CN105392499B

CN105392499B - 用于治疗癌症的包含tor激酶抑制剂和胞苷类似物的组合疗法

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Publication number: CN105392499B
Application number: CN201480034607.XA
Authority: CN
Inventors: 希瑟·雷蒙
Original assignee: Signal Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Signal Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2013-04-17
Filing date: 2014-04-16
Publication date: 2018-07-24
Anticipated expiration: 2034-04-16
Also published as: NZ631082A; US20140315848A1; CA2908742C; TW201526895A; KR102242505B1; EP2986321A1; BR112015026247A8; KR20160002782A; AU2014254059B2; CA2908742A1; IL242021B; JP2016516820A; MX2015014599A; HK1221144A1; BR112015026247B1; JP6382948B2; WO2014172432A1; CN105392499A; TWI631949B; US9782427B2

Abstract

本文提供用于治疗或预防癌症的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂和有效量的胞苷类似物。

Description

用于治疗癌症的包含TOR激酶抑制剂和胞苷类似物的组合疗法

本申请要求2013年4月17日提交的美国临时申请No.61/813,053的权益，将其全部内容通过引用结合到本文中。

1.发明领域

2.背景技术

已知异常蛋白质磷酸化和疾病的原因或结果之间的联系超过20年。因此，蛋白激酶已成为一组非常重要的药物靶标。参见Cohen,Nature,1:309-315(2002)。多种蛋白激酶抑制剂已经在临床上用于治疗多种疾病，比如癌症和慢性炎性疾病，包括糖尿病和中风。参见Cohen,Eur.J.Biochem.,268:5001-5010(2001),Protein Kinase Inhibitors for theTreatment of Disease:The Promise and the Problems,Handbook of ExperimentalPharmacology,Springer Berlin Heidelberg,167(2005)。

蛋白激酶为一个大且多样的酶家族，其催化蛋白磷酸化并且在细胞信号传导中起关键作用。蛋白激酶可以根据其靶蛋白而发挥正调节或负调节作用。蛋白激酶参与特定信号传导通路，所述通路调节细胞功能，比如但不限于代谢、细胞周期进程、细胞粘附、血管功能、细胞凋亡和血管生成。细胞信号传导障碍已与许多疾病相关，其中最具特征的包括癌症和糖尿病。已充分证明了信号转导由细胞因子的调节以及信号分子与原癌基因和肿瘤抑制基因的关联。类似地，糖尿病和相关病症与蛋白激酶的水平失调之间的联系已经得到证实。参见例如Sridhar et al.Pharmaceutical Research,17(11):1345-1353(2000)。病毒感染和与其相关的病症也与蛋白激酶的调节相关。Park et al.Cell 101(7):777-787(2000)。

由于蛋白激酶调节几乎每个细胞过程，包括代谢、细胞增殖、细胞分化和细胞存活，因此其是用于多种疾病状态的治疗性干预的具有吸引力的靶标。例如，其中蛋白激酶起关键作用的细胞周期控制和血管生成是与许多疾病病症相关的细胞过程，所述疾病病症比如但不限于癌症、炎性疾病、异常血管生成和与其相关的疾病、动脉粥样硬化、黄斑变性、糖尿病、肥胖和疼痛。

蛋白激酶已成为用于治疗癌症的具有吸引力的靶标。Fabbro et al.,Pharmacology&Therapeutics 93:79-98(2002)。已经提出蛋白激酶参与人类恶性肿瘤的发展可以通过以下进行：(1)基因组重排(例如，慢性髓性白血病中的BCR-ABL)，(2)导致组成性活性激酶活性突变，如急性髓性白血病及胃肠道肿瘤，(3)致癌基因的活化或肿瘤抑制功能的丧失导致的激酶活性失调，比如在具有致癌RAS的癌症中，(4)由过表达导致的激酶活性失调，如在EGFR的情况下，和(5)可有助于肿瘤表型发展和维持的生长因子的异位表达。Fabbro et al.,Pharmacology&Therapeutics 93:79-98(2002)。

对蛋白激酶通路的复杂性和各种蛋白激酶和激酶通路之中和之间的关系和相互作用的复杂性的阐明强调了开发能够充当对多种激酶或多种激酶通路具有有益活性的蛋白激酶调制剂(modulator)、调节剂(regulator)或抑制剂的药物的重要性。因此，仍需要新的激酶调节剂。

称为mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶标)的蛋白(其也称为FRAP、RAFTI或RAPT1)是2549个氨基酸的Ser/Thr蛋白激酶，其已显示为调节细胞生长和增殖的mTOR/PI3K/Akt通路中最关键的蛋白之一。Georgakis和Younes Expert Rev.Anticancer Ther.6(1):131-140(2006)。mTOR存在于两种复合物mTORC1和mTORC2之内。虽然mTORC1对雷帕霉素类似物(比如坦罗莫司(temsirolimus)或依维莫司)敏感，但mTORC2对雷帕霉素大部分是不敏感的。值得注意的是，雷帕霉素不是TOR激酶抑制剂。一些mTOR抑制剂已经被评价或正在临床试验中被评价以用于治疗癌症。坦罗莫司在2007年被批准用于肾细胞癌，而西罗莫司在1999年被批准用于预防肾移植排斥反应。依维莫司在2009年被批准用于在血管内皮生长因子受体抑制剂方面已有进展的肾细胞癌患者，在2010年用于需要治疗但不是手术切除的候选者的患者中的与结节性硬化(TS)相关的室管膜下巨细胞星形细胞瘤(SEGA)，并且在2011年用于患有不可切除的、局部晚期或转移性疾病的患者中的胰腺来源的进行性神经内分泌肿瘤(PNET)。仍然需要抑制mTORC1和mTORC2复合物两者的TOR激酶抑制剂。

DNA-依赖性蛋白激酶(DNA-PK)是一种参与DNA双链断裂(DSBs)修复的丝氨酸-苏氨酸激酶。DSB被认为是最致命性的DNA损伤，并且内源性或响应电离辐射和化疗而发生(综述参见Jackson,S.P.,Bartek,J.The DNA-damage response in human biology anddisease.Nature Rev 2009；461:1071-1078)。如果没有被修复，则DSB将导致细胞周期停止和/或细胞死亡(Hoeijmakers,J.H.J.Genome maintenance mechanisms for preventingcancer.Nature 2001；411:366-374；van Gent,D.C.,Hoeijmakers,J.H.,Kanaar,R.Chromosomal stability and the DNA double-stranded break connection.Nat RevGenet 2001；2:196-206)。作为对损伤的反应，细胞发展了修复这种断裂的复杂机制，并且这些机制可以形成治疗抗性的基础。存在两种用于修复DSB的主要途径，非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HR)。NHEJ将断裂的DNA末端放在一起并在不参照第二模板下使其再结合(Collis,S.J.,DeWeese,T.L.,Jeggo P.A.,Parker,A.R.The life and death of DNA-PK.Oncogene 2005；24:949-961)。相反，HR取决于姐妹染色单体的接近性，其提供介导可靠修复的模板(Takata,M.,Sasaki,M.S.,Sonoda,E.,Morrison,C.,Hashimoto,M.,Utsumi,H.,et al.Homologous recombination and non-homologous end-joining pathways ofDNA double-strand break repair have overlapping roles in the maintenance ofchromosomal integrity in vertebrate cells.EMBO J 1998；17:5497-5508；Haber,J.E.Partners and pathways repairing a double-strand break.Trends Genet 2000；16:259-264)。NHEJ修复大部分DSB。在NHEJ中，DSB被结合并随后活化DNA-PK的催化亚基的Ku蛋白识别。这引起末端处理酶(end-processing enzymes)、聚合酶和DNA连接酶IV的募集和活化(Collis,S.J.,DeWeese,T.L.,Jeggo P.A.,Parker,A.R.The life and death ofDNA-PK.Oncogene 2005；24:949-961)。NHEJ主要受DNA-PK控制，因此抑制DNA-PK是一种调节修复应答以外源性诱导DSB的有吸引力的方法。缺乏NHEJ途径的组分的细胞在DSB修复中有缺陷，并且对于电离辐射和拓扑异构酶毒性高度敏感(Smith,G.C.M.,Jackson,S.P.的综述，The DNA-dependent protein kinase.Genes Dev 1999；13:916-934；Jeggo,P.A.,Caldecott,K.,Pidsley,S.,Banks,G.R.Sensitivity of Chinese hamster ovarymutants defective in DNA double strand break repair to topoisomerase IIinhibitors.Cancer Res 1989；49:7057-7063)。已经报道DNA-PK抑制剂具有敏化癌细胞以治疗性诱导DSB的相同作用(Smith,G.C.M.,Jackson,S.P.The DNA-dependent proteinkinase.Genes Dev 1999；13:916-934)。

在本申请的第2部分中任何参考文献的引用或确定都不应看作是承认该参考文献为本申请的现有技术。

3.发明简述

在某些实施方案中，本文提供用于在患有实体瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的实体瘤的反应评价标准(RECIST 1.1)的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有白血病的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的国家癌症研究所资助的关于慢性淋巴细胞性白血病的工作组(National Cancer Institute-Sponsored Working Group)(NCI-WG CLL)的反应定义的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有***癌的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的***癌工作组2(PCWG2)标准的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有非霍奇金淋巴瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的非非霍奇金淋巴瘤的国际研讨会标准(IWC)的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有多发性骨髓瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的多发性骨髓瘤的国际统一反应标准(IURC)的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合在某些实施方案中，本文提供用于在患有多形性成胶质细胞瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的多形性成胶质细胞瘤的神经肿瘤学(RANO)工作组的反应评价的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供提高患有癌症的患者的存活率而没有肿瘤进展的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂为如本文描述的化合物。

通过参照详细说明和实施例可以更充分地理解本发明的实实施方案，该详细说明和实施例旨在举例说明非限制性实施方案。

4.附图说明

图1描绘化合物1对于HepG2集落形成的作用。将HepG2细胞铺板在琼脂中，并用化合物1培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞的对照＝100％对照的百分比。每个数据点代表n＝3次试验(一式三份)的平均值。***相对于DMSO对照，p<0.001(通过单因素ANOVA，接着Dunnett事后检验)。

图2描绘5-AZA对于HepG2集落形成的作用。将HepG2细胞铺板在琼脂中，并用化合物培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞的对照＝100％对照的百分比。每个数据点代表n＝3次试验(一式三份)的平均值。***p<0.001。

图3描绘化合物1对于SK-Hep-1集落形成的作用。将SK-Hep-1细胞铺板在琼脂中，并用化合物培养8-10天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞的对照＝100％对照的百分比。每个数据点代表n＝3次试验(一式三份)的平均值。***相对于DMSO对照，p<0.001(通过单因素ANOVA，接着Dunnett事后检验)。

图4描绘5-AZA对于SK-Hep-1集落形成的作用。将SK-Hep-1细胞铺板在琼脂中，并用化合物培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞的对照＝100％对照的百分比。每个数据点代表n＝3次试验(一式三份)的平均值。***p<0.001。

图5描绘化合物1+5-AZA对于HepG2集落形成的作用。将HepG2细胞铺板在琼脂中，并用化合物5培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞的对照＝100％对照的百分比。每个数据点代表n＝3次试验(一式三份)的平均值。***相对于理论叠加性，p<0.001(通过不成对t检验)。

图6描绘化合物1+5-AZA对于SK-Hep-1集落形成的作用。将SK-Hep-1细胞铺板在琼脂中，并用化合物培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞的对照＝100％对照的百分比。每个数据点代表n＝3次试验(一式三份)的平均值。*相对于理论叠加性，p<0.05(通过不成对t检验)。

5.详细说明

5.1定义

“烷基”是具有1至10个碳原子，通常1至8个碳，或在某些实施方案中，1至6个、1至4个或2至6个碳原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的直链或支链非环状烃。代表性的烷基包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而饱和的支链烷基包括-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。不饱和的烷基的实例包括但不限于，乙烯基、烯丙基、-CH＝CH(CH₃)、-CH＝C(CH₃)₂、-C(CH₃)＝CH₂、-C(CH₃)＝CH(CH₃)、-C(CH₂CH₃)＝CH₂、-C≡CH、-C≡C(CH₃)、-C≡C(CH₂CH₃)、-CH₂C≡CH、-CH₂C≡C(CH₃)and-CH₂C≡C(CH₂CH₃)等。烷基可以是取代的或未取代的。在某些实施方案中，当本文所述的烷基被称为“取代的”时，其可以被任何一个或多个取代基取代，所述取代基如见于本文公开的示例性化合物和实施方案中的，以及卤素(氯、碘、溴或氟)；羟基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷基氨基；羧基；硝基；氰基；巯基；硫醚；亚胺；酰亚胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰氨基；膦酸基；膦；硫代羰基；磺酰基；砜；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；尿烷；肟；羟胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；叠氮化物；异氰酸酯；异硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；B(OH)₂或O(烷基)氨基羰基。

“烯基”是具有2至10个碳原子，通常2至8个碳原子并且包括至少一个碳碳双键的直链或支链的非环状烃。代表性的直链和支链的(C2-C8)烯基包括-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、-1-己烯基、-2-己烯基、-3-己烯基、-1-庚烯基、-2-庚烯基、-3-庚烯基、-1-辛烯基、-2-辛烯基、-3-辛烯基等。烯基的双键可以是非共轭的或与另一个不饱和基团共轭。烯基可以是未取代的或取代的。

“环烷基”为具有单个环或多个稠环或桥环的3至10个碳原子的饱和、部分饱和或不饱和环状烷基，其可以任选地被1至3个烷基取代。在某些实施方案中，环烃基具有3至8个环成员，而在其他实施方案中，环碳原子的数目为3至5、3至6或3至7。这样的环烷基包括，例如单环结构，比如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、1-甲基环丙基、2-甲基环戊基、2-甲基环辛基等；或多环或桥环结构，比如金刚烷基等。不饱和的环烃基的实例包括环己烯基、环戊烯基、环己二烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基等。环烷基可以是取代的或未取代的。这样的取代的环烷基包括例如环己酮等。

“芳基”是具有单个环(例如，苯基)或多个稠环(例如，萘基或蒽基)的6至14个碳原子的芳族碳环基。在某些实施方案中，芳基在基团的环部分含有6-14个碳，在其他实施方案中含有6至12个或甚至6至10个碳原子。特定的芳基包括苯基、联苯基、萘基等。芳基可以是取代的或未取代的。短语“芳基”也包括含有稠环的基团，比如稠合芳族-脂族环***(例如，茚满基、四氢萘基等)。

“杂芳基”是在杂芳族环***中具有1至4个杂原子作为环原子的芳环***，其中其余原子为碳原子。在某些实施方案中，杂芳基在基团的环部分中含有5至6个环原子，在其他实施方案中含有6至9个或甚至6至10个原子。合适的杂原子包括氧、硫和氮。在某些实施方案中，杂芳环***为单环或双环。非限制性实例包括，但不限于基团比如吡咯基、吡唑基、咪唑基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、吡咯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基(例如，异苯并呋喃-1,3-二亚胺)、吲哚基、氮杂吲哚基(例如，吡咯并吡啶基或1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基)、吲唑基、苯并咪唑基(例如，1H-苯并[d]咪唑基)、咪唑并吡啶基(例如，氮杂苯并咪唑基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基或1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基)、吡唑并吡啶基、***并吡啶基、苯并***基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、异噁唑并吡啶基、噻萘基、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、喹喔啉基和喹唑啉基。

