DE2616939C3 - Verwendung von Placentaextraktrückständen und Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts - Google Patents
Verwendung von Placentaextraktrückständen und Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen PlacentaextraktsInfo
- Publication number
- DE2616939C3 DE2616939C3 DE19762616939 DE2616939A DE2616939C3 DE 2616939 C3 DE2616939 C3 DE 2616939C3 DE 19762616939 DE19762616939 DE 19762616939 DE 2616939 A DE2616939 A DE 2616939A DE 2616939 C3 DE2616939 C3 DE 2616939C3
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- collagen
- residues
- placenta extract
- placenta
- soluble
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims description 56
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims description 56
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims description 56
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 title claims description 27
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 14
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 9
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 9
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- VATYWCRQDJIRAI-UHFFFAOYSA-N p-aminobenzaldehyde Chemical compound NC1=CC=C(C=O)C=C1 VATYWCRQDJIRAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-BKLSDQPFSA-N 4-hydroxy-L-proline Chemical compound OC1C[NH2+][C@H](C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-BKLSDQPFSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical class CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 108010077465 Tropocollagen Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000036782 biological activation Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 102000034240 fibrous proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005899 fibrous proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037377 skin turgor Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000012859 sterile filling Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
- C08H1/06—Macromolecular products derived from proteins derived from horn, hoofs, hair, skin or leather
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft die Verwendung von bei der Placentafrischextrakt-Fabrikation anfallenden ätherhaltigen
Rückständen und ein Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts.
Lösliches Kollagen, das eine biologische Vorstufe des reifen Kollagens darstellt, wird seit einigen Jahren in
zunehmendem Maße als Wirkstoffkomponente in kosmetischen Präparaten verarbeitet. Derartige Präparate
sollen durch percutane Zufuhr biologischer Wirkstoffe den Stoffwechsel der Haut- und Bindegewebszellen
beleben und welke, faltige Haut durch Erhöhung des Hautturgors wieder straffen. Kollagen ist
ein faserförmiges Scleroprotein, das in Knochen und im Bindegewebe der Tiere enthalten ist. Entsprechend wird
Kollagen durch Extraktion aus dem Bindegewebe meist embryonaler oder junger Säugetiere gewonnen. Die
Beschaffung des Rohmaterials ist jedoch wegen der benötigten Menge teuer und zudem meist mit
erheblichen Schwierigkeiten verbunden, da es möglichst frisch und frei von nicht verwertbaren Abfällen und
anderen Verunreinigungen sein muß.
Aus der DE-OS 24 05 002 ist es bekannt, lösliches natives Kollagen aus Humangewebe, insbesondere
Placemen, zu gewinnen. Zu diesem Zweck wird das gereinigte und zerkleinerte Humangewebe stufenweise
fraktioniert, indem zunächst mit Hilfe einer wäßrigen Salzlösung das neutralsalzlösliche Tropokollagen und
anschließend das säurelösliche Prokollagen sowie eine weitere strukturierte Modifikation des nativen Kollagens
extrahiert wird. Dieses bekannte Verfahren ist jedoch wegen der Vielzahl der Verfahrensstufen und
der vorhandenen, den verschiedensten Stoffklassen angehörenden Placentainhaltsstoffe verhältnismäßig
aufwendig. Außerdem sind Humanplacenten und ebenso Placemen tierischen Ursprungs als Ausgangsmaterial
für die Gewinnung löslicher Kollagene nicht zuletzt wegen ihrer Knappheit äußerst unwirtschaftlich,
zumal auf diese Weise der Rohstoff für die Gewinnung des wertvolleren Placentaextrakts verlorengeht.
Aufgabe der Erfindung ist es, für die Gewinnung löslicher Kollagene ein preiswertes Rohmaterial zu
finden, das in ausreichender Menge zur Verfügung steht.
Der Erfindung liegt die Erkenntnis zugrunde, die bei der Placentafrischextrakt-Fabrikation anfallenden
ätherhaltigen Rückstände für die Gewinnung des löslichen Kollagens zu nutzen.
