CN106536753B - 用于确定对mek/erk抑制剂的应答性的方法 - Google Patents

用于确定对mek/erk抑制剂的应答性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种用于预测癌细胞对MEK抑制剂的应答性的方法，所述方法包括检测所述癌细胞中选自下组ADAM12、COL14A1、TNN和TP53的一种或多种基因中至少一种突变的存在。本发明还提供了一种用于预测癌细胞对ERK抑制剂的应答性的方法，所述方法包括检测所述癌细胞中选自下组ADAM12、PEX5L、TNN和TP53的一种或多种基因中至少一种突变的存在。

Description

用于确定对MEK/ERK抑制剂的应答性的方法
对相关申请的交叉引用
本申请要求2014年4月4日提交的标题为“癌症治疗的生物标记”的中国专利申请201410135569.9的优先权。其全部内容在此参考并入。
发明领域
本发明一般涉及用于确定受试者对MEK或者ERK抑制剂的治疗的应答性的方法。
背景技术
Ras-Raf-MEK-ERK信号级联(MEK/ERK通路)是关键性的促增殖和促存活通路之一。已经发现MEK/ERK通路中的突变导致在许多癌症(例如，黑素瘤)中生长失控。已经使用了抑制MEP/ERK通路中的步骤的化合物来治疗癌症。然而，一些具有MEK/ERK通路突变的患者显示出对MEK或者ERK抑制剂的抗性。
需要有效的方法来确定哪些具有MEK/ERK通路突变的患者会对MEK或者ERK抑制剂的治疗具有耐受性并且需要将这种确定性发现结合到有效的治疗中。
发明概述
一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对MEK抑制剂的应答性的方法。在某些实施方案中，所述方法包括通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述MEK抑制剂的降低的应答性。
在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。
在某些实施方案中，所述MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)。
在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突变选自下组突变：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S突变；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。
在某些实施方案中，所述检测步骤包括将所述寡核苷酸用作引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。
在某些实施方案中，所述检测步骤包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。
另一方面，本申请提供了一种鉴定MEK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括：通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自下组的一种或多种基因中至少一种突变的存在：ADAM12、COL14A1、TNN和TP53，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述MEK抑制剂的可能的无应答者。
在某些实施方案中，所述MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)。
在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突变选自下组突变：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者MEK抑制剂治疗。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的MEK抑制剂治疗，或者用不同的MEK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的应答者的所述患者用所述MEK抑制剂治疗。
在某些实施方案中，所述样品来源于所述患者的癌细胞或者组织。
另一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对ERK抑制剂的应答性的方法，所述方法包括：通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。
在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。
在某些实施方案中，所述ERK抑制剂是SCH772984。
在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突变选自下组突变：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。
在某些实施方案中，所述检测步骤包括用所述寡核苷酸作为引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。
在某些实施方案中，所述检测步骤包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。
另一方面，本申请提供了一种鉴定ERK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括：通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述ERK抑制剂的可能的无应答者。
在某些实施方案中，所述ERK抑制剂是SCH772984。
在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突变选自下组突变：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者ERK抑制剂治疗。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的ERK抑制剂治疗，或者用不同的ERK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。
在某些实施方案中，所述样品来源于所述患者的癌细胞或者组织。
另一方面，本申请提供了一种试剂盒，其包括至少一种能用于确定一个或多个基因中至少一种突变的存在的寡核苷酸，其中所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53、ITGB和PEX5L。
在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定COL14L1中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，或其任意组合。
在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定PEX5L中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，和或其组合。
在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于扩增基因序列的至少一部分的引物对，或者包括用于与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物的探针。
另一方面，本申请提供了至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞或者癌症患者对MEK抑制剂或者ERK抑制剂的应答性的试剂盒中的用途，其中所述寡核苷酸用于检测一种或多种基因中至少一种突变的存在，所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和PEX5L。
附图简述
图1显示了具有ADAM12基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。
图2显示了具有COL14A1基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的降低的敏感性。
图3显示了具有TNN基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。
图4显示了具有TP53基因中的突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。
图5显示了具有ADAM12、COL14A1、TNN和TP53基因中的多种突变的细胞对MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)的增强的敏感性。
图6显示了具有ADAM12基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。
图7显示了具有PEX5L基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。
图8显示了具有TNN基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。
图9显示了具有TP53基因中的突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。
图10显示了具有ADAM12、PEX5L、TNN和TP53基因中的多种突变的细胞对ERK抑制剂SCH772984的增强的敏感性。
发明详述
一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对MEK抑制剂的应答性的方法。在某些实施方案中，所述方法包括通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。
丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)级联，也称为Ras-Raf-MEK-ERK信号通路，是涉及肿瘤恶性生长和发展的关键性信号通路之一。所述信号通路始于信号分子(例如，生长因子)与细胞表面的受体结合之时。这触发Ras(一种GTP酶)离开其GDP而结合GTP。结合GTP的Ras随后激活Raf，所述Raf激活MEK，所述MEK激活ERK。ERK随后激活一些蛋白质，例如myc，其控制细胞***和细胞存活。当通路中的一种或多种蛋白质(例如Ras)突变时，其可导致所述信号通路陷入活化的状态，所述状态是许多癌症发展中的必经步骤。因此，已经开发了MEK/ERK信号通路的抑制剂来治疗癌症。已经发现某些患者对MEK或者ERK的抑制剂具有抗性。尚不清楚对这些抑制剂的抗性的潜在机制。
多种MEK和ERK1/2的抑制剂目前正处于癌症治疗的临床研究中，并且更多的靶向MEK或ERK1/2的试剂正处于临床前开发中。MEK抑制剂的实例包括但不限于曲美替尼(Trametinib)(GSK1120212)、司美替尼(Selumetinib)、比尼替尼(Binimetinib)(MEK162)、PD-325901、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，XL518)和CI-1040(PD035901)。ERK抑制剂包括但不限于SCH772984、FR180204、GDC-0994。
在某些实施方案中，所述MEK抑制剂是曲美替尼(Trametinib)。曲美替尼(Trametinib)(商品名Mekinist)具有化学名称N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙酰胺。曲美替尼(Trametinib)的结构如下所示。
Figure BDA0001163938750000071
本文使用的术语“应答性”是指细胞/个体/患者/受试者对MEK或者ERK抑制剂的治疗产生应答的可能性，即在用MEK或者ERK抑制剂治疗后显示出降低的增殖/生长和/或增强的细胞死亡。在某些实施方案中，可将所述应答性分为不敏感的(即，不太可能产生应答)、敏感的(可能产生应答)和不确定的。在某些实施方案中，当所述细胞/个体/患者/受试者显示出发生病理完全反应(pcR)(即，不存在侵袭性癌症)的降低的可能性时，则所述细胞/个体/患者/受试者不太可能对MEK或者ER抑制剂的治疗产生应答。在某些实施方案中，降低的可能性是指在参照患者(例如，在目标基因中没有突变的患者)中发生pcR的可能性的约70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％。在某些实施方案中，可以通过测定细胞对MEK或者ERK抑制剂的IC50来评价所述细胞的应答性。
本文使用的术语“突变”是指基因组DNA相对正常参照(例如野生型基因组DNA)的偏离，例如，添加、缺失、***、重排、倒位、转换、颠换、移码突变、无义突变、错义突变、易位和单核苷酸多态性。
检测基因中突变的存在的方法描述于本文中并且是本领域已知的(通常参见例如，Molecular Cloning A Laboratory Manual,第2版,ed.By Sambrook,Fritsch andManiatis,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)。所述方法的实例包括但不限于，核酸测序(例如Sanger二脱氧测序、“二代”测序方法和单分子测序)、基于PCR(聚合酶链反应)的测定法(实时RCR、PCR-RFLP测定法(参见Cancer Research 59(1999)，5169-5175)、质谱基因分型(例如MALDI-TOF)、HPLC、酶法和SSPC(单链构象多态性分析(参见Pathol Int(1996)46,801-804))、基于杂交的测定法(例如Northern印迹、Southern印迹、5'-外切核酸酶(TaqManTM)探针、分子信标、荧光能量转移探针、Scorpion探针)。
在某些实施方案中，所述方法可以包括对有待于通过PCR进行评价的基因的DNA或cDNA片段进行酶扩增。所得到的PCR产物可以进行常规的基于Sanger的双脱氧核苷酸测序法或者平行测序法(“二代测序”)，例如由Roche(454technology)、Illumina(Solexatechnology)ABI(Solid technology)或者Invitrogen(IonTorrent)市售的方法。通过与公众可获得的基因序列数据库比较，可以从序列读数中鉴定突变。或者，可以通过掺入等位基因特异性探针来鉴定突变，所述探针可以用酶检测反应、荧光、质谱法等来检测。
在某些实施方案中，所述方法可以包括使用仅特异性结合正常和突变的序列中的一个的引物来扩增目标基因的DNA或cDNA片段。因此，只能在正常和突变的基因中的一个中发现扩增产物。因此，可以通过检测所述扩增产物的存在来确定所述基因中突变的存在。
在某些实施方案中，所述方法可以包括使核酸样品接触寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针与基因的突变特异性杂交以形成复合物。可以将所述寡核苷酸探针设计成不与基因的正常序列杂交。可以使用报告信号，例如荧光来检测杂交复合物的存在。因此，可以通过检测所述复合物的形成来确定基因中突变的存在。
在某些实施方案中，突变存在于基因的外显子中。在某些实施方案中，所述突变的存在导致由所述基因编码的多肽的氨基酸改变。表3显示了本发明要确定的突变的示例性核酸序列。如本文中所使用的，将特定突变标注为所得到的氨基酸的改变。例如，Q650K突变是指编码所述基因第650位的氨基酸K的密码子/三联体，其中氨基酸G存在于野生型序列中。
ADAM12基因(基因ID：8038)编码ADAM(一种去整合素和金属蛋白酶)蛋白家族的成员。ADAM家族的成员是与蛇毒去整合素结构相关的膜锚定蛋白，并且已经被发现涉及细胞-细胞和细胞-基质的相互作用。ADAM12基因具有两个可变剪接的转录物：较短的分泌形式和较长的膜结合形式。
COL14A1基因(基因ID：7373)编码XIV类胶原的α链，所述胶原是FACIT(具有间断三螺旋的原纤维相关胶原)胶原家族的成员。XIV型胶原与所述原纤维表面相互作用并参与调节原纤维形成。
TNN基因(基因ID：63923)编码腱生蛋白N前体。腱生蛋白是细胞外基质糖蛋白家族，其成员已被发现参与伤口愈合以及发现于一些肿瘤基质中。
TP53基因(基因ID：7157)编码肿瘤蛋白p53，其是含有转录激活域、DNA结合域和寡聚化结构域的肿瘤抑制蛋白。肿瘤蛋白p53响应多种细胞应激以调节靶基因的表达，从而诱导细胞周期停滞、凋亡、衰老、DNA修复、或者代谢变化。已经发现TP53基因中的突变与多种癌症相关。TP53基因的可变剪接和替代启动子的使用导致产生多个转录本变体和同种型。还已经显示使用替代的翻译起始密码子产生了另外的同种型。如本文中所使用的，位置编号是指肿瘤蛋白p53同种型a的序列。
在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在COL14A1中的突变选自下组突变：COL14A1中的R178W、L713_剪接、Q1272K、L479I、L1295F、E1024K、P1467S、G737R、K1023T、G966C、S1512fs；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*，其中“*”表示所述突变引起产生终止密码子，“fs”表示突变导致移码，“剪接”表示所述突变导致mRNA的可变剪接。
所述癌细胞可以，例如，来源于肺癌、非小细胞肺(NSCL)癌、支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头部或颈部的癌症、皮肤或眼内黑色素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区域的癌症、胃癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子***、***癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠癌、内分泌***的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、膀胱癌、肾脏或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆管癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、中枢神经***(CNS)的肿瘤、脊髓轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鳞状细胞癌、垂体腺瘤，包括上述任何癌症的难治性形式，或者一种或多种上述癌症的组合。在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。
另一方面，本申请提供了一种鉴定MEK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自ADAM12、COL14A1、TNN和TP53组的一种或多种基因中至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述MEK抑制剂的可能的无应答者。
本文使用的术语“应答者”是指对用MEK或ERK抑制剂治疗更有可能应答的个体/患者/受试者。本文使用的“更有可能应答”是指在用MEK或ERK抑制剂治疗的患者中有增加的将发生病理完全反应的可能性。术语“无应答者”是指对用MEK或ERK抑制剂治疗不太可能产生应答的个体/患者/受试者。本文使用的“不太可能应答”是指在用MEK或ERK抑制剂治疗的患者中有降低的发生病理完全反应的可能性。
在某些实施方案中，在患者被评估为可能的“应答者”的情况下，推荐所述患者用MEK或者ERK抑制剂治疗。
在患者被鉴定为可能的无应答者的情况下，对不推荐所述患者用MEK或者ERK抑制剂的单一疗法治疗，或者不推荐用MEK或者ERK抑制剂治疗。
