CN105727366A - 一种sis组织修复材料的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种SIS组织修复材料的制备方法及其应用，其特征在于：包括以下步骤：S01，取小肠，刮除空肠浆膜层、黏膜层及肌层，去离子水清洗后，剪断，得小肠粘膜下层；S02，脱脂：将S01中的小肠粘膜下层放入渗滤筒中，加入相当于小肠粘膜下层3~5倍重量的渗滤液浸泡至少6h，浸泡完成后开始渗滤并加入相当于小肠粘膜下层20~30倍重量的渗滤液，渗滤速度为1~2ml/min，渗滤液为乙醇和表面活性剂的混合溶液。本发明提供的一种SIS组织修复材料的制备方法及其应用，制备方法无毒，对环境友好，并且SIS的修复能力强。

Description

一种SIS组织修复材料的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种SIS组织修复材料的制备方法及其应用，属于生物材料技术领域。
背景技术
小肠黏膜下层(smallintestinesubmucosa，SIS)，为小肠的组成结构之一，是一种可降解的天然细胞外基质类生物衍生材料，含有多种生长因子，生长因子在在组织的修复和重构中有着重要的促进作用。
目前，SIS的制备方法多为化学法，化学法中多使用大量有机溶剂，表面活性剂和酶，这些物质对生长因子具有一定的毒性，使SIS中的生长因子失活，破坏或降低SIS的修复能力。还有，化学法中多使用苯，氯仿等有机溶剂，不仅使SIS制备方法毒性大，危害操作人员的身体健康，也给环境带来了严重污染。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种制备方法无毒，对环境友好，并且SIS的修复能力强的SIS组织修复材料的制备方法；进一步地，本发明保护一种SIS组织修复材料在组织修复中的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S01，取小肠，刮除空肠浆膜层、黏膜层及肌层，去离子水清洗后，剪断，得小肠粘膜下层；
S02，脱脂：将S01中的小肠粘膜下层放入渗滤筒中，加入相当于小肠粘膜下层3～5倍重量的渗滤液浸泡至少6h，浸泡完成后开始渗滤并加入相当于小肠粘膜下层20～30倍重量的渗滤液，渗滤速度为1～2ml/min，渗滤液为乙醇和表面活性剂的混合溶液；
S03，去离子水清洗脱脂后的小肠粘膜下层；
S04，脱细胞：将S03中清洗后的小肠粘膜下层用胰蛋白酶消化，消化完成后用去离子水冲洗；
S05，去垢：将脱细胞后的小肠粘膜下层常温下用清洗剂分1～3次浸泡清洗处理，再用去离子水冲洗后离心；
S06，活化：取离心后的小肠粘膜下层，按1:(60～70)W/V与0.3～0.4M乙酸混合，-5～0℃下搅拌至凝胶状，再加入适量生长因子，混匀，冷冻干燥后，消毒，即得。
S02中的表面活性剂包括CATB和SDS中的一种或两种；乙醇和表面活性剂的比例为100ml乙醇中添加0.5～0.8g表面活性剂。
所述清洗剂包括5～10％的十二烷基磺酸钠水溶液。
所述生长因子包括神经生长因子、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。
小肠粘膜下层与神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的重量比为1：(1.5×10-5～2.5×10-5)：(1.0×10-5～2.0×10-5)：(5.0×10-6～1.0×10-5)。
所述消毒的方法为采用环氧乙烷灭菌。
所述离心的转速为至少5000r/min。
一种SIS组织修复材料在组织修复中的应用，如损伤或薄弱软组织的修复、加强；修复机体体表体内软组织缺损、作为组织充填材料、充当组织加强物替代筋膜、修复膜性缺损。
CATB：十六烷基三甲基溴化铵，别称西曲溴铵，本品呈白色或浅黄色结晶体至粉末状，HLB值15.8，易熔于热水、乙醇。
SDS：十二烷基硫酸钠，易溶于热水，溶于水，溶于热乙醇，微溶于醇。
本发明的有益效果：本发明提供的一种SIS组织修复材料的制备方法及其应用，制备方法中的有机溶剂仅采用无毒的乙醇，对环境友好，无污染，不会危害操作人员的身体健康；制备方法中采用渗滤法脱脂，渗滤法脱脂溶剂用量少，脱脂效率高且脱脂彻底；在渗滤液中添加可溶于乙醇的表面活性剂的设置，进一步增强了乙醇的脱脂效果，减少了乙醇用量；离心的设置，离心后倒出上清液，取小肠粘膜下层，使活化步骤小肠粘膜下层的湿重重量可控；活化步骤的设置，即使小肠粘膜下层在化学处理过程中生长因子被破坏失活，也可以在活化步骤中恢复活性，保证小肠粘膜下层在应用过程中的修复能力。
