JP2000026272A - 甘い白色ルピンの種子から植物活性成分を抽出する方法、得られた抽出液および該抽出液の少なくとも一部分を用いる組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は環境が皮膚に及ぼす有害な作用を低
減するために、角層の厚みを増加するように活性成分を
抽出する方法である。 【解決手段】 本発明は、 −甘い白色ルピンの種子を粉砕し粉末を得る工程と、 −得られた粉末を水性溶液中で濃度５〜２０容量％に溶
解する工程と、 −プロテアーゼの存在下に蛋白質を加水分解する工程
と、 −溶液を濾過して、粒子のない透明な溶液を得る工程
と、 −微生物、酵母、かびならびに全部の中温性フロラを保
持するように濾液を蒸留する工程と、 からなることを特徴とする。本発明はまた、上記方法に
より得られた抽出液、該抽出液を含む組成物およびこれ
らを組合わせた処理方法を含むものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、甘い白色ルピン
（ｗｈｉｔｅ ｌｕｐｉｎ）の種子から植物活性成分を
抽出する方法、得られた抽出液および該抽出液のうち少
なくとも一部分を用いる組成物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ルピンの種子はよく知られた産物で、特
に動物飼料として栽培されているが、少くとも特に有害
な物質の物質であるルピニンは除かれる。本発明に使用
される品種は、特に甘い白色ルピンの種子である。この
甘い白色ルピンの種子の定義は、本明細書の残部におい
て、アルカロイドを含まない全種類のルピンを含むもの
である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、環境
の有害な作用に対する皮膚の保護作用を再生する抽出液
を提供することである。この理由によりこの抽出液は、
皮膚への日照の作用（ｅｆｆｅｃｔ）の低減を間接的に
助けるものである。この抽出液は実用的には、例えば化
粧品、クリーム、軟膏、粉末、溶液などと組合せること
ができる。

【０００４】角層（ｓｔｒａｔｕｍ ｃｏｒｎｅｕｍ）
を厚くすることは、微生物における主な防御手段の１つ
であり、また環境に対する皮膚の防御機能の再生の手段
である。この防御法の反応時間は比較的遅く、皮膚の肥
厚が効果的な保護を生じるまでに数日を要する。したが
って防御的手段として表皮を保護することが必要であ
る。本発明の目的は、表皮の保護、厚みの増加に有利な
抽出液の提供を目的としている。この抽出液は、特に日
照を受けた軽い皮膚を持つ人々に有利であることが判明
した。

【０００５】このケラチン化（ｋｅｒａｔｉｎｉｓａｔ
ｉｏｎ）反応は、良く知られた複雑な皮膚の反応を刺激
し、結果から明らかなように肥厚による表皮構造の補強
効果を支持する。この反応は皮膚の組織の、複雑な成熟
法としてよく知られている。これによって、ケラチノサ
イテス（ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）は、死んだ、角
質化された細胞に変形する。この細胞は、水分の損失お
よび有害な外部条件に対する保護に特に有益である。

【０００６】コルネオサイテス（ｃｏｒｎｅｏｃｙｔｅ
ｓ）は、絡み合う蛋白質からなる封筒形状をなしてい
る。それは角層をなすケラチンの網状組織で囲まれてい
る。蛋白質は凝固して角層、特にインヴォルクリン（ｉ
ｎｖｏｌｕｃｒｉｎ）を生じる。

【０００７】−インヴォルクリン：エッカルトの報告
（Ｅｃｋｅｒｔ Ｒ．Ｌ． Ｍ．Ｂ．Ｃｒｉｆｈ Ｊ．
Ｆ．−Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉ
ｖｅＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９３，Ｖｏｌ．５，
ｐ．６１３〜６１７）によると、この蛋白は、グルタミ
ンを含む残基に富み（４０％グルタミンおよびグルタミ
ン酸）、その結果目的とされた封筒形状に重要な役目を
果たしている。封筒形状は、遅く進行し、インヴォルク
リンはこの方法を初め、かつ目的への展開を促進する。
封筒形状は、架橋された蛋白質（ｅ−（ｇ−グルタイ
ル）リシン）の網状組織の発展と連動している。これは
封筒の分子を組立てる構造を作り、全体の構造に安定性
を与える。

