DE3734476A1

DE3734476A1 - Anthracyclinglycoside, verfahren zu deren herstellung, zwischenprodukte dafuer und arzneimittel, welche die anthracyclinglycoside enthalten

Info

Publication number: DE3734476A1
Application number: DE19873734476
Authority: DE
Inventors: Alberto Bragiotti; Teresa Bordoni; Pierangelo Zini; Sergio Penco
Original assignee: Farmitalia Carlo Erba SRL
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1986-10-15
Filing date: 1987-10-12
Publication date: 1988-04-21
Also published as: DK533087D0; AU7955087A; DK533087A; GR871576B; PT85916A; HUT46030A; NL8702436A; IL84146A0; US4839346A; FR2605321A1; FI874470A0; SE8703999L; MY102186A; GB2196626B; ES2007419A6; BE1000407A4; SE8703999D0; HU198505B; IT1226375B; CA1289950C

Description

Die Erfindung betrifft neue Anthracycline, Verfahren zu deren Herstellung, Arzneimittel, welche diese enthalten, und neue geschützte Aminozucker, die als Zwischenprodukte bei der Herstellung verwendet werden.

Die erfindungsgemäßen neuen Anthracyclinglycoside (IA-D) und deren pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze haben die folgende Formel:

IA:R¹ = R² = H; R³ = CH₂NH₂ IB:R¹ = OH; R² = H; R³ = CH₂NH₂ IC:R¹ = R³ = H; R² = CH₂NH₂ ID:R¹ = OH; R³ = H; R² = CH₂NH₂

Die Glycoside (IA) und (IC) kann man herstellen, indem man Daunomycinon, ein bekanntes Aglykon des Antitumormittels Anthracyclindaunorubicin, mit reaktiven geschützten Derivaten des neuen Aminozuckers 2,3,6-Trideoxy-3-aminomethyl-L- ribohexopyranose (IIA) und 2,3,6-Trideoxy-3-aminomethyl-L- arabinohexapyranose (IIB) unter den Bedingungen, wie sie in US-OS 40 98 798 beschrieben werden, umsetzt

Die Analogen (IB) und (ID) erhält man durch Bromierung von (IA) bzw. (IC) und anschließende Hydrolyse des 14-Bromderivates, und zwar vorzugsweise nach der Methode gemäß US-PS 41 12 076.

Die Erfindung betrifft somit auch ein Verfahren zur Herstellung eines Anthracyclinglycosids der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

(i) Daunomycinon mit einem reaktiven Derivat von 2,3,6-Trideoxy-3-aminomethyl-L-ribohexopyranose oder -L-arabinohexopyranose, in welcher die Amino- und 4-Hydroxygruppen geschützt sind, umsetzt und die Schutzgruppen von dem so erhaltenen Produkt unter Ausbildung eines Anthracyclinglycosids der Formel (I), in welchem R¹ Wasserstoff bedeutet, entfernt;
(ii) gewünschtenfalls das Glycosid der Formel (I) in ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon überführt;
(iii) gewünschtenfalls das Glycosid der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bromiert und das so erhaltene 14-Bromderivat unter Ausbildung des entsprechenden Glycosids der Formel (I), worin R¹ Hydroxy ist, hydrolysiert; und
(iv) gewünschtenfalls das Glycosid der Formel (I), worin R¹ Hydroxy ist, in ein pharmazeutisch annehmbares Salz überführt.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Anthracyclinglycoside und deren Salze wird ausführlich nachfolgend unter Bezugnahme auf die Herstellung der ersten Zwischenprodukte (5) und (6) beschrieben.

Es gibt zwei Syntheseverfahren, um die Verbindungen (5) und (6) zu erhalten. Bei dem ersten Verfahren, wie dies im nachfolgenden Schema 1 gezeigt wird, erfolgt die Addition von Nitromethan zu dem bekannten 3-Ketozucker (1) unter Erhalt des Nitroderivates (2), aus dem man nach der angegebenen Reaktionsfolge eine Mischung von (5) und (6) erhält, wobei sich überwiegend der Zucker mit der L-Ribokonfiguration bildet (5 : 6 = 3 : 1).

Schema 1

Die Zugabe von Nitromethan in Gegenwart von Natriummethoxid ergibt den entsprechenden Nitroalkohol (2), der in einer Ausbeute von 85% nach dem Kristallisieren erhalten wird. Das Nitroen (3), das man leicht aus (2) erhält, unterliegt einer Verschiebung der Doppelbindung unter basischen Bedingungen und ergibt den ungesättigten Nitrozucker (4). Wird dieser in Gegenwart von Raney-Nickel reduziert, erhält man eine Mischung der beiden Aminozucker (5) und (6), die man chromatografisch als N-Trifluoroacetylderivate trennen kann.