“杂环基”是其中一至四个环原子被选自O、S和N的杂原子独立地替代的芳族(也称为杂芳基)或非芳族环烷基。在某些实施方案中，杂环基包括3至10个环成员，而其他这样的基团具有3至5个、3至6个或3至8个环成员。杂环基还可以在任何环原子处(即，在杂环的任何碳原子或杂原子处)结合于其他基团。杂环基烷基可以是取代的或未取代的。杂环基包括不饱和的、部分饱和的及饱和的环***，比如例如，咪唑基、咪唑啉基和咪唑烷基。短语杂环基包括稠环类，包括包含稠合的芳族和非芳族基团的那些，比如例如苯并***基、2,3-二氢苯并[l,4]二氧杂环己烯基和苯并[l,3]间二氧杂环戊烯基。该短语还包括含有杂原子的桥连多环***，例如但不限于奎宁基。杂环基的代表性实例包括但不限于，氮丙啶基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、噻唑烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、间二氧杂环戊烯基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、***基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻唑啉基、异噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢吡喃基(例如，四氢-2H-吡喃基)、四氢硫代吡喃基、氧硫杂环已烷、二噁烷基(dioxyl)、二噻烷基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢二噻英基(dihydrodithiinyl)、二氢二亚硫酰基、高哌嗪基、奎宁基、吲哚基、吲哚啉基、异吲哚基、氮杂吲哚基(吡咯并吡啶基)、吲唑基、吲嗪基、苯并***基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噁嗪基、苯并二噻英基、苯并噁噻英基、苯并噻嗪基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基、吡唑并吡啶基、咪唑并吡啶基(氮杂苯并咪唑基；例如，1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基或1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮基)、***并吡啶基、异噁唑并吡啶基、嘌呤基、黄嘌呤基、腺嘌呤基、鸟嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基、蝶啶基、噻萘基、二氢苯并噻嗪基、二氢苯并呋喃基、二氢吲哚基、二氢苯并二氧杂环己烯基、四氢吲哚基、四氢吲唑基、四氢苯并咪唑基、四氢苯并***基、四氢吡咯并吡啶基、四氢吡唑并吡啶基、四氢咪唑并吡啶基、四氢***并吡啶基和四氢喹啉基。代表性的取代杂环基可以是单取代的或被取代一次以上，比如但不限于，吡啶基或吗啉基，其为2-、3-、4-、5-或6-取代的，或被各种取代基比如下列那些二取代的。

“环烷基烷基”是式：-烷基-环烷基的基团，其中烷基和环烷基为上文中定义。取代的环烷基烷基可以在基团的烷基、环烷基或烷基和环烷基两个部分被取代。代表性的环烷基烷基包括但不限于，环戊基甲基、环戊基乙基、环己基甲基、环己基乙基和环己基丙基。代表性的取代的环烷基烷基可以是单取代的或被取代一次以上。

“芳烷基”是式：-烷基-芳基的基团，其中烷基和芳基为上文定义的。取代的芳烷基可以在基团的烷基、芳基或烷基和芳基两个部分被取代。代表性的芳烷基包括但不限于苄基和苯乙基和稠合(环烷基芳基)烷基比如4-乙基-茚满基。

“杂环基烷基”是式：-烷基-杂环基的基团，其中烷基和杂环基为上文定义的。取代的杂环基烷基可以在基团的烷基、杂环基或烷基和杂环基两个部分被取代。代表性的杂环基烷基包括但不限于，4-乙基-吗啉基、4-丙基吗啉基、呋喃-2-基甲基、呋喃-3-基甲基、吡啶-3-基甲基、(四氢-2H-吡喃-4-基)甲基、(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基、四氢呋喃-2-基甲基、四氢呋喃-2-基乙基和吲哚-2-基丙基。

“卤素”是氯、溴、碘或氟。

“羟烷基”基团是如上所述被一个或多个羟基取代的烷基。

“烷氧基”基团是-O-(烷基)，其中烷基为上文定义的。

“烷氧基烷基”基团是-(烷基)-O-(烷基)，其中烷基为上文定义的。

“氨基”基团是式：-NH₂的基团。

“羟基胺”基团是式：-N(R^#)OH或-NHOH的基团，其中R^#是如本文定义的取代的或未取代的烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环基或杂环基烷基。

“烷氧基胺”基团是式：-N(R^#)O-烷基或-NHO-烷基的基团，其中R^#为如上定义的。

“芳烷氧基胺”基团是式：-N(R^#)O-芳基或-NHO-芳基的基团，其中R^#为如上定义的。

“烷基胺”基团是式∶-NH-烷基或-N-(烷基)₂的基团，其中每个烷基独立地为如上定义的。

“氨基羰基”基团是式：-C(＝O)N(R^#)₂、-C(＝O)NH(R^#)或-C(＝O)NH₂的基团，其中每个R^#为如上定义的。

“酰氨基”基团是式：-NHC(＝O)(R^#)或-N(烷基)C(＝O)(R^#)的基团，其中每个烷基和R^#独立地为如上定义的。

“O(烷基)氨基羰基”基团是式：-O(烷基)C(＝O)N(R^#)₂、-O(烷基)C(＝O)NH(R^#)或-O(烷基)C(＝O)NH₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“N-氧化物”基团是式：-N⁺-O^-的基团。

“羧基”基团是式：-C(＝O)OH的基团。

“酮”基团是式：-C(＝O)(R^#)的基团，其中R^#为如上定义的。

“醛”基团是式：-CH(＝O)的基团。

“酯”基团是式：-C(＝O)O(R^#)或-OC(＝O)(R^#)的基团，其中R^#为如上定义的。

“脲”基团是式：-N(烷基)C(＝O)N(R^#)₂、-N(烷基)C(＝O)NH(R^#)、-N(烷基)C(＝O)NH₂、-NHC(＝O)N(R^#)₂、-NHC(＝O)NH(R^#)或-NHC(＝O)NH₂ ^#的基团，其中每个烷基和R^#_独立地为如上定义的。

“亚胺”基团是式：-N＝C(R^#)₂或-C(R^#)＝N(R^#)的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“酰亚胺”基团是式：-C(＝O)N(R#)C(＝O)(R^#)或-N((C＝O)(R^#))₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“尿烷”基团是式：-OC(＝O)N(R^#)₂、-OC(＝O)NH(R^#)、-N(R^#)C(＝O)O(R^#)或-NHC(＝O)O(R^#)的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“脒”基团是式：-C(＝N(R^#))N(R^#)₂、-C(＝N(R^#))NH(R^#)、-C(＝N(R^#))NH₂、-C(＝NH)N(R^#)₂、-C(＝NH)NH(R^#)、-C(＝NH)NH₂、-N＝C(R^#)N(R^#)₂、-N＝C(R^#)NH(R^#)、-N＝C(R^#)NH₂、-N(R^#)C(R^#)＝N(R^#)、-NHC(R^#)＝N(R^#)、-N(R^#)C(R^#)＝NH或-NHC(R^#)＝NH的基团，其中每个R^#_独立地为如上定义的。

“胍”基团是式：-N(R^#)C(＝N(R^#))N(R^#)₂、-NHC(＝N(R^#))N(R^#)₂、-N(R^#)C(＝NH)N(R^#)₂、-N(R^#)C(＝N(R^#))NH(R^#)、-N(R^#)C(＝N(R^#))NH₂、-NHC(＝NH)N(R^#)₂、-NHC(＝N(R^#))NH(R^#)、-NHC(＝N(R^#))NH₂、-NHC(＝NH)NH(R^#)、-NHC(＝NH)NH₂、-N＝C(N(R^#)₂)₂、-N＝C(NH(R^#))₂或-N＝C(NH₂)₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“烯胺”基团是式：-N(R^#)C(R^#)＝C(R^#)₂、-NHC(R^#)＝C(R^#)₂、-C(N(R^#)₂)＝C(R^#)₂、-C(NH(R^#))＝C(R^#)₂、-C(NH₂)＝C(R^#)₂、-C(R^#)＝C(R^#)(N(R^#)₂)、-C(R^#)＝C(R^#)(NH(R^#))或-C(R^#)＝C(R^#)(NH₂)的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“肟”基团是式：-C(＝NO(R^#))(R^#),-C(＝NOH)(R^#),-CH(＝NO(R^#))或-CH(＝NOH)的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“酰肼”基团是式：-C(＝O)N(R^#)N(R^#)₂、-C(＝O)NHN(R^#)₂、-C(＝O)N(R^#)NH(R^#)、-C(＝O)N(R^#)NH₂、-C(＝O)NHNH(R^#)₂或-C(＝O)NHNH₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“肼”基团是式：-N(R^#)N(R^#)₂、-NHN(R^#)₂、-N(R^#)NH(R^#)、-N(R^#)NH₂、-NHNH(R^#)₂或-NHNH₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“腙”基团是式：-C(＝N-N(R^#)₂)(R^#)₂、-C(＝N-NH(R^#))(R^#)₂、-C(＝N-NH₂)(R^#)₂、-N(R^#)(N＝C(R^#)₂)或-NH(N＝C(R^#)₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“叠氮化物”基团是式：-N₃的基团。

“异氰酸酯”基团是式：-N＝C＝O的基团。

“异硫氰酸酯”基团是式：-N＝C＝S的基团。

“氰酸酯”基团是式：-OCN的基团。

“硫代氰酸酯”基团是式：-SCN的基团。

“硫醚”基团是式：-S(R^#)的基团，其中R^#为如上定义的。

“硫代羰基”基团是式：-C(＝S)(R^#)的基团，其中R^#为如上定义的。

“亚磺酰基”基团是式：-S(＝O)(R^#)的基团，其中R^#为如上定义的。

“砜”基团是式：-S(＝O)₂(R^#)的基团，其中R^#为如上定义的。

“磺酰氨基”基团是式：-NHSO₂(R^#)或-N(烷基)SO₂(R^#)的基团，其中每个烷基和R^#为上述定义的。

“磺酰胺”基团是式：-S(＝O)₂N(R^#)₂或-S(＝O)₂NH(R^#)或-S(＝O)₂NH₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“膦酸酯”基团是式：-P(＝O)(O(R^#))₂、-P(＝O)(OH)₂、-OP(＝O)(O(R^#))(R^#)或-OP(＝O)(OH)(R^#)的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

“膦”基团是式：-P(R^#)₂的基团，其中每个R^#独立地为如上定义的。

当本文所述的除烷基之外的化合物称为“取代的”时，其可以被任何适当的取代基或多个取代基取代。取代基的说明性实例是见于本文公开的的示例性化合物和实施方案的那些，以及卤素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羟基；烷氧基；烷氧基烷基；氨基；烷基氨基；羧基；硝基；氰基；巯基；硫醚；亚胺；酰亚胺；脒；胍；烯胺；氨基羰基；酰氨基；膦酸酯基；膦；硫代羰基；亚磺酰基；砜；磺酰胺；酮；醛；酯；脲；尿烷；肟；羟胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；肼；酰肼；腙；叠氮化物；异氰酸酯；异硫氰酸酯；氰酸酯；硫代氰酸酯；氧(＝O)；B(OH)₂；O(烷基)氨基羰基；环烷基，其可以是单环或稠合或非稠合多环(例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基)；或杂环基，其可以是单环或稠合的或非稠合的多环(例如，吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基或噻嗪基)；单环或稠合的或非稠合的多环芳基或杂芳基(例如，苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、***基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、吖啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基)；芳氧基；芳烷氧基；杂环基氧基；和杂环基烷氧基。

如本文所使用，术语“可药用盐”指由可药用无毒酸或碱制备的盐，所述无毒酸或碱包括无机酸和碱以及有机酸和碱。TOR激酶抑制剂的适合的可药用碱加成盐包括但不限于由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的金属盐，或由赖氨酸、N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。合适的无毒酸包括但不限于，无机酸和有机酸，比如乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。具体的无毒酸包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，具体盐的实例包括盐酸盐和甲磺酸盐。其他的盐是本领域公知的，参见例如，Remington’s PharmaceuticalSciences，第18版，Mack Publishing,Easton PA(1990)或Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第19版，Mack Publishing,Easton PA(1995)。

如本文使用的且除非另有说明，术语“包合物(clathrate)”指呈含有空间(例如通道(channels))并且其中捕获有客分子(例如溶剂或水)的晶格形式或其中TOR激酶抑制剂是客分子的晶格形式的TOR激酶抑制剂或其盐。

如本文所使用且除非另有说明，术语“溶剂化物”指进一步包括化学计量或非化学计量量的通过非共价分子间力结合的溶剂的TOR激酶抑制剂或其盐。在一个实施方案中，溶剂化物为水合物。

如本文所使用且除非另有说明，术语“水合物”指进一步包括化学计量或非化学计量量的通过非共价分子间力结合的水的TOR激酶抑制剂或其盐。

如本文所使用且除非另有说明，术语“前药”指可以在生物条件(体外或体内)下水解、氧化或反应以提供活性化合物，尤其是TOR激酶抑制剂的TOR激酶抑制剂衍生物。前药的实例包括但不限于，TOR激酶抑制剂的衍生物和代谢物，其包括可生物水解的部分，比如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲和可生物水解的磷酸酯类似物。在某些实施方案中，具有羧基官能基的化合物的前药是羧酸的低级烷基酯。羧酸酯通过酯化分子上存在的任意羧酸部分而容易地形成。前药可以通常使用公知方法制备，比如Burger’s Medicinal Chemistry and DrugDiscovery 6^th ed.(Donald J.Abraham ed.,2001,Wiley)和Design and Application ofProdrugs(H.Bundgaard ed.,1985,Harwood Academic Publishers Gmfh)所述的那些方法。

如本文所使用且除非另有说明，术语“立体异构体”或“立体异构纯的”指TOR激酶抑制剂的一种立体异构体，其基本上不含该化合物的其他立体异构体。例如，具有一个手性中心的立体异构纯的化合物将基本上不含该化合物的相反对映异构体。具有两个手性中心的立体异构纯的化合物将基本上不含该化合物的其他非对映异构体。典型的立体异构纯的化合物包含大于约80％重量的化合物的一种立体异构体和少于约20％重量的化合物的其他立体异构体，大于约90％重量的化合物的一种立体异构体和少于约10％重量的化合物的其他立体异构体，大于约95％重量的化合物的一种立体异构体和少于约5％重量的化合物的其他立体异构体，或大于约97％重量的化合物的一种立体异构体和小于约3％重量的化合物的其他立体异构体。TOR激酶抑制剂可以具有手性中心并且可以作为外消旋体、单个对映异构体或非对映异构体及其混合物存在。所有这样的异构形式均包括在本文公开的实施方案中，包括其混合物。这样的TOR激酶抑制剂的立体异构纯形式的使用，以及那些形式的混合物的使用涵盖在本文所公开的实施方案中。例如，包含等量或不等量的特定TOR激酶抑制剂的对映异构体的混合物可用于本文公开的方法和组合物中。这些异构体可以是不对称合成的或使用标准技术如手性柱或手性拆分剂来拆分。参见例如Jacques,J.,et al.,Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley-Interscience,New York,1981)；Wilen,S.H.,et al.,Tetrahedron 33:2725(1977)；Eliel,E.L.,Stereochemistry ofCarbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；和Wilen,S.H.,Tables of Resolving Agentsand Optical Resolutions p.268(E.L.Eliel,Ed.,Univ.of Notre Dame Press,NotreDame,IN,1972)。