【０００８】−フィラググリン（ｆｉｌａｇｇｒｉ
ｎ）：この細胞蛋白質は、表皮の粒状層の中に合成さ
れ、燐酸化された先駆物質の形をなし、ケラチンフィラ
メントを集合させる能力を有する。さらにこの蛋白質
は、代謝能を有し、ある文献（Ｗｅｉｄｅｎｔｈａｌｅ
ｒＢ．Ｈａｕｂｅｒ Ｉ．，Ａｎｔｏｎ−Ｌａｎｐｒｅ
ｃｈｔ Ｉ．：Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ，２８５，ｐ．１１１〜１２０）によると、
角層の物性を維持するのに役立つ。この蛋白質の有効寿
命は比較的短く、角層の更新速度は早いが、その減少は
日照、その他の有害な要素に対する保護に役立つ。蛋白
質分解は実際に早く、自由なアミノ酸の濃縮された集団
を蛋白質分解する。この集団は紫外線に対するスクリー
ンとしておよび／またはＰＣＡ（ピロリドン・カルボン
酸）のような水容器として重要である。

【０００９】本発明の方法により、これらの２つの構造
的蛋白質の合成を特に刺激する活性成分を抽出すること
ができる。この活性成分は、これらの２つの構造的蛋白
質の合成を促進する。その結果合理的な日照時間を制限
することにより、皮膚を保護できるので、日照の危険を
避けることができる。

【００１０】本発明の方法により、前の成分と異なる性
質および効果を有する活性成分を抽出することができ
る。これは、得られた抽出液が保護的効果を有する他
に、角層の修復を助け、さらに水分損失を助ける表皮の
脂質の代謝（ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）を助
ける作用を有する理由である。

【００１１】

【課題を解決するための手段】この目的のために本発明
の方法は、有害な外部の要素から皮膚を保護するため
に、角層の厚みを増加するように活性成分の厚みを増加
するための、活性成分抽出法に関する。この方法は、 −甘い白色ルピンを研磨して粉末を得る工程と、 −こうして得られた粉を水性溶液中で濃度５〜２０容量
％に溶解する工程と、 −プロテアーゼの存在下に蛋白質を加水分解する工程
と、 −溶液を濾過して、粒子のない透明な溶液を得る工程
と、 −微生物、酵母、かび、ならびに全部の中温性フロラ
（ｍｅｓｏｐｈｉｌｉｃｆｌｏｒａ）を保持するように
溶液を殺菌する工程と、 からなるものである。

【００１２】更に詳しくは加水分解条件は、ｐＨを６．
０〜９．０とし、温度を５０〜８０℃とする。この方法
により、溶液を滅菌濾過以前に濃縮でき、また最後の溶
液を凍結乾燥することができる。

【００１３】こうして得られた抽出液も本発明の範囲に
属し、角層の厚みを増し、皮膚の環境の有害な作用を低
減することを目的とする。この抽出液は、 −乾燥物比率が２０ｇ／ｌ以上、好ましくは２０〜２０
０ｇ／ｌ、特に好ましくは４０〜６０ｇ／ｌであり、 −ｐＨが２〜１０、好ましくは５〜９、特に好ましくは
６．５〜７．５であり、 −蛋白質比が、１０ｇ／ｌ以上、好ましくは１０〜１０
０ｇ／ｌ、特に好ましくは２０〜４０ｇ／ｌであり、 −全糖比が３ｇ／ｌ以上、好ましくは３〜１００ｇ／
ｌ、特に好ましくは２０〜４０ｇ／ｌであり、 −異なる分子種の分子量が１３００ダルトンにピークを
示し、ついでファースト蛋白（Ｆａｓｔ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ）液体クロマトグラフィー（Ｆ・Ｐ・Ｌ・Ｃ）による
分子濾過試験が続く、 ことを特徴とするものである。そして単糖は本質的にグ
ルコースおよびサッカロースで、多糖またはオリゴ糖類
の比率は全糖類部分中３０％を占める。

【００１４】本発明の他の目的は、上記の抽出液の一部
分以上を含む化粧品組成物の提供であって、角層の厚み
を増加し、皮膚に及ぼす環境の有害な作用をなくすこと
ができる。

【００１５】本発明のさらに他の目的は、角層の厚みを
増加することのできる皮膚の処理法である。前記化粧品
組成物を皮膚に与えると、角層の厚みを増加することが
できる。