Eine alternative Route wird im nachfolgenden Schema 2 gezeigt. Dabei erhält man die Zwischenprodukte (5) oder (6) stereoselektiv, indem man als Schlüssel-Zwischenprodukt das bekannte exocyclische Olefin (7) (R. M. Giuliano, Carbohydr. Res. 131 [1984], 341-345), das man leicht aus (1) erhält, verwendet. Die Hydroborierung von (7) ergibt stereoselektiv den entsprechenden Alkohol (9). Aus diesem Zwischenprodukt kann man das Zwischenprodukt (5) über die Bildung des entsprechenden Azids, Hydrolyse der O-Schutzgruppe, Reduktion und weiterer N-Trifluoracetylierung des neuen Zuckers gewinnen. Alternativ erhält man bei der Oxidation von (9) zu (12) und anschließender alkalischer Behandlung das Zwischenprodukt (13) mit der Arabinokonfiguration. Das Zwischenprodukt (13) wird zum Alkohol (14) reduziert. Der Alkohol (14) ergibt dann, wenn man die gleiche Reaktionsfolge anwendet, für die Umwandlung von (9) in (5) den N-geschützten Aminozucker (6) mit der L-Arabinokonfiguration.

Schema 2

Die Herstellung der Daunorubicinanalogen (IA) und (IC) erfolgt durch Umsetzen von Daunomycinon mit 1-Chloro-N,O-trifluoracetylderivaten (IIIA) oder (IIIB)

die durch Behandlung von (5) oder (6) mit Trifluoressigsäureanhydrid und anschließendes Umsetzen mit trockenem Chlorwasserstoff erhalten werden. Das so erhaltene geschützte Glycosid wird, nachdem man die N-Trifluoracetyl-Schutzgruppe durch schwache alkalische Hydrolyse entfernt hat, in das neue Anthracyclin (IA) oder (IC) überführt. Dieses Anthracyclin kann gewünschtenfalls als Hydrochlorid isoliert werden. Dies erfolgt dadurch, daß man typischerweise das Glycosid mit einer methanolischen Lösung von Chlorwasserstoff behandelt und dann das Glycosid als Hydrochlorid gewinnt.

Die Herstellung der Doxorubicinanaloge (IB) und (ID) erfolgt, indem man (IA) oder (IC) bromiert, z. B. mit Brom in Methylendichlorid, unter Erhalt des 14-Bromderivates, aus dem man dann, nach einer Hydrolyse, die typischerweise mit einer wäßrigen Natriumformiatlösung durchgeführt wird, das neue Glycosid (IB) oder (ID) erhält. Auch diese neuen Glycoside können als Hydrochlorid isoliert werden. Dies erfolgt, indem man das Glycosid mit einer methanolischen Chlorwasserstofflösung behandelt und das Glycosid dann als Hydrochlorid gewinnt.

Die Erfindung betrifft auch Arzneimittel, welche als aktiven Bestandteil ein Anthracyclinglycosid der Formeln (IA) bis (ID) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel enthalten. Man kann die üblichen Träger verwenden, und die Arzneimittel können in üblicher Weise formuliert werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind zur therapeutischen Behandlung des menschlichen oder tierischen Körpers geeignet. Ganz besonders sind die erfindungsgemäßen Verbindungen als Antitumormittel geeignet, indem man eine therapeutisch wirksame Menge der Verbindung einem Patienten verabreicht.

Die Erfindung wird in den nachfolgenden Beispielen beschrieben.

Beispiel 1 Herstellung von Methyl-2,6-dideoxy-3-C-nitromethyl-alpha-L-ribohexapyranosid (2)

Eine 1-molare Lösung von Natriummethoxid in Methanol (20 ml, 20 mMol) wurde tropfenweise unter Rühren zu einer Lösung von Methyl-2,6-dideoxy-alpha-L-erythro-hexapyranosid-3-ulose (1) (1,60 g, 10 mMol) in 70 ml trockenem Nitromethan gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Dowex 50 W×8 (H⁺)-Harz entionisiert, und das Filtrat wurde zu einem Feststoff eingedampft.

Durch fraktionierte Kristallisation des Produktes aus Ether erhielt man 1,66 g (75%) Methyl-2,6-dideoxy-3-C-nitromethyl- alpha-L-ribo-hexopyranosid (2).

Das PMR-Spektrum (200 MHz, CHCl₃) zeigte folgende Absorptionen:

1,35 (d, J = 6,2 Hz, 3 H, CH₃-5),
2,01 (dd, J = 3,7, 15,0 Hz, 1 H, H-2ax),
2,24 (bd, J = 11,7 Hz, 1 H, OH-4),
2,32 (dd, J = 1,1, 15,0 Hz, 1 H, H-2e),
3,06 (dd, J = 9,3, 11,7 Hz, 1 H, H-4),
3,38 (s, 3 H, OCH₃),
3,70 (qd, J = 6,2, 9,3 Hz, 1 H, H-5),
4,26 (d, J = 1,5 Hz, 1 H, OH-3),
4,34 (dd, J = 1,5, 11,1 Hz, 1 H, CH(H)-NO₂),
4,74 (d, J = 11,1 Hz, 1 H, CH(H)-NO₂),
4,84 (dd, J = 1,1, 3,7 Hz, 1 H, H-1) delta.

