CN101952291A

CN101952291A - 用作人蛋白激酶plk1至plk4的抑制剂以治疗增殖疾病的4-(9-(3,3-二氟环戊基)-5,7,7-三甲基-6-氧代-6,7,8,9-四氢-5h-嘧啶并[4,5-b][1,4]二氮杂䓬-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺衍生物

Info

Publication number: CN101952291A
Application number: CN2008801115486A
Authority: CN
Inventors: F·皮拉德; J·-D·沙里耶
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2007-08-15
Filing date: 2008-08-15
Publication date: 2011-01-19
Also published as: AU2008287339A1; JP5380447B2; US8461149B2; WO2009023269A3; CA2695753A1; EP2190849B1; EP2190849A2; US20140018352A1; WO2009023269A2; US20110263575A1; JP2010536760A; NZ583061A; MX2010001677A

Abstract

本发明的化合物及其可药用组合物可用作PLK1蛋白激酶的抑制剂。这些化合物如具有本文定义的式I或其可药用盐。这些化合物及其可药用盐可用于治疗多种疾病、病症和症状，包括但不限于自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖疾病或过度增殖疾病、神经变性疾病、或免疫介导疾病。式I的化合物中，R¹是(式)；R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的，并任选被1或2个卤素原子取代；X是O且R²是-CH₃；或X是NR⁵，且R²和R⁵与和它们连接的原子一起形成1，2，4-***；R³和R⁴各自独立地为H、甲基或乙基；或R³和R⁴与和它们连接的原子一起形成环丙基环；且n是0或1。

Description

用作人蛋白激酶PLK1至PLK4的抑制剂以治疗增殖疾病的4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-B][1，4]二氮杂-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺衍生物

交叉引用

本申请要求2007年8月15日提交的美国申请No.60/964,825和2007年10月17日提交的美国申请No.60/980,629的优先权。前述申请的整个内容经此引用并入本文。

发明技术领域

本发明涉及可用作蛋白激酶抑制剂的化合物。本发明还提供包含本发明的化合物的可药用组合物和在各种病症的治疗中使用该组合物的方法。本发明还提供了制备本发明的化合物的方法。

发明背景

近年来，对与疾病相关的酶和其它生物分子的结构的更好理解极大有助于对新型治疗剂的探寻。已成为大量研究的主题的一种重要类型的酶是蛋白激酶。

蛋白激酶构成负责控制细胞内的各种信号转导过程的一大类结构相关酶(参见Hardie，G和Hanks，S.The Protein Kinase Facts Book，I和II，Academic Press，San Diego，CA：1995)。蛋白激酶被认为由共同祖先基因因其结构和催化功能的保存而产生。几乎所有激酶都含有类似的250-300个氨基酸催化域。激酶可通过被它们磷酸化的底物分类(例如蛋白质-酪氨酸、蛋白质-丝氨酸/苏氨酸、脂质等)。已经识别了大致与各激酶族对应的序列基序(参见，例如，Hanks，S.K.，Hunter，T.，FASEB J.1995，9，576-596；Knighton等人，Science 1991，253，407-414；Hiles等人，Cell 1992，70，419-429；Kunz等人，Cell 1993，73，585-596；Garcia-Bustos等人，EMBO J 1994，13，2352-2361)。

通常，蛋白激酶通过实现从三磷酸核苷向参与信号传导通路的蛋白质受体的磷酰基转移来介导细胞内信号传导。这些磷酸化事件充当可调制或调节靶蛋白生物功能的分子开/关切换(on/off switches)。最终响应各种细胞外刺激和其它刺激来触发这些磷酸化事件。这类刺激的实例包括环境和化学应力信号(例如休克、热休克、紫外线辐射、细菌内毒素和H₂O₂)、细胞因子(例如，白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-a)和生长因子(例如，粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外刺激可能影响与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白质合成控制、存活和细胞周期调节相关的一种或多种细胞响应。

许多疾病与上述蛋白激酶介导事件触发的异常细胞响应相关联。这些疾病包括但不限于，癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、骨病、代谢病、神经和神经变性疾病、心血管病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏症和激素相关疾病。相应地，在医药化学中，为找到有效充当治疗剂的蛋白激酶抑制剂，已作出显著努力。

Polo-样激酶(PLK)属于丝氨酸/苏氨酸激酶族，其在从酵母到人的各物种间高度保留(Lowery DM等人在Oncogene 2005，24；248-259中综述)。PLK激酶在细胞周期中起到多种作用，包括控制进入和行经有丝***。

PLK1是最有代表性的PLK族成员。PLK1广泛表达并且最富集在具有高有丝***指数的组织中。PLK1的蛋白质含量在有丝***中升高并达到峰值(Hamanaka，R等人，J Biol Chem 1995，270，21086-21091)。所报道的PLK1的底物是已知调节进入和行经有丝***的所有分子，并包括CDC25C、周期蛋白(cyclin)B、p53、APC、BRCA2和蛋白酶体。PLK1在多种癌类型中上调且表达水平与疾病严重程度相关联(Macmillan，JC等人，Ann Surg Oncol 2001，8，729-740)。PLK1是致癌基因并可以转化NIH-3T3细胞(Smith，MR等人，BiochemBiophys Res Commun 1997，234，397-405)。反义siRNA造成的PLK1的脱除或抑制、抗体的微注射或PLK1的显性负性结构转染到细胞中降低了肿瘤细胞的体外增殖和生存力(Guan，R等人，Cancer Res 2005，65，2698-2704；Liu，X等人，Proc Natl Acad Sci U S A 2003，100，5789-5794，Fan，Y等人，World J Gastroenterol 2005，11，4596-4599；Lane，HA等人，J Cell Biol 1996，135，1701-1713)。已脱除PLK1的肿瘤细胞已在纺锤体形成、染色体排列和分离以及胞质***中激活纺锤体检查点和缺陷。生存力的损失据报道是诱导细胞凋亡的结果。相反，正常细胞据报道在PLK1脱除后保持生存力。siRNA造成的PLK1的体内敲除或显性负性结构的使用在异种移植模型中导致肿瘤的生长抑制或阻遏。

PLK2主要在细胞周期的G1阶段中表达并定位至间期细胞中的中心体。敲除PLK2的小鼠正常发育，繁殖并具有正常存活率，但比野生型小鼠小大约20％。来自敲除动物的细胞比在正常小鼠中更慢地经过细胞周期(Ma，S等人，Mol Cell Biol 2003，23，6936-6943)。siRNA造成的PLK2脱除或激酶无活性突变体转染到细胞中阻断了中心粒复制。PLK2的下调也使肿瘤细胞对紫杉醇敏感并促进有丝***灾变，这部分通过遏止p53响应来进行(Burns TF等人，Mol Cell Biol 2003，23，5556-5571)。

PLK3在整个细胞周期中表达并从G1到有丝***提高。表达在高度增殖的卵巢肿瘤和乳腺癌中上调并与较差的预后相关联(Weichert，W等人，Br J Cancer 2004，90，815-821；Weichert，W等人，VirchowsArch 2005，446，442-450)。除调节有丝***外，PLK3被认为还参与细胞周期中的高尔基体断裂和参与DNA-损伤响应。显性负性表达对PLK3的抑制被报道促进DNA损伤后的不依赖p53的凋亡和通过肿瘤细胞抑制集落形成(Li，Z等人，J Biol Chem 2005，280，16843-16850)。

PLK4在结构上更不同于其它PLK族成员。这种激酶的脱除造成癌细胞的凋亡(Li，J等人，Neoplasia 2005，7，312-323)。PLK4敲除小鼠在E7.5阻遏有丝***中的高比例细胞和部分分离的染色体(Hudson，JW等人，Current Biology 2001，11，441-446)。

在肿瘤细胞生长、增殖和存活中涉及蛋白激酶族的分子。相应地，非常需要开发可用作蛋白激酶抑制剂的化合物。暗示PLK激酶为细胞分化所必需的证据是强有力的。细胞周期的阻断是抑制肿瘤细胞增殖和存活的临床批准方法。因此最好开发可用作PLK族蛋白激酶(例如，PLK1、PLK2、PLK3和PLK4)的抑制剂的化合物，其抑制增殖和降低肿瘤细胞的存活力，特别是因为在医学上非常需要开发新型癌症治疗法，包括口服实施的治疗法。

发明概述

本发明的化合物及其可药用组合物可用作蛋白激酶抑制剂。在一些实施方案中，这些化合物可用作PLK蛋白激酶的抑制剂；在一些实施方案中，可用作PLK1蛋白激酶的抑制剂。这些化合物具有如本文定义的式I或其可药用盐。

这些化合物及其可药用盐可用于治疗或预防各种疾病、病症或症状症状，包括但不限于，自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖疾病或过度增殖疾病、神经变性疾病、或免疫介导疾病。本发明提供的化合物也可用于生物和病理现象中的激酶的研究；这类激酶介导的细胞内信号转导通路的研究；和新型激酶抑制剂的对比评测。

在一些情况下，本发明的化合物在小于1nM的浓度下表现出PLK1抑制。在另一些情况下，本发明的化合物在1nM至10nM的浓度下表现出PLK1抑制。此外，本发明的化合物表现出有利的药物动力学性质。

发明详述

在一个方面中，本发明提供式I的化合物：

其中：

R¹是

R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的，并被1至2个卤素原子(例如，氟)取代；

X是O且R²是CH₃；或X是NR⁵，且R²和R⁵与和它们连接的原子一起形成1，2，4-***；

R³和R⁴各自独立地为H、甲基或乙基；或R³和R⁴与和它们连接的原子一起形成环丙基环；且

n是0或1。

本发明的化合物的实施方案可以包括一个或多个下列特征：X是O且R²是-CH₃；R⁶是任选被1至2个卤素(例如，氟)原子取代的C_3-6脂环族基团；R³是甲基；R⁴是甲基；R³是H；R⁴是乙基；R⁶是任选被1至2个氟原子取代的环丙基；R⁶是任选被1至2个卤素(例如，氟)原子取代的环戊基；R⁶是任选被1至2个卤素(例如，氟)原子取代的环己基；R⁶是任选被1至2个卤素(例如，氟)原子取代的C_1-4脂族基团。

本发明的化合物的具体实例包括但不限于，

N-环丙基-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-N-(3-氟环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

N-(3，3-二氟环戊基)-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

N-环丙基-4-(9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

e]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

N-(3，3-二氟环戊基)-4-(9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

e]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺；

N-环丙基-4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢蝶啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺；和

N-环丙基-4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢蝶啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺。

在一些实施方案中，式I的化合物具有式I-A：

在另一些实施方案中，式I的化合物具有式I-B：

在再一些实施方案中，式I的化合物具有式I-C：

在式I的化合物具有式I-A的一些实施方案中，R³和R⁴各自是甲基；或R³和R⁴之一是H且另一个是甲基；或R³和R⁴与和它们连接的原子一起形成环丙基。

在式I的化合物具有式I-B的另一些实施方案中，R³和R⁴之一是H且另一个是乙基；该不对称碳具有如下所示的(R)构型。

在式I的化合物具有式I-C的另一些实施方案中，R³和R⁴之一是H且另一个是乙基；该不对称碳具有如下所示的(R)构型。

在本发明的化合物的一些实施方案中，R¹是

另一方面，本发明提供制备式I-A的化合物的方法：

在式I-A中，R¹是

R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的，并任选被1或2个卤素原子(例如，2个氟原子)取代；且R³和R⁴各自独立地为H、甲基或乙基；或R₃和R₄与和它们连接的原子一起形成环丙基环。该方法包括使式5A的化合物与H₂NR¹反应形成式I-A的化合物的步骤：

