DE2552510A1 - Biologisch aktive verbindungen und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents
Biologisch aktive verbindungen und verfahren zu ihrer herstellungInfo
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Description
BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT, Marburg / Lahn
Aktenzeichen: Ma 233 - HOE 75/B 014 -
Datum: 21. November 1975
Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
f;
Die Erfindung betrifft neue Verbindungen von biologisch aktiven Substanzen
und wasserlöslichen hochmolekularen Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung vorzugsweise bei der
Affinitätschroirat.ographie.
In den letzten Jahren hat sich eine neue Technik innerhalb der biochemischen
Arbeitsmethoden mehr und mehr durchgesetzt, deren primäres Merkmal darin besteht, die Affinität von trägergebundenen,
biologisch aktiven Substanzen zu selektiv durchzviführenden Reaktionen
einzusetzen.
Ober eine spezifische Komplexbildung der trägergebundenen Substanz
mit einer zweiten, die in einem Gemisch vorliegt, kann die betreffende
Substanz aus dem Gemisch entfernt und gewünschtenfalls anschließend
durch Desorption isoliert werden.
Trägergebundene Enzyme bieten den Vorteil, StoffUmwandlungen in
präparativen, kontinuierlichen Prozessen durchzuführen und die Reaktionsprodukte enzymfrei zu erhalten.
In der biochemischen, enzymatischen Analytik stehen trägergebun-
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dene wasserunlösliche Enzyme als mehrfach verwendbare Reagenzien zur Verfügung.
Aufgrund der Eigenschaft der Enzyme, Affinitäten nicht nur gegenüber
den Substraten, sondern auch gegenüber den spezifischen Inhibitoren aufzuweisen, hat sich die Gewinnung von Enzyminhibitoren
mit Hilfe der Affinitäschromatographie an trägergebundenen Enzymen
besonders günstig erwiesen. Andererseits erlaubt die Bindung von Inhibitoren an wasserunslösliche Matrizen die präparative
Gewinnung der entsprechenden Enzyme.
Als sogenannte Immunadsorbentien werden Antigene oder Antikörper an wasserunlösliche Matrizen gebunden und erlauben danach die Isolierung
der korrespondierenden Antikörper bzw. Antigene.
Als biologisch aktive Substanzen werden entsprechend den vorhergehenden
Ausführungen in vivo und in vitro wirksame natürliche und künstlich hergestellte Stoffe verstanden, die im weitesten
Sinne als Enzyme, Aktivatoren, Inhibitoren, Antigene oder Antikörper, Vitamine und Hormone bezeichnet werden können. Für diese
biologisch aktiven Substanzen hat sich, da sie die Wirkprinzipien der wasserunslöslichen Systeme darstellen, die Bezeichnung Effektoren
eingeführt.
Die meisten der bisher beschriebenen trägergebundenen Effektoren
sind wSentlich stabiler als die entsprechenden biologisch aktiven Substanzen in Lösung.
Als Trägermaterialien, sogenannte Matrizen, sind vorteilhaft solche Stoffe einzusetzen, die neben der Unlöslichkeit in wässrigen
Systemen eine möglichst niedrige umspezifische Adsorption aufweisen.
Dazu müssen hydrophobe, hydrophile und ionische Wechselwirkungen zwischen Matrize und dem Reaktionspartner des Effektors ·
weitgehend unterbunden werden. Mit Substanzen, deren Bindung an den Effektor unerwünscht ist, z.B. solchen, die keine spezifischen
Reaktionspartner des Effektors sind, sollte eine Bindung ausgeschlossen
sein. ''■·■■
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Die bislang verwendeten Matrizen als Träger für biologisch aktive Substanzen können unterteilt werden in diejenigen, die die Effektoren
durch physikalische Adsorption binden, dazu gehören beispielsweise Polystyrol, Aktivkohle und Glasperlen und diejenigen, die
mit den Effektoren über eine kovalente Bindung miteinander verknüpft
sind. Die Letztgenannten schliessen Vinylpolymeie als Homo- und Cop^ymerisate, z.B. Polyacrylsäure, Polyacrylsäureamide und
Amino-, Carboxy- oder Sulfonyl-substituiertes Polystyrol, ferner die Zellulose und ihre Abkömmlinge und schliesslich natürliche
und synthetische Polypeptide und Proteine ein. Wegen der ausgeglichenen Wechselwirkung zwischen Matrize und Effektor hat die Verwendung
von Kohlenhydraten, insbesondere der Zellulose, des Dex~ trans, der Stärke, des. Agars bzw. deren Abkömmlingen, als Matrize
in wäßrigen Systemen die höchste Verbreitung gefunden, wenn auch die in diesen Naturstoffen häufig enthaltenen Carboxylgruppen wegen
ihren unspezifischen Affinitäten als störend empfunden werden. Daneben weisen diese Stoffe eine relativ geringe thermische
und chemische Stabilität auf.
Viele dieser Nachteile konnten durch Verwendung von Polyvinylenglykol,
einem synthetischen Polymeren, als Matrize weitgehend beseitigt werden. Polyvinylglykol, auch Polyhydroximethylen genannt,
wird durch saure oder basische Hydrolyse aus Polyvinylencarbonat hergestellt. Jedes Kohlenstoffatom trägt eine Hydroxylgruppe und
ein Wasserstoffatom. Die durchgehende -C-C-Bindung verleiht dem Träger eine besonders hohe Stabilität.
Es wurde nun gefunden, daß man statt Polyvinyüsnglykol vorteilhaft
Vinylenglykol-Copolymere als Trägermatrix verwenden kann. Durch Einpolymerisieren von geeigneten Comonomeren in Polyvinylencarbonat
können die physikalischen und chemischen Eigenschaften des daraus hergestellten Polyvinylglykols weitgehend variiert werden.
So kann z.B. die "Hydrophilie" bzw. "Quellung" des Polyvinylenglykols
durch Einpolymerisieren von hydrophoben Monomeren, wie Äthylen, Vinylchlorid oder Styrol in das Polyvinylencarbonat ver-
/4
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ändert werden. Durch die Copolymerisation von Vinylacetat wird im verseiften Endprodukt eine Vinylenglykolgruppe durch eine Vinylalkoholgruppe
ersetzt, was eine erhöhte Quellbarkeit in wäßrigem Medium zur Folge hat.
