a partir do grupo constituído por agentes isotônicos, açúcares, álcoois poli-hidricos e aminoácidos.
[029] O tampão serve para manter o pH da formulação líquida, de modo que o pH da formulação líquida não mude rapidamente de modo a tornar o conjugado de oxintomodulina de longa duração estável. Exemplos do tampão podem incluir tampões de pH farmaceuticamente aceitáveis, incluindo um sal alcalino (fosfato de sódio, fosfato de potássio, ou um hidrogênio ou um sal di- hidrogenofosfato do mesmo), citrato de sódio, ácido cítrico, acetato de sódio, ácido acético, e histidina, ou uma mistura destes tampões podem também ser usada. O tampão é Preferencialmente um tampão de citrato ou histidina, e mais preferencialmente um tampão de histidina. A concentração do tampão é preferencialmente 5-100 mM, e mais preferencialmente de 5-50 mM. O pH do tampão é, preferencialmente 4,0-8,0, mais preferencialmente 4,5-7,0, e ainda mais preferivelmente 5,0-6,0.
[030] Em um exemplo da presente invenção, foi medida a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o pH do tampão da formulação líquida. Ou seja, depois de o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado a 25°C durante 0-4 semanas durante a mudança do pH do tampão, a quantidade restante do conjugado foi analisada, e como resultado, foi verificado que o conjugado de oxintomodulina foi mais estável a pH 5,6, pH 5,8 e pH 6,0 (Exemplo 3, Tabelas 2 a 5, Exemplo 7, Tabelas 18 a 21, Exemplo 8 e Tabelas 22 a 25). Assim, foi verificado que o pH do tampão mais estável na presente invenção varia 5,0 a 6,0. Em um exemplo da presente invenção, foi medida a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o tipo de tampão da formulação líquida. Especificamente, depois de o conjugado de oxintomodulina ser armazenado com 0,02% de polissorbato 20, 0,1 mg/mL de metionina, e manitol a 5% a 25°C durante 0-4 semanas, a quantidade restante do conjugado foi analisada. Os resultados da análise de SE-HPLC indicou que a quantidade restante do conjugado não difere grandemente entre os tampões no mesmo pH. Os resultados da análise por IE-HPLC ou por RP-HPLC indicam que a histidina foi mais estável no mesmo pH (exemplo 8 e Tabelas 22 a 25).
[031] O álcool de açúcar funciona para aumentar a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Na presente invenção, o álcool de açúcar pode ser um ou mais, selecionado do grupo que consiste em em manitol, sorbitol e glicerol. Preferencialmente, o álcool de açúcar pode ser o manitol. A concentração do álcool de açúcar na formulação líquida é Preferencialmente 1-20% (p/v), e mais preferencialmente 2-15% (p/v).
[032] Em um exemplo da presente invenção, foi analisada a influência do tipo de álcool de açúcar como um estabilizante na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, o conjugado de oxintomodulina foi armazenado em tampão citrato (pH 5,6) a 25°C durante 0-4 semanas, e, em seguida, analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Como resultado, o conjugado foi mais estável na presença de manitol ou sorbitol do que na presença de glicerol na mesma concentração. Os resultados da análise por RP-HPLC indicou que o conjugado foi um pouco mais estável na presença de manitol em comparação com a presença de sorbitol (Exemplo 4 e Tabelas 6 a 9). Em outras palavras, foi verificado que a adição de manitol ou sorbitol apresentaram excelente estabilidade, mas o conjugado foi mais estável na presença de manitol.
[033] Em um exemplo da presente invenção, foi analisada a influência da concentração do álcool de açúcar como um estabilizante na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, o conjugado de oxintomodulina foi armazenado a 25°C durante 0-4 semanas, e, em seguida, analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Como resultado, na presença de 2% de manitol ou 15% de manitol, um precipitado de proteína foi produzido, e na presença de 5% de manitol ou 10% de manitol, o conjugado foi estável (Exemplo 5, Tabelas 10 e 13, Exemplo 7 e Tabelas 18 a 21).
[034] O tensoativo não iônico funciona para diminuir a tensão superficial da solução de proteína para evitar que a proteína seja adsorvida sobre uma superfície hidrofóbica ou da agregação. Os exemplos preferidos de um agente tensoativo não iônico que pode ser usados na presente invenção incluem agentes tensoativos não iônicos à base de polissorbato e agentes tensoativos não iônicos à base de poloxâmero, que podem ser utilizados sozinhos ou em combinação de dois ou mais. Não é conveniente que o agente tensoativo não iônico seja utilizado em altas concentrações na formulação líquida. A formulação líquida da presente invenção contém o agente tensoativo não iônico a uma concentração de 0,2% (p/v) ou menos, e preferivelmente 0,001-0,1% (p/v).
[035] O estabilizante da presente invenção pode conter um aminoácido tal como a metionina. A metionina adicionalmente funciona para estabilizar a proteína através da inibição da produção de impurezas que podem ser causadas por, por exemplo, a reação oxidativa da proteína.
[036] Em um exemplo da presente invenção, a influência da concentração do tensoativo não iônico como estabilizante e a presença ou ausência de um aminoácido na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração foi testada. Especificamente, o conjugado de oxintomodulina foi armazenado em tampão citrato (pH 5,6) e 10% de manitol a 25°C durante 0-4 semanas, e, em seguida, analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Como resultado, o conjugado de oxintomodulina foi mais estável na presença de 0,02% de polissorbato 20 e 0,1 mg/mL de metionina (Exemplo 6 e Tabelas 14 a 17).
[037] O agente isotônico serve para manter a pressão osmótica um nível adequado quando se administra o conjugado de oxintomodulina de longa duração na solução in vivo e pode adicionalmente funcionar para estabilizar ainda mais o conjugado de oxintomodulina de longa duração na solução. Exemplos típicos do agente isotônico incluem sais inorgânicos solúveis em água, tais como cloreto de sódio, sulfato de sódio, citrato de sódio e semelhantes. A concentração do agente isotônico é Preferencialmente 0-200 mM, e o seu conteúdo pode ser adequadamente controlado.
[038] O estabilizante da presente invenção preferencialmente não contém albumina. A albumina do soro humano que pode ser usada como um estabilizante de proteína é preparada a partir do sangue humano, e, portanto, pode ser contaminada com um vírus patogênico humano, e gelatina ou albumina do soro bovino podem causar doenças ou podem provocar reações alérgicas em alguns pacientes. O estabilizante livre de albumina da presente invenção não contém uma proteína estranha, tal como albumina do soro humano ou animal, ou gelatina purificada, e, portanto, não é susceptível a infecção viral.
[039] Os exemplos preferidos de açúcares entre os açúcares e álcoois poli- hídricos que podem adicionalmente ser utilizados para aumentar a estabilidade do armazenamento do conjugado de oxintomodulina de longa duração incluem monossacarídeos, tais como manose, glucose, fucose e xilose, e polissacarídeos, tais como lactose, maltose, sacarose, rafinose e dextrana, e exemplos preferidos dos álcoois poli-hidricos incluem polipropileno, polietileno glicol de baixo peso molecular, glicerol, de baixo peso molecular, polipropileno glicol e outros semelhantes. Estes açúcares e álcoois poli-hídricos podem ser utilizados sozinhos ou em combinação de dois ou mais.
[040] Além do tampão acima descrito, um agente isotônico, álcool de açúcar, aminoácido e tensoativo não iônico, a formulação líquida da presente invenção pode ainda compreender outros componentes ou substâncias conhecidas na arte dentro de um intervalo que não prejudica o efeito da presente invenção.
[041] A formulação líquida de um conjugado de oxintomodulina de longa duração da invenção compreende uma quantidade farmacologicamente eficaz do conjugado de oxintomodulina de longa duração compreendendo um peptídeo oxintomodulina fisiologicamente ativo ligado a uma região Fc da imunoglobulina, e um estabilizante livre de albumina, em que o estabilizante pode conter um tampão tendo um pH de 4,8 a 7,0, um ou mais álcool de açúcar selecionado do grupo que consiste em manitol e sorbitol, e polissorbato 20. Mais especificamente, o estabilizante pode conter um tampão tendo um pH variando de 5,0 a 6,0, manitol e polissorbato 20. Além disso, o estabilizante pode compreender ainda um ou mais componentes selecionados a partir do grupo constituído de agentes isotônicos, açúcares, álcoois poli-hidricos e aminoácidos.
[042] A formulação líquida livre de albumina da invenção contendo uma alta concentração do conjugado de oxintomodulina de longa duração, que confere estabilidade ao conjugado de oxintomodulina de longa duração, não é susceptível a infecção viral, é simples e apresenta excelente estabilidade do armazenamento, e, assim, pode ser fornecida em de maneira econômica em comparação com outros estabilizantes ou formulações liofilizadas.
[043] Além disso, como a formulação líquida da presente invenção compreende um conjugado de oxintomodulina de longa duração que tem atividade fisiológica, por um período de tempo prolongado em comparação com a oxintomodulina nativa, essa pode manter a atividade da proteína no corpo humano durante um longo período de tempo em comparação com formulações convencionais de oxintomodulina, e, assim, pode ser utilizada como uma formulação farmacêutica eficiente. Além disso, a formulação líquida da presente invenção confere uma excelente estabilidade, mesmo a uma concentração elevada do conjugado de oxintomodulina de longa duração.