在某些实施方案中，当患者被鉴定为MEK抑制剂的可能的无应答者时，对所述患者推荐用不同的MEK抑制剂治疗，或者用不同的MEK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。有别于曲美替尼(Trametinib)的MEK抑制剂的实例包括，但不限于，司美替尼(Selumetinib)、比尼替尼(Binimetinib)(MEK162)、PD-325901、考比替尼(Cobimetinib)(GDC-0973，XL518)和CI-1040(PD035901)。
在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是靶向PI3K-Akt-mTOR信号通路的试剂。所述靶向PI3K-Akt-mTOR信号通路的试剂是本领域已知的并且包括，但不限于，美国专利号8,022,205B2中公开的稠合嘧啶衍生物或者WO2009/099163中公开的稠合吡咯并嘧啶衍生物。
在某些实施方案中，具有不同机制的另外的试剂可以包括c-Met抑制剂(例如，ARQ197(taventinib，由Daichi Sankyo和ArQule开发))、AMG458(由Amgen开发)、GSK1363089(也称为XL880或者foretinib，由GSK开发)、克唑替尼(也称为PF2341066，由Pfizer开发)、PF04217903(由Pfizer开发)、INCB28060(由Incyte开发)、E7050(由Eisai开发)、MK-2461(由Merck开发)、BMS-777607(由BMS开发)、JNJ-38877605(由Johnson&Johnson开发)、XL184(由BMS/Exelixis开发))。
在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是化疗剂(例如，环磷酰胺(CTX；例如
Figure BDA0001163938750000111
)、苯丁酸氮芥(CHL；例如
Figure BDA0001163938750000112
)、顺铂(CisP；例如
Figure BDA0001163938750000113
)、白消安(例如
Figure BDA0001163938750000114
)、美法仑、卡莫司汀(BCNU)、链脲佐菌素、三亚乙基胺(TEM)、丝裂霉素C)。
在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是抗代谢物，例如甲氨蝶呤(MTX)、依托泊苷(VP16；例如
Figure BDA0001163938750000115
)、6-巯基嘌呤(6MP)、6-硫代鸟嘌呤(6TG)、阿糖胞苷(Ara-C)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨(例如
Figure BDA0001163938750000116
)、达卡巴嗪(DTIC))。
在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是其他抗肿瘤剂，例如紫杉醇(例如
Figure BDA0001163938750000117
)和紫杉醇衍生物、细胞生长抑制剂、糖皮质激素例如***(DEX；例如
Figure BDA0001163938750000118
)和皮质类固醇例如***、核苷酶抑制剂例如羟基脲、氨基酸耗竭酶例如天冬酰胺酶、亚叶酸钙、亚叶酸、雷替曲塞和其他叶酸衍生物，以及类似的多种抗肿瘤剂。
在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是抗激素剂(例如，类固醇受体拮抗剂，抗***剂例如他莫昔芬、雷洛昔芬，芳香酶抑制剂4(5)-咪唑，其他芳香酶抑制剂，42-羟基他莫昔芬，三氧嘧啶，keoxifene，LY 117018，奥那司酮和托瑞米芬(例如
Figure BDA0001163938750000119
)；抗雄激素剂例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任意的药学上可接受的盐、酸或衍生物；糖蛋白激素例如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)以及***(LH)和LHRH(促卵泡激素释放激素)的激动剂和/或拮抗剂；LHRH激动剂醋酸戈舍瑞林，市售为
Figure BDA00011639387500001110
(AstraZeneca)；LHRH拮抗剂D-丙氨酰胺N-乙酰基-3-(2-萘基)-D-丙氨酰基-4-氯-D-苯丙氨酰基-3-(3-吡啶基)-D-丙氨酰基-L-丝氨酰基-N6-(3-吡啶基羰基)-L-赖氨酰基-N6-(3-吡啶基羰基)-D-赖氨酰基-L-亮氨酰基-N6-(1-甲基乙基)-L-赖氨酰基-L-脯氨酸(例如
Figure BDA00011639387500001111
Ares-Serono)；LHRH拮抗剂醋酸加尼瑞克；甾体抗雄激素醋酸环丙孕酮(CPA)和醋酸甲地孕酮，市售为
Figure BDA00011639387500001112
(Bristol-MyersOncology)；非甾体抗雄激素氟他胺(2-甲基-N-[4,20-硝基-3-(三氟甲基)苯基丙酰胺)，市售为
Figure BDA00011639387500001113
(Schering Corp.)；非甾体抗雄激素尼鲁米特(5,5-二甲基-3-[4-硝基-3-(三氟甲基-4'-硝基苯基)-4,4-二甲基-咪唑烷二酮)；和其他非容许受体的拮抗剂，例如RAR、RXR、TR、VDR等的拮抗剂)。
在某些实施方案中，所述另外的具有不同机制的治疗剂可以是血管生成抑制剂(例如，VEGFR抑制剂，例如SU5416和SU6668(南旧金山的Sugen Inc.，加州，美国)，或者如例如国际申请号WO 99/24440、WO 99/62890、WO 95/21613、WO 99/61422、WO 98/50356、WO99/10349、WO 97/32856、WO 97/22596、WO 98/54093、WO 98/02438、WO 99/16755和WO 98/02437，以及美国专利号5,883,113、5,886,020、5,792,783、5,834,504和6,235,764中所述的抑制剂；VEGF抑制剂如IM862(柯克兰的Cytran Inc.，华盛顿，美国)；血管酶，其是来自Ribozyme(Boulder，科罗拉多州)和Chiron(Emeryville，加州)的合成的核酶；以及VEGF的抗体，例如贝伐单抗(AvastinTM,Genentech，南旧金山，加州)，其是VEGF的重组人源化抗体；整合素受体拮抗剂和整合素拮抗剂，例如针对αvβ3、αvβ5和αvβ6整合素的拮抗剂，及其亚型，例如西仑吉肽(EMD 121974)，或抗整合素抗体，如，例如αvβ3特异性的人源化抗体(例如
Figure BDA0001163938750000121
)；因子如IFN-α(美国专利号41530,901、4,503,035和5,231,176)；血管生成抑制素和纤溶酶原片段(例如kringle 14、kringle 5、kringle 1-3(O'Reilly,M.S.等(1994)Cell 79:315-328；Cao等(1996)J.Biol.Chem.271:29461-29467；Cao等(1997)J.Biol.Chem.272:22924-22928)；内皮抑素(O'Reilly,M.S.等(1997)Cell88:277；以及国际专利公开号WO 97/15666)；血小板反应蛋白(TSP-1；Frazier,(1991)Curr.Opin.CellBiol.3:792)；血小板因子4(PF4)；纤溶酶原激活物/尿激酶抑制剂；尿激酶受体拮抗剂；肝素酶；烟曲霉素类似物例如TNP-4701；苏拉明和苏拉明类似物；血管稳定类固醇；bFGF拮抗剂；flk-1和flt-1拮抗剂；抗血管生成剂例如MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂和MMP-9(基质金属蛋白酶9)抑制剂)。
在某些实施方案中，所述样品是来源于患者的癌细胞或者组织。
另一方面，本申请提供了一种用于预测癌细胞对ERK抑制剂的应答性的方法，所述方法包括通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述癌细胞中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中的至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；其中ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。
在某些实施方案中，所述癌细胞来源于癌症患者。
在某些实施方案中，所述ERK抑制剂是SCH772984。SCH772984，化学名为(R)-1-(2-氧代-2-(4-(4-(嘧啶-2-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-N-(3-(吡啶-4-基)-1H-吲唑-5-基)吡咯烷-3-甲酰胺，是ERK1/2新型的、选择性的并且ATP竞争性的抑制剂(参见Morris EJ等,Discovery of a novel ERK inhibitor with activity in models ofacquiredresistance to BRAF and MEK inhibitors,Cancer Discov.20133(7):742-50)。SCH772984的结构如下所示。
Figure BDA0001163938750000131
在某些实施方案中，所述在ADAM12中的突变选自下组突变：ADAM12中的Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E；所述在PEX5L中的突变选自下组突变：PEX5L中的D179N、S229Y、G4E、T89K、Q355E、D39N、L571F、D113N；所述在TNN中的突变选自下组突变：TNN中的V353M、Y296S、A733P、D707Y、D471Y、P1010T、S71L、D457Y、P1155L、R476C、Q872H、Q261L、D798Y、C1237*、D67N和T823S突变；所述在TP53中的突变选自下组突变：TP53中的Q331R、C135fs、E285K、V274F、Y220C、P250L、R175H、R248Q、R280K、R248L、C176Y、A307_剪接、R273L、R158L、A138fs、H193R、A159D、C277F、R248W、Y220C、V274F、R196*、E224_剪接、K164*、M246I、A159V、S241F、C242R、S261_剪接、E339*。
在某些实施方案中，所述检测步骤包括将所述寡核苷酸用作引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。
在某些实施方案中，所述检测步骤包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。
另一方面，本申请提供了一种鉴定ERK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的方法，所述方法包括通过使来自患者的样品与至少一种寡核苷酸接触来检测所述样品中选自ADAM12、PEX5L、TNN和TP53组的一种或多种基因中至少一种突变的存在，其中所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；如果在所述样品中检测到ADAM12、PEX5L、TNN、TP53和/或其任意组合中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述ERK抑制剂的可能的无应答者。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者ERK抑制剂治疗。
在某些实施方案中，所述方法进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的ERK抑制剂治疗，或者用不同的ERK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。除了SCH772984之外的ERK抑制剂的实例包括FR180204、GDC-0994。
另一方面，本申请提供了一种试剂盒，其包括至少一种能用于确定一个或多个基因中至少一种突变的存在的寡核苷酸，其中所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53、ITGB和PEX5L。
在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定COL14L1中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，或其任意组合。
在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于确定ADAM12中至少一种突变的存在的第一寡核苷酸，用于确定PEX5L中至少一种突变的存在的第二寡核苷酸，用于确定TNN中至少一种突变的存在的第三寡核苷酸，用于确定TP53中至少一种突变的存在的第四寡核苷酸，和或其组合。
在某些实施方案中，所述至少一种寡核苷酸包括用于扩增基因序列的至少一部分的引物对，或者包括用于与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物的探针。
另一方面，本申请提供了至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞或者癌症患者对ERK抑制剂或者MEK抑制剂的应答性的试剂盒中的用途，其中所述寡核苷酸用于检测一种或多种基因中至少一种突变的存在，所述基因选自下组：ADAM12、COL14A1、TNN、TP53和PEX5L。
实施例1
以下是鉴定与对MEK抑制剂和/或ERK抑制剂的敏感性相关的基因的实例。
我们在50个细胞系组中检查了MEK抑制剂曲美替尼(trametinib)和ERK1/2抑制剂SCH772984的抗增殖活性(参见表1)。
表1.用于所述筛选的细胞系
Figure BDA0001163938750000151
Figure BDA0001163938750000161
材料和方法
细胞培养
在37℃温度、5％CO2和95％湿度的条件下，除非有特别标注，否则将在补充有10％FBS的培养基中培养所有细胞。
细胞活力试剂
通过使用
Figure BDA0001163938750000162
发光细胞活力测定试剂盒(目录号：G7572，Promega，在-20℃下储存)测定了细胞活力。为了制备所述CellTiter_Glo试剂，在使用前将CellTiter-Glo缓冲液解冻并平衡至室温。为了方便起见，可以在使用前将CellTiter-Glo缓冲液解冻并在室温下储存长达48小时。在使用前将冻干的CellTiter-Glo底物平衡至室温。将适当体积(100ml)的CellTiter-Glo缓冲液转移到含有CellTiter-Glo底物的琥珀色瓶中，以重构冻干的酶/底物混合物，其形成所述CellTiter-Glo试剂。在某些情况下，可将CellTiter-Glo缓冲液瓶的整个液体体积加入到CellTiter-Glo底物小瓶中。通过轻轻震荡、涡旋或者通过倒转内容物进行混合以获得均匀的溶液。所述CellTiter-Glo底物会在不到一分钟内就能迅速成为溶液。
MEK和ERK抑制剂
MEK抑制剂曲美替尼(Trametinib)购自Selleckchem(目录号S2673)并于使用前储存在-20℃。ERK1/2抑制剂SCH772984购自Selleckchem(目录号S7101)并于使用前储存在-20℃。
设备
在实验中使用了以下设备：EnVision多标记检测仪2104-0010A，PerkinElmer(美国)；Countstar，Inno-Alliance Biotech(美国)；Forma II系列水套CO2培养箱，ThermoScientific(美国)；生物安全柜，Thermo Scientific，(美国)；倒置显微镜，奥林巴斯CKX41SF(日本)。
细胞毒性和IC50的确定
在实验前一天(第-1天)，在对数生长期期间用细胞解离缓冲液(Gibco 13151-014)解离细胞，与合适的细胞培养基混合并且以1000rpm离心3分钟。在用表1中所列的相应培养基将细胞浓度调整至优化的密度(即4.44×104个细胞/ml)前，使用Countstar重新悬浮细胞并计数，用于3天的CTG测定法(在实际研究之前优化细胞密度；在测试中使用的细胞密度可以随不同细胞系而变化)。对于3天的CTG测定法，将90μl细胞悬浮液加入到两个96孔板(板A和板B)中，得到4×103个细胞/孔(在实际研究之前优化细胞密度；在测试中使用的细胞密度可以随不同细胞系而变化)。将板A和板B组在37℃具有5％CO2的加湿的培养箱中培育过夜。
在第0天，对于板A组，向每个孔中加入10μl培养基用于读取T0。以与每孔中存在的细胞培养基相等的体积加入
Figure BDA0001163938750000171
试剂(例如，对于96孔板，向100μl含有细胞的培养基中加入100μl试剂)。将内容物在轨道摇床上混合2分钟以促进细胞裂解。将所述板在室温下培育10分钟以稳定发光信号。将背封黑色贴纸(Backsealblack sticker)放置到每个板的底部。使用EnVision多标记检测仪记录发光。这形成了T0值的基础。
在第0天，以测试物稀释图所示的浓度溶解测试物和阳性对照。制备100×的PBS溶液，然后用适当的培养基将其稀释(1:10)成10×的工作溶液。根据平板接种图，在板B组的每个孔中分配10μl(10×)药物溶液(每个药物浓度一式三份)。将测试板在37°具有5％CO2的加湿的培养箱中培育4天。
在第3天，以与每孔中存在的细胞培养基相等的体积加入
Figure BDA0001163938750000172
试剂(例如，对于96孔板，向100μl含有细胞的培养基中加入100μl试剂)。将内容物在轨道摇床上混合2分钟以促进细胞裂解。将所述板在室温下培育10分钟以稳定发光信号。将背封黑色贴纸(Backseal black sticker)放置到每个板的底部。使用EnVision多标记检测仪记录发光。
使用GraphPad Prism 5.0以图形的形式显示数据。为了计算IC50，使用具有反曲剂量反应的非线性回归模型拟合剂量-应答曲线。用于计算存活率的公式如下所示；使用GraphPad Prism 5.0软件计算Y轴设置为50％时的绝对IC50。
存活率(％)＝(Lum测试物-Lum培养基对照)/(Lum未处理组-Lum培养基对照)×100％。
将Lum未处理组-Lum培养基对照设置为100％并且将Lum培养基对照设置为0％存活率。T0值显示为Lum未处理组的百分比。
统计分析
我们根据其对于SCH772984和曲美替尼的IC50，分别将63个细胞系分成敏感组、不敏感组和不确定组，然后在敏感组和不敏感组之间检测具有差异表达的或者不同突变类型的基因。这些基因在几条癌症相关通路中富集。
将所述63个细胞系分成3组(参见表1)：敏感组(IC50值小于1)、不敏感组(IC50值大于10)和不确定组(其余范围)。因此，我们得到了针对SCH772984的25个敏感细胞系和22个不敏感细胞系，针对曲美替尼的34个敏感细胞系和24个不敏感细胞系。在随后的分析中仅使用具有基因组数据的细胞系。使用GSEA软件分析差异表达的基因和富集的通路，使用Fisher精确检验检测具有不同突变类型的基因。
结果
对于曲美替尼，32个敏感细胞系和23个不敏感细胞系具有通过Affymetrix U219阵列分析的基因表达，34个基因组显著富集，标称p值<1％(参见表S2)。29个敏感细胞系和20个不敏感细胞系具有突变信息，并且通过临界P值0.01鉴定出了ADAM12、COL14A1、TNN和TP53(参见表3和图1-5)。
对于SCH772984，23个敏感细胞系和22个不敏感细胞系具有通过AffymetrixU219阵列分析的基因表达，10个基因组显著富集，标称p值<1％。21个敏感细胞系和18个不敏感细胞系具有突变信息，并且通过临界P值0.01鉴定出了ADAM12、PEX5L、TNN和TP53(参见表3和图6-10)。
表2.IC50信息
Figure BDA0001163938750000181
Figure BDA0001163938750000191
Figure BDA0001163938750000201
Figure BDA0001163938750000211
Figure BDA0001163938750000221
Figure BDA0001163938750000231