Es ist möglich, mit Hilfe von■Comonoraeren,wie z.B. Diäthylenglykoldivinyläther
und Divinylbenzol eine Vernetzung und damit eine Verbesserung der mechanischen Eigenschaften des Trägers zu erhalten.' Durch Einpolymerisieren von elektrophilen Funktionen, z.B.
'Oxirangruppen (Epoxigruppen) aus Vinylglycidyläther-Comonomeren,
ist eine direkte Umsetzung der Matrix mit nucleophilen Funktionen (-NH-, -OH usw) möglich. Carboxylgruppen können durch Acrylsäure-·
ester-Comonomere eingeführt werden. Nach erfolgter Copolymerisation
werden die Estergruppen zu Carboxylgruppen verseift. Die Einführung von -NH0- oder -COOH-Gruppen erlaubt die Aktivierung
mit Hilfe von Carbodiimiden, Isoxasoliumsalzen, Glutaraldehyd usw.
Copolymerisate-Vinylenglykol/Vinylalkohol haben eine höhere spezifische
Oberfläche und damit eine höhere Bindungskapazität für z.B. Proteine an der Oberfläche des Polymerpulvers im Vergleich
zu Vinylenglykol-Homopolymerisat.
Gegenstand der Erfindung sind demnach biologisch aktive Verbindungen
aus einem vorzugsweise wasserunlöslichen Copolymer!sat des
Polyvinylenglykols und einer daran unter Erhaltung ihrer biologischen Aktivität gebundenen biologisch aktiven Substanz. In diesen
Verbindungen ist die Trägermatiix ein Polyvinylenglykol-Copolymerisat
enthaltend bis zu 45 %, vorzugsweise 5-20%, eines Comonomeren. Die biologisch aktiven Substanzen sind Stoffe wie Enzyme,
Aktivatoren, Inhibitoren, Antigene oder Antikörper, andere Plasmaproteine, Blutgruppensubstanzen, Phytämagglutinine, Antibiotika,
Vitamine oder Hormone, Peptide oder Aminosäuren oder synthetisch hergestellte Effektoren.
Der polymere Träger und die biologsich aktive Substanz sind entweder
direkt oder über eine Seitenkette (Spacer) kovalent miteinander verknüpft.
/5
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Die biologsich aktiven Verbindungen über eine Seitenkette (Spacer)
zu binden ist von Vorteil, wenn die Molekulargewichte ihrer affinen Partner sehr unterschiedlich sind, oder wenn bei der Verwendung
in einem biospezifischen Prozess sehr hochmolekulare oder aus mehreren Untereinheiten aufgebaute Proteine teilnehmen. Spacer
sind an der polymeren Matrix verankerte Seitenketten "bestimmter Länge, die durch Einpolymerisieren durch An- oder Einbau
(Bindung von bi- oder polyfunktionellen Verbindungen - z.B. einem Tripeptid - an die Matrix) oder durch Einbau von funktionellen
Gruppen und schrittweise Verlängerung an diesen erhalten werden können.
Gegenstand der Erfindung sind ferner Verfahren zur kovalenten Verbindung der biologisch aktiven Substanzen mit dem Träger.
Hierzu steht eine Reihe von allgemein bekannten Reaktionen zur Verfügung.
Sie betreffen zunächst die Verfahren zur Herstellung des PoIyvinylenglykol-Copolymeien.
Sie sind dadurch gekennzeichnet, daß Vinylencarbonat mit Comonomeren der allgemeinen Formeln:
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H2CHC^
COOR
· \TV CH=CiI
0-CH=CH2
-- CH
.R
/i
R /l
in denen R.. Wasserstoff/ Methyl, Äthyl, R3 Methyl, Äthyl, Propyl
und η eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten, polymerisiert wird.
Die Polymerisation des Polyvinylencarbonats erfolgt mit bis zu 45 % Comonomeren, vorzugsweise mit 5-20 %.
"Die Herstellung der biologisch aktiven Verbindung ist beispielsweise
dadurch möglich, daß eine elektrophile Gruppe entweder in die biologisch aktive Substanz oder in das Polyvinylenglykolcopolymer
eingeführt wird und über diese die biologisch aktive Substanz mit den Polyvinylenglykolcopolymeren umgesetzt wird.
Die Einführung der elektrophilen Gruppen in die Trägermatrix erfolgt
entweder durch Copolymerisieren von Vinylencarbonat mit elektrophile Gruppen enthaltenden Comonomeren oder durch Um-
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Setzung der Trägermatrix mit aktivierenden, elektrophile Gruppen tragenden niedermolekularen Verbindungen.
Allgemein ist die chemische Kupplung eines Reaktionspartners an die Trägermatrix einfach, wenn auf der einen Seite nucleophile und
auf der anderen elektrophile Funktionen vorhanden sind. Als reaktive nucleophile Funktionen kommen vor allem Amino-, Sulfhydryl-
und Hydroxylgruppen in Betracht, die gewöhnlich entweder in der Matrix oder im Reaktionspartner bereits enthalten sind. Elektrophile
Funktionen müssen erst eingeführt werden. Dazu können Carboxylgruppen in Säurehalogenide, Säureazide, Säureanhydride, Imidazolide
übergeführt oder direkt mit Carbodiimiden aktiviert werden. Als reaktive elektrophile Gruppen werden auch Isocyanat-, Isothiocyanat-,
Diazonium-Gruppen oder cyclische Imidocarbonatester benutzt. Besonders günstig ist die Einführung reaktiver Gruppen mit
Hilfe der Copolymerisation.
Durch Einpolymerisieren von Monomeren mit Epoxy-Gruppen, z.B.
mit Epoxyalkylvinyläthern in das Polyvinylencarbonat und durch die sehr großen Unterschiede in der Verseifungsgeschwindigkeit
zwischen cyclischen Carbonat- und Epoxy-Gruppen, erhält man leicht eine Polyvinylenglykol-Matrix mit reaktiven Epoxy-Gruppen,
die mit nucleophilen Funktionen umgesetzt werden können. So ist die direkte Bindung einer biologisch aktiven Substanz und/oder
die Einführung (Verlängerung) einer Seitenkette. (Spacer) möglich.
