CN106187915A - 具有alk与egfr双重活性的抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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CN106187915A CN201610318055.6A CN201610318055A CN106187915A CN 106187915 A CN106187915 A CN 106187915A CN 201610318055 A CN201610318055 A CN 201610318055A CN 106187915 A CN106187915 A CN 106187915A
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仝朝龙
崔媛媛
危明松
包如迪
喻红平
徐耀昌
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Shanghai Hansen Biological Medicine Technology Co Ltd
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Shanghai Hansen Biological Medicine Technology Co Ltd
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms

Abstract

本发明公开了具有ALK与EGFR双重活性的抑制剂及其制备方法和应用。其涉及具有式(I)化合物N‑(3‑((4‑((2‑(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶‑2‑基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐。该系列化合物具有抑制表皮生长因子受体(EGFR)L858R EGFR突变体、T790MEGFR突变体和外显子19缺失激活突变体的活性；该系列化合物同时具有ALK抑制活性。因此该系列化合物可以用来治疗单独或部分地由EGFR突变体以及ALK活性介导疾病，如在预防与治疗癌症尤其是非小细胞肺癌药物中的具有广泛应用，有望开发成新一代EGFR或/和ALK抑制剂。

Description

具有ALK与EGFR双重活性的抑制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种具有ALK与EGFR双重活性的抑制剂、其制备方法和应用。
背景技术
EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是跨膜蛋白酪氨酸激酶erbB受体家族的一员。通过与其配体-例如表皮生长因子(EGF)的结合，EGFR在细胞膜上可以形成同源二聚体，或者与家族中其他的受体(比如erbB2，erbB3，或erbB4)形成异源二聚体。这些二聚体的形成，可引起EGFR细胞内关键的酪氨酸残基磷酸化，从而激活细胞内多个下游的信号通路。这些细胞内信号通路在细胞增殖、生存及抗凋亡中起重要作用。EGFR信号传导通路失调，包括配体及受体的表达增高、EGFR基因扩增以及突变等，可促进细胞向恶性转化，并在肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及血管形成中起重要作用。因此，EGFR是抗癌药物开发的合理靶点。
第一代小分子EGFR抑制剂，包括吉非替尼(易瑞沙TM)和厄洛替尼(特罗凯TM)，在肺癌治疗中显示出较好的疗效，已作为一线药物用于治疗伴随EGFR激活突变的非小细胞肺癌NSCLC(New England Journal of Medicine(2008)Vol.358,1160-74，Biochemical andBiophysical Research Communications(2004)Vol.319,1-11)。
相对于野生型(WT)EGFR而言，激活突变型EGFR(包括L858R和外显子19缺失突变delE746_A750)对三磷酸腺苷(ATP)亲和力下降，而对小分子抑制剂的亲和力增加，从而导致肿瘤细胞对第一代EGFR抑制剂例如吉非替尼或厄洛替尼的敏感性增加，达到靶向治疗的目的(Science[2004]第304期，1497-500；New England Journalof medicine[2004]第350期，2129-39)。
然而，经第一代小分子EGFR抑制剂治疗10-12月后，几乎所有的NSCLC患者均产生对此类小分子抑制剂的抗药性。其耐药机制包括EGFR继发突变、旁通路激活等。其中半数患者的耐药是由于EGFR看门基因残基T790M的继发突变，从而降低了药物与靶点的亲和力而产生抗药性，造成肿瘤的复发或病情进展。
鉴于这种突变在肺癌EGFR靶向治疗中产生耐药的重要性和普遍性，多家药物研发公司(辉瑞，BI，AZ等)试图开发第二代小分子EGFR抑制剂，通过抑制EGFR T790M突变株来达到治疗此类耐药的肺癌患者，但均因选择性差而以失败告终。即使afatinib已被FDA批准用于肺癌的治疗，但仅用于伴有EGFR激活突变患者的一线治疗；而对伴有EGFR T790M突变患者，由于afatinib对野生型EGFR具有更强的抑制作用，造成严重的皮肤和胃肠道毒性而限制了给药剂量，没有显示出治疗效果。
因此，有必要开发第三代小分子EGFR抑制剂，能高选择性抑制EGFR T790M突变体，而对野生型EGFR没有或低度活性。由于这一高选择性，可以大大降低因野生型EGFR抑制引起的皮肤和胃肠道的损伤，以达到治疗EGFR T790M继发突变耐药的肿瘤。另外，保留对EGFR激活突变体(包括L858R EGFR、外显子19缺失突变delE746_A750)的抑制活性，也很有意义。由于对野生型EGFR抑制较弱，第三代EGFR抑制剂具有比第一代EGFR抑制剂更好的安全性，有望作为第一线治疗，在治疗伴随EGFR激活突变的NSCLC同时，也可清除初始治疗患者可能存在的少量EGFRT790T突变株，以延缓耐药的发生。
间变性淋巴瘤激酶(ALK)是一种受体酪氨酸蛋白激酶，最早是在间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的一个亚型中被发现的，因此定名为间变性淋巴瘤激酶(anaplasticlymphomakinase，ALK)(Morris,S.W.et al.,Science,1994,263,1281-1284；Shiota,M.et al,Oncogene,1994,9,1567-1574)。ALK蛋白含有1620个氨基酸，分子量为177千道尔顿(kDa),254个氨基酸激酶结构域由1123至1376位氨基酸残基组成，在此之前是一个由氨基酸组成的短跨膜区。在小鼠体内的表达形式提示其在中枢和以及外周神经***的发育中起作用；在果蝇中发现ALK以配体结合的形式促进肠管肌肉组织形成，哺乳动物配体尚未确定；人类视网膜中检测到ALK蛋白质。ALK基因敲除的小鼠生命周期和生命活动未见明显异常(Webb,T.R.et al.,Expert Rev.Anti-cancer Ther.,2009,9,331-356),预示着ALK抑制将不会对机体造成严重的伤害。
2007年两个独立研究小组在非小细胞肺癌中分别鉴定出ALK基因重排。其中一组研究人员开发了逆转录病毒cDNA表达库用于筛选新癌基因。他们转染了提取自一位预先筛选显示KRAS和EGFR突变阴性的62岁日本男性吸烟者肺腺癌的cDNA文库，并设计生成了转基因小鼠，在肺泡细胞中特异性表达EML4-ALK，由此生成了许多肺腺癌结节。使用ALK抑制剂治疗这些转基因小鼠导致肿瘤负荷相比于未治疗的小鼠减小。大部分小鼠很快在1个月内死亡。使用相同ALK抑制剂治疗导致肺脏无EML4-ALK/3T3细胞浸润且生存期延长。此研究有力证实了EML4-ALK是非小细胞肺癌中唯一的驱动突变，并且在体内抑制EML4-ALK活性会导致肺癌负荷减少(Soda,M.,Choi,Y.L.,Enomoto,M.,et al.,Nature，2007：448)。EML4-ALK融合出现在大约3-5％的非小细胞肺癌中，具体因研究的人群和使用的ALK检测方法的不同而有所差别,是非小细胞肺癌中的唯一驱动突变基因。
实验数据表明，抑制ALK基因可以有效阻止ALK呈阳性的淋巴瘤细胞和肺癌细胞的生长，显示出ALK抑制剂在这类肿瘤治疗中具有重要价值(Piva,R.et al.,Blood,2006,107,689-697；Galkin,A.V.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2007,104,270-275；Koivunen,J.P.et al.,Clin.Cancer Res.,2008,14,4275-4238))。