[044] Tal como aqui utilizado, o termo "oxintomodulina" se refere a um peptídeo produzido a partir do pré-glucagon que é um precursor do glucagon. Na presente invenção, oxintomodulina pretende incluir oxintomodulina nativa e seu precursor, derivado, fragmento e variante. Preferivelmente, oxintomodulina tem uma sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 1 (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA).
[045] Tal como aqui utilizado, o termo "derivado de oxintomodulina" pretende incluir um peptídeo, um derivado de peptídeo ou um peptídeo mimético que é obtido pela adição, deleção ou substituição de aminoácidos na sequência de aminoácidos da oxintomodulina e pode ativar o glucagon e os receptores GLP-1 a um nível mais elevado do que ativado pela oxintomodulina nativa. Na presente invenção, o derivado de oxintomodulina pode ter qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID N°s: 2 a 34. Preferencialmente, o derivado de oxintomodulina pode ter uma sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 23 ou 25. Mais preferivelmente, ele pode ter uma sequência de aminoácidos da SEQ ID N°: 25.
[046] Tal como aqui utilizado, o termo "fragmento de oxintomodulina" se refere a um fragmento possuindo um ou mais aminoácidos na extremidade amino ou carboxi terminal da oxintomodulina nativa, em que os aminoácidos adicionados podem também ser aminoácidos que não ocorrem naturalmente (por exemplo, aminoácido do tipo D). Este fragmento de oxintomodulina tem a função de regular os níveis de glicose no sangue in vivo.
[047] Tal como aqui utilizado, o termo "oxintomodulina variante " é um peptídeo que tem um ou mais resíduos de aminoácidos diferentes dos da sequência de aminoácidos nativa da oxintomodulina e possui uma função de ativação dos receptores de GLP-1 e glucagon. A oxintomodulina variante pode ser preparada por qualquer uma dentre substituição, adição, deleção, alteração, ou uma combinação de alguns aminoácidos na sequência de aminoácidos da oxintomodulina nativa.
[048] Os métodos para a preparação da oxintomodulina variante, derivados e fragmentos podem ser utilizados isoladamente ou em combinação. Por exemplo, a presente invenção inclui também um peptídeo, que tem um ou mais aminoácidos diferentes dos da oxintomodulina nativa e a desaminação do resíduo N-terminal dos aminoácidos e tem uma função de ativação tanto do receptor GLP-1 como do receptor de glucagon.
[049] Os aminoácidos mencionados aqui são abreviados de acordo com as regras de nomenclatura da IUPAC-IUB, como segue: Alanina A; Arginina R; Asparagina N; Ácido Aspártico D; Cisteina C; Ácido Glutâmico E; Glutamina Q; Glicina G; Histidina H; Isoleucina I; Leucina L; Lisina K; Metionina M; Fenilalanina F Prolina P; Serina S; Treonina T; Triptofano W; Tirosina Y; Valina V.
[050] Na presente invenção, o derivado de oxintomodulina engloba qualquer peptídeo, que é preparado por substituição, adição, deleção ou modificação pós-tradução (por exemplo, metilação, acilação, ubiquitinação, ou ligação covalente intramolecular) de aminoácidos na sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 1 e pode ativar tanto a receptores de glucagon e GLP-1. Para substituição ou adição de aminoácidos, não somente os 20 aminoácidos comumente encontrados em proteínas humanas, mas também ocorrem aminoácidos atípico ou não natural podem ser usados. As fontes comerciais de aminoácidos atípicos incluem Sigma-Aldrich, ChemPep Inc., e Genzyme Pharmaceuticals. Os peptídeos, os quais incluem destes aminoácidos, e sequências de peptídeos atípicos podem ser sintetizados e adquiridos de fornecedores comerciais, por exemplo, American Peptide Company ou Bachem (EUA) ou Anygen (Coreia do Sul).
[051] Em uma concretização específica da presente invenção, o derivado de oxintomodulina da presente invenção é um novo peptídeo incluindo a sequência de aminoácidos da seguinte fórmula 1: Fórmula 1
[052] R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14- X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23- X24-R2 (SEQ ID NO: 50)
[053] em que
[054] R1 é histidina, desamino-histidila, dimetil-histidila (N-dimetil-histidil), beta-hidroxiimidazopropionil, 4-imidazoacetil, imidazopropionilo ou tirosina beta-carboxi;
[055] X1 é Aib (ácido aminosiobutirico), d-alanina, glicina, Sar (N- metilglicina), serina ou d-serina;
[056] X2 é ácido glutâmico ou glutamina;
[057] X3 é leucina ou tirosina;
[058] X4 é serina ou alanina;
[059] X5 é lisina ou arginina;
[060] X6 é glutamina ou tirosina;
[061] X7 é leucina ou metionina;
[062] X8 é ácido aspártico ou ácido glutâmico;
[063] X9 é o ácido glutâmico, serina ou-alfa-metil glutâmico ou é excluído;
[064] X10 é glutamina, ácido glutâmico, lisina, arginina ou serina ou é excluído;
[065] X11 é alanina, arginina ou valina ou é excluído;
[066] X12 é alanina, arginina, serina ou valina ou é excluído;
[067] X13 é lisina, glutamina, arginina ou ácido alfa-metil-glutâmico ou é excluído;
[068] X14 é o ácido aspártico, ácido glutâmico ou leucina ou é excluído;
[069] X15 é fenilalanina ou é excluído;
[070] X16 é isoleucina ou valina ou é excluído;
[071] X17 é alanina, cisteína, ácido glutâmico, lisina, glutamina ou ácido alfa-metil-glutâmico ou é excluído;
[072] X18 é triptofano ou for excluído;
[073] X19 é alanina, isoleucina, leucina, serina ou valina ou é excluído;
[074] X20 é alanina, lisina, metionina, glutamina ou arginina ou é excluído;
[075] X21 é asparagina ou é excluído;
[076] X22 é alanina, glicina ou treonina ou é excluído;
[077] X23 é cisteína ou lisina ou é excluído;
[078] X24 é um peptídeo com 2 a 10 aminoácidos constituídos por uma combinação de alanina, glicina e serina ou é excluído; e
[079] R2 é KRNRNNIA (SEQ ID N°: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID N°: 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID N°: 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID N°: 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID N°: 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID N°: 40) ou é excluído (com a exceção do caso em que a sequência de aminoácidos da fórmula 1 é idêntica a da SEQ ID N°: 1).
[080] A fim de aumentar a atividade de tipo selvagem oxintomodulina para o receptor do glucagon e o receptor de GLP-1, o derivado de oxintomodulina da presente invenção pode ser substituído com 4-imidazoacetil obtido pela exclusão do carbono alfa de histidina na posição 1 da sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 1, desamino-histidila obtida pela exclusão do grupo N-amino terminal, dimetil-histidila (N-dimetil-histidil) obtida pela modificação do grupo amino N- terminal, com dois grupos metila, beta-hidroxi imidazopropionil obtido pela substituição do grupo amino N-terminal com um grupo hidroxila, ou beta-carboxi imidazopropionila obtida pela substituição do grupo amino N-terminal por um grupo carboxila. Além disso, a região de ligação ao receptor de GLP-1 pode ser substituída por aminoácidos que melhoram a ligações hidrofóbicas e iônicas ou uma combinação das mesmas. Além disso, uma porção da sequência de oxintomodulina pode ser substituída com a sequência de aminoácidos do GLP- 1 ou exendina-4 para aumentar a atividade do receptor de GLP-1.
[081] Além disso, uma porção da sequência de oxintomodulina pode ser substituída por uma sequência que aumenta a alfa hélice. Preferencialmente, os aminoácidos nas posições 10, 14, 16, 20, 24 e 28 da sequência de aminoácidos de fórmula 1 podem ser substituídos por aminoácidos ou derivados de aminoácidos consistidos em Tyr (4-Me), Phe, Phe (4-Me), Phe (4-Cl), Phe (4- CN), Phe (4-NO2), Phe (4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala (2-tienil) e Ala (benzotienila) que são conhecidos por estabilizar a alfa hélice, e o tipo e número de aminoácidos estabilizantees de alfa-hélice ou de derivados de aminoácidos a serem inseridos não está limitado. Preferencialmente, os aminoácidos nas posições 10 e 14, 12 e 16, 16 e 20, 20 e 24, e 24 e 28 da sequência de aminoácidos também podem ser substituídos por ácido glutâmico ou lisina, de modo a formar anéis, e o número de anéis a serem inserido não está limitado. Mais preferencialmente, o derivado de oxintomodulina pode ter uma sequência de aminoácidos selecionada de entre as seguintes fórmulas 2-6.
