SK14432003A3 - Protilátka špecifická pre Cripto, kompozícia obsahujúca takúto protilátku a jej použitie - Google Patents
Protilátka špecifická pre Cripto, kompozícia obsahujúca takúto protilátku a jej použitie Download PDFInfo
- Publication number
- SK14432003A3 SK14432003A3 SK1443-2003A SK14432003A SK14432003A3 SK 14432003 A3 SK14432003 A3 SK 14432003A3 SK 14432003 A SK14432003 A SK 14432003A SK 14432003 A3 SK14432003 A3 SK 14432003A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- cripto
- antibody
- antibodies
- domain
- tumor
- Prior art date
Links
- 101100369076 Mus musculus Tdgf1 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 246
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 title abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 55
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims abstract description 28
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 26
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims abstract description 19
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 84
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 44
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 44
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 42
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 20
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 19
- 102000012545 EGF-like domains Human genes 0.000 claims description 16
- 108050002150 EGF-like domains Proteins 0.000 claims description 16
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 claims description 13
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 12
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 12
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 11
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 11
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 10
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 claims description 9
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 2
- 206010061968 Gastric neoplasm Diseases 0.000 claims 7
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 claims 7
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 claims 7
- 208000024719 uterine cervix neoplasm Diseases 0.000 claims 7
- 241001167018 Aroa Species 0.000 claims 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 37
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 24
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 101000835745 Homo sapiens Teratocarcinoma-derived growth factor 1 Proteins 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 11
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 102100026404 Teratocarcinoma-derived growth factor 1 Human genes 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 9
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 101100118545 Holotrichia diomphalia EGF-like gene Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 6
- 101150101604 ACVR1B gene Proteins 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 5
- 101000872083 Danio rerio Delta-like protein C Proteins 0.000 description 4
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 4
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 4
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 4
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 102000055846 human TDGF1 Human genes 0.000 description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 3
- -1 nuclide Chemical class 0.000 description 3
- 210000004287 null lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- NYDBKUNVSALYPX-NAKRPEOUSA-N Ala-Ile-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NYDBKUNVSALYPX-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- DRCOAZZDQRCGGP-GHCJXIJMSA-N Asp-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O DRCOAZZDQRCGGP-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- HAYVTMHUNMMXCV-IMJSIDKUSA-N Cys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CS HAYVTMHUNMMXCV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- XTHUKRLJRUVVBF-WHFBIAKZSA-N Cys-Gly-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XTHUKRLJRUVVBF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- HSAWNMMTZCLTPY-DCAQKATOSA-N Cys-Met-Leu Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HSAWNMMTZCLTPY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- PMSMKNYRZCKVMC-DRZSPHRISA-N Glu-Phe-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N PMSMKNYRZCKVMC-DRZSPHRISA-N 0.000 description 2
- GZBZACMXFIPIDX-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)C(=O)O GZBZACMXFIPIDX-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 2
- 101000766090 Haloarcula argentinensis Cruxrhodopsin-1 Proteins 0.000 description 2
- YOSQCYUFZGPIPC-PBCZWWQYSA-N His-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YOSQCYUFZGPIPC-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 2
- UOYGZBIPZYKGSH-SRVKXCTJSA-N His-Ser-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N UOYGZBIPZYKGSH-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XVUAQNRNFMVWBR-BLMTYFJBSA-N Ile-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N XVUAQNRNFMVWBR-BLMTYFJBSA-N 0.000 description 2
- MVHXGBZUJLWZOH-BJDJZHNGSA-N Leu-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MVHXGBZUJLWZOH-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- VSJXPNCQYGOLFM-XIRDDKMYSA-N Lys-Cys-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O VSJXPNCQYGOLFM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- AHFOKDZWPPGJAZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N AHFOKDZWPPGJAZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- QGQGAIBGTUJRBR-NAKRPEOUSA-N Met-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC QGQGAIBGTUJRBR-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- DZTDEZSHBVRUCQ-FXQIFTODSA-N Met-Asp-Cys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N DZTDEZSHBVRUCQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- SLQDSYZHHOKQSR-QXEWZRGKSA-N Met-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCSC SLQDSYZHHOKQSR-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- VHWOBXIWBDWZHK-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 VHWOBXIWBDWZHK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- KJJROSNFBRWPHS-JYJNAYRXSA-N Phe-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KJJROSNFBRWPHS-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N Ser-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O HQTKVSCNCDLXSX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N Ser-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OYEDZGNMSBZCIM-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- IAORETPTUDBBGV-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N IAORETPTUDBBGV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- OSFZCEQJLWCIBG-BZSNNMDCSA-N Ser-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OSFZCEQJLWCIBG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N Thr-Cys-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000011717 athymic nude mouse Methods 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000002701 cell growth assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010081985 glycyl-cystinyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 2
- 108010029384 tryptophyl-histidine Proteins 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWWPBOUMKFBHAL-FXQIFTODSA-N Arg-Asn-Cys Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O RWWPBOUMKFBHAL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N Arg-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BBYTXXRNSFUOOX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- CVXXSWQORBZAAA-SRVKXCTJSA-N Arg-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N CVXXSWQORBZAAA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZPWMEWYQBWSGAO-ZJDVBMNYSA-N Arg-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZPWMEWYQBWSGAO-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- UUOYKFNULIOCGJ-GUBZILKMSA-N Cys-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N UUOYKFNULIOCGJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000012624 DNA alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229940123414 Folate antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N Glu-His-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZJFNRQHUIHKZJF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DVLZZEPUNFEUBW-AVGNSLFASA-N Glu-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N DVLZZEPUNFEUBW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N Glu-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- BXSZPACYCMNKLS-AVGNSLFASA-N Glu-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BXSZPACYCMNKLS-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- LUJVWKKYHSLULQ-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN LUJVWKKYHSLULQ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JSLVAHYTAJJEQH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100026894 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 235000010624 Medicago sativa Nutrition 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- GODBLDDYHFTUAH-CIUDSAMLSA-N Met-Asp-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GODBLDDYHFTUAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- GCFNFKNPCMBHNT-IRXDYDNUSA-N Phe-Tyr-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)NCC(=O)O)N GCFNFKNPCMBHNT-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FIXILCYTSAUERA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GZSZPKSBVAOGIE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZKBKUWQVDWWSRI-BZSNNMDCSA-N Ser-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKBKUWQVDWWSRI-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- BDYBHQWMHYDRKJ-UNQGMJICSA-N Thr-Phe-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O BDYBHQWMHYDRKJ-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- 230000010632 Transcription Factor Activity Effects 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108010015920 Type I Activin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000002138 Type I Activin Receptors Human genes 0.000 description 1
- GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N Tyr-Leu-Ala Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 GULIUBBXCYPDJU-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 1
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 1
- 241000269370 Xenopus <genus> Species 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012801 analytical assay Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229940088954 camptosar Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001955 cumulated effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010237 hybrid technique Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002212 purine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 239000002718 pyrimidine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010005652 splenotritin Proteins 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004034 viscosity adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Protilátka špecifická pre Cripto, kompozícia obsahujúca takúto protilátku a jej použitie
Súvisiace prihlášky vynálezu ?red.<_adaná prihláška je pokračovaním prihlášky U.S. č. 60/367,002 podanej 22. marca 2002, ktorá je prihláškou čiastočne nadväzujúcou na prihlášku U.S. č. 60/301,091, podanú 26. júna 2001, ktorá je prihláškou čiastočne nadväzujúcou na prihlášku U.S. č. 60/293,020, podanú 17. mája 2001, ktorá je prihláškou čiastočne nadväzujúcou na prihlášku U.S. č. 60/286,782, podanú 26. apríla 2001. Úplný opis každej z uvedených patentových prihlášok je zahrnutý formou odkazu v predkladanej prihláške.
Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka všeobecne odboru genetiky a bunkovej a molekulárnej biológie. Konkrétne sa vynález týka protilátok, ktoré sa viažu na Cripto, a modulujú signalizáciu Cripto, súprav (kítov) obsahujúcich takéto protilátky, a použitia týchto protiláook.
Doterajší stav techniky
Cripto je proteín bunkového povrchu, ktorý sa skladá zo 188 aminokyselinových zvyškov, neočakávane izolovaný pri cDNA skríningu knižnice ludského embryonálneho karcinómu (Ciccodicola et al., 1989, EMBO J., vol. 8, no. 7, pp. 1987-1991). Proteín Cripto má aspoň dve pozoruhodné domény: doménu bohatú na cysteín („cysteine-rich) a doménu, ktorá bola najprv charakterizovaná ako doména podobná doméne nájdenej v rodine epidermálneho rastového faktora (EGF). Cripto bol pôvodne klasifikovaný ako člen EGF rodiny (Ciccodicola et al., uvedené skôr), avšak následná analýza ukázala, že Cripto sa neviaže na žiadny zc známych receptorov EGF a jeho doména podobná EGF („EGF-like) je v skutočnosti odlišná od EGF rodiny (Bianco et al., 1999, J.
3iol. Chem., 2/4:8624-8629).
Signálna dráha Cripto zostala napriek pokračujúcemu výskumu nevyjasnená, pričom odborná literatúra podporuje domnienku o aktivácii niekoľkých rôznych dráh, vrátane dráhy MA P kínázy ÍDeSantis et al., 1937, Celí Growth Differ., 8:Í257-1266, Kannan et al., 1997,
J.
-O_
Chem., 272:3330-3335), dráhy TGF-p
Gritsman et al., 1999, Development, 12 / : 921-932, Scnier et
Náture, 403:385-389), prípadne interakcií s dráhou Wnt (Salomon et al., Endocr Relat Cancer. a skríženie (cross talk) s dráhou EGF () Eiol. Chem., 274:8624-8629).
J Dec, :199-22 í 1999, .
Patent U.S. č. o 256 643 a dve z neho vylúčené patentové prihlášky teraz patenty O.S. č. 5 654 140 a 5 7 92 616), opisujú ľudský gén Cripto, proteín Cripto a protilátky proti proteínu Cripto.
Patent t.S. č. 5 264 557 a tri z neho vylúčené patentové prihlášky (teraz patenty U.S. č. 5 620 866, 5 650 285 a 5 854 399) opisujú gén a proteín príbuzný ľudskému génu a proteínu Cripto. Tiež opisujú protiiátxy, ktoré sa viažu na proteín príbuzný Cripto, ale nereagujú skrížené väzbou na proteín Cripto samotný.
Nadmerná expresia („overexpression) proteínu Cripto je asociovaná s mnohými typmi nádorov (napr. nádoru prsníka, semenníkov, kólonu, plúc, vaječníkov, močového mechúra, maternice krčka maternice, panKreasc a za lúdka, bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci), ako je demonštrované pomocou imunoznačenia ľudského tkaniva králičími polykionálnymi protilátkami proti malým peptidom cripto (Panico et al., 1996, Int. J. Cancer, 65: 51-56, Byrne et al., 1998, J Pathology, 185:108-111, De Angelis et al. , 1999, Int J Oncology, 14:437-440). V danom odbore preto existuje potreba nájsť prostriedky na riadenie, obmedzovanie a/alebo prevenciu takejto nadmernej expresie Cripto, moduláciu signalizácie (signaling) Cripto a moduláciu dôsledkov expresie
Cripto (t.j. podpora a/alebo udržovanie bunkovej transformácie).
Podstata vynálezu
Predkladaný vynález poskytuje nové protilátky, ktoré sa špecificky viažu na Cripto a spôsoby výroby a použitia takýchto protilátok. Vynález tiež poskytuje protilátky, ktoré sa viažu na Cripto a modulujú signalizáciu Cripto alebo proteínové interakcie napr. protilátku, ktorá sa viaže na Cripto tak, že výsledný signál z proteínovej interakcie s Cripto je modulovaný „downward. Vynález tiež poskytuje protilátky, ktoré sa viažu na Cripto a blokujú tak interakciu medzi Cripto a ALK4 . Vynález tiež poskytuje protilátky, ktoré sa viažu na Cripto a modulujú tak nádorový rast. Vynález tiež poskytuje protilátky, ktoré sa viažu na Cripto, a tak modulujú Cripto signalizáciu a modulujú nádorový rast. Vynález tiež poskytuje protilátky, ktoré sa viažu na Cripto, blokujú interakciu medzi Cripto a ALK4 a modulujú nádorový rast.
V jednom aspekte vynálezu sa protilátka podía predkladaného vynálezu špecificky viaže na epitop vybraný zo skupiny obsahujúcej epitopy, na ktoré sa viaže protilátka A6C12.il, A6F3.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318), A7H1.19, A8F1.30, A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), A8H3.1 (ATCC prístupové č. PTA3315), A8H3.2, A19A1O,3O, A10B2.18 (ATCC prístupové č. PTA3311), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-3310), A40G12.8 (ATCC prístupové č. PTA-3316), A2D3.23, A7A10,29, A9G9.9, A15C12.10, A15F4.14, A17A2.16, A17C12.28, A17G12.1 (ATCC prístupové č. PTA3314), A17H6.1, A18B3.il (ATCC prístupové č. PTA-3312), A19E2.7, B3F6.17 (ATCC prístupové č. PTA-3319), B6G7.10 (ATCC prístupové č. PTA-3313), B11H8.4 .
V ďalšom aspekte vynálezu sa protilátka pódia predkladaného vynálezu špecificky viaže na epitop vo väzbovej doméne ligand/receptor Cripto. Cripto pritom môže byť vybraný z CR-1 (sekvencia SEQ ID NO: 1) nebo CR-3 (sekvencia SEQ ID NO: 2) .
V konkrétnom uskutočnení protilátka, ktorá sa šoecifrcry viaže na epitop vo väzbovej doméne ligand/receptor je napr. A6C12.il, A6F8.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318), A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), AÍ9A18.32, A8H3.Í (ATCC prístupové č. PTA-3315), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-3310), A40G12.8 (ATCC prístupové č. PTA-3316), A17G12.1 (ATCC prístupové č. PTA-3314), AÍ8B3.11 (ATCC prístupové č. PTA-3312) a B6G7.10 (ATCC prístupové č. ΡΤΆ3313) .
V jednom uskutočnení vynálezu je epitop, na ktorý sa protilátky podlá predkladaného vynálezu viažu, v doméne podobnej EGP. Protilátky, ktoré sa špecificky viažu na epitop v EGF podobnej doméne sú napr. protilátky A40G12.8 (ATCC prístupové č. PTA3316), A8H3.1 (ATCC prístupové č. PTA-3315), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-3310), B6G7.10 (ATCC prístupové č. PTA-3313), A17G12.1 (ATCC prístupové č. PTA-3314) a ÄÍ8B3.11 (ATCC prístupové č. PTA-3312), bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci.
V ďalšom uskutočnení je epitop, na ktorý sa viažu protilátky podľa predklaaaného vynálezu, v doméne bohatej na cysteín („cysrich dornain). Protilátka, ktorá sa špecificky viaže na epitop v doméne bohatej na cysteín je napr. A19A10.30, A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), A6F8.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318) a A6C12.il, bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci.
V ďalšom uskutočnení je epitop, na ktorý sa viažu protiláfky podlá predkladaného vynálezu, v doméne obsahujúcej aminokyselinové zvyšky 46 až 62 z Cripto (46-62 Cripto). Protilátky, ktoré sa špecificky viažu na epitop v doméne obsahujúcej aminokyselinové zvyšky 46 až 62 z Cripto sú napr. A10B2.18 (ATCC prístupové č. ΡΤΑ-3311.'!, B3F6,i7 (ATCC prístupové č. PTA-3319) a A17A2.16, bez toho aby’ boí tento zoznam obmedzujúci.
Predkladaný vynález tiež zahŕňa protilátky, ktoré sa viažu špecificky na Cripto a sú schopné modulovať signalizáciu Cripto. Protilátky, kroré sa viažu špecificky na Cripto a sú schopné modulovať signalizáciu Cripto sú napr. A48G12.8 (ATCC prístupové
č. PTA-3316), A3H3.1 (ATCC prístupové č. PTA-3315), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-3310) a A6C12.il, bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci. V jednom uskutočnení protilátky podľa predkladaného vynálezu, ktoré sa viažu špecificky na Cripto a sú schopné modulovať signalizáciu Cripto, sa viažu na epitop v doméne podobnej EGF alebo v doméne bohatej na cysteín v proteíne Cripto.
Predkladaný vynález tiež zahŕňa protilátky, ktoré sa viažu špecificky na Cripto a blokujú interakciu medzi Cripto a ALK4 . Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na Cripto a je schopná blokovať interakciu medzi Cripto a ALK4 je napr. A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), A6F8.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318) a A6C12.il, bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci. V jednom uskutočnení protilátka podľa predkladaného vynálezu, ktorá sa špecificky viaže na Cripto a je schopná blokovať interakciu medzi Cripto a ALK4, sa viaže na epitop v doméne podobne EGF alebo doméne bohatej na cysteín v Cripto.
V ďalšom aspekte predkladaný vynález zahŕňa protilátky, ktoré sa viažu špecificky na Cripto a sú schopné modulovať nádorový rast. Protilátka, ktorá sa špecificky viaže na Cripto a je schopná modulovať nádorový rast, je napr. A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-3310), B6G7.10 (ATCC prístupové č. PTA-3313) a A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci. V jednom uskutočnení sa protilátky podľa predkladaného vynálezu, ktoré sa viažu špecificky na Cripto a sú schopné modulovať nádorový rast, viažu na epitop v doméne podobnej EGF alebo v doméne bohatej na cysteín v Cripto.
