EA007469B1 - Антитела, блокирующие cripto, и их применения - Google Patents
Антитела, блокирующие cripto, и их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA007469B1 EA007469B1 EA200301158A EA200301158A EA007469B1 EA 007469 B1 EA007469 B1 EA 007469B1 EA 200301158 A EA200301158 A EA 200301158A EA 200301158 A EA200301158 A EA 200301158A EA 007469 B1 EA007469 B1 EA 007469B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- antibodies
- epitope
- tumor
- bind
- Prior art date
Links
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 101100369076 Mus musculus Tdgf1 gene Proteins 0.000 title abstract 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 30
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 14
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 41
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 33
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 21
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 16
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 3
- 101150108171 ABA4 gene Proteins 0.000 claims description 2
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims description 2
- 241000592344 Spermatophyta Species 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 abstract description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 abstract 2
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 84
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 54
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 48
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 47
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 46
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 36
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 19
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 13
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 12
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 10
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 8
- 102100040149 Adenylyl-sulfate kinase Human genes 0.000 description 7
- 108010054404 Adenylyl-sulfate kinase Proteins 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 5
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 3
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000004287 null lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- -1 cisplatin) Chemical compound 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 1
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- 101100181130 Arabidopsis thaliana KIN14G gene Proteins 0.000 description 1
- 102000014654 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 108010078554 Aromatase Proteins 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 101100497948 Caenorhabditis elegans cyn-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 239000012624 DNA alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 235000012601 Euterpe oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 244000207620 Euterpe oleracea Species 0.000 description 1
- 229940123414 Folate antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100113597 Mus musculus Cs gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940127395 Ribonucleotide Reductase Inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 102220469221 S-adenosyl-L-methionine-dependent tRNA 4-demethylwyosine synthase TYW1B_E18A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000003650 acai Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000012801 analytical assay Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229940088954 camptosar Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к антителам, блокирующим Cripto, или к их биологически функциональным фрагментам и их применениям. Представлены антитела, которые связывают Cripto и модулируют передачу сигнала Cripto. Представлены антитела, которые связывают Cripto и блокируют взаимодействие между Cripto и ALK4. Также представлены антитела, которые связывают Cripto и модулируют рост опухоли. Также представлены антитела, которые связывают Cripto, модулируют передачу сигнала и модулируют рост опухоли. Представлены антитела, которые связывают Cripto, блокируют взаимодействие между Cripto ALK4 и модулируют рост опухоли. Изобретение также относится к способам использования указанных антител в терапевтических, диагностических и научно-исследовательских целях.
Description
Родственные заявки
Данная заявка является продолжением заявки на выдачу патента υ.δ.δ.Ν. 60/367002, поданной 22 марта 2002, которая является частичным продолжением заявки υ.δ.δ.Ν. 60/301091, поданной 26 июня 2001, которая является частичным продолжением заявки υ.δ.δ.Ν. 60/293020, поданной 17 мая 2001, которая является частичным продолжением заявки υ.δ.δ.Ν. 60/286782, поданной 26 апреля 2001. Полное описание каждой из вышеуказанных заявок на выдачу патентов включено в данное описание в виде ссылки.
Область техники изобретения
Данное изобретение, в общем, относится к области генетики и клеточной и молекулярной биологии. Более конкретно изобретение относится к антителам, которые связываются и модулируют передачу сигнала СпрЮ. к наборам, содержащим такие антитела, и способам, в которых антитела используются.
Предпосылка изобретения
СпрЮ является белком клеточной поверхности, состоящим из 188 аминокислотных остатков, случайно выделенным при скрининге кДНК библиотеки эмбриональной карциномы человека (С1ссобюо1а е1 а1., 1989, ЕМВО ^., νοί. 8, N0. 7, рр. 1987-1991). Белок СпрЮ имеет, по меньшей мере, два заметных домена: богатый цистеином домен и домен, сначала охарактеризованный как домен, сходный с доменом, обнаруженным в семействе эпидермального фактора роста (ЕОР). СпрЮ первоначально классифицировали как представителя семейства ЕОР (С1ссоШсо1а е1 а1., выше); однако последующий анализ показал, что СпрЮ не связывает ни один из известных рецепторов ЕОР и его ЕОР-подобный домен в действительности отличается от семейства ЕОР (В1апсо е1 а1., 1999, 1. Вю1. Сйет., 274:8624-8629).
Сигнальный путь СпрЮ остается неясным, несмотря на продолжающееся исследование при наличии сведений в литературе, подтверждающих активацию нескольких различных путей, включая МАРкиназный путь (^еδаηΐ^5 е1 а1., 1997, Се11 Сго\\1й Игйег., 8:1257-1266; Каппап е1 а1., 1997, 1. Вю1. Сйет., 272:3330-3335), путь ТОР-β (Огйвтап е1 а1., 1999, ^еνе1οртепΐ, 127:921-932; δΠ№Γ е1 а1., 2000, №1иге, 403:385-389), возможные взаимодействия с путем \Уп1 (Ьа1отоп е1 а1., Епбосг. Ке1а1. Сапсег. 2000 Эес; 7(4):199-226) и взаимное влияние в случае пути ЕОР (В1апсо е1 а1., 1999, 1. Вю1. Сйет., 274:8624-8629).
В патенте США 5256643 и двух родственных ему выделенных заявках (патенты США 5654140 и 5792616) описан ген СпрЮ человека, белок СпрЮ и антитела к СпрЮ.
В патенте США 5264557 и трех родственных ему выделенных заявках (патенты США 5620866, 5650285 и 5854399) описан родственный СпрЮ ген и белок человека. Также заявлены антитела, которые связываются с белком, родственным Спр!о, но перекрестно не реагируют посредством связывания с самим белком СпрЮ.
Сверхэкспрессия белка СпрЮ связана со многими типами опухолей (включая, но не ограничиваясь указанным, опухоли молочной железы, семенников, толстой кишки, легкого, яичника, мочевого пузыря, матки, шейки матки, поджелудочной железы и желудка), как показано с помощью иммуноокрашивания ткани человека поликлональными антителами кролика, полученными против небольших пептидов спр!о (Рашсо е1 а1., 1996, ΙπΙ. 1. Сапсег, 65:51-56; Вугпе е1 а1., 1998, 1. Ра1йо1оду, 185:108-111; Ие Апдейв е1 а1., 1999, 1пГ 1. Опсо1оду, 14:437-440). Таким образом, в данной области существует необходимость в средствах контроля, ограничения и/или предотвращения такой сверхэкспрессии, модулирования передачи сигнала СпрЮ и модулирования последствий экспрессии Сг1р1о (т.е. стимулирования и/или поддержания клеточной трансформации).
Сущность изобретения
Данное изобретение относится к новым антителам, которые специфично связываются с Спр!о, и способам получения и применения таких антител. Изобретение также относится к антителам, которые связываются с СпрЮ и модулируют передачу сигнала СпрЮ или взаимодействие белков, например, к антителу, которое связывается с СпрЮ так, что сигнал, возникающий в результате взаимодействия белков с Спр!о, подавляется. Изобретение также относится к антителам, которые связываются с СпрЮ и блокируют взаимодействие между СпрЮ и АЬК4. Изобретение также относится к антителам, которые связываются с СпрЮ и модулируют рост опухоли. Изобретение также относится к антителам, которые связываются с Спр!о, модулируют передачу сигнала СпрЮ и модулируют рост опухоли. Изобретение также относится к антителам, которые связываются с Спр!о, блокируют взаимодействие между СпрЮ и АЬК4 и модулируют рост опухоли.
В одном аспекте изобретения антитело согласно данному изобретению специфично связывается с эпитопом, выбранным из группы эпитопов, с которыми связываются антитела А6С12.11, А6Р8.6 (АТСС инвентарный № РТА-3318), А7Н1.19, А8Р1.30, А8О3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317), А8Н3.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3315), А8Н3.2, А19А10.30, А10В2.18 (АТСС инвентарный №. РТА-3311), А27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310), А40О12.8 (АТСС инвентарный №. РТА3316), А2И3.23, А7А10.29, А9О9.9, А15С12.10, А15Е4.14, А17А2.16, А17С12.28, А17О12.1 (АТСС инвентарный №. РТА3314), А17Н6.1, А18В3.11 (АТСС инвентарный №. РТА-3312), А19Е2.7, В3Р6.17 (АТСС инвентарный №. РТА-3319), В6О7.10 (АТСС инвентарный №. РТА-3313), В11Н8.4.
В другом аспекте изобретения антитело согласно данному изобретению специфично связывается с эпитопом в лиганд/рецептор-связывающем домене СпрЮ. СпрЮ может быть выбран из СВ-1 (УЕЦ ΙΌ №:
- 1 007469
1) или СР-3 (8ЕЦ ΙΌ №: 2). В более конкретном варианте антитела, которые специфично связываются с эпитопом в лиганд/рецептор-связывающем домене, включают, например, А6С12.11, Л6Е8.6 (АТСС инвентарный №. РТА-3318), Л8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317), А19А10.30, А8Н3.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3315), Л27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310), Л40С12.8 (АТСС инвентарный №. РТА-3316), А17С12.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3314), А18В3.11 (АТСС инвентарный №. РТА-3312) и В6С7.10 (АТСС инвентарный №. РТА-3313).
В одном варианте эпитоп, с которым связываются антитела согласно данному изобретению, находится в ЕСР-подобном домене. Антитела, которые специфично связываются с эпитопом в ЕСЕ-подобном домене, включают, но не ограничены указанным, А40С12.8 (АТСС инвентарный №. РТА-3316), А8Н3.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3315), А27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310), В6С7.10 (АТСС инвентарный №. РТА-3313), А17С12.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3314) и А18В3.11 (АТСС инвентарный №. РТА-3312).
В другом варианте эпитоп, с которым связываются антитела согласно данному изобретению, находится в Сук-богатом домене. Антитела, которые специфично связываются с эпитопом в Сук-богатом домене, включают, но не ограничены указанным, А19А10.30, А8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317), А6Р8.6 (АТСС инвентарный №. РТА-3318) и А6С12.11.
В другом варианте эпитоп, с которым связываются антитела согласно данному изобретению, находится в домене, охватывающем аминокислотные остатки 46-62 Спр!о. Антитела, которые специфично связываются с эпитопом в домене, охватывающем аминокислотные остатки 4 6-62 С'пр1о. включают, но не ограничены указанным, А10В2.18 (АТСС инвентарный №. РТА-3311), В3Р6.17 (АТСС инвентарный №. РТА-3319) и А17А2.16.
Данное изобретение также относится к антителам, которые специфично связываются с Спр1о и способны модулировать передачу сигнала Спр1о. Антитела, которые специфично связываются с Спр1о и способны модулировать передачу сигнала Спр!о, включают, но не ограничены указанным, А40С12.8 (АТСС инвентарный №. РТА-3316), А8Н3.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3315), А27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310) и А6С12.11. В одном варианте антитела согласно данному изобретению, которые специфично связываются с Спр!о и способны модулировать передачу сигнала Спр!о, связываются с эпитопом в ЕСР-подобном домене или Сук-богатом домене Спр1о.
Данное изобретение также относится к антителам, которые специфично связываются с Спр1о и блокируют взаимодействие между Спр1о и АЕК4. Антитела, которые специфично связываются с Спр1о и способны блокировать взаимодействие между Спр1о и АЕК4, включают, но не ограничены указанным, А8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317), А6Р8.6 (АТСС инвентарный №. РТА-3318) и А6С12.11. В одном варианте антитела согласно данному изобретению, которые специфично связываются с Спр1о и способны блокировать взаимодействие между Спр1о и АЕК4, связываются с эпитопом в ЕСР-подобном домене или Сук-богатом домене Спр1о.
В другом аспекте данное изобретение относится к антителам, которые специфично связываются с Спр1о и способны модулировать рост опухоли. Антитела, которые специфично связываются с Спр1о и способны модулировать рост опухоли, включают, но не ограничены указанным, А27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310), В6С7.10 (АТСС инвентарный №. РТА-3313) и А8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317).
В одном варианте антитела согласно данному изобретению, которые специфично связываются с Спр1о и способны модулировать рост опухоли, связываются с эпитопом в ЕСР-подобном домене или Сук-богатом домене Спр1о.
В еще одном аспекте данное изобретение относится к антителам, которые специфично связываются с Ст1р!о, которые способны модулировать передачу сигнала Спр1о и которые способны модулировать рост опухоли. Антитела, которые специфично связываются с Спр!о, которые способны модулировать передачу сигнала Спр1о и которые способны модулировать рост опухоли, включают, но не ограничены указанным, А27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310).
В одном варианте антитела согласно данному изобретению, которые специфично связываются с Ст1р!о, которые способны модулировать передачу сигнала Спр1о и которые способны модулировать рост опухоли, связываются с эпитопом в ЕСР-подобном домене или Сук-богатом домене Спр1о.
В еще одном аспекте данное изобретение относится к антителам, которые специфично связываются с Ст1р!о, которые способны блокировать взаимодействие между Спр1о и АЕК4 и которые способны модулировать рост опухоли. Антитела, которые специфично связываются с Спр!о, которые способны блокировать взаимодействие между Спр1о и АЬК4 и которые способны модулировать рост опухоли, включают, но не ограничены указанным, А8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317).
В другом варианте данное изобретение относится к антителу, продуцируемому гибридомой, выбранному из группы, состоящей из А6Р8.6 (АТСС инвентарный №. РТА-3318), А8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317), А8Н3.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3315), А10В2.18 (АТСС инвентарный №. РтА3311), А27Р6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310), А40С12.8 (АТСС инвентарный №. РТА-3316), А17С12.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3314), А18В3.11 (АТСС инвентарный №. РТА-3312), В3Р6.17 (АТСС*инвентарный №. РТА-3319) и В6С7.10 (АТСС инвентарный №. РТА-3313).
- 2 007469
Антитела согласно данному изобретению включают, но не ограничены указанным, моноклональные, поликлональные, гуманизированные, химерные и человеческие антитела.
Данное изобретение также относится к композиции для введения субъекту, имеющему опухоль, которая экспрессирует СпрЮ, содержащей по меньшей мере одно из антител, описанных выше. В более конкретном варианте субъектом является человек. Композиция может содержать фармацевтически приемлемый наполнитель. Описанные выше антитела можно конъюгировать с химиотерапевтическим средством или вводить в комбинации с неконъюгированным химиотерапевтическим средством.
В другом аспекте изобретения рассматриваются способы модулирования роста опухолевых клеток в образце ίη νίίτο, включающие стадию добавления к образцу описанных выше композиций.
