CN110724728A - 一种环状dna的制备方法 - Google Patents

一种环状dna的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110724728A
CN110724728A CN201910968892.7A CN201910968892A CN110724728A CN 110724728 A CN110724728 A CN 110724728A CN 201910968892 A CN201910968892 A CN 201910968892A CN 110724728 A CN110724728 A CN 110724728A
Authority
CN
China
Prior art keywords
circular dna
exonuclease
reaction
annealing
molecule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910968892.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110724728B (zh
Inventor
高亚平
田晖
何筠
邓素华
伊戈尔·伊万诺夫
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anxueyuan Biotechnology (shenzhen) Co Ltd
Shenzhen Research Institute Tsinghua University
Original Assignee
Anxueyuan Biotechnology (shenzhen) Co Ltd
Shenzhen Research Institute Tsinghua University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anxueyuan Biotechnology (shenzhen) Co Ltd, Shenzhen Research Institute Tsinghua University filed Critical Anxueyuan Biotechnology (shenzhen) Co Ltd
Priority to CN201910968892.7A priority Critical patent/CN110724728B/zh
Publication of CN110724728A publication Critical patent/CN110724728A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110724728B publication Critical patent/CN110724728B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本公开提供了一种环状DNA的制备方法，所述环状DNA的制备方法的具体步骤为：(1)首先合成需要成环的单链DNA分子，然后在合成的单链DNA分子的5’端做磷酸化修饰；(2)然后设计合成引导RNA分子，所述引导RNA分子的核苷酸序列与合成的单链DNA分子两端的核苷酸互补配对；(3)将合成的单链DNA分子和引导RNA分子进行退火，获得退火产物；(4)利用连接酶对得到的退火产物进行连接反应，得到连接反应产物；(5)利用核酸外切酶消化连接产物中未成环的线性核苷酸；(6)最后回收合成的单链环状DNA分子。所述制备方法简单易操作，且在方法中所使用的材料成本低，降低了制备环状DNA的成本。

Description

一种环状DNA的制备方法
技术领域
本公开涉及核苷酸技术领域，具体涉及一种环状DNA的制备方法。
背景技术
滚环复制(环-介导的等温扩增，Loop-mediated isothermal amplification-LAMP)是具有链置换能力的等温扩增酶利用环状DNA分子做模板，进行核酸扩增的方法。该方法与PCR(聚合酶链式反应)都能对微量的核酸模板进行序列特异的扩增，不同之处在于，滚环复制过程能够在恒定温度下完成扩增反应，因此不需要温控精确的PCR仪，是一种既简便又经济的核酸扩增方法，且不同序列的单链环状DNA分子通过滚环复制，能够生成不同长度的串联重复序列。天然的基因和蛋白中存在大量的随机重复序列，这些重复序列组成特异的模序，能够急剧增加候选基因的生物大分子的生理特异性和活性。这种模序广泛分布于启动子/增强子等核酸序列，促进反式作用因子对靶序列的识别，产生叠加和/或者协同效用。通过构建大的随机重复序列库，是研究体内或者体外研究结构-功能之间的关系的重要策略之一。通过制备单链环状DNA分子进行滚环复制，可以制备不同长度和重复次数的随机重复序列。
目前常用的单链环状DNA模板主要来源是病毒的单链环状DNA M13mp18(7249bp)以及酶连反应产生的的单链环状DNA分子(sscDNA,single strand circular DNA)，sscDNA分子长度一般为34-120bp，但是使用单链环状病毒DNA M13mp18，这种病毒培养的过程慢，成本高，从而导致M13mp18的价格较高，且单链M13mp18 DNA分子量(Molecular weight)大，若底物浓度过高，会抑制滚环复制反应的进行。在现有的酶连反应产生单链环状DNA分子的制备方法中，多倚赖DNA(guide DNA)做引导分子，完成目标序列的连接，这种方法会导致终产物中残留微量引导DNA分子，使得后续DNA聚合酶利用其作引物进行滚环复制，从而对结果分析造成干扰。