V ešte ďalšom aspekte predkladaný vynález zahŕňa protilátky, ktoré sa viažu špecificky na Cripto, ktoré sú schopné modulovať signalizáciu Cripto, a ktoré sú schopné modulovať nádorový rast. Protilátka, ktorá sa špecificky viaže na Cripto, je schopná modulovať signalizáciu Cripto a je schopná modulovať nádorový rast je, avšak bez obmedzenia, napr. A27F6.1 (ATCC prístupové č.
ΡΤΑ-3 3 1 C ) .
jednom uskutočnení protilátky poola predkladaného vynálezu, ktoré sa viažu špecificky na Criptc, sú schopné modelovať signalizáciu Cnpto a sú schopné moaulovať nádorový rast, sa viažu na epitop v doméne podobnej EGF alebo v doméne bohatej na cyste í r. v Cripto.
T ešte ďalšom aspekte predkladaný vynález zahŕňa protilátky, ktoré sa viažu špecificky na Cripto, sú schopné blokovať mteratciu medzi Cripto a ALK4 a sú schopné modulovať nádorový rast. Protilátka, ktoré sa špecificky viaže na Cripto, je schopná blokovať interakciu medzi Cripto a ALK4 a je schopná modulovať nádorový rast je, avšak bez obmedzenia, napr. A8G3.5 'ATCC prístupové č. PTA-3317).
V ďalšom uskutočnení predkladaný vynález poskytuje protilátku produkovanú hybridómom, ktorá je vybraná zo skupiny obsanujúcej A6F8.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318), A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), A3H3.1 (ATCC prístupové č. PTA-3315), A1032.33 (ATCC prístupové č. PTA-3311), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-331C), A43G12.8 (ATCC prístupové č. PTA-3316), A17G12.1 (ATCC prístupové č. PTA-3314), A18B3.il (ATCC prístupové č. PTA3312), 33F6.17 (ATCC prístupové č. PTA-3319) a B6G7.10 (ATCC prístupové č. PTA-3313).
Protilátky podlá predkladaného vynálezu zahŕňajú, ale bez obmedzenia, mor.oklonálne, polyklonálne, humaní zované, chinérické a ľudské protilátky.
Predkladaný vynález tiež poskytuje farmaceutickú kompozíciu na podávanie pacientovi, ktorý má nádor exprimujúci Cripto, ktorá obsahuje aspoň jednu z protilátok opísaných skôr.
V konkrétnom uskutočnení je pacient človek. Kompozícia môže oosahovať tiež farmaceutický prijatelné vehikulum. Skôr opísané protilátky môžu byť konjugované (kondenzované) s chemoterapeutrokým agensom alebo sa môžu podávať v kombinácii s nekonjugova7 ným chemoterapeutickom.
V inom aspekte vynálezu sú zahrnuté spôsoby modulácie rastu nádorových buniek in vitro vo vzorke zahrnujúce krok pridania skôr opísaných kompozícií k vzorke.
Vynález sa tiež týka spôsobov modulácie rastu nádorových buniek in vivo u pacienta, ktoré zahrnujú krok podávania účinného množstva skôr opísaných kompozícií pacientovi. V konkrétnom uskutočnení je pacientom človek.
Ďalší aspekt vynálezu sa týka spôsobov liečenia pacientov, ktorí majú nádor nadmerne exprimujúci Cripto, ktoré zahrnujú podávanie kompozícii opísaných skôr v účinnom množstve pacientovi. Kompozície na podávanie môžu ďalej obsahovať farmaceutický prijateľné vehikulá, protilátky konjugované s chemoterapeutickými agensmi a protilátky podávané v kombinácii s nekonjugovanými chemoterapeutickými agensmi.
Spôsoby podľa predkladaného vynálezu sú obzvlášť užitočné pri modulácii rastu nádorovej bunky a/alebo pri liečení pacienta (t.j. človeka), ktorý má nádor, kde nádorová bunka je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria nádorové bunky prsníka, semenníkov, kólor.u, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.
V ešte ďalšom uskutočnení predkladaný vynález zahŕňa spôsoby na určenie, či tkanivo exprimuje Cripto, pričom tieto spôsoby zahŕňajú krok, kedy sa pacientovo tkanivo analyzuje imunotestom s použitím ktorýchkolvek protilátok opísaných skôr. Vynález tiež zahŕňa spôsoby na určenie toho, čí bunková línia exprimuje (nadmerne exprimuje) Cripto, kde uvedené spôsoby zahŕňajú krok, kedy sa bunková línia analyzuje imunotestom s použitím ktorýchkolvek protilátok opísaných skôr.
Tieto a ďalšie aspekty vynálezu sú uvedené ešte detailnejšie v nasledujúcom podrobnom opise vynálezu.
Podrobný opis vynálezu
Boli objavené protilátky, ktoré sa špecificay viažu na Cripto, ich použitie na moduláciu signalizácie Cripto ajebc proteínovej interakcie a/alebo blokovanie interakcie medzi Cripto a ALK4, a/alebc moduláciu rastu nádorovej bunky. Boli objavené rôzne triedy protilátok, ktoré sa špecificky viažu na Cripco, vrátane napríklad protilátok, ktoré sa špecificky viažu na epitop vo väzbovej doméne ligand/receptor buď natívneho proteínu Cripto a/alebo denaturovanej formy Cripto, protilátok, ktoré sa viažu na doménu podobnú EGF, doménu bohatú na cysteír. alebo peptid (zložený napr. z približne 3 až približne 20 aminokyselín) z úseku oosahujúceho aminokyselinové zvyšky 46 až 150, protilátok, ktoré sa viažu na Cripto a modulujú signalizáciu Cripto, protilátok, ktoré sa viažu na Cripto a modelujú rast nádorových buniek a protilátok, ktoré sa viažu na Cripto modulujú signalizáciu Cripto a modulujú rast nádorových buniek. Tieto protilátky sa selektujú s použitím obvyklých in vitro testov na selekciu protilátok, ktoré sa viažu r.a väzbovú doménu ligand/receptcr, modulujú signalizáciu Cripto alebo modulujú rast nádorovýcn buniek.
Spôsoby podlá predkladaného vynálezu sú použiteľné pri liečení malígnych alebo benígnych nádorov cicavcov, kde rýchlosť rastu nádoru (ktorá je pre normálne taanivo abnormálnou rýchlosťou) je aspoň čiastočne závislá od Cripto. Abnormálna rýchlosť rastu je taká rýchlosť rastu, ktorá prevyšuje rýchlosť potrebnú pre normálnu homeostázu a prevyšuje rýchlosť, xtorá ;e normálna pre tkanivá rovnakého pôvodu.
Definície
V tomto opise vynálezu sú vytvorené rôzne definície. Väčšina termínov má význam, ktorý im odborníci bežne priraďujú. Termíny špecificky definované v predchádzajúcom alebo nasledujúcom texte majú význam zodpovedajúci kontextu predklaoaného vynálezu ako celku, a ich význam je odborníkom v odbore bežne zrozumiteľný.
.ermin „úsek”, ako sa v tomto texte používa, znamená fyzicky susediacu časť primárnej štruktúry biomolekuly. V prípade proteínov je úsek definovaný ako súvislá neprerušená časť aminokyselinovej sekvencie proteínu.
Termín „doména”, ako sa v tomto texte používa, sa týka štruktúrnej časti biomolekuly, ktorá prispieva k známej alebo domnelej funkcii biomolekuly. Domény môžu byť tzv. ko-extenzívne s icn úsekmi alebo časťami; domény môžu tiež obsahovať časť biomolekuly, ktorá je odlišná od konkrétneho úseku, naviac k celému alebo časti tohto úseku. Príklady proteínových domén zahrnujú, ale bez obmedzenia, extracelulárnu doménu (zahrnuje približne zvyšok 31 až približne zvyšok 188 Criptc, pre Cripto CR-1 (sekvencia SEQ ID NO: 1) a CR-3 (sekvencia SEQ ID NO: 2)), a transmembránovú doménu (zahrnuje približne zvyšok 169 až približne zvyšok 188 Cripto, a to pre Cripto CR-1 (sekvencia SEQ ID NO: 1) a CR-3 (sekvencia SEQ ID NO: 2)). Väzbová doména ligand/receptor Cripto proteínu zahrnuje približne zvyšok 75 až približne zvyšok 150 Cripto, a to pre Cripto CR-1 (sekvencia SEQ ID NO: 1) a CR-3 (sekvencia SEQ ID NO: 2), a zahrnuje EGF podobnú doménu Cripto, ktorá zahrnuje približne zvyšok 75 až približne zvyšok 112 Cripto, a to pre Cripto, CR-1 (sekvencia SEQ ID NO: 1) a CR-3 (sekvencia SEQ ID NO: 2) a doménu bohatú na cysteín Cripto, ktorá zahrnuje približne zvyšok 114 až približne zvyšok 150 Cripto, a to pre Cripto, CR-1 (sekvencia SEQ ID NO: 1) a CR-3 (sekvencia SEQ ID NO: 2). Napríklad mnohé monoklonálne protilátky podľa predkladaného vynálezu boli identifikované ako protilátky, ktoré sa viažu k EGF podobnej doméne alebo doméne bohatej na cysteín. Ďalej monoklonálne protilátky A10B2.18 (ATCC prístupové č. PTA-3311), B3F6.17 (ATCC prístupové č. PTA-3319) a A17A2.16 boli identifikované ako protilátky, ktoré sa viažu na epitop vytvorený v doméne v úseku zahrnujúcom: amincryselinové zvyškv46 až 62, v protismere („upstream) od EGF podobnej domény (pozri príklad 3 ďalej). Epitop vo väzbovej doméne ligand/receptor je epitop buď vytvorený v konformačne natívnom Cripto
K proteíne alebo denaturovanom Cripto proteíne, na ktorý sa môžu viazať protilátky.
Termín „protilátka, ako sa v tomto texte používa, sa týka kompletnej, neporušenej protilátky, fragmentov Fao, Fab', F(ab)2 a dalších fragmentov protilátky. Kompletné, neporušené protilátky zahrnujú, ale bez obmedzenia, monoalonálne protilátky ako napríklad myšie monoklonálne protilátky, polyklonálne protilátky, chimérické protilátky, ľudské protilátky a humanizované protilátky. Rôzne formy protilátok sa môžu pripraviť s použitím štandardných techník rekombinantnej DNA (Winter a Milstein, Náture 349: 293-99, 1991). Tak napríklad môžu sa skonštruovať „chimérické protilátky, v ktorých je väzbová doména pre antigén zo zvieracej protilátky spojená s lucskcu konštantnou doménou (protilátka pochádzajúca pôvodne z cicavca s výnimkou človeka, v ktorej sa tecn.nikami rekombinantne j DNA nahradila časť alebo celá kĺbová časť a konštantné úseky ťažkého reťazca a/alebo konštantný úsek .ľahkého reťazca zodpovedajúcimi úsekmi ľahkého reťazca nebo ťažkého reťazca ľudského imunoglobulínn) (pozri napr., Cabilly et al., United States patent 4 316 567, Morriscn et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 8i: 6851-55, 1984). Chimérické protilátky redukujú imunogér.ne reakcie vyvolané zvieracími protilátkami pri použití u človeka pri klinickom liečení.
Okrem toho sa môžu syntetizovať rekombinantné „humanizované protilátky. Humanizované protilátky sú protilátky spočiatku pochádzajúce z cicavca s výnimkou človeka, v ktorých sa technológia rekombinantných DNA použila na náhradu niektorých alebo všetkých aminokyselín nepotrebných pre väzbu antigénu aminokyselinami zo zodpovedajúcich úsekov ľahkého alebo ťažkého reťazca ludského imunoglobulínu. To znamená, že sú to chiméry obsahujúce väčšinu sekvencie ludského imunoglobul ínu, do ktorého boli vložené úseky zodpovedné za špecifickú väzbu antigénu (pozri napr. PCT prihláška publikovaná ako WO 94/04679). Zvieratá sa imnnizujú požadovaným, antigénom, zocpcvedajúce protilátky sa i z o 1 u : u a o a s t sekvencie v a r i a o 11 n e r: o ú s e .< u z o oc o· u e oná i a š o e c i — fickú väzbu antigénu sa odstráni. Väzbové úseky pre antigén pocnádzajúce zo zvierat sa potom klonujú do vhoonej polohy génu ľudskej protilátky, z ktorého boli väzbové úseky pre antigén odstránené. Kumanizované protilátky minimalizujú použitie heterológnych (mezidruhových) sekvencii v protilátkach na použitie v ľudskej terapii, a teda menej pravdepodobne vyvolávajú nežiaduce imunitné reakcie. Podobne sa môžu vytvoriť aj primárizované (primatized) protilátky.
Ďalšie uskutočnenie vynálezu zahrnuje použitie ľudských protilátok, ktoré môžu byť produkované v zvieratách s výnimkou človeka, ako sú napríklad transgénne zvieratá nesúce jeden alebo viac transgénov pre ľudský imunoglobulín. Takéto zvieratá sa môžu použiť ako zdroj splenocytov na prípravu hybridónov, ako je opísané v patente U.S. č. 5 569 825.
Protilátkové fragmenty a univalentné protilátky sa môžu tiež použiť v spôsoboch a kompozíciách podľa predkladaného vynálezu. Univalentné protilátky zahrnujú dimér ťažký reťazec/ľahký reťazec naviazaný k Fc (alebo stonkovému) úseku druhého ťažkého reťazca. „Fab úsek sa týka tých častí reťazcov, ktoré sú zhruba ekvivalentné alebo analogické k sekvenciám, ktoré zahrnujú časti ťažkého reťazca a ľahkého reťazca v tvare Y ako ceľok, a ktoré kolektívne (v agregátoch) prejavujú protilátkovú akcivitu. Fab proteín zahrnuje agregáty jedného ťažkého a jedného ľahkého reťazca (všeobecne známe ako Fab'), a tiež tetraméry, ktoré zodpovedajú dvom rozvetveným segmentom protilátky v tvare Y (všeobecne známe ako F(ab)2), či už sú agregované kovalentne alebo nekovalentne, pokiaľ je agregát schopný špecificky reagovať s určitým antigénom alebo rodinou antigénov.
Ktorákoľvek z protilátok podľa predkladaného vynálezu môže byť voliteľne konjugovaná s chemoterapeutickým agenscm, ako bude definované ďalej.
Termín „väzba, ako sa v tomto texte používa, znamená fyzikálnu nebo chemickú interakciu medzi dvomi proteínmi alebo zlúčeninami alebo asociovanými prcteínmi alebo zlúčeninami alebo ich kombináciami, zahrnujúcu interaxcie medzi protilátkou a proteínom. Väzba zahrnuje iónovú, necenovú a vodíkovú väzbu, van der Waalsove väzby, hyorofóbne inoerakoie a pod. Fyzixálna interakcia, väzba, môže byť buď priama alebo nepriama, kce nepriama je sprostredkovaná účinkami ďalšieho proteínu alebo zlúčeniny. Priama väzba sa týka interakcie, ktorá nie je sprostredkovaná účinkami ďalšieho proteínu alebo zlúčeniny, ale je naproti tomu bez ďalších podstatných chemických medziproduktov. Väzba sa môže detegovať mnohými rôznymi spôsobmi. Metódy detekcie väzby sú odborníkom dobre známe.2
Termín „protiláoka schopná internalizovať (mternaiizing) Cripto, ako sa v tomto texte používa, označuje protilátku, ktorá vstupuje do bunoy, zatiai čo odstraňuje Cripto z bunkovéno povrchu. Je možné uskutočňovať s krír.ing na Cripto protilátky, ktoré sú schopné internalizovať Cripto, s použitím fluorescenčné značených Cripto monoklonálnych protilátok. Aby bolo možné určiť, ktoré protilátky internalízujú dc Cripto pozitívnych buniek, dá sa uskutočniť test na príjem fluorescenčného signálu protilátok do buniek tak, že sa bunky prehliadajú pod fluorescenčným a/alebo konfokálnym mikroskopom. Tne protilátky, ktoré sú internalizované, sú viditeľné ako fluorescenčné signály v cytoplazme a/alebo bunkových vezikulcon. Príklady, avšak neobmedzujúce rozsah vynálezu, Cripto protilátok schopných internalizovať Cripto sú A27F6.1 a B3F6.17.
Termín „zlúčenina, ako sa v torte texte používa, znamená akúkoľvek identifikovateľnú chemickú entitu alebo molekulu, vrátane iónu, atómu, malej molekuly, peptidu, proteínu, sacharidu, nukieotidu alebo nukleovej kyseliny, bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci, pričom zlúčenina môže byť buď prírodná alebo syntetická.
Termíny „modeluje alebo „moci fí kuj e, ako sa v tomto texte používajú, znamenajú zvýšenie alebo pokles množstva, kvality alebo účinku konkrétnej aktivity alebo proteínu.