Das ¹³C-NMR-Spektrum (50 MHz, CDCl₃) zeigte Absorptionen bei:

17,8 (CH₃-5); 36,7 (C-2); 55,3 (OCH₃); 65,1 (C-5);
71,5 (C-3); 73,5 (C-4); 80,8 (CH₂NO₂); 97,7 (C-1).

Beispiel 2 Herstellung von Methyl-3-nitromethyl-2,3,6-trideoxy-hex-2-enopyranosid (4)

Die Verbindung (2) (1,1 g, 5 mMol) wurde mit 70 ml Essigsäureanhydrid und 0,7 g p-Toluolsulfonsäuremonohydrat über Nacht bei Raumtemperatur behandelt. Die Reaktionsmischung wurde zu Eiswasser gegossen und mit Natriumhydrogencarbonat unter Rühren behandelt. Nach dem Neutralisieren ließ man die Mischung unter Rühren auf Raumtemperatur erwärmen und extrahierte dann mit Ethylacetat.

Das organische Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei man 1,030 g (84%) von (3) als weißen Sirup erhielt, der ohne weitere Reinigung in der nachfolgenden Stufe verwendet wurde.

Verbindung (3) (0,98 g, 4 mMol), gelöst in 0,1 M methanolischem Natriummethoxid (70 ml) wurde bei Raumtemperatur gehalten. Das Verfahren wurde durch Dünnschichtchromatografie über Kieselgel unter Verwendung von Methylenchlorid : Methanol (10 : 1 V/V) überwacht. Nachdem die Reaktion vollständig war, neutralisierte man mit in Methanol gelöster Essigsäure und dampfte ein, wobei man einen Sirup erhielt, der durch Entspannungschromatografie mit Methylenchlorid : Methanol gereinigt wurde (19 : 1 V/V) und wobei man 0,675 g (83%) von (4) als Sirup erhielt.

Das PMR-Spektrum (200 MHz, CHCl₃) zeigte Absorptionen bei:

1,33 (d, J = 6,2 Hz, 3 H, CH₃-5),
2,38 (bd, J = 7,0 Hz, 1 H, OH-4),
3,42 (s, 3 H, OCH₃),
3,76 (dq, J = 9,1, 6,2 Hz, 1 H, H-5),
3,99 (ddd, J = 9,1, 7,0, 2,0 Hz, 1 H, H-4),
4,86, 5,30 (zwei d, J = 13,3 Hz, 2 H, CH₂NO₂),
4,84 (d, J = 3,0 Hz, 1 H, H-1),
5,90 (dd, J = 3,0, 2,0 Hz, 1 H, H-2) delta.

Beispiel 3 Herstellung von Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracetamidomethyl- alpha-L-ribo-hexopyranosid (5) und Methyl-2,3,6- trideoxy-3-trifluoracetamidomethyl-alpha-L-arabino-hexopyranosid (6)

Die Verbindung (4) (0,61 g, 3 mMol) in 50 ml Wasser wurde in Gegenwart von 0,6 g neutralem Raney-Nickel unter einem Druck von 10 bar hydriert. Nach dem Abfiltrieren des Katalysators wurde der pH-Wert der Lösung mit wäßriger Salzsäure auf 6 eingestellt und dann wurde eingedampft. Der Rückstand wurde mit verschiedenen Anteilen von Toluol und anschließenden Verdampfen behandelt, wobei man einen farblosen Sirup erhielt, der in 20 ml Methylendichlorid suspendiert und mit 4 ml Trifluoressigsäureanhydrid bei 0°C behandelt wurde.

Nach 2 Stunden wurde das Reaktionsgemisch zur Trockne eingedampft und mit 20 ml Methanol behandelt. Nach dem Stehen bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung zur Trockne eingedampft. Die Dünnschichtchromatografie des Rückstandes mit Methylendichlorid : Methanol (10 : 1) zeigte das Vorhandensein von zwei Produkten mit Rf 0,45 und Rf 0,40.

Der erhaltene Rückstand wurde durch Entspannungschromatografie gereinigt, unter Verwendung von Methylenchlorid : Methanol (97 : 3) als Eluiermittel. Man erhielt 0,55 g (67%) (5). Das PMR-Spektrum zeigte Absorptionen bei:

1,24 (d, 3 H, CH₃-5),
1,71 (ddd, J = 2,7, 5,0, 14,5 Hz, 1 H, H-2ax),
1,87 (ddd, J = 4,1, 5,5, 14,5 Hz, 1 H, H-2e),
2,21 (m, 1 H, H-3),
3,32 (s, 3 H, OCH₃),
3,53 (dd, J = 4,7, 8,1 Hz, 1 H, H-4),
3,60 (m, 2 H, CH₂NH),
3,80 (qd, J = 6,4, 8,1 Hz, 1 H, H-5),
4,61 (dd, J = 2,7, 4,1 Hz, 1 H, H-1) delta;
FD-MS 271 (M^+.).