虽然已经以具体实施方案(其中一些是优选的实施方案)为参考具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员应当理解，在不偏离在此公开的本发明的主旨和范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。
SEQUENCE LISTING
<110> 中美冠科(太仓)生物技术有限公司
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 1
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ccgaggcagg aaatccctcc ggtcgcgacg cccggccccg gctcggcgcc cgcgtgggat 360
ggtgcagcgc tcgccgccgg gcccgagagc tgctgcactg aaggccggcg acgatggcag 420
cgcgcccgct gcccgtgtcc cccgcccgcg ccctcctgct cgccctggcc ggtgctctgc 480
tcgcgccctg cgaggcccga ggggtgagct tatggaacca aggaagagct gatgaagttg 540
tcagtgcctc tgttgggagt ggggacctct ggatcccagt gaagagcttc gactccaaga 600
atcatccaga agtgctgaat attcgactac aacgggaaag caaagaactg atcataaatc 660
tggaaagaaa tgaaggtctc attgccagca gtttcacgga aacccactat ctgcaagacg 720
gtactgatgt ctccctcgct cgaaattaca cggtaattct gggtcactgt tactaccatg 780
gacatgtacg gggatattct gattcagcag tcagtctcag cacgtgttct ggtctcaggg 840
gacttattgt gtttgaaaat gaaagctatg tcttagaacc aatgaaaagt gcaaccaaca 900
gatacaaact cttcccagcg aagaagctga aaagcgtccg gggatcatgt ggatcacatc 960
acaacacacc aaacctcgct gcaaagaatg tgtttccacc accctctcag acatgggcaa 1020
gaaggcataa aagagagacc ctcaaggcaa ctaagtatgt ggagctggtg atcgtggcag 1080
acaaccgaga gtttcagagg caaggaaaag atctggaaaa agttaagcag cgattaatag 1140
agattgctaa tcacgttgac aagttttaca gaccactgaa cattcggatc gtgttggtag 1200
gcgtggaagt gtggaatgac atggacaaat gctctgtaag tcaggaccca ttcaccagcc 1260
tccatgaatt tctggactgg aggaagatga agcttctacc tcgcaaatcc catgacaatg 1320
cgcagcttgt cagtggggtt tatttccaag ggaccaccat cggcatggcc ccaatcatga 1380
gcatgtgcac ggcagaccag tctgggggaa ttgtcatgga ccattcagac aatccccttg 1440
gtgcagccgt gaccctggca catgagctgg gccacaattt cgggatgaat catgacacac 1500
tggacagggg ctgtagctgt caaatggcgg ttgagaaagg aggctgcatc atgaacgctt 1560
ccaccgggta cccatttccc atggtgttca gcagttgcag caggaaggac ttggagacca 1620
gcctggagaa aggaatgggg gtgtgcctgt ttaacctgcc ggaagtcagg gagtctttcg 1680
ggggccagaa gtgtgggaac agatttgtgg aagaaggaga ggagtgtgac tgtggggagc 1740
cagaggaatg tatgaatcgc tgctgcaatg ccaccacctg taccctgaag ccggacgctg 1800
tgtgcgcaca tgggctgtgc tgtgaagact gccagctgaa gcctgcagga acagcgtgca 1860
gggactccag caactcctgt gacctcccag agttctgcac aggggccagc cctcactgcc 1920
cagccaacgt gtacctgcac gatgggcact catgtcagga tgtggacggc tactgctaca 1980
atggcatctg ccagactcac gagcagcagt gtgtcacgct ctggggacca ggtgctaaac 2040
ctgcccctgg gatctgcttt gagagagtca attctgcagg tgatccttat ggcaactgtg 2100
gcaaagtctc gaagagttcc tttgccaaat gcgagatgag agatgctaaa tgtggaaaaa 2160
tccagtgtca aggaggtgcc agccggccag tcattggtac caatgccgtt tccatagaaa 2220
caaacatccc cctgcagcaa ggaggccgga ttctgtgccg ggggacccac gtgtacttgg 2280
gcgatgacat gccggaccca gggcttgtgc ttgcaggcac aaagtgtgca gatggaaaaa 2340
tctgcctgaa tcgtcaatgt caaaatatta gtgtctttgg ggttcacgag tgtgcaatgc 2400
agtgccacgg cagaggggtg tgcaacaaca ggaagaactg ccactgcgag gcccactggg 2460
cacctccctt ctgtgacaag tttggctttg gaggaagcac agacagcggc cccatccggc 2520
aagcagataa ccaaggttta accataggaa ttctggtgac catcctgtgt cttcttgctg 2580
ccggatttgt ggtttatctc aaaaggaaga ccttgatacg actgctgttt acaaataaga 2640
agaccaccat tgaaaaacta aggtgtgtgc gcccttcccg gccaccccgt ggcttccaac 2700
cctgtcaggc tcacctcggc caccttggaa aaggcctgat gaggaagccg ccagattcct 2760
acccaccgaa ggacaatccc aggagattgc tgcagtgtca gaatgttgac atcagcagac 2820
ccctcaacgg cctgaatgtc cctcagcccc agtcaactca gcgagtgctt cctcccctcc 2880
accgggctcc acgtgcacct agcgtccctg ccagacccct gccagccaag cctgcactta 2940
ggcaggccca ggggacctgt aagccaaacc cccctcagaa gcctctgcct gcagatcctc 3000
tggccagaac aactcggctc actcatgcct tggccaggac cccaggacaa tgggagactg 3060
ggctccgcct ggcacccctc agacctgctc cacaatatcc acaccaagtg cccagatcca 3120
cccacaccgc ctatattaag tgagaagccg acaccttttt tcaacagtga agacagaagt 3180
ttgcactatc tttcagctcc agttggagtt ttttgtacca acttttagga ttttttttaa 3240
tgtttaaaac atcattacta taagaacttt gagctactgc cgtcagtgct gtgctgtgct 3300
atggtgctct gtctacttgc tcaggtactt gtaaattatt aatttatgca gaatgttgat 3360
tacagtgcag tgcgctgtag taggcatttt taccatcact gagttttcca tggcaggaag 3420
gcttgttgtg cttttagtat tttagtgaac ttgaaatatc ctgcttgatg ggattctgga 3480
caggatgtgt ttgctttctg atcaaggcct tattggaaag cagtccccca actaccccca 3540
gctgtgctta tggtaccaga tgcagctcaa gagatcccaa gtagaatctc agttgatttt 3600
ctggattccc catctcaggc cagagccaag gggcttcagg tccaggctgt gtttggcttt 3660
cagggaggcc ctgtgcccct tgacaactgg caggcaggct cccagggaca cctgggagaa 3720
atctggcttc tggccaggaa gctttggtga gaacctgggt tgcagacagg aatcttaagg 3780
tgtagccaca ccaggataga gactggaaca ctagacaagc cagaacttga ccctgagctg 3840
accagccgtg agcatgtttg gaaggggtct gtagtgtcac tcaaggcggt gcttgataga 3900
aatgccaagc acttcttttt ctcgctgtcc tttctagagc actgccacca gtaggttatt 3960
tagcttggga aaggtggtgt ttctgtaaga aacctactgc ccaggcactg caaaccgcca 4020
cctccctata ctgcttggag ctgagcaaat caccacaaac tgtaatacaa tgatcctgta 4080
ttcagacaga tgaggctttc catgggacca caactatttt cagatgtgaa ccattaacca 4140
gatctagtca atcaagtctg tttactgcaa ggttcaactt attaacaatt aggcagactc 4200
tttatgcttg caaaaactac aaccaatgga atgtgatgtt catgggtata gttcatgtct 4260
gctatcatta ttcgtagata ttggacaaag aaccttctct atggggcatc ctctttttcc 4320
aacttggctg caggaatctt taaaagatgc ttttaacaga gtctgaacct atttcttaaa 4380
cacttgcaac ctacctgttg agcatcacag aatgtgataa ggaaatcaac ttgcttatca 4440
acttcctaaa tattatgaga tgctggcttg ggcagcatcc ccttgaactc ttcactcttc 4500
aaatgcctga ctagggagcc atgtttcaca aggtctttaa agtgactaat ggcatgagaa 4560
atacaaaaat actcagataa ggtaaaatgc catgatgcct ctgtcttctg gactggtttt 4620
cacattagaa gacaattgac aacagttaca taattcactc tgagtgtttt atgagaaagc 4680
cttcttttgg gggtcaacag ttttcctatg ctttgaaaca gaaaaatatg taccaagaat 4740
cttggtttgc cttccagaaa acaaaactgc atttcacttt cccggtgttc cccactgtat 4800
ctaggcaaca tagtattcat gactatggat aaactaaaca cgtgacacaa acacacacaa 4860
aagggaaccc agctctaata cattccaact cgtatagcat gcatctgttt attctatagt 4920
tattaagttc tttaaaatgt aaagccatgc tggaaaataa tactgctgag atacatacag 4980
aattactgta actgattaca cttggtaatt gtactaaagc caaacatata tatactatta 5040
aaaaggttta cagaatttta tggtgcatta cgtgggcatt gtctttttag atgcccaaat 5100
ccttagatct ggcatgttag cccttcctcc aattataaga ggatatgaac tgagtttttc 5160
ttttgttgtt tgttcttagc tgtaattcct atgcttctat ttcagagagc caggagagtt 5220
tgatattaaa ggaggttaaa actgtgatct tatgccatgt catcaatggc cacttagggg 5280
ccatggctga tgacacattc ttatctctac agtactaatg tgttattata gagccatgca 5340
ttttatttct gaataagaac atatttaaac taatattccc ttacaatatg gacagtatta 5400
atccttccaa gatgcagtat ttatcaagtg aagcatattt agcagcaaat tccattttaa 5460
cataacttag gaaccaataa ccagggtgtt ttgtggttgg gggaggcacg gggtggagta 5520
ttctttttta tatcctcaaa acaaaaaaaa tcaatactta tatttcaatg gcaatctagt 5580
atttttttaa aagactgtat aggcatgaat aatagaggtg gtttgagttt tgtagggcca 5640
tcacctggaa agtcaatgtg actagacaca aagtagccca gaggctactt ttcttcctac 5700
agcttattat agttgtaggt tctatgacct cacttcatgg gttccaggca attccgctga 5760
aaggtttgtc tcctgaaatt ttttaagttt gttttcctga cacatgtaat cagatgtgta 5820
gcaaccgagg gaaacgaagc ctaacattct ccattgtgga aatacacaca ggaggttaca 5880
tttcacagcg tggatttttc cagcttacac atgtgggatg acatcacaga aaccacaaaa 5940
gcagcaaatt aaactgtagg agagtcaata ctcctgacga gtctcggggg gggggcattt 6000
ttatgccttc ttaactttat gagaattctc aggctgaact ataggccatt gttcccaggc 6060
aaatcaatac atcaatgcat cctcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaacc ggctaaaact 6120
gtgtcaaaat gttcttaagg agcctatggt ctccacggtg ctaaaaagag cctggtgctg 6180
ggccgactgg cagggctgag catcctcctg ccccctcgcc actgatgttt actaagcact 6240
ctgagccaat gagaccccca gcagcagaaa gggcacaagg tggcgccagg gcagcagggc 6300
cagatctttc tcatgcacct cgacctcttg cagactttct tcgtgagatg tactactcat 6360
ttcaaaactg ctttgcaggg ctcccctatg tattcggggg gcccacggca cactcaggct 6420
ggagatcctt cctcactgcg ctcaagatgg cctcagccag acaccagtta cccagctgaa 6480
agtcacaatc cctcccagaa gtctcccaac actagtgctg accagaggtg gggctctcag 6540
gctaggagtt tcacacacaa tgacaggctg ctgggggaca ttgcaggacc ccttttcctc 6600
tcctctccat gctagaagcc agccctaggc agctgcagtt actccctgtg actcagcagc 6660
aggctgattc aacacagctg cccacacaaa gccagtggct aatacatctg tttacctttc 6720
cctatcaccc agacacaagc ccctttccca ggtcaaacca caggccgatg catctccagt 6780
ttgacagtca aatcactact tccattgcta ctttagatca gccaaagtgg tgactgctgc 6840
agtgtgtggc tatccctaca aggcccaccc aagggatgcc caaagcccaa ccttctccag 6900
ggctgcagcc cagagcaacc ccaccagcct aagtccagca gaggacctcc cacccaatgt 6960
cttgttctaa ttagaagggg aagttagcca cagaaaatca acttatctat aattacaaaa 7020
ttctcttgac tcaccttaaa gttcctattg acatctactg cttttaaacc tatttgaaaa 7080
ctctgatact aaaacaaatg acactctaag aaagtttggg agccccatgc tgagaaccat 7140
ttctgtgcag tgaggatgtt tccagaagct acttacctac atgtgaatgt gccattttct 7200
ttccttttgt agagaaaatc ccctttactt tttggaacag taatggcagc ttctagtaca 7260
gccattacag tttcatatga gaaaaattaa gaataactat aaaattgtta aaatatccaa 7320
taatggataa tgatggccag aagatttaac atacaaagta attctcaatg taaagctatt 7380
cagctcttcc aggttgaatg ccctgtaacc caccctgacc ttccacatca tcttcaaaaa 7440
gcagtttctc tgttccccat gattctccta taaggtaact ctttagtcct ccatttagca 7500
cattttaaat cctccaaaga ataagtatca tgtgattatt ttagctttac aaaaaaaaag 7560
ttgaatggcg ttttattttc atggcctata agcaggtacc ttagtagggc agatatagga 7620