Das Ausgangsmaterial zur Gewinnung von Placentafrischextrakten
ist ausnahmslos tierischen Ursprungs, da entsprechendes Humangewebe in den erforderlichen
Mengen in der Regel nicht zur Verfugung steht Zu Beginn des Fabrikationsprozesses werden die zuvor
ίο zerkleinerten Plaeenten tage- oder sogar wochenlang in
der Kälte mit Äther behandelt, um die Zellen aufzuschließen und Hormone sowie Fett- und Lipoidstoffe
weitgehend zu extrahieren. Nach Abtrennung der wäßrigen Anteile verbleibt schließlich ein überwiegend
aus Feststoffen bestehender Rückstand, der stark ätherhaltig ist und bisher den Abdeckereien zur
Vernichtung bzw. Weiterverarbeitung z. B. zu Düngezwecken (vgl. auch DE-AS 11 42 373) zugeführt wurde.
Diese bis dahin als wertlos verworfenen Organrückstände werden erfindungsgemäß nunmehr zur Gewinnung des löslichen nativen Kollagens genutzt, wobei die Langzeiteinwirkung des Äthers keinen Einfluß auf die Nativität der löslichen Kollagene hat und ihre Ausbeute wegen der weitgehenden Denaturierung von Fremdeiweißstoffen und der restlosen Entfernung von Lipoiden und Fetten zudem verbessert werden konnte. Diese Organrückstände sind äußerst preiswert, da sie in großen Mengen anfallen und ihre bisherige Vernichtung sogar erhebliche Kosten verursachte.
Diese bis dahin als wertlos verworfenen Organrückstände werden erfindungsgemäß nunmehr zur Gewinnung des löslichen nativen Kollagens genutzt, wobei die Langzeiteinwirkung des Äthers keinen Einfluß auf die Nativität der löslichen Kollagene hat und ihre Ausbeute wegen der weitgehenden Denaturierung von Fremdeiweißstoffen und der restlosen Entfernung von Lipoiden und Fetten zudem verbessert werden konnte. Diese Organrückstände sind äußerst preiswert, da sie in großen Mengen anfallen und ihre bisherige Vernichtung sogar erhebliche Kosten verursachte.
Die Erfindung besteht weiterhin hi einem Verfahren
zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextraktes, das dadurch gekennzeichnet ist, daß die bei
der Placentafrischextrakt-Fabrikation anfallenden Rückstände bei 0-3° C zunächst durch Waschen mit
einer gepufferten schwachen NaCl-Lösung von einem Teil der vorhandenen Fremdeiweißstoffe befreit und
durch Zugabe einer ausreichenden Menge einer Neutralsalzlösung innerhalb von 2-6 Tagen extrahiert
werden, daß anschließend das neutralsalzlösliche Kollagen nach Abtrennung der restlichen Placentarückstände
durch Aussalzen mit einer ausreichenden Menge Kochsalz gefällt wird und daß das ausgefällte lösliche
Kollagen in einer ein Konservierungsmittel enthaltenden Pufferlösung aus Placentaextrakt mit einem
pH-Wert unter 7 gelöst wird.
Der auf diese Weise hergestellte kollagenhaltige Placentaextrakt ist besonders haltbar und wird bevorzugt
zur Herstellung von Hautpflegemitteln verwendet, da die neutralsalzlösliche Vorstufe des nativen Kollagens
wegen seiner geringen inter- und intramolekularen Quervernetzung besonders förderlich für den biologischen
Aktivierungsprozeß ist.
Die Erfindung wird nachfolgend an Hand von Ausführungsbeispielen näher erläutert.