发明内容
发明人在研究过程中发现一类具有式(I)结构N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物具有抑制L858R EGFR突变体、T790MEGFR突变体和外显子19缺失激活突变体的活性，同时该系列化合物也具有ALK抑制活性。因此该系列化合物可以用来治疗单独或部分地由EGFR突变体以及ALK活性介导疾病，例如在预防与治疗癌症尤其是非小细胞肺癌药物中的具有广泛应用。
本发明一方面提供一种具有如下式(I)化合物N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
其中，
R1选自C1-8烷基、C3-8环烷基，任选进一步被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷氧基、C3-8环烷基或C3-8环烷氧基的取代基所取代；
R2选自氢、氘、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、C1-8烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C(O)R5、C(O)OR5或P(O)R6R7；
R3选自如下结构：
R4选自氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷氧基、卤取代C1-8烷氧基、苯基或对甲基苯基；
R5、R6、R7各自独立的选自C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、氨基或二C1-8烷基氨基。
作为优选的方案，所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，C1-8烷基选自C1-6烷基，优选C1-3烷基；卤取代C1-8烷基选自卤取代C1-6烷基，优选卤取代C1-3烷基；C1-8烷氧基选自C1-6烷氧基，优选C1-3烷氧基；卤取代C1-8烷氧基选自卤取代C1-6烷氧基，优选卤取代C1-3烷氧基；C3-8环烷基选自C3-6环烷基。
作为进一步优选的方案，所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R3选自：R1、R2、R4、R5、R6、R7如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自C1-4烷基、C3-6环烷基，任选进一步被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷氧基、C3-8环烷基或C3-8环烷氧基的取代基所取代；R2、R3、R4、R5、R6、R7如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R1选自甲基、乙基、异丙基、三氟甲基、二氟甲基；R2、R3、R4、R5、R6、R7如式(I)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R2选自氢、氟、氯、氰基、C1-3烷氧基、三氟甲基或三氟甲氧基。
作为更进一步优选的方案，所述的的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，R4选自氢、氟、氯、C1-3烷基、C1-3烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基或二氟甲氧基。
作为最优选的方案，所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自如下化合物：
本发明另一方面提供了前述N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，包括如下步骤：
其中，X1、X2选自氟、氯、溴或碘；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如式(I)化合物所定义。
本发明再一方面提供一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的前述N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
本发明再一方面提供了一种前述N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或前述药物组合物在制备用于治疗对EGFR突变体、外显子19缺失激活突变体活性介及ALK导疾病的治疗药物中的应用。
作为进一步优选的方案，前述N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或前述药物组合物在制备用于治疗单独或部分地由EGFR突变体活性以及ALK介导疾病的治疗药物中的应用。
作为更进一步优选的方案，所述EFGR突变体选自L858R EGFR突变体或T790MEGFR突变体。
作为更进一步优选的方案，前述N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或前述药物组合物在制备用于治疗癌症药物中的应用。
作为更进一步优选的方案，所述癌症选自卵巢癌、***、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤,黑色素瘤、***癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤、黑色素瘤或间皮瘤；优选自非小细胞肺癌。
具体实施方式
详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“C1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体等。
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C3-8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，例如：
单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。
多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：
“稠环烷基”指***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，稠环烷基的非限制性实施例包含：
“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。
“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。“C1-8烷氧基”指含1-8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
“环烷氧基”指和-O-(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。“C3-8环烷氧基”指含3-8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“卤取代的C1-8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“C(O)R5”指R5取代的羰基。
“P(O)R6R7”指R6、R7取代的磷酰基，R6、R7任选相同或不同的取代基。
“二C1-8烷基氨基”指两个C1-8烷基取代的氨基基团。
“THF”指四氢呋喃。
“DCM”指二氯甲烷。
“DMF”指N、N-二甲基甲酰胺。
“DIPEA”指二异丙基乙胺。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂。
实施例化合物的制备
实施例一：N-(5-((4-((5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：4-氯-2-(异丙基硫代)苯胺的制备
将5-氯-2-氨基苯硫酚(500mg,3.13mmol),碳酸钾(973mg,7.04mmol)置于50mL圆底瓶中,加入15ml DMF，在搅拌下加入异丙基溴(0.5mL),将混合物在室温下搅拌过夜，加入50毫升水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸出溶剂，残留物经硅胶柱层析得到浅黄色油状粘稠液体(0.520g)。
第二步：4-氯-2-(异丙基磺酰)苯胺的制备