[082] Em uma concretização específica, o derivado de oxintomodulina da presente invenção é um novo peptídeo incluindo a sequência de aminoácidos da seguinte fórmula 2, obtido pela substituição da sequência de aminoácidos da oxintomodulina com a de exendina ou de GLP-1: Fórmula 2 R1-A-R3 (SEQ ID NO: 51)
[083] Em uma outra concretização específica, o derivado de oxintomodulina da presente invenção é um novo peptídeo incluindo a sequência de aminoácidos da seguinte fórmula 3, que é preparado pela ligação de uma porção da sequência de aminoácidos da oxintomodulina e uma porção da sequência de aminoácidos de exendina ou de GLP-1 através de um aminoácido ligante adequado: Fórmula 3 R1-B-C-R4 (SEQ ID NO: 52)
[084] Em ainda outra concretização específica, o derivado de oxintomodulina da presente invenção é um novo peptídeo incluindo a sequência de aminoácidos da seguinte fórmula 4, em que uma porção da sequência de aminoácidos da oxintomodulina é substituída com um aminoácido hidrofóbico que melhora a ligação ao receptor GLP-1. Por exemplo, é um peptídeo em que Leu na posição 26 é substituído pelo aminoácido Ile ou Val, que aumenta a hidrofobicidade. Fórmula 4 R1-SQGTFTSDYSKYLD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3 (SEQ ID NO: 53)
[085] Em ainda outra concretização específica, o derivado de oxintomodulina da presente invenção é um novo peptídeo incluindo a sequência de aminoácidos da seguinte fórmula 5, em que uma porção da sequência de aminoácidos da oxintomodulina nativa é eliminada, adicionada ou substituída por outros aminoácidos a fim de aumentar a capacidade da oxintomodulina nativa em ativar o receptor de GLP-1 e receptor de glucagon: Fórmula 5 R1-E1-QGTFTSDYSKYLD-E2-E3-RA-E4-E5-E6-FV-WLMNT-E7-R5 (SEQ ID NO: 54)
[086] Nas fórmulas 2-5, R1 é tal como foi descrito na fórmula 1;
[087] A é selecionado a partir do grupo que consiste em SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT (SEQ ID N°: 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID N°: 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID N°: 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID N°: 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID N°: 45), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA (SEQ ID N°: 46), e SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID N°: 47);
[088] B é selecionado a partir do grupo que consiste em SQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT (SEQ ID N°: 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID N°: 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID N°: 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID N°: 44), GQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID N°: 45), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEWAA (SEQ ID N°: 46), SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID N°: 47), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW (SEQ ID N°: 48), e SQGTFTSDYSRYLD (SEQ ID N°: 49);
[089] C é um peptídeo com 2 a 10 aminoácidos constituídos por uma combinação de alanina, glicina e serina;
[090] D1 é serina, ácido glutâmico ou arginina;
[091] D2 é arginina, ácido glutâmico ou serina;
[092] D3 é arginina, alanina ou valina;
[093] D4 é arginina, valina ou serina;
[094] D5 é glutamina, arginina ou lisina;
[095] D6 é isoleucina, valina ou serina;
[096] D7 é metionina, arginina ou glutamina;
[097] D8 é treonina, glicina ou alanina;
[098] E1 é serina, Aib, Sar, d-d-alanina ou de serina;
[099] E2 é serina ou ácido glutâmico;
[100] E3 é arginina ou lisina;
[101] E4 é glutamina ou lisina;
[102] E5 é ácido aspártico ou ácido glutâmico;
[103] E6 é glutamina, cisteína ou lisina;
[104] E7 é cisteína ou lisina ou é excluído;
[105] R3 é KRNRNNIA (SEQ ID N°: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID N°: 36) ou GPSSGAPPPSK (SEQ ID N°: 37);
[106] R4 é HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID N°: 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID N°: 39) ou HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID N°: 40); e,
[107] R5 é KRNRNNIA (SEQ ID N°: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID N°: 36) ou GPSSGAPPPSK (SEQ ID N°: 37) ou é excluído (com a excepção do caso em que as sequências de aminoácidos de fórmulas 2-5 são idênticos ao da SEQ ID N°: 1).
[108] Preferencialmente, o derivado de oxintomodulina da presente invenção pode ser um novo peptídeo com a seguinte fórmula 6: Fórmula 6
[109] R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14- X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23- X24-R2 (SEQ ID NO: 55)
[110] em que R1 é histidina, desamino-histidila, 4-imidazoacetil ou tirosina;
[111] X1 é Aib (ácido aminosiobutirico), glicina ou serina;
[112] X2 é ácido glutâmico ou glutamina;
[113] X3 é leucina ou tirosina;
[114] X4 é serina ou alanina;
[115] X5 é lisina ou arginina;
[116] X6 é glutamina ou tirosina;
[117] X7 é leucina ou metionina;
[118] X8 é ácido aspártico ou ácido glutâmico;
[119] X9 é o ácido glutâmico ou-alfa-metil glutâmico ou é excluído;
[120] X10 é glutamina, ácido glutâmico, lisina ou arginina ou é excluído;
[121] X11 é alanina ou arginina ou é excluído;
[122] X12 é alanina ou valina ou é excluído;
[123] X13 é lisina, glutamina, arginina ou ácido alfa-metil-glutâmico ou é excluído;
[124] X14 é o ácido aspártico, ácido glutâmico ou leucina ou é excluído;
[125] X15 é fenilalanina ou é excluído;
[126] X16 é isoleucina ou valina ou é excluído;
[127] X17 é alanina, cisteína, ácido glutâmico, glutamina ou ácido alfa-metil- glutâmico ou é excluído;
[128] X18 é triptofano ou for excluído;
[129] X19 é alanina, isoleucina, leucina ou valina ou é excluído;
[130] X20 é alanina, lisina, metionina ou arginina ou é excluído;
[131] X21 é asparagina ou é excluído;
[132] X22 é treonina ou é excluído;
[133] X23 é cisteína, lisina ou é excluído;
[134] X24 é um peptídeo com 2 a 10 aminoácidos que consiste em glicina ou é excluído; e
[135] R2 é KRNRNNIA (SEQ ID N°: 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID N°: 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID N°: 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID N°: 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID N°: 39) ou HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID N°: 40) ou é excluído (com a exceção do caso em que a sequência de aminoácidos de fórmula 6 seja idêntica ao da SEQ ID N°: 1).
[136] Mais preferencialmente, o derivado de oxintomodulina da presente invenção pode ser selecionado a partir do grupo consistido ds peptídeos de SEQ ID N°s: 2 a 34. Ainda mais preferivelmente, o derivado de oxintomodulina da presente invenção pode ser um derivado de oxintomodulina descrito na Tabela 1 do Exemplo 1.
[137] Oxintomodulina tem as atividades dos dois peptídeos, GLP-1 e glucagon. O GLP-1 tem o efeito de diminuir os níveis de glicose no sangue pela secreção de insulina, mas o glucagon tem o efeito de aumentar os níveis de glicose no sangue. Além disso, o GLP-1 inibe a ingestão de alimentos e suprime o esvaziamento gástrico, e o glucagon tem o efeito de reduzir o peso do corpo, facilitando a lipólise e aumentando o metabolismo de energia. Assim, o GLP-1 e glucagon têm diferentes efeitos biológicos. Assim, no caso dos dois peptídeos presentes como um conjugado, se o efeito de qualquer um dos dois peptídeos é maior do que a do outro, um efeito adverso pode ocorrer. Por exemplo, se o efeito do glucagon é maior do que a de GLP-1, os níveis de glicose no sangue podem subir, e se o efeito de GLP-1 é maior do que a de glucagon, os efeitos secundários tais como náuseas e vómitos podem ocorrer. Além disso, o efeito dos dois peptídeos pode variar dependendo da razão das atividades dos dois peptídeos. Assim, os derivados oxintomodulina e seus conjugados não estão limitados apenas aos derivados possuindo atividades aumentadas.
[138] Tal como aqui utilizado, o termo "conjugado de oxintomodulina" se refere a um conjugado compreendendo oxintomodulina e outro elemento. O outro elemento pode ser qualquer substância que tenha funções benéficas, incluindo o aumento da meia-vida no sangue da oxintomodulina ou retardar a liberação da oxintomodulina pelos rins. O conjugado da presente invenção podem se ligar covalentemente a oxintomodulina ou formar microesferas para aumentar a estabilidade no soro da oxintomodulina ou para atrasar a liberação da oxintomodulina pelos rins ou para alterar a atividade de ligação da oxintomodulina ao seu receptor. O transportador que pode formar um conjugado compreendendo oxintomodulina pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em albumina, transferrina, anticorpos, fragmentos de anticorpos, elastina, heparina, polissacarídeo tal como a quitina, fibronectina, e semelhantes, os quais podem ser ligados a oxintomodulina para aumentar a estabilidade no soro da oxintomodulina. Preferencialmente, o transportador é uma região Fc da imunoglobulina.
[139] A Fc da imunoglobulina que pode ser utilizada na presente invenção pode ser uma Fc da imunoglobulina humana, uma Fc da imunoglobulina possuindo a sequência de um seu análogo, ou um Fc da imunoglobulina derivada de animais, incluindo vacas, cabras, porcos, ratos, coelhos, hamsters, ratos e porquinhos da índia. Além disso, a região Fc da imunoglobulina pode ser derivada a partir de IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, ou uma combinação ou híbrido dos mesmos. Além disso, cada domínio da região Fc da imunoglobulina da presente invenção pode ser um híbrido de domínios provenientes de diferentes de imunoglobulinas selecionados a partir do grupo que consiste em IgG, IgA, IgD, IgE, e IgM. Alternativamente, a região Fc da imunoglobulina é um dímero ou multímero que consiste em imunoglobulinas de cadeia simples compostas por domínios da mesma origem. Preferencialmente, a região Fc da imunoglobulina é um derivado de IgG ou de IgM, que é mais rica no sangue humano. Mais preferivelmente, é uma imunoglobulina Fc derivada de IgG conhecido por aumentar a meia-vida das proteínas de ligação ao ligante. A Fc da imunoglobulina pode ser preparada quer por tratamento de IgG com uma protease nativa ou específica de células transformadas utilizando a técnica de recombinação. Preferencialmente, é uma Fc da imunoglobulina humana recombinante preparada em E. coli.
