CN108117551B

CN108117551B - 取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物及其抗肿瘤用途

Info

Publication number: CN108117551B
Application number: CN201611073936.2A
Authority: CN
Inventors: 李剑; 鲁彦丽; 毛斐; 朱进
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2016-11-29
Filing date: 2016-11-29
Publication date: 2020-03-27
Anticipated expiration: 2036-11-29
Also published as: CN108117551A

Abstract

本发明提供了一种取代(1H‑吡唑[3,4‑b]吡啶)脲类化合物及其抗肿瘤用途。具体地，本发明提供了式I化合物及其药学上可接受的盐，其中，各基团的定义如说明书中所述。本发明的式I化合物可以抑制与肿瘤发生、发展相关的受体酪氨酸激酶(包括c‑Kit，PDGFRα和VEGFR2)，用于肿瘤的治疗。

Description

取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物及其抗肿瘤用途

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，更具体地涉及取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物及其抗肿瘤用途。

背景技术

癌症(恶性肿瘤)是严重威胁人类健康的慢性非传染性疾病之一，已成为日益严峻的全球性公共卫生问题。据统计数据表明，我国癌症发病人数日益增加，目前癌症发病率为285.91/10万，死亡率为180.54/10万.并且，预计在未来几十年内，我国癌症发病率、死亡率将继续呈现上升趋势。因此，针对恶性肿瘤，开发出强而有效的治疗方法刻不容缓。随着分子药理学、分子肿瘤学的不断发展，对肿瘤本质的阐明逐渐清晰化；同时，药物、基因工程、组合化学、大规模快速筛选等先进技术的广泛应用，加速并强效了新型抗肿瘤药物的开发。目前，抗肿瘤药物研发的焦点正在从细胞毒性药物转移到靶向多环节作用的新型抗肿瘤药物上来，如针对关键基因、调控分子和细胞受体等多靶点的抗肿瘤药物已经开始从实验室进入临床。分子靶向治疗方法具有定向、定位的优势，使药物选择性地与靶组织在细胞或亚细胞水平上发生反应，使药物能够可控性地分布，并于靶区持续缓慢地释放药物，可以减少用药剂量，提高治疗效果，减少毒副反应，是全世界癌症治疗的有效途径。

近十几年来，已有十余个靶向抗肿瘤药物被成功应用到临床中，而激酶是最重要的分子靶向治疗药物，目前全世界药物在研或开发项目中约三分之一均与激酶相关。率先进入临床的酪氨酸激酶抑制药，蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)，是多数肿瘤最常见的生长因子受体，参与正常细胞的调节、信号传递和发育，也与肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和凋亡密切相关，通过抑制其活性可破坏肿瘤细胞的信号传递，选择性抑制肿瘤细胞而对正常细胞并无影响。c-KIT是典型III型受体酪氨酸激酶，是ATP竞争性激酶的一种，在肿瘤的发生发展以及侵袭、迁移和复发过程中起着十分重要的作用，是目前肿瘤分子靶向治疗的热门靶标之一，其抑制剂也成为抗肿瘤药物研究与开发的热点。

c-KIT(又称CD117)是1987年发现的，是由逆转录病毒原癌基因c-KIT编码的一类具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体蛋白，与血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、巨噬细胞集落刺激因子-1受体(CSF-1R)和Fms样酪氨酸激酶受体3(FLT3)共同组成III型受体酪氨酸激酶超家族，其在肿瘤发生发展过程中起着十分重要的作用。c-KIT激酶存在着30多种功能获得性(gain-of-function，GOF)突变形式，是干细胞因子(stemcell factor，SCF)的受体。它被干细胞生长因子激活后，形成二聚体，导致JMD中Tyr568和Tyr570的跨膜磷酸化，从而改变JMD的三维结构，减弱其与激酶活性位点的相互作用，即减弱激酶的自抑制作用，致使激酶区磷酸化，进而募集下游信号分子，最终激活下游信号通路，调节细胞的生长和增殖。目前已知，在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor，GIST)、急性粒细胞白血病(AML)、肺癌等多种肿瘤组织中均存在c-KIT受体的异常活化状态。这主要源于c-KIT突变导致其过度表达和持续性激活。C-KIT基因的功能性突变主要发生在胞外域(外显子8、9)、胞内JMD(外显子11)以及激酶结构域中A-loop区(外显子17).外显子9突变发生率为3～21％，主要发生在密码子501～503，主要类型为重复***。外显子11的突变率在20～92％之间，集中在密码子550～599之间，突变类型包括：点突变、缺失突变、***突变、替代突变、框移突变等；外显子13的突变位点主要是密码子642，其突变率为0.8～4.1％。值得注意的是：不同肿瘤的常见c-KIT突变位点存在差异。例如：GIST中，突变主要发生在外显子11(如V560D)，急性髓细胞白血病(AML)细胞中，c-KIT激活型突变主要发生在外显子17，如D816V/H/Y等。并且研究表明，在GIST中，约有80％存在c-KIT激活型突变。

此外，血管生成被认为在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移过程中发挥着重要作用。一方面，血管的生成为营养物质和氧气进入肿瘤组织、把代谢产物运出组织细胞外奠定了物质基础；另一方面，为肿瘤细胞迁移至靶器官，促进其继续生长提供了输送途径。目前，研究发现与肿瘤血管生成有关的因子有30余种，如血小板衍生生长因子(PDGF)，血管内皮生长因子(VEGF)，成纤维细胞因子(FGF)、血管抑素等，其中PDGF能够募集周细胞刺激肿瘤血管生成，还能诱导血管内皮细胞、平滑肌细胞和肿瘤细胞的增殖和迁移，促进***间质的产生，为新生的血管提供良好的支持，对肿瘤血管发生起着直接的作用。研究发现，在多种肿瘤内均有PDGFR信号转导的参与，其中7～12％发现有PDGFR-α基因内突变，突变部位集中在外显子18(II号激酶区)、12(近膜调控区)和14(激酶区)，且PDGFRa突变体多呈低危性，以胃部GIST多见。进一步的研究表明，VEGF/VEGFR-2所介导的信号级联通路可以调控血管内皮细胞的增殖、迁移、存活和通透性的改变，促进血管的新生。成纤维细胞生长因子受体(FGFR)与FGFs结合,可以引发靶细胞的多种反应，在肿瘤的发生和血管的生成中发挥着关键的作用。

因此，开发多靶点(c-KIT、PDGFR、VEGFR和FGFR)靶向肿瘤发生、发展相关信号通路的治疗药物预期可以产生更好的抗肿瘤效果，尤其是针对胃肠间质瘤的抗肿瘤效果。

发明内容

本发明的一个目的是，提供一种取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物，其结构通式如(I)所示、或其在药学上可接受的盐；

本发明的再一个目的是提供作为c-KIT和PDGFR-a双重抑制剂的取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物在预防或治疗酪氨酸激酶受体抑制剂相关的肿瘤疾病(如胃肠道间质瘤)方面的应用。

在本发明的第一方面，提供了一种式I所示化合物、或其药学上可接受的盐,

其中，

X为O或S；

R¹为C₁～C₄直链或支链烷基或C₁～C₄直链或支链卤代烷基；

R²为取代或未取代的C₁～C₆直链或支链烷基、取代或未取代的C₃～C₈环烷基、取代或未取代的C₆～C₁₀芳基、取代或未取代的4-10元杂芳基；

其中，所述取代指具有1-3个选自下组的取代基：卤素、羟基、硝基、氰基、C₁-C₄烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基、-NRaRb、4-10元杂芳基、4-8元杂环烷基、C₆～C₁₀芳基；

并且上述取代基中的C₆～C₁₀芳基可非必须地进一步被1-3个选自卤素、羟基、硝基、氰基、C₁-C₆烷基、C₁-C₄卤代烷基、C₁-C₄烷氧基中的取代基取代；

且上述取代基中的C₁-C₄烷基可非必须地进一步被1-3个选自卤素、羟基、硝基、氰基、-NRaRb中的取代基取代；

Ra和Rb各自独立地为H和C₁-C₄烷基；

所述的4-10元杂芳基和4-8元杂环烷基各自独立地含有1-3个选自N、O和S中的杂原子；

且所述卤素为氟、氯、溴或碘。

在另一优选例中，所述的R¹为C₁～C₄直链或支链烷基或C₁～C₄直链或支链全氟烷基，较佳地，所述的R¹为甲基或全氟取代的甲基。

在另一优选例中，所述的式I所示化合物具有选自下组的一个或多个特征：

(a)所述的C₁～C₆直链或支链烷基选自：乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、异丁基、新丁基；

(b)所述C₃～C₈环烷基选自：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基；

(c)所述的C₆～C₁₀芳基选自：苯基、萘基、二氢茚基，较佳地，所述的C₆～C₁₀芳基选自：苯基、2,3-二氢-1H-茚-2-基、萘-1-基、萘-2-基；

(d)所述的4-10元杂芳基选自：吡唑基、吡啶基、喹啉基、呋喃基、噻吩基，较佳地，所述的4-10元杂芳基选自：1H-吡唑-5-基、吡啶-2-基，吡啶-3-基、吡啶-4-基、喹啉-3-基、呋喃-2-基、噻吩-2-基；

(e)所述的4-8元杂环烷基选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基(4-甲基哌嗪基)、吡咯烷基、四氢吡喃基，较佳地，所述的4-8元杂环烷基选自：2-哌啶-1-基、2-吗啉-4-基、吗啉-4-基、4-甲基哌嗪-1-基。

在另一优选例中，所述的杂环烷基为饱和杂环烷基。

在另一优选例中，所述的Ra和Rb相同。

在另一优选例中，所述的Ra和Rb同时为甲基或乙基。

在另一优选例中，所述取代的C₁～C₆直链或支链烷基具有式II结构，

其中，R³为5-6元杂芳基、5-6元杂环烷基、C₆～C₁₀芳基；

且所述的C₆～C₁₀芳基可非必须地进一步被1-3个选自卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₄烷氧基中的取代基取代；

所述的5-6元杂芳基和5-6元杂环烷基各自独立地含有1-3个选自N、O和S中的杂原子；

并且，n为1～4之间的整数。

在另一优选例中，所述的5-6元杂芳基选自：吡唑基、吡啶基、呋喃基、噻吩基，较佳地，所述的4-10元杂芳基选自：1H-吡唑-5-基、吡啶-2-基，吡啶-3-基、吡啶-4-基、呋喃-2-基、噻吩-2-基。

在另一优选例中，所述的5-6元杂环烷基选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基(4-甲基哌嗪基)、吡咯烷基、四氢吡喃基，较佳地，所述的5-6元杂环烷基选自：2-哌啶-1-基、2-吗啉-4-基、吗啉-4-基、4-甲基哌嗪-1-基。

在另一优选例中，所述的R³为呋喃基、噻吩基、吡啶基、哌啶基、吗啉基、或苯基，且所述的苯基可非必须地进一步被1-3个选自卤素、C₁-C₆烷基、C₁-C₄烷氧基中的取代基取代。

在另一优选例中，所述的R³为呋喃-2-基、噻吩-2-基、吡啶-4-基、2-哌啶-1-基、2-吗啉-4-基、苯基(未取代的苯基)、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2,6-二氟苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、或4,5-二甲氧基苯基。

在另一优选例中，所述取代的C₁～C₆直链或支链烷基具有式III结构，

其中，R⁴为C₁-C₂烷基，且n为1～3之间的整数。

在另一优选例中，所述R⁴为甲基或乙基。

在另一优选例中，所述取代的C₆～C₁₀芳基为取代的苯基且具有式IV结构，

其中，R⁵为氢或C₁～C₄烷基；R⁶为5-6元杂环烷基，或

其中，所述的5-6元杂环烷基可非必须地进一步被1-3个选自卤素、C₁-C₄烷基中的取代基取代；并且R⁴为C₁-C₂烷基，且n为0～3之间的整数。

在另一优选例中，所述的R⁶为4-甲基哌嗪基、吗啉基，或

并且R⁴为C₁-C₂烷基，且n为0～3之间的整数。

在另一优选例中，所述的R⁶为4-甲基哌嗪-1-基，吗啉-4-基，或

并且R⁴为C₁-C₂烷基，且n为0～3之间的整数。

在另一优选例中，所述的式II结构选自：呋喃-2-基甲基、噻吩-2-基甲基、吡啶-4-基甲基、2-哌啶-1-基乙基、2-吗啉-4-基乙基、苄基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、2-甲基苄基、4-甲基苄基、2-氟苄基、2-氯苄基、2，6-二氟苄基、4-氟苯乙基、4-氯苯乙基、4,5-二甲氧基苯乙基。