【００１６】

【発明の実施の形態】本発明による抽出法はつぎの通り
である。この説明は、抽出液に含まれる活性物質の具体
的効果を示す効果も含んでいる。ルピンの種子を調製し
粉砕して、純粋なルピン粉末を得る。この粉末は濃度５
〜２０容量％まで水性溶液に溶解される。この溶液の溶
解性を改善するために、温度を調節してもよい。

【００１７】つぎに蛋白質を加水分解する。特にｐＨ
６．０〜９．０、温度５０〜８０℃とする。加水分解さ
れた溶液は、粉状粒子を除き、きれいな溶液を得るため
に濾過される。

【００１８】つぎに溶液を濃縮する。活性を強化するた
めに必要なら、溶液を濾過する。脱水または凍結乾燥す
ることもできる。

【００１９】最後に、微生物、全中温フロラ、酵母およ
びかびの存在を制限するために膜上で滅菌濾過する。

【００２０】得られた抽出液の特徴はつぎの通りであ
る。 （１）乾燥物の比が、２０ｇ／ｌ以上、好ましくは２０
〜２００ｇ／ｌ、特に好ましくは４０〜６０ｇ／ｌであ
る。この比は、重量一定になるまでオーブンで加熱して
得らた。 （２）ｐＨが２〜１０、好ましくは５〜９、特に好まし
くは６５．〜７．５である。この値は電位差計で得られ
た。 （３）蛋白質の比が１０ｇ／ｌ以上、好ましくは１０〜
１００ｇ／ｌ、特に好ましくは２０〜４０ｇ／ｌであ
る。この値はＢｕｒｅｔ法で得られた。 （４）全糖分の比が３ｇ／ｌ、好ましくは３〜１００ｇ
／ｌ、特に好ましくは５〜２０ｇ／ｌである。この比率
は１９５６ ＤＵＢＯＩＳ法（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９、Ｎｏ．３、ｐ．３５〜３５
６）で得られた。 単糖は本質的にグルコースおよびサッカロースである。
全糖分中の多糖またはオリゴ糖の比は全糖分の３０％で
ある。

【００２１】解糖された（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）
鎖の長さを決定することは有益である。使用できる方法
はこの抽出液のシリカゲル上の薄膜クロマトグラフィー
で、この抽出液を対照液と比較する： ガラクトーゼ グルコース サッカロース ガラクチュロニック酸 ｂ−グルカン ラムノース

【００２２】移行溶媒（ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｓｏｌｖ
ｅｎｔ）はブタノール＋酢酸＋浸透した水である。展開
する溶液は、オルシノール＋硫酸からなる。結果を図１
に示す。抽出液はオリゴ糖類、モノおよびジ糖類の存在
を示す。

【００２３】（５）アミノ酸の組成 つぎの１００ｇ当たりの数値は、主なアミノ酸の濃度を
示す。 アスパラギン酸 ５ｇ、 スレオニン ２ｇ、 セリン ３ｇ、 グルタミン酸 １０ｇ、 アラニン ２ｇ、 ロイシン ４ｇ、 アルギニン ５ｇ

【００２４】（６）異なる分子種からの分子量。 図２はＦ・Ｐ・Ｌ・Ｃ分子濾過試験の結果で、主なピー
クは１３００ダルトンである。得られた抽出液の特徴に
より、具体的な効果を実証することができる。

【００２５】（Ｉ）脂質の代謝に対する得られた抽出液
の効果。 下記する動作説明は、本発明による抽出液で処理された
皮膚の外植体（ｅｘｐｌａｎｔｓ）を培養することから
なり、該皮膚の外植体は増殖培地中に置かれた生きた微
生物から取られた断片である。抽出液は水性溶液の形
で、その濃度は２容量％であった。これを５％のＣＯ_２
雰囲気で３７℃で４８時間培養した。４８時間培養後、
真皮（ｄｅｒｍｉｓ）と表皮（ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）と
を分離した。表皮の種々の種類および性質を薄膜クロマ
トグラフィーで区別した。下記する表１は、脂質の型を
示す。