Termín „moduluje signalizáciu Cripto, ako sa v tomto texte používa, znamená zvýšenie alebo pokles v množstve, kvalite alebo účinku aktivity Cripto, približne o 5%, výhodne 10%, výhodnejšie 20%, výhodnejšie 39%, výhodnejšie 40%, výhodnejšie 50%, výhodnejšie 60%, výhodnejšie 70%, výhodnejšie 80%, výhodnejšie 90% a najvýhodnejšie 100%. Aktivita sa môže merať testmi známymi v odbore, ako je napríklad nulový bunkový test opísaný v príklade 3. V ďalšom uskutočnení proteínová interakcia medzi Cripto a ďalším proteínom je podobne modulovaná smerom dole (downward) prostredníctvom väzby protilátky podlá vynálezu.
Termín „blokovanie interakcie medzi Cripto a ALK 4, ako sa v tomto texte používa, znamená zvýšenie alebo pokles interakcie, t.j. väzby, medzi Cripto a ALK4, približne o 5%, výhodne 10%, výhodnejšie 20%, výhodnejšie 30%, výhodnejšie 40%, výhodnejšie 50%, výhodnejšie 60%, výhodnejšie 70%, výhodnejšie 80%, výhodnejšie 90% a najvýhodnejšie o 10C%. Akcivita sa môže merať testmi známymi v odbore, ako je napríklad väzbový test opísaný v príklade 8.
Termín „modulácia rastu nádorovej bunky in vitro, ako sa v tomto texte používa, znamená zvýšenie alebo pokles počtu nádorových buniek in vitro, približne o 5%, výhodne 10%, výhodnejšie 20%, výhodnejšie 30%, výhodnejšie 40%, výhodnejšie 50%, výhodnejšie 60%, výhodnejšie 70%, výhodnejšie 80%, výhodnejšie 90% a najvýhodnejšie o 100%. In vitro modulácia rastu nádorových buniek sa môže merať testmi známymi v odbore, ako je napríklad test s GEO bunkami v mäkkom agare opísaný v príklade 4.
Termín „modulácia rastu nádorovej bunky in vivo, ako sa v tomto texte používa, znamená zvýšenie alebo pokles počtu nádorových buniek in vivo, približne o 5%, výhodne 10%, výhodnejšie 20%, výhodnejšie 30%, výhodnejšie 40%, výhodnejšie 50%, výhodnejšie 60%, výhodnejšie 70%, výhodnejšie 80%, výhodnejšie 90% a najvýhodnejšie 100%. In vivo modulácia rastu nádorových buniek sa môže merať testmi známymi v odbore, ako je napríklad test opísaný v príklade 5.
termín „prevencia sa týka zníženia pravdepodobnosti, že organizmus získa alebo sa u neho vyvinie abnormálny stav (ochorenie; .
Termín „liečenie” sa týka terapeutického účinku a aspoň čiastcčnéno zmiernenia alebo úplného potlačenia abnormálneho stavu (ochorenia; v organizme. Liečenie zahrnuje tiež udržovanie inhibície nádorového rastu a indukciu remisie.
Termín „terapeutický účinok” sa týra inhibície abnormálneho stavu. Terapeutický účinok vedie v určitom rozsahu k ústupu jedného nebo viac symptómov abnormálneho stavu. Vo vzťahu k liečeniu abnormálnych stavov, terapeutický účinok sa týka jedného nebo viacerých z nasledujúcich: (a) zvýšenie alebo pokles proliferácre, rastu a/alebo diferenciácie buniek; í b) inhibícia (t. p. spomalenie alebo zastavenie) alebo indukcia (podpora) bunkovej smrti; (c) inhibícia degenerácie; (d) úlava v určitom rozsahu cd jedného alebo viacerých symptómov asociovaných s abncrmálním stavom; a (e) zosilnenie funkcie populácie buniek. Zlúčeniny vykazujúce účinnosť proti abnormálnym stavom sa môžu identifikovať postupmi, ako sú opísané v tomto texte.
Termín „podávanie sa týka spôsobu začlenenia zlúčenín do buniek alebo tkanív organizmu. Abnormálnemu stavu sa môže predchádzať alebo sa abnormálny stav môže liečiť, keď sú bunky alebo tkanivá organizmu prítomné v organizme, alebo keď sú mimo organizmus. Bunky existujúce mimo organizmus sa môžu udržovať alebo ďalej kultivovať v miskách Tkanivových kultúr alebo v mom organizme. Pre bunky vc vnútri organizmu existuje v odbore mnoho známych spôsobov, ako podávať zlúčeniny, ktoré zahrnujú (bez obmedzenia; perorálne, parenterálne, dermálne, injekčné a aerosólové aplikácie. Pre bunky mimo organizmu existuje v odbore mnoho známych oechník ua podávanie zlúčenín, ktoré zahrnujú (ale bez obmedzenia; techniky bunkovej mikroinjekcie, transformácie a techniky s nosičom. Podávanie sa môže uskutočniť jedným z mnohých spôsobov známych v odbore, ako je napr. spôsob peroráiny, intravenózny, intraperitoneálny, intramuskulárny a pod. Keď sa použije in vivo terapia, protilátky podía vynálezu sa podávajú pacientovi v účinnom množstve. Termín „účinné množstvo, ako sa v tomto texte používa, označuje množstvo dostatočné na to, aby spôsobilo prospešný alebo požadovaný klinický výsledok (t.j. množstvo, ktoré eliminuje alebo redukuje pacientovu nádorovú záťaž) . Účinné množstvo sa môže podať v jednom alebo viacerých podaniach. Na účely tohoto vynálezu, účinné množstvo protilátok podlá predkladaného vynálezu je také množstvo protilátok, ktoré je dostatočné na zlepšenie, stabilizáciu alebo zastavenie rozvoja ochorenia asociovaného s Cripto, konkrétne nádorov asociovaných s Cripto. Detekcia a meranie týchto indikátorov účinnosti sa diskutujú ešte ďalej. Príklad typickej liečebnej schémy zahrnuje podávanie intravenóznej infúzie protilátky podľa vynálezu pacientovi v týždennom režime, v dávke približne 2 až 5 mg/kg. Protilátky sa podávajú pacientovi ambulantne na chemoinfúznej jednotke, pokial pacient nevyžaduje hospitalizáciu. Pripadajú do úvahy aj iné dávkovacie režimy, ktoré sú odborníkom známe.
Abnormálnym stavom (ochoreniam) sa dá predchádzať alebo sa tieto môžu liečiť podávaním protilátky podľa vynálezu skupine buniek, ktoré majú aberáciu v dráhe signálnej transdukcie do organizmu. Účinok podávania zlúčeniny na funkcie organizmu sa potom môže monitorovať. Organizmus je výhodne organizmus človeka.
Termín „nadmerná expresia Cripto znamená expresiu Cripto v tkanive, kde expresia je väčšia ako expresia Cripto v priľahlom normálnom tkanive v štatisticky významnej výške.
Termín „chemoterapeutikum. sa týka akéhokoľvek agensu známeho v odbore aso agens, ktorý má terapeutický účinok na inhibíciu nádorového rastu, udržanie inhibície rastu nádoru a/alebc indukcie remisie, ako sú napr. prírodné zlúčeniny, syntetické zlúčeniny, proteíny, modifikované proteíny a rádioaktívne zlúčeniny. Chemoterapeutické agensy zahrnujú agensy, ktoré môžu byť konjugované s protilátkami podľa predkladaného vynálezu alebo alternatívne agensy, ktoré sa môžu použiť v kombinácii s protilátkami podľa predkladaného vynálezu bez toho, aby boli konjugované s protilátkou. Príklady chemoterapeutík, ktoré môžu byť konjugované s protilátkami podlá predkladaného vynálezu, zanrnujú rádiokonjugáty (90Y, 1311, 99mTc, Hlín, lS6Rh a ďalšie), nádorom aktivované proliečivá (maytansmcidy, analógy CC1065, deriváty ciicheamicinu, antracyklíny, alkaloidy z Vinea sp. a ďalšie), ricín, difterický toxín, exotoxín z Pseudcmonas, pričom tento zoznam nie je obmedzujúci.
Chemoterapeutické agensy, kzoré sa môžu použiť v kombinácii s protilátkami podľa vynálezu, skôr ako byť s nimi konjugované ft.j. nekonjugované chemcterapeutiká), zahrnujú, ale bez obmedzenia, nasledujúce agensy: platinu (napr. cisplatinu), antracykiíny, analógy nukleozidov ípurínu a pyrimidínu), taxány, camptotheciny, epipodophyllotoxíny, činidlá alkyiujúce DNA, antagonisty folátu, alkaloidy z Vinea sp., inhibítory ribonukieoridreduktázy, inhibítory estrogénu, inhibítory progesterónu, inhioítory androgénu, inhibítory aromatázy, interferóny, interleukíny, monoklonálne protilátky, taxol, camptosar, adriamyom (aox), 5-FU a gemcitabm. Takéto chemoterapeutiká sa môžu použiť pri realizácii vynálezu v kombinácii s protilátkami podlá vynálezu tak, že sa spoločne podáva (ko-administrácia) protilátka a nekonjugované chemoterapeutikum.
Termín „farmaceutický prijatelný nosič alebo vehikulum sa týka biologicky inertnej zlúčeniny známej v odbore a používanej pri podávaní protilátky podľa vynálezu. Prijateľné nosiče sú v odbere dobre známe a sú opísané napríklad v publikácii: Remingccn's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, ed., Mack Publishing Co., 1990. Prijateľné nosiče zahrnujú oiologicky kompatibilné, inertné alebo bioabsorbovateiné soli, pufrovacie činidlá, cligo- alebo polysacharidy, polyméry, viskoelastické zlúčeniny, ako je napríklad kyselina hyalurónová, viskozitu upravujúce činidlá, konzervačné činidlá a pod.
Termín „pacient sa týka stavovcov obzvlášť konkrétne druhov cicavcov a zahrnuje domáce zvieratá, športové zvieratá a primáty, vrátane ludí, bez toho aby bol tento zoznam obmedzujúci.
Protilátky podľa vynálezu
Protilátky podlá vynálezu sa špecificky viažu na Cripto. Ako sa v tomto texre používa, termín Cripto zahrnuje proteín CR-1 Cripto, proteín CR-3 Cripto a ich fragmenty. Takéto fragmenty môžu byť domény, ako napríklad extracelulárne alebo intracelulárne domény, EGF-podobná doména, cys-bohatá doména, väzbová doména na receptor a pod. Tieto fragmenty môžu tiež obsahovať súvislé i nesúvislé epitopy ktorejkoľvek domény Cripto proteínu.
Sekvencia CR-1 obsahujúca 188 aminokyselín je nasledujúca [sekvencia SEQ ID NO: 1]:
MDCRKMARFSYSVIWIMAISKVFELGLVAGLGHQEFARPSRGYLAFRDDS
IWPQEEPAIRPRSSQRVPPMGIQHSKELNRTCCLNGGTCMLGSFCACPPS
FYGRNCEHDVRKENCGSVPHDTWLPKKCSLCKCWHGQLRCFPQAFLPGCD
GLVMDEHLVASRTPELPPSARTTTFMLVGICLSIQSYY
Sekvencia CR-3 obsahujúca 188 aminokyselín je nasledujúca [sekvencia SEQ ID NO: 2]:
MDCRKMVRFSYSVIWIMAISKAFELGLVAGLGHQEFARPSRGDLAFRDDS
IWPQEEPAIRPRSSQRVLPMGIQHSKELNRTCCLNGGTCMLESFCACPPSF
YGRNCEHDVRKENCGSVPHDTWLPKKCSLCKCWHGQLRCFPQAFLPGCDGL
VMDEHLVASRTPELPPSARTTTFMLAGICLSIQSYY
V jednom uskutočnení sa protilátky podľa vynálezu viažu na epitop v EGF-podobnej doméne Cripto. EGF-podobná doména zahrnuje približne aminokyselinový zvyšok 75 až približne ammokyselinový zvyšok 112 zrelého proteínu Cripto. Epitopy v EGF-podobnej doméne môžu zahŕňať lineárny alebo nelineárny úsek aminokyselinových zvyškov. Príkladom uvažovaného lineárneho epitopu je epitop zahrnujúci približne amínokyselmové zvyšky 75-85, 80-80, 85-95, 90-100, 95-1C 5, 100-110 nebo 105-112, bez noho aby ool tento zoznart obmedzujúci. V jednôt: uskutočnení epitop v EGF doméne je epitop vytvorený v konformačne natívnom Cripto proteíne proti denaturovanému Cripto proteínu.
V ďalšom uskutočnení sa protilátky pódia vynálezu viažu na epitop v cys-bohatej doméne Cripto. Cys bohatá doména zahrnuje približne amrnokyselinový zvyšok 111 až približne aminctyseiinový zvyšok 150 zrelého Cripto proteínu. Epitopy v cys-bohatej ooméne môžu zahrnovať lineárny nebo nelineárny úsek ammokyselincvýcn zvyškov. Príkladom uvažovaného lineárneho epitopu je epitop zahrnujúci približne aminokysei inové zvyšky 1 i á -12 5, 12 9130, 125-135, 130-140, 135-145 nebo 140-150, bez toho by ool tento zoznam obmedzujúci. V jednom uskutočnení epitop v cysbohatej doméne je epitop vytvorený v konformačne natívnom Cripto proteíne proti denaturovanému Cripto proteínu.
Akonáhle sú raz protilátky vytvorené, väzba prctilátok na Criptc sa môže testovať s použitím štandardných techník známych v odoore, ako je napr. ELISA, a prítomnosť Cripto na bunkovom povrchu sa môže testovať s použitím prietokovej cytometne (FACS), ako je ukázané v príklade 2. Alternatívne sa môžu použiť ktorékoľvek ďalšie spôsoby merania takejto väzby.
Predkladaný vynález poskytuje protilátky (napr. monoklonálne a polyklonálne protilátky, jednoreťazcové protilátky, chimérícké protilátky, bifunkčné/bišpecifické protilátky, humanizované protilátky, ludské protilátky a protilátky so štepeným úsekom určujúcim komplementaritu (CDR), vrátane zlúčenín, ktoré obsahujú CDR sekvencie, ktoré špecificky rozpoznávajú polypeptid pocia vynálezu) špecifické pre Cripto alebo ich fragmenty. Protilátkevé fragmenty, vrátane Fab, Fab', FJab'jj a Fv sú tiež poskytnuté vo vynáleze. Termíny špecifický a selektívny, keď sú použité na opis väzby protilátky podľa vynálezu, ukazujú, že variabilné úseky protilátky podľa vynálezu rozpoznávajú Cripto polypepticy a tiež sa na ne viažu. Je potrebné rozumieť, že špecifické protilátky podľa vynálezu môžu tiež interagovať s ďalšími proteínmi (napr. proteín S. aureus alebo ďalšie protilátky v teste ELISA) prostredníctvom interakcií so sekvenciami mimo variabilného úseku protilátok, a najmä v konštantnom úseku molekuly. Skrír.íngové testy na určenie väzbovej špecifity protilátky podlá vynálezu (t.j. protilátky, ktorá sa špecificky viaže na epitop väzbovej domény ligand/receptor a domény zahrnujúcej aminokyselinové zvyšky 46-62) sú známe a rutinne uskutočňované. Pre obsažnú diskusiu o takýchto testoch pozri Harlow et al. (Eds.), Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1988), Kapitola 6. Protilátky, ktoré rozpoznávajú a viažu fragmenty Cripto proteínu sú tiež zahrnuté, s podmienkou, že protilátky sú špecifické pre Cripto polypeptidy. Protilátky podlá vynálezu sa môžu vytvoriť s použitím akéhokoľvek spôsobu známeho a rutinne praktizovaného v odbore.
V jednom uskutočnení vynález poskytuje protilátku, ktorá sa špecificky viaže na epitop väzbovej domény ligand/receptor Cripto. Protilátková špecifita je opísaná ešte detailnejšie ďalej. Avšak treba zdôrazniť, že protilátky, ktoré sa môžu pripraviť z iných polypeptidov, ktoré sú opísané v literatúre už skôr, a ktoré sú schopné náhodne skrížené reagovať s Cripto (napr. v dôsledku náhodnej existencie podobného epitopu v oboch polypeptidoch) sa považujú za skrížené reaktívne protilátky. Takéto skrížené reaktívne protilátky nie sú protilátky, ktoré sú špecifické pre Cripto. Stanovenie toho, či sa protilátka špecificky viaže na epitop Cripto, sa uskutočňuje s použitím akéhokoľvek zo známych testov, ako je napr. Western blot, ktoré sú dobre známe v odbore. Na identifikáciu buniek exprimujúcich Cripto a tiež na moduláciu väzbovej aktivity Cripto ligand/receptor, sú obzvlášť použiteľné protilátky, ktoré sa špecificky viažu na extracelulárny epitop Cripco proteínu (t.j. časť Cripto proteínu nachádzajúcu sa mimo bunky).
V jednom uskutočnení vynález poskytuje bezbunkovú kompozíciu obsahujúcu polyklonálne protilátky, kde aspoň jedna z protilátok je protilárka podlá vynálezu špecifická pre Cripto. Anoiséra izolované zo zvierat sú príkladom takejto kompozície, rovnako ako kompozície obsahujúce protilétkcvú frakciu z ani:sér, ktoré boli resuspendcvané vo vode alebo v inom riedidle, vehikude alebo nosiči.
