CN102906090B - 1-(5-叔丁基-2-苯基-2h-吡唑-3-基)-3-[2-氟-4-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1h-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)-苯基]-脲和相关化合物及它们在治疗中的应用 - Google Patents

1-(5-叔丁基-2-苯基-2h-吡唑-3-基)-3-[2-氟-4-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1h-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)-苯基]-脲和相关化合物及它们在治疗中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明通常涉及治疗化合物的领域且更具体地涉及下式（I）的特定化合物（为了方便，在本文中统称为“IP化合物”），其特别可用于治疗癌症，例如，由突变RAS表征（例如驱动）的癌症（“突变RAS癌症”）。本发明还涉及包含这种化合物的药物组合物、以及这种化合物和组合物在癌症如突变RAS癌症的治疗中的应用。

Description

1-(5-叔丁基-2-苯基-2H-吡唑-3-基)-3-[2-氟-4-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-B]吡啶-7-基氧基)-苯基]-脲和相关化合物及它们在治疗中的应用
相关申请
本申请涉及2010年2月1日提交的美国专利申请号61/300,085，通过参考将其内容全部并入本文中。
技术领域
本发明通常涉及治疗化合物的领域，更具体地，涉及特定化合物(为了方便，在本文中统称为“IP化合物”)，其特别可用于治疗癌症，例如，由突变RAS表征(例如驱动)的癌症(“突变RAS癌症”)。本发明还涉及包含这种化合物的药物组合物、以及这种化合物和组合物在癌症如突变RAS癌症的治疗中的应用。
背景技术
在本文中引用了大量专利和出版物以便更全面地描述和公开本发明和本发明所属的技术状态。通过参考将这些参考文献的每一个全部并入本文中，使得其程度仿佛与通过参考将各单独文献具体和单独指出以并入本文中相同。
在包含所附的权利要求书的本说明书中各处，除非需要另外说明，否则词“包含”及变形如“包括”和“含有”应被理解为含有如下含义：包含所述的整数或步骤，或者整数或步骤的组，但是不排除任意其他整数或步骤，或者整数或步骤的组。
必须注意，本说明书和所附的权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包含了所指对象的复数，除非在内容中明确地表明不是这样。因此，例如提及“药物载体”包括两种以上这种载体的混合物等。
本文中经常将范围表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一个特定值。当表示这种范围时，另一个实施方式包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应理解，特定的值形成另一个实施方式。
本发明包括可用于理解本发明的信息。不承认本文中提供的任意信息是现有技术或与要求的本发明相关，或者具体或暗示地引用的任何出版物是现有技术。
癌症和RAS
RAS蛋白是小的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，其是生长因子、细胞因子和激素受体的下游。这些细胞表面受体激活称作鸟嘌呤-核苷酸交换因子(GNEF)的蛋白，所述鸟嘌呤-核苷酸交换因子(GNEF)用GDP代替RAS蛋白上的GTP，从而刺激RAS活化。称作GTP酶-激活蛋白(GAPs)的其他蛋白刺激RAS的固有GTP酶活性，从而促进GTP水解并将RAS返回至其失活的GDP结合状态。活化的RAS与几种效应蛋白结合，包括磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶的RAF族、以及Ral鸟嘌呤-核苷酸交换因子。这些效应物又对控制细胞增殖、老化、存活和分化的信号通路的活性进行控制。在哺乳动物中存在三种RAS基因，称作HRAS、KRAS和NRAS，且它们提供重叠但不守恒的功能。
RAS蛋白在癌症中也是重要的。20-30%的人体肿瘤在一个RAS基因中窝藏身体功能获得性突变。最通常地，它们涉及用于甘氨酸12(G12)、甘氨酸13(G13)和谷氨酰胺61(Q61)的密码子，且这些突变通过不同的机理损害RAS的GAP刺激的固有GTP酶活性，从而将其陷入在活性GTP结合状态中，并使得可促进肿瘤形成。参见，例如，Downward，2003；Young等人，2009和Bos，1989。
RAS和BRAF
活性RAS蛋白激活包括RAF族的蛋白的几种下游效应物。存在三种RAF蛋白，ARAF，BRAF和CRAF。活化的RAF使称作MEK的第二蛋白激酶磷酸化和活化，然后其使称作ERK的第三蛋白激酶磷酸化和活化。ERK使大量胞质和核底物磷酸化，从而控制细胞进程如增殖、存活、分化和老化。
BRAF在癌症中是重要的，因为其在约2%的人体癌症，特别是在黑素瘤(43%的情况)、甲状腺(45%)、卵巢(10%)和结肠直肠(13%)癌症中发生突变。相反，ARAF和CRAF突变在人体癌症中非常少。然而，应注意，在癌症细胞中，致癌的RAS不通过BRAF传导信号，而是专门通过CRAF传导信号以激活MEK。
在癌症中在BRAF中描述了超过100种不同的突变，但是一种突变(在位置600处谷氨酸代替缬氨酸)占据了发生的突变的约90%。这种突变将BRAF激活500倍并使得其可以刺激构成的ERK和NFkB信号传导，刺激存活和增殖。因此，V600EBRAF可以转换细胞如成纤维细胞和黑素细胞。癌症细胞中的V600EBRAF的抑制抑制了细胞增殖并诱发体外和体内的细胞凋亡，其抑制了肿瘤细胞生长，从而证实V600EBRAF是治疗靶点。
在绝大多数癌症中，BRAF和RAS突变是相互排他的。这提供了暗示如下的基因证据：这些蛋白在相同通道上且它们在癌症细胞中驱动相同的进程。然而，在癌症细胞中在致癌的BRAF和致癌的RAS功能之间存在明显的差别。首先，RAS激活几条通道，而BRAF已知仅激活MEK/ERK通道。结果，BRAF突变细胞更依赖于MEK/ERK信号传导，因此与其中RAS发生突变的细胞相比，对BRAF或MEK抑制剂显著地更敏感。参见，例如，Garnett等人，2004；Wellbrock等人，2004；Gray-Schopfer等人，2007；Solit等人，2006。
相关化合物
Niculescu-Duvaz等人，2006(WO2006/043090A 1)在其中的41和43页描述了下列类别的化合物。所述化合物被描述为可用于治疗癌症，特别是突变BRAF癌症的BRAF抑制剂。
另外，Niculescu-Duvaz等人，2006提供了下列实例：
Niculescu-Duvaz等人，2007(WO 2007/125330A1)在其中的57和58页描述了下列类别的化合物。所述化合物被描述为可用于治疗癌症，特别是突变BRAF癌症的BRAF抑制剂。
另外，Niculescu-Duvaz等人，2007提供了下列实例：
本发明提供了替代化合物，其特征在于结构基元的特定组合，且例如，与一种或多种结构相关的已知化合物相比，其提供令人惊讶和出乎意料的活性(例如，对突变RAS癌症的活性)。
尽管已知结构相关的化合物为BRAF抑制剂，但是尚未预测，所要求的化合物对于突变RAS癌症是活性的。
附图说明
图1示出了几种本发明的化合物：AA-01、AA-02、AA-03和AA-04的化学结构。
图2示出了几种本发明的化合物：BB-01和BB-02的化学结构。
图3示出了几种比较化合物：XX-01、XX-02、XX-03和XX-04的化学结构。
图4是示出对于化合物AA-01，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系是(a)一组突变BRAF(mutBRAF)细胞系：WM266.4、A375M、UACC62；(b)一组突变RAS(mutRAS)细胞系：SW620、HCT116和WM1361；和(c)一组野生型BRAF和RAS(wtBRAFT/RAS)细胞系：SKMEL23、KM12和BT474。
图5是示出对于化合物BB-01，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图6是示出对于化合物BB-02，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图7是示出对于比较化合物XX-01，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图8是示出对于比较化合物XX-02，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图9是示出对于比较化合物XX-03，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图10是示出对于比较化合物XX-04，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图11是对于利用化合物AA-01的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图12是对于利用化合物BB-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图13是对于利用化合物AA-01的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变BRAF细胞系A375的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图14是对于利用化合物BB-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变BRAF细胞系A375的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图15是对于利用比较化合物XX-01的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图16是对于利用比较化合物XX-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图17是对于利用比较化合物XX-03的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图18是对于利用比较化合物XX-04的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
图19是对于利用比较化合物XX-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变BRAF细胞系A375的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
发明内容
本发明的一个方面涉及本文中所述的特定化合物(为了方便，在本文中统称为“IP化合物”)。
本发明的另一个方面涉及一种包含本文中所述的IP化合物的组合物(例如，药物组合物)、和药用载体或稀释剂。
本发明的另一个方面涉及制备组合物(例如，药物组合物)的方法，所述方法包括将本文中所述的IP化合物与药用载体或稀释剂混合的步骤。
本发明的另一个方面涉及一种治疗方法，包括对需要治疗的受治疗者给予治疗有效量的优选为药物组合物形式的本文中所述的IP化合物。
本发明的另一个方面涉及将本文中所述的IP化合物用于通过治疗来对人体或动物体进行治疗的方法中。
本发明的另一个方面涉及本文中所述的IP化合物在制备用于治疗的药物中的应用。
在一个实施方式中，所述治疗是癌症的治疗。
在一个实施方式中，所述癌症是实体瘤癌症（solid tumour cancer）。
在一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌；甲状腺(例如，滤泡状；未分化的***状)癌；结直肠癌；***瘤；骨髓增生异常综合征(MDS)；肺癌(例如，肺腺癌)；肝癌；白血病(例如，急性髓性白血病(AML))；黑素瘤；膀胱癌；肾癌；乳腺癌，卵巢癌症，胆管癌症或神经胶质瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是甲状腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是结直肠癌。
在一个实施方式中，所述癌症是***瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是骨髓增生异常综合征(MDS)。
在一个实施方式中，所述癌症是肺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是肺腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是肝癌。
在一个实施方式中，所述癌症是白血病。
在一个实施方式中，所述癌症是急性髓性白血病(AML)。
在一个实施方式中，所述癌症是黑素瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是膀胱癌。
在一个实施方式中，所述癌症是肾癌。
在一个实施方式中，所述癌症是乳腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是卵巢癌。
在一个实施方式中，所述癌症是胆管癌。
在一个实施方式中，所述癌症是神经胶质瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是突变RAS癌症(例如，突变RAS胰腺癌等)。
在一个实施方式中，所述癌症的特征在于或特征进一步在于肿瘤干细胞。
在一个实施方式中，所述治疗还包括利用一种或多种其他治疗剂或疗法，例如一种或多种其他抗癌药剂或疗法进行治疗。