具体实施方式
下面对本发明作更进一步的说明。
实施例1：
一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S01，取小肠，刮除空肠浆膜层、黏膜层及肌层，去离子水清洗后，剪断，得小肠粘膜下层；
S02，脱脂：将S01中的小肠粘膜下层放入渗滤筒中，加入相当于小肠粘膜下层3倍重量的渗滤液浸泡6h，浸泡完成后开始渗滤并加入相当于小肠粘膜下层20倍重量的渗滤液，渗滤速度为1ml/min，渗滤液为乙醇和表面活性剂的混合溶液；
S03，去离子水清洗脱脂后的小肠粘膜下层；
S04，脱细胞：将S03中清洗后的小肠粘膜下层用胰蛋白酶消化，消化完成后用去离子水冲洗；
S05，去垢：将脱细胞后的小肠粘膜下层常温下用清洗剂分1次浸泡清洗处理，再用去离子水冲洗后离心；
S06，活化：取离心后的小肠粘膜下层，按1:60W/V与0.3M乙酸混合，-5℃下搅拌至凝胶状，再加入适量生长因子，混匀，冷冻干燥后，消毒，即得。
S02中的表面活性剂为CATB；乙醇和表面活性剂的比例为100ml乙醇中添加0.5gCATB，超声后溶解。
所述清洗剂为5％的十二烷基磺酸钠水溶液。
所述生长因子包括神经生长因子、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。
小肠粘膜下层与神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的重量比为1：1.5×10-5：1.0×10-5：5.0×10-6。
所述消毒的方法为采用环氧乙烷灭菌。
所述离心的转速为5000r/min。
一种SIS组织修复材料在组织修复中的应用，如损伤或薄弱软组织的修复、加强；修复机体体表体内软组织缺损、作为组织充填材料、充当组织加强物替代筋膜、修复膜性缺损。
实施例2：
一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S01，取小肠，刮除空肠浆膜层、黏膜层及肌层，去离子水清洗后，剪断，得小肠粘膜下层；
S02，脱脂：将S01中的小肠粘膜下层放入渗滤筒中，加入相当于小肠粘膜下层5倍重量的渗滤液浸泡8h，浸泡完成后开始渗滤并加入相当于小肠粘膜下层30倍重量的渗滤液，渗滤速度为2ml/min，渗滤液为乙醇和表面活性剂的混合溶液；
S03，去离子水清洗脱脂后的小肠粘膜下层；
S04，脱细胞：将S03中清洗后的小肠粘膜下层用胰蛋白酶消化，消化完成后用去离子水冲洗；
S05，去垢：将脱细胞后的小肠粘膜下层常温下用清洗剂分3次浸泡清洗处理，再用去离子水冲洗后离心；
S06，活化：取离心后的小肠粘膜下层，按1:70W/V与0.4M乙酸混合，0℃下搅拌至凝胶状，再加入适量生长因子，混匀，冷冻干燥后，消毒，即得。
S02中的表面活性剂为SDS；乙醇和表面活性剂的比例为100ml乙醇中添加0.8g表面活性剂，超声后溶解。
所述清洗剂包括10％的十二烷基磺酸钠水溶液。
所述生长因子包括神经生长因子、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。
小肠粘膜下层与神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的重量比为1：2.5×10-5：2.0×10-5：1.0×10-5。
所述消毒的方法为采用环氧乙烷灭菌。
所述离心的转速为6000r/min。
一种SIS组织修复材料在组织修复中的应用，如损伤或薄弱软组织的修复、加强；修复机体体表体内软组织缺损、作为组织充填材料、充当组织加强物替代筋膜、修复膜性缺损。
实施例3：
一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S01，取小肠，刮除空肠浆膜层、黏膜层及肌层，去离子水清洗后，剪断，得小肠粘膜下层；
S02，脱脂：将S01中的小肠粘膜下层放入渗滤筒中，加入相当于小肠粘膜下层4倍重量的渗滤液浸泡10h，浸泡完成后开始渗滤并加入相当于小肠粘膜下层25倍重量的渗滤液，渗滤速度为1.5ml/min，渗滤液为乙醇和表面活性剂的混合溶液；
S03，去离子水清洗脱脂后的小肠粘膜下层；
S04，脱细胞：将S03中清洗后的小肠粘膜下层用胰蛋白酶消化，消化完成后用去离子水冲洗；
S05，去垢：将脱细胞后的小肠粘膜下层常温下用清洗剂分2次浸泡清洗处理，再用去离子水冲洗后离心；
S06，活化：取离心后的小肠粘膜下层，按1:65W/V与0.35M乙酸混合，-2℃下搅拌至凝胶状，再加入适量生长因子，混匀，冷冻干燥后，消毒，即得。