Vor Durchführung der präparativen Versuche zur Gewinnung von löslichem Kollagen aus Placentarückständen
der Extrakt-Fabrikation war zunächst der Nachweis zu führen, daß überhaupt biologisch aktives
Kollagen im Ausgangsmaterial vorhanden ist, und der Gesamtkollagengehalt (lösliches und unlösliches Kollagen)
zu bestimmen. Zu diesem Zweck wurden Proben eines ätherhaltigen Placentarückstandes aus der
Fabrikation auf der Stufe der Gewinnung des Rohzentrifugates gefriergetrocknet, genau gewogen
(Tabelle 1) und jede Probe mit 4 ml 6n HCl in einem verschlossenen Reagenzglas 24 Stunden auf 1020C
erhitzt, um die Probe zu hydrolysieren. Nachdem das Hydrolysat nochmals 9 Stunden mit 100 ml 6n HCl unter
Rückfluß erhitzt worden war, wurde zur Trockne eingedampft und eine bekannte Menge Wasser
hinzugefügt (Tabelle 1: 500 bzw. 624 ml). 1 ml dieser Lösung wurde zur Hydroxyprolin-Bestimmung nach der
Methode von Logan und Neumann verwendet Die Meßergebnisse sind in Tabelle 1 sowie in den Abb. 1
und 2 zusammengestellt
Versuchsdaten zur Bestimmung des KoUagengelialts von Placentarückständen (Hydroxyprolingehalt
des Kollagens ist 13,5%).
Einwaage
Wasser
hinzugefügt
hinzugefügt
ml
Extinktion des Hydrolysates mit PAB bei 560 nm*) Hydroxyprolin
Kollagen
ε
c
c
ο
o>
ro
o>
ro
| 0,1543 | 500,31 | 0,212 |
| 0,166 | 624,0 | 0,172 |
| 0,147 | 624,0 | 0,154 |
| *) Mittelwerte. **) nach Eichkurve. |
||
|
ε
C |
ε
C |
|
| 500 | 560 |
12,25
9,9
8,9
9,9
8,9
29,4
27,6
28,0
27,6
28,0
| ε | ε | ε | ε | S | ε |
| C | C | C | C | C | C |
| ο | ο | O | ο | O | ο |
| r~- | ο | η | CM | <£> | |
| "if | ID | LD |
| ■ | 20 | 1 | ι | I |
| / | I | |||
| 10 | ||||
| Ό | ||||
Abb. I
A b b. 1 zeigt das sichtbare Spektrum der Farbe, die durch die Reaktion des Hydrolysats mit p-Aminobenzaldehyd
(PAB) erzeugt worden ist;
A b b. 2 gibt das in entsprechender Weise unter Verwendung von 13,4 γ Hydroxyprolin gemessene
Spektrum. Die Übereinstimmung der Kurven von A b b. 1 und 2 bestätigt, daß die Placentarückstände
Hydroxyprolin im Hydrolysat enthalten, das durch Spaltung des Kollagens entstanden ist. Der Kollagengehalt
der Proben erreichnet sich zu 28 bis 29% (Tabelle Il
60
65 Abb. 2
Gewinnung löslichen Kollagens aus Placentarückständen der Fabrikation von Placentaextrakten
320 kg Placentarückstände, die bei der Gewinnung von Placentafrischextrakt nach Abtrennung des Rohextrakts
beim Zentrifugieren anfallen, werden — ggf. nach Gefriertrocknen — erneut zerkleinert und mit
300 kg Eiswasser bei 0° bis +3° C gewaschen. Nach Zentrifugieren (30 Minuten, 4000 rpm) wird der
Rückstand nach Zusatz einer kleineren Menge Toluol
zur Verhinderung einer eventuellen bakteriellen Tätigkeit 24 Stunden mit 500 kg einer 0,01 molaren
Natriumchlorid-Lösung von pH 7,4 (Phosphat-Puffer: 152 g Na2HPO4 und 18,5 g NaH2PO4 auf 701 Wasser) bei
0° bis 3° C stehengelassen. Der nz.ch einstündigem Zentrifugieren bei 4000 rpm erhaltene Rückstand wird
zur Gewinnung des neutralsalzlöslichen Kollagens 4 Tage bei 0° bis +30C mit 0,15 molarer Natriumchlorid-Lösung
bei pH 7,1 extrahiert (Toluolzusatz) und dann zentrifugiert: Zentrifugat A.