本发明的另一个方面涉及一种试剂盒，其包括(a)本文中所述的IP化合物，优选为药物组合物的形式且以适当的容器和/或以适当的包装提供；和(b)使用说明，例如，关于如何给予所述化合物的书面说明。
本发明的另一个方面涉及可通过本文中所述的合成方法或者包含本文中所述的合成方法的方法获得的IP化合物。
本发明的另一个方面涉及通过本文中所述的合成方法或者包含本文中所述的合成方法的方法获得的IP化合物。
本发明的另一个方面涉及本文中所述的新型中间体，其适合用于本文中所述的合成方法中。
本发明的另一个方面涉及本文中所述的这种新型中间体在本文中所述的合成方法中的应用。
本领域的技术人员应理解，本发明一个方面的特征和优选实施方式也属于本发明的其他方面。
具体实施方式
化合物
本发明涉及与下列化合物结构相关的特定化合物：
与已知化合物相比，本发明化合物的特征在于结构基元的特定组合，具体地：
(A)1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基基元：
(B)连接的2-氟-苯-1,4-二基部分或连接的萘-1,4-二基基元：
(C)1-(5-叔丁基-2-苯基-2H-吡唑-3-基)-脲基基元，其中苯基任选地含有间位或对位取代基：
没有已知化合物具有所有三种这些基元。此外，利用化合物(包括已知化合物)的比较研究表明，令人惊讶和出乎意料地，与缺乏这些基元的一种或多种的比较化合物相比，具有所有三种基元的化合物(即，所要求的化合物)对突变RAS癌症具有实质上更好的活性。
因此，本发明的一个方面涉及下式化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物(在本文中统称为“IP化合物”)：
其中-J-独立地为：
且其中-R独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I；
且其中-R位于苯环上的间位或对位上。
在一个实施方式中，所述化合物选自下式的化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-RA独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I，并且其中-RA位于苯环上的间位或对位上：
在一个实施方式中，所述化合物选自下式的化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-RA独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I：
在一个实施方式中，所述化合物选自下式的化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-RA独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I：
在一个实施方式中，-RA独立地为-H、-Me、-F或-Cl。
在一个实施方式中，-RA独立地为-H或-Me。
在一个实施方式中，-RA独立地为-H。
在一个实施方式中，-RA独立地为-Me。
在一个实施方式中，-RA独立地为-F或-Cl。
在一个实施方式中，-RA独立地为-F。
在一个实施方式中，-RA独立地为-Cl。
在一个实施方式中，所述化合物选自下列化合物(即，AA-01)及其药用盐、水合物和溶剂化物：
在一个实施方式中，所述化合物选自下列化合物(即，AA-02)及其药用盐、水合物和溶剂化物：
在一个实施方式中，所述化合物选自下列化合物(即，AA-03)及其药用盐、水合物和溶剂化物：
在一个实施方式中，所述化合物选自下列化合物(即，AA-04)及其药用盐、水合物和溶剂化物：
在一个实施方式中，所述化合物选自下式的化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-RB独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I，且其中-RB位于苯环上的间位或对位上：
在一个实施方式中，所述化合物选自下式的化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-RB独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I：
及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-RB独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I：
在一个实施方式中，-RB独立地为-H、-Me、-F或-Cl。
在一个实施方式中，-RB独立地为-H或-Me。
在一个实施方式中，-RB独立地为-H。
在一个实施方式中，-RB独立地为-Me。
在一个实施方式中，-RB独立地为-F或-Cl。
在一个实施方式中，-RB独立地为-F。
在一个实施方式中，-RB独立地为-Cl。
在一个实施方式中，所述化合物选自下列化合物(即，BB-01)及其药用盐、水合物和溶剂化物：
在一个实施方式中，所述化合物选自下列化合物(即，BB-02)及其药用盐、水合物和溶剂化物：
组合
应理解，为了清楚而在单独实施方式的内容中描述的本发明的特定特征也可以在单一实施方式中以组合提供。相反，为了简洁而在单一实施方式的内容中描述的本发明的各种特征也可以单独或以任意合适的亚组合的方式提供。涉及由变量(例如，-J-、-R、-RA、-RB等)表示的化学基团的实施方式的所有组合都由本发明具体包括且公开在本文中，如同将各个和所有组合单独和明确地公开那样，到这种组合包括作为稳定的化合物(即，可以分离、表征和试验生物活性的化合物)的化合物的程度。另外，描述这种变量的实施方式中列出的化学基团的所有亚组合也由本发明具体包括并公开在本文中，如同将化学基团的各个和所有这种亚组合单独和明确地公开在本文中那样。
基本纯的形式
本发明的一个方面涉及本文中所述的IP化合物，其为基本纯的形式和/或基本不含杂质的形式。
在一个实施方式中，所述化合物为基本纯的形式和/或基本不含杂质的形式。
在一个实施方式中，所述化合物为基本纯的形式，其纯度为至少50重量%，例如，至少60重量%，例如，至少70重量%，例如，至少80重量%，例如，至少90重量%，例如，至少95重量%，例如，至少97重量%，例如，至少98重量%，例如，至少99重量%。
除非另有规定，否则基本纯的形式是指以任意立体异构体形式的化合物。例如，在一个实施方式中，基本纯的形式是指立体异构体的混合物，即，相对于其他化合物提纯的混合物。在一个实施方式中，基本纯的形式是指一种立体异构体。
在一个实施方式中，所述化合物为基本不含杂质的形式，其中所述杂质占不超过50重量%，例如，不超过40重量%，例如，不超过30重量%，例如，不超过20重量%，例如，不超过10重量%，例如，不超过5重量%，例如，不超过3重量%，例如，不超过2重量%，例如，不超过1重量%。
除非另有规定，否则杂质是指其他化合物，即除了立体异构体以外的化合物。在一个实施方式中，杂质是指其他化合物和其他立体异构体。
异构体
特定化合物可以以一种以上特定的几何异构体、光学异构体、对映体、非对映异构体、差向异构体、阿托异构体、立体异构体、互变异构体、构象异构体或异头碳形式，包括但不限于，顺-和反-形式；E-和Z-形式；c-、t-和r-形式；内-和外-形式；R-、S-和内消旋-形式；D-和L-形式；d-和l-形式；(+)和(-)形式；酮-、烯醇-和烯醇化物-形式；同-和反-形式；向斜-和背斜-形式；α-和β-形式；直立和平伏形式；船-、椅-、扭曲-、信封-和半椅-形式；和它们的组合，在下文中统称为“异构体”(或“异构体形式”)。
应注意，本文中所用的术语“异构体”特别排除结构(或构成)异构体(即，原子间的连接不同而不是仅通过原子在空间中的位置不同的异构体)。例如，提及叔丁基，-C(CH3)3不应被理解为提及其结构异构体，异丁基，-CH2CH(CH3)2。类似地，提及对氯苯基不应被理解为提及其结构异构体，间氯苯基。
应注意，术语“异构体”特别包括具有一种或多种同位素取代的化合物。例如，H可以是任意同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可以是任意同位素形式，包括12C、13C和14C；O可以是任意同位素形式，包括16O和18O；等等。
除非另有规定，否则特定化合物包括所有这种异构体形式，包括它们的混合物。
盐
可以方便地或理想地制备、提纯和/或处理所述化合物的对应盐，例如，药用盐。在Berge等人，1977，“Pharmaceutically Acceptable Salts（药用盐）”，J.Pharm.Sci.，66卷，1-19页中讨论了药用盐的实例。
例如，如果化合物是阳离子或具有可以是阳离子的官能团(例如，-NH-可以是-NH2 +-)，则可以与适当阴离子形成盐。适当的无机阴离子的实例包括但不限于源自下列无机酸：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸的盐。
适当的有机阴离子的实例包括但不限于源自下列有机酸：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸、已二磺、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟基乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊酸的盐。适当的聚合有机阴离子的实例包括但不限于源自下列聚合物酸：丹宁酸、羧甲基纤维素的阴离子。
除非另有规定，否则提及特定化合物还包括其盐形式。
水合物和溶剂化物
可以方便地或理想地制备、提纯和/或处理所述化合物的对应溶剂化物。术语“溶剂化物”在本文中以常规含义使用以指溶质(例如，化合物，化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂是水，则溶剂化物可以方便地指水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
除非另有规定，否则提及特定化合物也包括其溶剂化物和水合物形式。
化学合成
在本文中描述了用于化学合成本发明化合物的方法。这些和/或其他熟知的方法可以以已知的方式修改和/或改变以便促进本发明的范围内的其他化合物的合成。
在Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry，第5版，1989，(编辑：Furniss，Hannaford，Smith和Tatchell)(由Longmann出版，UK)中提供了可用于本文中所述的化合物的制备的普通实验室方法和程序的说明。
在Heterocyclic Chemistry，第3版，1998，(编辑：Joule，Mills和Smith)(由Chapman & Hall出版，UK)中描述了用于合成特别是吡啶化合物的方法。
本文中所述的IP化合物可以通过中间体(2)制备。这些中间体可以由市售原料2-氨基-3-硝基-4-氯吡啶(1)和3-氟-4-氨基苯酚(R1是-H且R2是-F)或4-氨基-1-萘酚(R1和R2一起是-CH=CH-)制备。然后，例如作为BOC氨基甲酸酯在氨基处对中间体(2)进行选择性保护以提供中间体(3)。
方案1
中间体(3)还可以由2-氨基-3-硝基-4-氯吡啶(1)和N-BOC-保护的3-氟-4-氨基苯酚或N-BOC-保护的4-氨基-1-萘酚直接获得。
方案2
可以利用Pd/C和甲酸铵或氢或者利用NiCl2和NaBH4将保护的中间体(3)的硝基还原成氨基以得到二氨基中间体(4)。
方案3
在N3处烷基化(通过相对于吡啶环)的中间体(8)可以由中间体(4)制备。将中间体(4)上的更亲核的3-氨基转化为氨基甲酸乙酯以提供中间体(5)，并利用TFA将BOC基团除去以提供中间体(6)。利用NaH的酸性氨基甲酸酯质子的脱质子化在N3上提供阴离子，将其烷基化而提供中间体(7)。在碱的存在下将中间体(7)环化而得到对应的中间体(8)。
方案4
使中间体(8)与3-叔丁基-5-异氰酸酯基-1-芳基-1H-吡唑反应而提供对应的脲。相应的异氰酸酯可以通过胺与光气、三光气或它们的衍生物的反应获得，或者通过利用例如二苯基膦酰基叠氮化物将对应的羧酸转化为酰基叠氮化物，接着进行柯提斯重排（Curtius rearrangement）而获得。吡唑上的芳基可以是例如未取代或被烷基(例如，-Me)或卤素原子(例如，-F、-Cl、-Br、-I)取代的(例如，间位取代的或对位取代的)。
方案5
组合物
本发明的一个方面涉及一种组合物(例如，药物组合物)，其包含本文中所述的IP化合物和药用载体、稀释剂或赋形剂。
在一个实施方式中，所述组合物还包含一种或多种(例如，1、2、3、4种)本文中所述的其他治疗剂。
本发明的另一个方面涉及一种制备组合物(例如，药物组合物)的方法，所述方法包括将本文中所述的IP化合物和药用载体、稀释剂或赋形剂混合。
本发明的另一个方面涉及一种制备组合物(例如，药物组合物)的方法，所述方法包括将本文中所述的IP化合物；一种或多种(例如，1、2、3、4种)本文中所述的其他治疗剂；以及药用载体，稀释剂或赋形剂混合。
应用
本文中所述的化合物可用于治疗癌症，例如，突变RAS癌症。
为了消除疑义，本文中所用的术语“突变RAS癌症”是指由突变RAS，例如由RAS基因(即，HRAS、KRAS和NRAS)中的一种中的一种或多种突变(例如，功能获得性突变)表征(例如驱动)的癌症。如本文中所讨论的，最常见的RAS突变涉及用于甘氨酸12(G12)、甘氨酸13(G13)和谷氨酰胺61(Q61)的一种或多种的密码子。
在治疗方法中的应用
本发明的另一个方面涉及本文中所述的IP化合物，其用于通过治疗来对人体或动物体进行治疗的方法中。
本发明的另一个方面涉及本文中所述的IP化合物，其与一种或多种(例如，1、2、3、4种)本文中所述的其他治疗剂组合用于通过治疗来对人体或动物体进行治疗的方法中。
在制备药物中的应用
本发明的另一个方面涉及本文中所述的IP化合物在制备用于治疗的药物中的应用。
在一个实施方式中，所述药物包含IP化合物。
本发明的另一个方面涉及本文中所述的IP化合物与一种或多种(例如，1、2、3、4种)本文中所述的其他治疗剂在制备用于治疗的药物中的应用。