将4-氯-2-(异丙基硫代)苯胺(520mg,3.33mmol)和间氯过氧苯甲酸(mCPBA)(85％,1.33g)置于100mL圆底瓶中,加入15ml二氯甲烷，将混合物在室温下搅拌5小时，加入10毫升饱和亚硫酸钠溶液搅拌10分钟，加入20毫升饱和碳酸氢钠溶液搅拌10分钟，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸出溶剂，残留物再经柱层析得产物4-氯-2-(异丙基磺酰)苯胺(320mg)。
第三步：2-氯-N-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的制备
将4-氯-2-(异丙基磺酰)苯胺(710mg,3.04mmol)溶于无水DMF中，0℃下，加入氢化钠(243mg,6.08mmol)，在0℃下搅拌半小时，将此混悬物滴加到溶有2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(988mg,4.56mmol)的5毫升DMF溶液中，缓慢升至室温，搅拌过夜。加水淬灭反应，蒸除溶剂，残留物经反相柱层析分离纯化(水：乙腈＝40:60)得浅黄色固体(200mg)。
LC-MS：tR＝3.18min，414.1([M+H]+)。
第四步：N-4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2-氯-N-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(200mg,0.483mmol)与4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(135mg,0.724mmol)溶于1,4-二氧六环(15ml)中，加入对甲苯磺酸(166mg,0.966mmol)，加热至140℃反应三小时，冷却至室温，蒸除溶剂，剩余物经反相柱层析分离纯化得N-4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(150mg)。
LC-MS：tR＝3.24min，564.1([M+H]+)。
第五步：N-4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将N-4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(150mg)溶于DMF(5ml)中，加入0.2mL三甲基乙二胺，加热至125℃反应2小时，蒸除溶剂，得粗产品(120mg)。
第六步：N-4-(4-((5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-N1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
将上一步反应得到的粗产品(120mg)溶于乙醇中，加入氯化铵(100mg)，铁粉(80mg)，加热回流反应2小时，反应完毕，冷却至室温，过滤，收集滤液，蒸除滤液溶剂，加大量水稀释剩余物，异丙醇-二氯甲烷混合溶剂(1:3)萃取水相三次，合并有机相，蒸除有机相溶剂，得粗产品(60mg)。
LC-MS：tR＝2.48min，616.3([M+H]+)。
第七步：N-(5-((4-((5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将上一步反应得到的粗产品(60mg,0.097mmol)溶于5毫升无水四氢呋喃中，0℃下，氮气保护，加入0.1mL二异丙基乙基胺，1M丙烯酰氯四氢呋喃溶液(0.15mL)缓慢滴加入上述溶液中，0℃下反应半小时，加入2毫升饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，蒸除四氢呋喃，剩余物经反相柱层析分离纯化得最终产品(25.6mg)。
LC-MS：tR＝2.50min，670.3([M+H]+)；
1HNMR(CD3OD，
400MHz)δ:8.47(s,1H),8.27(br,1H),8.09(s,1H),7.85(d,1H),7.35(d,1H),6.98(s,1H),6.56(m,1H),6.33(m,1H),5.83(d,1H),3.96(s,3H),3.46(m,2H),3.37(m,1H),3.31(m,2H),2.91(s,6H),2.70(s,3H),1.29(d,6H)；
F-NMR:-62.49。
实施例二：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：异丙基(2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)硫烷的制备
取100mL单口瓶，加入1-氟-2-硝基-4-(三氟甲基)苯(1g)和15mL DMF，碳酸钾(3.3g)和异丙硫醇(0.72g)分别加入上述溶液中，50℃搅拌3小时，冷却至0℃，加入2mlNaOH(1M)水溶液，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩，得到白色固体(2.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,1H),3.62(dt,J＝13.3,6.7Hz,1H),3.62(dt,J＝13.3,6.7Hz,1H),1.44(d,J＝6.7Hz,6H)。
第二步：1-(异丙基磺酰)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯的制备
取50mL单口瓶，依次加入异丙基(2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)硫烷(2,5g)，间氯过氧苯甲酸(4g)，50ml二氯甲烷，该混合物在室温下搅拌5小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，浓缩得到白色固体(2g)。
第三步：1-(异丙基磺酰)-2-氨基-4-(三氟甲基)苯的制备
取100mL单口瓶，依次加入1-(异丙基磺酰)-2-硝基-4-(三氟甲基)苯(900mg)，铁粉(1.7g)，氯化铵(3.27g)，50ml乙醇和2ml水。在70℃搅拌1小时，过滤，滤液浓缩，乙酸乙酯萃取，得到黄色固体(840mg)。
第四步：2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的制备
将1-(异丙基磺酰)-2-氨基-4-(三氟甲基)苯(800mg,2.993mmol)溶于无水DMF(10mL)中，在冰浴下分批加入NaH(359mg,8.979mmol)，搅拌20分钟后，将所得混悬液加入2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(714mg,3.292mmol)的DMF(5mL)中，反应在冰浴下搅拌2小时，LCMS显示反应完全。反应液用饱和NH4Cl(3mL)淬灭，浓缩干后，用二氯甲烷(20mL),水(20mL)分层，有机相干燥过滤浓缩，剩余物通过快速柱层析得到2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(130mg,9.7％)。
第五步：N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(130mg,0.29mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(54mg,0.29mmol),对甲苯磺酸(55mg,0.29mmol)溶于2-戊醇(10mL)。反应加热至120℃，搅拌3小时，LCMS显示反应完全，反应液浓缩，剩余物加入水(10mL),甲醇(5mL)，混合物搅拌10分钟后，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚洗后得到粗品(170mg)。
第六步：N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将上一步反应得到的粗产品(170mg,0.285mmol),三乙胺(86mg,0.854mmol),N,N,N-三甲基乙二胺(87mg,0.854mmol)溶于DMF(5mL)中，反应加热至120℃搅拌1小时，LCMS显示反应，反应浓缩干，剩余物通过快速柱层析得到N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(110mg,57％)。
第七步：N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
