BR112012018415A2 - composto, composição, métodos de preparar uma composição e de tratamento, e, uso de um composto. - Google Patents
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Abstract
COMPOSTO, COMPOSIÇÃO, MÉTODOS DE PREPARAR UMA COMPOSIÇÃO E DE TRATAMENTO, E, USO DE UM COMPOSITO. A presente invenção diz respeito no geral ao campo dos compostos terapêuticos e mais especificamente a certos compostos da seguinte fórmula (por conveniência, aqui coletivamente aludido como "compostos IP"), que, inter alia, são úteis no tratamento de câncer, por exemplo,câncer caracterizado por (por exemplo, impulsionado por) RAS multante ("câncer RAS mutante"). A presente invenção também diz respeito às composições farmacêuticas que compreende tais compostos, e o uso de tais compostos e composições no tratamento de câncer, por exemplo, câncer RAS mutante.
Description
PEDIDO RELACIONADO Este pedido está relacionado com o pedido de patente dos 5 Estados Unidos número 61/300.085 depositado em 01 de fevereiro de 2010, os conteúdos do qual são aqui incorporados por referência em sua totalidade.
CAMPO TÉCNICO A presente invenção no geral diz respeito ao campo dos compostos terapêuticos e mais especificamente a certos compostos (por conveniência, coletivamente aqui aludidos como “composto IPs”), que, inter alia, são úteis no tratamento de câncer, por exemplo, câncer caracterizado por (por exemplo, direcionado por) RAS mutante (“câncer RAS mutante”). A presente invenção também diz respeito às composições farmacêuticas que compreendem tais compostos e ao uso de tais compostos e composições no tratamento de câncer, por exemplo, câncer RAS mutante.
FUNDAMENTOS Várias patentes e publicações são aqui citadas de modo a descrever e divulgar mais completamente a invenção e o estado da técnica à qual a invenção pertence. Cada uma destas referências é aqui incorporada por referência em sua totalidade na presente divulgação, até o mesmo grau como se cada referência individual foi específica e individualmente indicada como sendo incorporada por referência. Por todo este relatório descritivo, incluindo as reivindicações que seguem, a menos que o contexto requeira de outro modo, a palavra “compreender,” e variações tais como “compreende” e “compreendendo,” serão entendidas implicar a inclusão de um número inteiro ou etapa estabelecida ou grupo de números inteiros ou etapas mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou etapa ou grupo de números inteiros ou etapas.
Deve ser mencionado que, como usado no relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um,” “uma,” e “o”, “a” incluem referentes plural a menos que o contexto claramente dite de outro modo.
Assim, por exemplo, referência a “um transportador farmacêutico” 5 inclui misturas de dois ou mais de tais transportadores e os semelhantes.
As faixas são frequentemente aqui expressadas como de “cerca de” um valor particular, e/ou a “cerca de” um outro valor particular.
Quando uma tal faixa é expressada, uma outra forma de realização inclui do um valor particular e/ou até o outro valor particular.
Similarmente, quando valores são expressados como aproximações, pelo uso do “cerca de,” antecedente será entendido que o valor particular forma uma outra forma de realização.
Esta divulgação inclui informação que pode ser útil no entendimento da presente invenção.
Não é uma admissão que qualquer uma das informações aqui fornecidas seja técnica anterior ou relevante para a invenção presentemente reivindicada, ou que qualquer publicação específica ou implicitamente aludida seja técnica anterior.
Câncer e RAS As proteínas RAS são proteínas de ligação de nucleotídeo guanina pequenas que estão à jusante do fator de crescimento, citocina e receptores de hormônios.
Estes receptores de superfície celular ativam as proteínas chamadas de fatores de troca de guanina-nucleotídeo (GNEFs), que substituem GDP no lugar de GTP nas proteínas RAS, que estimulam a ativação de RAS.
Outras proteínas chamadas de proteínas que ativam GTPase (GAPs) estimulam a atividade de GTPase intrínseca de RAS, promovendo deste modo a hidrólise de GTP e retornando RAS para o seu estado ligado a GDP inativo.
A RAS ativada liga-se a diversas proteínas efetoras, incluindo fosfoinositida 3-cinase (PI3K), a família RAF de cinases de proteína e o fator de troca de guanina-nucleotídeo Ral.
Estes efetores por sua vez regulam a atividade dos caminhos de sinalização que controlam a proliferação celular,
senescência, sobrevivência e diferenciação.
Existem três genes RAS em mamíferos chamados de HRAS, KRAS e NRAS e eles servem para funções de sobreposição mas não conservadas.
As proteínas RAS também são importantes no câncer. 20 a 30 5 % dos tumores humanos que abrigam mutações de ganho de função somática em um dos genes RAS.
Mais habitualmente estes envolvem os códons para glicina 12 (G12), glicina 13 (G13) e glutamina 61 (Q61) e estas mutações comunicam, através de mecanismos diferentes, a atividade de GTPase intrínseca estimulada de RAS, aprisionando-a no estado ligado a GTP ativo e permitindo que a mesma promova a tumorigênese.
Ver, por exemplo, Downward, 2003; Young et al., 2009; e Bos, 1989. Tabela 1 Frequência de Mutações RAS em Diferentes Tipos de Cânceres Tipo de Tumor Frequência Pâncreas 90 % Tireoide (Papilar não diferenciado) 60 % Tireoide (Folicular) 55 % Colorretal 45 % Seminoma 45 % Síndrome mielodisplástica (MDS) 40 % Adenocarcinoma pulmonar 35 % (célula não pequena) Fígado 30 % Leucemia mielógena aguda (AML) 30 % Melanoma 15 % Bexiga 10 % Rim 10 % RAS e BRAF As proteínas de RAS ativas ativam vários efetores a jusante, incluindo as proteínas da família RAF.
Existem três proteínas RAF, ARAF, BRAF e CRAF.
A RAF ativada fosforila e ativa uma segunda cinase de proteína chamada MEK, que depois fosforila e ativa uma terceira cinase de proteína chamada de ERK.
ERK fosforila uma multidão de substratos citossólicos e nuclear, regulando deste modo os processos celulares tais como proliferação, sobrevivência, diferenciação e senescência.
BRAF é importante no câncer, porque o mesmo é mutado em cerca de 2 % dos cânceres humanos, particularmente em melanoma (43 % dos casos), cânceres da tireóide (45 %), ovariano (10 %) e colorretal (13 %). Ao contrário, as mutações de ARAF e CRAF são muito raras em câncer humano.
Notavelmente, entretanto, em células cancerosas, a RAS oncogênica não 5 sinaliza através de BRAF, mas ao invés sinalizam exclusivamente através de CRAF para ativar MEK.
Mais de 100 mutações diferentes foram descritas em BRAF no câncer, mas uma única mutação (uma substituição de ácido glutâmico no lugar da valina na posição 600) é responsável por cerca de 90 % das mutações que ocorrem.
Este BRAF ativa mutante 500 vezes e permite que o mesmo estimule a sinalização de ERK e NFkB constitutivos, estimulando a V600E sobrevivência e proliferação.
Consequentemente, BRAF pode transformar células tais como fibroblastos e melanócitos.
A inibição de V600E BRAF em células cancerosas inibe a proliferação de célula e induz à apoptose in vitro e in vivo suprime o crescimento de tumor, validando V600E BRAF como um agente terapêutico.
Na vasta maioria dos cânceres, as mutações de BRAF e RAS são mutuamente exclusivas.
Isto fornece evidência genética para sugerir que estas proteínas estão no mesmo caminho e que elas conduzem os mesmos processos nas células cancerosas.
Entretanto, existem diferenças claras entre as funções de BRAF oncogênico e RAS oncogênico nas células cancerosas.
Primeiro, RAS ativa vários caminhos, ao passo que BRAF é conhecido ativar apenas o caminho de MEK/ERK.
Como uma consequência, as células mutantes BRAF são mais dependentes da sinalização de MEK/ERK e assim são consideravelmente mais sensíveis aos inibidores de BRAF ou MEK do que as células em que RAS é mutada.
Ver, por exemplo, Garnett et al., 2004; Wellbrock et al., 2004; Gray-Schopfer et al., 2007; Solit et al., 2006. Compostos relacionados Niculescu-Duvaz et al., 2006 (WO 2006/043090 A1), descreve as seguintes classes de compostos nas páginas 41 e 43 neste. Os compostos são descritos como inibidores de BRAF úteis para o tratamento de câncer, especialmente câncer de BRAF mutante.
O N1 N2 PY P1 P2 R R
R R R N N h
N N N N3 H H R P3 P4
O N1 N2
R R R h
N N N N3 H H
R Adicionalmente, Niculescu-Duvaz et al., 2006 fornece os seguintes exemplos:
O O N CJS 3247 N CJS 3600
H H Cl
O O CJS 3608 N N N N CJS 3609 H (XX-01) H
O O CJS 3680 N N CJS 3614 N N (XX-04) H H . Niculescu-Duvaz et al., 2007 (WO 2007/125330 A1), descreve as seguintes classes de compostos nas páginas 57 e 58 neste. Os compostos são descritos como inibidores de BRAF úteis para o tratamento de câncer, 5 especialmente câncer de BRAF mutante.
O N1 N2 P1 P2 R R
R R N N P5
R O N N3
R H P4
PY R h
O N1 N2
O N N3
PY R h Adicionalmente, Niculescu-Duvaz et al., 2007 fornece os seguintes exemplos:
N N H CJS 3683 N N CJS 3741
N N H CJS 3742 F . A presente invenção fornece compostos alternativos, que caracterizados por uma combinação particular de motivos estruturais e que fornecem atividade surpreendente e inesperada (por exemplo, atividade contra 5 cânceres de RAS mutantes), por exemplo, quando comparados a um ou mais dos compostos conhecidos estruturalmente relacionados. Embora os compostos estruturalmente relacionados sejam conhecidos como inibidores de BRAF, não teria sido prognosticado que os compostos reivindicados são ativos contra cânceres de RAS mutantes.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS A Figura 1 mostra a estrutura química dos vários compostos da presente invenção: AA-01, AA-02, AA-03 e AA-04. A Figura 2 mostra a estrutura química dos vários compostos da presente invenção: BB-01 e BB-02. A Figura 3 mostra a estrutura química de vários compostos de comparação: XX-01, XX-02, XX-03 e XX-04. A Figura 4 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto AA-01. As faixas de linhas celulares são (a) um painel de linhas celulares de BRAF mutante (mutBRAF): WM266.4, A375M, UACC62; (b) um painel de linhas celulares de RAS mutante (mutRAS): SW620, HCT116 e WM1361; e (c) um painel de linhas celulares BRAF e RAS do tipo selvagem: SKMEL23, KM12 e BT474. A Figura 5 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular
WM266.4 para o composto BB-01. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 6 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular 5 WM266.4 para o composto BB-02. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 7 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-01. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 8 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-02. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 9 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-03. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 10 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-04. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 11 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto AA-01 e para os controles.
A Figura 12 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto BB-02 e para os controles.
A Figura 13 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha de célula de BRAF mutante A375, para o tratamento com o composto AA-01 e 5 para os controles.
A Figura 14 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha de célula de BRAF mutante A375, para o tratamento com o composto BB-02 e para os controles.
A Figura 15 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-01 e para os controles.
A Figura 16 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-02 e para os controles.
A Figura 17 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-03 e para os controles.
A Figura 18 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-04 e para os controles.
A Figura 19 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha de célula de BRAF mutante A375, para o tratamento com o composto de comparação XX-02 e para os controles.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO Um aspecto da invenção diz respeito a certos compostos (por conveniência, aqui coletivamente aludido como “compostos IP”), como aqui descritos. 5 Um outro aspecto da invenção diz respeito a uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) que compreende um composto IP, como aqui descrito e um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitáveis.
Um outro aspecto da invenção diz respeito ao método de preparar uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) que compreende a etapa de misturar um composto IP, como aqui descrito e um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitáveis.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método de tratamento que compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto IP, como aqui descrito, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um composto IP como aqui descrito para o uso em um método de tratamento do corpo do ser humano ou animal pela terapia.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso de um composto IP, como aqui descrito, na fabricação de um medicamento para o uso em tratamento.
Em uma forma de realização, o tratamento é tratamento de câncer.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer de tumor sólido.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer pancreático; câncer da tireóide (por exemplo, folicular; papilar não diferenciado); câncer colorretal; seminoma; síndrome mielodisplástica (MDS); câncer pulmonar (por exemplo adenocarcinoma pulmonar); câncer hepático; leucemia (por exemplo, leucemia mielógena aguda (AML)); melanoma; câncer da bexiga; câncer renal; câncer mamário, câncer ovariano, câncer do duto biliar, ou 5 glioma.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer pancreático.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer da tireóide.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer colorretal.
Em uma forma de realização, o câncer é seminoma.
Em uma forma de realização, o câncer é síndrome mielodisplástica (MDS). Em uma forma de realização, o câncer é câncer pulmonar.
Em uma forma de realização, o câncer é adenocarcinoma pulmonar.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer hepático.
Em uma forma de realização, o câncer é leucemia.
Em uma forma de realização, o câncer é leucemia mielógena aguda (AML). Em uma forma de realização, o câncer é melanoma.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer da bexiga.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer renal.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer mamário.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer ovariano.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer do duto biliar.
Em uma forma de realização, o câncer é glioma.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer RAS mutante (por exemplo, câncer pancreático RAS mutante, etc.). Em uma forma de realização, o câncer é caracterizado por, ou caracterizado ainda por, câncer de células tronco.
Em uma forma de realização, o tratamento compreende ainda tratamento com um ou mais agentes terapêuticos ou terapias adicionais, por exemplo, um ou mais agentes anti-câncer ou terapias adicionais. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um kit 5 que compreende (a) um composto IP, como aqui descrito, preferivelmente fornecido como uma composição farmacêutica e em um recipiente adequado e/ou com embalagem adequada; e (b) instruções para o uso, por exemplo, instruções descritas sobre como administrar o composto. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um composto IP obtenível por um método de síntese como aqui descrito, ou um método que compreende um método de síntese como aqui descrito. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um composto IP obtido por um método de síntese como aqui descrito, ou um método que compreende um método de síntese como aqui descrito. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a novos intermediários, como aqui descritos, que são adequados para o uso nos métodos da síntese aqui descritos. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso de tais novos intermediários, como aqui descritos, nos métodos da síntese aqui descritos. Como será avaliado por uma pessoa de habilidade na técnica, as características e as formas de realização preferidas de um aspecto da invenção também dirão respeito a outros aspectos da invenção.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Compostos A presente diz respeito a certos compostos que são estruturalmente relacionados com os seguintes compostos:
N O 1-(5-terc-butil-2-fenil-2H-pirazol-3-il)-3-[2-fluoro-4-(1-metil-2- O oxo-2,3-diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)-fenil]-uréia
N O 1-(5-terc-butil-2-fenil-2H-pirazol-3-il)-3-[4-(1-metil-2-oxo-2,3- O diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)- naftalen-1-il]-uréia
H Ao contrário dos compostos conhecidos, os compostos da presente invenção são caracterizados por uma combinação particular de motivos estruturais, especificamente: (a) um motivo de 1-metil-2-oxo-2,3-diidro-1H-imidazo[4,5- 5 b]piridin-7-ilóxi:
H (B) um porção de ligação de 2-fluoro-fen-1,4-di-ila ou um motivo de ligação de naft-1,4-di-ila:
F (C) um motivo de um 1-(5-terc-butil-2-fenil-2H-pirazol-3-il)- ureíla, onde o grupo fenila opcionalmente carrega um substituinte meta ou para:
O m p R Nenhum dos compostos conhecidos têm todos os três destes motivos. Além disso, os estudos de comparação com os compostos (incluindo os compostos conhecidos) demonstram que, surpreendente e inesperadamente, os compostos tendo todos os três dos motivos (isto é, os 5 compostos reivindicados) têm substancialmente melhor atividade contra o cânceres de RAS mutantes, do que os compostos de comparação que carecem de um ou mais destes motivos. Assim, um aspecto da presente invenção diz respeito aos compostos da seguinte fórmula e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis (aqui coletivamente aludidos como “compostos IP”):
O Me N m
O p R
H em que -J- é independentemente:
F ou ; e em que -R é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I; e em que -R é posicionado em meta- ou para- no anel de fenila.