aaaacaaatt agagcaaaac aaatcctcta caaatccaag gcaggaaaag tggtggcaga 7680
gtgactcatt ctcctgtccc tcccatcagg tcaaatcagg aggctgcagt gaatgcctgt 7740
tctttgaatg tgtagcagtt gttcctgtaa ctctttaaaa cttggctata ggctgtttag 7800
cacagtacag attaaagata cagttacgta aacagcaaag taattttata gtgcttcatc 7860
catttatcat gctttggttt gctaattttt tcacatacct ttttctatca cagtctgttg 7920
cttttgtaca catttctcat attggggttc gacaggtaaa cacaaactgc tatttcagta 7980
gaaaaagtta ttgttatgaa tattaaaccc aataaattgt ataaaggtaa atatcaaaaa 8040
aaaaaaaaaa 8050
<210> 2
<211> 909
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Ala Ala Arg Pro Leu Pro Val Ser Pro Ala Arg Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ala Leu Ala Gly Ala Leu Leu Ala Pro Cys Glu Ala Arg Gly Val Ser
20 25 30
Leu Trp Asn Gln Gly Arg Ala Asp Glu Val Val Ser Ala Ser Val Gly
35 40 45
Ser Gly Asp Leu Trp Ile Pro Val Lys Ser Phe Asp Ser Lys Asn His
50 55 60
Pro Glu Val Leu Asn Ile Arg Leu Gln Arg Glu Ser Lys Glu Leu Ile
65 70 75 80
Ile Asn Leu Glu Arg Asn Glu Gly Leu Ile Ala Ser Ser Phe Thr Glu
85 90 95
Thr His Tyr Leu Gln Asp Gly Thr Asp Val Ser Leu Ala Arg Asn Tyr
100 105 110
Thr Val Ile Leu Gly His Cys Tyr Tyr His Gly His Val Arg Gly Tyr
115 120 125
Ser Asp Ser Ala Val Ser Leu Ser Thr Cys Ser Gly Leu Arg Gly Leu
130 135 140
Ile Val Phe Glu Asn Glu Ser Tyr Val Leu Glu Pro Met Lys Ser Ala
145 150 155 160
Thr Asn Arg Tyr Lys Leu Phe Pro Ala Lys Lys Leu Lys Ser Val Arg
165 170 175
Gly Ser Cys Gly Ser His His Asn Thr Pro Asn Leu Ala Ala Lys Asn
180 185 190
Val Phe Pro Pro Pro Ser Gln Thr Trp Ala Arg Arg His Lys Arg Glu
195 200 205
Thr Leu Lys Ala Thr Lys Tyr Val Glu Leu Val Ile Val Ala Asp Asn
210 215 220
Arg Glu Phe Gln Arg Gln Gly Lys Asp Leu Glu Lys Val Lys Gln Arg
225 230 235 240
Leu Ile Glu Ile Ala Asn His Val Asp Lys Phe Tyr Arg Pro Leu Asn
245 250 255
Ile Arg Ile Val Leu Val Gly Val Glu Val Trp Asn Asp Met Asp Lys
260 265 270
Cys Ser Val Ser Gln Asp Pro Phe Thr Ser Leu His Glu Phe Leu Asp
275 280 285
Trp Arg Lys Met Lys Leu Leu Pro Arg Lys Ser His Asp Asn Ala Gln
290 295 300
Leu Val Ser Gly Val Tyr Phe Gln Gly Thr Thr Ile Gly Met Ala Pro
305 310 315 320
Ile Met Ser Met Cys Thr Ala Asp Gln Ser Gly Gly Ile Val Met Asp
325 330 335
His Ser Asp Asn Pro Leu Gly Ala Ala Val Thr Leu Ala His Glu Leu
340 345 350
Gly His Asn Phe Gly Met Asn His Asp Thr Leu Asp Arg Gly Cys Ser
355 360 365
Cys Gln Met Ala Val Glu Lys Gly Gly Cys Ile Met Asn Ala Ser Thr
370 375 380
Gly Tyr Pro Phe Pro Met Val Phe Ser Ser Cys Ser Arg Lys Asp Leu
385 390 395 400
Glu Thr Ser Leu Glu Lys Gly Met Gly Val Cys Leu Phe Asn Leu Pro
405 410 415
Glu Val Arg Glu Ser Phe Gly Gly Gln Lys Cys Gly Asn Arg Phe Val
420 425 430
Glu Glu Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Glu Pro Glu Glu Cys Met Asn
435 440 445
Arg Cys Cys Asn Ala Thr Thr Cys Thr Leu Lys Pro Asp Ala Val Cys
450 455 460
Ala His Gly Leu Cys Cys Glu Asp Cys Gln Leu Lys Pro Ala Gly Thr
465 470 475 480
Ala Cys Arg Asp Ser Ser Asn Ser Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Thr
485 490 495
Gly Ala Ser Pro His Cys Pro Ala Asn Val Tyr Leu His Asp Gly His
500 505 510
Ser Cys Gln Asp Val Asp Gly Tyr Cys Tyr Asn Gly Ile Cys Gln Thr
515 520 525
His Glu Gln Gln Cys Val Thr Leu Trp Gly Pro Gly Ala Lys Pro Ala
530 535 540
Pro Gly Ile Cys Phe Glu Arg Val Asn Ser Ala Gly Asp Pro Tyr Gly
545 550 555 560
Asn Cys Gly Lys Val Ser Lys Ser Ser Phe Ala Lys Cys Glu Met Arg
565 570 575
Asp Ala Lys Cys Gly Lys Ile Gln Cys Gln Gly Gly Ala Ser Arg Pro
580 585 590
Val Ile Gly Thr Asn Ala Val Ser Ile Glu Thr Asn Ile Pro Leu Gln
595 600 605
Gln Gly Gly Arg Ile Leu Cys Arg Gly Thr His Val Tyr Leu Gly Asp
610 615 620
Asp Met Pro Asp Pro Gly Leu Val Leu Ala Gly Thr Lys Cys Ala Asp
625 630 635 640
Gly Lys Ile Cys Leu Asn Arg Gln Cys Gln Asn Ile Ser Val Phe Gly
645 650 655
Val His Glu Cys Ala Met Gln Cys His Gly Arg Gly Val Cys Asn Asn
660 665 670
Arg Lys Asn Cys His Cys Glu Ala His Trp Ala Pro Pro Phe Cys Asp
675 680 685
Lys Phe Gly Phe Gly Gly Ser Thr Asp Ser Gly Pro Ile Arg Gln Ala
690 695 700
Asp Asn Gln Gly Leu Thr Ile Gly Ile Leu Val Thr Ile Leu Cys Leu
705 710 715 720
Leu Ala Ala Gly Phe Val Val Tyr Leu Lys Arg Lys Thr Leu Ile Arg
725 730 735
Leu Leu Phe Thr Asn Lys Lys Thr Thr Ile Glu Lys Leu Arg Cys Val
740 745 750
Arg Pro Ser Arg Pro Pro Arg Gly Phe Gln Pro Cys Gln Ala His Leu
755 760 765
Gly His Leu Gly Lys Gly Leu Met Arg Lys Pro Pro Asp Ser Tyr Pro
770 775 780
Pro Lys Asp Asn Pro Arg Arg Leu Leu Gln Cys Gln Asn Val Asp Ile
785 790 795 800
Ser Arg Pro Leu Asn Gly Leu Asn Val Pro Gln Pro Gln Ser Thr Gln
805 810 815
Arg Val Leu Pro Pro Leu His Arg Ala Pro Arg Ala Pro Ser Val Pro
820 825 830
Ala Arg Pro Leu Pro Ala Lys Pro Ala Leu Arg Gln Ala Gln Gly Thr
835 840 845
Cys Lys Pro Asn Pro Pro Gln Lys Pro Leu Pro Ala Asp Pro Leu Ala
850 855 860
Arg Thr Thr Arg Leu Thr His Ala Leu Ala Arg Thr Pro Gly Gln Trp
865 870 875 880
Glu Thr Gly Leu Arg Leu Ala Pro Leu Arg Pro Ala Pro Gln Tyr Pro
885 890 895
His Gln Val Pro Arg Ser Thr His Thr Ala Tyr Ile Lys
900 905
<210> 3
<211> 6464
<212> DNA
<213> 智人
<400> 3
atctgatcct gggctcccag ctggagaggc ggaggcagct ccagggggct ggaagtggaa 60
gcgcagcggc agaaggagag ggagagagaa agagagagag gctaattaaa aaaggatact 120
ccgagggaag agagcaaggg cggtgcgccg ccaaggacca actagcggcg gagcttcgat 180
cttgcctagg cgcggagagc tcccaacctg ggctggaacc ttgcccagca caggtggctg 240
ctacacccca tgtaaaaagc ggaaaataaa atgaagattt tccagcgcaa gatgcggtac 300
tggttgcttc cacctttttt ggcaattgtt tatttctgca ccattgtcca aggtcaagtg 360
gctccaccca caaggttaag atataatgta atatctcatg acagtataca gatttcatgg 420
aaggctccaa gagggaaatt tggtggttac aaacttcttg tgactccaac ttcaggtgga 480
aaaactaacc agctgaatct gcagaacact gcaactaaag caattattca aggccttatg 540
ccagaccaga attacacagt tcaaattatt gcatacaata aagataaaga aagcaagcca 600
gctcaaggcc aattcagaat taaagattta gaaaaaagaa aggatccaaa gcccagagtc 660
aaagttgtgg acagaggaaa tgggagtaga ccatcttcac cagaagaagt gaaatttgtc 720
tgtcaaactc cagcaattgc tgacattgta atcctggtcg atggttcatg gagtattgga 780
agattcaact tcagactggt tcggcatttc ttggaaaacc tggttacagc attcgatgtg 840
ggctcagaga agacacgaat tggtcttgca cagtatagtg gtgaccccag aatagaatgg 900
cacttgaatg catttagcac aaaagatgaa gtgattgaag ctgtccgaaa cctcccatat 960
aaaggaggaa atacactaac aggtcttgct ttgaactaca tttttgaaaa tagcttcaaa 1020
ccagaagcag gatcaaggac tggagtatcc aaaattggca ttttaatcac agatggaaaa 1080
tcccaagatg acattattcc accatctaga aatcttcgtg agtctggtgt agaactgttt 1140
gccatagggg tgaaaaacgc ggatgtgaat gagctgcagg agatcgcctc tgaaccagac 1200
agcactcatg tgtacaatgt tgccgaattc gatctgatgc acacagttgt ggagagtctg 1260
accaggactc tctgctctag agtggaagaa caggacagag aaattaaagc ctcagcccat 1320
gccatcactg ggccgcctac ggagttgatt acttctgaag tcactgccag aagctttatg 1380
gttaactgga ctcatgcccc aggaaatgtg gaaaaataca gagttgtgta ttatcctacc 1440
aggggtggaa aaccagacga ggtggtggta gatggaactg tatcttccac agtgttgaaa 1500
aacttgatgt ctttaactga atatcagata gcagtctttg caatctatgc ccacactgct 1560
agtgaaggcc tacggggaac tgaaactaca cttgctttac cgatggcttc tgaccttcta 1620
ctgtacgacg tgactgagaa cagcatgcga gtcaaatggg atgcagtgcc tggggcctca 1680
ggttacctga tcctttatgc tcctctaaca gagggcctgg ctggggatga aaaagagatg 1740
aaaattggag agacccacac agatattgaa ttgagtgggt tgttgcccaa tacagaatac 1800
acagtcacag tttatgccat gtttggagaa gaggccagtg atcctgttac gggacaagaa 1860
acaacattgg ctttaagtcc accaagaaac ctgagaatct ccaatgttgg ctctaacagt 1920
gctcgattaa cctgggaccc aacttcaaga cagatcaatg gttatcgaat tgtatataac 1980
aatgcagatg ggactgaaat caatgaggtt gaagtcgatc ctattactac cttccctctg 2040
aagggcttga cacctctcac agagtatact attgctattt tctccatcta tgatgaagga 2100
cagtcagagc ctctgactgg agtttttacc accgaggaag ttccagccca gcaatactta 2160
gaaattgatg aggtgacgac agacagtttt agggtgacct ggcatcccct ctcagctgat 2220
gaagggctac acaaattgat gtggattcca gtctatgggg ggaagactga ggaggttgtc 2280
ctgaaagaag agcaggactc acatgttatt gaaggcctgg agcccggtac ggagtatgaa 2340
gtttcactat tggccgtact tgatgatgga agcgagagtg aggtggtgac tgctgtcggg 2400
accacacttg acagtttttg gacagaacca gctacaacca tagtgcctac cacatctgtg 2460
acttcagttt tccagacggg aatcagaaac ctagttgtag gtgatgaaac tacttctagc 2520
ctgcgggtaa aatgggacat ttctgacagc gatgtgcagc agtttagggt gacctacatg 2580
acagctcaag gggaccctga ggaagaagtc ataggaacgg ttatggtgcc tggaagccag 2640
aacaacctcc ttctgaagcc tctgcttcct gatactgaat acaaagtcac agtgactccc 2700
atctacacgg atggcgaagg cgtcagcgtc tccgctcctg gaaaaacctt accatcctcg 2760
gggccccaga acttgcgggt gtccgaggaa tggtataacc ggttgcgcat tacgtgggac 2820
cccccatctt ccccggtgaa aggctataga attgtctaca aacctgtcag tgttcctggt 2880
ccaacactgg aaacgtttgt gggagctgac attaacacca tccttatcac aaacctcctc 2940
agcggaatgg actacaatgt gaagatattt gcctcccagg cctcaggctt cagcgacgcc 3000
ctgacaggca tggtgaaaac attgttcttg ggtgttacca atctccaagc caaacatgtt 3060
gaaatgacca gcttgtgtgc ccactggcag gtacatcgcc atgccacagc ctatagggtt 3120
gttatagaat ccctccagga taggcaaaag caagaatcca ctgtgggtgg agggacaacc 3180
aggcattgct tctatggact tcagcctgat tctgaatata aaatcagtgt ttatacaaag 3240
ctccaggaga ttgaaggacc tagtgtgagc ataatggaaa aaacacaatc acttcctaca 3300
cgaccaccaa cttttcctcc aaccattcca ccagcaaaag aagtatgtaa ggcggccaag 3360