Также рассматриваются способы модулирования роста опухолевых клеток у субъектов ίη νΐνο, включающие стадию введения субъекту эффективного количества описанных выше композиций. В конкретном варианте субъектом является человек.
Другим аспектом настоящего изобретения являются способы лечения субъектов, имеющих опухоль, которая сверхэкспрессирует СпрЮ, включающие введение субъекту описанных выше композиций в эффективном количестве. Композиции для введения могут включать фармацевтически приемлемые наполнители, антитела, конъюгированные с химиотерапевтическими средствами, и антитела, вводимые в комбинации с неконъюгированными химиотерапевтическими средствами.
Способы согласно данному изобретению особенно полезны для модулирования роста опухолевых клеток и/или лечения субъекта (т.е. человека), имеющего опухоль, в том случае, когда опухолевая клетка выбрана из опухолевых клеток молочной железы, семенников, толстой кишки, легкого, яичника, мочевого пузыря, матки, шейки матки, поджелудочной железы и желудка.
В еще одном варианте данное изобретение относится к способам определения того, экспрессирует ли ткань СпрЮ, включающим стадию анализа ткани субъекта в иммуноанализе с использованием любого из описанных выше антител. Также рассматриваются способы определения того, сверхэкспрессирует ли линия клеток СпрЮ, включающие стадию анализа линии клеток в иммуноанализе с использованием любого из описанных выше антител.
Указанные и другие аспекты изобретения более подробно представлены ниже в подробном описании изобретения.
Подробное описание изобретения
Обнаружены антитела, которые специфично связываются с СпрЮ, и их применения для модулирования передачи сигнала СпрЮ или взаимодействия белков и/или для блокирования взаимодействия между СпрЮ и АТК4, и/или модулирования роста опухолевых клеток. Обнаружены различные классы антител, которые специфично связываются с СпрЮ, включая, например, антитела, которые специфично связываются с эпитопом в лиганд/рецептор-связывающем домене либо нативного белка СпрЮ, либо денатурированной формы СпрЮ: антитела, которые связывают ЕСТ-подобный домен, Сук-богатый домен или пептид (например, примерно из 3-20 аминокислот) из области, содержащей аминокислотные остатки 46150; антитела, которые связывают СпрЮ и модулируют передачу сигнала СпрЮ; антитела, которые связывают СпрЮ и модулируют рост опухолевых клеток; и антитела, которые связывают СпрЮ, модулируют передачу сигнала СпрЮ и модулируют рост опухолевых клеток. Указанные антитела выбраны с использованием обычных анализов ίη νίί го для отбора антител, которые связывают лиганд/рецепторсвязывающий домен, модулируют передачу сигнала СпрЮ или модулируют рост опухолевых клеток.
Способы согласно данному изобретению применимы в терапии злокачественных или доброкачественных опухолей млекопитающих в том случае, когда скорость роста опухоли (которая является аномальной скоростью для нормальной ткани), по меньшей мере, частично зависит от СпрЮ. Аномальной скоростью роста является скорость роста, которая превышает скорость, необходимую для нормального гомеостаза и превышает скорость для нормальных тканей того же происхождения.
Определения
На протяжении документа приведены различные определения. Большинство слов имеют значение, которое может приписываться таким словам специалистом в данной области. Слова, конкретное определение которых приведено либо ниже, либо в ином месте данного документа, имеют значение, приведенное в контексте данного изобретения в целом, и которое обычно понимается специалистами в данной области.
В используемом в данном описании смысле термин «область» означает физически непрерывную часть первичной структуры биомолекулы. В случае белков область определяют как непрерывную часть аминокислотной последовательности данного белка.
В используемом в данном описании смысле термин «домен» относится к структурной части биомолекулы, которая вносит вклад в известную или ожидаемую функцию биомолекулы. Домены могут иметь равную протяженность с областями или их частями; домены также могут включать часть биомолекулы, которая отлична от конкретной области, наряду с полной указанной областью или ее частью. Примеры белковых доменов включают, но не ограничены указанным, внеклеточный домен (простирается примерно от остатка 31 до остатка 188 СпрЮ, включая СпрЮ, СК-1 (8ЕО ΙΌ N0: 1) и СК-3 (8Е0 ΙΌ N0: 2)) и трансмембранный домен (простирается примерно от остатка 169 до остатка 188 СпрЮ, включая С/г1р1о,
- 3 007469
СК-1 (8Еф ΙΌ N0: 1) и СК-3 (8Еф ΙΌ N0: 2)). Лиганд/рецептор-связывающий домен белка Спр1о простирается примерно от остатка 75 до остатка 150 СпрЮ. включая Спр!о. СК-1 (8Еф ΙΌ N0: 1) и СК-3 (8ЕЦ ΙΌ N0: 2) и содержит ЕСЕ-подобный домен С.’пр1о. который простирается. например. примерно от остатка 75 до остатка 112 Спр1о. включая Спр1о. СК-1 (8Еф ΙΌ N0: 1) и СК-3 (8Еф ΙΌ N0: 2). и богатый цистеином домен СпрЮ. который простирается. например. примерно от остатка 114 до остатка 150 СпрЮ. включая Спр1о. СК-1 (8Еф ΙΌ N0: 1) и СК-3 (8Еф ΙΌ N0: 2) . Например. многие моноклональные антитела согласно данному изобретению были идентифицированы как антитела. связывающиеся с ЕСЕподобным или Су8-богатым доменами. Кроме того. моноклональные антитела А10В2.18 (АТСС инвентарный №. РТА-3311). В3Е6.17 (АТСС инвентарный №. РТА-3319) и А17А2.16 были идентифицированы как антитела. связывающиеся с эпитопом. образованным в домене в области. охватывающей аминокислотные остатки 46-62. «левее» ЕСЕ-подобного домена. Смотри пример 3 ниже. Эпитоп в лиганд/рецептор-связывающем домене является эпитопом. образуемом либо в конформационно нативном белке. либо в денатурированном белке Спр!о. с которым могут связываться антитела.
В используемом в данном описании смысле подразумевается. что термин «антитело» относится к полным интактным антителам и ЕаЬ. ЕаЬ'. Е(аЬ)2 и другим их фрагментам. Полные интактные антитела включают. но не ограничены указанным. моноклональные антитела. такие как мышиные моноклональные антитела. поликлональные антитела. химерные антитела. человеческие антитела и гуманизированные антитела. Различные формы антител можно получить с использованием стандартных способов на основе рекомбинантной ДНК (\Ут1ег апй МйЫет. №11игс 349: 293-99. 1991) . Например. можно сконструировать «химерные» антитела. в которых антиген-связывающий домен из антитела животного связан с константным доменом человека (антитело. исходно полученное от млекопитающего. отличного от человека. для которого использовали технологию рекомбинантной ДНК. чтобы заменить все или часть областей шарнирной и константной областей тяжелой цепи и/или константной области легкой цепи соответствующими областями из легкой цепи или тяжелой цепи иммуноглобулина человека) (см.. например. СаЬ111у е! а1.. патент США 4816567; Мотпкоп е! а1.. Ргос. №11. Асай. δει. 81: 6851-55. 1984). Химерные антитела уменьшают иммуногенные ответы. вызываемые антителами животных в случае использования при клиническом лечении людей.
Кроме того. можно синтезировать рекомбинантные «гуманизированные» антитела. Гуманизированные антитела являются антителами. исходно полученными от млекопитающего. отличного от человека. для которых использовали технологию рекомбинантной ДНК. чтобы заменить некоторые или все аминокислоты. не требующиеся для связывания антигена. аминокислотами из соответствующих областей легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина человека. То есть. они являются химерами. главным образом содержащими последовательности иммуноглобулина человека. в которые были встроены области. ответственные за специфичное связывание антигена (смотри. например. заявку на выдачу патента РСТ \У0 94/04679). Животных иммунизируют требуемым антигеном. выделяют соответствующие антитела и удаляют часть последовательностей вариабельных областей. ответственных за специфичное связывание антигена. Полученные от животного антигенсвязывающие области затем клонируют в соответствующем положении генов антитела человека. в которых были делетированы антигенсвязывающие области. Гуманизированные антитела минимизируют использование гетерологичных (межвидовых) последовательностей в антителах для применения в терапии человека. и меньше вероятность того. что они вызовут нежелательные иммунные ответы. Подобным образом можно получить приматизированные антитела.
Другой вариант изобретения включает применение человеческих антител. которые можно продуцировать в животных. отличных от человека. таких как трансгенные животные. несущие один или несколько трансгенов иммуноглобулина человека. Таких животных можно использовать в качестве источника спленоцитов для получения гибридом. как описано в патенте США 5569825.
Фрагменты антител и моновалентные антитела также можно использовать в способах и композициях согласно данному изобретению. Моновалентные антитела содержат димер тяжелая цепь/легкая цепь. связанный с областью Ес (или стволовой областью) второй тяжелой цепи. «ЕаЬ-область» относится к тем частям цепей. которые примерно эквивалентны или аналогичны последовательностям. которые содержат Υ-разветвленные части тяжелой цепи. и полностью к легкой цепи. и которые. как было показано. совместно (в агрегатах) проявляют активность антитела. Белок ЕаЬ включает агрегаты одной тяжелой и одной легкой цепи (обычно известные как ЕаЬ'). а также тетрамеры. которые соответствуют двум разветвленным участкам антитела У (обычно известные как Е(аЬ)2). при ковалентной или нековалентной агрегации любых указанных выше компонентов. при условии. что агрегат способен специфично реагировать с конкретным антигеном или семейством антигенов.
Любое из антител согласно изобретению необязательно может быть конъюгировано с химиотерапевтическим средством. определение которого приведено ниже.
В используемом в данном описании смысле термин «связывание» означает физическое или химическое взаимодействие между двумя белками или соединениями или ассоциированными белками или соединениями или их комбинациями. включая взаимодействие между антителом и белком. Связывание включает ионные. неионные. водородные связи. Ван-дер-Ваальсовы и гидрофобные взаимодействия и т.д. При физическом взаимодействии связывание может быть либо прямым. либо непрямым. при этом
- 4 007469 непрямое осуществляется посредством или благодаря влиянию другого белка или соединения. Прямое связывание относится к взаимодействиям, которые не происходят при посредстве или за счет влияния другого белка или соединения, а напротив происходит без других реальных химических промежуточных соединений. Связывание можно регистрировать многими различными способами. Способы регистрации связывания хорошо известны специалистам в данной области.
В используемом в данном описании смысле «антитело, способное интернализовать С'прЮ» означает антитело, которое проникает в клетку, удаляя С'прЮ с клеточной поверхности. Можно провести скрининг в отношении антител к Спр1о, которые способны интернализовать Сг1р1о. с использованием флуоресцентных меченых моноклональных антител к С'прЮ. Для того чтобы определить, какие антитела интернализуются в С'прЮ-позитивные клетки, можно провести анализ в отношении поглощения флуоресцентного сигнала антител в клетки, наблюдая клетки в флуоресцентном и/или конфокальном микроскопе. Указанные антитела, которые интернализовались, будут видны как флуоресцентные сигналы в цитоплазматических и/или клеточных везикулах. Неограничивающие примеры антител к СпрЮ, способных интернализовать СпрЮ, включают А27Р6.1 и В3Р6.17.
В используемом в данном описании смысле термин «соединения» означает любой идентифицируемый химический агент или молекулу, включая, но не ограничиваясь указанным, ион, атом, небольшую молекулу, пептид, белок, сахар, нуклеотид или нуклеиновую кислоту, и такое соединение может быть природным или синтетическим.
В используемом в данном описании смысле термины «модулирует» или «модифицирует» означают увеличение или уменьшение количества, качества или влияния конкретной активности или белка.
В используемом в данном описании смысле термин «модулирует передачу сигнала С'прЮ» означает увеличение или уменьшение количества, качества или влияния активности Спр1о, примерно на 5%, предпочтительно на 10%, более предпочтительно на 20%, более предпочтительно на 30%, более предпочтительно на 40%, более предпочтительно на 50%, более предпочтительно на 60%, более предпочтительно на 70%, более предпочтительно на 80%, более предпочтительно на 90% и наиболее предпочтительно на 100%. Активность можно измерить с помощью анализов, известных в данной области, таких как анализ нулевых клеток, показанный в примере 3. В другом варианте белковое взаимодействие между Сир1о и другим белком сходным образом подавляют посредством связывания антител согласно изобретению.
В используемом в данном описании смысле термин «блокирование взаимодействия между С'прЮ и АЬК 4» означает увеличение или уменьшение взаимодействия, т.е. связывания между Сг1р1о и АЕК4 примерно на 5%, предпочтительно на 10%, более предпочтительно на 20%, более предпочтительно на 30%, более предпочтительно на 40%, более предпочтительно на 50%, более предпочтительно на 60%, более предпочтительно на 70%, более предпочтительно на 80%, более предпочтительно на 90% и наиболее предпочтительно на 100%. Активность можно измерить с помощью анализов, известных в данной области, таких как анализ связывания, показанный в примере 8.
В используемом в данном описании смысле термин «модулирование роста опухолевых клеток ίη νίίτο» означает увеличение или уменьшение количества опухолевых клеток ίη νίΐτο примерно на 5%, предпочтительно на 10%, более предпочтительно на 20%, более предпочтительно на 30%, более предпочтительно на 40%, более предпочтительно на 50%, более предпочтительно на 60%, более предпочтительно на 70%, более предпочтительно на 80%, более предпочтительно на 90% и наиболее предпочтительно на 100%. Модулирование роста опухолевых клеток ίη νίΐτο можно измерить с помощью анализов, известных в данной области, таких как анализ в мягком агаре клеток СЕО, показанный в примере 4.
В используемом в данном описании смысле «модулирование роста опухолевых клеток ίη νΐνο» означает увеличение или уменьшение количества опухолевых клеток ίη νΐνο примерно на 5%, предпочтительно на 10%, более предпочтительно на 20%, более предпочтительно на 30%, более предпочтительно на 4 0%, более предпочтительно на 50%, более предпочтительно на 60%, более предпочтительно на 70%, более предпочтительно на 80%, более предпочтительно на 90% и наиболее предпочтительно на 100%. Модулирование роста опухолевых клеток ίη νΐνο можно измерить с помощью анализов, известных в данной области, таких как анализ, показанный в примере 5.
Термин «профилактика» относится к уменьшению вероятности того, что организм будет заражен или будет развиваться аномальное состояние.
Термин «лечение» относится к получению терапевтического эффекта и, по меньшей мере, частичному ослаблению или отмене аномального состояния организма. Лечение включает поддержание роста опухоли в подавленном состоянии и индукцию ремиссии.