Weiterhin erhielt man 0,185 g (23%) von (6). Das PMR-Spektrum von (6) zeigte Absorptionen bei:

1,26 (d, J = 6,3 m, 3 H, CH₃-5),
1,50 (ddd, J = 3,6, 13,5, 13,5 Hz, 1 H, H-2ax),
1,80 (ddd, J = 1,3, 4,1, 13,5 Hz, 1 H, H-2e),
2,0-2,2 (m, 1 H, H-3),
2,29 (d, J = 5,1 Hz, 1 H, OH-4),
3,0-3,1 (m, 1 H, CH(H)-NH),
3,06 (ddd, J = 5,1, 9,3, 9,6 Hz, 1 H, H-6),
3,34 (s, 3 H, OCH₃),
3,64 (dq, J = 6,3, 9,3 Hz, 1 H, H-5),
3,76 (ddd, J = 3,8, 8,0, 14,0 Hz, 1 H, CH(H)-NH),
4,67 (dd, J = 1,3, 3,6 Hz, 1 H, H-1) delta;
FD-MS 271 (M^+.).

Beispiel 4 Herstellung von Methyl-4-t-butyldimethylsilyl-3-(hydroxymethyl)- 2,3,6-trideoxy-alpha-L-ribo-hexopyranosid (9)

3,16 g Methyl-2,3,6-trideoxy-3-C-methylen-alpha-L-erythrohexopyranosid (7), gelöst in 30 ml N,N-Dimethylformamid, wurden zu 3,650 g t-Butyldimethylsilylchlorid und 3,27 g Imidazol bei einer Temperatur von 35°C im Laufe von 10 Stunden zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde zu Eiswasser gegossen und mit Dichlormethan extrahiert. Das Extrakt wurde mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei man 4,850 g (89%) (8) als Sirup erhielt.

4,5 g (16,5 mMol) von (8) in 30 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden unter einer Stickstoffatmosphäre mit 27 ml wasserfreier Tetrahydrofuranlösung eines 1 M Moran-tetrahydrofurankomplexes bei 0°C behandelt.

Die Lösung wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, dann abgekühlt und mit 20 ml Tetrahydrofuran : Wasser (1 : 1) und 25,5 ml 2 N Natriumhydroxid behandelt und im Anschluß daran 10 Minuten mit 20,5 ml 30%igem Wasserstoffperoxid behandelt.

Die Mischung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, nochmals abgekühlt und mit 50 ml gesättigtem wäßrigem Natriumthiosulfat zur Zersetzung des überschüssigen Peroxids behandelt.

Zu der wäßrigen Schicht wurde bis zur Sättigung Natriumchlorid gegeben und die wäßrige Schicht wurde dann abgetrennt und mit Methylendichlorid extrahiert. Die organische Schicht wurde getrocknet und eingedampft, wobei man 4,65 g (97%) von (9) erhält.

Das PMR-Spektrum zeigte Absorptionen bei:

0,08, 0,09 (zwei s, 6 H, Si(CH₃)₂,
0,88 (s, 9 H, SiC(CH₃)₃),
1,17 (d, J = 6,4 Hz, 3 H, CH₃-5),
1,86 (m, 2 H, CH₂-2),
2,20 (m, 1 H, H-3),
2,82 (m, 1 H, CH₂OH),
3,31 (s, 3 H, OCH₃),
3,55 (dd, J = 5,3, 9,2 Hz, 1 H, H-4),
3,76 (ddd, J = 6,0, 6,9, 12,0 Hz, 1 H, CH(H)-OH),
3,90 (qd, J = 6,4, 9,2 Hz, 1 H, H-5),
4,01 (ddd, J = 4,0, 7,0, 12,0 Hz, 1 H, CH(H)-OH),
4,58 (t, J = 2,9, 1 H, H-1) delta.

Beispiel 5 Herstellung von Methyl-3-azidomethyl-4-t-butyldimethyldimethylsilyl- 2,3,6-trideoxy-alpha-L-ribohexopyranosid (11)

2,9 g (10 mMol) von (9), gelöst in 20 ml trockenem Pyridin, wurden mit 2 ml Methasulfonylchlorid bei 0°C über Nacht behandelt. Die Mischung wurde zu Eiswasser gegossen und die wäßrige Mischung wurde mit Methylenchlorid extrahiert. Die vereinten organischen Extrakte wurden mit wäßriger Chlorwasserstoffsäure, wäßrigem Natriumhydrogencarbonat und dann mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Beim Eindampfen des Filtrates erhielt man 3,40 g (92%) von (10).

3 g (8,15 mMol) von (10), gelöst in 30 ml trockenem N,N-Dimethylformamid, wurden mit einem Überschuß an Natriumazid (3,2 g) behandelt. Die Mischung wurde 30 Minuten unter Rückfluß behandelt und dann unter Rühren zu Eiswasser gegossen. Anschließend wurde mit Methylendichlorid extrahiert. Der erhaltene Sirup wurde durch Entspannungschromatografie unter Verwendung von Methylenchlorid als Eluiermittel gereinigt. Man erhielt 2,50 g (80%) reines (11).

