CN102580153B - 一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法 - Google Patents

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本发明公开了一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，将动物皮肤通过制备断层皮片、病毒灭活、脱脂、脱细胞、冻干、裁剪、成型、包装和辐照消毒工艺后得到脱细胞真皮基质医用组织补片。本发明的优点：脱脂时间短，效率高，脱细胞彻底，对真皮细胞外基质天然结构损害轻的优点。

Description

一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法
技术领域
本发明涉及一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法。
背景技术
脱细胞真皮基质医用组织补片是在组织工程学基础上发展起来的组织工程项目，目的就是利用真皮的细胞外基质来进行组织修复。取材于天然的皮肤组织，经过特殊的理化处理，将组织中可能引起人体植入后的免疫排异反应的成分去除，同时保留了原有组织的立体支架结构，因此它具有诱导组织再生的作用。已有的脱细胞真皮基质生产工艺存在以下不足：操作较复杂，周期较长，效率较低；容易造成基质的损坏。因此，需要提供一种新的技术方案来解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产周期短、效率高、对真皮细胞外基质天然结构损害轻的制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法。
本发明采用的技术方案是：
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由猪皮、牛皮或羊皮制备而成，包括以下步骤：
 a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1-2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片。
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1%-2.0%的过氧乙酸和质量浓度1.0%-5.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30-60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1: 4-7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0%-4.0%纯碱、质量浓度1.0%-4.0%烧碱和质量浓度0.1%-1.0%表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂30-60分钟，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，皮片与混合脱脂剂的质量比为1: 4-7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%-0.5%胰酶、质量浓度0.1%-0.3%激活剂、质量浓度0.2%-0.5%脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞30-60分钟，所述激活剂为质量浓度0.1%-0.3%硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2%-0.5%平平加，质量浓度0.2%-0.5%十二烷基硫酸钠中的一种，皮片与脱细胞液的质量比为1:4-7；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.1-0.5cm，网孔密度1-5个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.1-0.5cm，圆孔密度1-5个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.01-0.3cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
本发明的有益效果：（1）b步骤采用过氧乙酸和氯化钠溶液组成的病毒灭活溶液进行灭活，既达到了病毒灭活的效果，又避免了过氧乙酸溶液灭活病毒而产生的断层皮片肿胀的问题；（2）c步骤中由纯碱、烧碱、表面活性剂组成的混合脱脂剂具有脱脂时间短、效率高、对皮片组织结构的保护作用强的优点；（3）d步骤中采用酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺，具有脱细胞彻底、时间短、效率高，对真皮细胞外基质天然结构损害轻的优点。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本方明的进一步限定。
实施例1
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由猪皮、牛皮或羊皮制备而成，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1%的过氧乙酸和质量浓度1.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1: 4；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0%纯碱、质量浓度1.0%烧碱和质量浓度0.1%平平加组成的混合脱脂剂进行脱脂30分钟，皮片与混合脱脂剂的质量比为1: 4；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%胰酶、质量浓度0.1%激活剂硫酸铵、质量浓度0.2%脱脂剂平平加组成的脱细胞液进行脱细胞30分钟，皮片与脱细胞液的质量比为1: 4；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.1cm，网孔密度1个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.1cm，圆孔密度1个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.01cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
实施例2
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由猪皮、牛皮或羊皮制备而成，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1%的过氧乙酸和质量浓度1.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1: 4；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0%纯碱、质量浓度1.0%烧碱和质量浓度0.1%平平加组成的混合脱脂剂进行脱脂30分钟，皮片与混合脱脂剂的质量比为1: 4；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%胰酶、质量浓度0.1%激活剂硫酸铵、质量浓度0.2%脱脂剂十二烷基氨基丙酸钠组成的脱细胞液进行脱细胞30分钟，皮片与脱细胞液的质量比为1: 4；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.1cm，网孔密度1个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.1cm，圆孔密度1个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.01cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
实施例3
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由猪皮、牛皮或羊皮制备而成，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为1.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度1.0%的过氧乙酸和质量浓度3.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活45分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:5.5；
c、脱脂工艺：采用质量浓度2.5%纯碱、质量浓度2.5%烧碱和质量浓度0.5%十二烷基氨基丙酸钠组成的混合脱脂剂进行脱脂45分钟，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:5.5；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.3%胰酶、质量浓度0.2%激活剂硫酸铵、质量浓度0.3%脱脂剂平平加组成的脱细胞液进行脱细胞45分钟，皮片与脱细胞液的质量比为1:5.5；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.3cm，网孔密度3个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.3cm，圆孔密度3个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.1cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
实施例4
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由动物皮肤如猪、牛、羊制备而成，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为1.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度1.0%的过氧乙酸和质量浓度3.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活45分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:5.5；
c、脱脂工艺：采用质量浓度2.5%纯碱、质量浓度2.5%烧碱和质量浓度0.5%十二烷基氨基丙酸钠组成的混合脱脂剂进行脱脂45分钟，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:5.5；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.3%胰酶、质量浓度0.2%激活剂硫酸铵、质量浓度0.3%脱脂剂十二烷基硫酸钠组成的脱细胞液进行脱细胞45分钟，皮片与脱细胞液的质量比为1:5.5；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.3cm，网孔密度3个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.3cm，圆孔密度3个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.1cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
实施例5
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由猪皮、牛皮或羊皮制备而成，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度2.0%的过氧乙酸和质量浓度5.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1: 7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度4.0%纯碱、质量浓度4.0%烧碱和质量浓度1.0%脂肪醇聚氧乙烯醚组成的混合脱脂剂进行脱脂60分钟，皮片与混合脱脂剂的质量比为1: 7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.5%胰酶、质量浓度0.3%激活剂硫酸铵、质量浓度0.5%脱脂剂平平加组成的脱细胞液进行脱细胞60分钟，皮片与脱细胞液的质量比为1: 7；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.5cm，网孔密度5个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.5cm，圆孔密度5个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.3cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
实施例6
一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由动物皮肤如猪、牛、羊制备而成，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度2.0%的过氧乙酸和质量浓度5.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1: 7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度4.0%纯碱、质量浓度4.0%烧碱和质量浓度1.0%脂肪醇聚氧乙烯醚组成的混合脱脂剂进行脱脂60分钟，皮片与混合脱脂剂的质量比为1: 7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.5%胰酶、质量浓度0.3%激活剂硫酸铵、质量浓度0.5%脱脂剂十二烷基硫酸钠组成的脱细胞液进行脱细胞60分钟，皮片与脱细胞液的质量比为1: 7；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，网孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.5cm，网孔密度5个/c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.5cm，圆孔密度5个/c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.3cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
c步骤脱脂工艺中，表面活性剂还可以为曲拉酮。
本发明的有益效果：（1）b步骤采用过氧乙酸和氯化钠溶液组成的病毒灭活溶液进行灭活，既达到了病毒灭活的效果，又避免了过氧乙酸溶液灭活病毒而产生的断层皮片肿胀的问题；（2）c步骤中由纯碱、烧碱、表面活性剂组成的混合脱脂剂具有脱脂时间短、效率高、对皮片组织结构的保护作用强的优点；（3）d步骤中采用酶、激活剂和脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞工艺，具有脱细胞彻底、时间短、效率高，对真皮细胞外基质天然结构损害轻的优点。
该脱细胞真皮基质医用组织补片的应用，该脱细胞真皮基质组织补片供医疗机构用于各种原因引起的软组织缺损和薄弱的修复治疗，例如：1、各种原因引起的创面覆盖治疗；2、各种原因引起的真皮缺损和皮下软组织缺损的修复治疗；3、各种原因引起的疝的修复治疗；4、各种原因引起的硬脑膜缺损的修复治疗；5、各种原因引起的粘膜和粘膜下组织缺损的修复治疗；6、各种原因引起的软组织缺损和薄弱的整形美容修复治疗；7、各种原因引起的神经、肌腱、血管、粘连的修复治疗；8、各种原因引起的泌尿道损伤的修复治疗等等。