V ďalšom uskutočnení vynález poskytuje monoklonálne protilátky. Monoklonálne protilátky sú vysoko špecifické, pretože sú namierené proti jedinému antigénnemu miestu. A ďalej, na rozdiel od polyklonálnych preparátov, ktoré typicky zahrnujú rôzne protilátky namierené proti rôznym epitopom, každá monoklonálna protilátka je namierená proti jedinému determinantu na anrigén. Monoklonálne prcoiláoky sú užitočné na zlepšenie selektivity a špecifity postupov pri diagnostických a analytických restoch využívajúcich väzbu antigen-protiiátka. Calšcu výhodou mcnoklonálnych protilátok je to, že sa syntetizujú hybridómovou kultúrou, nekontaminovancc inými imunoglobulínmi. Hybriaómy, ktoré produkuj ú protilátky podľa vynálezu, sú tiež zahrnuté ako aspekty vynálezu.
V ešte ďalšom príbuznom uskutočnení vynález poskytuje antiidiotypové protilátky špecifické pre protilátku, krorá je špecifická pre Cripto. Na detailnejšiu diskusiu o antiidiotypových protilátkach pozri napr. patenty U.S. č. 6 063 379 a 5 780 029.
Je dobre známe, že prczilátky obsahujú relatívne malé antigén viažuce domény, ktoré sa môžu izolovať chemickými alebo rekombinantnými rechnikami. Takéto domény sú samotné užitočné ako molekuly viažuce Cripto a môžu sa spätne vniesť do ľudských protilátok alebo fúzovať s chemocerapeutickým agensom alebo polypeptidom. Takže v ešte ďalšom uskutočnení vynález poskytuje polypeptid obsahujúci fragment Cripto-špecifickej protilátky, kde fragment a asociovaná molekula, ak je nejaká Ľaká, sa viažu na Cripto. Ako neobmedzujúce príklady vynález poskytuje polypeptidy, ktoré sú jednoretazcové protilátky a CDR-štepené protilát21 ky. Na detailnejšiu diskusiu o CDR-štepených protilátkach pozri napr. patent U.S. č. 5 859 205.
V inom uskutočnení môžu byť protilátky iného ako ludského pôvodu humanizované ktoroukolvek z metód známych z odboru. Humanizcvané protilátky sú použitelné na in vivo terapeutické aplikácie. Okrem toho sa môžu syntetizovať rekombinantné humanizované protilátky. Humanizované protilátky sú protilátky pochádzajúce pôvodne z cicavca iného ako človek, u ktorých sa technika rekombinanonej DNA použila na náhradu niektorých alebo všetkých aminokyselín nepotrebných pre väzbu antigénu aminokyselinami zo zodpovedajúcich úsekov ľahkého alebo ťažkého reťazca ľudského imunoglobulínu. Teda chiméry obsahujú väčšinou ľudské imunoglobulínové sekvencie, do ktorých boli vložené úseky zodpovedné za špecifickú väzbu antigénu (pozri napr. PCT patentová prihláška WO 94/04679). Zvieratá sa imunizujú požadovaným antigénom, zodpovedajúce protilátky sa izolujú a časť sekvencie variabilného úseku zodpovedná za špecifickú väzbu antigénu sa odstráni. Väzbový úsek pre antigén pochádzajúci zo zvieraťa sa potom klonuje do vhodnej polohy v géne ľudskej protilátky, z ktorého sa odstránili úseky pre väzbu antigénu. Humanizované protilátky minimalizujú použitie heterológnych (mezídruhových) sekvencií v protilátkach pri použití na liečenie človeka a menej pravdepodobne vyvolajú nežiadúce imunitné reakcie. Podobne sa môžu vytvoriť primatizované protilátky s použitím protilátkových génov primátov (napr. makak „rhesus (Macaca mullata), pavián a šimpanz). Ďalšie zmeny sa potom môžu vniesť do rámcových úsekov protilátky, aby sa modulovala afinita alebo imunogenicita protilátky (pozri napr. patenty U.S. č. 5 585 089, 5 693 761, 5 693 762 a 6 180 370).
Ďalšie uskutočnenie vynálezu zahrnuje použitie ľudských protilátok, ktoré sa môžu pripraviť vo zvieratách odlišných od človeka, ako sú napríklad transgénne zvieratá nesúce jeden alebo viac transgénov pre ludský imunoglobulín. Takéto zvieratá sa môžu použiť ako zdroj splenocytov na prípravu hybridómov, ako je ooísané v patente P.S. č. 5 569 825, a PCT prihláškach
WO 00076310, XX 00058499 a WO 00037504, ktoré sú celé zahrnuté formou odkazu v tomto texte.
Modulácia signálu
V ďalšom uskutočnení vynálezu, sa protilátky podľa vynálezu viažu na Cripto a modulujú signalizáciu Cripto alebo interakcie Cripto-prcceín. Nadmerná expresia Cripto aktivity môže viesť k dediferencovanému stavu, ktorý podporuje mezenchýmové bunkové charakteristiky, zvýšenú proliferáciu a bunkovú migráciu (Salomon et al·., BioEssays 21:61-70, 1999, Ciardiello et al·., Oncogene 9:291-298, 1994, and Baldassarre et al., int. J. Cancer 66:538-543, 1996), fenotypy asociované s bunkovou transformáciou pozorované u neoplázií.
Jeden zo spôsobov testovania aktivity antí-Cripto protilátok a ich schopnosti modulovať Cripto signalizáciu je bunková línia E9-Cripto KO (knock-out) (Minchiotti et al., Mech. Dev. 90:133142, 2000). Cripto stimuluje fosforyláciu smad2 a transkripčný faktor FAST v embryách Xenopus, a aktivita transkripčného faktora FAST sa môže monitorovať meraním luciferázcvej aktivity konštruktu FAST regulačný element-luciferázový reportérový gén (Saijoh et al., Mol. Celí 5:35-47, 2000). F9-Cripto KO bunky majú odstránený Cripto gén a sú tak „nulitné pre Cripto ínuli for Cripto) a Cripto-závislú signalizáciu (Minchiotti et. al., Mech. Dev. 90: 133-142, 2000). Cripto signalizácia sa môže hodnotiť v F9 Cripto KO bunkách transfekovaných génovým konštruktom Cripto, FAST a FAST regulačný element-luciferáza. Žiadna Cripto-závislá FAST luciferázová aktivita sa nebude v tejto bunkovej línii pozorovať, pokiaľ sa do nich netransfekuj e Cripto cDNA a FAST cDNA. Protilátky schopné blokovať Cripto-závislú nodálnu signalizáciu sú protilátky, ktoré blokujú signalizačnú funkciu Cripto.
Odborníci môžu použiť aj ďalšie testy schopné merať aktivitu Cripto, ako napríklad test rastu v mäkkom agare (pozri príklad 4 ďalej). Schopnosť buniek rásť v mäkkom agare je asociovaná s bunkovou transformáciou a test je klasický in vitro test na meranie inhibície rastu nádorových buniek. Ďalšie testy použiteľné na určenie inhibície aktivity zahrnujú in vitro testy na plaste (on plastic) a pod.
Terapeutické použitie
Protilátky podlá vynálezu sú tiež použiteľné na terapeutické účely, ako napríklad na moduláciu rastu nádorových buniek, na diagnostické účely, na detekciu alebo kvantifikáciu Cripto a na purifikáciu Cripto.
V jednom uskutočnení vynálezu sú poskytnuté protilátky, ktoré sú schopné špecificky sa viazať na Cripto a ktoré modulujú rast nádorovej bunky u pacienta. V jednom uskutočnení nádorové bunky sú bunky semenníkov, prsníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.
V ďalšom uskutočnení sú poskytnuté protilátky, ktoré sú schopné sa špecificky viazať na Cripto a ktoré modulujú rast nádorových buniek, ktoré nadmerne exprimujú Cripto. V jednom uskutočnení nádorové bunky sú bunkové línie, ktoré nadmerne exprimujú Cripto, ako napríklad bunkové línie pochádzajúce z karcinómu prsníka, semenníkov, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.
Anti-Cripto protilátky sa môžu podrobiť skríningu na in vivo aktivitu ako potenciálne protinádorové agensy podľa štandardných protokolov používaných odborníkmi, ako je ukázané v príklade 4 ďalej. Príklad takých protokolov je zverejnený v National Cancer inštitúte (NCI) v protokoloch in vivo cancer models screening, NIH publikácia č. 84-2635 (február 1984).
V ďalšom uskutočnení vynálezu sú protilátky podía vynálezu použité na liečenie pacientov, ktorí majú rakovinový nádor.
Protilátky podlá predkladaného vynálezu sa môžu kombinovať
4 s farmaceutický prijateľným vehikulom a podávať v terapeuticky účinných dávkách pacientovi. Na diskusiu o metódach inhibície rastu nádorov pozri napr. patent U.3. č. 6 165 4 64.
Tiež sú zahrnuté spôsoby liečenia pacientov trpiacich chorobným. stavom asociovaným s abnormálnym.! i.Iacinami (t.-, zvýšenou alebo zníženou, Cripto, kde spôsob zahrnuje podávanie účinného množstva protilátky, ktorá sa špecificky viaže na epitop vo väzbovej doméne ligand/receptor Cripto, vrátane, ale bez obmedzenia, epitopu, ktorý je v EGF-podobnej doméne alebo cys-bohatej doméne Cripto, pacientovi.
Tiež sú zahrnuté spôsoby liečenia pacientov trpiacich chorobným stavom asociovaným s abnormálnymi hladinami (t.j. zvýšenou alebo zníženou) Cripto, kde spôsob zahrnuje podávanie účinného množstva protilátky, ktorá špecificky vytvára komplex s Crioto a je namierená proti epitopu, proti ktorému je namierená protilátka vybraná zo skupiny, ktorú tvoria A6C12.il, A6F6.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318), ACH1.19, A8F1.30, A8G3.5 (ATCC prístupové č. PTA-3317), A8H3.1 (ATCC prístupové č. PTA-3315), A8H3.2, A19A10.30, A10B2.18 (ATCC prístupové o. PTA-3312), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-331C), A4QG12.8 (ATCC prístupové č. PTA-3316), A2D3.23, A7A10.29, A9G9.9, A15C12.16, A15E4.14, A17A2.16, A17C12.28, A17G12.1 (ATCC prístupové č. PTA-3314), A17H6.2, A18B3.il (ATCC prístupové č. FTA-3312), A19E2.7, B3F6.17 (ATCC prístupové č. PTA-3319) a B6C7.10 (ATCC prístupové č. PTA-3313), pacientovo.
Diagnóza prostredníctvom detekcie Cripto je sa lahko uskutočňuje štandardnými väzbovými testmi s použitím novej protilátky poola vynálezu, čo dovoľuje odborníkom detegovať prítomnosť Cripto špecificky v širokej škále rôznych vzoriek, bunkových kultúr a pod.
Súpravy (kity) obsahujúce protilátku podľa vynálezu na ktorýkoľvek z účelov opísaných v tomto texte sú tiež zahrnuté vo vynáleze. Všeobecne, súprava podľa vynálezu tiež oosabuze kontrolný antigén, pre ktorý je protilátka irnunošpecif ická.
Uskutočnenia vynálezu sa týkajú súprav, ktoré obsahujú všetky potrebné činidlá a inštrukcie na ich použitie.
Ďalšie rysy vynálezu budú zrejmé z nasledovných názorných príkladov.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Expresia a purifikácia Cripto
Expresný plazmid nazvaný pSGS480 bol konštruovaný subklonovaním cDNA kódujúcej Cripto aminokyselinové zvyšky 1 až 169 [aminokyseliny 1-169 sekvencie SEQ ID NO: 1] ľudského Cripto, fúzovanej s ľudskou Fc doménou IgGi (t.j. CR(delC)-Fc) do vektora pEAGUOO. Na detailnejší opis tohoto vektora pozri spoločne prejednávanú patentovú prihlášku U.S. č. 60/233,148, podanú 18. septembra 2000. Vektor pEAGUOO je derivát plazmidu pCMV-Sport-betagal od firmy GIBCO-BRL Life Technologies, ktorého použitie na tranzientnu transfekciu CHO je opísané v publikácii Schifferli et al., 1999, Focus 21: 16. Bol vytvorený tak, že sa odstránil Nôti fragment reportérového génu β-galaktozidázy z plazmidu pCMV-Sport-betagal (katalógové č. 10586-014; nasledovným postupom: Plazmid sa štiepil Notl a EcoRV, hlavný A7otl fragment vektora s veľkosťou 4,38 kb sa purifikoval z gélu a ligoval. Ligovaná DNA bola transformovaná do kompetentných buniek E. coli DH5 a. pEAGUOO sa izoloval ako plazmid obsahujúci požadovaný rekombinant z jedinej izolovanej kolónie. Sekvencia pEAGUOO zahrnujúca promótor, polylinker a signál term.ináce transkripcie sa potvrdila.
Plazmid pSGS480 sa prechodne transfekoval do buniek CHO a bunky sa kultivovali pri 28°C počas 7 dní. Prítomnosť CR(delC)-Fc proteínu v týchto bunkách a v kondicionovanom médiu sa vyšetrila analýzou Western blot. Na Western blot analýzu sa konci26 zodrobili SDS-PAGE ienkach, potom sa celulózu cionované médium a brúsky transfekované Cripto na 4-20% gradientovom géli v redukčných pod: uskutočnil elektroforetický prenos na nitrc: proteín Cripto sa detegoval použitím, králičie antiséra pripraveného proti Cripco peptloovéz obsahoval aminokyselinové zvyšky 57-113 zo ser 1) konjugovanému s hemocyanínom prílipky (rec odstránení buniek centrifugáciou ukázala Wes tí že CR(delC)-Fc proteín bol účinne sekretovaný ného média (supernatantu) . Supernatant sa r.a a f ú z n y ho poly klor.ál neho ‘.u ľľ-méru (ktorý vencie SEQ ID NO: fncle 1impet ) . Po ;rn olot analýza, do kondicionovanie s o1 na kolónu r o t e _ n sa eiu ov s1
Ei uovaný proteín i ρ a 8,6 a analy— z r bane i e pri 2 4 0uovaný proteín sa te -70°C.
Protein A-Sepaharose (Pharmacia) a naviazaný p 25 mM fosforečnanom sodným pH 2,8, 100 mM NaCl.
sa neutralizoval 0,5 M fosforečnanom sodným pi zoval na celkový obsah proaeínu meraním absr 340 nm a potom na čistotu použitím SDS-PAGE. i filtroval cez 0,2 p filter a srladoval pri cep
Príklad 2
Vytvorenie a skríning protilátok
Eluovaný CR(delC)-Fc proteín sa injikoval myšiam a pomocou štandardnej hybrídómovej techniky, ktorá je odcorníkom známa, sa pripravili monoklonálne protilátky.
A. Vytvorenie protilátok
Konkrétne, samice myší kmeňa Robertson (Jackson Labs) sa imuni zovali intraperitoneálne 2 5 pg purifi kovanéno ľudského CrdelC-Fc emulgovaného v kompletnom Freundovom. adjuvans (GibcoBRL katalóg, č. 15721-012). Boli posilnené („bocst) dvakrát intraperitoneálne 25 pg CrdelC-Fc emulgovaného v nekompletnom Freundovom adjuvans (GibcoBRL katalóg, č. 15720-014) a raz na Protein-A perličkách. Séra sa podrobili skríningu a 3 týždne po poslednej posilňovacej dávke sa myši s najlepšími ritrem ďalej posilnili intraperitoneálne 50 pg rozpustného CR del C-Fc tri dni tretí plánovanou fúziou. A ďalej sa myší posilnili intrave27 nózne dávkou 50 pg CrdelC-Fc deň pred fúziou. Bunky myšej sleziny sa potom fúzovali s myelómovými bunkami FL653 v pomere 1:6 (slezina:myelóm) a naniesli sa na 96 jamkové tkanivové kultivačné doštičky so selekčným médiom v množstve 100 000, 33 000 a 11 020 buniek na jamku. Jamky, kde sa pozitívne zaznamenal rast, sa o týždeň neskôr podrobili skríningu použitím FACS a ELISA. Uskutočnili sa dve fúzie.
B. Skríning protilátok
Supernatanty získané z prvej alebo druhej fúzie sa podrobili skríningu najprv na doštičkách ELISA na rozpoznanie proteínov Criptc del C a/alebo Crípto EGF-podobná doména. ELISA doštičky sa potiahli kontrolným fúznym proteínom (LT-beta receptor-Fc), aby sa odstránili monoklonálne protilátky, ktoré rozpoznávajú ľudský Fc epitop. ELISA sa inak uskutočnila postupom, ktorý je opísaný ďalej v časti C. V prvej fúzii, primárne supernatanty sa tiež podrobili skríningu na schopnosť rozpoznávať Cripto proteín bunkového povrchu na línii buniek z nádoru semenníka NCCIT, a síce použitím FACS. v prípade druhej fúzie sa schopnosť supernatantu rozpoznávať Cripto analyzovala použitím FACS na dvoch nádorových bunkových líniách, NCCIT a línii buniek karcinómu prsníka DU4475. Sekundárny skríning zahrnoval testovanie schopnosti supernatantu monoklonálnej protilátky rozpoznávať Cripto bunkového povrchu použitím panelu nádorových bunkových línií (pozri výsledky uvedené v tabuľkách 1 a 2), schopnosti monoklonáinycn protilátok rozpoznávať ľudský Cripto imunohistochemicky na tkanivových rezoch ľudského nádoru prsníka a kólonu, test schopnosti monoklonálnych protilátok blokovať Cripto-nodálnu signalizáciu, schopnosti blokovať rast nádorovej bunkovej línie na plaste alebo v mäkkom agare a schopnosti internalizovať Cripto ounkového povrchu.