Aus diesem Zentrifugat A wird das neutralsalzlösliche
Kollagen durch Zugabe von festem Natriumchlorid bis zu einer Konzentration von 12% bei +20C ausgefällt
und abzentrifugiert. Eine Reinigung des ausgefällten
neutralsalzlöslichen Kollagens kann durch Dialyse und ggf. mehrmalige Umfällung erfolgen. Vor Herstellung
einer haltbaren konservierten Endlösung des neutralsalzlöslichen Kollagens wird, wie unten beschrieben, der
Kollagengehalt durch eine Hydroxyprolin-Bestimmung ermittelt. Das isolierte, gereinigte l.autralsalzlösliche
Kollagen wird in einer solchen Menge 0,1 molarer konservierter Citrat-Pufferlösung gelöst, daß der
Kollagengehalt 4 g pro Liter beträgt. Vor Sterilabfüllung wird die so erhaltene Kollagenlösung noch
einmal zentrifugiert.
Der bei der Gewinnung von Zentrifugat A verbleibende Rückstand wird zur Isolierung säurelöslichen
Kollagens nach Toluol-Zusatz mit 100 kg Citrat-Puffer
von pH 3,7 (die Pufferlösung ist durch Auflösen von 21kg Zitronensäure und 4,4 kg NaOH in 1000 kg
Eiswasser hergestellt und auf pH 3.7 feineingestellt worden) unter Rühren in der Kälte bei +2°C extrahiert
und nach 2 bis 5 Tagen erneut zentrifugiert: Zentrifugat B I.
Der Rückstand dieser Zentrifugation wird erneut bei + 20C bis +4°C mit 1000 Liter Citrat-Puffer der oben
angegebenen Zusammensetzung ausgezogen und dann ebenfalls nach einigen Tagen zentrifugiert: Zentrifugat
B 2.
Die Zentrifugate B 1 und B 2 werden, jedes für sich, zur Abtrennung der Kollagen-Fraktion durch Zugabe
von Natriumchlorid auf eine Konzentration von 7% NaCl gebracht, wobei immer noch eine Temperatur von
+ 2° bis +30C eingehalten wird. Der erhaltene
Niederschlag jeder Fällung wird durch Zentrifugieren oder Filtration in der Kälte gesammelt und durch
Waschen mit Eiswasser von Salzen befreit. Eine weitere Reinigung der Kollagen-Fraktion kann durch Dialyse
oder/und Umfallen aus neutralem oder saurem Milieu erfolgen. Nach der Reinigung wird die Kollagen-Fraktion
unter Rühren in eine 0,1 molare Natriumcitrat-Pufferlösung gebracht, die 0,2 bis 0,5% Konservierungsmittel,
z. B. Phenonip, 1 bis 5% Tween 80 und 0,3 bis 2% Propylenglykole enthält. Diese Lösung wird ggf.
nochmals zentrifugiert bzw. filtriert und bei 20C aufbewahrt.
Vor der Herstellung eines haltbaren konservierten säurelöslichen Kollagenpräparates wird von je einer
Probe des Kollagens aus Zentrifugat B 1 und B 2 zur Ermittlung des Kollagengehaltes eine Hydroxyprolin-Bestimmung
durchgeführt:
Eine nach erneutem Zentrifugieren gefriergetrocknete Probe hatte in vorliegendem Fall ein Gewicht von
2,13 g. Davon werden 7,1 mg für eine Zeit von 24 Stunden mit 2 ml 6n HCl bei 102° C im verschlossenen
Reagenzglas hydrolisiert Die Farbbildung des Hydrolysates mit p-Aminobenzaldehyd (PAB) ergab eine
Extinktion von 0,194, was nach der aufgestellten Eichkurve einem Hydroxyprolin-Gehah von 11,2 γ
entspricht Die Analysenprobe enthielt demnach 0,248 g Kollagen.
Herstellung eines kollagenhaltigen Placenta-
extraktes durch Auflösen von Kollagen in einem
Placentaextrakt als Pufferlösung
Neutralsalzlösliches bzw. säurelösliches Kollagen, wie aus Beispiel 1, kann nach Reinigung (Dialyse, Umfallen)
anstatt in einer Citrat-Puffer- oder Essigsäure-Lösung auch in Placentaextrakten, die entsprechend gepuffert
sind, aufgelöst werden. Zum Beispiel läßt sich ein 0,3 bis 0,4% Kollagen enthaltender Placentaextrakt von pH 4,0
erhalten, in dem eine nach Hydroxyprolin-Bestimmung charakterisierte Kollagenmenge bei +10C unter
Rühren in einen standardisierten Placentaextrakt eingerührt wird, der folgende Kennzahlen aufweist:
Nachgewiesene Aminosäuren GIy, Ala, VaI, Tyr, Ser,
Phe, Try, Asp, GIu, Leu, Iso-Leu, Arg, Met, His,
Pro OH-Pro u. a.