其中LG₂是离去基。

在一些实施方案中，该方法进一步包括使式4A的化合物与Me-LG₃反应形成式5A的化合物的步骤：

其中LG₃是能在合适的条件下被NH酰胺替代的离去基。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括式3A的化合物的还原性环化以形成式4A的化合物的步骤：

其中R是C_1-6脂族基团或氢。

在再一些实施方案中，该方法进一步包括在环缩合条件下环化式3A-a的化合物：

以形成式4A的化合物。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式3A的化合物在还原条件下反应形成式3A-a的化合物的步骤：

合适的还原条件的实例描述在例如J.W.Bae等人，Chem.Commun.，2000，1857-1858(在简单和有效的一罐法合成中通过还原硝基苯随后在10％Pd/C存在下用癸硼烷(B10H14)还原性胺化来制备N-烷基氨基苯)；R.J.Rahaim等人，Org.Lett.，2005，7，5087-5090(芳族硝基基团的钯-催化的胺还原可以在室温下使用含水氟化钾和聚甲基氢化硅氧烷(PMHS)(对芳族硝基而言)以高收率、宽的官能团容许度和短反应时间实现；使用三乙基硅烷代替PMHS/KF将脂族硝基化合物还原成相应的羟胺)；G.S.Vanier，Synlett，2007，131-135(用于在微波辐射下将气态氢引入密封反应***的一般适用方法能够在短反应时间内用80℃至100℃的中等温度和50psi氢将各种底物氢化)；S.Chandrasekhar等人，J.Org.Chem.，2006，71，2196-2199(聚(乙二醇)(PEG)(400)已被发现是在使用Adams’催化剂促进各种官能团的氢化方面比离子液体优越数倍的溶剂；该催化剂和PEG都在无活性损失和无底物交叉污染的情况下有效再循环超过10次)；H.Berthold等人，Synthesis，2002，1607-1610(使用甲酸盐作为氢源的微波辅助的、钯-催化的不同同核或杂核有机化合物的催化转化氢化在[bmim][PF6]中进行；可以通过简单的液体-液体萃取以中等至优异的收率分离基本纯的产物)；和C.Yu等人，J.Org.Chem.，2001，66，919-924(在催化量的1，1’-二辛基-4，4’-联吡啶鎓二溴化物存在下使用钐(0)金属来化学选择性还原芳族硝基基团的温和和有效的电子-转移方法以良好收率以优于许多其它官能团和保护基的选择性产生芳胺)中。

在再一些实施方案中，该方法进一步包括下列步骤：(a)使式3A-a的化合物与烷基化剂在合适的条件下反应形成式3A-b的化合物；

和(b)在合适的环-缩合条件下环化式3A-b的化合物以形成式5A的化合物。烷基化剂的实例包括烷基卤。参见例如美国专利No.4783554。

在再一些实施方案中，该方法进一步包括使式2a的化合物：

与式1的化合物：

在合适的置换条件下反应形成式3A的化合物。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式11的化合物：

与式12的化合物：

在合适的还原性胺化条件下反应形成式2a的化合物。

在再一些实施方案中，该方法进一步包括下列步骤：(a)使式11的化合物，例如与1，3，5-三嗪或其衍生物在合适的条件下反应形成式13的六氢-1，3，5-三嗪；

和(b)使式13的化合物与式14的乙烯酮甲硅烷基乙缩醛：

在合适的条件下反应形成式2a的化合物。

本发明的另一方面提供制备式I-C的化合物的方法：

在式I-C中，R¹是

R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的并任选被1或2个卤素原子(例如，2个氟原子)取代；且R³和R⁴各自独立地为H、甲基或乙基；或R³和R⁴与和它们连接的原子一起形成环丙基环。该方法包括使式5C的化合物与H₂NR¹反应形成式I-C的化合物的步骤：

其中LG₂是离去基。

在一些实施方案中，该方法进一步包括使式4C的化合物与Me-LG₃在合适的条件下反应形成式5C的化合物的步骤：

其中LG₃是能被NH酰胺替代的离去基。

在另一些实施方案中，本发明的方法进一步包括式3C的化合物在合适的条件下还原性环化以形成式4C的化合物步骤：

在另一些实施方案中，该方法进一步包括在环-缩合条件下环化式3C-a的化合物以形成式4C的化合物：

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式3C的化合物在合适的还原条件下反应形成式3C-a的化合物的步骤：

在另一些实施方案中，该方法进一步包括下列步骤：(a)使式3C-a的化合物与烷基化剂在合适的条件下反应形成式3C-b的化合物；

和(b)在合适的环-缩合条件下环化式3C-b的化合物以形成式5C的化合物。合适的烷基化剂的实例包括烷基卤。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式2b的化合物：

与式1的化合物：

在合适的置换条件下反应形成式3C的化合物的步骤。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式11的化合物：

与式15的化合物：

在合适的置换条件下反应形成式2b的化合物的步骤。

再一方面，本发明提供制备式I-B的化合物的方法：

在式I-B中，R¹是

R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的，并任选被1或2个卤素原子(例如，2个氟原子)取代；且R3和R4各自独立地为H、甲基或乙基；或R3和R4与和它们连接的原子一起形成环丙基环。该方法包括使式10的化合物与H₂NR¹在合适的条件下反应形成式I-B的化合物的步骤：

其中LG₂是合适的离去基。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式9的化合物在本领域已知的用于将酰肼转化成1，2，4-***的合适的环化条件下反应形成式10的化合物的步骤：

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式8的化合物在合适的条件下与肼反应形成式9的化合物的步骤

其中LG₃是能被NH酰胺替代的离去基。

在另一些实施方案中，该方法进一步包括使式4C的化合物在本领域已知用于将酰胺转化成活化酰胺的合适的条件下反应形成式8的化合物：

在该方法的另一些实施方案中，R²和R⁵与和它们连接的原子一起形成1，2，4-***。

本发明的化合物包括本文所述的那些，并进一步以本文公开的种类、子类和物类为例。如本文所用，除非另行指明，应适用下列定义。对于本发明，根据元素周期表CAS版本，Handbook of Chemistry andPhysics，第75版确定化学元素。另外，在“Organic Chemistry”，ThomasSorrell，University Science Books，Sausalito：1999，和“March’s AdvancedOrganic Chemistry”，第5版，Ed.：Smith，M.B.和March，J.，John Wiley&Sons，New York(2001)中描述了有机化学的一般原理，它们的整个内容经此引用并入本文。

本文所述的指定原子数范围包括在其中的任何整数，包括该范围的上限和下限。例如，具有1至4个(或1-4个)原子的基团可具有1、2、3或4个原子。

本文所述的本发明的化合物可任选被一个或多个如上大致阐述或如通过本发明的具体种类、子类和物类例举的取代基取代。要理解的是，术语“任选取代”与术语“取代或未取代”可互换使用。通常，无论前面是否有术语“任选”，术语“取代”都是指给定结构中的氢基团被指定的取代基替代。除非另行指明，任选取代的基团可以在该基团的各可取代位置具有取代基，并在任何给定结构中的多于一个位置可被多于一个选自指定基团的取代基取代时，每一位置的取代基可以相同或不同。本发明考虑的取代基的组合优选为导致形成稳定或化学可行的化合物的那些。

本文所用的术语“稳定”是指在受到其制造、检测、回收、提纯和用于本文公开的一个或多个用途中的条件时不会显著变化的化合物。在一些实施方案中，稳定的化合物或化学可行的化合物是在不存在水分或其它化学反应性条件的情况下在40℃或更低温度保持至少1周时不会显著变化的化合物。

本文所用的术语“脂族”或“脂族基团”是指完全饱和或含有一个或多个与该分子的其余部分单点连接的不饱和单元的直链(即无支链)、支链或环状的取代或未取代的烃链。

除非另行指明，脂族基团含有1-20个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1-10个脂族碳原子。在另一些实施方案中，脂族基团含有1-8个脂族碳原子。在再一些实施方案中，脂族基团含有1-6个脂族碳原子，在又一些实施方案中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。合适的脂族基团包括但不限于，直链或支链的取代或未取代的烷基、烯基或炔基。具体实例包括，但不限于，甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基、乙烯基、正丁烯基、乙炔基和叔丁基。

应该理解的是，如果该脂族基团是烯基或炔基，则该脂族基团具有至少2个碳原子。

术语“脂环族”是指单环C₃-C₈烃或双环C₇-C₁₂烃，其是完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元，但不是芳族的，具有与该分子其余部分的单连接点，其中所述双环体系中的任何一个环都具有3-7元。合适的脂环族基团包括但不限于，环烷基和环烯基。具体实例包括但不限于，环己基、环丙烯基和环丁基。

本文所用的“杂脂族”是指其中一个或两个碳原子独立地被一个或多个氧、硫、氮、磷或硅替代的脂族基团。杂脂族基团可以是取代或未取代、支链或直链、环状或无环的，并包括“杂环”、“杂环基”、“杂脂环族”或“杂环的”基团。本文所用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”是指非芳族、单环、双环或三环的环体系，其中一个或多个环成员是独立选择的杂原子。在一些实施方案中，“杂环”、“杂环基”或“杂环的”基团具有3至14个环成员，其中一个或多个环成员是独立选自氧、硫、氮或磷的杂原子，且该体系中的各个环含有3至7个环成员。

合适的杂环包括但不限于，3-1H-苯并咪唑-2-酮、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢苯硫基、3-四氢苯硫基、2-吗啉代、3-吗啉代、4-吗啉代、2-硫代吗啉代、3-硫代吗啉代、4-硫代吗啉代、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、吲哚啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、benzothiolane、苯并二噻烷和1，3-二氢-咪唑-2-酮。

环状基团(例如，脂环族和杂环)可以是线性稠合、桥连或螺的。

术语“杂原子”是指氧、硫、氮或磷中的一个或多个(包括，氮、硫或磷的任何氧化形式；任何碱性氮的季氨化形式或；杂环的可取代氮，例如N(如在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR’(如在N-取代的吡咯烷基中))。

本文所用的术语“不饱和”是指具有一个或多个不饱和单元的部分。

本文所用的术语“非芳族”描述饱和或部分不饱和的环。

本文所用的术语“芳族”描述完全不饱和的环。

本文所用的术语“烷氧基”或“硫代烷基”是指通过氧(“烷氧基”)或硫(“硫代烷基”)原子连接到主碳链上的如上定义的烷基。

术语“卤代烷基”、“卤代烯基”、“卤代脂族基团”和“卤代烷氧基”是指视情况被一个或多个卤素原子取代的烷基、烯基或烷氧基。术语“卤素”、“卤代”和“卤(hal)”是指F(氟)、Cl(氯)、Br(溴)或I(碘)。

单独使用或如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中那样作为更大部分的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共5至14个环成员的单环、双环和三环的环体系，其中该体系中的至少一个环是芳族的，且其中该体系中的各个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。术语“芳基”也是指如下定义的杂芳基环体系。

单独使用或如在“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”中那样作为更大部分的一部分使用的术语“杂芳基”是指具有总共5至14个环成员的单环、双环和三环的环体系，其中该体系中的至少一个环是芳族的，该体系中的至少一个环含有一个或多个杂原子，且其中该体系中的各个环含有3至7个环成员。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳基环”或术语“杂芳族”互换使用。合适的杂芳基环包括但不限于，2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、苯并咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、N-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、哒嗪基(例如，3-哒嗪基)、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、四唑基(例如，5-四唑基)、***基(例如，2-***基和5-***基)、2-噻吩基、3-噻吩基、苯并呋喃基、苯并苯硫基、吲哚基(例如，2-吲哚基)、吡唑基(例如，2-吡唑基)、异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，3-***基、1，2，3-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、嘌呤基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、喹啉基(例如，2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基)和异喹啉基(例如，1-异喹啉基、3-异喹啉基或4-异喹啉基)。