IR: 2110 cm^-1 (Azid).

Beispiel 6 Herstellung von Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracetamidomethyl- alpha-L-ribo-hexopyranosid (5)

2,50 g (8 mMol) (11) wurden in 50 ml Tetrahydrofuran bei Raumtemperatur gelöst. Zu der Lösung wurden 5 g Tetrabutylammoniumfluorid gegeben. Die Lösung wurde 1 Stunde gerührt und dann mit Methylendichlorid und Wasser verdünnt. Die wäßrige Schicht wurde mit Methylenchlorid extrahiert und die vereinten organischen Lösungen wurden mit Wasser gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und dann zur Trockne eingedampft.

Der erhaltene Sirup wurde in 75 ml trockenem Methanol gelöst und dazu wurden 20% Palladium-auf-Kohle (1 g) gegeben und die Mischung wurde 3 Stunden bei 10 bar hydriert, anschließend filtriert und dann zur Trockne eingedampft.

Eine Lösung des erhaltenen Sirups in wasserfreiem Methylenchlorid (40 ml) wurde bei 0°C mit Trifluoressigsäureanhydrid (6 ml) behandelt. Nach 2 Stunden wurde die Mischung zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in wasserfreiem Methanol (50 ml) über Nacht gelöst. Das Lösungsmittel wurde entfernt und der Rückstand wurde durch Entspannungschromatografie mit Methylenchlorid : Methanol (97 : 3) als Eluiermittel gereinigt.

Man erhielt 1,540 g (71%) von (5).

Beispiel 7 Herstellung von Methyl-4-t-butyldimethylsilyl-3-formyl- 2,3,6-trideoxy-alpha-L-ribo-hexopyranosid (12)

Zu 0,5 ml (5,5 mMol) Oxalylchlorid, gelöst in 15 ml Methylenchlorid bei -60°C, wurden unter Rühren 0,85 ml (11 mMol) Dimethylsulfoxid, gelöst in 5 ml Methylenchlorid, gegeben. Die Reaktionsmischung wurde 5 Minuten gerührt und dann wurden 1,45 g (5 mMol) (9), gelöst in 10 ml Methylenchlorid, zugegeben. Nach 15 Minuten wurden 3,5 ml Triethylamin zugegeben und die Reaktionsmischung wurde 5 Minuten gerührt und dann auf Raumtemperatur erwärmen gelassen. 25 ml Wasser wurden zugegeben und die wäßrige Schicht wurde mit Methylenchlorid reextrahiert. Die organischen Schichten wurden vereint, mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und dann über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und eingedampft, wobei man 1,34 g (93%) von (12) erhielt.

Das PMR-Spektrum zeigte Adsorptionen bei:

0,03, 0,06 (zwei s, 6 H, Si(CH₃)₂),
0,84 (s, 9 H, SiC(CH₃)₃),
1,25 (d, J = 6,2 Hz, 3 H, CH₃-5),
1,97 (ddd, J = 3,4, 6,0, 14,0 Hz, 1 H, H-2ax),
2,09 (ddd, J = 1,4, 2,6, 14,0 Hz, 1 H, H-2e),
2,54 (dddd, J = 3,0, 2,6, 5,6, 6,0 Hz, 1 H, H-3),
3,30 (s, 3 H, OCH₃),
3,54 (dd, J = 5,6, 9,7 Hz, 1 H, H-4),
4,03 (qd, J = 6,2, 9,7 Hz, 1 H, H-5),
4,56 (dd, J = 1,4, 3,4 Hz, 1 H, H-1),
10,02 (d, J = 3,0 Hz, 1 H, CHO) delta.

Beispiel 8 Herstellung von Methyl-4-t-butyldimethylsilyl-3-formyl-2,3,6- trideoxy-alpha-L-arabino-hexopyranosid (13)

1,30 g (4,5 mMol) von (12), gelöst in 30 ml trockenem Triethylamin, wurden unter Rückfluß gerührt.

Das Fortschreiten der Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatografie über Kieselgel unter Verwendung von 9 : 1 Toluol : Aceton als Entwickler überwacht. Nach dem Eindampfen der Reaktionsmischung wurde der erhaltene Rückstand durch eine kurze Kieselgelsäule unter Verwendung von Toluol als Eluiermittel filtriert, wobei man 1,25 g (96%) (13) erhielt.

Das PMR-Spektrum zeigte Absorptionen bei:

0,01, 0,08 (zwei s, 6 H, Si(CH₃)₂),
0,86 (s, 9 H, SiC (CH₃)₃),
1,22 (d, J = 6,2 Hz, 3 H, CH₃-5),
1,6-1,9 (m, 2 H, CH₂-2),
2,93 (dddd, J = 2,5, 5,0, 9,2, 12,0 Hz, 1 H, H-3),
3,33 (s, 3 H, OCH₃),
3,51 (dd, J = 9,2, 9,2 Hz, 1 H, H-4),
3,66 (qd, J = 6,2, 9,2 Hz, 1 H, H-5),
4,68 (dd, J = 1,5, 3,5 Hz, 1 H, H-1),
9,77 (d, J = 2,5 Hz, 1 H, CHO) delta.