[140] Enquanto isso, o IgG também pode ser sub-classificado em IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, e na presente invenção, uma combinação ou híbrido destas subclasses também é possível. Preferencialmente, a IgG é IgG2 e subclasse de IgG4, e mais preferencialmente, é a região Fc da IgG4 que carece substancialmente de funções efetoras, tais como citotoxicidade dependente do complemento (CDC). Em outras palavras, a região Fc da imunoglobulina mais preferida que é utilizada como um veículo farmaceutico na presente invenção é uma região Fc não-glicosilada derivada da IgG4 humana. A região Fc de origem humana é mais preferível do que uma região Fc de origem não-humana, que pode atuar como um antígeno no corpo humano e provocar respostas imunes indesejáveis, tais como a produção de um novo anticorpo contra o antígeno.
[141] Na presente invenção, o conjugado de oxintomodulina pode ser preparado pela utilização de um polímero não peptídico ou por técnica de recombinação genética. Preferencialmente, o conjugado pode ser preparado através da ligação oxintomodulina a região Fc da imunoglobulina por um polímero não peptídico.
[142] O polímero não peptídico pode ser ligado a cada uma das oxintomodulina e região Fc da imunoglobulina. Cada extremidade do polímero não peptídico pode ser ligada à região Fc da imunoglobulina e o grupo amina ou tiol do derivado de oxintomodulina, respectivamente.
[143] Tal como aqui utilizado, o termo "conjugado de oxintomodulina" se refere a um tendo um maior efeito de longa duração em comparação com oxintomodulina nativa. Os exemplos do conjugado de longa duração incluem, mas não estão limitados a, um conjugado em que um derivado de oxintomodulina resultante da modificação, substituição, adição ou deleção de aminoácidos na sequência de aminoácidos nativa da oxintomodulina está ligada a um polímero biodegradável, tal como o polietileno glicol (PEG), um conjugado, em que uma proteína que possui excelentes propriedades de longa duração, tais como albumina ou imunoglobulina, está ligada a oxintomodulina, um conjugado em que um ácido graxo possuindo a capacidade de se ligar a albumina in vivo é ligado a oxintomodulina, ou um conjugado em que oxintomodulina é encapsulada em nanopartículas biodegradáveis.
[144] Tal como aqui utilizado, o termo "polímero não peptídico" se refere a um polímero biocompatível, incluindo duas ou mais unidades de repetição ligadas entre si por qualquer ligação covalente em lugar de uma ligação peptídica. Na presente invenção, o polímero não peptídico pode ser utilizado intermutavelmente com o ligante não peptídico.
[145] Um agente de ligação peptídico que é utilizado em uma proteína de fusão obtida por um método de fusão inframe convencional tem desvantagens na medida em que é facilmente clivado pela proteinase in vivo, e, assim, o efeito desejado de aumento da meia-vida sérica da droga ativa por um transportador não pode ser obtido. No entanto, na presente invenção, o polímero com resistência à protease pode ser usado para manter a sua meia-vida do peptídeo no soro, semelhante ao transportador. Portanto, qualquer polímero não peptídico pode ser utilizado sem limitação da presente invenção, contanto que é um polímero com a função acima mencionada, isto é, um polímero que tem a resistência à protease in vivo. O polímero não peptídico tem um peso molecular na faixa de 1 a 100 kDa, e preferencialmente de 1 a 20 kDa. O polímero não peptídico da presente invenção, o qual está ligado à região Fc da imunoglobulina, pode ser um tipo de polímero ou uma combinação de diferentes polímeros.
[146] O polímero não peptídico que é utilizado na presente invenção pode ter um grupo reativo capaz de se ligar à região Fc da imunoglobulina e a fármaco proteico. O grupo reativo em ambas as extremidades do polímero não peptídico é preferencialmente selecionado de entre o grupo consistindo de um grupo aldeído reativo, um grupo propionaldeído, um grupo butiraldeído, um grupo maleimida e um derivado de succinimida.
[147] O derivado de succinimida pode ser o propionato de succinimidilo, hidroxi succinimidil, succinimidil carboximetila, ou carbonato de succinimidila. Particularmente, quando o polímero não peptídico possui um grupo aldeído reativo em ambas as extremidades do mesmo, as reações não específicas podem ser minimizadas, e um polipeptídio fisiologicamente ativo e uma imunoglobulina podem ser eficazmente ligados a ambas as extremidades do polímero não-peptídico, respectivamente. Um produto final gerado por alquilação redutora com um aldeído de ligação é muito mais estável do que o ligado por uma ligação amida. O grupo aldeído reativo se liga seletivamente a um terminal N a um pH baixo e pode formar uma ligação covalente com um resíduo de lisina a um pH elevado, tal como pH 9,0.
[148] Os grupos reativos em ambas as extremidades do polímero não peptídico podem ser iguais ou diferentes. Por exemplo, o polímero não peptídico pode possuir um grupo maleimida, em uma extremidade, e um grupo aldeído, um grupo propionaldeído ou um grupo butiraldeído na outra extremidade. Quando um polietilenoglicol com um grupo hidroxi reativo em ambas as extremidades deste é usado como o polímero não peptídico, o grupo hidroxila pode ser ativado por vários grupos reativos por reações químicas conhecidas, ou um polietileno glicol tendo um grupo reativo modificado disponível comercialmente pode ser utilizado de modo a preparar o conjugado de ação prolongada da presente invenção.
[149] O conjugado da presente invenção pode ser um, em que, cada extremidade do polímero não peptídico está ligada à região Fc da imunoglobulina e o grupo amina ou tiol do derivado de oxintomodulina, respectivamente.
[150] Entretanto, na presente invenção, ambas as extremidades do polímero não peptídico incluem grupos reativos aos quais, uma região Fc da imunoglobulina e um fármaco proteico podem se ligar. Exemplos dos grupos reativos incluem, mas não estão limitados a, um grupo aldeído, um grupo propionaldeído ou um grupo butiraldeído, um grupo maleimida, um derivado de succinimida (propionato de succinimidilo, hidroxila succinimidila, carboximetil succinimidila ou carbonato de succinimidila) e semelhantes.
[151] Os grupos reativos em ambas as extremidades do ligante, é que o polímero não peptídico, podem ser iguais ou diferentes. Por exemplo, o polímero não peptídico pode ter um grupo maleimida em uma extremidade e um grupo aldeído, um grupo propionaldeído ou um grupo butiraldeído na outra extremidade. Por exemplo, quando o polímero não peptídico possui um grupo aldeído reativo em uma extremidade e um grupo maleimida reativo na outra extremidade, as reações não específicas podem ser minimizadas, e um polipeptídio fisiologicamente ativo e uma imunoglobulina podem ser eficazmente ligados a ambas as extremidades do polímero não peptídico. O polímero não peptídico que pode ser utilizado na presente invenção pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em polietileno-glicol, polipropileno-glicol, um glicol de etileno/copolímero de propileno glicol, poliol polioxietilado, álcool polivinílico, polissacarídeos, dextrano, acetato de éter de polivinila, polímeros biodegradável, tais como PLA (poli (ácido láctico)) e PLGA (ácido láctico-glicólico), polímeros de lipídeos, quitinas, ácido hialurônico, e suas combinações. Preferencialmente, o polímero não peptídico é o polietileno-glicol. Além disso, os seus derivados conhecidos na arte e derivados que podem ser facilmente preparados por um método conhecido na técnica estão incluídas no âmbito da presente invenção.
[152] Em um exemplo da presente invenção, um conjugado foi sintetizado ligando oxintomodulina ou um seu derivado à região Fc da imunoglobulina por meio de uma ligação covalente através polímero não peptídico a PEG incluindo um grupo propionaldeído sozinho ou tanto um grupo maleimida e um grupo aldeído.
[153] O conjugado da presente invenção tem excelente atividade de receptor de GLP-1 e receptor de glucagon comparado com a oxintomodulina nativa. Além disso, tem ligado a si uma região Fc que aumentam a meia-vida in vivo no sangue do mesmo para manter a sua atividade in vivo durante um período de tempo prolongado.
[154] Tal como aqui utilizado, termo "conservante" se refere a uma substância que é utilizada para prevenir reações anormais ou decomposição de serem causadas por contaminação microbiana. A formulação líquida da presente invenção pode compreender ainda um conservante. Um conservante é geralmente usado em formulações de dosagem múltipla que são provavelmente contaminados com microrganismos, mas não se limita a eles e pode também ser usado em formulações liofilizadas ou formulações de dosagem única, para prevenir a contaminação microbiana. A formulação líquida da presente invenção pode compreender um ou mais agentes conservantes selecionados a partir de m-cresol, fenol e álcool benzílico. A concentração do conservante na formulação líquida pode ser 0,001-1% (p/v). Particularmente, o conservante que é incluído na formulação líquida da presente invenção é preferivelmente m-cresol. A formulação líquida da presente invenção pode ser uma formulação de dosagem múltipla.
[155] Em um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a preparação de uma formulação líquida de um conjugado de oxintomodulina de longa duração.
[156] Especificamente, em uma concretização da presente invenção, o método para a preparação da formulação líquida pode compreender as etapas de: a) preparação de um conjugado de oxintomodulina de longa duração; e b) misturar o conjugado de oxintomodulina de longa duração preparada com um estabilizante contendo um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não-iônico.
[157] Em uma outra concretização da presente invenção, o método para a preparação da formulação líquida pode compreender as etapas de: a) preparação de um conjugado de oxintomodulina de longa duração; e b) misturar o conjugado de oxintomodulina de longa duração preparado com um estabilizante, que contém um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico, e conservante.