把N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(110mg,0.162mmol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(20mg)。反应在氢气下搅拌10min，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液旋干，剩余物通过反相柱纯化得到N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(80mg,76.2％)。
第八步：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(80mg,0.123mmol)，三乙胺(37mg,0.369mmol)溶于四氢呋喃(30mL),反应液冷却至-30℃。氮气保护下，缓慢加入丙烯酰氯(0.37mL,1.0M in THF)。反应在-30℃下搅拌30分钟，反应结束,加入甲醇(5mL)继续搅拌10分钟，反应液浓缩干，剩余物先经过制备板分离后再经反相柱纯化，得到最终产品(35mg,40.4％)。
m/z:704.5；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.51(s,2H),8.20(s,1H),8.08(d,J＝8.2Hz,1H),7.65(d,J＝7.9Hz,1H),6.96(s,1H),6.57(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.28(d,J＝17.1Hz,1H),5.80(d,J＝11.2Hz,1H),3.94(s,3H),3.49(dd,J＝11.6,4.9Hz,1H),3.43(t,J＝7.7Hz,2H),3.29(t,J＝5.7Hz,2H),2.88(s,6H),2.67(s,3H),1.34(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例三：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：1-(异丙基磺酰)-4-甲基-2-硝基苯的制备
将2-氟-5甲基硝基苯(3.0g,19.355mmol)溶于DMF(50mL)中，加入异丙硫醇(2.95g,38.71mmol)和碳酸钾(8.01g,58.065mmol)。反应60度搅拌2小时，LCMS显示反应完全。反应液溶于二氯甲烷，水洗，饱和氯化钠洗，有机相干燥过滤，浓缩，残留物溶于DCM(100mL)中，分批加入间氯过氧苯甲酸(8.35g,48.387mmol)。搅拌16小时，LCMS显示反应完全，反应液饱和亚硫酸钠(20mL)淬灭，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(3X15mL)洗，有机相干燥过滤，浓缩，剩余物通过快速硅胶柱纯化得到1-(异丙基磺酰)-4-甲基-2-硝基苯(4.2g,91.3％)。
第二步：2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯胺的制备
将1-(异丙基磺酰)-4-甲基-2-硝基苯(4.2g,17.263mmol)，氯化铵(9.236g，172.6mmol)溶于乙醇(90mL),水(30mL),加入还原铁粉(9.667g,172.6mmol),加热回流3小时，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液浓缩，剩余物水相用DCM(3X10mL)萃取，有机相干燥过滤，浓缩，通过快速硅胶柱纯化得到2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯胺(3g,81.5％)。
第三步：2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的制备
将2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯胺(875mg,4.102mmol)溶于无水DMF(15mL)中，在冰浴下分批加入NaH(492mg,12.307mmol)，搅拌20分钟后，将所得混悬液加入2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(979mg,4.512mmol)的DMF(10mL)中，反应在冰浴下搅拌2小时，LCMS显示反应完全。反应液用饱和NH4Cl(3mL)淬灭，浓缩干后，用二氯甲烷(20mL),水(20mL)分层，有机相干燥过滤浓缩，剩余物通过快速柱层析得到2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(211mg,13.1％)。
第四步：N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(211mg,0.536mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(99.7mg,0.536mmol),对甲苯磺酸(102mg,0.536mmol)溶于2-戊醇(10mL)。反应加热至120℃，搅拌3小时，LCMS显示反应完全，反应液浓缩，剩余物加入水(10mL),甲醇(5mL)，混合物搅拌10分钟后，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚洗后得到粗品(291mg)。
第五步：N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将上一步反应得到的粗品(291mg,0.535mmol),三乙胺(163mg,1.606mmol),N,N,N-三甲基乙二胺(164mg,1.606mmol)溶于DMF(5mL)中，反应加热至120℃搅拌1小时，LCMS显示反应，反应浓缩干，剩余物通过快速柱层析得到N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(78mg,23.3％)。
第六步：N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
把N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(78mg,0.125mmol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(20mg)。反应在氢气下搅拌10min，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液旋干，剩余物通过反相柱纯化得到N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(65mg,87.8％)。
第七步：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(65mg,0.109mmol)，三乙胺(33mg,0.327mmol)溶于四氢呋喃(30mL),反应液冷却至-30℃。氮气保护下，缓慢加入丙烯酰氯(0.33mL,1M in THF)。反应在-30℃下搅拌30分钟，反应结束,加入甲醇(5mL)继续搅拌10分钟，反应液浓缩干，剩余物先经过制备板分离后在经反相过柱纯化，得到最终产品(5mg,7.04％)。
m/z:650.5；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.44(s,1H),7.92(d,J＝16.2Hz,2H),7.78(d,J＝8.1Hz,1H),7.21(d,J＝7.9Hz,1H),6.95(s,1H),6.46(ddd,J＝18.8,16.9,5.9Hz,2H),5.89(dd,J＝9.9,1.9Hz,1H),3.96(s,3H),3.45(t,J＝5.7Hz,2H),3.34–3.32(m,4H),3.28(dd,J＝11.1,5.2Hz,2H),2.87(s,6H),2.69(s,3H),2.35(s,3H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例四：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：1-(异丙基磺酰)-4-甲氧基-2-硝基苯的制备