Claims (1)

1.一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法，该组织补片由猪皮、牛皮或羊皮制备而成，其特征在于，包括以下步骤：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1mm-2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1%-2.0%的过氧乙酸和质量浓度1.0%-5.0%的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30分钟-60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:4-7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0%-4.0%纯碱、质量浓度1.0%-4.0%烧碱和质量浓度0.1%-1.0%表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂30分钟-60分钟，所述表面活性剂为平平加、曲拉酮中的一种，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:4-7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1%-0.5%胰酶、质量浓度0.1%-0.3%激活剂、质量浓度0.2%-0.5%脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞30分钟-60分钟，所述激活剂为质量浓度0.1%-0.3%硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2%-0.5%平平加，质量浓度0.2%-0.5%十二烷基硫酸钠中的一种，皮片与脱细胞液的质量比为1：4-7；
e、冻干、裁剪、定型工艺：将经脱细胞工艺后制备好的断层皮片，放入冷冻干燥机冻干后，根据临床不同的适应症的需要，将脱细胞真皮基质分别裁剪定型成：片状型、网孔型、圆孔型、微粒型，圆孔型由片状型经网孔扎皮机制备而成，网孔型的网孔孔径为0.1 cm-0.5cm，网孔密度1个／c㎡-5个／c㎡，圆孔型由片状型经打孔机制备而成，圆孔型的孔径为0.1-0.5cm，圆孔密度1个／c㎡-5个／c㎡，微粒型由片状型经微粒粉碎机制备而成，微粒的直径为0.01cm -0.3cm；
f、包装和辐照消毒工艺：成型包装、经γ射线辐照灭菌，即为成品。
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陈磊等.复合表面活性剂处理生物源性骨组织作为骨移植材料的生物安全性研究.《中国医药生物技术》.2009,第4卷(第4期),第270页左栏第2段、右栏第5段1.2方法、第275页左栏第1段.

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