[158] Preferivelmente, o estabilizante na etapa b) pode ainda compreender um ou mais selecionado de entre o grupo que consiste em agentes isotônicos, açúcares, álcoois poli-hidricos e aminoácidos.
[159] Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica para a prevenção ou tratamento da obesidade ou diabetes, que compreende a formulação líquida acima.
[160] Tal como aqui utilizado, o termo "prevenção" se refere a todas as ações que inibem ou retardam o desenvolvimento de uma doença alvo. Tal como aqui utilizado, o termo "prevenir" significa a administração do conjugado da presente invenção para inibir ou retardar o desenvolvimento de condições diabéticas, tais como níveis anormais de glicose no sangue ou secreção anormal de isolamento, obesidade ou condições, tais como um aumento no peso do corpo ou gordura corporal.
[161] Tal como aqui utilizado, o termo "tratar" se refere a todas as ações que aliviam, melhorar ou aliviar os sintomas da doença desenvolvida. Tal como aqui utilizado, o termo "tratamento" significa a administração do conjugado da presente invenção para aliviar, melhorar ou aliviar as condições diabéticas acima ou condições de obesidade para normalizar os níveis de glicose no sangue e a secreção de insulina e reduzir o peso corporal ou gordura corporal.
[162] Tal como aqui utilizado, o termo "obesidade" se refere a uma quantidade excessiva de gordura corporal. Um índice de massa corporal (= peso (kg) dividido pela altura (m)) de 25 ou mais é definido como a obesidade. A obesidade geralmente resulta de um desequilíbrio energético no qual o consumo de energia excede o gasto de energia. A obesidade é uma doença metabólica que afeta todo o corpo e altamente susceptível de acarretar a diabetes e hiperlipidemia. Além disso, a obesidade está relacionada com a disfunção sexual, artrite, e um risco aumentado de desenvolvimento de doenças cardiovasculares, e está também relacionado com o desenvolvimento de câncer em alguns casos.
[163] Tal como aqui utilizado, o termo "diabetes" é um tipo de doença metabólica em que a secreção de insulina é insuficiente ou funções normais não são realizadas. A diabetes é caracterizada pelo aumento dos níveis de glicose no sangue e provoca vários problemas de saúde. No caso da diabetes, a glicose é excretada pela urina.
[164] A composição farmacêutica da presente invenção pode compreender ainda um veículo, excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável. Tal como aqui utilizado, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa uma quantidade que seja suficiente para exibir efeitos terapêuticos e não provoca efeitos secundários. A dose do ingrediente ativo da composição farmacêutica da presente invenção pode ser facilmente determinada pelos peritos na arte dependendo do tipo de doença, idade do paciente, peso, estado de saúde, sexo e sensibilidade ao fármaco, a via de administração, o modo de administração, a frequência de administração, a duração do tratamento, as drogas utilizadas em combinação ou coincidentes com a composição da presente invenção, e outros fatores conhecidos no campo da medicina.
[165] Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para a prevenção ou tratamento da obesidade ou diabetes, que compreende a administração da formulação líquida a um sujeito.
[166] Nisto, a formulação líquida, obesidade e diabetes são como descritas acima.
[167] Tal como aqui utilizado, o termo "sujeito" se refere a um indivíduo suspeito de ter a obesidade ou a diabetes. Especificamente, o termo significa mamíferos, incluindo seres humanos, ratos e animais domésticos, que têm ou estão em risco de desenvolver a doença acima. Além disso, o sujeito pode ser qualquer sujeito que possa ser tratado por o derivado de formulação líquida da presente invenção.
[168] O método terapêutico da presente invenção pode compreender a administração de uma quantidade farmaceuticamente eficaz da composição farmacêutica compreendendo a formulação líquida. A dose diária total da composição pode ser determinada através de uma avaliação médica apropriada por um médico, e a composição pode ser administrada uma vez ou várias vezes. No entanto, tendo em vista a finalidade da presente invenção, a dose terapeuticamente eficaz da composição específica para qualquer doente particular pode variar dependendo de vários fatores bem conhecidos no campo da medicina, incluindo o tipo e grau de resposta a ser alcançada, composições concretas de acordo com a hipótese de outros agentes são usados com o mesmo ou não, a idade, peso corporal, estado de saúde, sexo e dieta do paciente, o tempo e via de administração, a taxa de secreção da composição, a duração do tratamento, outras drogas usadas em combinação ou coincidente com a composição da presente invenção, e outros fatores conhecidos no campo da medicina.
EFEITOS VANTAJOSOS DA INVENÇÃO
[169] A formulação líquida da invenção que compreende o conjugado de oxintomodulina de longa duração compreende um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico e não contém uma albumina de soro humano e fatores que são potencialmente prejudiciais para o corpo humano, e, portanto, não é susceptível a infecção viral. Além disso, o conjugado de oxintomodulina da presente invenção compreende a oxintomodulina ligada a uma região Fc da imunoglobulina e, portanto, tem um grande peso molecular, atividade fisiológica prolongada, e uma excelente estabilidade do armazenamento, em comparação com oxintomodulina nativa.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[170] A FIG. 1a é um gráfico que mostra os resultados obtidos pela purificação de um derivado de oxintomodulina mono-PEGuilado (SEQ ID N°: 25) através de uma coluna de purificação SOURCE S.
[171] A FIG. 1b representa um gráfico que mostra os resultados obtidos pela purificação de um conjugado de um derivado de oxintomodulina mono- PEGuilado (SEQ ID N°: 25) e uma Fc da imunoglobulina por meio de uma coluna de purificação de SOURCE 15Q.
[172] A FIG. 1C é um gráfico que mostra os resultados obtidos purificação de um conjugado de um derivado de oxintomodulina mono-PEGuilada (SEQ ID N°: 25) e uma Fc da imunoglobulina por meio de uma coluna de purificação SOURCE ISO.
[173] A FIG. 2a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos pela avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o pH por IE-HPLC no Exemplo 3, após 0-2 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 2a mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[174] A FIG. 2b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos pela avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH por SE-HPLC no Exemplo 3, após 0-2 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 2b mostra o percentual da taxa de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[175] A FIG. 2c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos pela avaliação da estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o pH por RP-HPLC no Exemplo 3, após 0-2 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 2c mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[176] A FIG. 3a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o tipo de álcool de açúcar e a presença ou ausência de um agente isotônico por IE-HPLC no Exemplo 4, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 3A mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[177] A FIG. 3b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o tipo de álcool de açúcar e a presença ou ausência de um agente isotônico por SE-HPLC no Exemplo 4, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 3b mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[178] A FIG. 3c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de uma conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o tipo de álcool de açúcar e a presença ou ausência de um agente isotônico por RP-HPLC no Exemplo 4, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 3C mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[179] A FIG. 4a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de álcool de açúcar por IE-HPLC no Exemplo 5, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 4a mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[180] A FIG. 4b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de álcool de açúcar por SE-HPLC no Exemplo 5, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 4b mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[181] A FIG. 4c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de álcool de açúcar por meio de RP-HPLC no Exemplo 5, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 4c mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[182] A FIG. 5a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de um agente tensoativo e a presença ou ausência de um aminoácido por IE-HPLC no Exemplo 6, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 5a mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[183] A FIG. 5b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de um agente tensoativo e a presença ou ausência de um aminoácido por SE-HPLC no Exemplo 6, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 5b mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[184] A FIG. 5c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de um agente tensoativo e a presença ou ausência de um aminoácido por RP-HPLC no Exemplo 6, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 5c mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[185] A FIG. 6a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e a concentração de álcool de açúcar por IE-HPLC no Exemplo 7 após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 6a mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[186] A FIG. 6b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e a concentração de álcool de açúcar por SE-HPLC no Exemplo 7 após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 6b mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[187] A FIG. 6c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e a concentração de álcool de açúcar por meio de RP-HPLC no Exemplo 7 após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 6c mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[188] A FIG. 7a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e o tipo de tampão de álcool por IE-HPLC no Exemplo 8, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 7a mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[189] A FIG. 7b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e o tipo de tampão de álcool por SE-HPLC no Exemplo 8, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 7b mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[190] A FIG. 7c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e o tipo de tampão de álcool por RP-HPLC no Exemplo 8, após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 7c mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[191] A FIG. 8a é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a presença ou ausência de um conservante e a concentração de oxintomodulina de longa duração por IE-HPLC no Exemplo 9 após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 8a mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[192] A FIG. 8b é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a presença ou ausência de um conservante e a concentração de oxintomodulina de longa duração por SE-HPLC no Exemplo 9 após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 8b mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial.