Beispiel 9 Herstellung von Methyl-4-t-butyldimethylsilyl-3-hydroxymethyl- 2,3,6-trideoxy-alpha-L-arabino-hexopyranosid (14)

1,2 g (4,15 mMol) von (13) wurden in 50 ml Methanol gelöst und mit Natriumborhydrid (0,1 g) bei 0°C während 20 Minuten reduziert. Das überschüssige Natriumborhydrid wurde durch Zugabe von Aceton verbraucht. Nach der Zugabe von 25 ml Wasser wurde die Lösung mit Essigsäure neutralisiert und dann mit Methylenchlorid extrahiert. Beim Eindampfen der organischen Extrakte bis zur Trockne erhielt man 1,2 g (100%) von (14).

Das PMR-Spektrum zeigte Absorptionen bei:

0,08, 0,09 (zwei s, 6 H, Si(CH₃)₂),
0,88 (s, 9 H, SiC(CH₃)₃),
1,20 (d, J = 6,3 Hz, 3 H, CH₃-5),
1,66 (ddd, J = 3,6, 13,0, 1 H, H-2ax),
1,85 (ddd, J = 1,4, 2,5, 13,0 Hz, 1 H, H-2e),
1,9-2,0 (m, 1 H, H-3),
3,22 (dd, J = 9,4, 9,4 Hz, 1 H, H-4),
3,33 (s, 3 H, OCH₃),
3,6-3,7 (m, 3 H, H-5, CH₂OH),
4,68 (dd, J = 1,4, 3,6 Hz, 1 H, H-1) delta.

Beispiel 10 Herstellung von Methyl-2,3,6-trideoxy-3-trifluoracetamidomethyl- alpha-L-arabino-hexopyranosid (6)

Die Synthese der Titelverbindung erfolgte nach dem Verfahren gemäß Beispielen 5 und 6, wobei man von (14) ausging und dann mesylierte und anschließend eine Azidolyse durchführte.

Beispiel 11 Herstellung von 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoracetamidomethyl- 4-trifluoracetyl-alpha-L-ribo-hexopyranosylchlorid (III-A)

Eine Lösung aus 0,5 g (1,85 mMol) (5) in 10 ml Essigsäure und 40 ml Wasser wurde 1 Stunde bei 100°C umgesetzt. Die Lösung wurde im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in 25 ml Methylendichlorid gelöst und bei 0°C mit 3 ml Trifluoressigsäureanhydrid behandelt. Nach 2 Stunden bei 0°C und 1 Stunde bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch eingedampft und man erhielt einen Sirup, der direkt in 15 ml wasserfreiem Diethylether gelöst wurde. Die Lösung wurde bei 0°C mit trockenem Chlorwasserstoff gesättigt.

Nach dem Stehen über Nacht bei 0°C wurde das Reaktionsgemisch im Vakuum eingedampft, wobei man die Titelverbindung erhielt, die für die weitere Umsetzung ohne weitere Reinigung geeignet war.

Beispiel 12 Herstellung von 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epidaunorubicin (I-A)

Zu einer Lösung von Daunomycinon (0,400 g, 1 mMol) in 50 ml wasserfreiem Methylendichlorid wurde 2,3,6-Trideoxy-3- trifluoracetamidomethyl-4-trifluoracetyl-L-ribo-hexopyranosylchlorid- (0,37 g, 1 mMol), hergestellt gemäß Beispiel 11, in 15 ml Methylendichlorid gegeben, sowie 4 g eines Molekularsiebes (4×10^-10 m [4 Å], Merck). Die Mischung wurde dann mit 0,28 g Silbertrifluormethansulfonat in 15 ml wasserfreiem Diethylether unter kräftigem Rühren behandelt.

Nach 15 Minuten wurde das Reaktionsgemisch mit einer gesättigten wäßrigen Natriumhydrogencarbonatlösung behandelt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Wasser gewaschen und dann zur Trockne eingedampft.

Der feste Rückstand wurde in trockenem Methanol (25 ml) gelöst und über Nacht stehengelassen. Das beim Abdampfen des Lösungsmittels erhaltene Rohprodukt wurde über einer Kieselgelsäule unter Verwendung von Methylendichlorid : Aceton (19 : 1) als Eluiermittel chromatografiert, wobei man reines 3′-Desamino-3′-trifluoracetamidomethyl-3′,4′-epi-daunorubicin (0,410 g, 63%), F: 161 bis 163°C, erhielt.