在另一优选例中，所述的式III结构选自：2-二甲氨基乙基、2-二乙氨基乙基、2-二甲氨基丙基、2-二乙氨基丙基。

在另一优选例中，所述的式IV结构选自：2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、2-(吗啉-4-基)苯基、2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、5-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、3-甲基-4-(吗啉-4-基)苯基、5-甲基-2-(吗啉-4-基)苯基、(4-二甲胺基)苯基、(3-二甲胺基)苯基、(4-二乙胺基)苯基、(3-二乙胺基)苯基、(4-二甲胺基)苄基、(3-二甲胺基)苄基、(4-二乙胺基)苄基、(3-二乙胺基)苄基。

在另一优选例中，所述的R²选自下组：

乙基、正丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正己基、环丙基、环丁基、环戊基、环丁基、1H-吡唑-5-基、吡啶-2-基，吡啶-3-基、喹啉-3-基、2,3-二氢-1H-茚-2-基、萘-1-基、萘-2-基、呋喃-2-基甲基、噻吩-2-基甲基、吡啶-4-基甲基、2-哌啶-1-基乙基、2-吗啉-4-基乙基、苄基、苯乙基、苯丙基、苯丁基、2-甲基苄基、4-甲基苄基、2-氟苄基、2-氯苄基、2，6-二氟苄基、4-氟苯乙基、4-氯苯乙基、4,5-二甲氧基苯乙基、2-二甲氨基乙基、2-二乙氨基乙基、2-二甲氨基丙基、2-二乙氨基丙基、2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、2-(吗啉-4-基)苯基、2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、5-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基、3-甲基-4-(吗啉-4-基)苯基、5-甲基-2-(吗啉-4-基)苯基、(4-二甲胺基)苯基、(3-二甲胺基)苯基、(4-二乙胺基)苯基、(3-二乙胺基)苯基、(4-二甲胺基)苄基、(3-二甲胺基)苄基、(4-二乙胺基)苄基、(3-二乙胺基)苄基。

在另一优选例中，所述的式I化合物选自下组：

N-乙基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲，N-丙基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲，N-丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲，N-异丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-叔丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-正戊基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-正己基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-正己基-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-环己基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-环丙基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-环丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-环戊基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(吡啶-3-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(吡啶-2-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(1H-吡唑-5-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(萘-2-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(喹啉-3-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(噻吩-2-基甲基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(呋喃-2-基甲基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(吡啶-4-基甲基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-哌啶-1-基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-吗啉-4-基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-吗啉-4-基乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-苄基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-甲基苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-氟苯乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3,4-二甲氧基苯乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-氯苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-甲基苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-氯苯乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-氟苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-苯基丁基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-苯基丙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2,6-二氟苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-苯基乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-苯乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-苯丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-氯苯乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-二甲氨基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-二乙氨基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-二甲氨基丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-二乙氨基丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-二甲氨基乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)硫脲、N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(5-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-甲基-4-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(5-甲基-2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(5-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-甲基-4-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(5-甲基-2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((4-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((3-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((3-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-((二乙胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-((二乙胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((4-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((4-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((3-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((3-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(4-((二乙胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲、N-((4-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲。

在另一优选例中，所述的X为O且R¹为甲基。

在另一优选例中，所述的R²为4-10元杂芳基或苯基，其中所述的苯基可进一步被卤素、C₁～C₄烷基、-NRaRb、4-8元杂环烷基，且所述的Ra和Rb同时为甲基或乙基。

在另一优选例中，所述的R²为4-10元杂芳基或苯基取代的C₁～C₆烷基，其中，所述的苯基可非必须地进一步被卤素取代。

在另一优选例中，所述的式I化合物选自下组：

在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：

(a)治疗有效量的本发明第一方面所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐，以及任选的(b)药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述药物组合物中含有0.001-99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％的式I所示化合物,或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型为口服剂型、或注射剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物用于抑制肿瘤细胞或***。

在另一优选例中，所述的肿瘤选自下组：胃肠道间质瘤、急性粒细胞白血病、肺癌、黑色素瘤、急性髓细胞白血病或其组合。

在另一优选例中，所述的肿瘤细胞包括c-KIT和PDGFRα为野生型和突变型的肿瘤细胞。

在另一优选例中，所述的肿瘤细胞选自下组：BaF3细胞、GIST-T1细胞、GIST-882细胞、MOLM14、MV4-11或其组合。

在另一优选例中，所述的BaF3细胞选自下组：BaF3细胞、c-KIT-BaF3细胞、c-KIT-A829P-BaF3细胞、c-KIT-L576P-BaF3细胞、c-KIT-C674S-BaF3细胞、c-KIT-D816H-BaF3细胞、c-KIT-D816V-BaF3细胞、c-KIT-T670I-BaF3细胞、c-KIT-V559D-T670I-BaF3细胞、c-KIT-V654A-BaF3细胞、c-KIT-N822K-BaF3细胞、c-KIT-V559D-BaF3细胞、c-KIT-V559D-V654A-BaF3细胞、PDGFRα-BaF3细胞、PDGFRα-T674I-BaF3细胞、FLT3-BaF3细胞、和FLT3-ITD-BaF3细胞。

在另一优选例中，所述的药物组合物为多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类药物组合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物可以用于抑制受体酪氨酸激酶。

在另一优选例中，所述的受体酪氨酸激酶为III型受体酪氨酸激酶。

在另一优选例中，所述的受体酪氨酸激酶选自下组：c-KIT，PDGFRα、VEGFR2或其组合。

在另一优选例中，所述的药物组合物可以在体内施用也可在体外施用。

在本发明的第三方面，提供了一种本发明第一方面所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐的用途，用于制备(i)抑制肿瘤细胞或***的药物组合物，(ii)受体酪氨酸激酶抑制剂。

在本发明的第四方面，提供了一种体外抑制受体酪氨酸激酶的方法，包括步骤：

(a)将受体酪氨酸激酶与本发明第一方面所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐进行接触，从而抑制受体酪氨酸激酶的活性。

在另一优选例中，在步骤(a)中，将本发明第一方面所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐添加到细胞培养体系中，从而使其与受体酪氨酸激酶进行接触。

在另一优选例中，所述的细胞为正常细胞或肿瘤细胞。

在另一优选例中，所述的细胞为哺乳动物细胞。

在另一优选例中，所述的细胞为人细胞。

在另一优选例中，所述的方法是非治疗性和非诊断性的。

在本发明的第五方面，提供了一种***方法，包括步骤：给需要的对象施用本发明第一方面所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐。

在另一优选例中，所述的对象包括人和非人哺乳动物。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了大鼠单次静脉给予IA-41后个体和平均血药浓度-时间曲线(IV-2mg/kg,n＝3)。

图2显示了实施例94中各组小鼠平均体重变化曲线图。

图3显示了实施例94中各组小鼠平均相对体重变化曲线图。

图4显示了实施例94中各组小鼠肿瘤体积变化曲线图。

图5显示了实施例94中各组小鼠相对肿瘤体积变化曲线图。

图6显示了实施例94中各组小鼠GIST-T1小鼠I_A-41药效试验肿瘤照片。

图7显示了实施例94中各组小鼠肿瘤的瘤重图。

图8显示了化合物I_A-41药效试验HE、Ki67、Tunel染色

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现式I化合物可以显著地抑制与肿瘤发生、发展相关的受体酪氨酸激酶(包括c-KIT，PDGFR-α和VEGFR-2)的活性。实验表明，式I化合物对三种激酶都具有抑制活性，特别是对c-KIT和PDGFR-α受体的抑制活性尤其明显。同时，在细胞水平研究中，本发明一个最优激酶活性化合物对c-KIT和PDGFR-a的野生型与多种突变型细胞株均表现出较强的抗增殖能力，以及对8种真正肿瘤细胞株表现出高选择性和有效的抗增殖活性，特别是对胃肠道间质瘤(GIST)细胞株表现出高效的抗增殖效果。在药代动力学以及hERG研究中，该化合物表现出可接受的动力学特征以及良好的用药安全性。在后续的GIST-T1动物药效模型试验中，该化合物也表现出较好的抗肿瘤增殖效果。因此，本发明化合物可以作为多靶点酪氨酸激酶抑制剂，选择性针对胃肠道间质瘤开发成多靶向抗肿瘤药物。

术语

术语“C₁-C₆烷基”指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

术语“C₁-C₄烷氧基”指具有1-4个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或类似基团。

术语“环烷基”指3至8元全碳单环、全碳5元/6元或6元/6元稠合环或多环稠合环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。环烷基实例有环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己二烯基、金刚烷基、环庚烷基、环庚三烯基等。

术语“杂环烷基”指环骨架上至少存在一个选自下组的杂原子的饱和或不饱和环：N、S、O或P，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键。例如吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、或类似基团。

术语“芳环”指具有共轭的π电子***的芳环，包括碳环芳基、杂芳基。

术语“芳基”表示包含一个或多个芳环的烃基部分。芳基部分的例子包括苯基(Ph)、亚苯基、萘基、亚萘基、芘基、蒽基和菲基。

术语“杂芳基”指具有至少1个杂原子作为环原子，其余的环原子为碳的芳基，杂原子包括氧、硫、氮。所述环可以是5元或6元或7元环。杂芳基基团的实例包括但不限于呋喃基、亚呋喃基、芴基、吡咯基、N-烷基吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吡啶基、嘧啶基、喹唑啉基、喹啉基、异喹啉基和吲哚基。

术语“氨基”表示-NH₂、-NH-(C₁-C₆烷基)或-N(C₁-C₆烷基)₂。

术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。术语“卤代的”是指氟代的、氯代的、溴代的、碘代的。

在本文中，除特别说明之处，本文所述的烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基同时包括取代的和未取代的部分。此外，环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基也可互相稠合。

除特别说明之处，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：C₁-C₁₀烷基、C₃-C₁₀环烷基、C₁-C₁₀烷氧基、卤素、羟基、羧基(-COOH)、C₁-C₁₀醛基、C₂-C₁₀酰基、C₂-C₁₀酯基、氨基、苯基；所述的苯基包括未取代的苯基或具有1-3个取代基的取代苯基，所述取代基选自：卤素、C₁-C₁₀烷基、氰基、OH、硝基、C₃-C₁₀环烷基、C₁-C₁₀烷氧基、氨基。

除特别说明之处，本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为R构型或S构型，或R构型和S构型的混合物。

式I化合物

如本文所用，术语“本发明化合物”、“式I所示化合物”和“取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物”可互换使用，均指本发明第一方面所述的具有式I所示结构的化合物。

本发明化合物可以含有不对称或手性中心，因此可以以不同立体异构形式存在。本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物(如外消旋混合物)，均包括在本发明的范围内。

本发明化合物还可以以不同互变异构形式存在，所有这些形式均包括在本发明范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指经由低能垒相互转化的不同能量的结构异构体。

本发明化合物可以以非溶剂化形式和含有药学上可接受的溶剂(如水、乙醇等)的溶剂化形式存在，本发明的化合物包括溶剂化和非溶剂化形式。

本发明化合物具有碱性基团，因此可与无机酸或有机酸形成“药学上可接受的盐”，包括可药用酸加成盐，通过用无机酸或有机酸处理本发明化合物的游离碱，可以得到药学上可接受的盐，所述的无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸，所述的有机酸如抗坏血酸、烟酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、马来酸、丙二酸、富马酸、草酸、苹果酸、乙醇酸、琥珀酸、丙酸、乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。

本发明也涵盖经同位素标记的本发明化合物，除了一个或多个原子是被原子质量或质量数不同于自然中常见的原子质量或质量数之一原子所置换的事实之外，其是与此述者相同。可纳入本发明的化合物中的同位素实例，包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘及氯之同位素，其分别诸如：²氢、³氢、¹¹碳、¹³碳、¹⁴碳、¹³氮、¹⁵氮、¹⁵氧、¹⁷氧、¹⁸氧、³¹磷、³²磷、³⁵硫、¹⁸氟、¹²³碘、¹²⁵碘及³⁶氯。

某些同位素标记的本发明的化合物(例如用³H和¹⁴C标记的那些)用于化合物和/或底物组织分布试验。特别优选氚化(即³H)和碳-14(即¹⁴C)同位素，因为它们容易制备和检测。而且，较重的同位素如氘(即²H)进行取代可以提供由较大的代谢稳定性导致的某些治疗优点(例如体内半衰期增加或剂量需求减小)，因而在某些情况下可能是优选的。正电子发射同位素，例如¹⁵O、¹³N、¹¹C和¹⁸F用于正电子发射体层摄影术(PET)研究，以检查底物受体占用率。同位素标记的本发明的化合物一般可以遵循类似于在方案和/或下文实施例中所公开的方法，通过用同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂来制备。