Термин «терапевтический эффект» относится к подавлению аномального состояния. Терапевтический эффект в некоторой степени уменьшает один или несколько симптомов аномального состояния. По отношению к лечению аномальных состояний терапевтический эффект может относиться к одному или нескольким из следующих показателей:
(a) увеличение или уменьшение пролиферации, роста и/или дифференцировки клеток;
(b) ингибирование (т.е. замедление или остановка) или стимуляция гибели клеток;
(c) ингибирование дегенерации;
- 5 007469 (б) уменьшение в некоторой степени одного или нескольких симптомов, связанных с аномальным состоянием; и (е) усиление функционирования популяции клеток.
Соединения, проявляющие эффективность, направленную против аномальных состояний, можно идентифицировать, как указано в данном описании.
Термин «введение» относится к способу включения соединения в клетки или ткани организма. Можно проводить профилактику или лечение аномального состояния в том случае, когда клетки или ткани организма существуют в организме или вне организма. Клетки, существующие вне организма, можно поддерживать или выращивать на чашках для культуры ткани или в другом организме. Для клеток, которые содержаться в организме, в данной области существует много способов, чтобы ввести соединения, включая (без ограничения) пероральное, парентеральное, дермальное, инъекционное и аэрозольное применения. Для клеток вне организма в данной области существует множество способов, чтобы ввести соединения, включая (без ограничения) способы микроинъекции в клетки, способы трансформации и способы на основе носителей. Введение можно осуществить множеством способов, известных в данной области, например, перорально, внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно и т.д. В случае использования для терапии ίη νΐνο антитела согласно данному изобретению вводят пациенту в эффективных количествах. В используемом в данном описании смысле «эффективным количеством» является количество, достаточное для того, чтобы получить положительные или требуемые клинические результаты (т.е. количества, которые удаляют или уменьшают опухолевую нагрузку пациента). Эффективное количество можно ввести в одно или несколько введений. В целях данного изобретения эффективное количество антител согласно данному изобретению представляет собой количество антител, которое является достаточным для улучшения, стабилизации или замедления развития связанного с Спр1о патологического состояния, в частности связанных с Спр1о опухолей. Детенция и измерение указанных индикаторов эффективности обсуждается ниже. Пример обычного режима лечения включает введение субъекту с помощью внутривенной инфузии антител согласно изобретению по схеме один раз в неделю в дозе примерно 2-5 мг/кг. Антитела вводят амбулаторно в отделении хемоинфузии, если нет необходимости в госпитализации пациента. Другие схемы введения известны в данной области и также предполагаются в изобретении.
Профилактику и лечение аномального состояния также можно проводить с помощью введения антитела согласно изобретению в группу клеток, имеющих отклонения в пути сигнальной трансдукции в организме. Затем можно осуществлять мониторинг влияния введения соединения на функцию организма. Организм предпочтительно является организмом человека.
Подразумевается, что «сверхэкспрессия Спр1о» означает экспрессию Сг1р(о тканью, экспрессия в которой выше, чем экспрессия Спр1о в близлежащей нормальной ткани, в статистически значимом количестве.
Термин «химиотерапевтические средства» относится к любым средствам, идентифицированным в данной области как средства, оказывающие терапевтическое воздействие на ингибирование роста опухоли, поддержание роста опухоли в подавленном состоянии и/или индукцию ремиссии, таким как природные соединения, синтетические соединения, белки, модифицированные белки и радиоактивные соединения. Химиотерапевтические средства, рассматриваемые в данном описании, включают средства, которые можно конъюгировать с антителами согласно данному изобретению, или альтернативно средства, которые можно использовать в комбинации с антителами согласно данному изобретению, не конъюгируя их с антителом. Примеры химиотерапевтических средств, которые можно конъюгировать с антителами согласно данному изобретению, включают, но не ограничены указанным, радиоактивные конъюгаты (90Υ, 1311, 99тТс, 11Πη, 186Р11. и др.), активируемые в опухоли пролекарства (мейтанзиноиды, аналоги СС1065, производные клихеамицина, антрациклины, алкалоиды винка и др.), рицин, дифтерийный токсин, экзотоксин Рзеиботопаз.
Химиотерапевтические средства, которые можно использовать в комбинации с антителами согласно изобретению, а не конъюгировать с ними (т.е. неконъюгированные химиотерапевтические средства), включают, но не ограничены указанным, следующие средства: платину (т.е., цисплатин), антрациклины, аналоги нуклеозидов (пурина и пиримидина), таксаны, камптотецины, эпиподофиллотоксины, ДНКалкилирующие агенты, антагонисты фолатов, алкалоиды винка, ингибиторы рибонуклеотидредуктазы, ингибиторы эстрогена, ингибиторы прогестерона, ингибиторы андрогена, ингибиторы ароматазы, интерфероны, интерлейкины, моноклональные антитела, таксол, камптосар, адриамицин (бох), 5-Ρϋ и гемцитабин. Такие химиотерапевтические средства можно использовать в практике изобретения в комбинации с антителами согласно изобретению путем совместного введения антитела и неконъюгированного химиотерапевтического средства.
«Фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель» относится к биологически инертным соединениям известным в данной области и используемым в случае введения антител согласно изобретению. Приемлемые носители хорошо известны в данной области и описаны, например, в Яеттд1оп'8 Рйагтасеибса1 8с1епсез, Оеппато, еб., Маск РиЬйзЫпд Со., 1990. Приемлемые носители могут включать биосовместимые, инертные или биологически всасываемые соли, забуферивающие агенты олиго- или
- 6 007469 полисахариды, полимеры, вязкоупругое соединение, такое как гиалуроновая кислота, агенты, повышающие вязкость, консерванты и тому подобное.
«Субъект» относится к позвоночным, в частности к представителям видов млекопитающих, и включает, но не ограничен указанным, домашних животных, спортивных животных и приматов, включая людей.
Антитела согласно изобретению
Антитела согласно изобретению специфично связываются с Спр1о. В используемом в данном описании смысле Спр1о включает белок Спр1о СК-1, белок Спр1о СК-3 и их фрагменты. Такие фрагменты могут представлять собой полные домены, такие как внеклеточный или внутриклеточный домены, ЕСЕподобный домен, Суз-богатый домен, домен, связывающий рецептор, и тому подобное. Такие фрагменты также могут включать в себя непрерывные и прерывистые эпитопы в любом домене белка Спр1о.
Последовательность СК-1 длиной 188 аминокислот представляет собой следующую последовательность |8ЕС) Ш N0: I]:
1ТО0ЕЕРА1КРК530КУРРМС10Н5КЕ1хКгаТССЬКОСТСМЪО5ЕСАСРР£ ЭТевМСЕНПУККЕЫССЗУРНОтеЛиРККСЗЬСКСтаОССКСРРОАРЪРССП 6ЬУМПЕНЬУА5Й.ТРЕЬРРЗАкТТТЕМЬУ61СЬ51ОЗУУ
Последовательность СК-3 длиной 188 аминокислот представляет собой следующую последовательность |8Е() Ш N0: 2]:
МПСККМУКЕЗ¥ЗУШ1МА13КАЕЕЬСЬУАОЬОН12ЕРА1гРЗВ.еОЬАЕКОПЗ 1МР(2ЕЕРА1ЛРК332КУЬРМ(310НЗКЕЬЦКТССШ(ЗаТСМЬЕЗЕСАСРРЗЕ ΥΰΚΝαΕΗθνΡΚΕΝα(3ΕνΡΗΩΤΚΕΡΚΚ€5Ώ€Κ€νΤΗ(3ΰΏΙΐαΡΡΰΑΡΕΡ(3αΌ<3Ώ УМОЕНЬ¥А5КТРЕЬРР5АКТТТРМЬАС1СЬ31С5УУ
В одном варианте антитела согласно изобретению связываются с эпитопом в ЕСЕ-подобном домене Спр1о. ЕСЕ-подобный домен простирается примерно от аминокислотного остатка 75 до аминокислотного остатка 112 зрелого белка Спр1о. Эпитопы в ЕСЕ-подобном домене могут содержать линейные или нелинейные участки аминокислотных остатков. Пример рассматриваемых линейных эпитопов включает, но не ограничен указанным, примерно остатки 75-85, 80-90, 85-95, 90-100, 95-105, 100-110 или 105-112. В одном варианте эпитоп в ЕСЕ-домене является эпитопом, образуемым в конформационно нативном белке Спр1о в отличие от денатурированного белка Спр1о.
В другом варианте антитела согласно изобретению связываются с эпитопом в Суз-богатом домене Спр1о. Суз-богатый домен простирается примерно от аминокислотного остатка 114 до аминокислотного остатка 150 зрелого белка Спр1о. Эпитопы в Суз-богатом домене могут содержать линейные или нелинейные участки аминокислотных остатков. Пример рассматриваемых линейных эпитопов включает, но не ограничен указанным, примерно остатки 114-125, 120-130, 125-135, 130-140, 135-145 или 140-150. В одном варианте эпитоп в Суз-богатом домене является эпитопом, образуемом в конформационно нативном белке Спр1о в отличие от денатурированного белка Спр1о.
После создания антител связывание антител с Спр1о можно анализировать с использованием стандартных способов, известных в данной области, таких как ЕБ18А, тогда как присутствие Спр1о на клеточной поверхности можно анализировать с использованием проточной цитометрии (ЕАС8), как показано в примере 2. Альтернативно можно использовать любой другой способ измерения такого связывания.
Данное изобретение относится к антителам (например, моноклональным и поликлональным антителам, одноцепочечным антителам, химерным антителам, бифункциональным/биспецифичным антителам, гуманизированным антителам, человеческим антителам и антителам с привитыми районами, определяющими комплементарность (СЭК), включая соединения, которые содержат последовательности СЭК, которые специфично узнают полипептид согласно изобретению), специфичным по отношению к Спр1о или его фрагментам. Изобретение также относится к фрагментам антител, включая ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2 и Εν. Термины «специфичное» и «избирательное» в случае использования для описания связывания антител согласно изобретению указывают, что вариабельные области антител согласно изобретению узнают и связывают полипептиды Спр1о. Будет понятно, что специфичные антитела согласно изобретению также могут взаимодействовать с другими белками (например, белком А 8. аигеиз или другими антителами в способах ЕБ18А) посредством взаимодействий с последовательностями вне вариабельных областей антител и, в частности, в константной области молекулы. Скрининговые анализы для определения специфичности связывания антитела согласно изобретению (т.е. антител, которые специфично связываются с эпитопом в лиганд/рецептор-связывающем домене и домене, охватывающем остатки аминокислот 46-62) хорошо известны и постоянно используются на практике в данной области. С целью полного обсуждения таких анализов, смотри Наг1о^ е1 а1. (Ес!з.), АпйЬоШез А ЕаЬога1огу Мапиа1; Сок! 8рппд НагЬог ЕаЬога1огу; Сок! 8рппд НагЬог, ΝΥ (1988), Сйар1ег 6. Также представлены антитела, которые узнают и связывают фрагменты белка Спр1о, при условии, что антитела являются специфичными по отношению к полипептидам Спр1о. Антитела согласно изобретению можно получить с использованием любого способа, хорошо известного и постоянно используемого на практике в данной области.
- 7 007469
В одном варианте изобретение относится к антителу, которое специфично связывается с эпитопом в лиганд/рецептор-связывающем домене Спр1о. Специфичность антитела более подробно описана ниже. Однако следует подчеркнуть, что антитела, которые можно создать на основе других полипептидов, которые были ранее описаны в литературе и которые способны случайно перекрестно реагировать с Спр1о (например, вследствие случайного существования сходного эпитопа в обоих полипептидах), считаются «перекрестно реагирующими» антителами. Такие перекрестно реагирующие антитела не являются антителами, «специфичными» по отношению к Спр1о. Определение того, связывается ли антитело специфично с эпитопом Ст1р1о, осуществляют с использованием любого из нескольких анализов, таких как Вестерн-блот-анализ, которые хорошо известны в данной области. Антитела, которые специфично связываются с внеклеточным эпитопом белка Ст1р1о (т.е. с частями белка Сг1р1о. выявляемыми снаружи клетки) особенно полезны для идентификации клеток, которые экспрессируют Спр1о, а также для модулирования лиганд/рецептор-связывающей активности Спр1о.
В одном варианте изобретение относится к бесклеточной композиции, содержащей поликлональные антитела, где по меньшей мере одно из антител является антителом согласно изобретению, специфичным в отношении Спр1о. Примером композиции является антисыворотка, выделенная из животного, которая представляет собой композицию, содержащую фракцию антител антисыворотки, которая была ресуспендирована в воде или в другом разбавителе, наполнителе или носителе.
В другом варианте изобретение относится к моноклональным антителам. Моноклональные антитела являются высоко специфичными, поскольку направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от поликлональных препаратов, которые обычно содержат различные антитела, направленные против разных эпитопов, каждое моноклональное антитело направлено против единственной детерминанты на антигене. Моноклональные антитела пригодны для повышения избирательности и специфичности способов диагностического и аналитического исследования с использованием связывания антиген-антитело. Другое преимущество моноклональных антител состоит в том, что они синтезируются культурой гибридомы, не содержащей примесей других иммуноглобулинов. Гибридомы, которые продуцируют такие антитела, также считаются аспектами изобретения.
В еще одном родственном варианте изобретение относится к антиидиотипическому антителу, специфичному в отношении антитела, которое специфично для Спр1о. В целях более подробного обсуждения антиидиотипических антител смотри, например, патенты США 6063379 и 5780029.
Хорошо известно, что антитела содержат относительно небольшие антигенсвязывающие домены, которые можно выделить химическим способом или получить рекомбинантными способами. Такие домены как таковые являются пригодными в качестве молекул, связывающих Ст1р1о, а также их можно повторно ввести в человеческие антитела или слить с химиотерапевтическим средством или полипептидом. Таким образом, в еще одном варианте изобретение относится к полипептиду, содержащему фрагмент Ст1р1о-специфичного антитела, где фрагмент и ассоциированная молекула, если она существует, связываются с Ст1р1о. В качестве неограничивающего примера изобретение относится к полипептидам, которые являются одноцепочечными антителами и СЭЯ-привитыми антителами. Для более подробного обсуждения СЭЯ-привитых антител см., например, патент США 5859205.
