CN102612566A - 用于癌症患者中诊断学用途的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

本文中公开了可用于鉴定有可能对癌症患者赋予最佳临床益处的疗法的方法和组合物。

Description

用于癌症患者中诊断学用途的方法和组合物
本发明涉及可用于预测临床后果及监测用抗血管生成疗法治疗的癌症患者的方法和组合物。
癌症是人健康的最致命威胁之一。仅在美国，癌症每年影响着几乎130万新患者，并且是在心血管疾病之后的第二位主要的死亡原因，占4例死亡中的约1例。实体瘤造成那些死亡中的大多数。虽然在某些癌症的医学治疗中已经有显著进展，但是在过去20年中所有癌症的总体5年存活率仅改善了约10%。癌症或恶性肿瘤转移并以不受控制的方式快速生长，使及时的检测和治疗变得极端困难。
根据癌症类型，患者通常具有可用于他们的几种治疗选项，包括化学疗法、放射和基于抗体的药物。可用于预测来自不同治疗方案的临床后果的诊断方法会使这些患者的临床管理极大地受益。几项研究已经探索了基因表达与鉴定特定癌症类型的关联，例如通过突变特异性阵列、微阵列分析、qPCR、等等来进行。此类方法可用于鉴定并分类由患者呈现的癌症。然而，关于基因表达与临床后果的预测或预后价值知道很少。
如此，需要用于预测治疗后果，并且由此为每名患者选择最佳治疗方案的客观的、可再现的方法。
可以在多种背景中利用本发明的方法，包括例如在药物开发过程期间帮助患者选择中，在为患者选择最佳的治疗过程中，在用特定的治疗方案治疗个别患者时预测成功概率，在评估疾病进展中，在监测治疗功效中，在测定个别患者的预后中及在评估个体受益于特定疗法，例如抗癌疗法和/或抗血管生成疗法的素因中。
本发明部分基于如下的发现，即患有癌症的患者中的bFGF表达水平与来自抗血管生成疗法的临床益处升高相关联。因而，本发明的一方面提供了鉴定可以受益于抗血管生成疗法的癌症患者的方法，包括测定自所述患者获得的样品中的bFGF表达水平，其中与参照样品相比自所述患者获得的样品中更高的bFGF表达水平指示所述患者可以受益于抗血管生成疗法。
本发明的另一方面提供了预测癌症患者对抗血管生成疗法的响应性的方法，包括测定自所述患者获得的样品中的bFGF表达水平，其中与参照样品相比所述样品中更高的bFGF表达水平指示所述患者有可能响应抗血管生成疗法。
在某些实施方案中，所述抗血管生成疗法包括施用VEGF拮抗剂或其片段。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是单克隆抗体。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐单抗(bevacizumab)。在某些实施方案中，抗血管生成疗法包括施用5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg贝伐单抗。在某些实施方案中，抗血管生成疗法进一步包括对所述患者施用至少一种化疗剂。在某些实施方案中，至少一种化疗剂是顺铂或吉西他滨。在某些实施方案中，抗血管生成疗法进一步包括对所述患者施用至少两种化疗剂。在某些实施方案中，至少两种化疗剂是顺铂和吉西他滨。
在一个实施方案中，与参照样品相比自所述患者获得的样品中更高的bFGF表达水平指示所述患者可以受益于包括施用7.5mg/kg贝伐单抗的抗血管生成疗法。在另一个实施方案中，与参照样品相比所述样品中更高的bFGF表达水平指示所述患者有可能响应包括施用7.5mg/kg贝伐单抗的抗血管生成疗法。
在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括对患者施用有效量的抗VEGF抗体。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐单抗。在某些实施方案中，对患者施用的有效量的贝伐单抗是7.5mg/kg贝伐单抗。在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括对患者施用有效量的至少一种化疗剂。在某些实施方案中，至少一种化疗剂是顺铂或吉西他滨。在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括对患者施用有效量的至少两种化疗剂。在某些实施方案中，至少两种化疗剂是顺铂和吉西他滨。
另一方面，本发明提供了用抗VEGF抗体治疗患者的方法，包括(1)测定自所述患者获得的样品中的bFGF表达水平，并且(2)若与参照样品相比所述样品中存在着更高的bFGF表达水平，则对所述患者施用有效量的抗VEGF抗体。
在某些实施方案中，测量的bFGF表达水平是蛋白质表达水平。在某些实施方案中，使用免疫学测定法来测量蛋白质表达水平。在某些实施方案中，免疫学测定法是ELISA。在某些实施方案中，测量的bFGF表达水平是mRNA表达水平。
在某些实施方案中，所述样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约2pg/ml。在某些实施方案中，所述样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约4pg/ml。在某些实施方案中，所述样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约6pg/ml。在某些实施方案中，所述样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约6.9pg/ml。在某些实施方案中，所述参照样品中的bFGF蛋白质表达水平等于或小于约2pg/ml。在某些实施方案中，所述参照样品中的bFGF蛋白质表达水平等于或小于约4pg/ml。在某些实施方案中，所述参照样品中的bFGF蛋白质表达水平等于或小于约6pg/ml。在某些实施方案中，所述参照样品中的bFGF蛋白质表达水平等于或小于约6.9pg/ml。
本发明进一步提供了治疗癌症患者的方法，包括测定自所述患者获得的样品中的bFGF蛋白质表达水平，并且若bFGF蛋白质表达水平大于约2pg/ml，则对患者施用有效量的抗VEGF抗体。在某些实施方案中，样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约4pg/ml。在某些实施方案中，样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约6pg/ml。在某些实施方案中，样品中的bFGF蛋白质表达水平大于约6.9pg/ml。
在某些实施方案中，对患者施用的抗VEGF抗体是单克隆抗体。在某些实施方案中，对患者施用的抗VEGF抗体是人源化抗体。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐单抗或其片段。在某些实施方案中，对患者施用5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg贝伐单抗。在某些实施方案中，对患者施用的有效量的贝伐单抗是7.5mg/kg贝伐单抗。
在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括对患者施用有效量的至少一种化疗剂。在某些实施方案中，化疗剂是顺铂(cisplatin)。在某些实施方案中，化疗剂是吉西他滨(gemcitabine)。在某些实施方案中，化疗剂是卡铂(carboplatin)。在某些实施方案中，化疗剂是帕利他塞(paclitaxel)。在某些实施方案中，化疗剂是培美曲塞(pemetrexed)。在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括对患者施用有效量的顺铂和吉西他滨。在某些实施方案中，本发明的方法进一步包括对患者施用有效量的卡铂和帕利他塞。
在某些实施方案中，所述癌症是肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、肾癌或成胶质细胞瘤。在某些实施方案中，所述癌症是肺癌。在某些实施方案中，所述癌症是先前未治疗的肺癌。在某些实施方案中，所述肺癌是非小细胞肺癌。在某些实施方案中，所述肺癌是先前未治疗的非小细胞肺癌。在某些实施方案中，所述癌症是乳腺癌。
在某些实施方案中，自所述患者获得的样品是选自下组的成员：组织、血液、血液衍生的细胞、血浆、血清及其组合。在某些实施方案中，样品是血液样品。在某些实施方案中，样品是血浆样品。在某些实施方案中，在抗血管生成疗法前或开始时获得来自患者的样品。
在某些实施方案中，测量的bFGF表达水平是血液中的bFGF蛋白水平。在某些实施方案中，bFGF蛋白是bFGF蛋白的成熟形式。
另一方面，本发明提供了用于检测自癌症患者获得的样品中的bFGF表达水平的化合物组。该组包含一种或多种能够检测bFGF表达水平的化合物，其中与参照样品相比自癌症患者获得的样品中更高的bFGF表达水平（使用一种或多种化合物的组测定）指示患者可以受益于抗血管生成疗法。在某些实施方案中，化合物是蛋白质。在某些实施方案中，蛋白质是抗体。在某些实施方案中，至少一种抗体能够结合bFGF。
另一方面，本发明提供了用于测定患者是否可以受益于用抗血管生成疗法治疗的试剂盒。该试剂盒包含含有能够与bFGF特异性杂交的多核苷酸的阵列，其中该试剂盒进一步包含关于使用所述阵列来预测癌症患者对抗血管生成疗法的响应性的用法说明书，其中与参照样品相比更高的bFGF表达水平指示患者可以受益于抗血管生成疗法。
本文中所描述的任何实施方案或其任何组合适用于本文中所描述的发明的任何和所有方法。
提供了以下附图：
图1显示了AVAiL试验设计。
图2是按治疗组显示具有高bFGF蛋白质表达水平的肺癌患者中无进展存活的可能性的Kaplan Meier曲线。
图3是按治疗组显示具有低bFGF蛋白质表达水平的肺癌患者中无进展存活的可能性的Kaplan Meier曲线。
图4是按治疗组显示具有高bFGF蛋白质表达水平的肺癌患者中总体存活的可能性的Kaplan Meier曲线。
图5是按治疗组显示具有低bFGF蛋白质表达水平的肺癌患者中总体存活的可能性的Kaplan Meier曲线。
本文中所描述或提及的技术和规程一般是本领域技术人员充分了解并使用常规方法通常采用的，诸如例如记载于下列文献的广泛使用的方法：Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual第3版(2001)ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor，N.Y.CURRENTPROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(F.M.Ausubel等编,(2003));丛书METHODS IN ENZYMOLOGY(Academic Press,Inc.):PCR 2:APRACTICAL APPROACH(M.J.MacPherson,B.D.Hames和G.R.Taylor编(1995)),Harlow和Lane编(1988)ANTIBODIES,A LABORATORY MANUAL,及ANIMAL CELL CULTURE(R.I.Freshney编(1987));OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait编,1984);Methods in Molecular Biology,Humana Press;Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis编,1998)Academic Press;Animal Cell Culture(R.I.Freshney)编,1987);Introduction to Cell and TissueCulture(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998)Plenum Press;Cell and TissueCulture:Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths和D.G.Newell编,1993-8)J.Wiley和Sons;Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell编);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P.Calos编,1987);PCR:The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等编,1994);Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等编,1991);ShortProtocols in Molecular Biology(Wiley和Sons,1999);Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997);Antibodies(P.Finch,1997);Antibodies:A PracticalApproach(D.Catty.编,IRL Press,1988-1989);Monoclonal Antibodies:APractical Approach(P.Shepherd和C.Dean编,Oxford University Press,2000);Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow和D.Lane(Cold SpringHarbor Laboratory Press,1999);The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra编,Harwood Academic Publishers,1995);及Cancer:Principles and Practice ofOncology(V.T.DeVita等编,J.B.Lippincott Company,1993)。
除非另有定义，本文中所使用的技术和科学术语与本发明所属领域中的普通技术人员的通常理解具有相同意义。Singleton等,Dictionary ofMicrobiology and Molecular Biology第2版,J.Wiley & Sons(New York,N.Y.1994),及March,Advanced Organic Chemistry Reactions,Mechanisms andStructure第4版,John Wiley&Sons(New York,N.Y.1992)为本领域技术人员提供本申请中使用的许多术语的一般指导。通过提及而完整收录本文中所引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物。
为了解读本说明书，以下定义会适用，并且只要合适，以单数使用的术语也会包括复数，且反之亦然。在下文所列出的任何定义与通过提及而收入本文中的任何文献矛盾的情况中，应当以下文所列出的定义为准。
如本文中所使用的，术语“样品”或“测试样品”指自感兴趣的受试者获得或衍生的组合物，其含有要例如基于物理、生物化学、化学和/或生理学特征表征和/或鉴定的细胞和/或其它分子实体。在一个实施方案中，该定义涵盖生物起源的血液和其它液体样品和组织样品诸如活组织检查标本或组织培养物或自其衍生的细胞。组织样品的来源可以是固体组织，如来自新鲜的、冷冻的和/或保存的器官或组织样品或活组织检查或吸出物；血液或任何血液成分；体液；和来自受试者妊娠或发育中的任何时间的细胞或血浆。
在另一个实施方案中，该定义包括在其获得后已经以任何方式操作，诸如通过用试剂处理、增溶、或富集某种组分，诸如蛋白质或多核苷酸，或者为了形成切片包埋于半固体或固体基质中的生物学样品。出于本文中的目的，组织样品的“切片”意指组织样品的单一部分或份，例如自组织样品切割的细胞或组织薄片。
样品包括但不限于原代或培养的细胞或细胞系、细胞上清液、细胞溶胞物、血小板、血清、血浆、玻璃状液、淋巴液、滑液、滤泡液、***、羊水、乳、全血、尿液、脑脊液、唾液、痰、泪液、汗液、粘液、肿瘤溶胞物、和组织培养液及组织提取物诸如均质化组织、肿瘤组织、和细胞提取物。
在一个实施方案中，样品是临床样品。在另一个实施方案中，在诊断测定法中使用样品。在某些实施方案中，样品是血液样品。在某些实施方案中，样品是外周血样品。在某些实施方案中，样品是血清样品。
在某些实施方案中，自原发性或转移性肿瘤获得样品。经常使用组织活组织检查来获得肿瘤组织的代表性部分。或者，肿瘤细胞可以以已知或认为含有感兴趣的肿瘤细胞的组织或流体形式间接获得。例如，可以通过切除、支气管镜检查、细针抽吸、支气管刷检、或自痰、胸膜液或血液获得肺癌损伤的样品。
在一个实施方案中，在抗血管生成疗法前自受试者或患者获得测试样品。在另一个实施方案中，在VEGF拮抗剂疗法前自受试者或患者获得测试样品。在又一个实施方案中，在抗VEGF抗体疗法前自受试者或患者获得测试样品。在又一个实施方案中，在施用抗VEGF抗体贝伐单抗前自受试者或患者获得测试样品。在某些实施方案中，在抗血管生成、VEGF拮抗剂或抗VEGF抗体疗法期间或之后获得测试样品。在某些实施方案中，在癌症已经转移后获得测试样品。
如本文中所使用的，“参照样品”指出于比较目的使用的任何样品、标准品、或水平。参照样品包括所有类型的生物学样品，如上文在术语“样品”下所定义的。在某些实施方案中，参照样品是血液样品。在某些实施方案中，参照样品是外周血样品。在某些实施方案中，参照样品是血清样品。在某些实施方案中，参照样品是血浆样品。参照样品可以是选定的样品或合并的样品。
在一个实施方案中，自相同受试者或患者的身体的健康和/或未患病部分获得参照样品。在另一个实施方案中，自相同受试者或患者的身体的未处理组织和/或细胞获得参照样品。
在某些实施方案中，自一名或多名不是受试者或患者的患有癌症的个体获得参照样品。在一个实施方案中，自不是受试者或患者的个体的身体的健康和/或未患病部分获得参照样品。在另一个实施方案中，自不是受试者或患者的个体的身体的未处理组织和/或细胞部分获得参照样品。
在某些实施方案中，参照样品代表来自一名或多名不是受试者或患者的健康个体的组合的多份样品。在某些实施方案中，参照样品代表来自一名或多名不是受试者或患者的患有癌症的个体的组合的多份样品。在某些实施方案中，参照样品是来自一名或多名不是受试者或患者的个体的合并的蛋白质和/或RNA样品。
在某些实施方案中，参照样品是与获得测试样品时不同的一个或多个时间点时获得的来自相同受试者或患者的单一样品或组合的多份样品。例如，在比获得测试样品时更早的时间点时自相同受试者或患者获得参照样品。若在癌症的初始诊断期间获得参照样品，并且后来在癌症变为转移时获得测试样品，则此类参照样品可以是有用的。在某些实施方案中，在比获得测试样品时晚的时间点时自相同受试者或患者获得参照样品。
“个体”、“受试者”或“患者”是脊椎动物。在某些实施方案中，脊椎动物是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于牲畜动物（诸如牛）、运动动物、宠物（诸如猫、犬、和马）、灵长类、小鼠和大鼠。在某些实施方案中，哺乳动物是人。
“检测”包括任何检测手段，包括直接和间接检测。
词语“标记物”在本文中使用时指与试剂诸如核酸探针或抗体直接或间接缀合或融合，而且便于与其缀合或融合的试剂检出的化合物或组合物。标记物自身可以是可检出的（例如，放射性同位素标记物或荧光标记物）或在酶标记物的情况中，可以催化可检出的底物化合物和组合物的化学变化。
如本文中所使用的，“靶序列”、“靶核酸”或“靶蛋白质”是期望其检出的感兴趣的多核苷酸或蛋白质。一般地，如本文中所使用的，“模板”是含有靶核苷酸序列的多核苷酸。在一些情况中，术语“靶核酸”、“模板DNA”、“模板多核苷酸”、“靶核酸”、“靶多核苷酸”及其变型可互换使用。
如本文中所使用的，术语“生物标志”一般指其在哺乳动物组织或细胞之中或之上的表达可以通过标准方法（或本文中所公开的方法）来检测，并且是受试者对基于抑制血管发生的治疗方案，例如抗血管生成剂诸如VEGF特异性抑制剂的敏感性的预测、诊断和/或预后的分子，包括基因、蛋白质、碳水化合物结构、或脂质。在某些实施方案中，此类生物标志的表达测定为高于对参照样品观察到的。在某些实施方案中，生物标志是bFGF。可以例如使用高通量多重免疫测定法，诸如那些自Rules Based Medicine,Inc.或MesoScale Discovery商业上可得的测定法来测定生物标志的表达。也可以使用例如PCR或FACS测定法、免疫组织化学测定法或基于基因芯片的测定法来测定生物标志的表达。别的用于测量生物标志表达的方法在本文中在本发明的方法下描述。
“关联”意指以任何方式比较第一分析或方案的性能和/或结果与第二分析或方案的性能和/或结果。例如，可以在实施第二方案中使用第一分析或方案的结果和/或可以使用第一分析或方案的结果来确定第二分析或方案是否应当实施。就基因表达分析或方案的实施方案而言，可以使用基因表达分析或方案的结果来确定特定的治疗方案是否应当实施。
可以基于本领域中已知的任何合适的标准，包括但不限于mRNA、cDNA、蛋白质、蛋白质片段和/或基因拷贝来测定基因、基因产物例如生物标志的表达水平/量。可以定性和/或定量测定表达水平/量。在某些实施方案中，为了测定的RNA或蛋白质量的差异和所使用的RNA或蛋白质样品的质量可变性两者标准化样品。可以通过测量并合并某些标准化基因，包括公知的持家基因，诸如GAPDH的表达来实现此类标准化。或者，标准化可以基于所有测定基因或其大的亚组的均值或中值信号（全局标准化方法）。以挨个基因为基础，比较测量的患者肿瘤mRNA或蛋白质的标准化量与参照组中找到的量。每名患者的每个测试肿瘤的每种mRNA或蛋白质的标准化表达水平可以表述为参照组中测量的表达水平的百分比。要分析的特定患者样品中测量的表达水平会以某个百分位数落入此范围内，其可以通过本领域中公知的方法来测定。
如本文中所使用的，术语“阵列”或“微阵列”指可杂交阵列元件，优选地多核苷酸探针（例如，寡核苷酸）在基片上的有序排布。基片可以是固体基片，诸如玻璃载玻片，或半固体基片，诸如硝酸纤维素膜。核苷酸序列可以是DNA、RNA、或其任何排列。
如本文中所使用的，“扩增”一般指生成多拷贝的期望序列的过程。“多拷贝”意指至少2个拷贝。“拷贝”不必然意指与模板序列的完全序列互补性或同一性。例如，拷贝可以包含核苷酸类似物诸如脱氧肌苷、有意的序列变化（诸如经由包含与模板可杂交，但是不互补的序列的引物引入的序列变化）和/或扩增期间发生的序列错误。