gctgacctgg tatttatggt ggatggatcc tggagcattg gagatgaaaa tttcaataag 3420
atcatcagct ttctatacag cactgttgga gccctgaaca agattggcac agatggaacc 3480
caagttgcaa tggttcagtt cactgatgat cccagaacag aatttaaact aaatgcttac 3540
aaaaccaaag agactcttct tgatgcaatt aaacacattt catacaaagg aggaaataca 3600
aaaacaggaa aagcaattaa gtatgttcga gataccttgt tcactgcaga gtcaggtaca 3660
agaaggggca tcccaaaggt tatcgtggtt ataactgatg gaagatcaca agatgatgtg 3720
aacaaaatct ccagggagat gcaattagat ggctatagca tttttgcaat tggtgtggcc 3780
gatgcagatt actcggagtt ggttagcatt ggcagtaagc ccagcgcacg ccatgtcttc 3840
tttgtggatg actttgacgc ctttaagaaa atcgaagatg agttaattac ttttgtctgc 3900
gaaacagcat cagcaacctg tccagtggta cacaaggatg gcattgatct tgcaggattt 3960
aagatgatgg aaatgtttgg tttggttgaa aaagattttt catcagtgga aggggtttct 4020
atggagcctg gtaccttcaa tgtgtttcca tgttaccaac tccataaaga tgccctggtt 4080
tcccagccaa ccaggtactt gcacccagaa ggattgccct ccgactacac aatcagtttt 4140
ctattccgga ttcttcctga cactccacag gagccatttg ctctttggga gattttaaat 4200
aaaaattctg acccattggt tggggttatt ttagacaatg gtgggaaaac tctaacatat 4260
ttcaactatg accagagtgg ggattttcaa actgttactt tcgaaggacc tgaaattagg 4320
aaaatttttt atggaagctt tcacaagcta cacattgttg tcagtgagac tttggtcaaa 4380
gtggttattg actgcaagca agtgggtgag aaggcaatga acgcatcagc taatatcacg 4440
tcagatggtg tagaagtgct agggaaaatg gttcgatcaa gaggaccagg tggaaactct 4500
gcaccgttcc agttacagat gtttgatatt gtttgctcca catcatgggc caatacagac 4560
aaatgctgtg aacttccagg cctgagagat gatgagtctt gcccagacct tccccattcc 4620
tgctcctgtt ctgaaaccaa tgaagtggct ctgggaccag cgggcccacc aggtggtcca 4680
ggactccgag gaccaaaggg ccagcaaggt gaaccgggtc caaagggacc agatggccct 4740
cggggtgaaa ttggtctgcc aggacctcag ggtccacctg gacctcaagg accaagtggt 4800
ctgtccattc aaggaatgcc cggaatgcca ggagaaaaag gagagaaagg agatactggc 4860
cttccaggtc cacagggtat cccaggaggc gttggttcac caggacgtga tggctcacca 4920
ggccagaggg gccttccggg aaaggatgga tcctcgggac ctccaggacc accagggcca 4980
ataggcattc ctggcacccc tggagtccca gggatcacag gaagcatggg accgcaaggc 5040
gccctgggac cacctggtgt ccctggagca aagggggaac gaggagagcg gggtgacctg 5100
cagtctcaag ccatggtgag atcagtggcg cgtcaagtat gcgaacagct catccagagt 5160
cacatggcca ggtacactgc catcctcaac cagattccca gccactcctc atccatccgg 5220
actgtccaag ggcctcctgg ggagcctggg aggccaggct cacctggagc ccctggtgaa 5280
caaggacccc caggcacacc aggcttcccc ggaaatgcag gcgtgccagg gaccccagga 5340
gaacgaggtc taactggtat caaaggagaa aaaggaaatc caggcgttgg aacccaaggt 5400
ccaagaggcc cccctggacc agcaggacct tcaggggaga gtcggcctgg cagccctggg 5460
ccccctggct ctcctggacc aagaggccca ccaggtcatc tgggggttcc tggaccccaa 5520
ggtccttctg gccagcctgg atattgtgac ccctcatcat gttctgccta tggtgtgaga 5580
gctccccatc cagatcagcc agagttcacc cctgtccaag atgagctgga agccatggaa 5640
ctgtggggcc ctggagtctg atagcctcag gagaaatttg aagaccaact gcaagaactc 5700
ttaaggaatc ttgtttgaga aaatgttgtt atgtggtttg tatgctactt ttggggggca 5760
gggctcattt cagcagccta aatctcctcc ttggataatg ttaatattat tattattatt 5820
aacaaaaaat atatattttt aaaaagttcc cttaatctat gacatggtag caatgatttc 5880
cctttggtgt cttaatggca tgtcagataa tttgtttttc cagagaagag agctcaaaga 5940
ggaattggga aaaataaatt gaactctgga atcttctctc tcaagtccta aaatgaacaa 6000
acagatatga ttgtgtttga gggaaatatg tccctagcag gaaaagaatt caaagaggtt 6060
caaagaatat gtcacttact cctacttgct gtaggaataa ccttgctgat aagaaaaaaa 6120
gggacaatat tggagaaact acctcttgtt taattgatct gtccaactct gagatcactt 6180
ggtaactggt ttcatgtgta tccaaaaatc agcatttgga tttaagcttt ctgaatttgg 6240
tagtttaaga aacagattta gtttttcagt ggttttaact catgtgaaat aatgattttc 6300
caccagctct gatgcaaaga gatataattt taatgaacga tttatccagc agtgtgttcc 6360
aggggttgcc tctccttatc tacggggatt actttgtaca tgcagataag ttttcgcaaa 6420
cctatttcca ttttcttttg taagcaaata aaactttaaa acaa 6464
<210> 4
<211> 1796
<212> PRT
<213> 智人
<400> 4
Met Lys Ile Phe Gln Arg Lys Met Arg Tyr Trp Leu Leu Pro Pro Phe
1 5 10 15
Leu Ala Ile Val Tyr Phe Cys Thr Ile Val Gln Gly Gln Val Ala Pro
20 25 30
Pro Thr Arg Leu Arg Tyr Asn Val Ile Ser His Asp Ser Ile Gln Ile
35 40 45
Ser Trp Lys Ala Pro Arg Gly Lys Phe Gly Gly Tyr Lys Leu Leu Val
50 55 60
Thr Pro Thr Ser Gly Gly Lys Thr Asn Gln Leu Asn Leu Gln Asn Thr
65 70 75 80
Ala Thr Lys Ala Ile Ile Gln Gly Leu Met Pro Asp Gln Asn Tyr Thr
85 90 95
Val Gln Ile Ile Ala Tyr Asn Lys Asp Lys Glu Ser Lys Pro Ala Gln
100 105 110
Gly Gln Phe Arg Ile Lys Asp Leu Glu Lys Arg Lys Asp Pro Lys Pro
115 120 125
Arg Val Lys Val Val Asp Arg Gly Asn Gly Ser Arg Pro Ser Ser Pro
130 135 140
Glu Glu Val Lys Phe Val Cys Gln Thr Pro Ala Ile Ala Asp Ile Val
145 150 155 160
Ile Leu Val Asp Gly Ser Trp Ser Ile Gly Arg Phe Asn Phe Arg Leu
165 170 175
Val Arg His Phe Leu Glu Asn Leu Val Thr Ala Phe Asp Val Gly Ser
180 185 190
Glu Lys Thr Arg Ile Gly Leu Ala Gln Tyr Ser Gly Asp Pro Arg Ile
195 200 205
Glu Trp His Leu Asn Ala Phe Ser Thr Lys Asp Glu Val Ile Glu Ala
210 215 220
Val Arg Asn Leu Pro Tyr Lys Gly Gly Asn Thr Leu Thr Gly Leu Ala
225 230 235 240
Leu Asn Tyr Ile Phe Glu Asn Ser Phe Lys Pro Glu Ala Gly Ser Arg
245 250 255
Thr Gly Val Ser Lys Ile Gly Ile Leu Ile Thr Asp Gly Lys Ser Gln
260 265 270
Asp Asp Ile Ile Pro Pro Ser Arg Asn Leu Arg Glu Ser Gly Val Glu
275 280 285
Leu Phe Ala Ile Gly Val Lys Asn Ala Asp Val Asn Glu Leu Gln Glu
290 295 300
Ile Ala Ser Glu Pro Asp Ser Thr His Val Tyr Asn Val Ala Glu Phe
305 310 315 320
Asp Leu Met His Thr Val Val Glu Ser Leu Thr Arg Thr Leu Cys Ser
325 330 335
Arg Val Glu Glu Gln Asp Arg Glu Ile Lys Ala Ser Ala His Ala Ile
340 345 350
Thr Gly Pro Pro Thr Glu Leu Ile Thr Ser Glu Val Thr Ala Arg Ser
355 360 365
Phe Met Val Asn Trp Thr His Ala Pro Gly Asn Val Glu Lys Tyr Arg
370 375 380
Val Val Tyr Tyr Pro Thr Arg Gly Gly Lys Pro Asp Glu Val Val Val
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Asp Gly Thr Val Ser Ser Thr Val Leu Lys Asn Leu Met Ser Leu Thr
405 410 415
Glu Tyr Gln Ile Ala Val Phe Ala Ile Tyr Ala His Thr Ala Ser Glu
420 425 430
Gly Leu Arg Gly Thr Glu Thr Thr Leu Ala Leu Pro Met Ala Ser Asp
435 440 445
Leu Leu Leu Tyr Asp Val Thr Glu Asn Ser Met Arg Val Lys Trp Asp
450 455 460
Ala Val Pro Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Ile Leu Tyr Ala Pro Leu Thr
465 470 475 480
Glu Gly Leu Ala Gly Asp Glu Lys Glu Met Lys Ile Gly Glu Thr His
485 490 495
Thr Asp Ile Glu Leu Ser Gly Leu Leu Pro Asn Thr Glu Tyr Thr Val
500 505 510
Thr Val Tyr Ala Met Phe Gly Glu Glu Ala Ser Asp Pro Val Thr Gly
515 520 525
Gln Glu Thr Thr Leu Ala Leu Ser Pro Pro Arg Asn Leu Arg Ile Ser
530 535 540
Asn Val Gly Ser Asn Ser Ala Arg Leu Thr Trp Asp Pro Thr Ser Arg
545 550 555 560
Gln Ile Asn Gly Tyr Arg Ile Val Tyr Asn Asn Ala Asp Gly Thr Glu
565 570 575
Ile Asn Glu Val Glu Val Asp Pro Ile Thr Thr Phe Pro Leu Lys Gly
580 585 590
Leu Thr Pro Leu Thr Glu Tyr Thr Ile Ala Ile Phe Ser Ile Tyr Asp
595 600 605
Glu Gly Gln Ser Glu Pro Leu Thr Gly Val Phe Thr Thr Glu Glu Val
610 615 620
Pro Ala Gln Gln Tyr Leu Glu Ile Asp Glu Val Thr Thr Asp Ser Phe
625 630 635 640
Arg Val Thr Trp His Pro Leu Ser Ala Asp Glu Gly Leu His Lys Leu
645 650 655
Met Trp Ile Pro Val Tyr Gly Gly Lys Thr Glu Glu Val Val Leu Lys
660 665 670
Glu Glu Gln Asp Ser His Val Ile Glu Gly Leu Glu Pro Gly Thr Glu
675 680 685
Tyr Glu Val Ser Leu Leu Ala Val Leu Asp Asp Gly Ser Glu Ser Glu
690 695 700
Val Val Thr Ala Val Gly Thr Thr Leu Asp Ser Phe Trp Thr Glu Pro
705 710 715 720
Ala Thr Thr Ile Val Pro Thr Thr Ser Val Thr Ser Val Phe Gln Thr
725 730 735
Gly Ile Arg Asn Leu Val Val Gly Asp Glu Thr Thr Ser Ser Leu Arg
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Val Lys Trp Asp Ile Ser Asp Ser Asp Val Gln Gln Phe Arg Val Thr
755 760 765
Tyr Met Thr Ala Gln Gly Asp Pro Glu Glu Glu Val Ile Gly Thr Val
770 775 780
Met Val Pro Gly Ser Gln Asn Asn Leu Leu Leu Lys Pro Leu Leu Pro
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Asp Thr Glu Tyr Lys Val Thr Val Thr Pro Ile Tyr Thr Asp Gly Glu
805 810 815
Gly Val Ser Val Ser Ala Pro Gly Lys Thr Leu Pro Ser Ser Gly Pro
820 825 830
Gln Asn Leu Arg Val Ser Glu Glu Trp Tyr Asn Arg Leu Arg Ile Thr
835 840 845
Trp Asp Pro Pro Ser Ser Pro Val Lys Gly Tyr Arg Ile Val Tyr Lys
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Pro Val Ser Val Pro Gly Pro Thr Leu Glu Thr Phe Val Gly Ala Asp
865 870 875 880
Ile Asn Thr Ile Leu Ile Thr Asn Leu Leu Ser Gly Met Asp Tyr Asn
885 890 895
Val Lys Ile Phe Ala Ser Gln Ala Ser Gly Phe Ser Asp Ala Leu Thr
900 905 910
Gly Met Val Lys Thr Leu Phe Leu Gly Val Thr Asn Leu Gln Ala Lys
915 920 925
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Ala Thr Ala Tyr Arg Val Val Ile Glu Ser Leu Gln Asp Arg Gln Lys
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Gln Glu Ser Thr Val Gly Gly Gly Thr Thr Arg His Cys Phe Tyr Gly
965 970 975
Leu Gln Pro Asp Ser Glu Tyr Lys Ile Ser Val Tyr Thr Lys Leu Gln
980 985 990
Glu Ile Glu Gly Pro Ser Val Ser Ile Met Glu Lys Thr Gln Ser Leu
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Glu Val Cys Lys Ala Ala Lys Ala Asp Leu Val Phe Met Val Asp
1025 1030 1035
Gly Ser Trp Ser Ile Gly Asp Glu Asn Phe Asn Lys Ile Ile Ser
1040 1045 1050
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1055 1060 1065