Ein weiterer Vorteil ist demnach bei der Verwendung von Copolymeren
auch die Möglichkeit der direkten Einführung (Einpolymerisieren) von elektrophilen Funktionen, die eine Umsetzung nach bekannten
Methoden erlauben.
Durch Copolymerisieren von Vinylencarbonat mit Äthyl-Acrylat und
nachfolgender Verseifung der Polymeren erhält man eine Matrix mit
-OH- und -COOH-Funktionen. Die Carboxylgruppen können mit Hilfe
von Carbodiimiden aktiviert werden und sodann eine Amidbindung
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mit Aminogruppen des Effektors eingehen. Carboxylgruppen lassen ferner die Ausbildung von Amidbindungen mit Hilfe der von Woodward
eingeführten Isoxazoliumsalze zu.
Eine weitere Methode zur Kupplung von biologisch aktiven Verbindungen
an·Carboxylgruppen-haltigen Polymeren wird mit Hilfe von
N-äthoxycarbonyl-2-äthoxy 1,2-dihydrochinolin (EEDQ) ausgeführt.
Die Carboxylgruppen können nach bekannten Methode verestert, danach
der Ester in das Hydrazid überführt und schließlich das in der Folge resultierende Azid mit der Aminogruppe des Effektorproteins
mit der Polyv.inylglykol-Matrix verknüpft werden.
Besitzt das in die Matrix einpolymerisierte Comonomere durch nachfolgende
umsetzungen frei verfügbare Aminogruppen, so ist mit Arylaminogruppen
enthaltenden Vinylsulfonderivaten oder Schwefelsäureestern
von ß-Hydroxyäthylsulfönen die Einführung von Arylaminogruppen
möglich, wobei die Ary!aminogruppen sodann nach bekannten
Methoden diazotiert und anschließend mit entsprechend reaktiven Gruppen eines Effektors verbunden werden können, z.B.
OJI OH
il | II | II | H | H | H |
1 | I | i | |||
•c-
J |
-C-
1 |
p.
f |
—C
( |
-? |
C*--
( |
π ο η
CH0 ■■--
I 2
HO-CH ' · '^_
.CIT2-^ ilH- (CH2) 6"la:~cn2"CH2~SO2~C~yf ~mi2
Auf diese Weise kann auch eine "Verlängerung" eines Spacers vorgenommen
werden.
Ein anderer Weg zur Bindung von Proteinen über die Aminogruppen erfolgt mit Hilfe von Glutardialdehyd.
Einfach ist die Verknüpfung des Effektors an die Matrix nach
einer Aktivierung, der Hydroxyl- oder Aminogruppen des Polyvinylen-
tr
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glykol-Copolymeren mittels Cyanhalogeniden, vorteilhaft mit Bromcyan
und einer nachfolgenden Umsetzung der Aminogruppen enthaltenden biologisch aktiven Effektoren über diese aktivierten Gruppen.
Eine weitere Möglichkeit zur Verknüpfung des Effektors mit einer Polyvinylenglykol- oder Polyvinylenglykol-Copolymerisat-Matrix
besteht in der Acylierung der Hydroxylgruppen mit Bromacetylbromid,'gefolgt
von der Alkylierung der Aminogruppen des Effektors.
Ähnliche Reaktionsverläufe sind beispielsweise durch Umsetzung der
Hydroxylgruppen des Trägers mit reaktiven Triazinen zu erreichen, ·
wobei ein Teil der reaktiven Gruppen des Triazins mit der Polyvinyl
englykol-Verbindung, ein anderer mit Aminogruppen des Effektors in Reaktion tritt.
Diazotierbare aromatische Amine, die über eine weitere reaktive Gruppe mit den Hydroxylgruppen des Trägers einerseits in Verbindung
treten können, erlauben auf der anderen Seite die Kupplung mit dazu befähigten, aktivierten Aminosäuren, beispielsweise den
Tyrosin- oder Histidinresten des Proteineffektors.
Arykminogruppen enthaltende Vinylsulfonderivate und Schwefelsäurehalbester
von ß-Hydroxyäthylsulfonen können mit den Hydroxylgruppen des Trägers zur Reaktion gebracht werden. Sie ermöglichen die
Bindung des Effektors nach der vorbeschriebenen Diazotierungsreaktion.
Besonders stabile Ätherverbindungen entstehen bei der Umsetzung >
der Hydroxylgruppen des Polyvinylenglykol-Copolymerisats mit nicht ionenbildenden Epoxiden, die mindestens 2 reaktive Gruppen
enthalten, wie die Epihalohydrine oder die Polyepoxide, beispielsweise
Epichlorhydrin oder Bisepoxide.
Eine weitere Art der Modifizierung ist die Einpolymerisation von
Comonomeren in die Polyvinylencarbonat-Kette (wie z.B. von Viny-
/10
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pyrrolidon) mit anschließender' partieller Umsetzung der Zyklocarbonatringe
des Polyvinylencarbonats mit einem Amin, z.B. mit Hexamethylendiamin, zu einem über eine Urethanbindung mit einem
Spacer oder Effektor substituierten Polyvinylencarbonat-Cöpolymerisat.
Die restlichen Zyklocarbonatgruppen werden dann zu Hydroxylgruppen' verseift:
CH-CH-
ι. :
^ ο'
CH- CI
ο ..ο-
Γ T
-CH-CII0- CU*— CU—CII—CH-
2 ' I
2 2
0 - O
OhI O
ό η-1 ' f1
-' R
Polyvinylencarbonat
versei::i
- '.CiI-CIi0-1CH | 1 | — CH | ■—CIi- CH — | |
- ·* | -I ■·.:-. 1. | OH | ,1 | I I |
N | ion | Oil O | ||
11O | - | ι | I. | |
■ ^ | V. / | i - | ,ΞΓ c-o | |
:■ ( | ||||
• ι · | ||||
R |
Neben den hier beispielhaft angeführten Verfahren zur Herstellung der kovalenten Verbindung zwischen der Trägermatrix und dem Proteineffektor
oder anderen Effektoren, existieren noch weitere Methoden, die zur Reaktion der Hydroxylgruppen oder bestimmter
Gruppen des Copolymeren mit einem Effektor führen und dadurch die kovalente Verbindung zwischen beiden herstellen; so die bekannte
Umsetzung mit komplexbildenden Metallverbindungen, z.B. Titanverbindungen. Alle diese Methoden sind dem Fachmann bekannt.