C. ELISA
ELISA resty sa uskutočňovali nasledovným spôsobom:
Materiál:
Doštičky: 96-jamkové doštičky „high-binding Easy-uash od firmy Costar (07—200—642)
2' protilátka: Gt anti-Ms IgG (K+L)- HRP od Pierce (P131430) Substrát: TMB substrátová Súprava (3402í;, Pierce
Zastavovací roztok: IN H2SO4
Pufre:
Väzbový pufor: 0,1 M NaHPCy, pH 3,0
Blokovací pufor: PBS + 10% donorové telacie sérum
Premývací pufor: PBS + 0,1% Tween-20 premývacieho pufru
Antigény CR-dei-C-Fc a CR-EGF-Fc, kontrolný fúzny protein hu IgGl sa neriedili vo väzbovom pufri na koncentráciu 500 ng/ml. Po 10C pl sa potom, nanieslo do jamiek a inkubovalo počas 1 hodiny pri 37°C alebo cez noc pri 4°C. Kvapalina sa zliala a doštička obrátila a ponechala na pijakovom papieri do uschnutia. Potom, sa pridalo 250 ul/’jamku blckovacieho pufra, nasledovala inkubácia počas 30 minút pri 37°C. Znovu sa kvapalina zliala a doštička obrátila a nechala na pijakovom papieri do uscnnutia. Supernatanty sa nariedili 1:50 v premývanom pufri a naniesli sa po 50 pl/jamka, nasledovala inkubácia počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Doštičky sa premyli 3X dôkladne s 250 μΙ/jamka premývacieho pufru. Potom sa pridalo 100 μΙ/jamka sekundárnej (2') protilátky nariadene] premývacím. pufrom 1:10 000, nasledovala inkubácia počas 30 minút pri teplote miestností. Doštičky sa potom premyli 3X dôkladne 250 μΐ /jamka a potom sa pridal substrát v množstve
100 μΐ /jamka. Farba sa nechala vyvíjať až kým sa dosiahla dostatočná tmavosť, potom sa pridalo 100' ul /jamka zastavovacieho roztoku a doštičky sa premerali na absoroancii pri 450 nm.
D. Prietoková cytometria
Cripto pozitívne bunkové línie sa môžu použiť na testovanie monoklonálnych protilátok na väzbu na Cripto s využitím farbenia bunkového povrchu a prietokovej cytometrie, a síce spôsobom podlá protokolu, ktorý obsahuje nasledovné kroky:
Uvoľnenie buniek z T162 kultivačných fliaš s 2 ml PBS' s 5 mM EDTA, 10 minút, 37°C. Doplniť do 20 ml médiom so sérom, opakovaným pipetovaním rozvoľniť nahromadené bunky. Centrifugovať pri 1200 rpm počas 5 minút. Premyť bunky s 5 až 10 ml 4°C PBS s 0,1% BSA (premývací pufor). Centrifugovať pri 1200 rpm počas 5 minút. Resuspendovať na hustotu 4xl06-107/ml v premývacom pufri. Udržovať na ľade.
Príprava protilátok na farbenie. Purifikované protilátky sa narieaia premývacím pufrom na koncentráciu až 1-10 pg/ml. Pridá sa po 50 pl buniek do jamiek 96-jamkovej doštičky Linbro s dnom tvaru V (ICN 7632105). Nanesie sa po jednej jamke buniek na každú kontrolu na každú bunkovú líniu, ktorá sa má analyzovať, vrátane buniek bez protilátky ako kontroly, len so sekundárnou protilátkou, hybridómového média, supernatantu pozitívnej kontrolnej protilátky, ak je dostupná alebo purifikovaná, a kontrolnej podtriedy IgG (ak sa používajú purifikované protilátky).
Nanesie sa po jednej jamke buniek pre každú experimentálnu vzorku pre každú bunkovú líniu, ktorá sa má analyzovať. Doštička sa centrifuguje pri 1200 rpm počas 5 minút, s použitím stolovej centrifúgy, pri 4°C. Pufor sa odstráni tým, že sa doštička prevráti a otrepe, až sa kvapalina v podstate odstráni. Pridá sa 40-50 pl protilátok (alebo premývacieho pufru pre kontrolu bez protilátky a kontrolu len so sekundárnou protilátkou) do každej jamky. Inkubuje sa aspoň 30 minút až 1 hodinu pri 4°C. Doštička sa cenrrifuguje pri 1200 rpm počas 5 minút. Roztoky protilátok sa vytrasú. Jamky sa premyjú dvakrát 200 pl premývacieho pufra na jamku, po každom premytí sa doštička centrifuguje. Pufor sa z doštičky vytrasie.
Bunky sa resuspendujú v každej jamke v 50 ul kozieho antimyšieho IgG, Fc špecifického (Jackson Immunoresesrch Laboratories, kataló'g. č. 015-116-071) značeného R-PE v riedení 1:200 (v premývacom. pufri) . Inkubujú sa 20 minút, 4°C, v tme. K bunkám, sa pridá 150 ul premývacieko pufru do každej jamky. Doštička sa centrifuguje pri 1200 rpm počas 5 minút. Premyje sa raz s 200 gi premývacieho pufru na jamku. Bunky sa resuspendujú v 150 u: 1% PFA v PBS. Obsah každej jamky sa prenesie do samostatnej 5 ml polystyrénovej skúmavky s guľatým, dnom (Falcon, katalóg. č. 352052). Skúmavky sa obalia hliníkovou fóliou.
Obsahy skúmaviek sa potom analyzujú prietokovou cytometriou.
Výsledky z dvoch skríningov monok.1 orálnych protilátok produkovaných týmto spôsobom sú zhrnuté v tabulkách 1 a 2 ďalej, kde prvý stĺpec uvádza mená hybridómových subklonov, ďalšie dva štipce ukazujú výsledky ELISA skríňingu a zostávajúce stĺpce ukazujú výsledky analýzy prietokovou cytometriou u štyroch Cripto-pozitívnych bunkových línií. Výsledky sú uvedené v jednotkách priemerného indexu fluorescencie (MFI).
Tabuľka 1
Charakterizácia moncklonálnych protilátok anti-Cripto
| Hybridó- mový subklon | ATCC depozit. č. | ELISA Cripto deiC Sup s. | ELISA Cripto EGF- pdobná doména Sups . | DU4475 MFI | NCCTT MFI | GEC MFI | HT3 MFI |
| Kontrola ELISA | 0,06 | 0,07 | |||||
| Kontrola | 14 | O | 37 | 18 | |||
| myší Ig | |||||||
| A6C12.11 | 2,21 | 0,07 | 11 | 35 | 29 | 8 | |
| A6F'8 . 6 | PTA-3318 | 2, 32 | 0,08 | 11 | 50 | 29 | 10 |
| A7H1.19 | 2,14 | 0,09 | 14 | 34 | 27 | 12 | |
| A8F1.30 | 2, 15 | 0,1 | 17 | 27 | 32 | 28 | |
| A8G3.5 | PTA-3317 | 2,39 | 0,09 | 9 | 30 | 25 | 15 |
| A8H3.1 | PTA-3315 | 2,4 | 1,7 | 9 | 44 | 23 | 10 |
| A8H3.2 | 2,54 | 0, 07 | 13 | 13 | 16 | 14 | |
| A19A10.30 | 2,02 | 0,09 | 9 | 40 | 20 | 10 | |
| A10B2.18 | PTA-3311 | 2,36 | 0, 07 | 40 | 63 | 100 | 43 |
| A27F6.1 | PTA-3310 | 2,28 | 1, 19 | 9 | 44 | 26 | 17 |
| A40G12.8 | PTA-3316 | 2,27 | 1,59 | 10 | 47 | 26 | 16 |
Tabúlaa 2
Charakterizácia monokicnálnych protilátok anti-Cripto
| Hybridó- | ATCC | ELISA | ELISA | DU4475 | NCCIT | C-EO | HT3 |
| ľP.OVV subklon | depozit č. | Cripto cele | Cripro EGE- gdobná ccmcna | MFI | MFI | ? .,T 7Γ ~ | MFI 1 I |
| Kontrola | j, 0 5 | 0,05 | |||||
| ELISA | |||||||
| Kontrola | 10 | 6 | 4 | 6 | |||
| myši Ig | |||||||
| A2D3.23 | 2,93 | 0,90 | 73 | 133 | 37 | 27 | |
| A7A13.29 | 1, 37 | 0,07 | 75 | 8 3 | 33 | 83 | |
| A9G9.9 | 1,39 | 0,07 | 52 | 62 | 32 | 82 | |
| A15C12 . 10 | 1,42 | 0,06 | 4 6 | 5 5 | 25 | 9 3 | |
| A15E4. 14 | 2 , 38 | 0,06 | 5 0 | ô 3 | 23 | 95 | |
| A17A2.16 | 1,40 | 0,06 | 76 | 97 | 4 1 | 81 | |
| A17C22.28 | 0,96 | 0, 97 | 6 | 16 | 3 | 2 2 | |
| A17C-22 . 1 | PTA-3314 | 1, 30 | 1,37 | 61 | 6 6 | 28 | / D |
| A17H6 . 1 | 1, 38 | 0,05 | 35 | 30 | 5 | 28 | |
| A18E3.11 | PTA-3312 | 1, 36 | 1,38 | 50 | 42 | 33 | 65 |
| A19E2.7 | 1,40 | 0,06 | 53 | 59 | 26 | 9 9 | |
| S3F6.17 | PTA-3319 | 1,37 | 0,06 | 77 | 51 | 39 | 8 9 |
| B 6G7._ 0 | PTA-3313 | 1,38 | 1,40 | 28 | 22 | 22 | o 6 |
| B11H5 . 4 | 1,41 | 0,06 | 59 | 101 | 3 9 | 107 | |
| BA2C12 . 5 | 1,10 | 1,0 4 | 27 | 14 | 23 | 5 9 | |
| B15A2.6 | 1, 40 | 0, 0 6 | 36 | 44 | 2 2 | 59 | |
| C4A2.7 6 | 1,40 | 0, C 6 | 24 | 36 | 22 | 65 |
Príklad 3
Test inhibície Cripto signalizácie s Cripto-nulitnými bunkami
Nasledovný príklad opisuje test signalizácie s F9 Cripto nulitnými bunkami použitý na hodnotenie inhibície Cripto signalizácie, ktorý pozostával z nasledovných krokov.
Deň 0: Potiahnutie 6-jamkových doštičiek 0,1% želatínou, nanesením 2 ml/jamka pri 37°C počas 15 minút.
Výsev buniek F9 CRIPTO NULL v hustote 6xl05 buniek na jamku.
Deň 1: Transfekcia:
Každá z nasledujúcich vzoriek sa pridá k 300 pl média OptiMeml, čím sa pripraví pre každú vzorku roztok A:
Vzorka 1: 0,5 pg cDNA pre (N2)7luciferáza-FAST reportérový gén plus 1,5 pg cDNA prázdneho vektora.
Vzorka 2: 0,5 pg cDNA (N2) 7luciferázy, 0,5 pg cDNA FAST a 1 pg cDNA prázdneho vektora.
Vzorka 3: 0,5 pg cDNA (N2) 7luciferázy, 0,5 pg cDNA Cripto
ADD 0,5 FAST, a 0,5 pg cDNA prázdneho vektora.
| Vzorka | 4 : 0,5 | pg | cDNA (N2)7luciferázy, 0,5 | pg | cDNA | Cripto, | |
| 0,5 | pg cDNA | FAST a | 0,5 | pg cDNA prázdneho vektora. | |||
| Vzorka | 5: 0,5 | pg | cDNA (N2)7luciferázy, 0,5 | pg | CDNA | Cripto, | |
| 0,5 | pg cDNA | FAST a | 0,5 | pg cDNA prázdneho vektora. | |||
| Vzorka | 6: 0,5 | pg | cDNA (N2)7luciferázy, 0,5 | pg | CDNA | Cripto, | |
| 0,5 | pg cDNA | FAST a | 0,5 | pg cDNA prázdneho vektora. | |||
| Vzorka | 7 : 0,5 | pg | cDNA (N2)7luciferázy, 0,5 | pg | cDNA | Cripto, | |
| 0, 5 | pg cDNA | FAST a | 0, 5 | pg cDNA prázdneho vektora. | |||
| Vzorka | 8 : 0,5 | pg | cDNA (N2) 7luciferázy, 0,5 | pg | CDNA | Criptc, | |
| 0,5 | pg cDNA | FAST a | 0,5 | pg cDNA prázdneho vektora. |
Vzorka 9: 0,5 pg cDNA (N2) 7luciferázy, 0,5 μο cDNA Crictc,
5,5 pg cDNA FAST a 0,5 cg cDNA prázdneho vektora.
Roztok B obsahuje 30 pl lipofektamínu plus 270 pl CptiMeml.
Pre každú vzorku sa zmieša roztok A a roztok B. Inkubuje sa 45 minút pri teplote miestnosti. Jamky sa vypláchnu OptiMeml 2 ml/jamka. Odsajú sa tesne pred ďalším krokom.
Pridaj ú oremieša^ú sa sa 2,4 ml OptiMeml ku každej , pridá sa 1,5 ml/'jamka, aby
-.nkubu j e sa 5 hodín pri 37°C
Pridá sa zmesi roztokov A+B, sa tamky duplikovali. 1,5 mi / j amka DMEM-2 0 ΐ mM Glu, P/'S k jamkám, do kto
Pridajú sa protilátky anti-Griptc ých sa naniesli vzorky 1 pocia nasledujúcej schémy:
i am μ g / m 1, —.í 0ol2, 8 vzorky 9 y vzorky 4: A27F6,1, 10 pg/ml, jamky vzorky jamky vzorky 6: A40G12,8, 10 pg/ml, jama pg/ml, jamky vzorky 8: A10B2,18, 10 u
Al0B2,18, 2 pg/ml.
: A2 7 F6,1, :y vzorky 7 : g/ml, jamky
Peň 2: Odstráni sa médium, bunky sa premyjú PBS, 2 ml/jamka. Pridá sa DMEM + 0,5% FCS, 2 mM Gin, P/S s rovnaným množstvom Cripto protilátok ako predchádzajúci deň, do rovnakých jamiek.
Peň 3: Vyvíja sa iuciferázový signál. Jamky sa premyjú s FBS + CA4* a Mg2+, 2 ml/jamka. Použije sa súprava LucLite, Packarc kat. č. 6016911. Putor a substrát sa nechajú, aby získali teplotu miestnosti. Tlmené svetlo. Suostrát sa nariedi 10 ml pufru. Nariedi sa 1:1 s PBS + Ca4* a Mg4*. Jamky sa odsajú. Rýchlo sa pridá 250 pl neriedeného substrátu na jamku s použitím opakovacej cdpety. Roztokom sa zavíri a 200 pl sa prenesie do jamiek na 96-j.amkovej doštičke s bielym nepriehľadným onom, Falcon 353296. Doštička sa odčíta na iuminometri s použitím programu Kinglcc, dáta sa exportujú do programu Excel.
Výsledky tohoto testu sú zhrnuté ďalej v tabuľke 3.
Tabulka 3
Test signalizácie Cripto: Inhibícia monoklonálnymi protilátkami anti-Crrpto
| Transfekované cDNA | Protilátka anti- Cripto | Relatívne luminiscenčné j ednotky |
| (N2)7 luc | žiadna | 123 |
| (N2)7 luc, FAST | žiadna | 259 |
| (N2)7 luc, FAST, Cripto | žiadna | 309i |
| (N2)7 luc, FAST, Cripto | A27F6.1 10 yg/ml | 1507 |
| (N2)7 luc, FAST, Cripto | A27F6.1 2 yg/ml | 2297 |
| (N2)7 luc, FAST, Cripto | A40G12.8 10 yg/ml | 1213 |
| (N2)7 luc, FAST, Cripto | A40G12.8 2 yg/ml | 2626 |
| (N2)7 luc, FAST, Cripro | A10B2.18 10 yg/ml | 34 66 |
| (N2)7 luc, FAST, Cripto | A10B2.18 2 yg/ml | 3103 |
Príklad 4
Test In vitro inhibície rastu nádorových buniek
Inhibícia signalizácie Cripto sa môže tiež testovať meraním rastu buniek GEO na mäkkom agare. (Pozri napr. Ciardiello et al., Oncogene, 1994, január, 9(1):291-8, Ciardiello et al., Cncogene, február 1,51(3):1051-4).
