DE2004686B2

DE2004686B2 - Makrolid-Antibioticum SF-837 und dessen Diacetylderivat und deren pharmakologisch nichtgiftige Säureanlagerungssalze sowie Verfahren zur Herstellung des Antibioticums SF-837

Info

Publication number: DE2004686B2
Application number: DE2004686A
Authority: DE
Inventors: Eichi Tokio Akita; Shoichi Kawasaki Kanagawa Amano; Norio Ezaki; Shunzo Tokio Fukatsu; Shigeharu Yokohama Kanagawa Inoue; Taro Yokohama Kanagawa Niida; Takashi Shomura; Takashi Kawasaki Kanagawa Tsuruoka; Hiroshi Watanabe; Kanagawa Yokohama
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1969-02-06
Filing date: 1970-02-03
Publication date: 1974-03-14
Also published as: AT310942B; NL7001658A; IL33732A; CA919607A; IL33732A0; DE2004686C3; FR2034522B1; YU34146B; SE378843B; US3761588A; YU27870A; FR2034522A1; GB1303842A; BG25523A3; DK127007B; DE2004686A1; CS178067B2; NL159715B; BE745430A

Description

CH₃ ^CH₃

"n

OH

CH₃ O

in der R₁ und R₄ jeweils den ReSt-COCH₂CH₃ bedeuten, während R₂ und R₃ entweder je ein Wasserstoffatom oder den Rest —COCH₃ darstellen, und deren pharmakologisch nicht giftige Säureanlagerungssalze sowie ein Verfahren zur Herstellung des Antibioticums SF-837.

Es wurde gefunden, daß diese neuen Makrolid-Antibiotica eine starke wachstumshemmende bzw. wachs-

tumsverhindernde Wirkung gegen gram-positive patogene Bakterien und gegen eitererzeugende Bakterien haben, die ansonsten gegen Antibiotica resistent sind. Ihre Wirkung wurde gegenüber einer Reihe von Mikroorganismen geprüft, wobei für einige das bekannte Kitasamycin zum Vergleich herangezogen wurde. Das Kitasamycin ist bekannt aus »Journal of Antibiotics«, Bd. 6, S. 87 (1953).

In diesen Versuchen wurde die minimale Hemmkonzentration in üblicher Weise mit der Brühen-Verdünnungsmethode unter Verwendung von

1. Herzinfusions-Medium,

2. Glycerin-Bouillon-Medium und

3. Sabouraud-Medium

als Kulturmedien bestimmt. Die Bebrütung erfolgte jeweils 24 Stunden bei 37° C. Die erhaltenen Ergebnisse sind ti der folgenden Tabelle 1 zusammengestellt.

Tabelle I

Test
Mikroorganismen

Staphylococcus aureus 209P

Staphylococcus aureus 209 P, resistent gegen Penicillin

Staphylococcus aureus 209 P, resistent gegen Streptomycin und A. 249-Substanz ...V."

Staphylococcus aureus 209 P. resistent gegen Novobiocin

Staphylococcus aureus 209 P, resirtent gegen Actinomycin

Staphylococcus aureus 209 P, resistent gegen Kanamycin

Staphyloccus aureus Smith

Staphylococcus aureus Terajima

Staphylococcus aureus, resistent gegen Streptomycin, Penicillin und Tetracyclin ..

Staphylococcus aureus 193

Staphylococcus aureus Smith

Staphylococcus älbus PCI 1200A

Bacillus subtilis ATCC 6633

Sarcina lutea

Escherichia coli

Pseudomonas aeruginosa

Proteus vulgaris

Klebsieila pneumoniae Shigella dysenteriae....

Mycobacterium SP 607

Mycobacterium smegmatis 607

Minimale Hemmkonzentration (mcg/ml)

SF-837 Substanz

0,39 0,78

0,39

3,125

0,39

3,125

0,39

0,78

1,56 1,56 0,39 1,56

0,39 0,05 >25

>25 >25 >25 >25 6,25

>25

Diacety! SF-837 Substanz

0,78 0,78

0,39 6,25 0,78

6,25 0,78 0,78

6,25 3,125

0,78 0,10

>25

>25 >25 >25 >25

>25

Kitasamycin

0.78

0,78

0,78 3,12

0,19

	Minimale Himmkonzentration	(mcg/ml)	Kitasa-
Test		Diacetyl SF-837	mycin
Mikroorganismen	SF-S37	Substanz
	Substanz		mehr als
Mycobacterium phlei		12,5	100
Nr 56	12,5
		>25
Candida albicans	>25
Penicillium chrysoge-		>25
num	>25	>25-
Aspergillus niger	>25 ■
Saccharomyces cere-		>25
visiae	>25 -		0,39
Streptococcus pyogenes
D 58	0,19		0,39
Diplococcus pneumo
niae Typ I	0,09		0,19
Diplococcus pneumo			1,56
niae Typ II	0,09
Bacillus subtilis PCI 219	0,78		1,56
Bacillus anthracis
Nr. 119	0,78

Aus den Werten der Tabelle I geht die vorteilhafte Wirkung des Antibioticums SF-837 und der Diacetylverbindung von SF-837 hervor. Es konnte nicht festgestellt werden, daß die bakterienverhindernde Aktivität von SF-837 durch Serum inaktiviert werden kann. .

Die Toxität von SF-837 bei oraler und parenteraler Verabreichung ist gering. Bei oraler Gabe von SF-837 an Mäuse beträgt der LD₅₀-Wert 3200 mg/kg.

Ferner wurde die antibakterielle Wirksamkeit in vivo geprüft.

Hierbei wurden die zu prüfenden Verbindungen an Mäuse, die mit Staphylococcus aureus Smith infiziert worden waren, sowohl oral als auch subcutan verabreicht, und die ED₅₀ wurde nach dem Litchfield-Wilcoxon-Verfahren berechnet. Es wurden die folgenden Ergebnisse erhalten:

Geprüfte Substanz	ED₅₀ bei oral	Mä	jsen (mg/kg) subcutan
SF-837	125		51
KJtasamycin (bekannt)	230		86

12,5 Andere bekannte Antibiotica vom Makrolidtyp wie Niddamycin, Magnamycin und Spiramycin liefern

noch schlechtere Ergebnisse als Kitasamycin.