本发明所涉及的化合物具有全新的取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类结构，并对其进行三种与肿瘤组织生成密切相关的受体酪氨酸激酶(包括c-KIT，PDGFR-α和VEGFR-2)的抑制活性测试，c-KIT和PDGFR-a的野生型和多种突变型细胞株的抗增殖活性测试，8种真正的肿瘤细胞株的抑制活性测试，以及药代动力学特征、hERG和动物药效模型实验测试等，各种活性结果显示，本发明部分化合物对三种激酶都具有抑制活性，特别是对c-KIT和PDGFR-α受体的抑制活性尤其明显，其中激酶抑制活性最优的化合物对大部分野生和突变的c-KIT和PDGFR-a细胞株均有抑制活性，并且具有良好的用药安全窗口，可选择性的作用于肿瘤细胞，在后期的动物药效模型中也展现出较优的抗肿瘤效果，为今后进一步设计开发新型多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物奠定了基础。

在本发明的另一方面，提供具有如下通式(I)结构的取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物：

式I中：X为O或S；R¹为C₁～C₄直链或支链烷基或C₁～C₄直链或支链全氟烷基；R²为C₁～C₆直链或支链烷基、C₃～C₆环烷基、C₅～C₆芳杂环基、稠环或选自以下结构II、III、IV：

其中，式II中，R³为C₅～C₆芳杂环基、取代或未取代的哌啶和吗啉环基、取代或未取代六元芳环基，n为1-4之间的整数；

所述取代苯基的取代基选自：C₁～C₆直链或支链烷基，卤素，C₁～C₃烷氧基，取代基的个数为0～3的整数；

其中，式III中，R⁴为C₁～C₂烷基，n为1～3之间的整数；

其中，式IV中，R⁵为氢或C₁～C₃烷基；R⁶为取代或未取代的4-甲基哌嗪基或吗啉环基，或

n为0～3之间的整数。

本发明式(I)化合物的第一个优选实施方案是化合物(I_A)：

R²为C₁～C₆直链或支链烷基、C₃～C₆环烷基、C₅～C₆芳杂环基、稠环或选自以下结构II、III、IV：

其中，式III中，R⁴为C₁～C₂烷基，n为1～3之间的整数；

n为0～3之间的整数。

本发明式(I)化合物的第二个优选实施方案是化合物(I_B)：

X为O或S；R²为C₁～C₆直链或支链烷基、C₃～C₆环烷基、C₅～C₆芳杂环基、稠环或选自以下结构II、III、IV：

其中，式III中，R⁴为C₁～C₂烷基，n为1～3之间的整数；

n为0～3之间的整数。

具体的，本发明的化合物包括但不限于选自下组的化合物：

制备方法

本发明还提供通式(I)结构的取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类化合物I_A～I_B及其中间体V～XIV的制备方法，具体合成方法如下。

I_A的合成：

式中，R²的含义与前文所述相同。

具体包括如下步骤：

1)将3-甲基-5-氨基-1H-吡唑，对硝基苯甲醛和2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮加入圆底烧瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺溶解后在其沸点温度下加热直到没有CO₂放出为止。溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入适量的异丙醇稀释。抽滤，固体用N,N-二甲基甲酰胺溶解后超声15分钟，再抽滤后,得中间体3-甲基-4-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V)。

2)将中间体V溶于二氧六环中，加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌和N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，回流过夜。反应结束后冷却，将反应液倒入适量的水中，用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，大量固体从溶液中析出。抽滤，滤饼用N,N-二甲基甲酰胺溶解，超声15分钟后继续抽滤，用乙酸乙酯洗滤饼，滤饼烘干得中间体3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VI)。

3)将中间体VI溶于适量的苯磷酰二氯中，在110℃下反应过夜。反应结束后冷却，将体系倒入到适量冰水中，搅拌半个小时后，抽滤，滤饼加水搅拌均匀后用饱和碳酸氢钠溶液调节成弱碱性。抽滤，滤饼烘干得到中间体6-氯-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶(中间体VII)

4)把锌粉，水合肼，四氢呋喃混与三口烧瓶中，在氮气保护下，将溶有中间体VII的四氢呋喃溶液匀速滴加到反应体系中，加毕后回流反应4小时。反应结束后冷却，抽滤，滤液用四氢呋喃萃取三次，减压蒸馏萃液，残余物经柱层析分离，得到中间体4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体VIII)。

5)将中间体VIII溶于适量的二甲基亚砜中，加入商品化或自制的异氰酸酯类化合物(R²-NCO)，再加入三乙胺后，室温反应过夜。反应结束后，冷却，浓缩，残余物经柱层析分离，得到化合物N-R²-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(I_A)。

I_B的合成：

式中，R²的含义与前文所述相同。

具体包括如下步骤：

1)将氢化钠溶于适量的无水四氢呋喃中，加热回流，然后逐滴加入三氟乙酸乙酯和乙腈的混合的四氢呋喃溶液，加完后在70℃下反应15h。反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入水中，用适量无水***萃取，水相用2M盐酸溶液调节PH为2，再次用无水***萃取。总的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到粗产品4,4,4-三氟-3-羰基丁腈(中间体IX)；

2)将中间体IX和水合肼混合,缓慢滴加甲磺酸，加完后在80℃下反应过夜。反应结束后，减压蒸馏，残余物用乙酸乙酯:正己烷＝1:1溶解，搅拌5分钟，抽滤,滤液减压蒸馏，经过柱层析分离，得到3-三氟甲基-5-氨基-1H-吡唑(中间体X)；

3)将对硝基苯甲醛溶解于乙醇中，加入2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮，在80℃下反应3h,再加入中间体X的乙醇溶液，有固体析出后，反应半个小时。反应结束后，冷却至室温，加入适量的异丙醇稀释。抽滤，固体用甲醇溶解后超声15分钟，再抽滤,得中间体3-三氟甲基-4-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体XI)。

4)将中间体XI溶于氯苯中，加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌和N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，回流过夜。反应结束后冷却至室温，将反应液倒入适量的水中，用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，大量固体从溶液中析出。抽滤，用水洗涤滤饼，滤饼烘干得中间体3-三氟甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体XII)。

5)将中间体XII溶于适量的苯磷酰二氯中，在110℃下反应过夜。反应结束后冷却，将体系倒入到适量冰水中，搅拌半个小时后，抽滤，滤饼加水搅拌均匀后用饱和碳酸氢钠溶液调节成弱碱性。抽滤，滤饼烘干点板，若有原料剩余，继续加入苯膦酰二氯，按照起始条件反应，直至中间体XII反应完全，再次后处理后，得到中间体6-氯-3-三氟甲基-4-(4-硝基苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶(中间体XIII)

6)把锌粉，水合肼，四氢呋喃混与三口烧瓶中，在氮气保护下，将溶有中间体XIII的四氢呋喃溶液匀速滴加到反应体系中，加毕后回流反应过夜。反应结束后冷却，抽滤，滤液用四氢呋喃萃取三次，减压蒸馏萃液，残余物经柱层析分离，得到中间体4-(3-三氟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体XIV)。

7)将中间体XIV溶于适量的二甲基亚砜或无水THF中，加入商品化或自制的异氰酸酯类化合物(R²-NCO)，再加入三乙胺后，室温反应过夜。反应结束后，冷却，浓缩，残余物经柱层析分离，得到化合物N-R²-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(I_B)。

根据上述制备方法的教导，本领域普通技术人员无需创造性劳动，即可获得式I所包含的所有化合物。

药物组合物和施用方法

在本发明中，所述的药物组合物可直接用于疾病治疗，例如，用于抗肿瘤方面的治疗。在使用本发明药物制剂时，还可同时使用其他治疗剂，如抗肿瘤的药物等。

本发明提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、粉剂、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。

以药物组合物为例，本发明的组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。本发明的药物组合也可以被制成粉剂用于雾化吸入。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明化合物还可与其他治疗剂一起使用。

对于本发明的药物组合物，可通过常规的方式施用于所需的对象(如人和非人哺乳动物)。代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、注射、雾化吸入等。

使用药物组合物时，是将安全有效量的药物施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的主要优点包括：

(a)本发明的化合物可以抑制多种受体酪氨酸激酶(包括c-Kit，PDGFRα和VEGFR2)。

(b)本发明的化合物对多种肿瘤细胞株表现出高选择性和有效的抗增殖活性。

(c)本发明的化合物具有良好的的动力学特征及用药安全性。

(d)本发明化合物在体内可有效地抑制GIST-T1肿瘤细胞，肿瘤生长抑制可达到82.2％。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1

3-甲基-4-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体V)的制备

将4.85克3-甲基-5-氨基-1H-吡唑，7.55克对硝基苯甲醛和7.2克2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮投入100毫升圆底烧瓶中，用20毫升的N,N-二甲基甲酰胺溶解后，在110℃下加热反应至没有CO₂放出为止。反应30分钟后溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入50毫升的异丙醇稀释。抽滤，固体用N,N-二甲基甲酰胺超声15分钟，结束后继续抽滤，固体干燥后得标题化合物，9.8克白色固体(中间体V)，收率72％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:11.92(s,1H),10.41(s,1H),8.20(d,J＝8.7Hz,2H),7.45(d,J＝8.7Hz,2H),4.37(t,J＝6.3Hz,1H),2.88(dd,J＝15.9,7.3Hz,1H),2.58(dd,J＝16.0,5.6Hz,1H),1.86(s,3H).

实施例2

3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体VI)的制备

将14.9克中间体V投入到250毫升烧瓶中，加入100毫升二氧六环溶解，然后加入66毫升N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，再加入15克2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌，回流过夜。反应结束后将反应液倒入适量水中并用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，固体从溶液中析出。抽滤，滤饼先后用N,N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯洗涤，滤饼40℃下烘干得11.3克淡黄色固体(中间体VI)，收率76％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.00(s,1H),11.78(s,1H),8.33(d,J＝8.6Hz,2H),7.80(d,J＝8.6Hz,2H),6.00(s,1H),2.01(s,3H).

实施例3

6-氯-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶(中间体VII)的制备

将5克中间体VI投入100毫升烧瓶中，加入15毫升苯磷酰二氯溶解，在110℃下反应过夜。反应结束后，待体系冷却倒入适量冰水中，搅拌1小时，有大量固体析出。抽滤，滤饼用饱和碳酸氢钠溶液调成弱碱性后二次抽滤，用大量水淋洗滤饼，在40℃下烘干得3.1克灰黄色固体(中间体VII)，收率是58％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.71(s,1H),8.39(d,J＝8.7Hz,2H),7.90(d,J＝8.7Hz,2H),7.25(s,1H),2.16(s,3H).

实施例4

4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体VIII)的制备

将25克锌粉，70毫升一水合肼，10毫升四氢呋喃混与250毫升三口烧瓶中，在氮气保护下，将70毫升溶有7克中间体VII的四氢呋喃溶液匀速滴加到反应体系中，加毕后回流反应4小时。反应结束后抽滤，滤液用四氢呋喃萃取三次，减压蒸馏萃液，残余物用洗脱剂(四氢呋喃：二氯甲烷＝1:3，v/v)经柱层析分离，得到白色固体(中间体VIII)3.1克，收率为57％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.20(s,1H),8.38(d,J＝4.7Hz,1H),7.24(d,J＝7.7Hz,2H),6.93(d,J＝4.7Hz,1H),6.69(d,J＝7.7Hz,2H),5.45(s,2H),2.27(s,3H).

实施例5

4,4,4-三氟-3-羰基丁腈(中间体IX)的制备

将0.5克氢化钠溶于5ml无水四氢呋喃中，加热回流，得反应体系1，然后将0.4克乙腈溶于2ml无水四氢呋喃中，加入1.2克三氟乙酸乙酯，将混合溶液逐滴加入反应体系1中，加完后在70℃下反应15h。反应结束后，冷却至室温，将反应液倒入水中，用适量无水***萃取，水相用2M盐酸溶液调节PH为2，再次用无水***萃取。总的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏，得到粗产品4,4,4-三氟-3-羰基丁腈(中间体IX)。因该产物沸点较低，紫外下无明显荧光，难以监测，没有被进一步纯化，故与下一步同算收率，另在下一步投料中，此步收率按三氟乙酸乙酯完全反应，即100％计算。

实施例6

3-三氟甲基-5-氨基-1H-吡唑(中间体X)的制备

将1.16克中间体IX和4.5ml水合肼混合，滴加5.7ml甲磺酸，加完后在80℃下反应过夜。反应结束后，减压蒸馏，残余物用乙酸乙酯:正己烷＝1:1溶解，搅拌5分钟，抽滤，滤液减压蒸馏，浓缩后用洗脱剂(甲醇:二氯甲烷＝1:60，v/v)进行柱层析分离，得到淡黄色油状物102毫克(中间体X)。实施例5与实施例6，两步总收率为8％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:12.15(s,1H),5.53(s,1H),5.35(s,2H).