【００２６】

【表１】

【００２７】２％抽出液の濃縮の結果から特に顕著な増
加が認められた。 −セラミド（＋７０％） −コレストロール（＋３０％） −ジおよびトリグリセリド（＋２０％）

【００２８】（ＩＩ）角層の修復可能性。 この試験は、２％乳酸を用いた化学的施行後に行われ
た。その結果を図３に示す。線１は乳酸で処理し、つぎ
に本発明の方法で得た抽出液で４８時間処理した後の厚
みである。９０μｍへの復帰が認められたが満足であっ
た。線２は、本発明の方法で得た抽出液で４８時間保存
処理した時の厚みを示す。この保存処理後、乳酸処理し
たところ、乳酸の効果に拘らず厚みは少なくとも対照品
の厚みに等しかった。線３は、乳酸処理後の厚みで、６
０μｍへの減少が見られた。線４は、対照品の厚みで、
８０μｍであった。

【００２９】（ＩＩＩ）表皮のケラチン化（ｋｅｒａｔ
ｉｎｉｓａｔｉｏｎ）または角層の肥厚化。 再構成された表皮がＥｐｉｓｋｉｎ（商品名）で販売さ
れていた。これは増殖培地で作られた人工表皮に類似で
あったので試験に用いた。細胞増殖相（ｃｅｌｌ ｐｒ
ｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｐｈａｓｅ）間に再構成され
た表皮を処理した。すなわち培地に５％抽出液を加え
て、４８時間処理した。

【００３０】成育をブロックするために固定液を通過し
た後、対照表皮および処理済表皮は脱水され、樹脂に加
えられ、極めて薄い切片に切られ、ヘマチン、エリスロ
シンおよびサフロンで３色に染められ、つぎに顕微鏡お
よび写真で観察された。図４（Ａ）および図４（Ｂ）
は、それぞれ対照表皮および処理済表皮を示す。

【００３１】表２は測定結果である。特に興味があるの
は、厚みの３７％増加である。写真は表皮層および角層
の肥大を示している。表の数値は暗示的で、縮尺を無視
して写真から直接に測られた。

【００３２】

【表２】

【００３３】（ＩＶ）水分損失。 皮膚の障壁の役割は、皮膚内の水分と何かの病変（それ
は知覚できない水分の損失と呼ばれる要素の増加を生じ
る何かの病変）との間のバランスを維持することであ
る。この要素は、皮膚の周囲の水蒸気の圧力の勾配を測
定することによって調べることができる。しかし知覚で
きない水分の損失は極めて小さいので、洗浄液、例えば
１０％ソジウム・ラウリル・サルフェイトを与えること
によって、この水分損失を増加させることができる。

【００３４】人体試験を行い、本発明の方法で得た７０
％抽出液を含むクリームを１日２回投与した。結果を表
３、表４および表５に示す。そこではＤ０（初日）とＤ
１４（１４日経過後）のボランティア６名を用いた。

【００３５】

【表３】

【００３６】表３は未処理であるが、水洗した部分の平
均値およびこの平均値の標準偏差値を示し、知覚できな
い水分の損失が時間とともに増加することを示してい
る。

【００３７】

【表４】

【００３８】表４は水洗し、抽出液を含むクリームで処
理した部分の平均値およびこの平均値の標準偏差値を示
す。

【００３９】

【表５】

【００４０】表５は平均値およびこの平均値の標準偏差
値までの変化を百分率で示す。抽出液の投与によって、
角層の再構成および強化が可能となり、皮膚の脱水の積
極的な規制と制御とが可能になった。

【００４１】（Ｖ）蛋白質合成。 蛋白質、特にフィラググリンのレベルを調べた。このた
めにメッセンジャーＲＮＡモニターを用いた。人のケラ
チノサイテスを、本発明による抽出液の存在下または参
考分子の存在下に培養した。後者はケラチノサイテスの
分化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）を活性化す
る。ここでは塩化カルシウムであった。全部のｍＲＮＡ
は、抽出液の存在下に単離され、つぎにレバース−トラ
ンスクリップターゼおよび補助的なＤＮＡを分析した。

【００４２】図５は本発明の抽出液が３．９の因数で示
されるフィラグリンｍＲＮＡを増加させることを示す。
ただし塩化ナトリウムは２．８において同じ因数を増加
させる。表は結果の要約を示す。抽出液は蛋白質の合成
を刺激する。