| pH | 4,0 |
| Trockenrückstand | > 0,6% |
| Stickstoff | 0,031% |
| Aminosäuregehalt | > 3 mg pro ml |
Nachgewiesene Stoffwechsel-Aktivitäten:
Atmungssteigerungsfaktor (O2-Verbrauch
1,0)
1,0)
des Leberhomogenats = 1,0) 1,9
P/O-Quotient
P/O-Quotient
vor Bestimmung des O2-Verbrauchs 2,7
nach Bestimmung des O2-Verbrauchs 2,8
Gärungssteigerungsfaktor (CO2-Entwicklung
Gärungssteigerungsfaktor (CO2-Entwicklung
von Bäcker-Hefe nach 20 Minuten 1,0) 1,6
Sterilitätstest negativ
Konservierungsmittel >0,4%
Abschließend wird in dem kollagenhaltigen Placentaextrakt der Kollagengehalt nochmals durch Hydroxyprolin-Bestimmung
kontrolliert und ggf. auf einen angestrebten Wert korrigiert: Kollagengehalt im allgemeinen 0,3 bis 0,4%.
Die Anteile von niedermolekularen Komponenten zu hochmolekularen (Molekulargewicht
< 10 000 bzw. > 100 000) liegen im allgemeinen bei 5 :1 bis 9 :1. Das
Kollagen läßt sich, ggf. nach Ausblenden einiger Komponenten des Placentaextraktes, auch durch
Aufnahme eines UV-Spektrums charakterisieren: λ max. bei 255 nm. Auch der Gesamtstickstoffwert nach
Kjeldahl eignet sich zur Charakterisierung in Verbindung mit der Hydroxyprolin-Bestimmung und unter
Berücksichtigung der durch den Placentaextrakt eingebrachten Stickstoffverbindungen.
Claims (2)
1. Verwendung von bei der Placentafrischextrakt-Fabrikation
anfallenden ätherhaltigen Rückständen zur Gewinnung von löslichem Kollagen.
2. Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts, dadurch gekennzeichnet,
daß die Rückstände gemäß Anspruch 1 bei 0 bis 3° C zunächst durch Waschen mit einer
gepufferten schwachen NaCl-Lösung von einem Teil
der vorhandenen Fremdeiweißstoffe befreit und durch Zugabe einer ausreichenden Menge einer
Neutralsalzlösung innerhalb von 2 bis 6 Tagen extrahiert werden, daß anschließend das neutralsalzlösliche
Kollagen nach Abtrennung der restlichen Placentarückstände durch Aussalzen mit einer
ausreichenden Menge Kochsalz gefällt wird und daß das ausgefällte lösliche Kollagen in einer ein
Konservierungsmittel enthaltenden Pufferlösung aus Placentaextrakt mit einem pH-Wert unter 7
gelöst wird.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19762616939 DE2616939C3 (de) | 1976-04-17 | 1976-04-17 | Verwendung von Placentaextraktrückständen und Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts |
| BR7605189A BR7605189A (pt) | 1976-04-17 | 1976-08-09 | Processo para a fabricacao de colagenio soluvel |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19762616939 DE2616939C3 (de) | 1976-04-17 | 1976-04-17 | Verwendung von Placentaextraktrückständen und Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2616939A1 DE2616939A1 (de) | 1977-10-20 |
| DE2616939B2 DE2616939B2 (de) | 1980-12-04 |
| DE2616939C3 true DE2616939C3 (de) | 1981-10-15 |
Family
ID=5975609
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19762616939 Expired DE2616939C3 (de) | 1976-04-17 | 1976-04-17 | Verwendung von Placentaextraktrückständen und Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| BR (1) | BR7605189A (de) |
| DE (1) | DE2616939C3 (de) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2586703B1 (fr) * | 1985-09-02 | 1989-12-01 | Merieux Inst | Procede d'extraction de collagenes placentaires, collagenes obtenus notamment sous forme de gels ou de solutions et leurs applications |