Najprv sa zohreje 3% baktoagar. Drží sa vo vodnom kúpeli s teplotou 42°C. Potom sa zmieša 3% roztok baktoagaru s vopred zohriatym kompletným médiom za vzniku 0,6% roztoku baktoagaru, cri udržovaní v 42°C. 4 ml roztoku sa nanesú na misku s priemerom 6 cm a roztok sa nechá ochladiť aspoň 30 minút, aby sa vytvorila spodná vrstva agaru. GEO bunky sa trypsinizujú a resuspendujú na koncentráciu 105 buniek/ml v kompletnom médiu. K bunkovej suspenzii sa pridajú testované protilátky alebo kontroly, protilátky sa titrujú od 20 yg čo 1 yg. Rovnaké objemy GEO bunkovej suspenzie a 0,6% baktoagar sa zmiešajú a 2 mi sa prekryje vrch spodnej vrstvy agaru. Nechá sa chladnúť aspoň 1 hoainu. Inkubuje sa počas 14 dní pri 37°C v C02 inkubátore. Kolónie viditelné bez použitia mikroskopu sa spočítajú. Neprítomnosť kolónií, v porovnaní s negatívnymi kontrolami, ukazuje, že testovaná protilátka ínhibuje m vitro rast nádorových b u n i e k.
Tento test sa použil a poskytol výsledky ukázané v tabulke 4, pre protilátky A27F6.1 a 36G_.10, ktoré obe vykazujú schopnosť znížiť rast kolónií buniek GFO.
Tabuľka 4: Výsledky rastu v teste na mäkkom, agare
| Protilátka | Priemerný počet kolónií |
| žiadna | 10 9,0 |
| žiadna | 10 4,3 |
| A27.F6 20 pg/ml | 82,0 |
| A27F6.1 10 pg/ml | Ί R P ' r |
| A27F6.1 5 pg/ml | 79, 0 |
| A2 7 F6.1 1 pg/ml | 10 3,7 |
| B 6 G 7.1Q 2 0 pg/ml | 10 2,3 |
| B6 G7.10 10 pg/ml | 71,7 |
Test In vivo inhibície rastu nádorovýcn buniek
Aby sa vyhodnotila inhibícia rastu nádorových buniek, ludská nádorová bunková línia sa implantovala subkutánne atýmusovým nahým myšiam a účinky protilátok podlá vynálezu sa pozorovali, s ďalšou chemoterapeutickou liečbou a bez nej , ktorá by mohla poskytnúť synergické alebo aditívne účinky na inhibiciu nádoru.
Tento tesu sa môže uskutočňovať alternatívne s použitím rôznych nádorových bunkových línií, ako napríklad GEO (in vitro bunková línia dobre diferencovaného ludského Karcinómu kólonu, získaná od American Tissue Type Coliectron (ATCC);, Dd-4475 (m vitro bunková línia karcinómu prsníka získaná od ATCC), NCCIT (bunková línia nádoru semenníka získaná od A.TCC) alebo ďalších známych v odbore. Nasleduje jeden príklad takých testov:
Zvieratá sa individuálne označili prepichnutím uší. Bunková línia GEO je 1 až 4 pasážovaná in vitro nebo n vivo. Zvieratám sa implantujú bunky GEO subkutánne do oblasti pravého boku. Môžu sa použiť nasledujúce skupiny zvierat:
| č. 5 ku- piny | Liečba | Počet myší |
| 1 . | Kontrola s fyziologickým roztokom, 0,2 ml/myš, i.p. trikrát týždenne (po, str, pia) | 20 |
| 2 . | rrAb, nízka dávka, i.p. | 10 |
| 3. | rrAb, stredná dávka, i. p. | 10 |
| 4 . | mAb, vysoká dávka, i.p. | 10 |
| 5. | 5-FU, 30 mg/kg/inj, í.p., 3 x týždenne (po, str, pia) | 10 |
| 6. | Cisplatina, 2 mg/kg/inj, s.c., 3 x týždenne (po, str, pia) | 10 |
| 7 . | Adriamycin, 1,6 mg/kg/inj, i.p., 3 x týždenne (po, str, pia) | 10 |
| 8 . | Irinotecan, 10 mg/kg/inj., i.p., 5 x týždenne (po- pía) | 10 |
| 9. | 5-FU (stredná dávka) | 10 |
| 10. | mAb, stredná dávka, i.p. + 5-FU (stredná dávka) | 10 |
| 11. | mAb, vysoká dávka, i.p. + 5-FU (stredná dávka) | 10 |
| 12. | mAb, nízka dávka, i.p. + Cisplatina (stredná dávka) | 10 |
| 13. | mAb, stredná dávka, i.p. + Cisplatina (stredná dávka) | 10 |
| 14 . | mAb, vysoká dávka, i.p. + Cisplatina (stredná dávka) | 10 |
| 15. | mAb, nízka dávka, i.p. + Adriamycin (stredná dávka) | 10 |
| 1 6 . | mAb, o a v k a | stredná | dávka, i.p. | + | Adriamycin | (stredná | 10 |
| 17 . | ~Ao, dávka | vysoká | dávka, i.p. | + | Adriamycin | (stredná | 10 |
| 15 . | m A. b, : | nízka dávka, i.p. - Ir | i n C1 | tecan (stredná dávka) | 10 | ||
| í 9 . | ClAo , dávka | stredná | dávka, i.p. | + | Irinotecan | (stredná | 10 |
| 20 . | mAb, dávka | vysoká l | dávka, i.p. | Irinotecan | (stredná | 10 |
Ceň 0: Implantuje sa nácor, zaznamená sa počiatočná telesná hmoincsť zvierat.
Ceň 1: Zaháji sa ošetrenie, ako je ukázané skôr.
Deň 5: Začínajú merania veľkosti nádoru a telesnej hmotnosti a pokračuje sa dvakrát týždenne až dc ukončenia experimentu.
Východzia oelesná hmotnosť, merania veľkosti nádoru a telesnej nmotnosti, histológia po utratení a imunohistochemická analýza nádorov sa vyšetrujú, analyzujú na Cripto expresiu, nádorový rast a jeho inhibíciu.
Pri klao 6
In vín model s nádorovým, xenotransplancátom - antí-Cripto protilátka blokujúca Cys-bohatý úsek
Na vyhodnotenie reakcie NCCIT, sa bunky ľudskej bunkovej línie xarcinómu semenníka implancovali subkutánne s protilátkou, ktorá sa viaže na cys-bohatú doménu Cripto. experimentálne metódy sú uvedené ďalej. Výsledky sú ukázané na obrázku 1.
Metódy a maoeriál
Zvierala: Použili sa samce atýmusových „nahých” myší. Zvieratá sa individuálne očíslovali prepichnutím uší.
Nádor: NCCIT, mediastinálne zmiešané zárodočné bunky z in vitro bunkovej línie ľudského karcinómu semenníka, pôvodne získané z Americkej zbierky bunkových kultúr (ATCC). Bunková línia sa in vitro šesťkrát pasážovala v RPMZ1540/10% FBS bez antibiotík. Zvieratám sa implantovalo subkutánne do pravého boku 5 x 106 buniek/0,2 ml matngelu.
Číslo skupiny
Liečba
Počet myší
Kontrola s vehikulom (25 mM fosforečnan sodný, 20
100 mM chlorid sodný, pH 7,2), 0,2 ml/myš, i.p.,
Q14D.
Podávanie zahájené v deň -1
A8G3.5, 1 mg/kg/inj, i.p., Q14D 10
Podávanie zahájené v deň -1
A8G3.5, 3 mg/kg/inj, i.p., Q14D 10
Podávanie zahájené v deň -1
A8G3.5, 10 mg/kg/inj, i.p., Q14D 10
Podávanie zahájené v deň -1
Cisplatina, 2 mg/kg/inj, s.c., 3 x/týždeň (Po, 10 str, pia) pre 6 ošetrení (liečení)
Podávanie zahájené v deň 1
Testovacia schéma
Deň -1: Myši sa náhodne rozdelili do kontrolnej skupiny a liečených skupín. Zaznamenala sa počiatočná hmotnosť zvierat. Uskutočnilo sa prvé podanie protilátky v skupinách s protilátkou. Pripravili sa dávkovacie roztoky. Liečenia sa uskutočňovali „slepo vzhľadom k personálu, až do ukončenia.
Deň 0: Implantoval sa nádor. Bakteriálne kultúry na nádore implantovanom do myší.
| Deň 1: Bode: | :ie prvej liečby pozitívnej cnemoterapeuticxej sku- |
| p i r. e . | |
| Deň 4 : Zazri | imenanie počiatočnej velkosti nádoru merané ako |
| bazá; | ina hodnota nádoru v matrigeli. |
| Pokre | nšovanie v zaznamenávaní velxosti názoru a hmot- |
| n o s t i | u myší 2x/týždeň. Denné monitorovanie celej štúdie |
| a pr: | ioadné zápisy akéhokolvek neobvyklého pozorovania |
| na z’ | .· i e r a t á c n . |
| Výstupy: Počia | itočná telesná hmotnosť |
| Mera: | oia velkosti nádoru a telesnej hmotnosti |
| in vivo móde | 1 s nádorovým xenotransplantátom - anti-Cnpto |
| protilátka bied- | íujúca EGF-podobnú doménu |
| na vynodrn | ožerie reakcie NCCIT, bunky ludskej bunkovej línie |
karcinómu semenníka sa implantovali subkutánne s protilátkou, ktorá sa viaže na EGF-podobnú doménu Cripto. Experimentálne
| metóoy sú uvedí | nné d’alej. Výsledky sú ukázané na obrázku 2. |
| Metóoj' a mater: | .ál |
| Zvieratá: Použ; | .ii sa samce atýmusových „nahých myší. Zvieratá |
| sa ir | '.dividuálne očíslovali prepichnutím, uší. |
| nádor: NCCIZ | mediastinálne zmiešané zárodočné bunky z in vi- |
| tro | bunkovej línie ľudského karcinómu semenníka, |
| pôvoc | :ue získané z Americkej zbierky bunkových kultúr |
(ATCC;. Bunková línia sa in vitro šesťkrát pasážovala v RPml-1640/10% FBS bez antibiotík. Zvieratám sa implantovalo suokutánne do pravého boku 5 x 10ε buniek/ í,2 ml matrigelu.
Číslo Počet
Liečba s kúpi r. 7 myší
Kontrola s vehikulom (25 mM fosforečnan sečný, 18
100 mM chlorid sodný, pH 7,2), 0,2 ml/myš, i.p.,
Q14D.
| Podávanie | zahájené v deň | -1 | ||
| 2 | A8G3.5, 3 | mg/kg/inj, i.p. | , Q14D | 10 |
| Podávanie | zahájené v deň | -1 | ||
| 3 | A27F6.1, | 10 mg/kg/inj, i. | p., Q14D | 10 |
| Podávanie | zahájené v deň | -1 | ||
| 4 | Cisplatina, 2 mg/kg/inj, | s.c., 3 x/týždeň (Po, | 10 | |
| str, pia) | pre 6 liečení | |||
| Podávanie | zahájené v deň | 1 |
Testovac
Deň -1 :
ia schéma
Myši sa náhodne rozdelili do kontrolnej skupiny a liečených skupín. Zaznamenala sa počiatočná hmotnosť zvierat. Uskutočnilo sa prvé podanie protilátky v skupinách s protilátkou. Pripravili sa dávkovacie roztoky. Liečba sa uskutočňovala „slepo vzhladom na personál, až do ukončenia experimentu.
Deň 0: Implantoval sa nádor. Bakteriálne kultúry na nádore implantovanom do myší. Bakteriálne kultúry boli negatívne na kontamináciu 24 a 48 hodín po odobraní vzoriek.
Podanie prvej liečby pozitívnej chemoterapeutickej s kúpine.
Deň 4: Zaznamenanie počiatočnej veľkosti nádoru merané ako bazálna hodnota nádoru v matrigeli.
Pokračovanie v zaznamenávaní veľkosti nádoru a hmccnos42 ti myší 2x/'týždeň. Denné monitorovanie celej štúdie s prípadne zápisy akéhokoľvex neobvyklého pozorovania na zvieratách.
Výstupy: Počiatočná telesná hmotnosť
Merania veľkosti nádoru a telesnej hmotnosti
Príklad 8
Monoklonálne protilátky Cripto, ktoré blokujú väzbu ALK4
Na vyhodnotenie toho, či Cripto-špeciíické monoklonálne protilátky môžu interferovať so schopnosťou Cripto viazať sa r.a Alk4, receptor „activinu typu I”, sa použila analýza prietokovou cytometriou na bunkovej línii 293, ktorá trvalé exorimuje Alk4. Na prípravu tejto bunkovej línie sa bunky 293 kotransŕekovaíi plazmidom, ktorý exprimuje Alk4 označený na C-koncí HA. epitopom, a plazmidom, ktorý exprimuje liečive, puromycin, v pomere 10: í. Transfekované bunky sa potom selektovali v médiu s puromyoinom až do vytvorenia kolónií. Kolónie sa potom odobrali, namnožili a potom analyzovali na expresiu Alk4 s použitím Western blot testu s HA. Kloň 21 (293-A1k4-21) bol zistený ako kloň exprimujúci vysoké hladiny Alk4 v porovnaní s kontrolnými netransfekovanými bunkami 293.
Na analýzu väzby Cripto-Alkl prietokovou cytometriou sa použila purifikovaná rozpustná forma ľudského Cripto (aminokyseliny 1-169) fúzovaná s Fc časťou ludského IgG (CrdelC-Fc).
Približne 5 pg/ml CrdelC-Fc alebo kontrolného Fc proteínu sa 5 i n kubova 1 o s 3x10 buniek 2 93-A1 k4-21 na ľade počas 3 0 mir.út v 50 ul celkového objemu FACS pufra (PBS s 0,1% BSA). Pre vzorky obsahujúce anti-Criptc· protilátky, 5 pg/ml CrdelC-Fc sa preir.kubovalo s 50' pg/ml z každej Cripto protilátky ÍA10.B2. 18, A40.G12.8, A27.F6.1, A3.H3.1, A19.A10.30, A6.F8.6, A8.G3.5, A6.C12.il) na ľade pred pridaním buniek. Bunky sa potom premyli FACS pufrom a naviazaný Fc proteín sa detegoval tým, že sa bunky inkubovali s kozím anti-ludským IgG (špecifickým pre Fc fragment) konjugovaným s R-fykoerytrinom (Jackson Immunologics). Vzorky sa potom znovu premyli, fixovali v 1% paraformaldehyde v PBS a analyzovali štandardnými postupmi prietokovej cytcmetríe. Výsledky FACS testov sú ukázané na obrázku 3.
Uskutočnenia vynálezu tu opísané sú ukázané ako príklady a nijako neobmedzujú rozsah uskutočnenia vynálezu. Odborník si je vedomý toho, že sa môžu uskutočniť početné zmeny a modifikácie v rôznych uskutočneniach vynálezu, bez toho aby došlo k odchýleniu od vynálezcovskej myšlienky predkladaného vynálezu. To znamená, že všetky takéto variácie spadajú do rozsahu predkladaného vynálezu.
Publikácie citované v opise sú v plnom rozsahu zahrnuté formou odkazu.
Zoznam sekvencií <160> 2 <17Q> FasoSEQ pre Windows 4.0 < 2 10 > i <211> 188 <212> PRT <212> How.o sapiens <400> 1
| Met | Asp | Cys | Arg | Lys | Met | Ala | Arg | Phe | Ser | Tyr | Ser | Val | íle | Trp | íle |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Met | Ala | íle | Ser | Lys | Val | Phe | Glu | Leu | Gly | Leu | Val | Ala | Gly | Leu | Gly |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| His | Gin | Glu | Phe | Ala | Arg | Pro | Ser | Arg | Gly | Tyr | Leu | Ala | Phe | Arg | Asp |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Asp | Ser | íle | Trp | Pro | Gin | Glu | Glu | Pro | Ala | íle | Arg | Pro | Arg | Ser | Ser |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gin | Arg | Val | Pro | Pro | Met | Gly | íle | Gin | His | Ser | Lys | Glu | Leu | Asn | Arg |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Thr | Cys | Cys | Leu | Asn | Gly | Gly | Thr | Cys | Met | Leu | Gly | Ser | Phe | Cys | Ala |
| 85 | 90 | 95 |
| Cys | Pro | Pro | Ser 100 | Phe | Tyr | Gly Arg Asn 105 | Cys | Glu | His | Asp | Val 110 | Arg | Lys |
| Glu | Asn | Cys | Gly | Ser | Val | Pro His Asp | Thr | Trp | Leu | P-ro | Lys | Lys | Cys |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||
| Ser | Leu | Cys | Lys | Cys | Trp | His Gly Gin | Leu | Arg | Cys | Phe | Pro | Gin | Ala |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||
| Phe | Leu | Pro | Gly | Cys | Asp | Gly Leu Val | Met | Asp | Glu | His | Leu | Val | Ala |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||
| Ser | Arg | Thr | Pro | Glu | Leu | Pro Pro Ser | Ala | Arg | Thr | Thr | Thr | Phe | Met |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||
| Leu | Val | Gly | íle | Cys | Leu | Ser íle Gin | Ser | Tyr | Tyr | ||||
| 180 | 185 |
<210> 2 <211> 188 <212> PRT <213> Homo sapíens
| <400> 2 | |||||||||||||||
| Met | Asp | Cys | Arg | Lys | Met | Val | Arg | Phe | Ser | Tyr | Ser | Val | íle | Trp | íle |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Met | Ala | íle | Ser | Lys | Ala | Phe | Glu | Leu | Gly | Leu | Val | Ala | Gly | Leu | Gly |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| His | Gin | Glu | Phe | Ala | Arg | Pro | Ser | Arg | Gly | Asp | Leu | Ala | Phe | Arg | Asp |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Asp | Ser | íle | Trp | Pro | Gin | Glu | Glu | Pro | Ala | íle | Arg | Pro | Arg | Ser | Ser |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Gin | Arg | Val | Leu | Pro | Met | Gly | íle | Gin | His | Ser | Lys | Glu | Leu | Asn | Arg |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Thr | Cys | Cys | Leu | Asn | Gly Gly | Thr | Cys | Met | Leu | Glu | Ser | Phe | Cys | Ala | |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Cys | Pro | Pro | Ser | Phe | Tyr | Gly | Arg | Asn | Cys | Glu | His | Asp | Val | Arg | Lys |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Glu | Asn | Cys | Gly | Ser | Val | Pro | His | Asp | Thr | Trp | Leu | Pro | Lys | Lys | Cys |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Ser | Leu | Cys | Lys | Cys | Trp | His | Gly | Gin | Leu | Arg | Cys | Phe | Pro | Gin | Ala |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Phe | Leu | Pro | Gly | Cys | Asp | Gly | Leu | Val | Met | Asp | Glu | His | Leu | Val | Ala |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ser | Arg | Thr | Pro | Glu | Leu | Pro | Pro | Ser | Ala | Arg | Thr | Thr | Thr | Phe | Met |
| 165 | 17 0 | 175 | |||||||||||||
| Leu | Ala | Gly | Ilé | Cys | Leu | Ser | íle | Gin | Ser | Tyr | Tyr | ||||
| 180 | 185 |
Aminokyselinová sekvencia CR-1 obsahujúca 188 aminokyselín [sekvencia SEQ ID NO: 1]
MDCRKMARFSYSVTWIMAISKVFELGLVAGLGHQEFARPSRGYLAFRCDS
IWPQEEPAIRPRSSQRVPPMGIQHSXELNRTCCLNGGTCMLGSFCACPPS
FYGRNCEHDVRKENCGSVFHDTWLPKKCSLCKCWHGQLRCFPQAFLPGCD
GLVMDEHLVASRTPELPPSARTTTFMLVGICLSIQSYY
Aminokyselinová sekvencia CR-3 obsahujúca 188 aminokyselín [sekvencia SEQ ID NO: 2]
MDCRKMVRFSYSVIWIMAISKAFELGLVAGLGHQEFARPSRGDLAFRDDS
IWPQEEPAIRPRSSQRVLPMGIQHSKELNRTCCLNGGTCMLESFCACPPSF
YGKNCEHDVKKENCGSVPHDTWLPKKCSLCKCNHGQLRCFPQAFLPGCDGL
VMDEHLVASRTPELPPSARTTTFMLAGXCLSIQSYY
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKYT. Protilátka, ktorá sa špecificky viaže na epitop vo väzbové4· doméne iigand/receptor Cripto.