S02中的表面活性剂包括CATB和SDS；乙醇和表面活性剂的比例为100ml乙醇中添加0.6g表面活性剂，CATB和SDS的加入量均为0.3g，超声后溶解。
所述清洗剂包括6％的十二烷基磺酸钠水溶液。
所述生长因子包括神经生长因子、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。
小肠粘膜下层与神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的重量比为1：2.0×10-5：1.5×10-5：0.8×10-5。
所述消毒的方法为采用环氧乙烷灭菌。
所述离心的转速为8000r/min。
一种SIS组织修复材料在组织修复中的应用，如损伤或薄弱软组织的修复、加强；修复机体体表体内软组织缺损、作为组织充填材料、充当组织加强物替代筋膜、修复膜性缺损。
有效性检测：采用3％的戊巴比妥钠麻醉剂腹腔注射麻醉小鼠，再进行相关皮下植入试验，方法：先将小鼠背部毛清理干净，再采用打孔器分别将本发明产品(实施例1～实施例3)植入不同小鼠脊背两侧皮下，再进行缝合皮肤，并进行消毒。术后动物禁食12h，分笼饲养，连续三天肌注青霉素。观察小鼠一般状态和切口部位的表现。同时在4、12、21天处死小鼠，观察SIS软组织修复补片的形态变化和外周组织生长情况。
结果：术后小鼠生长情况良好，4天手术伤口基本愈合，SIS组织修复材料有较好的生物相容性，同时诱导周围正常组织细胞贴附、生长、增殖。表现出较好的组织修复效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S01，取小肠，刮除空肠浆膜层、黏膜层及肌层，去离子水清洗后，剪断，得小肠粘膜下层；
S02，脱脂：将S01中的小肠粘膜下层放入渗滤筒中，加入相当于小肠粘膜下层3～5倍重量的渗滤液浸泡至少6h，浸泡完成后开始渗滤并加入相当于小肠粘膜下层20～30倍重量的渗滤液，渗滤速度为1～2ml/min，渗滤液为乙醇和表面活性剂的混合溶液；
S03，去离子水清洗脱脂后的小肠粘膜下层；
S04，脱细胞：将S03中清洗后的小肠粘膜下层用胰蛋白酶消化，消化完成后用去离子水冲洗；
S05，去垢：将脱细胞后的小肠粘膜下层常温下用清洗剂分1～3次浸泡清洗处理，再用去离子水冲洗后离心；
S06，活化：取离心后的小肠粘膜下层，按1:(60～70)W/V与0.3～0.4M乙酸混合，-5～0℃下搅拌至凝胶状，再加入适量生长因子，混匀，冷冻干燥后，消毒，即得。
2.根据权利要求1所述的一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：S02中的表面活性剂包括CATB和SDS中的一种或两种；乙醇和表面活性剂的比例为100ml乙醇中添加0.5～0.8g表面活性剂。
3.根据权利要求1所述的一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：所述清洗剂包括5～10％的十二烷基磺酸钠水溶液。
4.根据权利要求1所述的一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：所述生长因子包括神经生长因子、血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子。
5.根据权利要求4所述的一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：小肠粘膜下层与神经生长因子、血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的重量比为1：(1.5×10-5～2.5×10-5)：(1.0×10-5～2.0×10-5)：(5.0×10-6～1.0×10-5)。
6.根据权利要求1所述的一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：所述消毒的方法为采用环氧乙烷灭菌。
7.根据权利要求1所述的一种SIS组织修复材料的制备方法，其特征在于：所述离心的转速为至少5000r/min。
8.根据权利要求1～7任一项制得的一种SIS组织修复材料在组织修复中的应用，如损伤或薄弱软组织的修复、加强；修复机体体表体内软组织缺损、作为组织充填材料、充当组织加强物替代筋膜、修复膜性缺损。
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