在一个实施方式中，所述药物包含所述IP化合物和所述一种或多种(例如，1、2、3、4种)其他治疗剂。
治疗方法
本发明的另一个方面涉及一种治疗方法，所述方法包括对需要治疗的患者给予治疗有效量的优选为药物组合物形式的本文中所述的IP化合物。
本发明的另一个方面涉及涉及一种治疗方法，所述方法包括对需要治疗的患者给予治疗有效量的优选为药物组合物形式的本文中所述的IP化合物以及优选为药物组合物形式的一种或多种(例如，1、2、3、4种)本文中所述的其他治疗剂。
治疗的疾病
在一个实施方式中，所述治疗是癌症的治疗。
在一个实施方式中，所述癌症是肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肠胃癌、胃癌、大肠癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、睾丸癌、肝癌、肾癌、肾细胞癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、神经胶质瘤、肉瘤、骨肉瘤、骨癌、鼻咽癌(例如，头癌、颈癌)、皮肤癌、鳞癌、卡波济肉瘤、黑素瘤、恶性黑素瘤、淋巴癌或白血病。
在一个实施方式中，所述癌症是：
癌，例如膀胱癌、乳腺癌、结肠/直肠癌(例如，结直肠癌如结肠癌和结肠腺瘤)、肾癌、上皮癌、肝癌、肺癌(例如，缐癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌(例如，胰腺外分泌肿瘤)、胃癌、***、甲状腺癌、***癌、皮肤癌(例如，鳞状细胞癌)；
淋巴***的造血肿瘤，例如白血病、急性淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤或伯克特淋巴瘤；
骨髓***的造血肿瘤，例如急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征或前髓细胞性白血病；
间叶细胞起源的肿瘤，例如纤维肉瘤或横纹肌肉瘤（habdomyosarcoma）；
中枢或外周神经***的肿瘤，例如星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤；
黑素瘤；***瘤；畸胎瘤；骨肉瘤；着色性干皮病（xenoderomapigmentoum）；角化棘皮瘤（keratoctanthoma）；甲状腺滤泡状癌症；或卡波济肉瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是实体瘤癌症。
在一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌；甲状腺(例如，滤泡状；未分化的***状)癌症；结直肠癌；***瘤；骨髓增生异常综合征(MDS)；肺癌(例如，肺腺癌)；肝癌；白血病(例如，急性髓性白血病(AML))；黑素瘤；膀胱癌；肾癌；乳腺癌，卵巢癌，胆管癌或神经胶质瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是胰腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是甲状腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是结直肠癌。
在一个实施方式中，所述癌症是***瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是骨髓增生异常综合征(MDS)。
在一个实施方式中，所述癌症是肺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是肺腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是肝癌。
在一个实施方式中，所述癌症是白血病。
在一个实施方式中，所述癌症是急性髓性白血病(AML)。
在一个实施方式中，所述癌症是黑素瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是膀胱癌。
在一个实施方式中，所述癌症是肾癌。
在一个实施方式中，所述癌症是乳腺癌。
在一个实施方式中，所述癌症是卵巢癌。
在一个实施方式中，所述癌症是胆管癌。
在一个实施方式中，所述癌症是神经胶质瘤。
在一个实施方式中，所述癌症是突变RAS癌症(例如，突变RAS胰腺癌等)。
在一个实施方式中，所述癌症的特征在于或特征进一步在于肿瘤干细胞。
抗癌效果可以通过一种或多种机理产生，包括但不限于细胞增殖的控制，细胞循环进程的抑制，血管生成(形成新血管)的抑制，转移(肿瘤从其源扩散)的抑制，细胞迁移(癌细胞到身体其他部分的扩散)的抑制，侵染(肿瘤细胞到相邻正常结构中的扩散)的抑制或细胞凋亡(编程性细胞死亡)的促进。本发明化合物可用于治疗本文中所述的癌症，而与本文中讨论的机理无关。
治疗
在治疗疾病的内容中在本文中使用的术语“治疗”通常涉及治疗和理疗人或动物(例如，在兽医应用中)，其中实现一些期望的治疗效果，例如抑制疾病进展，并包括降低进展率、停止进展率、减轻疾病症状、改善疾病和治愈疾病。也包括作为预防性手段(即，预防)的治疗。例如，术语“治疗”也包括对尚未发生疾病但是有发生疾病的危险的病人的应用。
例如，治疗包括癌症的预防，降低癌症的发生率，降低癌症的严重度，减轻癌症的症状等。
本文中所用的术语“治疗有效量”涉及当根据期望的治疗方案给药时，对产生一些期望的治疗效果有效，与合理的收益/风险比率匹配的化合物或材料，包含化合物的组合物或剂型的量。
组合治疗
术语“治疗”包括其中例如依次或同时将两种以上治疗或疗法结合的组合治疗和疗法。例如，本文中所述的化合物还可以例如，与其他试剂如细胞毒素剂、抗癌药剂等结合，以组合治疗的方式使用。治疗和疗法的实例包括但不限于化学治疗(给药活性剂，包括例如药物，抗体(例如，如在免疫治疗中)，前药(例如，如在光动力学治疗，GDEPT，ADEPT等中)；手术；放射治疗；光动力学治疗；基因治疗；和控制饮食。
例如，将利用本文中所述的化合物和一种或多种(例如，1、2、3、4种)其他试剂的治疗或通过不同机理控制细胞生长或存活或分化的疗法结合，由此治疗癌症发展的几种特性特征可以是有益的。
本发明的一个方面涉及本文中所述的化合物与下述的一种或多种其他治疗剂的组合。
特定组合会由医生自由决定，所述医生使用其一般常识和专业技术人员已知的剂量给药方式选择剂量。
所述试剂(即，本文中所述的化合物，加一种或多种其他试剂)可以同时或依次给予，或者可以以单独变化的给药方案并通过不同的途径给予。例如，当依次给药时，可以以间距很小的间隔(例如，在5-10分钟的时间内)或以较长的间隔(例如，相隔1、2、3、4个以上小时或在需要时相隔更长时间)给予试剂，精确的给药方案会与一种或多种治疗剂的性能相匹配。
所述试剂(即，本文中所述的化合物，加一种或多种其他试剂)可以以单一剂型一起配制，或者可替换地可以分别配制单独试剂并以任选具有其使用说明的试剂盒的形式一起提供。
其他应用
本文中所述的IP化合物还可以用作体外分析的一部分，例如以便确定候选主体是否可能受益于利用所讨论的化合物的治疗。
本文中所述的IP化合物还可以用作例如分析中的标准以便鉴定其他化合物、其他抗癌药剂等。
试剂盒
本发明的一个方面涉及一种试剂盒，其包含(a)本文中所述的IP化合物或者包含本文中所述的IP化合物的组合物，例如优选以适当的容器和/或以适当的包装提供；和(b)使用说明，例如，关于如何给予所述化合物或组合物的书面说明。
在一个实施方式中，所述试剂盒还包含一种或多种(例如，1、2、3、4种)本文中所述的其他治疗剂。
书面说明可还包括活性成分适合治疗的一系列适应症。
给药途径
IP化合物或包含所述IP化合物的药物组合物可以通过任何方便的给药途径给予受治疗者，不管是全身/***还是局部(即，在期望的起作用位点)给药。
给药途径包括但不限于经口(例如，通过摄入)；经颊；经舌；经皮(包括例如通过贴剂，石膏等)；经粘膜(包括例如，通过贴剂，石膏等)；经鼻(例如，通过鼻喷入，滴剂或者由喷雾器或干粉末供应装置)；经眼(例如，通过眼药水)；经肺(例如，通过例如通过嘴或鼻使用例如气溶胶的吸入或吹入疗法)；经直肠(例如，通过栓剂或灌肠)；经***(例如，通过***环)；肠胃外，例如，通过注射，包括皮下注射、皮内注射、肌内注射、静脉注射、动脉注射、心内注射、鞘内注射、脊柱内注射、囊内注射、囊下注射、眶内注射、腹腔内注射、气管内注射、表皮下注射、关节内注射、蛛网膜下注射和胸骨内注射；通过例如皮下或肌肉移植储库（depot）或储集层（reservoir）。
受治疗者/患者
受治疗者/患者可以是脊索动物、脊椎动物、哺乳动物、胎盘哺乳动物、有袋动物(例如，袋鼠、袋熊)、啮齿动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如，小鼠)、兔类动物(例如，兔子)、鸟类动物(例如，鸟)、犬科动物(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)、马科动物(例如，马)、猪科动物(例如，猪)、绵羊科动物(例如，绵羊)、牛科动物(例如，母牛)、灵长类动物、类人猿(例如，猴子或猿)、猴子(例如，绒猴、狒狒)、猿(例如，大猩猩、黑猩猩、红毛猩猩、长臂猿)或人。
此外，受治疗者/患者可以是其发育形式的任一种，例如胎儿。
在一个优选实施方式中，受治疗者/患者是人。
制剂
尽管可以将IP化合物单独给药，但是优选将其作为包含至少一种本文中所述的IP化合物与一种或多种本领域技术人员熟知的其他药用成分的药物制剂(例如，组合物，制剂，药物)提供，所述成分包括但不限于药用载体、稀释剂、赋形剂、辅药、填料、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如，润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、香味剂和甜味剂。所述制剂可还包含其他活性剂例如其他治疗或预防试剂。
因此，本发明还提供如上定义的药物组合物以及制备药物组合物的方法，所述方法包括将至少一种本文中所述的IP化合物与本领域技术人员熟知的一种或多种其他药用成分混合，所述成分例如载体、稀释剂、赋形剂等。如果以离散单元(例如，片剂等)配制，则各单元包含预定量(剂量)的化合物。
本文中所用的术语“药用”涉及化合物、成分、材料、组合物、剂型等，其在正确的医疗判断的范围内适合以与所讨论的受治疗者(例如，人)的组织接触的方式使用而不具有过度的毒性、刺激、***反应或其他问题或并发症，并与合理的收益/风险比率匹配。各种载体、稀释剂、赋形剂等必须在与制剂的其他成分相容的含义中也是“可接受的”。
适当的载体、稀释剂、赋形剂等可见于标准药物课本例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1990；和Handbook of Pharmaceutical Excipients，第5版，2005中。
可以通过制药领域中熟知的任意方法来制备所述制剂。这种方法包括使所述化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过如下来制备所述制剂：使所述化合物与载体(例如，液体载体、微细分开的固体载体等)均匀且密切地结合，然后根据需要将产物成形。
可以将制剂制备为提供快速或缓慢的释放；立即释放，延迟释放，定时释放或持久释放；或它们的组合。
制剂可以适当地为液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮液(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、酏剂、糖浆剂、膏剂、漱口剂、滴剂、片剂(包括例如包衣片剂)、粒剂、粉剂、含片、锭剂、胶囊剂(包括例如，硬和软的明胶胶囊剂)、胶囊药剂、丸剂、安瓿、大丸剂、栓剂、***栓剂、酊剂、凝胶、糊剂、软膏、乳膏、洗剂、油、泡沫、喷剂、合剂或气溶胶。
可以以利用一种或多种化合物与任选地一种或多种其他药用成分浸渍的贴片、绊创膏、绷带、敷料等的形式来适当提供制剂，所述成分包括例如渗透、浸透和吸收增强剂。所述制剂还可以以储库或储集层的形式适当提供。
可以将所述化合物溶解、悬浮在一种或多种其他药用成分中或者与其混合。所述化合物可以以脂质体或其他微粒的形式提供，其被设计为使所述化合物靶向例如血液成分或一种或多种器官。
适用于经口给药(例如，通过摄入)的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮液(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、酏剂、糖浆剂、膏剂、片剂、粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、安瓿、大丸剂。
适用于经颊给药的制剂包括漱口剂、含片、锭剂以及贴片、绊创膏、储库和储集层。含片典型地在好味道的基底，通常为蔗糖和***树胶或黄蓍胶中包含所述化合物。锭剂典型地在惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和***树胶中包含所述化合物。漱口剂典型地在适当的液体载体中包含所述化合物。
适用于经舌给药的制剂包括片剂、含片、锭剂、胶囊剂和丸剂。
适用于口服经粘膜给药的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)，悬浮液(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、漱口剂，含片、锭剂以及贴片、绊创膏、储库和储集层。
适用于非口服经粘膜给药的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)、悬浮液(例如，水性、非水性)、乳液(例如，水包油、油包水)、栓剂、引导栓剂、凝胶、糊剂、软膏、乳膏、洗剂、油以及贴片、绊创膏、储库和储集层。
适用于经皮给药的制剂包括凝胶、糊剂、软膏、乳膏剂洗剂和油、以及贴片、绊创膏、绷带、敷料、储库和储集层。