还应注意，TOR激酶抑制剂可以包括E和Z异构体或其混合物，以及顺式和反式异构体或其混合物。在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂分离为顺式或反式异构体。在其它实施方案中，TOR激酶抑制剂是顺式和反式异构体的混合物。

“互变异构体”指彼此平衡的化合物的异构形式。异构形式的浓度将取决于化合物存在的环境，并且可以根据例如化合物是否为固体或在有机或水性溶液中而不同。例如，在水性溶液中，吡唑可以显示下述异构形式，其称为彼此的互变异构体：

如本领域技术人员容易地理解的，多种官能团和其他结构可以显示互变异构现象，并且TOR激酶抑制剂的所有互变异构体在本发明的范围内。

应当注意，TOR激酶抑制剂可以在一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以使用放射性同位素进行放射性标记，所述放射性同位素比如例如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)、硫-35(³⁵S)或碳-14(¹⁴C)，或可以是同位素富集的，比如使用氘(²H)、碳-13(¹³C)或氮-15(¹⁵N)进行同位素富集。如本文所使用的，“同位素体(isotopologue)”是同位素富集的化合物。术语“同位素富集的”指具有不同于原子的天然同位素组成的同位素组成的原子。“同位素富集的”还可以指含有至少一种不同于原子的天然同位素组成的同位素组成的原子的化合物。术语“同位素组成”指给定的原子存在的每种同位素的量。放射性标记和同位素富集的化合物可用作治疗剂，例如，癌症和炎症治疗剂、研究试剂(例如，结合分析试剂)和诊断试剂(例如，体内显像剂)。如本文所述的TOR激酶抑制剂的所有同位素变体，无论是否具有放射性，都旨在涵盖于本文提供的实施方案的范围内。在某些实施方案中，提供了TOR激酶抑制剂的同位素体，例如，同位素体为氘、碳-13或氮-15富集的TOR激酶抑制剂。

应当注意，如果描述的结构和结构提供的名称之间存在矛盾，则以描述的结构为准。

如本文所用的“治疗”指缓解癌症或与癌症有关的症状的全部或部分，或者减缓或停止那些症状的进一步进展或恶化。

如本文所用的“预防”指防止癌症或其症状的全部或部分的发作、复发或扩散。

术语“有效量”当与TOR激酶抑制剂或胞苷类似物结合时指单独或组合能够缓解与癌症相关的症状的全部或部分，或者减缓或停止那些症状的进一步进程或恶化，或者治疗或预防患有癌症或处于患有癌症风险中的受试者的量。TOR激酶抑制剂或胞苷类似物的有效量，例如在药物组合物中，可以是在将发挥预期效果的水平上；例如，对于口服和肠胃外给药在单位剂量中均为约0.005mg/kg受试者体重至约100mg/kg患者体重。

术语“癌症”指以可以侵入周围组织且转移到新的身体部位的细胞增殖为特征的多种恶性肿瘤中任一种。良性肿瘤和恶性肿瘤都是根据其所在的组织的类型来分类。例如，纤维瘤是纤维***的肿瘤，黑素瘤是色素(黑色素)细胞的异常生长。例如皮肤、支气管和胃中来源于上皮组织的恶性肿瘤称为癌瘤。比如在乳腺、***和结肠中发现的上皮腺组织的恶性肿瘤被称为腺癌。***例如肌肉、软骨、淋巴组织和骨的恶性生长称为肉瘤。淋巴瘤和白血病是源自白细胞的恶性肿瘤。通过转移过程，肿瘤细胞迁移至身体的其他区域，在远离最初出现部位的区域建立肿瘤。骨组织是所有癌症病例的约30％中发生恶性肿瘤转移的最有利部位之一。在恶性肿瘤中，尤其已知肺癌、乳腺癌、***癌等可能转移到骨骼。

在肿瘤、癌症、肿瘤生长或肿瘤细胞生长的上下中，其中可以通过延迟原发肿瘤或继发肿瘤的出现、减缓原发肿瘤或继发肿瘤的发展、减少原发肿瘤或继发肿瘤的发生、减慢或降低疾病的继发效应的严重程度、阻止肿瘤生长和使肿瘤消退来评价抑制。在极端情况下，完全抑制在本文中指预防或化学预防。在这方面，术语“预防”包括预防临床明显瘤形成的发作或预防处于风险中的个体临床前瘤形成的明显期的发作。该定义还包括预防向恶性细胞的转化或阻止或逆转恶变前细胞向恶性细胞的进展。这包括对处于发展为瘤形成的风险中的对象的预防性治疗。

如本文使用的且除非另有说明，术语“组合”包括同时、同步或顺序给药两种或多种治疗剂，而没有特定的期限，除非另有说明。在一个实施方案中，给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在一个实施方案中，试剂同时存在于细胞或受试者的身体中或同时发挥其生物学或治疗效果。在一个实施方案中，治疗剂是相同的组合物或单位剂型。在其它实施方案中，治疗剂在单独的组合物或单位剂型中。在某些实施方案中，在给药第二试剂之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、基本上同时或在(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)，给药第一试剂，或其任意组合。例如，在一个实施方案中，可以在第二治疗剂之前，例如1周，给药第一试剂。在另一个实施方案中，可以在第二治疗剂之前(例如1天)给药第一试剂，然后伴随给药第二治疗剂。

如本文所使用的术语“患者”和“受试者”包括动物，包括但不限于下述动物：比如牛、猴、马、绵羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠，在一种实施方案中，包括哺乳动物，在另一种实施方案中，包括人类。在一个实施方案中，“患者”或“受试者”是患有癌症的人类。

在癌症的上下文中，可以通过抑制疾病进程、抑制肿瘤生长、减少原发肿瘤、缓解肿瘤相关症状、抑制肿瘤分泌因子(包括肿瘤分泌激素，比如导致类癌瘤综合征的那些)、延迟原发肿瘤或继发肿瘤的出现、减缓原发肿瘤或继发肿瘤的发展、减少原发肿瘤或继发肿瘤的发生、减慢或降低疾病的继发效应的严重程度、阻止肿瘤生长和使肿瘤消退、增加疾病进展时间(TTP)、增加无进展存活率(PFS)、增加总生存率(OS)来评价抑制。如本文所使用的OS指由于任何病因的从随机化到死亡的时间，并且在预期治疗的群体中测量。如本文所使用的TTP指从随机化到客观肿瘤进展的时间；TTP不包括死亡。如本文所使用，PFS指从随机化直到客观肿瘤进展或死亡的时间。在一个实施方案中，PFS率将使用Kaplan-Meier估计来计算。在极端的情况下，完全抑制在本文中指预防或化学预防。在这方面，术语“预防”包括预防临床明显晚期癌症的发作或预防临床前癌症的明显期的发作。该定义还包括预防向恶性细胞的转化或阻止或逆转恶变前细胞向恶性细胞的进展。这包括对处于发展为癌症的风险中的对象的预防性治疗。

在某些实施方案中，淋巴瘤的治疗可以通过非霍奇金淋巴瘤(NHL)的国际研讨会标准(IWC)来评估(参见Cheson BD,Pfistner B,Juweid,ME,et.al.Revised ResponseCriteria for Malignant Lymphoma.J.Clin.Oncol:2007:(25)579-586)，使用如下显示的应答和终点定义∶

缩写∶CR，完全缓解；FDG，[¹⁸F]氟去氧葡萄糖；PET，正电子发射断层扫描；CT，计算机断层扫描；PR，部分缓解；SPD，直径乘积总和；SD，疾病稳定；PD，进行性疾病。

缩写∶CR∶完全缓解；PR∶部分缓解

在一个实施方案中，淋巴瘤的终点为临床益处的证据。临床益处可以反应生活质量的改善，或患者症状、输注需求、频繁感染或其他参数减少。到淋巴瘤相关症状的再现或进展的时间可以用于该终点中。

在某些实施方案中，CLL的治疗可以通过CLL的国际研讨会指南(参见Hallek M,Cheson BD,Catovsky D,et al.Guidelines for the diagnosis and treatment ofchronic lymphocytic leukemia:a report from the International Workshop onChronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute-WorkingGroup 1996guidelines.Blood,2008；(111)12:5446-5456)，使用如下和特别地显示的应答和终点定义来评价：

A组标准定义了肿瘤载荷；B组标准定义造血***(或骨髓)的功能。CR(完全缓解)∶必须满足所有标准，并且患者必须没有疾病相关的全身症状；PR(部分缓解)∶必须满足至少两个A组标准+一个B组标准；SD为没有进行性疾病(PD)，并且不能实现至少一个PR；PD∶必须满足上述A组或B组的标准的至少一个。多个***乘积的总和(如通过临床试验中CT扫描，或通过一般实践的身体检查评价)。这些参数对于某些应答种类无关。

在某些实施方案中，多发性骨髓瘤的治疗可以通过多发性骨髓瘤(IURC)的国际统一应答标准(参见Durie BGM,Harousseau J-L,Miguel JS,et al.International uniformresponse criteria for multiple myeloma.Leukemia,2006；(10)10:1-7)，，使用如下显示的应答和终点定义来评价∶

缩写：CR，完全应答；FLC，游离轻链；PR，部分应答；SD，疾病稳定；sCR，严格完全应答；VGPR，非常好的部分应答；^a所有应答类别都需要在建立任何新治疗之前的任何时间进行的两个连续评价；如果进行了放射照相研究，则所有类别也需要无已知的进行性或新的骨病变迹象。不需要以放射照相研究来满足这些应答要求；^b不需要用重复骨髓活组织检查来证实；^c克隆细胞的存在/不存在基于κ/λ比。通过免疫组织化学和/或免疫荧光得到的异常κ/λ比需要最少100个浆细胞用于分析。反映异常克隆的存在的异常比例为κ/λ＞4:1或<1:2。^d可测量的疾病由以下测量中的至少一种定义：骨髓浆细胞≥30％；血清M-蛋白≥1g/dl(≥10gm/l)[10g/l]；尿液M-蛋白≥200mg/24h；血清FLC分析：涉及的FLC水平≥10mg/dl(≥100mg/l)；条件是血清FLC比异常。

在某些实施方案中，癌症的治疗可以通过实体瘤的应答评价标准(RECIST1.1)来评价(参见Thereasse P.,et al.New Guidelines to Evaluate the Response toTreatment in Solid Tumors.J.of the National Cancer Institute；2000；(92)205-216and Eisenhauer E.A.,Therasse P.,Bogaerts J.,et al.New response evaluationcriteria in solid tumours:Revised RECIST guideline(version 1.1).EuropeanJ.Cancer；2009；(45)228–247)。靶和非靶病变中的肿瘤应答与出现或不出现新病变的所有可能组合的总体应答如下：

CR＝完全应答；PR＝部分应答；SD＝疾病稳定；和PD＝进行性疾病。

对于靶病变的评价，完全应答(CR)是所有靶病变消失，部分应答(PR)是以基线总最长直径作为参照，靶病变的最长直径总和至少降低30％；进行性疾病(PD)是以从开始治疗或出现一个或多个新病变以来所记录的最小总最长直径作为参照，靶病变的最长直径的总和至少增大20％；且病情稳定(SD)为以从开始治疗以来的最小总最长直径作为参照，既不足以降低至对部分应答合格，也不足以增大至对进行性疾病合格。

对于非靶病变的评价，完全应答(CR)是所有非靶病变消失且肿瘤标志物水平正常化；不完全应答/病情稳定(SD)是一个或多个非靶病变持续和/或肿瘤标志物水平维持在正常限度以上；和进行性疾病(PD)是出现一个或多个新病变和/或现有的非靶病变明确进展。

以下所述的方法、惯例和定义为实施神经肿瘤学应答评估(RANO)工作组关于高级神经胶质瘤的应答标准的建议提供指导(Wen P.,Macdonald,DR.,Reardon,DA.,etal.Updated response assessment criteria for highgrade gliomas:Responseassessment in neuro-oncology working group.J Clin Oncol2010；28:1963-1972)。针对时间点应答标准(TPR)的RANO标准的主要修改可以包括加入用于限定糖皮质激素剂量变化的操作惯例，并且受试者的临床退化组分的去除集中于目标放射学评估上。基准MRI扫描定义为在手术后休息期结束时、在重新开始化合物治疗之前进行的评估。基准MRI用作用于评估完全应答(CR)和部分应答(PR)的参考。然而，在基准处或在随后的评估中获得的最小SPD(垂直直径乘积的总和)将指定为最低点评估并用作用于测定进展的参考。在任何试验设计限定的MRI扫描的前5天，受试者不接受糖皮质激素或接受稳定剂量的糖皮质激素。稳定剂量定义为在MRI扫描之前连续5天的相同每日剂量。如果开处方的糖皮质激素剂量在基准扫描前5天内变化，则需要糖皮质激素使用满足上述标准的新的基准扫描。将使用下述定义。

可测量的病变：可测量的病变是可以二维测量的对比增强病变。测量由最大增强肿瘤直径(也称为最长直径，LD)组成。在同一影象上测量最大垂直直径。二维测量的十字线应交叉并计算这些直径的乘积。

最小直径：T1-加权图像，其中各部分为5mm，具有1mm空白。可测量的病变的最小LD设定为5mm×5mm。入选和/或命名为靶病变可以需要更大的直径。在基准后，变得比测量的最低要求更小或变得不再可经受二维测量的靶病变将在5mm的缺省值下针对5mm以下的每个直径记录。消失的病变将记录为0mm×0mm。

多中心病变：视为多中心(与连续相对)的病变为其中在两个(或多个)病变之间有正常介入脑组织的病变。对于具有离散的增强病灶的多中心病变，方法为分别测量满足入选标准的每个增强病变。如果在两个(或多个)病变之间没有正常脑组织，则将其视为相同病变。

不可测量的病变：不满足如上定义的可测量的疾病的标准的所有病变，以及所有非增强和其他真正不可测量的病变将被视为不可测量的病变。不可测量的病变包括小于规定的最小直径(即，小于5mm×5mm)的增强的病灶、非增强病变(例如，如在T1加权对比后、T2加权或流体衰减反转回复[fluid-attenuation fluidinversion recovery，FLAIR]图像上所见的)、出血性或显著囊性或坏死性病变及软脑膜肿瘤。出血性病变通常具有固有T1加权高信号，其会被误解为增强肿瘤，且为此原因，可以检查对比前T1加权图像以排除基准或区间亚急性出血。