Weiterhin wurde die Wirkung der Diacetylverbindung von SF-837 in der folgenden Weise untersucht: eine wäßrige Suspension von Staphylococcus-Aureus-Smith-Bakterien würde Gruppen von je 10 ICR-

Mäusen intraperitoneal in einer Dosierung injiziert, die lOOmal größer war als der L D₅₀-Wert.

Dreißig Minuten nach dieser Injektion wurden die infizierten Mäuse oral mit wäßrigen Suspensionen von 0,2, 1,0,2,0,4,0, 6,0,8,0 bzw. 12 mg Diacetyl-SF-837 in

0,5 ml Wasser und einer geringen Menge an Gumml·- arabikum behandelt. Dann wurde jede Gruppe nach der Behandlung 7 Tage gefüttert. Aus den Ergebnissen mehrerer Versuche wurde festgestellt, daß das Di-

acetyl-SF-837 einen ED₅₀-Wert von 170 mg/kg besitzt; die ED₅₀-Werte wurden nach der Litchfield-Wilcoxon-Methode berechnet.

Das Makrolid-Antibioticum SF-837 wird erfindnngsgemäß dadurch hergestellt, daß man den Stamm von Streptomyces mycarofaciens nov. sp., das unter der ATCC Nr. 21454 hinterlegt worden ist, in üblicher Weise in einem Nährmedium, das assimilierbare Stickstoff- und Kohlenstoffquellen enthält, unter aeroben Bedingungen kultiviert bzw. züchtet und dann das gebildete Antibioticum aus der Kultur abtrennt.

Der aus einer Bodenprobe erstmals isolierte und bei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendete Mikroorganismus Streptomyces mycarofaciens nov. sp., der uneingeschränkt bei der American Type Culture Collection, Washington D. C, unter ATCC

Nr. 21 454 hinterlegt worden ist, hat folgende biologische Eigenschaften:

I. Morphologische Beobachtung
1. Belüftetes Mycelium

Belüftetes Mycelium erzeugt auf Glycerin-Czapek's-Agar, Glycerin-Calciummaleat-Agar und synthetischem Stärke-Agar reichlich offene Spiralen.

2. Sporen

Die Sporen sind von kugelförmiger, ovaler oder elliptischer Form, die Oberflächenstruktur ist dornig bzw. stachelig (verhältnismäßig dünnere und längere Stacheln), und die Größe der Spore beträgt 0,5 bis 0,7 Micron zu 0,8 bis 1,0 Micron.

II. Die Eigenschaften auf verschiedenen Kultur- bzw. Nährmedien ergeben sich aus der folgenden Tabelle 2

Tabelle 2

Kulturmedium	Wachstum	Belüftetes Mycelium	Lösliches Pigment
Secrose-Czapek-Agar	geringes Wachstum,	spärlich, kraus (Kraus)	keins
	farblos bis cremefarben	weißlichgrau
Glycerin-Czapek-Agar	dunkelbraun	weiß bis cremefarben,	keins oder sehr schwach
		teilweise mit Bildung	rosa
		von gräulich gefärbten
		und krausen Luftmyzel
Krainsky-Glucose-	hellbraun bis	weiß, mit rose Anstrich	keins oder schwach
Asparagin-Agar	rötlichbraun		bräunlichgelb
Ushinsky-Glucose-	braun mir rötlichem	roso bis lavendelfarben	hellbraun
Aspargin-Agar	Anstrich
Calcium-maleat-Agar	geringes Wachstum, cremefarben	keins	keins
Glycerin-Calcium	hellbraun	rose, allmählich über	keins
maleat-Agar		gehend zu gräulich (kraus)
synthetischer Stärke-Agar	dunkelbraun mit	rose mit stark röt	keins
	purpurnem Anstrich	lichem Anstrich, all
		mählich übergehend in
		gräulich (kraus)
Fleischbrühe-Agar	gelblichbraun	sehr spärlich, weiß	keins
Glucose-Fleischbrühe-	dick, gut und braun	weiß bis gelblich	keins
Agar	bis dunkelbraun	cremefarben
Gl uco se- Pepton-Agar	braun	spärlich, weiß	keins
Tyrosin-Agar	rötlichbraun	weiß	keins
Kartoffelschnipsel	dick, gut und braun	reichlich, gräulichbraun	schwärzlichbraun
	bis schwärzlichbraun
Kartoffelschnipsel	braun	weiß bis cremefarben	braun an der Peripherie
			des Wachstums
Magermilch	ringförmig, Oberflächen-	spärlich, weiß	keins
	wachsrum, hellbraun
Ei	blaßbraun	keins	keins
Glucose-Czapek-Lösung	Oberflächen- und	spärlich, weiß	keins
	Bodenwachstum,
	blaßbraun
Loeffler's koaguliertes Serum	blaßbraun	keins	keins
Gelatine (20⁰C)	cremefarben bis	keins	keins
	blaßbraun

3888

Fortsetzung

Kulturmedium	Wachstum	Belüftetes Mycelium	Lösliches Pigment
Bennett's Cellulose-Medium	braun bis schwärzlichbraun kein Wachstum	rose mit rötlichem Einschlag	hellbraun

Bemerkung: Die Bebrütungstemperatur betrug im allgemeinen, wenn nicht anders angegeben, 28°C.

III. Physiologische Eigenschaften

Bildung von Schwefelwasserstoff: negativ

Bildung von Tyrosinase: negativ _ls

Bildung von Nitrit: positiv

Gerinnen von Magermilch: positiv

Peptonisierung von Magermilch: negativ

Hydrolyse von Stärke: positiv

Verflüssigung von Gelatine: positiv (schwach)

Zersetzung von Loeffler's koaguliertem Serum:

negativ

Chromogtne Wirkung: negativ

IV. Verwendung von Kohlenstoffquellen

1. Verwendet:

Glucose, Galactose, Fructose, Maltose, Lactose, Dextrin, Stärke, Glycerin, Inosit, Mannose. Salicin, Natriumacetat, Natriumeitrat, Natriumsuccinat.

2. Zweifelhaft:

Arabinose und Rhamnose.

3. Nicht zu verwenden:

Xylose, Saccharose, Raffinose, Dulcit, Sorbit, Mannit und Cellulose.