发明内容
本公开的目的是提供一种环状DNA的制备方法，以达到降低成本的目的。
为实现上述目的，技术方案如下：
一种环状DNA的制备方法，所述环状DNA的制备方法的具体步骤为：
(1)首先合成需要成环的单链DNA分子，然后在合成的单链DNA分子的5’端做磷酸化修饰；
(2)然后设计合成引导RNA分子，所述引导RNA分子的核苷酸序列与合成的单链DNA分子两端的核苷酸互补配对；
(3)将合成的单链DNA分子和引导RNA分子进行退火，获得退火产物；
(4)利用连接酶对得到的退火产物进行连接反应，得到连接反应产物；
(5)利用核酸外切酶消化连接产物中未成环的线性核苷酸；
(6)最后回收合成的单链环状DNA分子。
所述步骤(3)中退火的反应条件为：首先85℃反应5min，然后25℃反应3h。
所述步骤(3)中退火的反应体系为合成的单链DNA分子：引导RNA分子：退火缓冲液：去RNA酶水的体积比为1：2：1：7。
所述退火缓冲液包括：100mM Tris-HCl、10mM EDTA、和1M NaCl，所述Tris-HCl的PH值为7.5。
所述步骤(4)连接反应的条件为：首先16℃反应16h，然后65℃反应20min。
所述步骤(4)中连接反应的体系为连接缓冲液：退火产物：连接酶：H2O的体积比为3：1：2.5：30。
所述连接酶为SplintR连接酶或T4 DNA连接酶。
所述步骤(5)中核酸外切酶为Exonuclease I外切酶和T7 Exonuclease外切酶的混合物。
核酸外切酶消化的反应体系为连接产物：Exonuclease I外切酶：T7Exonuclease外切酶的体积比为7：1：2。
所述步骤(5)中核酸外切酶消化的条件为：25℃反应16h。
本公开的有益效果是：提供了一种环状DNA的制备方法，所述制备方法简单易操作，且在方法中不需要实用单链环状病毒DNA M13mp18，其余材料成本低，从而降低了制备环状DNA的成本。同时本公开所述的环状DNA的制备方法突破了模板序列的限制，而且在制备过程中无需添加外源DNA，而是添加了根据需要成环的单链DNA分子末端所合成的RNA分子，减少了干扰，且还利用了核酸外切酶消化了未成环的线性核苷酸，进一步的减少了副产物的产生，大大增加了单链环状DNA的产率，而且本公开所述的环状DNA的制备方法所制备的单链环状DNA还可用于检测DNA聚合酶是否具备链置换能力。
附图说明
图1为实施例1中退火产物、连接产物和核酸外切酶消化产物的凝胶电泳图。
图2为实施例2滚环复制产物的凝胶电泳图。
图3为实施例3不同的延伸反应时间下产物的凝胶电泳图。
图4为实施例4DNA聚合酶链置换能力检测图。
具体实施方式
以下各步骤仅用以说明本公开的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各步骤对本公开进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各步骤所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本公开各步骤技术方案的范围。
实施例1
一种环状DNA的制备方法，具体操作步骤为：
(1)首先合成需要成环的单链DNA分子，然后在合成的单链DNA分子的5’端做磷酸化修饰，其中单链DNA分子的核苷酸序列为SEQ ID NO.1：5’-pATTGGTCTACATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCATGCCTACGGATTGC；
(2)然后设计合成引导RNA分子，所述引导RNA分子的核苷酸序列与合成的单链DNA分子的两端互补配对，其中引导RNA分子的核苷酸序列为SEQ ID NO.2：5’-UAGACCAAUGCAAUCCGUA-3’；
(3)将合成的单链DNA分子和引导RNA分子进行退火，获得退火产物，其中退火反应的体系如表1所示，
表1退火反应体系
试剂 体系
DNA(100uM) 1uL
RNA(100uM) 2ul
10×buffer 1uL
Rnase-free H<sub>2</sub>O 加至总体积10ul
其中10x退火缓冲液包括：100mM Tris-HCl(pH 7.5)、10mM EDTA和1M NaCl，退火反应的条件为：首先85℃反应5min，然后25℃反应3h，反应结束后，进行15％聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果如图1A泳道1所示；
(4)利用SplintR连接酶对得到的退火产物进行连接反应，得到连接反应产物，其中连接反应的体系如表2所示，
表2连接反应体系
试剂 体积
10xSplintR连接酶缓冲液 3
退火产物(10μM) 1
Ligase(10.5μM) 2.5
H<sub>2</sub>O 30uL
其中连接反应的条件为：16℃，16h；65℃，20min终止反应，反应结束后，进行15％聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果如图1A泳道2所示；
(5)利用核酸外切酶消化连接产物中未成环的线性核苷酸，其中核酸外切酶消化的反应体系如表3所示，
表3核酸外切酶消化的反应体系
试剂 体积