Bei der Bindung niedermolekularer biologisch aktiver Verbindungen ist es oft von Vorteil, nicht den Träger, sondern den Effektor
zu aktivieren.
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Im Prinzip können alle Verfahren verwendet werden/ die in der makromolekularen
Chemie bei der Modifizierung von synthetischen oder natürlichen makromolekularen Verbindungen bekannt sind.
Die Polyvinylenglykol-Polymerisate zeichnen sich neben der chemischen
und thermischen Stabilität durch vorteilhafte verarbeitungstechnische Eigenschaften aus und führen damit zu einer Überlegenheit
gegenüber den bisher als optimal gefundenen Trägermatrizen auf der Basis von natürlichen Kohlenhydraten. Sie sind
z.B. in Form von Fasern, Fäden, Folien oder sjferischen Partikeln
herstellbar, so daß je nach dem Anwendungszweck des daran zu bindenden
Effektors die geeignetste Form gewählt werden kann. Vorzugsweise werden diese Copolymerisate in Form von feinteiligen
Pulvern mit hoher spezifischer Oberfläche angewendet.
Durch die produktionstechnisch lenkbare Größe der für die Bindung
der Effektoren= bzw. der Spacer zugänglichen Oberfläche zeigt sich ein weiterer Vorzug der Polyvinylenglykol-Copolymerisate gegenüber
den bekannten Trägermaterialien.
Die erfindungsgemäßen biologisch aktiven Verbindungen eignen sich
"für die meisten Anwendungsverfahren, die bisher für andere an
hydrophile, wasserunlösliche Träger gebundene Effektoren bekannt geworden sind. Es können demnach Enzyme wasserunlöslich gemacht
werden. Die unlöslichen Enzyme werden zunehmend zur Bestimmung von Substraten in Analysenautomaten und als sogenannte Enzymelektroden
verwendet. Wegen der erhöhten Stabilität eignet sich eine Reihe trägergebundener Enzyme für die Durchführung technisch enzymatischer
umsetzungen.
Trägergebundene, biologisch aktive Substanzen haben wegen ihrer Eigenschaft als spezifische Adsorbentien eine breite Anwendung in
der Affinitätschromatographie gefunden. Mit Hilfe von trägergebundenen
natürlichen oder synthetischen Enzyminhibitoren gelingt die Hochreinigung von Enzymen, während die Enzyme als Effektoren insbesondere zur Gewinnung natürlicher Enzyminhibitoren aus Rohextrak-
/12
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ten hervorragend geeignet gefunden wurden. Trägergebundene wasserunlösliche
Antigene werden zur Isolierung der zugehörigen Antikörper verwendet, die auf diese Weise frei von anderen Serumbestandteilen
und frei von anderen Antigenen erhalten werden. Af finitätschromatographisch können auch nicht präzipitjrerbaren Antikörper
sowie solche, die wegen ihrer geringen Konzentration im Serum nicht fällbar sind, isoliert und auch quantitativ bestimmt werden.
/13
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Herstellung von Vinylencarbonat-Copolymeren
Das bei der Herstellung der Copolymeren (CP) eingesetzte Vinylencarbonat
wurde vor dem Einsatz eine Stunde über Natriumborhydrid
(100 Gewichtsteile Vinylencarbonat auf 2 Gewichtsteile NaBH.) bei
einem Druck von 33 mm am Rückfluß gekocht, dann bei 75°/33 mm über
eine 50 cm lange, mit Raschig-Glasringen gefüllte Silbermantel-Kolonne destilliert und möglichst umgehend für die Copolymerisation·
eingesetzt. Ebenso wurden die eingesetzten Comonomeren zuvor noch durch Destillation gereinigt.
1.) Copolymer!sat-Vinylenglykol/Vinylalkohol aus verseiftem Copolymer isat-Vinylencarbonat/ Vinylacetat
a) In 9 Gewichtsteilen Vinylencarbonat und 1 Gewichtsteil
Vinylacetat werden 0,05 Gewichtsteile Azobisisobutyronitril unter Stickstoff gelöst. Das Monomerengemisch wird
unter Stickstoff.in eine flachgedrückte (4 mm dicke, 60 mm
breite, 150 mm lange) Aluminiumtube mit Schraubverschluß eingefüllt (Gesamtfüllvolumen etwa 35 ml), unter N„ verschlossen
und 48 h in ein 50° warmes Wasserbad eingehängt. Es werden harte, spröde Kunststoffplatten erhalten, die
in einer Schlagmühle vor zeiJcleinert werden. Anschließend wird
das Granulat bei 1-2 mm Druck 5 h lang auf 120° erwärmt, um das nicht polymerisierte Rest-Monomere abzutrennen.
Das entmonomerisierte Granulat wird in einer Mühle weiter
auf eine Korngröße <T 0,1 mm gemahlen, in 500 Gewichtsteilen
0,5 N Natronlauge eingetragen, bei 20° mit einem schnelllaufenden Rührer eine Stunde lang gemischt, wobei die Carbonat-
und Acetyl-Gruppen verseift werden. Das wasserunlösliche CP-Vinylenglykol/Vinylakohol wird abgesaugt, gut mit
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Wasser von anorganische Salzen freigewaschen und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 4,7 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol
mit einer spezifischen Oberfläche gemessen nach BET von 34m2g"1.
b) Wie unter 1 .)a) beschrieben, nur daß auf 7 Gewichtsteile
Vinylencarbonat 3 Gewichtsteile Vinylacetat eingesetzt werden.
Ausbeute: 4,1 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol mit einer spezifischen Oberfläche des gefriergetrockneten
Polymerpulvers von 62,5m2g
.'■ c); Vergleichsversuch wie unter 1 .) a) beschrieben, nur daß
■10 Gewichtsteile Vinylencarbonat und kein Comonomer eingesetzt
werden.
Ausbeute: 4,7 Gewichtsteile Homopolymerisat-Vinylenglykol mit einer spezifischen Oberfläche des gefriergetrockneten
Polymerpulvers von 20,5 m2g ... .