[193] A FIG. 8c é um diagrama gráfico, mostrando os resultados obtidos por avaliação da estabilidade de um conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a presença ou ausência de um conservante e a concentração de oxintomodulina de longa duração por RP-HPLC no Exemplo 9 após 0-4 semanas do armazenamento a 25 °C. Cada gráfico na FIG. 8c mostra o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial. MODO PARA A INVEÇÃO
[194] Daqui em diante, a presente invenção será descrita em maiores detalhes com referência aos exemplos. Deve ser compreendido, contudo, que estes exemplos são apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o âmbito da presente invenção. Exemplo 1: Síntese de oxintomodulina e oxintomodulina derivados
[195] A fim de medir as estabilidades da oxintomodulina e derivados da oxintomodulina da formulação líquida da presente invenção, derivados oxintomodulina possuindo as sequências de aminoácidos mostradas na Tabela 1 abaixo foram sintetizados. Tabela 1 [Tabela 1] Oxintomodulina e derivados da oxintomodulina
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[196] Na Tabela a acima, os resíduos de aminoácidos indicados por letras em negrito em cada um das SEQ ID Nos: 9, 20, 22, 25, 26, 27, 32, 33, e 34, tomadas em conjunto, formam anéis, e os resíduos de aminoácidos indicados por X significa ácido alfa-metil-glutâmico que é um aminoácido não natural. Além disso, CA indica 4-imidazoacetil, DA indica desamino-histidila, e (d)S indica d- serina. Exemplo 2: Preparação de conjugado compreendendo derivado da oxintomodulina (SEQ ID N°: 25) e Fc da imunoglobulina (derivado da oxintomodulina (SEQ ID N°: 25) ligada à região Fc da imunoglobulina)
[197] Em primeiro lugar, a fim de PEGilar MAL-10K-ALD-PEG em um resíduo de cisteína na posição 30 do aminoácido de um derivado de oxintomodulina (SEQ ID N°: 25), o derivado de oxintomodulina (SEQ ID N°: 25) e MAL-10K-ALD-PEG foram mantidos reagindo uns com os outros em uma proporção molar de 1: 3 e uma concentração de proteína de 3 mg/ml à temperatura ambiente durante 3 horas. Aqui, a reação foi efetuada em 50 mM de tampão Tris (pH 8,0) na presença de 1 M de guanidina. Depois de completada a reação, a solução reacional foi aplicada a uma coluna SOURCE S para purificar um derivado de oxintomodulina mono-PEGuilado na cisteína (coluna SOURCE S, taxa de fluxo: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^100% 50 min B (A: 20 mM de Na- citrato, pH 3.0 + etanol 45%, B: A + 1M KCl)) (Figura 1a). A FIG. 1a é um gráfico que mostra os resultados obtidos pela purificação do derivado de oxintomodulina mono-PEGuilado (SEQ ID N°: 25) através da coluna de purificação SOURCE S.
[198] Em seguida, o derivado de oxintomodulina mono-PEGuilado purificado (SEQ ID N°: 25) e uma Fc da imunoglobulina foram reagidos um com o outro em uma razão molar de 1: 5 e uma concentração de proteína de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. A reação foi realizada em 100 mM de tampão de fosfato de potássio (pH 6,0) na presença de SCB 20 mM como agente redutor. Após a conclusão da reação, a reação foi aplicada a uma coluna de purificação SOURCE 15Q (coluna: 2.0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4% 1 min B ^ 20% 80 min B (A: 20mM Tris-HCl, pH 7.5, B: A + 1M NaCl)) (Fig 1b) e uma coluna de purificação SOURCE ISO (coluna: SOURCE ISO, taxa de fluxo: 2.0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100% 100 min A (A: 20mM Tris-HCl, pH 7.5, B: A + 1.1M AS)) (figura 1c) para purificar um conjugado compreendendo o derivado de oxintomodulina (SEQ ID N°: 25) e a Fc da imunoglobulina. A FIG. 1b representa um gráfico que mostra os resultados obtidos da purificação do conjugado, compreendendo o derivado de oxintomodulina (SEQ ID N°: 25) e a Fc da imunoglobulina, por meio da coluna de purificação SOURCE 15Q, e a FIG. 1C é um gráfico que mostra os resultados obtidos da purificação do conjugado, compreendendo o derivado de oxintomodulina (SEQ ID N°: 25) e a Fc da imunoglobulina, por meio da coluna de purificação SOURCE ISO.
[199] O conjugado de oxintomodulina preparado como descrito acima foi desenvolvido para aumentar a meia-vida da oxintomodulina no sangue. Ele compreende a região Fc da imunoglobulina, o polímero não peptídico e da oxintomodulina, ligados covalentemente um ao outro de uma maneira sítio- específica, e tem um aumento significativo da meia-vida no sangue. Exemplo 3: Avaliação da estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o pH
[200] A fim de avaliar a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração (preparado no Exemplo 2) em formulações líquidas, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 2, a 25 °C durante 0-2 semanas, e, em seguida foi analisado por cromatografia líquida de troca iônica de alta performance (IE- HPLC), cromatografia líquida de alta exclusão de tamanho (SE-HPLC) e cromatografia líquida de fase inversa de alto desempenho (RP-HPLC). Para o armazenamento do conjugado de oxintomodulina, tampão de citrato, como tampão, manitol como um álcool de açúcar, e o polissorbato 20 como agente tensoativo não iônico foram usados. Nas Tabelas 3, 4 e 5 abaixo, IE-HPLC (%), de SE-HPLC (%) e RP-HPLC (%) indicam a área%/área inicial%, o que indica o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial. A Tabela 3 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, a Tabela 4 mostra a área a SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento, e a Tabela 5 mostra o RP-HPLC Área (%) do conjugado do oxintomodulina de longa duração após o armazenamento. Tabela 2 [Tabela 2]
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[201] Como pode ser visto a partir dos resultados d o IE-HPLC (%) na Tabela 3 acima, o conjugado de oxintomodulina foi mais estável a pH mais baixo. Nos resultados de SE-HPLC na Tabela 4, o conjugado de oxintomodulina foi mais estável a um pH de 5,2, e nos resultados de RP-HPLC na Tabela 5, o conjugado de oxintomodulina foi mais estável a um pH de 5,6. Apesar da estabilidade a pH diferir entre os métodos de análise, a diferença na retenção entre pHs foi maior no método de análise por RP-HPLC. Isto sugere que o conjugado de oxintomodulina foi mais estável a um pH de 5,6. Exemplo 4: Avaliação da estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o tipo de álcool de açúcar e a presença ou ausência de um agente isotônico
[202] Os presentes inventores testaram as influências do tipo de álcool de açúcar como um estabilizante e a presença ou ausência de cloreto de sódio como um agente isotônico na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, utilizando o tampão de citrato (pH 5,6) selecionado no Exemplo 3, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 6 abaixo, a 25 °C durante 0-4 semanas, e depois foi analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP- HPLC. Nas Tabelas 7, 8 e 9 abaixo, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) e RP-HPLC (%) indicam a área%/área inicial%, o que indica o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração relativa para o valor inicial. A Tabela 7 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento, Tabela 8 apresenta a área da SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, e na Tabela 9 mostra o RP-HPLC Área (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento. Tabela 6 [Tabela 6]
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[203] Como pode ser observado nas Tabelas 6 a 9 acima, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi mais estável em manitol ou sorbitol do que em glicerol na mesma concentração. Os resultados de RP-HPLC indicam que o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi um pouco estável em manitol em que o sorbitol. Além disso, a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração não diferiram significativamente entre a presença e na ausência de cloreto de sódio como agente isotônico. Exemplo 5: Avaliação da estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de álcool de açúcar
[204] Os presentes inventores testaram a influência da concentração de álcool de açúcar como um estabilizante na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, utilizando o tampão de citrato (pH 5,6 e manitol selecionado nos exemplos acima, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 10 abaixo, a 25 °C durante 0-4 semanas, e depois foi analisado por IE- HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Nas Tabelas 11, 12 e 13 abaixo, IE-HPLC (%), de SE-HPLC (%) e RP-HPLC (%) indicam a área % / área inicial %, o que indica o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina de longa duração em relação ao valor inicial. A Tabela 11 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento, a Tabela 12 mostra a área de SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após armazenamento, e a Tabela 13 mostra a área de RP-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento. Tabela 10 [Tabela 10]
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[205] Como pode ser visto nas Tabelas 10 a 13, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi estável na presença de 5% de manitol ou 10% de manitol. No entanto, um precipitado de proteína foi formado na presença de 2% de manitol ou 15% de manitol. Os resultados de IE-HPLC ou SE-HPLC indicam que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração foi semelhante entre 10% de manitol e 5% de manitol. Os resultados de RP-HPLC indicam que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração era mais estável em 10% de manitol em 5% de manitol. Exemplo 6: Avaliação da estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a concentração de agente tensoativo e a presença ou ausência de aminoácido
[206] Os presentes inventores testaram a influência da concentração de um agente tensoativo como um estabilizante e a presença ou ausência de um aminoácido na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Utilizando o tampão citrato (pH 5,6) e tampão de citrato e 10% de manitol selecionado nos exemplos acima, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 14 abaixo, a 25 °C durante 0-4 semanas, e, em seguida, foi analisada por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Nas Tabelas 15, 16 e 17 abaixo, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) e RP- HPLC (%) indicam a área%/área inicial%, o que indica o percentual de retenção conjugado de oxintomodulina de longa duração relativo ao valor inicial. A Tabela 15 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, a Tabela 16 mostra a área do SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, e a Tabela 17 mostra o RP-HPLC Área (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento. Tabela 14 [Tabela 14]
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[207] Como pode ser visto a partir dos resultados nas Tabelas 4 a 17, o conjugado de oxintomodulina de longa duração era mais estável na composição contendo 0,02% de polissorbato 20 e 0,1 mg/ml de metionina. Exemplo 7: Avaliação da estabilidade conjugado de oxintomodulina de longa duração acordo com o pH e a concentração de álcool de açúcar
[208] Os presentes inventores testaram as influências do pH e a concentração de álcool de açúcar como um estabilizante na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, usando 0,02% do polisorbato 20 e 0,1 mg/mL de metionina selecionados nos exemplos acima, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 18 abaixo, a 25 °C durante 0-4 semanas, e, em seguida, foi analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Nas Tabelas 19, 20 e 21 abaixo, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) e RP-HPLC (%) indicam a área%/área inicial%, o que indica o percentual de retenção do conjugado de oxintomodulina longa duração relativo ao valor inicial. A Tabela 19 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento, a Tabela 20 mostra a área de SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento, e a Tabela 21 mostra o RP-HPLC Área (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração após o armazenamento. Tabela 18 [Tabela 18]
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[209] Como pode ser visto a partir dos resultados das Tabelas acima, os resultados de IE-HPLC indicam que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração foi maior no pH na ordem de pH 5,2, pH 5,6 e pH 6,0. Os resultados de RP-HPLC indicam que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração foi maior na ordem de pH 6,0, pH 5,6 e pH 5,2. Os resultados de SE-HPLC indicam que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração não diferiram significativamente entre pH 5,2, pH 5,6 e pH 6,0. Em outras palavras, os resultados de IE-HPLC, RP-HPLC e de SE-HPLC indicam que o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi estável a pH 5,6.