Gly Thr Gln Val Ala Met Val Gln Phe Thr Asp Asp Pro Arg Thr
1070 1075 1080
Glu Phe Lys Leu Asn Ala Tyr Lys Thr Lys Glu Thr Leu Leu Asp
1085 1090 1095
Ala Ile Lys His Ile Ser Tyr Lys Gly Gly Asn Thr Lys Thr Gly
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Lys Ala Ile Lys Tyr Val Arg Asp Thr Leu Phe Thr Ala Glu Ser
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Gly Thr Arg Arg Gly Ile Pro Lys Val Ile Val Val Ile Thr Asp
1130 1135 1140
Gly Arg Ser Gln Asp Asp Val Asn Lys Ile Ser Arg Glu Met Gln
1145 1150 1155
Leu Asp Gly Tyr Ser Ile Phe Ala Ile Gly Val Ala Asp Ala Asp
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Tyr Ser Glu Leu Val Ser Ile Gly Ser Lys Pro Ser Ala Arg His
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Val Phe Phe Val Asp Asp Phe Asp Ala Phe Lys Lys Ile Glu Asp
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Glu Leu Ile Thr Phe Val Cys Glu Thr Ala Ser Ala Thr Cys Pro
1205 1210 1215
Val Val His Lys Asp Gly Ile Asp Leu Ala Gly Phe Lys Met Met
1220 1225 1230
Glu Met Phe Gly Leu Val Glu Lys Asp Phe Ser Ser Val Glu Gly
1235 1240 1245
Val Ser Met Glu Pro Gly Thr Phe Asn Val Phe Pro Cys Tyr Gln
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Leu Asn Lys Asn Ser Asp Pro Leu Val Gly Val Ile Leu Asp Asn
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Gly Gly Lys Thr Leu Thr Tyr Phe Asn Tyr Asp Gln Ser Gly Asp
1325 1330 1335
Phe Gln Thr Val Thr Phe Glu Gly Pro Glu Ile Arg Lys Ile Phe
1340 1345 1350
Tyr Gly Ser Phe His Lys Leu His Ile Val Val Ser Glu Thr Leu
1355 1360 1365
Val Lys Val Val Ile Asp Cys Lys Gln Val Gly Glu Lys Ala Met
1370 1375 1380
Asn Ala Ser Ala Asn Ile Thr Ser Asp Gly Val Glu Val Leu Gly
1385 1390 1395
Lys Met Val Arg Ser Arg Gly Pro Gly Gly Asn Ser Ala Pro Phe
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Gln Leu Gln Met Phe Asp Ile Val Cys Ser Thr Ser Trp Ala Asn
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Thr Asp Lys Cys Cys Glu Leu Pro Gly Leu Arg Asp Asp Glu Ser
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Cys Pro Asp Leu Pro His Ser Cys Ser Cys Ser Glu Thr Asn Glu
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Val Ala Leu Gly Pro Ala Gly Pro Pro Gly Gly Pro Gly Leu Arg
1460 1465 1470
Gly Pro Lys Gly Gln Gln Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly Pro Asp
1475 1480 1485
Gly Pro Arg Gly Glu Ile Gly Leu Pro Gly Pro Gln Gly Pro Pro
1490 1495 1500
Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Leu Ser Ile Gln Gly Met Pro Gly
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Met Pro Gly Glu Lys Gly Glu Lys Gly Asp Thr Gly Leu Pro Gly
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Pro Gln Gly Ile Pro Gly Gly Val Gly Ser Pro Gly Arg Asp Gly
1535 1540 1545
Ser Pro Gly Gln Arg Gly Leu Pro Gly Lys Asp Gly Ser Ser Gly
1550 1555 1560
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Ile Gly Ile Pro Gly Thr Pro Gly
1565 1570 1575
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1580 1585 1590
Pro Pro Gly Val Pro Gly Ala Lys Gly Glu Arg Gly Glu Arg Gly
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Asp Leu Gln Ser Gln Ala Met Val Arg Ser Val Ala Arg Gln Val
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Cys Glu Gln Leu Ile Gln Ser His Met Ala Arg Tyr Thr Ala Ile
1625 1630 1635
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1640 1645 1650
Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Arg Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro
1655 1660 1665
Gly Glu Gln Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Phe Pro Gly Asn Ala
1670 1675 1680
Gly Val Pro Gly Thr Pro Gly Glu Arg Gly Leu Thr Gly Ile Lys
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Gly Glu Lys Gly Asn Pro Gly Val Gly Thr Gln Gly Pro Arg Gly
1700 1705 1710
Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ser Gly Glu Ser Arg Pro Gly Ser
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1730 1735 1740
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Cys Asp Pro Ser Ser Cys Ser Ala Tyr Gly Val Arg Ala Pro His
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Pro Asp Gln Pro Glu Phe Thr Pro Val Gln Asp Glu Leu Glu Ala
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Met Glu Leu Trp Gly Pro Gly Val
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<210> 5
<211> 5008
<212> DNA
<213> 智人
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cacccagcag cctcccaggc atcctggagg gtctgctccc tgtctttcca aggatgagtc 120
tccaggagat gttccgcttc cctatggggc tcctgcttgg ctctgtgctc ctggtggctt 180
cggccccagc cactctggag cctcccggct gcagcaacaa ggagcaacag gtcactgtca 240
gccacaccta caagatcgat gtgcccaagt ctgccttggt tcaggttgac gctgaccctc 300
agcccctcag tgacgatggg gcttcgctct tggccctggg ggaggccagg gaggaacaga 360
acatcatctt caggcacaac atccgccttc agacgccaca gaaggactgc gagttggcag 420
gcagtgtcca ggacctcctg gcccgggtga agaagctgga ggaagagatg gtggagatga 480
aggaacagtg tagtgcccag cgctgctgcc agggagtcac tgatctaagc cgccactgca 540
gcggccacgg gaccttctcc ctggagacct gcagctgcca ctgcgaagag ggcagggagg 600
gccccgcctg cgagcggctg gcctgccccg gggcgtgcag cggccacggg cgttgcgtgg 660
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ctgagaactg cagcggacac ggcgagtgcg tgcgcggcgt gtgccagtgc cacgaagact 780
tcatgtcgga ggactgcagc gagaagcgct gtcccggcga ctgcagcggc cacggcttct 840
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ctgagaactc ccttgacgtg gagtgggaaa acccctcaac tgaggtggac tactacaagc 1260
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accccaagag ccgatatgac atcactggtc tgcacccggg gactgagtat aagatcacgg 1380
tggtgcccat gagaggagag ctggagggca agccgatcct cctgaatggc aggacagaaa 1440
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aggcccagac agacattgac agcccccaaa acctggtgac cgaccgggtg acagagaata 2280
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cctttaaggg tggtcgccgg agcagaaatg tatccaccac cctctccaca gttggtgccc 3300
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actgtgccct gacacatcat ggtggctggt ggtataagaa ctgccacttg gccaacccta 3840
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ggtcactgcg gtctgggagt gctcagatag cccgcagaac aaatcatgtc accaagcttc 4140
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aaatcaaaat agtagttgca cagtatgtgt aggaaagaca gtactggaac ggcaaggttt 4260
ctcagcttat cttcagcaac atatatactg gattagggca agagaaggaa tcacccagca 4320
cttcaccagt tggaaatctc tggaaattta catctatgta tttaaagttc tgctaatgca 4380
aatcttttct ctggaaagaa gcacagagga ggagttctga tgacccaggg gttagggctg 4440
agacaaccgg acgtttgtca cctcctttcc cattgggttt ttaggaaaac agtgtgaacc 4500
tccccctttt aatttctggt gttatgagga agaataaagg ggataaaagg ggctaagatg 4560
gactcatgtt tagctaagtt ctgacttgta tccagcatgc tggagaccaa agctgccgcc 4620
ttactgctat ttttaagtgc cctcttttca gtcatttgca taattgcgtc catagagctg 4680
catatgttgt gaataaattc tcactcattt caactttgaa taatttgact gtcttgataa 4740
ttggttcctc ccaaagactc ttctgcaact cccattcatg cccaccaggc ctcagactcc 4800
ctcttttccc cgccctgcac tattggagcc ctgggttttg tgggagtgct cagcaccgtg 4860
agtcttactg tttgatcgga cagttagcaa gatcagatcc tttttgctta ttttctatca 4920
ctttggaggg ttttctgtag caaaatcagt gaccaatgaa gtaacttaaa ttcctattga 4980
agaaaaaaaa taataaacca cttgattt 5008
<210> 6
<211> 1299
<212> PRT
<213> 智人
<400> 6
Met Ser Leu Gln Glu Met Phe Arg Phe Pro Met Gly Leu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Ser Val Leu Leu Val Ala Ser Ala Pro Ala Thr Leu Glu Pro Pro Gly
20 25 30
Cys Ser Asn Lys Glu Gln Gln Val Thr Val Ser His Thr Tyr Lys Ile
35 40 45
Asp Val Pro Lys Ser Ala Leu Val Gln Val Asp Ala Asp Pro Gln Pro
50 55 60
Leu Ser Asp Asp Gly Ala Ser Leu Leu Ala Leu Gly Glu Ala Arg Glu
65 70 75 80
Glu Gln Asn Ile Ile Phe Arg His Asn Ile Arg Leu Gln Thr Pro Gln
85 90 95
Lys Asp Cys Glu Leu Ala Gly Ser Val Gln Asp Leu Leu Ala Arg Val
100 105 110
Lys Lys Leu Glu Glu Glu Met Val Glu Met Lys Glu Gln Cys Ser Ala
115 120 125
Gln Arg Cys Cys Gln Gly Val Thr Asp Leu Ser Arg His Cys Ser Gly
130 135 140
His Gly Thr Phe Ser Leu Glu Thr Cys Ser Cys His Cys Glu Glu Gly
145 150 155 160
Arg Glu Gly Pro Ala Cys Glu Arg Leu Ala Cys Pro Gly Ala Cys Ser
165 170 175
Gly His Gly Arg Cys Val Asp Gly Arg Cys Leu Cys His Glu Pro Tyr
180 185 190
Val Gly Ala Asp Cys Gly Tyr Pro Ala Cys Pro Glu Asn Cys Ser Gly
195 200 205
His Gly Glu Cys Val Arg Gly Val Cys Gln Cys His Glu Asp Phe Met
210 215 220
Ser Glu Asp Cys Ser Glu Lys Arg Cys Pro Gly Asp Cys Ser Gly His
225 230 235 240
Gly Phe Cys Asp Thr Gly Glu Cys Tyr Cys Glu Glu Gly Phe Thr Gly
245 250 255
Leu Asp Cys Ala Gln Val Val Thr Pro Gln Gly Leu Gln Leu Leu Lys
260 265 270
Asn Thr Glu Asp Ser Leu Leu Val Ser Trp Glu Pro Ser Ser Gln Val
275 280 285
Asp His Tyr Leu Leu Ser Tyr Tyr Pro Leu Gly Lys Glu Leu Ser Gly
290 295 300
Lys Gln Ile Gln Val Pro Lys Glu Gln His Ser Tyr Glu Ile Leu Gly
305 310 315 320
Leu Leu Pro Gly Thr Lys Tyr Ile Val Thr Leu Arg Asn Val Lys Asn
325 330 335
Glu Val Ser Ser Ser Pro Gln His Leu Leu Ala Thr Thr Asp Leu Ala
340 345 350
Val Leu Gly Thr Ala Trp Val Thr Asp Glu Thr Glu Asn Ser Leu Asp
355 360 365
Val Glu Trp Glu Asn Pro Ser Thr Glu Val Asp Tyr Tyr Lys Leu Arg
370 375 380