Em uma forma de realização, o composto é selecionado de compostos da seguinte fórmula e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis, em que -RA é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I e em que -RA é posicionado em meta- ou para- no anel de 5 fenila:
O Me N m
O A p R
N N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado de compostos da seguinte fórmula e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis, em que -RA é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I:
O Me
N N R H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado de compostos da seguinte fórmula e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis, em que -RA é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I:
O Me
N N H . Em uma forma de realização, -RA é independentemente -H, -Me, -F, ou -Cl. Em uma forma de realização, -RA é independentemente -H ou -Me. 5 Em uma forma de realização, -RA é independentemente -H. Em uma forma de realização, -RA é independentemente -Me. Em uma forma de realização, -RA é independentemente -F ou -Cl. Em uma forma de realização, -RA é independentemente -F. Em uma forma de realização, -RA é independentemente -Cl. Em uma forma de realização, o composto é selecionado do seguinte composto (isto é, AA-01) e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
O Me
N N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado do seguinte composto (isto é, AA-02) e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
O Me
N N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado do seguinte composto (isto é, AA-03) e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
O Me
O N Cl
N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado do 5 seguinte composto (isto é, AA-04) e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
O Me
N N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado de compostos da seguinte fórmula e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis, em que -RB é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I e em que -RB é posicionado em meta- ou para- no anel de fenila:
O Me N m O p RB
N N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado de compostos da seguinte fórmula e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis, em que -RB é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I:
O Me
N N R H . 5 e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis, em que -RB é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I:
O Me
N N H . Em uma forma de realização, -RB é independentemente -H, -Me, -F, ou -Cl. Em uma forma de realização, -RB é independentemente -H ou -Me. Em uma forma de realização, -RB é independentemente -H. Em uma forma de realização, -RB é independentemente -Me.
Em uma forma de realização, -RB é independentemente -F ou -Cl. Em uma forma de realização, -RB é independentemente -F. Em uma forma de realização, -RB é independentemente -Cl. 5 Em uma forma de realização, o composto é selecionado do seguinte composto (isto é, BB-01) e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
O Me
N N H . Em uma forma de realização, o composto é selecionado do seguinte composto (isto é, BB-02) e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
O Me
N N H . Combinações É avaliado que certas características da invenção, que são, por clareza, descritas no contexto das formas de realização separadas, também podem ser fornecidas em combinação em uma forma de realização única. Ao contrário, várias características da invenção, que são, por brevidade, descritas no contexto de uma forma de realização única, que também pode ser fornecida separadamente ou em qualquer subcombinação adequada. Todas as combinações das formas de realização que dizem respeito aos grupos químicos representados pelas variáveis (por exemplo, -J-, -R, -RA, -RB, etc.) são especificamente abrangidos pela presente invenção e são aqui divulgados exatamente como se todas as combinações fossem individuas e explicitamente divulgadas, até o grau em que tais combinações abrangem compostos que são 5 compostos estáveis (isto é, compostos que podem ser isolados, caracterizados e testados para a atividade biológica). Além disso, todas as subcondições dos grupos químicos listados nas formas de realização que descrevem tais variáveis são também especificamente abrangidos pela presente invenção e são aqui divulgados exatamente como se todas as tais subcombinações dos grupos químicos fossem individuais e explicitamente aqui divulgados.
Formas Substancialmente Purificadas Um aspecto da presente invenção diz respeito aos compostos IP, como aqui descritos, na forma substancialmente purificada e/ou em uma forma substancialmente isenta de contaminantes.
Em uma forma de realização, o composto está na forma substancialmente purificada e/ou em uma forma substancialmente isenta de contaminantes.
Em uma forma de realização, o composto está em uma forma substancialmente purificada com uma pureza de pelo menos 50 % em peso, por exemplo, pelo menos 60 % em peso, por exemplo, pelo menos 70 % em peso, por exemplo, pelo menos 80 % em peso, por exemplo, pelo menos 90 % em peso, por exemplo, pelo menos 95 % em peso, por exemplo, pelo menos 97 % em peso, por exemplo, pelo menos 98 % em peso, por exemplo, pelo menos 99 % em peso.
A menos que especificado, a forma substancialmente purificada refere-se ao composto em qualquer forma estereoisomérica.
Por exemplo, em uma forma de realização, a forma substancialmente purificada refere-se a uma mistura de estereoisômeros, isto é, purificada com respeito a outros compostos.
Em uma forma de realização, a forma substancialmente purificada refere-se a um estereoisômero.
Em uma forma de realização, o está em uma forma substancialmente isenta de contaminantes em que os contaminantes não representam mais do que 50 % em peso, por exemplo, não mais do que 40 % 5 em peso, por exemplo, não mais do que 30 % em peso, por exemplo, não mais do que 20 % em peso, por exemplo, não mais do que 10 % em peso, por exemplo, não mais do que 5 % em peso, por exemplo, não mais do que 3 % em peso, por exemplo, não mais do que 2 % em peso, por exemplo, não mais do que 1 % em peso.
A menos que especificado, os contaminantes referem-se a outros compostos, isto é, outro que não estereoisômeros.
Em uma forma de realização, os contaminantes referem-se a outros compostos e outros estereoisômeros.
Isômeros Certos compostos podem existir em uma ou mais formas geométricas, ópticas, enantioméricas, diasterioméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisôméricas, tautoméricas, conformacionais ou anoméricas particulares, incluindo mas não limitados a, formas cis e trans; formas E e Z; c-, t- e formas r; formas endo e exo; formas R-, S- e meso; formas D e L; d- e formas l; formas (+) e (-);formas ceto-, enol- e enolato; formas sin e anti; formas sinclinal e anticlinal; formas α e β; formas axial e equatorial; formas de bote, cadeira-, espiral-, envelope- e meia cadeira; e combinações destes, a seguir coletivamente aludidos como “isômeros” (ou “formas isoméricas”). Observar que especificamente excluídos dos termos “isômeros,” como aqui usados, são os isômeros estruturais (ou constitucionais) (isto é, isômeros que diferem nas conexões entre átomos ao invés de meramente pela posição dos átomos no espaço). Por exemplo, uma referência a um grupo terc-butila, -C(CH3)3, não deve ser interpretada como uma referência ao seu isômero estrutural, iso-butila, -CH2CH(CH3)2.
Similarmente, uma referência à para-clorofenila não deve ser interpretada como uma referência ao seu isômero estrutural, meta-clorofenila.
Observar que especificamente incluídos no termo “isômero” são compostos com uma ou mais substituições isotópicas.
Por exemplo, H 5 pode estar em qualquer forma isotópica, incluindo 1H, 2H (D) e 3H (T); C pode estar em qualquer forma isotópica, incluindo 12C, 13C e 14C; O pode estar em qualquer forma isotópica, incluindo 16O e 18O; e os seus semelhantes.
A menos que de outro modo especificado, uma referência a um composto particular inclui todas as tais formas isoméricas, incluindo suas misturas.
Sais Deve ser conveniente ou desejável preparar, purificar, e/ou manusear um sal correspondente do composto, por exemplo, um sal farmaceuticamente aceitável.
Os exemplos dos sais farmaceuticamente aceitáveis são debatidos em Berge et al., 1977, “Pharmaceutically Aceitáveis Salts,” J.
Pharm.
Sci., Vol. 66, pp. 1-19. Por exemplo, se o composto é catiônico, ou tem um grupo funcional que pode ser catiônico (por exemplo, -NH- pode ser -NH2+-), depois um sal pode ser formado com um ânion adequado.
Os exemplos dos ânions inorgânicos adequados incluem, mas não são limitados a, daqueles derivados dos seguintes ácidos inorgânicos: clorídrico, bromídrico, iodídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico e fosforoso.
Os exemplos dos ânions orgânicos adequados que incluem, mas não são limitados a, derivados adequados dos seguintes ácidos orgânicos: 2-acetioxibenzóico, acético, ascórbico, aspártico, benzóico, canforsulfônico, cinâmico, cítrico, edético, etanodissulfônico, etanossulfônico, fumárico, glicoptônico, glicônico, glutâmico, glicólico, hidroximaléico, hidroxinaftaleno carboxílico, isetiônico, lático, lactobiônico, laurico, maléico, málico, metanossulfônico, múcico, oléico, oxálico, palmítico, pamóico, pantotênico,
fenilacético, fenilsulfônico, propiônico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, toluenossulfônico e valérico.
Os exemplos dos ânions orgânicos poliméricos adequados que incluem, mas não são limitados a, derivados adequados dos seguintes ácidos poliméricos: ácido 5 tânico, carboximetil celulose.
A menos que de outro modo especificado, uma referência a um composto particular também incluem formas salinas deste.
Hidratos e Solvatos Deve ser conveniente ou desejável preparar, purificar, e/ou manusear um solvente correspondente do composto.
O termo “solvato” é aqui usado no sentido convencional para referir-se a um complexo de soluto (por exemplo, composto, sal do composto) e solvente.
Se o solvente é água, o solvato pode ser convenientemente aludido como um hidrato, por exemplo, um mono-hidrato, um di-hidrato, um tri-hidrato, etc.
A menos que de outro modo especificado, uma referência a um composto particular também inclui formas de solvato e hidrato deste.
Síntese Química Métodos para a síntese química de compostos da presente invenção são aqui descritos.
Estes e/ou outros métodos bem conhecidos podem ser modificados e/ou adaptados em maneiras conhecidas de modo a facilitar a síntese dos compostos adicionais dentro do escopo da presente invenção.
As descrições de métodos e procedimentos de laboratório gerais, úteis para a preparação dos compostos aqui descritos, são fornecidos em Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry, 5ª Edição, 1989, (Editores: Furniss, Hannaford, Smith e Tatchell) (publicado por Longmann, UK). Métodos para a síntese dos compostos de piridina em particular são descritos em Heterocyclic Chemistry, 3ª Edição, 1998,
(Editores: Joule, Mills e Smith) (publicado por Chapman & Hall, UK). Os compostos IP aqui descritos podem ser preparados via intermediários (2). Estes intermediários podem ser preparados a partir do material de partida comercialmente disponível, 2-amino-3-nitro-4-cloro- 5 piridina (1) e 3-fluoro-4-aminofenol (R1 é -H e R2 é -F) ou 4-amino-1-naftol (R1 e R2 junto são -CH=CH-). Os intermediários (2) são protegidos seletivamente no grupo amino, por exemplo como um carbamato de BOC, para produzir os intermediários (3). Esquema 1
Os intermediários (3) também podem ser obtidos diretamente a partir da 2-amino-3-nitro-4-cloropiridina (1) e 3-fluoro-4-aminofenol protegidos por N-BOC ou 4-amino-1-naftol protegidos por N-BOC.
Esquema 2
O grupo nitro dos intermediários protegidos (3) pode ser reduzido a um grupo amino com Pd/C e formiato de amônio ou hidrogênio, ou com NiCl2 e NaBH4, para dar os intermediários de diamino (4). Esquema 3
Os intermediários (8), alquilados a N3 (em respeito ao anel de piridina), podem ser preparados a partir dos intermediários (4). O grupo 3 amino mais nucleofílico no intermediários (4) é convertido ao carbamato de etila, para produzir os intermediários (5) e o grupo BOC é removido com TFA 5 para produzir os intermediários (6). A desproteção do próton de carbamato ácido com NaH dá um ânion em N3 que é alquilado para produzir os intermediários (7). A ciclização dos intermediários (7), na presença de base, dá os intermediários correspondentes (8). Esquema 4
Os intermediários (8) são reagidos com 3-terc- butil-5-isocianato-1-aril-1H-pirazóis para produzir as uréias correspondentes.
Os isocianatos respectivos podem ser obtidos pela reação de aminas com fosfogênio, trifosfogênio ou seus derivados, ou pela conversão dos ácidos carboxílicos correspondentes às acil azidas com, por exemplo, difenil fosforil azida, seguido pelo rearranjo de Curtius. O grupo arila no pirazol pode ser, 5 por exemplo, não substituído ou substituído (por exemplo, substituído em meta ou para) com um grupo alquila (por exemplo, -Me) ou um átomo de halógeno (por exemplo, -F, -Cl, -Br, -I). Esquema 5 2
R 1 R NH2 2
R 1 H H
N R N N O + OCN
R R 8 N N
H Composições Um aspecto da presente invenção diz respeito a uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) que compreende um composto IP, como aqui descrito e um transportador, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis. Em uma forma de realização, a composição compreende ainda um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, como aqui descritos. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método de preparar uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) que compreende misturar um composto IP, como aqui descrito e um transportador, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis. Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método de preparar uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) que compreende misturar um composto IP, como aqui descrito;
um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, como aqui descritos; e um transportador, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
Usos 5 Os compostos aqui descritos são úteis, por exemplo, no tratamento de câncer, por exemplo, câncer RAS mutante.
Para se evitar dúvidas, o termo “câncer RAS mutante” é aqui usado para se referir ao câncer é caracterizado por (por exemplo, direcionado por) RAS mutante, por exemplo, por uma ou mais mutações (por exemplo, mutações de ganho de função) em um dos agentes de RAS (isto é, HRAS, KRAS e NRAS). Como aqui debatido, as mutações de RAS mais comuns envolve códons para um ou mais de glicinas 12 (G12), glicina 13 (G13) e glutamina 61 (Q61). Uso nos Métodos de Terapia Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um composto IP, como aqui descrito, para o uso em um método de tratamento do corpo do ser humano ou animal pela terapia.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um composto IP, como aqui descrito, em combinação com um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, como aqui descritos, para o uso em um método de tratamento do corpo do ser humano ou animal pela terapia.
Uso na fabricação de Medicamentos Um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso de um composto IP, como aqui descrito, na fabricação de um medicamento para o uso em tratamento.
Em uma forma de realização, o medicamento compreende o composto IP.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito ao uso de um composto IP, como aqui descrito e um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, como aqui descritos, na fabricação de um medicamento para o uso em tratamento.
Em uma forma de realização, o medicamento compreende o 5 composto IP e a um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais.
Métodos de Tratamento Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método de tratamento que compreende administrar a um paciente em necessidade de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto IP, como aqui descrito, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica.
Um outro aspecto da presente invenção diz respeito a um método de tratamento que compreende administrar a um paciente em necessidade de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto IP, como aqui descrito, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica e um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, como aqui descritos, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica.
Condições Tratadas Em uma forma de realização, o tratamento é tratamento de câncer.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer pulmonar, câncer pulmonar de célula pequena, câncer pulmonar de célula não pequena, câncer gastrointestinal, câncer estomacal, câncer intestinal, câncer colorretal, câncer da tireóide, câncer mamário, câncer ovariano, câncer endometrial, câncer prostático, câncer testicular, câncer hepático, câncer renal, carcinoma da célula renal, câncer da bexiga, câncer pancreático, câncer cerebral, glioma, sarcoma, osteossarcoma, câncer ósseo, câncer nasofaríngeo (por exemplo,
câncer da cabeça, câncer de pescoço), câncer da pele, câncer escamoso, sarcoma de Kaposi, melanoma, melanoma maligno, linfoma, ou leucemia.