“多核苷酸”或“核酸”在本文中可互换使用，指任何长度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经过修饰的核苷酸或碱基、和/或其类似物，或者是可通过DNA或RNA聚合酶掺入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含经过修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸及其类似物。若存在的话，对核苷酸结构的修饰可以在装配聚合物之前或之后进行。核苷酸序列可以由非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在聚合后进一步修饰，诸如通过与标记用组分偶联。其它类型的修饰包括例如“帽”，将一个或多个天然存在的核苷酸用类似物替代，核苷酸间修饰诸如例如具有不带电荷连接（例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酰胺酯(phosphoamidate)、氨基甲酸酯等）和具有带电荷连接（例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等）的修饰，含有悬垂模块(pendant moiety)诸如例如蛋白质（例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚L-赖氨酸等）的修饰、具有嵌入剂（例如吖啶、补骨脂素等）的修饰、含有螯合剂（例如金属、放射性金属、硼、氧化性金属等）的修饰、含有烷化剂的修饰、具有经修饰连接（例如α端基异构核酸(anomeric nucleicacid)等）的修饰、以及未修饰形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖类中的任何羟基可以用例如膦酸(phosphonate)基团、磷酸(phosphate)基团替换，用标准保护基团保护，或活化以制备与别的核苷酸的别的连接，或者可偶联至固体支持物。可磷酸化或者用胺或1-20个碳原子的有机加帽基团模块取代5’和3’末端OH。其它羟基也可衍生成标准保护基团。多核苷酸也可含有本领域普遍知道的核糖或脱氧核糖糖类的类似物形式，包括例如2’-氧-甲基、2’-氧-烯丙基、2’-氟-或2’-叠氮-核糖，碳环糖类似物，α-端基异构糖，差向异构糖诸如***糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖，无环类似物及脱碱基核苷类似物诸如甲基核糖核苷。可用备选连接基团替换一个或多个磷酸二酯连接。这些备选连接基团包括但不限于以下实施方案，其中磷酸酯用P(O)S（“硫代酸酯”(thioate)）、P(S)S（“二硫代酸酯”(dithioate)）、(O)NR2（“酰胺酯”(amidate)）、P(O)R、P(O)OR’、CO或CH2（“甲缩醛”(formacetal)）替代，其中R或R’各自独立为H或者取代或未取代的烃基（1-20个C），任选含有醚(-O-)连接、芳基、烯基、环烃基、环烯基或芳烃基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有连接都必需是相同的。前述描述适用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
如本文中所使用的，“寡核苷酸”一般指短的、一般为单链的、一般为合成的多核苷酸，其一般地，但是不必在长度上小于约200个核苷酸。术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”并不互相排斥。上文关于多核苷酸的描述同样且完全可适用于寡核苷酸。
“引物”一般指通过与靶序列杂交结合感兴趣的样品中潜在存在的靶物，此后促进与靶物互补的多核苷酸聚合的短的单链多核苷酸，一般具有游离的3’-OH基团。
“天然序列”多肽包含与自自然界衍生的多肽具有相同的氨基酸序列的多肽。如此，天然序列多肽可以具有来自任何哺乳动物的天然存在的多肽的氨基酸序列。此类天然序列多肽可以自自然界分离或者可以通过重组或合成手段来生成。术语“天然序列”多肽明确涵盖多肽的天然存在的截短或分泌形式（例如，胞外域序列）、多肽的天然存在的变体形式（例如可变剪接形式）和天然存在的等位变体。
“分离的”多肽或“分离的”抗体指已经鉴定且与/由其天然环境的一种成分分开和/或回收的。其天然环境的污染性成分指将会干扰该多肽的诊断或治疗用途的材料，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在某些实施方案中，将多肽纯化至(1)根据Lowry法的测定，以多肽重量计超过95%，或以重量计超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE，使用考马斯蓝或银染色，达到同质。既然多肽天然环境的至少一种成分将不会存在，那么分离的多肽包括重组细胞内的原位多肽。然而，分离的多肽通常将通过至少一个纯化步骤来制备。
“多肽链”指如下的多肽，其中与非共价相互作用或二硫键相反，通过肽键连接其每个域与其它域。
多肽“变体”意指与相应的天然序列多肽具有至少约80%氨基酸序列同一性的生物学活性多肽。此类变体包括例如如下的多肽，其中在该多肽的N和/或C端添加或删除一个或多个氨基酸（天然存在的氨基酸和/或非天然存在的氨基酸）残基。通常，变体与天然序列多肽会具有至少约80%氨基酸序列同一性，或至少约90%氨基酸序列同一性，或至少约95%或更多的氨基酸序列同一性。变体还包括天然序列的多肽片段（例如，亚序列、截短等），通常具有生物学活性。
如本文中所使用的，术语“蛋白质变体”指如上文所描述的变体和/或在天然蛋白质序列中包含一处或多处氨基酸突变的蛋白质。任选地，一处或多处氨基酸突变包括氨基酸替代。可以通过本领域中公知的多种方法来制备本发明中使用的蛋白质及其变体。可以通过蛋白质DNA中的突变来制备蛋白质的氨基酸序列变体。此类变体包括例如蛋白质氨基酸序列内的残基删除、***或替代。可以进行任何删除、***和替代组合以获得具有期望活性的最终构建物。会对编码变体的DNA进行的突变不得将序列在阅读框外放置，并且优选地，不会创建可以生成二级mRNA结构的互补区。见例如EP 75,444A。
术语“抗体”以最广义使用，并且明确覆盖单克隆抗体（包括全长或完整的单克隆抗体）、多克隆抗体、多价抗体、自至少两种完整的抗体形成的多特异性抗体（例如双特异性抗体）、和抗体片段（见下文），只要它们展现出期望的生物学活性。
除非另有指示，表述“多价抗体”遍及本说明书用于意指包含三个或更多个抗原结合位点的抗体。多价抗体通常工程化改造成具有三个或更多个抗原结合位点，并且一般不是天然序列IgM或IgA抗体。
“抗体片段”仅包含完整抗体的一部分，一般地其包含完整抗体的抗原结合位点，并且如此保留结合抗原的能力。由本定义涵盖的抗体片段的例子包括：(i)Fab片段，其具有VL、CL、VH和CH1域；(ii)Fab’片段，其是在CH1域的C端具有一个或多个半胱氨酸残基的Fab片段；(iii)Fd片段，其具有VH和CH1域；(iv)Fd’片段，其具有VH和CH1域及在CH1域的C端的一个或多个半胱氨酸残基；(v)Fv片段，其具有抗体单臂的VL和VH域；(vi)dAb片段(Ward等,Nature 341,544-546(1989))，其由VH域组成；(vii)分离的CDR区；(viii)F(ab’)2片段，即一种包含通过铰链区处的二硫桥连接的两个Fab’片段的二价片段；(ix)单链抗体分子（例如单链Fv；scFv）(Bird等,Science 242:423-426(1988);及Huston等,PNAS(USA)85:5879-5883(1988))；(x)具有两个抗原结合位点的“双抗体”，其包含在同一多肽链中连接的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)（见例如EP 404,097;WO 93/11161;及Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)）；(xi)“线性抗体”，其包含一对串联的Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，它们与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区(Zapata等,Protein Eng.8(10):10571062(1995);及美国专利No.5,641,870)。
如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的突变（例如天然存在的突变）外。如此，修饰语“单克隆”指明抗体不是不同的抗体的混合物的特征。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原。在某些实施方案中，单克隆抗体通常包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中所述靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一靶物结合多肽序列在内的过程获得的。例如，所述选择过程可以是从众多克隆（诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆、或重组DNA克隆的集合）选择独特克隆。应当理解的是，可以进一步改变选定的靶物结合序列，例如为了提高对靶物的亲和力、将靶物结合序列人源化、提高其在细胞培养物中的产量、降低其在体内的免疫原性、创建多特异性抗体等，而且包含改变后的靶物结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型的包含针对不同决定簇（表位）的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性外，单克隆抗体制备物的优点在于它们通常未受到其它免疫球蛋白的污染。
修饰语“单克隆”表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。例如，要依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法（例如Kohler和Milstein,Nature,256:495-97(1975);Hongo等,Hybridoma,14(3):253-260(1995),Harlow等,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版,1988;Hammerling等,于:Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas,563-681,Elsevier,N.Y.,1981）、重组DNA法（参见例如美国专利No.4,816,567）、噬菌体展示技术（参见例如Clackson等,Nature 352:624-628(1991);Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1991);Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004);及Lee等,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)）、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术（参见例如WO 1998/24893;WO 1996/34096;WO 1996/33735;WO 1991/10741;Jakobovits等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993);Jakobovits等,Nature362:255-258(1993);Bruggemann等,Year in Immuno.7:33(1993);美国专利No.5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;及5,661,016;Marks等,Bio./Technology 10:779-783(1992);Lonberg等,Nature 368:856-859(1994);Morrison,Nature 368:812-813(1994);Fishwild等,Nature Biotechnol.14:845-851(1996);Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996);及Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)）。
单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性（美国专利No.4,816,567及Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855(1984)）。
非人（例如鼠）抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在很大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白（受体抗体）中的高变区残基用具有期望特异性、亲和力、和能力的非人物种（供体抗体）诸如小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类动物的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体会包含至少一个、通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还会包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节见Jones等,Nature 321:522-525(1986);Riechmann等,Nature 332:323-329(1988);及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还可见例如Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998);Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995);Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；及美国专利No.6,982,321和7,087,409。还见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。可以通过对转基因动物施用抗原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性考验而生成此类抗体，但是其内源基因座已经丧失能力，例如经免疫的异源小鼠(xenomice)（关于XENOMOUSETM技术，见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584）。关于经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体，还见例如Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。
“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用如本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域中已知的各种技术来生成人抗体。在一个实施方案中，自噬菌体文库选择人抗体，其中所述噬菌体文库表达人抗体(Vaughan等,Nature Biotechnology14:309-314(1996):Sheets等,PNAS(USA)95:6157-6162(1998));Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991);Marks等,J.Mol.Biol.,222:581(1991))。也可以通过将人免疫球蛋白基因座导入转基因动物，例如已经将内源免疫球蛋白基因部分或完全灭活的小鼠中来生成人抗体。考验后，观察到人抗体生成，其在所有方面，包括基因重排、装配、和抗体全集与人中看到的极其相似。此方法记载于例如美国专利No.5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016,及下列科学出版物：Marks等,Bio/Technology10:779-783(1992);Lonberg等,Nature 368:856-859(1994);Morrison,Nature368:812-13(1994);Fishwild等,Nature Biotechnology 14:845-51(1996);Neuberger,Nature Biotechnology 14:826(1996);Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)。或者，可以经由永生化生成针对靶抗原的抗体的人B淋巴细胞（此类B淋巴细胞可以自个体回收或者可以已经在体外免疫）来制备人抗体。见例如Cole等,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77页(1985);Boerner等,J.Immunol.,147(1):86-95(1991);及美国专利No.5,750,373。
术语“可变的”指可变域中的某些部分在抗体间序列差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作高变区的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR，它们大多采取β-片层构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-片层结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合位点的形成（见Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991)）。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的毒性中抗体的参与。
术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。例如，术语高变区抗体指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR：三个在VH中（H1、H2、H3），三个在VL中（L1、L2、L3）。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。见例如Xu等,Immunity 13:37-45(2000);Johnson和Wu,于Methodsin Molecular Biology 248:1-25(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在骆驼(camelid)抗体在缺乏轻链的情况中是有功能的且稳定的。见例如Hamers-Casterman等,Nature 363:446-448(1993);Sheriff等,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD.(1991))。Chothia改为指结构环的位置(Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR代表Kabat HVR与Chothia结构环之间的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触”HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每一个的残基。
Figure BDA00001639779900161
(Kabat编号方式)
H1    H31-H35    H26-H35    H26-H32    H30-H35
(Chothia编号方式)
H2    H50-H65    H50-H58    H53-H55    H47-H58
H3    H95-H102   H95-H102   H96-H101   H93-H101
HVR可以包含如下“延伸的HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变域残基是依照Kabat等,见上文编号的。
“框架区”或“FR”残基指除如本文中所定义的高变区残基外的那些可变域残基。
术语“如Kabat中的可变域残基编号方式”或“如Kabat中的氨基酸位置编号方式”及其变化形式指Kabat等，见上文中用于抗体重链可变域或轻链可变域编辑的编号***。使用此编号***，实际的线性氨基酸序列可以含有较少的或另外的氨基酸，对应于可变域FR或HVR的缩短或***。例如，重链可变域可以包含H2残基52后的单一氨基酸***（依照Kabat的残基52a）和重链FR残基82后的***残基（例如依照Kabat的残基82a、82b和82c等）。给定抗体的Kabat残基编号方式可以通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列比对同源区来确定。
贯穿本说明书，Kabat编号***一般在提及可变域中的残基（大约是轻链残基1-107和重链残基1-113）时使用（例如Kabat等,Sequences ofImmunological Interest.第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991))。“EU编号***”或“EU索引”一般在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用（例如Kabat等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991)中报告的EU索引，通过提及而将其明确收入本文）。除非本文中另有说明，提及抗体可变域中的残基编号指根据Kabat编号***的残基编号方式。除非本文中另有说明，提及抗体恒定域中的残基编号指根据EU编号***的残基编号方式（关于详情，见例如美国专利申请公开文本No.2998/0181888，其要求美国临时申请No.60/640,323的优先权）。
根据其重链恒定域的氨基酸序列，抗体（免疫球蛋白）可以归入不同的类。免疫球蛋白有五大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可以进一步分为亚类（同种型），例如IgG1（包括非A和A同种异型）、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α、δ、ε、γ和μ。不同类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是公知的，并且一般记载于例如Abbas等,Cellular and Mol.Immunology,第4版(W.B.Saunders,Co.,2000)。抗体可以是通过抗体与一种或多种其它蛋白质或肽的共价或非共价联合形成的较大融合分子的一部分。
根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的抗体（免疫球蛋白）的“轻链”可以归入两种截然不同的型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C-端区域，其可以通过对完整抗体的木瓜蛋白酶消化来生成。Fc区可以是天然序列Fc区或变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常定义为自大约位置Cys226处的氨基酸残基或自大约位置Pro230至Fc区的羧基端的区段。Fc区的C端赖氨酸（残基447，依照EU编号***）可以消除，例如在生产或纯化抗体期间，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造来进行。因而，完整抗体组合物可以包括所有K447残基都被消除的抗体群、无一K447残基被消除的抗体群、及具有有和没有K447残基的抗体的混合物的抗体群。免疫球蛋白的Fc区一般包含两个恒定域CH2域和CH3域，而且任选地，包含CH4域。
除非本文另有说明，免疫球蛋白重链中的残基编号方式是如Kabat等,见上文中的EU索引的编号方式。“如Kabat中的EU索引”指人IgG1EU抗体的残基编号方式。
本文中的“Fc区链”意指Fc区的两条多肽链之一。
人IgG Fc区的“CH2域”（也称为“Cg2”域）通常自约第231位的氨基酸残基延伸至约第340位的氨基酸残基。CH2域的独特之处在于它没有与另一域紧密配对。而是，有两个N-连接的分支的碳水化合物链介于完整天然IgG分子的两个CH2域之间。推测碳水化合物可能提供域-域配对的替代且有助于稳定CH2域。Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985)。本文中的CH2域可以是天然序列CH2域或变体CH2域。
“CH3域”包含Fc区中CH2域C端的一段残基（即自IgG的约第341位的氨基酸残基至约第447位的氨基酸残基）。本文中的CH3区可以是天然序列CH3域或变体CH3域（例如在其一条链中具有引入的“突出”和在其另一条链中具有相应的引入的“穴”的CH3域；见美国专利No.5,821,333，通过提及而将其明确收入本文）。可以使用此类变体CH3域来生成多特异性（例如双特异性）抗体，如本文中所描述的。