本文所用的术语“保护基”和“保护性基团”可互换并且是指用于临时封阻多官能化合物中的一个或多个预期反应性位点的试剂。在某些实施方案中，保护基具有一个或多个，或优选所有的下列特性：(a)以良好收率选择性添加到官能团上以产生被护底物，其(b)稳定耐受在一个或多个其它反应性位点发生的反应；和(c)可以以良好收率选择性地被不侵袭该再生的脱保护的官能团的试剂移除。T.W.Greene等人，在“Protective Groups in Organic Synthesis”，第3版，John Wiley&Sons，New York(1999)(和该书籍的其它版本)(其整个内容经此引用并入本文)中详述和提供了示例性保护基。本文所用的术语“氮保护基”是指用于临时封阻多官能化合物中的一个或多个预期氮反应性位点的试剂。T.W.Greene等人在“Protective Groups in Organic Synthesis”，第3版，John Wiley&Sons，New York(1999)的第7章(其整个内容经此引用并入本文)中详述和提供了某些示例性的氮保护基。

在一些实施方案中，烷基或脂族链可任选被另一原子或基团***。这意味着该烷基或脂族链的亚甲基单元任选被所述另一原子或基团替代。这类原子或基团的实例包括但不限于，-NR-、-O-、-S-、-CO₂-、-OC(O)-、-C(O)CO-、-C(O)-、-C(O)NR-、-C(＝N-CN)-、-NRCO-、-NRC(O)O-、-SO₂NR-、-NRSO₂-、-NRC(O)NR-、-OC(O)NR-、-NRSO₂NR-、-SO-或-SO₂-，其中R如本文定义。除非另行指明，所述任选替代形成化学稳定的化合物。可以在链内和在该链的末端；即在连接点和/或在末端都发生任选***。在一个链内，两个任选替代也可以彼此相邻，只要其产生化学稳定的化合物。该任选***或替代也可以完全替代链中的所有碳原子。例如，C₃脂族可任选被-NR-、-C(O)-和-NR-***或替代以形成-NRC(O)NR-(脲)。

除非另行指明，如果该替代或***在末端发生，该替代原子键合到该末端上的H上。例如，如果-CH₂CH₂CH₃任选被-O-***，所得化合物可以是-OCH₂CH₃、-CH₂OCH₃或-CH₂CH₂OH。

除非另行指明，本文所示的结构也意味着包括该结构的所有异构(例如，对映体、非对映体和几何(或构象))形式；例如，各不对称中心的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本化合物的单立体化学异构体以及对映体、非对映体和几何(或构象)混合物在本发明的范围内。

除非另行指明，本发明的化合物的所有互变异构形式都在本发明的范围内。

除非另行指明，取代基可以围绕任何可旋转键自由旋转。例如，绘制成

的取代基也代表

另外，除非另行指明，本文描绘的结构也意在包括仅在一个或多个同位素富集原子的存在方面不同的化合物。例如，具有本结构但氢被氘或氚替代或碳被¹³C-或¹⁴C-富集的碳替代的化合物在本发明的范围内。这类化合物可用作例如生物化验中的分析工具或探针。

本文所用的术语“可药用盐”是指在合理医疗判断范围内适合与人和低等动物的组织接触使用而没有过度毒性、刺激、过敏响应等并与合理的获益/风险比相称的化合物。

可药用盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge等人在经此引用并入本文的J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1-19中详细描述了可药用盐。本发明的化合物的可药用盐包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的那些。这些盐可以在该化合物的最终分离和提纯过程中原位制备。酸加成盐可以通过1)使其游离碱化形式的纯化化合物与合适的有机或无机酸反应和2)分离由此形成的盐来制备。

可药用的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸，如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸，如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸形成的或使用本领域所用的其它方法，如离子交换法形成的盐。其它可药用盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐(camphorate)、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸、乳糖酸盐(lactobionate)、乳酸盐、月桂酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、palmoate、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐和类似物。衍生自适当的碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明还设想了本文公开的化合物的任何含碱性氮的基团的季氨化。可以通过这种季氨化获得水或油溶性或分散性产物。

碱加成盐可以通过(1)使其酸形式的纯化化合物与合适的有机或无机碱反应和(2)分离由此形成的盐来制备。碱加成盐包括碱金属或碱土金属盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁和类似物。在适当时，其它可药用盐包括使用抗衡离子，如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低碳烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。另一些酸和碱尽管本身不可药用，但可用于制备可用作获得本发明的化合物及其可药用酸或碱加成盐用的中间体的盐。

使用下列缩写：

PG 保护基

LG 离去基

DCM 二氯甲烷

Ac 乙酰基

DMF 二甲基甲酰胺

EtOAc 乙酸乙酯

DMSO 二甲亚砜

MeCN 乙腈

TCA 三氯乙酸

ATP 三磷酸腺苷

EtOH 乙醇

Ph 苯基

Me 甲基

Et 乙基

Bu 丁基

DEAD 二乙基偶氮二羧酸盐

HEPES 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸

BSA 牛血清清蛋白

DTT 二硫苏糖醇

MOPS 4-吗啉丙磺酸

NMR 核磁共振

HPLC 高效液相色谱法

LCMS 液相色谱法-质谱法

TLC 薄层色谱法

Rt 停留时间

在一些实施方案中，本发明的化合物如表1中所示。

表1

一般合成方法

本发明的化合物可以大致通过如下列通用图式中所示的方法制备。除非另行指明，下列图式中的所有变量如本文所定义。

在一种方法中，可以如图式1中所示制备其中X是O的本发明的化合物。

图式1

参照图式1，使硝基嘧啶1(其中LG₁和LG₂是例如氯)与α-或β-氨基酯2(其中n是0或1)反应以提供加合物3。硝基在已知条件下的还原和随后环化提供双环化合物4。酰胺N-H可以通过在强碱，例如氢化钠存在下与例如烷基卤反应来官能化以提供化合物5。化合物5与R¹R⁸NH任选在钯催化剂存在下反应提供式I的化合物。

合成本发明的化合物的另一方法显示在图式2中。

图式2

参照图式2，化合物3(其中LG₂是例如氯)与R¹R⁸NH任选在钯催化剂存在下反应以提供化合物6。如前所述的化合物6中的硝基的还原和随后环化提供了双环化合物7。将化合物7中的酰胺基团官能化以提供式I的化合物。

下面在图式3中显示制备本发明的化合物的方法，其中X是-NR⁵且R⁵和R²与和它们连接的原子一起形成***环。

图式3

参照图式3，化合物4中的内酰胺官能团的活化提供中间体8，其中LG₃是例如氯。用肼替代化合物8中的基团LG₃提供了式9的中间体。化合物9与原甲酸酯(例如原甲酸甲酯)反应提供***中间体10。化合物10与如前所述的R¹R⁸NH的反应提供式I-b的化合物。

下面在图式4中显示了制备式2的化合物的方法，其中R⁷是3，3-二氟环戊基且n是1，该化合物在该图式中显示为式2a。

图式4

参照图式4，3，3-二氟环戊胺11(描述在WO 2007/062308和WO2007/062314中)与醛12在已知的还原性胺化条件下反应以提供中间体2a。如Eschweiler-Clarke反应中所用的合适的还原性胺化条件另外描述在文献中。参见例如A.F.Abdel-Magid等人，J.Org.Chem.，1996，61，3849-3862；J.W.Bae等人，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，2000，145-146；B.T.Cho等人，Tetrahedron，2005，61，5725-5734；M.McLaughlin等人，Org.Lett.，2006，8，3307-3310；T.Mizuta等人，J.Org.Chem.，2005，70，2195-2199。

制备式2a的中间体的另一方法显示在图式5中。

图式5

在图式5中，3，3-二氟环戊胺11与甲醛在氢氧化钠存在下反应以提供1，3，5-三嗪13。化合物13与式14的烯酮甲硅烷基乙缩醛的反应提供式2a的中间体。

下面在图式6中显示制备其中n是0的式2的化合物(在该图式中显示为式2b)的方法。

图式6

参照图式6，式15的化合物(其中LG是例如溴)与3，3-二氟环戊胺11反应以产生式2b的氨基酯。

本发明的另一方面提供作为蛋白激酶抑制剂并因此可用于治疗涉及蛋白激酶的疾病、病症或症状(统称为“病症”)以及本文所述的其它用途的化合物。这类病症的实例包括蛋白激酶(例如，PLK1、pLK2、PLK3或PLK4)牵涉或介导的增殖性疾病、神经变性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫介导疾病。这类病症的具体实例包括但不限于，黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤或选自结肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、***、肺癌、中枢神经***(CNS)癌、肾癌、***癌、膀胱癌或胰癌的癌症。

在本发明的另一方面中，提供可药用组合物，其中这些组合物各自包含本文所述的任何化合物和任选可药用载体、辅助剂或赋形剂。

在本发明的组合物的某些实施方案中，这些组合物各自进一步包含一种或多种附加治疗剂。这类附加治疗剂的实例包括但不限于，化疗或抗增殖剂、抗炎药剂、免疫调节或免疫抑制剂、神经营养因子、心血管病治疗剂、破骨性疾病治疗剂、肝病治疗剂、抗病毒剂、血液病治疗剂、糖尿病治疗剂或免疫缺陷病治疗剂。该附加治疗剂可以与该化合物或药物组合物一起以单剂型给药或作为多剂型的一部分与该化合物或药物组合物分开给药。

本发明提供可用作蛋白激酶抑制剂的化合物和组合物。在一些实施方案中，该蛋白激酶是PLK(例如，PLK1、PLK2、PLK3或PLK4)。在一些实施方案中，是PLK1。

作为蛋白激酶抑制剂，本发明的化合物和组合物特别可用于治疗或减轻疾病、症状或病症的严重程度，其中在该疾病、症状或病症中涉及蛋白激酶。一个方面，本发明提供治疗或减轻疾病、症状或病症的严重程度的方法，其中在该病状中涉及蛋白激酶。另一方面，本发明提供治疗或减轻激酶疾病、症状或病症的严重程度的方法，其中在该疾病的治疗中涉及酶活性的抑制。另一方面，本发明提供用通过结合到蛋白激酶上来抑制酶活性的化合物治疗或减轻疾病、症状或病症的严重程度的方法。另一方面提供通过用蛋白激酶抑制剂抑制激酶的酶活性来治疗或减轻激酶疾病、症状或病症的严重程度的方法。

在一些实施方案中，所述蛋白激酶抑制剂是PLK抑制剂。

本发明的一个方面涉及抑制患者的蛋白激酶活性的方法，该方法包括对该患者施用式I的化合物或包含所述化合物的组合物。

在一些实施方案中，所述方法用于治疗或预防选自自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖和过度增殖疾病、免疫介导疾病、骨病、代谢病、神经和神经变性疾病、心血管病、激素相关疾病、过敏症、哮喘和阿尔茨海默氏症的病症。在一些实施方案中，所述蛋白激酶是PLK。在另一些实施方案中，所述病症选自增殖性疾病和神经变性疾病。

根据要治疗或预防的特定蛋白激酶介导病症，可以与本发明的抑制剂一起施用常用于治疗或预防该病症的附加药物。例如，化疗剂或其它抗增殖剂可以与本发明的蛋白激酶抑制剂结合以治疗增殖性疾病。