Das PMR-Spektrum zeigte Absorptionen bei:

1,30 (d, J = 6,1 Hz, 3 H, CH₃-5′),
1,7-2,5 (m, 5 H, CH₂-8, CH₂-2′, CH-3′),
2,41 (s, 3 H, COCH₃),
2,88 (d, J = 18,9 Hz, 1 H, H-10ax),
3,18 (dd, J = 1,5, 18,9 Hz, 1 H, H-10e),
3,4-3,8 (m, 3 H, CH₂-NH, H-5′),
4,07 (s, 3 H, OCH₃-4),
4,53 (s, 1 H, OH-9),
5,23 (m, 1 H, H-7),
5,29 (dd, J = <1, 5,0 Hz, 1 H, H-1′),
7,38 (d, J = 8,3 Hz, 1 H, H-3),
7,76 (dd, J = 8,3, 8,3 Hz, 1 H, H-2),
8,01 (d, J = 8,3 Hz, 1 H, H-1),
13,26 (s, 1 H, OH-11),
13,97 (s, 1 H, O-6) delta.

Eine Lösung von 0,4 g der obengenannten Verbindung in 10 ml Aceton wurde mit 40 ml einer 0,1 N wäßrigen Natriumhydroxidlösung behandelt und unter Stickstoff bei 15°C gerührt. Nach 1 Stunde wurde das Reaktionsgemisch mit 1 N wäßriger Chlorwasserstoffsäure auf den pH-Wert 3,5 eingestellt und dann zum Entfernen von Verunreinigungen mit Methylendichlorid extrahiert.

Die wäßrige Phase wurde auf den pH-Wert 8 eingestellt und dann mit Methylendichlorid extrahiert.

Die vereinten organischen Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet, auf ein kleines Volumen konzentriert und mit 0,25 N methanolischer Chlorwasserstoffsäure auf den pH-Wert 4,5 angesäuert. Bei Zugabe von überschüssigem Diethylether erhielt man 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epi-daunorubicin (I-A) als Hydrochlorid (3,000 g), F: 151-153°C (unter Zersetzung).

Beispiel 13 Herstellung von 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epidoxorubicin (I-B)

Eine Lösung aus 0,200 g 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epidaunorubicin- hydrochlorid (I-A), hergestellt gemäß Beispiel 12, in Mischung mit 3 ml wasserfreiem Methano, 8 ml Dioxan und 0,2 ml Ethylorthoformiat, wurde mit 0,45 ml einer Lösung, enthaltend 0,95 g Brom in 10 ml Methylendichlorid behandelt.

Nach 1,5 Stunden bei 15°C wurde das Reaktionsgemisch zu einer Mischung aus 40 ml Diethylether und 40 ml Petrolether gegossen.

Der erhaltene rote Niederschlag wurde abfiltriert und mit Diethylether gewaschen und dann in einer Mischung aus 7,5 ml Aceton und 7,5 ml 0,25 N wäßrigem Bromwasserstoff gelöst. Nach 1 Tag bei 30°C wurde das Reaktionsgemisch mit 0,35 g Natriumformiat in 4 ml Wasser behandelt und 2 Tage bei 30°C gerührt.

Das Reaktionsgemisch wurde dann mit Methylendichlorid extrahiert, um einige lipophile Verunreinigungen zu entfernen. Die wäßrige Phase wurde mit wäßriger Natriumbicarbonatlösung auf den pH-Wert 7,6 eingestellt und dann wiederholt mit Methylendichlorid extrahiert. Die vereinten organischen Extrakte wurden über Natriumsulfat getrocknet und auf ein kleines Volumen im Vakuum eingedampft. Zu der erhaltenen roten Lösung, die mit wasserfreiem methanolischen Chlorwasserstoff auf den pH-Wert 3,5 eingestellt wurde, wurde überschüssiger Diethylether gegeben, wobei man 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epi-doxorubicin (I-B, 0,180 g) erhielt.

Beispiel 14 Herstellung von 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoroacetamidomethyl- 4-trifluoracetyl-L-arabino-hexopyranosylchlorid (III-B)

Die Synthese der Titelverbindung erfolge, indem man von (6) ausging und dann das Verfahren gemäß Beispiel 11 durchführte.

Beispiel 15 Herstellung von 3′-Desamino-3′-aminomethyl-4′-epi-daunorubicin (1-C)

Die Synthese der Titelverbindung erfolgte ausgehend von Daunomycinon und 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoracetamidomethyl-4- trifluoracetyl-L-arabino-hexapyranosylchlorid (III-B) nach der in Beispiel 12 beschriebenen Verfahrensweise.