实施例7

中间体3-三氟甲基-4-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体XI)的制备

将0.99克对硝基苯甲醛和0.95克2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮投入50毫升圆底烧瓶中，用20毫升的乙醇溶解后，在80℃下加热反应3h,再加入0.9克中间体X的乙醇溶液(5ml)。有固体析出后，反应半个小时。反应结束后，冷却至室温，加入10ml异丙醇稀释。抽滤，固体用甲醇溶解后超声15分钟，再抽滤,固体干燥后得标题化合物，0.376克淡黄色固体(中间体XI)，收率为38％。

1H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ：13.66(s,1H),11.02(s,1H),8.19(d,J＝8.8Hz,2H),7.36(d,J＝8.8Hz,2H),4.55(t,J＝5.6Hz,1H),3.19(dd,J＝5.6Hz,2.8Hz,1H),2.56(d,J＝2.8Hz,1H).

实施例8

3-三氟甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体XII)的制备

将0.736克中间体XII投入到50毫升烧瓶中，加入15毫升氯苯溶解，然后加入2.7毫升N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，再加入0.975克2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌，回流过夜。反应结束后将反应液倒入适量水中并用饱和NaHCO₃溶液调成碱性，固体从溶液中析出。抽滤，滤饼用水洗涤，于60℃下烘干得0.587克淡黄色固体(中间体XII)，收率80％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.15(s,1H),12.09(s,1H),8.28(d,J＝8.6Hz,2H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),6.46(s,1H).

实施例9

6-氯-3-三氟甲基-4-(4-硝基苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶(中间体XIII)的制备

将0.587克中间体XII投入100毫升烧瓶中，加入10毫升苯磷酰二氯溶解，在110℃下反应过夜。反应结束后，待体系冷却倒入适量冰水中，搅拌1小时，有大量固体析出。抽滤，滤饼用饱和碳酸氢钠溶液调成弱碱性后二次抽滤，用大量水淋洗滤饼，在60℃下烘干,点板，若还有中间体XII没有反应完全，重复反应操作，最后300毫克灰黄色固体(中间体XIII)，收率是48％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.96(s,1H),8.32(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(s,1H).

实施例10

4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体XIV)的制备

将342毫克锌粉，2.6毫升一水合肼，2毫升四氢呋喃混于25毫升三口烧瓶中，在氮气保护下，将2毫升溶有200毫克中间体XIII的四氢呋喃溶液匀速滴加到反应体系中，加毕后回流反应过夜。反应结束后抽滤，滤液用四氢呋喃萃取三次，减压蒸馏萃液，残余物用洗脱剂(乙酸乙酯：石油醚＝1:3，v/v)经柱层析分离，得到白色固体(中间体XIV)90毫克，收率为55％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.61(s,1H),8.60(d,J＝4.6Hz,1H),7.18(dd,J＝4.6Hz,8.2Hz,3H),6.66(d,J＝8.2Hz,2H),5.47(s,2H).

实施例11

N-乙基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-1)的制备

将50毫克4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体VIII)溶于1毫升二甲基亚砜中，加入22微升乙基异氰酸酯和10微升三乙胺，室温反应过夜。反应结束后，向体系中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸馏，残余物经柱层析分离(乙酸乙酯:石油醚＝1:3，v/v)，得到的固体再用***洗涤，得到标题化合物，45毫克黄色粉末，收率是69％。Mp：211-213℃；纯度：93％；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.17(s,1H),8.49(d,J＝4.8Hz,2H),7.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.12(d,J＝4.7Hz,1H),6.83(d,J＝8.0Hz,2H),3.62(q,2H),2.36(s,3H),1.35(t,J＝7.2Hz,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₁₆H₁₈N₅O[M+H]⁺296.1511,found 296.1506.

实施例12

N-丙基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-2)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成丙基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得标题化合物，黄色粉末44毫克，收率64％。Mp：208-210℃；纯度：92％；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.15(t,J＝5.5Hz,1H),8.56(d,J＝4.9Hz,1H),7.28(d,J＝8.2Hz,2H),7.22(d,J＝5.0Hz,1H),6.72(d,J＝8.3Hz,2H),3.42-3.35(t,2H),2.30(s,3H),1.68-1.55(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₇H₂₀N₅O[M+H]⁺310.1668,found 310.1662.

实施例13

N-丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-3)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成丁基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得标题化合物，黄色粉末62毫克，收率72％。Mp：177-180℃；纯度：95％；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.20(s,1H),8.49(d,J＝4.8Hz),7.27(d,J＝7.8Hz),7.12(d,J＝4.8Hz),6.81(d,J＝7.8Hz,2H),3.58(dd,J＝13.0,6.4Hz,2H),2.38(s,3H),1.81-1.64(m,2H),1.48(m,2H),0.99(t,J＝7.3Hz)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₈H₂₂N₅O[M+H]⁺324.1824,found 324.1819.

实施例14

N-异丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-4)的制备

将302微升异丁胺溶于2毫升二甲基亚砜中，加入583毫克羰基二咪唑，室温反应两小时后，无需处理，向其中加入150毫克4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体VIII)，40微升三乙胺，室温反应过夜。反应结束后，向体系中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸馏，残余物经柱层析分离(甲醇:二氯甲烷＝1:30，v/v)，得标题化合物150毫克，收率69％。Mp：262-265℃；纯度：96％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.64(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.27(t,J＝5.8Hz,1H),2.95(t,J＝6.2Hz,2H),2.23(s,3H),1.71(dt,J＝13.5,6.6Hz,1H),0.89(d,J＝6.7Hz,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₈H₂₂N₅O[M+H]⁺324.1825,found 324.1819.

实施例15

N-叔丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-5)的制备

除了将异丁胺替换成叔丁胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物120毫克，收率56％。Mp：244-251℃；纯度：100％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.47(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),6.99(d,J＝4.7Hz,1H),6.08(s,1H),2.23(s,3H),1.31(s,9H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₈H₂₁N₅NaO[M+Na]⁺346.1644,found346.1638.

实施例16

N-正戊基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-6)的制备

除了将异丁胺替换成正戊胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物150毫克，收率68％。Mp：233-236℃；纯度：98％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.64(s,1H),8.45(d,1H,J＝4.5Hz),7.56(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.00(d,J＝4.6Hz,1H),6.22(t,1H),3.10(dd,2H),2.24(s,3H),1.45(m,2H),1.30(d,4H),0.89(t,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₁₉H₂₄N₅O[M+H]⁺338.1981,found 338.1975.

实施例17

N-正己基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-7)的制备

除了将异丁胺替换成正己胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物120毫克，收率52％。Mp：213-215℃；纯度：98％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.30(s,1H,NH),8.63(s,1H,NH),8.44(d,J＝4.7Hz,1H,ArH),7.56(d,J＝8.5Hz,2H,ArH),7.42(d,J＝8.4Hz,2H,ArH),7.00(d,J＝4.7Hz,1H,ArH),6.21(t,J＝5.5Hz,1H,NH),3.10(dd,J＝12.8,6.5Hz,2H,CH2),2.23(s,3H,CH3),1.43(d,J＝6.5Hz,2H,CH2),1.29(m,6H,CH2),0.88(t,J＝6.4Hz,3H,CH3)；HRMS(ESI)m/z calcdfor C20H25N5NaO[M+Na]⁺374.1957,found 374.1951.

实施例18

N-环丙基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-8)的制备

除了将异丁胺替换成环丙胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物130毫克，收率63％。Mp：247-250℃；纯度：97％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.53(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.49(d,1H),2.60-2.55(m,1H),2.23(s,3H),0.65(q,J＝6.7Hz,2H),0.46-0.39(m,2H)；HRMS(ESI)m/z calcdfor C₁₇H₁₈N₅O[M+H]+308.1511,found 308.1506.

实施例19

N-环丁基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-9)的制备

除了将异丁胺替换成环丁胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物160毫克，收率67％。Mp：240-243℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.56(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.5Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H,ArH),7.00(d,J＝4.6Hz,1H,ArH),6.50(d,J＝8.1Hz,1H,NH),4.15(dd,J＝16.2,8.3Hz,1H,CH),2.23(s,3H,CH3),2.19(dd,2H,CH2),1.86(dd,J＝19.6,10.3Hz,2H,CH2),1.70-1.55(m,2H,CH2)；HRMS(ESI)m/z calcd forC18H20N5O[M+H]+322.1668,found 322.1662.

实施例20

N-环戊基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-10)的制备

除了将异丁胺替换成环戊胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物200毫克，收率89％。Mp：258-262℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.49(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.5Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.25(d,J＝7.2Hz,1H),3.96(dq,J＝13.5,6.7Hz,1H),2.23(s,3H),1.85(dt,J＝12.2,6.0Hz,2H),1.62(dd,J＝16.4,5.9Hz,2H),1.56(dd,J＝14.2,7.2Hz,2H),1.39(dt,J＝12.2,6.3Hz,2H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₉H₂₂N₅O[M+H]⁺336.1824,found 336.1819.

实施例21

N-环己基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-11)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成环己基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得标题化合物，黄色粉末40毫克，收率52％。Mp：233-237℃；纯度：95％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.53(s,1H),8.44(d,J＝4.6Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.17(d,J＝7.8Hz,1H),3.54-3.41(m,1H),2.23(s,3H),1.82(d,J＝8.9Hz,2H),1.67(d,J＝12.8Hz,2H),1.55(d,J＝12.0Hz,1H),1.32(dd,J＝23.6,11.7Hz,2H),1.18(dd,J＝21.8,12.1Hz,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₀H₂₄N₅O[M+H]⁺390.1981,found 350.1975.

实施例22

N-(呋喃-2-基甲基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-12)的制备

除了将异丁胺替换成2-呋喃甲胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物160毫克，收率70％。Mp：232-234℃；纯度：100％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.77(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.60(s,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.65(t,J＝5.5Hz,1H),6.41(s,1H),6.28(s,1H),4.32(d,J＝5.6Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₉H₁₈N₅O₂[M+H]⁺348.1460,found 348.1455.

实施例23

N-(噻吩-2-基甲基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-13)的制备

除了将异丁胺替换成2-噻吩甲胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物160毫克，收率67％。Mp：233-235℃；纯度：100％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.81(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝4.8Hz,1H),7.04-6.94(m,3H),6.77(t,J＝5.8Hz,1H),4.49(d,J＝5.8Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₁₉H₁₇N₅NaOS[M+Na]⁺386.1052,found 386.1046.

实施例24

N-(吡啶-4-基甲基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-14)的制备

除了将异丁胺替换成4-甲氨基吡啶之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物160毫克，收率68％。Mp：218-222℃；纯度：97％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.97(s,1H),8.52(d,J＝4.7Hz,2H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.32(d,J＝5.0Hz,2H),7.00(d,J＝4.6Hz,1H),6.85(t,J＝5.9Hz,1H),4.36(d,J＝5.9Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₀H₁₉N₆O[M+H]⁺359.1620,found 359.1615.

实施例25

N-苄基-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-15)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成苯甲基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得标题化合物，黄色粉末40毫克，收率50％。Mp：91-97℃；纯度：93％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.56(t,J＝5.9Hz,1H),8.55(d,J＝5.0Hz,1H),7.37(m,4H),7.27(t,J＝7.8Hz,3H),7.23(d,J＝5.0Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,2H),4.63(d,J＝6.0Hz,2H),2.32(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₁H₂₀N₅O[M+H]⁺358.1668,found358.1662.

实施例26

N-(3-甲基苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-16)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成3-甲基苄基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得标题化合物，黄色粉末50毫克，收率60％。Mp：140-145℃；纯度：97％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.54(t,J＝6.0Hz,1H),8.55(d,J＝5.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.4Hz,2H),7.25-7.16(m,4H),7.08(d,J＝7.2Hz,1H),6.71(d,J＝8.4Hz,2H),4.59(d,J＝5.9Hz,2H),2.31(d,J＝6.1Hz,3H),2.29(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₂₂N₅O[M+H]⁺372.1824,found 372.1819.