这些附加剂可以作为多剂型方案的一部分与含蛋白激酶抑制剂的化合物或组合物分开给药。或者，这些试剂可以是单剂型的一部分，与蛋白激酶抑制剂一起混合在单一组合物中。

作为蛋白激酶抑制剂，本发明的化合物和组合物也可用在生物样品中。本发明的一个方面涉及抑制生物样品中的蛋白激酶活性，该方法包括使所述生物样品与式I的化合物或包含所述化合物的组合物接触。本文所用的术语“生物样品”是指体外或离体样品，包括但不限于，细胞培养物或其提取物；获自哺乳动物的活组织检查材料或其提取物；和血液、唾液、尿、粪便、***、眼泪或其它体液或其提取物。

生物样品中蛋白激酶活性的抑制可用于本领域技术人员已知的各种用途。这类用途的实例包括但不限于，输血、器官移植和生物样本储存。

本发明的另一方面涉及生物和病理现象中的蛋白激酶的研究；这类蛋白激酶介导的细胞内信号转导通路的研究；和新型蛋白激酶抑制剂的对比评测。这类用途的实例包括但不限于，生物检验，如酶检验和细胞基检验。

该化合物作为蛋白激酶抑制剂的活性可以体外、体内或在细胞系中检验。体外检验包括测定激酶活性或活化激酶的ATPase活性的抑制的检验。另一种体外检验量化该抑制剂结合到蛋白激酶上的能力并可以通过在结合之前放射性同位素示踪该抑制剂、分离该抑制剂/激酶络合物和测定结合的放射性同位素示踪剂的量，或通过进行竞争实验(其中用结合到已知放射性配体上的激酶培养新型抑制剂)来测量。在下列实施例中阐述检验本发明中用作PLK1、PLK2、PLK3和PLK4的抑制剂的化合物的详细条件。

本发明的一个方面提供可用于以过度或异常细胞增殖为特征的疾病、病症和症状的治疗的化合物。这类疾病包括，增殖或过度增殖疾病和神经变性疾病。

增殖和过度增殖疾病的实例包括但不限于，癌症。

术语“癌症”包括但不限于下列癌症：乳腺癌；卵巢癌；***；***癌；睾丸、泌尿生殖道癌；食道癌；喉癌、成胶质细胞瘤；神经母细胞瘤；胃癌；皮肤癌、角化棘皮瘤；肺癌、扁平上皮癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌；骨癌；结肠癌；结直肠癌；腺肿内癌；胰腺、腺癌；甲状腺、滤泡状癌、未分化癌、***状腺癌；***瘤；黑色素瘤；肉瘤；膀胱癌；肝癌和胆管癌；肾脏癌；骨髓异常；淋巴疾病、何杰金氏病、毛细胞癌；口腔和咽(口部)、嘴唇、舌、嘴、咽癌；小肠癌；结肠-直肠、大肠、直肠癌；脑和中枢神经***癌；慢性粒细胞性白血病(CML)和白血病。术语“癌症”包括但不限于下列癌症：骨髓瘤、淋巴瘤或选自胃癌、肾癌和下列癌症的癌症：头和颈癌、oropharangeal、非小细胞肺癌(NSCLC)、子宫内膜癌、肝癌、非何杰金淋巴瘤和肺癌。

为避免疑问，术语“癌症”还包括但不限于下列癌症：表皮样瘤口：口腔、唇、舌、嘴、咽；心脏的：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管癌(鳞状细胞或表皮样的、未分化的小细胞、未分化的大细胞、腺癌)、肺泡(支气管癌)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤型错构瘤、间皮瘤；胃肠的：食道(鳞状细胞癌、喉癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰(导管癌、胰岛素瘤、胰升糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤)、小肠或small intestines(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠或large intestines(腺癌、小管腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)、结肠、结肠-直肠、结肠直肠的；直肠、泌尿生殖道：肾(腺癌、肾母细胞瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、***(腺癌、肉瘤)、睾丸(***瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、恶性的畸胎瘤、绒毛膜癌、肉瘤、***癌、纤维瘤、纤维腺瘤、良性间皮瘤、脂肪瘤)；肝：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞性腺瘤、血管瘤、胆道；骨：骨源性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、osteochronfroma(骨软骨性外生骨疣(osteocartilaginous exostoses))、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨肌瘤样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经***：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜(脑脊膜瘤、脑脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、室鼓膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤、脊髓神经纤维瘤、脑脊膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)、子宫颈(***、肿瘤性子宫颈非典型增生)、卵巢(卵巢癌[浆液囊肿腺癌、粘质腺癌、未分类癌]、颗粒细胞和卵泡膜细胞肿瘤、卵巢塞-莱二氏细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、***(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎横纹肌肉瘤)、输卵管(癌)、***；血液的：血(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性淋巴性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓发育异常综合征)、何杰金病、非何杰金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]毛细胞；淋巴疾病；皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、角化棘皮瘤、肿块发育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣、甲状腺：***状甲状腺癌、滤泡性甲状腺癌；甲状腺髓样癌、未分化的甲状腺癌、2A型多发性内分泌瘤病、2B型多发性内分泌瘤病、家族性甲状腺髓质癌、嗜铬细胞瘤、副神经节瘤；和肾上腺：神经母细胞瘤。由此，本文提供的术语“癌细胞”包括受上述任一病症折磨的细胞。

在一些实施方案中，本发明的化合物用于治疗癌症，如结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌和肺癌；和脊髓增生病，如真性红细胞增多、血小板增多、带有骨髓纤维化的髓样化生、慢性粒性白血病、慢性骨髓单核细胞性白血病、嗜酸细胞增多综合征、青少年慢性骨髓单核细胞性白血病和***肥大细胞病。

在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗造血功能障碍，特别是急性髓性白血病(AML)、慢性粒性白血病(CML)、急性早幼粒细胞白血病(APL)和急性淋巴细胞性白血病(ALL)。

神经变性疾病的实例包括但不限于阿尔茨海默氏症。

本发明的另一方面提供治疗或减轻选自增殖或过度增殖疾病或神经变性疾病的疾病的严重程度的方法，包括对有需要的对象施用有效量的化合物或包含化合物的可药用组合物。

在某些实施方案中，化合物或可药用组合物的“有效量”是有效治疗所述疾病的量。根据本发明的方法的化合物和组合物可以使用有效治疗或减轻所述疾病严重程度的任何量和任何给药途径给药。

在一些实施方案中，所述疾病是蛋白质-激酶介导病症。在一些实施方案中，所述疾病是PLK-介导疾病。

本文所用的术语“蛋白激酶-介导病症”是指蛋白激酶在其中起到一定作用的任何疾病或其它有害症状。此类症状包括但不限于自身免疫性疾病、炎性疾病、增殖和过度增殖疾病、免疫介导疾病、骨病、代谢病、神经和神经变性疾病、心血管病、激素相关疾病、过敏症、哮喘和阿尔茨海默氏症。

本文所用的术语“PLK-介导病症”是指PLK在其中起到一定作用的任何疾病或其它有害症状。此类症状包括但不限于，增殖或过度增殖疾病或神经变性疾病。

在本发明的另一方面中，提供可药用组合物，其中这些组合物包含本文所述的任何化合物，并任选包含可药用载体、辅助剂或赋形剂。

在某些实施方案中，这些组合物任选进一步包含一种或多种附加治疗剂。

例如，化疗剂或其它抗增殖剂可以与本发明的化合物组合以治疗增殖性疾病和癌症。

已知化疗剂的实例包括但不限于GleevecTM、阿霉素、***、长春新碱、环磷酰胺、氟脲嘧啶、托泊替康、红豆杉醇、干扰素和铂衍生物。

也可以与本发明的抑制剂组合的其它药剂实例包括但不限于：阿尔茨海默氏症治疗剂，如

和

帕金森氏症治疗剂，如L-DOPA/卡比多巴、恩他卡朋、罗吡尼洛、普拉克索、溴隐亭、培高利特、trihexephendyl和金刚胺；多发性硬化(MS)治疗剂，如β干扰素(例如，

和

)、

和米托蒽醌；哮喘治疗剂，如舒喘宁和

精神***症治疗剂，如再普乐、理思必妥、喹硫平和氟哌啶醇；抗炎药，如皮质激素类、TNF阻断药、IL-1RA、咪唑硫嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调节和免疫抑制剂，如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、吗替麦考酚酯、干扰素、皮质激素、环磷酰胺、咪唑硫嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥药、离子通道阻断剂、利鲁唑和抗帕金森病药物；心血管病治疗剂，如β-阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻断剂和他汀类药物；肝病治疗剂，如皮质激素、消胆胺、干扰素和抗病毒剂；血液病治疗剂，如皮质激素、抗白血病药和生长因子；和免疫缺陷病治疗剂，如丙种球蛋白。

如本文所述，本发明的可药用组合物另外包含可药用载体、辅助剂或赋形剂，其如本文中所用，包括适于所需特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂或其它液体赋形剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等等。Remington′sPharmaceutical Sciences，第16版，E.W.Martin(Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1980)公开了用于配制可药用组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除非任何传统载体介质与本发明的化合物不相容，如附带产生任何不合意的生理作用或另外以有害方式与该可药用组合物的任何其它组分相互作用，否则其使用被认为在本发明的范围内。

可充当可药用载体的材料的一些实例包括但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白，如人血清清蛋白，缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、羊毛脂、糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉类，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油类，如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和豆油；二醇类；如丙二醇或聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液，以及其它无毒相容性润滑剂，如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，且着色剂、释放剂、涂布剂、甜味剂、芳香剂和香料、防腐剂和抗氧化剂也可根据配方设计师的判断存在于该组合物中。

蛋白激酶抑制剂或其药用盐可配制成施用于动物或人的药物组合物。包含有效治疗或预防蛋白激酶介导病症的量的蛋白质抑制剂和可药用载体的这些药物组合物是本发明的另一实施方案。在一些实施方案中，所述蛋白激酶介导病症是PLK-介导的病症。

治疗所需的化合物的确切量随对象、随对象的物种、年龄和一般状况、感染严重程度、特定药剂、其给药模式等而变。本发明的化合物优选以易于给药和剂量均匀的单位剂型配制。本文所用的术语“单位剂型”是指适合治疗的患者的药剂的物理分立单位。但是，要理解的是，由主治医师在合理医学判断范围内决定本发明的化合物和组合物的总日用量。任何特定患者或有机体的具体有效剂量取决于多种因素，包括治疗的病症和该病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径和所用具体化合物的***率；治疗持续时间；与所用具体化合物联合或同时使用的药物，以及医疗领域中公知的类似因素。本文所用的术语“患者”是指动物，优选哺乳动物，最优选人。

本发明的可药用组合物可以根据治疗的感染的严重程度经口、经直肠、肠道外、脑池内、叶鞘内、腹膜内、局部(如通过粉剂、油膏或滴剂)、经颊、以口腔或鼻喷雾形式等施用于人和其它动物。在某些实施方案中，本发明的化合物可以经口或肠道外以每天大约0.01毫克/公斤至大约50毫克/公斤，优选大约1毫克/公斤至大约25毫克/公斤对象体重的剂量每天一次或多次给药，以获得所需治疗效果。在一个优选实施方案中，本发明的化合物经口给药。

口服用的液体剂型包括但不限于，可药用乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，该液体剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢化糠基醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇的脂肪酸酯；以及它们的混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括辅助剂，如润湿剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、芳香剂和香料。

可注射制剂，例如无菌可注射含水或油性悬浮液可以根据已知技术使用合适的分散或润湿剂和悬浮剂配制。该无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠道外可用稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳状液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可用的可接受的赋形剂和溶剂包括水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，常规上使用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和不挥发油，包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯。此外，在可注射制剂中使用脂肪酸，如油酸。

可注射配制剂可以例如通过在使用之前经细菌截留过滤器过滤或通过掺入可溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌。