2.) Copolymerisat-Vinylenglykol/Vinylglycidylather
Ein Gemisch von 7 Gewichtsteilen Vinylencarbonat, 3 Gewichtsteilen Vinylglycidyläther und 0,1 Gewichtsteil Azobisisobutyronitril
wird wie unter 1.)a) beschrieben in flachen AIu-'
miniumtuben unter N2 3 Tage auf 50° erwärmt. Die erhaltenen
Kunststoffplatten werden wie unter 1.)a) beschrieben zerkleinert,
entmonomerisiert, auf eine Korngröße <^ 0,1 mm gemahlen,
in 500 Gewichtsteilen eiskalter, 0,5 η NaOH mit einem schnell-,
laufenden Rührer 30 Minuten suspendiert, anschließend das verseifte Polymere sofort abzentrifugiert, in Eiswasser aufgeschlämmt,
unter Eiskühlung mit 2n H3SO4 auf pH 7 neutralisiert,
abgesaugt, mit Eiswasser ausgewaschen und gefriergetrocknet. Ausbeute: 3,9 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol(Vinylglycidyläther
enthaltend 1,3 Milliäquivalenten Oxirangruppen/g (bestimmt nach: "Praktikum der makromolekularen organischen Chemie",
S. 221, von Braun, D., Cherdron, H., Kern, W., Müthig Verlag, Heidelberg 1966). ■
■ /15
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3.) Aminosubstituierte Copolymerisat-Trägermaterial
3,9 Gewichtsteile CP-Vinylglykol/Vinyglycidylather (aus Beispiel
2.)) werden mit einem Ültra-Turrax-Rührer in 100 Gewichtsteilen
H2O suspendiert und mit 10 ml 30 %igem Ammoniak
versetzt. Mit einem kleinen Magnetrührer wird anschließend noch 10h bei 50° gerührt, schließlich abgesaugt und gut mit
Wasser ausgewaschen und gefriergetrocknet. Ausbeute:3,5 Gewichtsteile Copolymerisat-Trägermaterial enthaltend
0,9 m äquivalente Aminogruppen pro Gramm, in Form von 3-Ämino-2-hydroxy-propyl-Gruppen (aus der Umsetzung von Ammoniak
mit Glycidylgruppen entstanden).
4.) CP-Vinylenglykol / Arylsäure
9 Gewichtsteile Vinylencarbonat, 1 Gewichtsteil Acrylsäureäthylester
und 0,05 Gewichtsteile Azobisisobutyronitril werden unter N2 wie bei Beispiel 1.)a) polymerisiert, zerkleinert,
entmonomerisiert und auf eine Korngröße
<^0,1 mm gemahlen, verseift, abgesaugt, ausgewaschen und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 5,0 Gewichtsteile hydrophiles Polymerpulver, enthaltend
4,1 Milliäquivalente Carboxylgruppen pro Gramm Träger mit einer spezifischen Oberfläche nach BET von 27,2 m2g
5.) IW -Aminohexy!-Gruppen-substituiertes Poly-Vinylglykol
5 Gewichtsteile CP-Vinylenglykol/Acrylsäure aus Beispiel 4.)
werden mit dem ültra-Turrax in 100 ml H2O suspendiert, auf
5° gekühlt, mit 2,5 g N-Cyclohexyl-N1- (N-roethylmorpholino)-äthyl)-carbodiimido-p-toluol-sulfonat
versetzt, 30 Minuten bei pH 5 und 5° gerührt, abfiltriert und schnell mit Eiswasser
gewaschen. Der aktivierte Träger wird anschließend sofort in eine mit 2 η HCl auf pH 7,5 gestellte und auf 5°
gekühlte Lösung von 5 g Hexamethylendiamin in 100 ml Wasser suspendiert und noch weitere 24 Stunden unter diesen Bedingungen
mit einem Magnetrührer gerührt, abgesaugt, gut mit Wasser
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ausgewaschen und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 4,5 Gewichtsteile k/'-Aminohexyl-Gruppen-substituiertes
Poly-Vinylenglykol mit 0,7/Milliäquivalenten Aminogruppen
pro Gramm Träger.
6.) Umsetzung von CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol aus Beispiel 1.)a)
mit einer spezifischen Oberfläche nach BET von 34 m2g
a) mit Epichlorhydri>n
50 g eines CP-Vinylenglykol/Vinylakohol, hergestellt nach
Beispiel 1.)a) werden in 1 Liter 2 η NaOH suspendiert, mit
. 250 ml Epichlorhydrin versetzt und 2 Stunden bei 55-60° gerührt. Der pH-Wert der Suspension sinkt nach kurzer Zeit
auf 10-11. Durch Zugabe von NaOH wird noch 1 Stunde dieser pH-Wert gehalten. Nach 2 Stunden Reaktionszeit wird der Feststoff
abgesaugt, mit Wasser, Aceton und zum Schluß wieder mit Wasser gewaschen.
b) mit Hexamethylendiamin
50 g Hexamethylendiamin werden in 1,5 1 Wasser gelöst und mit HCl bis pH 10 versetzt. Zu der Lösung wird das nach
6.)a) aktivierte CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol gegeben und bei 50-55° 6 Stunden gerührt. Danach wird das Produkt
abgesaugt und mit Wasser frei von Hexamethylendiamin gewaschen.
c) mit i-Aminobenzol-4-ß-hydroxyäthylsulfonschwefelsäureester -
Das unter Beispiel 6.)b) erhaltene Produkt wird mit 50 g i-Aminobenzol-4-ß-hydroxyäthylsulfonschwefelsäureester
bei 55° und pH 10 eine Stunde lang gerührt. Anschließend wird der Feststoff abfilüri ert, mit Wasser, Aceton und
wieder mit Wasser gewaschen. -
c) Diazotierung
10 g des unter Beispiel 6.)c) erhaltenen Produktes werden
auf einer Nutsche mit -200 ml η HCl gewaschen und danach - in 300 ml 0,5 η HCl suspendiert. Die Suspension wird unter
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Rühren mit 0,1 η NaNO^Lösung bei 0-4° versetzt, bis bei
der Diazotierung mit KJ-Stärkepapier ein geringer Nitrit-Überschuß
festzustellen ist. Nach 10 Min. wird über eine Nutsche abfiltriert und der Rückstand mit Eiswasser und
anschließend mit 0,15 M Natriumphosphat-Puffer pH 7,5 von
0-4° gewaschen.