“铰链区”通常定义为自人IgG1的约Glu216或约Cys226至约Pro230的区段(Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985))。其它IgG同种型的铰链区可以通过将第一个和最后一个形成重链间S-S键的半胱氨酸残基置于相同位置而与IgG1序列对比。本文中的铰链区可以是天然序列铰链区或变体铰链区。变体铰链区的两条多肽链通常保留每条多肽链的至少一个半胱氨酸残基，从而变体铰链区的两条多肽链可以形成两条链间的二硫键。本文中优选的铰链区是天然序列人铰链区，例如天然序列人IgG1铰链区。
“功能性Fc区”拥有天然序列Fc区的至少一种“效应器功能”。例示性的“效应器功能”包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬；细胞表面受体（例如B细胞受体；BCR）下调等。此类效应器功能一般要求Fc区与结合域（例如抗体可变域）联合，而且可以使用本领域中已知的用于评估此类抗体效应器功能的多种测定法来评估。
“天然序列Fc区”包含与在自然界中找到的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1Fc区（非A和A同种异型）；天然序列人IgG2Fc区；天然序列人IgG3Fc区；和天然序列人IgG4Fc区；以及它们的天然存在变体。
“变体Fc区”包含由于至少一处氨基酸修饰而与天然序列Fc区有所不同的氨基酸序列。在某些实施方案中，变体Fc区与天然序列Fc区相比或与亲本多肽的Fc区相比具有至少一处氨基酸替代，例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中的约1处至约10处氨基酸替代，且优选地约1处至约5处氨基酸替代，例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中的约1处至约10处氨基酸替代，且优选地约1处至约5处氨基酸替代。本文中的变体Fc区通常会与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区拥有例如至少约80%的序列同一性，或者与它们具有至少约90%的序列同一性，或者与它们具有至少约95%或更多的同一性。
抗体“效应器功能”指那些可归于抗体Fc区（天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区）且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体（例如B细胞受体）下调；和B细胞活化。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指其中结合至某些细胞毒性细胞（例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞）上存在的Fc受体(FcR)上的分泌型Ig使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。介导ADCC的主要细胞，即NK细胞，只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464页表3汇总了造血细胞上的FcR表达。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可以实施体外ADCC测定法，诸如美国专利No.5,500,362或5,821,337中所描述的。可用于此类测定法的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynes等,PNAS(USA)95:652-656(1998)中所披露的。
“人效应细胞”指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。在某些实施方案中，该细胞至少表达FcγRIII并行使ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞，一般优选PBMC和NK细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如如本文所述从血液或PBMC分离。
“Fc受体”或“FcR”描述结合抗体Fc区的受体。在一些实施方案中，FcR是天然人FcR。在一些实施方案中，FcR指结合IgG抗体的FcR（γ受体），包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括那些受体的等位变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA（“活化受体”）和FcγRIIB（“抑制受体”），它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质域。活化受体FcγRIIA在其胞质域中含有免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质域中含有免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)（见例如
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Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997)）。FcR的综述见例如Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991);Capel等,Immunomethods 4:25-34(1994);及de Haas等,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来要鉴定的。
术语“Fc受体”或“FcR”还包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等,J.Immunol.24:249(1994))并调节免疫球蛋白稳态。测量对FcRn的结合的方法是已知的（见例如Ghetie和Ward.,Immunol.Today 18(12):592-598(1997);Ghetie等,NatureBiotechnology,15(7):637-640(1997);Hinton等,J.Biol.Chem.279(8):6213-6216(2004);WO 2004/92219(Hinton等)。
可以测定人FcRn高亲和力结合多肽与人FcRn的体内结合和血清半衰期，例如在表达人FcRn的经转染的人细胞系或转基因小鼠中，或者在施用具有变体Fc区的多肽的灵长类中。WO 2000/42072(Presta)描述了对FcR的结合提高或降低的抗体变体。还可见例如Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”指在存在补体的情况中对靶细胞的溶解。经典补体途径的激活是由补体***第一组分(C1q)结合其关联抗原所结合的抗体（适宜亚类的）起始的。为了评估补体激活，可以实施CDC测定法，例如如Gazzano-Santoro等,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所描述的。具有改变的Fc区氨基酸序列（具有变体Fc区的多肽）和增强的或减弱的C1q结合能力的多肽变体记载于例如美国专利No.6,194,551B 1和WO1999/51642。还可见例如Idusogie等,J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个CDR中具有一处或多处改变、导致该抗体对抗原的亲和力与没有那些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。在一个实施方案，亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。可以通过本领域已知规程来生成亲和力成熟的抗体。Marks等,Bio/Technology 10:779-783(1992)记载了通过VH和VL域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了CDR和/或框架残基的随机诱变：Barbas等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994);Schier等,Gene 169:147-155(1995);Yelton等,J.Immunol.155:1994-2004(1995);Jackson等,J.Immunol.154(7):3310-9(1995);及Hawkins等,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
抗体的“功能性抗原结合位点”是能够结合靶抗原的位点。抗原结合位点的抗原结合亲和力不必与衍生抗原结合位点的亲本抗体一样强，但是结合抗原的能力必须使用已知用于评估抗体对抗原结合的多种方法之任一种可测量。此外，本文中的多价抗体的每个抗原结合位点的抗原结合亲和力不需要定量相同。对于本文中的多聚抗体，可以使用超速离心分析来评估功能性抗原结合位点的数目。依照此分析方法，组合不同比率的靶抗原与多聚抗体，并且假设不同数目的功能性结合位点，计算复合物的平均分子量。比较这些理论值与获得的实际实验值以评估功能性结合位点的数目。
具有指定抗体的“生物学特征”的抗体指拥有所述抗体的一项或多项将其与结合相同抗原的其它抗体区分的生物学特征的抗体。
为了筛选结合抗原上被感兴趣的抗体结合的表位的抗体，可以实施常规的交叉阻断测定法，诸如记载于Antibodies,A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory,Ed Harlow和David Lane(1988)的。
术语“拮抗剂”在本文中使用时指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰本发明蛋白质活性（包括其对一种或多种受体的结合（在配体的情况中）或对一种或多种配体的结合（在受体的情况中））的分子。拮抗剂包括抗体及其抗原结合片段、蛋白质、肽、糖蛋白、糖肽、糖脂、多糖、寡糖、核酸、生物有机分子、肽模拟物、药剂及其代谢物、转录和翻译控制序列、等等。拮抗剂还包括本发明蛋白质的小分子抑制剂，和融合蛋白、受体分子和衍生物（其特异性结合蛋白质，由此隔绝它对其靶物的结合）、蛋白质的拮抗性变体、针对本发明蛋白质的反义分子、RNA适体、和针对本发明蛋白质的核酶。
“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗体。某些阻断性抗体或拮抗性抗体实质性或完全抑制抗原的生物学活性。
术语“VEGF”和“VEGF-A”可互换使用，指165个氨基酸的血管内皮细胞生长因子及相关的121个、145个、183个、189个和206个氨基酸的血管内皮细胞生长因子，如由Leung等,Science,246:1306(1989),Houck等,Mol.Endocrin.,5:1806(1991),及Robinson & Stringer,Journal of Cell Science,144(5):853-865(2001)所描述的，以及其天然存在的等位和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、VEGF-F、和PlGF的基因家族的一部分。VEGF-A主要结合两种高亲和力受体酪氨酸激酶VEGFR-1(Flt-1)和VEGFR-2(Flk-1/KDR)，后一种是VEGF-A的血管内皮细胞促有丝***信号的主要递质。术语“VEGF”或“VEGF-A”也指来自非人物种诸如小鼠、大鼠或灵长类的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF由术语诸如hVEGF（对于人VEGF）或mVEGF（对于鼠VEGF）指示。术语“VEGF”还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子的氨基酸8至109或1至109的多肽截短形式或片段。“截短的”天然VEGF的氨基酸位置如在天然的VEGF序列中指示的那样编号。例如，截短的天然VEGF中的氨基酸位置17（甲硫氨酸）也是天然VEGF中的第17位（甲硫氨酸）。截短的天然VEGF具有与天然的VEGF相当的针对KDR和Flt-1受体的结合亲和力。
“VEGF拮抗剂”指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF活性（包括其与一种或多种VEGF受体的结合）的分子（肽基或非肽基）。VEGF拮抗剂包括抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF由此隔绝其与一种或多种受体（例如可溶性VEGF受体蛋白、或其VEGF结合片段、或嵌合VEGF受体蛋白）结合的受体分子及衍生物、抗VEGF受体抗体和VEGF受体拮抗剂，诸如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂、及融合蛋白，例如VEGF-Trap(Regeneron)、VEGF 121-gelonin(Peregrine)。VEGF拮抗剂还包括VEGF的拮抗性变体、针对VEGF的反义分子、RNA适体、和针对VEGF或VEGF受体的核酶。可用于本发明的方法的VEGF拮抗剂进一步包括特异性结合VEGF的肽基或非肽基化合物，诸如抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF的多肽或其片段；至少与编码VEGF多肽的核酸分子的片段互补的反义核碱基寡聚物；至少与编码VEGF多肽的核酸分子的片段互补的小RNA；靶向VEGF的核酶；针对VEGF的肽体(peptibody)；和VEGF适体。在一个实施方案中，VEGF拮抗剂将VEGF的表达水平或生物学活性降低或抑制至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在另一个实施方案中，由VEGF拮抗剂抑制的VEGF是VEGF(8-109)、VEGF(1-109)、或VEGF165。
术语“抗VEGF抗体”或“结合VEGF的抗体”指能够以足够的亲和力和特异性结合VEGF，使得抗体可用作靶向VEGF中的诊断和/或治疗剂的抗体。例如，可以在靶向和干预牵涉VEGF活性的疾病或状况中使用本发明的抗VEGF抗体作为治疗剂。见例如美国专利6,582,959;6,703,020;WO98/45332;WO 96/30046;WO94/10202,WO2005/044853;EP 0666868B1;美国专利申请20030206899,20030190317,20030203409,20050112126,20050186208,及20050112126;Popkov等,Journal of Immunological Methods 288:149-164(2004);及WO2005012359。选定的抗体通常会具有足够强的针对VEGF的结合亲和力。例如，抗体可以以100nM-1pM间的Kd值结合hVEGF。可以例如通过基于表面等离振子共振的测定法（诸如BIAcore测定法，如记载于PCT申请公开文本No.WO2005/012359的）；酶联免疫吸附测定法(ELISA)；和竞争测定法（例如RIA）来测定抗体亲和力。抗体可以进行其它生物学活性测定法，例如以评估其作为治疗剂的有效性。此类测定法是本领域中已知的，并且取决于靶抗原和抗体的意图用途。例子包括HUVEC抑制测定法；肿瘤细胞生长抑制测定法（如记载于例如WO 89/06692的）；抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体介导的细胞毒性(CDC)测定法（美国专利5,500,362）；和激动活性或造血测定法（见WO 95/27062）。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同系物诸如VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或VEGF-E，也不结合其它生长因子诸如PlGF、PDGF或bFGF。在一个实施方案中，抗VEGF抗体包括与由杂交瘤ATCC HB 10709生成的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同表位的单克隆抗体；重组人源化的抗VEGF单克隆抗体（见Presta等(1997)Cancer Res.57:4593-4599），包括但不限于称为“贝伐单抗(BV)”的抗体，又称为“rhuMAbVEGF”或“AVASTINTM”。AVASTINTM目前是商品化的。贝伐单抗包含突变的人IgG1框架区和来自阻断人VEGF结合其受体的鼠抗体A.4.6.1的抗原结合互补决定区。贝伐单抗的约93%的氨基酸序列（包括大多数框架区）自人IgG1衍生，并且约7%的序列自A4.6.1衍生。贝伐单抗具有约149,000道尔顿的分子量，并且是糖基化的。贝伐单抗和其它人源化的抗VEGF抗体进一步记载于2005年2月26日公告的美国专利No.6,884,879。别的抗VEGF抗体包括G6或B20系列抗体（例如G6-23、G6-31、B20-4.1），如记载于PCT申请公开文本No.WO2005/012359的。关于别的优选抗体，见美国专利Nos.7,060,269,6,582,959,6,703,020;6,054,297;WO98/45332;WO 96/30046;WO94/10202;EP0666868B1;美国专利申请公开文本Nos.2006009360,20050186208,20030206899,20030190317,20030203409,和20050112126;及Popkov等,Journal of Immunological Methods 288:149-164(2004)。
如本文中所使用的，术语“B20系列多肽”指如下的多肽，包括结合VEGF的抗体。B20系列多肽包括但不限于自B20抗体序列衍生的抗体或B20衍生的抗体，其记载于美国公开文本No.20060280747、美国公开文本No.20070141065和/或美国公开文本No.20070020267，通过提及而将这些专利申请的内容明确收入本文。在一个实施方案中，B20系列多肽是B20-4.1，如记载于美国公开文本No.20060280747、美国公开文本No.20070141065和/或美国公开文本No.20070020267的。在另一个实施方案中，B20系列多肽是B20-4.1.1，如记载于PCT公开文本No.WO 2009/073160的，通过提及而将其全部公开内容明确收入本文。
如本文中所使用的，术语“G6系列多肽”指如下的多肽，包括结合VEGF的抗体。G6系列多肽包括但不限于自G6抗体序列衍生的抗体或G6衍生的抗体，其记载于美国公开文本No.20060280747、美国公开文本No.20070141065和/或美国公开文本No.20070020267。G6系列多肽（如记载于美国公开文本No.20060280747、美国公开文本No.20070141065和/或美国公开文本No.20070020267的）包括但不限于G6-8、G6-23和G6-31。
术语“bFGF”（又称为“FGF2”、“FGF-β”或“碱性成纤维细胞生长因子”）是由位于染色体4的短臂上的基因编码的成纤维细胞生长因子家族的成员。如本文中所使用的，术语bFGF包括天然序列bFGF多肽和bFGF变体。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种可溶性肝素结合多肽。bFGF也结合称作FGFR-1(Flg)的受体。bFGF对内皮细胞具有促有丝***效果，并且是血管发生的一种有力的诱导物。已经报告了肿瘤细胞中bFGF的旁分泌生成与肿瘤形成的血管生成开关有关(Kandel,J.等,Cell,1991.66(6):p.1095-104)。除了其对内皮细胞的独立效果外，bFGF还在诱导血管发生中与VEGF协同起作用(Asahara,T.等,Circulation,1995.92(9Suppl):p.II365-71)。
天然序列bFGF包含与自自然界衍生的bFGF具有相同氨基酸序列的多肽，而不管其制备模式。如此，天然序列bFGF可以具有天然存在的人bFGF、鼠bFGF、或来自任何其它哺乳动物物种的bFGF的氨基酸序列。还公开了人bFGF序列（SEQ ID NO:1至5）。此类天然序列bFGF可以自自然界分离或者可以通过重组和/或合成手段来生成。术语天然序列bFGF明确涵盖天然存在的前原、原和成熟形式和截短形式的bFGF、天然存在的变体形式（例如可变剪接形式）、和天然存在的等位变体。
bFGF变体是由于在天然序列内***、删除、修饰和/或替代一个或多个氨基酸残基而具有与天然序列bFGF多肽的序列不同的氨基酸序列的生物学活性bFGF多肽。一般地，bFGF变体与天然序列bFGF具有小于100%序列同一性。然而，通常，生物学活性bFGF变体会具有含有至少约70%、75%、80%、85%、90%、95%或约99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。bFGF变体包括保留相应的天然序列bFGF多肽的生物学活性的至少5个氨基酸的肽片段。bFGF变体还包括如下的bFGF多肽，其中在天然bFGF序列的N端或C端或在天然bFGF序列内添加一个或多个氨基酸残基。bFGF变体还包括如下的bFGF多肽，其中将许多氨基酸残基删除，并且任选地用一个或多个氨基酸残基替代。
术语“bFGF拮抗剂”在本文中使用时指结合bFGF，并且抑制或实质性降低bFGF的生物学活性的分子。bFGF拮抗剂的非限制性例子包括抗体、蛋白质、肽、糖蛋白、糖肽、糖脂、多糖、寡糖、核酸、生物有机分子、肽模拟物、药剂及其代谢物、转录和翻译控制序列、等等。在本发明的一个实施方案中，bFGF拮抗剂是抗体，特别是结合人bFGF的抗bFGF抗体。
术语“生物学活性”就多肽而言指分子特异性结合并调节细胞应答，例如增殖、迁移等的能力。细胞应答还包括那些经由受体介导的，包括但不限于迁移和/或增殖。在此背景中，术语“调控”包括促进和抑制两者。
“VEGF生物学活性”包括结合任何VEGF受体或任何VEGF信号传导活性，诸如调节正常的和异常的血管发生和血管生成两者(Ferrara和Davis-Smyth(1997)Endocrine Rev.18:4-25;Ferrara(1999)J.Mol.Med.77:527-543)；促进胚胎血管生成和血管发生(Carmeliet等(1996)Nature380:435-439;Ferrara等(1996)Nature 380:439-442)；及调控雌性生殖道中的周期性血管增殖和骨生长和软骨形成(Ferrara等(1998)Nature Med.4:336-340;Gerber等(1999)Nature Med.5:623-628)。在作为血管发生和血管生成中的血管生成因子外，VEGF作为多效性生长因子在其它生理学过程，诸如内皮细胞存活、血管通透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙流入中展现出多种生物学效应(Ferrara和Davis-Smyth(1997),见上文及Cebe-Suarez等,Cell.Mol.Life Sci.63:601-615(2006))。此外，最近的研究已经报告了VEGF对几种非内皮细胞类型，诸如视网膜色素上皮细胞、胰管细胞、和施万(Schwann)细胞的促有丝***效果。Guerrin等(1995)J.Cell Physiol.164:385-394;Oberg-Welsh等(1997)Mol.Cell.Endocrinol.126:125-132;Sondell等(1999)J.Neurosci.19:5731-5740.