可以任选地利用一种或多种辅助成分通过常规手段如压缩或成型来制备片剂。可以通过如下来制备压制片剂：在适当机器中对任选地与如下混合的自由流动形式如粉剂或颗粒的所述化合物进行压制：一种或多种粘合剂(例如，聚乙烯吡啶酮、明胶、***树胶、山梨糖醇、黄蓍胶、羟基丙基甲基纤维素)；填料或稀释剂(例如，乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石、二氧化硅)；崩解剂(例如，淀粉乙醇酸钠，交联的聚乙烯吡啶酮、交联的羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)；防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)；香料、香味增强剂和甜味剂。可以通过在适当的机器中将利用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物成型来制备成型片剂。可以对所述片剂进行可选包衣或压痕（score）或可以对其进行配制以便提供缓慢释放或可控释放的化合物，其中以变化的比例使用例如羟基丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线。所述片剂可任选地提供有例如包衣以影响释放，例如肠溶衣以在胃以外的肠的部分中提供释放。
软膏典型地由所述化合物和石蜡或水混溶性软膏基质制备。
乳膏典型地由所述化合物与水包油乳膏基质制备。如果需要，乳膏基质的水相可包含例如，至少约30%w/w的多元醇，即，具有两个以上羟基的醇如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇以及它们的混合物。局部制剂可理想地包含增强所述化合物通过皮肤或其他患病区域的吸收或渗透的化合物。这种皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
乳液典型地由所述化合物和油相制备，所述油相可任选地仅包含乳化剂(另外已知为乳化剂（emulgent）)或者其可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油，或者与脂肪和油两者的混合物。优选地，与充当稳定剂的亲脂性乳化剂一起包含亲水性乳化剂。还优选包含油和脂肪两者。同时，在具有或不具有一种或多种稳定剂的情况下的一种或多种乳化剂构成所谓的乳化蜡，且所述蜡与油和/或脂肪一起组成所谓的乳化乳膏基质，其形成乳膏制剂的油分散相。
适当的乳化剂和乳液增强剂包括吐温60、司盘80（Span 80）、琼蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。用于制剂的适当油或脂肪的选择基于实现期望的美容性能，因为所述化合物在可能用于药物乳液制剂中的大部分油中的溶解性可能非常低。因此，乳膏应优选为非油滑的、非染色的和可洗掉的产品，并具有适当的稠度以避免从管或其他容器中泄漏。可以使用直链或支链的、单或二元烷基酯如二异己二酸酯、硬脂酸异琼蜡酯，椰子脂肪酸的丙二醇二酯，肉豆蔻酸异丙酯，油酸癸酯，棕榈酸异丙酯，硬脂酸丁酯，棕榈酸-2-乙基己酯，或者已知为CrodamolCAP的支链酯的共混物，后三种是优选的酯。这些可单独使用或根据需要的性能而组合使用。可替换地，可以使用高熔点脂类如白软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。
适用于经鼻给药的制剂在载体为液体的情况下，包括例如，经鼻喷剂，经鼻滴剂，或者通过雾化器（nebuliser）由气溶胶给药，包括所述化合物的水性或油性溶液。
适用于经鼻给药的制剂，在载体为固体的情况下，包括例如，作为具有例如在约20至约500微米范围内的粒径的粗粉末而提供的制剂，其以摄取鼻烟的方式给药，即，通过经鼻通道，从贴近鼻子保持的粉末的容器快速吸入。
适用于经肺给药(例如，通过吸入或吹入治疗)的制剂包括利用适当的推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适当气体，以来自压缩包的气溶胶喷剂提供的制剂。
适用于经眼给药的制剂包括眼药水，其中所述化合物溶解或悬浮在用于所述化合物的适当载体中，特别是水性溶剂中。
适用于经直肠给药的制剂可以以具有适当基质的栓剂提供，所述基质包含例如天然或硬化油，蜡，脂肪，半液体或液体多元醇，例如可可油或水杨酸酯；或者以用于通过灌肠治疗的溶液或悬浮液的形式提供。
适用于经***给药的制剂可以以子宫套、止血栓、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂的形式来提供，其除了所述化合物之外，还包含本领域中已知为适当的载体。
适用于肠胃外给药(例如，通过注射)的制剂包括水性或非水性、等渗的、无热原的无菌液体(例如，溶液，悬浮液)，其中所述化合物溶解、悬浮或者另外提供(例如，在脂质体或其他微粒中)。这种液体可另外包含其他药用成分如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、悬浮剂、增稠剂以及使得所述制剂与目标接受者的血液(或其他相关的体液)等渗的溶质。赋形剂的实例包括例如水、醇、多元醇、甘油、植物油等。用于这种制剂的合适的等渗载体的实例包括氯化钠注射液（Sodium ChlorideInjection）、林格氏溶液（Ringer's Solution）或乳酸林格氏注射液（LactatedRinger's Injection）。典型地，所述化合物在液体中的浓度为约1ng/mL至约10μg/mL，例如约10ng/mL至约1μg/mL。所述制剂可以以单位剂量或多剂量密封的容器如安瓿和小瓶的形式存在，且可以储存在需要在使用之前立即仅添加无菌液体载体如注射用水的冷冻干燥(冻干)条件下。可以由无菌粉末、颗粒和片剂来制备临时注射溶液和悬浮液。
剂量
本领域的技术人员应理解，IP化合物和包含所述IP化合物的组合物的适当剂量可以随患者与患者的不同而变化。确定最佳剂量通常涉及相对于任意风险或有害副作用的治疗收益水平的平衡。所选择的剂量水平会取决于大量因素，包括但不限于特定IP化合物的活性，给药途径，给药时间，IP化合物的***速率，治疗的持续时间，组合使用的其他药物，化合物和/或材料，疾病的严重度以及患者的物种、性别、年龄、重量、疾病、一般健康和先前病史。IP化合物的量和给药途径最终由医生、兽医或临床医生自由决定，但是通常选择剂量以在起作用的位点实现获得期望效果而不造成实质地有害或不好的副作用的局部浓度。
可以在整个治疗过程中连续地或间歇地(例如，以适当的间隔以分开的剂量)以一个剂量进行给药。确定给药的最有效的手段和剂量的方法是本领域技术人员熟知的，且随着用于治疗的制剂、治疗目的、被治疗的一种或多种靶细胞和被治疗的受治疗者不同而变化。可以以治疗医生、兽医或临床医生选择的剂量水平和模式进行一次或多次给药。
通常，IP化合物的适当剂量在约10μg至约250mg(更典型地约100μg至约25mg)/kg受治疗者的体重/天的范围内。在化合物为盐、酯、酰胺、前药等的情况下，基于母体化合物来计算给药的量，从而成比例地增加所用的实际重量。
实施例
提供下列实施例仅用于说明本发明且不旨在限制本文中所述的本发明的范围。
化学合成
用于反应的所有原料、反应物和溶剂都是试剂级的且购买使用。色谱溶剂为HPLC级的且不进一步提纯而使用。使用Merck硅胶60F-254薄层板通过薄层色谱(TLC)分析来对反应进行监控。在Merck硅胶60(0.015-0.040mm)上或在一次性Isolute Flash Si和SiII硅胶柱中进行急骤柱层析。在Macherey-Nagel[809023]预涂布的TLC板SIL G-25UV254或具有UV254的Analtech[2015]预涂布的制备TLC板，2000μm上进行制备TLC。在22°C的温度下，以1mL/分钟的流速使用下列溶剂体系在具有来自Supelco的Discovery 5μm，C18，50mm×4.6mm内径柱的MicromassLCT/Water’s Alliance 2795HPLC***上进行LCMS分析，所述溶剂***为：溶剂A：甲醇；溶剂B：0.1%甲酸在水中的溶液。梯度以10%A/90%B开始，保持0-0.5分钟，然后在0.5分钟至6.5分钟，从10%A/90%B变化至90%A/10%B，并继续为90%A/10%B，直至10分钟。在10-10.5分钟，梯度恢复至10%A/90%，其中浓度保持直到12分钟为止。UV检测在254nm下且电离为正或负离子电喷射。分子量扫描范围为50-1000。利用在部分环装样上的3μL注射以1mg/mL将样品供应在DMSO或甲醇中。将NMR光谱记录在Bruker Advance 500MHz光谱仪上的DMSO-d6中。
合成1
2-氟-4-羟基苯基氨基甲酸叔丁酯
在35°C下将4-氨基-3-氟苯酚(10.61g，83.5mmol)添加至Boc2O(18.29g，83.8mmol)和InCl3(188mg，0.85mmol)的熔融混合物中。将黑色混合物在35°C下搅拌2小时，在搅拌时间期间其变为厚的黑油。然后，利用EtOAc(200mL)和H2O(200mL)对混合物进行稀释，并继续搅拌10分钟。进行分层并用H2O(3×200mL)对有机层进行洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至干燥。将所得黑油重新溶解在CH2Cl2(50mL)中，并装载到硅胶柱上。利用CH2Cl2中的5→7%EtOAc进行稀释提供了标题化合物，其为浅黄色结晶固体。
收率：16.7g(90%)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：1.42(s，9H，C(CH3)3)，6.50-6.57(m，2H，ArH)，7.11-7.21(m，1H，ArH)，8.45(bs，1H，OH)，9.63(s，1H，NHBoc)；13C-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：28.0，78.6，102.7(d，JFH=22.2)，110.8(d，JFH=2.7)，117.1(d，JFH=12.6)，127.2，153.7，155.5(d，JFH=11.3)，156.1(d，JFH=246)；19F-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)：-121.6；LC-MS(3.94min)：关于C11H14FNO3[M-C(CH3)3]+的m/z，计算的：172.0；发现的：172.0。
合成2
4-(2-氨基-3-硝基吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(3a)
在氩气下将干燥的DMSO(20mL)添加到圆底烧瓶中的NaH(1.029g60%矿物油中的分散液，25.7mmol)中。在5分钟之后，将固体2-氟-4-羟基苯基氨基甲酸叔丁酯(5.59g，24.6mmol)分三份添加，从而得到深色溶液，在室温下搅拌15分钟之后，立即利用4-氯-3-硝基吡啶-2-胺(4.23g，24.4mmol)对所得溶液处理。用1小时将深红色溶液加热至110°C并使其冷却至室温。随后将EtOAc(150mL)和H2O(200mL)添加到溶液中，并将有机层分离。利用EtOAc(3×100mL)对水层进行萃取，并利用饱和NaHCO3(150mL)对结合的有机层洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至干燥，从而得到亮黄色固体。将该材料用于下一步骤中而不进行进一步提纯。
收率：8.68g(98%)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：1.46(s，9H，C(CH3)3)，6.08(d，1H，3JHH=5.5，PyrH)，7.01(m，1H，ArH)，7.18(br s，2H，NH2)，7.22(m，1H，ArH)，7.67(m，1H，ArH)，8.04(d，1H，3JHH=5.5，PyrH)，9.03(s，1H，NHBoc)；19F-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)：-120.7；LC-MS(4.72min)：关于C16H17FN4O5[M+H+]的m/z，计算的：365.0；发现的：365.0。
合成3
4-(2,3-二氨基吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(4a)
将Pd/C(1.09g)添加到4-(2-氨基-3-硝基吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(3a)(6.20g，17.0mmol)在EtOAc/EtOH(90/150mL)中的黄色溶液中，并在氮气氛下将黑色混合物搅拌5小时，并在硅藻土上进行过滤。将深棕色滤液浓缩至干燥，重新溶解在CH2Cl2(20mL)中并装载到硅胶柱上。利用EtOAc对产物进行洗脱，并将含有标题化合物的部分蒸发至干燥。将有机油溶于CH2Cl2中，并添加等量的己烷。将溶液浓缩至干燥以得到橙色泡沫。
收率：4.30g(76%)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：1.45(s，9H，C(CH3)3)，4.47(s，2H，NH2)，5.61(s，2H，NH2)，6.09(d，1H，3JHH=5.5，PyrH)，6.76(m，1H，ArH)，6.87(m，1H，ArH)，7.28(d，1H，3JHH=5.5，PyrH)，7.47(m，1H，ArH)，8.82(s，1H，NHBoc)；13C-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：28.0，79.1，104.4，105.9(d，JFH=23.1)，113.4(d，JFH=3.1)，120.3，121.5(d，JFH=12.2)，126.1，135.7，146.2，150.5，153.1(d，JFH=10.1)，153.3，155.1(d，JFH=248)；19F-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)：-120.7；LC-MS(2.69min)：关于C16H20FN4O3[M+H+]的m/z，计算的：335.2；发现的：335.3.