V. Wachstumstemperatur: 15 bis 38"C

40

Die obenerwähnten mikro-biologischen Eigenschaften der die Substanz SF-837 erzeugenden Rasse (im folgenden als SF-837-Rasse bezeichnet) können wie folgt zusammengefaßt werden: Der Sporentrager ist spiralförmig, die Spore .st stachelig. Aus synthetischen Kultur- bzw. Nährmedien kann ein cremefarben bis braun bis rötlichbraungefarbtes Wachstum beobachtet werden, wobei ein rosegefarbtes Luftmycelium und ein krauses graugefärbtes Lu/t-mycehum gebildet werden. Es kann keine wesentliche Bildung an löslichem Pigment beobachtet werden wahrend die Büdung von löslichem Pigment mit hellbrauner Farbe bei einer beschränkten Gruppe synthetischer Kulturmedien beobachtet werden kann. Be. organischen Kulturmedien wird andererseits im a»g^em™^mJ^ braungefärbtes Wachstum nut der Bildung von weiß oder cremefarben gefärbten Luft-mycehum beobachtet, jedoch ohne Bildung «nes'oshchen Pigmentes. Bei Kartoffelschnitzeln wird J^J«^* ¹J^ mycelium von gräulichbrauner Farbe gebiWetund die Bildung von schwärzlichgefarbtem. löslichem Pigment beobachtet.

^to

weise in der Nähe der Eigenschaften der Fradiae Arten, der Ruber-Arten und Flavus-Arten des Genus-Streptomyces liegen. Daher wird dieser Punkt nachstehend noch eingehender betrachtet.

Da die SF-837-Rasse negativ bei der Melanin-Bildung ist und die Bildung von Luft-mycelium von rosa Farbe oder Anstrich zeigt, wird die SF-837-Rasse zuerst mit den Rassen der Fradiae-Arten verglichen, nämlich Streptomyces fradiae, Streptomyces luridus, Streptomyces roseus und Streptomyces fuscus. Die SF-837-Rasse unterscheidet sich von den Rassen der Fradiae-Arten dadurch, daß bei der SF-837-Rasse das Luft-mycelium mit rosa Farbe oder Anstrich zeitweilig in der Anfangsstufe der Bebrütung auftritt und in vielen Fällen während des mittleren und späteren Stadiums der Bebrütung sich in ein graugefärbtes und krauses Luft-mycelium verändert, während die rosa Farbe oder der rosa Anstrich, die bzw. der bei den Rassen der Fradiae-Arten beobachtet wird, sehr stabil ist. Das Luft-mycelium von Streptomyces fradiae ist gradlinig und unterscheidet sich von der Spirale der SF-837-Rasse Streptomyces fradiae unterscheidet sich auch deutlich von der SF-837-Rasse dadurch, daß Streptomyces fradiae eine reichliche Bildung von Luftmycelium auf Saccharose-Czapek-Agar und ein farbloses Wachstum auf Stärke-Agar zeigt.

Die SF-837-Rasse unterscheidet sich von Streptomyces fuscus und Streptomyces luridus dadurch, daß Streptomyces fuscus nicht die Spiralbildung hat, während Streptomyces luridus die Spiralbildung nur bei einer begrenzten Gruppe von Kulturmedien aufweist, während die SF-837-Rasse auf vielen Kulturmedien eine ergiebige Spiralbildung zeigt. Streptomyces roseus ist mit der SF-837-Rasse insoweit vergleichbar, als die Spiralbildung beobachtet werden kann, wobei diese beiden sich jedoch deutlich dadurch voneinander unterscheiden, daß Streptomyces roseus ein farbloses Wachstum auf synthetischem Stärke-Agar zeigt, während es jedoch kein Luft-mycelium auf Kartoffelschnitzeln bildet

Da die SF-837-Rasse negativ bei der Melanin-Bildung ist und ein Wachstum von roter Farbe oder rotem Anstrich zeigt, wird die SF-837-Rasse zweitens verglichen mit Streptomyces albosporeus, Streptomyces erythraeus, Streptomyces niveoruber und Streptomyces purpurascens usw., die zu den Ruber-Arten gehören.

Streptomyces niveoruber unterscheidet sich deutlich von der SF-837-Rasse dadurch, daß die Oberflächenstruktur der Spore der zuerst erwähnten Art gleichmäßig ist, während diejenige der zuletzt erwähnten Art stachelig ist. Streptomyces albosporeus unterscheidet sich von der SF-837-Rasse weiterhin dadurch, daß Streptomyces albosporeus Luft-mycelium bildet, das hauptsächlich gradlinig ist, wobei ein ausgeprägt rotgefärbtes Wachstum auf Sucrose-Czapek-Agar und auf Glycerin-Calcium-maleat-Agar vorhanden ist, während kein Luft-mycelium auf Stärke-Agar gebildet

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ίο

wird. Streptomyces erythraeus stimmt mit der SF-837-Rasse insoweit nicht überein, als Streptomyces erythraeus auf Sucrose-Czapek-Agar und auf Kartoffelschnitzel-Agar ein rotgefärbres Wachstum zeigt, während ein cremefarben gefärbtes Wachstum auf Glucose-Asparagin-Agar und synthetischem Stärke-Agar vorhanden ist, auf denen die SF-837-Rasse ein Wachstum mit rötlichem Anstrich hat. Streptomyces purpurascens stimmt mit der SF-837-Rasse hinsichtlich der stacheligen bzw. faserigen Struktur der Sporenoberfläche überein, wobei sich jedoch Streptomyces purpurascens von der SF-837-Rasse dadurch unterscheidet, daß die zuerst genannte Art deutlich lösliches Pigment von roter Farbe oder rotem Anstrich nuf synthetischem Kulturmedium bildet, während die SF-837-Rasse kein solches lösliches Pigment aufweist. Die SF-837-Rasse wird weiterhin mit Streptomyces microflavus und Streptomyces roseoflavus verglichen, die zu den Flavus-Arten gehören und von denen angenommen wird, daß sie in enger Beziehung zu der SF-837-Rasse stehen. Wie die Kultureigenschaften zeigen, liegen Streptomyces microflavus und Streptomyces roseoflavus hinsichtlich gewisser Punkte dicht

bei der SF-837-Rasse, wobei jedoch die beiden zuers genannten Rassen Sporen bilden, deren Oberflächen struktur gleichmäßig bzw. glatt ist (H. D. T r e s η e und andere, »Journal of Bacteriology«, Bd. 91, S. 199: bis 2005, 1966), was einen deutlichen Unterschied zu stacheligen bzw. faserigen Sporenstruktur der SF-837 Rasse bedeutet.