Em uma forma de realização, o câncer é: um carcinoma, por exemplo um carcinoma da bexiga, mama, 5 cólon/reto (por exemplo, carcinomas colorretais tais como adenocarcinoma do cólon e adenoma do cólon), renal, epidérmico, hepático, pulmonar (por exemplo, adenocarcinoma, câncer pulmonar de célula pequena e carcinomas pulmonares da célula não pequena), esofágico, vesícula biliar, ovariano, pancreático (por exemplo, carcinoma pancreático exócrino), estomacal, da cerviz, da tireóide, prostático, da pele (por exemplo, carcinoma da célula escamosa); um tumor hematopoiético de linhagem linfóide, por exemplo leucemia, leucemia linfocítica aguda, linfoma da célula B, linfoma da célula T, linfoma de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin, linfoma da célula pilosa, ou linfoma de Burkett; um tumor hematopoiético de linhagem mielóide, por exemplo leucemias mielógena aguda e crônica, síndrome mielodisplástica, ou leucemia promielocítica; um tumor de origem mesenquimatosa, por exemplo fibrossarcoma ou habdomiossarcoma; um tumor do sistema nervoso central ou periférico, por exemplo astrocitoma, neuroblastoma, glioma ou schvanoma; melanoma; seminoma; teratocarcinoma; osteossarcoma; xenoderoma pigmentoso; ceratoctantoma; câncer folicular da tireóide; ou sarcoma de Kaposi.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer de tumor sólido.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer pancreático; câncer da tireóide (por exemplo, folicular; papilar não diferenciado); câncer colorretal; seminoma; síndrome mielodisplástica (MDS); câncer pulmonar (por exemplo adenocarcinoma pulmonar); câncer hepático; leucemia (por exemplo, leucemia mielógena aguda (AML)); melanoma; câncer da bexiga; câncer renal; câncer mamário, câncer ovariano, câncer do duto biliar, ou 5 glioma.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer pancreático.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer da tireóide.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer colorretal.
Em uma forma de realização, o câncer é seminoma.
Em uma forma de realização, o câncer é síndrome mielodisplástica (MDS). Em uma forma de realização, o câncer é câncer pulmonar.
Em uma forma de realização, o câncer é adenocarcinoma pulmonar.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer hepático.
Em uma forma de realização, o câncer é leucemia.
Em uma forma de realização, o câncer é leucemia mielógena aguda (AML). Em uma forma de realização, o câncer é melanoma.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer da bexiga.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer renal.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer mamário.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer ovariano.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer do duto biliar.
Em uma forma de realização, o câncer é glioma.
Em uma forma de realização, o câncer é câncer RAS mutante (por exemplo, câncer pancreático RAS mutante, etc.). Em uma forma de realização, o câncer é caracterizado por, ou caracterizado ainda por, câncer de células tronco.
O efeito anti-câncer pode surgir através de um ou mais mecanismos, incluindo mas não limitados a regulagem de proliferação celular, a inibição da progressão do ciclo celular, a inibição da angiogênese (a formação de novo vasos sanguíneos), a inibição de metástase (o espalhamento 5 de um tumor a partir da sua origem), a inibição da migração celular (o espalhamento de células cancerosas para outras partes do corpo), a inibição da invasão (o espalhamento das células de tumor dentro das estruturas vizinhas), ou a promoção d apoptose (morte de célula programada). Os compostos da presente invenção podem ser usados no tratamento de cânceres aqui descritos, independente dos mecanismos aqui debatidos.
Tratamento O termo “tratamento,” como aqui usado no contexto de tratar uma condição, diz respeito no geral ao tratamento e terapia, seja de um ser humano ou um animal (por exemplo, em aplicações veterinárias), em que algum efeito terapêutico desejado é alcançado, por exemplo, a inibição do progresso da condição e que inclui uma redução na taxa de progresso, uma parada na taxa de progresso, alívio de sintomas da condição, melhora da condição e cura da condição.
O tratamento como uma medida profilática (isto é, profilaxia) também é incluído.
Por exemplo, o uso com pacientes que ainda não desenvolveram a condição, mas que estão em risco de desenvolver a condição, é abrangido pelo termo “tratamento.” Por exemplo, tratamento que inclui a profilaxia de câncer, reduzindo a incidência de câncer, reduzindo a severidade do câncer, aliviando os sintomas de câncer, etc.
O termo “quantidade terapeuticamente eficaz,” como aqui usado, diz respeito àquela quantidade de um composto, ou um material, composição ou forma de dosagem que compreende um composto, que é eficaz para produzir algum efeito terapêutico desejado, comensurado com uma razão benefício/risco, quando administrados de acordo com um regime de tratamento desejado.
Terapias de Combinação O termo “tratamento” que inclui tratamentos e terapias de combinação, em que dois ou mais tratamentos ou terapias são combinados, 5 por exemplo, sequencial ou simultaneamente.
Por exemplo, os compostos aqui descritos também podem ser usados em terapias de combinação, por exemplo, em conjunção com outros agentes, por exemplo, agentes citotóxicos, agentes anticâncer, etc.
Os exemplos dos tratamentos e terapias que incluem, mas não são limitados a, quimioterapia (a administração de agentes ativos, incluindo, por exemplo, medicamentos, anticorpos (por exemplo, como na imunoterapia), pró-medicamentos (por exemplo, como na terapia fotodinâmica, GDEPT, ADEPT, etc.); cirurgia; terapia de radiação; terapia fotodinâmica; terapia de gene; e dietas controladas.
Por exemplo, pode ser benéfico combinar tratamento com um composto como aqui descrito com um ou mais outros (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes ou terapias que regulam o crescimento e sobrevivência ou diferenciação da célula via um mecanismo diferente, tratando assim vários traços característico do desenvolvimento de câncer.
Um aspecto da presente invenção diz respeito a um composto como aqui descritos, em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais, como descrito abaixo.
A combinação particular estaria no critério do médico que selecionaria as dosagens usando o seu conhecimento geral comum e regimes de dosagem conhecidos por um médico habilitado.
Os agentes (isto é, o composto aqui descrito, mais um ou mais outros agentes) podem ser administrados simultânea ou sequencialmente e podem ser administrados em programas de dose que variam individualmente e via caminhos diferentes.
Por exemplo, quando administrados sequencialmente, os agentes podem ser administrados em intervalos contiguamente espaçados (por exemplo, em um período de 5 a 10 minutos) ou em intervalos mais longos (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou mais horas separadamente, ou mesmo períodos mais longos separadamente onde requerido), o regime de dosagem exato que é comensurado com as 5 propriedades do(s) agente(s) terapêutico(s). O(s) agente(s) (isto é, o composto aqui descrito, mais um ou mais outros agentes) pode(m) ser formulado(s) juntos em uma única forma de dosagem, ou alternativamente, os agentes individuais podem ser formulados separadamente e apresentados juntos na forma de um kit, opcionalmente com instruções para o seu uso.
Outros usos O compostos IP aqui descritos também podem ser usados como parte de um ensaio in vivo, por exemplo, de modo a determinar se um hospedeiro candidato é provável de se beneficiar do tratamento com o composto em questão.
O compostos IP aqui descritos também podem ser usados como um padrão, por exemplo, em um ensaio, de modo a identificar outros compostos, outros agentes anti-câncer, etc.
Kits Um aspecto da invenção diz respeito a um kit que compreende (a) um composto IP como aqui descrito, ou uma composição que compreende um composto IP como aqui descrito, por exemplo, preferivelmente fornecido em um recipiente adequado e/ou com embalagem adequada; e (b) instruções para o uso, por exemplo, instruções descritas sobre como administrar o composto ou composição.
Em uma forma de realização, o kit compreende ainda um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, como aqui descritos.
As instruções descritas também podem incluir uma lista de indicações para que o ingrediente ativo seja um tratamento adequado.
Vias de Administração O composto IP ou composição farmacêutica que compreende o composto IP pode ser administrada a um indivíduo por qualquer via 5 conveniente de administração, se sistêmica/periférica ou topicamente (isto é, no sítio de ação desejável). As vias de administração que incluem, mas não são limitados a, oral (por exemplo, pela ingestão); bucal; sublingual; transdérmica (incluindo, por exemplo, por um emplastro, esparadrapo, etc.); transmucósica (incluindo, por exemplo, por um emplastro, esparadrapo, etc.); intranasal (por exemplo, pela pulverização nasal, gotas ou a partir de um atomizador ou dispositivo de liberação de pó seco); ocular (por exemplo, pelas gotas oculares); pulmonar (por exemplo, pela terapia de inalação ou insuflação usando, por exemplo, um aerossol, por exemplo, através da boca ou nariz); retal (por exemplo, por supositório ou enema); vaginal (por exemplo, por pessário); parenteral, por exemplo, pela injeção, incluindo subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnóide e intraesternal; por implante de um depósito ou reservatório, por exemplo, subcutânea ou intramuscularmente.
O indivíduo/Paciente O indivíduo/paciente pode ser um cordato, um vertebrado, um mamífero, um mamífero placentário, um marsupial (por exemplo, canguru, fascólomo), um roedor (por exemplo, um porquinho da Índia, um hamster, um rato, um camundongo), murino (por exemplo, um camundongo), um lagomorfo (por exemplo, um coelho), aviário (por exemplo, um pássaro), canino (por exemplo, um cão), felino (por exemplo, um gato), equino (por exemplo, um cavalo), porcino (por exemplo, um porco), ovino (por exemplo,
um ovelha), bovino (por exemplo, um vaca), um primata, símio (por exemplo, um macaco ou bugio), um macaco (por exemplo, sagui, babuíno), um bugio (por exemplo, gorila, chimpanzé, orangotango, gibão), ou um ser humano.
Além disso, o indivíduo/paciente pode estar em qualquer uma 5 de suas formas de desenvolvimento, por exemplo, um feto.
Em uma forma de realização, o indivíduo/paciente é um ser humano.
Formulações Embora seja possível para o composto IP ser administrado sozinho, é preferível apresentá-lo como uma formulação farmacêutica (por exemplo, composição, preparação, medicamento) que compreende pelo menos um composto IP, como aqui descrito, junto com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica, incluindo, mas não limitado a, transportadores, diluentes, excipientes, adjuvantes, enchedores, tampões, preservantes, antioxidantes, lubrificantes, estabilizantes, solubilizantes, tensoativos (por exemplo, agentes de umectação), agentes de mascaramento, agentes corantes, agentes flavorizantes e agentes adoçantes farmaceuticamente aceitáveis.
A formulação pode compreender ainda outros agentes ativos, por exemplo, outros agentes terapêuticos ou profiláticos.
Assim, a presente invenção fornece ainda composições farmacêuticas, como definidas acima e métodos de fabricar uma composição farmacêutica que compreende misturar pelo menos um composto IP, como aqui descrito, junto com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica, por exemplo, transportadores, diluentes, excipientes, etc.
Se formulados como unidades separadas (por exemplo, tabletes, etc.), cada unidade contém uma quantidade pré-determinada (dosagem) do composto.
O termo “farmaceuticamente aceitável,” como aqui usado, diz respeito aos compostos, ingredientes, materiais, composições, formas de dosagem, etc., que sejam, dentro do escopo do julgamento médico criterioso, adequados para o uso em contato com os tecidos do indivíduo em questão (por exemplo, ser humano) sem toxicidade excessiva, irritação, resposta 5 alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurado com uma razão benefício/risco razoável.
Cada transportador, diluente, excipiente, etc. também devem ser “aceitáveis” no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação.
Os transportadores, diluentes, excipientes, etc. adequados podem ser encontrados em textos farmacêuticos padrão, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990; e Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5a edição, 2005. As formulações podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica da farmácia.
Tais métodos que incluem a etapa de levar em associação o composto com um transportador que constitui um ou mais ingredientes acessórios.
No geral, as formulações são preparadas levando-se uniforme e intimamente em associação o composto com transportadores (por exemplo, transportadores líquidos, transportadores sólidos finamente divididos, etc.) e depois dando forma ao produto, se necessário.
A formulação pode ser preparada para fornecer liberação rápida ou lenta; imediata, demorada, controlada com o tempo, ou de liberação prolongada; ou uma combinação destas.
As formulações podem estar adequadamente na forma de líquidos, soluções (por exemplo, aquosas e não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas e não aquosas), emulsões (por exemplo, óleo em água, água em óleo), elixires, xaropes, eletuários, enxágues bucais, gotas, tabletes (incluindo, por exemplo, tabletes revestidos), grânulos, pós, losangos,
pastilhas, cápsulas (incluindo, por exemplo, cápsulas de gelatina dura e mole), comprimidos, pílulas, ampolas, bolos, supositórios, pessários, tinturas, géis, pastas, unguentos, cremes, loções, óleos, espumas, pulverizações, névoas, ou aerossóis. 5 As formulações podem ser adequadamente fornecidas como um emplastro, esparadrapo adesivo, bandagem, curativo, ou os semelhantes que são impregnados com um ou mais compostos e opcionalmente um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis, incluindo, por exemplo, realçadores de penetração, permeação e absorção.
As formulações também podem ser adequadamente fornecidas na forma de um depósito ou reservatório.
O composto pode ser dissolvido em, colocado em suspensão em, ou misturado com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis.
O composto pode ser apresentado em um lipossoma ou outra micropartícula que é designada para alvejar o composto, por exemplo, aos componentes do sangue ou um ou mais órgãos.
As formulações adequadas para a administração oral (por exemplo, pela ingestão) que incluem líquidos, soluções (por exemplo, aquosas, não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas e não aquosas), emulsões (por exemplo, óleo em água, água em óleo), elixires, xaropes, eletuários, tabletes, grânulos, pós, cápsulas, comprimidos, pílulas, ampolas, bolos.
As formulações adequadas para a administração bucal que incluem enxágues bucais, losangos, pastilhas, assim como emplastros, esparadrapos adesivos, depósitos e reservatórios.
Os losangos tipicamente compreendem o composto em uma base aromatizada, usualmente a sacarose e acácia ou tragacanto.
As pastilhas tipicamente compreendem o composto em uma matriz inerte, tal como gelatina e glicerina, ou a sacarose e acácia.
Os enxágues bucais tipicamente compreendem o composto em um transportador líquido adequado.
As formulações adequadas para a administração sublingual que incluem tabletes, losangos, pastilhas, cápsulas e pílulas.
As formulações adequadas para a administração transmucósica 5 oral que incluem líquidos, soluções (por exemplo, aquosas e não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas e não aquosas), emulsões (por exemplo, óleo em água, água em óleo), enxágues bucais, losangos, pastilhas, assim como emplastros, esparadrapos adesivos, depósitos e reservatórios.
As formulações adequadas para a administração transmucósica não oral que incluem líquidos, soluções (por exemplo, aquosas e não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas e não aquosas), emulsões (por exemplo, óleo em água, água em óleo), supositórios, pessários, géis, pastas, unguentos, cremes, loções, óleos, assim como emplastros, esparadrapos adesivos, depósitos e reservatórios.
As formulações adequadas para a administração transdérmica que incluem géis, pastas, unguentos, cremes, loções e óleos, assim como emplastros, esparadrapos adesivos, bandagens, curativos, depósitos e reservatórios.
Os tabletes podem ser fabricados pelos meios convencionais, por exemplo, compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios.
Os tabletes comprimidos podem ser preparados pela compressão do composto em uma máquina adequada em uma forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um ou mais aglutinantes (por exemplo, povidona, gelatina, acácia, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetil celulose); enchedores ou diluentes (por exemplo, lactose, celulose microcristalina, hidrogeno fosfato de cálcio); lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco, sílica); desintegrantes (por exemplo, amido glicolato de sódio, povidona reticulada, carboximetil celulose de sódio reticulada); agentes ativos na superfície ou de dispersão ou de umectação (por exemplo, lauril sulfato de sódio); preservantes (por exemplo, p- hidroxibenzoato de metila, p-hidroxibenzoato de propila, ácido sórbico); aromatizantes, agentes realçadores de sabor e adoçantes.
Os tabletes moldados podem ser fabricados pela moldagem em uma máquina adequada 5 de uma mistura do composto em pó misturado com um diluente líquido incolor.
Os tabletes podem ser opcionalmente revestidos ou marcados e podem ser formulados de modo a fornecer liberação lenta ou controlada do composto neste usando, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose em proporções variadas para fornecer o perfil de liberação desejada.
Os tabletes podem ser opcionalmente fornecidos com um revestimento, por exemplo, para afetar a liberação, por exemplo um revestimento entérico, para fornecer a liberação em partes do intestino outro que não o estômago.