在基准处，病变将如下分类：靶病变：至多5个可测量的病变可以选作靶病变，其各自测量为至少10mm×5mm，代表受试者的疾病；非靶病变：所有其他病变，包括所有不可测量的病变(包括质量效应和T2/FLAIR结果)和未选作靶病变的任何可测量的病变。在基准处，靶病变将如可测量的病变的定义中所述进行测量，并且测定所有靶病变的SPD。所有其他病变的存在将进行证明。在所有治疗后评价下，病变作为靶和非靶病变的基准分类将保持，并且病变将以随时间推移一致的方式证明和描述(例如，以源文件和eCRF的相同顺序记录)。所有可测量的和不可测量的病变在研究的持续过程中必须使用与在基准处相同的技术评估(例如，受试者应当在相同的MRI扫描仪上或至少使用相同的磁强度成像)，以降低解释变化的困难。在每次评估时，将测量靶病变并计算SPD。将分别定性评估非靶病变并且将证明新病变(如果有的话)。在每次评价时，将针对靶病变、非靶病变和新病变测定时间点应答。即使仅评估病变的子集，也可以确定肿瘤进展。然而，除非观察到进展，否则当评估所有病变时才可以测定目标状态(疾病稳定、PR或CR)。

CR和PR的总体时间点应答的证实评估将在下一个定期评估中进行，但是如果扫描具有＜28天的间隔，则可以不进行确证。最佳应答与证实要求一起将来自该系列时间点。

在某些实施方式中，癌症的治疗可以通过在使用TOR激酶抑制剂治疗之前、期间和/或之后的循环血液和/或肿瘤细胞和/或皮肤活组织检查或肿瘤活组织检查/吸出物中的S6RP、4E-BP1、AKT和/或DNA-PK的磷酸化的抑制来评估。例如，S6RP、4E-BP1、AKT和/或DNA-PK的磷酸化的抑制在B细胞、T细胞和/或单核细胞中评价。在其它实施方案中，癌症的治疗可以通过在使用TOR激酶抑制剂治疗之前、期间和/或之后的皮肤样品和/或肿瘤活组织检查/吸出物中的DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)活性的抑制来评价，比如通过评价作为DNA损伤路径的生物标志物的pDNA-PK S2056的量来评价。

在极端的情况下，完全抑制在本文中称为预防或化学预防。在这方面，术语“预防”包括预防临床明显癌症的发作或预防临床前癌症的明显期的发作。该定义还包括预防向恶性细胞的转化或阻止或逆转恶变前细胞向恶性细胞的进展。这包括对处于发展为瘤形成的风险中的对象的预防性治疗。

5.2 TOR激酶抑制剂

本文提供的化合物通常称为“TOR激酶抑制剂”。在一个方面，TOR激酶抑制剂不包括雷帕霉素或雷帕霉素类似物(rapalog)。

在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂包括具有下式(I)的化合物：

及其可药用盐、包合物、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、代谢物、同位素体和前药，其中：

R¹为取代或未取代的C_1-8烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的杂环基或取代的或未取代的杂环基烷基；

R²取代的或未取代的C_1-8烷基、取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的杂环基、取代的或未取代的杂环基烷基、取代的或未取代的芳烷基或取代的或未取代的环烷基烷基；

R³为H或取代的或未取代的C_1-8烷基，

其中在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂不包括7-(4-羟基苯基)-1-(3-甲氧基苄基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮，描绘如下∶

在式(I)的化合物的某些实施方案中，R¹为取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的杂芳基。例如，R¹为苯基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、吲唑基、吲哚基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基或吡唑基，各自任选地被取代。在某些实施方案中，R¹为苯基，被一个或多个独立地选自下述的取代基取代：取代的或未取代的C1--8烷基(例如甲基)、取代的或未取代的杂环基(例如，取代的或未取代的***基或吡唑基)、氨基羰基、卤素(例如，氟)、氰基、羟烷基和羟基。在其它实施方案中，R¹为吡啶基，被一个或多个独立地选自下述的取代基取代：取代的或未取代的C_1-8烷基(例如甲基)、取代的或未取代的杂环基(例如，取代的或未取代的***基)、卤素、氨基羰基、氰基、羟烷基(例如，羟丙基)、-OR和-NR₂，其中每个R独立地为H或取代的或未取代的C_1-4烷基。在某些实施方案中，R¹为1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基或苯并咪唑基，任选地被一个或多个选自下述的取代基取代：取代的或未取代的C_1-8烷基，和-NR₂，其中R独立地H或取代的或未取代的C_1-4烷基。

在某些实施方案中，R¹为

其中R在每次出现时独立地为H或取代的或未取代的C_1-4烷基(例如，甲基)；R’在每次出现时独立地为取代的或未取代的C_1-4烷基(例如甲基)、卤素(例如，氟)、氰基、–OR或-NR₂；m为0-3；且n为0-3。本领域技术人员应当理解，取代基R'可以连接稠环***中任一个环的任何合适的原子。

在式(I)的化合物的某些实施方案中，R¹为

其中R在每次出现时独立地为H或取代的或未取代的C_1-4烷基；R’在每次出现时独立地为取代的或未取代的C_1-4烷基、卤素、氰基、-OR或-NR₂；m为0-3；且n为0-3。

在式(I)的化合物的某些实施方案中，R²为H、取代的或未取代的C_1-8烷基，取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的杂环基、取代的或未取代的C_1-4烷基-杂环基、取代的或未取代的C_1-4烷基-芳基或取代的或未取代的C_1-4烷基-环烷基。例如，R²为H、甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正-戊基、异戊基、环戊基、环己基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、(C_1-4烷基)-苯基、(C_1-4烷基)-环丙基、(C_1-4烷基)-环丁基、(C_1-4烷基)-环戊基、(C_1-4烷基)-环己基，(C_1-4烷基)-吡咯烷基、(C_1-4烷基)-哌啶基、(C_1-4烷基)-哌嗪基、(C_1-4烷基)-吗啉基、(C_1-4烷基)-四氢呋喃基或(C_1-4烷基)-四氢吡喃基，各自任选地被取代。

在其它实施方案中，R²为H、C_1-4烷基、(C_1-4烷基)(OR)，

其中R在每次出现时独立地为H或取代的或未取代的C_1-4烷基(例如，甲基)；R’在每次出现时独立地为H、OR、氰基或取代的或未取代的C₁-₄烷基(例如，甲基)和且p为0-3。

在式(I)的化合物的其它实施方案中，R²为H、C_1-4烷基、(C_1-4烷基)(OR)、

其中R在每次出现时独立地为H或取代的或未取代的C_1-2烷基；R’在每次出现时独立地为H、-OR、氰基或取代的或未取代的C_1-2烷基；且p为0-1。

在式(I)的化合物的其它实施方案中，R³为H。

在本文所述某些这样的实施方案中，R¹为取代的或未取代的芳基或取代的或未取代的杂芳基。例如，R¹为苯基、吡啶基、嘧啶基、苯并咪唑基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、吲唑基、吲哚基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶、吡啶基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基或吡唑基，各自任选地被取代。在某些实施方案中，R¹为苯基，被一个或多个独立地选自下述的取代基取代：取代的或未取代的C_1-8烷基、取代的或未取代的杂环基、氨基羰基、卤素、氰基、羟烷基和羟基。在其他实施方案中，R¹为吡啶基，被一个或多个独立地选自下述的取代基取代：C_1-8烷基、取代的或未取代的杂环基、卤素、氨基羰基、氰基、羟烷基、-OR和-NR₂，其中每个R独立地为H或取代的或未取代的C_1-4烷基。在仍然其它实施方案中，R¹为1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基或苯并咪唑基，任选地被一个或多个独立地选自下述的取代基取代：取代的或未取代的C_1-8烷基，和-NR₂，其中R独立地H或取代的或未取代的C_1-4烷基。

在某些实施方案中，式(I)的化合物具有本文所述R¹基团和本文所述R²基团。

在式(I)的化合物的某些实施方案中，所述化合物抑制TOR激酶。在式(I)的化合物的其它实施方案中，所述化合物抑制DNA-PK。在式(I)的化合物的某些实施方案中，所述化合物同时抑制TOR激酶和DNA-PK。

在式(I)的化合物的某些实施方案中，浓度10μm的所述化合物抑制mTOR激酶、DNA-PK、PI3K或其组合至少约50％。式(I)化合物可以在任何合适的试验***中被表明为上述激酶的抑制剂。

代表性的式(I)的TOR激酶抑制剂包括来自表A的化合物。

表A.

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-((反式-4-甲氧基环己基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(反式-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-ethyl-7-(1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-((反式-4-甲氧基环己基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-苯并[d]咪唑-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-((反式-4-羟基环己基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(反式-4-羟基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(反式-4-羟基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-乙基-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-((反式-4-羟基环己基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-indol-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-异丙基-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(反式-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-异丙基-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-乙基-7-(5-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-羟基吡啶-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-异丙基-7-(4-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

5-(8-异丙基-7-氧代-5,6,7,8-四氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4-甲基吡啶酰胺；

7-(1H-吲唑-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-氨基嘧啶-5-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-氨基吡啶-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(甲基氨基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-羟基吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-(1H-吡唑-3-基)苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吲唑-4-基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吲唑-6-基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(嘧啶-5-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(2-甲氧基乙基)-7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-乙基-7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；1-乙基-7-(1H-吲唑-4-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(吡啶-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-氨基吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-甲基-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

2-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(8-(反式-4-甲氧基环己基)-7-氧代-5,6,7,8-四氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2-基)吡啶-1-氧化物；

4-甲基-5-(7-氧代-8-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-5,6,7,8-四氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2-基)吡啶酰胺；

5-(8-((反式-4-甲氧基环己基)甲基)-7-氧代-5,6,7,8-四氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2-基)-4-甲基吡啶酰胺；

7-(1H-吡唑-4-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(反式-4-甲氧基环己基)-7-(4-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

3-((7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-2-氧代-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-1(2H)-基)甲基)苄腈；

1-((反式-4-甲氧基环己基)甲基)-7-(4-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

3-(7-氧代-8-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2-基)苯甲酰胺；

3-((7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-2-氧代-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-1(2H)-基)甲基)苄腈；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((1R,3R)-3-甲氧基环戊基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((1S,3R)-3-甲氧基环戊基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((1S,3S)-3-甲氧基环戊基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((1R,3S)-3-甲氧基环戊基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吲唑-6-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(2-吗琳子基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(反式-4-羟基环己基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(2-吗琳子基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-异丙基-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-((反式-4-甲氧基环己基)甲基)-7-(2-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(反式-4-羟基环己基)-7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

4-(7-氧代-8-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-5,6,7,8-四氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2-基)苯甲酰胺；

7-(1H-吲唑-5-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-((1S,3R)-3-甲氧基环戊基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-((1R,3R)-3-甲氧基环戊基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-((1R,3S)-3-甲氧基环戊基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-((1S,3S)-3-甲氧基环戊基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吲哚-5-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-乙基-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(1H-吲哚-6-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1-(反式-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((反式-4-甲氧基环己基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(2-甲氧基乙基)-7-(4-甲基-2-(甲基氨基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(7-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-甲基-4-(4H-1,2,4-***-3-基)苯基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(2-甲氧基乙基)-7-(4-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-苄基-7-(2-甲基-4-(4H-1,2,4-***-3-基)苯基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(3-氟-4-(4H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(3-氟-4-(4H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(3-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(反式-4-甲氧基环己基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(反式-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(5-氟-2-甲基-4-(4H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(3-氟-2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(2-甲氧基乙基)-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(环戊基甲基)-7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

(S)-7-(6-(1-羟基乙基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

(R)-7-(6-(1-羟基乙基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(3-(三氟甲基)苄基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(3-甲氧基丙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(2-甲氧基乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-甲基-2-(甲基氨基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-氨基-4-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

(R)-7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3-甲基-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

(S)-7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3-甲基-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3,3-二甲基-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-氨基-4-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(2-甲基-4-(1H-1,2,4-***-3-基)苯基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

7-(4-(1H-1,2,4-***-5-基)苯基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

1-(1-羟基丙烷-2-基)-7-(2-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；和

1-(2-羟基乙基)-7-(2-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮；

及其可药用盐、包合物、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、代谢物、同位素体和前药。

5.3胞苷类似物

核苷类似物临床上已经用于治疗病毒感染和某些癌症。大多数核苷类似物分类为抗代谢物。在它们进入细胞之后，核苷类似物连续地磷酸化为核苷5'-单磷酸酯、二磷酸酯和三磷酸酯。

核苷类似物5-氮胞苷(也称为4-氨基-1-β-D-呋喃核糖基-1,3,5-三嗪-2(1H)-酮；National Service Center名称NSC-102816；CAS登记号320-67-2；阿扎胞苷；Aza、AZA和5-AZA；目前市场上作为销售)和2’-脱氧-5-氮胞苷(也称为5-氮杂-2'-脱氧胞苷、地西他滨、5-氮杂-CdR、Dac和DAC，目前市场上作为销售)是DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂，已经由美国食品和药物管理局批准用于治疗骨髓发育不良综合征(MDS)。阿扎胞苷和地西他滨是胞苷类似物；这些胞苷类似物和其有关的天然核苷之间的结构差异是在胞嘧啶环的5位存在氮代替碳。阿扎胞苷可以定义为具有分子式C₈H₁₂N₄O₅，分子量为244.21克/摩尔，且结构如下所示。地西他滨可以定义为具有分子式C₈H₁₂N₄O₄，分子量228.21克/摩尔，且结构如下所示。

在其结合到复制中的DNA中后，5-氮杂胞苷或5-氮杂-2’-脱氧胞苷与DNA甲基转移酶形成共价复合物。DNA甲基转移酶负责从头DNA甲基化，并负责在复制中的DNA的子代DNA链中复制建立的甲基化模式。抑制DNA甲基转移酶会导致DNA低甲基化，从而通过重新表达具有正常细胞周期调控、分化和死亡的基因修复形态发育不良、不成熟造血细胞的正常功能。这些胞苷类似物的细胞毒性作用导致不再响应正常细胞生长控制机制的快速***细胞的死亡。5-氮杂胞苷与5-氮杂-2’-脱氧胞苷不同，还结合到RNA。阿扎胞苷的细胞毒性作用可能是因为多种机制，包括抑制DNA、RNA和蛋白的合成，整合入RNA和DNA，和活化DNA损伤通路。