Es ergibt sich somit, daß keine Rasse unter den be kannten Arten des Genus Streptomyces gefunden wer den kann, die mit der SF-837-Rasse übereinstimmt.

Andererseits ist die neue antibiotische Substanz, dit mittels der SF-837-Rasse erzeugt wird, typisch fiii basische macrolide Antibiotica. Die Substanz SF-83" zeigt ein Absorptionsmaximum bei einer Wellenlänge vcn 232 ηΐμ im ultravioletten Spektrum, woraus geschlossen werden kann, daß diese Substanz ein Antibioticum der gleichen Art wie Leucomycin, ,Iosamycin. Spiramycin, Miamycin und Tertiomycin darstellt.

Es bestehen deutliche Unterschiede zwischen den morphologischen Eigenschaften der SF-837-Rasse und den bekannte Antibiotica erzeugenden bekannten Mikroorganismen, wie aus der folgenden Tabelle 3 hervorgeht.

	Tabelle 3	Luftmycel	Spirale	Obcrflächenstruklu r der Spure
Gebildete Antibiotica	Microorganis mus	Quirl	stachelig
SF-837-Substanz	SF-837-Rasse	geradlinig	glatt
Leucomycin	Streptomyces kitasatoensis		glatt
.iosamycin	Streptomyces
	narboensis var.	Spirale
	josamyceticus	Spirale	glatt
Spiramycin	Streptomyces ambofaciens	Quirl	glatt
Miamycin	Streptomyces ambofaciens	Quirl	glatt
Tertiomycin	Streptomyces eurocidicus	Spirale	glatt
Tertiomycin	Streptomyces albireticuli	geradlinig	glatt
Carbomycin B	Streptomyces halstedii	geradlinig	glatt
Tylosin	Streptomyces fradiae	Spirale	glatt
Macrocin	Streptomyces fradiae		glatt
ftelomycin	Streptomycin
	hygroscopicus

Die SF-837-Rasse unterscheidet sich auch deutlich von dem das Niddamycin erzeugenden Mikroorganismus Streptomyces djakartensis (der in der deutschen Patentschrift 1 077 381 beschrieben ist), von dem die Sporenoberflächenstmktur nicht beschrieben ist, wobei der Unterschied darin liegt, daß Streptomyces djakartensis bei der Melaninbildung positiv ist, wobei jedoch weder eine Peptonisierung oder Koagulierung von Magermilch auftritt

Die vorstehenden microbiologischen Vergleiche und Betrachrungen ergeben, daß die SF-837-Rasse nicht nur ein neuer Mikroorganismus ist, der das Macrolid-Antibioticum SF-837 erzeugt, sondern auch, daß die SF-837-Rasse sich von allen bekannten Rassen selbst vom Gesichtspunkt der naturwissenschaftlichen Systemkunde aller Actinomyceten unterscheidet Aus diesem Grunde wurde diese SF-837-Rasse als Streptomyces mycarofaciens nov. sp. bezeichnet

Die SF-837-Rasse hat Eigenschaften, die zu Veränderungen neigen, wie es üblicherweise bei anderen Streptomyces-Arten beobachtet werden kann. So kann die SF-837-Rasse beispielsweise Varianten und Mutanten bilden, wenn sie mit verschiedenen bekannten Mutantenbildnern behandelt wird, beispielsweise mit ultravioletten Strahlen, Röntgenstrahlen, hochfrequenten magnetischen Wellen, radioaktiven Strahlen, Chemikalien.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird in der Weise durchgeführt, daß die SF-837-Rasse nach bekannten Methoden in einem Kultur- bzw. Nährmedium gezüchtet bzw. kultiviert wird, das Nährstoffe enthält, die von üblichen Mikroorganismen benutzt werden. Als Nährstoffqueilen lassen sich sämtliche bekannten Nährstoffe verwenden, die üblicherweise zur Züchtung bzw. Kultivierung von Streptomyces-Arten bekannt sind. Als Kohlenstoffquelle können beispielsweise benutzt werden: Glucose, Stärke, Glycerin, Dextrin, Sucrose bzw. Saccharose, verzuckerte Stärke, Melasse.

Als Stickstoffquelle können beispielsweise verwendet werden: Sojabohnenmehl, Weizenkeimlinge, Fleischextrakt Pepton, Maiswasser, lösliches pflanzliches Protein, Trockenhefe, Ammoniumsulfat, Natriumni-

trat. Falls notwendig, können dem Kultur- bzw. Nährmedium anorganische Salze wie Calciumcarbonat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Phosphate zugegeben werden. Zusätzlich können solche organischen und anorganischen Stoffe zugesetzt werden, die das Wachstum der SF-837-Rasse fördern und die Bildung der SF-837-Substanz beschleunigen.

Als Verfahren zur Züchtung oder Kultivierung der SF-837-Rasse ist die Flüssigkultur und insbesondere die Flüssigkultur unter submersen aeroben Bedingungen am vorteilhaftesten, und zwar in ähnlicher Weise wie bei den üblichen Verfahren zur Herstellung der bekannten Antibiotica. Die Zucht bzw. Kultur wird unter aeroben Bedingungen bei einer Fermentationstemperatur von 20 bis 30° C durchgeführt. Für die handelsmäßige oder labormäßige Erzeugung der Substanz SF-837 ist es jedoch häufig vorzuziehen, das Züchtungsverfahren bei Temperaturen in der Nähe von 28° C durchzuführen. Unter diesen Bedingungen erreicht die Konzentration der SF-837-Substanz in der Kulturbrühe ein Maximum am Ende einer Fermentationszeit von 2 bis 5 Tagen, und zwar entweder in Schüttelkulturen oder Tankkulturen.

Dabei ist die Substanz SF-837 dis hauptsächliche Stoffwechselprodukt von Streptomyces mycarofaciens nov. sp. ATCC Nr. 21 454.

Die Isolierung der Substanz SF-837 aus der Kultur kann auf verschiedenen Wegen erfolgen.