Os unguentos são tipicamente preparados a partir do composto e uma base parafínica ou uma de unguento miscível em água.
Os cremes são tipicamente preparados a partir do composto e uma base cremosa de óleo em água.
Se desejado, a fase aquosa da base cremosa pode incluir, por exemplo, pelo menos cerca de 30 % p/p de um álcool poliídrico, isto é, um álcool tendo dois ou mais grupos hidroxila tais como propileno glicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno glicol e suas misturas.
As formulações tópicas podem desejavelmente incluir um composto que realce a absorção ou penetração do composto através da pele ou outras áreas afetadas.
Os exemplos de tais realçadores de penetração dérmica que incluem sulfóxido de dimetila e análogos relacionados.
As emulsões são tipicamente preparadas a partir do composto e uma fase oleosa, que pode opcionalmente compreender meramente um emulsificante (de outro modo conhecido como um emulgente), ou pode compreender uma mistura de pelo menos um emulsificador com uma gordura ou um óleo ou tanto com uma gordura quanto com um óleo.
Preferivelmente,
um emulsificador hidrofílico é incluído junto com um emulsificador lipofílico que atua como um estabilizador.
Também é preferido incluir tanto um óleo quanto uma gordura.
Juntos, o(s) emulsificador(es) com ou sem estabilizante(s) compõem a chamada cera emulsificadora e a cera junto com o 5 óleo e/ou gordura compõem a chamada base de unguento emulsificadora que forma a fase oleosa dispersa das formulações cremosas.
Os emulgentes e estabilizadores de emulsão adequados que incluem Tween 60, Span 80, álcool cetoestearílico, álcool miristílico, monoestearato de glicerila e lauril sulfato de sódio.
A escolha de óleos ou gorduras adequados para a formulação está fundamentada com base na obtenção das propriedades cosméticas desejadas, visto que a solubilidade do composto na maioria dos óleos prováveis de serem usados nas formulações da emulsão farmacêutica pode ser muito baixa.
Assim o creme deve ser preferivelmente um produto não gorduroso, que não mancha e lavável com consistência adequada para evitar vazamento dos tubos ou outros recipientes.
Os ésteres alquílicos de cadeia reta ou ramificada, mono- ou dibásicos tais como di-isoadipato, estearato de isocetila, diéster de propileno glicol de ácidos graxos de coco, miristato de isopropila, oleato de decila, palmitato de isopropila, estearato de butila, palmitato de 2-etilexila ou uma mistura de ésteres de cadeia ramificada conhecidos como Crodamol CAP podem ser usados, os últimos três sendo ésteres preferidos.
Estes podem ser usados sozinhos ou em combinação dependendo das propriedades requeridas.
Alternativamente, lipídeos de alto ponto de fusão tais como parafina mole branca e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais podem ser usados.
As formulações adequadas para a administração intranasal, onde o transportador é um líquido, incluindo, por exemplo, pulverização nasal, gotas nasais, ou pela administração de aerossol pelo nebulizador, que incluem soluções aquosas ou oleosas do composto.
As formulações adequadas para a administração intranasal,
onde o transportador é um sólido, incluindo, por exemplo, aqueles apresentados como um pó grosso tendo um tamanho de partícula, por exemplo, na faixa de cerca de 20 a cerca de 500 mícrons que é administrado na maneira em que a aspiração pelo nariz é tomada, isto é, pela inalação 5 rápida através da passagem nasal a partir de um recipiente do pó mantido próximo ao nariz.
As formulações adequadas para a administração pulmonar (por exemplo, pela terapia de inalação ou insuflação) que incluem aquelas apresentadas como uma pulverização de aerossol a partir de uma embalagem pressurizada, com o uso de um propelente adequado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoro-etano, dióxido de carbono, ou outros gases adequados.
As formulações adequadas para a administração ocular que incluem gotas oculares em que o composto é dissolvido ou colocado em suspensão em um transportador adequado, especialmente um solvente aquoso para o composto.
As formulações adequadas para a administração retal podem ser apresentadas como um supositório com uma base adequada que compreende, por exemplo, óleos naturais ou endurecidos, ceras, gorduras, polióis semi-líquidos ou líquidos, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicilato; ou como uma solução ou suspensão para o tratamento por enema.
As formulações adequadas para a administração vaginal podem ser apresentadas como formulações de pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou pulverização contendo além do composto, tais transportadores como são conhecidos na técnica como sendo apropriados.
As formulações adequadas para a administração parenteral (por exemplo, por injeção), que incluem líquidos aquosos ou não aquosos, isotônicos, isentos de pirogênio, estéril (por exemplo, soluções, suspensões), em que o composto é dissolvido, colocado em suspensão, ou de outro modo fornecido (por exemplo, em um lipossoma ou outra micropartícula). Tais líquidos podem adicionalmente conter outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como anti-oxidantes, tampões, preservantes, estabilizantes, bacteriostatos, agentes de suspensão, agentes espessantes e solutos que 5 tornam a formulação isotônica com o sangue (ou outro fluido corporal relevante) do receptor pretendido.
Os exemplos dos excipientes que incluem, por exemplo, água, álcoois, polióis, glicerol, óleos vegetais e os seus semelhantes.
Os exemplos dos transportadores isotônicos adequados para o uso em tais formulações que incluem Injeção de Cloreto de Sódio, Solução de Ringer, ou Injeção de Ringer Lactada.
Tipicamente, a concentração do composto no líquido é de cerca de 1 ng/ml a cerca de 10 μg/ml, por exemplo de cerca de 10 ng/ml a cerca de 1 μg/ml.
As formulações podem ser apresentadas em recipientes selados de dose unitária ou dose múltipla, por exemplo, ampolas e frascos e podem ser armazenados em uma condição secada por congelamento que requer apenas a adição do transportador líquido estéril, por exemplo água para injeções, imediatamente antes do uso.
Soluções e suspensões de injeção extemporânea podem ser preparadas a partir dos pós, grânulos e tabletes estéreis.
Dosagem Será avaliado por uma pessoa de habilidade na técnica que dosagens apropriadas dos compostos IP e composições que compreendem os compostos IP, podem variar de paciente para paciente.
Determinar a dosagem ideal no geral envolverá o equilíbrio do nível de benefício terapêutico contra qualquer risco ou efeitos colaterais nocivos.
O nível de dosagem selecionado dependerá de uma variedade de fatores incluindo, mas não limitado à atividade do composto IP particular, da via de administração, do tempo de administração, da taxa de excreção do composto IP, da duração do tratamento, outros medicamentos, compostos, e/ou materiais usados em combinação, da severidade da condição e da espécie, sexo, idade, peso, condição, saúde geral e história médica anterior do paciente. A quantidade de composto IP e a via de administração por fim estará no critério do médico, veterinário, ou clínico, embora no geral a dosagem será selecionada para se obter concentrações locais no sítio de ação que alcancem os efeitos desejados sem causar efeitos 5 colaterais nocivos ou deletérios substanciais. A administração pode ser efetuada em uma dose, contínua ou intermitentemente (por exemplo, em doses divididas em intervalos apropriados) por todo o curso de tratamento. Os métodos de determinar os meios e dosagem mais eficazes de administração são bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica e variarão com a formulação usada para terapia, o propósito da terapia, a(s) célula(s) alvo que é(são) tratada(s) e o indivíduo que é tratado. As administrações únicas ou múltiplas podem ser realizadas com o nível e padrão de dose que são selecionados pelo médico, veterinário, ou clínico responsável pelo tratamento. No geral, uma dose adequada do composto IP está na faixa de cerca de 10 μg a cerca de 250 mg (mais tipicamente de cerca de 100 μg a cerca de 25 mg) por quilograma de peso corporal do indivíduo por dia. Onde o composto é um sal, um éster, uma amida, um pró-medicamento, ou os semelhantes, a quantidade administrada é calculada com base no composto precursor e assim o peso real a ser usado é aumentado proporcionalmente.
EXEMPLOS Os seguintes exemplos são fornecidos unicamente para ilustrar a presente invenção e não são intencionados para limitar o escopo da invenção, como aqui descritos. Síntese Química Todos os materiais de partida, reagentes e solventes para reagente foram grau reagente e usados como adquiridos. Os solventes cromatográficos foram grau de HPLC e foram usados sem outra purificação. As reações foram monitoradas pela análise cromatografia de camada fina
(TLC) usando placas de camada fina de gel de sílica 60 F-254 da Merck. A cromatografia em coluna cintilante foi realizada em gel de sílica 60 da Merck (0,015 a 0,040 mm) ou em colunas de gel de sílica Isolute Flash Si e Si II descartáveis. A TLC preparativa foi realizada em placas de TLC pré- 5 revestidas Macherey-Nagel [809 023] SILA G-25 UV254 ou placas de TLC preparativas pré-revestidas Analtech [2015], 2000 μm com UV254. As análises de LCMS foram realizadas em um sistema de HPLC Micromass LCT / Water’s Alliance 2795 com uma coluna Discovery 5 μm, C18, 50 mm x 4,6 mm d.i. da Supelco em uma temperatura de 22° C usando os seguintes sistemas de solvente: Solvente A: Metanol; Solvente B: 0,1 % de ácido fórmico em água em uma taxa de fluxo de 1 ml/min. Gradiente partindo com 10 % de A / 90 % de B de 0 a 0,5 minutos depois 10 % de A / 90 % de B a 90 % de A / 10 % de B de 0,5 minutos a 6,5 minutos e continuando a 90 % de A / 10 % de B até 10 minutos. De 10 a 10,5 minutos o gradiente reverteu de volta até 10 % de A / 90 % onde as concentrações permaneceram até 12 minutos. A detecção por UV foi a 254 nm e a ionização foi eletropulverização de íon positiva ou negativa. A faixa de varredura de peso molecular é de 50 a
1000. As amostras foram fornecidas como 1 mg/ml em DMSO ou metanol com 3 μl injetados em uma alça parcialmente cheia. Os espectros de RMN foram registrados em DMSO-d6 em um espectrômetro Bruker Advance de 500 MHz. Síntese 1 2-fluoro-4-hidroxifenilcarbamato de terc-butila
OH 4-Amino-3-fluorofenol (10,61 g, 83,5 mmol) foi adicionado a uma mistura fundida de Boc2O (18,29 g, 83,8 mmol) e InCl3 (188 mg, 0,85 mmol) a 35° C. A mistura preta foi agitada a 35° C por 2 horas, tempo durante o qual o mesmo tornou-se em um óleo preto espesso. A mistura foi depois diluída com EtOAc (200 ml) e H2O (200 ml) e a agitação foi continuada por 10 minutos. As camadas foram separadas e a camada orgânica 5 foi lavada com H2O (3 x 200 ml), secada (MgSO4), filtrada e concentrada até a secura. O óleo preto resultante foi redissolvido em CH2Cl2 (50 ml) e carregado em uma coluna em gel de sílica. Elução com 5 → 7 % de EtOAc em CH2Cl2 forneceu o composto do título como um sólido cristalino, amarelo claro. Rendimento 16,7 g (90 %). 1H-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 1,42 (s, 9H, C(CH3)3), 6,50 - 6,57 (m, 2H, ArH), 7,11 - 7,21 (m, 1 H, 13 ArH), 8,45 (bs, 1 H, OH), 9,63 (s, 1 H, NHBoc); C-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 28,0, 78,6, 102,7 (d, JFH = 22,2), 110,8 (d, JFH = 2,7), 117,1 (d, JFH = 12,6), 127,2, 153,7, 155,5 (d, JFH = 11,3), 156,1 (d, JFH = 246); 19F-RMN (DMSO-d6), δ (ppm): -121,6; LC-MS (3,94 min): m/z calculado para C11H14FNO3 [M - C(CH3)3]+: 172,0; encontrado: 172,0. Síntese 2 4-(2-amino-3-nitropiridin-4-ilóxi)-2-fluorofenilcarbamato de terc-butila (3a)
O NO2 N NH2 O DMSO seco (20 ml) foi adicionado ao NaH (1,029 g de uma dispersão a 60 % em óleo mineral, 25,7 mmol) em um frasco de fundo redondo sob argônio. Depois de 5 minutos, 2-fluoro-4-hidroxifenil-carbamato de terc-butila sólido (5,59 g, 24,6 mmol) foi adicionado em três porções, dando uma solução escura, que, depois de 15 minutos de agitação em temperatura ambiente, foi tratada com 4-cloro-3-nitropiridin-2-amina (4,23 g,
24,4 mmol) de uma vez. A solução vermelha escura foi aquecida até 110° C por 1 hora e deixada esfriar até a temperatura ambiente. O EtOAc (150 ml) e H2O (200 ml) foram subsequentemente adicionados à solução e a camada orgânica foi isolada. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml) e 5 as camadas orgânicas combinadas foram lavadas uma vez com NaHCO3 saturado (150 ml), secadas (MgSO4), filtradas e concentradas até a secura para dar um sólido amarelo brilhante. Este material foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. Rendimento 8,68 g (98 %). 1H-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 1,46 (s, 9H, C(CH3)3), 6,08 (d, 1 H, 3JHH = 5,5, PirH), 7,01 (m, 1 H, ArH), 7,18 (br s, 2H, NH2), 7,22 (m, 1 H, ArH), 7,67 (m, 1 H, ArH), 8,04 (d, 1 H, 3JHH = 5,5, PirH), 9,03 (s, 1 H, NHBoc); 19F-RMN (DMSO-d6), δ (ppm): -120,7; LC-MS (4,72 min): m/z calculado para C16H17FN4O5 [M + H+]: 365,0; encontrado: 365,0. Síntese 3 4-(2,3-diaminopiridin-4-ilóxi)-2-fluorofenilcarbamato de terc-butila (4a)
O NH2 N NH2 O Pd/C (1,09 g) foi adicionado a uma solução amarela de 4-(2- amino-3-nitropiridin-4-ilóxi)-2-fluorofenilcarbamato de terc-butila (3a) (6,20 g, 17,0 mmol) em EtOAc/EtOH (90/150 ml) e a mistura preta foi agitada sob uma atmosfera de nitrogênio por 5 horas e filtrada em Celite. O filtrado marrom escuro foi concentrado até a secura, redissolvido em CH2Cl2 (20 ml) e carregado em uma coluna em gel de sílica. Os produtos eluídos com EtOAc e as frações que contêm o composto do título foram evaporadas até a secura. O óleo orgânico foi dissolvido em CH2Cl2 e uma quantidade igual de hexano foi adicionada. A solução foi concentrada até a secura para dar um uma espuma laranja. Rendimento 4,30 g (76 %). 1H-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 1,45 (s, 9H, C(CH3)3), 4,47 (s, 2H, NH2), 5,61 (s, 2H, NH2), 6,09 (d, 1 5 H, 3JHH = 5,5, PirH), 6,76 (m, 1 H, ArH), 6,87 (m, 1 H, ArH), 7,28 (d, 1 H, 3 13 JHH = 5,5, PirH), 7,47 (m, 1 H, ArH), 8,82 (s, 1 H, NHBoc); C-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 28,0, 79,1, 104,4, 105,9 (d, JFH = 23,1), 113,4 (d, JFH = 3,1), 120,3, 121,5 (d, JFH = 12,2), 126,1, 135,7, 146,2, 150,5, 153,1 (d, JFH = 10,1), 153,3, 155,1 (d, JFH = 248); 19F-RMN (DMSO-d6), δ (ppm): - 120,7; LC-MS (2,69 min): m/z calculado para C16H20FN4O3 [M + H+]: 335,2; encontrado: 335,3. Síntese 4 4-(4-N-(terc-butoxicarbonil)-amino-3-fluorofenóxi)-2-aminopiridin-3-il- carbamato de etila (5a)
O NHCOOEt N NH2 4-(4-N-(terc-butoxicarbonil)-amino-3-fluorofenilóxi)-2,3- diaminopiridina (4a) (2,5 g, 7,5 mmol) foi dissolvida em THF seco (50 ml) sob agitação, piridina (1,2 ml, 15 mmol) foi adicionada e a solução foi esfriada a 0° C. O cloroformiato de etila (0,77 ml, 8,0 mmol) foi adicionado de uma vez. Depois de 30 minutos, a mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente e agitada por mais 24 horas. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo particionado entre DCM e Na2CO3 saturado aquoso. A camada orgânica foi lavada com H2O, secada em MgSO4 e evaporada. O resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna (gradiente de elução DCM a EtOAc) para produzir o composto do título como uma espuma.