- 2. Protilátka podlá nároku 1, kde Cripto je vybraný zo skupiny, ktorú tvoria sekvencie uvedené v zozname sekvencií ako sekvencia
SEQ 2D NO: 1 a 2 . 3 . P :rotilátka podľa nároku 2, kde epitop je v doméne podobnej EGF. 4 . P rct i látka podľa nároku 2, kde epitop je v doméne bohatej na cys . 5 . P rotilátka podlá nároku 2, ktorá je vybraná zo skupiny, ktorú 4- - 7 /- v- ι_ V _' _ . ra A6C12. 11, A6F8.6, A7H1.19, A8F1.30, A8G3.5, A8H3.1, Α8ΗΪ.2, A19A10.30, A1Q32.18, A27F6.1, A40G12.6, A2D - 3.23,Ά7Ά10.29, A9G9.9, A15C12.20, A15E4.14, A27A2.16, A17C12.28,A17G12.1, A17H6.1, A18B3.il, A19E2.7, B3F6.17 a B6G7.10.6. Protilátka podlá nároku 3, ktorá je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria A40G12.8, A8B3.1, A27E6.1, B6G7.10, A17G12.1 a A18B3.il.7. Protilátka podlá nároku 4, ktorá je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria A19A10.30, A8G3.5, A6F8.6 a A6C12.il.8. Protilátka, ktorá sa špecificky viaže na epitop obsiahnutý v doméne zahrnujúcej aminokyselinové zvyšky 46 až 62 Cripto.9. Protilátka podľa nároku 8, ktorou je A10B2.18 alebo B3F6.17.10. Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na epitop vybraný zo skupiny epitopov, na ktoré sa viažu protilátky A6C12.il, A6F8.6, A7H1.19, A8F1.30, A8G3.5, A8H3.1, A8H3.2, A19A10.30, A10B2.18, A27F6.1, A40 G12.8, A2D3.23, A7A10.29, A9G9.9, A15C12.10, A15E4.14, A17A2.16, A17C12.28, A17G12.1, A17H6.1, A18B3.il, A19E2.7, B3F6.17 a B6G7.10.11. Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na Cripto a je schopná modulovať Cripto signalizáciu.12. Protilátka podľa nároku 11, ktorá sa špecificky viaže na epitop v doméne podobnej EGF v Cripto.13. Protilátka podía nároku 12, ktorá je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria A40G12.8, A8H3.1 a A27F6.1.14. Protilátka podía nároku 11, ktorá epitop v doméne bohatej na cys v Cripto.sa špecificky viaže na15. Protilátka podľa nároku 14, ktorou je A6C12.il.16. Protilátka podľa nároku 11, ktorá je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria A40G12.8, A8H3.1, A27F6.1 a A6C12.il.17. Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na Cripto a je schopná modulovať rast nádorov.18. Protilátka podía nároku 17, ktorá sa epitop v doméne podobnej EGF v Cripto.špecificky viaže na19. Protilátka epitop v doméne podľa nároku 17, ktorá bohatej na cys v Cripto.sa špecificky viaže na20. Protilátka podľa nároku 17, ktorá je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria A27F6.1, A8 G3.5 a B6G7.10.21. Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na Cripto, je schoor.á modelovať Cripto signalizáciu a je schopná mooulovať ras nádorov.22. Frotilátka podľa nároku 21, ktorá sa špecificky viaže ra epitop v doméne podobnej EGF v Cripto.23. Frotilátka podľa nároku 21, ktorá sa špecificky viaže na epitsp v doméne bohatej na cys v Cripto.24. Frotilátka podľa nároku 21, ktorou je A27F6.Í.25. Frotilátka produkovaná hybritíómom vybraným zo skupiny, ktorú tvoria A6F8.6 (ATCC prístupové č. PTA-3318), A3G3.5 CATCC prístupové č. PTA-3317), A6H3.1 (ATCC prístupové č. PTA-3315),A10B2.18 (ATCC prístupové č. PTA-3311), A27F6.1 (ATCC prístupové č. PTA-3310), A40G12.8 (ATCC prístupové č. PTA-3316), A17C-Í2.1 (ATCC prístupové č. PTA-3314), A18B3.il (ATCC prístupové č. PTA3312 , B3F6.17 (ATCC prístupové č. PTA-3319) a B6G7.10 (ATCC prístupové č. PTA-3313).26. Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na Cripto a je schopná blokovať interakciu medzi Cripto a ALK4.
27 . r rotilát ka podlá nároku 26, ktorá sa špecificky viaže na epitco v doméne podobnej EGF v Cripto. 28 . Protilátka podľa nároku 26, ktorá sa špecificky viaže na epitco v doméne bohatej na cys v C ripto. 29. Protilátka podlá nároku 26, ktorá Je vybraná zo skupiny, kcorcu tvoria A8G3.5, A6F8.6 a A6C12.il.30. Protilátka, ktorá sa viaže špecificky na Cripto, je schopná blokovať interakciu medzi Cripto a ALK4 a je schopná modulovať rast nádorov.31. Protilátka podľa nároku 30, ktorá sa špecificky viaže na epitop v doméne podobnej EGF v Cripto.32. Protilátka podlá nároku 30, ktorý sa špecificky viaže na epitop v doméne bohatej na cys v Cripto.33. Protilátka podlá nároku 30, ktorou je A8G3.5.34. Cripto protilátka schopná internalizovať Cripto.35. Protilácka podlá nároku 34, kde je protilátka konjugovaná s chemoterapeutikom.36. Protilátka podľa nároku 34, ktorá je vybraná zo skupiny,' ktorú tvoria A27F6.1 a B3F6.17.37. Kompozícia na podávanie pacientovi, ktorý má nádor exprimujúci Cripto, vyznačujúca sa tým, že obsahuje aspoň jednu z protilátok podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 35.38. Kompozícia podľa nároku 37, vyznačujúca sa tým, pacient je človek.ze39. Kompozícia podľa nároku 37, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje farmaceutický prijateľné vehíkulum.40. Kompozícia podľa nároku 37, vyznačujúca sa tým, že orotilátka je konjugovaná s chemcterapeutikom.41. Kompozícia podľa nároku 37, vyznačujúca sa rým, že ďalej obsahuje nekonjugované chemoterapeutikun.42. Spôsob modulácie rastu nádorovej bunky in vitro vo vzorke vyznačujúci sa tým, že obsahuje krok, kedy sa k vzorke pridá kompozícia podlá nároku 37.43. Spôsob modulácie rascu nádorovej bunky in vivo u pacienca vyznačujúci sa tým, že obsahuje krok, kedy sa podáva pacientovi účinné množstvo kompozície pcdla náreku 3~.44. Spôsob podľa nároku 43, vyznačujúci sa sým, že pacient je človek.45. Spôsob liečenia pacienta, ktorý má nádor nadmerne exprimujúci Cripto, vyznačujúci sa c ý m, že obsahuje a rok podávania kompozície podľa nároku 37 v účinnom množscve pacientovi.46. Spôsob liečenia pacienta, ktorý má nádor nadmerne exprimujúci Cripto, vyznačujúci sa c ý m , že obsahuje are k podávania kompozície podľa nároku 39 v účinnom množscve pacientovi.47. Spôsob liečenia pacienta, ktorý má nádor nadmerne exprimu- júci Cripto, vyzná čujúci sa tým, že obsahuje kro k podáva- nia kompozície podľa nároku 40 v účinnom množstve pacien c ovi . 48. Spôsob liečenia pacienta, ktorý má nádor nadmerne exprimujúci Cripto, v y z n a č u j ú c i sa tým, že obsahuje aroa podávania kompozície podľa nároku 41 v účinnom, množstve pacientovi. - 4 9. Spôsob podľa nároku 42, vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníxa, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.50. Spôsob podlá nároku 43 vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníka, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.51. Spôsob podľa nároku 44 vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníka, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.52. Spôsob podľa nároku 45 vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníka, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.53. Spôsob podľa nároku 46, vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníka, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.54. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníka, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.55. Spôsob podľa nároku 48, vyznačujúci sa tým, že bunka nádoru je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria bunky nádoru prsníka, semenníka, kólonu, pľúc, vaječníka, močového mechúra, maternice, krčka maternice, pankreasu a žalúdka.56. Spôsob stanovenia toho, či tkanivo expnm.uje Cripto, vyznačujúci sa týc, že obsahuje krok, kedy sa analyzuje tkanivo pacienta v irrunoteste s použitím protilátky podľa ktoréhokoľvek z nárokov í až 27.57. Spôsob stanovenia toho, či bunkot'á línia nadmerne exprimuje Cripto, vyznačujúci sa tým, že obsahuje krok, kedy sa analyzuje bunková línia imunctestom s použitím procilátky nocia kroréhokoľvek z nárokov 1 až 37.58. Protilátka podľa nároku i, ktorá je monoklonálna protilátka.59. Protilátka podľa nároku 1, ktorá je humanizovaná protilátka.60. Protilátka podľa nároku 1, ktorá je ľudská protilátka.61. Spôsob liečenia pacienta so stavom asociovaným s nežiaducou bunkovou proliferáciou, vyznačujúci sa tým, že obsahuje podávanie kompozície podľa nároku 3/ paciencovi.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US28678201P | 2001-04-26 | 2001-04-26 | |
| US29302001P | 2001-05-17 | 2001-05-17 | |
| US30109101P | 2001-06-26 | 2001-06-26 | |
| US36700202P | 2002-03-22 | 2002-03-22 | |
| PCT/US2002/011950 WO2002088170A2 (en) | 2001-04-26 | 2002-04-17 | Cripto blocking antibodies and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK14432003A3 true SK14432003A3 (sk) | 2004-07-07 |
Family
ID=27501437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1443-2003A SK14432003A3 (sk) | 2001-04-26 | 2002-04-17 | Protilátka špecifická pre Cripto, kompozícia obsahujúca takúto protilátku a jej použitie |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US7531174B2 (sk) |
| EP (3) | EP2316486A3 (sk) |
| JP (4) | JP4307845B2 (sk) |
| KR (1) | KR100592357B1 (sk) |
| CN (1) | CN100352501C (sk) |
| AR (3) | AR037223A1 (sk) |
| AT (2) | ATE420659T1 (sk) |
| BG (1) | BG108363A (sk) |
| BR (1) | BR0209254A (sk) |
| CA (2) | CA2715570A1 (sk) |
| CL (1) | CL2009002199A1 (sk) |
| CY (1) | CY1108960T1 (sk) |
| CZ (1) | CZ20033208A3 (sk) |
| DE (1) | DE60230868D1 (sk) |
| DK (1) | DK1390389T3 (sk) |
| EA (1) | EA007469B1 (sk) |
| EE (1) | EE200300528A (sk) |
| ES (1) | ES2321065T3 (sk) |
| GE (1) | GEP20074091B (sk) |
| HK (1) | HK1058935A1 (sk) |
| HU (1) | HUP0501113A3 (sk) |
| IS (1) | IS2662B (sk) |
| MX (1) | MXPA03009797A (sk) |
| MY (2) | MY157382A (sk) |
| NO (1) | NO20034805L (sk) |
| NZ (1) | NZ566268A (sk) |
| PL (1) | PL207087B1 (sk) |
| PT (1) | PT1390389E (sk) |
| RS (2) | RS51635B (sk) |
| SG (1) | SG157951A1 (sk) |
| SI (1) | SI1390389T1 (sk) |
| SK (1) | SK14432003A3 (sk) |
| TR (1) | TR200301846T2 (sk) |
| WO (1) | WO2002088170A2 (sk) |
Families Citing this family (98)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002088170A2 (en) | 2001-04-26 | 2002-11-07 | Biogen, Inc. | Cripto blocking antibodies and uses thereof |
| AUPR395801A0 (en) | 2001-03-26 | 2001-04-26 | Austin Research Institute, The | Antibodies against cancer |
| US20090123470A1 (en) * | 2001-03-26 | 2009-05-14 | The Macfarlane Burnet Istitute For Medical Research And Public Health Ltd. | Antibodies Against Cancer |
| US7582299B2 (en) | 2001-04-26 | 2009-09-01 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto-specific antibodies |
| JP2005520566A (ja) * | 2002-03-22 | 2005-07-14 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | Ｃｒｉｐｔｏ特異的抗体 |
| JP5091476B2 (ja) | 2003-06-27 | 2012-12-05 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | 均質な抗体溶液の生成のための疎水性相互作用クロマトグラフィーまたはヒンジ領域改変の使用 |
| DE602004022315D1 (de) | 2003-09-15 | 2009-09-10 | Res Dev Foundation | Cripto-antagonismus von activin und tgf-b signalisierung |
| CA3062320C (en) | 2003-11-06 | 2022-11-15 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
| EP2385069A3 (en) | 2003-11-12 | 2012-05-30 | Biogen Idec MA Inc. | Neonatal Fc rReceptor (FcRn)- binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto |
| NZ579482A (en) | 2004-06-01 | 2011-02-25 | Genentech Inc | Antibody drug conjugates and methods |
| PL1791565T3 (pl) | 2004-09-23 | 2016-10-31 | Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty | |
| US20100111856A1 (en) | 2004-09-23 | 2010-05-06 | Herman Gill | Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates |
| WO2006074399A2 (en) | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Multispecific binding molecules comprising connecting peptides |
| WO2006074397A2 (en) | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto binding molecules |
| AU2007279205B2 (en) | 2006-07-28 | 2013-09-26 | Children's Memorial Hospital | Methods of inhibiting tumor cell aggressiveness using the microenvironment of human embryonic stem cells |
| US20100330081A1 (en) * | 2007-06-01 | 2010-12-30 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto binding molecules |
| EP2279414A4 (en) * | 2008-04-21 | 2011-06-29 | Merck Sharp & Dohme | PANCREATIC BETA CELL MASSE BIOMARKERS |
| EP2350131B1 (en) * | 2008-11-07 | 2017-06-07 | Research Development Foundation | Compositions and methods for the inhibition of cripto/grp78 complex formation and signaling |
| JP2013504585A (ja) | 2009-09-09 | 2013-02-07 | セントローズ， エルエルシー | 細胞外標的化薬物複合体 |
| DK2528625T3 (da) | 2010-04-15 | 2013-10-14 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepiner og konjugater deraf |
| BR112012030311A2 (pt) | 2010-06-08 | 2017-01-24 | Genentech Inc | anticorpo |
| CN103313990B (zh) | 2010-11-17 | 2016-07-20 | 基因泰克公司 | 丙氨酰美登醇抗体偶联物 |
| CN110038135B (zh) | 2011-03-17 | 2021-03-05 | 伯明翰大学 | 重新定向的免疫治疗 |
| CN103826661B (zh) | 2011-04-21 | 2019-03-05 | 西雅图基因公司 | 新的结合剂-药物缀合物(adc)及其用途 |
| WO2012155019A1 (en) | 2011-05-12 | 2012-11-15 | Genentech, Inc. | Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature pepides |
| WO2013012733A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Biogen Idec Ma Inc. | Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto |
| US11135303B2 (en) | 2011-10-14 | 2021-10-05 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| WO2013130093A1 (en) | 2012-03-02 | 2013-09-06 | Genentech, Inc. | Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds |
| CA2887894C (en) | 2012-10-12 | 2019-10-29 | Adc Therapeutics Sarl | Pyrrolobenzodiazepine - anti-psma antibody conjugates |
| CA2887895C (en) | 2012-10-12 | 2019-10-29 | Adc Therapeutics Sarl | Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd19 antibody conjugates |
| RS56520B1 (sr) | 2012-10-12 | 2018-02-28 | Adc Therapeutics Sa | Pirolobenzodiazepin-anti-cd22 konjugati antitela |
| BR112015008232A2 (pt) | 2012-10-12 | 2017-12-05 | Adc Therapeutics Sarl | conjugados pirrolbenzodiazepina-anticorpo |
| WO2014057120A1 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Adc Therapeutics Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| CA2885340C (en) | 2012-10-12 | 2016-11-08 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| ES2680153T3 (es) | 2012-10-12 | 2018-09-04 | Adc Therapeutics Sa | Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas |
| EP2935268B2 (en) | 2012-12-21 | 2021-02-17 | MedImmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| CA2894959C (en) | 2012-12-21 | 2022-01-11 | Spirogen Sarl | Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases |
| EA027910B1 (ru) | 2013-03-13 | 2017-09-29 | Медимьюн Лимитед | Пирролобензодиазепины и их конъюгаты |
| KR102066318B1 (ko) | 2013-03-13 | 2020-01-14 | 메디뮨 리미티드 | 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트 |
| JP6444902B2 (ja) | 2013-03-13 | 2018-12-26 | メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ | ピロロベンゾジアゼピン及びその結合体 |
| KR20160042080A (ko) | 2013-08-12 | 2016-04-18 | 제넨테크, 인크. | 1-(클로로메틸)-2,3-디히드로-1H-벤조[e]인돌 이량체 항체-약물 접합체 화합물, 및 사용 및 치료 방법 |
| EP3054983B1 (en) | 2013-10-11 | 2019-03-20 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US9950078B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-04-24 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| GB201317982D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| US9956299B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-05-01 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates |
| KR20170042495A (ko) | 2013-12-16 | 2017-04-19 | 제넨테크, 인크. | 펩티드모방체 화합물 및 그의 항체-약물 접합체 |