Das Antibioticum SF-837 ist sowohl in der festen Phase, die Mycelkuchen enthält, als auch in der flüssigen Phase der Kultur vorhanden. Die Kultur kann in bekannter Weise filtriert werden, um den Filterkuchen (d. h. die feste Phase, die Mycelkuchen enthält) und das Filtrat (d. h. die flüssige Phase der Fermentationsbrühe) getrennt zu erhalten. Die in dem Filtrat vorhandenen Aktivstoffe können mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel unter neutralen oder schwach alkalischen Bedingungen extrahiert werden, z. B. mit Äthylacetat, Butylacetat, Chloroform, Benzol, Äthyläther, Methylisobutylketon. Butanol. Die in dem Filterkuchen vorhandenen Aktivstoffe können mit angesäuertem Wasser extrahiert werden oder mit einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel wie Methanol, Äthanol, Aceton. Wahlweise kann die Kultur auch direkt mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel ohne vorhergehende Filtration des Mycelkuchens extrahiert werden, so daß die Aktivstoffe unmittelbar aus der Kultur in das verwendete organische Lösungsmittel übergehen.

Die Aktivstoffe, die in das organische Lösungsmittel übergeführt worden sind, können dann mit angesäuertem Wasser wieder extrahiert werden. Der anfallende saure Extrakt kann anschließend neutral oder durch Zugabe basischer Stoffe wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumcarbonat oder Natriumbicarbonat schwach alkalisch gemacht werden, woran sich eine Rüttel- bzw. Schüttelbehandlung mit einem entsprechenden organischen Lösungsmittel anschließt, so daß die Aktivstoffe wieder in das organische Lösungsmittel übergehen. Indem diese Verfahren der Rück- bzw. Umkehrextraktion wiederholt werden, können bis zu einem gewissen Umfang Verunreinigungen von den Aktivstoffen abgetrennt werden. Der organische Lösungsmittelextrakt kann unter verringertem Druck bis zur Trockne eingeengt werden, wobei ein Rohpulver gewonnen wird, das die Substanz SF-837 enthält. Die Lösung der aktiven Substanz in dem angesäuerten Wasser kann wahlweise entweder gefriergetrocknet werden, um die Säureanlagerungssalze der aktiven Substanz zu erhalten, oder die wäßrige Lösung kann neutral oder schwach alkalisch gemacht werden, so daß die aktive Substanz in form der freien Base ausfällt.

Da die Substanz SF-837 von basischer Natur ist, kann die Kultur oder deren Filtrat oder eine Lösung der aktiven Substanz auch mit Ionenaustauschern behandelt werden, wie einem Ionenaustauschharz, beispielsweise Amberlite IRC-50, oder einer Ionenaustauschcellulose, und wobei die aktive Substanz von dem Ionenaustauscher adsorbiert wird, der dann anschließend mit einem geeigneten Lösungsmittel eluiert wird.

Das anfallende Rohpulver kann weiter durch Extraktion mit einem entsprechenden organischen Lösungsmittel gereinigt werden, z. B. mit Benzol, das die Substanz SF-837 löst oder durch Waschen mit einem anderen Lösungsmittel, z. B. Petroläther, Ligroin und η-Hexan, das die SF-837-Substanz kaum oder nicht, die Verunreinigungen jedoch gut auflösen kann, und/ oder durch Zugabe von Petroläther, Ligroin oder η-Hexan zu einer Lösung der aktiven Substanz in einem organischen Lösungsmittel wie Benzol.

Auf diese Weise erhält man gereinigtes SF-837, das gegebenenfalls noch andere aktive Bestandteile (SF-837-A₂-, SF-837-Aj- und SF-837-A₄-, deren Gesamtanteil in der Größenordnung von 5 bis 20 Gewichtsprozent des Anteils der Substanz SF-837 schwankt) enthält.

Das gereinigte, gegebenenfalls noch kleinere Anteile an SF-837-A₂-, SF-837-A₃-, SF-837-A₄- enthaltende SF-837 kann direkt in ein entsprechendes Säureanlagerungssalz nach üblichen Methoden übergeführt werden. Ferner kann man das gereinigte SF-837 mittels eines üblichen Acetylierungsverfahrens, z. B. durch Lösen in Pyridin, Behandlung der Lösung mit Essigsäureanhydiid bei Raumtemperatur oder bei einer geringfügig höheren Temperatur über einen ausreichend langen Zeitraum in das Diacetylderivat der Substanz SF-837 überführen.

Für die Reinigung und Abtrennung der Substanz SF-837 eignet sich jedes bisher für die Reinigung und Trennung von makroliden Antibiotica angewendete bekannte Verfahren.

Das Makrolid-Antibioticum SF-837 und dessen Diacetylderivat und deren nicht giftige Säureanlagerungssalze können in verschiedenen Formen für therapeutische Zwecke verwendet werden. Für die Injektion werden vorzugsweise wegen ihrer hohen Wasserlöslichkeit nicht giftige Säureanlagerungssalze, z. B. Tartrate verwendet. Andere geeignete Salze sind beispielsweise solche mit Salzsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Essigsäure, Zitronensäure, Maleinsäure, Apfelsäure, Weinsäure, Zimtsäure, Ascorbinsäure, Glykolsäure.

Beispiel 1

Streptomyces mycarofaciens nov. sp. der ATCC Nr. 21 454 (SF-837-Rasse) wurde in 601 eines flüssigen Kultur- bzw. Nährmediums eingeimpft, das 2,5% verzuckerte Stärke, 4% lösliches Protein, 0,3% Kaliumchlorid und 0,3% Calciumcarbonat bei einem pH-Wert von 7,0 enthielt, und dann wurde 35 Stunden unter Belüftung bei einer Temperatur von 28°C in einem Standfennenter unter Umrühren kultiviert Die anfallende Kultur wurde dann direkt filtriert und der

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den Mycelkuchen enthaltende Filterkuchen mit verdünnter Salzsäure gewaschen.

Das mit der Waschflüssigkeit vereinte Kulturfilirat ergab eine Gesamtflüssigkeitsmenge von 501 (Stärke 150 mcg/ml). Diese Flüssigkeit (pH 8) wurde dann mit 25 1 Äthylacetat extrahiert und die Äthylacetatphase unter verringertem Druck auf etwa 3 1 eingeengt. Das Konzentrat wurde hierauf mit 1,51 Wasser verdünnt, disrch Zugabe von 5n-Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,0 eingestellt und dann heftig durchgeschüttelt. Die wäßrige Phase wurde von der organischen Phase abgetrennt und diese wäßrige Lösung durch Zugabe von 3 n-Natriumhydroxydlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und dann mit 80 ml Äthylacetat extrahiert. Der anfallende Äthylacetatextrakt wurde dann zusammen mit 500 ml wäßriger Salzsäure geschüttelt, die wäßrige Phase abgetrennt und diese mit 400 ml Äthyläther bei einem pH von 8 extrahiert. Der Ätherextrakt wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck eingeengt, wobei 16,5 g eines hellgelbgefärbten Pulvers erhalten ^wurden.