В другом варианте нечеловеческие антитела можно гуманизировать любым способом, известным в данной области. Гуманизированные антитела пригодны для терапевтических применений ίη у1уо. Кроме того, можно синтезировать рекомбинантные «гуманизированные» антитела. Гуманизированные антитела представляют собой антитела, исходно полученные из млекопитающего, отличного от человека, для которых использовали технологию рекомбинантной ДНК, чтобы заменить некоторые или все аминокисло ты, не требуемые для связывания антигена, аминокислотами из соответствующих областей легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина человека. То есть, они являются химерами, главным образом содержащими последовательности иммуноглобулина человека, в которые были встроены области, ответственные за специфичное связывание антигена (см., например, заявку на выдачу патента РСТ АО 94/04679). Животных иммунизируют требуемым антигеном, выделяют соответствующие антитела и удаляют часть последовательностей вариабельных областей, ответственных за специфичное связывание антигена. Полученные от животного антигенсвязывающие области затем клонируют в соответствующем положении генов антитела человека, в которых были делетированы антигенсвязывающие области. Гуманизированные антитела минимизируют использование гетерологичных (межвидовых) последовательностей в антителах для применения в терапии человека, и менее вероятно, что они вызовут нежелательные иммунные ответы. Подобным образом можно получить приматизированные антитела, используя гены антител примата (например, резуса, бабуина и шимпанзе). Затем можно ввести другие изменения в каркас антитела, чтобы модулировать аффинность или иммуногенность. См., например патенты США №. 5585089, 5693761, 5693762 и 6180370.
Другой вариант изобретения включает применение человеческих антител, которые можно продуцировать в животных, отличных от человека, таких как трансгенные животные, несущие один или несколько трансгенов иммуноглобулина человека. Таких животных можно использовать в качестве источника спленоцитов для получения гибридом, как описано в патенте США 5569825, заявках на выдачу патента АО 00076310, АО 00058499 и АО 00037504, включенных в данное описание в виде ссылок.
- 8 007469
Модулирование сигнала
В другом варианте антитела согласно изобретению связываются с θηρίο и модулируют передачу сигнала θηρίο или взаимодействия СпрЮ-белок. Сверхэкспрессия активности СпрЮ может приводить к состоянию дедифференцировки, способствующему проявлению характеристик мезенхимальных клеток, повышенной пролиферации и миграции клеток (8а1ошоп с( а1., ВюЕззауз 21: 61-70,1999; С1агШс11о с( а1., Опсодепе 9: 291-298,1994; и Ва1баззатге е! а1., Ιηί. 1. Сапсег 66: 538-543,1996), проявлению фенотипов, связанных с трансформацией клеток, наблюдаемой при неоплазии.
Одними из способов тестирования активности анти-СпрЮ-антител и их способности модулировать передачу сигнала Сйр1о является способ с использованием линии клеток Е9, «нокаутированных» (КО) по Сйр1о (МшсЫоШ а! а1., МесН. Эеу. 90: 133-142,2000). Сйр1о стимулирует фосфорилирование зшаб2 и фактор транскрипции ЕА8Т в эмбрионах Хепориз, и активность фактора транскрипции ЕА8Т можно контролировать, измеряя активность люциферазы репортерного гена регуляторный элемент ЕА8Тлюцифераза (8ацой е! а1., Мо1. Се11 5:35-47, 2000). В клетках Е9-Сйр1о-КО делетирован ген Сйр1о, и таким образом они являются нулевыми клетками в отношении Сйр1о и зависимой от Сйр1о передачи сигнала (МшсЫоШ а! а1., МесН. Эеу. 90: 133-142, 2000). Передачу сигнала Сйр1о можно оценить в клетках Е9-Сйр1о-КО путем трансфекции генной конструкции СпрЮ, ЕА8Т и регуляторный элемент ЕА8Тлюцифераза. В указанных линиях клеток зависимой от Сйр1о ЕА8Т-люциферазной активности не наблюдается, пока в них не трансфицируют кДНК Сйр1о и кДНК ЕА8Т. Антитела, способные блокировать Сйр1о-зависимую передачу сигнала Хоба1, являются антителами, которые блокируют функцию передачи сигнала СпрЮ.
Специалисты в данной области могут использовать другие анализы, позволяющие измерять активность Сйр1о, такие как анализ роста в мягком агаре (см. пример 4 ниже). Способность клеток расти в мягком агаре связана с трансформацией клеток, и анализ является классическим анализом ш уйго для измерения ингибирования роста опухолевых клеток. Другие анализы, применимые для определения ингибирования активности, включают анализы ш уйго на пластике и тому подобные.
Терапевтические применения
Антитела согласно изобретению также применимы для терапевтических целей, таких как модулирование роста опухолевых клеток, диагностических целей для выявления или количественного измерения СпрЮ и для очистки СпрЮ.
В одном варианте изобретения представлены антитела, которые способны специфично связываться с Сйр1о и которые модулируют рост опухолевых клеток у пациента. В одном варианте опухолевыми клетками являются клетки опухоли семенников, молочной железы, толстой кишки, легкого, яичника, мочевого пузыря, матки, шейки матки, поджелудочной железы и желудка.
В другом варианте представлены антитела, которые способны специфично связываться с Сйр1о и которые модулируют рост опухолевых клеток, которые сверхэкспрессируют СпрЮ. В одном варианте опухолевыми клетками являются линии клеток, которые сверхэкспрессируют Сйр1о, такие как линии клеток, полученные из злокачественной опухоли молочной железы, семенников, толстой кишки, легкого, яичника, мочевого пузыря, матки, шейки матки, поджелудочной железы и желудка.
Можно проводить скрининг анти-СпрЮ-антител в отношении активности ш у1уо в качестве потенциальных противораковых средств, следуя стандартным протоколам, используемым специалистами в данной области, как показано в примере 4 ниже. Примеры таких протоколов в общем описаны №1юпа1 Сапсег 1пзШи1е (ЫС1) в их протоколах «скрининга моделей злокачественных опухолей ш У1уо», номер публикации ΝΙΗ 84-2635 (февраль 1984).
В другом варианте изобретения антитела согласно изобретению используют для лечения пациента, имеющего злокачественную опухоль.
Антитела согласно данному изобретению можно комбинировать с фармацевтически приемлемым наполнителем и вводить пациенту в терапевтически эффективной дозе. Для обсуждения способов ингибирования роста опухолей смотри, например, патент США 6165464.
Также предусмотрены способы лечения субъекта, страдающего нарушением, связанным с аномальными уровнями (т.е. повышенными или пониженными) Сйр1о, при этом способ включает в себя введение субъекту эффективного количества антитела, которое специфично связывается с эпитопом в лиганд/рецептор-связывающем домене Сйр1о, включая, но не ограничиваясь указанным, случаи, когда эпитоп находится в ЕСЕ-подобном домене или Суз-богатом домене Сйр1о.
Также предусмотрены способы лечения субъекта, страдающего нарушением, связанным с аномальными уровнями (т.е. повышенными или пониженными) Сйр1о, при этом способ включает введение субъекту эффективного количества антитела, которое специфично образует комплекс с Сйр1о и направлено эпитопу, к которому направлено антитело, выбранное из группы, состоящей из А6С12.11, А6Е8.6 (АТСС инвентарный №. РТА-3318), А7Н1.19, А8Е1.30, А8С3.5 (АТСС инвентарный №. РТА-3317), А8Н3.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3315), А8Н3.2, А19А10.30, А10В2.18 (АТСС инвентарный №. РТА-3311), А27Е6.1 (АТСС инвентарный №. РТА-3310), А40С12.8 (АТСС инвентарный №. РТА-3316), Α2Ό3.23, А7А10.29, А9С9.9, А15С12.10, А15Е4.14, А17А2.16, А17С12.28, А17С12.1 (АТСС инвентарный №. РТА- 9 007469
3314), А17Н6.1, А18В3.11 (АТСС инвентарный №. РТА-3312), А19Е2.7, Б3Т6.17 (АТСС инвентарный №. РТА-3319) и В6С7.10 (АТСС инвентарный №. РТА-3313).
Диагностику с помощью детекции Сйр1о легко осуществить посредством стандартных анализов связывания с использованием новых антител согласно изобретению, позволяющих специалистам специфично выявлять наличие Сйр1о в широком круге образцов, культур и т.д.
Также предусмотрены наборы, содержащие антитело согласно изобретению, для любых приведенных в данном описании целей. Как правило, набор согласно изобретению также содержит контрольный антиген, по отношению к которому антитело является иммуноспецифичным. Варианты включают наборы, содержащие все реагенты и инструкции по их применению.
Дополнительные характерные особенности изобретения будут понятны на основе следующих иллюстративных примеров.
Примеры
Пример 1. Экспрессия и очистка Сйр1о.
Экспрессирующую плазмиду, названную р8С8480, конструировали с помощью субклонирования к ДНК, кодирующей аминокислотные остатки 1-169 Сйр1о человека [аминокислоты 1-169 8ЕС ΙΌ N0: 1], слитые с Те-доменом 1дС1 человека (т.е., «СР(бс1 С)-Ес»), в векторе рЕЛС1100. Для знакомства с более подробным описанием указанного вектора, см. находящуюся на совместном рассмотрении заявку на выдачу патента США с регистрационным №. 60/233148, поданную 18 сентября 2000. Вектор рЕЛС1100 является производным плазмиды рСМУ-8рой-Ье1ада1 С1ВС0-ВВЕ Ьйс Тсе11по1ощс5. применение которого для временных трансфекций СНО описано ЗсШйегй е! а1., 1999, Еосик 21: 16. Он был получен удалением №Й-фрагмента репортерного гена бета-галактозидазы из плазмиды рСМУ-8рой-Ве1ада1 (номер в каталоге 10586-014) следующим образом: плазмиду расщепляли №11 и ЕсоРУ, №Й-фрагмент остова вектора размером 4,38 т.п.н. подвергали очистке в геле и лигировали. Лигированную ДНК трансформировали в компетентные клетки Е. сой ΌΗ5-альфа. рЕЛС1100 выделяли в виде плазмиды, содержащей требуемый рекомбинант, из отдельной изолированной колонии. Подтверждали последовательность рЕЛС1100, охватывающую промотор, полилинкер и сигнал терминации транскрипции.
Плазмиду р8С8480 временно трансфицировали в клетки СНО, и клетки выращивали при 28°С в течение 7 дней. Наличие белка СК(йе1 С)-Ес в указанных клетках и кондиционированных средах оценивали с помощью Вестерн-блот-анализа. Для Вестерн-блот-анализа кондиционированные среды и клетки из Сйр1о-трансфицированных культур клеток подвергали δΌδ-ПААГ в 4-20%-градиентных гелях при восстанавливающих условиях, с помощью электрофореза переносили на нитроцеллюлозу, и слитый белок Сйр1о выявляли с помощью поликлональной кроличьей антисыворотки, полученной против конъюгата 17-мерного пептида Сйр1о (содержащего остатки 97-113 8ЕО ΙΌ N0: 1) с гемоцианином морского блюдечка «замочная скважина». После центрифугирования для удаления клеток проведенный Вестерн-блотанализ показал, что белок СК.(йе1 С)-Ес эффективно секретируется в кондиционированные среды (надосадок). Надосадок наносили на белок А-сефарозу (Рйатташа), и связанный белок элюировали 25 мМ фосфатом натрия, рН 2,8, 100 мМ №С1. Элюированный белок нейтрализовали 0,5М фосфатом натрия при рН 8,6 и анализировали в отношении содержания общего белка на основе измерений поглощения при 240-340 нм и в отношении чистоты с помощью δΌδ-ПААГ. Элюированный белок фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,2 микрона и хранили при -70°С.
Пример 2. Создание и скрининг антител.
Элюированный белок СК(йе1 С)-Ес инъецировали мышам и использовали стандартные способы гибридом, известные специалистам в данной области, чтобы создать моноклональные антитела.
A. Создание антител.
В частности, самок мышей РоЬегйошап (1аск§оп ЬаЬк) внутрибрюшинно иммунизировали 25 мкг очищенного СК.(йе1 С)-Ес, эмульгированного с полным адъювантом Фрейнда (С1ЬсоВРЕ №15721-012). Мышей два раза подвергали бустер-иммунизации внутрибрюшинно 25 мкг СК(йе1 С)-Ес, эмульгированного с неполным адъювантом Фрейнда (С1ЬсоВКЬ №15720-014), и один раз на шариках с белком А. Проводили скрининг сывороток и через 3 недели после последней бустер-иммунизации мышь с самым высоким титром бустер-иммунизировали внутрибрюшинно, используя 50 мкг растворимого СК(йе1 С)Ес, за три дня до слияния. Мышь бустер-иммунизировали внутривенно, используя 50 мкг СК(йе1 С)-Ес за день до слияния. Клетки селезенки мыши сливали с клетками миеломы ЕЬ653 в соотношении 1 клетка селезенки: 6 клеток миеломы и высевали при плотности 100000, 33000 и 11000 клеток на лунку в 96луночный планшет для культуры ткани в селективные среды. Неделю спустя проводили скрининг лунок, позитивных в отношении роста, с помощью ΕАСδ и ЕЙ-ΙδΑ. Проводили два слияния.
B. Скрининг антител.
Проводили скрининг надосадков, полученных в результате первого или второго слияния, сначала на планшетах для ЕЕ-ΙδΑ для узнавания белков Сйр1о Йе1 С и/или ЕСЕ-подобного домена Сйр1о. Планшеты ЕЕ-ΙδΑ покрывали контрольным слитым белком (ЬТ-бета-рецептор-Ес), чтобы избавиться от моноклональных антител, которые узнавали эпитоп Ес человека. ЕЙ-ΙδΑ выполняли как описано ниже в разделе С. В случае первого слияния также проводили скрининг первичных надосадков в отношении их способности узнавать белок Сйр1о на клеточной поверхности линии клеток опухоли семенников NССIТ с
- 10 007469 помощью ЕАС8. В случае второго слияния анализировали способность надосадков узнавать С’прЮ на двух линиях опухолевых клеток, Νί.'ί.ΊΤ и линии клеток рака молочной железы Όυ4475, с помощью ЕАС8. Вторичные скрининги включали тестирование способности надосадков моноклональных антител узнавать С'прЮ клеточной поверхности на панели линий опухолевых клеток (см. результаты в табл. 1 и 2), способности моноклональных антител узнавать Сг1р1о человека иммуногистохимически на срезах ткани опухоли молочной железы и толстой кишки человека, способности моноклональных антител блокировать при анализе передачи сигнала Спр!о-Иойа1, способности блокировать рост линий опухолевых клеток при анализах на пластике или в мягком агаре и способности интернализовать С'прЮ клеточной поверхности.