将异丙基(4-甲氧基-2-硝基苯基)硫烷(2.0g,8.8mmol)溶于DCM(20mL)中，分批加入间氯过氧苯甲酸(3.8g,22.0mmol)。搅拌16小时，LCMS显示反应完全，反应液饱和亚硫酸钠(20mL)淬灭，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(3X15mL)洗，有机相干燥过滤，浓缩，剩余物通过快速硅胶柱纯化得到黄色固体(1.8g,78％)。
第二步：1-(异丙基磺酰)-4-甲氧基-2-苯胺的制备
将1-(异丙基磺酰)-4-甲氧基-2-硝基苯(1.8g,6.94mmol)，氯化铵(3.8g，69.4mmol)溶于甲醇(10mL),THF(10mL),水(10),加入还原铁粉(3.7g,69.4mmol),加热回流3小时，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液浓缩去除甲醇以及THF，剩余物水相用DCM(3X10mL)萃取，有机相干燥过滤，浓缩，通过快速硅胶柱纯化得到浅黄色固体(1.5g,85％)。
第三步：2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺的制备
将1-(异丙基磺酰)-4-甲氧基-2-苯胺(400mg,1.74mmol)溶于无水DMF(10mL)中，在冰浴下分批加入NaH(140mg,3.48mmol)，搅拌20分钟后，将所得混悬液加入2,4-二氯-5-甲基嘧啶(570mg,2.62mmol)的DMF(10mL)中，反应在冰浴下搅拌2小时，LCMS显示反应完全。反应液用饱和NH4Cl(3mL)淬灭，浓缩干后，用二氯甲烷(20mL),水(20mL)，有机相干燥过滤浓缩，剩余物通过快速柱层析得到2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(400mg,55％)。
第四步：N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2-氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(300mg,0.73mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(162mg,0.88mmol),对甲苯磺酸(210mg,1.1mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)。反应加热至110℃，搅拌16小时，LCMS显示反应完全，反应液浓缩，剩余物加入水(10mL),甲醇(5mL)，混合物搅拌10分钟后，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚洗后得到粗产物(400mg)。
第五步：N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(400mg,0.71mmol),三乙胺(0.5mL),N,N,N-三甲基乙二胺(150mg,1.42mmol)溶于DMF(10mL)中，反应加热至110℃搅拌2小时，LCMS显示反应，反应浓缩干，剩余物用二氯甲烷(20mL)，水(20mL)分层，将不溶物过滤，有机相干燥，过滤，浓缩，剩余物通过快速柱层析得到黄色固体(200mg,50％)。
第六步：N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
把N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2,4-二胺(200mg,0.31mmol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(20mg)。反应在氢气下搅拌10min，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液旋干，剩余物通过反相柱纯化得到N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(150mg,75％)。
第七步：N-(2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-N-4-(4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(150mg,0.24mmol)，三乙胺(0.3mL)溶于四氢呋喃(20mL),反应液冷却至-10至-5℃。氮气保护下，缓慢加入丙烯酰氯(0.36mL,1M in THF)。反应在-10至-5℃下搅拌30分钟，反应结束,加入甲醇(3mL)继续搅拌10分钟，反应液浓缩干，剩余物先经过制备板分离后再经反相柱纯化，得到最终产品(15mg,10％)。
m/z:666.3；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.46(s,1H),8.03(s,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,1H),7.74(s,1H),6.96(s,1H),6.90(dd,J＝8.9,2.1Hz,1H),6.63–6.29(m,2H),5.87(dd,J＝9.9,1.8Hz,1H),3.96(s,3H),3.73(s,3H),3.47(t,J＝5.6Hz,2H),3.28(t,J＝6.4Hz,3H),2.88(s,6H),2.70(s,3H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例五：N-(5-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)嘧啶-4-胺的制备
将1-(异丙基磺酰)-4-甲氧基-2-苯胺(350mg,1.52mmol)溶于无水DMF(10mL)中，在冰浴下分批加入NaH(120mg,3.0mmol)，搅拌20分钟后，将所得混悬液加入2,4-二氯-5-甲基嘧啶(420mg,2.28mmol)的DMF(10mL)中，反应在冰浴下搅拌2小时，LCMS显示反应完全。反应液用饱和NH4Cl(3mL)淬灭，浓缩干后，用二氯甲烷(20mL),水(20mL)，有机相干燥过滤浓缩，剩余物通过快速柱层析得到产品(300mg,52％)。
第二步：5-氯-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)嘧啶-4-胺(300mg,0.79mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(180mg,0.96mmol),对甲苯磺酸(225mg,1.2mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)。反应加热至120℃，搅拌16小时，LCMS显示反应完全，反应液浓缩，剩余物加入水(10mL),甲醇(5mL)，混合物搅拌10分钟后，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚洗后得到粗品(400mg)。
第三步：5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将5-氯-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)嘧啶-2,4-二胺(400mg,0.70mmol),三乙胺(1mL),N,N,N-三甲基乙二胺(140mg,1.4mmol)溶于DMF(10mL)中，反应加热至110℃搅拌2小时，LCMS显示反应，反应浓缩干，剩余物用二氯甲烷(20mL)，水(20mL)分层，将不溶物过滤，有机相干燥，过滤，浓缩，剩余物通过快速柱层析得到产品(150mg,34％)。
第四步：N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
把5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)嘧啶-2,4-二胺(100mg,0.16mmol)溶于甲醇(5mL)，加入Pd/C(20mg)。反应在氢气下搅拌10min，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液旋干，剩余物通过反相柱纯化得到产品(80mg,80％)。
第五步：N-(5-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲氧苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N1-甲基苯-1,2,4-三胺(80mg,0.12mmol)，三乙胺(0.5mL)溶于四氢呋喃(20mL),反应液冷却至-10至-5℃。氮气保护下，缓慢加入丙烯酰氯(0.3mL,1M inTHF)。反应在-10至-5℃下搅拌30分钟，反应结束,加入甲醇(3mL)继续搅拌10分钟，反应液浓缩干，剩余物先经过制备板分离后在经反相过柱纯化，得到最终产品(15mg,15％)。