Tyr Gly Pro Met Thr Gly Gln Glu Val Ala Glu Val Thr Val Pro Lys
385 390 395 400
Ser Ser Asp Pro Lys Ser Arg Tyr Asp Ile Thr Gly Leu His Pro Gly
405 410 415
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420 425 430
Lys Pro Ile Leu Leu Asn Gly Arg Thr Glu Ile Asp Ser Pro Thr Asn
435 440 445
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450 455 460
Pro Val Gln Ala Val Ile Asp Lys Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser Ala
465 470 475 480
Asp Gly Asp Thr Lys Glu Met Ala Val His Lys Asp Glu Ser Ser Thr
485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
Asn Thr Ala Thr Ile Ser Trp Asp Pro Val Gln Ala Thr Ile Asp Lys
545 550 555 560
Tyr Val Val Arg Tyr Thr Ser Ala Asp Asp Gln Glu Thr Arg Glu Val
565 570 575
Leu Val Gly Lys Glu Gln Ser Ser Thr Val Leu Thr Gly Leu Arg Pro
580 585 590
Gly Val Glu Tyr Thr Val His Val Trp Ala Gln Lys Gly Asp Arg Glu
595 600 605
Ser Lys Lys Ala Asp Thr Asn Ala Pro Thr Asp Ile Asp Ser Pro Lys
610 615 620
Asn Leu Val Thr Asp Arg Val Thr Glu Asn Met Ala Thr Val Ser Trp
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645 650 655
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660 665 670
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675 680 685
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740 745 750
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Glu Ser Lys Lys Ala Asp Thr Lys Ala Gln Thr Glu Leu Asp Pro Pro
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980 985 990
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Tyr Cys Asp Met Glu Thr Asp Gly Gly Gly Trp Ile Val Phe Gln
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Arg Arg Asn Thr Gly Gln Leu Asp Phe Phe Lys Arg Trp Arg Ser
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Ile Ala Leu Ser Asn Cys Ala Leu Thr His His Gly Gly Trp Trp
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1295
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<212> DNA
<213> 智人
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ctcaaaagtc tagagccacc gtccagggag caggtagctg ctgggctccg gggacacttt 120
gcgttcgggc tgggagcgtg ctttccacga cggtgacacg cttccctgga ttggccagac 180
tgccttccgg gtcactgcca tggaggagcc gcagtcagat cctagcgtcg agccccctct 240
gagtcaggaa acattttcag acctatggaa actacttcct gaaaacaacg ttctgtcccc 300
cttgccgtcc caagcaatgg atgatttgat gctgtccccg gacgatattg aacaatggtt 360
cactgaagac ccaggtccag atgaagctcc cagaatgcca gaggctgctc cccccgtggc 420
ccctgcacca gcagctccta caccggcggc ccctgcacca gccccctcct ggcccctgtc 480
atcttctgtc ccttcccaga aaacctacca gggcagctac ggtttccgtc tgggcttctt 540
gcattctggg acagccaagt ctgtgacttg cacgtactcc cctgccctca acaagatgtt 600
ttgccaactg gccaagacct gccctgtgca gctgtgggtt gattccacac ccccgcccgg 660
cacccgcgtc cgcgccatgg ccatctacaa gcagtcacag cacatgacgg aggttgtgag 720
gcgctgcccc caccatgagc gctgctcaga tagcgatggt ctggcccctc ctcagcatct 780
tatccgagtg gaaggaaatt tgcgtgtgga gtatttggat gacagaaaca cttttcgaca 840
tagtgtggtg gtgccctatg agccgcctga ggttggctct gactgtacca ccatccacta 900
caactacatg tgtaacagtt cctgcatggg cggcatgaac cggaggccca tcctcaccat 960
catcacactg gaagactcca gtggtaatct actgggacgg aacagctttg aggtgcgtgt 1020
ttgtgcctgt cctgggagag accggcgcac agaggaagag aatctccgca agaaagggga 1080
gcctcaccac gagctgcccc cagggagcac taagcgagca ctgcccaaca acaccagctc 1140
ctctccccag ccaaagaaga aaccactgga tggagaatat ttcacccttc agatccgtgg 1200
gcgtgagcgc ttcgagatgt tccgagagct gaatgaggcc ttggaactca aggatgccca 1260
ggctgggaag gagccagggg ggagcagggc tcactccagc cacctgaagt ccaaaaaggg 1320
tcagtctacc tcccgccata aaaaactcat gttcaagaca gaagggcctg actcagactg 1380
acattctcca cttcttgttc cccactgaca gcctcccacc cccatctctc cctcccctgc 1440
cattttgggt tttgggtctt tgaacccttg cttgcaatag gtgtgcgtca gaagcaccca 1500
ggacttccat ttgctttgtc ccggggctcc actgaacaag ttggcctgca ctggtgtttt 1560
gttgtgggga ggaggatggg gagtaggaca taccagctta gattttaagg tttttactgt 1620
gagggatgtt tgggagatgt aagaaatgtt cttgcagtta agggttagtt tacaatcagc 1680
cacattctag gtaggggccc acttcaccgt actaaccagg gaagctgtcc ctcactgttg 1740
aattttctct aacttcaagg cccatatctg tgaaatgctg gcatttgcac ctacctcaca 1800
gagtgcattg tgagggttaa tgaaataatg tacatctggc cttgaaacca ccttttatta 1860
catggggtct agaacttgac ccccttgagg gtgcttgttc cctctccctg ttggtcggtg 1920
ggttggtagt ttctacagtt gggcagctgg ttaggtagag ggagttgtca agtctctgct 1980
ggcccagcca aaccctgtct gacaacctct tggtgaacct tagtacctaa aaggaaatct 2040
caccccatcc cacaccctgg aggatttcat ctcttgtata tgatgatctg gatccaccaa 2100
gacttgtttt atgctcaggg tcaatttctt ttttcttttt tttttttttt tttctttttc 2160
tttgagactg ggtctcgctt tgttgcccag gctggagtgg agtggcgtga tcttggctta 2220
ctgcagcctt tgcctccccg gctcgagcag tcctgcctca gcctccggag tagctgggac 2280
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ccagagtgct gggattacaa ttgtgagcca ccacgtccag ctggaagggt caacatcttt 2460
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atcccatttt tatatcgatc tcttatttta caataaaact ttgctgccac ctgtgtgtct 2580
gaggggtg 2588
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<211> 393
<212> PRT
<213> 智人
<400> 8
Met Glu Glu Pro Gln Ser Asp Pro Ser Val Glu Pro Pro Leu Ser Gln
1 5 10 15
Glu Thr Phe Ser Asp Leu Trp Lys Leu Leu Pro Glu Asn Asn Val Leu
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Ser Pro Leu Pro Ser Gln Ala Met Asp Asp Leu Met Leu Ser Pro Asp
35 40 45
Asp Ile Glu Gln Trp Phe Thr Glu Asp Pro Gly Pro Asp Glu Ala Pro
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Arg Met Pro Glu Ala Ala Pro Pro Val Ala Pro Ala Pro Ala Ala Pro
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Thr Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ser Trp Pro Leu Ser Ser Ser
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg Val Arg Ala Met
145 150 155 160
Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val Val Arg Arg Cys
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180 185 190
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210 215 220
Val Gly Ser Asp Cys Thr Thr Ile His Tyr Asn Tyr Met Cys Asn Ser
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Ser Cys Met Gly Gly Met Asn Arg Arg Pro Ile Leu Thr Ile Ile Thr
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Leu Glu Asp Ser Ser Gly Asn Leu Leu Gly Arg Asn Ser Phe Glu Val
260 265 270
Arg Val Cys Ala Cys Pro Gly Arg Asp Arg Arg Thr Glu Glu Glu Asn
275 280 285
Leu Arg Lys Lys Gly Glu Pro His His Glu Leu Pro Pro Gly Ser Thr
290 295 300
Lys Arg Ala Leu Pro Asn Asn Thr Ser Ser Ser Pro Gln Pro Lys Lys
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Lys Pro Leu Asp Gly Glu Tyr Phe Thr Leu Gln Ile Arg Gly Arg Glu
325 330 335
Arg Phe Glu Met Phe Arg Glu Leu Asn Glu Ala Leu Glu Leu Lys Asp
340 345 350
Ala Gln Ala Gly Lys Glu Pro Gly Gly Ser Arg Ala His Ser Ser His
355 360 365
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<213> 智人
<400> 9
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gcgcctgcag gagagcctgg ccgacccggc tcctcgcctt ctctgcgcgc tctcccgcgt 240
ccgctttcag caccccgagc ggagaacagt tcccggcagc ccgcagcgct gccgagtggc 300
cgccggccgg ccgagtaccc ggagctccag ggggctcagg agcaccctct gagaacccgc 360
tgtgcaccca ccttttcccc tcttttggtg ggcaagtaag cacgggggaa aagcatccgg 420
tggcctcagg gagccctgaa gaaaccgaag cagaatgtac cagggacaca tgcagaaaag 480
taaagaacaa ggatatggaa aactaagcag tgatgaagac ctcgaaataa ttgttgatca 540
aaagcaggga aaaggctcta gggcggcaga taaggctgtt gccatggtga tgaaggagat 600
accgagggag gagtctgctg aagaaaagcc cctccttact atgacatcac agctggtgaa 660
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gccctcatca aaaacctcat ccctcaagaa aaaggccgat ggatctgacc tcatcagcac 900
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ttgtatatag agtcaaagtc aggctcaaaa gaagaattaa gagactcaag acaaaccaag 2580
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tctttggctc tttgaacatt tagcaagtat tgggaatttt ctattagcag tggtgtttta 3600
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ataataatag ctcatcccgc tcatgattat agctacccac aaaaaataaa acaacaacaa 3900
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ctctcctctg ttacatctga agtccttggg ttgtgagagg gcctcaagtt aacagaaacc 4080
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tagttcatgg acaaaggatt gaatagcctc tgaacaaagg attcaaagca aactttgtaa 4560
gtgttctgtg atgccattct atactttgag cagcagctga atctgcagcc tggatttaaa 4620
gcctgaaact agtataaatg tcaaataatt aatttgttgc taaatggtgg caaattttgt 4680
ggcccaagtt ttattttgct attggaacac aaactccaag gagctgtttt agggaagact 4740
aaacaatctt ccattcttac cattatttgg caatttgcag agcatttagt agtactttct 4800
ctagtgtatg tagtatctgt cagatctaag atttttatag gctgtcaaga agtccagaat 4860
tacggcccaa gaggaaaaga gttgcatttt tcaataatat tttttataaa attaagttaa 4920
aaccattatt aaaacatgag tgacaggcca ggtgcggtgg ctcacgcctg taatcctagc 4980
actttgggag gcagaggcgg gcagaccacg aggtcaggag ttcgagacca gcctgaccaa 5040
catggtgaaa ccccgtcttt attaagaata caaaaattag ccgggtgtag tggtatgcac 5100
ctgtaatacc agctactcag gaggctgagg caggagaatc acttgaacca gggaggcgga 5160
ggttgcagtg agccgagatt gcaccgctgc actccagtct gggtgacaga gcgagactcc 5220
gtctcaaaaa aaacaaaaaa gtgacagttt ataggaatag agcaccacca agaaatcagt 5280
agcaagactt tagaacagtc tttttgtata aatcatatac agtaaatgtt ttgtttctta 5340