Rendimento 1,13 g, 37 %. 1H-RMN δ: 1,17 (t, 3H, CH3,Et, J = 7,1 Hz), 1,45 (s, 9H, tBu), 4,02 (q, 2H, J = 7,1, CH2,Et), 5,89 (s, 2H, NH2,Py2), 5,98 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 6,83 (d, 1 H, Harom), 6,96 (d, 1 H, Harom), 7,55 (t, 1 H, Harom), 7,73 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 8,29 (br s, 1 H, NHPy3), 9,39 (s, 1 H, 5 NHBoc). Síntese 5 4-(4-amino-3-fluorofenóxi)-2-aminopiridin-3-il-carbamato de etila (6a)
F NH2
O NHCOOEt N NH2 4-(4-N-(terc-butoxicarbonil)-amino-3-fluorofenóxi)-2- aminopiridin-3-il-carbamato de etila (5a) (1,13 g, 2,8 mmol) foi dissolvido em TFA (8 ml), umas poucas gotas de água adicionadas e a mistura de reação foi agitada por 2 horas em temperatura ambiente. O TFA foi evaporado, o resíduo dissolvido em água (20 ml), neutralizado com Na2CO3 saturado aquoso e extraído com DCM (2 x 20 ml). A camada orgânica foi secada e evaporada para produzir o composto do título. Rendimento 730 mg, 86 %. 1H-RMN δ: 1,17 (t, 3H, J = 7,1, CH3,Et), 4,05 (q, 2H, J = 7,0, CH2,Et), 5,04 (s, 2H, NH2,Ph), 5,71 (s, 2H, NH2,Py), 5,86 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 6,64 (d, 1 H, Harom), 6,73 - 6,82 (m, 2H, Harom), 7,68 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 8,23 (br s, 1 H, NHPy3). LC-MS: m/z 307 ([M + H]+, 100). Síntese 6 4-(4-amino-3-fluorofenóxi)-2-aminopiridin-3-il-metil-carbamato de etila (7a)
F NH2
N COOEt N NH2 4-(4-amino-3-fluorofenóxi)-2-aminopiridin-3-il-carbamato de etila (6a) (480 mg, 1,6 mmol) foi dissolvido em THF seco (8 ml) e esfriado a 0° C. O hidreto de sódio (60 % em óleo mineral, 80 mg, 2,0 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 40 minutos a 0° C. O iodeto 5 de metila (130 μl, 1,8 mmol) foi adicionado a 0° C. O banho de gelo foi removido e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. O solvente foi evaporado e o resíduo particionado entre DCM e a água destilada. A camada orgânica foi secada e evaporada e o resíduo lavado com éter dietílico para produzir o composto do título como um sólido marrom. Rendimento 322 mg, 63 %. 1H-RMN δ : 1,09 (t, 3H, J = 7,0, CH3,Et), 3,00 (s, 3H, CH3N), 3,90 - 4,10 (m, 2H, CH2,Et), 5,07 (s, 2H, NH2,Ph), 5,87 (d, 1 H, HPy), 6,03 (s, 2H, NH2,Py), 6,63 (t, 1 H, Harom), 6,77-6,81 (m, 2H, Harom), 7,75 (d, 1 H, HPy). Síntese 7 7-(4-Amino-3-fluorofenóxi)-1-N-metil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (8a)
F NH2
H 4-(4-amino-3-fluorofenóxi)-2-aminopiridin-3-il-metil- carbamato de etila (7a) (320 mg, 1,0 mmol) foi colocado em suspensão em uma solução de EtONa em EtOH (4 ml), obtido a partir da dissolução de sódio (480 mg, 21 mmol) em etanol (9 ml). A suspensão foi aquecida sob irradiação de microonda por 1 hora (100° C, 100 W). A mistura foi esfriada em temperatura ambiente e o solvente foi evaporado. O resíduo foi dissolvido in água e foi acidificado com AcOH até o pH 4. O precipitado formado foi recuperado pela filtração, para produzir o composto do título. 5 Rendimento 188 mg, 67 %. 1H-RMN δ : 3,46 (s, 3H, CH3N), 5,11 (s, 2H, NH2), 6,35 (d, 1 H, J = 5,9, HPy), 6,77 - 6,82 (m, 2H, Harom,), 6,99 (d, 1 H, Harom), 7,76 (d, 1 H, J = 6,0, HPy), 11,54 (s, 1 H, NHPy). Síntese 8 1-(3-Terc-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)-3-(2-fluoro-4-(1-N-metil-2-oxo-2,3- diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)fenil)uréia (AA-01)
H 3-Terc-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-amina (550 mg, 1,8 mmol) foi dissolvida em CH2Cl2 (25 ml) e um volume igual de NaHCO3 saturado (aq) foi adicionado. A mistura bifásica foi agitada e esfriada até 0° C com um banho de gelo/água. Depois de 10 minutos, 2 equiv. de uma solução 1,9 M de fosgênio em tolueno adicionado. A mistura foi vigorosamente agitada por 10 minutos, a camada orgânica foi isolada, lavada com H2O, secada (MgSO4) e concentrada até cerca de 5 ml. Esta solução foi adicionada a uma solução de 7-(4-amino-3-fluorofenóxi)-1-N-metil-1H-imidazo[4,5-b]-piridin-2(3H)-ona (8a) (200 mg, 1,4 mmol) em THF. A solução foi agitada por 15 horas em temperatura ambiente, os solventes foram evaporados e o resíduo sólido foi lavado com Et2O e CH2Cl2 para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento 200 mg, 53 %. 1H RMN, δ : 1,28 (s, 9H, terc-Bu), 3,42 (s, 3H, CH3), 6,39 (s, 1 H, HPyz,4), 6,49 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,5), 6,99 (dd, 1
H, J = 1,6, 9,0, Harom),7,21 (dd, 1 H, J = 11,9, 2,7, Harom), 7,40 - 7,45 (m, 1 H, Harom), 7,50 - 7,58 (m, 4H, Harom), 7,81 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 8,10 (t, 1 H, J = 9,1, Harom), 8,80 (s, 1 H, NHuréia), 8,93 (s, 1 H, NHuréia), 11,63 (bs, 1 H, NHPy2). LC-MS: m/z 516 ([M]+, 100). H RMS (EI): m/z calculado para C27H27N7O3 5 ([M + H]+): 516,2154; encontrado: 516,2152. Síntese 9 1-(3-Terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)-3-(2-fluoro-4-(1-N-metil-2-oxo-2,3- diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)fenil)uréia (AA-02)
H O composto do título foi preparado a partir de 3-terc-butil-1-p- tolil-1H-pirazol-5-amina (458 mg, 2 mmol) e 7-(4-amino-3-fluoro-fenóxi)-1- N-metil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (8a) (110 mg, 0,4 mmol) pelo mesmo método como descrito para (AA-01), como um sólido branco amarelado. Rendimento 150 mg, 71 %. 1H RMN, δ : 1,27 (s, 9H, terc-Bu), 2,38 (s, 3H, Ph-CH3), 3,42 (s, 3H, N-CH3), 6,37 (s, 1 H, HPyz,4), 6,49 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,5), 6,96 (dd, 1 H, Harom), 7,20 (d, 1 H, Harom), 7,34 (d, 2H, J = 8,3, Harom), 7,39 (d, 2H, J = 8,4, Harom), 7,81 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 8,11 (t, 1 H, Harom), 8,74 (s, 1 H, NHuréia), 8,92 (s, 1 H, NHuréia), 11,61 (bs, 1 H, NHPy2). LC-MS: m/z 530 ([M + H]+, 100). Síntese 10 1-(3-Terc-butil-1-(4-clorofenila)-1H-pirazol-5-il)-3-(2-fluoro-4-(1-N-metil-2- oxo-2,3-diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)fenil)uréia (AA-03)
O N Cl
N H O composto do título foi preparado a partir de 3-terc-butil-1- (4-clorofenila)-1H-pirazol-5-amina (375 mg, 1,5 mmol) e 7-(4-amino-3- fluorofenóxi)-1-N-metil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (8a) (150 mg, 0,55 mmol) pelo mesmo método como descrito para (AA-01), como um 5 sólido branco amarelado. Rendimento 190 mg, 63 %. 1H RMN, δ : 1,28 (s, 9H, terc-Bu), 3,42 (s, 3H, CH3), 6,39 (s, 1 H, HPyz,4), 6,49 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,5), 6,96 (dd, 1 H, 9,0, Harom),7,21 (d, 1 H, Harom), 7,57 (d, 2H, J = 9,0, Harom), 7,60 (d, 2H, J = 8,9, Harom), 7,81 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 8,08 (t, 1 H, Harom), 8,80 (s, 1 H, NHuréia), 8,89 (s, 1 H, NHuréia), 11,63 (bs, 1 H, NHPy2). LC-MS: m/z 549 ([M]+, 100). Síntese 11 Ácido 3-terc-butil-1-(3-fluorofenil)-1H-pirazol-5-carboxílico
F Em um frasco de fundo redondo (secado em uma estufa) o ácido (3-fluorofenil) borônico (224 mg, 1,6 mmol), etil-3-t-butil-pirazol-5- carboxilato (320 mg, 1,6 mmol), acetato de cobre (355 mg, 1,9 mmol) e piridina seca (158 μl, 1,9 mmol) foram colocados em suspensão sob agitação vigorosa e uma atmosfera de argônio em 10 ml de DMF seco. à mistura de reação, 300 mg de uma peneira molecular 4 Å foi adicionada e a suspensão agitada por 20 horas em temperatura ambiente. A suspensão foi diluída com 20 ml de AcOEt, lavada com água (2 x 20 ml), depois com 20 ml de solução conc. de NaHCO3 e 20 ml de salmoura, secada (MgSO4) e evaporada sob vácuo. Um óleo espesso foi obtido (520 mg) que foi usado na etapa seguinte 5 sem purificação. O óleo foi dissolvido em 10 ml de EtOH e 3 ml de solução NaOH (2 M) foi adicionada sob agitação e a mistura de reação foi refluxada por 30 minutos. Depois de esfriar até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi ajustada até o pH 4 (com AcOH) e extraída com 20 ml de AcOEt. A camada orgânica foi lavada com água (2 x 20 ml), secada e evaporada sob vácuo. Um sólido foi obtido (457 mg). O sólido foi purificado em Biotage usando cicloexano : AcOEt 3 : 1 para produzir o composto do título como um sólido branco. Rendimento 166 mg ( 40 %). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): δ 1,30 (s, 9H), 6,95 (s, 1 H, Hpir), 8,59 (d, 1 H, J = 8,6 Hz), 7,25 - 7,32 (m, 1 H, Harom), 7,35 (d, 1 H, J = 9,9 Hz, Harom), 7,47 - 7,52 (m, 1 H, Harom), 13,22 (s, 1 H, Hácido). H RMS: (M + H)+ calculado para C14H15FN2O2, 262,1118, encontrado: 262,1117. Síntese 12 1-(3-Terc-butil-1-(3-fluorofenil)-1H-pirazol-5-il)-3-(2-fluoro-4-(1-metil-2- oxo-2,3-diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)fenil)uréia (AA-04)
H Ácido 3-terc-butil-1-(3-fluorofenil)-1H-pirazol-5-carboxílico (393 mg, 1,5 mmol) foi dissolvido em DMF seco (8 ml) e trietilamina (209 μl, 1,5 mmol) foi adicionada. A solução foi esfriada a 0° C e difenilfosforil azida
(323 μl, 1,5 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada por 30 minutos a 0° C, seguido por 1 hora em temperatura ambiente. 7-(4-Amino-3- fluorofenóxi)-1-N-thil-1H-imidazo-[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (8a) (140 mg, 0,5 mmol) foi adicionada e a mistura de reação aquecida a 110° C por 1 hora. 5 A solução foi diluída com AcOEt (100 ml) e extraída com água e salmoura. A camada orgânica foi secada e evaporada e o resíduo coletado em DCM. O sólido remanescente foi recuperado pela filtração para produzir o composto do título. Rendimento 25 mg, 9 %. 1H RMN, δ : 1,28 (s, 9H, terc-Bu), 3,41 (s, 3H, CH3), 6,40 (s, 1 H, HPyz,4), 6,49 (d, 1 H, J = 6,1, HPy,5), 6,96 - 7,02 (m, 1 H, Harom), 7,19 - 7,26 (m, 2H, Harom), 7,36 - 7,44 (m, 2H, Harom), 7,58 (t, 1 H, Harom), 7,81 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 8,06 (t, 1 H, J = 9,1, Harom), 8,83 (s, 1 H, NHuréia), 8,92 (s, 1 H, NHuréia), 11,64 (bs, 1 H, NHPy2). LC-MS: m/z 533 ([M]+, 100). Síntese 13 Terc-butil-4-(2-amino-3-nitropiridin-4-il-óxi)naftalen-1-il-carbamato (3b)
O NO2 N NH2 O composto do título foi preparado a partir de 4- hidroxinaftalen-1-ilcarbamato de terc-butila (Regan, J. et al, J. Med. Chem., 2002, Vol. 45, No. 14, p. 2994) (3,9 g, 15 mmol) pelo mesmo método como descrito para o composto (3a). Rendimento 5,4 g, 90 %, na recristalização de diclorometano. 1 H-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 1,52 (s, 9H, C(CH3)3), 5,80 (d, 1 H, J = 5,7, PirH), 7,26 (s, 2H, NH2), 7,38 (d, 1 H, J = 8,3, ArH, Naph), 7,58 - 7,69 (m, 3H, ArH, Naph), 7,86 - 7,89 (m, 1 H, ArH, Naph), 7,93 (d, 1 H, J = 5,5,
PirH), 8,14 - 8,17 (m, 1 H, ArH, Naph), 9,36 (s, 1 H, NHBoc). Síntese 14 Terc-butil-4-(2,3-diaminopiridin-4-il-óxi)naftalen-1-il-carbamato (4b)
O NH2 N NH2 O composto do título foi preparado a partir de terc-butil-4-(2- 5 amino-3-nitropiridin-4-il-óxi)naftalen-1-il-carbamato (3b) (0,50 g, 1,26 mmol) pelo mesmo método como descrito para o composto (4a) como um sólido marrom. Rendimento 0,38 g (82 %). 1H-RMN (DMSO-d6), δ (ppm), J (Hz): 1,55 (s, 9H, C(CH3)3), 4,63 (s, 2H, NH2), 5,66 (s, 2H, NH2), 5,92 (d, 1 H, J = 5,6, PirH), 7,05 (d, 1 H, J = 8,3, ArH,Naph), 7,24 (d, 1 H, J = 5,5, PirH), 7,54 (d, 1 H, J = 8,3, ArH,Naph), 7,60 - 7,65 (m, 2H, ArH, Naph), 8,07-8,12 (m, 2H, ArH, Naph), 9,22 (s, 1 H, NHBoc). Síntese 15 4-(4-N-Boc-aminonaftalen-1-il-óxi)-3-N-aminocarbamoiletil-2-amino- piridina (5b)