实施例27

N-(4-甲基苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-17)的制备

除了将异丁胺替换成对甲基苄胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物170毫克，收率69％。Mp：275-276℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.78(s,1H,NH),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.58(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.21(d,J＝7.9Hz,2H),7.15(d,J＝7.9Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.66(t,J＝5.7Hz,1H),4.28(d,J＝5.8Hz,2H),2.29(s,3H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₂H₂₂N₅O[M+H]⁺372.1824,found 372.1819.

实施例28

N-(2-氟苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-18)的制备

除了将异丁胺替换成邻氟苄胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物210毫克，收率84％。Mp：248-251℃；纯度：97％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.85(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.44(d,J＝8.5Hz,2H),7.40(d,J＝7.5Hz,1H),7.33(dd,J＝13.5,6.8Hz,1H),7.20(t,J＝8.0Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.73(t,J＝5.8Hz,1H),4.38(d,J＝5.8Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₁H₁₈FN₅NaO[M+Na]⁺398.1393,found 398.1388.

实施例29

N-(2-氯苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-19)的制备

除了将异丁胺替换成邻氯苄胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物210毫克，收率79％。Mp：254-256℃；纯度：96％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.94(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.58(d,J＝8.3Hz,2H),7.45(m,4H),7.34(dt,J＝14.5,6.9Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.77(t,J＝5.7Hz,1H),4.40(d,J＝5.7Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₁H₁₉ClN₅O[M+H]⁺392.1278,found 392.1273.

实施例30

N-(2,6-二氟苄基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-20)的制备

除了将异丁胺替换成2,6-二氟苄胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物200毫克，收率77％。Mp：254-256℃；纯度：97％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.68(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),7.54(d,J＝8.5Hz,2H),7.40(dd,3H),7.10(dt,J＝19.6,7.8Hz,3H),6.99(d,J＝4.7Hz,1H),6.70(t,J＝5.6Hz,1H),4.41(d,J＝5.6Hz,2H),2.22(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₁H₁₈F₂N₅O[M+H]⁺394.1479,found 394.1474.

实施例31

N-(2-苯基乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-21)的制备

除了将异丁胺替换成苯乙胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物200毫克，收率82％。Mp：221-224℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.73(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.56(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.32(d,J＝7.4Hz,2H),7.24(dd,J＝18.6,7.2Hz,3H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.22(t,J＝5.6Hz,1H),3.37(t,2H),2.78(t,J＝7.1Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₂₂N₅O[M+H]⁺372.1824,found 372.1819.

实施例32

N-(4-氟苯乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-22)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成4-氟苯乙基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得到标题化合物60毫克，收率是23％。Mp：185-189℃，纯度：97％；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.26(s,1H),8.38(d,J＝4.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.3,3.5Hz,4H),7.11(d,J＝4.9Hz,1H),6.99(dd,J＝16.8,8.3Hz,2H),6.81(d,J＝8.2Hz,2H),3.86-3.77(t,2H),3.00(t,J＝6.9Hz,2H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₂H₂₁FN₅O[M+H]⁺390.1730,found 390.1725.

实施例33

N-(4-氯苯乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-23)的制备

除了将异丁胺替换成4-氯苯乙胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物220毫克，收率82％。Mp：244-247℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.71(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.21(t,J＝5.6Hz,1H),3.36(t,2H),2.77(t,J＝7.0Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₂₁ClN₅O[M+H]⁺406.1435,found 406.1429.

实施例34

N-(3,4-二甲氧基苯乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-24)的制备

除了将乙基异氰酸酯替换成3,4-二甲氧基苯乙基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-1，得标题化合物50毫克，收率18％。Mp：178-181℃；纯度：92％；

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:9.18(t,J＝5.4Hz,1H),8.48(d,J＝5.0Hz,1H),7.27(d,J＝8.3Hz,2H),7.22(d,J＝5.0Hz,1H),6.93-6.86(m,2H),6.81(d,J＝7.9Hz,1H),6.71(d,J＝8.3Hz,2H),3.72(s,3H),3.69(s,3H),3.64(dd,J＝12.6,6.6Hz,2H),2.86(t,J＝6.9Hz,2H),2.31(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₆N₅O₃[M+H]⁺432.2036,found 432.2030.

实施例35

N-(3-苯基丙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-25)的制备

除了将异丁胺替换成***之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例I_A-4，得标题化合物180毫克，收率70％。Mp：223-225℃；纯度：98％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.31(s,1H),8.68(s,1H),8.45(d,J＝4.7Hz,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),7.23(d,J＝7.2Hz,2H),7.19(t,J＝7.1Hz,1H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.31(t,J＝5.5Hz,1H),3.13(dd,J＝12.8,6.5Hz,2H),2.63(t,J＝7.6Hz,2H),2.24(s,3H),1.83-1.67(m,2H)；HRMS(ESI)m/zcalcd for C₂₃H₂₃N₅NaO[M+Na]⁺408.1800,found 408.1795.

实施例36

N-(4-苯基丁基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-26)的制备

除了将异丁胺替换成苯丁胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物200毫克，收率75％。Mp：224-227℃；纯度：92％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.63(s,1H),8.44(d,J＝4.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),7.28(t,J＝7.4Hz,2H),7.24-7.13(m,3H),6.99(d,J＝4.6Hz,1H),6.24(t,J＝5.5Hz,1H),3.13(dd,J＝12.6,6.4Hz,2H),2.61(t,J＝7.4Hz,2H),2.23(s,3H),1.60(dd,J＝14.8,7.3Hz,2H),1.47(dd,J＝14.5,7.0Hz,2H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₅N₅NaO[M+Na]⁺422.1957,found 422.1951.

实施例37

N-(1H-吡唑-5-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-27)的制备

除了将异丁胺替换成3-氨基吡唑之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物60毫克，收率30％。Mp：260-263℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),12.28(s,1H),9.26(s,1H),9.06(s,1H),8.46(d,J＝4.7Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,3H),7.49(d,J＝8.5Hz,2H),7.03(d,J＝4.7Hz,1H),6.29(s,1H),2.24(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₇H₁₅N₇NaO[M+Na]⁺356.1236,found 356.1230.

实施例38

N-(吡啶-3-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-28)的制备

除了将异丁胺替换成3-吡啶胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物120毫克，收率52％。Mp：245-247℃；纯度：98％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),9.06(s,1H),8.64(s,1H),8.47(d,J＝4.7Hz,1H),8.21(d,J＝4.1Hz,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(d,J＝8.5Hz,2H),7.34(dd,J＝8.3,4.7Hz,1H),7.03(d,J＝4.7Hz,1H),6.66(s,1H),2.25(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₁₉H₁₆N₆NaO[M+Na]⁺367.1283,found 367.1278.

实施例39

N-(吡啶-2-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-29)的制备

除了将异丁胺替换成2-吡啶胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物46毫克，收率30％。Mp：244-248℃；纯度：96％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.32(s,1H),10.74(s,1H),9.53(s,1H),8.46(d,J＝4.7Hz,1H),8.30(d,J＝4.9Hz,1H),7.76(t,J＝7.8Hz,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(t,J＝8.0Hz,3H),7.02(dd,J＝8.1,4.0Hz,2H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₁₉H₁₆N₆NaO[M+Na]⁺367.1283,found 367.1278.

实施例40

N-(2,3-二氢-1H-茚-2-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-30)的制备

除了将异丁胺替换成2-氨基茚之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得到标题化合物50毫克，收率是20％。Mp：249-251℃；纯度：96％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.55(s,1H),8.44(d,J＝4.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.5Hz,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,2H),7.30-7.22(m,2H),7.21-7.14(m,2H),7.00(d,J＝4.7Hz,1H),6.55(d,J＝7.3Hz,1H),4.45(m,1H),3.21(dd,J＝15.9,7.0Hz,2H),2.80(dd,J＝15.9,5.0Hz,2H),2.22(d,J＝5.9Hz,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₂N₅O[M+H]⁺384.1824,found 384.1819.

实施例41

N-(萘-2-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-31)的制备

除了将异丁胺替换成2-萘胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得到标题化合物90毫克，收率是34％。Mp：232-235℃；纯度：100％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.32(s,1H),8.99(d,J＝5.5Hz,2H),8.47(d,J＝4.7Hz,1H),8.14(s,1H),7.89-7.78(m,3H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.55-7.49(m,3H),7.49-7.43(m,1H),7.37(t,J＝7.5Hz,1H),7.04(d,J＝4.7Hz,1H),2.25(d,J＝8.6Hz,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₀N₅O[M+1]⁺394.1668,found 394.1662.

实施例42

N-(喹啉-3-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-32)的制备

除了将异丁胺替换成3-氨基喹啉之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物80毫克，收率30％。Mp：226-229℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),9.23(s,1H),9.15(s,1H),8.87(d,J＝2.5Hz,1H),8.56(d,J＝2.3Hz,1H),8.47(d,J＝4.7Hz,1H),7.93(dd,J＝13.8,8.3Hz,2H),7.69(d,J＝8.5Hz,2H),7.64-7.55(m,2H),7.53(d,J＝8.5Hz,2H),7.04(d,J＝4.7Hz,1H),2.26(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₁₉N₆O[M+H]⁺395.1620,found 395.1615.

实施例43

N-(萘-1-基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(化合物I_A-33)的制备

除了将异丁胺替换成1-萘胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物170毫克，收率69％。Mp：225-228℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),8.87(s,1H),8.48(d,J＝4.6Hz,1H),8.15(d,J＝8.4Hz,1H),8.03(d,J＝7.5Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.75-7.47(m,9H),7.04(d,J＝4.6Hz,1H),2.26(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₄H₂₀N₅O[M+H]⁺394.1668,found 394.1662.

实施例44

N-(2-吗啉-4-基乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-34)的制备

将395微升N-(2-氨基乙基)吗啉溶于4.6毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入2.25毫升吡啶，得反应体系1。将452微升氯甲酸苯酯溶于2毫升四氢呋喃溶液中，并在在冰浴下逐滴加入反应体系1。常温反应3小时，反应结束后，向体系中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得残余物。将残余物溶于5毫升二氧六环中，加入60毫克4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体VIII)和20微升1-甲基吡咯烷，回流反应过夜。反应结束后，冷却至室温，减压蒸馏，残余物经柱层析分离(甲醇:二氯甲烷＝1:15，v/v)，得到标题化合物，45毫克黄色固体，收率是44％。Mp：98-101；纯度：95％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.30(s,1H),8.88(s,1H),8.45(d,J＝4.8Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.18(t,J＝5.2Hz,1H),3.61(brs,4H),3.55(t,J＝5.6Hz,2H),3.24(q,J＝11.6Hz,5.6Hz,2H),2.41(brs,4H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₀H₂₅N₆O₂[M+H]⁺381.2034,found 381.2029.

实施例45

N-(2-二甲氨基乙基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-35)的制备

除了将N-(2-氨基乙基)吗啉换成N,N-二甲基乙二胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-34，得标题化合物39毫克，黄色油状物，收率43％。Mp：54-56℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ::13.32(s,1H),9.01(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.29(t,J＝5.6Hz,1H),3.24(q,J＝11.6Hz,6.0Hz,2H),2.45(t,J＝6.0Hz,2H),2.27(s,6H),2.24(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd forC₁₈H₂₃N₆O[M+H]⁺339.1928,found339.1927.

实施例46

N-(2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-36)的制备

将1克5-氟-2-硝基甲苯和1.783克碳酸钾溶于7毫升二甲基亚砜中，加入1.072毫升N-甲基哌嗪，与122℃下搅拌过夜。反应结束后，冷却至室温，向体系中加入适量水，用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得中间体XV：1.2g。

将1.2克中间体XV溶于甲醇中，加入120毫克10％Pd/C,通入氢气，室温下反应过夜。反应结束后，过滤，浓缩，残余物经柱层析分离(乙酸乙酯:石油醚＝1:2，v/v)，得到中间体XVI：0.935克。

除了将N-(2-氨基乙基)吗啉换成中间体XVI之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-34，得到标题化合物，29毫克粉红色固体，收率是24％。Mp：263-264；纯度：95％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ::13.33(s,1H),9.09(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.86(s,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,3H),7.02(d,J＝4.8Hz,1H),6.81(s,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,1H),3.07(t,J＝4.4Hz,4H),2.45(t,J＝4.4Hz,4H),2.25(s,3H),2.21(s,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₆H₃₀N₇O[M+H]⁺456.2506,found 456.2504.