“血管生成因子或血管生成剂”指刺激血管形成，例如促进血管发生、内皮细胞生长、血管稳定性、和/或血管生成等的生长因子。例如，血管生成因子包括但不限于例如VEGF和VEGF家族成员、PlGF、PDGF家族、成纤维细胞生长因子家族(FGF)、TIE配体（血管生成素(Angiopoietins)）、肝配蛋白、ANGPTL3、ANGPTL4等。它还会包括加速伤口愈合的因子，诸如生长激素、***-I(IGF-I)、VIGF、表皮生长因子(EGF)、CTGF及其家族成员、和TGF-α和TGF-β。见例如Klagsbrun和D’Amore,Annu.Rev.Physiol.,53:217-39(1991);Streit和Detmar,Oncogene,22:3172-3179(2003);Ferrara和Alitalo,Nature Medicine 5(12):1359-1364(1999);Tonini等,Oncogene,22:6549-6556(2003)（例如列出血管生成因子的表1）；及Sato Int.J.Clin.Oncol.,8:200-206(2003)。
“抗血管生成剂”或“血管发生抑制剂”指直接或间隔抑制血管发生、血管生成、或不想要的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体、或其缀合物或融合蛋白。例如，抗血管生成剂是针对如上文所限定的血管生成剂的抗体或其它拮抗剂，例如针对VEGF的抗体、针对VEGF受体的抗体、阻断VEGF受体信号传导的小分子（例如，PTK787/ZK2284、SU6668、SUTENT/SU11248（苹果酸舒尼替尼(sunitinibmalate)）,AMG706）。抗血管生成剂还包括天然的血管发生抑制剂，例如血管他丁(angiostatin)、内皮他丁(endostatin)等。见例如Klagsbrun和D’Amore,Annu.Rev.Physiol.,53:217-39(1991);Streit和Detmar,Oncogene,22:3172-3179(2003)（例如，列出恶性黑素瘤中的抗血管生成疗法的表3）；Ferrara和Alitalo,Nature Medicine 5(12):1359-1364(1999);Tonini等,Oncogene,22:6549-6556(2003)（例如，列出抗血管生成因子的表2）;及Sato Int.J.Clin.Oncol.,8:200-206(2003)（例如，表1列出了临床试验中使用的抗血管生成剂）。
术语“抗血管生成疗法”指可用于抑制血管发生的疗法，其包括施用至少一种如本文中所限定的抗血管生成剂。在某些实施方案中，抗血管生成疗法包括对受试者施用VEGF拮抗剂。在一个实施方案中，抗血管生成疗法包括施用如本文所限定的VEGF拮抗剂。在一个实施方案中，VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在另一个实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐单抗。在某些实施方案中，抗血管生成疗法包括施用7.5mg/kg贝伐单抗。
如本文中所使用的，术语“免疫抑制剂”指作用于抑制或掩盖本文中所治疗哺乳动物的免疫***的物质。这会包括抑制细胞因子生成、下调或抑制自身抗原表达、或掩盖MHC抗原的物质。此类药剂的例子包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶（见美国专利No.4,665,077）；非类固醇抗炎药(NSAID)；更昔洛韦(ganciclovir)、他克莫司(tacrolimus)、糖皮质激素诸如皮质醇(cortisol)或醛甾酮(aldosterone)、抗炎剂诸如环加氧酶抑制剂、5-脂加氧酶抑制剂、或白三烯受体拮抗剂；嘌呤拮抗剂，诸如硫唑嘌呤(azathioprine)或霉酚酸吗乙酯(mycophenolate mofetil,MMF)；烷化剂，诸如环磷酰胺；溴隐亭(bromocryptine)；达扎唑(danazol)；氨苯砜(dapsone)；戊二醛（如美国专利No.4,120,649中所述，它掩盖MHC抗原）；针对MHC抗原和MHC片段的抗独特型抗体；环孢菌素A；类固醇，诸如皮质类固醇或糖皮质类固醇或糖皮质激素类似物，如***(prednisone)、甲基***龙(methylprednisolone)和***(dexamethasone)；二氢叶酸还原酶抑制剂，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)（口服或皮下）；羟氯喹(hydroxycloroquine)；柳氮磺吡啶(sulfasalazine)；来氟米特(leflunomide)；细胞因子或细胞因子受体抗体，包括抗干扰素-α、-β或-γ抗体、抗肿瘤坏死因子-α抗体（infliximab或adalimumab）、抗TNFα免疫黏附素（依那西普(etanercept)）、抗肿瘤坏死因子-β抗体、抗白介素-2抗体和抗IL-2受体抗体；抗LFA-1抗体，包括抗CD11a和抗CD18抗体；抗L3T4抗体；异源抗淋巴细胞球蛋白；泛T(pan-T)抗体，优选抗CD3或抗CD4/CD4a抗体；含有LFA-3结合域的可溶性肽（1990年7月26日出版的WO 1990/08187）；链激酶；TGF-β；链道酶；来自宿主的RNA或DNA；FK506；RS-61443；脱氧精胍菌素(deoxyspergualin)；雷帕霉素(rapamycin)；T细胞受体（Cohen等，美国专利No.5,114,721）；T细胞受体片段（Offner等,Science 251:430-432(1991);WO  1990/11294;Ianeway,Nature 341:482(1989);及WO1991/01133）；及T细胞受体抗体（EP 340,109），诸如T10B9。
“非类固醇抗炎药”或“NSAID”的例子是乙酰水杨酸、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)，包括其盐和衍生物等。
如本文中所使用的，术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞的功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意图包括放射性同位素（例如211At、131I、125I、90Y、186Re、188Re、153Sm、212Bi、32P和Lu的放射性同位素）、化疗剂、和毒素诸如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体。
如本文中所使用的，“生长抑制剂”指在体外和/或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。如此，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞的百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进（处于与S期不同的位置）的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长***类(vincas)（长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine)）、TAXOLTM、和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、***(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、顺铂(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可见The Molecular Basis of Cancer,Mendelsohn和Israel编,第1章,题目为“Cell cycle regulation,oncogenes,andantineoplastic drugs”,Murakami等(WB Saunders:Philadelphia,1995),尤其是第13页。
“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和CYTOXANTM环磷酰胺(cyclophosphamide)；磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)（尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone)）；δ-9-四氢屈***酚(tetrahydrocannabinol)（屈***酚(dronabinol)，MARINOLTM）；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)（包括合成类似物托泊替康(topotecan)（HYCAMTINTM）、CPT-11（伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSARTM）、乙酰喜树碱、东莨菪亭(scopoletin)和9-氨基喜树碱）；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065（包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物）；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycins)（特别是隐藻素1和隐藻素8）；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin（包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1）；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)（例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1（参见例如Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994)）；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团）、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)（包括ADRIAMYCINTM、吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射剂(DOXILTM)和脱氧多柔比星）、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；培美曲塞(pemetrexed)(ALIMTATM)；吉西他滨(gemicitabine)(GEMZARTM)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤、吉西他滨(GEMZARTM)、替加氟(tegafur)(UFTORALTM)、卡培他滨(capecitabine)(XELODATM)、埃博霉素(epothilone)、和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSKTM多糖复合物（JHS NaturalProducts,Eugene,OR）；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)（尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin)）；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)（ELDISINETM,FILDESINTM）；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)（“Ara-C”）；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)(TAXOLTM)、清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞(ABRAXANETM)和多西他塞(doxetaxel)(TAXOTERETM)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)（VELBANTM）；铂；依托泊苷(etoposide)（VP-16）；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)奥沙利铂(oxaliplatin)；亚叶酸(leucovorin)；长春瑞滨(vinorelbine)（NAVELBINETM）；能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄酸(retinoids)，诸如视黄酸(retinoic acid)；任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物；以及两种或更多种上述物质的组合，诸如CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和***龙联合疗法的缩写）和FOLFOX（奥沙利铂（ELOXATIN）联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写）。
该定义还包括作用为调节、降低、阻断、或抑制可促进癌生长的激素效果的抗激素剂，且常常是***或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。例子包括抗***类和选择性***受体调节剂类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)（包括NOLVADEXTM他莫昔芬）、雷洛昔芬(raloxifene)(EVISTATM)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(FARESTONTM)；抗孕酮类；***受体下调剂类(ERD)；功能为抑制或关闭卵巢的药剂，例如促黄体生成激素释放激素(LHRH)激动剂，诸如醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRONTM和ELIGARDTM)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(triptorelin)；其它抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；及抑制在肾上腺中调节***生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MEGASETM)、依西美坦(exemestane)(AROMASINTM)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、伏罗唑(vorozole)(RIVISORTM)、来曲唑(letrozole)(FEMARATM)和阿那曲唑(anastrozole)(ARIMIDEXTM)。另外，化疗剂的这种定义包括二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)（例如BONEFOSTM或OSTACTM）、依替膦酸钠(etidronate)(DIDROCALTM)、NE-58095、唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)(ZOMETATM)、阿伦膦酸盐(alendronate)(FOSAMAXTM)、帕米膦酸盐(pamidronate)(AREDIATM)、替鲁膦酸盐(tiludronate)(SKELIDTM)或利塞膦酸盐(risedronate)(ACTONELTM)；以及曲沙他滨(troxacitabine)（1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物）；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常(abherant)细胞增殖的信号传导途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如THERATOPETM疫苗和基因疗法疫苗，例如ALLOVECTINTM疫苗、LEUVECTINTM疫苗和VAXIDTM疫苗；拓扑异构酶1抑制剂（例如LURTOTECANTM）；rmRH（例如ABARELIXTM）；二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)（ErbB-2和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂，也称为GW572016）；COX-2抑制剂诸如塞来考昔(celecoxib)（CELEBREXTM；4-(5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基)苯磺酰胺；及任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物。
术语“细胞因子”指由一种细胞群体释放的作为细胞间介导物对另一细胞起作用的蛋白质的通称。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子、和传统的多肽激素。细胞因子中包括生长激素诸如人生长激素、N-甲硫氨酰人生长激素、和牛生长激素、甲状旁腺素、甲状腺素、胰岛素、胰岛素原、松弛素；松弛素原、糖蛋白激素诸如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)、和***(LH)、肝生长因子；成纤维细胞生长因子、促乳素、胎盘催乳激素、肿瘤坏死因子-α和-β、Mullerian抑制物质、小鼠***相关肽、抑制素；激活蛋白；血管内皮生长因子（例如VEGF、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E）；胎盘衍生的生长因子(PlGF)；血小板衍生的生长因子（PDGF，例如PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD）；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子诸如NGF-α；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)诸如TGF-α和TGF-β；***-I和-II；红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素诸如干扰素-α、-β和-γ、集落刺激因子(CSF)诸如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)诸如IL-1,IL-1α,IL-1β,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-11,IL-12,IL-13,IL-14,IL-15,IL-16,IL-17,IL-18,IL-19,IL-20-IL-30；分泌珠蛋白/子宫珠蛋白；制瘤蛋白M(OSM)；肿瘤坏死因子诸如TNF-α或TNF-β，及其它多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文中所使用的，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子的生物学活性等同物。
“病症”指任何会受益于治疗的状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物倾向于所讨论病症的病理状况。本文中要治疗的病症的非限制性例子包括任何形式的肿瘤、良性和恶性肿瘤；血管化的肿瘤；肥大；白血病和淋巴样恶性肿瘤；神经元、神经胶质、星形胶质细胞、下丘脑和其它腺、巨噬细胞、上皮、基质和囊胚腔病症；和炎性、血管生成性和免疫学病症，源自不适当的、异常的、过度的和/或病理性的血管化和/或血管通透性的血管病症。
如本文中所使用的，“治疗/处理”指试图改变所治疗个体或细胞的自然过程的临床干预，并且可以是为了预防或在临床病理学过程期间实施。治疗的期望效果包括预防疾病的发生或复发、缓解症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、减缓疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态、及免除或改善预后。在一些实施方案中，使用本发明的方法和组合物来延迟疾病或病症的形成或减缓疾病或病症的进展。
术语“有效量”或“治疗有效量”指在哺乳动物中有效治疗疾病或病症的药物量。在癌症的情况中，药物的有效量可以减少癌细胞数目；缩小肿瘤大小；抑制（即一定程度地减缓，且通常停止）癌细胞浸润到周围器官中；抑制（即一定程度地减缓，且通常停止）肿瘤转移；一定程度地抑制肿瘤生长；容许治疗不依赖于VEGF的肿瘤、和/或一定程度地减轻与病症有关的一种或多种症状。就药物可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是细胞抑制的和/或细胞毒性的。对于癌症疗法，体内效力可以例如通过评估存活持续时间、疾病进展前时间(TTP)、响应率(RR)、响应的持续时间、和/或生命质量来测量。
“预防有效量”指在必要的剂量和时段有效实现期望的预防结果的量。通常但不必要，因为在疾病的较早阶段前或时在受试者中使用预防剂量，所以预防有效量会小于治疗有效量。