e) Kovalente Bindung mit Protein
0,8 g Albumin werden in 350 ml Phosphatpuffer pH 7,5 gelöst,
auf 4° abgekühlt und das unter 6.)d) hergestellte Produkt zugegeben. Die Suspension wird 20 Stunden bei 4°
gerührt, danach abfiltriert und der Feststoff mit 1 M NaCl und phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) (wäßrige
0,9 %ige NaCl-Lösung mit einem Gehalt an 1/15 Mol Na2HPO4-KH3PO4-PUffer
von pH 7,2) gewaschen. Filtrat und Waschlauge werden nach der Methode der radialen
Immundiffusion auf Albumin untersucht. Es werden 60 mg Albumin an 1 g des so hergestellten Trägers gebunden.
7.) Umsetzung von CP-Vinylenglykol/Vinylalkohol aus Beispiel 1.)b)
mit einer spezifischen Oberfläche nach BET, von 62,5 m2g
Nach analogen Umsetzungen wie unter 6.)a) bis e) beschrieben können 1 g aktivierten Träger 80 mg Albumin quantitativ gebunden
werden.
8.) Umsetzung von Homopolymerisat-Vinylenglykol aus Beispiel
1.)c) mit einer spezifischen Oberfläche nach BET von 20,5ro2g
Nach analogen Umsetzungen wie unter 6.)a) bis e) beschrieben können an 1 g aktivierten Träger 45 mg Albumin quantitativ
gebunden werden.
9.) (-c-Aminohexylgruppen-substituiertes Vinylenglykol(Vinylpyrrolidon-Copolymerisat
In 9 Gew.Tl. Vinylencarbonat und 1 Gew.Tl. Vinylpyrrolidon
werden Ό,05 Gew.Tl. Azobisisobutyrolnitril unter Stickstoff
gelöst und analog Beispiel 1.)a) polymerisiert -und aufgear-
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Nach dem Entmonomerisieren wird das Granulat zu einer 12 Gew.
%-igen Dimethylformariid-Lösung gelöst, und mit einem Druck
von 15 Atü wird diese Lösung in ein Methanol-Fallbad hinein-· gedüst. Man erhält einen feinfaserigen Niederschlag Vinylencarbonat/Vinylpyrrolidon-Copolymerisat,
der abgesaugt, mit Methanol nachgewaschen und in 200 Gew.Tl. Methanol resuspendiert
wird. Es werden 6 Gew.Tl. Hexamethylendiamin, gelöst iu
50 Gew.Tl. Methanol, zugegeben, die Suspension 2 Teige bei
Raumtemperatur gerührt, abgesaugt und mit Methanol ausgewaschen. Der gewaschene Filterrückstand wird jetzt in einer Lösung
von 10 Gew.Tl. Natriumraethylat in 300 Gew.Tl. 96 %igem
Methanol 4 Tage bei Raumtemperatur suspendiert, mit Methanol und dann sehr intensiv mit Wasser ausgewaschen und gefriergetrocknet.
Ausbeute: 5,0 Gew.Tl. eines über Urethan-Bindurigen mit
hexyl-Gruppen substituierten VinyIglykol/Vinylpyrrolidon-Copolymerisats
enthaltend 1,6 m Äquivalent NH^-Grippen/g Träger.
10.) Bindung von IgG an CiT-Aminohexyl-Gruppen-substituiertes Copolymerisat
aus Beispiel 9.) mit Hilfe von Bernsteinsäureanhydrid und wasserlöslichen Carbodiixaid
5 Gew.Tl. von nach Beispiel 9.) hergestelltem tcT-Aminohexylsubstituierten
Träger werden bei 10° und pH 6 mit 2,5 Gew.Tl.
Bernsteinsäureanhydrid, die in 200 Gew.Tl. Wasser suspendiert sind, 4 Stunden succincyliert. Der pH-Wert wird mit 2 η NaOH
einreguliert. Nach der Waschung des Feststoffes mit Wasser wird das Produkt mit 1,25 Gew.Tl. N-Cyclohexyl-N1-(N-methymorpholino)-äthyl)-carbodiimid-p-toluol-sulfonat
bei pH 5 und 5° 30 Min. gerührt, abfiltriert und schnell mit Eiswasser gewaschen.
0,5 Gew.Tl. IgG werden in 150 Gew.Tl. Phosphat-Puffer pH 7,5
gelöst und mit dem aktivierten Träger 24 Stunden bei 4° gerührt. Nach Filtration wird das Produkt mit 1 M Kochsalz und
mit PBS gewaschen.
An 1 g· des Trägers werden 75 mg IgG kovalent gebunden.
An 1 g· des Trägers werden 75 mg IgG kovalent gebunden.
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- rs -
Ίλ -
"·"·-) Copolymerisat-Vinylenglykol/Diäthylenglykoldivinyläther
In 9 Gew. Tl. Vinylencarbonat und 1 Gew>il. Diäthylenglykol-divinyläther
werden 0,1 Gew.Tl. Azobisisobutyrolnitril unter Stickstoff gelöst und wie unter 1.)a) beschrieben in flachen
Aluminiumtuben unter N~ 3 Tage auf 50° erwärmt und polymerisiert.
Nach Aufarbeitung und Verseifung wie unter 1,)a) boschrieben werden 3,5 Gew.Tl. CP-Vinylenglykol/Diäthylenglyko.·
divinyläther erhalten.
12.) Copolymerisat-Vinylenglykol/ N-Acryloylaminoacetaldehyddiiue-
■ thy !acetal ·
a) In 9 Gew.Tl. Vinylencarbonat und 1 Gew.Tl. N-Acyloylaminoacetaldehyddimethylacetal
werden 0,05 Gew.Tl. Azolisisobutyronitril unter Stickstoff gelöst. Das Monomerengemisch
wird wie unter 1.}a) beschrieben polymerisiert, aufgearbeitet und verseift zu 4,1 Gew.Tl. N-Acryloylaminoacetaldehyddimethylacetal/Vinylenglykol-Copolymer.