为了延长本发明的化合物的作用，通常合意的是减缓该化合物从皮下或肌肉注射起的吸收。这可以使用具有差水溶性的结晶或非晶材料的液体悬浮液实现。所述化合物的吸收速率随之取决于其溶解速率，这又可能取决于晶体大小和结晶形式。或者，通过将该化合物溶解或悬浮在油赋形剂中来实现肠道外给药的化合物形式的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物，如聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成该化合物的微胶囊基质来制造可注射储备(depot)形式。根据化合物/聚合物比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物释放速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也通过将该化合物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储备可注射制剂。

直肠或***给药用的组合物优选是可通过将本发明的化合物与在环境温度下是固体但在体温下是液体并因此在直肠或***腔内熔融并释放该活性化合物的合适的无刺激赋形剂或载体，如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合而制备的栓剂。

口服用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性可药用赋形剂或载体，如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下物质混合a)填料或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***树胶，c)湿润剂，如甘油，d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，如石蜡，f)吸收促进剂，如季铵化合物，g)润湿剂，例如十六烷醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、及其混合物。在胶囊、片剂或丸剂的情况下，剂型也可以包含缓冲剂。

也可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇之类的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填料。片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用衣料和壳，如肠溶衣料和制药领域中公知的其它衣料制备。它们可任选含有乳浊剂，并且也可以具有任选以缓释方式仅在或优先在肠道的特定部位释放活性化合物的组成。可用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。也可以使用类似类型的固体组合物作为使用如乳糖或奶糖以及高分子聚乙二醇之类的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中的填料。

活性化合物也可以是含有一种或多种上述赋形剂的微囊化形式。片剂、糖锭剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用衣料和壳，如肠溶衣料、释放控制衣料和制药领域中公知的其它衣料制备。在这类固体剂型中，该活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂，如蔗糖、乳糖或淀粉混合。这类剂型也可以如一般实践那样包含惰性稀释剂以外的附加物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，该剂型也可以包含缓冲剂。它们可任选含有乳浊剂，并且也可以具有任选以缓释方式仅在或优先在肠道的特定部位释放活性化合物的组成。可用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。

本发明的化合物的局部或经皮给药用的剂型包括油膏、糊、霜、洗液、凝胶、粉剂、溶液、喷剂、吸入剂或贴膏。将活性组分在无菌条件下与可药用载体和任何所需防腐剂或缓冲剂按需要混合。眼科配制剂、耳药水和滴眼剂也被认为在本发明的范围内。另外，本发明考虑使用经皮贴膏，其具有向身体受控输送化合物的额外优点。这类剂型可通过将该化合物溶解或分配在适当介质中来制造。也可以使用吸收增强剂以提高该化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将该化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制该速率。

除本发明的化合物外，在组合物中也可以使用本发明的化合物的可药用衍生物或前药以治疗或预防上述病症。

本发明的化合物也可以以可药用衍生物形式存在。

“可药用衍生物”是在给予需要的患者后能够直接或间接提供如本文所述的化合物或其代谢物或残留物的加合物或衍生物。可药用衍生物的实例包括但不限于，酯和这类酯的盐。

“可药用衍生物或前药”是指在给予接受者后能够直接或间接提供本发明的化合物或其抑制活性代谢物或残留物的本发明的化合物的任何可药用酯、酯的盐或其它衍生物。特别有利的衍生物或前药是在将这类化合物施用于患者时提高本发明的化合物的生物利用率(例如通过使口服化合物更易吸收到血液中)或相对于母体物种提高母体物类向生物隔室(例如脑或淋巴***)的输送的那些。

本发明的化合物的可药用前药包括但不限于，酯、氨基酸酯、磷酸酯、金属盐和磺酸酯。

可用在这些药物组合物中的可药用载体包括但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白，如人血清清蛋白，缓冲物质，如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯基吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

本发明的组合物可以经口、肠道外、经吸入喷雾剂、局部、直肠、经鼻、经颊、***或经由植入贮库(reservoir)给药。本文所用的术语“肠道外”包括但不限于皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输液技术。该组合物优选经口、腹膜内或静脉内给药。

本发明的组合物的无菌可注射形式可以是含水或油性悬浮液。可以根据本领域已知的技术使用合适的分散或润湿剂和悬浮剂配制这些悬浮液。该无菌可注射制剂也可以是在无毒的肠道外可用稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可用的可接受的赋形剂和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，常规上使用无菌不挥发油作为溶剂或悬浮介质。可以使用任何温和不挥发油，包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯。此外，脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，如天然可药用油，如橄榄油或蓖麻油，尤其是以它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液也可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或可药用剂型，包括乳状液和悬浮液的配制中常用的类似分散剂。其它常用的表面活性剂，如吐温、司班和其它乳化剂，或可药用固体、液体或其它剂型的制造中常用的生物相容性增强剂也可用于配制用途。

本发明的药物组合物可以以任何可口服剂型经口给药，包括但不限于，胶囊剂、片剂、水悬浮液或溶液。在口服用片剂的情况下，常用载体包括但不限于，乳糖和玉米淀粉。也通常添加润滑剂，如硬脂酸镁。为了以胶囊形式口服，可用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要口服使用含水悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂合并。如果需要，也可以加入某些甜味剂、增香剂和/或着色剂。

或者，本发明的药物组合物可以以直肠给药用的栓剂形式给药。这些可以通过将该试剂与在室温下是固体但在直肠温度下是液体并因此在直肠中熔融以释放该药物的合适的无刺激赋形剂混合来制备。这类材料包括但不限于，可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药物组合物也可以局部给药，尤其是在治疗目标包括局部给药易达的区域或器官时，包括眼病、皮肤病或下肠道病。容易针对各区域或器官制备合适的局部制剂。

下肠道的局部给药可以以直肠栓剂(见上文)或合适的灌肠剂实现。也可以使用局部经皮贴膏。

为了局部给药，该药物组合物可以配制在含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分的合适的油膏中。本发明的化合物的局部给药用载体包括但不限于，矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，该药物组合物可以配制在含有悬浮或溶解在一种或多种可药用载体中的活性组分的合适的洗液或霜中。合适的载体包括但不限于，矿物油、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、吐温60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。

为了眼用，该药物组合物可以配制成在等渗的pH调节无菌盐水中的微粉化悬浮剂，或优选配制成在等渗的pH调节无菌盐水中的溶液，含或不含防腐剂，如苄基alkonium氯化物。或者，为了眼用，该药物组合物可以配制在油膏，如矿脂中。

本发明的药物组合物也可以通过鼻气雾剂或吸入给药。这类组合物根据药物配制领域公知的技术制备并且可以使用苄醇或其它合适的防腐剂、用于提高生物利用率的吸收促进剂、氟烃和/或其它传统增溶或分散剂以在盐水中的溶液形式制备。

可以与载体材料结合产生单剂型的蛋白激酶抑制剂的量随治疗的宿主、特定给药模式而变。优选，应配制该组合物以便向接受这些组合物的患者施用0.01至100毫克/公斤体重/天抑制剂的剂量。

还应该理解，用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案取决于多种因素，包括所用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、***速率、药物组合、治疗医师的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。抑制剂的量还取决于该组合物中的特定化合物。

根据另一实施方案，本发明提供治疗或预防蛋白激酶介导的病症(在一些实施方案中，PLK-介导的病症)的方法，包括对患者施用上述药物组合物之一的步骤。本文所用的术语“患者”是指动物，包括人。

在一些实施方案中，所述方法用于治疗或预防选自增殖性疾病，如癌症，神经变性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病和免疫介导疾病的病症。在一些实施方案中，所述方法用于治疗或预防选自癌症，如乳腺癌、结肠癌、***癌、皮肤癌、胰癌、脑癌、泌尿生殖道癌、淋巴***癌、胃癌、喉癌和肺癌，包括肺腺癌和小细胞肺癌；中风、糖尿病、骨髓瘤、肝大、心肥大、阿尔茨海默氏症、囊性纤维化病和病毒病、或上述任何具体疾病的病症。

本发明的化合物可以一般通过本领域技术人员已知的方法制备。这些化合物可以通过已知方法分析，包括但不限于LCMS(液相色谱质谱法)和NMR(核磁共振)。本发明的化合物也可以根据这些实施例测试。应该理解的是，下示具体条件仅是实例，且不是要限制可用于制造、分析或测试本发明的化合物的条件的范围。相反，本发明还包括本领域技术人员已知用于制造、分析和测试本发明的化合物的条件。

实施例

本文所用的术语“Rt(min)”是指与该化合物相关的以分钟计的HPLC停留时间。除非另行指明，用于获得所报道的停留时间的HPLC方法如下：

柱：ACE C8柱，4.6x150mm

梯度：0-100％乙腈+甲醇50∶50(20mM Tris磷酸酯)

流速：1.5毫升/分钟

检测：225nm。

在以单MS模式运行的具有电喷雾电离的MicroMass QuattroMicro质谱仪上分析质谱样品。将样品引入使用色谱法的质谱仪中。

使用Bruker DPX 400仪器在400MHz下记录¹H-NMR谱。

如下制备和分析下列式I的化合物。

实施例1：(R)-N-环丙基-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

步骤1：(1R，3S)-3-羟基环戊基氨基甲酸叔丁酯

将二碳酸二-叔丁基酯(432毫克，1.98毫摩尔)在0℃添加到(1S，3R)-3-氨基环戊醇(200毫克，1.98毫摩尔)和三乙胺(0.662毫升，4.75毫摩尔)在二氯甲烷(20毫升)中的溶液中。完全加料后，使反应混合物升温至室温并搅拌18小时。在真空下浓缩该反应混合物并在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以产生所需化合物(380毫克，95％收率)。

¹H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.45(9H，s)，1.64(1H，br d)，1.78-1.96(4H，m)，1.96-2.11(2H，m)，4.05(1H，br s)，4.39(1H，br s)。

步骤2：(R)-3-氧代环戊基氨基甲酸叔丁酯

在0℃将戴斯-马丁氧化剂(961毫克，2.27毫摩尔)逐份添加到(1R，3S)-3-羟基环戊基氨基甲酸叔丁酯(380毫克，1.89毫摩尔)在二氯甲烷(10毫升)中的溶液中。完全加料后，将反应混合物在0℃搅拌1小时，然后使其升温至室温并搅拌18小时。该反应混合物用50/50的碳酸氢钠饱和水溶液和硫代硫酸钠饱和水溶液猝灭。水层用二氯甲烷萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以产生标题化合物(316毫克，84％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.47(9H，s)，1.01-1.13(1H，m)，2.13(1H，dd)，2.25(1H，m)，2.31-2.44(2H，m)，2.65(1H，dd)，4.24(1H，br s)，4.62(1H，br s)。

步骤3：(R)-3，3-二氟环戊基氨基甲酸叔丁酯

在0℃将[双(2-甲氧基乙基)氨基硫三氟化物，0.574毫升，3.12毫摩尔]逐滴添加到(R)-3-氧代环戊基氨基甲酸叔丁酯(310毫克，1.56毫摩尔)在二氯甲烷(8毫升)中的溶液中。完全加料后，使反应混合物升温至室温并搅拌18小时。将反应混合物缓慢倒入冰冷的碳酸氢钠饱和水溶液中。水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以产生标题化合物(226毫克，66％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ1.46(9H，s)，1.61-1.74(1H，m)，1.90-2.32(4H，m)，2.52(1H，dq)，4.18(1H，br s)，4.65(1H，br s)。