术语“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调节的生理学状况。癌症的例子包括但不限于癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤(lymphoma)、母细胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)、和白血病(leukemia)或淋巴样恶性肿瘤(lymphoid malignancies)。此类癌症的更具体例子包括肾癌(kidney/renal cancer)、乳腺癌(breast cancer)、结肠癌(colon cancer)、直肠癌(rectal cancer)、结肠直肠癌(colorectal cancer)、肺癌(lung cancer)（包括小细胞肺癌(small-cell lung cancer)、非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer)、肺的腺癌和肺的鳞癌）、鳞状细胞癌(squamous cell cancer)（例如上皮鳞状细胞癌(epithelial squamous cell cancer)）、***(cervical cancer)、卵巢癌(ovariancancer)、***癌(prostate cancer)、肝癌(liver cancer)、膀胱癌(bladder cancer)、腹膜癌(cancer of the peritoneum)、肝细胞癌(hepatocellular cancer)、胃癌(gastric or stomach cancer)（包括胃肠癌(gastrointestinal cancer)）、胃肠基质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)、胰腺癌(pancreatic cancer)、头颈癌(headand neck cancer)、成胶质细胞瘤(glioblastoma)、成视网膜细胞瘤(retinoblastoma)、星形细胞瘤(astrocytoma)、泡膜细胞瘤(thecomas)、男性细胞瘤(arrhenoblastomas)、肝瘤(hepatoma)、血液学恶性肿瘤(hematologicmalignancies)（包括非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)和急性血液学恶性肿瘤(acute hematologic malignancies)）、子宫内膜癌或子宫癌、子宫内膜异位症(endometriosis)、纤维肉瘤(fibrosarcomas)、绒毛膜癌(choriocarcinoma)、唾液腺癌(salivary glandcarcinoma)、外阴癌(vulval cancer)、甲状腺癌(thyroid cancer)、食管癌(esophageal carcinomas)、肝癌(hepatic carcinoma)、***癌(anal carcinoma)、***癌(penile carcinoma)、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma)、喉癌(laryngealcarcinomas)、卡波西(Kaposi)氏肉瘤、黑素瘤、皮肤癌、许旺氏细胞瘤(Schwannoma)、少突神经胶质瘤(oligodendroglioma)、成神经细胞瘤(neuroblastomas)、横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)、骨源性肉瘤(osteogenicsarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomyo sarcomas)、尿道癌(urinary tract carcinomas)、甲状腺癌(thyroid carcinomas)、维尔姆斯(Wilm)氏肿瘤、以及B细胞淋巴瘤（包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性(SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞性NHL、贮积病(bulky disease)NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症）、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、毛细胞性白血病、慢性成髓细胞性白血病、和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)、以及与瘢痣病(phakomatoses)、水肿（诸如与脑肿瘤有关的）、和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖。
如本文中所使用的，“肿瘤”指所有新生物细胞生长和增殖，无论是恶性的或者是良性的，及所有癌前的和癌性的细胞和组织。
要治疗的新生物病症的例子包括但不限于那些在本文中在术语“癌症”和“癌性”下描述的。
术语“抗癌疗法”或“癌症疗法”指可用于治疗癌症的疗法。抗癌治疗剂的例子包括但不限于例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、在放射疗法中使用的药剂、抗血管生成剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和用于治疗癌症的其它药剂，诸如抗HER-2抗体、抗CD20抗体、表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂（例如，酪氨酸激酶抑制剂）、HER1/EGFR抑制剂（例如，erlotinib(TARCEVATM)、血小板衍生的生长因子抑制剂（例如，GLEEVECTM（甲磺酸伊马替尼(Imatinib Mesylate)）、COX-2抑制剂（例如，塞来考昔(celecoxib)）、ERBITUXTM（西妥昔单抗(cetuximab),Imclone）、干扰素、细胞因子、结合下列靶物ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA或VEGF受体中的一种或多种结合的拮抗剂（例如中和性抗体）、TRAIL/Apo2、及其它生物活性和有机化学剂等。本发明还包括其组合。
术语“诊断”在本文中用于指鉴定分子或病理状态、疾病或状况，诸如鉴定癌症或者指鉴定可能受益于特定的治疗方案的癌症患者。
术语“预后”在本文中用于指预测来自抗癌疗法的临床益处的可能性。
术语“预测”在本文中用于指患者会有利地响应特定抗癌疗法的可能性。本发明的预测方法在临床上可用于做出治疗决定，为任何特定患者选择最适宜的治疗形式。本发明的预测方法是有价值的工具，用于预测患者是否有可能有利地响应治疗方案，诸如给定的治疗方案，包括例如施用给定的治疗剂或组合、手术干预、类固醇治疗等。
可以使用指示对患者有益处的任何终点来评估患者的响应性，包括但不限于(1)在某种程度上抑制疾病进展，包括减缓和完全阻滞；(2)减小损伤尺寸；(3)抑制（即降低、减缓或完全阻止）疾病细胞渗入临近的周围器官和/或组织；(4)抑制（即降低、减缓或完全阻止）疾病扩散；(5)在某种程度上减轻一种或多种与病症有关的症状；(6)延长治疗后无疾病表现的长度；和/或(8)降低治疗后给定时间点的死亡率。
可以通过评估各种终点来测量临床益处，例如在某种程度上抑制疾病进展，包括减缓和完全阻滞；减少疾病事件和/或症状数目；减小损伤尺寸；抑制（即降低、减缓或完全阻止）疾病细胞渗入临近的周围器官和/或组织；抑制（即降低、减缓或完全阻止）疾病扩散；降低自身免疫应答（其可以但是不必导致疾病损伤的消退或消融）；在某种程度上减轻一种或多种与病症有关的症状；延长治疗后无疾病表现（例如无进展存活）的长度；延长的总体存活；较高的应答率；和/或降低治疗后给定时间点的死亡率。
术语“益处”以最广义使用，指任何期望的效果，并且明确包括如本文中限定的临床益处。
术语“药物配制剂”指处于如下的形式，从而容许活性成分的生物学活性有效，而且不含对于会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制剂。此类配制剂可以是无菌的。
“无菌”配制剂是无菌的或没有所有活的微生物及其孢子。
与一种或多种别的治疗剂“组合”施用包括同时（并发）和以任何次序序贯或连续施用。
术语“同时”在本文中用于指施用两种或更多种治疗剂，其中施用的至少一部分在时间上交叠。因而，同时施用包括在中断一种或多种其它药剂施用后继续施用一种或多种药剂时的剂量给药方案。
“长期”施用指以与短期模式相反的连续模式施用药剂，从而将初始治疗效果（活性）维持较长的一段时间。
“间歇”施用指并非连续不间断进行的处理，而且本质上是循环的。
如本文中所使用的，“载体”包括药学可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。经常，生理学可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学可接受载体的例子包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量（小于约10个残基）多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
“脂质体”指由各种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的，可用于对哺乳动物投递药物（诸如抗VEGF抗体）的小囊泡。脂质体的成分通常排列成双层形式，与生物膜的脂质排列相似。
抗血管生成剂包括但不限于下列药剂：VEGF抑制剂诸如VEGF特异性拮抗剂、EGF抑制剂、EGFR抑制剂、ERBITUXTM（西妥昔单抗(cetuximab)，ImClone Systems,Inc.,Branchburg,N.J.）、VECTIBIXTM（帕尼单抗(panitumumab),Amgen,Thousand Oaks,CA）、TIE2抑制剂、IGF1R抑制剂、COX-II（环加氧酶II）抑制剂、MMP-2（基质金属蛋白酶2）抑制剂、和MMP-9（基质金属蛋白酶9）抑制剂、CP-547,632(Pfizer Inc.,NY，USA)、阿西替尼(Axitinib)(Pfizer Inc.;AG-013736)、ZD-6474(AstraZeneca)、AEE788(Novartis)、AZD-2171)、VEGF Trap(Regeneron/Aventis)、瓦他拉尼(Vatalanib)（又称为PTK-787，ZK-222584:Novartis & Schering AG）、Macugen(pegaptanib octasodium,NX-1838,EYE-001,Pfizer Inc./Gilead/Eyetech),IM862(Cytran Inc.of Kirkland,Wash.,USA)；和Angiozyme，即一种来自Ribozyme(Boulder,Colo.)和Chiron(Emeryville,Calif.)的合成核酶及其组合。其它血管生成抑制剂包括血小板反应蛋白1、血小板反应蛋白2、胶原IV和胶原XVIII。VEGF抑制剂披露于美国专利No.6,534,524和6,235,764，为了所有目的而完整收录这两篇。
VEGF特异性拮抗剂指能够结合VEGF、降低VEGF表达水平、或中和、阻断、抑制、消除、降低、或干扰VEGF生物学活性，包括VEGF对一种或多种VEGF受体的结合和VEGF介导的血管发生和内皮细胞存活或增殖的分子。作为可用于本发明的方法的VEGF特异性拮抗剂包括的是特异性结合VEGF的多肽、抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF，由此隔绝其结合一种或多种受体的受体分子和衍生物、融合蛋白（例如，VEGF-Trap(Regeneron)）、和VEGF121-白树毒素(gelonin)(Peregrine)。VEGF特异性拮抗剂还包括VEGF多肽的拮抗性变体、针对VEGF的反义核碱基寡聚物、针对VEGF的小RNA分子、RNA适体、肽体、和针对VEGF的核酶。
两种表征最好的VEGF受体是VEGFR1（又称为Flt-1）和VEGFR2（对于鼠同系物，又称为KDR和FLK-1）。每种受体对每个VEGF家族成员的特异性有所变化，但是VEGF-A结合Flt-1和KDR两者。全长Flt-1受体包括具有7个Ig域的胞外域、跨膜域、和具有酪氨酸激酶活性的胞内域。胞外域牵涉结合VEGF，而胞内域牵涉信号转导。
可以使用特异性结合VEGF的VEGF受体分子或其片段作为VEGF抑制剂，其结合VEGF蛋白，并隔绝VEGF蛋白，由此阻止其信号传导。在某些实施方案中，VEGF受体分子或其VEGF结合片段是可溶形式，诸如sFlt-1。可溶形式的受体通过结合VEGF，由此阻止其结合靶细胞表面上存在的其天然受体来对VEGF蛋白的生物学活性施加抑制效果。还包括VEGF受体融合蛋白，其例子在下文描述。
嵌合VEGF受体蛋白是具有自至少两种不同蛋白质衍生的氨基酸序列的受体分子，至少一种所述蛋白质是VEGF受体蛋白（例如flt-1或KDR受体），其能够结合VEGF并抑制VEGF的生物学活性。在某些实施方案中，本发明的嵌合VEGF受体蛋白由仅自两种不同VEGF受体分子衍生的氨基酸序列组成；然而，可以将包含来自flt-1和/或KDR受体的胞外配体结合区的1、2、3、4、5、6或所有7个Ig样域的氨基酸序列与来自其它无关蛋白质的氨基酸序列，例如免疫球蛋白序列连接。与Ig样域组合的其它氨基酸序列对于本领域普通技术人员会是容易显而易见的。嵌合VEGF受体蛋白的例子包括但不限于可溶性Flt-1/Fc、KDR/Fc、或Flt-1/KDR/Fc（又称为VEGF Trap）。（见例如PCT申请公开文本No.WO97/44453）。
可溶性VEGF受体蛋白或嵌合VEGF受体蛋白包括没有经由跨膜域固定于细胞表面的VEGF受体蛋白。因此，可溶形式的VEGF受体（包括嵌合受体蛋白），在能够结合并灭活VEGF的同时，不包含跨膜域，并且如此一般不变得与表达该分子的细胞的细胞膜结合。
别的VEGF抑制剂记载于例如WO 99/24440、PCT国际申请PCT/IB99/00797、WO 95/21613、WO 99/61422、美国专利No.6,534,524、美国专利No.5,834,504、WO 98/50356、美国专利No.5,883,113、美国专利No.5,886,020、美国专利No.5,792,783、美国专利No.6,653,308、WO 99/10349、WO 97/32856、WO 97/22596、WO 98/54093、WO 98/02438、WO 99/16755、和WO 98/02437，通过提及而将它们都完整收入本文。
大体上，已经报告了53-74%的NSCLC患者具有肿瘤组织标本中表达的bFGF(Takanami,I.等,Jpn J Clin Oncol,1996.26(5):p.293-7;Volm,M.等,EurJ Cancer,1997.33(4):p.691-3;Shou,Y.等,Br J Cancer，2001.85(11):p.1706-12)，并且bFGF表达与较高的T和N（在TNM分类中）；较高的肿瘤阶段；和差的存活有关(Takanami,I.等,Jpn J Clin Oncol,1996.26(5):p.293-7)。还已经报告了bFGF表达与NSCLC患者中的低分化、血管侵入、和***转移有关(Volm,M.等,Anticancer Res,1999.19(1B):p.651-5;Ito,H.等,Oncol Rep,2002.9(1):p.119-23)。
检查循环bFGF在NSCLC患者中的作用的研究已经显示了可变的结果，即升高的bFGF水平与存活之间的有利关联(Brattstrom,D.等,Anticancer Res,1998.18(2A):p.1123-7)、与存活没有关联(Ueno,K.等,Lung Cancer,2001.31(2-3):p.213-9)和升高的水平与存活之间的负关联(Brattstrom,D.等,LungCancer,2002.37(1):p.57-63;Brattstrom,D.等,Lung Cancer,2004.43(1):p.55-62;Joensuu,H.等,Cancer Res,2002.62(18):p.5210-7)。
还已经提示了循环bFGF与肿瘤逃脱抗VEGF疗法有关，因为备选的促血管生成信号传导途径的上调（诸如bFGF）可能牵涉对抗VEGF疗法的抗性(Jain,R.K.等,Nat Rev Clin Oncol,2009.6(6):p.327-38;Dempke,W.C.和V.Heinemann,Eur J Cancer，2009.45(7):p.1117-28)。
本发明部分基于如下的鉴定，即bFGF的表达水平可用于预测和/或监测包含抗VEGF抗体贝伐单抗的抗血管生成疗法的进展。特别地，本发明部分基于如下的鉴定，即血液中的bFGF蛋白水平可用于预测对抗VEGF抗体疗法的患者响应性。如此，公开的方法和测定法提供了方便的、有效的、且潜在成本有效的手段来获得可用于评估用于治疗癌症患者的合适或有效疗法的数据和信息。例如，可以通过多种体外测定法来检查来自癌症患者的样品以测定样品中的bFGF表达水平是否比参照样品中的bFGF表达水平高。若检出较高的表达水平，则患者会有可能受益于包含抗VEGF抗体的抗癌疗法。在某些实施方案中，若检出较高的bFGF表达水平，则患者会有可能受益于包括施用7.5mg/kg抗VEGF抗体贝伐单抗的抗血管生成疗法。
可以基于本领域中已知的任何合适的标准，包括但不限于mRNA、cDNA、蛋白质、蛋白质片段和/或基因拷贝数来测定生物标志的表达水平/量。
例如，可以通过多种方法来分析样品中的bFGF表达水平，许多所述方法是本领域中已知的并且是熟练技术人员理解的，包括但不限于免疫组织化学和/或Western印迹分析、免疫沉淀、分子结合测定法、ELISA、ELIFA、光激活细胞分选(FACS)等、基于血液的定量测定法（如例如血清ELISA）（以检查例如，蛋白质表达水平）、生物化学酶活性测定法、原位杂交、对mRNA的Northern分析和/或PCR分析，及可以通过基因和/或组织阵列分析实施的极其多种测定法之任一种。用于评估基因和基因产物的状态的典型方案可见例如Ausubel等编,1995,Current Protocols In Molecular Biology,单元2（Northern印迹）、4（Southern印迹）、15（免疫印迹）和18（PCR分析）。也可以使用多重免疫测定法，诸如那些可获自Rules Based Medicine或Meso ScaleDiscovery(MSD)的。
可以通过本领域中公知的，并且适合于感兴趣癌症的特定类型和位置的方法来获得包含bFGF的样品。见定义。例如，可以通过切除术、支气管镜检查术、细针抽吸、支气管刷检、或者自痰、胸膜液或血液获得癌性损伤的样品。可以自癌症或肿瘤组织或者自其它身体样品诸如尿液、痰、血清或血浆检测基因或基因产物，例如bFGF基因、bFGF蛋白或bFGF mRNA。可以将上文讨论的用于检测癌性样品中的靶基因或基因产物的相同技术应用于其它身体样品。癌细胞可以自癌症损伤脱落下来，并出现在此类身体样品中。通过筛选此类身体样品，可以实现对于这些癌症的简单早期诊断。另外，可以通过对此类身体样品测试靶基因或基因产物来更容易地监测治疗的进展。
对组织制备物富集癌细胞的手段是本领域已知的。例如，可以从石蜡或低温保存的切片中分离组织。癌细胞也可以通过流式细胞术或激光捕捉显微解剖而与正常细胞分开。这些以及其它用于分开癌性与正常细胞的技术是本领域公知的。如果癌组织被正常细胞高度污染，那么检测签名基因或蛋白质表达序型可能更为困难，虽然最小化污染和/或假阳/阴性结果的技术是已知的，其中一些在下文有描述。例如，也可以对样品评估生物标志的存在，所述生物标志已知与感兴趣的癌细胞有关而与相应的正常细胞无关，反之亦然。
在某些实施方案中，使用免疫组织化学(“IHC”)和染色方案来检查样品中的蛋白质表达。组织切片的免疫组织化学染色已经显示为评估或检测样品中蛋白质存在的可靠方法。免疫组织化学技术利用抗体来探查和显现原位细胞抗原，一般通过显色或荧光方法。
可以通过常规方法来固定（即保存）组织样品（参见例如“Manual ofHistological Staining Method of the Armed Forces Institute of Pathology，”第3版(1960)Lee G.Luna,HT(ASCP)编,The Blakston Division McGraw-HillBook Company,New York;The Armed Forces Institute of Pathology AdvancedLaboratory Methods in Histology and Pathology(1994)Ulreka V.Mikel编,Armed Forces Institute of Pathology,American Registry of Pathology,Washington,D.C.）。本领域技术人员会领会，固定剂的选择由样品用于组织学染色或其它分析的目的来决定。本领域技术人员还会领会，固定长度取决于组织样品的大小和所使用的固定剂。举例而言，可以使用中性缓冲的***、Bouin氏液或低聚甲醛来固定样品。
一般而言，将样品首先固定，然后经由酒精递增系列脱水，用石蜡或其它切片介质渗透和包埋使得该组织样品可以切片。或者，可以将组织切片并将所得切片固定。举例而言，可以通过常规方法学将组织样品包埋和加工（参见例如“Manual of Histological Staining Method of the Armed Forces Institute ofPathology”,见上文）。可以使用的石蜡的例子包括但不限于Paraplast、Broloid、和Tissuemay。一旦将组织样品包埋，就可以用切片机等等将样品切片（参见例如“Manual of Histological Staining Method of the Armed ForcesInstitute of Pathology”,见上文）。作为此规程的例子，切片的厚度范围可以是约3微米至约5微米。一旦切片，就可以通过数种标准方法将切片附着至载玻片。载玻片粘合剂的例子包括但不限于硅烷、明胶、聚L-赖氨酸等等。举例而言，可以将石蜡包埋的切片附着于带正电荷的载玻片和/或聚L-赖氨酸包被的载玻片。
若使用石蜡作为包埋材料，则一般将组织切片脱石蜡和对水复水。可以通过数种常规的标准方法学将组织切片脱石蜡。例如，可以使用二甲苯和酒精逐渐递减系列（参见例如“Manual of Histological Staining Method of theArmed Forces Institute of Pathology”,见上文）。或者，可以使用商品化的脱石蜡用非有机试剂，诸如Hemo-De7(CMS,Houston,Texas)。