实施例47

N-(3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-37)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成2-氟-5-硝基甲苯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物24毫克，乳白色固体，收率20％。Mp：236-238；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ::13.34(s,1H),8.87(s,1H),8.58(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,2H),7.48(d,J＝8.6Hz,2H),7.27(s,1H),7.24(d,J＝8.4Hz,1H),7.02(d,J＝4.8Hz,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,1H),2.79(t,J＝4.4Hz,4H),2.45(brs,4H),2.24(t,9H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₆H₃₀N₇O[M+H]⁺456.2506,found 456.2506.

实施例48

N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-38)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成3-氟硝基苯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物32毫克，黄色固体，收率27％。Mp：108-109；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),8.91(s,1H),8.68(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,3H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(s,1H),7.12(t,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,J＝4.8Hz,1H),6.81(d,J＝7.6Hz,1H),6.59(d,J＝8.0Hz,1H),3.13(brs,4H),2.50(brs,4H),2.25(d,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₈N₇O[M+H]⁺442.2350,found442.2348.

实施例49

N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-39)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成2-氟硝基苯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物105毫克，白色固体，收率89％。Mp：253-253；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),8.91(s,1H),8.68(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,3H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(s,1H),7.12(t,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,J＝4.8Hz,1H),6.81(d,J＝7.6Hz,1H),6.59(d,J＝8.0Hz,1H),3.13(brs,4H),2.50(brs,4H),2.25(d,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₈N₇O[M+H]⁺442.2350,found442.2346.

实施例50

N-(5-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-40)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成4-氟-5-硝基甲苯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物23毫克，白色固体，收率19％。Mp：247-250；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),9.81(s,1H),8.47(d,J＝4.8Hz,1H),8.08(s,1H),7.89(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝4.8Hz,1H),6.79(d,J＝8.0Hz,1H),2.79(t,J＝4.0Hz,4H),2.64(brs,4H),2.31(s,3H),2.25(s,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₆H₃₀N₇O[M+H]⁺456.2506,found 456.2504.

实施例51

N-(3-甲基-4-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-41)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成2-氟-5-硝基甲苯，N-甲基哌嗪换成吗啉之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得到标题化合物，13毫克白色固体，收率是11％。Mp：253-255；纯度：90％。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.32(s,1H),8.85(s,1H),8.57(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(s,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.03(d,J＝4.8Hz,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),3.73(t,J＝4.4Hz,4H),2.79(t,J＝4.4Hz,4H),2.25(s,6H).；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₇N₆O₂[M+H]⁺443.2190,found443.2188.

实施例52

N-(2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-42)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成2-氟硝基苯，N-甲基哌嗪换成吗啉之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物45毫克，乳白色固体，收率39％。Mp：225-228℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),9.76(s,1H),8.47(d,J＝4.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝7.2Hz,1H),7.10(t,J＝7.2Hz,1H),7.03(d,J＝4.4Hz,1H),6.99(d,J＝8.0Hz,1H),3.87(brs,4H),2.83(brs,4H),2.25(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₅N₆O₂[M+H]⁺429.2034,found 429.2033.

实施例53

N-(5-甲基-2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-43)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成4-氟-5-硝基甲苯，N-甲基哌嗪换成吗啉之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物57毫克，黄色固体，收率48％。Mp：268-270；纯度：98％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.34(s,1H),9.76(s,1H),8.47(d,J＝4.4Hz,1H),8.19(s,1H),7.94(s,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝4.4Hz,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),3.86(t,J＝3.6Hz,4H),2.79(t,J＝3.6Hz,4H),2.26(d,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₇N₆O₂[M+H]⁺443.2190,found443.2188.

实施例54

N-((4-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-44)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成对氟硝基苯，N-甲基哌嗪换成二乙胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物81毫克，棕褐色固体，收率73％。Mp：242-246℃；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.32(s,1H),8.76(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),8.33(s,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(d,J＝8.8Hz,2H),7.00(d,J＝4.8Hz,1H),6.64(d,J＝8.8Hz,2H),3.27(q,J＝6.8Hz,4H),2.26(s,3H),1.07(t,J＝6.8Hz,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₇N₆O[M+H]⁺415.2241,found 415.2238.

实施例55

N-((3-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-45)的制备

将7.2毫升40％甲醛溶液与2.56毫升浓硫酸放在冰浴下搅拌，得体系1，将2.4克间硝基苯胺与4.24克硼氢化钠的四氢呋喃(80毫升)溶液缓慢加入体系1中，冰浴下反应2小时，加入1.92克氢氧化钠，搅拌半小时。反应结束后，向体系中加入适量水，用乙酸乙酯萃取三次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏，残余物经柱层析分离(乙酸乙酯:石油醚＝1:20，v/v)得1.8克中间体.

将1.8克中间体XVII溶于甲醇中，加入900毫克10％Pd/C,通入氢气，室温下反应过夜。反应结束后，过滤，浓缩，残余物经柱层析分离(乙酸乙酯:石油醚＝1:10，v/v)，得到1.3克中间体XVIII。

除了将N-(2-氨基乙基)吗啉换成中间体XVIII之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-34，得标题化合物20毫克，淡黄色固体，收率19％。Mp：226-228℃；纯度：98％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),8.84(s,1H),8.61(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝4.8Hz,1H),6.95(s,1H),6.74(d,J＝8.0Hz,1H),6.38(d,J＝8.0Hz,1H),2.89(s,7H),2.25(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₂₃N₆O[M+H]⁺387.1928,found 387.1925.

实施例56

N-((3-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-46)的制备

除了将40％甲醛溶液替换成40％乙醛溶液之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-45，得标题化合物29毫克，青褐色固体，收率26％。Mp：125-128℃；纯度：97％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.34(s,1H),8.84(s,1H),8.59(s,1H),8.47(d,J＝4.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(t,J＝4.8Hz,8.4Hz,2H),6.92(s,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,1H),6.31(d,J＝8.4Hz,1H),3.31(q,J＝7.2Hz,4H),2.25(s,3H),1.10(t,J＝7.2Hz,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₇N₆O[M+H]⁺415.2241,found415.2241.

实施例57

N-(4-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-47)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成对硝基苄氯，N-甲基哌嗪换成二甲胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体100毫克，收率93％。Mp：59-62℃；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.34(s,1H),8.96(s,1H),8.80(s,1H),8.47(d,J＝4.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,H2),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(d,J＝8.4Hz,2H),7.00(t,J＝4.8Hz,1H),3.34–3.33(s,2H),2.25(s,3H),2.13(s,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₅N₆O[M+H]⁺401.2084,found 401.2083.

实施例58

N-(4-((二乙胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-48)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成硝基苄氯，N-甲基哌嗪换成二乙胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体50毫克，收率44％。Mp：123-125℃；纯度：97％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.34(s,1H),8.92(s,1H),8.74(s,1H),8.46(d,J＝4.8Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝7.6Hz,2H),7.23(d,J＝7.6Hz,2H),7.03(d,J＝4.8Hz,1H),3.46(s,2H),2.44(s,4H),2.25(s,3H),0.98(s,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₉N₆O[M+H]⁺429.2397,found 429.2396.

实施例59

N-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-49)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成间硝基苄溴，N-甲基哌嗪换成二甲胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体25毫克，收率23％。Mp：185-186℃；纯度：90％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.39(s,1H),9.64(s,1H),9.25(s,1H),8.52(d,J＝2.8Hz,1H),7.95(d,J＝7.6Hz,1H),7.73(d,J＝7.2Hz,2H),7.55(d,J＝7.2Hz,2H),7.31(t,J＝6.4Hz,1H),7.23(d,J＝6.4Hz,1H),7.08(d,J＝2.8Hz,1H),7.04(t,J＝6.4Hz,1H),3.50(s,2H),2.30(s,3H),2.24(s,6H)；HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₅N₆O[M+H]⁺401.2084,found 401.2082.

实施例60

N-((4-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_A-50)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯换成对氟硝基苯，N-甲基哌嗪换成二甲胺之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，棕褐色固体10毫克，收率10％。Mp：218-221℃；纯度：90％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),8.78(s,1H),8.46(d,J＝4.4Hz,1H),8.41(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),7.02(d,J＝4.4Hz,1H),6.72(d,J＝8.8Hz,2H),2.82(d,6H),2.23(s,3H)；HRMS(ESI)m/z calcdfor C₂₂H₂₃N₆O[M+H]⁺387.1928,found 387.1928.

实施例61

N-正戊基-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-1)的制备

除了将异丁胺替换正己胺，中间体VIII替换成XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得到标题化合物，20毫克白色粉末，收率是20。Mp：215-216℃；纯度：99％；

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:14.73(s,1H),8.66(d,J＝3.6Hz,2H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝3.6Hz,1H),6.24(t,J＝5.4Hz,1H),3.10(q,J＝12.8,6.4Hz,2H),1.43(m,2H),1.29(m,6H),0.87(t,J＝6.8Hz,3H).HRMS(ESI)m/zcalcd for C₂₀H₂₂N₅OF₃[M+H]⁺405.1776,found 405.1777.

实施例62

N-(3-苯丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-2)的制备

除了将异丁胺替换成苯乙胺，中间体VIII替换成XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物27毫克，白色固体，收率25％。Mp：225-227℃；纯度：95％；

1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:14.69(s,1H),8.76(s,1H),8.67(d,J＝4.8Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(dd,J＝12.8,8.0Hz,4H),7.25(m,4H),6.25(t,J＝5.6Hz,1H),2.78(t,J＝7.0Hz,2H),1.26(m,1H),0.87(brs,1H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₁₈N₅OF₃[M+H]⁺425.1463,found 425.1465.

实施例63

N-(3-苯丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-3)的制备

除了将异丁胺替换成***，中间体VIII替换成XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，白色粉末18毫克，收率16％。Mp：212-214℃；纯度：100％；

1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:14.71(s,1H),8.70(s,1H),8.67(d,J＝4.8Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(t,J＝7.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.4Hz,3H),7.19(t,J＝7.2Hz,1H),6.33(t,J＝5.6Hz,1H),3.13(dd,J＝12.8,6.4Hz,2H),2.63(t,J＝7.6Hz,2H),1.76(m,2H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₀N₅OF₃[M+H]⁺439.1620,found439.1613.

实施例64

N-(4-氯苯乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-4)的制备

除了将异丁胺替换成4-氯苯乙胺，中间体VIII替换成XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，淡黄色粉末26毫克，收率23％。Mp：228-232℃；纯度：97％；

1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:14.71(s,1H),8.72(s,1H),8.67(d,J＝4.8Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(dd,J＝12.4,8.4Hz,4H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),7.24(d,J＝4.8Hz,1H),6.23(t,J＝5.6Hz,1H),2.77(t,J＝6.8Hz,2H),1.24(s,1H),0.84(t,1H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₁₇N₅OF₃Na[M+Na]⁺482.0971,found 482.0973.

实施例65

N-(2-二甲氨基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-5)的制备

除了将异丁胺替换成N,N-二甲基乙二胺，中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物41毫克，乳白色固体，收率42％。Mp：165-168℃；纯度：97％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.93(s,1H),8.67(d,J＝4.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.4Hz,1H),6.22(t,J＝5.2Hz,1H),3.22(dd,J＝11.6,6.0Hz,2H),2.39(t,J＝6.0Hz,2H),2.22(s,6H).HRMS(ESI)m/z calcd forC₁₈H₂₀N₆OF₃[M+H]⁺393.1651,found 393.1651.

实施例66

N-(2-二乙氨基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-6)的制备

除了将异丁胺替换成N,N-二乙基乙二胺，中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，乳白色粉末35毫克，收率33％。Mp：128-132℃；纯度：97％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.04(s,1H),8.67(d,J＝4.4Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.4Hz,1H),6.29(s,1H),3.24(q,J＝5.6Hz,2H),2.65(s,6H),1.03(t,J＝7.2,8.9Hz,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₀H₂₄N₆OF₃[M+H]⁺421.1964,found 421.1967.

实施例67

N-(3-二甲氨基丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-7)的制备

除了将异丁胺替换成3-二甲氨基丙胺，中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，淡黄色粉末28毫克，收率27％。Mp：186-189℃；纯度：96％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.79(s,1H),8.66(d,J＝4.8Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.8Hz,1H),6.33(t,J＝5.6Hz,1H),3.14(dd,J＝12.4,6.4Hz,2H),2.35(t,J＝6.0Hz,2H),2.21(s,6H),1.61(m,2H).HRMS(ESI)m/zcalcd for C₁₉H₂₁N₆OF₃[M+H]⁺406.1729,found 406.1731.