[210] Entretanto, os resultados de IE-HPLC e de SE-HPLC indicam que o conjugado de oxintomodulina de longa duração não diferiram significativamente entre as concentrações de manitol a pH 5,6. No entanto, nos resultados de RP- HPLC, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi mais estável em 5% de manitol do em que 10% ou 15% de manitol a pH 5,6. Exemplo 8: Avaliação da estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração de acordo com o pH e o tipo de tampão
[211] Os presentes inventores testaram as influências do pH e o tipo de tampão, como um estabilizante na estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, foi utilizando o 0,02% de polissorbato 20, 0,1 mg/ml de metionina e 5% de manitol selecionado nos Exemplos acima, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 22 abaixo, a 25 °C durante 0-4 semanas, e, em seguida, foi analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC.
[212] Nas Tabelas 23, 24 e 25 abaixo, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) e RP- HPLC (%) indicam a área%/área inicial%, o que indica o percentual de retenção conjugado de oxintomodulina de longa duração relativa ao valor inicial. A Tabela 23 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, a Tabela 24 mostra a área de SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, e a Tabela 25 mostra o RP-HPLC Área (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento. Tabela 22 [Tabela 22]
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[213] Como pode ser visto a partir dos resultados nas Tabelas 23 a 25, os resultados do SE-HPLC ou RP-HPLC indicam que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração não diferiram significativamente entre pH 5,6 e pH 5,8. Os resultados de IE-HPLC indicou que o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi mais estável a pH 5,6 do que a pH 5,8. Os resultados de SE-HPLC mostram que a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração não diferiram significativamente entre os tampões ao mesmo pH. Além disso, os resultados de IE-HPLC ou RP-HPLC indicam que o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi mais estável em histidina, ao mesmo pH. Exemplo 9: Avaliação da influência da presença ou ausência de conservante e a concentração do conjugado de oxintomodulina de longa duração sobre a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração
[214] Os presentes inventores testaram as influências da presença ou ausência de um conservante, como um estabilizante e a concentração do conjugado de oxintomodulina de longa duração sobre a estabilidade do conjugado de oxintomodulina de longa duração. Especificamente, utilizando tampão de histidina (pH 5.6), 0,02% de polissorbato 20, 0,1 mg/ml de metionina e 5% de manitol, selecionado nos exemplos acima, o conjugado de oxintomodulina de longa duração foi armazenado nas composições apresentadas na Tabela 26 abaixo, a 25 °C durante 0-4 semanas, e depois foi analisado por IE-HPLC, SE-HPLC e RP-HPLC. Nas Tabelas 27, 28 e 29 abaixo, IE-HPLC (%), SE-HPLC (%) e RP-HPLC (%) indicam a área%/área inicial%, o que indica o percentual de retenção de conjugado de oxintomodulina de longa duração relativa ao valor inicial. A Tabela 27 mostra a área de IE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, a Tabela 28 mostra a área de SE-HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento, e a Tabela 29 mostra a área de RP- HPLC (%) do conjugado de oxintomodulina de longa duração depois do armazenamento. Tabela 26 [Tabela 26]
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[215] Como pode ser visto nas T abelas 26 a 2S SE-HPLC ou RP-HPLC indicam que a estab oxintomodulina de longa duração não se altero conservante e não diferiram de acordo com a sua c , os resultados de IE-HPLC, ilidade do conjugado de u mesmo na presença do oncentração.
[216] Embora as concretizações preferidas da presente invenção tenham sido descritas com fins ilustrativos, os peritos na arte poderão apreciar que várias modificações, adições e substituições são possíveis, sem se afastar do âmbito e espírito da invenção como revelado nas reivindicações anexas.

Claims (34)

1. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade farmacologicamente ativa de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, em que o conjugado de derivado de oxintomodulina compreende: um derivado de oxintomodulina, que é um peptídeo fisiologicamente ativo, compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 24, 25, 26, e 28; uma região Fc da imunoglobulina; e um polímero não peptídico, em que o polímero não peptídico liga covalentemente o derivado de oxintomodulina e a região Fc da imunoglobulina; e um estabilizante isento de albumina, em que o estabilizante contém um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico, em que o tampão possui um pH entre 4,5 a 7.
2. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o estabilizante contém ainda um ou mais compostos selecionados do grupo que consiste em agentes isotônicos, açúcares, álcoois poli-hídricos e aminoácidos.
3. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o derivado de oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24.
4. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o derivado de oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25.
5. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, , caracterizada pelo fato de que o derivado de oxitomodulina compreende a sequência de um aminoácidos da SEQ ID NO: 26.
6. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que que o derivado de oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28.
7. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que a região Fc da imunoglobulina é uma região Fc derivada de IgG, IgA, IgD, IgE ou IgM.
8. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que cada domínio da região Fc da imunoglobulina é um híbrido de domínios provenientes de diferentes imunoglobulinas selecionadas do grupo que consiste em IgG, IgA, IgD, IgE e IgM.
9. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a região Fc da imunoglobulina é um dímero ou multímero que consiste em imunoglobulinas de cadeias simples compostas por domínios da mesma origem.
10. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a região Fc da imunoglobulina é uma região Fc da IgG4.
11. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que a região Fc da imunoglobulina é uma região Fc da IgG4 humana não glicosilada.
12. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que o polímero não peptídico é selecionado do grupo constituído por polipropileno-glicol, copolímero de etileno- glicol/propileno glicol, poliol polioxietilado, poli(álcool vinílico), polissacarídeos, dextrano, poli(éter-etil- vinílico), polímeros biodegradáveis, incluindo o ácido poli- láctico (PLA) e ácido glicólico-poli-láctico (PLGA), polímeros de lipídeos, quitinas, ácido hialurônico, e suas combinações.
13. Formulação líquida de um conjugado de derivado da oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que o polímero não peptídico é o polietileno-glicol.
14. Formulação líquida de um conjugado de derivado da oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizada pelo fato de que o álcool de açúcar é um ou mais álcoois selecionados do grupo que consiste em manitol, sorbitol e glicerol.
15. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que a concentração do álcool de açúcar na formulação líquida é de 2 a 15% (p/v).
16. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que o tampão é um ou mais tampões selecionados do grupo que consiste em citrato, acetato, histidina e tampão fosfato.
17. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 16, caracterizada pelo fato de que o agente isotônico é o cloreto de sódio.
18. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que o tensoativo não iônico é o poloxâmero ou o polissorbato.
19. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que a concentração do agente tensoativo não iônico na formulação líquida é de 0,001 a 0,1% (p/v).
20. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 19, caracterizada pelo fato de que o aminoácido é a metionina.
21. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizada pelo fato de que o estabilizante contém um tampão tendo um pH entre 4,8 e 6,0, um ou mais álcoois de açúcar selecionados dentre o grupo que consiste em manitol e sorbitol, e polissorbato 20.
22. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um ou mais agentes conservantes selecionados do grupo que consiste em m-cresol, fenol e álcool benzílico.
23. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que a concentração do conservante na formulação líquida é de 0,001 a 1% (p/v).
24. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que o conservante é o m-cresol.
25. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizada pelo fato de que a formulação é para administração de múltiplas doses.
26. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, caracterizada pelo fato de que compreende: uma quantidade farmacologicamente eficaz de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, em que o conjugado de derivado de oxintomodulina compreende: um derivado de oxintomodulina que é um peptídeo fisiologicamente ativo, compreendendo a sequência de aminoácidos selecionada do grupo consistido em SEQ ID NO: 24, 25, 26 e 28; uma região Fc da imunoglobulina; e um polímero não peptídico, em que o polímero não peptídico liga covalentemente o derivado de oxintomodulina e a região Fc da imunoglobulina; e de 5 a 50 mM de histidina; de 2 a 15% (p/v) de manitol; de 0,01 a 1 mg/mL de metionina; e de 0,001 a 0,1% (p/v) de polissorbato 20, em que o tampão possui um pH entre 4,5 e 7.
27. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que o derivado de oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24.
28. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que o derivado de oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25.
29. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que o derivado oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26.
30. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que o derivado oxintomodulina compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28.
31. Formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração de acordo com qualquer uma das reivindicações 26 a 30, caracterizado pelo fato de que compreende ainda de 0,001 a 1% (p/v) de m-cresol.
32. Método para a preparação da formulação líquida de um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21 e 26 a 30, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) preparar um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração;e b) misturar o conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, preparado na etapa a), com um estabilizante contendo um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico, em que o tmapão possui um pH entre 4,5 e 7.