m/z:632.2；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.11(s,1H),7.95(s,1H),7.85(s,1H),7.70(d,J＝8.9Hz,1H),6.85(s,1H),6.79(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.41(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.27(dd,J＝16.9,1.8Hz,1H),5.73(dd,J＝10.1,1.8Hz,1H),3.84(s,3H),3.67(s,3H),3.35(t,J＝5.8Hz,2H),3.22–3.13(m,3H),2.77(s,6H),2.59(s,3H),1.16(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例六：N-(5-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-4-胺的制备
取50mL单口瓶，依次加入1-(异丙基磺酰)-2-氨基-4-(三氟甲基)苯(270mg)，2,4,5-三氯嘧啶(220mg)，氢化钠(36mg)，DMF(15mL)。在0℃零度下反应一个小时，加入100毫升水到反应液中，二氯甲烷萃取，硅胶柱层析(20％EA/PE)，得到白色固体(380mg)。
第二步：5-氯-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
取100mL单口瓶，加入2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-4-胺(380mg)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(170mg)和对甲基苯磺酸(158mg)，溶于2-戊醇(20mL)，在120℃反应3小时。冷却后加入NaHCO3水溶液，搅拌30分钟，过滤，收集固体得到黄色固体(400mg)。
第三步：5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
取100mL单口瓶，分别加入5-氯-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(400mg)，N,N,N,-3-甲基乙基-二胺(108mg)，DIPEA(183mg)和5ml DMF，在100℃反应1小时，浓缩,二氯甲烷萃取，得到粗产品(400mg)。
第四步：N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N-1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
取100mL单口瓶，分别加入5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(400mg)，铁粉(347mg)，氯化铵(670mg)和20mL乙醇和7mL水。在70℃反应3小时，100mL乙醇加入反应液，过滤，浓缩，用二氯甲烷萃取，得到粗产品(380mg)。
第五步：N-(5-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
取100mL单口瓶，加入N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N-1-甲基苯-1,2,4-三胺(380mg)，DIPEA(221mg)和100mL THF，冷却至-10℃，然后滴加0.5ml丙烯酰氯(1M四氢呋喃溶液)，继续搅拌2小时，甲醇淬灭，浓缩，残留物竟反相柱层析得到最终产品(180mg)。
m/z:670.2；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.60(s,1H),8.27(s,1H),8.19–8.00(m,2H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),6.96(s,1H),6.68–6.49(m,1H),6.25(d,J＝16.8Hz,1H),5.76(d,J＝10.2Hz,1H),3.90(s,3H),3.51–3.27(m,5H),2.87(s,6H),2.67(s,3H),1.31(d,J＝6.7Hz,6H)。
实施例七：N-(5-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-氯-苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：2-氯-N-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-5-氯嘧啶-4-胺的制备
将4-氯-2-(异丙基磺酰)苯胺(700mg,3.00mmol)溶于无水DMF中，0℃下，加入氢化钠(243mg,6.08mmol)，搅拌半小时，0℃下，将此混悬物滴加到溶有2,4,5-三氯嘧啶(600mg,3.29mmol)中，缓慢升至室温，搅拌过夜。加水淬灭反应，蒸除溶剂，剩余物经反相柱层析分离纯化(水：乙腈＝40:60)得产物(600mg)。
LC-MS：tR＝3.18min，380.0([M+H]+)。
第二步：5-氯-N-4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2-氯-N-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-5-氯嘧啶-4-胺(600mg,1.58mmol)与4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(350mg,1.89mmol)溶于2-戊醇中，加入对甲苯磺酸(410mg,2.36mmol)，加热至140℃反应三小时，冷却至室温，蒸除溶剂，剩余物反相柱层析分离纯化得产物(400mg)。
LC-MS：tR＝3.24min，530.0([M+H]+)。
第三步：5-氯-N4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将5-氯-N-4-(5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)嘧啶-2,4-二胺(400mg)溶于DMF中，加入0.5mL三甲基乙二胺，加热至125℃反应，2小时后，反应完毕。蒸除溶剂，得粗产品，不经纯化直接用于下步反应。
LC-MS：tR＝2.54min，612.1([M+H]+)。
第四步：N-4-(5-氯-4-((5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N-1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
将上一步反应得到的粗品(300mg)溶于乙醇中，加入氯化铵(300mg)，铁粉(200mg)，加热回流反应2小时，反应完毕。冷却至室温，过滤，收集滤液，蒸除溶剂，加大量水稀释剩余物，异丙醇-二氯甲烷混合溶剂(1:3)萃取水相三次，合并有机相，蒸除有机相溶剂，得粗产品(150mg)，不经纯化直接投入下一步。
LC-MS：tR＝2.37min，582.1([M+H]+)。
第五步：N-(5-((5-氯-4-((5-氯-2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将上一步反应得到的粗品(150mg,0.26mmol)溶于无水四氢呋喃中，0℃下，氮气保护，加入0.3mL二异丙基乙基胺，1M丙烯酰氯四氢呋喃溶液(0.4mL)缓慢滴加入上述溶液中，0℃下反应半小时，蒸除四氢呋喃，剩余物反相柱层析分离纯化得最终产品(52mg)。
LC-MS：tR＝2.38min，636.1([M+H]+)；
1HNMR(400MHz,CD3OD)δ：
8.45(s,1H),8.26(br,1H),8.09(s,1H),7.86(d,1H),7.37(dd,1H),7.00(s,1H),6.60(m,1H),6.32(d,1H),5.79(d,1H),3.95(s,3H),3.46(m,2H),3.39(m,1H),3.33(m,2H),2.89(s,6H),2.71(s,3H),1.29(d,6H)。
