CN103191466A - 制备人体或动物脱细胞组织的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种制备人体或动物脱细胞组织的方法，该方法是将人类或动物的组织如：皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜、血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱等，用病毒灭活、脱脂、脱细胞等工艺处理后得到的脱细胞组织，为一种无细胞的三维网状结构组织，保留细胞外基质成分。该方法制备的组织，可以作为人体植入性的修复材料，也可以作为组织工程细胞培养的支架材料。皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜等也可作为创面覆盖材料。

Description

制备人体或动物脱细胞组织的方法
技术领域
本发明涉及一种制备人体或动物脱细胞组织的方法。
背景技术
现有的人体或动物脱细胞组织的制备，由于工艺、处理剂等原因，处理时间长，效率低，易造成组织结构的破坏，影响产品质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生产效率高，产品质量好的制备人体或动物脱细胞组织的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法，其特征是：包括下列步骤：
（一）组织初加工：将人体或动物的组织用机械方法去除表面脂肪，按临床用途制备成临床所需的各种形状；
（二）病毒灭活、脱脂、脱细胞：
依次经下列步骤处理：
（1）将经过初加工的人体或动物组织，用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟；所述第一灭活、脱脂液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂及余量的水组成； 
（2）将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟；所述第二灭活、脱脂液由1%-4%的烧碱、0.5%-2%的表面活性剂及余量的水组成；
（3）将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理10~30分钟；所述灭活、脱细胞液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂、0.2%~2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7，处理温度为30℃-40℃；
（4）循环操作：根据组织的不同，将上述步骤（1）、（2）、（3）循环操作2~7次； 
（5）组织保存：将制备好的组织浸泡于保存液中，用PE或PVC材质的密封袋保存，根据需要保存1~12个月；所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7；
（6）冻干、包装、辐照消毒：将产品低温冷冻干燥，成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌，即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
步骤（4）循环操作时，皮肤组织循环操作2~3次；胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜组织循环操作1~2次；血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱组织循环操作3~7次。
本发明生产效率高，产品质量好；将人类或动物的组织如：皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜、血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱等，用病毒灭活、脱脂、脱细胞等工艺处理后得到脱细胞组织，为一种无细胞的三维网状结构组织，保留细胞外基质成分。该方法制备的组织，可以作为人体植入性的修复材料，也可以作为组织工程细胞培养的支架材料。皮肤、胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜等也可作为创面覆盖材料。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法，包括下列步骤：
（一）组织初加工：将人体或动物的组织（本实施例为：胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜或心包膜组织）用机械方法去除表面脂肪，按临床用途制备成临床所需的各种形状；
（二）病毒灭活、脱脂、脱细胞：
依次经下列步骤处理：
（1）将经过初加工的人体或动物组织，用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理30分钟；所述第一灭活、脱脂液由2%的过氧乙酸、1的氯化钠溶液、2%的表面活性剂及余量的水组成；用过氧乙酸和氯化钠溶液进行灭活，同时加入表面活性剂进行脱脂，在病毒灭活的同时又达到脱脂的效果，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（2）将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理20分钟；所述第二灭活、脱脂液由4%的烧碱、1%的表面活性剂及余量的水组成；用2%的烧碱进行病毒灭活，同时加入0.5%%的表面活性剂进行脱脂，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（3）将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理30分钟；所述灭活、脱细胞液由2%的过氧乙酸、1%的氯化钠溶液、0.5%的表面活性剂、0.2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成，并用0.1%%的纯碱调pH值为5，处理温度为30℃℃；在病毒灭活的同时，进行脱脂和脱细胞，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（4）循环操作：将上述步骤（1）、（2）、（3）循环操作1~2次；循环操作具有病毒灭活彻底，脱脂、脱细胞时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。一般情况下，在24小时内完成组织脱细胞过程。
（5）组织保存：将制备好的组织浸泡于保存液中，用PE或PVC材质的密封袋保存，根据需要保存1~12个月；所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7；保存液的配方合理，保存工艺有利于进行大规模生产，降低原料采购成本和生产成本。
（6）冻干、包装、辐照消毒：将产品低温冷冻干燥，成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌，即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
实施例2：
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法，包括下列步骤：
（一）组织初加工：将人体或动物的组织（皮肤组织）用机械方法去除表面脂肪，按临床用途制备成临床所需的各种形状；
（二）病毒灭活、脱脂、脱细胞：
依次经下列步骤处理：
（1）将经过初加工的人体或动物的皮肤组织，用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10分钟；所述第一灭活、脱脂液由0.1%的过氧乙酸、3%的氯化钠溶液、1%的表面活性剂及余量的水组成；用过氧乙酸和氯化钠溶液进行灭活，同时加入表面活性剂进行脱脂，在病毒灭活的同时又达到脱脂的效果，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（2）将经上述步骤处理的人体或动物的皮肤组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理30分钟；所述第二灭活、脱脂液由1%%的烧碱、2%的表面活性剂及余量的水组成；用4%的烧碱进行病毒灭活，同时加入1%的表面活性剂进行脱脂，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（3）将经上述步骤处理的人体或动物的皮肤组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理20分钟；所述灭活、脱细胞液由1%的过氧乙酸、3%的氯化钠溶液、2%的表面活性剂、1%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成，并用0.1%的纯碱调pH值为67，处理温度为35℃；在病毒灭活的同时，进行脱脂和脱细胞，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（4）循环操作：将上述步骤（1）、（2）、（3）循环操作2~3次；循环操作具有病毒灭活彻底，脱脂、脱细胞时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。一般情况下，在24小时内完成组织脱细胞过程。
（5）组织保存：将制备好的组织浸泡于保存液中，用PE或PVC材质的密封袋保存，根据需要保存1~12个月；所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7；保存液的配方合理，保存工艺有利于进行大规模生产，降低原料采购成本和生产成本。
（6）冻干、包装、辐照消毒：将产品低温冷冻干燥，成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌，即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
实施例3：
一种制备人体或动物脱细胞组织的方法，包括下列步骤：
（一）组织初加工：将人体或动物的组织（本实施例为血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨或肌腱组织）用机械方法去除表面脂肪，按临床用途制备成临床所需的各种形状；
（二）病毒灭活、脱脂、脱细胞：
依次经下列步骤处理：
（1）将经过初加工的人体或动物组织，用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理20分钟；所述第一灭活、脱脂液由1%的过氧乙酸、5%的氯化钠溶液、0.5%的表面活性剂及余量的水组成；用过氧乙酸和氯化钠溶液进行灭活，同时加入表面活性剂进行脱脂，在病毒灭活的同时又达到脱脂的效果，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（2）将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10分钟；所述第二灭活、脱脂液由2%的烧碱、0.5%%的表面活性剂及余量的水组成；用1%%的烧碱进行病毒灭活，同时加入2%的表面活性剂进行脱脂，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（3）将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理10分钟；所述灭活、脱细胞液由2%的过氧乙酸、1%的氯化钠溶液、0.5%的表面活性剂、2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成，并用4%的纯碱调pH值为7，处理温度为40℃；在病毒灭活的同时，进行脱脂和脱细胞，具有脱脂时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。
（4）循环操作：将上述步骤（1）、（2）、（3）循环操作3~7次；循环操作具有病毒灭活彻底，脱脂、脱细胞时间短、效率高、对组织结构的保护作用强的特点。一般情况下，在24小时内完成组织脱细胞过程。
（5）组织保存：将制备好的组织浸泡于保存液中，用PE或PVC材质的密封袋保存，根据需要保存1~12个月；所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7；保存液的配方合理，保存工艺有利于进行大规模生产，降低原料采购成本和生产成本。
（6）冻干、包装、辐照消毒：将产品低温冷冻干燥，成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌，即为成品。
第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。