步骤4：(R)-3，3-二氟环戊胺盐酸盐

在0℃将盐酸(在二氧杂环己烷中4M，60毫升)添加到(R)-3，3-二氟环戊基氨基甲酸叔丁酯(4.61克，20.8毫摩尔)在二氧杂环己烷(40毫升)中的溶液中。完全加料后，使反应混合物升温至室温并搅拌2小时。在真空中除去溶剂且残留物用二***研制以提供灰白色固体状的标题化合物(2.68克，82％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.76-1.88(1H，m)，2.10-2.40(4H，m)，2.45-2.60(1H，m)，3.68(1H，五重峰)，8.33(3H，s)。

步骤5：1，3，5-三((R)-3，3-二氟环戊基)-1，3，5-triazinane

将在乙醇(17毫升)中的(R)-3，3-二氟环戊胺盐酸盐(2.68克，17毫摩尔)冷却至0℃。加入氢氧化钠水溶液(2M，8.5毫升，17毫摩尔)，随后逐滴加入37％甲醛(1.38毫升，17毫摩尔)。完全加料后，将反应混合物在0℃搅拌15分钟，随后使其升温至室温并再搅拌1小时。通过过滤分离白色固体状的标题化合物(1.75克，77％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.60-1.75(3H，m)，1.90-2.15(9H，m)，2.18-2.43(6H，m)，3.11(3H，br s)，3.39(6H，br s)。

步骤6：(R)-3-(3，3-二氟环戊基氨基)-2，2-二甲基丙酸甲酯

在0℃将三氟甲磺酸(58微升，0.66毫摩尔)添加到1，3，5-三((R)-3，3-二氟环戊基)-1，3，5-triazinane(1.75克，4.38毫摩尔)和1-甲氧基-2-甲基-1-(三甲基甲硅烷氧基)丙烯(2.29克，13.14毫摩尔)在二氯甲烷(40毫升)中的溶液中。完全加料后，使反应混合物升温至室温并搅拌2小时。反应混合物用二氯甲烷稀释，用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供油状标题化合物(2.72克，88％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.05(6H，s)，1.30-1.56(3H，m)，1.72(1H，dq)，1.80-1.95(1H，m)，2.00-2.28(2H，m)，2.49(2H，dd)，3.09(1H，五重峰)，3.54(3H，s)。

步骤7：(R)-3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(3，3-二氟环戊基)氨基)-2，2-二甲基丙酸甲酯

将2，4-二氯-5-硝基嘧啶(2.18克，11.25毫摩尔)添加到在二氯甲烷(10毫升)中的(R)-3-(3，3-二氟环戊基氨基)-2，2-二甲基丙酸甲酯(2.65克，11.25毫摩尔)和碳酸氢钠(3.78克，44.98毫摩尔)与石油醚(40毫升)的混合物中。反应混合物在室温下搅拌18小时。反应混合物用二氯甲烷稀释并经硫酸镁干燥。滤出固体，再用二氯甲烷漂洗。使母液吸附在硅胶上并真空浓缩。残留物通过快速柱色谱法提纯以提供黄色固体状的标题化合物(2.74克，62％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.23(6H，s)，1.90-2.07(2H，m)，2.11-2.40(3H，m)，2.40-2.55(1H，m)，3.70(3H，s)，3.72-3.84(3H，m)，8.84(1H，s)；MS(ES+)393。

步骤8：(R)-2-氯-9-(3，3-二氟环戊基)-7，7-二甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-6(7H)-酮

将(R)-3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(3，3-二氟环戊基)氨基)-2，2-二甲基丙酸甲酯(2.74克，6.98毫摩尔)和铁粉(0.799克，14.31毫摩尔)在冰醋酸(30毫升)中的混合物加热至70℃2小时。热过滤反应混合物且滤饼进一步用乙酸洗涤。将母液真空浓缩。将残留物导出在甲醇在二氯甲烷中的15％溶液中并在用更多甲醇-二氯甲烷溶液冲洗下经硅胶垫过滤。滤液真空浓缩。残留物用甲醇研制并过滤固体以提供灰白色固体状的标题化合物(1.67克，72％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.30(6H，s)，1.89(1H，m)，2.03-2.23(3H，m)，2.30-2.44(1H，m)，2.48-2.64(1H，m)，3.36(2H，s)，5.52(1H，五重峰)，7.73(1H，s)，7.86(1H，s)；MS(ES+)331，(ES-)329。

步骤9：(R)-2-氯-9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-6(7H)-酮

将在矿物油中的60％氢化钠(0.210克，5.24毫摩尔)添加到(R)-2-氯-9-(3，3-二氟环戊基)-7，7-二甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-6(7H)-酮(1.65克，4.99毫摩尔)和甲基碘(0.34毫升，5.49毫摩尔)在二甲基乙酰胺(18毫升)中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌25分钟。向反应混合物中加入冰，并收集所得沉淀物和用水漂洗。固体在喷枪中真空干燥3小时。获得白色固体状的标题化合物(1.68克，98％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ1.09(6H，s)，1.87-2.22(3H，m)，2.22-2.48(3H，m)，3.19(3H，s)，3.49(2H，s)，5.26(1H，五重峰)，8.12(1H，s)。

MS(ES+)345。

步骤10：(R)-N-环丙基-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

将浓盐酸(52微升)添加到(R)-2-氯-9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-8，9-二氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-6(7H)-酮(100毫克，0.29毫摩尔)和4-氨基-N-环丙基-3-甲氧基苯甲酰胺(90毫克，0.44毫摩尔)在乙醇(1.4毫升)和水(5.2毫升)中的混合物中。将反应混合物加热至85℃并搅拌48小时。将反应混合物真空浓缩。将残留物溶解在乙酸乙酯中，用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供白色固体状的标题化合物(83毫克，56％收率)。

步骤11：甲磺酸盐形成

将(R)-N-环丙基-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺(83毫克，0.16毫摩尔)溶解在热(50℃)甲醇(4毫升)中并用甲磺酸(10.5微升，0.16毫摩尔)处理，该混合物减压蒸发并与二***共沸三次。残留物用醚研制并过滤以产生甲磺酸盐(69毫克，71％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.54-0.61(2H，m)，0.68-0.75(2H，m)，1.14(6H，d)，1.98-2.18(3H，m)，2.28-2.46(3H，m)，2.31(3H，s)，2.80-2.86(1H，m)，3.18(3H，s)，3.56(2H，s)，3.94(3H，s)，5.34(1H，dt)，7.49(1H，d)，7.54(1H，s)，8.03(1H，d)，8.05(1H，s)，8.41(1H，d)，9.03(1H，br s)。

MS(ES+)515，(ES-)513。

经由与实施例1中所述类似的程序制备本发明的其它式I的化合物。

实施例2：4-(9-((R)-3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-N-((1R，3R)-3-氟环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ1.10(6H，d)，1.55-2.40(12H，m)，3.20(3H，s)，3.45(2H，s)，3.95(3H，s)，4.45(1H，六重峰)，5.20(0.5H，s)，5.35(0.5H，s)，5.40(1H，五重峰)，7.45(1H，d)，7.50(1H，s)，7.80(1H，s)，8.05(1H，s)，8.25(1H，d)，8.35(1H，d)。

MS(ES+)561，(ES-)559。

实施例3：N-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-(9-((R)-3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ1.10(6H，d)，1.80-2.50(12H，m)，3.20(3H，s)，3.45(2H，s)，3.95(3H，s)，4.45(1H，六重峰)，5.40(1H，五重峰)，7.45(1H，d)，7.50(1H，s)，7.80(1H，s)，8.05(1H，s)，8.35(1H，d)，8.45(1H，d)。

MS(ES+)579，(ES-)577。

实施例4：(R)-N-环丙基-4-(9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

步骤1：1-甲酰基环丙烷羧酸甲酯

将环丙烷-1，1-二羧酸二甲酯(6.90毫升，50毫摩尔)溶解在二氯甲烷(100毫升)中并冷却至-78℃。经30分钟缓慢加入DIBAL(在DCM中1.0M，100毫升，100毫摩尔)。将反应混合物在-78℃搅拌6.5小时，随后用氯化铵饱和水溶液(16毫升)然后HCl(1.0M，20毫升)仔细处理。使该反应经周末升温至室温。滤出固体并用DCM洗涤。滤液用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，并减压除去溶剂(在室温下200毫巴)。粗产物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供所需化合物，其通过¹H NMR判断是在EtOAc/DCM/醚中的45％w/w溶液(3.295克)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.58-1.63(2H，m)，1.64-1.70(2H，m)，3.81(3H，s)，10.38(1H，s)。

步骤2：(R)-1-((3，3-二氟环戊基氨基)甲基)环丙烷羧酸甲酯

将1-甲酰基环丙烷羧酸甲酯(45％w/w，3.205克，11.26毫摩尔)和(R)-3，3-二氟环戊胺盐酸盐(1.774克，11.26毫摩尔)在0℃在氮气下溶解在二氯甲烷(20毫升)中。向该溶液中加入乙酸钠(0.923克，11.26毫摩尔)随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.46克，16.32毫摩尔)。使反应混合物升温至室温过夜。该反应混合物用碳酸氢钠饱和水溶液猝灭并在室温下再搅拌10分钟。水层用二氯甲烷萃取3次。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以产生所需化合物(2.631克，定量收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ0.79-0.82(2H，m)，1.25-1.29(2H，m)，1.55-1.61(1H，m)，1.82-2.08(4H，m)，2.12-2.39(2H，m)，2.67(2H，dd)，3.26(1H，五重峰)，3.65(3H，s)。

步骤3：(R)-1-(((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(3，3-二氟环戊基)氨基)甲基)环丙烷-羧酸甲酯

将2，4-二氯-5-硝基嘧啶(2.16克，11.15毫摩尔)添加到(R)-1-((3，3-二氟环戊基氨基)甲基)环丙烷羧酸甲酯(2.6克，11.15毫摩尔)和碳酸氢钠(3.75克，44.64毫摩尔)在二氯甲烷(15毫升)和石油醚(60毫升)中的混合物中。该反应混合物在室温下搅拌18小时。反应混合物用二氯甲烷稀释并经硫酸镁干燥。滤出固体，再用二氯甲烷漂洗。使母液吸附在硅胶上并真空浓缩。残留物通过快速柱色谱法提纯以提供黄色固体状的所需产物(3.974克，91％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ0.96-1.05(2H，m)，1.40-1.48(2H，m)，2.06-2.25(3H，m)，2.34-2.78(3H，m)，3.53(2H，dd)，3.59(3H，s)，4.04(1H，五重峰)，8.84(1H，s)。

MS(ES+)391。

步骤4：(R)-2′-氯-9′-(3，3-二氟环戊基)-8′，9′-二氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂]-6′(5′H)-酮

将(R)-1-(((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)(3，3-二氟环戊基)氨基)甲基)环丙烷-羧酸甲酯(3.90克，9.98毫摩尔)和铁粉(1.143克，20.46毫摩尔)在冰醋酸(50毫升)中的混合物加热至70℃2小时。热过滤反应混合物且滤饼进一步用乙酸洗涤。将母液真空浓缩。将残留物导出在甲醇在二氯甲烷中的15％溶液中并在用更多甲醇-二氯甲烷溶液冲洗下经硅胶途径过滤。滤液真空浓缩。残留物用甲醇研制并过滤固体以提供浅粉色固体状的所需化合物(1.953克，60％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ0.87-0.95(2H，m)，1.14-1.20(2H，m)，1.75-1.86(1H，m)，1.92-2.40(5H，m)，3.48(2H，dd)，5.01(1H，五重峰)，7.80(1H，s)，9.92(1H，s)。

MS(ES+)329，(ES-)327。

步骤5：(R)-2′-氯-9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-8′，9′-二氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

]-6′(5′H)-酮

将在矿物油中的60％氢化钠(0.25克，6.23毫摩尔)添加到(R)-2′-氯-9′-(3，3-二氟环戊基)-8′，9′-二氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