| EP3082876B1 (en) | 2013-12-16 | 2018-01-17 | Genentech, Inc. | 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment |
| KR102354207B1 (ko) | 2013-12-16 | 2022-01-20 | 제넨테크, 인크. | 펩티드모방체 화합물 및 그의 항체-약물 접합체 |
| NZ720736A (en) | 2013-12-23 | 2020-08-28 | Bayer Pharma AG | Antibody drug conjugates (adcs) with kinesin spindel protein (ksp) |
| WO2016037644A1 (en) | 2014-09-10 | 2016-03-17 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| WO2016040825A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Genentech, Inc. | Anthracycline disulfide intermediates, antibody-drug conjugates and methods |
| BR112017003236A2 (pt) | 2014-09-12 | 2017-11-28 | Genentech Inc | anticorpos elaborados com cisteína, conjugados de droga e anticorpos, método de preparação de conjugado de droga e anticorpo e composição farmacêutica |
| GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| MX2017003523A (es) | 2014-09-17 | 2017-11-08 | Genentech Inc | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de anticuerpo-disulfuro de las mismas. |
| CN107148285B (zh) | 2014-11-25 | 2022-01-04 | Adc治疗股份有限公司 | 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物 |
| AU2015358532C1 (en) | 2014-12-03 | 2020-10-29 | Genentech, Inc. | Quaternary amine compounds and antibody-drug conjugates thereof |
| CA2980611A1 (en) * | 2015-04-07 | 2016-10-13 | Paranta Biosciences Limited | A method of treating neoplasias |
| GB201506402D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
| GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
| CA2990076A1 (en) | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Antibody drug conjugates (adcs) and antibody prodrug conjugates (apdcs) with enzymatically cleavable groups |
| MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
| WO2017060322A2 (en) | 2015-10-10 | 2017-04-13 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Ptefb-inhibitor-adc |
| MA43354A (fr) | 2015-10-16 | 2018-08-22 | Genentech Inc | Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré |
| MA45326A (fr) | 2015-10-20 | 2018-08-29 | Genentech Inc | Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation |
| GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| MX2018011627A (es) | 2016-03-24 | 2019-01-10 | Bayer Pharma AG | Profarmacos de farmacos citotoxicos que tienen grupos enzimaticamente escindibles. |
| JP6943872B2 (ja) | 2016-03-25 | 2021-10-06 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 多重全抗体及び抗体複合体化薬物定量化アッセイ |
| GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| ES2858151T3 (es) | 2016-05-20 | 2021-09-29 | Hoffmann La Roche | Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso |
| WO2017205741A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Genentech, Inc. | Bioanalytical method for the characterization of site-specific antibody-drug conjugates |
| US10639378B2 (en) | 2016-06-06 | 2020-05-05 | Genentech, Inc. | Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use |
| EP3471776B1 (en) | 2016-06-15 | 2022-05-04 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Specific antibody-drug-conjugates with ksp inhibitors and anti-cd123-antibodies |
| EP3496763A1 (en) | 2016-08-11 | 2019-06-19 | Genentech, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof |
| WO2018065501A1 (en) | 2016-10-05 | 2018-04-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for preparing antibody drug conjugates |
| GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| CA3047491A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Bayer Aktiengesellschaft | Prodrugs of cytotoxic active agents having enzymatically cleavable groups |
| AU2017380871A1 (en) | 2016-12-21 | 2019-07-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Antibody drug conjugates (ADCs) having enzymatically cleavable groups |
| JP7030811B2 (ja) | 2016-12-21 | 2022-03-07 | バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト | Ｋｓｐ阻害剤を有する特異的抗体－薬物コンジュゲート（ａｄｃ） |
| GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| CN110267686B (zh) | 2017-02-08 | 2023-06-09 | Adc治疗有限公司 | 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物 |
| WO2018192944A1 (en) | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| CA3057748A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Adc Therapeutics Sa | Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate |
| CA3064804A1 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | Adc Therapeutics Sa | Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc |
| SG11202000358YA (en) | 2017-08-18 | 2020-02-27 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| BR112020004307A2 (pt) | 2017-09-20 | 2020-11-10 | Ph Pharma Co., Ltd. | análogos de tailanestatina |
| GB201803342D0 (en) | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
| GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| BR112020024549A2 (pt) | 2018-06-01 | 2021-03-02 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | conjugados anticorpo-fármaco de modulador de splicing e métodos de uso |
| GB201814281D0 (en) | 2018-09-03 | 2018-10-17 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic agents |
| TW202037381A (zh) | 2018-10-24 | 2020-10-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 綴合化學降解誘導劑及使用方法 |
| WO2020123275A1 (en) | 2018-12-10 | 2020-06-18 | Genentech, Inc. | Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins |
| CN113271981A (zh) | 2018-12-13 | 2021-08-17 | 卫材R&D管理有限公司 | 荷伯希二烯抗体-药物缀合物及使用方法 |
| US11702482B2 (en) | 2018-12-17 | 2023-07-18 | Revitope Limited | Twin immune cell engager |
| GB201901197D0 (en) | 2019-01-29 | 2019-03-20 | Femtogenix Ltd | G-A Crosslinking cytotoxic agents |
| GB2597532A (en) | 2020-07-28 | 2022-02-02 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic compounds |
| WO2024138128A2 (en) | 2022-12-23 | 2024-06-27 | Genentech, Inc. | Cereblon degrader conjugates, and uses thereof |
Family Cites Families (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ207394A (en) * | 1983-03-08 | 1987-03-06 | Commw Serum Lab Commission | Detecting or determining sequence of amino acids |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| JP3040121B2 (ja) | 1988-01-12 | 2000-05-08 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法 |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5208020A (en) * | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| US5780029A (en) | 1989-11-14 | 1998-07-14 | New York Medical College | Antidiotypic monoclonal antibodies for treatment of melanoma |
| US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| US5256643A (en) | 1990-05-29 | 1993-10-26 | The Government Of The United States | Human cripto protein |
| EP0814159B1 (en) | 1990-08-29 | 2005-07-27 | GenPharm International, Inc. | Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies |
| WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US5264557A (en) | 1991-08-23 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3 |
| US6063379A (en) | 1993-12-09 | 2000-05-16 | Centro De Inmunologia Molecular | Anti-idiotypic monoclonal antibodies and compositions including the anti-idiotypic monoclonal antibodies |
| US5981215A (en) * | 1995-06-06 | 1999-11-09 | Human Genome Sciences, Inc. | Human criptin growth factor |
| IL127193A (en) * | 1996-05-22 | 2006-10-31 | Viventia Biotech Inc | Antigen binding fragments that specifically detect cancer cells, nucleotides encoding the fragments and use thereof for the prophylaxis and detection of cancers |
| IL125608A0 (en) | 1998-07-30 | 1999-03-12 | Yeda Res & Dev | Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines |
| TR200200735T2 (tr) | 1998-12-23 | 2002-06-21 | Pfizer Inc. | CTLA-4 için insan monoklonal antikorları |
| WO2000052204A2 (en) * | 1999-02-22 | 2000-09-08 | Orntoft Torben F | Gene expression in bladder tumors |
| CA2368734C (en) | 1999-03-30 | 2005-08-23 | Japan Tobacco Inc. | Method for preparing monoclonal antibody |
| EP1179178A1 (en) * | 1999-04-20 | 2002-02-13 | William J. Kokolus | Improved method of identifying and locating immunobiologically-active linear peptides |
| US6833268B1 (en) | 1999-06-10 | 2004-12-21 | Abgenix, Inc. | Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions |
| JP2001046066A (ja) | 1999-08-03 | 2001-02-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 新規な相補性決定領域を有するヒトｖｅｇｆ受容体ｋｄｒに対する抗体 |
| CN1413220A (zh) | 1999-10-29 | 2003-04-23 | 杰南技术公司 | 抗***干细胞抗原(psca)抗体组合物及其应用方法 |
| US6663613B1 (en) | 2000-01-25 | 2003-12-16 | Bacchus Vascular, Inc. | System and methods for clot dissolution |
| KR100890873B1 (ko) * | 2000-03-03 | 2009-03-31 | 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 | 유전자 재조합 항체 및 이의 항체 단편 |
| WO2002088170A2 (en) * | 2001-04-26 | 2002-11-07 | Biogen, Inc. | Cripto blocking antibodies and uses thereof |
| US6333410B1 (en) * | 2000-08-18 | 2001-12-25 | Immunogen, Inc. | Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids |
| GB0020953D0 (en) | 2000-08-24 | 2000-10-11 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| WO2002022808A2 (en) | 2000-09-18 | 2002-03-21 | Biogen, Inc. | Cripto mutant and uses thereof |
| EP1370869B1 (en) | 2001-01-26 | 2006-12-27 | The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Detection and quantification of cripto-1 |
| WO2002096948A2 (en) | 2001-01-29 | 2002-12-05 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Engineered tetravalent antibodies and methods of use |
| WO2002060955A2 (en) | 2001-01-29 | 2002-08-08 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Modified antibodies and methods of use |
| AUPR395801A0 (en) | 2001-03-26 | 2001-04-26 | Austin Research Institute, The | Antibodies against cancer |
| US7582299B2 (en) * | 2001-04-26 | 2009-09-01 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto-specific antibodies |
| KR101008758B1 (ko) * | 2001-09-18 | 2011-01-14 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물 |
| US20040014690A1 (en) * | 2002-02-13 | 2004-01-22 | Zhenkun Ma | Macrolides with activity against methicillin-resistant staphylococcus aureus |
| JP2005520566A (ja) * | 2002-03-22 | 2005-07-14 | バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド | Ｃｒｉｐｔｏ特異的抗体 |
| DE602004022315D1 (de) * | 2003-09-15 | 2009-09-10 | Res Dev Foundation | Cripto-antagonismus von activin und tgf-b signalisierung |
| WO2006074397A2 (en) * | 2005-01-05 | 2006-07-13 | Biogen Idec Ma Inc. | Cripto binding molecules |
| EP2021510A2 (en) * | 2006-04-28 | 2009-02-11 | Biogen Idec MA Inc. | Composition and methods for the detection of cripto-3 |
-
2002
- 2002-04-17 WO PCT/US2002/011950 patent/WO2002088170A2/en active Search and Examination
- 2002-04-17 DE DE60230868T patent/DE60230868D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 HU HU0501113A patent/HUP0501113A3/hu unknown
- 2002-04-17 EE EEP200300528A patent/EE200300528A/xx unknown
- 2002-04-17 MX MXPA03009797A patent/MXPA03009797A/es active IP Right Grant
- 2002-04-17 JP JP2002585468A patent/JP4307845B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-17 EP EP10186149A patent/EP2316486A3/en not_active Withdrawn
- 2002-04-17 RS YU84903A patent/RS51635B/sr unknown
- 2002-04-17 SK SK1443-2003A patent/SK14432003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2002-04-17 CA CA2715570A patent/CA2715570A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-17 SI SI200230804T patent/SI1390389T1/sl unknown
- 2002-04-17 CN CNB028128877A patent/CN100352501C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-17 CA CA2443840A patent/CA2443840C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-17 RS RS20110024A patent/RS20110024A/en unknown
- 2002-04-17 SG SG200600551-6A patent/SG157951A1/en unknown
- 2002-04-17 GE GE5415A patent/GEP20074091B/en unknown
- 2002-04-17 CZ CZ20033208A patent/CZ20033208A3/cs unknown
- 2002-04-17 PL PL373513A patent/PL207087B1/pl unknown
- 2002-04-17 EP EP08158456A patent/EP1974749B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 NZ NZ566268A patent/NZ566268A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 DK DK02731384T patent/DK1390389T3/da active
- 2002-04-17 AT AT02731384T patent/ATE420659T1/de active
- 2002-04-17 TR TR2003/01846T patent/TR200301846T2/xx unknown
- 2002-04-17 KR KR1020037014078A patent/KR100592357B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 BR BRPI0209254-9A patent/BR0209254A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 EP EP02731384A patent/EP1390389B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-17 AT AT08158456T patent/ATE533508T1/de active
- 2002-04-17 PT PT02731384T patent/PT1390389E/pt unknown
- 2002-04-17 EA EA200301158A patent/EA007469B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-04-17 ES ES02731384T patent/ES2321065T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-23 MY MYPI20021484A patent/MY157382A/en unknown
- 2002-04-23 MY MYPI2010003173A patent/MY150237A/en unknown
- 2002-04-24 AR ARP020101492A patent/AR037223A1/es active IP Right Grant
-
2003
- 2003-10-23 US US10/693,538 patent/US7531174B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-24 IS IS6999A patent/IS2662B/is unknown
- 2003-10-27 NO NO20034805A patent/NO20034805L/no not_active Application Discontinuation
- 2003-11-14 BG BG108363A patent/BG108363A/bg unknown
-
2004
- 2004-03-11 HK HK04101788.0A patent/HK1058935A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-07-11 JP JP2005202361A patent/JP2005314436A/ja active Pending
-
2007
- 2007-04-30 US US11/799,361 patent/US7674462B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-12-22 US US12/317,476 patent/US8003763B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-01-14 US US12/353,913 patent/US20090285818A1/en not_active Abandoned
- 2009-02-05 JP JP2009025420A patent/JP4575983B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-31 US US12/415,659 patent/US7888052B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-04-08 CY CY20091100413T patent/CY1108960T1/el unknown
- 2009-07-08 AR ARP090102597A patent/AR072554A2/es not_active Application Discontinuation
- 2009-12-22 CL CL2009002199A patent/CL2009002199A1/es unknown
-
2010
- 2010-02-15 JP JP2010030683A patent/JP2010163438A/ja not_active Withdrawn
- 2010-07-16 AR ARP100102604A patent/AR077759A2/es not_active Application Discontinuation
-
2011
- 2011-08-19 US US13/213,499 patent/US8673303B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK14432003A3 (sk) | Protilátka špecifická pre Cripto, kompozícia obsahujúca takúto protilátku a jej použitie | |
| AU2002334799B2 (en) | Cripto-specific antibodies | |
| US7582299B2 (en) | Cripto-specific antibodies | |
| AU2007200809B2 (en) | Cripto Blocking Antibodies and Uses Thereof | |
| CA2480119C (en) | Cripto-specific antibodies | |
| NZ578287A (en) | Cripto blocking antibodies and uses thereof | |
| AU2002303364A1 (en) | Cripto blocking antibodies and uses thereof | |
| AU2010202840A1 (en) | Cripto Blocking Antibodies and Uses Thereof | |
| ZA200606338B (en) | Cripto blocking antibodies and uses thereof | |
| NZ536053A (en) | Cripto-specific antibodies, or biologically functional fragments thereof for use in the manufacture of a medicament for the inhibition of angiogenesis in a subject having a tumor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC9A | Refused patent application |