在某些实施方案中，在样品制备后，可以使用IHC来分析组织切片。可以与别的技术诸如形态学染色和/或荧光原位杂交组合实施IHC。两种IHC通用方法是可用的；直接和间接测定法。依照第一种测定法，直接测定抗体对靶抗原的结合。此直接测定法使用经标记的试剂，诸如荧光标签或酶标记的一抗，其可以在没有进一步抗体相互作用的情况中显现。在典型的直接测定法中，未缀合的一抗结合抗原，然后经标记的二抗结合一抗。在二抗与酶标记物缀合的情况中，添加生色或荧光底物以提供抗原显现。因为数个二抗可以与一抗上的不同表位起反应，所以发生了信号放大。
通常会用可检测模块来标记用于免疫组织化学的一抗和/或二抗。许多标记物是可用的，它们一般可以分成以下几类：
(a)放射性同位素，诸如35S、14C、125I、3H和131I。例如，可以使用CurrentProtocols in Immunology,第1卷和第2卷,Coligen等编Wiley-Interscience,New York,New York,Pubs.(1991)中描述的技术用放射性同位素标记抗体，并可以使用闪烁计数来测量放射性。
(b)胶体金颗粒。
(c)荧光标记物，包括但不限于稀士螯合物（铕螯合物）、德州红、若丹明、荧光素、丹酰、丽丝胺、伞形酮、藻红蛋白、藻蓝蛋白、或商品化荧光团诸如SPECTRUM ORANGE7和SPECTRUM GREEN7和/或上述任一种或多种的衍生物。例如，可以使用Current Protocols in Immunology,见上文中披露的技术使荧光标记物与抗体偶联。可以使用荧光计对荧光进行定量
(d)可利用各种酶-底物标记物且美国专利No.4,275,149提供了有关这些中的一些的综述。酶一般催化可以使用多种技术测量的显色底物的化学改变。例如，酶可以催化可通过分光光度法测量的底物的颜色改变。或者，酶可以改变底物的荧光或化学发光。上文描述了用于量化荧光改变的技术。化学发光底物通过化学反应变成电子激发态，然后可以发射可测量（例如使用化学发光计）的光或给荧光受体提供能量。酶标记物的例子包括萤光素酶（例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；美国专利No.4,737,456）、萤光素、2,3-二氢酞嗪二酮类、苹果酸脱氢酶、尿素酶、过氧化物酶诸如辣根过氧化物酶(HRPO)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶（例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）、杂环氧化酶（诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶）、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等。用于使酶与抗体缀合的技术描述于O’Sullivan等,Methods for the Preparation ofEnzyme-Antibody Conjugates for use in Enzyme Immunoassay,于Methods inEnzym.(J.Langone和H.Van Vunakis编),Academic press,New York,73:147-166(1981)。
酶-底物组合的例子包括例如：
(i)辣根过氧化物酶(HRPO)与作为底物的过氧化氢，其中过氧化氢氧化染料前体（例如邻苯二胺(OPD)或3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐(TMB)）；
(ii)碱性磷酸酶(AP)与作为显色底物的对硝基苯基磷酸酯；和
(iii)β-D-半乳糖苷酶(β-D-Gal)与显色底物（例如对硝基苯基-β-D-半乳糖苷)或荧光底物（例如，4-甲基伞形基-β-D-半乳糖苷）。
许多其它酶-底物组合是本领域技术人员可用的。关于这些的通用综述，见美国专利No.4,275,149和4,318,980。有时，将标记物与抗体间接偶联。熟练技术人员会知道用于实现这点的各种技术。例如，可以将抗体与生物素偶联，并且可以将上文所提及的四大类标记物之任一与亲合素偶联，或者反之亦然。生物素选择性结合亲合素，并且如此，标记物可以以此间接的方式与抗体缀合。或者，为了实现标记物与抗体的间接缀合，将抗体与小的半抗原缀合，并且将上文提及的不同类型的标记物之一与抗半抗原抗体缀合。如此，可以实现标记物与抗体的间接缀合。
在上文讨论的样品制备规程外，可能想要在IHC之前、期间或之后对组织切片进行进一步的处理。例如，可以实施表位修复法，诸如在柠檬酸盐缓冲液中对组织样品进行加热(参见例如Leong等,Appl.Immunohistochem.4(3):201(1996))。
在任选的封闭步骤后，将组织切片在合适条件下暴露于一抗足够时间，使得一抗结合至组织样品中的靶蛋白抗原。实现这一目的的适宜条件可以通过常规实验来确定。抗体与样品的结合程度通过使用上文讨论的任一种可检测标记物来测定。在某些实施方案中，标记物是酶标记物（例如HRPO），其催化显色底物诸如3,3’-二氨基联苯胺色原体的化学变化。在一个实施方案中，将酶标记物偶联至特异性结合一抗的抗体（例如一抗是家兔多克隆抗体，二抗是山羊抗家兔抗体）。
可以将如此制备的标本放置好并盖上盖玻片。然后进行载玻片评估，例如利用显微镜，并且可以采用本领域常规使用的染色强度标准。染色强度标准可以如下评估：
  染色样式   得分
  在细胞中没有观察到染色。   0
  在超过10%的细胞中检测到微弱/刚刚可察觉的染色。   1+
  在超过10%的细胞中观察到弱至中等的染色。   2+
  在超过10%的细胞中观察到中等至强的染色。   3+
在备选方法中，可以在足以使抗体-生物标志复合物形成的条件下使样品接触对所述生物标志，例如bFGF特异性的抗体，然后检测所述复合物。可以以多种方式来检测生物标志的存在，诸如通过Western印迹和ELISA规程，其用于测定极其广泛的组织和样品，包括血浆或血清。一大批使用此类测定形式的免疫测定技术是可用的，见例如美国专利No.4,016,043,4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争性类型的单位点和双位点或“三明治/夹心式”测定法，以及传统的竞争性结合测定法。这些测定法也包括经标记抗体对靶生物标志的直接结合。
三明治式测定法是最有用且常用的测定法之一。存在着三明治式测定技术的许多变型，并且本发明意图涵盖所有变型。简言之，在一种典型的正向测定法(forward assay)中，将未标记的抗体固定化在固体基片上，并使要测试的样品接触所结合的分子。温育足以容许抗体-抗原复合物形成的合适长度的一段时间后，然后添加对抗原特异性的、用能够生成可检测信号的报告分子标记的二抗，并温育足以使另一复合物即抗体-抗原-标记抗体形成的一段时间。洗去任何未反应的物质，并通过由报告分子生成的信号的观察结果来测定抗原的存在。结果可以是定性的，即通过可见信号的简单观察，或者可以量化，即通过与含有已知量生物标志的对照样品比较。
正向测定法上的变化包括同时测定法(simultaneous assay)，其中同时将样品和经标记的抗体两者添加至结合的抗体。这些技术对于本领域技术人员是公知的，包括会容易显而易见的任何微小变化。在一种典型的正向三明治式测定法中，将具有对生物标志特异性的一抗或是共价地或是被动地结合至固体表面。典型地，所述固体表面是玻璃或聚合物，最常用的聚合物是纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固体支持物可以为管、珠、微量板盘的形式，或者适于进行免疫测定法的任何其它表面。结合过程是本领域公知的，并且一般包括交联、共价结合或物理吸附，清洗聚合物-抗体复合体以为测试样品做好准备。然后将要测试的样品的等分试样添加至固相复合体，并在合适的条件（例如从室温至40°C，诸如包括端点在内的25°C和32°C之间）下培养足够的一段时间（例如2-40分钟或者过夜，如果更方便的话），所述条件和时间适于或足以容许存在于抗体中的任何亚基的结合。温育期后，清洗抗体亚基固相并干燥，并与对生物标志一部分特异性的二抗一起温育。所述二抗与用于指示二抗对分子标志结合的报告分子连接。
一种备选方法牵涉将样品中的靶生物标志固定化，然后将固定化的靶物暴露于可以用或未用报告分子标记的特定抗体。根据靶物的量和报告分子信号的强度，结合的靶物可以是通过用抗体进行的直接标记而可检测的。或者，将经标记的、对一抗特异性的二抗暴露于靶物-一抗复合物以形成靶物-一抗-二抗三元复合物。该复合物通过报告分子发射的信号来检测。如本说明书中使用的，“报告分子”指通过其化学本质提供分析上可鉴定的信号从而容许检测抗原结合的抗体的分子。此类测定法中最常用的报告分子是酶、荧光团或含放射性核素的分子（即放射性同位素）和化学发光分子。
在酶免疫测定法的情况中，将酶与二抗缀合，一般藉戊二醛或高碘酸盐进行。然而，如会容易认可的，存在着熟练技术人员容易获得的极其多种不同缀合技术。常用的酶包括辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶等等。与特定酶一起使用的底物一般选择成在被相应的酶水解后生成可检测的颜色变化。合适的酶的例子包括碱性磷酸酶和过氧化物酶。也有可能采用发荧光底物，其生成荧光产物而非上文所述显色底物。在所有情况中，将经酶标记的抗体添加至一抗-分子标志物复合物，容许结合，然后洗去过量的试剂。然后，将含有合适底物的溶液添加至抗体-抗原-抗体复合物。底物会与二抗所连接的酶起反应，给出定性可视信号，其可以进一步量化，通常通过分光光度法，以给出样品中存在的生物标志的量的指示。或者，可以将荧光化合物（诸如荧光素和罗丹明）化学偶联至抗体而不改变其结合能力。在被特定波长的光照射而激活后，荧光团标记的抗体吸收光能，在分子中诱导激发状态，接着以光学显微镜在视觉上可检测的特征性颜色发光。如在EIA中，容许荧光标记的抗体结合至一抗-分子标志物复合物。洗去未结合的试剂后，然后将剩余的三元复合物暴露于合适波长的光，所观察到的荧光指示存在感兴趣的分子标志物。免疫荧光和EIA技术都是本领域已完善建立的。然而，也可以采用其它报告分子，诸如放射性同位素、化学发光或生物发光分子。
涵盖的是，可以采用上文所描述的技术来检测bFGF的蛋白质表达水平。
本发明的方法进一步包括检查样品中的bFGF mRNA表达水平的方案。用于评估细胞中mRNA的方法是众所周知的，并且包括例如使用互补DNA探针的杂交测定法（诸如使用对一种或多种基因特异性的经标记的核糖核酸探针(riboprobe)的原位杂交、Northern印迹和相关技术）和各种核酸扩增测定法（诸如使用对一种或多种基因特异性的互补引物的RT-PCR，及其它扩增型检测方法，诸如例如分支DNA、SISBA、TMA等等）。
在某些实施方案中，可以使用Northern、点印迹或PCR分析对来自哺乳动物的组织或细胞样品便利地测定mRNA。例如，RT-PCR测定法（诸如定量PCR测定法）是本领域众所周知的。在本发明的一个例示性实施方案中，用于检测生物学样品中的靶mRNA的方法包括使用至少一种引物通过逆转录自样品生成cDNA；使用靶多核苷酸作为有义和反义引物扩增如此生成的cDNA以扩增其中的靶cDNA；并使用多核苷酸探针来检测所扩增靶cDNA的存在。另外，此类方法可以包括一个或多个如下步骤，其容许测定生物学样品中靶mRNA的水平（例如通过同时检查“持家”基因诸如肌动蛋白家族成员的比较性对照mRNA序列的水平）。任选地，可以测定所扩增靶cDNA的序列。
本发明的任选方法包括通过微阵列技术检查或检测组织或细胞样品中mRNA（诸如靶mRNA）的方案。使用核酸微阵列，将来自测试和对照组织样品的测试和对照mRNA样品逆转录和标记以生成cDNA探针。然后将探针杂交至在固体支持物上固定化的核酸阵列。所述阵列配置成阵列的每个成员的序列和位置是已知的。经标记探针与特定阵列成员的杂交指示衍生该探针的样品表达该基因。疾病组织的差异基因表达分析可提供有价值的信息。微阵列技术利用核酸杂交技术和计算技术在单一实验中评估数以千计基因的mRNA表达序型（参见例如2001年10月11日公布的WO 01/75166；U.S.5,700,637;美国专利5,445,934;美国专利5,807,522;Lockart,NatureBiotechnology,14:1675-1680(1996);Cheung,V.G.等,Nature Genetics21(Suppl):15-19(1999)，关于阵列制作的讨论）。DNA微阵列是含有基因片段的微型阵列，所述基因片段或是在玻璃或其它片基上直接合成或是点到玻璃或其它片基上。单一阵列中通常呈现数以千计的基因。一个典型的微阵列实验牵涉以下步骤：1)自分离自样品的RNA制备荧光标记的靶物；2)将经标记的靶物杂交至微阵列；3)清洗，染色，和扫描阵列；4)分析扫描图像；并5)生成基因表达序型。当前使用两种主要类型的DNA微阵列：含有自cDNA制备的PCR产物的基因表达阵列和寡核苷酸（通常25-70聚物）阵列。在形成阵列中，寡核苷酸可以是预制并点到表面上的，或者是直接在表面上合成的（原位）。
Affymetrix
Figure BDA00001639779900471
***是包含通过在玻璃表面上直接合成寡核苷酸而制作的阵列的商品化微阵列***。探针/基因阵列：寡核苷酸（通常25聚物）通过组合基于半导体的光刻和固相化学合成技术直接合成到玻璃晶片上。每个阵列包含多至400,000种不同寡聚物，并且每种寡聚物以数以百万计拷贝存在。因为寡核苷酸探针是在阵列上已知位置合成的，所以杂交样式和信号强度可以通过Affymetrix Microarray Suite软件解读成基因身份和相对表达水平。每种基因通过一系列不同寡核苷酸探针呈现在阵列上。每个探针对由一种完全匹配寡核苷酸和一种错配寡核苷酸组成。完全匹配探针具有与特定基因精确互补的序列，并且如此测量该基因的表达。错配探针因中央碱基位置的单一碱基替代而不同于完全匹配探针，从而扰乱了靶基因转录物的结合。这有助于测定对完全匹配寡聚物测得的信号做出贡献的背景和非特异性杂交。Microarray Suite软件将错配探针的杂交强度从完全匹配探针的杂交强度中减去，以确定每个探针集的绝对或特异强度。探针的选择基于Genbank和其它核苷酸库的当前信息。认为所述序列识别基因3’末端的独特区域。使用基因芯片杂交炉（“电转烤炉”）来同时实施多至64个阵列的杂交。射流站实施探针阵列的清洗和染色。它是完全自动化的，并且含有四个模块，每个模块持有一个探针阵列。每个模块经由Microarray Suite软件使用预编程射流方案独立控制。扫描仪是共焦激光荧光扫描仪，其测量由结合至探针阵列的经标记cRNA发射的荧光强度。安装有Microarray Suite软件的计算机工作站控制射流站和扫描仪。Microarray Suite软件可以控制多至八个射流站，使用探针阵列的预编程的杂交、清洗、和染色方案。该软件还获取杂交强度数据并使用适宜的算法将其转变成每种基因的有/无呼叫(presence/absence call)。最后，该软件通过比较分析来检测各实验间基因表达的变化，并将输出格式化为.txt文件，其可以与其它软件程序一起用于进一步的数据分析。
组织或细胞样品中生物标志的表达也可以通过基于功能或活性的测定法来检查。例如，若生物标志是酶，则可以实施本领域已知测定法来测定或检测组织或细胞样品中给定酶活性的存在。
本发明的试剂盒具有许多实施方案。在某些实施方案中，试剂盒包含容器、所述容器上的标签、和所述容器内装有的组合物；其中所述组合物包含结合bFGF的一种或多种一抗，所述容器上的标签指出该组合物可用于评估至少一种类型的哺乳动物细胞中bFGF蛋白的存在，及使用抗体来评估至少一种类型的哺乳动物细胞中bFGF蛋白存在的用法说明书。试剂盒可以进一步包含用于制备组织样品并将抗体和探针应用于组织样品的相同切片的一套用法说明书和材料。试剂盒可以包含一抗和二抗两者，其中二抗与标记物，例如酶标记物缀合。
另一个实施方案是包含容器、所述容器上的标签、和所述容器内装有的组合物的试剂盒；其中所述组合物包含在严格条件下与bFGF多核苷酸序列杂交的一种或多种多核苷酸，所述容器上的标签指出该组合物可用于评估至少一种类型的哺乳动物细胞中bFGF的存在和/或表达水平，及使用多核苷酸来评估至少一种类型的哺乳动物细胞中bFGF RNA或DNA存在和/或表达水平的用法说明书。
试剂盒中的其它任选成分包括一种或多种缓冲剂（例如封闭缓冲液、清洗缓冲液、底物缓冲液等）、其它试剂，诸如可以被酶标记物化学改变的底物（例如色原）、表位修复溶液、对照样品（阳性和/或阴性对照）、对照载玻片等。
本发明涵盖一种用于治疗患者中的血管生成性病症（例如以异常的血管发生或异常的血管泄漏为特征的病症）的方法，包括下列步骤：测定自患者获得的样品与参照样品相比具有更高的bFGF表达水平，并对患者施用有效量的抗血管生成剂，由此***、癌症或细胞增殖性病症。在某些实施方案中，抗血管生成疗法包括施用VEGF拮抗剂。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在某些实施方案中，抗VEGF抗体是贝伐单抗。在某些实施方案中，所述方法包括对具有较高bFGF表达水平的患者施用5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg贝伐单抗。
要在本文中治疗的血管生成性病症的例子包括但不限于癌症、尤其是血管化的实体瘤和转移性肿瘤（包括结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、肾癌和成胶质细胞瘤）、由眼新血管形成引起的疾病，尤其是糖尿病性盲、视网膜病变、原发性糖尿病视网膜病或年龄相关黄斑变性、脉络膜新血管形成(CNV)、糖尿病性黄斑水肿,病理性近视、冯希-林二氏(von Hippel-Lindau)病、眼的组织胞浆菌病、视网膜中央静脉阻塞(CRVO)、角膜新血管形成、视网膜新血管形成和发红；银屑病、银屑病关节炎、成血管细胞瘤诸如血管瘤、炎性肾病，诸如肾小球肾炎，尤其是膜增生性肾小球肾炎(mesangioproliferative glomerulonephritis),溶血性尿毒综合征(haemolyticuremic syndrome)、糖尿病肾病或高血压肾硬化；各种炎性疾病，诸如关节炎，尤其是类风湿性关节炎、炎性肠病、银屑病、结节病、动脉硬化和移植后发生的疾病、子宫内膜异位症或慢性哮喘和其它状况；疾病状态，包括例如与肿瘤（包括例如脑瘤）有关的水肿；与恶性肿瘤有关的腹水；梅格斯氏(Meigs)综合征；肺部炎症；肾病综合征；心包积液；胸腔积液；与心血管疾病有关的通透性，诸如心肌梗死和中风后的状况等。
要在本文中治疗的癌症的例子包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤、和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、肺癌（包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、和肺鳞癌）、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌（包括胃肠癌）、胰腺癌、成胶质细胞瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌，及B细胞淋巴瘤（包括低级/滤泡非何杰金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级/滤泡NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞NHL；高级成淋巴细胞NHL；高级小无核裂细胞NHL；贮积病(bulky disease)NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；和瓦尔登斯特伦(Waldenstrom)氏巨球蛋白血症）；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)、以及与瘢痣病(phakomatoses)、水肿（诸如与脑瘤有关的）和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖。更具体地，适合于通过本发明的抗体治疗的癌症包括乳腺癌、结肠直肠癌、肾癌、非小细胞肺癌、非何杰金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、***癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西(Kaposi)肉瘤、类癌癌瘤、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、间皮瘤、和多发性骨髓瘤。
涵盖的是，在用于治疗各种疾病诸如肿瘤时，VEGF拮抗剂可以与一种或多种其它适合于相同或相似疾病的治疗剂组合。例如，在用于治疗癌症时，VEGF拮抗剂可以与常规的抗癌疗法，诸如手术、放射疗法、化学疗法或其组合组合使用。
在某些实施方案中，VEGF拮抗剂（例如，抗VEGF抗体）和一种或多种其它治疗剂可以以如下的量同时或序贯施用如下的时间，所述量和时间足以***。在某些实施方案中，可以在其它抗癌剂后施用VEGF拮抗剂。在某些实施方案中，与癌症疗法，例如化学疗法同时施用VEGF拮抗剂。或者/另外，拮抗剂疗法与另一种癌症疗法交替，其可以以任何次序实施。
在某些方面，可用于与VEGF拮抗剂的组合癌症疗法的其它治疗剂包括其它抗血管生成剂。已经鉴定出许多抗血管生成剂，并且是本领域中已知的，包括那些由Carmeliet and Jain(2000)Nature 407(6801):249-57所列的及那些在本文中在定义和血管生成抑制剂部分下描述的。
在某些实施方案中，可以与bFGF拮抗剂组合使用VEGF拮抗剂。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在某些实施方案中，bFGF拮抗剂是抗bFGF抗体。在某些实施方案中，可以与bFGF拮抗剂组合使用抗VEGF抗体贝伐单抗。在某些实施方案中，可以与抗bFGF抗体组合使用贝伐单抗。在某些实施方案中，可以以足以***的量和时间同时或序贯施用抗VEGF抗体和抗bFGF抗体。