合成4
4-(4-N-(叔丁氧基羰基)-氨基-3-氟苯氧基)-2-氨基吡啶-3-基-氨基甲酸乙酯(5a)
在搅拌下将4-(4-N-(叔丁氧基羰基)-氨基-3-氟苯基氧基)-2,3-二氨基吡啶(4a)(2.5g，7.5mmol)溶解在干燥的THF(50mL)中，添加吡啶(1.2mL，15mmol)并在0°C下对溶液进行冷却。一次添加氯甲酸乙酯(0.77mL，8.0mmol)。在30分钟之后，使反应混合物达到室温，并搅拌另外24小时。将溶剂在真空下蒸发，并在DCM和饱和Na2CO3水溶液之间分配残留物。利用H2O对有机层进行洗涤，用MgSO4干燥并蒸发。通过柱层析(洗脱剂梯度DCM至EtOAc)对残留物进行提纯以得到标题化合物，其为泡沫状。
收率：1.13g，37%。1H-NMR δ：1.17(t，3H，CH3,Et，J=7.1Hz)，1.45(s，9H，tBu)，4.02(q，2H，J=7.1，CH2,Et)，5.89(s，2H，NH2,Py2)，5.98(d，1H，J=5.7，HPy)，6.83(d，1H，H芳族)，6.96(d，1H，H芳族)，7.55(t，1H，H芳族)，7.73(d，1H，J=5.7，HPy)，8.29(br s，1H，NHPy3)，9.39(s，1H，NHBoc)。
合成5
4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-2-氨基吡啶-3-基-氨基甲酸乙酯(6a)
将4-(4-N-(叔丁氧基羰基)-氨基-3-氟苯氧基)-2-氨基吡啶-3-基-氨基甲酸乙酯(5a)(1.13g，2.8mmol)溶解在TFA(8mL)中，添加几滴水，并在室温下将反应混合物搅拌2小时。将TFA蒸发，将残留物溶解在水(20mL)中，利用饱和Na2CO3水溶液进行中和，并利用DCM(2×20mL)进行萃取。对有机层进行干燥并蒸发，从而获得标题化合物。
收率：730mg，86%。1H-NMR δ：1.17(t，3H，J=7.1，CH3,Et)，4.05(q，2H，J=7.0，CH2,Et)，5.04(s，2H，NH2,Ph)，5.71(s，2H，NH2,Py)，5.86(d，1H，J=5.7，HPy)，6.64(d，1H，H芳族)，6.73-6.82(m，2H，H芳族)，7.68(d，1H，J=5.7，HPy)，8.23(br s，1H，NHPy3)。LC-MS：m/z 307([M+H]+，100)。
合成6
4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-2-氨基吡啶-3-基-甲基-氨基甲酸乙酯(7a)
将4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-2-氨基吡啶-3-基-氨基甲酸乙酯(6a)(480mg，1.6mmol)溶解在干燥的THF(8mL)中并在0°C下冷却。添加氢化钠(60%在矿物油中，80mg，2.0mmol)，并在0°C下将反应混合物搅拌40分钟。在0°C下添加碘甲烷(130μL，1.8mmol)。将冰浴除去，并在室温下将混合物搅拌18小时。将溶剂蒸发并在DCM和蒸馏水之间分配残留物。将有机层干燥并蒸发，利用二***对残留物进行洗涤，从而获得标题化合物，其为棕色固体。
收率：322mg，63%。1H-NMR δ：1.09(t，3H，J=7.0，CH3,Et)，3.00(s，3H，CH3N)，3.90-4.10(m，2H，CH2,Et)，5.07(s，2H，NH2,Ph)，5.87(d，1H，HPy)，6.03(s，2H，NH2,Py)，6.63(t，1H，H芳族)，6.77-6.81(m，2H，H芳族)，7.75(d，1H，HPy)。
合成7
7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8a)
将4-(4-氨基-3-氟苯氧基)-2-氨基吡啶-3-基-甲基-氨基甲酸乙酯(7a)(320mg，1.0mmol)悬浮在EtONa在EtOH(4mL)中的溶液中，所述溶液通过将钠(480mg，21mmol)溶解在乙醇(9mL)中而获得。在微波辐射下将悬浮液加热1小时(100°C，100W)。在室温下对混合物进行冷却并将溶剂蒸发。将残留物溶解在水中并利用AcOH酸化至pH 4。通过过滤来回收形成的沉淀物，从而获得标题化合物。
收率：188mg，67%。1H-NMR δ：3.46(s，3H，CH3N)，5.11(s，2H，NH2)，6.35(d，1H，J=5.9，HPy)，6.77-6.82(m，2H，H芳族)，6.99(d，1H，H芳族)，7.76(d，1H，J=6.0，HPy)，11.54(s，1H，NHPy)。
合成8
1-(3-叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(1-N-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)苯基)脲(AA-01)
将3-叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-胺(550mg，1.8mmol)溶解在CH2Cl2(25mL)中并添加等体积的饱和NaHCO3(水溶液)。对两相混合物进行搅拌并利用冰/水浴冷却至0°C。在10分钟之后，添加2当量的1.9M光气在甲苯中的溶液。将混合物剧烈搅拌10分钟，将有机层分离，用H2O洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩至约5mL。将该溶液添加至7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8a)(200mg，1.4mmol)在THF的溶液中。在室温下将溶液搅拌15小时，将溶剂蒸发并利用Et2O和CH2Cl2对固体残留物进行洗涤，从而得到标题化合物，其为白色固体。
收率：200mg，53%。1H NMR，δ：1.28(s，9H，t-Bu)，3.42(s，3H，CH3)，6.39(s，1H，HPyz,4)，6.49(d，1H，J=5.9，HPy,5)，6.99(dd，1H，J=1.6，9.0，H芳族),7.21(dd，1H，J=11.9，2.7，H芳族)，7.40-7.45(m，1H，H芳族)，7.50-7.58(m，4H，H芳族)，7.81(d，1H，J=5.9，HPy,6)，8.10(t，1H，J=9.1，H芳族)，8.80(s，1H，NH脲)，8.93(s，1H，NH脲)，11.63(bs，1H，NHPy2)。LC-MS：m/z 516([M]+，100)。HRMS(EI)：关于C27H27N7O3([M+H]+)的m/z，计算的：516.2154；发现的：516.2152。
合成9
1-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(1-N-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)苯基)脲(AA-02)
标题化合物通过与对于(AA-01)所述相同的方法由3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-胺(458mg，2mmol)和7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8a)(110mg，0.4mmol)制备，其为灰白色固体。
收率：150mg，71%。1H NMR，δ：1.27(s，9H，t-Bu)，2.38(s，3H，Ph-CH3)，3.42(s，3H，N-CH3)，6.37(s，1H，HPyz,4)，6.49(d，1H，J=5.9，HPy,5)，6.96(dd，1H，H芳族)，7.20(d，1H，H芳族)，7.34(d，2H，J=8.3，H芳族)，7.39(d，2H，J=8.4，H芳族)，7.81(d，1H，J=5.9，HPy，6)，8.11(t，1H，H芳族)，8.74(s，1H，NH脲)，8.92(s，1H，NH脲)，11.61(bs，1H，NHPy2)。LC-MS：m/z 530([M+H]+，100)。
合成10
1-(3-叔丁基-1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(1-N-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)苯基)脲(AA-03)
标题化合物通过与对于(AA-01)所述相同的方法由3-叔丁基-1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-5-胺(375mg，1.5mmol)和7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8a)(150mg，0.55mmol)制备，其为灰白色固体。
收率：190mg，63%。1H NMR，δ：1.28(s，9H，t-Bu)，3.42(s，3H，CH3)，6.39(s，1H，HPyz,4)，6.49(d，1H，J=5.9，HPy,5)，6.96(dd，1H，9.0，H芳族),7.21(d，1H，H芳族)，7.57(d，2H，J=9.0，H芳族)，7.60(d，2H，J=8.9，H芳族)，7.81(d，1H，J=5.9，HPy,6)，8.08(t，1H，H芳族)，8.80(s，1H，NH脲)，8.89(s，1H，NH脲)，11.63(bs，1H，NHPy2)。LC-MS：m/z 549([M]+，100)。
合成11
3-叔丁基-1-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸
在圆底烧瓶(在烘箱中干燥的)中，在剧烈搅拌和氩气氛下将(3-氟苯基)硼酸(224mg，1.6mmol)、乙基-3-叔丁基-吡唑-5-羧酸酯(320mg，1.6mmol)、乙酸铜(355mg，1.9mmol)和干吡啶(158μL，1.9mmol)悬浮在10mL干燥DMF中。向反应混合物中，添加300mg 4A分子筛，并在室温下将悬浮液搅拌20小时。利用20mL AcOEt对悬浮液进行稀释，用水(2×20mL)洗涤，然后用20mL NaHCO3浓溶液和20mL盐水进行洗涤，干燥(MgSO4)并在真空下蒸发。得到粘稠的油(520mg)，将其用于下一步骤中而不进行提纯。
将所述油溶解在10mL EtOH中并在搅拌下添加3mL NaOH溶液(2M)，将反应混合物回流30分钟。在冷却至室温之后，(利用AcOH)将反应混合物调节至pH 4并利用20mL AcOEt进行萃取。利用水(2×20mL)对有机层进行洗涤，干燥并在真空下蒸发。获得固体(457mg)。使用环己烷：AcOEt 3:1在Biotage上对固体进行提纯以得到标题化合物，其为白色固体。
收率：166mg(40%)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ1.30(s，9H)，6.95(s，1H，Hpyr)，8.59(d，1H，J=8.6Hz)，7.25-7.32(m，1H，H芳族)，7.35(d，1H，J=9.9Hz，H芳族)，7.47-7.52(m，1H，H芳族)，13.22(s，1H，H酸)。HRMS：(M+H)+，关于C14H15FN2O2，计算的：262.1118，发现的：262.1117。
合成12
1-(3-叔丁基-1-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-基)-3-(2-氟-4-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)苯基)脲(AA-04)
将3-叔丁基-1-(3-氟苯基)-1H-吡唑-5-羧酸(393mg，1.5mmol)溶解在干燥DMF(8mL)中，并添加三乙胺(209μL，1.5mmol)。在0°C下对溶液进行冷却并添加二苯基膦酰基叠氮化物(323μL，1.5mmol)。在0°C下将反应混合物搅拌30分钟，随后在室温下搅拌1小时。添加7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8a)(140mg，0.5mmol)并在110°C下将反应混合物加热1小时。将溶液冷却，利用AcOEt(100mL)稀释，并利用水和盐水萃取。对有机层进行干燥和蒸发，并将残留物放入DCM中。通过过滤回收剩余的固体，从而获得标题化合物。
收率：25mg，9%。1H NMR，δ：1.28(s，9H，t-Bu)，3.41(s，3H，CH3)，6.40(s，1H，HPyz,4)，6.49(d，1H，J=6.1，HPy,5)，6.96-7.02(m，1H，H芳族)，7.19-7.26(m，2H，H芳族)，7.36-7.44(m，2H，H芳族)，7.58(t，1H，H芳族)，7.81(d，1H，J=5.9，HPy,6)，8.06(t，1H，J=9.1，H芳族)，8.83(s，1H，NH脲)，8.92(s，1H，NH脲)，11.64(bs，1H，NHPy2)。LC-MS：m/z 533([M]+，100)。
合成13
4-(2-氨基-3-硝基吡啶-4-基-氧基)萘-1-基-氨基甲酸叔丁酯(3b)
通过对于化合物(3a)所述相同的方法由4-羟基萘-1-基氨基甲酸叔丁酯(Regan，J等人，J.Med.Chem.，2002，45卷，14号，2994页)(3.9g，15mmol)制备标题化合物。
收率：5.4g，90%，在由二氯甲烷重结晶时。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：1.52(s，9H，C(CH3)3)，5.80(d，1H，J=5.7，PyrH)，7.26(s，2H，NH2)，7.38(d，1H，J=8.3，ArH,Naph)，7.58-7.69(m，3H，ArH，Naph)，7.86-7.89(m，1H，ArH，Naph)，7.93(d，1H，J=5.5，PyrH)，8.14-8.17(m，1H，ArH，Naph)，9.36(s，1H，NHBoc)。
合成14
4-(2,3-二氨基吡啶-4-基-氧基)萘-1-基-氨基甲酸叔丁酯(4b)
通过对于化合物(4a)所述相同的方法由4-(2-氨基-3-硝基吡啶-4-基-氧基)萘-1-基-氨基甲酸叔丁酯(3b)(0.50g，1.26mmol)制备标题化合物，其为棕色固体。
收率：0.38g(82%)。1H-NMR(DMSO-d6)，δ(ppm)，J(Hz)：1.55(s，9H，C(CH3)3)，4.63(s，2H，NH2)，5.66(s，2H，NH2)，5.92(d，1H，J=5.6，PyrH)，7.05(d，1H，J=8.3，ArH,Naph)，7.24(d，1H，J=5.5，PyrH)，7.54(d，1H，J=8.3，ArH,Naph)，7.60-7.65(m，2H，ArH，Naph)，8.07-8.12(m，2H，ArH，Naph)，9.22(s，1H，NHBoc)。
合成15
4-(4-N-Boc-氨基萘-1-基-氧基)-3-N-氨基氨基甲酰基乙基-2-氨基-吡啶(5b)
在0°C下在剧烈搅拌下将4-(4-N-Boc-氨基萘-1-基-氧基)-2,3-二氨基吡啶(4b)(500mg，1.4mmol)和吡啶(222μL，2.7mmol)溶解在干燥的THF(8mL)中。向该溶液中一次添加氯甲酸乙酯(136mL，1.5mmol)。使反应混合物达到室温并搅拌另外10小时。将溶剂在真空下蒸发，并在EtOAc和Na2CO3溶液之间分配残留物。对有机层进行洗涤(20mL盐水)，干燥(MgSO4)并蒸发以提供固体残留物。在通过LC(Isolute柱，Flash Si II，50g/170mL；洗脱剂：EtOAc)提纯之后，获得期望的化合物。