实施例68

N-(3-二乙氨基丙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-8)的制备

除了将异丁胺替换成3-二乙氨基丙胺，中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，乳白色粉末12毫克，收率11％。Mp：217-220℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.71(s,1H),9.15(s,1H),8.67(d,J＝4.4Hz,1H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.4Hz,1H),6.69(s,1H),3.20(q,J＝11.6,6.0Hz,2H),3.06(brs,6H),1.82(brs,2H),1.21(m,6H).HRMS(ESI)m/z calcdfor C₂₁H₂₆N₆OF₃[M+H]⁺435.2120,found 435.2118.

实施例69

N-(2-哌啶-1-基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-9)的制备

除了将异丁胺替换成1-(2-氨乙基)哌啶，中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，淡黄色粉末34毫克，收率31％。Mp：120-122℃；纯度：93％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:8.91(s,1H),8.67(d,J＝4.4Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.4Hz,1H),6.17(t,J＝4.8Hz,1H),3.23(dd,J＝11.6,6.0Hz,2H),2.36(t,6H),1.53(m,4H),1.40(m,2H).HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₁H₂₄N₆OF₃[M+H]⁺433.1964,found 433.1963.

实施例70

N-(2-吗啉-4-基乙基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-10)的制备

除了将异丁胺替换成N-(2-氨基乙基)吗啉，中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-4，得标题化合物，淡黄色粉末35毫克，收率32％。Mp：217-219℃；纯度：96％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.70(s,1H),8.92(s,1H),8.66(d,J＝4.8Hz,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝4.8Hz,1H),6.21(t,J＝5.2Hz,1H),3.61(t,J＝4.4Hz,4H),3.24(dd,J＝11.6,6.0Hz,2H),2.41(t,6H).HRMS(ESI)m/zcalcd for C₂₀H₂₂N₆O₂F₃[M+H]⁺435.1756,found 435.1754.

实施例71

N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-11)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成4-氟硝基苯，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物37毫克，银灰色固体，收率30％。Mp：267-268℃；纯度：96％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),8.83(s,1H),8.68(d,J＝4.8Hz,1H),8.52(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.32(d,J＝8.8Hz,2H),7.26(d,J＝4.8Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,2H),3.06(s,4H),2.44(s,4H),2.24(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₅N₇OF₃[M+H]⁺496.2073,found 496.2079.

实施例72

N-(2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-12)的制备

除了将中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，棕褐色粉末22毫克，收率17％。Mp：250-253℃；纯度：91％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.74(s,1H),9.07(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),7.86(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝4.4Hz,1H),6.81(s,1H),6.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.09(s,4H),2.46(s,4H),2.23(d,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₆H₂₇N₇OF₃[M+H]⁺510.2229,found 510.2232.

实施例73

N-(3-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-13)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成2-氟-5-硝基甲苯，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，淡黄色粉末69毫克，收率54％。Mp：209-211℃；纯度：97％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),8.87(s,1H),8.68(d,J＝4.8Hz,1H),8.59(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(m,3H),6.97(d,J＝8.4Hz,1H),2.80(s,4H),2.44(s,4H),2.24(d,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₆H₂₇N₇OF₃[M+H]⁺510.2229,found 510.2230.

实施例74

N-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-14)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成3-氟硝基苯，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_B-11，得标题化合物，黄色粉末57毫克，收率46％。Mp：229-231℃；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),8.90(s,1H),8.69(d,J＝4.8Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝4.8Hz,1H),7.20(s,1H),7.12(t,J＝8.0Hz,1H),6.82(d,J＝8.0Hz,1H),6.59(d,J＝8.0Hz,1H),3.12(s,4H),2.48(s,4H),2.24(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₅N₇OF₃[M+H]⁺496.2073,found496.2072..

实施例75

N-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-15)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成2-氟硝基苯，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，白色粉末40毫克，收率32％。Mp：283-286℃；纯度：98％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),9.80(s,1H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),8.09(s,1H),8.03(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,2H),7.43(d,J＝8.0Hz,2H),7.27(d,J＝4.4Hz,1H),7.19(d,J＝7.6Hz,1H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H),6.99(t,J＝7.6Hz,1H),2.84(s,4H),2.63(s,4H),2.30(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₅N₇OF₃[M+H]⁺496.2073,found 496.2071.

实施例76

N-(5-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-16)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成4-氟-3-硝基甲苯，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色粉末31毫克，收率24％。Mp：274-276℃；纯度：96％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),9.82(s,1H),8.69(d,J＝4.8Hz,1H),8.09(s,1H),7.90(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝4.8Hz,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.79(d,J＝8.0Hz,1H),2.80(s,4H),2.65(s,4H),2.31(s,3H),2.26(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₆H₂₇N₇OF₃[M+H]⁺510.2229,found510.2228.

实施例77

N-(3-甲基-4-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-17)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成2-氟-5-硝基甲苯，N-甲基哌嗪替换成吗啉，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，乳白色粉末105毫克，收率84％。Mp：85-87℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.69(s,1H),8.87(s,1H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),8.60(s,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.30(s,1H),7.27(d,J＝4.4Hz,1H),7.04(s,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),3.73(t,4H),2.79(t,4H),2.26(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₄N₆O₂F₃[M+H]⁺497.1913,found 497.1914.

实施例78

N-(2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-18)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成2-氟硝基苯，N-甲基哌嗪替换成吗啉，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，白色粉末36毫克，收率30％。Mp：224-226℃；纯度：100％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.74(s,1H),9.77(s,1H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),8.21(s,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝4.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.0Hz,1H),7.10(t,J＝7.6Hz,1H),7.00(t,J＝7.6Hz,1H),3.87(s,4H),2.83(s,4H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₄H₂₂N₆O₂F₃[M+H]⁺483.1756,found483.1756.

实施例79

N-(5-甲基-2-(吗啉-4-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-19)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成2-氟-5-硝基甲苯，N-甲基哌嗪替换成吗啉，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色粉末43毫克，收率34％。Mp：153-155℃；纯度：91％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.74(s,1H),9.77(s,1H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),8.22(s,1H),7.94(s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝4.4Hz,1H),7.09(d,J＝8.0Hz,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),3.86(s,4H),2.79(s,4H),2.26(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₄N₆O₂F₃[M+H]⁺497.1913,found 497.1914.

实施例80

N-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)硫脲(I_B-20)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成4-氟硝基苯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同中间体XVI，得中间体XIX：4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺。

取中间体XIX，200毫克溶于4毫升二氯甲烷中，在氮气保护和0℃下，滴加入二氯化硫(240微升)的二氯甲烷(6毫升)溶液中，加入124毫克氢氧化钠，常温下反应3小时。反应结束后，抽滤，用二氯甲烷洗涤，减压蒸馏，得残余物。将残余物溶解于5毫升乙醇中，向其中加入70毫克4-(3-三氟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺(中间体XIV)，常温下反应1小时。反应结束后，减压蒸馏，残余物经柱层析分离(甲醇:二氯甲烷＝1:30，v/v)，得标题化合物76毫克，收率59％。Mp：153-155℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.76(s,1H),9.76(d,J＝15.2Hz,2H),8.71(d,J＝4.4Hz,1H),7.70(d,J＝7.6Hz,2H),7.44(d,J＝7.6Hz,2H),7.28(d,J＝5.6Hz,3H),6.94(d,J＝8.0Hz,2H),3.13(s,4H),2.45(s,4H),2.24(s,3H).HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₅H₂₄N₇OF₃S[M+H]⁺512.1844,found 512.1974.

实施例81

N-((4-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-21)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成对氟硝基苯，N-甲基哌嗪替换成二乙胺，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物23毫克，紫褐色固体，收率20％。Mp：253-254℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.70(s,1H),8.76(s,1H),8.68(d,J＝4.0Hz,1H),8.33(s,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(d,J＝8.0Hz,2H),7.25(d,J＝8.0Hz,3H),6.64(d,J＝8.0Hz,2H),3.29(dd,J＝13.2,6.4Hz,4H),1.07(t,J＝6.4Hz,6H).HRMS(ESI)m/zcalcd for C₂₄H₂₄N₆OF₃[M+H]⁺469.1964,found 469.1962.

实施例82

N-((3-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-22)的制备

除了将中间体VIII换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-45，得标题化合物80毫克，黄色固体，收率72％。Mp：82-84℃；纯度：98％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),8.84(s,1H),8.69(d,J＝4.8Hz,1H),8.62(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝4.8Hz,1H),7.08(t,J＝8.0Hz,1H),6.95(s,1H),6.74(d,J＝8.0Hz,1H),6.39(d,J＝8.0Hz,1H),2.89(s,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₂H₂₀N₆OF₃[M+H]⁺441.1650,found 441.1651.

实施例83

N-((3-二乙胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-23)的制备

除了将中间体VIII换成中间体XIV，甲醛溶液换成乙醛溶液之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-45，得标题化合物，棕褐色粉末54毫克，收率46％。Mp：151-153℃；纯度：98％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.72(s,1H),8.81(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),8.56(s,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(d,J＝4.4Hz,1H),7.04(t,J＝8.0Hz,1H),6.91(t,J＝2.0Hz,1H),6.63(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),6.31(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),3.31(t,J＝7.2,4H),1.10(t,J＝7.2,6H).HRMS(ESI)m/z calcd forC₂₄H₂₄N₆OF₃[M+H]⁺469.1964,found 469.1962.

实施例84

N-(4-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-24)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成对硝基苄氯，N-甲基哌嗪替换成二甲胺，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体86毫克，收率75％。Mp：200-202℃；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.52(s,1H),8.93(s,1H),8.78(s,1H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,2H),7.43(t,J＝8.0Hz,4H),7.26(d,J＝4.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.0Hz,2H),3.34(s,3H),2.15(s,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₂N₆OF₃[M+H]⁺455.1807,found 455.1809.

实施例85

N-(4-((二乙胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-25)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成对硝基苄氯，N-甲基哌嗪替换成二乙胺，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体94毫克，收率74％。Mp：90-93℃；纯度：95％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.52(s,1H),8.93(s,1H),8.77(s,1H),8.68(d,J＝4.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.0Hz,2H),7.42(d,J＝4.8Hz,4H),7.26(d,J＝4.4Hz,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),3.50(s,2H),2.47(t,J＝6.8Hz,4H),0.99(t,J＝6.8Hz,6H).HRMS(ESI)m/zcalcd for C₂₅H₂₆N₆OF₃[M+H]⁺483.21210,found 483.2121.

实施例86

N-(3-((二甲胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-26)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成间硝基苄溴，N-甲基哌嗪替换成二甲胺，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体26毫克，收率23％。Mp：96-98℃；纯度：99％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.39(s,1H),8.92(s,1H),8.82(s,1H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(s,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(d,J＝4.4Hz,1H),7.23(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(d,J＝7.6Hz,1H),3.40(s,2H),2.17(s,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₂N₆OF₃[M+H]⁺455.1807,found 455.1806.

实施例87

N-((4-二甲胺基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-27)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成对氟硝基苯，N-甲基哌嗪替换成二甲胺，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，青褐色固体10毫克，收率9％。Mp：219-221℃；纯度：80％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ::14.71(s,1H),8.80(s,1H),8.68(d,J＝4.8Hz,1H),8.43(s,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,2H),7.39(d,J＝8.8Hz,2H),7.27(d,J＝9.2Hz,2H),6.87(s,1H),6.71(d,J＝9.2Hz,2H),2.84(s,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₃H₂₂N₆OF₃[M+H]⁺441.1651,found 441.1649.

实施例88

N-(3-((二乙胺基)甲基)苯基)-N’-(4-(3-三氟甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-4-基)苯基)脲(I_B-28)的制备

除了将5-氟-2-硝基甲苯替换成间硝基苄溴，N-甲基哌嗪替换成二乙胺，中间体VIII替换成中间体XIV之外，其余所需原料、试剂及制备方法同I_A-36，得标题化合物，黄色固体32毫克，收率26％。Mp：70-72℃；纯度：98％；

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:14.73(s,1H),8.94(d,2H),8.69(d,J＝4.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(s,1H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝7.6,1H),7.24(d,J＝4.4,1H),6.95(d,J＝7.6Hz,1H),3.60(s,2H),2.54(q,J＝7.2Hz,3H),1.02(t,J＝7.2Hz,6H).HRMS(ESI)m/z calcd for C₂₅H₂₆N₆OF₃[M+H]⁺483.2120,found 483.2120.