已经在临床试验中对5-氮杂胞苷和5-氮杂-2’-脱氧胞苷进行了测试，并表现出显著的抗肿瘤活性，比如例如，在治疗骨髓增生异常综合征(MDS)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性粒细胞性白血病(CML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中表现出显著的活性。参见，例如，Aparicio et al.,Curr.Opin.Invest.Drugs 3(4):627-33(2002)。5-氮杂胞苷已用于NCI-资助的试验来治疗MDS，并被批准用于治疗MDS的所有FAB亚型。参见，例如，Kornblith et al.,J.Clin.Oncol.20(10):2441-2452(2002)；Silvermanet al.,J.Clin.Oncol.20(10):2429-2440(2002)。5-氮杂胞苷利用它的细胞毒性活性和它的DNA甲基转移酶抑制活性减少向AM的转化，从而可以改变MDS的自然过程。在III期研究中，皮下给药5-氮杂胞苷苷显著延长了高危MDS受试者的存活和向AML或死亡转化的时间。参见，例如，P.Fenaux et al.,Lancet Oncol.,2009,10(3):223-32；Silverman et al.,Blood 106(11):Abstract 2526(2005)。这类胞苷类似物的其他成员包括例如：1-β-D-***呋喃糖基胞嘧啶(阿糖胞苷或ara-C)；伪胞嘧啶(psi ICR)；5-氟-2′-脱氧胞苷(FCdR)；2’-脱氧-2’,2’-二氟胞苷(吉西他滨)；5-氮杂-2’-脱氧-2’,2’-二氟胞苷；5-氮杂-2’-脱氧-2’-氟胞苷；1-β-D-呋喃核糖基-2(1H)-嘧啶酮(Zebularine)；2’,3’-二脱氧-5-氟-3’-硫杂胞苷(Emtriva)；2’-环胞苷(安西他滨)；1-β-D-***呋喃糖基-5-氮杂胞嘧啶(法扎拉滨或ara-AC)；6-氮杂胞苷(6-氮杂-CR)；5,6-二氢-5-氮杂胞苷(dH-氮杂-CR)；N⁴-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞苷(卡培他滨)；N⁴-十八烷基-阿糖胞苷、和反油酸阿糖胞苷。

5-氮杂胞苷和其他胞苷类似物被批准皮下(SC)或静脉(IV)给药以治疗一些增殖性疾病。例如，通过消除SC给药可能出现的注射部位反应和/或通过允许改善患者依从性，胞苷类似物的口服给药对于患者和医生将是更为理想的和方便的。然而，由于化学不稳定性、酶不稳定性和/或差渗透性，已经证明胞苷类似物很难口服递送。例如，胞苷类似物被认为在胃的酸性环境中是酸活性和不稳定的。之前试图开发胞苷类似物的口服剂型要求药核有肠溶衣，以防止可理解的和可接受的活性药物成分(API)在胃中发生治疗上不能接受的水解，从而使得药物优选在下胃肠道的特定区域被吸收，比如小肠中的空肠。参见，例如，Sands,et al.,U.S.Patent Publication No.2004/0162263(App.No.10/698,983).此外，本领域中普遍接受的观点是水会导致的胞苷类似物在配制过程中不利的水解降解，随后影响到API在剂型中的稳定性。因此，应用到用于胞苷类似物的预期口服递送的药核的包衣之前仅限于基于有机溶剂的体系，以使API暴露于水中最少化。

在某些实施方案中，胞苷类似物为5-氮杂胞苷。在其它实施方案中，胞苷类似物为5-氮杂-2’-脱氧胞苷(地西他滨或5-氮杂-CdR)。在仍然其它实施方案中，胞苷类似物为例如∶1-β-D-***呋喃糖基胞嘧啶(阿糖胞苷或ara-C)；伪异胞苷(psi ICR)；5-氟-2’-脱氧胞苷(FCdR)；2’-脱氧-2’,2’-二氟胞苷(吉西他滨)；5-氮杂-2’-脱氧-2’,2’-二氟胞苷；5-氮杂-2’-脱氧-2’-氟胞苷、1-β-D-呋喃核糖基-2(1H)-嘧啶酮(Zebularine)；2’,3’-二脱氧-5-氟-3’-硫杂胞苷(Emtriva)；2’-环胞苷(安西他滨)；1-β-D-***呋喃糖基-5-氮杂胞嘧啶(法扎拉滨或ara-AC)；6-氮杂胞苷(6-氮杂-CR)；5,6-二氢-5-氮杂胞苷(dH-氮杂-CR)；N4-戊氧基羰基-5’-脱氧-5-氟胞苷(卡培他滨)；N4-十八烷基-阿糖胞苷；反油酸阿糖胞苷；或其衍生物或相关类似物。

在某些实施方案中，示例性的胞苷类似物具有如下提供的结构∶

5.4制备TOR激酶抑制剂的方法

TOR激酶抑制剂可以通过标准熟知的合成方法获得，参见例如March,J.AdvancedOrganic Chemistry；Reactions Mechanisms和Structure,4th ed.,1992。因此，用于制备式(III)所示的化合物和中间体的起始原料是市售可获得的或可以使用已知的合成方法和试剂由市售可获得的物质制备。

制备式(I)的化合物的具体方法公开在2012年2月7日授权的美国专利No.8,110,578和2013年10月29日授权的美国专利No.8,569,494中，将其全部内容以引用方式并入本文。

5.5使用方法

在某些实施方案中，癌症为头癌、颈癌、眼癌、口癌、咽喉癌、食道癌、支气管癌、喉癌、咽癌、胸癌、骨癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、***癌、膀胱癌、子宫癌、子***、乳腺癌、卵巢癌、睾丸癌或其它生殖器官癌、皮肤癌、甲状腺癌、血液癌、***癌、肾癌、肝癌、胰腺癌和脑癌或中枢神经***的癌症。

在其它实施方案中，癌症为实体瘤。在某些实施方案中，实体瘤为复发的或难治性的实体瘤。

在一个实施方案中，实体瘤为神经内分泌肿瘤。在某些实施方案中，神经内分泌肿瘤为肠来源的神经内分泌肿瘤。在某些实施方案中，神经内分泌肿瘤具有非胰腺来源。在某些实施方案中，神经内分泌肿瘤具有肠的非胰腺来源。在某些实施方案中，神经内分泌肿瘤具有未知的原发性来源。在某些实施方案中，神经内分泌肿瘤为症状性内分泌产生肿瘤(symptomatic endocrine producing tumor)或非功能性肿瘤(nonfunctional tumor)。在某些实施方案中，神经内分泌肿瘤为局部不可切除、转移性中度、分化良好的、低度(1级)或中度(2级)。

在一个实施方案中，癌症不为非小细胞肺癌(NSCLC)。

在一个实施方案中，实体瘤不为非小细胞肺癌(NSCLC)。

在另一个实施方案中，实体瘤为多形性成胶质细胞瘤(GBM)。

在另一个实施方案中，实体瘤为肝细胞癌(HCC)。

在另一个实施方案中，实体瘤为乳腺癌。在一个实施方案中，乳腺癌为激素受体阳性的。在一个实施方案中，乳腺癌为***受体阳性的(ER+、ER+/Her2-或ER+/Her2+)。在一个实施方案中，乳腺癌为***受体阴性的(ER-/Her2+)。在一个实施方案中，乳腺癌为三阴性的(TN)(不表达对应于***受体(ER)、孕酮受体(PR)的基因和/或蛋白，且不过表达Her2/neu蛋白的乳腺癌)。

在另一个实施方案中，实体瘤为结肠直肠癌(CRC)。

在另一个实施方案中，实体瘤为唾液腺癌。

在另一个实施方案中，实体瘤为胰腺癌。

在另一个实施方案中，实体瘤为囊腺癌。

在另一个实施方案中，实体瘤为肾上腺癌。

在另一个实施方案中，实体瘤为食道癌、肾癌、平滑肌肉瘤或副神经节瘤。

在一个实施方案中，实体瘤为晚期实体瘤。

在另一个实施方案中，癌症为头颈鳞状细胞癌。

在另一个实施方案中，癌症为E-二十六(ETS)过表达去势-抗性(castration-resistant)***癌。

在另一个实施方案中，癌症为E-二十六(ETS)过表达尤因氏肉瘤。

在其它实施方案中，癌症为血液肿瘤。

在其它实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。

在其它实施方案中，癌症为非霍奇金淋巴瘤。在某些实施方案中，非霍奇金淋巴瘤为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、急性骨髓性白血病(AML)、套细胞淋巴瘤(MCL)或ALK+退行性大细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，非霍奇金淋巴瘤是晚期实体非霍奇金淋巴瘤。在一个实施方案中，非霍奇金淋巴瘤为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。

在其它实施方案中，癌症为与涉及mTOR、PI3K或Akt激酶及其突变体或同工型的通路相关的癌症。在本文提供的方法范围内的其他癌症包括与下述激酶的通路有关的那些：PI3K、PI3K、PI3K、KDR、GSK3、GSK3、ATM、ATX、ATR、cFMS、和/或DNA-PK激酶及其突变体或同工型。在某些实施方案中，与mTOR/PI3K/Akt通路有关的癌症包括实体瘤和血液肿瘤，例如多发性骨髓瘤、、弥漫性大B细胞淋巴瘤、急性髓细胞样淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病；和实体瘤，例如乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胃癌、子***和***癌；成胶质细胞瘤；肾癌；肝细胞癌；结肠癌；神经内分泌肿瘤；头颈肿瘤；和肉瘤，比如尤文氏肉瘤。

在其它实施方案中，癌症为骨髓增生异常综合征。在某些实施方案中，骨髓增生异常综合征亚型为难治性贫血(RA)或具有环形铁粒幼红细胞的难治性贫血(如果伴随嗜中性白血球减少症或血小板减少症或需要输血)、具有过量胚细胞的难治性贫血(RAEB)、具有过量胚细胞的转化型难治性贫血(RAEB-T)或慢性骨髓单核细胞性白血病(CMMoL)。

在某些实施方案中，本文提供用于在患有实体瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的实体瘤应答评价标准(RECIST 1.1)的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有白血病的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的国家癌症研究所资助的关于慢性淋巴细胞性白血病的工作组(National Cancer Institute-Sponsored Working Group)(NCI-WG CLL)的应答定义的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有***癌的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的***癌工作组2(PCWG2)标准的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有非霍奇金淋巴瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的非非霍奇金淋巴瘤的国际研讨会标准(IWC)的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，本文提供用于在患有多发性骨髓瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的多发性骨髓瘤的国际统一应答标准(IURC)的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合在某些实施方案中，本文提供用于在患有多形性成胶质细胞瘤的患者中获得完全应答、部分应答或疾病稳定的多形性成胶质细胞瘤的神经肿瘤学(RANO)工作组的应答评价的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供用于提高患有癌症的患者的存活率而没有肿瘤进展的方法，包括向所述患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在一个实施方案中，本文提供用于预防或延迟患者中进行性疾病的实体瘤应答评价标准(例如，RECIST 1.1)的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。在一个实施方案中，预防或延迟进行性疾病的特征在于或实现了靶病变的总尺寸改变，例如与预处理相比改变在-30％和+20％之间。在另一个实施方案中，靶病变的尺寸变化为总尺寸减小超过30％，例如，与预处理相比靶病变尺寸减小超过50％。在一个实施方案中，预防的特征在于或实现了与预处理相比非靶病变的尺寸减小或其进展延迟。在一个实施方案中，预防实现了或特征在于与预处理相比靶病变数量降低。在另一个实施方案中，预防实现了或特征在于与预处理相比非靶病变的数量或质量降低。在一个实施方案中，预防实现了或特征在于与预处理相比靶病变不存在或消失。在另一个实施方案中，预防是实现了或特征在于与预处理相比非-靶病变不存在或消失。在另一个实施方案中，预防实现了或特征在于与预处理相比预防了新病变。在另一个实施方案中，预防是实现了或特征在于与预处理相比预防了疾病的临床征兆或症状，比如癌症相关的恶病质或增加的疼痛。

在某些实施方案中，本文提供与预处理相比减小患者的靶病变尺寸的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供与预处理相比减小患者的非靶病变尺寸的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供与预处理相比实现了患者中靶病变数量减小的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供与预处理相比实现了患者中非靶病变数量减小的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供与预处理相比实现了患者中不存在所有靶病变的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供与预处理相比实现了患者中不存在所有非靶病变的方法，包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，本文提供治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合，其中所述治疗产生完全应答、部分应答或疾病稳定，如通过实体瘤的应答评价标准(例如，RECIST 1.1)测定。

在某些实施方案中，本文提供治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合，其中所述治疗产生与预处理相比，靶病变尺寸减小、非靶病变尺寸减小和/或不存在新靶和/或非靶病变。

在某些实施方案中，本文提供治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合，其中所述治疗产生预防或阻止临床进展，比如癌症相关的恶病质或增加的疼痛。

在某些实施方案中，本文提供用于治疗癌症的方法，所述方法包括向患有癌症的患者给药有效量的TOR激酶抑制剂与有效量的胞苷类似物的组合，其中所述治疗产生抑制疾病进程、抑制肿瘤生长、减少原发肿瘤、缓解肿瘤相关症状、(包括肿瘤分泌激素，比如导致类癌瘤综合征的那些)、延迟原发肿瘤或继发肿瘤的出现、减缓原发肿瘤或继发肿瘤的发展、减少原发肿瘤或继发肿瘤的发生、减慢或降低疾病的继发效应的严重程度、阻止肿瘤生长和使肿瘤消退、增加疾病进展时间(TTP)、增加无进展存活率(PFS)、和/或增加总生存率(OS)的一种或多种。

在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂为如本文所述的化合物。在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂为式(I)的化合物。在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂为来自表A的化合物。在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂为化合物1(具有分子式C₂₁H₂₇N₅O₃的本文所述TOR激酶抑制剂)。在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂为化合物2(具有分子式C₁₆H₁₆N₈O的本文所述TOR激酶抑制剂)。在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂为化合物3(具有分子式C₂₁H₂₄N₈O₂的本文所述TOR激酶抑制剂)。在一个实施方案中，TOR激酶抑制剂为化合物4(具有分子式C₂₀H₂₅N₅O₃的本文所述TOR激酶抑制剂)。在一个实施方案中，化合物1为7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((1r,4r)-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并-[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮，或者称为7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((反式)-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮，或7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-((1R*,4R*)-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮。在另一个实施方案中，化合物2为1-乙基-7-(2-甲基-6-(1H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮或其互变异构体，例如1-乙基-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮，或1-乙基-7-(2-甲基-6-(1H-1,2,4-***-5-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮。在另一个实施方案中，化合物3为7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-1-(2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮。在另一个实施方案中，化合物4为1-((反式)-4-羟基环己基)-7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮，或者称为1-((1r,4r)-4-羟基环己基)-7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮。在一个实施方案中，化合物4为化合物1的代谢物。

与胞苷类似物组合给药的TOR激酶抑制剂可以与放射治疗或手术组合。在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂与胞苷类似物组合给予正在经受放射治疗的患者、先前已经受放射治疗的患者或将要经受放射治疗的患者。在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂与胞苷类似物组合给予已接受手术比如肿瘤去除手术的患者。

本文进一步提供用于治疗之前已进行癌症治疗以及之前没有进行治疗的患者的方法。本文进一步提供治疗已接受手术以尝试治疗癌症以及没有接受手术的患者的方法。因为患有癌症的患者具有异质临床表现和不同的临床结果，因此给予患者的治疗可以根据他/她的预后而不同。有经验的临床医师能够在无过度实验的情况下容易地确定可有效地用于治疗患有癌症患者的第二试剂、外科手术类型和非基于药物的标准疗法的类型。