收率：475mg，75%。1H-NMR δ：1.14-1.21(m，3H，CH3)，1.50(s，9H，tBu)，4.04-4.10(m，2H，CH2)，5.66(d，1H，J=5.7，HPy)，5.84(s，2H，NH2)，7.15(d，1H，J=8.1，H芳族)，7.49-7.60(m，3H，H芳族)，7.62(d，1H，J=5.7，HPy)，7.98-8.04(m，1H，H芳族)，8.07(d，1H，J=8.5，H芳族)，8.40(s，1H，NHcarb)，9.22(s，1H，NHBoc)。LC-MS：m/z 440[(M+H)+，100]。HRMS(EI)：关于C23H27N4O5[(M+H)+]的m/z，计算的：439.1981；发现的：439.1979。
合成16
4-(4-氨基萘-1-基-氧基)-3-N-氨基氨基甲酰基乙基-2-氨基-吡啶(6b)
在0°C下在剧烈搅拌下将4-(4-N-Boc-氨基萘-1-基-氧基)-3-N-氨基氨基甲酰基乙基-2-氨基吡啶(5b)(475mg，1.05mmol)溶解在干燥的TFA(10mL)中。使溶液达到室温并搅拌另外2小时。将TFA在真空下蒸发并在EtOAc和Na2CO3溶液之间分配油性残留物。对有机层进行洗涤(20mL盐水)，干燥(MgSO4)并蒸发以提供固体残留物。
收率：346mg，97%。1H-NMR δ：1.19-1.26(m，3H，CH3)，4.07-4.13(m，2H，CH2)，5.57(d，1H，J=5.7，HPy)，5.77(s，4H，2x NH2)，6.66(d，1H，J=8.1，H芳族)，6.97(d，1H，J=8.1，H芳族)，7.37-7.45(m，2H，H芳族)，7.55(d，1H，J=5.7，HPy)，7.76-7.86(bs，1H，H芳族)，8.09-8.12(m，1H，H芳族)，8.36(s，1H，NHcarb)。LC-MS：m/z 339[(M+H)+，100]。HRMS(EI)：关于C18H19N4O3[(M+H)+，100]的m/z，计算的：339.1457；发现的：339.1459。
合成17
4-(4-氨基萘-1-基-氧基)-3-N-甲基-N-氨基氨基甲酰基乙基-2-氨基-吡啶(7b)
在0°C和氩气下在剧烈搅拌下将4-(4-氨基萘-1-基-氧基)-3-N-氨基氨基甲酰基乙基-2-氨基-吡啶(6b)(350mg，1.04mmol)溶解在干燥的THF(8mL)中。向该溶液中添加NaH(60%分散在矿物油中)(45mg，1.14mmol)。在40分钟之后，在0°C下添加MeI(66mL，0.91mmol)。使反应混合物达到室温并搅拌另外10小时。将溶剂在真空下蒸发，并将残留物重新放在20mL EtOAc中。利用盐水(2×20mL)对溶液进行洗涤，干燥并蒸发至干燥。利用Et2O对残留物进行磨碎并过滤，从而得到标题化合物，其为固体。
收率：238mg，65%。1H-NMR δ：1.12-1.29(m，3H，CH3)，3.14(s，3H，CH3)，4.05-4.16(m，2H，CH2)，5.53(d，1H，J=5.8，HPy)，5.75(s，2H，NH2)，6.01(s，2H，NH2)，6.66(d，1H，J=8.1，H芳族)，6.96(d，1H，J=8.1，H芳族)，7.37-7.43(m，2H，H芳族)，7.57(d，1H，J=5.8，HPy)，7.59-7.64(m，1H，H芳族)，8.11-8.15(m，1H，H芳族)。LC-MS：m/z 353([M+H]+，100)。HRMS(EI)：关于C19H21N4O3([M+H]+)的m/z，计算的：353.1614；发现的：353.1610。
合成18
7-(4-氨基萘-1-基-氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8b)
将230mg(0.65mmol)4-(4-氨基萘-1-基-氧基)-3-N-甲基-N-氨基氨基甲酰基乙基-2-氨基吡啶(7b)悬浮在5.0mL 1.0M EtONa在EtOH中的溶液中。使悬浮液经受微波(150W，100°C)持续45分钟。在冷却之后，将反应混合物蒸发至干燥，重新放在20mL H2O中，将pH调节至4.5(AcOH)，从而沉淀标题化合物。
收率：167mg，84%。1H-NMR δ：3.61(s，3H，CH3)，5.79(s，2H，NH2)，6.10(d，1H，J=5.9，HPy)，6.68(d，1H，J=8.1，H芳族)，7.10(d，1H，J=8.1，H芳族)，7.43-7.48(m，2H，H芳族)，7.64(d，1H，J=5.8，HPy)，7.74-7.81(m，1H，H芳族)，8.12-8.17(m，1H，H芳族)，11.57(s，1H，NHPy)。LC-MS：m/z307([M+H]+，100)。HRMS(EI)：关于C17H25N4O2([M+H]+)的m/z，计算的：307.1195；发现的：307.1188。
合成19
1-(3-叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(4-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)萘-1-基)脲(BB-01)
通过与对于(AA-01)所述相同的方法由3-叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-胺(0.18mmol)和7-(4-氨基萘-1-基-氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8b)(50mg，0.16mmol)来制备标题化合物，其为灰白色固体。
收率：87mg，98%。1H NMR，δ1.29(s，9H，t-Bu)，3.53(s，3H，CH3)，6.29(d，1H，J=5.9，HPy,5)，6.40(s，1H，Hpyr)，7.24(d，1H，J=8.3，H芳族)，7.43(t，1H，J=7.0Hz)，7.54-7.63(m，5H)，7.66(t，1H，J=8.2，H芳族)，7.74(d，1H，J=5.9，HPy,6)，7.86(d，2H，J=8.3，H芳族)，8.05-8.10(m，1H)，8.77(s，1H，NH脲)，9.07(s，1H，NH脲)，11.64(s，1H，NHPy2)。LC-MS：Rf=8.25min；m/z 548.2(M+，100)。HRMS(EI)：关于C31H30N7O3([M+H]+)的m/z，计算的：548.2410；发现的：548.2404。
合成20
1-(1-N-对甲苯基-3-叔丁基-吡唑-5-基)-3-(4-(2-氧代-2,3-二氢-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基-氧基)萘-1-基)脲(BB-02)
通过与对于(AA-01)所述相同的方法由3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-胺(35mg，0.15mmol)和7-(4-氨基萘-1-基-氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(8b)(40mg，0.13mmol)来制备标题化合物，其为灰白色固体。
收率：52mg，71%。1H NMR，δ：1.28(s，9H，t-Bu)，2.40(s，3H，CH3)，3.53(s，3H，CH3)，6.29(d，1H，J=5.9，HPy，5)，6.39(s，1H，Hpyr)，7.24(d，1H，J=8.4，H芳族)，7.36(d，2H，J=8.2，H芳族)，7.45(d，2H，J=8.2，H芳族)，7.60(t，1H，J=7.5，H芳族)，7.67(t，1H，J=7.6，H芳族)，7.74(d，1H，J=5.9，HPy,6)，7.87(d，1H，J=8.3，H芳族)，8.07(d，2H，J=8.3，H芳族)，8.71(s，1H，NH脲)，9.06(s，1H，NH脲)，11.65(s，1H，NHPy3)。LC-MS：Rf=5.23min；m/z 562.2([M+H]+，100)。HRMS(EI)：关于C32H32N7O3([M+H]+)的m/z，计算的：562.2561；发现的：562.2566。
(参考)合成21
2-氟-4-(2-(甲基氨基)-3-硝基吡啶-4-基氧基)苯基氨基甲酸叔丁酯
将2-氟-4-羟基苯基氨基甲酸叔丁酯(3.25g，14.4mmol)溶解在DMSO(25mL)中并在氩气气氛下将溶液搅拌20分钟。分批添加氢化钠(60%在矿物油中，580mg，14.4mmol)并在室温下将深色溶液搅拌1小时。一次添加溶解在DMSO(5mL)中的4-氯-N-甲基-3-硝基吡啶-2-胺(2.7g，14.4mmol)并将红色溶液在50°C下搅拌2小时。将溶液冷却，倒入碎冰(200g)中并利用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。利用盐水对有机相进行洗涤，干燥并蒸发，从而得到标题化合物，其为黄色固体。
收率：5.3g，90%。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：1.47(s，9H，t-Bu)2.93(d，J=4.5Hz，CH3N)，6.08(d，J=5.7Hz，1H，Hpy)，7.00(m，1H，H芳族)，7.22(m，1H，H芳族)，7.55(q，J=4.5Hz，1H，NHCH3)，7.66(m，1H，H芳族)，8.14(d，J=5.7Hz，1H，1H，Hpy)，9.04(bs，1H，NH)。LC-MS：m/z 378.3([M+H]+，100)。
(参考)合成22
4-(3-氨基-2-(甲基氨基)吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯
将2-氟-4-(2-(甲基氨基)-3-硝基吡啶-4-基氧基)苯基氨基甲酸叔丁酯(5.3mg，14mmol)溶解在无水乙醇(600mL)中并通过H-Cube装置在10%Pd/C盒上进行氢化，从而得到标题化合物，其为黄色固体。
收率：4.88g(定量收率)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：1.44(s，9H，t-Bu)，2.85(d，3H，J=4.5Hz，CH3N)，4.51(bs，2H，NH2)，5.94(m，1H，CH3NH)，6.10(d，1H，J=5.6Hz，Hpy)，6.72(m，1H，H芳族)，6.85(m，1H，H芳族)，7.37(d，1H，J=5.6Hz，Hpy)，7.44(m，1H，H芳族)，8.87(bs，1H，NH)。LC-MS：m/z 348.4([M+H]+，100)。
(参考)合成23
2-氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)苯基氨基甲酸叔丁酯
在氩气氛下向4-(3-氨基-2-(甲基氨基)吡啶-4-基氧基)-2-氟苯基氨基甲酸叔丁酯(4.9g，14mmol)在THF(150mL)和吡啶(10mL)中的冰冷却溶液中，通过滴液漏斗用2小时添加三光气(4.45g，15mmol)在THF(75mL)中的溶液。在0°C下将溶液搅拌2小时，接着在室温下搅拌4小时，然后回流过夜。在冷却之后，将溶液过滤，蒸发，并在Biotage装置(25+M柱，洗脱剂DCM/EtOAc 1/1)上进行色谱分离，从而得到标题化合物，其为白色固体。
收率：2.05g，40%。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：1.47(s，9H，t-Bu)，3.32(s，3H，CH3N)，6.53(d，1H，J=5.9Hz，Hpy)，6.94(m，1H，H芳族)，7.15(m，1H，H芳族)，7.60(m，1H，H芳族)，7.89(d，1H，J=5.9Hz，Hpy)，8.97(s，1H，NH)，11.46(s，1H，NH)。LC-MS：m/z 375.1([M+H]+，100)。
(参考)合成24
7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-3-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮
在氩气氛下将2-氟-4-(3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)苯基氨基甲酸叔丁酯(2.18g，5.8mmol)以1M TBAF在THF(41mL)中的溶液过夜回流。将溶液冷却和蒸发，并添加水(20mL)，此时形成沉淀物。将沉淀物过滤，用水洗涤并干燥，从而得到标题化合物，其为灰白色固体。
收率：1.37g，86%。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ3.29(s，3H，CH3N)，5.17(s，2H，NH2)，6.35(d，1H，J=5.94Hz，Hpy)，6.74-6.83(m，2H，H芳族)，6.99(m，1H，H芳族)，7.81(d，1H，J=5.94Hz，Hpy)，11.44(s，1H，NH)。LC-MS：m/z 275.1([M+H]+，100)。
(参考)合成25
7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1,3-二甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮
在氩气下在0°C下向7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-3-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(100mg，0.365mmol)在THF(4mL)中的溶液中，以一份添加NaH(16.77mg，0.419mmol)。将所得溶液搅拌20分钟并添加碘甲烷(0.025mL，0.401mmol)。在1小时之后，添加水，将溶液蒸发，并利用DCM(3×20mL)萃取，从而得到标题化合物。
收率：80mg，0.278mmol，76%。1H NMR(CDCl3)，δ：3.51(s，3H，Me)，3.66(s，3H，Me)，6.40(d，1H，J=6.0，H芳族,Py)，6.74(ddd，1H，J=8.6，2.5，1.0，H芳族,FPh)，6.83(m，2H，H芳族,FPh)，7.87(d，1H，J=6.0，H芳族,Py)。LC-MS：Rf=2.60min；m/z 289.1([M+H]+，90)。
(参考)合成26
1-(1-N-对甲苯基-3-叔丁基-吡唑-5-基)-3-(4-(2-氧代-2,3-二氢-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基-氧基)苯基)脲(XX-02)
通过与对于(AA-01)所述相同的方法使用3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-胺(43.7mg，0.19mmol)和7-(4-氨基苯基氧基)-1-N-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(Niculescu-Duvaz，D等人，J.Med.Chem.，2009，52卷，8号，2255页)(40mg，0.16mmol)制备标题化合物，其为白色固体。
收率：62mg，76%。1H NMR，δ：1.27(s，9H，t-Bu)，2.37(s，3H，CH3)，3.44(s，3H，CH3)，6.35(d，1H，J=5.9，HPy,5)，6.39(s，1H，Hpyr)，7.11(d，2H，J=9.0，H芳族)，7.33(d，2H，J=8.3，H芳族)，7.39(d，2H，J=8.3，H芳族)，7.47(d，2H，J=9.0，H芳族)，7.78(d，1H，J=5.9，HPy,6)，8.32(s，1H，NH脲)，9.08(s，1H，NH脲)，11.59(s，1H，NHPy3)。LC-MS：Rf=5.14min；m/z 511([M+H]+，100)。HRMS(EI)：关于C28H30N7O3([M+H]+)的m/z，计算的：512.2405；发现的：512.2405.