10 Gew.Tl. N-Acryloylaminoacetaldehyddimethylacetal/Vinylenglykol-Copolymere
wurden in 100 Gew.Tl.· 1 N HCl 4-5 Stunden
gerührt. Der aktivierte Träger wurde mit Wasser und Phosphatpuffer pH 7,5 gewaschen.
b) 0,5 g Albumin wurden in 200 ml PBS gelöst und mit dem unter
a) hergestellten Produkt 14 Stunden bei 4° gerührt. Nach Filtration wurde das trägergebundene Protein mit 1 M Kochsalz
und mit PBS gewaschen.
1 g des so hergestllten Trägers bindet 40 mg Albumin.
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INSPECTED
Claims (6)
1. Verbindung aus einem Copolymeren des Vinylenglykols und einer
daran chemisch gebundenen biologisch aktiven Substanz.
2. Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch-gekennzeichnet, daß das
Copolymere mindestes 55 % Monomereneinheiten des Vinylenglycols enthält und höchstens 45 % Monomereneinheiten mindestens einer
Verbindung der allgemeinen Formeln:
-He-/'
H2° S0-
9C=C V/ V CH=CH9
\ΓΛ V^ 0-CK=CH2
/h
\ ι
OC ^ C
R /
9C=Cv 2 \CHC
^Q-CH-CH2 I I
in denen R^ Wasserstoff, Methyl, Äthyl, R3 Methyl, Äthyl, Pro-
pyl und η eine ganze Zahl zwischen 1 und 4 bedeuten.
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OWQlNAL INSffCTEP
3. Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die
biologisch aktive Substanz ein Enzym, Aktivator, Inhibitor, Antigen oder Antikörper, ein Plasmaprotein, eine Blutgruppensubstanz,
ein Phythämagglutinin, ein Antibiotikum, Vitamin oder Hormon, ein Peptid oder eine Aminosäure, ein natürlicher oder
snythetisch hergestellter Effektor.ist.
4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 , dcidurch
gekennzeichnet, daß man
(A) ein Copolymeres des Vinylcarbonats mit einer biologisch aktiven Substanz umsetzt und danach die noch vorhandenen
Cyclocarbonatgruppen in Hydroxygruppen überführt oder
(B) die Cyclocarbonatgruppen eines Copolymeren des Vinylen-■
· carbonats in Hydroxygruppen überführt und
(a) im Copolymerisat vorhandene oder in dieses eingeführte elektrophile Gruppen mit einer
biologisch aktiven Substanz umsetzt oder
(b) diese Hydroxygruppen
(1) entweder zuerst mit einer elektrophile Gruppen enthaltenden Verbindung und sodann mit einer
biologisch aktiven Substanz
(2) oder unmittelbar mit einer elektrophilen Gruppen tragenden biologisch aktiven Substanz umsetzt.
5. Mittel enthaltend eine Verbindung gemäß Anspruch 1.
6. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 zur Affinitätschromatographie, zur Durchführung von Immunreaktionen oder zur
Durchführung von Enzymreaktionen.
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Priority Applications (20)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2552510A DE2552510C3 (de) | 1975-11-22 | 1975-11-22 | Biologisch aktive Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung |
ES453362A ES453362A1 (es) | 1975-11-22 | 1976-11-16 | Procedimiento para la preparacion de una comunicacion forma-da por un copolimero de vinilenglicol y una sustancia biolo-gicamente activa. |
NL7612771A NL7612771A (nl) | 1975-11-22 | 1976-11-17 | Biologisch actieve verbindingen en werkwijze voor de bereiding daarvan. |
CH1453676A CH636628A5 (en) | 1975-11-22 | 1976-11-18 | Process for the preparation of biologically active compounds, and the use thereof |
FI763314A FI763314A (de) | 1975-11-22 | 1976-11-18 | |
NO763975A NO763975L (de) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | |
DK522976A DK522976A (da) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Forbindelser af vinylenglycol-copolymere og biologisk aktive stoffer og fremgangsmade til fremstilling deraf |
SE7612998A SE430066B (sv) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Forening mellan ett sampolymeriserat och en dertill kemiskt bunden biologiskt aktiv substans jemte anvendning av nemnda forening for affinitetskromatografi eller for genomforande av immun- eller enzymreaktioner |
AU19817/76A AU513890B2 (en) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Water-insoluble biologically active compounds |
CA266,092A CA1069070A (en) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Water insoluble biologically active compounds and process for their manufacture |
LU76243A LU76243A1 (de) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | |
ZA766942A ZA766942B (en) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Water insoluble biologically active compounds and process for their manufacture |
YU02836/76A YU283676A (en) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Process for preparing biologically active compounds |
IL50940A IL50940A (en) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Water insoluble biologically active substances chemically bound to a copolymer of vinylene glycol and process for their manufacture |
AT863176A AT358275B (de) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Verfahren zur herstellung von neuen ver- bindungen aus einem copolymeren des vinylengly- cols und einer daran chemisch gebundenen biologisch aktiven substanz |
IT7629576A IT1121742B (it) | 1975-11-22 | 1976-11-19 | Composti biologicamente attivi impiegati in reazioni tra partner bioaffini e processo per la loro preparazione |
BE172569A BE848601A (fr) | 1975-11-22 | 1976-11-22 | Combinaisons a activite biologique, leur procede de preparation |
GB48603/76A GB1571182A (en) | 1975-11-22 | 1976-11-22 | Carrier-bound biologically active substances and process for their manufacture |
JP51139645A JPS6048524B2 (ja) | 1975-11-22 | 1976-11-22 | 生物活性物質試薬およびその製造方法 |
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---|---|---|---|
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---|---|
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0002767A1 (de) * | 1977-12-22 | 1979-07-11 | BASF Aktiengesellschaft | Polyamidacetale und ein Verfahren zur Herstellung derartiger Polymerisate |