在某些实施方案中，TOR激酶抑制剂与胞苷类似物组合循环地给药患者。循环治疗包括给药一段时间的活性剂，接着停止一段时间，并且重复该连续给药。循环疗法可减少耐药性的发展，避免或减少副作用，和/或改善治疗功效。

在一个实施方案中，每日以单剂量或分开剂量给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物组合约3天、约5天、约一周、约两周、约三周、约四周(例如，28天)、约五周、约六周、约七周、约八周、约十周、约十五周或约二十周，接着是约1天至约十周的停止期。在一个实施方案中，本文提供的方法预期约一周、约两周、约三周、约四周、约五周、约六周、约八周、约十周、约十五周或约二十周的循环疗法。在某些实施方案中，以单剂量或分开剂量给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合约3天、约5天、约一周、约两周、约三周、约四周(例如，28天)、约五周或约六周，伴随约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、29或30天的停止期。在某些实施方案中，停止期为1天。在某些实施方案中，停止期为3天。在某些实施方案中，停止期为7天。在某些实施方案中，停止期为14天。在某些实施方案中，停止期为28天。给药循环的频率、数量和长度可以增减。

在一个实施方案中，本文提供的方法包括∶i)向受试者给药第一日剂量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合；ii)任选地停止至少一天的时期，其中没有向受试者给药胞苷类似物；iii)向受试者给药第二剂量的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合；和iv)重复步骤ii)至iii)多个时间。

在一个实施方案中，本文提供的方法包括在第1天向受试者给药一个剂量的胞苷类似物，接着在第2天和随后数天向受试者给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，在约1至约52周之间连续给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，连续给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。在某些实施方案中，连续给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合约7、约14、约21、约28、约35、约42、约84或约112天。

在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，连续地给药TOR激酶抑制剂28天，同时连续地给药胞苷类似物21天，接着7天不给药胞苷类似物。在一个实施方案中，在28天的循环中，在第1天单独给药胞苷类似物，在第2-21天组合给药胞苷类似物和TOR激酶抑制剂，并且在第22-28天单独给药TOR激酶抑制剂。在某些这样的实施方案中，从第2个循环开始，在第1天同时给药胞苷类似物和TOR激酶抑制剂，继续胞苷类似物直到第21天，同时继续TOR激酶抑制剂直到第28天。当长期需要时，如上所述的28天循环可以持续例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更久。

当某些实施方案中，当在28天循环中给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，在第1-7天单独给药胞苷类似物，并且在第8-28天单独给药TOR激酶抑制剂。当长期需要时，如上所述的28天循环可以持续例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更久。

当某些实施方案中，当在28天循环中给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，在第1-7天给药胞苷类似物与TOR激酶抑制剂的组合，并且在第8-28天单独给药TOR激酶抑制剂。当长期需要时，如上所述的28天循环可以持续例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更久。

在某些实施方案中，使用治疗循环给药胞苷类似物与TOR激酶抑制剂的组合，所述治疗循环包括每日一次给药约200mg的胞苷类似物7天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约200mg的胞苷类似物7天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日一次给药约200mg的胞苷类似物14天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约200mg的胞苷类似物14天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约200mg的胞苷类似物21天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约200mg的胞苷类似物21天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日三次给药约200mg的胞苷类似物7天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日三次给药约200mg的胞苷类似物14天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日一次给药约300mg的胞苷类似物7天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约300mg的胞苷类似物7天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日一次给药约300mg的胞苷类似物14天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约300mg的胞苷类似物14天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日一次给药约300mg的胞苷类似物21天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日两次给药约300mg的胞苷类似物21天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日三次给药约300mg的胞苷类似物7天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，使用治疗循环给药包含胞苷类似物的制剂，所述治疗循环包括每日三次给药约300mg的胞苷类似物14天或更多天与每日一次给药约2.5mg至约50mg(比如约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg、约30mg或约45mg)的TOR激酶抑制剂的组合。在某些实施方案中，本文提供的方法包括使用一种或多种本文提供的循环给药包含胞苷类似物与TOR激酶抑制剂的组合的制剂，并重复该循环例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或大于12个月的时期。TOR激酶抑制剂和胞苷类似物可以各自独立地每日一次(QD)、两次(BD)或三次(TID)给药。

在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，TOR激酶抑制剂的给药量为每日约2.5mg至约50mg(比如，每日约2.5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约30mg或约45mg)，并且胞苷类似物的给药量为约50mg/m²/天至约2,000mg/m²/天(比如约50mg/m²/天、约75mg/m²/天、约100mg/m²/天、约120mg/m²/天、约140mg/m²/天、约150mg/m²/天、约180mg/m²/天、约200mg/m²/天、约220mg/m²/天、约240mg/m²/天、约250mg/m²/天、约260mg/m²/天、约280mg/m²/天、约300mg/m²/天、约320mg/m²/天、约350mg/m²/天、约380mg/m²/天、约400mg/m²/天、约450mg/m²/天或约500mg/m²/天)。在某些实施方案中，给药约2.5mg/天的TOR激酶抑制剂与约75mg/m²/天或约100mg/m²/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约10mg/天的TOR激酶抑制剂与约75mg/m²/天或约100mg/m²/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约15mg/天的TOR激酶抑制剂与约75mg/m²/天或约100mg/m²/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约20mg/天的TOR激酶抑制剂与约75mg/m²/天或约100mg/m²/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约30mg/天的TOR激酶抑制剂与约75mg/m²/天或约100mg/m²/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约45mg/天的TOR激酶抑制剂与约75mg/m²/天或约100mg/m²/天的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，TOR激酶抑制剂的给药量为每日约2.5mg至约50mg(比如，每日约2.5mg、约10mg、约15mg、约16mg、约20mg，约45mg)，并且胞苷类似物的给药量为约约50mg至约1000mg/天(比如约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约120mg、约140mg、约150mg、约160mg、约180mg、约200mg、约220mg、约240mg、约250mg、约260mg、约280mg、约300mg、约320mg、约340mg、约350mg、约360mg、约380mg、约400mg、约420mg、约450mg、约480mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg或约1,000mg/天)。在某些实施方案中，给药约2.5mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约10mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约15mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约16mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约20mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约30mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。在某些实施方案中，给药约45mg/天的TOR激酶抑制剂与约200mg或约300mg/天的胞苷类似物的组合。

在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，TOR激酶抑制剂：胞苷类似物的比例为约1:1至约1:30。在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，TOR激酶抑制剂：胞苷类似物之比为小于约1:1，小于约1:10或小于约1:30。在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合，TOR激酶抑制剂：胞苷类似物之比为约1:1、约1:10或约1:30。

在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，给药的胞苷类似物的量的范围可以为例如在约50mg/m²/天至约2,000mg/m²/天之间、在约100mg/m²/天至约1,000mg/m²/天之间、在约50mg/m²/天至约200mg/m²/天之间、在约50mg/m²/天至约100mg/m²/天之间、在约100mg/m²/天至约500mg/m²/天之间或在约120mg/m²/天至约250mg/m²/天之间。在某些实施方案中，具体剂量为例如约50mg/m²/天、约75mg/m²/天、约100mg/m²/天、约120mg/m²/天、约140mg/m²/天、约150mg/m²/天、约180mg/m²/天、约200mg/m²/天、约220mg/m²/天、约240mg/m²/天、约250mg/m²/天、约260mg/m²/天、约280mg/m²/天、约300mg/m²/天、约320mg/m²/天、约350mg/m²/天、约380mg/m²/天、约400mg/m²/天、约450mg/m²/天或约500mg/m²/天。在某些实施方案中，具体剂量为例如至多约100mg/m²/天、至多约120mg/m²/天、至多约140mg/m²/天、至多约150mg/m²/天、至多约180mg/m²/天、至多约200mg/m²/天、至多约220mg/m²/天、至多约240mg/m²/天、至多约250mg/m²/天、至多约260mg/m²/天、至多约280mg/m²/天、至多约300mg/m²/天、至多约320mg/m²/天、至多约350mg/m²/天、至多约380mg/m²/天、至多约400mg/m²/天、至多约450mg/m²/天、至多约500mg/m²/天、至多约750mg/m²/天或至多约1000mg/m²/天。

在某些实施方案中，当给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，给药的胞苷类似物的量的范围可以例如在约5mg/天至约2,000mg/天之间、在约10mg/天至约2,000mg/天之间、在约20mg/天至约2,000mg/天之间、在约50mg/天至约1,000mg/天之间、在约100mg/天至约600mg/天之间、在约100mg/天至约500mg/天之间、在约150mg/天至约500mg/天之间、在约250mg/天至约350mg/天或在约150mg/天至约250mg/天之间。在某些实施方案中，具体剂量为例如约10mg/天、约20mg/天、约50mg/天、约75mg/天、约100mg/天、约120mg/天、约150mg/天、约180mg/天、约200mg/天、约240mg/天、约250mg/天、约280mg/天、约300mg/天、约320mg/天、约350mg/天、约360mg/天、约400mg/天、约450mg/天、约500mg/天、约600mg/天、约700mg/天、约800mg/天、约900mg/天、约1,000mg/天、约1,200mg/天或约1,500mg/天。在某些实施方案中，具体剂量为例如至多约10mg/天、至多约20mg/天、至多约50mg/天、至多约75mg/天、至多约100mg/天、至多约120mg/天、至多约150mg/天、至多约200mg/天、至多约250mg/天、至多约300mg/天、至多约350mg/天、至多约400mg/天、至多约450mg/天、至多约500mg/天、至多约600mg/天、至多约700mg/天、至多约800mg/天、至多约900mg/天、至多约1,000mg/天、至多约1,200mg/天或至多约1,500mg/天。

5.6药物组合物和给药途径

本文提供了包含有效量的TOR激酶抑制剂和有效量的胞苷类似物的组合物，和包含有效量的TOR激酶抑制剂和胞苷类似物及可药用载体或溶媒的组合物。

在某些实施方案中，本文所述药物组合物适于口服、非肠道、粘膜、经皮或局部给药。

组合物可以以常规制剂形式口服或肠胃外给药至患者，所述常规制剂形式比如胶囊、微囊、片剂、颗粒剂、散剂、锭剂、丸剂、栓剂、注射剂、混悬剂和糖浆。适合的制剂可以使用常规的有机或无机添加剂，通过通常采用的方法制备，所述有机或无机添加剂为比如赋形剂(例如，蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙)、粘合剂(例如，纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、***胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)、崩解剂(例如，淀粉、羧基甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代的羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙)、润滑剂(例如，硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或月桂基硫酸钠)、矫味剂(例如，柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橘子粉)、防腐剂(例如，苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯)、稳定剂(例如，柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸)、助悬剂(例如，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝)、分散剂(例如，羟丙基甲基纤维素)、稀释剂(例如，水)和底蜡(例如，可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。药物组合物中的TOR激酶抑制剂的有效量可以在发挥预期效果的水平；例如，在用于口服和肠胃外给药的单位剂量中约0.005mg/kg患者体重至约10mg/kg患者体重。

待给药患者的TOR激酶抑制剂的剂量和胞苷类似物的计量相当程度上是可变的，并且可以服从卫生护理专业人员的判断。通常，TOR激酶抑制剂和胞苷类似物可以约0.005mg/kg患者体重至约10mg/kg患者体重的剂量每天一至四次给药患者，但是上述剂量可以根据患者的年龄、体重和医学病症和给药类型而适当变化。在一个实施方案中，剂量为约0.01mg/kg患者体重至约5mg/kg患者体重、约0.05mg/kg患者体重至约1mg/kg患者体重、约0.1mg/kg患者体重至约0.75mg/kg患者体重或约0.25mg/kg患者体重至约0.5mg/kg患者体重。在一个实施方案中，每天给予一个剂量。在任何给定的情况下，给药的TOR激酶抑制剂的量将取决于比如活性组分的溶解度、使用的制剂和给药途径的因素。

在另一个实施方案中，本文提供为包括单独的在约1mg至约2000mg、约1mg至约200mg、约35mg至约1400mg、约125mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、约500mg至约1000mg、约1mg至约30mg、约1mg至约25mg或约2.5mg至约20mg的TOR激酶抑制剂或与胞苷类似物的组合的单位剂量制剂。在另一个实施方案中，本文提供包括单独的1mg、2.5mg、5mg、about7.5mg、8mg、10mg、15mg、20mg、30mg、35mg、45mg、50mg、70mg、100mg、125mg、140mg、175mg、200mg、250mg、280mg、350mg、500mg、560mg、700mg、750mg、1000mg或1400mg的TOR激酶抑制剂或与胞苷类似物的组合的单位剂量制剂。在另一个实施方案中，本文提供包括单独的约2.5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约30mg或约45mg的TOR激酶抑制剂或与胞苷类似物的组合的单位剂量制剂。在一个特定的实施方案中，本文提供包括单独的约5mg、约7.5mg和约10mg的TOR激酶抑制剂或与胞苷类似物的组合的单位剂量制剂。

在一个特定的实施方案中，本文提供包括约7.5mg、约8mg、约10mg、约15mg、约30mg、约45mg、约50mg、约75mg、约100mg或约400mg的TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合的单位剂量制剂。

在另一个实施方案中，本文提供包括单独的在约5mg至约2,000mg之间、在约10mg至约2,000mg之间、在约20至约2,000mg之间、在约50mg至约1,000mg之间、在约100mg至约600mg之间、在约100mg至约500mg之间、在约150mg至约500mg之间、在约250mg至约350mg之间或在约150mg至约250mg之间的胞苷类似物或与TOR激酶抑制剂的组合的单位剂量制剂。在某些实施方案中，胞苷类似物的具体量为例如约10mg、约20mg、约50mg、约75mg、约100mg、约120mg、约150mg、约180mg、约200mg、约240mg、约250mg、约300mg、约320mg、约350mg、约360mg、约400mg、约420mg、约450mg、约480mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1,000mg、约1,200mg或约1,500mg。在某些实施方案中，胞苷类似物的具体量为例如至多约10mg、至多约20mg、至多约50mg、至多约75mg、至多约100mg、至多约120mg、至多约150mg、至多约200mg、至多约250mg、至多约300mg、至多约350mg、至多约400mg、至多约450mg、至多约500mg、至多约600mg、至多约700mg、至多约800mg、至多约900mg、至多约1,000mg、至多约1,200mg或至多约1,500mg。

在某些实施方案中，本文提供其中TOR激酶抑制剂∶胞苷类似物之比为约1:1至约1:10的单位剂量制剂。在某些实施方案中，本文提供其中TOR激酶抑制剂∶胞苷类似物之比小于约1:1、小于约1:3或小于约1:10的单位剂量制剂。在某些实施方案中，本文提供其中TOR激酶抑制剂∶胞苷类似物之比为约1:1、约1:3或约1:10的单位剂量制剂。