С. ЕЫ8А
Анализы ЕЬ18А выполняли следующим образом:
Материалы:
Планшеты: 96-луночные с высокой способностью к связыванию и легко промываемые планшеты С’оЧаг (07-200-642);
2-е антитело: антитело козы против мышиного ЦС (Н+Ь)-НКР (Р131430);
Субстрат: субстратный набор ТМВ йегее (34021);
Раствор для остановки: 1Ν Н28О4;
Буферы:
Буфер для связывания: 0,1 М ΝαΗΡΟ4. рН 9,0;
Блокирующий буфер: РВ8 + 10% донорская сыворотка теленка;
Буфер для промывки: РВ8 + 0,1% Твин-20;
Антигены СК(йе1 С)-Ес и СК ЕСЕ-Ес, контрольный слитый белок ЦС1 человека разбавляли в буфере для связывания до 500 нг/мл. Добавляли по 100 мкл на лунку и инкубировали в течение 1 ч при 37°С или в течение ночи при 4°С. Жидкость декантировали, и планшет переворачивали и промокали досуха. Затем добавляли 250 мкл/лунку блокирующего буфера, после чего инкубировали в течение 30 мин при 37°С. Жидкость снова декантировали, и планшет переворачивали и промокали досуха. Надосадки разводили 1:50 в буфере для промывки и помещали в планшеты по 50 мкл/лунку с последующей инкубацией в течение 1 часа при комнатной температуре. Планшеты 3 раза энергично промывали 250 мкл/лунку буфера для промывки. Затем добавляли 100 мкл/лунку 2-ого антитела, разведенного в буфере для промывки в соотношении 1:10000, с последующей инкубацией в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем планшеты 3 раза энергично промывали 250 мкл/лунку буфера для промывки, затем добавляли субстрат по 100 мкл/лунку. Давали возможность окраске развиться до достаточной интенсивности, затем добавляли 100 мкл/лунку раствора для остановки и проводили регистрацию планшетов в отношении поглощения при 450 нм.
Р. Проточная цитометрия.
СпрЮ-позитивные линии клеток можно использовать для анализа моноклональных антител в отношении связывания с СпрЮ, используя окрашивание клеточной поверхности и проточную цитометрию следующим образом.
Клетки высвобождают из флаконов Т162, используя 2 мл РВ8 с 5 мМ ΕΌΤΑ в течение 10 мин при 37°С. Доводят до 20 мл средой с сывороткой, несколько раз пипетируют вверх и вниз, чтобы разъединить клетки. Центрифугируют при 1200 об/мин в течение 5 мин. Клетки промывают 5-10 мл РВ8 с температурой 4°С с 0,1% БСА (буфер для промывки). Центрифугируют при 1200 об/мин в течение 5 мин. Ресуспендируют при концентрации 4х106-107/мл в буфере для промывки. Хранят на льду.
Готовят антитела для окрашивания. Очищенные антитела разводят до 1-10 мкг/мл в буфере для промывки. Добавляют по 50 мкл клеток в 96-луночные планшеты ЬтЬго с У-образным дном (Ιί.'Ν 7632105). По одной лунке засевают клетками для каждого из контролей каждой линии клеток, которую необходимо анализировать, включая клетки без антитела, только со 2-м антителом, со средой для гибридом, с надосадком антител позитивного контроля, если таковой имеется или очищен, и контролем подкласса ЦС (в случае использования очищенных антител).
Засевают по одной лунке для каждого экспериментального образца для каждой анализируемой линии клеток. Планшет центрифугируют при 1200 об/мин в течение 5 мин, используя настольную центрифугу, при 4°С. Быстро удаляют буфер, переворачивая планшет и встряхивая до тех пор, пока жидкость в основном не стечет. Добавляют в лунки по 40-50 мкл антител (или буфера для промывки в случае лунок без антитела или контрольных лунок только со 2-м антителом). Инкубируют по меньшей мере 30 мин-1 ч при 4°С. Планшет центрифугируют при 1200 об/мин в течение 5 мин. Быстро удаляют растворы антител. Лунки дважды промывают 200 мкл буфера для промывки на лунку, центрифугируя после каждой промывки. Буфер быстро удаляют.
Клетки в каждой лунке ресуспендируют в 50 мкл меченого К-РЕ антитела козы против мышиного 1дС, Ес-специфичного Цаскюп 1ттипоге5еагс11 БаЬогаЮпех катал. № 115-116-071), в разведении 1:200 (в буфере для промывки). Инкубируют 20 мин при 4°С в темноте. К клеткам в каждой лунке добавляют 150 мкл буфера для промывки. Планшет центрифугируют при 1200 об/мин в течение 5 мин. Один раз промывают 200 мкл буфера для промывки на лунку. Клетки ресуспендируют в 150 мкл 1% РЕА в РВ8. Со
- 11 007469 держимое каждой лунки переносят в отдельные пробирки (круглодонные полистироловые пробирки объемом 5 мл Ра1соп 352052). Пробирки заворачивают в оловянную фольгу.
Затем содержимое пробирок регистрируют проточной цитометрией.
Результаты двух скрининговых исследований моноклональных антител, полученные указанным способом, дали следующие данные, суммированные в табл. 1 и 2 ниже, где в первой колонке приведены названия субклонов гибридом, в следующих двух колонках показаны результаты скрининга в ЕБ18Л, а в остальных колонках показаны результаты анализа проточной цитометрией, полученные на четырех Спр1о-позитивных линиях клеток. Результаты приведены в единицах среднего показателя флуоресценции (ΜΡΙ).
Таблица 1. Характеристика анти-Спр!о-моноклонального антитела
| Субклон гибридомы | № депозита АТСС | ЕЫЗА Сггрбо Це1С Зирз | ЕЫЗА ЕСГподобный домен Сгтрбо | ЦЦ4475 ΜΓΙ | ЦСС1Т ΜΕΙ | СЕО МП | нтз ΜΓΙ |
| Контроль ЕЫЗА | 0,06 | 0,07 | |||||
| Контроль мышиный 1д | 14 | 9 | 37 | 18 | |||
| А6С12.11 | 2,21 | 0,07 | 11 | 35 | 29 | 8 | |
| А6Г8.6 | РТА-3318 | 2,32 | 0,08 | 11 | 50 | 29 | 10 |
| А7Н1.19 | 2,14 | 0,09 | 14 | 34 | 27 | 12 | |
| А8Г1.30 | 2,15 | 0,1 | 17 | 27 | 32 | 28 | |
| А8С3.5 | РТА-3317 | 2,39 | 0,09 | 9 | 30 | 25 | 15 |
| А8Н3.1 | РТА-3315 | 2,4 | 1,7 | 9 | 44 | 23 | 10 |
| А8Н3.2 | 2,54 | 0,07 | 13 | 13 | 16 | 14 | |
| А19А10.30 | 2,02 | 0,09 | 9 | 40 | 20 | 10 | |
| А10В2.18 | РТА-3311 | 2,36 | 0,07 | 40 | 63 | 100 | 43 |
| А27Г6.1 | РТА-3310 | 2,28 | 1,19 | 9 | 44 | 26 | 17 |
| А40С12.8 | РТА-3316 | 2,27 | 1,59 | 10 | 47 | 26 | 16 |
Таблица 2. Характеристика анти-Спр1о-моноклонального антитела
| Субклон гибридомы | № депозита АТСС | ЕЫЗА СгтрТо бе1С | ЕЫЗА ЕСГподобный домен СггрСо | ЦЦ4475 МП | ЦСС1Т ΜΕΙ | СЕО ΜΓΙ | НТЗ МП |
| Контроль - ЕЫЗА | 0,05 | 0,05 | |||||
| Контроль мышиный 1д | 10 | 6 | 4 | 4 | |||
| А2Ц3.23 | 0,93 | 0,90 | 73 | 138 | 37 | 27 | |
| А7А10.29 | 1,37 | 0,07 | 75 | 83 | 33 | 83 | |
| А9С9.9 | 1,39 | 0,07 | 52 | 62 | 32 | 82 | |
| А15С12.10 | 1,42 | 0,06 | 46 | 55 | 25 | 93 | |
| А15Е4.14 | 1,38 | 0,06 | 50 | 63 | 23 | 95 | |
| А17А2.16 | 1,40 | 0,06 | 76 | 97 | 41 | 81 | |
| А17С12.28 | 0, 96 | 0,97 | 6 | 16 | 3 | 22 | |
| А17С12.1 | РТА-3314 | 1,30 | 1,37 | 61 | 66 | 28 | 78 |
| А17Н6.1 | 1,38 | 0,05 | 35 | 30 | 5 | 28 | |
| А18В3.11 | РТА-3312 | 1,36 | 1,38 | 50 | 42 | 33 | 65 |
| А19Е2.7 | 1,40 | 0,06 | 53 | 59 | 26 | 99 | |
| ВЗГ6.17 | РТА-3319 | 1,37 | 0,06 | 77 | 51 | 39 | 89 |
| В6С7.10 | РТА-3313 | 1,38 | 1,40 | 28 | 22 | 22 | 56 |
| В11Н8.4 | 1,41 | 0,06 | 59 | 101 | 39 | 107 | |
| В12С12.5 | 1,10 | 1,04 | 27 | 14 | 23 | 59 | |
| В15А2.6 | 1,40 | 0,06 | 36 | 44 | 22 | 59 | |
| С4А2.16 | 1,40 | 0,06 | 24 | 36 | 22 | 65 |
- 12 007469
Пример 3. Анализ нулевых клеток в отношении ингибирования передачи сигнала СпрЮ.
Нижеследующее является описанием анализа передачи сигнала в СпрЩ-нулевых клетках Т9, используемого для оценки ингибирования передачи сигнала СпрЮ.
День 0. 6-луночные планшеты покрывают 0,1% желатином по 2 мл/лунку при 37°С в течение 15 мин.
Клетки высевают при плотности 6х105 СпрЮ-нулевыгх клеток Т9 на лунку.
День 1. Трансфекция.
Каждый из следующих образцов добавляют к 300 мкл 0рбМеш1, чтобы получить раствор А для каждого образца.
Образец 1: 0,5 мкг репортерной кДНК (^)7-люциферазы1-РА8Т плюс 1,5 мкг кДНК пустого вектора.
Образец 2: 0,5 мкг кДНК (^)7-люциферазы1, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 1 мкг кДНК пустого вектора.
Образец 3: 0,5 мкг кДНК (^)7-люциферазы1, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и +0,5 мкг кДНК пустого вектора.
Образец 4: 0,5 мкг кДНК (Ν2)7-люциферазы, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 0,5 мг кДНК пустого вектора.
Образец 5: 0,5 мкг кДНК (Ν2)7-люциферазы, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 0,5 мг кДНК пустого вектора.
Образец 6: 0,5 мкг кДНК (Ν2)7-люциферазы, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 0,5 мг кДНК пустого вектора.
Образец 7: 0,5 мкг кДНК (Ν2)7-люциферазы, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 0,5 мг кДНК пустого вектора.
Образец 8: 0,5 мкг кДНК (Ν2)7-люциферазы, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 0,5 мг кДНК пустого вектора.
Образец 9: 0,5 мкг кДНК (^)7-люциферазы1, 0,5 мкг кДНК СпрЮ, 0,5 мкг кДНК ТА8Т и 0,5 мг кДНК пустого вектора.
Раствор В содержит 30 мкл липофектамина плюс 270 мкл 0рбМеш1.
Для каждого образца смешивают вместе раствор А и раствор В. Инкубируют 45 мин при комнатной температуре. Лунки промывают 2 мл/лунку 0рбМеш1. Жидкость удаляют непосредственно перед следующей стадией.
К каждой смеси растворов А+В добавляют 2,4 мл 0рбМеш1, перемешивают, добавляют в лунки по 1,5 мл/лунку в повторах. Инкубируют 5 ч при 37°С. Добавляют 1,5 мл/лунку ИМЕМ + 20% ТС8, 2 мМ Ο1η, Р/8 в лунки, в которые вносили образцы 1-3. Анти-СпрЮ-антитела добавляют следующим образом: лунки с образцом 4: А27Т6.1, 10 мкг/мл; лунки с образцом 5: А27Т6.1, 2 мкг/мл; лунки с образцом 6: А40О12.8; 10 мкг/мл, лунки с образцом 7: А40О12.8, 2 мкг/мл; лунки с образцом 8: А10В2.18, 10 мкг/мл; лунки с образцом 9: А10В2.18, 2 мкг/мл.
День 2. Удаляют среды, клетки промывают РВА 2 мл/лунку. Добавляют ИМЕМ+0,5% ТСА 2 мМ Ο1η, Р/8 с такими же количествами СпрЮ-антител, как в предыдущий день в те же самые лунки.
День 3. Проявляют сигнал люциферазы. Лунки промывают РВ8 + Са2+ и Мд2+, 2 мл/лунку. Используют набор РисРПе, Раскагб катал. № 6016911. Буфер и субстрат доводят до комнатной температуры. Комнату затемняют. Субстрат перерастворяют с использованием 10 мл буфера. Разбавляют 1:1 РВ8 + Са2+ и Мд2+. Жидкость из лунок удаляют. Быстро добавляют 250 мкл разбавленного субстрата в лунку, используя устройство для пипетирования нескольких образцов. Раствор перемешивают и переносят по 200 мкл в лунки 96-луночного планшета с белым непрозрачным дном Ρа1сοη 35-3296. Считывают планшет в люминометре, используя \\'тд1о\у, выдавая данные в Ехсе1. Результаты анализа суммированы ниже в табл. 3.
Таблица 3. Анализ передачи сигнала СпрЮ: Ингибирование анти-СпрЮ-моноклональными антителами.
- 13 007469
Пример 4. Анализ ингибирования роста опухолевых клеток ΐη νίΐίο.
Ингибирование передачи сигнала ίτίρΐο также можно анализировать посредством измерения роста клеток ОБО в мягком агаре. См., например, ОагЛеНо е! а1., Опсодепе. 1994 1ап; 9 (1): 291-8; С1агШе11о е! а1., Сапсег Кез. 1991 БеЬ 1; 51 (3): 1051-4.