EP0095932A1 (de) * | 1982-05-28 | 1983-12-07 | Japan Synthetic Rubber Co., Ltd. | Die Verwendung eines teilchenförmigen Polymers als Träger für biologische Substanzen und dergleichen und solche auf dem Träger gebundene Substanzen |
DE3413904A1 (de) * | 1984-04-13 | 1985-10-24 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Polymerisate auf basis von polyvinylencarbonat und/oder polyhydroxymethylen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
EP3502275A1 (de) * | 2017-12-22 | 2019-06-26 | Attomol GmbH | Verfahren zur anreicherung von nukleinsäuren und kit zu dessen durchführung |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4210722A (en) * | 1977-11-14 | 1980-07-01 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Protein immobilizer |
GB2043996B (en) * | 1978-12-27 | 1983-09-07 | Nihon Dempa Kogyo Co | Thickness shear quartz crystal oscillator |
FR2450263A1 (fr) * | 1979-02-28 | 1980-09-26 | Dow Chemical Co | Procede pour coupler une proteine sur un latex portant des groupes epoxyde et produits obtenus par ce procede |
EP0015473A1 (de) * | 1979-02-28 | 1980-09-17 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Verfahren zum Immobilisieren von Zellen |
DE3145082A1 (de) * | 1981-11-13 | 1983-05-19 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "ein latex, biologisch aktive latexkonjugate und verfahren zu ihrer herstellung" |
DE3243591A1 (de) * | 1982-11-25 | 1984-05-30 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Vinylencarbonat-polymerysate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
DE3344912A1 (de) * | 1983-12-13 | 1985-06-20 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Vernetzte polymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
SE8401437D0 (sv) * | 1984-03-14 | 1984-03-14 | Sven Gothe | Ytmodifierade plastytor och dess tillempningar for immunoassays (ia) |
GB8423228D0 (en) * | 1984-09-14 | 1984-10-17 | Unilever Plc | Specific binding materials |
US4780409A (en) * | 1985-05-02 | 1988-10-25 | Genetic Systems Corporation | Thermally induced phase separation immunoassay |
DE3637421C1 (de) * | 1986-11-03 | 1987-10-29 | Nerbe Plus Ges Fuer Medizinisc | Reaktionsgefaess fuer die Blutgerinnungsreaktion |
DE3811042A1 (de) * | 1988-03-31 | 1989-10-19 | Merck Patent Gmbh | Ionenaustauscher |
DE19715504C2 (de) * | 1997-04-14 | 2000-10-26 | Max Planck Gesellschaft | PMMA-Membranen mit Polyethylenglykol-gekoppelten Wirksubstanzen |
JP2001247738A (ja) * | 2000-03-06 | 2001-09-11 | Unitika Chem Co Ltd | ポリビニルアルコール系樹脂組成物およびそれを主成分とする紙コート剤 |
JP6405669B2 (ja) * | 2014-03-31 | 2018-10-17 | 東ソー株式会社 | 新規重合体、およびそれを有する細胞培養基材 |
CN108264604B (zh) * | 2016-12-30 | 2020-08-11 | 北京爱普聚合科技有限公司 | 一种干法压裂液减阻增稠剂及其制备方法 |
CN110504452B (zh) * | 2019-09-04 | 2022-06-21 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高剥离强度的聚合物粘结剂及其在二次锂电池中的应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE810605A (fr) * | 1973-03-01 | 1974-05-29 | Enzymes et autres proteines liees a des supports polymeriques contenant des unites de carbonate de vinylene | |
ES437153A1 (es) * | 1974-05-06 | 1977-04-16 | Marburgnlahn | Procedimiento para la preparacion de un compuesto biologica-mente activo a base de poli(hidroximetileno) o poli(carbona-to de vinileno). |
-
1975
- 1975-11-22 DE DE2552510A patent/DE2552510C3/de not_active Expired
-
1976
- 1976-11-16 ES ES453362A patent/ES453362A1/es not_active Expired
- 1976-11-17 NL NL7612771A patent/NL7612771A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-11-18 CH CH1453676A patent/CH636628A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-11-18 FI FI763314A patent/FI763314A/fi not_active Application Discontinuation
- 1976-11-19 ZA ZA766942A patent/ZA766942B/xx unknown
- 1976-11-19 AU AU19817/76A patent/AU513890B2/en not_active Expired
- 1976-11-19 AT AT863176A patent/AT358275B/de active
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Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0002767A1 (de) * | 1977-12-22 | 1979-07-11 | BASF Aktiengesellschaft | Polyamidacetale und ein Verfahren zur Herstellung derartiger Polymerisate |
EP0095932A1 (de) * | 1982-05-28 | 1983-12-07 | Japan Synthetic Rubber Co., Ltd. | Die Verwendung eines teilchenförmigen Polymers als Träger für biologische Substanzen und dergleichen und solche auf dem Träger gebundene Substanzen |
DE3413904A1 (de) * | 1984-04-13 | 1985-10-24 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Polymerisate auf basis von polyvinylencarbonat und/oder polyhydroxymethylen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
EP3502275A1 (de) * | 2017-12-22 | 2019-06-26 | Attomol GmbH | Verfahren zur anreicherung von nukleinsäuren und kit zu dessen durchführung |
EP3502274A1 (de) * | 2017-12-22 | 2019-06-26 | Attomol GmbH | Probenträger und verfahren zu dessen herstellung |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO763975L (de) | 1977-05-24 |
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JPS5265596A (en) | 1977-05-31 |
ATA863176A (de) | 1980-01-15 |
FR2332287B1 (de) | 1982-11-12 |
JPS6048524B2 (ja) | 1985-10-28 |
FR2332287A1 (fr) | 1977-06-17 |
YU283676A (en) | 1982-06-30 |
SE7612998L (sv) | 1977-05-23 |
AU1981776A (en) | 1978-05-25 |
CH636628A5 (en) | 1983-06-15 |
DE2552510C3 (de) | 1981-02-19 |
CA1069070A (en) | 1980-01-01 |
IL50940A (en) | 1980-03-31 |
AT358275B (de) | 1980-08-25 |
SE430066B (sv) | 1983-10-17 |
BE848601A (fr) | 1977-05-23 |
ZA766942B (en) | 1977-10-26 |
AU513890B2 (en) | 1981-01-15 |
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LU76243A1 (de) | 1977-06-07 |
DE2552510B2 (de) | 1980-06-04 |
NL7612771A (nl) | 1977-05-24 |
FI763314A (de) | 1977-05-23 |
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