实施例八：N-(5-((5-甲基-4-((2-(异丙基磺酰)-5-氯-苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
第一步：2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-4-胺的制备
将2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯胺(800mg,3.751mmol)溶于无水DMF(15mL)中，在冰浴下分批加入NaH(450mg,11.252mmol)，搅拌20分钟后，将所得混悬液加入2,4,5-三氯嘧啶(757mg,4.126mmol)的DMF(5mL)中，反应在冰浴下搅拌1小时，LCMS显示反应完全。反应液用饱和NH4Cl(3mL)淬灭，浓缩干后，用二氯甲烷(20mL),水(20mL)分层，有机相干燥过滤浓缩，剩余物通过快速柱层析得到2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-4-胺(470mg,34.8％)。
第二步：5-氯-N-2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将2,5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-4-胺(470mg,1.309mmol),4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(243mg,1.309mmol),对甲苯磺酸(243mg,1.309mmol)溶于2-戊醇(10mL)。反应加热至120℃，搅拌3小时，LCMS显示反应完全，反应液浓缩，剩余物加入水(10mL),甲醇(5mL)，混合物搅拌10分钟后，过滤，滤饼用甲基叔丁基醚洗后得到粗品(530mg)。
第三步：5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-2,4-二胺的制备
将上一步反应得到的粗品(530mg,1.039mmol),三乙胺(317mg,3.118mmol),N,N,N-三甲基乙二胺(318mg,3.118mmol)溶于DMF(10mL)中，反应加热至120℃搅拌1小时，LCMS显示反应，反应浓缩干，剩余物通过快速柱层析得到5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-2,4-二胺(365mg,59.3％)。
第四步：N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N-1-甲基苯-1,2,4-三胺的制备
把5-氯-N-2-(4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-N-4-(2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)嘧啶-2,4-二胺(365mg,0.616mmol)溶于甲醇(20mL)，加入Pd/C(40mg)。反应在氢气下搅拌10min，LCMS显示反应完全，反应液过滤，滤液旋干，剩余物通过反相柱纯化得到N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N-1-甲基苯-1,2,4-三胺(150mg,43.4％)。
第五步：N-(5-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧苯基)丙烯酰基酰胺的制备
将N-4-(5-氯-4-((2-(异丙基磺酰)-5-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)-N-1-(2-(二甲氨基)乙基)-5-甲氧基-N-1-甲基苯-1,2,4-三胺(150mg,0.267mmol)，三乙胺(81mg,0.801mmol)溶于四氢呋喃(50mL),反应液冷却至-30℃。氮气保护下，缓慢加入丙烯酰氯(0.8mL,1M in THF)。反应在-30℃下搅拌30分钟，反应结束,加入甲醇(10mL)继续搅拌10分钟，反应液浓缩干，剩余物先经过制备板分离后再经反相过柱纯化得到最终产品(24mg,14.6％)。
m/z:617.1；
1H NMR(400MHz,MeOD)δ：8.23(s,1H),8.10(s,1H),7.93(s,1H),7.80(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(d,J＝7.9Hz,1H),6.99(s,1H),6.59(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.38(dd,J＝16.9,1.6Hz,1H),5.85(dd,J＝10.2,1.6Hz,1H),3.94(s,3H),3.46(t,J＝5.8Hz,2H),3.37(dd,J＝13.6,6.8Hz,1H),3.33–3.29(m,2H),2.88(s,6H),2.70(s,3H),2.37(s,3H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H)。
生物学测试评价(一)
1.EGFR T790M突变型酶学实验
本实验采用荧光共振能量转移(TR-FRET)的方法测试化合物对外显子20T790M突变型EGFR酶的抑制作用，并得出化合物对该酶活性的半数抑制浓度IC50。
1)在384孔板中加入1～5ul EGFR T790M酶溶液，酶终浓度为0.1～1nM。
2)加入1～5ul梯度稀释好的化合物溶液。
3)室温孵育10分钟。
4)加入1～5ul底物混合液包含底物多肽终浓度5～50nM和ATP终浓度1～10uM。
5)室温孵育0.5～2小时。
6)加入5ul EDTA终止液终止反应5分钟。
7)加入5ul含标记抗体的检测液，室温孵育1小时。
8)酶标仪测定各板的665nm荧光信号值。
9)通过荧光信号值计算抑制率。
10)根据不同浓度的抑制率通过曲线拟合得出化合物的IC50。
2.EGFR野生型(WT)酶学实验
本实验采用荧光共振能量转移(TR-FRET)的方法测试化合物对野生型EGFR酶的抑制作用，并得出化合物对该酶活性的半数抑制浓度IC50。
1)在384孔板中加入1～5ul EGFR野生型酶溶液，酶终浓度为0.1～1nM。
2)加入1～5ul梯度稀释好的化合物溶液。
3)室温孵育10分钟。
4)加入1～5ul底物混合液包含底物多肽终浓度5～50nM和ATP终浓度0.1～5uM。
5)室温孵育0.5～2小时。
6)加入5ul EDTA终止液终止反应5分钟。
7)加入5ul含标记抗体的检测液，室温孵育1小时。
8)酶标仪测定各板的665nm荧光信号值。
9)通过荧光信号值计算抑制率。
10)根据不同浓度的抑制率通过曲线拟合得出化合物的IC50。
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
结论：本发明实施例对EGFR突变型激酶具有很强的抑制活性，同时对野生型激酶具有较弱的抑制活性，显示出很好的选择性；而参照化合物crizotinib和LDK378对EGFR突变型激酶基本没有抑制活性。
3.NCI-H1975细胞增殖抑制实验
本实验采用CellTiter-Glo的方法测试化合物对NCI-H1975细胞增殖的抑制作用，并得出化合物抑制细胞增殖活性的半数抑制浓度IC50。
1)在96孔细胞培养板中接种90μL的H1975细胞悬液，密度为1～5*103细胞/ml，将培养板于培养箱培养16～24小时(37℃，5％CO2)。
2)向培养板细胞中加入梯度稀释的不同浓度的待测化合物溶液，将培养板在培养箱孵育72小时(37℃，5％CO2)。
3)每孔加入50～100μL CellTiter-Glo试剂，并振荡10分钟，室温静置10分钟。
4)酶标仪测定各板的化学发光信号值。
5)通过化学发光信号值计算抑制率。
6)根据不同浓度的抑制率通过曲线拟合得出化合物的IC50。
4.A431细胞增殖抑制实验
本实验采用CellTiter-Glo的方法测试化合物对A431细胞增殖的抑制作用，并得出化合物抑制细胞增殖活性的半数抑制浓度IC50。
1)在96孔细胞培养板中接种90μL的A431细胞悬液，密度为1～5*103细胞/ml，将培养板于培养箱培养16～24小时(37℃，5％CO2)。
2)向培养板细胞中加入梯度稀释的不同浓度的待测化合物溶液，将培养板在培养箱孵育72小时(37℃，5％CO2)。
3)每孔加入50～100μL CellTiter-Glo试剂，并振荡10分钟，室温静置10分钟。
4)酶标仪测定各板的化学发光信号值。
5)通过化学发光信号值计算抑制率。
6)根据不同浓度的抑制率通过曲线拟合得出化合物的IC50。