连接反应产物 7uL
Exonuclease I 1uL
T7 gene 6exonuclease 2ul
其中反应条件为：25℃反应16h，反应结束后，进行15％聚丙烯酰胺凝胶电泳，以检测目标产物以及线形分子是否消化完全，结果如图1B所示，可以看出线性分子已被消化完全；
(6)最后利用NEB MonarchTMPCR&DNA Cleanup Kit回收试剂盒回收合成的单链环状DNA分子。
实施例2
利用实施例1所制备的单链环状DNA分子(sscDNA)进行滚环复制实验，其具体操作步骤为：首先设计引物序列，其引物DNA序列为SEQ ID NO.3：5’-aTAGACCAAT GCAATCCGTAc-3’；然后进行退火反应，最后选用Phi29 DNA聚合酶进行延伸反应。
其中退火反应的体系如表4所示：
表4滚环复制退火反应体系
试剂 体系
sscDNA(2.5uM) 1uL
引物DNA(2.5uM) 2ul
10×buffer 1uL
Rnase-free H<sub>2</sub>O 加至总体积10ul
其中10x退火缓冲液包括：100mM Tris-HCl(pH 7.5)、10mM EDTA和1M NaCl，退火反应条件为：85℃，5min；25℃，3h。
其中利用Phi29 DNA聚合酶(Phi29 DNAP)进行延伸反应的体系，然后设置对照组，体系如表5所示：
表5滚环复制延伸反应的体系
Figure BDA0002231422290000061
其中Phi29DNA聚合酶，购自NEB，货号为M0269S；延伸反应条件是30℃，30min。
反应结束后，采用碱性琼脂糖凝胶电泳检测延伸产物，其中，碱性琼脂糖凝胶电泳条件为3V/CM，3h。碱性琼脂糖凝胶电泳的缓冲液为：10×碱性琼脂糖电泳缓冲液或6×碱性凝胶载样缓冲液，其中10×碱性琼脂糖电泳缓冲液包括：500mM NaOH及10mM EDTA；6×碱性凝胶载样缓冲液包括：300mM NaOH，6mM EDTA，18％(m/V)Ficoll-400(Pharmacia公司)，0.15％(m/V)溴甲酚绿及0.25％(m/V)二甲苯氰。电泳结束后，将琼脂糖胶浸泡在SYBR Gold染液中，缓慢水平震荡约20min；然后利用Azure Biosystems成像仪检测。结果如图2所示，对照组(泳道1)没有延伸产物，而实验组(泳道2)生成大于48.5kbp的延伸产物，证明实施例1中制备所得DNA为环形DNA。
实施例3
利用实施例1中制备的单链环状DNA分子做模板，生成不同大小的串联重读序列，按照实施例2的滚环复制的方法设定不同的延伸反应时间(0、5、10、20、30min)，可以生成不同长度和浓度的串联重复序列，其中退火反应的体系为实施例2表1所示，退火反应的条件为：85℃，5min；25℃，3h；其中延伸反应的体系为实施例2中表5所示的实验组体系，结果如图3所示，其中2-6泳道中反应时间分别为0、5、10、20、30min，可以看出延伸产物的长度和浓度，均随着延伸时间的延长不断增加。
实施例4
利用实施例1中制备的单链环状DNA分子做模板，通过实施例2中的滚环复制方法，根据DNA聚合酶的聚合能力，可以检测DNA聚合酶是否具有链置换能力，其中退火反应的体系为实施例2表1所示，退火反应的条件为：85℃，5min；25℃，3h；其中延伸反应体系如表6：
表6检测DNA聚合酶链置换能力的延伸反应体系
Figure BDA0002231422290000071
其中Phi29DNA聚合酶，购自NEB，货号为M0269S；延伸反应条件是30℃，30min。
将上述反应体系所产生的产物进行凝胶电泳，结果如图4所示，其中图中泳道1为不添加DNA聚合酶的空白对照组，泳道2为Phi29 DNA聚合酶延伸产物，泳道3为大肠杆菌DNAPol I，Large(Klenow)fragment，根据图4可以看出具有链置换能力的DNA聚合酶能够利用环形DNA分子进行滚环复制，生成大片段单链DNA产物；而不具有链置换能力的DNA聚合酶，不能生成相应的产物，因此利用单链环状DNA分子做模板，通过DNA聚合酶的聚合能力这种方法，可以用来迅速、简便鉴定未知DNA聚合酶是否具有链置换能力。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳清华大学研究院；安序源生物科技(深圳)有限公司
<120> 一种环状DNA的制备方法
<130> 2019.10.12
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 1
attggtctac atgcatgcat gcatgcatgc atgcatgcat gcatgcatgc atgcatgcct 60
acggattgc 69
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工合成
<400> 2
uagaccaaug caauccgua 19
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
atagaccaat gcaatccgta c 21

Claims (10)

1.一种环状DNA的制备方法，其特征在于，所述环状DNA的制备方法的具体步骤为：
(1)首先合成需要成环的单链DNA分子，然后在合成的单链DNA分子的5’端做磷酸化修饰；
(2)然后设计合成引导RNA分子，所述引导RNA分子的核苷酸序列与合成的单链DNA分子两端的核苷酸互补配对；