Claims (5)

1.一种制备人体或动物脱细胞组织的方法，其特征是：包括下列步骤：
（一）组织初加工：将人体或动物的组织用机械方法去除表面脂肪，按临床用途制备成临床所需的各种形状；
（二）病毒灭活、脱脂、脱细胞：
依次经下列步骤处理：
（1）将经过初加工的人体或动物组织，用第一灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟；所述第一灭活、脱脂液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂及余量的水组成； 
（2）将经上述步骤处理的人体或动物组织用第二灭活、脱脂液进行病毒灭活和脱脂处理10~30分钟；所述第二灭活、脱脂液由1%-4%的烧碱、0.5%-2%的表面活性剂及余量的水组成；
（3）将经上述步骤处理的人体或动物组织用灭活、脱细胞液进行病毒灭活和脱细胞处理10~30分钟；所述灭活、脱细胞液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠溶液、0.5~2%的表面活性剂、0.2%~2%的胰酶或胰蛋白酶及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7，处理温度为30℃-40℃；
（4）循环操作：根据组织的不同，将上述步骤（1）、（2）、（3）循环操作2~7次； 
（5）组织保存：将制备好的组织浸泡于保存液中，用PE或PVC材质的密封袋保存，根据需要保存1~12个月；所述保存液由0.1%~2%的过氧乙酸、1%~5%的氯化钠及余量的水组成，并用0.1%-4%的纯碱调pH值为5~7；
（6）冻干、包装、辐照消毒：将产品低温冷冻干燥，成型包装、再经γ射线辐照或环氧乙烷消毒灭菌，即为成品。
2.根据权利要求1所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法，其特征是：第一灭活、脱脂液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
3. 根据权利要求1所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法，其特征是：第二灭活、脱脂液中的表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚或曲拉酮。
4. 根据权利要求1、2或3所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法，其特征是：灭活、脱细胞液中的表面活性剂为十二烷基磺酸钠或曲拉酮。
5. 根据权利要求1、2或3所述的制备人体或动物脱细胞组织的方法，其特征是：步骤（4）循环操作时，皮肤组织循环操作2~3次；胸腹膜、食道黏膜、小肠黏膜、心包膜组织循环操作1~2次；血管、神经、心脏瓣膜、骨、软骨、肌腱组织循环操作3~7次。
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