依照已知的方法，诸如静脉内施用，以推注或通过在一段时间里的连续输注，通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入路径、和/或皮下施用来对人施用本发明的药剂（例如VEGF拮抗剂、bFGF拮抗剂、化疗剂、或抗癌剂）。
在本发明的方法涵盖对患者施用抗体的情况中，根据疾病的类型和严重性，约1μg/kg至50mg/kg（例如0.1-20mg/kg）抗体是对患者施用的初始候选剂量，无论例如通过一次或多次分开的施用，或是通过连续输注来进行。典型的每日剂量范围可以为约1μg/kg至约100mg/kg或更多，这取决于上文所提及的因素。对于几天里或更长的重复施用，根据状况，维持治疗，直至发生对疾病症状的期望抑制。然而，其它剂量方案可以是有用的。在某些实施方案中，以范围为约5mg/kg至约15mg/kg的剂量每两至三周施用抗体。在一方面，以约5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg或15mg/kg的剂量每两至三周施用抗体。此类给药方案可以与化学疗法方案组合使用。在一些方面，化学疗法方案牵涉传统的高剂量间歇施用。在某些实施方案中，在没有安排的中断的情况中使用较小的且更频繁的剂量来施用化疗剂（“节拍式化学疗法(metronomicchemotherapy)”）。容易通过常规的技术和测定法来监测本发明疗法的进展。
与VEGF拮抗剂组合施用的治疗剂，例如bFGF拮抗剂的有效量会凭内科医生的判断。适合于VEGF拮抗剂的剂量是那些目前使用的，并且可以由于VEGF拮抗剂和本发明的不同拮抗剂，例如bFGF拮抗剂的组合作用（协同）而降低。
会以与优良医学实践一致的方式配制、剂量给药和施用抗体组合物。在此上下文中考虑的因素包括所治疗的具体病症、所治疗的具体哺乳动物、患者个体的临床状况、病症的起因、投递药剂的部位、施药的方法、施药的日程安排、和医学从业人员知道的其它因素。要施用的抗体的“治疗有效量”会由此类考虑因素决定，并且是预防、改善、或治疗疾病或病症必需的最小量。不是必需而是任选将抗体与目前用于预防或治疗所讨论病症的一种或多种药剂一起配制。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量、病症或治疗的类型、和上文讨论的其它因素。这些通常是以与上文所用相同剂量和施用路径使用，或是迄今所用剂量的大约1-99%。一般而言，改善或治疗疾病或病症牵涉减轻与疾病或病症有关的一种或多种症状或医学问题。在癌症的情况中，治疗有效量的药物可以实现下列一项或组合：减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制（即一定程度上降低和/或停止）癌细胞浸润到周围器官中；抑制肿瘤转移；一定程度地抑制肿瘤生长；和/或一定程度地减轻与癌症有关的一种或多种症状。就药物可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是细胞抑制的和/或细胞毒性的。在一些实施方案中，可以使用本发明的组合物来预防受试者或哺乳动物中疾病或病症的发作或复发。
在某些方面，本发明提供了鉴定可以受益于抗血管生成疗法的癌症患者的方法，包括测定自患者获得的样品中的bFGF表达水平，然后通过对患者施用有效量的VEGF拮抗剂和一种或多种化疗剂来治疗患者。可以在本发明的组合治疗方法中使用多种化疗剂。本文中在提供本说明书中使用的术语的定义的部分中提供了涵盖的化疗剂的例示性的且非限制性的列表。
在某些实施方案中，本发明的方法包括对患者施用VEGF拮抗剂和有效量的至少一种化疗剂。在某些实施方案中，化疗剂是顺铂。在某些实施方案中，化疗剂是吉西他滨。在某些实施方案中，化疗剂是卡铂。在某些实施方案中，化疗剂是帕利他塞。在某些实施方案中，对患者施用有效量的VEGF拮抗剂、顺铂和吉西他滨。在某些实施方案中，对患者施用有效量的VEGF拮抗剂、卡铂和帕利他塞。
如本领域普通技术人员会理解的，化疗剂的合适剂量一般会在临床疗法中已经采用的那些剂量左右，其中单独地或与其它化疗剂组合施用化疗剂。剂量的变化可能会随所治疗的状况而发生。施行治疗的内科医生会能够确定对于个别受试者合适的剂量。
虽然在上述描述中，本发明参照某些实施方案例示，但是它不是如此限制的。实际上，在那些在本文中所显示并描述的方案外本发明的各种修饰从前述描述看对于本领域技术人员会是显而易见的，并且落入所附权利要求书的范围内。在此为了所有目的通过提及而明确地完整收录遍及说明书引用的所有参考文献及其中引用的参考文献。
实施例
实施例1：AVAiL试验方案
在2项III期试验E4599和AVAiL中对基于铂的化学疗法添加贝伐单抗改善未治疗的晚期NSCLC患者中的后果。在研究E4599中，研究的目的是测定几种生物标志的预后和预测价值。对几种生物标志的此分析显示了胞内粘着分子-1(ICAM-1)水平可以预测对疗法的响应并预后存活，而具有较高的基线血管内皮生长因子(VEGF)水平的患者可以具有较高的对贝伐单抗的响应率。在AVAiL中，实施相似的生物标志分析。“
AVAiL（“肺中的AVASTINTM”，BO177704）研究是一项随机化的、有对照的、双盲的III期研究，其包括超过1,000名具有组织学与鳞状细胞不同的先前未治疗的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者（图1）。研究的主要目的是证明两个含有AVASTINTM的治疗臂对对照方案在患者无进展存活(PFS)方面的优越性。研究的次要终点包括总体存活(OS)、响应率和响应的持续时间、生命质量和两种剂量的AVASTINTM对护理标准的安全性比较。研究AVASTINTM的两种剂量（7.5mg/kg和15mg/kg）。AVAiL研究确认就NSCLC(E4599)试验中已经找到的显著升高的PFS（比那些仅接受化学疗法的对象高20至30%的PFS率）而言的临床益处(Reck M等,J Clin Oncol 2009;27(8):1227-1234;SandlerA.B.等,N Engl.J.Med.2006;355:2542-2550)。在7.5和15mg/kg剂量的AVASTINTM都观察到相似的治疗效果。
试验方案得到每个地方的机构审查委员会(institutional review board)批准，并且依照赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)、目前的美国食品和药品管理局优良临床实践(Good Clinical Practices)、和地方伦理和法律要求进行。在完成对研究的募集后做出对随机化至AVAiL试验的所有患者实施回顾生物标志分析的决定。
取得患者组的完整人口统计概况，并取得记录的每名患者的全部医学史。所有患者经历体格检查，包括重量、高度、生命体征和心肺检查、ECOG运行状态(performance status)、12-导联ECG。评估每名患者的肿瘤状态，如先前所描述的(Reck M.等,J.Clin.Oncol.2009;27(9):1227-1234)。简言之，在试验治疗期间每三个周期（约每9周）评估肿瘤状态。若患者出于除进行性疾病以外的原因从试验治疗退出，则每两个月重复随访肿瘤评估，直至疾病进展。依照实体瘤响应评估标准(Therasse P.等,J.Clin.Oncol.2009;27(9):1227-1234)由调查人员评估肿瘤响应。一个独立的数据和安全性监测委员会负责未掺合的安全性数据的正在进行中的审阅。使用国家癌症研究所常见不利事件毒性标准(National Cancer Institute Common Toxicity Criteria forAdverse Events)（第3.0版）来将不利事件(AE)分级，并将其依照管理活动医学词典(medical dictionary for regulatory activities)编码。还获得实验室数据，并向数据和安全性监测委员会提供。
下文表1中显示了接受低剂量贝伐单抗(7.5mg/kg)的患者的生物标志人群基线特征。表1中显示的生物标志分析中包括的患者的基线人口统计特征反映作为整体的研究人群。
表1
Figure BDA00001639779900531
Figure BDA00001639779900541
Figure BDA00001639779900551
实施例2：样品收集和分析
在施用任何药物前自IIIB或IV期患者或复发性非鳞状NSCLC患者收集血浆样品。自患者获得所有样品，患者此后每3周加上低剂量贝伐单抗(7.5mg/kg)、高剂量贝伐单抗(15mg/kg)、或安慰剂用顺铂80mg/m2和吉西他滨1,250mg/m2处理多至6个周期，直至疾病进展。
将总共3mL血液吸入柠檬酸钠Vaccutainer管中。通过将管颠倒10至15次来将它们立即混合，并以约3000g在4°C冷冻离心机中离心。将血浆等分入2个塑料管形瓶中。将样品于-70°C以竖立位置贮存。在一些情况中，将样品于-20°C贮存多至一个月，然后转移至-70°C。
将所有样品融化，并以40μl等分试样在72个批次中分配入384孔REMP微管板中。将管用铝隔膜密封，并在为了维持-70°C温度而设置的冰箱中贮存，直至分析。总共366份样品可用于分析bFGF浓度。
用于测量bFGF的三明治式免疫测定法购自R&D Systems (Minneapolis,MN)。依照制造商的推荐使用试剂盒。简言之，用校准稀释剂以64pg/mL的储备溶液制备基本的标准品。校准稀释剂中的标准稀释系列包括32、16、8、4、2、1和0pg/mL bFGF。
将测定缓冲液中预稀释的标准品、对照或样品添加至经如测定试剂盒中提供的针对bFGF的小鼠单克隆抗体包被的聚苯乙烯微板的每孔中。于室温3小时温育后，将板清洗，并添加经缀合的检测抗体，并再温育2小时。再次清洗后，将50μl底物溶液在每孔中添加，并于室温温育45分钟。此后，添加放大溶液(amplifier solution)（50μl/孔），容许颜色显现45分钟，并通过2N硫酸（50μl/孔）来停止反应。在30分钟内，使用微板分光光度计(Versamax,Molecular Devices,Sunnyvale,CA)以490nm的波长读板。针对650nm的吸光度校正490nm的吸光度值。数据简化基于4参数逻辑斯谛(logistic)曲线拟合，其使用仪器软件包进行。以pg/ml测量bFGF蛋白水平，由于该测定法的功能限度其范围为2-64pg/ml。
在bFGF蛋白水平在检测范围外部的情况中，结果以BLQ（量化限度下）或ALQ（量化上限上）报告。因为样品体积对于bFGF测量是有限的，所以仅实施一次测量。若样品体积对于测量，甚至对于单一重复测量是不足的，则报告QNS（量不足）。若单一测量是有可能的，则报告来自单一测量的结果。
基于每块测试板上包含的三个运行中的对照样品，样品分析期间的bFGF测定法的运行遍及整个研究的进行是令人满意的。在下文表2中汇总了产生有效结果、在量化范围之下或之上的结果，或无有效结果的样品数目。
表2
Figure BDA00001639779900561
实施例3：对bFGF蛋白水平数据的统计学分析
对于统计学分析，将与bFGF蛋白表达水平有关的数据分成两类：高水平和低水平。本文中提供了高和低水平的定义。
总体存活(OS)终点定义为自进入研究直至死亡或检查的时间。无进展存活(PFS)终点定义为自进入研究直至疾病进展或死亡的时间。
使用cox比例危险回归模型来评估预测变量对PFS和OS的影响。OS的危险比定义为处理组中的死亡风险除以安慰剂组中的死亡风险的比率。1之下的危险比指示死亡风险在处理臂中比在安慰剂臂中小，并且因此均值OS在经处理的患者中比在安慰剂患者中长。PFS的危险比定义为处理组中的死亡或进展的风险除以安慰剂组中的死亡风险的比率。1之下的危险比指示进展或死亡的风险在处理臂中比在安慰剂比中小，并且因此均值PFS在经处理的患者中比在安慰剂患者中长。
“处理效果”或“治疗效果”定义为与安慰剂相比在对患者施用7.5mg/kg贝伐单抗时观察到的对OS或PFS的影响。使用危险比来评估治疗效果。阳性治疗定义为意味着与安慰剂臂相比，OS或PFS在处理臂中是增加的。因此，阳性治疗效果对应于1之下的危险比。
使用Kaplan Meier方法来生成具有高bFGF蛋白水平的患者亚组和具有低bFGF蛋白水平的患者亚组中存活概率对处理组的图形展示（图2至5）。
第一组分析评估具有高bFGF蛋白水平的患者的治疗效果。来自样品的bFGF水平的中值数值是6.9pg/ml。因此，在第一个例子中，若自患者获得的样品中的bFGF蛋白水平大于6.9pg/ml，则样品称为具有高水平的bFGF蛋白。另外，使用截留值2pg/ml来进一步表征生物标志的效果，因为该数值对应于测定法检测的下限。因此，在第二个例子中，若自患者获得的样品中的bFGF蛋白水平大于2pg/ml，则样品称为具有高水平的bFGF蛋白。
对于OS，无效(null)假设规定安慰剂处理组与7.5mg/kg贝伐单抗处理组间在OS上没有差异。备选假设规定两个处理组间在OS上存在差异。使用时序检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。
对于PFS，无效假设规定安慰剂处理组和7.5mg/kg贝伐单抗处理组间在PFS上没有差异。备选假设规定两个处理组间在PFS上存在差异。使用时序检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。
第二组分析评估具有低bFGF蛋白水平的患者中的治疗效果。在第一个例子中，若自患者获得的样品中的bFGF蛋白水平等于或小于6.9pg/ml，则样品称为具有低水平的bFGF蛋白。在第二个例子中，若自患者获得的样品中的bFGF蛋白水平等于或小于2pg/ml，则样品称为具有低水平的bFGF蛋白。
无效假设规定两个处理组间在OS上没有差异。备选假设规定处理组间在OS上存在差异。使用时序检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。
对于PFS，无效假设规定两个处理组间在无进展存活上没有差异。备选假设规定处理组间在PFS上有差异。使用时序检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。
进行第三组分析以评估治疗效果是否随bFGF蛋白水平而不同。使用以处理组、bFGF水平和处理对bFGF交互作为预测物的模型。
对于OS，此交互检验的无效假设规定依照bFGF水平在OS上治疗效果没有差异。备选假设规定治疗效果随bFGF水平而不同。使用似然比检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。认为0.1之下的P值是临界显著的(borderline significant)。
对于PFS，此交互检验的无效假设规定依照bFGF水平在PFS上治疗效果没有差异。备选假设规定治疗效果随bFGF水平而不同。认为0.05之下的P值是统计学显著的。认为0.1之下的P值是临界显著的。
进行第四组分析以检查用上文所描述的其它三项分析找到的结果的稳健性。在此组分析中，不将bFGF蛋白水平的数值对分，而是在对数转化后作为连续变量处理。另外，模型中包括其它基线预后变量以检查bFGF的影响是否不被其它因素混淆。该模型具有处理组、bFGF水平、通过bFGF交互的处理和其它基线协变量(covariate)作为预测物。其它基线预测物是：性别（男性对女性）；过去的吸烟者对所有其它；年龄（<65对>=65）；疾病阶段（IV对所有其它）；西欧/澳大利亚/加拿大对所有其它；种族（白人对所有其它）；筛选时的ECOG；腺癌对所有其它。
对于总体存活，无效假设规定在OS上的治疗效果不随bFGF蛋白表达水平变化以线性方式变化。备选假设规定治疗效果随bFGF蛋白表达水平变化而变化。使用似然比检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。
对于PFS，无效假设规定在PFS上的治疗效果不随bFGF蛋白表达水平变化以线性方式变化。备选假设规定治疗效果随bFGF蛋白表达水平变化而变化。使用似然比检验来计算与此假设对应的p值。认为0.05之下的P值是统计学显著的。
下文表3显示了分析组1和2的结果，所述组1和2评估具有定义为数值≤6.9pg/ml的低bFGF蛋白质表达水平和定义为数值>6.9pg/ml的高bFGF蛋白质表达水平的患者亚组中的治疗效果。
表3中的结果显示了具有高bFGF蛋白质表达水平(>6.9pg/ml)的患者中在PFS和OS上的强治疗效果。完全在1之下的危险比评估值和0.05之下的p值两者都指示治疗显著延长具有大于6.9pg/ml的bFGF蛋白水平的患者中的死亡前时间和进展前时间。
表3
*HR[95%CI]：危险比及95%置信区间
下文表4显示了分析组1和2的结果，所述组1和2评估具有定义为数值≤2pg/ml的低bFGF蛋白质表达水平和定义为数值>2pg/ml的高bFGF蛋白质表达水平的患者亚组中在PFS和OS上的治疗效果。
表4中的结果显示了具有高bFGF蛋白质表达水平(>2pg/ml)的患者中在PFS和OS上的强治疗效果。完全在1之下的危险比评估值和在0.05水平之下或处于0.05水平的p值两者都指示治疗显著延长具有大于2pg/ml的bFGF蛋白水平的患者中的死亡前时间和进展前时间。
表4
Figure BDA00001639779900592
*HR[95%CI]：危险比及95%置信区间
下文表5显示了第三组分析的结果。它报告了治疗效果与bFGF蛋白表达水平间的交互检验的p值。这些结果提供了额外的证据，即治疗效果在具有高bFGF蛋白质表达水平的患者亚组中显著更重要。
表5
Figure BDA00001639779900601
下文表6显示了第四组分析的后果。它展现在使用对数转化的连续变量形式的bFGF蛋白表达水平的数值和其它基线患者特征的模型中处理对交互项的p值。这些结果提供了额外的证据，即治疗效果与bFGF蛋白表达水平显著有关，其中在具有较高的bFGF蛋白质表达水平的患者中观察到较高的治疗效果。
表6
总之，应用几种统计学模型来评估与bFGF水平有关的在PFS和OS上的治疗效果。首先用定义为数值大于2pg/ml的所有bFGF蛋白表达水平的高bFGF蛋白质水平实施分析。接着，为了提高就治疗效果而言检测高和低bFGF蛋白表达水平间的差异的统计学能力，还用定义为所有数值大于6.9pg/ml的高bFGF蛋白质表达水平实施分析。所有分析一致地指示PFS和OS的显著升高存在于具有高bFGF蛋白质表达水平的患者中（图2、3、4和5）。
在此通过提及而明确地完整收录遍及本公开内容引用的所有参考文献。
虽然本发明已经参照认为是具体实施方案的事物进行过描述，但是应当理解，本发明不限于此类实施方案。相反，本发明意图覆盖所附权利要求书的精神和范围内包括的各种修饰和等同方案。
遍及本申请（包括权利要求书），术语“包含”作为一种包含性的、开放末端的过渡短语使用，其不排除别的、未引用的元件或方法步骤。
Figure IDA00001639780300021
Figure IDA00001639780300031

Claims (30)

1.一种鉴定可以受益于抗血管生成疗法的癌症患者的方法，包括测定自所述患者获得的样品中的bFGF表达水平，其中与参照样品相比自所述患者获得的样品中更高的bFGF表达水平指示所述患者可以受益于抗血管生成疗法。
2.一种预测癌症患者对抗血管生成疗法的响应性的方法，包括测定自所述患者获得的样品中的bFGF表达水平，其中与参照样品相比所述样品中更高的bFGF表达水平指示所述患者有可能响应抗血管生成疗法。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述抗血管生成疗法包括对所述患者施用VEGF拮抗剂。
4.权利要求3的方法，其中所述VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。
5.权利要求4的方法，其中所述抗VEGF抗体是贝伐单抗。
6.权利要求3至5中任一项的方法，其中所述抗血管生成疗法进一步包括对所述患者施用至少一种化疗剂。
7.权利要求6的方法，其中所述化疗剂是顺铂或吉西他滨。
8.权利要求3至5中任一项的方法，其中所述抗血管生成疗法进一步包括对所述患者施用至少两种化疗剂。
9.权利要求8的方法，其中至少两种化疗剂是顺铂和吉西他滨。
10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述抗血管生成疗法包括对所述患者施用7.5mg/kg贝伐单抗。
11.权利要求1的方法，其进一步包括对所述患者施用有效量的抗VEGF抗体。
12.权利要求11的方法，其中所述抗VEGF抗体是贝伐单抗。
13.权利要求12的方法，其中对所述患者施用7.5mg/kg贝伐单抗。
14.抗VEGF抗体用于改善患有癌症的患者的治疗效果的用途，包括下列步骤：(1)测定自所述患者获得的样品中的bFGF表达水平，并且(2)若与参照样品相比所述样品中存在着更高的bFGF表达水平，则对所述患者施用有效量的抗VEGF抗体。
15.权利要求14的用途，其进一步包括对所述患者施用有效量的至少一种化疗剂。
16.权利要求15的用途，其中至少一种化疗剂是顺铂或吉西他滨。
17.权利要求14的用途，其进一步包括对所述患者施用有效量的至少两种化疗剂。
18.权利要求17的用途，其中至少两种化疗剂是顺铂和吉西他滨。
19.权利要求1至13中任一项的方法或权利要求14至18中任一项的用途，其中所述bFGF表达水平是蛋白质表达水平。
20.权利要求1至13中任一项的方法或权利要求14至18中任一项的用途，其中所述样品中的bFGF蛋白质表达水平大于2pg/ml。
21.权利要求1至13中任一项的方法或权利要求14至18中任一项的用途，其中所述样品中的bFGF蛋白质表达水平大于6.9pg/ml。
22.权利要求1至13中任一项的方法或权利要求14至18中任一项的用途，其中所述癌症是肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、肾癌或成胶质细胞瘤。
23.权利要求22的方法，其中所述癌症是肺癌。
24.权利要求23的方法，其中癌症是先前未治疗的肺癌。
25.权利要求23的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌。
26.权利要求1至13中任一项的方法或权利要求14至18中任一项的用途，其中所述自患者获得的样品是选自下组的成员：组织、血液、血液衍生的细胞、血浆、血清及其组合。
27.一种可用于实施权利要求1至13中任一项的方法的试剂盒，其包含一种或多种能够检测bFGF表达水平的化合物或寡核苷酸或多核苷酸阵列。