]-6′(5′H)-酮(1.95克，5.94毫摩尔)和甲基碘(0.41毫升，6.53毫摩尔)在二甲基乙酰胺(20毫升)中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌25分钟。向反应混合物中加入冰。固体坠出(crash out)并滤出，用水漂洗。固体在喷枪中真空干燥3小时。获得浅粉色固体状的化合物(1.863克，92％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.70-0.73(2H，m)，0.90-0.96(2H，m)，1.77-1.92(1H，m)，2.00-2.45(5H，m)，3.17(3H，s)，3.59(2H，dd)，4.89(1H，五重峰)，8.12(1H，s)。

MS(ES+)343。

步骤6：(R)-N-环丙基-4-(9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

e]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

将浓盐酸(45微升)添加到(R)-2′-氯-9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-8′，9′-二氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

]-6′(5′H)-酮(100毫克，0.29毫摩尔)和4-氨基-N-环丙基-3-甲氧基苯甲酰胺(90毫克，0.44毫摩尔)在乙醇(1.4毫升)和水(5.2毫升)中的混合物中。将反应混合物加热至85℃并搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩。残留物用乙酸乙酯溶解，用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供白色固体状的所需化合物(49毫克，33％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.53-0.60(2H，m)，0.67-0.75(4H，m)，0.82-0.95(2H，m)，1.84-1.91(1H，m)，2.04-2.31(4H，m)，2.39-2.51(1H，m)，2.81(1H，m)，3.17(3H，s)，3.51(2H，dd)，3.93(3H，s)，5.00(1H，五重峰)，7.44(1H，d)，7.47(1H，s)，7.80(1H，s)，8.04(1H，s)，8.29-8.34(2H，m)。

MS(ES+)513，(ES-)511。

实施例5：N-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-(9′-((R)-3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂

e]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

分析该化合物为游离碱。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.65-0.73(2H，m)，0.82-0.96(2H，m)，1.80-1.93(2H，m)，2.04-2.30(8H，m)，2.40-2.56(2H，m)，3.17(3H，s)，3.52(2H，dd)，3.95(3H，s)，4.43(1H，dt)，5.01(1H，五重峰)，7.47(1H，d)，7.50(1H，s)，7.82(1H，s)，8.05(1H，s)，8.34(1H，d)，8.41(1H，d)。

MS(ES+)577，(ES-)575。

实施例6：4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺

步骤1：(S)-2-(三氟甲基磺酰氧基)丁酸叔丁酯

用2，6-二甲基吡啶(2.0毫升)逐滴处理冷却至0℃的(s)-2-羟基丁酸叔丁酯(1.0克，6.242毫摩尔)在二氯甲烷(30毫升)中的溶液。随后用经2-3分钟添加的三氟甲磺酸酐(3.346克，1.995毫升，11.86毫摩尔)逐滴处理所得溶液。将反应混合物在0℃搅拌40分钟，随后倒在盐水(70毫升)和1M HCl(35毫升)的混合物上，进一步用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥并在室温下减压浓缩以产生浅棕色油(2.6克)。将该粗混合物再溶解在二氯甲烷中，并进一步用饱和盐水和1MHCl(2x 20毫升)的2∶1溶液和随后用盐水洗涤，经硫酸镁干燥并在室温下浓缩以产生浅棕色油(1.772克，97％收率)。

¹H NMR(CDCl3，400MHz)：δ1.08(3H，t)，1.53(9H，s)，2.00-2.09(2H，m)，4.97(1H，dd)。

步骤2：(R)-2-((RR)-3，3-二氟环戊基氨基)丁酸叔丁酯

在水(4毫升)中的(R)-3，3-二氟环戊胺盐酸盐(1.888克，11.98毫摩尔)用碳酸钾碱化并用二氯甲烷萃取(15次)(总计50毫升)。该溶液经硫酸镁干燥，过滤并添加到(S)-2-(三氟甲基磺酰氧基)丁酸叔丁酯(1.75克，5.988毫摩尔)上。加入二甲亚砜(2毫升)，该混合物在室温下在280毫巴下浓缩(降至8毫升体积)。将所得溶液转移到玻璃压力管中并在60℃加热过夜。所得混合物用乙酸乙酯稀释并用碳酸氢盐饱和水溶液、稀盐水洗涤，并经硫酸镁干燥。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供无色油状的所需化合物(1.17克，74％收率)。

¹H NMR(CDCl3，400MHz)：δ0.94(3H，t)，1.49(9H，s)，1.54-1.67(3H，m)，1.82-2.07(3H，m)，2.21-2.40(2H，m)，3.00(1H，t)，3.22(1H，五重峰)；MS(ES+)264。

步骤3：(R)-2-((R)-3，3-二氟环戊基氨基)丁酸甲酯

将(R)-2-((R)-3，3-二氟环戊基氨基)丁酸叔丁酯(1.0克，3.798毫摩尔)溶解在甲醇(70毫升)中并冷却至0℃。所得混合物用HCl气体饱和，随后在室温下搅拌3小时。将反应混合物升温至40℃90分钟，随后减压浓缩。使残留物在DCM和NaHCO₃水溶液之间分配。水相用DCM萃取三次，经硫酸镁干燥并减压浓缩以提供无色油状的所需产物(645毫克，78％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ0.95(3H，t)，1.57-1.74(3H，m)，1.83-2.09(3H，m)，2.19-2.40(2H，m)，3.15(1H，t)，3.21(1H，五重峰)。

MS(ES+)222。

步骤4：(R)-2-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)((R)-3，3-二氟环戊基)氨基)丁酸甲酯

将2，4-二氯-5-硝基嘧啶(603.3毫克，3.110毫摩尔)在密封管中添加到(R)-2-((R)-3，3-二氟环戊基氨基)丁酸甲酯(688毫克，3.110毫摩尔)和碳酸氢钠(1.045克，12.44毫摩尔)在二氯乙烷(5毫升)和石油醚(12毫升)中的混合物中。将该反应混合物在60℃加热4天。该反应混合物用二氯乙烷稀释并用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物通过快速柱色谱法提纯以提供黄色固体状的所需产物(698毫克，59％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ1.05(3H，t)，1.98-2.04(3H，m)，2.26-2.66(5H，m)，3.71-3.76(1H，m)，3.80(3H，s)，3.90(1H，五重峰)，8.76(1H，s)。

MS(ES+)379。

步骤5：(R)-2-氯-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-7，8-二氢蝶啶-6(5H)-酮

将(R)-2-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)((R)-3，3-二氟环戊基)氨基)丁酸甲酯(677毫克，1.787毫摩尔)和铁粉(179.7毫克，3.217毫摩尔)在冰醋酸(8毫升)中的混合物加热至70℃1小时。热过滤反应混合物且滤饼进一步用乙酸洗涤。将母液真空浓缩。将残留物溶解在甲醇在二氯甲烷中的15％溶液中并在用更多甲醇-二氯甲烷溶液冲洗下经硅胶途径过滤。将母液真空浓缩。残留物用乙醇研制并过滤固体以提供白色固体状的所需化合物(348毫克，61％收率)。

¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ0.76(3H，t)，1.66-1.86(2H，m)，2.03-2.24(3H，m)，2.33-2.50(2H，m)，2.67-2.82(1H，m)，4.22-4.31(2H，m)，7.61(1H，s)，10.89(1H，s)。

MS(ES+)317，(ES-)315。

步骤6：(R)-7-氯-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶

将叔丁醇钾(在THF中1M，697.7微升，0.6977毫摩尔)在-20℃添加到(R)-2-氯-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-7，8-二氢蝶啶-6(5H)-酮(170毫克，0.5367毫摩尔)在THF(3毫升)中的溶液中。在完全加料后，将该反应混合物升温至0℃ 25分钟。将反应混合物在-40℃冷却并加入氯磷酸二乙酯(120.4毫克，100.8微升，0.6977毫摩尔)。完全加料后，将反应混合物升温至室温45分钟。将所得混合物逐滴添加到在THF中的1M肼(8.050毫升，8.050毫摩尔)中并将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，在DCM和NaHCO₃饱和水溶液之间分配。将有机相干燥(MgSO₄)并真空浓缩以提供浅色油(200毫克)。将该粗制油溶解在原甲酸三甲酯(2.847克，2.935毫升，26.83毫摩尔)中并加热至110℃ 1小时。将反应混合物真空浓缩并在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供无色固体状的化合物(0.143克，78％收率)。

¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ0.85(3H，t)，1.83-1.95(1H，m)，2.04-2.39(4H，m)，2.48-2.83(3H，m)，4.43(1H，五重峰)，5.19(1H，dd)，8.33(1H，s)，8.68(1H，s)。

MS(ES+)341。

步骤7：4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺

将浓盐酸(36□升)添加到(R)-7-氯-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶(70毫克，0.21毫摩尔)和4-氨基-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺(59.84毫克，0.31毫摩尔)在乙醇(0.9毫升)和水(3.6毫升)中的混合物中。将反应混合物加热至95℃并搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩。残留物用乙酸乙酯溶解，用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供白色固体状的所需化合物(82毫克，80％收率)。

分析该化合物为甲磺酸盐。

¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ0.71(3H，t)，1.11(3H，t)，1.79-2.34(6H，m)，2.35(3H，s)，2.40-2.50(1H，m)，2.64-2.82(1H，m)，3.27-3.34(2H，m)，3.91(3H，s)，4.52(1H，quin)，5.35(1H，t)，7.51(1H，d)，7.56(1H，s)，7.96(1H，d)，8.44(1H，t)，8.61(1H，s)，8.89(1H，br s)，9.30(1H，s)。

MS(ES+)499，(ES-)497。

实施例7：N-环丙基-4-((R)-5-((R)-3，3-二氟环戊基)-4-乙基-4，5-二氢-[1，2，4]***并[4，3-f]蝶啶-7-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

分析该化合物为甲磺酸盐。

¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ0.55-0.60(2H，m)，0.65-0.75(5H，m)，1.76-2.30(6H，m)，2.33(3H，s)，2.44-2.51(1H，m)，2.65-2.80(1H，m)，2.80-2.90(1H，m)，3.90(3H，s)，4.52(1H，quin)，5.34(1H，q)，7.48(1H，d)，7.50(1H，s)，7.98(1H，d)，8.40(1H，d)，8.61(1H，s)，8.77(1H，br s)，9.30(1H，s)。

MS(ES+)511，(ES-)509。

实施例8：4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢蝶啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺

步骤1：(R)-2-氯-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-7，8-二氢蝶啶-6(5H)-酮

将在矿物油中的60％氢化钠(22.41毫克，0.56毫摩尔)添加到(R)-2-氯-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-7，8-二氢蝶啶-6(5H)-酮(169毫克，0.53毫摩尔)和甲基碘(36.54微升，0.59毫摩尔)在二甲基乙酰胺(1.7毫升)中的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中加入冰。固体坠出并滤出，用水漂洗。固体在喷枪中在真空下在70℃干燥。获得白色固体状的化合物(165毫克，094％收率)。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.69-0.76(3H，m)，1.65-1.87(2H，m)，2.07-2.37(3H，m)，2.38-2.82(3H，m)，3.24(3H，s)，4.31(1H，m)，4.43(1H，m)，7.92(1H，s)。

MS(ES+)331。

步骤2：4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢蝶啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺(I-8)

将浓盐酸(42微升)添加到(R)-2-氯-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-7，8-二氢蝶啶-6(5H)-酮(80毫克，0.24毫摩尔)和4-氨基-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺(70.47毫克，0.36毫摩尔)在乙醇(1.2毫升)和水(4.8毫升)中的混合物中。将反应混合物加热至95℃并搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩。残留物用二氯甲烷溶解，用碳酸氢钠饱和水溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。残留物在硅胶上通过快速柱色谱法提纯以提供白色固体状的所需化合物(89毫克，75％收率)。