12 g dieses Rohpulvers wurden dann in 200 ml Äthylacetat gelöst. Die Lösung wurde durch eine mit 75 g mit Äthylacetat imprägnierten. Kohlenstoff gefüllte Kolonne bzw. Säule geschickt. Das vom Kohlenstoff eingenommene Volumen in der Kolonne entsprach 600 ml.

Die Entwicklung wurde unter Verwendung von Äthylacetat als Lösungsmittel durchgeführt; es wurden 10 Fraktionen von je 500 ml aufgefangen; die aktiven Fraktionen Nr. 3 bis 7 wurden vereinigt.

Die vereinigten Eluate wiesen eine Gesamtmenge von 2500 ml auf, die dann unter verringertem Druck eingedampft wurde, wobei 5 g eines weißen Pulvers erhalten wurden. Dieses Pulver wurde in 10 ml Benzol gelöst, und die unlöslichen Anteile wurden abfiltriert. Das Filtrat wurde dann Chromatographien, indem es durch eine Kolonne bzw. Säule, die mit mit Benzol imprägniertem Silikagel gefüllt war, geschickt wurde. Das eingefüllte Silikagel (510 g) nahm in der Kolonne ein Volumen von 700 ml ein.

Die Entwicklung der am Silikagel adsorbierten Substanzen wurde mittels eines Lösungsmittelgemisches aus Benzol —Aceton (4:1) durchgeführt. Das Eluat wurde in Fraktionen von jeweils 20 ml aufgefangen bzw. gesammelt. Die aktiven Fraktionen Nr. 90 bis 380, die bei der Aluminiumoxyd-Dünnschicht-Chromatographie einen Einzelneck ergaben und die in Anbetracht des Rf-Wertes des Einzelfleckens als Fraktionen anzusehen waren, die die SF-837-Substanz in reinem Zustand enthielten, wurden vereinigt. Bezüglich der Durchführung der Dünnschicht-Chromatographie wird auf die im Anschluß an die Beispiele gebrachten Ausführungen verwiesen.

Die vereinigten Fraktionen, bei denen es sich um eine Gesamtmenge von 4000 ml handelt, wurden unter verringertem Druck eingeengt, wobei 1,5 g eines weißen Pulvers vom F. 122 bis 124° C erhalten wurden, das die reine freie Base des Makrolid-Antibioticums SF-837 darstellt.

Die Substanz SF-837 ist in Methanol, Äthanol, Aceton, Chloroform, Äthylacetat, Butylacetat, angesäuertem Wasser, Benzol, Äthyläther und Tetrachlorkohlenstoff löslich, jedoch in Petroläther, n-Hexan und neutralem Wasser nur schwer löslich. Sie bildet mit Säuren Salze, die beim Erythromycin-Test mit 50%iger Schwefelsäure positiv und im Gegensatz dazu mit Ninhydrin- und Eisenchloridreagenzier negativ reagieren.

Die Verbindung SF-837 ergibt beim Erythromycin test mit 50%iger Schwefelsäure eine bräunlich unc rötlich purpurne Farbe.

In 50%igem wäßrigem Äthanol beträgt dei pKa-Wert der Substanz SF-837 6,9; die optische Drehung bei einer Konzentration von 1% in Äthano beträgt α ο = —67°.

Das Ultraviolettabsorptionsspektrum der Substanz SF-837 (in Äthanol) ist in der F i g. 1 dargestellt. Die Verbindung besitzt ein charakteristisches Absorptionsmaximum bei einer Wellenlänge von 232 ηΐμ (E\*_a = 325). Das Infrarotabsorptionsspektrum dei Substanz SF-837 in Form der freien in Kaliumbromid granulierten Base ist in F i g. 2 dargestellt. Die Verbindung besitzt charakteristische Absorptionsbanden im infraroten Bereich bei folgenden Wellenlängen in cm"¹: 3500, 2970, 2930, 1735, 1460, 1408, 1376. 1360, 1330, 1295, 1275, 1190, 1165, 1120, 1082, 1050, 1015, 910, 860, 840, 805, 780, 735 und 680.

Gewichtsanalyse in % für C₄₁H₆₇O₁₅N:

Berechnet ... C 60,52, H 8,24, N 1,72, O 29,39;
gefunden .... C 60,78, H 8,35, N 1,65, O 29,62;
MG = 813 bestimmt durch Massenanalyse.

In Fig. 3 ist die Kurve des kernmagnetischen Resonanzspektrums (ΙυΟ Mc) der Substanz SF-837 in Form der freien Base, die mit einer Konzentration von 10% in Deuterochloroform gelöst ist, dargestellt.

Ferner ergibt die Substanz SF-837 bei der Silikagel- oder Aluminium-Dünnschicht-Chromatographie unter Verwendung verschiedener Lösungsmittelsysteme Einzelflecken mit jeweils verschiedenen Rf-Werten, wodurch die Reinheit und Homogenität dieser Substanz bestätigt wird.

Die Rf-Werte der Substanz SF-837 mit verschiedenen Lösungsmittelsystemen sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt.

Lösungsmittelsysteme
Silicagel-Dünnschicht-Chromatographie

Benzol-Aceton (2:1)

n-Butanol-Essigsäure-Wasser (3:1:1)..

Methanol

Aluminiumoxyd-Dünnschicht-Chromatographie

Äthylacetat-Benzol (2:1)

Äthylacetat

Rf-Wert

SF-837-Substanz

0,45

0,67
0,82

0,34
0,78

Beispiel 2

201 eines Kulturmediums, das 3% Glukose, 1% Pepton, 0,5% Fleischextrakt, 0,2% Natriumchlorid, 0,3% Calciumcarbonat und 0,3% Sojabohnenöl (eingestellt auf pH 7) enthielt, wurden in einen Stand- bzw. Flaschenfermenter mit einer Kapazität von 30 1 eingefüllt und dann durch Erhitzen auf 120° C 20 Minuten sterilisiert. Danach wurde Strepiomyces mycarofaciens nov.sp. der ATCC Nr. 21 454 (SF-837-Rasse) dem Kulturmedium eingeimpft und das Ganze unter Belüftung 48 Stunden bei 28⁰C umgerührt. Die fer-

den Mycelkuchen enthaltende Filterkuchen mit verdünnter Salzsäure gewaschen.