O NHCOOEt N NH2 4-(4-N-Boc-aminonaftalen-1-il-óxi)-2,3-diaminopiridina (4b) (500 mg, 1,4 mmol) e a piridina (222 µl, 2,7 mmol) foram dissolvidos em THF seco (8 ml) sob agitação vigorosa a 0° C. A esta solução cloroformiato de etila (136 ml, 1,5 mmol) foi adicionado de uma vez. A mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente e foi agitada por um adicional de 10 horas. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo particionado entre EtOAc e solução de Na2CO3. A camada orgânica foi lavada (20 ml salmoura), secada (MgSO4) e evaporada para fornecer um resíduo sólido. Depois da 5 purificação pela LC (Coluna Isolute, Flash Si II, 50g/170 ml; eluente: EtOAc), o composto desejado foi obtido. Rendimento 475 mg, 75 %. 1H-RMN δ : 1,14 - 1,21 (m, 3H, CH3), 1,50 (s, 9H, tBu), 4,04 - 4,10 (m, 2H, CH2), 5,66 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 5,84 (s, 2H, NH2), 7,15 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 7,49 - 7,60 (m, 3H, Harom), 7,62 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 7,98 - 8,04 (m, 1 H, Harom), 8,07 (d, 1 H, J = 8,5, Harom), 8,40 (s, 1 H, NHcarb), 9,22 (s, 1 H, NHBoc). LC-MS: m/z 440 [(M + H)+, 100]. HRMS (EI): m/z calculado para C23H27N4O5 [(M + H)+]: 439,1981; encontrado 439,1979. Síntese 16 4-(4-Aminonaftalen-1-il-óxi)-3-N-aminocarbamoiletil-2-amino-piridina (6b) NH2
O NHCOOEt N NH2 4-(4-N-Boc-aminonaftalen-1-il-óxi)-3-N-aminocarbamoiletil- 2-aminopiridina (5b) (475 mg, 1,05 mmol) foi dissolvida em TFA seco (10 ml) sob agitação vigorosa a 0° C. A solução foi deixada atingir na temperatura ambiente e foi agitada por um adicional de 2 horas. O TFA foi evaporado sob vácuo e o resíduo oleoso particionado entre EtOAc e a solução de Na2CO3. A camada orgânica foi lavada (20 ml de salmoura), secada (MgSO4) e evaporada para fornecer um resíduo sólido. Rendimento 346 mg, 97 %. 1H-RMN δ : 1,19 - 1,26 (m, 3H, CH3), 4,07 - 4,13 (m, 2H, CH2), 5,57 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 5,77 (s, 4H, 2 x
NH2), 6,66 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 6,97 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 7,37 - 7,45 (m, 2H, Harom), 7,55 (d, 1 H, J = 5,7, HPy), 7,76 - 7,86 (bs, 1 H, Harom), 8,09 - 8,12 (m, 1 H, Harom), 8,36 (s, 1 H, NHcarb). LC-MS: m/z 339 [(M + H)+, 100]. HRMS (EI): m/z calculado para C18H19N4O3 [(M + H)+, 100]: 339,1457; 5 encontrado 339,1459. Síntese 17 4-(4-Aminonaftalen-1-il-óxi)-3-N-metil-N-aminocarbamoiletil-2-amino- piridina (7b) NH2
N COOEt N NH2 4-(4-Aminonaftalen-1-il-óxi)-3-N-aminocarbamoiletil-2- amino-piridina (6b) (350 mg, 1,04 mmol) foi dissolvida em THF seco (8 ml) sob agitação vigorosa a 0° C e argônio. A esta solução NaH (dispersada a 60 % em óleo mineral) (45 mg, 1,14 mmol) foi adicionado. Depois de 40 minutos, MeI (66 ml, 0,91 mmol) foi adicionado a 0° C. A mistura de reação foi deixada atingir a temperatura ambiente e foi agitada por um adicional de 10 horas. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo novamente coletado em 20 ml de EtOAc. A solução foi lavada com salmoura (2 x 20 ml), secada e evaporada até a secura. O resíduo foi triturado com Et2O e filtrado para dar o composto do título como um sólido. Rendimento 238 mg, 65 %. 1H-RMN δ : 1,12 - 1,29 (m, 3H, CH3), 3,14 (s, 3H, CH3), 4,05 - 4,16 (m, 2H, CH2), 5,53 (d, 1 H, J = 5,8, HPy), 5,75 (s, 2H, NH2), 6,01 (s, 2H, NH2), 6,66 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 6,96 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 7,37 - 7,43 (m, 2H, Harom), 7,57 (d, 1 H, J = 5,8, HPy), 7,59 - 7,64 (m, 1 H, Harom), 8,11 - 8,15 (m, 1 H, Harom). LC-MS: m/z 353 ([M + H]+, 100). HRMS (EI): m/z calculado para C19H21N4O3 ([M + H]+): 353,1614;
encontrado 353,1610. Síntese 18 7-(4-Aminonaftalen-1-il-óxi)-1-N-metil-1H-imidazo[4,5-b]piridino-2(3H)- ona (8b) NH2
H 5 230 mg (0,65 mmol) de 4-(4-aminonaftalen-1-il-óxi)-3-N- metil-N-aminocarbamoiletil-2-aminopiridina (7b) foram colocados em suspensão em 5,0 ml de solução 1,0 M de EtONa em EtOH. A suspensão foi submetida à microonda (150 W, 100° C) por 45 minutos. Depois de esfriar, a mistura de reação foi evaporada até a secura, novamente coletada em 20 ml de H2O, o pH ajustado até 4,5 (AcOH), precipitando o composto do título. Rendimento 167 mg, 84 %. 1H-RMN δ : 3,61 (s, 3H, CH3), 5,79 (s, 2H, NH2), 6,10 (d, 1 H, J = 5,9, HPy), 6,68 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 7,10 (d, 1 H, J = 8,1, Harom), 7,43-7,48 (m, 2H, Harom), 7,64 (d, 1 H, J = 5,8, HPy), 7,74 - 7,81 (m, 1 H, Harom), 8,12 - 8,17 (m, 1 H, Harom), 11,57 (s, 1 H, NHPy). LC-MS: m/z 307 ([M + H]+, 100). HRMS (EI): m/z calculado para C17H25N4O2 ([M + H]+): 307,1195; encontrado 307,1188. Síntese 19 1-(3-Terc-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)-3-(4-(1-metil-2-oxo-2,3-diidro-1H- imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)naftalen-1-il)uréia (BB-01)
H O composto do título foi preparado a partir de 3-terc-butil-1- fenil-1H-pirazol-5-amina (0,18 mmol) e 7-(4-aminonaftalen-1-il-óxi)-1-N- metil-1H-imidazo[4,5-b]piridino-2(3H)-ona (8b) (50 mg, 0,16 mmol) pelo mesmo método como descrito para (AA-01), como um sólido branco 5 amarelado. Rendimento 87 mg, 98 %. 1H RMN, δ 1,29 (s, 9H, terc-Bu), 3,53 (s, 3H, CH3), 6,29 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,5), 6,40 (s, 1 H, Hpir), 7,24 (d, 1 H, J = 8,3, Harom), 7,43 (t, 1 H, J = 7,0 Hz), 7,54 - 7,63 (m, 5H), 7,66 (t, 1 H, J = 8,2, Harom), 7,74 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 7,86 (d, 2H, J = 8,3, Harom), 8,05 - 8,10 (m, 1H), 8,77 (s, 1 H, NHuréia), 9,07 (s, 1 H, NHuréia), 11,64 (s, 1 H, NHPy2). LC-MS: Rf = 8,25 min; m/z 548,2 (M+, 100). HRMS (EI): m/z calculado para C31H30N7O3 ([M + H]+): 548,2410; encontrado: 548,2404. Síntese 20 1-(1-N-p-tolil-3-terc-butil-pirazol-5-il)-3-(4-(2-oxo-2,3-diidro-1-N-metil-1H- imidazo[4,5-b]piridin-7-il-óxi)naftalen-1-il)uréia (BB-02)
H O composto do título foi preparado a partir de 3-terc-butil-1-p- tolil-1H-pirazol-5-amina (35 mg, 0,15 mmol) e 7-(4-aminonaftalen-1-il-óxi)- 1-N-metil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (8b) (40 mg, 0,13 mmol) pelo mesmo método como descrito para (AA-01), como um sólido branco amarelado. Rendimento 52 mg, 71 %. 1H RMN, δ : 1,28 (s, 9H, terc-Bu), 2,40 (s, 3H, CH3), 3,53 (s, 3H, CH3), 6,29 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,5), 6,39 (s, 1 H, 5 Hpir), 7,24 (d, 1 H, J = 8,4, Harom), 7,36 (d, 2H, J = 8,2, Harom), 7,45 (d, 2H, J = 8,2, Harom), 7,60 (t, 1 H, J = 7,5, Harom), 7,67 (t, 1 H, J = 7,6, Harom), 7,74 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 7,87 (d, 1 H, J = 8,3, Harom), 8,07 (d, 2H, J = 8,3, Harom), 8,71 (s, 1 H, NHuréia), 9,06 (s, 1 H, NHuréia), 11,65 (s, 1 H, NHPy3). LC-MS: Rf = 5,23 min; m/z 562,2 ([M + H]+, 100). HRMS (EI): m/z calculado para C32H32N7O3 ([M + H]+): 562,2561; encontrado: 562,2566. (Referência) Síntese 21 2-fluoro-4-(2-(metilamino)-3-nitropiridin-4-ilóxi)fenilcarbamato de terc- butila
O NO2
N NH 2-fluoro-4-hidroxifenilcarbamato de terc-butila (3,25 g, 14,4 mmol) foi dissolvido em DMSO (25 ml) e a solução foi agitada sob uma atmosfera de argônio por 20 minutos. O hidreto de sódio (60 % em óleo mineral, 580 mg, 14,4 mmol) foi adicionado às porções e a solução escura foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. 4-cloro-N-metil-3-nitropiridin-2- amina (2,7 g, 14,4 mmol) dissolvida em DMSO (5 ml) foi adicionada de uma vez e a solução vermelha foi agitada a 50° C por 2 horas. A solução foi esfriada, vertida sob gelo moído (200 g) e extraída com acetato de etila (3 x 100 ml). As fases orgânicas foram lavadas com salmoura, secadas e evaporadas para dar o composto do título como um sólido amarelo. Rendimento 5,3 g, 90 %. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ :
1,47 (s, 9H, terc-Bu) 2,93 (d, J = 4,5 Hz, CH3N), 6,08 (d, J = 5,7 Hz, 1 H, Hpy), 7,00 (m, 1 H, Harom), 7,22 (m, 1 H, Harom), 7,55 (q, J = 4,5 Hz, 1 H, NHCH3), 7,66 (m, 1 H, Harom), 8,14 (d, J = 5,7 Hz, 1 H, 1H, Hpy), 9,04 (bs, 1 H, NH). LC-MS: m/z 378,3 ([M + H]+, 100). 5 (Referência) Síntese 22 4-(3-amino-2-(metilamino)piridin-4-ilóxi)-2-fluorofenilcarbamato de terc- butila
O NH2
N NH 2-fluoro-4-(2-(metilamino)-3-nitropiridin-4-ilóxi)fenil- carbamato de terc-butila (5,3 mg, 14 mmol) foi dissolvido em etanol absoluto (600 ml) e hidrogenado em um cartucho de Pd/C a 10 % através de um aparelho H-cube, para dar o composto do título como um sólido amarelo. Rendimento 4,88 g (rendimento quantitativo). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ : 1,44 (s, 9H, terc-Bu), 2,85(d, 3H, J = 4,5 Hz, CH3N), 4,51 (bs, 2H, NH2), 5,94 (m, 1 H, CH3NH), 6,10 (d, 1 H, J = 5,6 Hz, Hpy), 6,72 (m, 1 H, Harom), 6,85 (m, 1 H, Harom), 7,37 (d, 1 H, J = 5,6 Hz, Hpy), 7,44 (m, 1 H, Harom), 8,87 (bs, 1 H, NH). LC-MS: m/z 348,4 ([M + H]+, 100). (Referência) Síntese 23 2-fluoro-4-(3-metil-2-oxo-2,3-diidro-1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)- fenilcarbamata de terc-butila
A uma solução esfriada com gelo 4-(3-amino-2-(metil- amino)piridin-4-ilóxi)-2-fluorofenilcarbamato de terc-butila (4,9 g, 14 mmol) em THF (150 ml) e piridina (10 ml) sob uma atmosfera de argônio, uma solução de trifosfogênio (4,45 g, 15 mmol) em THF (75 ml) foi adicionada 5 em 2 horas por intermédio de um funil de gotejamento. A solução foi agitada por 2 horas a 0° C, seguida por 4 horas em temperatura ambiente e depois submetida ao refluxo durante a noite. Depois de esfriar, a solução foi filtrada, evaporada e submetida a cromatografia em um aparelho Biotage (coluna 25+M, eluente DCM/EtOAc 1/1) para dar o composto do título como um sólido branco. Rendimento 2,05 g, 40 %. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ : 1,47 (s, 9H, terc-Bu), 3,32 (s, 3H, CH3N), 6,53 (d, 1 H, J = 5,9 Hz, Hpy), 6,94 (m, 1 H, Harom), 7,15 (m, 1 H, Harom), 7,60 (m, 1 H, Harom), 7,89 (d, 1 H, J = 5,9 Hz, Hpy), 8,97 (s, 1 H, NH), 11,46 (s, 1 H, NH). LC-MS: m/z 375,1 ([M + H]+, 100). (Referência) Síntese 24 7-(4-Amino-3-fluorofenóxi)-3-metil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona
F NH2
N N Uma solução de 2-fluoro-4-(3-metil-2-oxo-2,3-diidro-1H- imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)fenilcarbamato de terc-butila (2,18 g, 5,8 mmol) em TBAF 1 M em THF (41 ml) foi submetida ao refluxo durante a noite sob uma atmosfera de argônio. A solução foi esfriada e evaporada e a água (20 ml) foi adicionada, no que um precipitado formou-se. O precipitado foi filtrado, lavado com água e secado para dar o composto do título como um sólido branco amarelado.