(3)将合成的单链DNA分子和引导RNA分子进行退火，获得退火产物；
(4)利用连接酶对得到的退火产物进行连接反应，得到连接产物；
(5)利用核酸外切酶消化连接产物中未成环的线性核苷酸；
(6)最后回收合成的单链环状DNA分子。
2.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中退火的反应条件为：首先85℃反应5min，然后25℃反应3h。
3.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中退火的反应体系为合成的单链DNA分子：引导RNA分子：退火缓冲液：去RNA酶水的体积比为1：2：1：7。
4.根据权利要求书3中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述退火缓冲液包括：100mM Tris-HCl、10mM EDTA、和1M NaCl，所述Tris-HCl的PH值为7.5。
5.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)连接反应的条件为：首先16℃反应16h，然后65℃反应20min。
6.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中连接反应的体系为连接缓冲液：退火产物：连接酶：H2O的体积比为3：1：2.5：30。
7.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述连接酶为SplintR连接酶或T4 DNA连接酶。
8.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中核酸外切酶为Exonuclease I外切酶和T7 Exonuclease外切酶的混合物。
9.根据权利要求书8中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，核酸外切酶消化的反应体系为连接产物：Exonuclease I外切酶：T7 Exonuclease外切酶的体积比为7：1：2。
10.根据权利要求书1中所述的环状DNA的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中核酸外切酶消化的条件为：25℃反应16h。
CN201910968892.7A 2019-10-12 2019-10-12 一种环状dna的制备方法 Active CN110724728B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910968892.7A CN110724728B (zh) 2019-10-12 2019-10-12 一种环状dna的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910968892.7A CN110724728B (zh) 2019-10-12 2019-10-12 一种环状dna的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110724728A true CN110724728A (zh) 2020-01-24
CN110724728B CN110724728B (zh) 2023-06-06

Family

ID=69220095

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910968892.7A Active CN110724728B (zh) 2019-10-12 2019-10-12 一种环状dna的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110724728B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111321143A (zh) * 2020-02-16 2020-06-23 中国海洋大学 一种制备环状rna的方法
CN111793619A (zh) * 2020-06-04 2020-10-20 中国海洋大学 一种单链环状dna的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010094040A1 (en) * 2009-02-16 2010-08-19 Epicentre Technologies Corporation Template-independent ligation of single-stranded dna
CN107267499A (zh) * 2017-06-22 2017-10-20 中国海洋大学 制备环状dna或rna的方法
CN108251424A (zh) * 2017-12-19 2018-07-06 天利康（天津）科技有限公司 一种单链环状rna和dna及其制备方法和应用
CN109161572A (zh) * 2018-07-05 2019-01-08 中国海洋大学 单链环状核酸及其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010094040A1 (en) * 2009-02-16 2010-08-19 Epicentre Technologies Corporation Template-independent ligation of single-stranded dna