TOR激酶抑制剂可以与胞苷类似物组合每天给药一次、两次、三次、四次或更多次。

出于方便的原因，TOR激酶抑制剂可以与胞苷类似物组合口服给药。在一个实施方案中，当口服给药时，TOR激酶抑制剂胞苷类似物的组合与膳食和水一起给予。在另一个实施方案中，TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合分散在水或果汁(例如，苹果汁或橙汁)中，并作为混悬剂口服给药。在另一个实施方案中，当口服给药时，TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合在禁食状态下给药。

TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合也可以静脉内给药，比如静脉内输注，或皮下给药，比如皮下注射。给药方式由卫生护理专业人员判断，并且可以部分取决于医学病症的部位。

在一个实施方案中，本文提供含有TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合而不含另外的载体、赋形剂或溶媒的胶囊。

在另一个实施方案中，本文提供包括有效量的TOR激酶抑制剂、有效量的胞苷类似物和可药用载体或溶媒的组合物，其中可药用载体或溶媒可以包括赋形剂、稀释剂或其混合物。在一个实施方案中，组合物为药物组合物。

组合物可以是片剂、咀嚼片、胶囊、溶液、肠胃外溶液、锭剂、栓剂和混悬剂等的形式。组合物可以经配制而在剂量单位中含有每日剂量或每日剂量的适宜部分，所述剂量单位可以是单一片剂或胶囊或适宜体积的液体。在一个实施方案中，溶液由水溶性盐比如盐酸盐来制备。通常，所有组合物均根据药物化学中的已知方法制备。胶囊可以通过将TOR激酶抑制剂与适合的载体或稀释剂混合并用适当量的混合物填充胶囊来制备。常用的载体和稀释剂包括，但不限于惰性粉状物质，比如多种不同的淀粉，粉状纤维素，尤其是结晶和微晶纤维素，糖比如果糖、甘露醇和蔗糖，谷粉和类似的可食用粉末。

片剂可以通过直接压制、湿法制粒或干法制粒来制备。其制剂通常加入稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂以及该化合物。典型的稀释剂包括，例如，多种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙、无机盐(比如氯化钠)和糖粉。粉状纤维素衍生物也是有用的。在一个实施方案中，药物组合物不含乳糖。典型的片剂粘合剂为下述物质，比如淀粉、明胶和糖(比如乳糖、果糖、葡萄糖等)。天然和合成树胶也是适宜的，其包括***胶、藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮等。聚乙二醇、乙基纤维素和蜡也可以充当粘合剂。本文提供包括的化合物1的示例性片剂制剂。

片剂制剂中可能需要润滑剂以防止片剂和冲压机粘在模具中。润滑剂可以选自这样的滑的固体，如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油。片剂崩解剂是在润湿时膨胀以使片剂破碎并释放化合物的物质。其包括淀粉、粘土、纤维素、藻胶和树胶。更特别地，可以使用例如玉米和马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、木纤维素、粉状天然海绵、阴离子交换树脂、藻酸、瓜尔胶、柑桔渣和羧基甲基纤维素以及月桂基硫酸钠。片剂可以涂布有作为调味剂和密封剂的糖，或涂布有成膜保护剂以改变片剂的溶解性质。组合物还可以配制成咀嚼片，例如通过在制剂中使用物质如甘露醇配制。

当希望作为栓剂给药TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合时，可以使用典型的基质。可可脂是传统的栓剂基质，其可以通过加入蜡以稍微升高其熔点而改变。特别地包括各种分子量的聚乙二醇的水可混溶性栓剂基质被广泛使用。

TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合的作用可以通过适当的制剂而延迟或延长。例如，TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合的缓慢溶解的小丸可以被制备并加入片剂或胶囊剂中或作为缓释可植入装置。该技术还包括制备数种不同溶解速率的小丸，并使用小丸的混合物填充胶囊。片剂或胶囊可以涂布在可预测的期间抵抗溶解的膜。即使是肠胃外制剂也可以通过将TOR激酶抑制剂与胞苷类似物的组合溶解或悬浮在允许其缓慢分散于血清中的油性或乳化的溶媒中制备成长效的。

在某些实施方案中，化合物1以在2013年6月6日公开的美国专利申请公开No.2013-0142873中的制剂给药，将其全部内容引入本文(特别地参见[0323]段至[0424]段，和[0636]段至[0655]段)。在其它实施方案中，化合物1以在2013年5月29日提交的美国临时专利申请No.61/828,506中的制剂给药，将其全部内容引入本文(特别地参见[0246]段至[0403]段，和[0571]段至[0586]段)。

在某些实施方案中，化合物2以在2013年4月17日提交的美国临时申请No.61/813,064中的制剂给药，将其全部内容引入本文(特别地参见[0168]段至[0189]段，和[0262]段至[0294]段)。在其它实施方案中，化合物2以在2013年12月3日提交的美国临时专利申请No.61/911,201中的制剂给药，将其全部内容引入本文(特别地参见[0170]段至[0190]段，和[0264]段至[0296]段)。

5.7试剂盒

在某些实施方案中，本文提供包括TOR激酶抑制剂和胞苷类似物的试剂盒。

在某些实施方案中，本文提供包括TOR激酶抑制剂(比如本文所述那些)的一个或多个单位剂型和胞苷类似物(比如本文所述那些)的一个或多个单位剂型的试剂盒。

在某些实施方案中，本文提供的试剂盒进一步包括使用说明书，比如用于给药TOR激酶抑制剂和胞苷类似物的使用说明书。

6.实施例

6.1生物化学分析

mTOR HTR-FRET分析.下述为可用于测定测试化合物的TOR激酶抑制活性的分析的实例。将TOR激酶抑制剂溶于DMSO中，并制备成10mM储液，并且适当稀释用于实验。如下制备试剂：

“单纯TOR缓冲液”(用于稀释高甘油TOR级分)：10mM Tris pH7.4，100mM NaCl，0.1％吐温-20，1mM DTT。将Invitrogen mTOR(cat#_PV4753)稀释在该缓冲液中至0.200μg/mL的分析浓度。

ATP/底物溶液：0.075mM ATP，12.5mM MnCl₂，50mM Hepes，pH7.4，50mMβ-GOP，250nM微囊藻素LR，0.25mM EDTA，5mM DTT和3.5μg/mL GST-p70S6。

检测试剂溶液：50mM HEPES,pH 7.4,0.01％Triton X-100,0.01％BSA,0.1mMEDTA,12.7μg/mL Cy5- GST Amersham(Cat#PA92002V),9ng/mL磷酸化p70S6(Thr389)(CellSignaling Mouse Monoclonal#9206L),627ng/mL小鼠Lance Eu(Perkin Elmer Cat#AD0077)。

向20μL的单纯TOR缓冲液中加入0.5μL在DMSO中的测试化合物。为了引发反应，将5μL的ATP/底物溶液加入到20μL的单纯TOR缓冲溶液(对照)和上述制备的化合物溶液中。在60min之后，通过加入5μL的60mM EDTA溶液停止分析；随后，加入10μL检测试剂溶液，并且使混合物静置至少2小时，之后在经设定以检测LANCE Eu TR-FRET(在320nm下激发且在495/520nm下发射)的Perkin-Elmer Envision微板读数器上读数。

在mTOR HTR-FRET分析中测试TOR激酶抑制剂，发现其中具有活性，其中在分析中某些化合物具有低于10μM的IC₅₀，一些化合物具有在0.005nM至250nM之间的IC₅₀，其它化合物具有在250nM至500nM之间的IC₅₀，其它化合物具有在500nM至1μM之间的IC₅₀，并且其它化合物具有在1μM至10μM之间的IC₅₀。

DNA-PK分析。使用Promega DNA-PK分析试剂盒(catalog#_V7870)中提供的方法进行DNA-PK分析。DNA-PK酶购自Promega(Promega cat#_V5811)。

选择的如本文所述TOR激酶抑制剂在该分析中具有或预期具有10μM以下的IC₅₀，其中如本文所述的一些TOR激酶抑制剂具有1μM以下的IC₅₀而其它具有0.10μM以下的IC₅₀。

6.2基于细胞的分析

材料和方法细胞系和细胞培养物∶细胞系购自American Type CultureCollection(ATCC)，且保存在ATCC推荐的培养基中。使用或可使用的卵巢癌细胞系包括下述的：Ovcar-3、Ovcar-4、Ovcar-5、Oncar-8和Caov-3。使用或可使用的多发性骨髓瘤(MM)包括下述的：NCI-H929、LP-1、MM1.s、U266B1、DF-15和RPMI-8226人MM-来源的细胞系。通过将H929亲代细胞(H929)连续暴露于递增浓度的最少5个月来建立耐药性细胞系H929/R1和H929/R4。通过将H929亲代细胞连续暴露于0.1％DMSO来建立对照细胞系H929/D。将已建立的H929/R1和H929/R4每3天用10μMREVLIMID脉冲处理一次，而将H929/D每3天用0.1％DMSO脉冲处理一次。肝细胞癌、乳腺癌、肺癌和黑素瘤细胞系购自市售来源(ATCC、DSMZ、HSRRB)，并常规保存在37℃、具有5％CO₂的含有10％胎牛血清的RPMI1640或DMEM中。使用或可使用的肝细胞癌(HCC)细胞系包括下述的∶Hep3B、HepG2、HuH-7、PLC-PRF-5、SK-HEP-1、SNU-182、SNU-387、SNU-398、SNU-423、SNU-449和SNU-387。

卵巢细胞系的细胞活力分析。使用CellLuminescent CellViability Assay,Catalog Number G7570(Promega Corporation,Madison,WI)评价细胞活力。该分析是基于存在的三磷酸腺苷(ATP)的定量来测定培养物中活细胞数量的均质方法，所述三磷酸腺苷为代谢活性细胞的指示物。均质分析程序包括向在补充有血清的培养基中培养的细胞中直接加入单一试剂(CellTiter-Glo试剂)。以之前对于每个细胞系最优化的密度将细胞铺板在96孔平底板(Costar目录号33595)中。在37℃下，在5％CO2中培养细胞过夜。第二天，制备化合物稀释液且分析所有浓度，一式三份。在37℃下，在5％CO₂中使用TOR激酶抑制剂或TOR激酶抑制剂和第二活性剂培养细胞3天。在3天的培养期之后，在振摇下将100μL的CellTiter-Glo试剂加入到每个孔中2分钟，并在室温下进一步培养10分钟(不振摇)以稳定信号。在VICTOR X2多标记平板读数器上测量发光。使用在相同的板中DMSO对照(无化合物)反应作为100％细胞生长来计算生长抑制百分比。对于单个化合物处理(分别为TORKi和第二活性剂)，使用来自IDBS的软件XLfit，对一式三份的平均值绘图以获得IC₅₀值。用于在XLfit中测定IC₅₀的公式为模型编号205，其利用4参数对数模型或S形剂量-反应模型来计算IC₅₀值。结果列在表1中。

测量TOR激酶抑制剂与第二活性剂的组合对细胞增殖抑制的协同作用。首先，用TOR激酶抑制剂和单独第二活性剂进行细胞活力分析，以测定随后组合研究的剂量范围。为了保持TOR激酶抑制剂和第二活性剂的类似效力，最高组合剂量从每种化合物的近似IC₅₀开始，稀释期间的常数比例为1:1或1:10。将TOR激酶抑制剂和第二活性剂各自加入到包含最终浓度0.2％DMSO的一个孔中(一式三份)。在相同的板中一式三份，同时或顺序用TOR激酶抑制剂和每种第二活性剂(包含0.2％DMSO)处理细胞。将受化合物处理影响的细胞数标准化成DMSO对照(100％活力)，并将数据引入到CalcuSyn软件(V2.1,Biosoft)中。根据具有数学模型和模拟的Chou Talalay’s CI方法，使用CalcuSyn，通过组合指数(CI)定量协同作用。如果CI值在0.1-0.3之间，则该值指示强协同作用，在0.3-0.7之间则指示协同作用，在0.7-0.85之间则指示中等协同作用，在0.85-0.90之间则指示弱协同作用，和在0.90-1.10之间则指示接近加合作用(Trends Pharmacol.Sci.4,450-454,1983)。ED₅₀是获得50％生长抑制的平均作用剂量。结果列在表1中。

表1.化合物1、化合物3和在卵巢癌细胞系中ED₅₀下的组合指数(CI).

肝细胞系的细胞活力分析。将TOR激酶抑制剂和第二试剂经由声学分配器(EDCBiosystems)加入到空的384-孔平的、透明底的、黑色聚苯乙烯、TC-处理的板(Cat#_3712Cat#_3712,Corning,MA)中。将TOR激酶抑制剂横穿该板连续稀释3倍，得到九个浓度，并且将第二试剂沿该板连续稀释3倍，得到七个浓度。进行两种试剂的正交滴定以产生63种不同的化合物组合。还单独加入两种化合物以确定其作为单一试剂的效果。使用DMSO(无化合物)作为100％活力的对照和背景(无细胞)。最终分析DMSO浓度为0.2％(v/v)。将细胞以最优化的密度直接加入到化合物之上，以确保在培养基中4天后细胞生长处于分析的线性检测范围内。在其终点下，使用Promega’s CellTiter-Glo Luminescent Cell ViabilityAssay(Cat#_G7573,Promega,WI)，使用制造商的标准操作方法测定细胞活力。将背景扣除的荧光计数转化成相对于DMSO处理的对照细胞的细胞活力的百分数。使用XLFit4(IDBS,UK)，通过使用4参数逻辑模型/S形剂量-反应模型[y＝(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))]拟合对照数据的百分数产生剂量反应曲线。为了评价两种试剂对细胞系的组合效应，通过比较其组合反应与单独的两种试剂的理论加合反应对数据进行分析。使用分数乘积法计算两种试剂(A和B)的预期加合效应(Webb 1961)∶(fu)A,B＝(fu)A x(fu)B，其中fu＝不受处理影响的分数。当观察到组合中不受影响的分数小于(fu)A,B时，确定组合的协同作用，而当观察到组合中不受影响的分数＝(fu)A,B时，确定加合效应。结果列在表2中。

表2.在所选HCC细胞系中使用TOR激酶抑制剂和第二活性剂与Vidaza的组合

在人肝细胞癌锚定(Anchorage)非依赖性生长分析中化合物1与5-AZA的组合作用。

概述。在2种人肝细胞癌(“HHC”)细胞系、HepG2和SK-Hep-1中，通过集落形成分析评价化合物1对锚定-非依赖性生长(AIG)的作用。在两个细胞系中，化合物1显示在0.1至100μM的浓度下均现实剂量-依赖性和显著抗集落形成活性。在两个细胞系中，化合物1与5-AZA协同抑制集落形成。

研究目的∶该研究的目的是评价化合物1和化合物1与5-AZA的组合在2个HHC肿瘤细胞系中对肿瘤细胞锚定-非依赖性生长的直接作用。该评价在集落形成分析中进行。

材料和方法。

研究材料∶细胞系/细胞。人细胞系HepG2和SK-Hep-1细胞购自American TypeCulture Collection(ATCC；Manassas,VA)。在含有10％Premium FBS(Lonza,Walkersville,MD)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)(Mediatech；Mannasas,VA)中培养细胞。