实施例89

本发明化合物对三种受体酪氨酸激酶活性抑制的实验方法及结果

本发明化合物激酶活性测试的方法是在KmATP的浓度情况下采用迁移率变动分析(Mobility Shift Assay)方法，选取VEGFR-2、PGDFR-α和c-KIT三种体外激酶进行活性测试，并用化合物Imatinib作为标准对照。每个化合物先配置成50μM的溶液，稀释成10个浓度点(每个浓度点之间的浓度相差4倍)进行单孔检测。

本发明化合物对上述3种酪氨酸受体激酶活性数据如表1所示，共发现了29个本发明化合物对c-KIT有较好的抑制活性，IC₅₀<100nM，其中17个衍生物对c-KIT有极强的抑制活性，半数有效抑制浓度1nM<IC₅₀<10nM；共发现了33个本发明化合物对PDGFRα有良好的抑制活性，半数有效抑制浓度IC₅₀<1000nM，其中8个本发明化合物对PDGFRα有较好的抑制活性，半数有效抑制浓度10nM<IC₅₀<100nM；1个本发明化合物对PDGFRα有极强的抑制活性，半数有效抑制浓度1nM<IC₅₀<10nM；没有发现对VEGFR-2有较好的抑制活性(IC₅₀<1000nM)的衍生物，超过一半的(41个)衍生物对VEGFR-2有一定的抑制活性，半数有效抑制浓度1000nM<IC50<10000nM；活性数据详见表1和附表1：说明本发明的化合物有希望开发为多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物。

在表1中，c-KIT代表III型酪氨酸激酶受体，PDGFRa代表血小板衍生生长因子受体α，VEGFR2代表血管内皮生长因子受体2，Linifanib和甲磺酸伊马替尼为阳性对照药，其中Linifanib是美国雅培公司推出的抗肿瘤候选药物，甲磺酸伊马替尼为2002年FDA批准的用于不能切除和(或)转移性的GISTs,是第一个用于临床治疗恶性肿瘤的细胞信号传导抑制剂。

表1本发明化合物对三种酪氨酸激酶的抑制活性数据(IC₅₀，nM)

附表1

实施例90

本发明化合物针对多种同源BaF3细胞系的抗增殖实验的GI₅₀测定实验方法及结果

本发明化合物以c-KIT和PDGFRA激酶活性都最好的I_A-41为例，检测化合物对多种同源BaF3细胞系的抗增殖活性。该实验将10mM的待测化合物母液(DMSO)，按照7个浓度3倍稀释制备成药板，以适宜条件保存，同时采用同等体积的DMSO溶剂作为空白对照，伊马替尼作为阳性对照。取相应的对数生长期细胞制备成细胞板，于适宜条件下培养，加药后，37℃、5％CO₂培养箱中孵育72小时，加入10μL CellTiter-Glo细胞增殖荧光检测试剂，静置10分钟，通过Envision Plate-Reader读数来检测药物与细胞的作用情况。活性数据如表2，

表2本发明化合物I_A-41对多种同源BaF₃细胞系的抗增殖实验活性数据(GI₅₀，μM)

GI<sub>50</sub>(μM)	I<sub>A</sub>41	伊马替尼
			BaF3	4.031	4.686
c-KIT-BaF3	0.0181	0.3819
			c-KIT-A829P-BaF3	0.01159	0.1482
c-KIT-L576P-BaF3	0.01056	0.04508
			c-KIT-C674S-BaF3	0.01045	0.02493
c-KIT-D816H-BaF3	0.1341	1.245
			c-KIT-D816V-BaF3	＞10	＞10
c-KIT-T670I-BaF3	0.03924	＞10
			c-KIT-V559D-T670I-BaF3	0.03637	＞10
c-KIT-V654A-BaF3	0.1365	0.8031
			c-KIT-N822K-BaF3	0.01109	1.466
c-KIT-V559D-BaF3	0.09645	0.03598
			c-KIT-V559D-V654A-BaF3	0.3303	0.803
PDGFRα-BaF3	0.01044	0.01066
			PDGFRα-T674I-BaF3	0.1348	＞10
FLT3-BaF3	0.0107	＞10
			FLT3-ITD-BaF3	0.01043	2.014

由表2可以看出：化合物I_A-41对大部分c-KIT、PDGFRα及突变细胞系均表现出较强的抑制作用，但对c-KIT-D816V-BaF3无明显抑制作用。其中，与已上市药物伊马替尼的抗增殖活性相比，化合物I_A-41对c-KIT-T670I-BaF3、c-KIT-V559D-T670I-BaF3、c-KIT-N822K-BaF3、PDGFRα-T674I-BaF3、FLT3-BaF3、FLT3-ITD-BaF3细胞抗增殖效果有突破性的提高；对c-KIT-BaF3、c-KIT-A829P-BaF3、c-KIT-D816H-BaF3、c-KIT-V559D-V654A-BaF3等靶点的细胞抗增殖效果有极大的提高；对c-KIT-L576P-BaF3、c-KIT-C674S-BaF3、c-KIT-V654A-BaF3细胞抗增殖效果有良好的提高。

实施例91

本发明化合物针对多种真正肿瘤细胞系的抗增殖实验GI₅₀的测定方法和结果

鉴于实施例90中，化合物I_A-41对c-KIT、PDGFRa等激酶及其突变均表现出较强的抗增殖效果，本实施例将展述此化合物针对于8种真正肿瘤细胞系的抗增殖实验方法。细胞系包括仓鼠卵巢细胞系(CHL、CHO)、GIST细胞系(GIST-T1、GIST-882、GIST-48B)、BCR-ABL激酶类细胞系(MEG-01、K562、KU812)，在各自适宜的培养条件下，除了GIST-882加入10μLCCK8细胞增殖检测试剂进行检测外，其他细胞具体实施步骤同实施例90，活性数据见表3。

表3本发明化合物I_A-41对多种真正肿瘤细胞系的抗增殖实验活性数据(GI₅₀，μM)

细胞系	I<sub>A</sub>41(GI<sub>50</sub>μM)	伊马替尼(GI<sub>50</sub>μM)
			CHO	7.036	>10
CHL	>10	>10
			GIST-48B	>10	6.986
K562	>10	0.147
			MEG-01	9.092	0.0453
GIST-T1	<0.003	0.003
			GIST-882	<0.003	0.0202
KU812	>10	0.11
			MOLM14	0.0107	6.452
MV4-11	0.0105	3.589

由表3可以看出，化合物I_A-41对GIST-T1(<0.003μM)、GIST-882(<0.003μM)、MOLM14(0.0107μM)、MV4-11(0.0105μM)细胞株作用效果显著，对KU812、MEG-01、K562、GIST-48B、CHL、CHO细胞株均无作用或作用不明显。此结果表明，本发明化合物I_A-41对正常细胞无增殖抑制作用，对胃肠道间质瘤的治疗有高效选择性，为进一步开发抗胃肠道间质瘤靶向药物提供了方向。

实施例92

本发明化合物药代动力学特征实验测定方法与结果

鉴于本发明化合物I_A-41良好的激酶抑制活性和肿瘤细胞抑制活性，继而对其进行了药代动力学特征的考察。选取30％HP-β-CD、PEG400和微量DMSO(11:8:1)为溶媒，配置I_A-41的最终浓度为2mg/mL，并按2mg/kg的剂量静脉给药于6只雄性SD大鼠；在合适时间进行样本采集(颈静脉采约0.2mL血液)与数据分析；大鼠单次静脉给予I_A-41后个体和平均血药浓度-时间曲线(n＝3)见图1.根据药物的血药浓度数据，使用药代动力学计算软件WinNonlin6.2.1非房室模型分别计算受试物的药代动力学参数，见表4。实验数据表明：在静脉注射中，化合物I_A-41表现出可接受的半衰期和清除率。

表4大鼠单次静脉给予I_A-41后I_A-41主要药动学参数

NA：不适用；-：无计算值

实施例93

本发明化合物利用全自动膜片钳QPatch检测法对hERG钾通道作用的测试方法及结果

选取I_A-41作为代表化合物，将CHO-hERG细胞培养于适宜条件中并进行适当的后续处理，以确保细胞密度为2～5×10⁶/mL。取2μL 20mM的化合物母液加入998μL细胞外液，然后在含0.2％DMSO的细胞外液中依次进行3倍连续稀释得到需要测试的最终浓度，同时选取Cisapride作为阳性对照，利用全自动膜片钳QPatch检测法记录的电生理过程来分析药物对CHO-hERG细胞的作用效果，实验数据见表5.

表5化合物I_A-41对hERG钾电流的抑制结果

化合物	最大浓度抑制率(％)	IC<sub>50</sub>(μm)
			I<sub>A</sub>-41	39.78	>40
Cisapride	98.91	0.13

注：>40μM指该化合物抑制效应在40μM时小于50％

从上述实验结果可以看出，本发明化合物I_A-41对hERG钾通道的抑制作用非常弱，表明心脏毒性很低，有较好的用药安全窗口，有利于开发为临床药物。

实施例94

本发明化合物在GIST-T1肿瘤细胞小鼠移植模型中的药效实验方法和结果

本实验选取I_A-41作为代表化合物，0.5％MC+0.4％Tween80作为溶媒，溶媒组作为空白对照，以及Imatinib作为阳性对照。在受试小鼠右前肩胛处皮下接种GIST-T1细胞1*10⁶/只，当荷瘤鼠平均肿瘤体积到达100-200mm³时,将小鼠随机分为5组。分别按表6进行药效学实验设计，以及表7进行化合物浓度的配制。每天一次腹腔注射药物，并测量肿瘤体积和体重。实验数据用单因素方差分析(one way ANOVA)检验方法比较治疗组肿瘤体积和瘤重与对照组相比有无显著性差异，实验结果见图2-7。最后对各组小鼠GIST-T1细胞进行TUNEL染色、Ki67染色以及HE染色分析，观察本发明化合物I_A-41对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响(见图8)。

表6药效学实验设计

表7受试药、对照药配制方法

从以上结果可以看出：

1)体重：实验期间，各组小鼠的体重，从开始到实验结束，均有一定程度的增长，其他未见异常。

2)肿瘤体积：在试验期间，空白对照组和低剂量组(I_A-41 25mg/kg)小鼠的肿瘤出现大幅增长。高剂量组小鼠的肿瘤体积表现出较强肿瘤抑制作用。

3)肿瘤体积相对百分比：高剂量组药物对小鼠肿瘤存在抑制作用。低剂量组药物作用不明显。显示药物不能很好的穿透肿瘤，只有在体液中的浓度达到一定程度时，才能穿透肿瘤，发挥药物的抑制作用。

4)肿瘤的瘤重：由实验数据结果表明，本发明化合物I_A-41对胃肠道间质瘤的抑制显著程度与已上市药物伊马替尼处于同一个数量级。

5)免疫组化实验结果：根据染色现象，HE染色结果显示：细胞形态及组织比较完整，没有有坏死，为后续说明药效提供依据。通过Ki 67的染色结果可以看出，低剂量组肿瘤细胞增殖较快，而高剂量组以及Imatinib组，由于肿瘤细胞受到抑制，处于增殖状态的细胞明显减少。通过TUNEL染色的结果可以看出，高剂量组染成褐色的细胞明显较多，肿瘤中处于凋亡状态的细胞占多数。

总体表明：本发明化合物I_A-41在高剂量100mg/kg腹腔注射的情况下，对GIST-T1肿瘤有明显的抗增殖和促凋亡药效，且几乎相当于已上市药物伊马替尼，由此可见，I_A-41有望发展为靶向胃肠道间质瘤药物。

本发明的取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)脲类抗肿瘤化合物为一类新结构的小分子化合物，其具有多靶点酪氨酸激酶抑制活性，对多种同源BaF3细胞系以及真正的肿瘤细胞具有抗增殖能力，在具有良好的药代特征和无心脏毒性的同时，在动物药效实验中，也表现出较好的抗肿瘤增殖现象，并且其制备工艺简洁，生产成本低，因此有望发展成为一类新结构的多靶点的酪氨酸激酶抗肿瘤药物，尤其是有望发展成抗胃肠道间质瘤的临床候选药物。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种式I所示化合物、或其药学上可接受的盐,

其中，所述式I化合物选自下组：

2.如权利要求1所述的式I所示化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的式I化合物选自下组：

3.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：

(a)治疗有效量的权利要求1所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐，

以及任选的(b)药学上可接受的载体。

4.一种权利要求1所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备(i)抑制肿瘤细胞或***的药物组合物，(ii)受体酪氨酸激酶抑制剂。

5.一种体外抑制受体酪氨酸激酶的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)将受体酪氨酸激酶与权利要求1所述的式I所示化合物，或其药学上可接受的盐进行接触，从而抑制受体酪氨酸激酶的活性。