Rendimento 1,37 g, 86 %. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): δ 3,29 (s, 3H, CH3N), 5,17 (s, 2H, NH2), 6,35 (d, 1 H, J = 5,94 Hz, Hpy), 6,74 - 6,83 (m, 2H, Harom), 6,99 (m, 1 H, Harom), 7,81 (d, 1 H, J = 5,94 Hz, Hpy), 11,44 (s, 1 H, NH). LC-MS: m/z 275,1 ([M + H]+, 100). 5 (Referência) Síntese 25 7-(4-amino-3-fluorofenóxi)-1,3-dimetil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona
F NH2
N N A uma solução de 7-(4-amino-3-fluorofenóxi)-3-metil-1H- imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (100 mg, 0,365 mmol) em THF (4 ml) a 0° C sob argônio, NaH (16,77 mg, 0,419 mmol) foi adicionado em uma porção. A solução resultante foi agitada por 20 minutos e iodometano (0,025 ml, 0,401 mmol) foi adicionado. Depois de 1 hora, água foi adicionada e a solução evaporada e extraída com DCM (3 x 20 ml) para dar o composto do título. Rendimento 80 mg, 0,278 mmol, 76 %. 1H RMN (CDCl3), δ : 3,51 (s, 3H, Me), 3,66 (s, 3H, Me), 6,40 (d, 1 H, J = 6,0, Harom,Py), 6,74 (ddd, 1 H, J = 8,6, 2,5, 1,0, Harom,FPh), 6,83 (m, 2H, Harom,FPh), 7,87 (d, 1 H, J = 6,0, Harom,Py). LC-MS: Rf = 2,60 min; m/z 289,1 ([M + H]+, 90). (Referência) Síntese 26 1-(1-N-p-tolil-3-terc-butil-pirazol-5-il)-3-(4-(2-oxo-2,3-diidro-1-N-metil-1H- imidazo[4,5-b]piridin-7-il-óxi)fenil)uréia (XX-02)
H O composto do título foi preparado usando 3-terc-butil-1-p- tolil-1H-pirazol-5-amina (43,7 mg, 0,19 mmol) e 7-(4-aminofenilóxi)-1-N- metil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (Niculescu-Duvaz, D. et al, J. Med. Chem., 2009, Vol. 52, No. 8, p. 2255) (40 mg, 0,16 mmol) pelo mesmo 5 método como descrito para (AA-01), como um sólido branco. Rendimento 62 mg, 76 %. 1H RMN, δ : 1,27 (s, 9H, terc-Bu), 2,37 (s, 3H, CH3), 3,44 (s, 3H, CH3), 6,35 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,5), 6,39 (s, 1 H, Hpir), 7,11 (d, 2H, J = 9,0, Harom), 7,33 (d, 2H, J = 8,3, Harom), 7,39 (d, 2H, J = 8,3, Harom), 7,47 (d, 2H, J = 9,0, Harom), 7,78 (d, 1 H, J = 5,9, HPy,6), 8,32 (s, 1 H, NHuréia), 9,08 (s, 1 H, NHuréia), 11,59 (s, 1 H, NHPy3). LC-MS: Rf = 5,14 min; m/z 511 ([M + H]+, 100). HRMS (EI): m/z calculado para C28H30N7O3 ([M + H]+): 512,2405; encontrado: 512,2405. (Referência) Síntese 27 1-(3-Terc-butil-1-fenil-1H-pirazol-5-il)-3-(4-(1,3-dimetil-2-oxo-2,3-diidro - 1H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)-2-fluorofenil)uréia (XX-03)
N N O composto do título foi preparado a partir de 3-terc-butil-1- fenil-1H-pirazol-5-amina (130 mg, 0,60 mmol) e 7-(4-amino-3-fluoro- fenóxi)-1,3-dimetil-1H-imidazo[4,5-b]piridin-2(3H)-ona (100 mg, 0,35 mmol) pelo mesmo método como descrito para (AA-01), como um pó amarelo. Rendimento 15 mg, 8 %. 1H RMN (CDCl3), δ : 1,39 (s, 9H, terc-Bu), 3,48 (s, 3H, Me), 3,59 (s, 3H, Me), 6,47 (d, 1 H, J = 5,9, Harom,Py), 5 6,49 (s, 1 H, HPyz,4), 6,85 (dd, 1 H, J = 11,1, 2,5, Harom,FPh), 6,89 (d, 1 H, J = 9,0, Harom,FPh), 7,31 (t, 1 H, J = 7,7, Harom,Ph), 7,42 (t, 2H, J = 7,7, Harom,Ph), 7,50 (d, 2H, J = 7,9, Harom,Ph), 7,92 (d, 1 H, J = 5,9, Harom,Py), 8,15 (t, 1 H, J = 8,9, Harom,FPh). LC-MS: Rf = 2,78 min; m/z 530 ([M + H]+, 90). HRMS (EI): m/z calculado para C28H29FN7O3 ([M + H]+): 530,2310; encontrado: 530,2326. (Referência) Síntese 28 1-(5-Terc-butil-2-fenil-2H-pirazol-3-il)-3-[4-(2-oxo-2,3-diidro-1H- imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)-fenil]-uréia (XX-01)
H O composto do título foi obtido usando métodos conhecidos, como mostrado, por exemplo, na Síntese 61 em Niculescu-Duvaz et al., 2006. (Referência) Síntese 29 1-[5-terc-Butil-2-(4-fluoro-fenil)-2H-pirazol-3-il]-3-[4-(2-oxo-2,3-diidro-1H- imidazo[4,5-b]piridin-7-ilóxi)-fenil]-uréia (XX-04)
N H O composto do título foi obtido usando métodos conhecidos,
como mostrado, por exemplo, na Síntese 79 em Niculescu-Duvaz et al., 2006. Métodos Biológicos Métodos Biológicos - Ensaio A - Ensaio de DELFIA Cinase Os compostos foram avaliados por um ensaio de Cinase 5 realizado de acordo com o seguinte protocolo.
Os seguintes reagentes foram preparados: Tampão DELFIA Cinase (DKB): Tabela 2 Reagente Concentração de Estoque Volume por ml (μl) Volume por placa de 10 ml (μl) MOPS a 20 mM pH 7,2 0,2 M 100 1000 EGTA 0,5 M pH 8,0 0,5 M 10 100 MgCl2 a 10 mM 1M 10 100 β-mercaptoetanol a 0,1 % - 1 10 β-glicerofosfato a 25 mM 0,5 M 50 500 Água 100 % 829 8290
MOPS = ácido 3-[N-Morfolino] propanossulfônico (Sigma M3183). EGTA = ácido bis(éter 2-aminoetílico)-N,N,N’,N’-tetraacético de etileno glicol (Sigma E3889). DKB1 (DKB com B-RAF e proteína MEK): Combinar 4950 μl de DKB e 50 μl de 2,5 mg/ml de estoque de GST-MEK (para dar 1 mg de MEK por 40 μl). Depois adicionar 22,5 μl de B- RAF para dar ~ 0,2 μl de B-RAF por 40 μl.
DKB2 (DKB com proteína MEK): Combinar 4950 μl de DKB e 50 μl de 2,5 mg/ml de estoque de GST-MEK (para dar 1 mg de MEK por 40 μl). Usar 500 μl deste para o sopro (BO) e o controle de vetor vazio (EV). ATP: 100 mM de estoque, diluir a 500 μM para dar 100 μM de concentração final no ensaio.
Inibidores (Compostos de Teste): 100 mM de estoque, diluir até 10, 3, 1, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01, 0,003, 0,001, 0,0003 e 0,0001 mM em DMSO em placa de medicamento, resultando em concentração de 100, 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1, 0,03, 0,01, 0,003 e
0,001 µM no ensaio. Anticorpo primário: Fosfo-MEK1/2 CST #9121S diluído 1 : 1000 em tampão de ensaio DELFIA (AB). Anticorpo pré-incubado no AB por 30 minutos em 5 temperatura ambiente antes do uso. Anticorpo secundário: Perkin Elmer #AD0105 secundário rotulado com Anti-coelho- Eur diluído 1:1000 em tampão de ensaio DELFIA (AB). Anticorpo pré- incubado no AB por 30 minutos em temperatura ambiente antes do uso. (os anticorpos primário e secundário foram incubados juntos). Tween: 0,1 % de Tween 20 em água. Tampão de Ensaio: Tampão de ensaio DELFIA Perkin Elmer #4002-0010. Solução de Realce: Solução de realce DELFIA Perkin Elmer #4001-0010. Placas de Ensaio: Placa preta revestida com glutationa de 96 reservatórios Perbio #15340. Procedimento:
1. Pré-bloquear os reservatórios com leite a 5 % em TBS por 1 hora.
2. Lavar os reservatórios 3 x com 200 μl de TBS.
3. Plaquear 40 μl de DKB1 para todos os inibidores (Compostos de Teste), controle de DMSO e opcionalmente outros compostos de controle.
4. Plaquear 40 μl de DKB2 para os reservatórios BO e EV.
5. Adicionar os inibidores (Compostos de Teste) a 0,5 μl por reservatório de acordo com o layout de placa desejado.
6. Adicionar 0,5 μl de DMSO aos reservatórios de controle de veículo.
7. Adicionar 2 μl de B-RAF aos reservatórios de BO e EV.
8. Pré-incubar com inibidores (Compostos de Teste) por 10 5 minutos em temperatura ambiente com agitação.
9. Adicionar 10 μl de estoque de ATP de 500 μM, em DKB, para dar 100 μM de concentração de ensaio.
10. Selar as placas com TopSeal e incubar em temperatura ambiente com agitação por 45 minutos.
11. Lavar as placas 3 x com 200 μl de Tween 20 a 0,1 %/Água para terminar a reação.
12. Adicionar 50 μl por reservatório de mistura de anticorpo e incubar por 1 hora na temperatura ambiente com agitação.
13. Lavar as placas 3 x com 200 μl de Tween 20 a 0,1 %/Água.
14. Adicionar 100 μl de solução de realce DELFIA por reservatório, cobrir em folha e incubar em temperatura ambiente por 30 minutos com agitação.
15. Ler em Victor usando protocolo de Európio. Os valores para o branco (Vetor Vazio) são subtraídos de todos os Valores. Os controles de DMSO são ajustados como 100 % de atividade e pontos de ensaio (a resposta) são calculados como uma porcentagem do controle de DMSO. Os dados são plotados usando software Graphpad Prism e uma linha de regressão não linear é calculado usando uma equação de dose resposta sigmoidal de inclinação variável: Y = Fundo + [ Topo – Fundo ] / [ 1 + 10^((LogEC50 - X) * Inclinação de Hill) ] onde X é o logaritmo da concentração e Y é a resposta. A IC50 gerada por este procedimento é a concentração do medicamento que produz um valor de fluorescência de controle percentual a meio caminho entre os platôs de saturação e efeito zero. Três ensaios independentes são usualmente realizados e a IC50 média é reportada. Métodos Biológicos - Ensaio B – Ensaio de Fosfo-ERK Com Base em Célula 5 Os compostos foram avaliados usando um ensaio com base em célula que foi realizado de acordo com o seguinte protocolo. Dia 0: Plaquear 16.000 células BRAF WM266.4 mutantes/reservatório em 99 μl de meio em uma placa de 96 reservatórios. Dia 1:
1. Adicionar 1 μl de inibidor (composto de teste) às células (total 1 μl de solução).
2. Incubar as células com composto de teste por 6 horas a 37° C.
3. Retirar por aspiração a solução de todos os reservatórios.
4. Fixar as células com 100 μl de formaldeído a 4 % /0,25 % de Triton X-100 em PBS por reservatório.
5. Incubar a placa por 1 hora a 4° C.
6. Retirar por aspiração a solução de fixa e adicionar 300 μl de TBS por reservatório.
7. Deixar a placa durante a noite a 4° C. Dia 2:
1. Lavar a placa 2 x com 200 μl de PBS por reservatório.
2. Bloquear com 100 μl de leite em pó a 5 % em TBS.
3. Incubar a placa por 20 minutos a 37° C.
4. Lavar a placa 2 x com 0,1 % de tween/H2O.
5. Adicionar 50 μl de 3 μg/ml de anticorpo primário pERK (Sigma M8159), diluído em leite em pó a 5 %/TBS, a cada reservatório.
6. Incubar a placa por 2 horas a 37° C.
7. Lavar a placa 3 x com 0,1 % de tween/H2O.
8. Adicionar 50 μl de 0,45 μg/ml de anticorpo anti- camundongo rotulado com Európio secundário (Perkin Elmer) a cada reservatório. 5 9. Incubar a placa por 1 hora a 37° C.
10. Lavar a placa 3 x com 0,1 % de tween/H2O.
11. Adicionar 100 μl de solução de realce (Perkin Elmer) a cada reservatório.
12. Deixar a placa por aproximadamente 10 minutos em temperatura ambiente antes de agitação suave da placa.
13. Ler a Fluorescência do Európio Resolvido com o Tempo em Victor2.
14. Lavar a placa 2 x com 0,1 % de tween/H2O.
15. Medir a concentração de proteína com BCA (Sigma) pela adição de 200 μl de solução por reservatório.
16. Incubar a placa por 30 minutos a 37° C.
17. Ler os níveis de absorbância a 570 nm em uma leitora de placa. Observar que as contagens de Európio são normalizadas para o nível de proteína dividindo-se as contagens pela absorbância. Os valores para o branco (nenhuma célula) são subtraídos de todos os valores. Os controles de DMSO são ajustados como 100 % de atividade e pontos de ensaio (a resposta) são calculados como uma porcentagem do controle de DMSO. Os dados são plotados usando o software Graphpad Prism e uma linha de regressão não linear é calculada usando uma equação de dose-resposta sigmoidal de inclinação variável: Y = Fundo + [ Topo - Fundo ] / [ 1 + 10^((LogEC50 - X) * Inclinação de Hill) ] onde X é o logaritmo da concentração e Y é a resposta. A IC50 gerada por este procedimento é a concentração do medicamento que produz um valor de fluorescência de controle percentual a meio caminho entre os platôs de saturação e efeito zero.
Três ensaios independentes são usualmente realizados e a IC50 média é relatada. 5 Métodos Biológicos - Ensaio C - Ensaio de Proliferação Celular SRB (SRB GI50) As linhas celulares (por exemplo, as linhas celulares de melanoma WM266.4 e A375M; linha celular de carcinoma colorretal SW620) são rotineiramente cultivadas em DMEM ou RPMI1640 suplementado com 10 % de soro bovino fetal, a 37° C, em atmosfera saturada com água com 10 % de CO2. As culturas são mantidas em fase de crescimento exponencial pelo subcultivo antes de ter se tornado confluente (intervalos de 3 a 5 dias). As suspensões de célula única são preparadas colhendo-se um frasco de cultura de tecido de 80 cm2 com 5 ml de tripsina EDTA comercial.
Depois de 5 minutos, as células descoladas são misturadas com 5 ml de meio de cultura totalmente complementado e granulado por centrifugação (1000 rpm por 7 minutos). Depois de aspirar o sobrenadante, a pelota de célula é recolocada em suspensão em 10 ml de meio fresco e as células totalmente desagregadas puxando-se o volume inteiro para cima/para baixo 5 vezes através de uma agulha de calibre 19. A concentração das células é determinada usando um hemocitômetro (diluição 1/10). Um volume adequado para dar pelo menos um excesso de 2 vezes para o número de testes que são conduzidos, tipicamente de 100 a 200 ml, é preparado pela diluição da suspensão de célula até 10.000 a 40.000 /ml e 100 µl/reservatório dispensados em placas de 96 reservatórios usando uma bomba peristáltica de 8 canais programável, dando 1000 a 4000 células/reservatório, deixando a coluna 12 em branco.
As placas são retornadas para o incubador por 24 horas para permitir que as células se religuem.
Os compostos que são testados são preparados a 10 mM em
As alíquotas (24 µl) são diluídas até 1,2 ml de meio de cultura dando 200 µM e 10 diluições em série de 3 x realizadas pela transferência de 80 µl até 160 µl.
As alíquotas (100 µl) de cada diluição são adicionadas aos reservatórios, usando um pipetador de 8 canais, realizando assim uma diluição 5 de 2 x final adicional e dando doses que variam de 100 µM até 0,005 µM.
A coluna 11 recebe apenas meio de cultura puro.
Cada composto é testado em quadruplicata, cada duplicata sendo a média de quatro reservatórios.
Depois de um cultivo adicional de 5 dias, as placas são esvaziadas e as células são fixadas em ácido tricloroacético a 10 % por 30 minutos a 4° C.
Depois de enxaguar cuidadosamente em água de torneira corrente, as placas são secadas e tingidas pela adição de 50 µl de uma solução de sulforrodamina-B a 0,1 % em 1 % de ácido acético, por 10 minutos em temperatura ambiente.
A mancha é vertida e as placas cuidadosamente enxaguadas sob uma corrente de ácido acético a 1 %, removendo assim a mancha não ligada e secada.
A cepa ligada é tomada em solução pela adição de 100 µl de tampão de Tris pH 8, seguido por 10 minutos em um agitador de placa (aproximadamente 500 rpm). A absorbância a 540 nm em cada reservatório (sendo proporcional ao número de células presentes) é determinada usando uma leitora de placa.
Depois de calcular em média os valores em branco na coluna 12 isto foi subtraído de todos os valores e os resultados expressados como uma porcentagem do valor não tratado (coluna 11). Os 10 valores assim derivados (em quadruplicata) são plotados contra o logaritmo da concentração de medicamento e analisados pela regressão não linear para uma equação logística de quatro parâmetros, ajustando as restrições se sugerido pela inspeção.
A GI50 gerada por este procedimento é a concentração do medicamento que produz um controle percentual A540 a meio caminho entre os platôs de saturação e efeito zero.
Métodos Biológicos – Estudos de Xenoenxerto
As células de carcinoma colorretal humano SW620 (RAS mutante, 7 x 107) ou as células de melanoma A375M humano (BRAF mutante, 107) foram inoculadas subcutaneamente em suspensão (0,2 ml) no flanco direito de camundongos atímicos Crl:CD1-Foxn1nu fêmeas.
Os grupos 5 foram designados para tratamento a seguir da distribuição estratificada de volumes de tumor.
O tratamento com composto de teste começou entre os dias 11 e 14 após a administração de célula.