(参考)合成27
1-(3-叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-基)-3-(4-(1,3-二甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)-2-氟苯基)脲(XX-03)
通过与对于(AA-01)所述相同的方法由3-叔丁基-1-苯基-1H-吡唑-5-胺(130mg，0.60mmol)和7-(4-氨基-3-氟苯氧基)-1,3-二甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(100mg，0.35mmol)制备标题化合物，其为黄色粉末。
收率：15mg，8%。1H NMR(CDCl3)，δ：1.39(s，9H，t-Bu)，3.48(s，3H，Me)，3.59(s，3H，Me)，6.47(d，1H，J=5.9，H芳族,Py)，6.49(s，1H，HPyz,4)，6.85(dd，1H，J=11.1，2.5，H 芳族,FPh)，6.89(d，1H，J=9.0，H芳 族,FPh)，7.31(t，1H，J=7.7，H 芳族,Ph)，7.42(t，2H，J=7.7，H芳族,Ph)，7.50(d，2H，J=7.9，H 芳族,Ph)，7.92(d，1H，J=5.9，H芳族,Py)，8.15(t，1H，J=8.9，H芳族,FPh)。LC-MS：Rf=2.78min；m/z 530([M+H]+，90)。HRMS(EI)：关于C28H29FN7O3([M+H]+)的m/z，计算的：530.2310；发现的：530.2326.
(参考)合成28
1-(5-叔丁基-2-苯基-2H-吡唑-3-基)-3-[4-(2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)-苯基]-脲(XX-01)
使用已知方法如Niculescu-Duvaz等人，2006在合成61中所示的方法来获得标题化合物。
(参考)合成29
1-[5-叔丁基-2-(4-氟-苯基)-2H-吡唑-3-基]-3-[4-(2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氧基)-苯基]-脲(XX-04)
使用已知方法如Niculescu-Duvaz等人，2006在合成79中所示的方法来获得标题化合物。
生物方法
生物方法-分析A-DELFIA激酶分析
通过根据下列协议进行的激酶分析对所述化合物进行评价。
准备了下列试剂：
DELFIA激酶缓冲液(DKB)：
MOPS=3-[N-吗啉代]丙磺酸(Sigma M3183)。
EGTA=乙二醇-二(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸(Sigma E3889)。
DKB1(具有B-RAF和MEK蛋白的DKB)：
将4950μL DKB与50μL 2.5mg/mL GST-MEK储料结合(以得到1mgMEK/40μL)。然后添加22.5μL B-RAF以得到~0.2μL B-RAF/40μL。
DKB2(具有MEK蛋白的DKB)：
将4950μL DKB与50μL 2.5mg/mL GST-MEK储料结合(以得到1mgMEK/40μL)。将500μL其用于吹熄(BO)和空载体(EV)对照。
ATP：
将100mM储料稀释至500μM以在分析中得到100μM最终浓度。
抑制剂(试验化合物)：
在药板中在DMSO中将100mM储料稀释至10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001、0.0003和0.0001mM，从而在分析中得到100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003和0.001μM的浓度。
一级抗体：
在DELFIA分析缓冲液(AB)中以1：1000稀释的二氧磷基-MEK1/2CST#9121S。在使用之前在室温下在AB中将抗体预培养30分钟。
二级抗体：
将抗兔子-Eur标记的二级Perkin Elmer#AD0105以1：1000稀释在DELFIA分析缓冲液(AB)中。在使用之前在室温下将抗体在AB中预培养30分钟。(一起培养一级抗体和二级抗体)
吐温：
在水中的0.1%吐温20。
分析缓冲液：
DELFIA分析缓冲液Perkin Elmer#4002-0010。
增强溶液：
DELFIA增强溶液Perkin Elmer#4001-0010。
分析板：
96孔谷胱甘肽涂布的黑板Perbio#15340。
程序：
1.利用TBS中的5%牛奶将孔预堵塞1小时。
2.利用200μLTBS将孔洗涤3次。
3.对于所有抑制剂(试验化合物)、DMSO对照物和任选的其他对照化合物平板滴加(plate out)40μL DKB1。
4.对于BO和EV孔平板滴加40μLDKB2。
5.根据期望的平板布置以0.5μL/孔添加抑制剂(试验化合物)。
6.向载体对照物孔中添加0.5μLDMSO。
7.向BO和EV孔中添加2μL B-RAF。
8.在振荡下在室温下利用抑制剂(试验化合物)预培养10分钟。
9.在DKB中添加10μL 500μMATP储料以得到100μM分析浓度。
10.利用顶部密封（TopSeal）密封板并在振荡下在室温下将板培养45分钟。
11.利用200μL0.1%吐温20/水将板洗涤3次以终止反应。
12.添加50μL/孔抗体混合物并在振荡下在室温下培养1小时。
13.利用200μL0.1%吐温20/水将板洗涤3次。
14.添加100μLDELFIA增强溶液/孔，以箔覆盖并在振荡下在室温下培养30分钟。
15.使用铕（Europium）协议在胜利者（Victor）上进行读出。
从所有值中减去用于空白(空载体)的值。将DMSO对照物设定为100%活性并将分析点(响应)计算为DMSO对照物的百分比。使用GraphpadPrism软件对数据进行作图并使用可变斜率S型剂量响应等式计算非线性回归线：
Y=底部+[顶部-底部]/[1+10^((LogEC50-X)*山斜率)]
其中X是浓度的对数且Y是响应。通过这种程序产生的IC50是产生饱和与零效应平台之间的中间的百分比对照物荧光值的药物的浓度。通常进行三次单独分析并报道平均的IC50。
生物方法-分析B-基于细胞的二氧磷基-ERK分析
使用基于细胞的分析对化合物进行评价，所述分析根据下列协议进行。
0天：
在96-孔板中的99μL介质中平板滴加16,000突变BRAF WM266.4细胞/孔。
第1天：
1.向细胞(总计1μL溶液)中添加1μL抑制剂(试验化合物)。
2.在37°C下利用试验化合物将细胞培养6小时。
3.从所有孔中吸出溶液。
4.利用100μL 4%甲醛/0.25%Triton（氚核）X-100PBS/孔固定细胞。
5.在4°C下将板培养1小时。
6.将固定溶液吸出并添加300μLTBS/孔。
7.在4°C下将板静置过夜。
第2天：
1.利用200μL PBS/孔将板洗涤2次。
2.利用TBS中的100μL 5%奶粉进行堵塞。
3.在37°C下将板培养20分钟。
4.利用0.1%吐温/H2O将板洗涤2次。
5.向每个孔添加在5%奶粉/TBS中稀释的50μL 3μg/mL一级抗体pERK(Sigma M8159)。
6.在37°C下将板培养2小时。
7.利用0.1%吐温/H2O将板洗涤3次。
8.向每个孔中添加50μL0.45μg/mL二级铕标记的抗小鼠抗体(Perkin Elmer)。
9.在37°C下将板培养1小时。
10.利用0.1%吐温/H2O将板洗涤3次。
11.向每个孔中添加100μL增强溶液(Perkin Elmer)。
12.在温和振荡板之前在室温下将板静置约10分钟。
13.在胜利者2（Victor2）中读出铕时间分辨荧光。
14.利用0.1%吐温/H2O将板洗涤2次。
15.通过添加200μL溶液/孔利用BCA(Sigma)测量蛋白浓度。
16.在37°C下将板培养30分钟。
17.在板读出器中读出570nm下的吸收水平。
应注意，通过将铕计数除以吸收率来对蛋白水平将所述计数标准化。
从所有值中减去用于空白(无细胞)的值。将DMSO对照物设定为100%活性并将分析点(响应)计算为DMSO对照物的百分比。使用GraphpadPrism软件对数据进行作图并使用可变斜率S型剂量响应等式计算非线性回归线：
Y=底部+[顶部-底部]/[1+10^((LogEC50-X)*山斜率)]
其中X是浓度的对数且Y是响应。通过这种程序产生的IC50是产生饱和与零效应平台之间的中间的百分比对照物荧光值的药物的浓度。通常进行三次单独分析并报道平均的IC50。
生物方法-分析C-SRB细胞增殖分析(SRB GI 50 )
通常在37°C下在10%CO2水饱和气氛中在补充有10%胎牛血清的DMEM或RPMI1640中对细胞系(例如，WM266.4和A375M黑素瘤细胞系；SW620结直肠癌细胞系)进行培养。通过在汇合之前(3-5天间隔)进行再次培养而将培养保持在指数生长阶段中。通过利用5mL市售胰蛋白酶EDTA对80cm2组织培养烧瓶进行收获来制备单细胞悬浮液。在5分钟之后，将分离的细胞与5mL充分补充的培养基混合并离心造粒(1000rpm保持7分钟)。在将上清液吸出之后，将细胞粒重新悬浮在10mL新鲜介质中并通过19号（规格）的针将整个体积拉上/拉下5次来将细胞充分解开。使用血球计来确定细胞的浓度(1/10稀释液)。通过如下来制备适合对于进行的试验次数过量至少2倍的体积，典型地100-200mL：将细胞悬浮液稀释至10,000-40,000/mL，并使用可编程的8通道蠕动泵将100μL/孔分配到96孔板中，从而得到1000-4000细胞/孔，使柱12为空白。将板送回培养箱中并保持24小时以使得可以将细胞重新附着。
在DMSO中以10mM制备待试验的化合物。将等分试样(24μL)稀释到1.2mL培养基中，从而得到200μM，并通过将80μL转变为160μL来进行3倍的10系列稀释。使用8通道移液器将各稀释液的等分试样(100μL)添加到孔中，由此进行最终的另外2倍稀释，并得到100μM至0.005μM范围的剂量。柱11仅接收空白培养基。以一式四份对各化合物进行试验，每个平行测定为四个孔的平均值。
在另外5天生长之后，将板倒空，并在4°C下将细胞固定在10%三氯乙酸中持续30分钟。在流动的自来水中进行充分漂洗之后，将板干燥并通过在室温下添加50μL的0.1%磺酰罗丹明B在1%乙酸中的溶液将板染色10分钟。将着色剂倒出，并在1%乙酸的流股下将板充分漂洗，由此除去未结合的着色剂并干燥。通过添加100μL Tris缓冲液pH 8，接着在板式振荡器(约500rpm)上保持10分钟来将结合的着色剂加入溶液中。使用板读出器来确定各个孔中在540nm下的吸收率(与存在的细胞数成比例)。
在柱12中对空白值进行取平均值之后，从所有值中减去其并将结果表示为未处理值的百分比(柱11)。将10个由此获得的值(以一式四份)对药物浓度的对数作图，并通过非线性回归线分析为四参数逻辑化方程，从而通过检查设定所建议的限制。通过这种程序产生的GI50是产生饱和与零效应平台之间的中间的百分比对照物A540的药物的浓度。
生物方法-异种移植研究
以悬浮液(0.2mL)将SW620人类结直肠癌细胞(突变RAS，7×107)或A375M人类黑素瘤细胞(突变BRAF，107)皮下地接种到雌性Crl：CD1-Foxn1nu无胸腺小鼠的右侧。在肿瘤体积的分层分配之后，对组指定处理。利用试验化合物的处理在11-14天后细胞给予之间开始。对于管伺法，给予悬浮液(在10mL/kg下的DMSO：水，1：19，v/v)。对照动物接收类似剂量的载体(DMSO：水，1：19，v/v)。隔天继续利用试验化合物的处理持续24剂量。
生物数据-分析数据
将用于本发明几种化合物以及几种比较化合物的数据总结在下表中。IC50/GI50值越小，指示效力越高。
在体外BRAF酶分析(分析A)中，本发明的化合物(~0.2-2.3μM)和比较化合物(~0.1-1.1μM)具有类似的BRAF IC50值。
在体外pERK细胞基分析(分析B)中，本发明的化合物(~0.02-0.26μM)和比较化合物(~0.1-0.6μM)具有类似的pERK IC50值。
在体外SRB细胞基分析(分析C)中，对于突变BRAF细胞系WM266.4和A375M，本发明的化合物(WM266.4：~0.01-0.12μM；A375M：~0.05-0.14μM)和比较化合物(WM266.4：~0.02-0.4μM；A375M：~0.25-1.1μM)具有类似的GI50值。显著地，BB-01是最有效的(具有最低的GI50：WM266.4，0.008μM；A375M，0.052μM)且XX-01是最不有效的(具有最高的GI50：WM266.4，0.39μM；A375M，1.13μM)。
在体外SRB细胞基分析(分析C)中，对于突变RAS细胞系SW620，本发明的化合物(SW620：~0.17-1.6μM)和比较化合物(SW620：~0.45-7μM)具有类似的GI50值。
然而，应注意，基于体外突变RAS数据，在体内突变RAS SW620异种移植研究中，可预期XX-01和XX-02具有比BB-02更好的治疗功效。
类似地，基于体外突变RAS数据，在体内突变RAS SW620异种移植研究中，可预期XX-02具有与AA-01类似的治疗功效。