| US4786436A (en) * | 1986-01-31 | 1988-11-22 | Bausch & Lomb Incorporated | Wetting solutions for contact lenses |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1142373B (de) * | 1960-02-29 | 1963-01-17 | Sauerbruch Praeparate Boettger | Verfahren zur Herstellung von fluessigen oder festen Duengemitteln |
| DE2338970C2 (de) * | 1973-08-01 | 1983-01-27 | Böttger GmbH Pharmazeutische und Kosmetische Präparate, 1000 Berlin | Verfahren zur Herstellung eines stabilisierten, wasserlöslichen Placenta-Extraktes |
| DE2405002B2 (de) * | 1974-02-02 | 1979-07-19 | Fa. H. Trommsdorff, 5110 Alsdorf | Lösliches natives Kollagen aus menschlicher Plancenta sowie dieses als therapeutischen Wirkstoff enthaltendes Mittel |
-
1976
- 1976-04-17 DE DE19762616939 patent/DE2616939C3/de not_active Expired
- 1976-08-09 BR BR7605189A patent/BR7605189A/pt unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2616939B2 (de) | 1980-12-04 |
| DE2616939A1 (de) | 1977-10-20 |
| BR7605189A (pt) | 1978-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3049932C1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Kollagenproduktes fuer medizinische und kosmetische Zwecke | |
| EP0115023A2 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Pankreatin | |
| KR101760890B1 (ko) | 콜라겐 제조방법 | |
| US4421746A (en) | Process for producing interferon inducers | |
| JP2000026272A (ja) | 甘い白色ルピンの種子から植物活性成分を抽出する方法、得られた抽出液および該抽出液の少なくとも一部分を用いる組成物 | |
| DE3101646A1 (de) | Von kollagen abgeleitete oligopeptide und verfahren zu deren herstellung | |
| DE3102487C2 (de) | Verfahren zum Herstellen von Humanrelaxinextrakt aus Placenta | |
| DE2616939C3 (de) | Verwendung von Placentaextraktrückständen und Verfahren zur Herstellung eines kollagenhaltigen Placentaextrakts | |
| DE2321306C2 (de) | Hautpflegemittel | |
| DE2234832C2 (de) | Proteinfreies Hormonkonzentrat von Säugetier-Nebenschilddrüsen, dessen Herstellung und dieses Hormonkonzentrat enthaltende pharmazeutische Präparate | |
| Bohn et al. | Isolation and characterization of the placental protein PP 5 | |
| Anderson | Changes in the distribution of nitrogen in the Japanese beetle (Popillia japonica Newman) during metamorphosis | |
| DE69433221T2 (de) | Neues Chondrozytprotein | |
| DE3410694A1 (de) | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung | |
| DE2720041A1 (de) | Herzstaerkendes mittel | |
| DE1293705B (de) | Verfahren zur Gewinnung eines elastolytisch wirksamen Bauchspeicheldruesen-Praeparates | |
| DE651435C (de) | Verfahren zur Gewinnung eines Vitaminpraeparates | |
| DE1767099B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung eines Glykoproteins mit einer Hemmwirkung gegenueber Magensaeureabsonderung und einer Antiaktivitaet gegenueber Ulcus-Bildung | |
| DE2101866A1 (de) | Verfahren zum Reinigen von Orgotein | |
| DE2111518C3 (de) | Hormonähnliche Substanz mit hypocalcämischer Wirkung und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| Maurel et al. | Lathyrism: aortic and cutaneous collagen in the rat | |
| DE212709C (de) | ||
| DE2507223C3 (de) | Kollagenprodukt und Verfahren zur Herstellung des Kollagenproduktes | |
| DE2810855A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines fermentpraeparates zur beschleunigung des ausreifens von fleischprodukten | |
| DE4004001A1 (de) | Kosmetische zusammensetzungen und isolation und reinigung von in kosmetischen zusammensetzungen verwendeten natrium-hyaluronat-fraktionen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: BOETTGER GMBH PHARMAZEUTISCHE UND KOSMETISCHE PRAE |