28.蛋白质或寡核苷酸或多核苷酸阵列在权利要求1至13中任一项的方法中测定bFGF表达水平的用途。
29.权利要求28的试剂盒或权利要求29的用途，其中所述能够测定bFGF表达水平的化合物是适合于在免疫组织化学方法中使用的多肽和/或是对bFGF特异性的抗体。
30.如本文所描述的发明。
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112013031019A2 (pt) * 2011-06-02 2017-03-21 Almac Diagnostics Ltd teste diagnóstico molecular para câncer
US11091809B2 (en) 2012-12-03 2021-08-17 Almac Diagnostic Services Limited Molecular diagnostic test for cancer
GB201409479D0 (en) 2014-05-28 2014-07-09 Almac Diagnostics Ltd Molecular diagnostic test for cancer
CA2946362C (en) * 2014-04-24 2019-03-12 Pfizer Inc. Cancer treatment with axitinib
WO2016041616A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Merck Patent Gmbh A method of treating bone metastasis diseases, medicaments therefore, and a method of predicting the clinical outcome of treating bone metastasis diseases
CA2961421C (en) 2014-09-17 2024-01-30 Merck Patent Gmbh A method of treating solid cancers and/or metastases thereof, medicaments therefore, and a method of predicting the clinical outcome of treating solid cancers and/or metastases thereof
WO2016187708A1 (en) 2015-05-22 2016-12-01 Csts Health Care Inc. Thermodynamic measures on protein-protein interaction networks for cancer therapy
EP3498844B1 (en) 2016-08-09 2022-09-28 Seasun Therapeutics Peptide nucleic acid complex having improved cell permeability and pharmaceutical composition comprising same
KR102262260B1 (ko) * 2018-02-08 2021-06-09 주식회사 시선테라퓨틱스 엔도좀 탈출능을 갖는 펩티드 핵산 복합체 및 이의 용도

Family Cites Families (82)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4018653A (en) 1971-10-29 1977-04-19 U.S. Packaging Corporation Instrument for the detection of Neisseria gonorrhoeae without culture
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4016043A (en) 1975-09-04 1977-04-05 Akzona Incorporated Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4318980A (en) 1978-04-10 1982-03-09 Miles Laboratories, Inc. Heterogenous specific binding assay employing a cycling reactant as label
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
NZ201918A (en) 1981-09-18 1987-04-30 Genentech Inc N-terminal methionyl analogues of bovine growth hormone
US4424279A (en) 1982-08-12 1984-01-03 Quidel Rapid plunger immunoassay method and apparatus
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3040121B2 (ja) 1988-01-12 2000-05-08 ジェネンテク，インコーポレイテッド 増殖因子レセプターの機能を阻害することにより腫瘍細胞を処置する方法
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
FI891226A (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
US5700637A (en) 1988-05-03 1997-12-23 Isis Innovation Limited Apparatus and method for analyzing polynucleotide sequences and method of generating oligonucleotide arrays
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
RO110397B1 (ro) 1989-03-21 1996-01-30 Immune Response Corp San Diego Vaccin pentru prevenirea sau tratarea unor boli care rezulta din raspunsuri patogene, prin populatii de celule t specifice, procedeu de obtinere si metode de diagnostic si tratament cu acesta
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
ATE161850T1 (de) 1989-07-19 1998-01-15 Connetics Corp T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
JP3068180B2 (ja) 1990-01-12 2000-07-24 アブジェニックス インコーポレイテッド 異種抗体の生成
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US20030206899A1 (en) 1991-03-29 2003-11-06 Genentech, Inc. Vascular endothelial cell growth factor antagonists
US6582959B2 (en) 1991-03-29 2003-06-24 Genentech, Inc. Antibodies to vascular endothelial cell growth factor
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
ES2241710T3 (es) 1991-11-25 2005-11-01 Enzon, Inc. Procedimiento para producir proteinas multivalentes de union a antigeno.
BR9207175A (pt) 1992-10-28 1995-12-12 Genentech Inc Composição contendo antagonista de fator de crescimento de célula endotelial vascular sequência aminoácida de anticorpo monoclonal polipeptídeo e método de tratamento de tumor em mamífero
US6177401B1 (en) 1992-11-13 2001-01-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften Use of organic compounds for the inhibition of Flk-1 mediated vasculogenesis and angiogenesis
US5635388A (en) 1994-04-04 1997-06-03 Genentech, Inc. Agonist antibodies against the flk2/flt3 receptor and uses thereof
US5807522A (en) 1994-06-17 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for fabricating microarrays of biological samples
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
CA2761116A1 (en) 1995-04-27 1996-10-31 Amgen Fremont Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5880141A (en) 1995-06-07 1999-03-09 Sugen, Inc. Benzylidene-Z-indoline compounds for the treatment of disease
GB9624482D0 (en) 1995-12-18 1997-01-15 Zeneca Phaema S A Chemical compounds
KR100489174B1 (ko) 1996-03-05 2005-09-30 제네카-파마 소시에떼아노님 4-아닐리노퀴나졸린유도체
US6100071A (en) 1996-05-07 2000-08-08 Genentech, Inc. Receptors as novel inhibitors of vascular endothelial growth factor activity and processes for their production
BR9710362A (pt) 1996-07-13 1999-08-17 Glaxo Group Ltd Composto formula-ao farmaceutica utiliza-ao de um composto processos de tratamento de um ser humano ou animal sofrendo de uma mediada por atividade anormal de cinase de proteina tirosina e para a prepara-ao de um composto
HRP970371A2 (en) 1996-07-13 1998-08-31 Kathryn Jane Smith Heterocyclic compounds
KR20080059467A (ko) 1996-12-03 2008-06-27 아브게닉스, 인크. 복수의 ｖｈ 및 ｖｋ 부위를 함유하는 사람 면역글로불린유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된항체
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
TR199903123T2 (xx) 1997-04-07 2000-05-22 Genentech, Inc. Anti-Vegf antikorlar�.
AU740738B2 (en) 1997-04-07 2001-11-15 Genentech Inc. Humanized antibodies and methods for forming humanized antibodies
US20020032315A1 (en) 1997-08-06 2002-03-14 Manuel Baca Anti-vegf antibodies
WO1998050356A1 (en) 1997-05-07 1998-11-12 Sugen, Inc. 2-indolinone derivatives as modulators of protein kinase activity
EP0984692A4 (en) 1997-05-30 2001-02-21 Merck & Co Inc ANGIOGENESIS INHIBITORS
DE69838172T2 (de) 1997-08-22 2008-04-10 Astrazeneca Ab Oxindolylchinazolinderivate als angiogenesehemmer
JP2001518470A (ja) 1997-09-26 2001-10-16 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド 新規な血管形成阻害剤
JP2001522853A (ja) 1997-11-11 2001-11-20 ファイザー・プロダクツ・インク 抗癌剤として有用なチエノピリミジンおよびチエノピリジン誘導体
DK1034298T3 (da) 1997-12-05 2012-01-30 Scripps Research Inst Humanisering af murint antistof
IL138608A0 (en) 1998-04-02 2001-10-31 Genentech Inc Antibody variants and fragments thereof
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
WO1999061422A1 (en) 1998-05-29 1999-12-02 Sugen, Inc. Pyrrole substituted 2-indolinone protein kinase inhibitors
UA60365C2 (uk) 1998-06-04 2003-10-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні ізотіазолу, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб лікування гіперпроліферативного захворювання у ссавця
WO2000042072A2 (en) 1999-01-15 2000-07-20 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6703020B1 (en) 1999-04-28 2004-03-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibody conjugate methods for selectively inhibiting VEGF
TWI262914B (en) 1999-07-02 2006-10-01 Agouron Pharma Compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases
JP2003529774A (ja) 2000-03-31 2003-10-07 ジェネンテック・インコーポレーテッド 遺伝子発現を検出し定量するための構成物及び方法
AR042586A1 (es) 2001-02-15 2005-06-29 Sugen Inc 3-(4-amidopirrol-2-ilmetiliden)-2-indolinona como inhibidores de la protein quinasa; sus composiciones farmaceuticas; un metodo para la modulacion de la actividad catalitica de la proteinquinasa; un metodo para tratar o prevenir una afeccion relacionada con la proteinquinasa
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
RU2005136988A (ru) 2003-05-30 2006-06-10 Дженентек, Инк. (Us) Лечение антителами против vegf
WO2005044853A2 (en) 2003-11-01 2005-05-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20050106667A1 (en) 2003-08-01 2005-05-19 Genentech, Inc Binding polypeptides with restricted diversity sequences
US7758859B2 (en) 2003-08-01 2010-07-20 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20060009360A1 (en) 2004-06-25 2006-01-12 Robert Pifer New adjuvant composition
BRPI0518994A2 (pt) 2004-12-31 2008-12-02 Biogen Idec Inc anticorpos ou polipeptÍdeos que se ligam a br3, seus usos e formulaÇÕes lÍquidas
US20070197599A1 (en) * 2006-02-02 2007-08-23 Matier William L Hydroxylamines and derivatives as anti-angiogenic agents
BRPI0817158A2 (pt) * 2007-11-09 2015-04-14 Genentech Inc "método de identificar um paciente com câncer renal, kit, métodos e conjunto de compostos"
US8628176B2 (en) * 2007-11-10 2014-01-14 Videojet Technologies Inc. Electromechanical converter for ink jet printing
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AFSHIN DOWLATI等: "Cell Adhesion Molecules, Vascular Endothelial Growth Factor, and Basic Fibroblast Growth Factor in Patients with Non-Small Cell Lung Cancer Treated with Chemotherapy with or without Bevacizumab-an Eastern Cooperative Oncology Group Study", 《CLINICAL CANCER RESEARCH》 *
BHUVANESWARI R等: "Hypericin-mediated photodynamic therapy in combination with Avastin (bevacizumab) improves tumor response by downregulating angiogenic proteins", 《PHOTOCHEMICAL AND PHOTOBIOLOGICAL SCIENCES》 *
POFSTAD E K等: "Vascular Endothelial Growth Factor, Interleukin 8,Platelet-derived Endothelial Cell Growth Factor, and Basic Fibroblast Growth Factor Promote Angiogenesis and Metastasis in Human Melanoma Xenografts", 《CANCER RESEARCH》 *
TARASENKO N等: "Histone deacetylase inhibitors: the anticancer, antimetastatic and antiangiogenic activities of AN-7 are superior to those of the clinically tested AN-9 (Pivanex)", 《CLINICAL EXPERIMENTAL METASTASIS》 *
赵军等: "46例晚期非小细胞肺癌化疗前后外周血VEGF，bFGF，MMP-9的检测与预后关系", 《2004中国肿瘤学术大会论文集》 *

Also Published As

Publication number Publication date
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