基于体外突变RAS数据，在体内突变RAS SW620异种移植研究中，没有预期与比较化合物(XX-01、XX-02、XX-03、XX-04)相比，要求的化合物(特别是AA-01和BB-02)实质更有效。
生物数据-BRAF/RAS/野生型选择性数据
将用于本发明的几种化合物以及几种比较化合物的数据示于图4至图10中，如下文所讨论的。所述数据示出了突变BRAF或突变RAS细胞系的选择性或选择性缺乏。
图4是示出对于化合物AA-01，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系是(a)一组突变BRAF(mutBRAF)细胞系：WM266.4，A375M，UACC62；(b)一组突变RAS(mutRAS)细胞系：SW620，HCT116和WM1361；和(c)一组野生型BRAF和RAS(wtBRAFT/RAS)细胞系：SKMEL23，KM12和BT474。
图5是示出对于化合物BB-01，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图6是示出对于化合物BB-02，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图7是示出对于比较化合物XX-01，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图8是示出对于比较化合物XX-02，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图9是示出对于比较化合物XX-03，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
图10是示出对于比较化合物XX-04，一系列细胞系的每一个的GI50与WM266.4细胞系的GI50的比率的柱状图。所述一系列细胞系与图4相同。
基于这些体外数据，在体内突变RAS SW620异种移植研究中，没有预期与比较化合物(XX-01、XX-02、XX-03、XX-04)相比，要求的化合物(特别是AA-01和BB-02)实质更有效。
生物数据-异种移植数据
将用于本发明的几种化合物以及几种比较化合物的异种移植数据示于图11-19中。
图11是对于利用化合物AA-01的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变RAS结直肠癌细胞系，与对照相比，化合物AA-01随研究的时标推移实质上降低了肿瘤体积(例如，约3的因子)。
图12是对于利用化合物BB-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变RAS结直肠癌细胞系，与对照相比，化合物BB-02随研究的时标推移实质上降低了肿瘤体积(例如，约1.5的因子)。
图13是对于利用化合物AA-01的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变BRAF细胞系A375的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种黑素瘤细胞系，与对照相比，化合物AA-01随研究的时标推移实质上降低了肿瘤体积(例如，约2.5的因子)。
图14是对于利用化合物BB-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变BRAF细胞系A375的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变BRAF黑素瘤细胞系，与对照相比，化合物BB-02随研究的时标推移实质上降低了肿瘤体积(例如，约1.5的因子)。
图15是对于利用比较化合物XX-01的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变RAS结直肠癌细胞系，与对照相比，比较化合物XX-01具有相对较小的效果。
图16是对于利用比较化合物XX-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变RAS结直肠癌细胞系，与对照相比，比较化合物XX-02具有相对较小的效果。
图17是对于利用比较化合物XX-03的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变RAS结直肠癌细胞系，与对照相比，比较化合物XX-03具有相对较小的效果。
图18是对于利用比较化合物XX-04的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变RAS细胞系SW620的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变RAS结直肠癌细胞系，与对照相比，比较化合物XX-04具有相对较小的效果。
图19是对于利用比较化合物XX-02的治疗和对照，相对肿瘤体积作为突变BRAF细胞系A375的小鼠异种移植的时间(天)的函数的图。
所述数据表明，对于这种突变BRAF黑素瘤细胞系，与对照相比，比较化合物XX-02至少在一定程度上有效。
将对于突变RAS SW620异种移植，肿瘤体积(用于治疗)与肿瘤体积(用于对照)(T/C)的比率示于下表中。T/C比率越低指示功效越高。而比较化合物全部具有指示很少功效或没有功效的T/C比率，要求的化合物AA-01和BB-02两者都具有表明统计上显著的功效的T/C比率。
用于要求的化合物的数据表明，要求的化合物不仅有效地作为BRAF抑制剂并对抗突变BRAF肿瘤(例如，突变BRAF黑素瘤细胞系A375M的异种移植；图13和图14)，而且令人惊讶地且出乎意料地，要求的化合物还有效地对抗突变RAS肿瘤(例如，突变RAS结直肠癌细胞系SW620的异种移植；图11和图12)。要求的化合物对抗突变RAS肿瘤的令人惊讶的且出乎意料的活性不能从它们已知的或预期的BRAF抑制活性来预测得到。
用于比较化合物的数据表明，尽管比较化合物在一定程度上有效地对抗突变BRAF肿瘤(例如，突变BRAF黑素瘤细胞系A375M的异种移植；图19)，但是它们对抗突变RAS肿瘤的效果相对较小(例如，突变RAS结直肠癌细胞系SW620的异种移植；图15、图16、图17和图18)。
上述已经描述了本发明的原理、优选实施方式和运行模式。然而，本发明不应被理解为限于所讨论的特定实施方式。而是，上述实施方式应被看作是说明性的而不是限制性的且应理解，在不背离本发明范围的情况下，本领域技术人员可以在那些实施方式中进行变化。
参考文献
在本文中引用了大量专利和出版物以更充分地们描述和公开本发明以及本发明所属的技术状态。下面提供这些参考文献的完全引用。通过参考将这些参考文献的每一个全部并入本发明中，使得其程度仿佛与通过参考将各单独文献具体和单独指出以并入本文中。
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Claims (40)

1.一种化合物，选自下式的化合物及其药用盐：
其中-RA独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I；并且
其中-RA位于苯环上的间位或对位。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，-RA独立地为-H、-Me、-F或-Cl。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，-RA为-H。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中，-RA为-Me。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，-RA为-F。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中，-RA为-Cl。
7.根据权利要求1所述的化合物，选自下式的化合物及其药用盐：
其中-RA独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I。
8.根据权利要求1所述的化合物，选自下式的化合物及其药用盐：
其中-RA独立地为-H、-Me、-F、-Cl、-Br或-I。
9.根据权利要求1所述的化合物，选自下列化合物及其药用盐：
10.根据权利要求1所述的化合物，选自下列化合物及其药用盐：
11.根据权利要求1所述的化合物，选自下列化合物及其药用盐：
12.根据权利要求1所述的化合物，选自下列化合物及其药用盐：
13.一种组合物，包含根据权利要求1至12中任一项所述的化合物及药用载体。
14.一种组合物，包含根据权利要求1至12中任一项所述的化合物及药用稀释剂。
15.一种组合物，包含根据权利要求1至12中任一项所述的化合物及药用赋形剂。
16.一种制备组合物的方法，包括将根据权利要求1至12中任一项所述的化合物与药用载体混合。
17.一种制备组合物的方法，包括将根据权利要求1至12中任一项所述的化合物与药用稀释剂混合。
18.一种制备组合物的方法，包括将根据权利要求1至12中任一项所述的化合物与药用赋形剂混合。
19.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
20.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS癌症的药物中的应用。
21.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗下述的药物中的应用：
胰腺癌；甲状腺癌症；结直肠癌；***瘤；骨髓增生异常综合征；肺癌；肝癌；白血病；黑素瘤；膀胱癌；肾癌；乳腺癌，卵巢癌，胆管癌或神经胶质瘤。
22.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗胰腺癌的药物中的应用。
23.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗甲状腺癌症的药物中的应用。
24.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗滤泡状甲状腺癌症或未分化的***状甲状腺癌症的药物中的应用。
25.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗结直肠癌的药物中的应用。
26.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗肺癌的药物中的应用。
27.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗肺腺癌的药物中的应用。
28.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗白血病的药物中的应用。
29.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗急性髓性白血病的药物中的应用。
30.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗黑素瘤的药物中的应用。
31.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗下述的药物中的应用：
突变RAS胰腺癌；突变RAS甲状腺癌症；突变RAS结直肠癌；突变RAS***瘤；突变RAS骨髓增生异常综合征；突变RAS肺癌；突变RAS肝癌；突变RAS白血病；突变RAS黑素瘤；突变RAS膀胱癌；突变RAS肾癌；突变RAS乳腺癌，突变RAS卵巢癌，突变RAS胆管癌或突变RAS神经胶质瘤。
32.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS胰腺癌的药物中的应用。
33.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS甲状腺癌症的药物中的应用。
34.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS滤泡状甲状腺癌症或未分化的***状甲状腺癌症的药物中的应用。
35.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS结直肠癌的药物中的应用。
36.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS肺癌的药物中的应用。
37.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS肺腺癌的药物中的应用。
38.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS白血病的药物中的应用。
39.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS急性髓性白血病的药物中的应用。
40.根据权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备用于治疗突变RAS黑素瘤的药物中的应用。
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