Para a gavagem, uma suspensão (DMSO:água, 1:19, ânion/ânion a 10 ml/kg) foi administrada.
Os animais de controle receberam uma dosagem similar de veículo (DMSO:água, 1:19, ânion/ânion). O tratamento com o composto de teste foi continuado uma vez ao dia por 24 doses.
Dados Biológicos – Dados de Ensaio Os dados para os diversos compostos da presente invenção, assim como diversos compostos de comparação são resumidos na seguinte tabela.
Valores de IC50/GI50 mais baixos indicam potência mais alta.
Tabela 3 Ensaio A Ensaio B Ensaio C Ensaio C Ensaio C BRAF pERK SRB SRB SRB - WM266.4 WM266.4 A375M SW620 Código IC50 (μM) IC50 (μM) GI50 (μM) GI50 (μM) GI50 (μM) AA-01 0,27 0,26 0,052 0,138 0,167 AA-02 0,197 0,020 0,057 AA-03 0,302 0,060 0,121 BB-01 0,25 0,019 0,008 0,052 1,6 BB-02 2,28 0,026 0,016 0,101 1,685 XX-01 0,094 0,62 0,39 1,13 0,84 XX-02 0,20 0,09 0,066 0,25 0,45 XX-03 1,09 0,12 0,033 0,247 6,83 XX-04 0,24 0,20 0,020 0,307 2,72
No ensaio de enzima BRAF in vitro (Ensaio A), os compostos da presente invenção (~ 0,2 a 2,3 μM) e os compostos de comparação (~ 0,1 a 1,1 μM) tiveram Valores IC50 de BRAF similares.
No ensaio com base em célula pERK in vitro (Ensaio B), os compostos da presente invenção (~ 0,02 a 0,26 μM) e os compostos de comparação (~ 0,1 a 0,6 μM) tiveram valores IC50 de pERK similares.
No Ensaio com base em célula de SRB in vitro (Ensaio C), para as linhas celulares BRAF mutantes WM266.4 e A375M, os compostos da presente invenção (WM266.4: ~ 0,01 a 0,12 μM; A375M: ~ 0,05 a 0,14 μM) e os compostos de comparação (WM266.4: ~ 0,02 a 0,4 μM; A375M: ~ 0,25 a 1,1 μM) tiveram valores GI50 similares.
Notavelmente, BB-01 foi o mais potente (com a GI50 mais baixa: WM266.4, 0,008 μM; A375M, 0,052 5 μM) e XX-01 foi o menos potente (com a GI50 mais alta: WM266.4, 0,39 μM; A375M, 1,13 μM). No ensaio com base em célula de SRB in vitro (Ensaio C), para a linhagem mutante RAS SW620, os compostos da presente invenção (SW620: ~ 0,17 a 1,6 μM) e os compostos de comparação (SW620: ~ 0,45 a 7 μM) tiveram valores GI50 similares.
Entretanto, observar que, com base nos dados de RAS mutante in vitro, seria esperado que XX-01 e XX-02 teriam melhor eficácia terapêutica do que BB-02, no estudo de xenoenxerto SW620 de RAS mutante in vivo.
Similarmente, com base nos dados de RAS mutante in vitro, seria esperado que XX-02 teria uma eficácia terapêutica similar como AA-01, no estudo de xenoenxerto SW620 de RAS mutante in vivo.
Com base nos dados de RAS mutante in vitro, não seria esperado que os compostos reivindicados (especialmente AA-01 e BB-02) fossem substancialmente mais eficazes do que os compostos de comparação (XX-01, XX-02, XX-03, XX-04), no estudo de xenoenxerto SW620 de RAS mutante in vivo.
Dados Biológicos – Dados de Seletividade de BRAF/RAS/Tipo Selvagem Os dados para os vários compostos da presente invenção, assim como os vários compostos de comparação são ilustrados nas Figuras 4 até 10, como debatido abaixo.
Os dados ilustram a seletividade, ou a falta de seletividade, para as linhas celulares mutante de BRAF ou RAS.
A Figura 4 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular
WM266.4 para o composto AA-01. A faixa de linhas celulares são (a) um painel de linhas celulares de BRAF mutante (mutBRAF): WM266.4, A375M, UACC62; (b) um painel de linhas celulares de RAS mutante (mutRAS): SW620, HCT116 e WM1361; e (c) um painel de linhas celulares BRAF e 5 RAS do tipo selvagem: SKMEL23, KM12 e BT474. A Figura 5 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto BB-01. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 6 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto BB-02. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 7 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-01. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 8 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-02. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 9 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-03. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4. A Figura 10 é um gráfico de barras que mostra a razão do GI50 para cada uma das faixas de linhas celulares para o GI50 para a linha celular WM266.4 para o composto de comparação XX-04. As faixas de linhas celulares são como para a Figura 4.
Com base nestes dados in vitro, não seria esperado que os compostos reivindicados (especialmente AA-01 e BB-02) fossem substancialmente mais eficazes do que os compostos de comparação (XX-01, XX-02, XX-03, XX-04), no estudo de xenoenxerto SW620 de RAS mutante 5 in vivo.
Dados Biológicos – Dados de Xenoenxerto Os dados de xenoenxerto para os vários compostos da presente invenção, assim como os vários compostos de comparação são ilustrados nas Figuras 11 a 19. A Figura 11 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto AA-01 e para os controles.
Os dados demonstram que o composto AA-01 substancialmente reduziu o volume do tumor em relação à escala de tempo do estudo (por exemplo, um fator de cerca de 3), quando comparado ao controle, para esta linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante.
A Figura 12 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto BB-02 e para os controles.
Os dados demonstram que o composto BB-02 substancialmente reduziu o volume do tumor em relação à escala de tempo do estudo (por exemplo, um fator de cerca de 1,5), quando comparado ao controle, para esta linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante.
A Figura 13 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha de célula de BRAF mutante A375, para o tratamento com o composto AA-01 e para os controles.
Os dados demonstram que o composto AA-01 substancialmente reduziu o volume do tumor em relação à escala de tempo do estudo (por exemplo, um fator de cerca de 2,5), quando comparado ao controle, para esta linha celular de melanoma. 5 A Figura 14 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha de célula de BRAF mutante A375, para o tratamento com o composto BB-02 e para os controles.
Os dados demonstram que o composto BB-02 substancialmente reduziu o volume do tumor em relação à escala de tempo do estudo (por exemplo, um fator de cerca de 1,5), quando comparado ao controle, para esta linha celular de melanoma de BRAF mutante.
A Figura 15 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-01 e para os controles.
Os dados demonstram que as comparações do composto XX-01 tiveram relativamente pouco efeito, quando comparado ao controle, para esta linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante.
A Figura 16 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-02 e para os controles.
Os dados demonstram que as comparações do composto XX-02 tiveram relativamente pouco efeito, quando comparado ao controle, para esta linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante.
A Figura 17 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-03 e para os controles.
Os dados demonstram que as comparações do composto XX-03 tiveram relativamente pouco efeito, quando comparado ao controle, para esta linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante. 5 A Figura 18 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha celular de RAS mutante SW620, para o tratamento com o composto de comparação XX-04 e para os controles.
Os dados demonstram que as comparações do composto XX-04 tiveram relativamente pouco efeito, quando comparado ao controle, para esta linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante.
A Figura 19 é um gráfico de volume de tumor relativo como uma função do tempo (dias) para xenoenxertos de camundongos da linha de célula de BRAF mutante A375, para o tratamento com o composto de comparação XX-02 e para os controles.
Os dados demonstram que as comparações do composto XX-02 é pelo menos em algum grau eficaz, quando comparado ao controle, para esta linha celular de melanoma de BRAF mutante.
As razões de volume de tumor (para o tratamento) para volume de tumor (para o controle) (T/C) para xenoenxertos SW620 de RAS mutante são mostrados na tabela que segue.
Uma razão de T/C mais baixa indica uma eficácia mais alta.
Ao passo que os compostos de comparação todos tiveram razões de T/C que indicam pouca ou nenhuma eficácia, os compostos reivindicados AA-01 e BB-02 ambos têm razões de T/C que demonstram eficácia estatisticamente significante.
Tabela 4 Razão de: Código Volume de Tumor (Tratamento) / Volume de Tumor (Controle) (xenoenxerto SW620 de RAS mutante) AA-01 0,34 BB-02 0,66 XX-01 >1 XX-02 0,95 XX-03 0,97 XX-04 0,87
Os dados para os compostos reivindicados demonstram que, não apenas são os compostos reivindicados eficazes como inibidores de BRAF e contra tumores de BRAF mutante (por exemplo, xenoenxertos da linha celular de melanoma de BRAF mutante A375M; Figuras 13 e 14), mas, 5 surpreendente e inesperadamente, os compostos reivindicados também são eficazes contra tumores de RAS mutante (por exemplo, xenoenxertos da linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante SW620; Figuras 11 e 12). A atividade surpreendente e inesperada dos compostos reivindicados contra tumores de RAS mutante não seriam prognosticados a partir da sua atividade inibidora de BRAF conhecida ou esperada. Os dados para os compostos de comparação demonstram que, embora os compostos de comparação sejam em algum grau eficazes contra tumores de BRAF mutante (por exemplo, xenoenxertos da linha celular de melanoma de BRAF mutante A375M; Figura 19), eles têm relativamente pouco efeito contra os tumores de RAS mutante (por exemplo, xenoenxertos da linha celular de carcinoma colorretal de RAS mutante SW620; Figuras 15, 16, 17 e 18). *** O precedente descreveu os princípios, formas de realização preferidos e modos de operação da presente invenção. Entretanto, a invenção não deve ser interpretada como limitada às formas de realização particulares debatidas. Ao invés, as formas de realização descritas acima devem ser consideradas como ilustrativas ao invés de restritivas e deve ser avaliado que as variações podem ser feitas nestas formas de realização pelos trabalhadores habilitados na técnica sem divergir do escopo da presente invenção.
REFERÊNCIAS Várias patentes e publicações são aqui citadas de modo a descrever e divulgar mais completamente a invenção e o estado da técnica à qual a invenção diz respeito. Citações completas para estas referências são fornecidas abaixo.
Cada uma destas referências é aqui incorporada por referência na sua totalidade dentro da presente divulgação, até o mesmo grau como se cada referência individual fosse específica e individualmente indicada ser incorporada por referência. 5 Bos, 1989, “ras oncogenes in human cancer: a review”, Cancer Res., Vol. 49, pp. 4682-4689. Downward, 2003, “Targeting RAS signalling pathways in cancer therapy”, Nat.
Rev.
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Cancer Res., Vol. 102, pp. 1-17.
Claims (28)
1. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
H H
N N
N
J N
O
O Me N m
O p R
N N
H 5 em que -J- é independentemente:
F ou ; e em que -R é independentemente: -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I; e em que -R é posicionado em meta- ou para- no anel de fenila.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me N m
O A p R
N N
H em que -RA é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I; e em que -RA é posicionado em meta- ou para- no anel de fenila.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais,
hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O
A
N N R
H em que -RA é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I.
4. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais, 5 hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me
N A
O R
N N
H em que -RA é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
H H
N N
N
N
O
O Me N m O p RB
N N
H em que -RB é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I; e em que -RB é posicionado em meta- ou para- no anel de fenila.
6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O
B
N N R
H em que -RB é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I.
7. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado 5 pelo fato de que é selecionado dos compostos da seguinte fórmula, e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
H H
N N
N
N
O
O Me
N B
O R
N N
H em que -RB é independentemente -H, -Me, -F, -Cl, -Br, ou -I.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 2 a 7, caracterizado pelo fato de que -RA, se presente, e –RB, se presente, é independentemente -H.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 2 a 7, caracterizado pelo fato de que -RA, se presente, e –RB, se presente, é independentemente -Me.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 2 a 7, caracterizado pelo fato de que -RA, se presente, e –RB, se presente, é independentemente -F.
11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 2 a 7, caracterizado pelo fato de que -RA, se presente, e –RB, se presente, é independentemente -Cl.
12. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado do seguinte composto e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O
N N H . 5
13. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado do seguinte composto e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O
N N H .
14. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado do seguinte composto e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O N Cl
N H .
15. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado do seguinte composto e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
F
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O F
N N H .
16. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é selecionado do seguinte composto e sais, hidratos e 5 solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O
N N H .
17. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que é selecionado do seguinte composto e sais, hidratos e solvatos destes farmaceuticamente aceitáveis:
H H
N N
N
N
O
O Me
N
O
N N H .
18. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 17 e um transportador, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
19. Método de preparar uma composição, caracterizado pelo fato de que compreende misturar um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 17 e um transportador, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitáveis.
20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é para o uso em um método de tratamento do corpo do ser humano ou animal pela terapia.
21. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é para o uso em um método de tratamento de câncer.
22. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que para o uso em um método de tratamento de câncer RAS mutante.
23. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é para o uso em um método de tratamento de: câncer pancreático; câncer da tireóide (por exemplo, folicular; papilar não diferenciado); câncer colorretal; seminoma; síndrome mielodisplástica (MDS); câncer pulmonar (por exemplo adenocarcinoma pulmonar); câncer hepático; leucemia (por exemplo, leucemia mielógena aguda (AML)); melanoma; câncer da bexiga; câncer renal; câncer mamário, câncer ovariano, câncer do duto biliar, ou glioma.
24. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é para o uso em um método de tratamento de: câncer pancreático RAS mutante; câncer RAS mutante da tireóide (por exemplo, folicular; papilar não diferenciado); câncer RAS mutante colorretal; RAS mutante seminoma; RAS mutante síndrome mielodisplástica (MDS); câncer RAS mutante pulmonar (por exemplo adenocarcinoma pulmonar); câncer RAS mutante hepático; RAS mutante leucemia (por exemplo, leucemia mielógena aguda (AML)); RAS mutante melanoma; câncer RAS mutante da bexiga; câncer RAS mutante renal; câncer RAS mutante mamário, câncer RAS mutante ovariano, câncer RAS mutante do duto biliar, ou RAS mutante glioma. 5
25. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
26. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer RAS mutante.
27. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de: câncer pancreático; câncer da tireóide (por exemplo, folicular; papilar não diferenciado); câncer colorretal; seminoma; síndrome mielodisplástica (MDS); câncer pulmonar (por exemplo adenocarcinoma pulmonar); câncer hepático; leucemia (por exemplo, leucemia mielógena aguda (AML)); melanoma; câncer da bexiga; câncer renal; câncer mamário, câncer ovariano, câncer do duto biliar, ou glioma.
28. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 17, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para o tratamento de: câncer pancreático RAS mutante; câncer RAS mutante da tireóide (por exemplo, folicular; papilar não diferenciado); câncer RAS mutante colorretal; RAS mutante seminoma; RAS mutante síndrome mielodisplástica (MDS); câncer RAS mutante pulmonar (por exemplo adenocarcinoma pulmonar); câncer RAS mutante hepático; RAS mutante leucemia (por exemplo, leucemia mielógena aguda (AML)); RAS mutante melanoma; câncer RAS mutante da bexiga; câncer RAS mutante renal; câncer
RAS mutante mamário, câncer RAS mutante ovariano, câncer RAS mutante do duto biliar, ou RAS mutante glioma.
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Free format text: DE ACORDO COM O ARTIGO 229-C DA LEI NO 10196/2001, QUE MODIFICOU A LEI NO 9279/96, A CONCESSAO DA PATENTE ESTA CONDICIONADA A ANUENCIA PREVIA DA ANVISA. CONSIDERANDO A APROVACAO DOS TERMOS DO PARECER NO 337/PGF/EA/2010, BEM COMO A PORTARIA INTERMINISTERIAL NO 1065 DE 24/05/2012, ENCAMINHA-SE O PRESENTE PEDIDO PARA AS PROVIDENCIAS CABIVEIS. |
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| B07E | Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette] | ||
| B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
| B11B | Dismissal acc. art. 36, par 1 of ipl - no reply within 90 days to fullfil the necessary requirements | ||
| B350 | Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette] |