Сначала расплавляют 3% бактоагар. Хранят при 42°С на водяной бане. Затем смешивают 3% раствор бактоагара с предварительно нагретой полной средой, чтобы получить раствор 0,6% бактоагара, который держат при 42°С. Помещают 4 мл раствора в 6-см чашки и дают возможность остыть, по меньшей мере, в течение 30 мин с образованием нижнего слоя агара. Трипсинизируют клетки ОЕО и ресуспендируют до 105 клеток/мл в полной среде. К суспензиям клеток добавляют анализируемые антитела или контроли, титруя антитела от 20 до 1 мкг. Смешивают равные объемы суспензий клеток ОЕО и 0,6% бактоагара и наслаивают по 2 мл сверху на нижний слой агара. Дают возможность остыть, по меньшей мере, в течение 1 ч. Инкубируют в течение 14 дней при 37°С в СО2-инкубаторе. Подсчитывают колонии, видимые без применения микроскопа. Отсутствие колоний по сравнению с негативными контролями свидетельствует о том, что тестируемые антитела ингибируют рост опухолевых клеток ΐη νίίτο.
Указанный анализ использовали для получения результатов, показанных в таблице 4, для антител Л27Б6.1 и В6О7.10, которые оба проявляют способность уменьшать рост колоний клеток Оео.
Таблица 4. Результаты анализа роста в мягком агаре
| Антитело | Среднее количество колоний |
| Отсутствует | 109,0 |
| Отсутствует | 104,3 |
| А27Г6 20мкг/мл | 82,0 |
| А27Г6.1 10мкг/мл | 78,3 |
| А27Е6.1 5мкг/мл | 79,0 |
| А27Г6.1 1мкг/мл | 108,7 |
| В6С7.10 20мкг/мл | 102,3 |
| В6С7.10 10мкг/мл | 71,7 |
Пример 5. Анализ ингибирования роста опухолевых клеток ΐη νίνο.
Чтобы оценить ингибирование роста опухолевых клеток линию опухолевых клеток человека имплантируют подкожно бестимусным мышам пийе и исследуют влияние антител согласно изобретению с использованием или без дополнительных химиотерапевтических обработок, которые могут оказывать синергетическое или аддитивное действие на ингибирование опухоли.
Анализ можно проводить альтернативно с использованием различных линий опухолевых клеток, например, таких как ОЕО (хорошо дифференцированная линия клеток рака толстой кишки человека, культивируемая ш νίίτο, получена из американской коллекции типов тканей (АТСС)), ИИ-4475 (линия клеток рака молочной железы ш νίίτο, полученная из АТСС), ИСС1Т (линия клеток опухоли семенника, полученная из АТСС) или других линий, известных в данной области. Одним из примеров таких анализов является следующий анализ.
Животных индивидуально маркируют прокалыванием ушей. Линию клеток ОЕО пересевают ш νΐϊγο или 1п νίνο на протяжении 1-4 пассажей. Животным имплантируют клетки ОЕО подкожно в область правого бока. Можно использовать следующие группы животных:
| № группы | Обработка | Количество мы- |
| 1 | Контрольный физиологический раствор, 0,2 мл/мышь, в/б три раза в | шей 20 |
| неделю (М,\¥,Е) | ||
| 2 | мАт, низкая доза, в/б | 10 |
| 3 | мАт, средняя доза, в/б | 10 |
| 4 | мАт, высокая доза, в/б | 10 |
| 5 | 5-БИ, 30 мг/кг/инъекц., в/б, 3 приема/неделю (М,\У,1') | 10 |
| 6 | Цисплатин, 2 мг/кг/инъекц., п/к, 3 приема/неделю (М,А,Б) | 10 |
| 7 | Адриамицин, 1,6 мг/кг/инъекц., в/б, 3 приема/неделю (М,А,Б) | 10 |
| 8 | Иринотекан, 10 мг/кг/инъекц., в/б, 5 приемов/неделю (М-Б) | 10 |
| 9 | мАт, низкая доза, в/б + 5-БИ (промежуточная доза) | 10 |
| 10 | мАт, средняя доза, в/б + 5-БИ (промежуточная доза) | 10 |
| 11 | мАт, высокая доза, в/б + 5-БИ (промежуточная доза) | 10 |
| 12 | мАт, низкая доза, в/б+цисплатин (промежуточная доза) | 10 |
| 13 | мАт, средняя доза, в/б+цисплатин (промежуточная доза) | 10 |
| 14 | мАт, высока доза, в/б+цисплатин (промежуточная доза) | 10 |
| 15 | мАт, низкая доза, в/б+адриамицин (промежуточная доза) | 10 |
| 16 | мАт, средняя доза, в/б + адриамицин (промежуточная доза) | 10 |
| 17 | мАт, высокая доза, в/б+адриамицин (промежуточная доза) | 10 |
- 14 007469 мАт, низкая доза, в/б+иринотекан (промежуточная доза)10 мАт, средняя доза, в/б+иринотекан (промежуточная доза)10 мАт, высокая доза, в/б+иринотекан (промежуточная доза)10
День 0: Имплантируют опухоль, регистрируют начальный вес тела животных.
День 1: Начинают обработку, как указано выше.
День 5: Начинают измерения размера опухоли и веса тела и продолжают измерения два раза в неделю вплоть до окончания эксперимента.
Оценивают измерения начального веса тела, размера опухоли, гистологию при умерщвлении и иммуногистохимический анализ опухолей, анализируя экспрессию Сг1р1о. рост опухоли и их ингибирование.
Пример 6. Модель ксенотрансплантированной опухоли ίη νί\Ό - анти-СпрЮ-антитело, блокирующее Сук-богатый домен.
Чтобы оценить ответ Νί.'ί.ΊΤ линию клеток карциномы семенников человека имплантировали подкожно с антителом, которое связывается с Сук-богатым доменом С.'пр1о.
Экспериментальные способы перечислены ниже. Результаты показаны на фиг. 1.
Способы и материалы
Животные: использовали самцов бестимусных мышей пибе. Животных индивидуально нумеровали проколами на ушах.
Опухоль: NССIΤ, культивируемая ш νίΙΐΌ линия клеток карциномы семенников человека из медиастинальных смешанных зародышевых клеток, исходно полученная из американской коллекции типов тканей. Линию клеток пересевали ш νίΙΐΌ на протяжении шести пассажей в КРМ1-1640/10% РВ8 без антибиотиков. Животным подкожно имплантировали 5 х 106 клеток/0,2 мл матригеля в правый бок животных.
| № | Обработка | Количество |
| группы | мышей | |
| 1 | Контрольный наполнитель, (25 мМ фосфат натрия, 100 мМ хлорид натрия, рН 7,2), 0,2 мл/мышь, в/б, Ο14Ω, обработки начинаются в день -1 | 20 |
| 2 | А8С3.5, 1 мг/кг/инъек., в/б, Ο14Ω, обработки начинаются в день -1 | 10 |
| 3 | А8С3.5, 3 мг/кг/инъек., в/б, Ο14Ω, обработки начинаются в день -1 | 10 |
| 4 | А8С3.5, 10 мг/кг/инъек., в/б, Ο14Ω, обработки начинаются в день -1 | 10 |
| 5 | Цисплатин, 2 мг/кг/инъек., п/к, 3 х/неделю (М,ЭД,Р), 6 обработок, обработки начинаются в день 1 | 10 |
| Схема обработки |
День -1. Мышей случайным образом распределяли в контрольные группы и группы обработки. Регистрировали начальный вес тела животных. Проводили первые обработки в группах с антителом. Готовили дозированные растворы. Специалисты проводили обработки вслепую вплоть до окончания анализа.
День 0. Имплантировали опухоль. Разгоняли бактериальные культуры из опухоли, имплантированной мышам.
День 1. Проводили первую обработку в группе, позитивной в отношении химиотерапевтического средства.
День 4. Регистрировали измерения начального размера опухоли для получения исходной линии размера опухоли на матригеле. Продолжали регистрировать размер опухоли и вес тела мышей 2х/неделю. Исследование контролировали ежедневно и делали заметки при любом необычном наблюдении за животными.
Конечные начальный вес тела, измерения размера опухоли и точки: веса тела.
Пример 7. Модель ксенотрансплантированной опухоли ш νί\Ό - анти-СпрЮ-антитело, блокирующее ЕСР-подобный домен.
Чтобы оценить ответ NССIΤ линию клеток карциномы семенников человека имплантировали подкожно с антителом, которое связывается с ЕСР-подобным доменом Спр1о.
Экспериментальные способы перечислены ниже. Результаты показаны на фиг. 2.
Способы и материалы
Животные: использовали самцов бестимусных мышей пибе. Животных индивидуально нумеровали проколами на ушах.
Опухоль: NССIΤ, культивируемая ш νίΙΐΌ линия клеток карциномы семенников человека из медиастинальных смешанных зародышевых клеток, исходно полученная из американской коллекции типов тканей. Линию клеток пересевали ш νίίΐΌ на протяжении восьми пассажей в ВРМ1-1640/10% РВ8 без антибиотиков. Животным подкожно имплантировали 5х106 клеток/0,2 мл матригеля в правый бок животных.
- 15 007469
| № группы | Обработка | Количество |
| мышей | ||
| 1 | Контрольный наполнитель, (25 мМ фосфат натрия, 100 мМ хлорид натрия, рН 7,2), 0,2 мл/мышь, в/б, 014Ω, обработки начинаются в день -1 | 18 |
| 2 | А27Р6.1, 1 мг/кг/инъек., в/б, 014Ω, обработки начинаются в день -1 ударной дозой 2,6 мг/кг/мышь | 10 |
| 3 | А27Р6.1, 10 мг/кг/инъек., в/б, 014Ω, обработки начинаются в день -1 ударной дозой 21,2 мг/кг/мышь | 10 |
| 4 | Цисплатин, 2 мг/кг/инъек., п/к, 3 х/неделю (М,^,Р), 6 обработок, обработки начинались в день 1 | 10 |
Схема обработки
День -1. Мышей случайным образом распределяли в контрольные группы и группы обработки. Регистрировали начальный вес тела животных. Проводили первые обработки в группах с антителом. Готовили дозированные растворы. Специалисты проводили обработки вслепую вплоть до окончания анализа.
День 0. Имплантировали опухоль. Разгоняли бактериальные культуры из опухолей, имплантированных мышам. Бактериальные культуры были негативными в отношении загрязнения через 24 и 48 ч после отбора образца.
День 1. Проводили первую обработку в группе, позитивной в отношении химиотерапевтического средства.
День 4. Регистрировали измерения начального размера опухоли для получения исходной линии размера опухоли на матригеле. Продолжали регистрировать размер опухоли и вес тела мышей 2х/неделю. Исследование контролировали ежедневно и делали заметки при любом необычном наблюдении за животными.
Конечные начальный вес тела, измерения размера опухоли и точки: веса тела.
Пример 8. Анти-СпрФ-мАт, которые блокируют связывание АБК4.
Для того чтобы определить могут ли СпрФ-специфичные моноклональные антитела препятствовать способности С'прЮ связываться с А1к4, рецептором активина типа I, авторы применили анализ проточной цитометрией с использованием линии клеток 293, которая стабильно экспрессирует А1к4. Чтобы получить такую линию клеток клетки 293 совместно трансфицировали плазмидой, которая экспрессирует А1к4, меченый на С-конце НА-эпитопом, и плазмидой, которая экспрессирует лекарственное средство пуромицин, в соотношении 10:1. Затем проводили селекцию трансфицированных клеток в отношении пуромицина вплоть до образования колоний. Затем колонии собирали, размножали и анализировали в отношении экспрессии А1к4, используя Вестерн-блот-анализ НА. Обнаружено, что клон 21 (293-А1к4-21) экспрессирует высокие уровни А1к4 по сравнению с контролем, нетрансфицированными клетками 293.
Чтобы проанализировать связывание СпрЮ-АПО с помощью проточной цитометрии использовали очищенную растворимую форму С’прЮ человека (а/к 1-169), слитую с Рс-частью 1дС человека Ст(бе1С)Рс. Примерно 5 мкг/мл Ст(бе1С)-Рс или контрольного белка Рс инкубировали с 3х105 клеток 293-А1к4-21 на льду в течение 30 мин в общем объеме 50 мкл буфера для РАС8 (РВ8 с 0,1% БСА). В случае образцов, содержащих анти-СпрФ-антитела, 5 мкг/мл Ст(бе1С)-Рс предварительно инкубировали с 50 мкг/мл каждого анти-СпрЮ-антитела (А10.В2.18, А40.С12.8, А27.Р6.1, А8.Н3.1, А19.А10.30, А6.Р8.6, А8.С3.5, А6.С12.11) на льду перед добавлением клеток. Затем клетки промывали буфером для РАС8, и связанный белок Рс определяли посредством инкубирования клеток с конъюгированным с К-фикоэритрином антителом козы против 1дС человека (специфичным по отношению к Рс-фрагменту) из ^аск8οη ΙιηιηιιηοΙοΥδ. Затем образцы снова промывали, фиксировали в 1% параформальдегиде в РВ8 и анализировали, используя стандартные способы проточной цитометрии. Результаты РАС8-анализа показаны на фиг. 3.
Некоторые из вариантов описанного выше изобретения в общих чертах указаны ниже и включают следующие варианты, но не ограничены ими. Как будет понятно специалистам в данной области можно осуществить многочисленные изменения и модификации различных вариантов изобретения, не отходя от сути изобретения. Подразумевается, что все такие изменения входят в объем изобретения.
Полное описание каждой публикации, цитированной в данной заявке, включено в данное описание в виде ссылки.
Claims (28)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Антитело, которое специфично связывается с эпитопом СпрЮ, находящимся в домене, охватывающем аминокислотные остатки аминокислот 46-62 5>ЕО ΙΌ N0:1 или 5>ЕО ΙΌ N0:2.
- 2. Антитело, которое специфично связывается с эпитопом, выбранным из группы эпитопов, с которыми связываются продуцируемые гибридомой антитела, выбранные из группы, состоящей из А10В2.18 и В3Р6.17.
- 3. Антитело, которое специфично связывается с С'прЮ и способно интернализовать С'прЮ.- 16 007469
- 4. Антитело. которое специфично связывается с эпитопом. находящимся в Сук-богатом домене СпрЮ. охватывающем аминокислотные остатки аминокислот 114-150 8Еф ΙΌ N0:1 или 8Еф ΙΌ N0:2.
- 5. Антитело. которое связывается с эпитопом. выбранным из группы эпитопов. с которыми связываются продуцируемые гибридомой антитела. выбранные из группы. состоящей из А6С12.11. А8С3.5 и А6Е8.6.
- 6. Антитело. которое специфично связывается с СпрЮ и способно блокировать взаимодействие между Спр1о и АБК4.