实验过程。(1)单一试剂集落形成分析：将Nobel琼脂(1.2克；BD；Franklin Lakes,NJ)置于100mL无菌瓶中。加入无菌水(100mL)，并施加微波直到琼脂煮沸。混合同等体积的琼脂和2X RPMI培养基(ECE Scientific；Doylestown，PA)，并将300μL转移到24孔平底板(BD；Franklin Lakes，NJ)的每个孔中。将各板保持在4℃下，直到琼脂固化。收集HepG2和SK-Hep-1细胞的培养物，并以3.6×10³细胞/mL再悬浮在培养基中。在无菌管中混合同等体积的琼脂、2X RPMI和细胞悬液(1:1:1)，并立即将500μL/孔转移到24-孔板中。将各板保持在4℃，直到琼脂固化。向各孔中加入含有化合物或DMSO的培养基(500μL)(每个处理的最终DMSO浓度为0.2％)。以0.1、0.3、1、3、10和30μM的最终浓度测试化合物1。以1、3和10μM的最终浓度测试5-AZA。开始细胞处理，一式三份。在37℃下，在5％CO₂气氛中培养细胞8-10天。使用Nikon DXM1200数字照相机和Nikon ACT1软件对各孔进行照相(2X放大倍率)，保存为TIFF文件。使用ImageQuant TL(GE Healthcare；Piscataway,NJ)集落计数软件对集落计数。(2)组合研究集落形成分析。将Nobel琼脂(1.2克；BD；Franklin Lakes,NJ)置于100-ml无菌瓶中。加入无菌水(100mL)，并施加微波直到琼脂煮沸。混合同等体积的琼脂和2X RPMI培养基(ECE Scientific；Doylestown，PA)，并将300μL转移到24孔平底板(BD；FranklinLakes，NJ)的每个孔中。将各板保持在4℃下，直到琼脂固化。收集HepG2和SK-Hep-1细胞的培养物，并以3.6×10³细胞/mL再悬浮在培养基中。在无菌管中混合同等体积的琼脂、2XRPMI和细胞悬液(1:1:1)，并立即将500μL/孔转移到24-孔板中。将各板保持在4℃，直到琼脂固化。向各孔中加入含有化合物或DMSO的培养基(500μL)(每个处理的最终DMSO浓度为0.2％)。用如下单一处理来处理细胞：以0.1和0.3μM的最终浓度测试化合物1。以3μM测试5-AZA。测试0.1和0.3μM的化合物1与3μM的5-AZA。开始细胞处理，一式三份。在37℃下，在5％CO₂气氛中培养细胞8-10天。使用Nikon DXM1200数字照相机和Nikon ACT1软件对各孔进行照相(2X放大倍率)，保存为TIFF文件。使用ImageQuant TL(GE Healthcare；Piscataway,NJ)集落计数软件对集落计数。

数据分析。通过标准化成DMSO对照(100％对照)计算集落形成抑制的百分数。使用GraphPad Prism v5.01，使用单因素ANOVA和Dunnett事后检验或不成对t检验计算相对于DMSO对照的显著性。为了评价组合效果，通过比较其组合反应与单独的两种试剂的理论加合反应分析来自三个独立实验的数据。

使用分数乘积法计算两种试剂(A和B)的预期加合效应[Webb]:(fu)A,B＝(fu)A x(fu)B；其中fu＝不受处理影响的分数。当观察到组合中不受影响的分数显著地小于(fu)A,B时，确定组合的协同作用，而当观察到组合中不受影响的分数等于(fu)A,B时，确定加合效应。当观察到不受影响的分数显著地大于(fu)A,B时，发生部分加合效应。

结果。在HepG2细胞中用单一试剂处理的集落形成分析的结果呈现在图1中。用0.1、0.3、1、3、10和30μM化合物1处理的HepG2细胞显示集落形成的显著抑制分别为对照的74、57、33、24、16和11％(p值<0.001)。在1、3和10μM下的5-AZA显著地抑制对照的43-76％的集落形成，如图2所示(p值＜0.001)。

在SK-Hep-1细胞中用单一试剂处理的集落形成分析的结果呈现在图3中。用0.3-30μM化合物1处理后，在SK-Hep-1细胞中观察到集落形成的显著抑制(对照的0-45％)(p值＜0.001)。用3μM和更高浓度的化合物1处理，引起集落形成的100％抑制。在10μM下，5-AZA显著地抑制对照的集落形成38％，如图4所示(p值<0.001)。

在HepG2细胞中化合物1组合集落形成分析的结果呈现在图5和表3中。图5显示0.1μM化合物+3μM 5-AZA对于集落形成具有不显著的加合效应，而0.3μM化合物1与3μM 5-AZA的组合协同地减少HepG2集落的数量(p值<0.001)。

在SK-Hep-1细胞中化合物1组合集落形成分析的结果呈现在图6和表4中。图6显示化合物1+3μM 5-AZA的组合协同地减少SK-Hep-1集落的数量(p值＜0.05)。

结论.通过在HepG2和SK-Hep-1细胞中的集落形成分析来评价化合物1与5-AZA的组合对于锚定-非依赖性生长的作用。在两种细胞系中，在0.1至100μM的浓度下，化合物1都显示出剂量-依赖性和显著地抗集落形成。

在HepG2细胞中，化合物1与5-AZA的组合具有加合至协同作用。

在SK-HEP-1细胞中，化合物1与5-AZA的组合具有协同作用。

表3.化合物1HepG2集落形成分析的结果

将HepG2细胞铺板在琼脂中，并用化合物培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞＝0％抑制的抑制百分数。结果表示n＝3次试验的平均值，一式三份。使用分数乘积法计算化合物组合的组合作用。***p<0.001.ns＝不显著。

表4.化合物1SK-Hep-1集落形成分析的结果。

将SK-Hep-1细胞铺板在琼脂中，并用化合物培养8天，之后对集落计数。将数据计算为相对于仅用DMSO处理的细胞＝0％抑制的抑制百分数。结果表示n＝3次试验的平均值，一式三份。使用分数乘积法计算化合物组合的组合作用。*通过不成对t检验，相对于理论加和性的p<0.05。

化合物2与5-AZA在乳腺癌细胞系中的组合作用。

抗增殖分析.将细胞从液氮保存的状态解冻。一旦细胞膨胀并以其预期的倍增时间***，开始筛选。将细胞以如表5所列细胞密度接种在384-孔组织培养物处理的板中的生长培养基中。

表5∶乳腺癌细胞系组

经由离心在分析板中将细胞平衡，并且在处理之前，放入连接到给药模组的37℃培养箱中二十四小时。在处理时，收集一组分析板(其未接受处理)，并通过加入ATP Lite(Perkin Elmer)测量ATP水平。在Envision板读数器上，使用超灵敏荧光读取这些T零点(T₀)板。用化合物(单一化合物或组合)培养处理的分析板71小时。在72小时之后，使用ATPLite将各板展开进行终点分析。经由自动化过程收集所有数据点；质量控制；并分析。如果分析板通过下述质量控制标准，则可接受该分析板：在整个试验中相对荧光素酶值一致。Z-因子得分大于0.6，未处理的/溶媒对照在板上表现一致。协同得分的计算提供如下。

使用生长抑制(GI)作为细胞活力的量度。在剂量给药时(T₀)和72小时之后(T₇₂)，测量溶媒的细胞活力。0％的GI读数表示没有生长抑制-用化合物处理的细胞和T₇₂溶媒信号匹配。GI 100％表示完全生长抑制-通过化合物处理的细胞和T₀溶媒信号匹配。在具有GI100％的各孔中，细胞数量在处理期间没有增加，并且对于在该作用水平下达到平台的化合物而言可显示抑制细胞效应。GI 200％表示培养孔中所有细胞完全死亡。达到GI 200％的活性水平的化合物被认为是细胞毒性的。通过应用下述测试和等式计算GI：

如果T<V₀:100*[1-(T-V₀)/V₀]

如果T≥V₀:100*[1-(T-V₀)/(V-V₀)]

其中T为测试制品的信号量度，V为溶媒处理的对照量度，V₀为在零时间的溶媒对照量度。该公式来源于国家癌症研究所的NCI-60高通量筛选中使用的生长抑制算法。

协同得分分析。使用Chalice软件(Zalicus Inc.,Cambridge MA)确定协同得分。简而言之，为了测量超过Loewe加和性的组合作用，使用称为协同得分的表征协同相互作用强度的标量量度(scalar measure).协同得分计算如下：

协同得分＝log f_X log F_Y∑max(0,I_data)(I_data–I_Loewe)

其中I_data为在给定药物浓度组合下观察到的抑制作用。

加和性的计算为：

满足(X/X_I)+(Y/Y_I)的I_Loewe＝1,

其中X_I和Y_I为观察到的组合作用I的单一试剂有效浓度。

观察到超过Loewe加和性的活性确定为可能的协同相互作用。

相对于所有溶媒-处理的对照孔的中值，计算基质中每种组分试剂和组合点的抑制分数。该协同得分等式使用Loewe加和性模型整合超过数字上衍生自组分试剂的活性的模型表面的矩阵中各点处的实验观察的活性体积。协同作用得分等式(上述)中其它术语被用于标准化用于单个试剂的各种稀释因数和允许整个试验中比较协同作用得分。纳入阳性抑制门控或I_数据乘数消除接近零效应水平的噪音，和偏移在高活性水平下存在的协同相互作用的结果。

基于自我交叉(self-cross-based)的组合筛选分析。其中协同作用得分大于自交平均值+两个标准偏差(2σ’s)的组合可被认为是在95％置信水平的候选协同作用。

为了客观地建立用于组合筛选分析的击中标准，选择20种化合物在十七个细胞系组中进行自我交叉，作为凭经验确定基准加合反应、非协同反应的方法。通过选择具有多种最大反应值和单一试剂剂量反应斜度(steepness)的化合物确定所述20种自我交叉化合物的同一性。那些产生在统计学地代替那些基准加和性值的效应水平的药物组合被认识具有协同作用。

化合物2在该十七个细胞系组中具有不同活性。对于每个细胞系，以384-孔板格式进行三倍10点剂量滴定。对于其中GI₅₀达到大于50％的抑制水平的细胞系，中值GI₅₀为0.14μM。

表6∶用化合物2和5-Aza处理的乳腺癌细胞系组的协同得分。超过平均自我交叉阈值+两个标准偏差(2σ)的协同得分被粗体描绘。

结论∶如表6中所见，化合物2与5-Aza的组合在多种乳腺癌细胞系中(及尤其在基底样乳腺癌细胞系中)显示协同作用。

TOR激酶抑制剂和第二活性剂的活性

可以使用例如卵巢癌细胞系，在细胞活力分析中与TOR激酶抑制剂组合地测试第二活性剂的其它实例为例如胞苷类似物。

可以使用例如多发性骨髓瘤细胞系，在细胞活力分析中与TOR激酶抑制剂组合地测试第二活性剂的其它实例为例如胞苷类似物。

可以使用例如肝细胞癌细胞系，在细胞活力分析中与TOR激酶抑制剂组合地测试第二活性剂的其它实例为例如胞苷类似物。

6.3体内分析

DLBCL异种移植物模型。将人类DLBCL(WSU-DLCL2)癌细胞系注射到SCID(严重复合免疫缺陷)老鼠中。在体外培养基中繁殖癌细胞系。通过将1×10⁶个细胞注射到小鼠中产生载有肿瘤的动物。在动物接种之后，允许该肿瘤在随机化之前生长至一定尺寸。将具有100至400mm³的异种移植物肿瘤的小鼠集中在一起，并随机分到不同处理组中。将TOR激酶抑制剂和胞苷类似物以不同剂量水平给药至载有肿瘤的小鼠。另外，该研究中包括参考化疗剂，比如CHOP治疗剂(环磷酰胺、多柔比星、环磷酰胺的组合)和阴性对照。给药途径可以包括皮下(SC)、腹膜内(IP)、静脉内(IV)、肌内(IM)和口服(PO)。在研究过程中测量肿瘤和体重，并记录发病率和死亡率。使用卡尺测量量度，每周两次，并使用式W²×L/2计算肿瘤体积。

OCI-Ly10 DLBCL异种移植物模型。OCI-Ly10细胞源自弥漫性-大B细胞淋巴瘤(一类非霍奇金淋巴瘤)。简言之，对雌性CB.17SCID小鼠皮下接种5×10⁶个OCI-Ly10细胞，并允许肿瘤生长至约50-300mm³。将载有具有类似尺寸肿瘤的异种移植物的小鼠集中在一起，并随机分到不同处理组中。典型的功效研究设计包括基于之前的单一试剂研究，以不同剂量水平和时间表给药一种或多种化合物至载有肿瘤的小鼠。在约28天的处理期间，使用卡尺每周两次测量肿瘤体积，并使用标准方法(例如使用式W²×L/2)计算肿瘤体积。可以任选地在处理后进一步测量肿瘤体积。将使用标准统计方法进行统计分析。

6.4化合物制剂

用于本文提供的方法的化合物1的示例性制剂列在下表7-10中。

表7

表8

表9

表10

用于本文提供的方法中的化合物2的示例性制剂列在下表11中。

表11∶示例性的片剂制剂

已经引用了许多参考文献，将其公开内容以其全文引入本文作为参考。本文公开的实施方案不受实施例中公开的特定实施方案的范围的限制，所述实施例旨在说明所公开的实施方案的一些方面，并且任何功能等效的实施方案被本发明所涵盖。实际上，除了本文所显示和描述的那些之外，本文公开的实施方案的各种修饰将对本领域技术人员变得显而易见，并且预期落入附加权利要求书的范围内。

Claims

1.1-乙基-7-(2-甲基-6-(4H-1,2,4-***-3-基)吡啶-3-基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮或7-(6-(2-羟基丙烷-2-基)吡啶-3-基)-1-(反式-4-甲氧基环己基)-3,4-二氢吡嗪并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮或其可药用盐、立体异构体或互变异构体和5-氮杂胞苷在制备用于治疗癌症的药物或试剂盒中的用途，所述癌症为肝癌或乳腺癌。

2.权利要求1的用途，其中所述癌症为乳腺癌。

3.权利要求1的用途，其中所述癌症为肝癌。

4.权利要求1的用途，其中所述乳腺癌或肝癌为复发性或难治性乳腺癌或肝癌。

5.权利要求1的用途，其中所述乳腺癌或肝癌为晚期乳腺癌或肝癌。

6.权利要求2的用途，其中所述乳腺癌为激素受体阳性的、***受体阳性的、***受体阴性的或三阴性的。

7.权利要求1的用途，其中所述乳腺癌或肝癌为与涉及mTOR、PI3K或Akt激酶及其突变体或同工型的通路相关的乳腺癌或肝癌，或者与下述激酶的通路相关的乳腺癌或肝癌：PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ、KDR、GSK3α、GSK3β、ATM、ATX、ATR、cFMS和/或DNA-PK激酶及其突变体或同工型。