Das PMR-Spektrum des 3′-Desamino-3′-trifluoracetamidomethyl- 3′,4′-epi-daunorubicins zeigte Absorptionen bei:

1,32 (d, J = 6,0 Hz, 3 H, CH₃-5′),
1,5-1,9 (m, 3 H, CH₂′, H-3′),
2,0-2,4 (m, 2 H, CH₂-8),
2,42 (s, 3 H, COCH₃),
2,64 (d, J = 5,3 Hz, 1 H, OH-4),
2,94 (d, J = 18,9 Hz, 1 H, H-10ax),
3,05 (m, 1 H, H-4′),
3,23 (dd, J = 1,5, 18,9 Hz, 1 H, H-10e),
3,6-3,8 (m, 2 H, CH₂-NH),
3,87 (qd, J = 6,0, 9,2 Hz, 1 H, H-5′),
4,08 (s, 3 H, OCH₃-4),
4,59 (s, 1 H, OH-9),
5,30 (dd, J = 1,9, 3,7 Hz, 1 H, H-7),
5,45 (dd, J<1, 3,5 Hz, 1 H, H-1′),
7,25 (m, 1 H, NH-COCF₃),
7,39 (d, J = 8,1 Hz, 1 H, H-3),
7,78 (dd, J = 8,1, 8,1 Hz, 1 H, H-2),
8,03 (d, J = 8,1 Hz, 1 H, H-1),
13,28 (s, 1 H, OH-11),
14,00 (s, 1 H, OH-6) delta.

3′-Desamino-3′-aminomethyl-4′-epi-daunorubicin (I-C) erhielt man als Hydrochlorid in Form von roten Kristallen, F: 164 bis 165°C (unter Zersetzung).

Beispiel 16 Herstellung von 3′-Desamino-3′-aminomethyl-4′-epi-doxorubicin (I-D)

Verbindung (I-C) wurde wie in Beispiel 15 hergestellt und wurde in das entsprechende 14-Hydroxyderivat nach der in Beispiel 13 beschriebenen Verfahrensweise überführt.

3′-Desamino-3′-aminomethyl-4′-epi-doxorubicin (I-D) erhielt man als Hydrochlorid in Form von roten Kristallen, F: 170 bis 172°C (Zersetzung).

Biologische Aktivität von IB

Die Verbindung (IB) wurde zum Vergleich mit Daunorubicin (DNR) gegen HeLa- und P388-Zellen in vivo (Tabelle 1) geprüft. Die in vivo-Wirkung von (I-B) gegen disseminierte Groß-Leukämie wird in Tabelle 2 gezeigt. Hier war (Ib), i. v. verabreicht weniger wirksam als DNR, jedoch war die neue Verbindung bei der maximalen tolerierten Dosis (32,11 mg/kg) aktiver als DNR (M×TD = 15 mg/kg).

Tabelle 1

Cytotoxische Aktivität von IB im Vergleich zu Daunorubicin

Tabelle 2

Wirkung gegen Gross-Leukämie ^A)

Claims

1. Anthracyclin der Formel (I) worin R¹ Wasserstoff oder Hydroxy bedeutet und eines von R² oder R³ Wasserstoff und das andere Aminomethyl bedeutet, sowie pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze davon.

2. Verbindung gemäß Anspruch 1, nämlich 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epi-daunorubicin oder dessen Hydrochlorid.

3. Verbindung gemäß Anspruch 1, nämlich 3′-Desamino-3′-aminomethyl-3′,4′-epi-doxorubicin oder dessen Hydrochlorid.

4. Verbindung gemäß Anspruch 1, nämlich 3′-Desamino-3′-aminomethyl-4′-epi-daunorubicin oder dessen Hydrochlorid.

5. Verbindung gemäß Anspruch 1, nämlich 3′-Desamino-3′-aminomethyl-4′-eppi-doxorubicin oder dessen Hydrochlorid.

6. Verfahren zur Herstellung eines Anthracyclinglycosids der Formel (I) gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon, dadurch gekennzeichnet, daß man

7. Verfahren gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die Stufe (i) durchführt, indem man Daunomycinon mit einer Verbindung der Formel (III-A) oder (III-B) umsetzt und anschließend die Trifluoracetyl-Schutzgruppen entfernt.

8. Verfahren gemäß Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Stufe (ii) durchgeführt wird, indem man das Glycosid der Formel (I) mit einer methanolischen Chlorwasserstofflösung behandelt und das Glycosid der Formel (I) als Hydrochlorid gewinnt.

9. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß man die Stufe (iii) durchführt, indem man das Glycosid der Formel (I) mit Brom in Methylenchlorid behandelt und das so erhaltene 14-Bromderivat mit einer wäßrigen Natriumformiatlösung hydrolysiert.

10. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man die Stufe (iv) durchführt, indem man das Glycosid der Formel (I), in welcher R¹ Hydroxy bedeutet, mit einer methanolischen Chlorwasserstofflösung behandelt und das Glycosid der Formel (I), worin R¹ Hydroxy bedeutet, als Hydrochlorid gewinnt.

11. Arzneimittel, umfassend ein Anthracyclinglycosid der Formel (I) oder ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz davon, gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.

12. Verwendung eines Anthracyclinglycosids oder eines Salzes davon, der Formel (I) gemäß Anspruch 1, zur Herstellung eines Antitumormittels.

13. 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoroacetamidomethyl-4-trifluoroacetyl- L-ribo-hexopyranosylchlorid der Formel (III-A)

14. 2,3,6-Trideoxy-3-trifluoroacetamidomethyl-4-trifluoroacetyl- L-arabino-hexapyranosylchlorid der Formel