33. Método para a preparação da formulação líquida tal como definida em qualquer uma das reivindicações 22 a 25 e 31, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) preparar um conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração;e b) misturar o conjugado de derivado de oxintomodulina de longa duração, preparado na etapa a), com um estabilizante, que contém um tampão, um álcool de açúcar e um agente tensoativo não iônico, e um conservante, em que o tampão possui um pH entre 4,5 e 7.
34. Método de acordo com a reivindicação 32 ou 33, caracterizado pelo fato de que o estabilizante contém ainda um ou mais compostos selecionados do grupo que consiste em agentes isotônicos, açúcares, álcoois poli-hídricos e aminoácidos.
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WO (1) WO2014073842A1 (pt)
ZA (1) ZA201503998B (pt)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG195258A1 (en) 2011-06-10 2013-12-30 Hanmi Science Co Ltd Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PE20181268A1 (es) 2011-06-17 2018-08-03 Hanmi Science Co Ltd Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y el uso del mismo
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
AR093387A1 (es) 2012-11-06 2015-06-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de un conjugado de proteina que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina
JP2016503771A (ja) 2012-12-21 2016-02-08 サノフイ エキセンジン−４誘導体
TW201609796A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 非醯化之艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
EP3080150B1 (en) 2013-12-13 2018-08-01 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
MA39301A1 (fr) 2014-01-20 2018-01-31 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Insuline à action prolongée et utilisation associée
MY192248A (en) * 2014-03-31 2022-08-10 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
AR100695A1 (es) 2014-05-30 2016-10-26 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para el tratamiento de diabetes mellitus que comprende insulina y un agonista dual glp-1 / glucagón
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
CN105435221B (zh) * 2014-09-22 2021-09-28 正大天晴药业集团股份有限公司 一种针对血管内皮生长因子的人源化抗体的药物组合物
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
US11135271B2 (en) 2014-12-30 2021-10-05 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivatives with improved stability
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
US10696725B2 (en) 2015-06-30 2020-06-30 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
AU2015416589B2 (en) * 2015-12-10 2021-04-01 Menicon Co., Ltd. Peptide composition
MX2018008027A (es) 2015-12-31 2018-11-29 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Activador triple que activa receptor de glucagon, glp-1 y gip.
CA3029518A1 (en) * 2016-06-29 2018-01-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same, and therapeutic use thereof
JP7158378B2 (ja) 2016-09-23 2022-10-21 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド インスリン受容体との結合力が減少された、インスリンアナログ及びその用途
JOP20190095A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
US11752216B2 (en) 2017-03-23 2023-09-12 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
US20210317178A1 (en) * 2018-07-19 2021-10-14 D&D Pharmatech Inc. Pharmaceutical composition comprising polypeptide
US20200262887A1 (en) * 2018-11-30 2020-08-20 Opko Ireland Global Holdings, Ltd. Oxyntomodulin peptide analog formulations
US20220242913A1 (en) * 2019-02-15 2022-08-04 Hanmi Fine Chemical Co., Ltd. Novel intermediate used for biologically active polypeptide and method for preparing same
AU2021276071A1 (en) 2020-05-22 2023-02-02 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Liquid formulation

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
EP1952820A3 (en) 1998-03-06 2012-06-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein-free G-CSF formulations
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7217845B2 (en) 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
CA2513213C (en) 2003-01-22 2013-07-30 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
US20050176108A1 (en) 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US8263084B2 (en) * 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
KR101135244B1 (ko) 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
ATE522548T1 (de) 2003-11-13 2011-09-15 Hanmi Holdings Co Ltd Verfahren zur massenproduktion der konstanten region von immunglobulin
US20090214534A1 (en) 2004-12-02 2009-08-27 Steve Holmes Bispecific Domain Antibodies Targeting Serum Albumin And GLP-1 Or PYY
AU2006213607A1 (en) 2005-02-11 2006-08-17 Amylin Pharmaceuticals, Llc GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
KR101349808B1 (ko) 2005-06-13 2014-02-13 임페리얼 이노베이션스 리미티드 섭취행동에 관한 신규 화합물들 및 이들의 효능
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
AU2006279680B2 (en) 2005-08-11 2012-12-06 Amylin Pharmaceuticals, Llc Hybrid polypeptides with selectable properties
WO2007030375A2 (en) 2005-09-08 2007-03-15 Children's Hospital Medical Center Lysosomal acid lipase therapy for nafld and related diseases
CN101389648B (zh) 2006-02-22 2013-07-17 默沙东公司 肽胃泌酸调节素衍生物
AU2007258609B2 (en) 2006-06-07 2013-01-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
GB0624868D0 (en) 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
JP2008169195A (ja) * 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
EP2111414B1 (en) 2007-02-15 2014-07-02 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
EA201070121A1 (ru) 2007-07-10 2010-06-30 Эли Лилли Энд Компани Лекарственная форма, содержащая слитый белок glp-1-fc
KR101545181B1 (ko) 2007-07-27 2015-08-21 바이엘 크롭사이언스 아게 삼원 활성 화합물의 배합물
RU2010113997A (ru) 2007-09-11 2011-10-20 Мондобайотек Лабораториз Аг (Li) Тиролиберин для терапевтического применения
WO2009058734A1 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
US20090181037A1 (en) 2007-11-02 2009-07-16 George Heavner Semi-Synthetic GLP-1 Peptide-FC Fusion Constructs, Methods and Uses
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
EA019203B9 (ru) 2008-06-17 2014-03-31 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты глюкагонового рецептора/glp-1-рецептора
KR20110039230A (ko) 2008-06-17 2011-04-15 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 생리학적 ｐＨ 완충액에서 강화된 용해도 및 안정성을 나타내는 글루카곤 유사체
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
WO2010033207A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
EP2344200A2 (en) 2008-09-19 2011-07-20 Nektar Therapeutics Modified therapeutics peptides, methods of their preparation and use
EP2370461B1 (en) 2008-12-15 2013-10-02 Zealand Pharma A/S Glucagon analogues
TWI489992B (zh) 2008-12-19 2015-07-01 印地安那大學研究及技術公司 醯胺系胰高血糖素超級家族之胜肽前驅藥物
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
BRPI1013626B8 (pt) 2009-03-20 2021-05-25 Hanmi Holdings Co Ltd método para preparar conjugado de polipeptídeo fisiologicamente ativo em sítio específico
WO2010108153A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
MX2011013625A (es) 2009-06-16 2012-01-20 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos glucagon activo de receptor de gip.
AU2010272944B2 (en) 2009-07-13 2015-11-19 Zealand Pharma A/S Acylated glucagon analogues
EP2496249B1 (en) 2009-11-03 2016-03-09 Amylin Pharmaceuticals, LLC Glp-1 receptor agonist for use in treating obstructive sleep apnea
US20120269830A1 (en) 2009-12-07 2012-10-25 Lawrence Horowitz Conjugates with improved pharmacokinetic properties
EP2512503A4 (en) * 2009-12-18 2013-08-21 Univ Indiana Res & Tech Corp COAGONISTS OF GLUCAGON / GLP-1 RECEPTOR
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
MX2012008603A (es) 2010-01-27 2013-01-25 Univ Indiana Res & Tech Corp Conjugados de antagonista de glucagon-agonista de gip y composiciones para el tratamiento de desordenes metabolicos y obesidad.
EP2552950A1 (en) 2010-03-26 2013-02-06 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
AR081066A1 (es) 2010-04-02 2012-06-06 Hanmi Holdings Co Ltd Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina
EP2568993A4 (en) 2010-05-13 2014-02-19 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES EXPRESSING G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR ACTIVITY
WO2011163012A2 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
KR101314865B1 (ko) * 2010-07-06 2013-10-04 김덕중 모바일 환경에서 ｔｖ 화면과 연동하는 증강 현실을 제공하는 방법, 이를 위한 부가 서비스 서버 및 방송 시스템
KR101337797B1 (ko) * 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
JP5282146B2 (ja) 2010-09-06 2013-09-04 パナソニック株式会社 表示装置及びその制御方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101303388B1 (ko) * 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
KR101767570B1 (ko) * 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
CN102010473A (zh) * 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
AR084558A1 (es) 2010-12-22 2013-05-22 Marcadia Biotech Metodos para tratar trastornos metabolicos y obesidad con peptidos basados en glucagon activos para el receptor de peptido insulinotropico dependiente de glucosa (gip)/peptido-1 similar al glucagon (glp-1)
JP6118500B2 (ja) 2011-02-28 2017-04-19 ローム アンド ハース エレクトロニック マテリアルズ エルエルシーＲｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＬＬＣ フォトレジスト組成物、およびフォトリソグラフィパターンを形成する方法
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
SG195258A1 (en) 2011-06-10 2013-12-30 Hanmi Science Co Ltd Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PE20181268A1 (es) 2011-06-17 2018-08-03 Hanmi Science Co Ltd Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y el uso del mismo
MX2013015168A (es) * 2011-06-22 2014-03-31 Univ Indiana Res & Tech Corp Co-agonista del receptor de glucagon/glp-1.
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2013157002A1 (en) 2012-04-19 2013-10-24 Prolor Biotech Inc. Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
JP6311708B2 (ja) 2012-06-21 2018-04-18 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｇｉｐ受容体活性を示すグルカゴンアナローグ
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
AR093387A1 (es) * 2012-11-06 2015-06-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de un conjugado de proteina que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

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