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
结论：本发明实施例对EGFR突变型细胞H1975的增殖具有很强的抑制活性，而对野生型A431细胞的增殖具有较低的抑制，实施例对野生型/突变型细胞具有很好的选择性；而参照化合物crizotinib和LDK378对EGFR突变型细胞H1975的增殖基本没有抑制活性。
生物学测试评价(二)
实验例1、ALK基因融合细胞增殖抑制测试
下面的体外试验可用来测定本发明化合物对于ALK基因融合高表达的人淋巴瘤细胞Karpas 299的增殖抑制活性。
以下所述的体外细胞试验可测定受试化合物的对人淋巴瘤细胞Karpas 299的增殖抑制活性，其活性可用IC50值来表示。此类试验的一般方案如下：首先选择人淋巴瘤细胞Karpas 299，以适宜的细胞浓度(e.g.6000个细胞/well100uL medium)接种在96孔培养板上，随后向各孔加入用培养基稀释的一系列梯度浓度(一般6到10个浓度)的受试化合物溶液，连续培养72个小时。72小时后，可用CellTiter-Luminescent Cell ViabilityAssay kit(购于Promega)。方法测定化合物抑制细胞增殖的活性。IC50值可通过测定一系列不同浓度下，受试化合物对细胞增殖的抑制数值进行计算。
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
化合物 IC50(nM)
Crizotinib 38.5
LDK378 32
实施例一 24
实施例二 290
实施例三 99
实施例四 530
实施例五 360
实施例六 230
实施例七 20
实施例八 74
结论：本发明实施例化合物与参照化合物Crizotinib和LDK378一样对Karpas 299细胞均有明显地增殖抑制活性；尤其是实施例一和实施例七化合物的抑制活性具有很大的提高。
实验例2、ALK激酶抑制测试
下面的体外试验可用来测定本发明化合物对于ALK激酶及产生变异的ALKL1196M激酶抑制活性，其活性可用IC50值来表示。化合物的半数抑制浓度IC50(将一定浓度的酶活性抑制至50％时所需的化合物浓度)是通过将一定量的激酶与特定的底物及不同浓度的待测化合物混合反应后测定计算出的。本实验所用的ALK激酶为人源重组蛋白，该酶在含有50mM HEPES(pH7.5)，10mM MgCl2，2M DTT(1000x)的缓冲溶液及30μM ATP的反应体系中与多肽底物以及不同浓度的受试化合物共同进行反应(25℃，45min)，随后FAM标记抗体对底物进行标记，最后以时间分辨荧光方式对ALK激酶活性进行定量测定。
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见下表。
结论：本发明实施例化合物与参照化合物Crizotinib和LDK378一样对ALK及ALKL1196M激酶活性均有明显地抑制作用。

Claims (15)

1.式(I)所示N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
其中，
R1选自C1-8烷基、C3-8环烷基，任选进一步被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷氧基、C3-8环烷基或C3-8环烷氧基的取代基所取代；
R2选自氢、氘、氟、氯、溴、碘、氰基、硝基、C1-8烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、C(O)R5、C(O)OR5或P(O)R6R7；
R3选自如下结构：
R4选自氢、氟、氯、溴、碘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、C3-8环烷氧基、卤取代C1-8烷氧基、苯基或对甲基苯基；
R5、R6、R7各自独立的选自C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C1-8烷氧基、氨基或二C1-8烷基氨基。
2.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，C1-8烷基选自C1-6烷基，优选C1-3烷基；卤取代C1-8烷基选自卤取代C1-6烷基，优选卤取代C1-3烷基；C1-8烷氧基选自C1-6烷氧基，优选C1-3烷氧基；卤取代C1-8烷氧基选自卤取代C1-6烷氧基，优选卤取代C1-3烷氧基；C3-8环烷基选自C3-6环烷基。
3.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R3选自：R1、R2、R4、R5、R6、R7如权利要求1所定义。
4.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1选自C1-4烷基、C3-6环烷基，任选进一步被一个或多个选自氟、氯、溴、碘、羟基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤取代C1-8烷氧基、C3-8环烷基或C3-8环烷氧基的取代基所取代；R2、R3、R4、R5、R6、R7如权利要求1所定义。
5.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R1选自甲基、乙基、异丙基、三氟甲基、二氟甲基；R2、R3、R4、R5、R6、R7如权利要求1所定义。
6.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R2选自氢、氟、氯、氰基、C1-3烷氧基、三氟甲基或三氟甲氧基。
7.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，R4选自氢、氟、氯、C1-3烷基、C1-3烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基或二氟甲氧基。
8.根据权利要求1所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其特征在于，选自如下化合物：
9.根据权利要求1-8任一项所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐的制备方法，包括如下步骤：
其中，X1、X2选自氟、氯、溴或碘；R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7如权利要求1所定义。
10.一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的根据权利要求1-8任一项所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
11.根据权利要求1-8任一项所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗对EGFR突变体、外显子19缺失激活突变体活性介或ALK导疾病的治疗药物中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，根据权利要求1-8任一项所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗单独或部分地由EGFR突变体活性或及ALK介导疾病的治疗药物中的应用。
13.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述EFGR突变体选自L858R EGFR突变体或T790MEGFR突变体。
14.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，根据权利要求1-8任一项所述的N-(3-((4-((2-(异丙基磺酰)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰基酰胺类似物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或权利要求10所述的药物组合物在制备用于治疗癌症药物中的应用。
15.根据权利要求11所述的应用，其特征在于，所述癌症选自卵巢癌、***、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤,黑色素瘤、***癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤、黑色素瘤或间皮瘤；优选非小细胞肺癌。
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