- 7. Моноклональное антитело. которое специфично связывается с эпитопом. выбранным из группы эпитопов. с которыми связываются продуцируемые гибридомой антитела А6С12.11. А6Е8.6. А7Н1.19. А8Е1.30. А8С3.5. А19А10.30. А10В2.18. А2П3.23. А7А10.29. А9С9.9. А15С12.10. А15Е4.14. А17А2.16. А17С12.28. А17С12.1. А17Н6.1. А18В3.11. В3Е6.17 и В11Н8.4.
- 8. Антитело по любому из пп.1-7. которое является фрагментом антитела. выбранного из группы. состоящей из ЕаЬ. ЕаЬ' и Е(аЬ)2 фрагментов.
- 9. Антитело по любому из пп.1-7. которое является полным интактным антителом.
- 10. Антитело по любому из пп.1-7. которое является одноцепочечным антителом.
- 11. Антитело по любому из пп.1-7. которое конъюгировано с химиотерапевтическим средством.
- 12. Антитело по любому из пп.1-7. которое вводится в комбинации с неконъюгированным химиотерапевтическим средством.
- 13. Антитело по п.11. в котором химиотерапевтическое средство выбрано из группы. состоящей из активируемого в опухоли пролекарства. радионуклида и токсина.
- 14. Антитело по п.13. в котором указанным средством является мейтанзиноид.
- 15. Антитело по любому из пп.1-7. где антитело является антителом человека.
- 16. Антитело по любому из пп.1-7. где антитело является моноклональным антителом.
- 17. Антитело по любому из пп.1-7. где антитело является гуманизированным антителом.
- 18. Фармацевтическая композиция. содержащая по меньшей мере одно из антител по любому из пп.1-10 и наполнитель.
- 19. Композиция по п.18. в которой антитело конъюгировано с химиотерапевтическим средством.
- 20. Композиция по п.18. дополнительно содержащая неконъюгированное химиотерапевтическое средство.
- 21. Фармацевтическая композиция. содержащая антитело или его фрагмент. которое специфично связывается с эпитопом. находящимся в домене. охватывающем аминокислотные остатки 46-62 8Еф ΙΌ N0:1 или 8Еф ΙΌ N0:2. конъюгированное с мейтанзиноидом.
- 22. Композиция по п.21. в которой антителом является гуманизированное антитело В3Е6.17.
- 23. Применение композиции по любому из пп.18-22 в качестве средства. подавляющего рост опухоли ίη νίΙΐΌ.
- 24. Применение композиции по любому из пп.18-22 в качестве средства. подавляющего рост опухоли ίη νί\Ό.
- 25. Применение по п.23. в котором опухолевая клетка выбрана из группы. состоящей из клеток опухоли молочной железы. семенников. толстой кишки. легкого. яичника. мочевого пузыря. матки. шейки матки. поджелудочной железы и желудка.
- 26. Применение по п.24. в котором опухолевая клетка выбрана из группы. состоящей из клеток опухоли молочной железы. семенников. толстой кишки. легкого. яичника. мочевого пузыря. матки. шейки матки. поджелудочной железы и желудка.
- 27. Применение композиции по любому из пп.18-22 для воздействия на нежелательную пролиферацию клеток.
- 28. Способ модулирования роста опухолевых клеток в образце ίη νίΐΐΌ. включающий стадию добавления к образцу композиции по любому из пп.18-22.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US28678201P | 2001-04-26 | 2001-04-26 | |
| US29302001P | 2001-05-17 | 2001-05-17 | |
| US30109101P | 2001-06-26 | 2001-06-26 | |
| US36700202P | 2002-03-22 | 2002-03-22 | |
| PCT/US2002/011950 WO2002088170A2 (en) | 2001-04-26 | 2002-04-17 | Cripto blocking antibodies and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200301158A1 EA200301158A1 (ru) | 2005-06-30 |
| EA007469B1 true EA007469B1 (ru) | 2006-10-27 |
Family
ID=27501437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200301158A EA007469B1 (ru) | 2001-04-26 | 2002-04-17 | Антитела, блокирующие cripto, и их применения |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US7531174B2 (ru) |
| EP (3) | EP1974749B1 (ru) |
| JP (4) | JP4307845B2 (ru) |
| KR (1) | KR100592357B1 (ru) |
| CN (1) | CN100352501C (ru) |
| AR (3) | AR037223A1 (ru) |
| AT (2) | ATE420659T1 (ru) |
| BG (1) | BG108363A (ru) |
| BR (1) | BR0209254A (ru) |
| CA (2) | CA2715570A1 (ru) |
| CL (1) | CL2009002199A1 (ru) |
| CY (1) | CY1108960T1 (ru) |
| CZ (1) | CZ20033208A3 (ru) |
| DE (1) | DE60230868D1 (ru) |
| DK (1) | DK1390389T3 (ru) |
| EA (1) | EA007469B1 (ru) |
| EE (1) | EE200300528A (ru) |
| ES (1) | ES2321065T3 (ru) |
| GE (1) | GEP20074091B (ru) |
| HK (1) | HK1058935A1 (ru) |
| HU (1) | HUP0501113A3 (ru) |
| IS (1) | IS2662B (ru) |
| MX (1) | MXPA03009797A (ru) |
| MY (2) | MY157382A (ru) |
| NO (1) | NO20034805L (ru) |
| NZ (1) | NZ566268A (ru) |
| PL (1) | PL207087B1 (ru) |
| PT (1) | PT1390389E (ru) |
| RS (2) | RS20110024A (ru) |
| SG (1) | SG157951A1 (ru) |
| SI (1) | SI1390389T1 (ru) |
| SK (1) | SK14432003A3 (ru) |
| TR (1) | TR200301846T2 (ru) |
| WO (1) | WO2002088170A2 (ru) |
Families Citing this family (97)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPR395801A0 (en) | 2001-03-26 | 2001-04-26 | Austin Research Institute, The | Antibodies against cancer |
| US20090123470A1 (en) * | 2001-03-26 | 2009-05-14 | The Macfarlane Burnet Istitute For Medical Research And Public Health Ltd. | Antibodies Against Cancer |
| US7582299B2 (en) | 2001-04-26 | 2009-09-01 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto-specific antibodies |
| DE60230868D1 (de) * | 2001-04-26 | 2009-03-05 | Biogen Inc | Criptoblockierende antikörper und deren verwendung |
| JP2005520566A (ja) * | 2002-03-22 | 2005-07-14 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | Ｃｒｉｐｔｏ特異的抗体 |
| US20050276812A1 (en) | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Genentech, Inc. | Antibody-drug conjugates and methods |
| EP1641826A2 (en) | 2003-06-27 | 2006-04-05 | Biogen Idec MA Inc. | Use of hydrophobic-interaction-chromatography or hinge-region modifications for the production of homogeneous antibody-solutions |
| ATE437950T1 (de) * | 2003-09-15 | 2009-08-15 | Res Dev Foundation | Cripto-antagonismus von activin und tgf-b signalisierung |
| SG195524A1 (en) | 2003-11-06 | 2013-12-30 | Seattle Genetics Inc | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
| CA2545603A1 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto |
| AU2005286607B2 (en) | 2004-09-23 | 2011-01-27 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
| US20100111856A1 (en) | 2004-09-23 | 2010-05-06 | Herman Gill | Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates |
| EP2311880A3 (en) * | 2005-01-05 | 2011-07-27 | Biogen Idec MA Inc. | Cripto binding molecules |
| WO2006074399A2 (en) | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Multispecific binding molecules comprising connecting peptides |
| WO2008014426A2 (en) * | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Children's Memorial Hospital | Methods of inhibiting tumor cell aggressiveness using the microenvironment of human embryonic stem cells |
| CA2688563A1 (en) * | 2007-06-01 | 2008-12-11 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto binding molecules |
| CA2719385A1 (en) * | 2008-04-21 | 2009-10-29 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Pancreatic beta-cell mass biomarker |
| CA2743057C (en) * | 2008-11-07 | 2019-11-26 | Research Development Foundation | Compositions and methods for the inhibition of cripto/grp78 complex formation and signaling |
| US8470980B2 (en) | 2009-09-09 | 2013-06-25 | Centrose, Llc | Extracellular targeted drug conjugates |
| DK2528625T3 (da) | 2010-04-15 | 2013-10-14 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepiner og konjugater deraf |
| CN114246952A (zh) | 2010-06-08 | 2022-03-29 | 基因泰克公司 | 半胱氨酸改造的抗体和偶联物 |
| US20120121615A1 (en) | 2010-11-17 | 2012-05-17 | Flygare John A | Alaninyl maytansinol antibody conjugates |
| EP2686020B1 (en) | 2011-03-17 | 2017-02-22 | The University of Birmingham | Re-directed immunotherapy |
| TWI636793B (zh) | 2011-04-21 | 2018-10-01 | 西雅圖遺傳學公司 | 新穎結合劑-藥物接合物（ＡＤＣｓ）及其用途（二） |
| ES2567276T3 (es) | 2011-05-12 | 2016-04-21 | Genentech, Inc. | Método de LC-MS/MS de monitoreo de múltiples reacciones para detectar anticuerpos terapéuticos en muestras de animales usando péptidos de cambio de marco |
| US9738707B2 (en) | 2011-07-15 | 2017-08-22 | Biogen Ma Inc. | Heterodimeric Fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto |
| CN103987407B (zh) | 2011-10-14 | 2016-08-24 | 麦迪穆有限责任公司 | 吡咯并苯并二氮杂卓及其偶联物 |
| WO2013130093A1 (en) | 2012-03-02 | 2013-09-06 | Genentech, Inc. | Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds |
| ES2680153T3 (es) | 2012-10-12 | 2018-09-04 | Adc Therapeutics Sa | Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas |
| CA2885340C (en) | 2012-10-12 | 2016-11-08 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| ES2660029T3 (es) | 2012-10-12 | 2018-03-20 | Medimmune Limited | Conjugados de anticuerpo-pirrolobenzodiazepinas |
| RS57694B1 (sr) | 2012-10-12 | 2018-11-30 | Adc Therapeutics Sa | Pirolobenzodiazepin - anti-psma konjugati antitela |
| HUE039329T2 (hu) | 2012-10-12 | 2018-12-28 | Adc Therapeutics Sa | Pirrolobenzodiazepin-antitest konjugátumok |
| JP6392763B2 (ja) | 2012-10-12 | 2018-09-19 | エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ | ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体 |
| MX364327B (es) | 2012-10-12 | 2019-04-23 | Medimmune Ltd | Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina - anti-cd22. |
| WO2014096365A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Spirogen Sàrl | Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases |
| ES2658888T5 (es) | 2012-12-21 | 2021-10-19 | Medimmune Ltd | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas |
| AU2014230735B2 (en) | 2013-03-13 | 2018-03-15 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| JP6340019B2 (ja) | 2013-03-13 | 2018-06-06 | メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ | ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート |
| NZ710745A (en) | 2013-03-13 | 2019-03-29 | Genentech Inc | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| EA201690195A1 (ru) | 2013-08-12 | 2016-05-31 | Дженентек, Инк. | Конъюгатные соединения антитело-лекарство на основе димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1h-бензо[e]индола и способы применения и лечения |
| US9950078B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-04-24 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| WO2015052532A1 (en) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US9956299B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-05-01 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates |
| GB201317982D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| PE20161394A1 (es) | 2013-12-16 | 2017-01-06 | Genentech Inc | Compuestos peptidomimeticos y sus conjugados de anticuerpo-farmaco |
| MX371092B (es) | 2013-12-16 | 2020-01-16 | Genentech Inc | Compuestos peptidomimeticos y conjugados de anticuerpo-farmaco de los mismos. |
| JP6980384B2 (ja) | 2013-12-16 | 2021-12-15 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | １−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール二量体抗体−薬物コンジュゲート化合物、並びに使用及び処置の方法 |
| BR112016014830A2 (pt) | 2013-12-23 | 2017-09-19 | Bayer Pharma AG | Conjugados de fármaco de anticorpo (adcs) com inibidores de ksp |
| US10188746B2 (en) | 2014-09-10 | 2019-01-29 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| EP3191134B1 (en) | 2014-09-12 | 2019-11-20 | Genentech, Inc. | Anthracycline disulfide intermediates, antibody-drug conjugates and methods |
| BR112017003236A2 (pt) | 2014-09-12 | 2017-11-28 | Genentech Inc | anticorpos elaborados com cisteína, conjugados de droga e anticorpos, método de preparação de conjugado de droga e anticorpo e composição farmacêutica |
| CR20170099A (es) | 2014-09-17 | 2017-07-19 | Genentech Inc | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de anticuerpos-disulfuro de las mismas |
| MX2017006770A (es) | 2014-11-25 | 2018-02-09 | Adc Therapeutics Sa | Conjugados de pirrolobenzodiazepina y anticuerpo. |
| EP3226909A1 (en) | 2014-12-03 | 2017-10-11 | Genentech, Inc. | Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof |
| AU2016245328A1 (en) * | 2015-04-07 | 2017-10-12 | Paranta Biosciences Limited | A method of treating neoplasias |
| GB201506402D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
| CA2990076A1 (en) | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Antibody drug conjugates (adcs) and antibody prodrug conjugates (apdcs) with enzymatically cleavable groups |
| MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
| WO2017060322A2 (en) | 2015-10-10 | 2017-04-13 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Ptefb-inhibitor-adc |
| MA43354A (fr) | 2015-10-16 | 2018-08-22 | Genentech Inc | Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré |
| MA45326A (fr) | 2015-10-20 | 2018-08-29 | Genentech Inc | Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation |
| GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| SG11201808167VA (en) | 2016-03-24 | 2018-10-30 | Bayer Pharma AG | Prodrugs of cytotoxic active agents having enzymatically cleavable groups |
| US20170315132A1 (en) | 2016-03-25 | 2017-11-02 | Genentech, Inc. | Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay |
| GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| JP2019522633A (ja) | 2016-05-20 | 2019-08-15 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ｐｒｏｔａｃ抗体コンジュゲート及び使用方法 |
| CN109313200B (zh) | 2016-05-27 | 2022-10-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法 |
| WO2017214024A1 (en) | 2016-06-06 | 2017-12-14 | Genentech, Inc. | Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use |
| US11001636B2 (en) | 2016-06-15 | 2021-05-11 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Specific antibody-drug-conjugates (ADCs) with KSP inhibitors and anti-CD123-antibodies |
| WO2018031662A1 (en) | 2016-08-11 | 2018-02-15 | Genentech, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof |
| WO2018065501A1 (en) | 2016-10-05 | 2018-04-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for preparing antibody drug conjugates |
| GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| WO2018114804A1 (de) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Spezifische antikörper-wirkstoff-konjugate (adcs) mit ksp-inhibitoren |
| KR20190099250A (ko) | 2016-12-21 | 2019-08-26 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 효소적으로 절단가능한 기를 갖는 세포독성 활성제의 전구약물 |