分析该化合物为甲磺酸盐。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.75(3H，t)，1.13(3H，t)，1.70-2.20(6H，m)，2.30(3H，s)，2.40-2.50(2H，m)，3.23(3H，s)，3.30(2H，五重峰)，3.91(3H，s)，4.39(1H，m)，4.50(1H，m)，7.51(1H，d)，7.57(1H，s)，7.76(1H，d)，8.87(1H，br s)，8.47(1H，m)，9.11(1H，br s)。

MS(ES+)489，(ES-)487。

实施例9：N-环丙基-4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢蝶啶-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺

分析该化合物为甲磺酸盐。

¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)：δ0.55-0.59(2H，m)，0.70-0.77(5H，m)，1.75-2.48(7H，m)，2.30(3H，s)，2.50-2.70(1H，m)，3.22(3H，s)，3.90(3H，d)，4.30-4.44(1H，m)，4.53-4.57(1H，m)，7.50(1H，d)，7.57(1H，s)，7.69-7.75(2H，m)，8.47(1H，s)，9.57(1H，br s)。

MS(ES+)501，(ES-)499。

实施例10：PLK检验

使用下列检验法作为人PLK激酶抑制剂评测本发明的化合物。

PLK1抑制检验法：

使用放射性-磷酸盐并入检验法检查化合物的抑制PLK1的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.1％ BSA和2mM DTT的混合物中进行检验。最终底物浓度为150μM(350μM用于测定小于1nM的值)[γ-33P]ATP(115mCi 33P ATP/毫摩尔ATP，AmershamPharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和300μM(450μM用于测定小＜1nM的值)肽(KKKISDELMDATFADQEAK)(SEQ ID NO：1)。在25℃在4nM(1nM用于测定小于1nM的值)PLK1存在下进行检验。制备含有除ATP和相关受试化合物外的其它所有上列试剂的检验储备缓冲液。将30微升该储液置于96孔板中，随后一式两份地加入2微升含连续稀释的受试化合物的DMSO储液(通常从10μM的最终浓度开始，2倍连续稀释度)(最终DMSO浓度5％)。该板在25℃预培养10分钟并通过添加8微升[γ-33P]ATP(最终浓度150μM(350μM用于测定小于1nM的值)))来引发反应。

在90分钟(240分钟用于测定小于1nM的值)后通过添加100微升0.14M磷酸来终止反应。在加入125微升该停止的检验混合物之前，用100微升0.2M磷酸预处理multiscreen磷酸纤维素过滤器96孔板(Millipore，Cat.No.MAPHN0B50)。该板用200微升0.2M磷酸洗涤4次。干燥后，在闪烁计数(1450 Microβ Liquid ScintillationCounter，Wallac)之前将100微升Optiphase‘SuperMix’闪烁液(liquidscintillation cocktail)(Perkin Elmer)添加到孔中。

在从所有数据点中除去平均背景值后，使用Prism软件包(用于Macintosh的GraphPad Prism版本3.0cx，GraphPad Software，San DiegoCalifornia，USA)由初始速率数据的非线性回归分析计算Ki(app)数据。

总体上，本发明的化合物有效抑制PLK1。下列化合物在放射性并入检验中表现出小于1nM的Ki：I-2、I-3、I-6、I-7、I-8、I-9。下列化合物在放射性并入检验中表现出1nM至10nM的Ki：I-1、I-4、I-5。

PLK2抑制检验法：

使用放射性-磷酸盐并入检验法检查化合物的抑制PLK2的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.1％BSA和2mM DTT的混合物中进行检验。最终底物浓度为200μM [γ-33P]ATP(57mCi 33PATP/毫摩尔ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和300μM 肽(KKKISDELMDATFADQEAK)(SEQ ID NO：1)。在25℃在25nM PLK2存在下进行检验。制备含有除ATP和相关受试化合物外的其它所有上列试剂的检验储备缓冲液。将30微升该储液置于96孔板中，随后一式两份地加入2微升含连续稀释的受试化合物的DMSO储液(通常从10μM的最终浓度开始，2倍连续稀释度)(最终DMSO浓度5％)。该板在25℃预培养10分钟并通过添加8微升[γ-33P]ATP(最终浓度200μM)来引发反应。

在90分钟后通过添加100微升0.14M磷酸来终止反应。在加入125微升该停止的检验混合物之前，用100微升0.2M磷酸预处理multiscreen磷酸纤维素过滤器96孔板(Millipore，Cat.no.MAPHN0B50)。该板用200微升0.2M磷酸洗涤4次。干燥后，在闪烁计数(1450 Microβ Liquid Scintillation Counter，Wallac)之前将100微升Optiphase‘SuperMix’闪烁液(Perkin Elmer)添加到孔中。

PLK3抑制检验法：

使用放射性-磷酸盐并入检验法检查化合物的抑制PLK3的能力。在25mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl₂和1mM DTT的混合物中进行检验。最终底物浓度为75μM[γ-33P]ATP(60mCi 33P ATP/毫摩尔ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和10μM肽(SAM68蛋白质Δ332-443)。在5nM PLK3(S38-A340)存在下在25℃进行检验。制备含有除ATP和相关受试化合物外的其它所有上列试剂的检验储备缓冲液。将30微升该储液置于96-孔板中，随后一式两份地加入2微升含连续稀释的受试化合物的DMSO储液(通常从10μM的最终浓度开始，2倍连续稀释度)(最终DMSO浓度5％)。该板在25℃预培养10分钟并通过添加8微升[γ-33P]ATP(最终浓度75μM)来引发反应。

在60分钟后通过添加100微升0.14M磷酸来终止反应。在加入125微升该停止的检验混合物之前，用100微升0.2M磷酸预处理multiscreen磷酸纤维素过滤器96孔板(Millipore，Cat.No.MAPHN0B50)。该板用200微升0.2M磷酸洗涤4次。干燥后，在闪烁计数(1450 Microβ Liquid Scintillation Counter，Wallac)之前将100微升Optiphase‘SuperMix’闪烁液(Perkin Elmer)添加到孔中。

PLK4抑制检验法：

使用放射性-磷酸盐并入检验法检查化合物的抑制PLK4的能力。在8mM MOPS(pH 7.5)、10mM MgCl₂、0.1％BSA和2mM DTT的混合物中进行检验。最终底物浓度为15μM[γ-33P]ATP(227mCi 33PATP/毫摩尔ATP，Amersham Pharmacia Biotech/Sigma Chemicals)和300μM肽(KKKMDATFADQ)(SEQ ID NO：2)。在25nM PLK4存在下在25℃进行检验。制备含有除ATP和相关受试化合物外的其它所有上列试剂的检验储备缓冲液。将30微升该储液置于96孔板中，随后一式两份地加入2微升含连续稀释的受试化合物的DMSO储液(通常从10μM的最终浓度开始，2倍连续稀释度)(最终DMSO浓度5％)。该板在25℃预培养10分钟并通过添加8微升[γ-33P]ATP(最终浓度15μM)来引发反应。

在180分钟后通过添加100微升0.14M磷酸来终止反应。在加入125微升该停止的检验混合物之前，用100微升0.2M磷酸预处理multiscreen磷酸纤维素过滤器96孔板(Millipore，Cat.No.MAPHN0B50)。该板用200微升0.2M磷酸洗涤4次。干燥后，在闪烁计数(1450 Microβ Liquid Scintillation Counter，Wallac)之前将100微升Optiphase‘SuperMix’闪烁液(Perkin Elmer)添加到孔中。

尽管我们已经描述了本发明的许多实施方案，但显而易见的是，可以改变我们的基础实施例以提供利用或包含本发明的化合物、方法和工艺的其它实施方案。因此，要认识到，由所附权利要求书确定本发明的范围。

Claims

1.式I的化合物：

其中

R¹是

R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的，并任选被1或2个卤素原子取代；

X是O且R²是-CH₃；或X是NR⁵，且R²和R⁵与和它们连接的原子一起形成1，2，4-***；

n是0或1。

2.权利要求1的化合物，其中X是O且R²是-CH₃。

3.权利要求1的化合物，其中X是NR⁵，且R²和R⁵与和它们连接的原子一起形成1，2，4-***。

4.权利要求1至3任一项的化合物，其中R⁶是C_1-4脂族或C_3-6脂环族的，并任选被1至2个卤素原子取代。

5.权利要求1至4任一项的化合物，其中R³和R⁴各自是甲基。

6.权利要求1至4任一项的化合物，其中R³是H且R⁴是乙基。

7.权利要求1至4任一项的化合物，其中R³和R⁴与和它们连接的原子一起形成环丙基环。

8.权利要求1至7任一项的化合物，其中R⁶是任选被1或2个卤素原子取代的环丙基。

9.权利要求1至7任一项的化合物，其中R⁶是任选被1或2个卤素原子取代的环戊基。

10.权利要求1至7任一项的化合物，其中R⁶是任选被1或2个卤素原子取代的环己基。

11.权利要求1至7任一项的化合物，其中R⁶是任选被1或2个卤素原子取代的C_1-4脂族基团。

12.权利要求1的化合物，其中该化合物是

N-环丙基-4-(9-(3，3-二氟环戊基)-5，7，7-三甲基-6-氧代-6，7，8，9-四氢-5H-嘧啶开[4，5-b][1，4]二氮杂

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

-2-基氨基)-N-(3-氟环戊基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

-2-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

N-环丙基-4-(9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂罩]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

N-(3，3-二氟环戊基)-4-(9′-(3，3-二氟环戊基)-5′-甲基-6′-氧代-5′，6′，8′，9′-四氢螺[环丙烷-1，7′-嘧啶并[4，5-b][1，4]二氮杂罩]-2′-基氨基)-3-甲氧基苯甲酰胺；

4-((R)-8-((R)-3，3-二氟环戊基)-7-乙基-5-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢蝶啶-2-基氨基)-N-乙基-3-甲氧基苯甲酰胺；或

13.包含权利要求1至12任一项的化合物和可药用载体、辅助剂或赋形剂的药物组合物。

14.抑制有需要的患者中的蛋白激酶活性的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物组合物。

15.抑制生物样品中的蛋白激酶活性的方法，包括使该生物样品与权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物组合物接触。

16.权利要求14或15的方法，其中该蛋白激酶是PLK。

17.权利要求16的方法，其中该蛋白激酶是PLK1。

18.治疗有需要的患者的增殖性疾病、神经变性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病或免疫介导疾病的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物组合物的步骤。

19.根据权利要求18的方法，进一步包括对所述患者施用选自化疗或抗增殖剂、抗炎剂、免疫调节或免疫抑制剂、神经营养因子、心血管病治疗剂、破骨性疾病治疗剂、肝病治疗剂、抗病毒剂、血液病治疗剂、糖尿病治疗剂或免疫缺陷病治疗剂的附加治疗剂，其中该附加治疗剂适用于正治疗的疾病并与权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物组合物一起以单剂型给药或作为多剂型的一部分与该化合物或药物组合物分开给药。

20.治疗有需要的患者的黑素瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、成神经细胞瘤或选自结肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、***、肺癌、中枢神经***(CNS)癌、肾癌、***癌、膀胱癌或胰癌的癌症的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物组合物。

21.治疗有需要的患者的癌症的方法，包括对该患者施用权利要求1至12任一项的化合物或权利要求13的药物组合物。

22.权利要求21的方法，其中该方法包括通过用该化合物药物组合物抑制PLK来干扰癌细胞有丝***的步骤。

23.制备式I-A的化合物的方法：