Das mit der Waschflüssigkeit vereinte Kulturfiltrat ergab eine Gesamtflüssigkeitsmenge von 501 (Stärke 150 mcg/ml). Diese Flüssigkeit (pH 8) wurde dann mit s 25 1 Äthylacetat extrahiert und die Äthylacetatphase unter verringertem Druck auf etwa 3 1 eingeengt. Das Konzentrat wurde hierauf mit 1,5 1 Wasser verdünnt, durch Zugabe von 5n-Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,0 eingestellt und dann heftig durchgeschüttelt Die wäßrige Phase wurde von der organischen Phase abgetrennt und diese wäßrige Lösung durch Zugabe von 3n-Natriumhydroxydlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und dann mit 80 rn! Äthylacetat extrahiert. Der anfallende Äthylacetatextrakt wurde dann zusammen mit 500 ml wäßriger Salzsäure geschüttelt, die wäßrige Phase abgetrennt und diese mit 400 ml Äthyläther bei einem pH von 8 extrahiert. Der Ätherextrakt wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter verringertem Druck eingeengt, wobei 16,5 g eines hellgelbgefärbten Pulvers erhalten wurden.

12g dieses Rohpulvers wurden dann in 200 ml Äthylacetat gelöst. Die Lösung wurde durch eine mit 75 g mii Äthylacetat imprägnierten, Kohlenstoff gefüllte Kolonne bzw. Säule geschickt. Das vom Kohlenstoff eingenommene Volumen in der Kolonne entsprach 600 ml.

Die vereinigten Eluate wiesen eine Gesamtmenge von 2500 ml auf. die dann unter verringertem Druck eingedampft wurde, wobei 5 g eines weißen Pulvers erhalten wurden. Dieses Pulver wurde in 10 mi Benzol gelöst, und die unlöslichen Anteile wurden abnitriert. Das F'iltrat wurde dann chromatographiert, indem es durch eine Kolonne bzw. Säule, die mit mit Benzol imprägniertem Silikagel gefüllt war, geschickt wurde. Das eingefüllte Silikagel (510 g) nahm in der Kolonne ein Volumen von 700 ml ein.

Die Entwicklung der am Silikagel adsorbierten Substanzen wurde mittels eines Lösungsmittelgemisches aus Benzol — Aceton (4:1) durchgeführt. Das Eluat wurde in Fraktionen von jeweils 20 ml aufgefangen bzw. gesammelt. Die aktiven Fraktionen Nr. 90 bis ?80, die bei der Aluminiumoxyd-Dünnschicht-Chromatographie einen Einzelneck ergaben und die in Anbetracht des Rf-Wertes des Einzelfleckens als Fraktionen anzusehen waren, die die SF-837-Substanz in reinem Zustand enthielten, wurden vereinigt. Bezüglich der Durchführung der Dünnschicht-Chromatographie wird auf die im Anschluß an die Beispiele gebrachten Ausführungen verwiesen.

Die vereinigten Fraktionen, bei denen es sich um eine Gesamtmenge von 4000 ml handelt, wurden unter verringertem Druck eingeengt, wobei 1,5 g eines weißen Pulvers vom F. 122 bis 124ⁿC erhalten wurden, das die reine freie Base des Makrolid-Anti- ■ bioticums SF-837 darstellt.

Die Substanz SF-837 ist in Methanol, Äthanol, Aceton, Chloroform, Äthylacetat, Butylacetat, angesäuertem Wasser, Benzol, Äthyläther und Tetrachlorkohlenstoff löslich, jedoch in Petrolätherj n-Hexan und neutralem Wasser nur schwer löslich. Sie bildet mit Säuren Salze, die beim Erythromycin-Test mit 50%iger Schwefelsäure positiv und im Gegensatz dazu mit Ninhydrin- und Eisenchloridreagenzien negativ reagieren.

Die Verbindung SF-837 ergibt beim Erythromycintest mit 50%iger Schwefelsäure eine bräunlich und rötlich purpurne Farbe.

In 50%igem wäßrigem Äthanol beträgt der pKa-Wert der Substanz SF-837 6,9; die optische Drehung bei einer Konzentration von 1% in Äthanol beträgt α ο = -67°.

Das Ultraviolettabsorptionsspektrum der Substanz SF-837 (in Äthanol) ist in der F i g. 1 dargestellt. Die Verbindung besitzt ein charakteristisches Absorptionsmaximum bei einer Wellenlänge von 232 ηΐμ (E}*_m = 325). Das Infrarotabsorptionsspektrum der Substanz SF-837 in Form der freien in Kaliumbromid granulierten Base ist in F i g. 2 dargestellt. Die Verbindung besitzt charakteristische Absorptionsbanden im infraroten Bereich bei folgenden Wellenlängen in cm"¹: 3500, 2970, 2930, 1735, 1460, 1408, 1376, 1360, 1330, 1295, 1275, 1190, Π65, 1120, 1082, 1050, 1025, 910, 860, 840, 805, 780, 735 und 680.
Gewichtsanalyse in % für C₄₁H₆₇O₁₅N:
Berechnet ... C 60,52, H 8,24, N 1,72, O 29,39, gefunden .... C 60,78, H 8,35, N 1,65, O 29,62:
MG = 813 bestimmt durch Massenanalyse.

In Fig. 3 ist die Kurve des kernmagnetischen Resonanzspektrums (100 Mc) der Substanz SF-837 in Form der freien Base, die mit einer Konzentration von 10% in Deuterochloroform gelöst ist, dargestellt.

Lösungsmittelsysteme
Silicagel-Dünnschicht-Chromatographie

Benzol-Aceton (2:1)

n-Butanol-Essigsäure-Wasser (3:1:1)..