gaagtgcatc tactttattt tttggcagaa caatttttgg catcttatct tcatggcatg 5400
aaattgtcat ttaaattact ctttccgttt gaaaggggag ggtatcctta tttcccttct 5460
gaggtactct gagaaggctt tgagtttcct ttttcatgta ttaatgtata acagcctaac 5520
agctcctaga agagggtatt cttactagaa tggctacata cgggtgactt cagttacata 5580
caggtgactt ccagggactg acttcgcctg tagattggat gaaaataaag agaaagccag 5640
tgattattgc tgagtttcaa aatataacca tttctagtag gctacttcta catgctgttg 5700
taccttcctg gtgaggagga gacagaggga taggggagag gaggaggaat aaaaatccct 5760
ctcactgggc caatcatact gattcattcc ctttacttcc tccaaaactc actccccatg 5820
actcctgaaa aatgggtaga tctcgtccac caggaaattt taatagaata ctatgcaccg 5880
tgctttctca gtcaatctgg attcctacta gaacagaaaa gtaaggaaac ataactgggt 5940
aggaatgtcc acttacgttt cacaaactca cttttagagt ttcatgccac tttcctcatt 6000
cttctcttta agatactatt atattgaacg tgggacccat gtctaaatac ttgtatagat 6060
aaatatttct tgtatattct tcccatacaa gcaagacttg aatacagttg tagctagtcc 6120
cacttttata ataaaagctt ccaaactctt tatcataaac tttgtctgtg agcttgggaa 6180
tacagagaaa gcaagttgat cattctgaga cccttcctca tttgccctga atcagttccc 6240
caagattgga ctgtacttta agctagttgt tgtagcagtg gtggttgttg ttttatatct 6300
tgagatactt ctagaacatt ctagaaacag ggtattctaa aggcttactt tatatgccat 6360
cctttttgaa ccctcttatt ttagaaatta ttacacgtgc acacttatga tttcaacctt 6420
gtaaaataat ttcaaattca tttcgtatcc acattttact gcagtttccc tatcatcatc 6480
tcaatagtta tagaactggt tgaaattaaa ctgttttgaa ctaagaagta gatatatata 6540
tatatatata tatatatttt tttttttttt tttaaagagt gttcatagat aaactctggc 6600
ataaagtttg taaaaaagca attttttaaa agcaaaacgt ataacctcag gtacaaaaat 6660
attgcatgca ttagtattgc aaatttgcct actcaaatat taaccaaagc atgcaagata 6720
acttgactga atttaaattt acacagtgca tgattaagtc tcataggtta gcctgttgtt 6780
ccttgcctct atacaaggga gcatttttat gaactttgtg ttacagtttt tctatttgct 6840
tttcttatcc tatccttgag attgttttca tgctatcaca ctgaacttta cagatattca 6900
cacatctggt ttctacagtg ttaccagtgc caaactaatc ctctgaagaa tctgggacat 6960
ctaaacactt tttcaaaaac cagttgaggc acaacagatc ccaaacttaa acaaatccaa 7020
gtgtctgaat gctactaaac taaatcatgt tgactgcctc agcacataaa ggtttcgact 7080
ttaaattctt aataatgcat ttcaaaattt ttctaaaagt ttgggaataa attagaaaaa 7140
ctgatattct aaataaggcg aggaggttgg ggtaatgtca ggcacatcaa aatcatcaca 7200
caacgaagta gatatggggc cttaattttc ataaatgtca catagcaagt gtgtggggta 7260
tcacaacatt gttctgatac agccctgttt gtatggtagt tgagctgctt gggctaaatg 7320
tcccttgaga aactggactt gatcaacagg tctaaaaaca ctgatattta gggagtgatg 7380
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cccctatttt atgaggagac cagaaaggga gagagcaaag ctcagtgaga ccatgtggtc 7500
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caattaggca gttctttgct caactataaa atgtgtatca ttcattgggg gagggggagg 7980
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atacacactc agctcggtaa ttcgagcatt tggcattttc actgagatat atagcatttc 8100
tgcatggata ccatacaaga attctgccat gtgagaaatg tgttcatgat ggactacatt 8160
accagtagtt aagggaaata cagcaaactt aagtttttac caacttcctt tcatgttccc 8220
tatatatcat ctaacccaaa ctttcaattt acattgccca aatttgttta cattggttga 8280
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gcaatggggg ggaggggatt ttaaagtgat tggcatatta tgtgatactg tatcagtgat 8640
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gctatctgga aatcaggaat gcatttttgg atataaaaca aaactttaaa aatcttcctc 9120
ctttgttaat tttttaagac taaaatatta tttaacctga aattgaattt tgtgattctt 9180
tttagaataa aaatattaaa ataaa 9205
<210> 10
<211> 626
<212> PRT
<213> 智人
<400> 10
Met Tyr Gln Gly His Met Gln Lys Ser Lys Glu Gln Gly Tyr Gly Lys
1 5 10 15
Leu Ser Ser Asp Glu Asp Leu Glu Ile Ile Val Asp Gln Lys Gln Gly
20 25 30
Lys Gly Ser Arg Ala Ala Asp Lys Ala Val Ala Met Val Met Lys Glu
35 40 45
Ile Pro Arg Glu Glu Ser Ala Glu Glu Lys Pro Leu Leu Thr Met Thr
50 55 60
Ser Gln Leu Val Asn Glu Gln Gln Glu Ser Arg Pro Leu Leu Ser Pro
65 70 75 80
Ser Ile Asp Asp Phe Leu Cys Glu Thr Lys Ser Glu Ala Ile Ala Arg
85 90 95
Pro Val Thr Ser Asn Thr Ala Val Leu Thr Thr Gly Leu Asp Leu Leu
100 105 110
Asp Leu Ser Glu Pro Val Ser Gln Thr Gln Thr Lys Ala Lys Lys Ser
115 120 125
Glu Pro Ser Ser Lys Thr Ser Ser Leu Lys Lys Lys Ala Asp Gly Ser
130 135 140
Asp Leu Ile Ser Thr Asp Ala Glu Gln Arg Gly Gln Pro Leu Arg Val
145 150 155 160
Pro Glu Thr Ser Ser Leu Asp Leu Asp Ile Gln Thr Gln Leu Glu Lys
165 170 175
Trp Asp Asp Val Lys Phe His Gly Asp Arg Asn Thr Lys Gly His Pro
180 185 190
Met Ala Glu Arg Lys Ser Ser Ser Ser Arg Thr Gly Ser Lys Glu Leu
195 200 205
Leu Trp Ser Ser Glu His Arg Ser Gln Pro Glu Leu Ser Gly Gly Lys
210 215 220
Ser Ala Leu Asn Ser Glu Ser Ala Ser Glu Leu Glu Leu Val Ala Pro
225 230 235 240
Thr Gln Ala Arg Leu Thr Lys Glu His Arg Trp Gly Ser Ala Leu Leu
245 250 255
Ser Arg Asn His Ser Leu Glu Glu Glu Phe Glu Arg Ala Lys Ala Ala
260 265 270
Val Glu Ser Asp Thr Glu Phe Trp Asp Lys Met Gln Ala Glu Trp Glu
275 280 285
Glu Met Ala Arg Arg Asn Trp Ile Ser Glu Asn Gln Glu Ala Gln Asn
290 295 300
Gln Val Thr Ile Ser Ala Ser Glu Lys Gly Tyr Tyr Phe His Thr Glu
305 310 315 320
Asn Pro Phe Lys Asp Trp Pro Gly Ala Phe Glu Glu Gly Leu Lys Arg
325 330 335
Leu Lys Glu Gly Asp Leu Pro Val Thr Ile Leu Phe Met Glu Ala Ala
340 345 350
Ile Leu Gln Asp Pro Gly Asp Ala Glu Ala Trp Gln Phe Leu Gly Ile
355 360 365
Thr Gln Ala Glu Asn Glu Asn Glu Gln Ala Ala Ile Val Ala Leu Gln
370 375 380
Arg Cys Leu Glu Leu Gln Pro Asn Asn Leu Lys Ala Leu Met Ala Leu
385 390 395 400
Ala Val Ser Tyr Thr Asn Thr Gly His Gln Gln Asp Ala Cys Asp Ala
405 410 415
Leu Lys Asn Trp Ile Lys Gln Asn Pro Lys Tyr Lys Tyr Leu Val Lys
420 425 430
Ser Lys Lys Gly Ser Pro Gly Leu Thr Arg Arg Met Ser Lys Ser Pro
435 440 445
Val Asp Ser Ser Val Leu Glu Gly Val Lys Glu Leu Tyr Leu Glu Ala
450 455 460
Ala His Gln Asn Gly Asp Met Ile Asp Pro Asp Leu Gln Thr Gly Leu
465 470 475 480
Gly Val Leu Phe His Leu Ser Gly Glu Phe Asn Arg Ala Ile Asp Ala
485 490 495
Phe Asn Ala Ala Leu Thr Val Arg Pro Glu Asp Tyr Ser Leu Trp Asn
500 505 510
Arg Leu Gly Ala Thr Leu Ala Asn Gly Asp Arg Ser Glu Glu Ala Val
515 520 525
Glu Ala Tyr Thr Arg Ala Leu Glu Ile Gln Pro Gly Phe Ile Arg Ser
530 535 540
Arg Tyr Asn Leu Gly Ile Ser Cys Ile Asn Leu Gly Ala Tyr Arg Glu
545 550 555 560
Ala Val Ser Asn Phe Leu Thr Ala Leu Ser Leu Gln Arg Lys Ser Arg
565 570 575
Asn Gln Gln Gln Val Pro His Pro Ala Ile Ser Gly Asn Ile Trp Ala
580 585 590
Ala Leu Arg Ile Ala Leu Ser Leu Met Asp Gln Pro Glu Leu Phe Gln
595 600 605
Ala Ala Asn Leu Gly Asp Leu Asp Val Leu Leu Arg Ala Phe Asn Leu
610 615 620
Asp Pro
625

Claims (18)

1.至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞对MEK抑制剂的应答性的试剂中的用途，其中所述MEK抑制剂是曲美替尼，所述预测包括：
通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与所述试剂接触来检测所述癌细胞中ADAM12基因中的至少一种突变的存在，其中所述ADAM12基因中的突变选自下组突变：Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E，所述寡核苷酸特异性检测所述突变；
其中ADAM12中突变的存在指示所述癌细胞对所述MEK抑制剂的降低的应答性。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述癌细胞来源于癌症患者。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述检测包括将所述寡核苷酸用作引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述检测包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。
5.至少一种寡核苷酸在制造用于鉴定MEK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的试剂中的用途，其中所述MEK抑制剂是曲美替尼，所述鉴定包括：
a)通过使来自患者的样品与所述试剂接触来检测所述样品中ADAM12基因中至少一种突变的存在，其中所述ADAM12基因中的突变选自下组突变：Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E，所述寡核苷酸特异性检测所述突变；
b)如果在所述样品中检测到ADAM12中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述MEK抑制剂的可能的无应答者。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述鉴定进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述MEK抑制剂的单一疗法或者MEK抑制剂治疗。
7.根据权利要求5所述的用途，其中所述鉴定进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的MEK抑制剂治疗，或者用不同的MEK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。
8.根据权利要求5所述的用途，其中所述鉴定进一步包括推荐被鉴定为可能的应答者的所述患者用所述MEK抑制剂治疗。
9.根据权利要求5所述的用途，其中所述样品来源于所述患者的癌细胞或者组织。
10.至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞对ERK抑制剂的应答性的试剂中的用途，其中所述ERK抑制剂是SCH772984，所述预测包括：
通过使来源于所述癌细胞的核酸样品与所述试剂接触来检测所述癌细胞中ADAM12基因中的至少一种突变的存在，其中所述ADAM12基因中的突变选自下组突变：Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E，所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；
其中ADAM12中突变的存在指示所述癌细胞对所述ERK抑制剂的降低的应答性。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述癌细胞来源于癌症患者。
12.根据权利要求10所述的用途，其中所述检测包括将所述寡核苷酸用作引物来扩增所述基因的至少一部分，以及检测所述扩增产物从而确定在所述基因中所述突变的存在。
13.根据权利要求10所述的用途，其中所述检测包括使所述核酸样品接触所述寡核苷酸，所述寡核苷酸与所述基因的所述突变特异性杂交以形成复合物，以及检测所述复合物的形成从而确定在所述基因中所述突变的存在。
14.至少一种寡核苷酸在制造用于鉴定ERK抑制剂的可能的应答者或者可能的无应答者的试剂中的用途，其中所述ERK抑制剂是SCH772984，所述鉴定包括：
a)通过使来自患者的样品与所述试剂接触来检测所述样品中ADAM12基因中至少一种突变的存在，其中所述ADAM12基因中的突变选自下组突变：Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E，所述寡核苷酸允许特异性检测所述突变；
b)如果在所述样品中检测到ADAM12中的至少一种突变，则将所述患者鉴定为所述ERK抑制剂的可能的无应答者。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述鉴定进一步包括对被鉴定为可能的无应答者的所述患者不推荐用所述ERK抑制剂的单一疗法或者ERK抑制剂治疗。
16.根据权利要求14所述的用途，其中所述鉴定进一步包括推荐被鉴定为可能的无应答者的所述患者用不同的ERK抑制剂治疗，或者用不同的ERK抑制剂和另外的具有不同机制的治疗剂的联合疗法治疗。
17.根据权利要求14所述的用途，其中所述样品来源于所述患者的癌细胞或者组织。
18.至少一种寡核苷酸在制造用于预测癌细胞或者癌症患者对MEK抑制剂或者ERK抑制剂的应答性的试剂盒中的用途，其中所述MEK抑制剂是曲美替尼，所述ERK抑制剂是SCH772984，其中所述寡核苷酸用于检测ADAM12基因中至少一种突变的存在，其中所述ADAM12基因中的突变选自下组突变：Q650K、R240L、C440Y、Q228E、H247D、M322I、T97fs、P168L和G308E。
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