【００４３】本発明の方法で得られた抽出液は、多くの
特徴を有するので便利である。実際に抽出液はオリゴ糖
および低分子量のグルタミンを含有するペプチドに富む
ので、浸透性に富み、ケラチノサイテスの活性を高め、
フィラグリン型の構成蛋白質の合成を刺激する。結果と
して得られる角層の肥厚は水分損失を減じ、脱水を助
け、日射により皮膚を乾燥させる。

【００４４】

【発明の効果】上記の通り本発明により、活性成分を抽
出することができる。この成分は特に上記の２つの構造
的蛋白質の合成を促進する。つぎに予防的処理を可能に
し、これによって合理的な日照の危険を制限するよう皮
膚を整える。

【図面の簡単な説明】

【図１】離糖された鎖の特性を示す説明図である。

【図２】各種の分子種に対する試験のグラフである。

【図３】各種の修復可能性を示すグラフである。

【図４】表皮の条件を示す図で、（Ａ）は対照の表皮を
示す図、（Ｂ）は処理済の表皮を示す図である。

【図５】処理の関数としてのフィラググリンｍＲＮＡの
グラフである。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 環境が皮膚に及ぼす有害な作用を低減す
   るために、角層の厚みを増加するように活性成分を抽出
   する方法において、 −甘い白色ルピンの種子を粉砕し粉末を得る工程と、 −得られた粉末を水性溶液中で濃度５〜２０容量％に溶
   解する工程と、 −プロテアーゼの存在下に蛋白質を加水分解する工程
   と、 −溶液を濾過して粒子のない透明な溶液を得る工程と、 −微生物、酵母、かびならびに全部の中温性フロラを保
   持するように濾液を蒸留する工程と、からなることを特
   徴とする植物活性成分を抽出する方法。
2. 【請求項２】 前記加水分解の条件としてｐＨを６．０
   〜９．０の範囲に保つことを特徴とする請求項１記載の
   植物活性成分を抽出する方法。
3. 【請求項３】 前記加水分解の条件として温度を５０〜
   ８０℃の範囲に保つことを特徴とする請求項１または２
   記載の植物活性成分を抽出する方法。
4. 【請求項４】 前記溶液は蒸留濾過以前に濃縮されるこ
   とを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項記載の植物
   活性成分を抽出する方法。
5. 【請求項５】 最終溶液を凍結乾燥することを特徴とす
   る請求項４記載の植物活性成分を抽出する方法。
6. 【請求項６】 環境が皮膚に及ぼす有害な作用を低減す
   る目的で、角層の厚みを増加するため請求項１〜５のい
   ずれか１項記載の抽出方法によって得られた抽出液であ
   って、 −乾燥物の比が２０ｇ／ｌ以上、好ましくは２０〜２０
   ０ｇ／ｌ、特に好ましくは４０〜６０ｇ／ｌであり、 −ｐＨが２〜１０で、好ましくは５〜９、特に好ましく
   は６．５〜７．５であり、 −蛋白質の比が１０ｇ／ｌ以上、好ましくは１０〜１０
   ０ｇ／ｌ、特に好ましくは２０〜４０ｇ／ｌであり、 −全糖分の比が３ｇ／ｌ以上、好ましくは３〜１００ｇ
   ／ｌ、特に好ましくは５〜２０ｇ／ｌであり、 −異なる分子種の分子量が１３００ダルトンに主なピー
   クを示し、つぎにファースト蛋白液体クロマトグラフィ
   ーによる分子濾過試験が続く、ことを特徴とする抽出
   液。
7. 【請求項７】 単糖が本質的にグルコースまたはサッカ
   ロースであることを特徴とする請求項６記載の抽出液。
8. 【請求項８】 多糖またはオリゴ糖類が全糖類部分の３
   ０％を占めることを特徴とする請求項６または７記載の
   抽出液。
9. 【請求項９】 環境が皮膚に及ぼす有害な作用を低減す
   る目的で、角層の厚みを増加するための化粧品組成物で
   あって、請求項６、７または８記載の抽出液の一部分以
   上を含むことを特徴とする化粧品組成物。
10. 【請求項１０】 角層の厚みを増加するために皮膚を処
    理する方法において、請求項９記載の化粧品組成物を皮
    膚に適用することを特徴とする皮膚を処理する方法。