Methanol

Aluminiumoxyd-Dünnschicht-Chromatographie

Äthylacetat-Benzol (2:1)

Äthylacetat

Rf-Wert

SF-837-Substanz

0,45
0,67
0,82

0,34
0,78

Beispiel 2

201 eines Kulturmediums, das 3% Glukose, l°/t Pepton, 0,5% Fleischextrakt, 0,2% Natriumchlorid 0,3% Calciumcarbonat und 0,3% Sojabohnenöl (ein gestellt auf pH 7) enthielt, wurden in einen Stand- bzw Flaschenfermenter mit einer Kapazität von 30 1 eingefüllt und dann durch Erhitzen auf 120⁰C 20 Minuter sterilisiert. Danach wurde Streptomyces mycarofacieni nov.sp. der ATCC Nr. 21 454 (SF-837-Rasse) den Kulturmedium eingeimpft und das Ganze untei Belüftung 48 Stunden bei 28⁰C umgerührt. Die fer

einerAluminiumoxyd-Dünnschicht-Chromatographie Die Verbindung besitzt ein charakteristisches

unterworfen wurden unter Verwendung eines Ge- UV-Absorptionsmaximum bei 232 πΐμ (Ει* =295)

miseries aus Athylacetat-Benzol (2:1) als Entwick- wenn es in Äthanol gelöst ist, und die folgenden

wngslosungsmittel. Bezüglich der Durchführung der charakteristischen Absorptionsbanden im infraroten uunnscnicht-Chromatographie wird auf die im An- 5 Bereich des Spektrums, wenn es in Kaliumbromid

scniuu aa die Beispiele gebrachten Ausführungen granuliert ist, bei folgenden Wellenlängen in cm"¹·

verwiesen. _3450>
29 270, 2930, 1728, 1454,1368,1232,1167, 1122,

Uie Fraktionen Nr. 70 bis 95, die bei der Alu- 1082,1054,1024,1002,957,907,863,837, 783 und 762. mmiumoxyd-Dunnschicht-Chromatograpnie einen

Emzelflecken ergaben und in denen die Substanz ι ο Gewichtsanalyse in % für C₄₅H₇₁O₁₇N:

SF-837 allein angesammelt war, wurden dann unter Berechnet ... C 60,20, H 7,90, N 1,56;

Vakuum eingeengt, wobei 0,8 g der Substanz SF-837 gefunden .... C 60,38, H 7,26, N 1,54. als weißes Pulver vom F. 122 bis 124° C erhalten

wurden. Dünnschicht-Chromatographie

B e i s ρ i e 1 5 '5 Die Dünnschicht-Chromatographie wurde in üb-

*nv\ ~ α ~a π ■ ■ , ~ licher Weise nach der absteigenden Methode an einer

«κ ST7 ^S α ^gemai« ⁸^Tu^{12 erhaIteney} Substanz dünnen Schicht (0,25 mm dick) aus Aluminiumoxyd

SF-837 wurden in 10 ml Äthyläther gelöst, und der durchgeführt, die durch Erhitzen auf 110⁰C aktiviert

Losung wurde tropfenweise eine gesättigte Lösung von worden war. Der Einzelfleck der aktiven Substanz

Zitronensäure zugegeben. Der gebildete Niederschlag 20 wurde durch Behandlung mit Schwefelsäure sichtbar

wurde abfijtnert und getrocknet, wobei 230 mg des gemacht

Citrats der Substanz SF-837 vom F. 162 bis 167° C ^ -,^u

(unter Zersetzung) erhalten wurden. Gegenstromverteilungsverfahren

Beispiel 6 ^as Gegenstromverteilungsverfahren wurde mit

_lnn , ..„ „ . . , ²5 Hilfe speziell entwickelter zylindrischer Gefäße mit

JOO mg der gemäß Beispiel 1 erhaltenen Substanz einem Durchmesser von 18 cm und einer Höhe von

!«of Tn , 1^Ώ '*^ml ^P/^{ndin gelöst und der} 30 cm durchgeführt. Eine Lösung des Pulvers in Benzol

r™?A ' α ^Essiß^sau.i^eanhy^d _J ^rid ^gesetzt. Das und eine Menge des Phosphatpuffers wurden in das

Gemisch wurde umgerührt und dann 20 Stunden erste Gefäß eingeführt, worauf die beiden Schichten

2«5T" T? ^{Ur stehen}S^elassen· °as Rcaktions- 30 in dem Gefäß mit Hilfe eines rotierenden Rührers

fn«l« wyrae.dann unter Ruhren in Eiswasser ge- vermischt wurden. Anschließend wurde die die wäßrige

E· *^ob,^ei Tfiu ¹^ ^! ^{aUsfieL Dieser Nieder}" ^Lösun8 enthaltende Schicht durch ein Loch im Boden

En™™ ^ab.5^ltnei^t,^{und da}°n getrocknet, wobei des Gefäßes abgezogen und in das nächste Gefäß

ihiEFtT*? ? ^1Vn^rS,^erhalten *"^Γαεη- ^Durch ß^eleitet· welches dieselbe Form und dieselben Ab-

fe^S^L H ^f^{65 P}/^Ve£ ^{aUS Tetrachlorkoh}- 35 messungen aufwies wie das erste Gefäß und ebenfalls

MaSSidXtiDiot?^⁸ SF _fi ^DV^acety^{ldenvates des} ^d** organische Lösungsmittel enthielt, dort wie be-

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims

ι 2

Patentansprüche:
1. Makrolid-Antibioticum SF-837 und dessen Diacetylderivat der allgemeinen Formel

CHO CH₃ CH₃

OH

CH, O

CH,

in der R₁ und R₄ jeweils den Rest -COCH₂CH₃ bedeuten, während R₂ und R₃ entweder je ein Wasserstoffatom oder den Rest —COCH₃ darstellen, und deren pharmakologisch nicht giftige Säureanlagerungssalze.
2. Verfahren zur Herstellung des Makrolid-Antibioticums SF-837, dadurch gekennzeichnet, daß man den Stamm von Streptomyces mycarofaciens nov. sp., der unter der AT.CC Nr. 21454 hinterlegt worden ist, in üblicher Weise in einem Nährmedium, das assimilierbare Stickstoff- und Kohlenstoffquellen enthält, unter aeroben Bedingungen kultiviert bzw. züchtet und dann das gebildete Antibioticum SF-837 aus der Kultur abtrennt.

Die Erfindung betrifft das Makrolid-Antibioticum SF-837 und dessen Diacetylderivat der allgemeinen Formel