CN107267499A (zh) * 2017-06-22 2017-10-20 中国海洋大学 制备环状dna或rna的方法
CN108251424A (zh) * 2017-12-19 2018-07-06 天利康（天津）科技有限公司 一种单链环状rna和dna及其制备方法和应用
CN109161572A (zh) * 2018-07-05 2019-01-08 中国海洋大学 单链环状核酸及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHU-SHU ZHU等: "Avenues Toward microRNA Detection In Vitro: A Review of Technical Advances and Challenges", 《COMPUTATIONAL AND STRUCTURAL BIOTECHNOLOGY JOURNAL》 *
庄君阳: "新型功能核酸探针和等温信号放大策略的研究及分析应用", 《中国博士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *
曹墨菊: "《植物生物技术概论》", 31 October 2014, 中国农业大学出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111321143A (zh) * 2020-02-16 2020-06-23 中国海洋大学 一种制备环状rna的方法
CN111793619A (zh) * 2020-06-04 2020-10-20 中国海洋大学 一种单链环状dna的制备方法
CN111793619B (zh) * 2020-06-04 2022-01-07 中国海洋大学 一种单链环状dna的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110724728B (zh) 2023-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6894501B2 (ja) 等温核酸自己増幅法
CN105121655B (zh) 新型连接酶活性
EP3388519A1 (en) Vesicular adaptor and uses thereof in nucleic acid library construction and sequencing
US11761037B1 (en) Probe and method of enriching target region applicable to high-throughput sequencing using the same
US20120316075A1 (en) Sequence preserved dna conversion for optical nanopore sequencing
GB2595076A (en) Methods for targeted nucleic acid library formation
CN110724728B (zh) 一种环状dna的制备方法
US20140128292A1 (en) Methods for improving ligation steps to minimize bias during production of libraries for massively parallel sequencing
CN108166068A (zh) 一种新型dna建库试剂盒及其应用
WO2017215517A1 (zh) 测序文库构建中5&#39;和3&#39;接头连接副产物的去除方法
CN108166067A (zh) 一种新型dna建库方法及其应用
US9695417B2 (en) Method for large-scale synthesis of long-chain nucleic acid molecule
JP2022515085A (ja) 一本鎖ｄｎａの合成方法
CN114317684B (zh) 一种基于tna分子的细胞内镁离子成像的方法
CN109706233A (zh) 一种复杂长片段核酸序列的扩增技术
CN110818757A (zh) 核苷酸类似物以及筛选dna聚合酶的方法
CN115873928A (zh) 一种基于双链环模板的滚环扩增方法及其应用
CN116179652A (zh) 基于LAMP联合Cas13a核酸酶的检测痕量核酸的方法以及应用
CN110512010B (zh) 一种检测大肠杆菌rRNA转录速率的试剂盒及方法
CN113817803B (zh) 一种携带修饰的小rna的建库方法及其应用
CN113862333A (zh) 一种组合物及其氧化5-甲基胞嘧啶的方法
WO2021088189A1 (zh) 一种应用于dna数据存储的寡核苷酸库恒温扩增方法
JP5129498B2 (ja) 核酸クローニング法
CN106283198B (zh) 用于单细胞全基因组重亚硫酸氢盐测序的文库构建方法
CN114196714B (zh) 利用末端脱氧核糖核苷酸转移酶无模板合成含非天然碱基寡核苷酸链的方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant