CN101200446A - 3-吡咯并环己亚基-2-二氢吲哚酮衍生物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及具有式(I)结构的3－吡咯并环己亚基－2－二氢吲哚酮衍生物或其药学上可接受的盐，以及其用途；另外，本发明还涉及合成该类化合物的式(II)中间体。药理实验表明，此类化合物或其药学上可接受的盐对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。
Description
技术领域
本发明涉及3-吡咯并环己亚基-2-二氢吲哚酮衍生物及其用途，本发明还涉及该类化合物的中间体。
背景技术
以下仅作为背景资料提供而不认为是本发明的先前技术。
目前，许多2-二氢吲哚酮类小分子化合物已试图鉴定作为蛋白激酶抑制剂，广泛用于治疗多种与异常激酶活性相关的疾病，如肿瘤、牛皮癣、肝硬化、糖尿病、血管发生、眼科疾病、类风湿关节炎和其它的炎症疾病、免疫疾病、心血管疾病如动脉硬化和多种肾病。其中，靛玉红类化合物(PCT WO2001037819、PCT WO2002092079)、3-亚甲基吡咯-2-二氢吲哚酮类化合物(US6642251、PCT WO2001060814、PCT WO2003035009、PCTWO2005053686)、3-吡咯并环戊亚基-2-二氢吲哚酮类化合物(PCT WO2005016875)和其它2-二氢吲哚酮类化合物(PCT WO 2000012084)等全部被描述为用于治疗癌症的激酶抑制剂。
蛋白激酶(PKs)包括蛋白酪氨酸激酶(PTKs)和丝氨酸-苏氨酸激酶(STKs)，其中，PTKs主要分为受体酪氨酸激酶(RTKs)和非受体(细胞)酪氨酸激酶(CTKs)两种类型。
受体酪氨酸激酶(RTKs)是一类具有胞质区域跨膜蛋白，胞外区是结合配体结构域，配体是可溶性或膜结合的多肽或蛋白类激素，包括胰岛素和多种生长因子。胞内段是酪氨酸蛋白激酶的催化部位，并具有自磷酸化位点。其内在催化活性在与配体结合时被激活。一旦被激活，受体通过二聚化(或寡聚化)连接两个催化区域，并在催化区域的活化口袋中促使共生残基的磷酸转移。这促使酶的活化并在催化区域中自动磷酸化酪氨酸残基。例如，配体表皮生长因子(EGF)在胞外与受体结合并引起后者构象变化，导致受体二聚化(dimerization)形成同源或异源二聚体，在二聚体内彼此相互磷酸化胞内段酪氨酸残基，激活受体本身的激酶活性。这类受体主要有EGFR、VEGFR、PDGFR、FGFR等。对酪氨酸激酶及其信号转导更为详细的讨论，参见Grosios k，et al，Drugs Fut，2003，28：679，其全文包括任何绘图作为一整体提出，通过引用结合到本文中。
在许多细胞内的信号蛋白(例如Shc、Grb2、Src、Cbl、磷脂酶Cg和3’-磷酸肌醇激酶[PI-3kinase]等)中，这些被磷酸化的酪氨酸残基作为对接位点存在于磷酸酪氨酸的结合区域中。在细胞膜中这些被活化的复合物促使了最初的信号级联反应，这对下游信号以及生物效应具有关键的作用。如果，受体缺乏催化活性，可以与非受体PTKs相偶联，通过非共价联合与一个受体亚基的胞质区域形成“二元受体”。最重要的下游信号级联是由RTKs活化，其中包括ERK/MAPK信号通路，PI-3激酶-AKT信号通路以及JAK/STAT信号通路。PTKs维持所有这些不同转导途径中相互间的信号通讯，最终调控基因的转录。此外，其它的级联反应也可以被使用，例如胰岛素受体(InsR)利用腺苷酰环化酶信号转导***，活化cAMP依赖的丝氨酸-苏氨酸特殊蛋白激酶。
非受体酪氨酸激酶(CTKs)的调节机制差异较大，它们通过与跨膜受体(例如荷尔蒙、细胞因子和生长因子受体)发生物理性作用，进而参与胞外信号响应。在细胞周期的特定阶段，当这些受体与细胞外的配体或细胞黏着成分相结合时即被活化。
在正常细胞中，活化的RTKs迅速内化并离开细胞表面，发生改性从而抑制酶活性。这确保信号级联反应的活化是短暂的，并且细胞可以及时恢复至非刺激状态。但是，许多结构的改变，如单个氨基酸取代以及大段氨基酸的缺失，或抑制信号以及自控制机制的失调，会导致激酶及其催化区域持续处于活化状态。许多疾病与这种突变导致的PTKs持续激活以及PTKs错误表达或过度表达相关。在恶性肿瘤的分子表征过程中发现近一半已知的PTKs，例如EGFR、ErbB2、Ret、Kit、Src、Abl、PDGFR、VEGF1/2/3、FGFR1/2/3等，都存在突变或过度表达的情况。同时，临床研究显示酪氨酸激酶的过度表达或失调对肿瘤病人的预后以及病征的预测具有重要参考价值(Madhusudan S，et al，Clin Biochem，2004，37：618)。由上所述，酪氨酸激酶对生理自体调节十分重要，基因突变/重排会使PTKs异常或过度表达，从而导致疾病的发生，因此可以使用这些酶的激动剂或拮抗剂进行治疗。
不管是潜在的基因改变还是异常受体的存在都会有各自的疾病表型(例如癌症)，而且与细胞周期以及胞内胞外信号传递有关，例如旁分泌和自主分泌传递。生长因子(例如EGF、VEGF、PDGF)受体和生长因子的过度表达常导致肿瘤细胞的增殖以及肿瘤血管生成和转移。
血管生成(angiogenesis)是指从已存在的血管上发育出新的血管***。正常的血管生成只在某些短期、特定的生理过程种存在，如生殖、伤口愈合等。而异常的血管生成则是肿瘤、风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病变等恶性疾病的病理表现之一。Folkman在大量临床实践和实验积累的基础上提出了肿瘤生长依赖于血管生成的假说：肿瘤在形成的早期阶段由于缺乏新生血管，直径限制在2～3nm，细胞个数不超过100万个；只有在肿瘤细胞分泌的肿瘤血管生成因子(Tumor-angiogenesis Factor，TAF)的介导下进入血管生成期，获得充足的氧和养料供应后，肿瘤才能迅速生长(Folkman J，N Engl J Med，1971，285：1182)，因而基于阻断TAF的抗血管生成可以作为新的肿瘤治疗手段。
肿瘤细胞可以分泌多种血管生成因子，它们之间相互联系和调控，其中血管内皮细胞生长因子(VEGF)处于核心地位，是目前已知活性最强、专属性最高的血管生成因子，而其它血管生成因子大都通过增强VEGF的表达产生血管生成的作用(Zhang QX，et al，JSurg Res，1997，67：147)。VEGF在体内多种组织如肺、脾、肾、肝等和绝大多数肿瘤细胞中都有表达。VEGF的表达受多种因素调控，缺氧是迄今为止发现的最强的诱导VEGF表达的因素；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)、角化细胞生长因子(KGF)、胎盘生长因子(PLGF)、转化生长因子β(TGFβ)、***-1(IGF-1)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、白介索(IL)-1β、IL-6和NO等也都能促进VEGF的表达；而干扰素-α(IFN-α)、IL-10和IL-12等能抑制VEGF的表达；另外，癌基因ras、raf、src和抑癌基因vHL，p53的突变都可增加VEGF的表达(Neufeld G，et al，FASEB J，1999，13：9)。
VEGF受体(VEGFR)目前已知有3种：VEGFR-1/Flt-1、VEGFR-2(Flk-1/KDR)和VEGFR-3/Flt-4。其中VEGFR-1和VEGFR-2特异地在血管内皮细胞上有表达，与血管生成密切相关。VEGFR属于酪氨酸激酶受体家族，是一类具有胞质区域的跨膜蛋白，其表达受VEGF的诱导。与正常人体组织的低对平表达相比，在绝大多数恶性肿瘤种均呈现VEGF及其受体(VEGFR)的高表达，而且VEGFR不仅表达于血管内皮细胞，还表达于肿瘤细胞，因而认为除旁分泌以外，还存在自分泌途径，即作为血管内皮细胞特异性有丝***原，由恶性肿瘤细胞分泌产生VEGF作用于相邻基质血管内皮细胞VEGF受体，促进血管内皮细胞***、增殖，诱导肿瘤血管新生，同时增加血管通透性促进肿瘤生长转移，并直接作用于肿瘤细胞，刺激肿瘤细胞生长。(参见李容，国外医学·生理、病理科学与临床分册，2002，22：475及其引用文献)
PKs的突变、信号蛋白的串扰是造成肿瘤的病理原因，同样也会导致其它疾病的发生。在一些免疫缺陷症中，可以观察到非受体酪氨酸的突变性失活，例如JAK3的失活引起严重的联合免疫缺陷(Leonard WJ，Nat Rev Immunol，2001，1：200；Leonard WJ，Int J Hematol，2001，73：271)。Bruton蛋白酪氨酸激酶(BTK or BPK、ATK)属于Src家族，是B细胞发育成熟所必须的一种酪氨酸激酶，而Btk基因突变会导致先天性无免疫球蛋白血症(Cheng G，et al，Proc Natl Acad Sci USA，1994，91：8152；Maas A，et al，J Immunol，1999，162：6526)。PTK在中枢神经***中也具有重要的生理作用，其失常也会导致相应疾病的发生，例如在AD中神经元斑与神经调节蛋白-1(neuregulin-1)和ErbB4的免疫反应性相关(Ferguson SS，Trends Neurosci，2003，26：119；Chaudhury AR，et al，J Neuropathol Exp Neurol，2003，62：42)。***(IGFs)及其调节蛋白是由心血管***分泌而来，这些因子调节异常会导致冠状动脉粥样硬化和再狭窄的发生发展，而IGFs的作用是由特异性膜受体所介导，其中IGF受体I型具有酪氨酸激酶活性，出现于动脉粥样硬化损伤处的平滑肌细胞，炎性细胞及动脉内皮细胞(Bayes-genis A，et al，Circ Res，2000，86：125；Bayes-genis A，et al，ArtherioThromb and Vascu Biol，2001，21：335；Che WY，et al，Circ Res，2002，90：1222)。血管内皮生长因子及其受体在类风湿关节炎的多种细胞内表达，并且是类风湿性关节炎病理性血管新生过程中的关键因子(De Bandt M，et al，J Immunol，2003，1712：4853)。Jak2是胞浆非受体酪氨酸激酶，而JAK2基因突变至少引起三种疾病(Spivak JL，Blood，2002，100：4272；Thiele J，et al，Acta Haematol，2004，111：155)——真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(IMF)、原发性血小板增多症(ET)以及一些其它不典型骨髓增殖性疾病(MPD)。成纤维细胞生长因子受体跨区域突变会导致最常见遗传性侏儒症——骨软骨发育不良(Shiang R，et al，Cell，1994，78：335)。
此外，许多疾病与缺乏PTK信号相关，例如非胰岛素依赖性糖尿病和外周神经疾病，而通过增强相应信号的传递可以有效地改善症状(Hunter T，Cell，2000，100：111)。针对其它一些与血管发生相关的疾病，例如某些心血管疾病，刺激血管生成比抑制更为有效。
丝氨酸-苏氨酸激酶(STKs)是一大类特异性催化蛋白丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化的激酶家族。STK主要是细胞溶胶激酶，影响细胞的内部生物化学，经常作为对PTK事件的下行反应。STK可参与发信号过程，后者引发DNA合成和随后引起细胞增殖的有丝***。此外STKs已涉及多种类型的癌症，如乳腺癌(Cance et al，Int.J.Cancer，1993，55，571)。
总之，PK信号转导导致细胞增殖、分化、生长和代谢，而非其它反应。并常的细胞增殖可能导致广泛的功能障碍和疾病，例如恶性肿瘤、肉瘤、成胶质细胞癌、血管瘤、白血病、牛皮癣、动脉硬化、关节炎等功能障碍和其它涉及血管生成和/或血管发生失控的功能障碍等。
发明内容
本发明涉及新的2-二氢吲哚酮类衍生物，它们表现出对肿瘤细胞的增殖具有抑制能力。此外，本发明涉及公开化合物的中间体。
本发明涉及具有以下化学结构的化合物：
其中：
R1是氢、卤素、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、-(CH2)nR12或-C(O)NR13R14；
R2是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、氰基、-NR10R11、-NR10C(O)R11、-C(O)R9、芳基、杂芳基、-S(O)2NR10R11或-SO2R15；
R3是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、芳基、杂芳基、-NR10S(O)2R11、-S(O)2NR10R11、-NR10C(O)R11、-NR10C(O)OR11或-SO2R15；
R4是氢、卤素、烷基、羟基、烷氧基或-NR10R11；
R5是氢、烷基或-C(O)R16；
R6、R7和R8是氢或烷基；
R9是氢、羟基、烷氧基或芳氧基；
R12是羟基、-C(O)R9、-NR10R11或-C(O)NR10R11；
R13和R14独立地选自氢、烷基或芳基，或者R13和R14与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；
R15是烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；
R16是羟基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
Z是芳基、杂芳基、杂环基或-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基；
n是1、2、3或4。
上述化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1、R2、R3和R4优选氢、羟基、烷氧基、-NR10R11、卤素或烷基；
R5优选氢或烷基；
R6、R7和R8优选氢或烷基；
Z优选-NR10R11；
R10和R11优选氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
上述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1、R3和R4最优选氢；
R2最优选氢，卤素或烷基；
R5最优选甲基；
R6、R7和R8最优选氢；
Z最优选-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢，烷基，环烷基，芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
本发明化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
一种式(II)的中间体：
其中：
R5是氢、烷基或-C(O)R16，优选甲基；
R16是羟基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
R6、R7和R8是氢或烷基，优选氢；
Z是芳基、杂芳基、杂环基或-NR10R11，优选-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢，烷基，环烷基，芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
在此可互换使用的术语“2-二氢吲哚酮”、“2-羟基吲哚”和“2-氧代吲哚”指的是具有以下化学结构的分子。
“吡咯并环己亚基”指的是具有以下化学结构的分子。
“3-吡咯并环己亚基-2-二氢吲哚酮”指的是具有在式(I)中显示的通式结构的化合物。
“吡咯并环己酮”指的是具有在式(II)中显示的通式结构的化合物。
“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：
(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸例如(但不限于)盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸例如(但不限于)乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等，优选盐酸或(L)苹果酸
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
1.化学
A.一般结构特征
本发明的一个方面涉及具有以下化学结构的化合物：
其中：
R1是氢、卤素、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、-(CH2)nR12或-C(O)NR13R14；
R2是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、氰基、-NR10R11、-NR10C(O)R11、-C(O)R9、芳基、杂芳基、-S(O)2NR10R11或-SO2R15；
R3是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、芳基、杂芳基、-NR10S(O)2R11、-S(O)2NR10R11、-NR10C(O)R11、-NR10C(O)OR11或-SO2R15；
R4是氢、卤素、烷基、羟基、烷氧基或-NR10R11；
R5是氢、烷基或-C(O)R16；
R6、R7和R8是氢或烷基；
R9是氢、羟基、烷氧基或芳氧基；
R12是羟基、-C(O)R9、-NR10R11或-C(O)NR10R11；
R13和R14独立地选自氢、烷基或芳基，或者R13和R14与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；
R15是烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；
R16是羟基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
Z是芳基、杂芳基、杂环基或-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
n是1、2、3或4。
除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：
“烷基”表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-20”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括20个碳原子)。含1-4个碳原子的烷基称为低级烷基。当低级烷基没有取代基时，称其为未取代的低级烷基。更优选的是，烷基是有1-10个碳原子的中等大小的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基为有1-4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。当是取代的烷基时，该取代基优选是一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个取代基，它们独立地优选自以下的基团：卤素、羟基、低级烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂脂环基、-C(O)R9，-NR10R11和-C(O)NR13R14，其中R9、R10、R11、R13和R14定义同上。
“环烷基”表示全部为碳的单环或稠合的环(“稠合”环意味着***中的每个环与***中的其它环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多个环不具有完全连接的π电子***，环烷基的实例(不局限于)为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。环烷基可为取代的和未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个各自选自以下的基团，包括：烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷巯基、芳巯基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-羧基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基，C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、氨基和-NR10R11，其中R10和R11定义同上。
“芳基”表示1至12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子***。芳基的非限制性实例有苯基、萘基和蒽基。芳基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个，更优选为一个、两个或三个，进而更优选为一个或两个，独立地选自由低级烷基、三卤烷基、卤素、羟基、低级烷氧基、巯基、(低级烷基)硫基、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、R10S(O)-、R10S(O)2-、-C(O)OR10、R10C(O)O-和-NR10R11组成的组，R10和R11定义同上。优选地，芳基可选地被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自卤素、低级烷基、三卤烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、单或二烷基胺基、羧基或N-磺酰氨基。
“杂芳基”表示5至12个环原子的单环或稠合环基团，含有一个、两个、三个或四个选自N、O或S的环杂原子，其余环原子是C，另外具有完全共轭的π电子***。未取代的杂芳基地非限制性实例有吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、嘧啶、喹啉、异喹啉、嘌呤、四唑、三嗪和咔唑。杂芳基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个，更为优选为一个、两个或三个，进而更为优选一个或两个，独立地选自以下基团，包括：低级烷基、三卤烷基、卤素、羟基、低级烷氧基、巯基、(低级烷基)硫基、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、R10S(O)-、R10S(O)2-、-C(O)OR10、R10C(O)O-和-NR10R11，其中R10和R11定义同上。优选的杂芳基可选地被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自卤素、低级烷基、三卤烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、单或二烷基胺基、羧基或N-磺酰氨基。
“杂脂环基”表示单环或稠合环基团，在环中具有5到9个环原子，其中一个或两个环原子是选自N、O或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子是C。这些环可以具有一条或多条双键，但这些环不具有完全共轭的π电子***。未取代的杂脂环基的非限制性实例有吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪子基、吗啉代基、硫代吗啉代基、高哌嗪子基等。杂脂环基可以是取代的或未取代的。当被取代时，取代基优选为一个或多个、更优选为一个、两个或三个，进而更优选为一个或两个，独立地选自以下基团，包括：低级烷基、三卤烷基、卤素、羟基、低级烷氧基、巯基、(低级烷基)硫基、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、R10S(O)-、R10S(O)2-、-C(O)OR10、R10C(O)O-和-NR10R11，其中R10和R11定义同上。优选地，杂脂环基可选地被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自卤素、低级烷基、三卤烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、单或二烷基胺基、羧基或N-磺酰氨基。。
“杂环”表示3到8个环原子的饱和环状基团，其中一个或两个环原子是选自N、O或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子是C，其中一个或两个C原子可以可选地被羰基代替。杂环基的环可以可选地独立地被一个、两个或三个取代基取代，取代基选自低级烷基(可选地被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自羧基或酯基)、卤代烷基、氰基烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、烷氧基、氨基、单烷基胺基、二烷基胺基、芳烷基、杂芳烷基和-COR(其中R是烷基)。更具体地，术语杂环基包括但不限于四氢吡喃基、2，2-二甲基-1，3-二氧戊环、哌啶子基、N-甲基哌啶-3-基、哌嗪子基、N-甲基吡咯烷-3-基、吡咯烷基、吗啉代基、硫代吗啉代基、硫代吗啉代-1-氧化物、硫代吗啉代-1，1-二氧化物、4-乙氧羰基哌嗪子基、3-氧代哌嗪子基、2-咪唑啉酮、2-吡咯烷酮、2-氧代高哌嗪子基、四氢嘧啶-2-酮及其衍生物。优选地，杂环基团可选地被一个或两个取代基取代，取代基独立地选自卤素、低级烷基、被羧基或酯基取代的低级烷基、羟基、单或二烷基胺基。
“羟基”表示-OH基团。
“烷氧基”表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的环烷基)。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
“芳氧基”表示-O-芳基和-O-杂芳基。代表性实例包括但不限于苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。
“巯基”表示-SH基团。
“酰基”表示-C(O)-R’基团，其中R’是选自以下基团：氢、未取代的低级烷基、三卤甲基、未取代的环烷基，可选地被一或多个、优选被1、2或3个选自未取代的低级烷基、三卤甲基、未取代的低级烷氧基、卤素和-NR10R11基团的取代基取代的芳基，其中R10和R11定义同上，可选地被一个或多个、优选被1、2或3个选自未取代的低级烷基、三卤甲基、未取代的低级烷氧基、卤素和-NR10R11基团的取代基取代的杂芳基(通过环碳原子键合)，以及可选地被一个或多个、优选被1、2或3个选自未取代的低级烷基、三卤甲基、未取代的低级烷氧基、卤素和-NR10R11基团的取代基取代的杂脂环基(通过环碳原子键合)，代表性的酰基包括但不限于乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。
“硫代酰基”表示-C(S)-R’基团，其中R’定义同上。
“酯基”表示-C(O)O-R’基团，其中R’定义同上，但是R’不能是氢。
“乙酰基”表示-C(O)CH3基团。
“卤素”表示氟、氯、溴或碘，优选为氟或氯。
“三卤甲基”表示-CX3基团，其中X是如上所定义的卤素。
“氰基”表示-CN基团。
“S-磺酰氨基”表示-S(O)2NR10R11基团，其中R10和R11定义同上。
“N-磺酰氨基”表示-NR10S(O)2R11基团，其中R10和R11定义同上。
“O-氨基甲酰基”表示-OC(O)NR13R14基团，其中R13和R14定义同上。
“N-氨基甲酰基”表示R10OC(O)NR11-基团，其中R10和R11定义同上。
“O-硫代氨基甲酰基”表示-OC(S)NR13R14基团，其中R13和R14定义同上。
“N-硫代氨基甲酰基”表示R10OC(S)NR11-基团，其中R10和R11定义同上。
“氨基”表示-NH2基团。
“C-酰氨基”表示-C(O)NR10R11基团，其中R10和R11定义同上。
“N-酰氨基”表示R10C(O)NR11-基团，其中R10和R11定义同上。
“硝基”表示-NO2基团。
“卤代烷基”表示烷基，优选如上所定义的低级烷基，它被一个或多个相同或不同的卤原子取代，例如-CH2Cl、-CF3、-CH2CF3、-CH2CCl3等。
“芳烷基”表示烷基，优选如上所定义的低级烷基，它被如上所定义的芳基取代，例如-CH2苯基、-(CH2)2苯基、-(CH2)3苯基、CH3CH(CH3)CH2苯基及其衍生物。
“杂芳烷基”表示烷基，优选如上所定义的低级烷基，它被杂芳基取代，例如-CH2吡啶基、-(CH2)2嘧啶基、-(CH2)3咪唑基等及其衍生物。
“单烷基胺基”表示基团-NHR，其中R是如上所定义的烷基或未取代的环烷基，例如甲胺基、(1-甲基乙基)胺基、环己胺基等。
“二烷基胺基”表示基团-NRR，其中每个R独立地是如上所定义的烷基或未取代的环烷基，例如二甲基胺基、二乙基胺基、N-甲基环己基胺基等。
“氰基烷基”表示1或2个氰基取代的如上定义的未取代的烷基，优选为未取代的低级烷基。
“哌嗪子基”指的是具有以下化学结构的基团。
“吗啉代基”指的是具有以下化学结构的基团。
“哌啶子基”指的是具有以下化学结构的基团。
“吡咯烷基”指的是具有以下化学结构的基团。
“可选”或“可选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生和不发生的场合。例如，“杂芳基可选地被一个或两个取代基取代”意味着杂芳基的取代基可以但不必是一个，该说明包括杂芳基被一个取代基取代的情形和杂芳基被两个取代基取代的情形。
B.优选的结构特征
R1、R3、R4是氢是本发明优选的特征。
R2是氢、卤素或烷基是本发明优选的特征，其中卤素优选为氟或氯，烷基优选为甲基。
R5是甲基是本发明优选的特征。
R6、R7和R8是氢是本发明优选的特征。
Z是-NR10R11也是本发明优选的特征，其中R10和R11独立地选自氢，烷基，环烷基，芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基，优选为-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、吗啉代基、哌啶子基、吡咯烷基、N-甲基-哌嗪子基或N-甲基-环己基胺基。
2.合成和组合库
A.组合库
本发明的一个方面是式(III)的2-羟基吲哚与式(II)的吡咯并环已酮反应形成具有式(I)结构化合物的组合库。
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和Z具有在一般结构中所阐明的含义。
在此使用的“组合库”指的是在多维列阵的化合物中由一维的每个化合物与其它的每一个维中的化合物反应形成的所有化合物。在本发明上下文中，所述列阵是二维的并且一维表示本发明所有的2-羟基吲哚类和第二维表示本发明所有的吡咯并环己酮。每一个2-羟基吲哚可与每一个吡咯并环己酮反应以形成如式(I)所示的3-吡咯并环己亚基-2-二氢吲哚酮化合物。以该方法形成的所有3-吡咯并环己亚基-2-二氢吲哚酮化合物处于本发明范围内。经一些2-羟基吲哚与所有吡咯并环己酮反应、所有的2-羟基吲哚与一些吡咯并环己酮反应或者一些2-羟基吲哚与一些吡咯并环己酮反应形成的更小的组合库也处于本发明范围内。
以上组合库中的2-羟基吲哚优选自2-羟基吲哚本身和取代的2-羟基吲哚，例如(但不局限于)5-氟-2-二氢吲哚酮、5-氯-2-二氢吲哚酮、5-溴-2-二氢吲哚酮、5-羟基-2-二氢吲哚酮、5-甲基-2-二氢吲哚酮、5-乙基-2-二氢吲哚酮、5-正丁基-2-二氢吲哚酮、5-甲氧基-2-二氢吲哚酮、5-乙氧基-2-二氢吲哚酮、5-氨基-2-二氢吲哚酮、5-乙酰基-2-二氢吲哚酮、5-苯基氨基磺酰基-2-二氢吲哚酮、5-氨基磺酰基-2-二氢吲哚酮、5-异丙基氨基磺酰基-2-二氢吲哚酮、5-二甲基氨基磺酰基-2-二氢吲哚酮、5-三氟甲基-2-二氢吲哚酮、6-氟-2-二氢吲哚酮、6-甲氧基-2-二氢吲哚酮、6-甲基-2-二氢吲哚酮、6-氯-2-二氢吲哚酮、4-甲基-2-二氢吲哚酮、4-甲基-5-氯-2-二氢吲哚酮、4，5-二甲氧基-2-二氢吲哚酮。
以上组合库中的吡咯并环己酮优选自(但不局限于)N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(二甲胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺、N-[3-(N-甲基环己基胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺。
B.一般合成方法
(1)中间体式(II)
本发明所涉及的一个中间体式(II)的吡咯并环己酮按照以下路线合成：6-氨基-5-氧代己酸盐酸盐(S1)与乙酰乙酸乙酯在磷酸二氢钠水溶液中回流反应生成取代的吡咯(S2)，再以多聚磷酸(PPA)为反应溶剂、五氧化二磷(P2O5)为脱水剂，70℃下反应生成2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(S3)，随后在1mol/L LiOH水溶液中进行水解得到2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)，最后以N，N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂、在缩合剂存在条件下，与胺H2N-CH(R6)-CR7(OH)-CH(R8)Z室温下反应24小时制得式(II)的吡咯并环己酮。
其中：
R5是氢、烷基或-C(O)R16，优选甲基；
R16是羟基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
R6、R7和R8是氢或烷基，优选氢；
Z是芳基、杂芳基、杂环基或-NR10R11，优选-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢，烷基，环烷基，芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
缩合剂包括(但不局限于)N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)、N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(CDMT)、2，4-二氯-6-甲氧基-1.3.5-三嗪(DCMT)、1，1′-羰基二咪唑(CDI)和1-羟基苯并***(HOBt)，优选为EDCI和HOBt。
所述反应在室温下进行，优选的反应温度为20℃至25℃。
(2)式(I)化合物
本发明提供了用于合成式(I)的3-吡咯并环己亚基-2-二氢吲哚酮的方法，该方法包括在Lewis酸存在下，使式(III)的2-羟基吲哚与式(II)的吡咯并环己酮反应于溶剂中，其中各基团的定义如一般结构特征中所述，优选：
R1、R3和R4是氢；
R2是氢、卤素或烷基；
R5是甲基；
R6、R7和R8是氢；
Z是-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢，烷基，环烷基，芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
该反应可以在Lewis酸存在下进行，其中Lewis酸包括(但不局限于)AlCl3、BF3、SnCl4、SnCl2、ZnCl2、TiCl4，在本发明优选的实施方案中，所述的Lewis酸优选为SnCl4和TiCl4，更优选为TiCl4。
所述反应进行的溶剂为非质子溶剂。“非质子溶剂”为分子中无转移性质子的溶剂，这类溶剂又可分为非质子亲质子性溶剂和惰性溶剂。“非质子亲质子性溶剂”特征在于分子中无质子，与水比较几乎无酸性，也无两性特征，但有较弱的接受质子倾向和程度不同的成氢键能力，实例包括(但不局限于)酰胺类、酮类、腈类、二甲亚砜、吡啶。“惰性溶剂”不具酸碱性质或酸碱性极弱，自身无质子转移过程，当溶质酸和碱在溶剂中起反应时，溶剂分子不参与反应，实例包括(但不局限于)戊烷、己烷、环己烷、苯、甲苯。
在本发明优选的实施方案中，所述溶剂为非质子溶剂，优选为吡啶。
所述反应在高于室温的温度下进行。该温度一般为50℃至150℃，优选为85℃至120℃，最优选为100℃至110℃。
所述反应的反应时间为8小时至10小时。
此外，本发明所涉及的化合物S1可以参照本领域已有文献报道制备，如Lartillot，Serge.et al，Bulletin de la Societe Chimique de France，1964，4：783；MacGee，J.et al.Biochem Med，1977，17：31；Evans DA，et al，J.C.S.Chem.Comm，1978，17：753以及它们所引用的相关文献。式H2N-CH(R6)-CR7(OH)-CH(R8)Z是商业上可以得到的胺，或者它们可以参照本领域已有文献报道及其类似方法进行制备，如专利GB276012；US1790096；CA975364；FR2396002；US1790042等及其所引用的相关文献。本发明提供的合成方法中所涉及的中间体式(III)的2-羟基吲哚也是商业上可得到的或可以参照本领域已有文献报道及其类似方法进行制备，如“Rodd’s Chemistry ofCarbon Compounds”第二版，S.Coffey，第IV卷A部，1973，pp.448-450；Gassman PG，et al，J Org Chem，1977，42：1340；Wright WB et al，J Am Chem Soc，1956，78：221；Kisteneva，MS.Zhurnal Obshchei Khimii，1956，26：2251；Beckett AH，et al，Tetrahedron，1968，24：6093；Walker GN，J Am Chem Soc，1955，77：3844；Protiva M，et al，Collect Czech Chem Commun，1979，44：2108；McEvoy FJ，et al，J Org Chem，1973，38：3350；Simet L，J Org Chem，1963，28：3580；Wieland T，et al，Chem Ber，1963，96：253；美国专利US3882236、4006161和4160032以及它们所引用的相关文献。
同时，将为本领域技术人员领会到的是，用于生成本发明化合物的其它合成途径也是可利用的，本文所提供的实施例仅供举例而非限制。
3.生物评价方法
抑制细胞增殖测定方法采取常用的MTT法：活细胞线粒体中的脱氢酶能够还原黄色的溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)为兰紫色的不溶于水的甲臢(Formazan)，甲臢的多少可通过酶标仪测定在570nm的吸收值(OD值)可得知，因而甲臢生成量在通常情况下与活细胞数成正比，因此可根据OD值推测出活细胞的数目，了解药物抑制或杀伤细胞的能力。
该测定方法可以用于测定不同的本发明化合物对一种或多种癌细胞增殖的抑制能力，利用本领域熟知的方法，可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。
具体实施方式
给出下列制备例和实施例，使本领域技术人员能够更清楚地理解和实施本发明。它们不应被解释为限制本发明的范围，仅仅是其例证和代表。
合成实施例
实施例1
2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)
步骤1
6-氨基-5-氧代己酸盐酸盐(S1)22.44g(0.12mol)(Lartillot，Serge.et al，Bulletin de laSociete Chimique de France，1964，4：783)溶于大约6.1L磷酸二氢钠缓冲液中(300g磷酸二氢钠固体溶于6L水，并用1mol/L的NaOH水溶液调节pH至6.5左右)，加入16.12g(0.12mol)乙酰乙酸乙酯，升温回流反应半小时，待冷却以后反应液用Na2CO3调节pH至8左右，并用100ml氯仿萃取一次，水相用6mol/L盐酸调pH至1左右，析出大量棕色固体，过滤真空干燥得固体4-(4-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)丁酸(S2)20.29g(71％收率)。
1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ11.89(s，1H，-COOH)，10.90(s，1H，-NH-1)，6.38(s，1H，pyrrole-2)，4.14(q，2H，-CH 2 CH3)，2.56(t，2H，-CH 2 CH2CH2COOH)，2.36(s，3H，-CH3-5)，2.18(t，2H，-CH2CH2 CH 2 -COOH)，1.71(m，2H，-CH2 CH 2 CH2COOH)，1.25(t，3H，-CH2 CH 3 ).
步骤2
142g多聚磷酸中加入7.1g五氧化二磷，70℃下搅拌30分钟，再加入6.3g(0.026mol)4-(4-乙氧基羰基-5-甲基-1H-吡咯-3-基)丁酸(S2)，在此温度下，继续搅拌反应48小时后，倒入冰水中，用饱和Na2CO3水溶液调pH至8左右，乙酸乙酯提取。用水和饱和NaCl水溶液洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥后，浓缩除去大部分乙酸乙酯至饱和状态，-5℃下低温析晶，过滤，真空干燥得白色固体2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(S3)3.5g(61％)。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ10.23(s，1H，-NH-1)，4.30(q，2H，-CH 2 CH3)，3.00(t，2H，-CH2-4)，2.59(s，3H，-CH3-2)，2.50(t，2H，-CH2-6)，2.12(m，2H，-CH2-5)，1.36(t，3H，-CH2 CH 3 )；ESI-MS：222.1[M+H]+；220.1[M-H]-.
步骤3
在25ml LiOH水溶液(1mol/L)中加入1.0g(4.5mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸乙酯(S3)，在70℃下反应48小时后，倒入冰水中，用6mol/L盐酸调节pH至1～2，析出大量固体，过滤，水洗，真空干燥后得0.64g(74％)为灰色固体的标题化合物。
1HNMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.03(bs，2H，-NH-1，-COOH)，2.87(t，2H，-CH2-4)，2.42(s，3H，-CH3-2)，2.34(t，2H，-CH2-6)，1.98(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：194.1[M+H]+.
实施例2
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)
0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)，0.16g HOBt(1.2mmol)，0.24g(1.2mmol)EDCI和0.2g(2.0mmol)三乙胺溶于10ml DMF中，室温下搅拌20min后，加入0.31g(2.1mmol)1-氨基-3-二乙胺基-丙-2-醇，室温下搅拌24个小时后，反应液倒入冰水中，用二氯甲烷提取，用水和饱和NaCl水溶液洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥后，浓缩得到的固体经硅胶柱层析纯化(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇3∶1)得0.26g(81％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.09(s，1H，-NH-1)，6.74(t，1H，-CONH-)，4.40(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.83(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.58(m，1H，-CH(OH)-)，3.26～3.15(m，6H，-CH 2 N(CH 2 CH3)2)，3.00(t，2H，-CH2-4)，2.56(s，3H，-CH3-2)，2.46(t，2H，-CH2-6)，2.15(m，2H，-CH2-5)，1.44(t，6H，-CH2N(CH2 CH 3 )2)；
ESI-MS：322.2[M+H]+.
实施例3
N-[3-(二甲胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-2)
使用实施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.25g(2.1mmol)1-氨基-3-二甲胺基-丙-2-醇反应得0.24g(82％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.43(s，1H，-NH-1)，6.23(t，1H，-CONH-)，3.86(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.32(m，1H，-CH(OH)-)，2.93(t，2H，-CH2-4)，2.58(s，3H，-CH3-2)，2.49(t，2H，-CH2-6)，2.40～2.30(m，8H，-CH 2 N(CH 3 )2)，2.14(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：294.1[M+H]+.
实施例4
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)
使用实施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.34g(2.1mmol)1-氨基-3-(吗啉-4-基)-丙-2-醇反应得0.27g(81％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.00(s，1H，-NH-1)，6.08(s，1H，-CONH-)，3.94(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.75～3.71(m，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2 CH 2 )2O)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，2.90(t，2H，-CH2-4)，2.67(m，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2O)，2.58(s，3H，-CH3-2)，2.51～2.40(m，6H，-CH2-6，-CH2N(CH 2 CH2)2O)，2.15(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：336.0[M+H]+，358.0[M+Na]+.
实施例5
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)
使用实施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.30g(2.1mmol)1-氨基-3-(吡咯烷-1-基)-丙-2-醇反应得0.26g(82％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.61(s，1H，-NH-1)，6.20(s，1H，-CONH-)，3.92(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.76(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.39(m，1H，-CH(OH)-)，2.96(t，2H，-CH2-4)，2.75(m，3H，烷基)，2.60～2.46(m，8H，-CH2-6，-CH3-2，烷基)，2.20(m，2H，-CH2-5)，1.84(s，4H，-CH2N(CH2 CH 2 CH 2 CH2))；
ESI-MS：320.2[M+H]+，342.1[M+Na]+；318.2[M-H]-.
实施例6
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)
使用实施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.34g(2.1mmol)1-氨基-3-(哌啶-1-基)-丙-2-醇反应得0.26g(78％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ10.33(s，1H，-NH-1)，6.11(t，1H，-CONH-)，3.88(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.68(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.29(m，1H，-CH(OH)-)，2.92(t，2H，-CH2-4)，2.63～2.57(m，5H，-CH 2 N(CH2)5，-CH3-2)，2.49(t，2H，-CH2-6)，2.36(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2CH2CH2 CH 2 ))，2.17(m，2H，-CH2-5)，1.58(m，4H，-N(CH2 CH 2 CH2 CH 2 CH2))，1.46(m，2H，-N(CH2CH2 CH 2 CH2CH2))；
ESI-MS：334.2[M+H]+，356.3[M+Na]+；332.3[M-H]-.
实施例7
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)
使用实施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.36g(2.1mmol)1-氨基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙-2-醇反应得0.25g(72％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.53(s，1H，-NH-1)，6.09(s，1H，-CONH-)，3.93(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，2.92(t，2H，-CH2-4)，2.78(bs，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2NCH3)，2.56～2.40(m，13H，-CH3-2，-CH2N(CH 2 CH 2 )2NCH3，-CH2-6)，2.33(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH 3 )，2.15(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：349.2[M+H]+.
实施例8
N-[3-(N-甲基环己基胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺
(II-7)
步骤1
将7.2g(0.03mol)N-(3-氯-2-羟基丙基-1)-邻苯二甲酰亚胺(Weizmann，M.et al.Bull.soc.chim.1930，47：356-61)和6.8g(0.06mol)N-甲基环己胺加到25ml乙醇中，回流反应6小时，蒸去溶剂，残留的油状物中加入60ml 20％的盐酸，再回流反应3小时。待冷却后，过滤除去不溶物，滤液浓缩至15ml，用NaOH固体碱化至pH为13～14，用二氯甲烷提取，有机层经无水硫酸钠干燥后，浓缩得到无色液体1-氨基-3-(N-甲基环己基胺基)-丙-2-醇1.75g(31％)。
ESI-MS：187.1[M+H]+.
步骤2
使用实施例2的方法，0.2g(1.0mmol)2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酸(S4)和0.39g(2.1mmol)1-氨基-3-(N-甲基环己基胺基)-丙-2-醇反应得0.30g(83％)为白色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.91(s，1H，-NH-1)，6.43(s，1H，-CONH-)，4.16(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.77(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.47(m，1H，-CH(OH)-)，2.97～2.87(m，4H，-CH2-4，-CH(OH)-CH 2 N-)，2.62(s，3H，-CH3)，2.58(s，3H，-CH3)，2.48(t，2H，-CH2-6)，2.18～2.01(m，4H，-CH2-5，环己基)，1.90(d，2H，环己基)，1.71(d，1H，环己基)，1.41～1.22(m，5H，环己基)，1.10(m，1H，环己基)；
ESI-MS：362.3[M+H]+.
实施例9
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-1)
0.11g(0.83mmol)2-羟基吲哚和0.24g(0.75mmol)N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)溶于10ml无水吡啶中，加入TiCl40.3ml，100℃～110℃下搅拌反应10小时后，反应液倒入冰水中，用二氯甲烷提取，用水和饱和NaCl水溶液洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥后，浓缩得到的固体经硅胶柱层析纯化(洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇10∶1)得0.09g(28％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ14.26(s，1H，-NH-1)，8.20(bs，1H，-NH-1’)，7.61(d，1H，J＝7.90Hz，H-4’)，7.15(t，1H，H-6’)，7.04(t，1H，H-5’)，6.90(d，1H，J＝7.61Hz，H-7’)，6.23(s，1H，-CONH-)，3.86(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，3.11(t，2H，-CH2-4)，2.87(t，2H，-CH2-6)，2.69(m，2H，-CH 2 N(CH2CH3)2)，2.59～2.40(m，7H，-CH3-2，-CH2N(CH 2 CH3)2)，2.01(m，2H，-CH2-5)，1.05(t，6H，-CH2N(CH 2 CH3)2)；
ESI-MS：437.2[M+H]+.
实施例10
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-2)
使用实施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羟基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)反应得0.11g(34％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.32(s，1H，-NH-1)，8.27(bs，1H，-NH-1’)，7.35(dd，1H，J＝10.67Hz，H-4’)，6.92～6.80(m，2H，H-6’，H-7’)，6.28(t，1H，-CONH-)，3.90(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.74(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.38(m，1H，-CH(OH)-)，3.09(t，2H，-CH2-4)，2.92(t，2H，-CH2-6)，2.72(m，2H，-CH 2 N(CH2CH3)2)，2.62(s，3H，-CH3-2)，2.61～2.40(m，4H，-CH2N(CH 2 CH3)2)，2.07(m，2H，-CH2-5)，1.08(t，6H，-CH2N(CH2 CH 3 )2)；
ESI-MS：455.3[M+H]+.
实施例11
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-3)
使用实施例9的方法，0.13g(0.78mmol)5-氯-2-羟基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-1)反应得0.10g(30％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.25(s，1H，-NH-1)，8.18(bs，1H，-NH-1’)，7.57(s，1H，H-4’)，7.12(dd，1H，J＝8.23Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.23Hz，H-7’)，6.25(s，1H，-CONH-)，3.87(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.70(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.34(m，1H，-CH(OH)-)，3.07(t，2H，-CH2-4)，2.89(t，2H，-CH2-6)，2.71(m，2H，-CH 2 N(CH2CH3)2)，2.66～2.40(m，7H，-CH3-2，-CH2N(CH 2 CH3)2)，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.07(t，6H，-CH2N(CH2 CH 3 )2)；
ESI-MS：471.3[M+H]+，493.2[M+Na]+.
实施例12
N-[3-(二甲胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-4)
使用实施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羟基吲哚和0.21g(0.72mmol)N-[3-(二甲胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-2)反应得0.08g(26％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.33(s，1H，-NH-1)，7.77(bs，1H，-NH-1’)，7.35(dd，1H，J＝10.39Hz，H-4’)，6.91～6.78(m，2H，H-6’，H-7’)，6.19(bs，1H，-CONH-)，3.90(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.37(m，1H，-CH(OH)-)，3.09(t，2H，-CH2-4)，2.92(t，2H，-CH2-6)，2.61(s，3H，-CH3-2)，2.44～2.34(m，8H，-CH 2 N(CH 3 )2)，2.06(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：427.3[M+H]+.
实施例13
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-5)
使用实施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羟基吲哚和0.25g(0.75mmol)N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)反应得0.12g(35％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.29(s，1H，-NH-1)，7.99(s，1H，-NH-1’)，7.62(d，1H，J＝7.86Hz，H-4’)，7.17(t，1H，H-6’)，7.06(t，1H，H-5’)，6.90(d，1H，J＝7.47Hz，H-7’)，6.12(s，1H，-CONH-)，3.95(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(s，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2 CH 2 )2O)，3.37(m，1H，-CH(OH)-)，3.13(t，2H，-CH2-4)，2.90(t，2H，-CH2-6)，2.69(m，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2O)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.46(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2)2O)，2.04(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：451.3[M+H]+.
实施例14
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-6)
使用实施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羟基吲哚和0.24g(0.72mmol)N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)反应得0.11g(33％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.34(s，1H，-NH-1)，7.65(s，1H，-NH-1’)，7.32(d，1H，J＝11.4Hz，H-4’)，6.87～6.79(m，2H，H-6’，H-7’)，6.06(s，1H，-CONH-)，3.92(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.72(bs，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2 CH 2 )2O)，3.34(m，1H，-CH(OH)-)，3.10(t，2H，-CH2-4)，2.96(s，2H，-CH2-6)，2.65～2.60(m，5H，-CH 2 N(CH2CH2)2O，-CH3-2)，2.45(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2)2O)，2.07(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：469.2[M+H]+，491.2[M+Na]+；467.3[M-H]-.
实施例15
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-7)
使用实施例9的方法，0.12g(0.72mmol)5-氯-2-羟基吲哚和0.22g(0.66mmol)N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-3)反应得0.11g(34％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ14.30(s，1H，-NH-1)，7.70(s，1H，-NH-1’)，7.59(s，1H，H-4’)，7.12(d，1H，J＝7.95Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.35Hz，H-7’)，6.09(s，1H，-CONH-)，3.93(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.72(bs，6H，-OH，-CONHCH(H)-，-CH2N(CH2 CH 2 )2O)，3.34(m，1H，-CH(OH)-)，3.12(t，2H，-CH2-4)，2.95(s，2H，-CH2-6)，2.67(s，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2O)，2.61(s，3H，-CH3-2)，2.46(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2)2O)，2.09(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：485.2[M+H]+；483.1[M-H]-.
实施例16
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-8)
使用实施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羟基吲哚和0.24g(0.75mmol)N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)反应得0.10g(31％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(500MHz，CDCl3)δ14.32(s，1H，-NH-1)，7.80(bs，1H，-NH-1’)，7.63(d，1H，J＝7.95Hz，H-4’)，7.15(t，1H，H-6’)，7.05(t，1H，H-5’)，6.91(d，1H，J＝7.73Hz，H-7’)，6.44(bs，1H，-CONH-)，4.02(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.75(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.51(m，1H，-CH(OH)-)，3.15(s，2H，-CH2-4)，2.94(m，4H，-CH2-6，-CH 2 N(CH2)4)，2.85(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2CH2 CH 2 ))，2.61(s，3H，-CH3-2)，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.94(s，4H，-CH2N(CH2 CH 2 CH 2 CH2))；
ESI-MS：435.3[M+H]+，457.2[M+Na]+.
实施例17
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-9)
使用实施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羟基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)反应得0.09g(28％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.33(s，1H，-NH-1)，7.89(bs，1H，-NH-1’)，7.36(d，1H，J＝10.92Hz，H-4’)，6.86～6.80(m，2H，H-6’，H-7’)，6.22(s，1H，-CONH-)，3.91(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.37(m，1H，-CH(OH)-)，3.08(s，2H，-CH2-4)，2.93(s，2H，-CH2-6)，2.74(m，2H，-CH 2 N(CH2)4)，2.67～2.45(m，7H，-CH3-2，-CH2N(CH 2 CH2CH2 CH 2 ))，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.81(bs，4H，-CH2N(CH2 CH 2 CH 2 CH2))；
ESI-MS：453.3[M+H]+，475.2[M+Na]+.
实施例18
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-10)
使用实施例9的方法，0.14g(0.84mmol)5-氯-2-羟基吲哚和0.23g(0.72mmol)N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-4)反应得0.11g(33％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ14.52(s，1H，-NH-1)，11.02(s，1H，-NH-1’)，7.61(s，1H，H-4’)，7.52(t，1H，-CONH-)，7.18(dd，1H，J＝8.24Hz，H-6’)，6.93(d，1H，J＝8.25Hz，H-7’)，5.71(bs，1H，-CH(OH)-)，3.99(bs，1H，-CH(OH)-)，3.31(m，7H，-CH 2 CH(OH)CH 2 -，-CH3-2)，3.10(m，6H，-CH2N(CH 2 CH2CH2 CH 2 )，-CH2-4)，2.86(t，2H，-CH2-6)，1.96(m，6H，-CH2-5，-CH2N(CH2 CH 2 CH 2 CH2))；
ESI-MS：469.2[M+H]+.
实施例19
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-11)
使用实施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羟基吲哚和0.24g(0.72mmol)N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)反应得0.09g(28％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.31(s，1H，-NH-1)，7.75(bs，1H，-NH-1’)，7.64(d，1H，J＝7.99Hz，H-4’)，7.16(t，1H，H-6’)，7.07(t，1H，H-5’)，6.91(d，1H，J＝7.67Hz，H-7’)，6.19(bs，1H，-CONH-)，3.95(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.69(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.38(m，1H，-CH(OH)-)，3.13(t，2H，-CH2-4)，2.94(s，2H，-CH2-6)，2.67(bs，2H，-CH 2 N(CH2)5)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.45(bs，4H，-CH2N(CH 2 CH2CH2CH2 CH 2 ))，2.06(m，2H，-CH2-5)，1.64～1.43(m，6H，-CH2N(CH2 CH 2 -CH 2 -CH 2 CH2))；
ESI-MS：449.4[M+H]+，471.3[M+Na]+.
实施例20
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-12)
使用实施例9的方法，0.12g(0.79mmol)5-氟-2-羟基吲哚和0.23g(0.69mmol)N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)反应得0.10g(31％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.30(s，1H，-NH-1)，8.09(bs，1H，-NH-1’)，7.35(d，1H，J＝10.5Hz，H-4’)，6.93～6.80(m，2H，H-6’，H-7’)，6.21(s，1H，-CONH-)，3.93(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.71(d，1H，-CONHCH(H)-)，3.30(m，1H，-CH(OH)-)，3.01(s，2H，-CH2-4)，2.88(s，2H，-CH2-6)，2.59(bs，5H，-CH3-2，-CH 2 N(CH2)5)，2.38(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2CH2CH2 CH 2 ))，2.03(m，2H，-CH2-5)，1.60(bs，6H，-CH2N(CH2 CH 2 CH 2 CH 2 CH2))；
ESI-MS：465.3[M-H]-.
实施例21
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-13)
使用实施例9的方法，0.14g(0.84mmol)5-氯-2-羟基吲哚和0.23g(0.69mmol)N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-5)反应得0.12g(36％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.25(s，1H，-NH-1)，8.11(bs，1H，-NH-1’)，7.57(s，1H，H-4’)，7.13(d，1H，J＝8.67Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.46Hz，H-7’)，6.20(s，1H，-CONH-)，3.92(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.72(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.32(m，1H，-CH(OH)-)，3.08(s，2H，-CH2-4)，2.89(s，2H，-CH2-6)，2.59(s，5H，-CH3-2，-CH 2 N(CH2)5)，2.40(m，4H，-CH2N(CH 2 CH2CH2CH2 CH 2 ))，2.05(m，2H，-CH2-5)，1.60～1.43(m，6H，-CH2N(CH2 CH 2 -CH 2 -CH 2 CH2))；
ESI-MS：483.3[M+H]+.
实施例22
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-14)
使用实施例9的方法，0.11g(0.83mmol)2-羟基吲哚和0.25g(0.72mmol)N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)反应得0.11g(33％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.29(s，1H，-NH-1)，7.96(s，1H，-NH-1’)，7.63(d，1H，J＝8.14Hz，H-4’)，7.15(t，1H，H-6’)，7.06(t，1H，H-5’)，6.91(dd，1H，J＝7.69Hz，H-7’)，6.13(t，1H，-CONH-)，3.94(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.70(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.36(m，1H，-CH(OH)-)，3.14(t，2H，-CH2-4)，2.90(t，2H，-CH2-6)，2.72(bs，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2NCH3)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.46～2.37(m，8H，-N(CH 2 CH 2 )2NCH3)，2.30(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH 3 )，2.06(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：464.1[M+H]+，486.0[M+Na]+.
实施例23
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-15)
使用实施例9的方法，0.13g(0.86mmol)5-氟-2-羟基吲哚和0.25g(0.72mmol)N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)反应得0.10g(29％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.32(s，1H，-NH-1)，8.07(bs，1H，-NH-1’)，7.35(dd，1H，J＝10.6Hz，H-4’)，6.89～6.78(m，2H，H-6’，H-7’)，6.16(t，1H，-CONH-)，3.94(s，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，3.09(t，2H，-CH2-4)，2.90(t，2H，-CH2-6)，2.74(s，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2NCH3)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.47～2.37(m，8H，-N(CH 2 CH 2 )2NCH3)，2.30(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH 3 )，2.07(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：482.0[M+H]+.
实施例24
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-16)
使用实施例9的方法，0.14g(0.84mmol)5-氯-2-羟基吲哚和0.25g(0.72mmol)N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-6)反应得0.11g(31％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.28(s，1H，-NH-1)，7.97(s，1H，-NH-1’)，7.59(s，1H，H-4’)，7.13(dd，1H，J＝8.22Hz，H-6’)，6.83(d，1H，J＝8.23Hz，H-7’)，6.15(s，1H，-CONH-)，3.94(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.73(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.35(m，1H，-CH(OH)-)，3.11(t，2H，-CH2-4)，2.92(t，2H，-CH2-6)，2.77(bs，2H，-CH 2 N(CH2CH2)2NCH3)，2.60(s，3H，-CH3-2)，2.52～2.40(m，8H，-N(CH 2 CH 2 )2NCH3)，2.33(s，3H，-N(CH2CH2)2NCH 3 )，2.08(m，2H，-CH2-5)；
ESI-MS：498.0[M+H]+，520.0[M+Na]+.
实施例25
N-[3-(N-甲基环己基胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-甲基-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(I-17)
使用实施例9的方法，0.13g(0.88mmol)5-甲基-2-羟基吲哚和0.27g(0.75mmol)N-[3-(N-甲基环己基胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺(II-7)反应得0.14g(38％)为黄色固体的标题化合物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)δ14.29(s，1H，-NH-1)，8.06(s，1H，-NH-1’)，7.42(s，1H，H-4’)，6.97(d，1H，J＝7.88Hz，H-6’)，6.80(d，1H，J＝7.82Hz，H-7’)，6.23(t，1H，-CONH-)，3.88(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.74(m，1H，-CONHCH(H)-)，3.33(m，1H，-CH(OH)-)，3.12(t，2H，-CH2-4)，2.89(t，2H，-CH2-6)，2.59(s，3H，-CH3-2)，2.52(m，2H，-CONHCH2CH(OH)-CH 2 N-)，2.38(s，3H，-NCH 3 -)，2.33(s，3H，-CH3-5’)，2.05(m，2H，-CH2-5)，1.88～1.62(m，6H，环己基)，1.32～1.04(m，5H，环己基)；
ESI-MS：491.1[M+H]+.
生物学实施例
采用下列试验甄别具有最佳程度的所需活性的那些化合物。
抑制肿瘤细胞增殖测定方法(MTT法)
测定按常规采用溴化四氮唑蓝(MTT)法。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性溴化四氮唑蓝还原为难溶性的蓝紫色结晶物(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。因而，采用MTT法可测定本发明化合物的抑制细胞增殖能力，同时利用本领域熟知的方法，可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。
1.试剂和仪器
RPMI 1640培养基(RPMI 1640+12％小牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+链霉素0.15g/l)；
RPMI 1640培养基(RPMI 1640+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+链霉素0.15g/l)；
高糖DMEM培养基(DMEM+10％小牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+链霉素0.15g/l)；
高糖DMEM培养基(DMEM+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+链霉素0.15g/l)；
MC COYS 5-A培养基(DMEM+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/l+NaHCO32.2g/l+青霉素0.13g/l+链霉素0.15g/l)；
胰蛋白酶；
MTT(美国Amresco公司产品)；
待测化合物：本发明实施例中制备的化合物I-1～I-17；
酶标仪(TECAN infinite M200)
2.癌细胞株
2.1人胃腺癌细胞株(BGC)
2.2人非小细胞肺癌(A549)
2.3人白血病细胞株(K562)
2.4人胰腺癌细胞株(PANC-1)
2.5人小细胞肺癌(NCI-H446)
如2.1、2.2、2.3、2.4和2.5所列癌细胞株用含12％小牛血清的RPMI 1640培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
2.6人胰腺癌细胞株(BXPC-3)
2.7人膀胱癌细胞株(T24)
如2.6和2.7所列癌细胞株用12％胎牛血清的RPMI 1640培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
2.8人肝癌细胞株(HEPG2)
2.9人乳腺癌细胞株(MCF-7)
如2.8和2.9所列癌细胞株用12％小牛血清的高糖DMEM培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
2.10人结肠腺癌细胞株(CACO-2)
如2.10所列癌细胞株用12％胎牛血清的高糖DMEM培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
2.11人结肠癌细胞株(HT29)
2.12人结肠癌细胞株(HCT116)
2.13人卵巢癌细胞株(SK-OV-3)
如2.11、2.12和2.13所列癌细胞株用12％胎牛血清的MC COYS 5-A培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养。
3.实验方法
3.1接种：取处于指数生长期，状态良好的细胞一瓶，加入适量胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，用含12％小牛血清的RPMI1640(或DMEM或5A)培养液配成细胞悬液，计数，并将细胞密度调整稀释至1.67×104/ml取细胞悬液接种于96孔板上，180ul/孔(含肿瘤细胞3000/孔)。
3.2培养：将培养板转入恒温CO2培养箱中，在37℃，5％CO2及饱和湿度条件下培养24小时。
3.3初筛：待测化合物先用DMSO配制成0.1M浓度，再作3个稀释度，用于初筛，浓度依次为10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L。加入待测化合物，20ul/孔，培养72小时。每组设3个平行孔，并重复3次，测定96孔板每孔吸光值，记录结果计算细胞生长抑制率，取三次平均值。
3.4染色：
3.4.1将MTT加入96孔板(贴壁细胞)中，20ul/孔，置于培养箱中孵育4小时，吸弃孔内上清液，加入DMSO 100ul/孔，置平板摇床上震荡5分钟。
3.4.2将MTT加入96孔板中(悬浮细胞)，20ul/孔，置于培养箱中孵育4小时，再加入20％SDS 50ul/孔，置于培养箱中过夜。
3.5测定：酶标仪设定波长为570nm，参考波长为630nm，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞生长抑制率，以判断受试药物的抗肿瘤活性。
3.6复筛：在初筛浓度为10-5mol/L时，3次细胞抑制率≥50％的化合物用于复筛，将0.1mol/L再作10个稀释度，浓度依次为10-5mol/L、0.5×10-5mol/L、10-6mol/L、0.8×10-6mol/L、0.6×10-6mol/L、0.4×10-6mol/L、0.2×10-6mol/L、10-7mol/L、0.8×10-7mol/L和0.4×10-7mol/L。加入受试化合物，20ul/孔，培养48小时。同样每组设3个平行孔，并重复3次，并按照初筛方法，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞生长抑制率。
3.7细胞生长抑制率以及IC50的计算：
对照组平均OD值-给药组平均OD值
同时根据各浓度的生长抑制率，采用以化合物浓度的对数同Logit[I]线性回归，求出抑制生长率为50％时的待测化合物浓度即IC50，取三次平均值。
4.实验结果
4.1细胞生长抑制率
在浓度为10-5mol/L，本发明化合物对不同肿瘤细胞的生长抑制率分别见表1和表2：
表1
表2
4.2细胞生长半数抑制浓度(IC50umol/L)
本发明化合物对不同肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC50)分别见表3和表4：
表3
表4
5.实验结论
本发明实施例中制备的具有式(I)结构的化合物I-1～I-17对多种肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用。上述这些化合物可应用于抗肿瘤药物的制备。
Claims (7)
1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1是氢、卤素、烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、-(CH2)nR12或-C(O)NR13R14；
R2是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、氰基、-NR10R11、-NR10C(O)R11、-C(O)R9、芳基、杂芳基、-S(O)2NR10R11或-SO2R15；
R3是氢、卤素、烷基、卤代烷基、羟基、烷氧基、-C(O)R9、-NR10R11、芳基、杂芳基、-NR10S(O)2R11、-S(O)2NR10R11、-NR10C(O)R11、-NR10C(O)OR11或-SO2R15；
R4是氢、卤素、烷基、羟基、烷氧基或-NR10R11；
R5是氢、烷基或-C(O)R16；
R6、R7和R8是氢或烷基；
R9是氢、羟基、烷氧基或芳氧基；
R12是羟基、-C(O)R9、-NR10R11或-C(O)NR10R11；
R13和R14独立地选自氢、烷基或芳基，或者R13和R14与它们所连接的氮原子一起形成杂环基；
R15是烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基；
R16是羟基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
Z是芳基、杂芳基、杂环基或-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基；
n是1、2、3或4。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1、R2、R3和R4独立地选自氢、羟基、烷氧基、-NR10R11、卤素或烷基；
R5是氢或烷基；
R6、R7和R8独立地选自氢或烷基；
Z是-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
3.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1、R2、R3和R4独立地选自氢、卤素或烷基；
R5是甲基；
R6、R7和R8是氢；
Z是-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
4.权利要求3的化合物或盐，其中所述的化合物选自下组：
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(二乙胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(二甲胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吗啉-4-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(吡咯烷-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(哌啶-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氟-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-氯-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺；
N-[3-(N-甲基环己基胺基)-2-羟基丙基]-2-甲基-7-[1，2-二氢-5-甲基-2-氧代-3H-吲哚-(Z)-3-亚基]-4，5，6，7-四氢-1H-吲哚-3-羧酰胺。
5.权利要求1-4任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.一种式(II)的中间体：
其中：
R5是氢、烷基或-C(O)R16；
R6、R7和R8是氢或烷基；
R16是羟基、烷氧基、芳氧基或-NR10R11；
Z是芳基、杂芳基、杂环基或-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
7.根据权利要求6所述的中间体，其中
R5是甲基；
R6、R7和R8是氢；
Z是-NR10R11；
R10和R11独立地选自氢、烷基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R10和R11合起来形成一个杂环基。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080618 |