| IL310558A (en) | 2016-12-21 | 2024-03-01 | Bayer Pharma AG | Drug-antibody conjugates with enzymatically cleavable groups |
| GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| PT3544636T (pt) | 2017-02-08 | 2021-05-04 | Medimmune Ltd | Conjugados de anticorpos-pirrolobenzodiazepinas |
| WO2018192944A1 (en) | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| KR20190141666A (ko) | 2017-04-20 | 2019-12-24 | 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 | 항-axl 항체-약물 접합체로의 병용 요법 |
| AU2018285562B2 (en) | 2017-06-14 | 2024-01-18 | Adc Therapeutics Sa | Dosage regimes for the administration of an anti-CD19 ADC |
| ES2906965T3 (es) | 2017-08-18 | 2022-04-21 | Medimmune Ltd | Conjugados de pirrolobenzodiazepina |
| WO2019060398A1 (en) | 2017-09-20 | 2019-03-28 | Ph Pharma Co., Ltd. | ANALOGUES OF THAILANSTATINE |
| GB201803342D0 (en) | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
| GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| WO2019232449A1 (en) | 2018-06-01 | 2019-12-05 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Splicing modulator antibody-drug conjugates and methods of use |
| GB201814281D0 (en) | 2018-09-03 | 2018-10-17 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic agents |
| TW202037381A (zh) | 2018-10-24 | 2020-10-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 綴合化學降解誘導劑及使用方法 |
| WO2020123275A1 (en) | 2018-12-10 | 2020-06-18 | Genentech, Inc. | Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins |
| KR20210102274A (ko) | 2018-12-13 | 2021-08-19 | 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 | 헤르복시디엔 항체-약물 접합체 및 사용 방법 |
| WO2020131697A2 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-25 | Revitope Limited | Twin immune cell engager |
| GB201901197D0 (en) | 2019-01-29 | 2019-03-20 | Femtogenix Ltd | G-A Crosslinking cytotoxic agents |
| GB2597532A (en) | 2020-07-28 | 2022-02-02 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic compounds |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5264557A (en) * | 1991-08-23 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3 |
| WO2000063693A1 (en) * | 1999-04-20 | 2000-10-26 | Kokolus William J | Improved method of identifying and locating immunobiologically-active linear peptides |
Family Cites Families (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ207394A (en) * | 1983-03-08 | 1987-03-06 | Commw Serum Lab Commission | Detecting or determining sequence of amino acids |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| JP3040121B2 (ja) | 1988-01-12 | 2000-05-08 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法 |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5208020A (en) * | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| US5780029A (en) | 1989-11-14 | 1998-07-14 | New York Medical College | Antidiotypic monoclonal antibodies for treatment of melanoma |
| US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| US5256643A (en) | 1990-05-29 | 1993-10-26 | The Government Of The United States | Human cripto protein |
| EP0814159B1 (en) | 1990-08-29 | 2005-07-27 | GenPharm International, Inc. | Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies |
| WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US6063379A (en) | 1993-12-09 | 2000-05-16 | Centro De Inmunologia Molecular | Anti-idiotypic monoclonal antibodies and compositions including the anti-idiotypic monoclonal antibodies |
| US5981215A (en) * | 1995-06-06 | 1999-11-09 | Human Genome Sciences, Inc. | Human criptin growth factor |
| ATE403001T1 (de) * | 1996-05-22 | 2008-08-15 | Viventia Biotech Inc | Antigenbindungsfragmente die spezifisch krebszellen nachweisen, nukleotide die für diese fragmente kodieren, und deren verwendung zur vorbeugung und zum nachweis von krebs |
| IL125608A0 (en) | 1998-07-30 | 1999-03-12 | Yeda Res & Dev | Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines |
| RS51309B (sr) | 1998-12-23 | 2010-12-31 | Pfizer Inc. | Humana monoklonalna antitela za ctla-4 |
| US6335170B1 (en) | 1999-02-22 | 2002-01-01 | Torben F. Orntoft | Gene expression in bladder tumors |
| WO2000058499A1 (fr) | 1999-03-30 | 2000-10-05 | Japan Tobacco Inc. | Procede pour la production d'anticorps monoclonal |
| US6833268B1 (en) | 1999-06-10 | 2004-12-21 | Abgenix, Inc. | Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions |
| JP2001046066A (ja) | 1999-08-03 | 2001-02-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 新規な相補性決定領域を有するヒトｖｅｇｆ受容体ｋｄｒに対する抗体 |
| EP1226177B1 (en) | 1999-10-29 | 2008-07-09 | Genentech, Inc. | Anti-prostate stem cell antigen (psca) antibody compositions and methods of use |
| US6663613B1 (en) | 2000-01-25 | 2003-12-16 | Bacchus Vascular, Inc. | System and methods for clot dissolution |
| WO2001064754A1 (fr) | 2000-03-03 | 2001-09-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Anticorps a recombinaison genique et son fragment |
| US6333410B1 (en) * | 2000-08-18 | 2001-12-25 | Immunogen, Inc. | Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids |
| GB0020953D0 (en) | 2000-08-24 | 2000-10-11 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| CA2422814A1 (en) | 2000-09-18 | 2002-03-21 | Biogen, Inc. | Cripto mutant and uses thereof |
| US7078176B2 (en) | 2001-01-26 | 2006-07-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Serivices | Detection and quantification of Cripto-1 |
| IL157142A0 (en) | 2001-01-29 | 2004-02-08 | Idec Pharma Corp | Modified antibodies and methods of use |
| WO2002096948A2 (en) | 2001-01-29 | 2002-12-05 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Engineered tetravalent antibodies and methods of use |
| AUPR395801A0 (en) * | 2001-03-26 | 2001-04-26 | Austin Research Institute, The | Antibodies against cancer |
| DE60230868D1 (de) | 2001-04-26 | 2009-03-05 | Biogen Inc | Criptoblockierende antikörper und deren verwendung |
| US7582299B2 (en) * | 2001-04-26 | 2009-09-01 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto-specific antibodies |
| US20030148408A1 (en) * | 2001-09-18 | 2003-08-07 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| US20040014690A1 (en) | 2002-02-13 | 2004-01-22 | Zhenkun Ma | Macrolides with activity against methicillin-resistant staphylococcus aureus |
| JP2005520566A (ja) * | 2002-03-22 | 2005-07-14 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | Ｃｒｉｐｔｏ特異的抗体 |
| ATE437950T1 (de) * | 2003-09-15 | 2009-08-15 | Res Dev Foundation | Cripto-antagonismus von activin und tgf-b signalisierung |
| EP2311880A3 (en) | 2005-01-05 | 2011-07-27 | Biogen Idec MA Inc. | Cripto binding molecules |
| CN101479391A (zh) | 2006-04-28 | 2009-07-08 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 用于检测cripto-3的组合物及方法 |
-
2002
- 2002-04-17 DE DE60230868T patent/DE60230868D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 AT AT02731384T patent/ATE420659T1/de active
- 2002-04-17 SG SG200600551-6A patent/SG157951A1/en unknown
- 2002-04-17 SK SK1443-2003A patent/SK14432003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-04-17 RS RS20110024A patent/RS20110024A/en unknown
- 2002-04-17 SI SI200230804T patent/SI1390389T1/sl unknown
- 2002-04-17 WO PCT/US2002/011950 patent/WO2002088170A2/en active Search and Examination
- 2002-04-17 ES ES02731384T patent/ES2321065T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 CA CA2715570A patent/CA2715570A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-17 EP EP08158456A patent/EP1974749B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 EP EP10186149A patent/EP2316486A3/en not_active Withdrawn
- 2002-04-17 DK DK02731384T patent/DK1390389T3/da active
- 2002-04-17 MX MXPA03009797A patent/MXPA03009797A/es active IP Right Grant
- 2002-04-17 PL PL373513A patent/PL207087B1/pl unknown
- 2002-04-17 CN CNB028128877A patent/CN100352501C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-17 EP EP02731384A patent/EP1390389B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 KR KR1020037014078A patent/KR100592357B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 EE EEP200300528A patent/EE200300528A/xx unknown
- 2002-04-17 TR TR2003/01846T patent/TR200301846T2/xx unknown
- 2002-04-17 PT PT02731384T patent/PT1390389E/pt unknown
- 2002-04-17 HU HU0501113A patent/HUP0501113A3/hu unknown
- 2002-04-17 CZ CZ20033208A patent/CZ20033208A3/cs unknown
- 2002-04-17 GE GE5415A patent/GEP20074091B/en unknown
- 2002-04-17 NZ NZ566268A patent/NZ566268A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 BR BRPI0209254-9A patent/BR0209254A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 AT AT08158456T patent/ATE533508T1/de active
- 2002-04-17 RS YU84903A patent/RS51635B/sr unknown
- 2002-04-17 EA EA200301158A patent/EA007469B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 CA CA2443840A patent/CA2443840C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-17 JP JP2002585468A patent/JP4307845B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-23 MY MYPI20021484A patent/MY157382A/en unknown
- 2002-04-23 MY MYPI2010003173A patent/MY150237A/en unknown
- 2002-04-24 AR ARP020101492A patent/AR037223A1/es active IP Right Grant
-
2003
- 2003-10-23 US US10/693,538 patent/US7531174B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-24 IS IS6999A patent/IS2662B/is unknown
- 2003-10-27 NO NO20034805A patent/NO20034805L/no not_active Application Discontinuation
- 2003-11-14 BG BG108363A patent/BG108363A/bg unknown
-
2004
- 2004-03-11 HK HK04101788.0A patent/HK1058935A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-07-11 JP JP2005202361A patent/JP2005314436A/ja active Pending
-
2007
- 2007-04-30 US US11/799,361 patent/US7674462B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-12-22 US US12/317,476 patent/US8003763B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-01-14 US US12/353,913 patent/US20090285818A1/en not_active Abandoned
- 2009-02-05 JP JP2009025420A patent/JP4575983B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-31 US US12/415,659 patent/US7888052B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-04-08 CY CY20091100413T patent/CY1108960T1/el unknown
- 2009-07-08 AR ARP090102597A patent/AR072554A2/es not_active Application Discontinuation
- 2009-12-22 CL CL2009002199A patent/CL2009002199A1/es unknown
-
2010
- 2010-02-15 JP JP2010030683A patent/JP2010163438A/ja not_active Withdrawn
- 2010-07-16 AR ARP100102604A patent/AR077759A2/es not_active Application Discontinuation
-
2011
- 2011-08-19 US US13/213,499 patent/US8673303B2/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5264557A (en) * | 1991-08-23 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3 |
| WO2000063693A1 (en) * | 1999-04-20 | 2000-10-26 | Kokolus William J | Improved method of identifying and locating immunobiologically-active linear peptides |
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| BIANCO et al. Cripto-1 Indirectly Stimulates the Tyrosine Phosphorylation of erb B-4 through a Novel Receptor. The Journal of Biological Chemistry. 26 March 1999, Vol.274, pages 8624-8629, see entire document * |
| BRANDT et al. Identification and Biological Characterization of an Epidermal Growth Factor-related Protein:Cripto-l. The Journal of Biological Chemistry. 24 June 1994, Vol.269, pages 17320-17328, especially page 17321, second column, lines 8-28 * |
| CICCODICOLA et al. Molecular characterization of a gene of the 'EGF family' expressed in undifferentiated human NTERA2 teratocarcinoma cells. The EMBO Journal. 1989, Vol.8, pages 1987-1991, especially figure 2 on page 1988 * |
| Database Biosis on STN, Biological Abstracts, Inc., (Colombus, OH, USA), No. 1995:110701, SAEKI et al. 'Immunohistochemical detection of cripto-1, amphiregulin and transforming growth factor alpha in human gastric carcinomas and intestinal metaplasias,' abstract, International Journal of Oncology, 1994, Vol.5, pages 215-223 * |
| Database Biosis on STN, Biological Abstracts, Inc., (Colombus, OH, USA), No. 1995:111501, SAEKI et al. 'Expression of cripto-1 in human colorectal adenomas and carcinomas is related to the degree of dysplasia,' abstract, International Journal of Oncology, 1994, Vol.5, pages 445-451 * |
| Database Biosis on STN, Biological Abstracts, Inc., (Columbus, OH, USA), No. 1995:456402, DUBLIN et al, 'Amphiregulin and cripto overexpression in breast cancer: Relationship with prognosis and clinical and molecular variables,' abstract, International Journal of Oncology, 1995, Vol.7, pages 617-622 * |
| Database Medline on STN, US National Library of Medicine, (Bethesda, MD, USA), No. 94134427, CIARDIELLO et al. 'Inhibition of CRIPTO expression and tumorigenicity in human colon cancer cells by antisense RNA and oligodeoxynucleotides,' abstract, Oncognene, 1994, Vol.9, pages 291-298 * |
| Database Scisearch on STN, Thomson ISI, (Colombus, OH, USA), No. 93:334632, NORMANNO et al. 'Expression of Amphiregulin, Cripto-1, and Heregulin-Aplha in Human Breast-Cancer Cells,' abstract, International Journal of Oncology, 1993, Vol. 2, pages 903-911 * |
| EBERT et al. Cripto-1 Induces Phosphatidylinositol 3'-Kinase-dependent Phosphorylation of AKT and Glycogen Synthase Kinase 3Beta in Human Cervical Carcinoma Cells. Cancer Research. 15 September 1999, Vol.59, pages 4502-4505, see entire article * |
| KANNAN et al. Cripto Enhances the Tyrosin Phosphorylation of She and Activates Mitogen-activated Protein Kinase (MAPK) in Mammary Epithelial Cells. The Journal of Biological Chemistry. 7 February 1997, Vol.272, pages 3330-3335, see entire document * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA007469B1 (ru) | Антитела, блокирующие cripto, и их применения | |
| AU2002334799B2 (en) | Cripto-specific antibodies | |
| US7582299B2 (en) | Cripto-specific antibodies | |
| AU2007200809B2 (en) | Cripto Blocking Antibodies and Uses Thereof | |
| ES2355363T3 (es) | Anticuerpos específicos de cripto. | |
| NZ578287A (en) | Cripto blocking antibodies and uses thereof | |
| ZA200606338B (en) | Cripto blocking antibodies and uses thereof | |
| AU2002303364A1 (en) | Cripto blocking antibodies and uses thereof | |
| AU2010202840A1 (en) | Cripto Blocking Antibodies and Uses Thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HC1A | Change in name of an applicant in a eurasian application | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |