BR112014018868B1 - composto heterocíclico aromático contendo nitrogênio, composição farmacêutica compreendendo dito composto e uso do mesmo - Google Patents

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Abstract

COMPOSTO HETEROCÍCLICO AROMÁTICO CONTENDO NITROGÊNIO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO DITO COMPOSTO E USO DO MESMO. É fornecido um composto útil como um agente profilático e/ou terapêutico para o câncer de bexiga. Como resultado de estudos sobre compostos tendo ação inibidora de FGFR, os presentes inventores verificaram que os compostos aromáticos heterocíclicos contendo nitrogênio da presente invenção têm ação inibidora sobre FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3, particularmente, FGFR3 mutante, e assim, a presente invenção foi rea-lizada. O composto heterocíclico aromático contendo nitrogênio da presente invenção pode ser usado como um agente terapêutico para vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou de FGFR3, tais como o câncer do pulmão e câncer da mama resistente à terapia hormonal, câncer do estômago, câncer da mama triplo negativo, câncer de endométrio, câncer de bexiga, e glioblastoma, particularmente, como um agente profilático e/ou terapêutico para o câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante.

Description

CAMPO TÉCNICO
[001]A presente invenção refere-se a compostos úteis como ingredientes ativos em composições farmacêuticas, particularmente, em composições farmacêuticas para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3- positivo mutante.
ANTECEDENTES DA TÉCNICA
[002]A via de sinalização induzida por fatores de crescimento de fibroblas- tos (FGFs) e os seus receptores, receptores do fator de crescimento de fibroblas- tos (FGFRs), é uma das vias de sinalização que tem as funções mais importantes no curso de desenvolvimento da embriogênese precoce para a formação de vários órgãos. Existem 18 genes de ligantes de FGF e quatro genes de FGFR (FGFR1 a FGFR4), que são expressos em várias células e envolvidos no crescimento, diferenciação e sobrevivência celular. Nos últimos anos, tem sido relatada a importância da sinalização de FGF na patogênese de diversos tipos de tumores, e os rea-gentesclínicos que visam especificamente os FGF ou receptores de FGF estão sendo desenvolvidos (Nature Reviews Cancer 2010; 10, 116-129, J. Med. Chem. 2011; 54, 7066-7083, AACR 2011, No. 1643 AstraZeneca).
[003]Tal como para FGFR1, relata-se que o gene FGFR1 é amplificado no câncer do pulmão (em particular, o câncer de células escamosas), e terapia hormonal do câncer de mama resistente, e também é relatado que estas linhagens de células apresentam o crescimento celular dependente de FGFR1 (Sci. Transl. Med. 2010; 2(62): 62ra93, Breast Cancer Res. 2007; 9(2): R23, Cancer Res. 2010, 70 (5), 2085-2094).
[004]Como para FGFR2, a amplificação do gene no câncer de estômago e câncer de mama triplo negativo e a mutação ativadora no câncer endometrial são relatadas (Laboratory Investigation 1998, 78(9); 1143-1153, Virchows Arch. 1997, 431; 383-389, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 1993, 119, 265-272, AACR 2011, No. 1643 AstraZeneca, Oncogene 2010; 29, 2013-2023). Estas células de câncer foram também confirmaram apresentar o crescimento dependente de FGFR2.
[005]Além disso, FGFR3 apresenta ativação da mutação genética em cerca de 50% dos casos de câncer de bexiga. O câncer de bexiga é amplamente dividido em três tipos: tipos não invasivo, invasivo e metastático. Houve questões sobre eles pelo fato de que, embora o câncer de bexiga não invasivo tenha uma alta taxa de sobrevivência em 5 anos de 70% ou acima, ele frequentemente recorre ou evolui parcialmente para câncer invasivo, e pelo fato de que o câncer de bexiga invasivo ou metastático tem uma taxa de sobrevivência baixa de 5 anos de 50% ou abaixo. As terapias atuais para o câncer de bexiga não invasivo com mutação FGFR3 são a ressecção transuretral de tumor de bexiga (TUR-BT) e a terapia com BCG pós-operatória ou instilação intravesical de agentes quimioterápicos. No entanto, seu efeito de prevenção da recorrência continua a ser insatisfatório, e os seus efeitos adversos, tais como hematúria e bexiga irritável estavam em questão. Enquanto isso, a cistectomia total e a administração sistêmica de agentes quimioterapêuticos têm sido usadas para o tratamento do câncer de bexiga invasivo ou metastático. No entanto, há questões sobre a sua eficácia e efeitos adversos. O câncer de bexiga é conhecido por ser caracterizado pelo fato de que parte das células de câncer se desprende dos tecidos da bexiga na urina, e, com base nesta característica, a citologia da urina é usada para o diagnóstico de câncer de bexiga. Recentemente, foi relatado que a mutação FGFR3 pode ser detectada com o uso dos sedimentos na urina (Biochem. Biophys. Res. Commun. Nov 3, 2007; 362(4): 865-71). Com base na presença ou ausência desta mutação FGFR3, os pacientes com câncer de bexiga positivo para mutação FGFR3 podem ser selecionados, e a criação de um inibidor seletivo de FGFR3 foi  exigida.
[006]Também é relatado que os genes de fusão que combinam os genes FGFR e genes TACC (Transformação do domínio Coiled-coil Ácido) (FGFR3- TACC3 e FGFR1-TACC1) são expressos no tumor de alguns pacientes com glioblastoma (Science, Sep 7, 2012; 337(6099): 1231-5). De acordo com este relato, a expressão forçada de FGFR3-TACC3 e FGFR1-TACC1 em astrócitos levou à transformação e este resultado mostrou a oncogenicidade desses genes de fusão. Mostrou-se também que FGFR3-TACC3 está localizada em pólos do fuso mitótico e induz a aneuploidia cromossômica dependente de atividade de quinase. Além disso, o tratamento de células que expressam TACC3 FGFR3 com um inibidor de FGFR suprimiu a aneuploidia cromossômica, suprimindo, assim, o crescimento das células. Assim, sugere-se que os inibidores de FGFR podem ser eficazes para o tratamento de pacientes com glioblastoma com genes de fusão FGFR-TACC.
[007]Também é relatado que as linhagens de células de câncer de bexiga humanas RT112, RT4 e LUCC2 expressam o gene de fusão FGFR3-TACC3 e que a linhagem de células de câncer de bexiga humana SW780 também expressa gene de fusão FGFR3-BAIAP2L1 (Hum Mol Genet., 2013 Feb 15, 22(4), 795-803). De acordo com este relato, o crescimento independente de ancoragem destes genes de fusão foi confirmado como um resultado da sua introdução em células de NIH3T3. Dado que o crescimento das linhagens de células de câncer de bexiga anteriores que expressam estes genes de fusão de FGFR3 é inibido por inibidores de FGFR, a detecção da presença dos genes de fusão pode ser útil para selecionar os pacientes que podem ser tratados eficazmente com inibidores de FGFR.
[008]É relatado que os compostos de fórmula (A) mostrados abaixo apresentam inibição de várias quinases e são úteis como agentes terapêuticos para o câncer e distúrbios vasculares, incluindo infarto do miocárdio (Documento de Patente 1). A Tabela 2 do documento divulga os resultados do teste de inibição de quinases Yes, VEGFR, EphB4, PDGFRβ, e FGFR1 por alguns dos compostos, que divulga que os valores de IC50 para a atividade inibidora de FGFR1 foram maiores do que 1000 nM, mostrando que a atividade também foi menor do que no caso da inibição da atividade das outras cinases. Além disso, no documento, não há nenhuma descrição específica sobre os compostos de fórmula (I) da presente invenção descrita abaixa.
[009][Fórmula 1]
Figure img0001
(Nesta fórmula, cada um de A é CH, N, ou semelhante; cada um de B é CH ou semelhante; AI é O, CR2, ou semelhante; ROé H ou semelhante; A2 é NR, O, ou semelhante; LIé uma ligação, O, ou semelhante; L2 é uma ligação, C1-C6 alquil, ou semelhante; RI é um anel heterocíclico de 3- a 6- membros ou semelhante; e cada um de Re e Rf é H, C1-C6 alquil, hidróxi alquil, ou semelhante. Para outros símbolos, fazer referência à publicação.)
[0010]É relatado que os compostos de fórmula (B) mostrados abaixo exibem ação inibidora de Abl e são úteis contra vários tipos de câncer (Documento de Patente 2). No entanto, no documento, não há nenhuma descrição específica sobre a ação inibidora de FGFR. Além disso, os compostos de fórmula (I) da presente invenção descritos abaixo têm grupo (R1)p que se diferenciam dos compostos na estrutura dos compostos de fórmula (B).
[0011][Fórmula 2]
Figure img0002
(Nesta fórmula, G é CH ou semelhante; A é 3-hidróxi fenil ou semelhante; e Y é vinil ou etileno. Para outros símbolos, fazer referência à publicação.)
[0012]É relatado que os compostos de fórmula (C) mostrados abaixo possuem ação inibidora sobre várias quinases, incluindo Src, VEGFR2, Yes, Fyn, Lck, Abl, PDGFR, EGFR, e RET e são utilizáveis para o tratamento do câncer, doenças vasculares, e semelhantes (Documento de Patente 3). No entanto, não há nenhuma divulgação sobre a ação inibidora de FGFR no documento. No documento, também não há nenhuma divulgação específica sobre os compostos de fórmula (I) da presente invenção descritos abaixo.
[0013][Fórmula 3]
Figure img0003
(Nesta fórmula, G1 é aril tendo, opcionalmente, um substituinte, heteroaril tendo, opcionalmente, um substituinte, ou semelhante; L1 é O, SO, SO2, alquil op-cionalmentesubstituído, ou semelhante; L2 é alquil opcionalmente substituído, anel heterocíclico, ou semelhante; A1 é uma ligação, O, C(Ra)2, ou semelhante; e A2 é NRa, O, ou semelhante. Para os outros símbolos, consulte a publicação.)
[0014]É relatado que os compostos de fórmula (D) mostrados abaixo têm ação inibidora de quinase TIE-2 e/ou VEGFR-2 e são úteis no tratamento de doenças relacionadas com a angiogênese, incluindo o câncer (Documento de Patente 4). No entanto, não há nenhuma descrição específica sobre a inibição de FGFR no documento. Além disso, os compostos de fórmula (I) da presente invenção descritos abaixo diferem em estrutura dos compostos de fórmula (D) pelo fato de que os compostos de fórmula (I) têm um grupo L1 que não tem nenhum grupo amino e que os compostos também têm duas ligações posicionadas para para entre si em um anel compreendendo X e Y.
[0015][Fórmula 4]
Figure img0004
(Nesta fórmula, W é N ou CR; R é H ou semelhante. Para outros símbolos, fazer referência à publicação.)
[0016]É relatado que os compostos de fórmula (E) mostrados abaixo apresentam ação inibidora sobre a atividade de muitos receptores de proteína tirosina quinase, particularmente, FGFRs, e podem ser usados para o tratamento de várias doenças relacionadas com a atividade aberrante ou excessiva destas enzimas (Documento de Patente 5). No entanto, os compostos de fórmula (I) da presente invenção descritos abaixo diferem na estrutura dos compostos de fórmula (E) em que os compostos de fórmula (I) têm um grupo L1, que não reprsesent um átomo de N e que os compostos também têm duas ligações posicionadas para entre si em um anel compreendendo X e Y.
[0017][Fórmula 5]
Figure img0005
(Nesta fórmula, dois de X, Y, e Z são N e o terceiro é CH ou N. Para outros símbolos, fazer referência à publicação.)
[0018]É relatado que os compostos de fórmula (F) mostrados abaixo apresentam ação inibidora em várias quinases e são úteis contra a inflamação e doenças autoimunes (Documento de Patente 6). Por outro lado, os compostos de fórmula (I) da presente invenção descritos abaixo diferem na estrutura dos compostos de fórmula (F) pelo fato de que os compostos de fórmula (I) têm um grupo L1 que não é amida e que os compostos também têm duas ligações posicionadas para entre si sobre o anel compreendendo X e Y.
[0019][Fórmula 6]
Figure img0006
(Nesta fórmula, A1, A2, A3, e A4 são CR4, CR5, CR6, e CR7, respectivamente, ou são N; L é -C(O)NR7-, -NR7C(O)-, ou semelhante. Para outros símbolos, fazer referência à publicação).
[0020]É relatado que os compostos de fórmula (G) e aqueles de fórmula (H) mostrados abaixo apresentam ação inibidora de FGFR e podem ser usados para o tratamento de vários cânceres (Documentos de Patente 7 e 8).
[0021][Fórmula 7]
Figure img0007
(Na fórmula (G), o anel B representa um grupo aromático de 5- ou 6- membros que pode compreender pelo menos um heteroátomo selecionado a partir de O, S, e N. Para outros símbolos, fazer referência à publicação.)
[0022]É relatado que os compostos de fórmula (J) mostrados abaixo apresentam efeitos de ativação de glucoquinase e podem ser usados para o tratamento de doenças relacionadas com a diabetes mellitus (Documento de Patente 9), e a característica estrutural é a substituição com amino na posição 2 de piridina.
[0023][Fórmula 8]
Figure img0008
(Para os símbolos nesta fórmula, fazer referência à publicação.)
[0024]Além disso, os compostos conhecidos tendo as estruturas mostradas abaixo são registrados na base de dados como 1371065-79-0 e 1317903-92-6 no número de registro CAS, respectivamente.
[0025] [Fórmula 9]
Figure img0009
LISTA DE CITAÇÃO DOCUMENTOS DE PATENTE
[0026]Documento de Patente 1: Publicação Internacional No. WO 2006/101977 Documento de Patente 2: Publicação Internacional No. WO 2007/056075 Documento de Patente 3: Publicação Internacional No. WO 2008/008234 Documento de Patente 4: Publicação Internacional No. WO 2003/066601 Documento de Patente 5: Publicação Internacional No. WO 2007/071752 Documento de Patente 6: Publicação Internacional No. WO 2007/022380 Documento de Patente 7: Publicação Internacional No. WO 2008/075068 Documento de Patente 8: Publicação Internacional No. WO 2009/153592 Documento de Patente 9: Publicação Internacional No. WO 2009/046784
SUMÁRIO DA INVENÇÃO PROBLEMA TÉCNICO
[0027]A presente invenção fornece compostos úteis como ingredientes ativos em composições farmacêuticas, particularmente, em composições farmacêuticas para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante.
SOLUÇÃO PARA O PROBLEMA
[0028]Como resultado de estudos intensivos e extensivos sobre os compostos tendo ação inibidora de FGFR, os presentes inventores verificaram que o composto heterocíclico aromático contendo nitrogênio da presente invenção tem ação inibidora em FGFR1, FGFR2, FGFR3 e, em particular, boa ação inibidora sobre FGFR3 mutante. A presente invenção foi assim realizada.
[0029]Mais especificamente, a presente invenção refere-se a um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, bem como a uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0030][Fórmula 10]
Figure img0010
(em que X e Y, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são CH ou N, com a condição de que X e Y não são N simultaneamente; L1é -alquileno inferior-, -alquileno inferior-O-, -O-alquileno inferior-, ou - alquinileno inferior-; Z é N ou CH; R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são alquil inferior opcionalmen-tesubstituídos com halogênio, -O-(alquil inferior opcionalmente substituído com ha- logênio), halogênio, ciano, ou -N(alquil inferior)2; p é um inteiro de 2 a 4; anel W é um anel carbocíclico aromático opcionalmente substituído, um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído, ou um anel heterocíclico não aromático opcionalmente substituído; Q é -L2-R2 ou R3; L2é um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído ou um anel heterocíclico não aromático opcionalmente substituído; R2é um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com alquil inferior, cicloalquil opcionalmente substituído, alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em - OH e -O-alquil inferior, -C(O)-R0, cicloalquil opcionalmente substituído com -C(O)-, - NH-R0, -N(alquil inferior)-R0, grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com L3-, ou H; R0é alquil inferior opcionalmente substituído com -OH; R3é (1) alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, -OH, -O-R0, amino opcionalmente substituído com um ou dois R0, carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0, um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído, um grupo heterocí- clico não aromático opcionalmente substituído, e um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -C(O)-; (2) -O-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, -OH, -O-R0, carbamoil opcionalmentesubstituído com um ou dois R0, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído, e um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -C(O)-); (3) -NH-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos se-lecionados a partir do grupo que consiste em -OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com alquil inferior, e carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0); (4) -N(alquil inferior)-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, um grupo hetero- cíclico não aromático opcionalmente substituído com alquil inferior, e carbamoil opcionalmentesubstituído com um ou dois R0); (5) -C(O)OH; (6) grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -C(O)-; (7) -O-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com alquil inferior); ou (8) carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0; e L3é uma ligação, -NH-, -N(alquil inferior)-, ou alquileno inferior).
[0031]A menos que especificado de outra forma, quando os símbolos usados em uma fórmula química da presente invenção também são usados em uma outra fórmula química, os mesmos símbolos têm significados idênticos.
[0032]A presente invenção refere-se também a uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável e que está disponível para o tratamento de vários cãnceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3, tal como o câncer de pulmão relacionado com FGFR1 e câncer de mama resistente à terapia com hormônio, câncer de estômago relacionado com FGFR2, câncer de mama triplo negativo e câncer endometrial e câncer de bexiga relacionado com FGFR3 e glioblastoma. Deve-se notar que a composição farmacêutica inclui agentes terapêuticos para vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3. Uma modalidade é uma composição farmacêutica para o tratamento de câncer de bexiga relacionado com FGFR3, que compreende um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável. Outra modalidade é uma composição farmacêutica para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante, que compreende um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável. No presente relatório descritivo, "mutante" inclui mutação pontual, mutação de fusão, mutação de deleção e mutação de inserção, e em uma modalidade, "mutante" significa ideia geral incluindo mutação pontual e mutação de fusão. Em uma outra modalidade, "mutante" significa mutação pontual, e em ainda uma outra modalidade, "mutante" significa mutação de fusão.
[0033]Além disso, a presente invenção refere-se a: uso de um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento de vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3; Uso de um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, para o tratamento de vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3; um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, para o tratamento de vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3; e um método para o tratamento de vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3, que compreende a administração de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo a um sujeito. A presente invenção também se refere a: uso de um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante; uso de um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante; um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante; e um método para o tratamento de câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante, que compreende a administração de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo a um sujeito. Deve-se notar que o "sujeito" referido acima é um ser humano ou um outro animal com necessidade de tratamento, e é um ser humano com necessidade de tratamento em uma modalidade.
EFEITOS VANTAJOSOS DA INVENÇÃO
[0034]Um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo tem ação inibidora sobre FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3, particularmente, FGFR3 mutante, e pode ser usado como um agente terapêutico para vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2, e/ou FGFR3, tal como câncer de pulmão e câncer de mama resistente à terapia com hormônio, câncer de estômago, câncer de mama triplo negativo, câncer endometrial, câncer de bexiga, e globlastoma, particularmente, como um agenteterapêutico para câncer de bexiga positivo para FGFR3 mutante.
DESCRIÇÃO DAS MODALIDADES
[0035]A presente invenção ê descrita em detalhe a seguir.
[0036]Como usado no presente documento, o termo “alquil inferior” refere- se a um alquil linear ou ramificado tendo 1 a 8 átomos de carbono (a seguir abre- viado como C1-8) incluindo metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil, sec-butil, terc-butil, n-pentil, n-hexil, n-heptil, n-octil, e semelhantes. Uma outra modalidade é C1-4 alquil, e ainda uma outra modalidade é metil. Ainda uma outra modalidade é etil.
[0037]O termo “alquileno inferior” refere-se a um C1-8 alquileno linear ou ramificado incluindo metileno, etileno, trimetileno, tetrametileno, pentametileno, hexametileno, heptametileno, octametileno, propileno, metilmetileno, etiletileno, 1,2-dimetiletileno, 1,1,2,2-tetrametiletileno, e semelhantes. Uma outra modalidade é C1-4 alquileno, e ainda uma outra modalidade é metileno. Ainda uma outra modalidadeé etileno.
[0038]O termo “alquinileno inferior” refere-se a um C2-6 alquinileno linear ou ramificado incluindo etinileno, propinileno, butinileno, pentinileno, hexinileno, 1,3- butadi-inileno, 1,3-pentadi-inileno, e semelhantes. Uma outra modalidade é C2-4 alquinileno, e ainda uma outra modalidade é etinileno.
[0039]O termo “cicloalquil” refere-se a um grupo de anel de hidrocarboneto saturado C3-10 e pode ser em ponte. Exemplos incluem ciclopropil, ciclobutil, ciclo- pentil, ciclo-hexil, ciclo-heptil, ciclooctil, adamantil e semelhantes. Uma outra modalidadeé C3-8 cicloalquil, e ainda uma outra modalidade é C3-6 cicloalquil. Ainda uma outra modalidade é ciclopropil.
[0040]O termo “anel carbocíclico aromático” refere-se a um anel de hidro- carboneto aromático monocíclico a tricíclico C6-14. Exemplos incluem benzeno, naf- taleno, e antraceno, e uma outra modalidade é benzeno.
[0041]O termo “anel heterocíclico aromático” refere-se a um anel heterocí- clico aromático de 5- a 10- membros que tem 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre. Exemplos incluem piridina, pirrol, pirazina, pirimidina, piridazina, imidazol, pirazol, tiazol, oxazol, iso- xazol, tiofeno, isotiazol, furano, oxadiazol, tiadiazol, indol, isoindol, indazol, benzo furano, benzotiofeno, benzimidazol, benzoxazol, benzotiazol, quinolina, isoquinoli- na, cinolina, ftalazina, quinazolina, quinoxalina, tienopiridina, tienopirimidina, tie- nopirazina, e semelhantes. Uma outra modalidade é piridina, pirrol, pirazina, piri- midina, piridazina, imidazol, pirazol, tiazol, oxazol, tiofeno, furano, oxadiazol e in- dazol. Ainda uma outra modalidade é piridina, pirimidina, imidazol, pirazol, tiazol e indazol. Ainda uma outra modalidade é piridina, imidazol e pirazol. Ainda uma outra modalidade é piridina. Ainda uma outra modalidade é pirazol. Ainda uma outra modalidade é imidazol.
[0042]O termo “grupo heterocíclico aromático” refere-se a um grupo monovalente do “anel heterocíclico aromático” descrito acima. Exemplos incluem piridil, pirrolil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, oxazolil, tienil, furil, 1,2,4-oxadiazolil, e semelhantes. Uma outra modalidade é um grupo heterocíclico aromático de 5- ou 6- membros que tem 1 ou 2 átomos de nitrogênio, e ainda uma outra modalidade é piridil.
[0043]O termo “anel heterocíclico não aromático” refere-se a um anel hete- rocíclico não aromático de 3- a 10- membros (ou um anel heterocíclico não aromático de 4- a 8-membros em uma modalidade) tendo 1 a 4 heteroátomos que são selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio, e enxofre e que são os mesmos ou diferentes. O anel heterocíclico não aromático pode ser fundido a um anel de benzeno ou a um anel de tiofeno, ser ligado em ponte por alquileno inferior, ser combinado com um outro anel heterocíclico não aromático para formar um anel espiro, ou tem uma ligação insaturada em parte do próprio anel. O átomo de enxofre ou átomo de nitrogênio que é um átomo formador de anel pode ser oxidado. Exemplos incluem aziridina, oxetano, azetidina, pirrolidina, piperidina, azepano, diazepano, azocano, piperazina, 4-oxidopiperazina, homopi- perazina, morfolina, oxazepano, tiomorfolina, 1,1-dioxidotiomorfolina, 1,1- dioxidotetra-hidrotiopirano, 1,1-dioxidotiazolidina, tiazepano, 1-  azabiciclo[2,2,2]octano, 7-oxabiciclo[2,2,1]heptano, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptano, 3-azabiciclo[3.2.1]octano, 8-azabiciclo[3,2,1]octano, 9-azabiciclo[3,3,1]nonano, 3,9- diazabiciclo[3,3,1]nonano, 3,9-diazaespiro[5,5]undecano, 2,6- diazaespiro[3,3]heptano, 2-oxa-6-azaespiro[3,3]heptano, 2-oxa-7- azaespiro[3,5]nonano, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, dioxano, dioxolano, te- tra-hidrotiofeno, tetra-hidrotiopirano, tetra-hidrotienopiridina, tetra- hidrobenzoazepina, tetra-hidrobenzodiazepina, di-hidrobenzofurano, di- hidrobenzotiofeno, di-hidrobenzopirano, di-hidrobenzodioxano, benzodioxano, di- hidropirano, di-hidropirrol, di-hidropiridina, tetra-hidropiridina, tetra-hidropirazina, e semelhantes. Uma outra modalidade é um anel heterocíclico não aromático de 5- a 7- membros tendo 1 ou 2 heteroátomos que são selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio, e enxofre e que são os mesmos ou diferen-tes. Ainda uma outra modalidade é um anel heterocíclico não aromático de 5- a 7- membros contendo nitrogênio que pode ter pelo menos um átomo de nitrogênio e tem um heteroátomo adicional selecionado a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio e enxofre. Ainda uma outra modalidade é um anel heterocíclico não aromático de 6-membros contendo nitrogênio. Exemplos incluem piperazina, piperidina, morfolina, tiomorfolina, 1,1-dioxidotiomorfolina, e semelhantes. Ainda uma outra modalidade é oxetano, piperidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, 4- oxidopiperazina, 1,1-dioxidotiomorfolina, tetra-hidropirano, tetra-hidrofurano, tetra- hidrotiofeno, tetra-hidropiridina, 1-azabiciclo[2,2,2]octano, 8-azabiciclo[3,2,1]octano, 3,9-diazaespiro[5,5]undecano, 2,6-diazaespiro[3,3]heptano, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]heptano, ou 2-oxa-7-azaespiro[3,5]nonano. Ainda uma outra modalidadeé morfolina, piperidina, piperazina, 4-oxidopiperazina, 3,9- diazaespiro[5,5]undecano, ou 2,6-diazaespiro[3,3]heptano. Ainda uma outra modalidadeé piperidina. Ainda uma outra modalidade é piperazina.
[0044]O termo “grupo heterocíclico não-aromático” refere-se a um grupo monovalente de um anel heterocíclico não aromático. O grupo heterocíclico não aromático é um grupo heterocíclico não aromático de 3- a 10- membros tendo 1 a 4 heteroátomos que são selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio, e enxofre e que são os mesmos ou diferentes. O grupo heterocíclico não aromático pode ser ligado em ponte por alquileno inferior, ter uma ligação insatu- rada em parte do anel, ou ser combinado com um outro anel heterocíclico não aromático para formar um anel espiro. O átomo de enxofre ou átomo de nitrogênio que é um átomo formador de anel pode ser oxidado. Exemplos incluem aziridinil, azetidinil, oxetanil, pirrolidinil, piperidinil, azepanil, diazepanil, azocanil, piperazinil, homopiperazinil, morfolinil, oxazepanil, tiomorfolinil, 1,1-dioxidotiomorfolinil, tiaze- panil, tetra-hidropiranil, tetra-hidrofuril, dioxanil, dioxolanil, tetra-hidrotienil, tetra- hidrotiopiranil, 7-oxabiciclo[2,2,1]heptil, 2,5-diazabiciclo[2,2,1]heptil, 3- azabiciclo[3,2,1]octil, 8-azabiciclo[3,2,1]octil, 9-azabiciclo[3,3,1]nonil, 3,9- diazabiciclo[3,3,1]nonil, di-hidropiranil, di-hidropirrolil, di-hidropiridil, tetra-hidropiridil, tetra-hidropirazil, 9-diazaespiro[5,5]undec-3-il, 1,9-diazaespiro[5,5]undec-9-il, 2,8- diazaespiro[4,5]dec-8-il, 1,4-dioxa-8-azaespiro[4,5]dec-8-il, e semelhantes. Uma outra modalidade é um grupo heterocíclico não aromático de 5- a 7- membros tendo 1 ou 2 heteroátomos que são selecionados a partir do grupo que consiste em nitrogênio, oxigênio, e enxofre e que são os mesmos ou diferentes. Ainda uma outra modalidade é um grupo heterocíclico não aromático de 5- a 7- membros tendo pelo menos um átomo de nitrogênio. Ainda uma outra modalidade é um grupo he- terocíclico não aromático de 6 membros contendo nitrogênio. Exemplos incluem piperazinil, piperidinil, morfolinil, tiomorfolinil, 1,1-dioxidotiomorfolinil, e semelhantes. Ainda uma outra modalidade é oxetanil, piperidinil, piperazinil, morfolinil, tio- morfolinil, 4-oxidopiperazinil, 1,1-dioxidotiomorfolinil, tetra-hidropiranil, tetra- hidrofuril, tetra-hidrotienil, tetra-hidropiridil, 1-azabiciclo[2,2,2]octil, 8- azabiciclo[3,2,1]octil, 3,9-diazaespiro[5,5]undec-3-il, 2,6-diazaespiro[3,3]hept-2-il, ou 2-oxa-6-azaespiro[3,3]hept-6-il. Ainda uma outra modalidade é piperidinil ou piperazinil. Ainda uma outra modalidade é piperidinil. Ainda uma outra modalidade é piperazinil.
[0045]O termo “halogênio” refere-se a -F, -Cl, -Br, ou -I. Uma outra modalidadeé -F, e ainda uma outra modalidade é -Cl.
[0046]Um composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, em que L1 na fórmula (I) é -alquileno inferior-O-, significa um composto de fórmula (I-I) ou um sal do mesmo.
[0047][Fórmula 11]
Figure img0011
(Nesta fórmula, L4 representa alquileno inferior. O mesmo se aplica a seguir.)
[0048]Além disso, dois a quatro R1 em (R1)p podem ser os mesmos ou diferentes uns dos outros.
[0049]A frase “opcionalmente substituído” como usada no presente documento significa “não substituído” ou “tendo 1 a 5 substituintes”. Quando uma pluralidade de substituintes está contida, estes substituintes podem ser os mesmos ou diferentes uns dos outros. Além disso, por exemplo, dois R0 sobre o nitrogênio no “carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0” podem ser os mesmos grupos alquil inferiores ou diferentes grupos alquil inferiores uns dos outros. Cada R0 pode ser substituído com -OH, ou alternativamente, quer um pode ser substituído ou nenhum pode ser substituído.
[0050]Como referido no presente documento, um substituinte em “um anel carbocíclico aromático opcionalmente substituído”, “um anel heterocíclico aromáti- co opcionalmente substituído”, ou “um anel heterocíclico não aromático opcional-mentesubstituído” como anel W na fórmula (I) é, por exemplo, um grupo mostrado no grupo D1 descrito abaixo.
[0051]O grupo D1 é um grupo que consiste em: (1) um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -OH e alquil inferior; (2) um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -OH e alquil inferior; (3) halogênios; (4) -O-alquil inferior, -S-alquil inferior, -OH, e -SH; (5) -CN e -NO2; (6) -CO2H e -CO2-alquil inferior; e (7) alquil inferior ou -O-alquil inferior, cada um dos quais sendo opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste nos grupos mostrados em (1) a (6) acima.
[0052]Uma outra modalidade do grupo D1 é um grupo que consiste em: (1) um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído com -OH; (2) halogênios; (3) -OH; (4) -CN; (5) -CO2H; e (6) alquil inferior ou -O-alquil inferior, cada um dos quais sendo opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste nos substituintes mostrados em (1) a (5) acima.
[0053]Ainda uma outra modalidade, o grupo D1 é um grupo que consiste em: (1) alquil inferior opcionalmente substituído com halogênio; (2) -O-alquil inferior opcionalmente substituído com um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído com -OH; (3) halogênios; e (4) -CN
[0054]Ainda em uma outra modalidade, o grupo D1 é um grupo que consiste em alquil inferior opcionalmente substituído com halogênio; -O-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com oxo, um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído com -OH, e halogênios), halogênios, ciano, e oxo.
[0055]Um substituinte aceitável em “um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído” ou “um anel heterocíclico não aromático opcionalmente substituído” chamado de L2 na fórmula (I), “cicloalquil opcionalmente substituído” ou “um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído” chamado de R2 na fórmula (I), e “um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído” ou “um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído” referido em R3 na fórmula (I) é, por exemplo, um substituinte selecionado a partir do grupo D2.
[0056]O grupo D2 é um grupo que consiste em: (1) halogênios; (2) -OH e -SH; (3) -CN; e (4) alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais substituintes se-lecionados a partir do grupo que consiste nos substituintes mostrados em (1) a (3) acima.
[0057]Uma outra modalidade, o grupo D2 é um grupo que consiste em: (1) alquil inferior opcionalmente substituído com -OH; e (2) -OH
[0058]Algumas modalidades dos compostos de fórmula (I) ou sais dos mesmos são dadas a seguir. (1) Um composto ou um sal do mesmo, em que X é N e Y é CH. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que X é CH e Y é N. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que X é CH e Y é CH. (2) Um composto ou um sal do mesmo, em que L1é alquileno inferior ou - alquileno inferior-O-. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L1é -alquileno inferior-. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L1é -alquileno inferior-O-. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L1é etileno ou -metileno-O-. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L1é etileno. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L1 é -metileno-O-. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L1é etinileno. (3) Um composto ou um sal do mesmo, em que Z é CH. Uma outra modalidadeé um composto ou um sal do mesmo, em que Z é N. (4) 1) Um composto ou um sal do mesmo, em que p é 2 ou 4. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que p é 2. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que p é 4. (5) 2) Um composto ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-alquil inferior ou halogênio. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-alquil inferior. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são halogênio. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-metil ou F. Ainda uma outra modali- dade é um composto ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-metil ou Cl. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que todos de R1são F. (6) Um composto ou um sal do mesmo, em que o anel aromático de 6 membros na fórmula (I) que é substituído com (R1)p e que tem Z como um átomo formador de anel é 2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-fenil ou 2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel aromático de 6 membros na fórmula (I) que é substituído com (R1)p e que tem Z como um átomo formador de anel é 2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-fenil. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel aromático de 6 membros na fórmula (I) que é substituído com (R1)p e que tem Z como um átomo formador de anel é 2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil. (7) Um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel carbo- cíclico aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1 ou é um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel benzeno substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1 ou é pirazol, piridina, pirimidina, tiazol, indazol, ou imidazol em que cada caso é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel benzeno opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1 ou seja pirazol opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel benzeno opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel benzeno opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em al- quil inferior, -O-alquil inferior e halogênios. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel benzeno opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em metil, -O-metil, e halogênios. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é um anel benzeno opcionalmentesubstituído com -O-metil. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é pirazol opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D1. Ainda uma outra modalidadeé um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é pirazol opcionalmentesubstituído com alquil inferior. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é pirazol opcionalmente substituído com metil. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é pirazol substituído com metil. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que o anel W é pirazol. (8) Um composto ou um sal do mesmo, em que Q é -L2-R2. Uma outra modalidadeé um composto ou um sal do mesmo, em que Q é R3. (9) Um composto ou um sal do mesmo, em que L2é a anel heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L2é um anel heterocíclico não aromático contendo nitrogênio opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L2é piperazina, 4-oxidopiperazina, piperidina, morfolina, azetidina, 3,9- diazaespiro[5,5]undecano, 2,6-diazaespiro[3,3]heptano, 2-oxa-6- azaespiro[3,3]heptano, 2-oxa-7-azaespiro[3,5]nonano, 8-azabiciclo[3,2,1]octano, ou 1-azabiciclo[2,2,2]octano em que cada caso é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2. Ainda uma outra modalidadeé um composto ou um sal do mesmo, em que L2é piperazina opcionalmentesubstituída com um ou mais metil, piperidina opcionalmente substituída com um ou mais metil, ou 3,9-diazaespiro[5,5]undecano. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que L2é piperidina ou 4-metilpiperazina. (10) Um composto ou um sal do mesmo, em que R2é alquil inferior opcio-nalmentesubstituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH e -O-alquil inferior, -NH-(alquil inferior opcionalmente substituído com -OH), um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2, -alquileno inferior-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2), ou H. Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R2é alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH e -O-alquil inferior, -NH-(alquil inferior opcionalmente substituído com -OH), um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com alquil inferior (o alquil inferior é opcionalmente substituído com -OH), ou H. Ainda uma outra modalidadeé um composto ou um sal do mesmo, em que R2é piperazina opcionalmentesubstituída com metil, piperidina opcionalmente substituída com metil, 2- hidróxi etilamino, ou H. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R2é 4-metilpiperazina, 2-hidróxi etilamino, ou H. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R2é 4-metilpiperazina. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R2é 2- hidróxi etilamino. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R2é H. (11) Um composto ou um sal do mesmo, em que R3é alquil inferior opcio- nalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0, - OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2, e -C(O)-(um grupo heterocí- clico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2) ou em que R3é -O-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0, -OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2, e -C(O)-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2)). Uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é alquil inferior substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0, -OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2, e - C(O)-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo D2). Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é alquil inferior substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -OH e alquil inferior, e -C(O)-(um grupo hete- rocíclico não aromático opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -OH e alquil inferior). Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é alquil inferior substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com alquil inferior, e -C(O)-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -OH). Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é alquil inferior substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, piperazinil opcionalmente substituído com metil, e -C(O)-(azetidinil opcionalmente substituído com -OH). Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é 2-hidróxi etil, 2,3-di-hidróxi propil, ou 4-metilpiperazin-1-ilmetil. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é 4-metilpiperazin-1-ilmetil. Ainda uma outra modalidade é um composto ou um sal do mesmo, em que R3é alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais -OH. Ainda uma outra modalidadeé um composto ou um sal do mesmo, em que R3é 2-hidróxi etil ou 2,3-di- hidróxi propil. (12) Um composto ou um sal do mesmo, que é uma combinação consistente de quaisquer duas ou mais modalidades descritas em (1) a (10) acima.
[0059]A presente invenção abrange um composto ou um sal do mesmo, que é uma combinação de quaisquer duas ou mais modalidades descritas em (1) a (10) acima, como descrito em (11) acima. Exemplos específicos incluem as modalidades descritas abaixo. (13) Um composto ou um sal do mesmo, em que X é N; Y é CH; e L1é al- quileno inferior ou -alquileno inferior-O-. (14) O composto de acordo com (12) ou um sal do mesmo, em que Z é CH; R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-alquil inferior ou halogê- nio; p é 2 ou 4; o anel W é um anel carbocíclico aromático opcionalmente substituído ou um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído. (15) O composto de acordo com (13) ou um sal do mesmo, em que L1é etileno ou -metileno-O-; p é 4; o anel W é um anel de benzeno opcionalmente substituído ou pirazol opcionalmente substituído. (16) O composto de acordo com qualquer um de (12) a (14) ou um sal do mesmo, em que Q é -L2-R2; L2é um anel heterocíclico não aromático opcionalmentesubstituído; R2é alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH e -O-alquil inferior, -NH- (alquil inferior opcionalmente substituído com -OH), um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído, -alquileno inferior-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído), ou H. (17) O composto de acordo com (15) ou um sal do mesmo, em que p é 4; L2é piperazina opcionalmente substituída com um ou mais metil, piperidina opcionalmentesubstituída com um ou mais metil, ou 3,9-diazaespiro[5,5]undecano; R2é piperazina opcionalmente substituída com metil, piperidina opcionalmente substituída com metil, 2-hidróxi etilamino, ou H. (18) O composto de acordo com (16) ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-metil ou F; L1é -metileno-O-; o anel W é um anel benzeno opcionalmente substituído com -O-metil; L2é piperidina ou 4-metilpiperazina; R2é 4-metilpiperazina, 2-hidróxi etilamino, ou H. (19) O composto de acordo com qualquer um de (12) a (14) ou um sal do mesmo, em que o anel W é pirazol opcionalmente substituído; Q é R3; R3é alquil inferior substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, carbamoil opcionalmente substituído com um ou dois R0, - OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído, e -C(O)-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído). (20) O composto de acordo com (18) ou um sal do mesmo, em que p é 4 e R3é alquil inferior substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmentesubstituído com alquil inferior, e -C(O)-(um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -OH). (21) O composto de acordo com (19) ou um sal do mesmo, em que R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são -O-metil ou F; L1é -metileno-O-; o anel W é pirazol opcionalmente substituído com metil; R3é 2-hidróxi etil, 2,3-di-hidróxi propil, ou 4-metilpiperazin-1-ilmetil.
[0060]Uma outra modalidade do composto de fórmula (I) ou sal do mesmo é, por exemplo, um composto ou um sal do mesmo, em que X e Y, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são CH ou N, com a condição de que X e Y não são N simultaneamente; L1 é -alquileno inferior-, -alquileno inferior-O-, -O-alquileno inferior-, ou al- quinileno inferior; Z é N ou CH; R1, os mesmos ou diferentes uns dos outros, são alquil inferior opcionalmente substituídos com halogênio, -O-(alquil inferior opcionalmente substituído com ha- logênio), halogênio, ciano, ou -N(alquil inferior^; p é um inteiro de 2 a 4; anel W é um anel carbocíclico aromático opcionalmente substituído, um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído, ou um anel heterocíclico não aromático opcionalmente substituído; Q é -L2-R2 ou R3; L2 é um anel heterocíclico aromático opcionalmente substituído ou um anel heterocíclico não aromático opcionalmente substituído; R2 é alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH e -O-alquil inferior, cicloalquil opcionalmente substituído com -C(O)-, -NH-(alquil inferior opcionalmente substituído com -OH), um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -L3-, ou H; R3 é alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleci- onados a partir do grupo que consiste em -C(O)OH, -OH, -NH-alquil inferior, -N(alquil inferior^, -C(O)-NH-alquil inferior, -C(O)-N(alquil inferior^, um grupo heterocíclico aromático opcionalmente substituído, um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído, e um grupo heterocíclico não aromático opcionalmente substituído com -C(O)-, -O-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, -C(O)-NH-alquil inferior, e - C(O)-N(alquil inferior^), -NH-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em -OH, -C(O)-NH-alquil inferior, e -C(O)-N(alquil inferior^), -N(alquil inferior)-(alquil inferior opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados a partir do grupo que consiste em - OH, -C(O)-NH-alquil inferior, e -C(O)-N(alquil inferior^), -C(O)OH, ou um grupo hete-rocíclico não aromático opcionalmente substituído com -C(O)-; e L3 é uma ligação ou alquileno inferior.
[0061]Exemplos de compostos específicos que fazem parte do escopo do composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo incluem os seguintes compostos: 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, (2S)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin- 1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol- 4-il]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4- il]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metil-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{4-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1- il]-3-metóxi-fenil}pirimidin-2-amina, N-[4-(3,9-diazaespiro[5,5]undec-3-il)-3-metóxi-fenil]-5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etil]- 1H-pirazol-4-il}pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]-1-(3-hidróxi azetidin-1-il)etanona, (2R)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, 2-({1-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)fenil]piperidin-4-il}amino)etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-metil-5-[(4-metilpiperazin-1- il)metil]-1H-pirazol-3-il}pirimidin-2-amina, e 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, e sais dos mesmos.
[0062]Em uma outra modalidade, exemplos de compostos específicos que fazem parte do escopo do composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo incluem os seguintes compostos: 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, (2S)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin- 1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol- 4-il]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4- il]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metil-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{4-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1- il]-3-metóxi-fenil}pirimidin-2-amina, N-[4-(3,9-diazaespiro[5,5]undec-3-il)-3-metóxi-fenil]-5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-  pirazol-1-il]etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etil]- 1H-pirazol-4-il}pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]-1-(3-hidróxi azetidin-1-il)etanona, e (2R)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, e sais dos mesmos.
[0063]Em ainda uma outra modalidade, exemplos de compostos específicos que fazem parte do escopo do composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo incluem os seguintes compostos: 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin- 1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]etanol, (2R)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, 2-({1-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)fenil]piperidin-4-il}amino)etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-metil-5-[(4-metilpiperazin-1- il)metil]-1H-pirazol-3-il}pirimidin-2-amina, e 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, e sais dos mesmos.
[0064]Em ainda uma outra modalidade, exemplos de compostos específicos que fazem parte do escopo do composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo incluem os seguintes compostos: 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin- 1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]etanol, e (2R)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)-1H-pirazol-1-il]propano-1,2-diol, e sais dos mesmos.
[0065]Em ainda uma outra modalidade, exemplos de compostos específicos que fazem parte do escopo do composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo incluem os seguintes compostos: 2-({1-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)fenil]piperidin-4-il}amino)etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-metil-5-[(4-metilpiperazin-1- il)metil]-1H-pirazol-3-il}pirimidin-2-amina, e 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, e sais dos mesmos.
[0066]Os compostos de fórmula (I) podem ter tautômeros e/ou isômeros geométricos, dependendo do tipo de substituintes. Mesmo quando o composto de fórmula (I) aparece aqui apenas em uma forma de isômero, a presente invenção abrange os outros isômeros, e também abrange os isômeros separados ou misturas dos mesmos.
[0067]Além disso, uma vez que alguns dos compostos da fórmula (I) têm um átomo de carbono assimétrico ou assimetria axial, os isômeros ópticos baseados nesta assimetria podem também existir. A presente invenção também abrange isômeros ópticos separados dos compostos de fórmula (I) ou misturas dos mesmos.
[0068]Além disso, a presente invenção abrange pró-fármacos farmaceuti- camente aceitáveis dos compostos representados pela fórmula (I). O termo "pró- fármaco farmaceuticamente aceitável"refere-se a um composto que tem um grupo que pode ser convertido em um grupo amino, um grupo hidroxil, um grupo carboxil, ou semelhante, por solvólise ou sob condições fisiológicas. Exemplos de um grupo formador de pró-fármaco incluem aqueles descritos em Prog. Med. Chem., 5, 2157-2161 (1985) e aqueles descritos em “Development of Pharmaceuticals” (Hirokawa Publishing, 1990) vol. 7, Molecular Design, 163-198.
[0069]Da mesma forma, os sais dos compostos de fórmula (I) são sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I). Os compostos de fórmula (I) podem formar sais de adição de ácidos ou sais com bases, dependendo do tipo de substituintes. Os exemplos específicos incluem os sais de adição de ácido com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico) ou com os ácidos orgânicos (por exemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido oxálico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido láctico, ácido málico, ácido mandélico, ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico, ácido cítrico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido aspártico, ácido glutâmico), os sais com bases inorgânicas (por exemplo, de sódio, potássio, magnésio, cálcio, alumínio) ou com bases orgânicas (por exemplo, metilamina, etilamina, etanolamina, lisina, ornitina), sais com vários aminoácidos e derivados de aminoácidos (por exemplo, acetil leucina), sais de amônio, e semelhantes.
[0070]Além disso, a presente invenção engloba os compostos de fórmula (I) e os sais dos mesmos sob a forma de vários hidratos, solvatos e substâncias polimórficas cristalinas. A presente invenção também abrange os compostos marcados com vários isótopos radioativos ou não radioativos.
(Processos de Preparação)
[0071]Os compostos de fórmula (I) e os sais dos mesmos podem ser preparados através da aplicação de vários métodos de síntese conhecidos a partir das características derivadas da sua estrutura básica ou do tipo de seus substituintes. Em alguns casos, dependendo do tipo de grupo funcional, é tecnicamente eficaz a substituição de um grupo funcional tal com um grupo de proteção adequado (um grupo que pode ser facilmente convertido no grupo funcional original) entre o estágio de material de partida e a fase intermediária. Exemplos de grupos de proteção incluem os descritos em Wuts (P. G. M. Wuts) and Greene (T. W. Greene), “Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis (quarta edição, 2006)”, e semelhantes, os quais podem ser selecionados e usados como apropriado, dependendo das condições de reação. Em tal método, após a introdução do grupo de proteção e a reação subsequente, o grupo de proteção pode ser removido, se necessário, para obter um composto desejado.
[0072]Da mesma forma, um pró-fármaco do composto de fórmula (I) pode ser preparado através da introdução de um grupo específico entre o estágio de material de partida e o estágio intermediário, como no caso do grupo de proteção acima, ou sujeitando o composto obtido de fórmula (I) à reação adicional. A reação pode ser realizada através da aplicação de esterificação, amidação, desidratação, ou semelhante, que é um método que é comum e conhecido dos versados na técnica.
[0073]São descritos abaixo os processos típicos para a preparação dos compostos de fórmula (I). Cada processo pode também ser realizado por referência aos documentos citados na presente descrição. Deve-se notar que os processos de preparação da presente invenção não estão limitados aos exemplos ilustrados abaixo.
(Processo de Preparação 1)
[0074][Fórmula 12]
Figure img0012
(Nesta fórmula, L5 representa halogênio, metil sulfinil, ou metil sulfonil. O mesmo se aplica a seguir).
[0075]O composto (I) da presente invenção pode ser obtido por reação de acoplamento do composto (1a) e composto (2a).
[0076]Nesta reação, os compostos (1a) e (2a) são usados em quantidades iguais, ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes compostos é agitada na presença de um catalisador predeterminado, em um solvente inerte à reação ou na ausência de um solvente, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias sob condições compreendidas entre a temperatura ambiente e aquecimento a refluxo. Esta reação é, de preferência, realizada sob uma atmosfera de gás inerte. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão particularmente limitados a, hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, benzeno, tolueno, xileno), éteres (por exemplo, éter dietílico, tetra-hidrofurano, dioxano, dimetóxi etano), hidrocarbonetos halogenados (por exemplo, diclorometano, 1,2- dicloroetano, clorofórmio), N-metilpirrolidona, N,N-dimetilformamida, N,N- dimetilacetamida, dimetil sulfóxido, acetato de etila, acetonitrila, terc-butanol, e misturas dos mesmos. Exemplos de catalisador predeterminado incluem acetato de paládio, tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio, e semelhantes. Além disso, quando um catalisador de paládio é usado, um ligante usado para o catalisador pode ser trifenilfosfina, 1,1’-binaftaleno-2,2’-di-ilbis(difenilfosfina), 2-(diciclo-hexilfosfino)- 2’,4’,6’-tri-isopropil-1,1’-bifenil, ou 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno. A reação pode ser realizada na presença de uma base orgânica (por exemplo, trietila- mina, N,N-di-isopropiletilamina, ou N-metilmorfolina) ou uma base inorgânica (por exemplo, terc-butóxido de sódio, carbonato de potássio, carbonato de sódio, carbonato de césio ou hidróxido de potássio), uma vez que é vantajoso para uma reação mais branda, em alguns casos. O aquecimento da mistura de reação por meio de irradiação de micro-ondas é vantajoso para uma reação mais branda, em alguns casos.
[0077][Documentos] S. R. Sandler e W. Karo, “Organic Functional Group Preparations”, segun- da edição, vol. 1, Academic Press Inc., 1991 The Chemical Society of Japan (ed.), “The Fifth Series of Experimental Chemistry”, vol. 14, MARUZEN Co., Ltd., 2005
(Processo de Preparação 2)
[0078][Fórmula 13]
Figure img0013
(Nesta fórmula, L6 representa alquinileno inferior. O mesmo se aplica a se- guir.)
(Etapa 1)
[0079]Este processo destina-se a preparar o composto (I-1) da presente invenção por reação de acoplamento de Sonogashira do composto (1b) e um derivado de alquino terminal.
[0080]Neste processo, o composto (1b) e um derivado de alquino terminal são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada na presença de uma base, um catalisador de paládio, e iodeto de cobre, em um solvente inerte para a reação, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediante condições entre a temperatura ambiente e aquecimento a refluxo. Esta reação é, de preferência, realizada mediante uma atmosfera de gás inerte. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão particularmente limitados a, hidrocarbonetos aromáticos (por exemplo, benzeno, tolueno, xileno), éteres (por exemplo, éter dietílico, tetra-hidrofurano, dioxano, dimetóxi etano), hidrocarbonetos halogenados (por exemplo, diclorome- tano, 1,2-dicloroetano, ou clorofórmio), álcoois (por exemplo, metanol, etanol, 2- propanol, butanol), N,N-dimetilformamida, dimetil sulfóxido, e misturas dos mesmos. A base é, de preferência, uma base orgânica (por exemplo, trietilamina, N,N- di-isopropiletilamina, ou N-metilmorfolina) ou uma base inorgânica (por exemplo, carbonato de potássio, carbonato de sódio, carbonato de césio, ou hidróxido de potássio). O catalisador de paládio é, de preferência, tetrakis(trifenilfosfina)paládio, diclorobis(trifenilfosfina)paládio, cloreto de paládio-1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno, ou semelhante. O aquecimento da mistura de reação por meio de irradiação de micro-ondas é vantajoso para uma reação mais branda, em alguns casos.
[0081][Documentos] A. d. Meijere e F. Diederich (ed.), “Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions”, primeira edição, VCH Publishers Inc., 1997 The Chemical Society of Japan (ed.), “The Fifth Series of Experimental  Chemistry”, vol. 13, MARUZEN Co., Ltd., 2005
(Etapa 2)
[0082]Este processo destina-se a preparar o composto (I-2) da presente invenção por redução da fração de alquino do composto (I-1) da presente invenção para alquileno por hidrogenação ou redução com di-imida.
[0083]Neste processo, o composto (I-1) da presente invenção e paládio carbono são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada em um solvente inerte para a reação, sob uma atmosfera de hidrogênio, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediantecondições entre a temperatura ambiente e aquecimento a refluxo. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão particularmente limitados a éteres (por exemplo, éter dietílico, tetra-hidrofurano, dioxano, dimetóxi etano), álcoois (por exemplo, metanol, etanol, 2-propanol, butanol), e misturas dos mes-mos.
[0084]Além da reação de hidrogenação, o composto (I-1) da presente invenção e a di-imida predeterminada são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada em um solvente inerte para a reação, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediante condições entre a temperatura ambiente e aquecimento a refluxo. Exemplos do solvente usado neste processo são os mesmos mostrados acima. A di-imida predeterminadaé, por exemplo, 4-metilbenzeno sulfonil hidrazida.
[0085]O(s) substituinte (s) no anel W no composto de fórmula (I) pode(m) ser facilmente convertido(s) em outros grupos funcionais, por meio da reação descrita adiante nos Exemplos, a reação óbvia para aqueles versados na técnica, ou um processo de modificação da mesma, com o uso de um composto de fórmula (I) como um material de partida. Por exemplo, a conversão pode ser conseguida através da combinação de quaisquer processos que podem ser aplicados de modo geral pelos versados na técnica, tal como redução, halogenação, desproteção, hidrólise, amidação, aminação, oxidação, aminação redutiva, acilação, O-alquilação, N-alquilação, alquilação redutiva e epoxidação.
(Preparação do Composto de Partida)
[0086]O composto de partida usado no processo de preparação acima descrito pode ser preparado, por exemplo, por um processo descrito a seguir, o processo nos Exemplos de Preparação descritos mais adiante, um processo conhecido ou um processo modificado dos mesmos.
(Síntese de Material de Partida 1)
[0087][Fórmula 14]
Figure img0014
(Nesta fórmula, R4 representa -OH ou -alquileno inferior-OH; L7 representa halogênio, -OH, -alquileno inferior-OH, -alquileno inferior-OMs, -alquileno inferior- OTs, -alquileno inferior-OTf, ou -alquileno inferior-halogênio; L8 representa - alquileno inferior-O- ou -O-alquileno inferior-. O mesmo se aplica a seguir.)
[0088]Este Processo de Preparação é destinado para preparar o composto (3c) que é o composto de partida (1a) do Processo de Preparação 1 em que L1 é - O-alquileno inferior- ou -alquileno inferior-O-
[0089]No caso do composto (3a) em que L7é halogênio, -alquileno inferior- OMs, -alquileno inferior-OTs, -alquileno inferior-OTf, ou -alquileno inferior- halogênio, os compostos (3a) e (3b) são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada na presença de uma base em um solvente inerte para a reação, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediante condições entre a temperatura ambiente e aquecimento a refluxo. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão parti- cularmente limitados a N-metilpirrolidona, N,N-dimetilformamida, dimetil sulfóxido, e semelhantes. A base é, de preferência, uma base inorgânica como carbonato de potássio, carbonato de sódio, carbonato de césio, ou hidróxido de potássio.
[0090]No caso do composto (3a) em que L7é -OH ou -alquileno inferior-OH, os compostos (3a) e (3b) são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada na presença de um reagente de fosfina predeterminado e um agente de condensação predeterminado em um solvente inerte para a reação, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediantecondições entre a temperatura ambiente e aquecimento a refluxo. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão particularmente limitados a éteres como éter dietílico, tetra-hidrofurano, dioxano, e dimetóxi etano. Exemplos de reagente de fosfina predeterminado incluem tributilfosfina, trifenilfos- fina e semelhantes. Exemplos de agente de condensação predeterminado incluem dietil azodicarboxilato, 1,1’-(azodicarbonil)dipiperidina, e semelhantes. O uso de (cianometileno)trimetilfosforano, ao invés de fosfina predeterminada e do agente de condensação predeterminado, é vantajoso para reações brandas, em alguns casos.
(Síntese de Material de Partida 2)
[0091][Fórmula 15]
Figure img0015
(Nesta fórmula, L9 representa halogênio. O mesmo se aplica a seguir).
[0092]Este Processo de Preparação é destinado para preparar o composto (4d) que é o composto de partida (1a) do Processo de Preparação 1 em que L1 é alquileno inferior.
(Etapa 1)
[0093]Este processo destina-se a preparar o composto (4b) por reação de acoplamento de Sonogashira do composto (4a) e um derivado de alquino terminal.
[0094]As condições de reação são as mesmas que na Etapa 1 do Processo de Preparação 2.
(Etapa 2)
[0095]Este processo destina-se a preparar o composto (4c) por redução da fração de alquino do composto (4b) para alquileno inferior por hidrogenação.
[0096]As condições de reação são as mesmas que na Etapa 2 do Processo de Preparação 2.
Etapa 3)
[0097]Este processo destina-se a preparar o composto (4d) por conversão do grupo amino do composto (4c) em halogênio.
[0098]Neste processo, o composto (4c) e uma combinação de cloreto de cobre (I-I) e nitrito de n-pentila são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada em um solvente inerte para a reação, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediante condições entre resfriamento com gelo e aquecimento a refluxo. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão particularmente limitados a hidro- carbonetos halogenados tais como diclorometano, 1,2-dicloroetano, e clorofórmio.
(Síntese de Material de Partida 3)
[0099][Fórmula 16]
Figure img0016
[00100]Este Processo de Preparação é destinado para preparar o composto (5c) que é o composto de partida (1b) do Processo de Preparação 2 em que X é N.
[00101]Esta reação é destinada para preparar o composto (5c) por reação de iso-substituição dos compostos (5a) e (5b).
[00102]Os compostos (5a) e (5b) são usados em quantidades iguais ou um deles é usado em uma quantidade excessiva. Uma mistura destes é agitada em um solvente inerte para a reação sob uma atmosfera de hidrogênio, geralmente, durante 0,1 hora a 5 dias mediante condições entre resfriamento com gelo e aquecimento a refluxo. Exemplos do solvente usado neste processo incluem, mas não estão particularmente limitados a álcoois (por exemplo, metanol, etanol, 2-propanol, butanol), N-metilpirrolidona, N,N-dimetilformamida, dimetil sulfóxido, e misturas dos mesmos. O uso de um ácido tal como ácido metanossulfônico, ácido acético, ácido trifluoroacético, cloreto de hidrogênio, ou ácido sulfúrico é vantajoso para reações brandas, em alguns casos.
[00103]A atividade farmacológica dos compostos de fórmula (I) foi confirmada nos ensaios descritos abaixo.Exemplo de Teste 1: ensaio de enzima FGFR1, FGFR2 e FGFR3
[00104]No ensaio da enzima, FGFR1, FGFR2, e FGFR3 recombinante humano (CRNAa Biosciences; Catálogo Nos. 08-133, 08-134, e 08-135) foram usados, e as reações foram realizadas à temperatura ambiente (FGFR1 e FGFR2) ou 30°C (FGFR3). O método de medição é descrito a seguir.
[00105]O composto foi diluído com uma solução de dimetil sulfóxido (DMSO) (10-vezes de razão comum, 4 porções) antes da diluição com um tampão de reação (HEPES 100 mM (pH7,5), 0,003% de Brij-35, 0,004% de Tween 20, DTT 0,5 mM, e MgCl2 10 mM) de modo que a concentração de DMSO final foi 2%. Para 4 μL da solução do composto em uma placa de 384 poços, 2 μL cada de enzima FGFR1 (2 ou 3 ng/μL), enzima FGFR2 (2 ng/μL), ou enzima FGFR3 (6 ng/μL) que foram diluídos com o tampão de reação foram adicionados. Em 20 minutos, 4 μL de uma solução de ATP- substrato (HEPES 100 mM (pH 7,5), 0,003% de Brij-35, 0,004% de Tween 20, DTT 0,5 mM, MgCl2 10 mM, 3,75 μM de substrato -FL- peptídeo 22 + 500 μM (FGFR1) de ATP, 188 μM (FGFR2) de ATP, ou 250 μM (FGFR3) de ATP) foram adicionados antes da reação subsequente a 30 minutos. Depois que a reação foi parada, a mistura de reação foi medida com um leitor LabChip EZ. Os valores de IC50 foram calculados por regressão não linear com base nas taxas de inibição obtidas. Os resultados de alguns compostos são apresentados na Tabela 1. O termo "Ex" da tabela indica o N°. do composto nos Exemplos descritos mais adiante.
[00106][Tabela 1]
Figure img0017
Exemplo de Teste 2: Ensaio de crescimento de células com expressão forçada de FGFR3 mutante (FGFR3_S249C/NIH3T3)
[00107]As células de FGFR3_S249C/NIH3T3 foram adicionadas a uma placa esferóide de 96 poços (fundo em U) a uma concentração de 3000 células/poço/90 μL, e a solução de composto (10 μL) foi adicionada à mesma, no dia seguinte (concentração final de DMSO: 0,1%). A solução de composto foi preparada por diluição em série do composto com DMSO em uma razão comum de 3 vezes (9 porções e DMSO apenas) a partir da concentração máxima de 10 mM e, em seguida, diluiu-se 100 vezes com um meio de cultura (D-MEM, FBS a 10%). 5 dias após a adição do composto, a inibição do crescimento causada pelo composto foi avaliada por Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente Promega (G7573) CellTiter-GloTM. O valor de IC50 foi calculado por regressão não linear, com o uso dos poços adicionados com DMSO como controle e assumindo a contagem de 0 como sendo 100% de inibição. Os resultados de alguns compostos são apresentados na Tabela 2.
[00108][Tabela 2]
Figure img0018
[00109]Exemplo de Teste 3: Teste anti-tumor em UM-UC-14 (células positivas-FGFR3_S249C, câncer de bexiga)
[00110]3*106 células UM-UC-14 por 0,1 mL (PBS+matrigel, 1:1) foram inoculadas subcutaneamente no flanco direito de camundongos nude (CAnN, Cg- Foxn1nu/CrlCrlj (nu/nu), do sexo masculino, 4 - a 5-semanas de idade), e quando o seu tamanho de tumor atingiu cerca de 250 mm3, a administração do fármaco foi iniciada (Dia 1). O fármaco foi administrado uma vez por dia e o tamanho do tumor foi medido com um paquímetro e o peso corporal foi também medido a cada dois ou três dias. O efeito antitumor foi finalmente determinado com base no volume do tumor (mm3; eixo menor (mm) x eixo menor (mm) x eixo maior (mm)/2) no Dia 11 (n = 3-5). Para o grupo controle, MC a 0,5% (metil celulose) foi administrada. Por "% de inibição", na tabela, por exemplo, 100% de inibição indica que o crescimento do tumor do controle foi inibido para o nível do volume do tumor no Dia 1. "% de regressão"indica qual a porcentagem de regressão pode ser conseguida em comparação com o volume do tumor no Dia 1. Aqui, o volume do tumor no Dia 1 significa o volume do tumor imediatamente antes da administração do fármaco. Os resultados de alguns compostos administrados por via oral (1 mg/kg/dia para o outro diferente do Ex 95 e 3 mg/kg/dia para o Ex 95) são mostrados na Tabela 3.
[00111 ][Tabela 3]
Figure img0019
[00112]O teste descrito acima confirmou que os compostos plurais dos Exemplos incluídos na fórmula (I) da presente invenção tinham atividade inibidora em FGFR1, FGFR 2, e/ou FGFR3. Foi também confirmado que os compostos plurais dos Exemplos incluídos na fórmula (I) inibiram o crescimento das células com a expressão forçada de FGFR3 mutante e que os compostos também inibiram o crescimento do câncer de bexiga ou fizeram que o câncer de bexiga regredisse, no modelo animal tendo câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante. À luz do exposto acima, o composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo, pode ser usado como um agente terapêutico para vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR 2, e/ou FGFR3, particularmente, câncer de bexiga FGFR3-positivo mutante.
[00113] Exemplo de Teste 4: Isolamento de FGFR3-TACC3_v1
[00114]O cDNA foi sintetizado pela reação de transcrição reversa em 200 amostras clínicas de câncer de pulmão (Asterand plc;. EUA), com o uso de transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp.) e iniciadores aleatórios (iniciadores aleatórios, Life Technologies Corp), de acordo com o protocolo do kit.
[00115]Em seguida, a PCR (30 ciclos de 98°C durante 10 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 1,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3_TACC3_RT_F representado pela SEQ ID No: 1 e FGFR3_TACC3_RT_R representado pela SEQ ID NO: 2 , o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (TaKaRa Ex Taq; Takara Bio Inc.). PCR adicional (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 1 minuto) foi realizado com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_nested_F representado pela SEQ ID No: 3 e FGFR3_TACC3_nested_R representado pela SEQ ID No: 4, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 500 bases foi obtido a partir de apenas espécime Lg344 de amostra.
[00116]Depois disto, o produto de PCR foi sequenciado por sequencia- mento didesoxi (BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit; Life Technologies Corp.) Como resultado, o produto de PCR de cerca de 500 bases foi verificado como sendo uma sequência obtida por fusão da extremidade 3' do éxon 18 da sequência de codificação (a seguir, o CDS) de FGFR3 (NM_001163213.1) registrada no NCBI para a extremidade 5' do éxon 11 em CDS de TACC3 (NM_006342.1).
[00117]O cDNA foi sintetizado por meio de reação de transcrição reversa no RNA do espécime Lg344 que é o RNA derivado de tecidos de câncer de pulmão de um paciente com câncer do pulmão de células escamosas (Asterand plc;.  EUA), com o uso de transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores oligo(dT) (oligo (dT) 20 primers, Life Technologies, Corp), de acordo com o protocolo do kit.
[00118]Em seguida, a PCR (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 60°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3-TACC3_cloning_F representado pela SEQ ID No: 5 e FGFR3- TACC3_cloning_R representado pela SEQ ID No: 6, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (KOD -plus- Ver. 2; Toyobo Co., Ltd.). PCR adicional (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F representado pela SEQ ID No: 7 e FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R representado pela SEQ ID No: 8, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 2,9 k bases foi obtido. O produto de PCR foi clonado em um vetor de clonagem (Kit de Clonagem TOPO XL PCR, Life Technologies, Corp.). A inserção foi sequenciada por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclos BigDye Terminator v3.1, Life Technologies, Corp.) Como resultado, verificou-se no produto de PCR de cerca de 2,9 k bases, que houve uma transcrição obtida por fusão da região entre o terminal 5' de CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI e o terminal 3’ do éxon 18 para a região entre a extremidade 5' do éxon 11 em CDS de TACC3 (NM_006342.1) e o terminal 3' de CDS (FGFR3-TACC3_v1) (SEQ ID No: 9). O polipeptídeo codificado por SEQ ID NO: 9 (polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1) é mostrado na SEQ ID No: 10.Exemplo de Teste 5: Isolamento de FGFR3-TACC3_v2
[00119]O cDNA foi sintetizado pela reação de transcrição reversa em 59 espécimes de câncer de bexiga (Asterand plc;. EUA), com o uso da transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores aleatórios (random primers, Life Technologies Corp.), de acordo com o protocolo do kit.
[00120]Em seguida, a PCR (30 ciclos de 98°C durante 10 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 1,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3_TACC3_RT_F representado pela SEQ ID No: 1 e FGFR3_TACC3_RT_R representada pela SEQ ID no: 2, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (Takara Ex Taq; Takara Bio Inc.). PCR adicional (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 1 minuto) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_nested_F representado pela SEQ ID No: 3 e FGFR3_TACC3_nested_R representado pela SEQ ID No: 4, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizadaapós a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 600 bases foi obtido a partir do espécime Bd106 de amostra.
[00121]Depois disto, o produto de PCR foi sequenciado por sequencia- mento de didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclo Big Dye Terminator v3.1; Life Technologies Corp.) Como resultado, o produto de PCR de cerca de 600 bases foi verificado como sendo uma sequência obtida através da fusão da extremidade 3’ do éxon 18 em CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI para a extremidade 5' do éxon 10 em CDS de TACC3 (NM_006342.1). O cDNA foi sintetizado por reação de transcrição reversa no espécime Bd106 de RNA que é um RNA derivado de tecido de câncer de bexiga de um paciente com câncer de bexiga (As- terand plc;. EUA), com o uso da transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Techno-logies, Corp) e iniciadores oligo(dT) (oligo(dT) 20 primers, Life Technologies, Corp), de acordo com o protocolo do kit.
[00122]Em seguida, a PCR (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 60°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3-TACC3_cloning_F representado pela SEQ ID No: 5 e FGFR3- TACC3_cloning_R representado pela SEQ ID No: 6, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (KOD-plus-Ver. 2; Toyobo Co., Ltd..). PCR adicional (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F representado pela SEQ ID No: 7 e FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R representado pela SEQ ID No: 8, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 3,0 k bases foi obtido. O produto de PCR foi clonado em um vetor de clonagem (Kit de Clonagem TOPO XL PCR, Life Technologies, Corp.). A inserção foi sequenciada por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclos BigDye Terminator v3.1, Life Technologies, Corp.) Como resultado, verificou-se no produto de PCR de cerca de 3,0 k bases que houve uma transcrição obtida por fusão da região entre o terminal 5' de CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI e o terminal 3’ do éxon 18 e a região entre a extremidade 5 'do éxon 10 em CDS de TACC3 (NM_006342.1) e o terminal 3' de CDS (FGFR3-TACC3_v2) (SEQ ID No: 11). O polipeptídeo codificado por SEQ ID No: 11 (polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2) é mostrado na SEQ ID No: 12.Exemplo de Teste 6: Isolamento de FGFR3-TACC3_v3
[00123]cDNA foi sintetizado pela reação de transcrição reversa em 59 espécimes de câncer de bexiga (Asterand plc;. EUA), com o uso da transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores aleatórios (random primers, Life Technologies Corp), de acordo com o protocolo do kit.
[00124]Em seguida, a PCR (30 ciclos de 98°C durante 10 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 1,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3_TACC3_RT_F representado pela SEQ ID No: 1 e FGFR3_TACC3_RT_R representado pela SEQ ID no: 2, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (Takara Ex Taq; Takara Bio Inc.). PCR adicional (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 1 minuto) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_nested_F representado pela SEQ ID No: 3 e FGFR3_TACC3_nested_R representado pela SEQ ID No: 4, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizadaapós a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 650 bases foi obtido a partir do espécime Bd021 da amostra.
[00125]Depois disto, o produto de PCR foi sequenciado por sequencia- mento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclo Big Dye Terminator v3.1; Life Technologies Corp.). Como resultado, o produto de PCR de cerca de 650 bases foi verificado como sendo uma sequência obtida pela fusão de uma determinada sequência de éxon 19 em CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI para uma parte do íntron de 10-11 TACC3 (NM_006342.1) e para a extremidade 5' do éxon 11 em CDS de TACC3.
[00126]O cDNA foi sintetizado pela reação de transcrição reversa na amostra de RNA Bd021 que é o RNA derivado de tecido de câncer de bexiga de um paciente com câncer de bexiga (Asterand plc;. EUA), com o uso da transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores oligo(dT) (oli- go(dT) 20 primers, Life Technologies, Corp), de acordo com o protocolo do kit.
[00127]Em seguida, a PCR (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 60°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3-TACC3_cloning_F representado pela SEQ ID No: 5 e FGFR3- TACC3_cloning_R representado pela SEQ ID No: 6, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (KOD-plus-Ver. 2; Toyobo Co., Ltd..). PCR adicional (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F representado pela SEQ ID No: 7 e FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R representado pela SEQ ID No: 8, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 3,0 k bases foi obtido. O produto de PCR foi clonado em um vetor de clonagem (Kit de Clonagem TOPO XL PCR, Life Technologies, Corp.). A inserção foi sequenciada por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclos BigDye Terminator v3.1, Life Technologies, Corp.) Como resultado, verificou-se no produto de PCR de cerca de 3,0 k bases que houve uma transcrição obtida por fusão da região entre o terminal 5' de CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI e uma certa sequência do éxon 19 com a parte do íntron de 10-11 TACC3 (NM_006342.1) e além da região entre a extremidade 5' do éxon 11 em CDS de TACC3 e o terminal 3' de CDS (FGFR3- TACC3_v3) (SEQ ID No: 13). O polipeptídeo codificado por SEQ ID No: 13 (poli- peptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3) é mostrado na SEQ ID No: 14.Exemplo de teste 7: Isolamento de FGFR3-TACC3_v1 de linhagem de células RT-112 derivadas de paciente com câncer de bexiga
[00128]O cDNA foi sintetizado pela reação de transcrição reversa em RNA purificado de linhagem de células derivadas de pacientes com câncer de bexiga RT-112 (comprado de Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorga- nismen und Zellkulturen GmbH), com o uso da transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores oligo(dT) (iniciadores oligo (dT)20, Life Technologies, Corp.), de acordo com o protocolo do kit.
[00129]Em seguida, a PCR (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 60°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3-TACC3_cloning_F representado pela SEQ ID No: 5 e FGFR3- TACC3_cloning_R representado pela SEQ ID No: 6, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (KOD-plus-Ver. 2; Toyobo Co., Ltd..). PCR adicional (25 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F representado pela SEQ ID No: 7 e FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R representado pela SEQ ID No: 8, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 2,9 k bases foi obtido. O produto de PCR foi clonado em um vetor de clonagem (Kit de Clonagem TOPO XL PCR, Life Technologies, Corp), e a inserção foi sequenciada por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclo Big Dye Terminator v3.1; Life Technologies, Corp.) Como resultado, verificou-se que um transcrito obtido era o mesmo que o transcrito obtido por fusão da região entre o N-terminal de CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI e a extremidade 3’ do éxon 18 para a região entre a extremidade 5' do éxon 11 em CDS de TACC3 (NM_006342.1) e o C- terminal de CDS (FGFR3-TACC3_v1) (SEQ ID No: 9).
[00130]Exemplo Teste 8: Isolamento de FGFR3-TACC3_v4 de linhagem de células RT4 derivadas de paciente com câncer de bexiga
[00131]O cDNA foi sintetizado por reação de transcrição reversa no RNA purificado a partir da linhagem de célula RT4 derivada de paciente com câncer de bexiga (adquirida a partir de ECACC (European Collection of Cell Cultures)), com o uso da transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores oligo (dT) (iniciadores oligo (dT)20, Life Technologies, Corp.), de acordo com o protocolo do kit. Em seguida, a PCR (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 60°C durante 15 segundos, 68°C durante 5,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3-TACC3_cloning_F representado pela SEQ ID No: 5 e FGFR3- TACC3_cloning_R representada pela SEQ ID No: 6, o cDNA obtido acima como um molde, e a DNA polimerase (KOD-plus-Ver. 2; Toyobo Co., Ltd..). PCR adicional (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 5 minutos) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_TACC3_cloning_BamHI_F representado pela SEQ ID No: 7 e FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R representado pela SEQ ID No: 8, e a mesma DNA polimerase, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 4,5 k bases foi obtido. O produto de PCR foi clonado em um vetor de clonagem (Kit de Clonagem TOPO XL PCR, Life Technologies, Corp), e a inserção foi sequenciada por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclo Big Dye Terminator v3.1; Life Technologies, Corp.) Como resultado, verificou-se que havia uma transcrição obtida pela fusão de uma parte da sequência 18-19 de íntron FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI para a região entre o terminal 5' de CDS de FGFR3 e extremidade 3' do éxon 18 e ainda para a região entre uma certa sequência de éxon 4 de TACC3 (NM_006342.1) e o terminal 3' de CDS de TACC3 (FGFR3-TACC3_v4). Na sequência confirmada, T na posição de base 882 foi substituída por C (registro SNPs No.; rs2234909), C na posição de base 2484 por T, e G na posição de base 2663 por A (SEQ ID No: 15). O polipeptídeo codificado pela SEQ ID No: 15 (polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v4) é mostrado na SEQ ID No: 16.Exemplo de Teste 9: Preparação de soluções de retrovírus de FGFR3- TACC3_v1, FGFR3-TACC3_v2, FGFR3-TACC3_v3 e FGFR3-TACC3_v4
[00132]Para expressão, como proteínas, os comprimentos completos de ORF de FGFR3-TACC3_v1, FGFR3-TACC3_v2, FGFR3-TACC3_v3, e FGFR3- TACC3_v4, a reação enzimática foi realizada a 37°C durante 3 horas, com o uso dos vetores de clonagem preparados nos Exemplos de Teste 4, 5, 6, e 8 e da enzima de restrição BamHI, e os fragmentos de DNA digeridos pelas enzimas de restrição foram obtidos e purificadas. Outra reação enzimática foi realizada a 37°C durante 3 horas, com o uso de EcoRI e os fragmentos de DNA, e os fragmentos de DNA digeridos por enzimas de restrição foram obtidos e purificados. Os fragmentos de DNA contendo ORF foram clonados nos sítios BamHI e EcoRI no sítio de clonagem múltipla de um vetor de expressão (pMXs-puro; Cosmo Bio) para a construção de plasmídeos de expressão (FGFR3-TACC3_v1/pMXs-puro, FGFR3- TACC3_v2/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_v3/pMXs-puro, e FGFR3- TACC3_v4/pMXs-puro).
[00133]9 μg, de cada, de FGFR3-TACC3_v1/pMXs-puro, FGFR3- TACC3_v2/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_v3/pMXs-puro, e FGFR3- TACC3_v4/pMXs-puro foram transfectados em células de platina-E, com o uso de um reagente de transfecção (FUGENE(R) HD, Roche). Ao fim de 24 horas após a transfecção, o meio D-MEM (Meio Eagle Modificado da Dulbecco, Invitrogen) contendo 10% de soro de bovino (Nichirei Biosciences) foi substituído, e os sobrena- dantes de cultura foram recolhidos após 24 horas para preparar soluções de retro- vírus.Exemplo de Teste 10: Investigação da ação de promoção do crescimento independente da ancoragem de FGFR3-TACC3_v1, FGFR3-TACC3_v2, FGFR3- TACC3_v3 e FGFR3-TACC3_v4
[00134]Para as soluções de vírus preparadas com o uso de FGFR3- TACC3_v1/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_v2/pMXs-puro, FGFR3-TACC3_v3/pMXs- puro, e FGFR3-TACC3_v4/pMXs-puro no Exemplo de Teste 9, 4 μg/mL de poli- breno (polibreno; Sigma) foram adicionados, seguido pela adição das misturas resultantes para células NIH3T3 para infecção. Em 6 horas após a adição, os meios usados foram substituídos pelos meios D-MEM contendo 10% de soro de bovino (Nichirei Biosciences), e, no dia após a infecção, os meios foram substituídos por meios de D-MEM (Invitrogen) contendo 10% de soro de bovino (Nichirei Biosciences) e 1 μg/mL de puromicina (Sigma). A cultura foi continuada na presença de 5% de CO2 a 37°C durante 4 semanas para obter as células NIH3T3 expressando es- tavelmente cada um de FGFR3-TACC3_v1, FGFR3-TACC3_v2, FGFR3- TACC3_v3, e FGFR3-TACC3_v4 (estas células foram designadas como células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v1, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v2, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3, e células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v4, respectivamente.)
[00135]Para investigar a capacidade de promoção do crescimento independente de ancoragem de células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v1, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v2, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3 e células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v4, estas células e as células NIH3T3 infectadas com um vetor pMXs-puro branco (célulasMock/NIH3T3) foram, cada, semeadas em 1 x 103 células por poço em meio de D-MEM (Invitrogen) contendo 10% de soro de bovino (Nichirei Biosciences) em uma placa esferóide de 96 poços (Sumilon Celltight Spheroid 96U; Sumitomo Bakelite). As células foram cultivadas na presença de 5% de CO2 a 37°C e foram contadas no dia seguinte (Dia 1) e 4 dias mais tarde (Dia 4), com o uso de um reagente de contagem de células (Ensaio de Viabilidade de Células Luminescentes CELLTITER-GloTM; Promega ) de acordo com o método descrito no manual. Um luminômetro foi usado para a detecção. Foi confirmado que a contagem de células Mock/NIH3T3 não aumentou entre o Dia 1 e Dia 4, enquanto que as contagens de células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v1, Células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v2, Células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3, e células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v4 aumentou cerca de 3,1 vezes, cerca de 2,8 vezes, cerca de 2,3 vezes, e cerca de 2,5 vezes, respectivamente, entre o Dia 1 e Dia 4.
[00136]Tendo em vista o exposto, considerou-se que as Células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v1, as células NIH3T3 que expressam FGFR3- TACC3_v2, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3 e células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v4 exibem crescimento celular independente de ancoragem.Exemplo de Teste 11: Atividade inibidora do crescimento celular independente de ancoragem de compostos em células NIH3T3 que expressam FGFR3- TACC3_v1, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v2, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3, células NIH3T3 que expressam FGFR3- TACC3_v4, e linhagem de células RT-112 e RT4 derivadas de pacientes com câncer de bexiga.
[00137]A medição para o crescimento celular independente de ancoragem (método de colônia, etc.) é conhecida por ser um sistema para investigar a ação anticancerígena (efeito farmacológico) de compostos (Clinical Oncology, second edition, Cancer and Chemotherapy Publishers Inc.). Como um método para se medir o crescimento não aderente de células, existe o seguinte método que usa uma placa esferóide conforme referido acima, em vez do método de colônia.
[00138]Em uma placa esferóide de 96 poços (Sumilon Celltight Spheroid 96U; Sumitomo Bakelite), células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v1, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v2, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3, e as células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v4 foram semeadas, cada, em 1 x 103 células por poço em meio D-MEM meio (Invitrogen) contendo 10% de soro fetal bovino. Da mesma forma, a linhagem de célula RT-112 derivada de paciente com câncer de bexiga foi semeada a 1 x 103 células por poço em meio RPMI 1640 contendo 10% de soro fetal bovino e 2 mM de L-glutamina, e a linhagem de célula RT4 derivada de paciente com câncer de bexiga foi semeado a 1 x 103 células por poço, em meio RPMI 1640 contendo 10% de soro fetal bovino. Um poço suplementado apenas com o meio foi também preparado para um controle positivo. A cultura foi realizada de um dia para o outro, na presença de 5% de CO2 a 37°C, seguido por adição de compostos de teste (concentrações finais: 100 nM, 10 nM, e 1 nM). Como um controle negativo, DMSO usado como um solvente para os compostos foi adicionado na mesma concentração (0,1%), como no caso da adição dos compostos. Em seguida, a cultura foi realizada na presença de 5% de CO2 a 37°C durante 4 dias, e um reagente de contagem de células (Ensaio de Viabilidade de Células Luminescentes CellTiter-GloTM; Promega) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante 20 minutos, seguido por medição com um luminômetro. Assumindo que os valores do controle positivo e do controle negativo foram de 100% de inibição, e 0% de inibição, respectivamente, a taxa de inibição do crescimento (%) foi calculada para cada composto. Como mostrado na Tabela 4, verificou-se que alguns compostos da presente invenção inibiram o crescimento independente de ancoragem de células NIH3T3 que expressam FGFR3- TACC3_v1, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v2, células NIH3T3 que expressam FGFR3-TACC3_v3, Células NIH3T3 que expressam FGFR3- TACC3_v44 e linhagens de células RT-112 e RT4 derivadas de pacientes com câncer de bexiga.
[00139] Os resultados descritos acima mostraram que o crescimento de células cancerosas e tumores que expressam FGFR3-TACC3_v1, FGFR3- TACC3_v2, FGFR3-TACC3_v3, e FGFR3-TACC3_v4 pode ser inibido pelos compostos da presente invenção.
[00140][Tabela 4]
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Exemplo de Teste 12: atividade inibidora dos compostos sobre a atividade de quinase in vitro de polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3
[00141](1) Construção de plasmídeo de expressão de fusão FLAG-tag (marcado com FLAG) (FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+), FGFR3- TACC3_v2 (N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+), e FGFR3-TACC3_v3 (N- FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+))
[00142]Para obter o polinucleotídeo de fusão FGFR3-TACC3 marcando 5'- terminalmente com FLAG, a PCR foi realizada para marcação de FLAG 5' terminal com o uso dos vetores clonados nos Exemplos de teste 4, 5 e 6 como modelos. PCR (12 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 3,5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3_N_FLAG_BamHI representado pela SEQ ID No: 17 e FGFR3_TACC3_cloning_EcoRI_R representado pela SEQ ID No: 8 e DNA polimerase (KOD -plus- Ver. 2; Toyobo Co., Ltd.). Os produtos de PCR obtidos foram clonados em vetores de clonagem (kit de clonagem TOPO XL PCR; Life Technologies, Corp.). As inserções foram sequenciadas por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclos BigDye Terminator v3.1, Life Technologies, Corp.). Como resultado, confirmou-se que os produtos de PCR foram as sequências de ácidos nucleicos de SEQ ID Nos: 9, 11, e 13 em que as três bases que codificam a primeira metionina (ATG) foram deletadas e o códon de partida e uma sequência de ácido nucleico que codifica FLAG tag (SEQ ID No: 24) foram adicionados ao terminal 5'. Os polipeptídeos codificados pelo acima são referidos como polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG) e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG), respectivamente, e estes polipeptídeos são referidos coletivamente como polipeptídeos de fusão FGFR3-TACC3 (N-FLAG). Além disso, para construir um vetor de expressão que expressa, como uma proteína, cada um dos comprimentos completos de ORF de FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG), FGFR3- TACC3_v2 (N-FLAG), e FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG), que continham estas sequências de FLAG adicionadas, a reação enzimática foi realizada a 37°C durante 3 horas, com o uso dos vetores de clonagem descritos acima e a enzima de restrição BamHI, e os fragmentos de DNA digeridos pela enzima de restrição foram obtidos e purificados. Além disso, a reação da enzima foi realizada a 37°C durante 3 horas, com o uso de EcoRI e os fragmentos de DNA, e os fragmentos de DNA digeridos pelas enzimas de restrição foram obtidos e purificados. Estes fragmentos de DNA contendo ORF foram clonados em sítios BamHI e EcoRI no sítio de clonagem múltipla de um vetor de expressão (pcDNA3.1/Zeo(+); Life Technologies, Corp.) para a construção de plasmídeos de expressão (FGFR3- TACC3_v1 (N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+), FGFR3-TACC3_v2 (N- FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+), e FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+)).
[00143](2) Preparação de polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3 (N-FLAG)
[00144]No dia antes da transfecção, 0,5 x 107 células HEK293 por colágeno revestidas em pratos de 15 cm foram cultivadas em meio D-MEM contendo 10% de soro fetal bovino para preparar 10 pratos. No dia da transfecção, 27 μg, cada, de FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+), FGFR3- TACC3_v2 (N-FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+), and FGFR3-TACC3_v3 (N- FLAG)/pcDNA3.1/Zeo(+) (Exemplo de Teste 12) por prato foram transfectados para células HEK293, utilizando 81 μL de um reagente de transfecção (FUGENE(R) HD, Roche). Ao fim de 24 horas após a transfecção, os meios foram removidos, e após a lavagem, três vezes com PBS, 1 ml de PBS foi adicionado. As células foram raspadas com um raspador de células (Corning Inc.) e, em seguida, recuperadas em tubos de polipropileno. Após centrifugação a 1200 rpm durante 5 minutos, o sobrenadante foi removido, 150 μl de um lisado de células (Tris-HCl 50 mM (pH 8,0), NaCl 150 mM, 1% de NP-40, EDTA 1 mM, e coquetel inibidor de protease completo) foi adicionado, e as células foram incubadas em gelo durante 30 minutos e lisadas. Cada um dos polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N- FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG), e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG) que estavam presentes no sobrenadante obtido após a centrifugação foi purificado utilizando gel de afinidade de anticorpo M2 (ANTI-FLAG M2 Affinity Gel; Sigma-Aldrich) de acordo com o método descrito no documento de informação de produto. Um líquido de lavagem (Tris-HCl 50 mM (pH 8,0), NaCl 150 mM, 1% de NP-40, EDTA 1 mM, e coquetel inibidor de protease completo) e um eluato (Tris-HCl 20 mM (pH 7,4), MgCl2 10 mM, MnCl2 10 mM, e 0,5 mg de peptídeo FLAG) foram usados para a lavagem e eluição, respectivamente, para se obter 100 mL de eluatos. Os eluatos foram sujeitos à imuno transferência (immunoblotting) com o uso de um anticorpo anti-FGFR3 (Cell Signaling Technology) e uma anticorpo anti-FLAG M2 (Sigma-Aldrich) e coloração com prata e, em seguida, confirmou-se que o polipeptídeo de fusão FGFR3- TACC3_v1 (N-FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG), e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG) foram obtidos.
[00145](3) A detecção da atividade de quinase in vitro do polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3 (N-FLAG)
[00146]O polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG), e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG), que foram purificados como descrito acima, foram usados para investigar a sua atividade de fosforilação contra um substrato de peptídeo, com o uso de um kit de detecção de atividade de quinase (HTRF KinEASE-TK; Cisbio). O tampão de reação foi preparado por adição de 1 mM (concentração final) de DTT e 5 mM (concentração final) de Mg para tampão de quinase 5x incluido no kit com o uso de 1 μL de soluções diluídas 1- vez, 3- vezes e 10- vezes dos elutates acima preparados como soluções enzimáticas, respectivamente, em 384 poços de uma placa preta de baixo volume (Corning). Usando 2,0 μM (concentração final) de Substrato TK incluído no kit como um substrato, a reação foi realizada em um volume final de 5,0 μL à temperatura ambiente durante 1 hora em cada caso de não se adição de ATP e adição de 100 μM de ATP (concentração final ). Após a reação, solução de Sa-XL665 e solução de TK Antibldy-Eu(K) foram elaboradas de acordo com o método recomendado pelo kit e adicionadas a cada 2,5 μL das soluções. Depois a reação ser realizada à temperatura ambiente durante 1 hora, as contagens de HTRF (isto é, a fosforilação do substrato peptídico) foram detectadas. Como resultados, foi demonstrado que, em comparação com as ATP- livres, as contagens de HTRF n os ATP adicionados tinha aumentado cerca de 38 vezes, cerca de 40 vezes, e cerca de 38 vezes, respectivamente, no caso da adição de 1 μL de soluções diluídas 1-vez dos eluatos descritos acima, incluindo o polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3- TACC3_v2 (N-FLAG), e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG), tinha aumentado cerca de 27 vezes, 34 vezes e 31 vezes, respectivamente, no caso da adição de 1 μL de soluções diluídas 3 vezes dos eluatos, e aumentou 5 vezes, 18 vezes e 11 vezes, respectivamente, no caso da adição de 1 μl de soluções diluídas 10 vezes de eluatos.
[00147]Como descrito acima, a atividade de quinase in vitro dos respectivos polipeptídeos de fusão pode ser detectada por uso de um kit de detecção de atividade de quinase.
[00148](4) Ação inibidora dos compostos sobre a atividade de quinase in vitro de polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3 (N-FLAG)
[00149]A atividade inibidora dos compostos de teste sobre a atividade de quinase in vitro de polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG), e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG) foi investigada com o uso do kit de detecção de atividade de quinase descrito acima e uma placa de 384 poços da mesma espécie. Os compostos foram adicionados de modo que as concentrações finais foram de 100 nM, 10 nM e de 1 nM, e DMSO foi adicionado como controle de modo que a concentração foi de 0,1%. Para o polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N- FLAG), 1 μL de uma solução diluída 2- vezes do fluido descrito acima, foi adicionado; para o polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG), 1 μL de uma solução diluída 3- vezes do eluato acima descrito foi adicionado; e para o polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG), 1 μL de uma solução diluída 3- vezes do eluato acima descrito foi adicionado. Substrato TK incluído no kit como substrato foi adicionado em uma concentração final de 2,0 uM, a reação foi realizada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Em seguida, a reação foi realizada em um volume final de 5,0 μL à temperatura ambiente durante 60 minutos em cada caso de não se adicionar nenhum ATP e adição 100 μM de ATP (concentração final). Após os outros processos serem realizados por adição de cada um dos 2,5 μL de solução de Sa-XL665 e solução de TK Anticorpo-Eu(K) preparada com o uso do método semelhante ao descrito em (3) acima, e a reação ser realizada à temperatura ambiente durante 1 hora, as contagens de HTRF foram detectadas. Assumindo que as contagens de fosforilação com nenhuma adição de ATP e adição de ATP na ausência de compostos (DMSO foi adicionado em uma concentração de 0,1%, a concentração igual à dos compostos) foram de  100% de inibição, e 0% de inibição, respectivamente, as taxas de inibição (%) da atividade de quinase de polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG), polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG), e polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v3 (N-FLAG) foram calculadas para os compostos usando a seguinte fórmula:[taxa (%) de atividade de inibição da quinase pelo composto] = (1 - [contagem de fosforilação com a adição de composto e adição de ATP - contagem de fosforilação com nenhuma adição de composto e nenhuma adição de ATP]/[contagem de fosforilação com nenhuma adição de composto e adição de ATP - contagem de fosforilação com nenhuma adição de composto e nenhuma adição de ATP]) x 100
[00150]Como um resultado, como mostrado na Tabela 5, verificou-se que alguns compostos da presente invenção inibem a atividade de fosforilação do polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v1 (N-FLAG) purificado, polipeptídeo de fusão FGFR3-TACC3_v2 (N-FLAG) purificado, e polipeptídeo de fusão FGFR3- TACC3_v3 (N-FLAG) purificado contra do substrato de peptídeo.
[00151 ][Tabela 5]
Figure img0022
Exemplo de Teste 13: Isolamento de FGFR3-BAIAP2L1 de linhagem de células SW780 derivada de paciente com câncer de bexiga
[00152]O cDNA foi sintetizado por reação de transcrição reversa no RNA purificado a partir da linhagem de células SW780 derivada de paciente com câncer da bexiga (adquirida a partir de ATCC) com o uso de transcriptase reversa (SuperScriptIII, Life Technologies, Corp) e iniciadores oligo (dT) (iniciadores oligo (dT) 20, life Technologies, Corp), de acordo com o protocolo do kit.
[00153]Em seguida, a PCR (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 60°C durante 15 segundos, 68°C durante 5 minutos) foi realizada com o uso dos iniciadores FGFR3-BAIAP2L1_cloning_F representado pela SEQ ID No: 18 e FGFR3-BAIAP2L1_cloning_R representado pela SEQ ID No: 19, o cDNA obtido acima como um molde, e a polimerase de DNA (KOD-plus-Ver. 2; Toyobo Co., Ltd..). PCR adicional (30 ciclos de 98°C durante 15 segundos, 55°C durante 15 segundos, 68°C durante 4 minutos) foi realizada com o uso do produto de PCR descrito acima, que foi diluído 10 vezes como um molde, os iniciadores FGFR3_BAIAP2L1_cloning_BamHI_F representado pela SEQ ID No: 20 e FGFR3_BAIAP2L1_cloning_NotI_R representado pela SEQ ID No: 21, e a mesma polimerase de DNA, como mostrado acima. A eletroforese realizada após a reação de PCR mostrou que um produto de PCR de cerca de 3,8 k bases foi obtido. O produto de PCR foi clonado em um vetor de clonagem (Kit de Clonagem TOPO XL PCR, Life Technologies, Corp), e a inserção foi sequenciada por sequenciamento didesoxi (Kit de Sequenciamento em Ciclos Big Dye Terminator v3.1; Life Technologies, Corp.). Como resultado, o produto foi verificado como sendo um transcrito obtido por fusão da região entre o terminal 5' de CDS de FGFR3 (NM_001163213.1) registrado no NCBI e a extremidade 3' do éxon 18 para a região entre a extremidade 5' do éxon 2 em CDS de BAIAP2L1 (NM_018842.4) e o terminal 3' de CDS (FGFR3-BAIAP2L1). Na sequência confirmada, G na posição de base 3558 foi substituído por A (SNPs registro No.: rs1045916), C na posição de base 3723 por T, e G na posição de base 3747 por A (SEQ ID No: 22). O polipeptídeo codificado por SEQ ID NO: 22 é mostrado na SEQ ID No: 23.Exemplo de Teste 14: Preparação de solução de retrovírus FGFR3- BAIAP2L1
[00154]Para construir um plasmídeo de expressão que expressa, como uma proteína, o comprimento completo de ORF de FGFR3-BAIAP2L1, a reação enzimática foi realizada a 37°C durante 3 horas, com o uso do vetor de clonagem descrito acima e a enzima de restrição BamHI e os fragmentos de DNA digeridos pelas enzimas de restrição foram obtidos e purificados. Além disso, a reação da enzima foi realizada a 37°C durante 3 horas, com o uso de Notl e os fragmentos de DNA, e os fragmentos de DNA digeridos pelas enzimas de restrição foram obtidos e purificados. Este fragmento de DNA contendo ORF foi clonado em sítios BamHI e NotI no sítio de clonagem múltipla de um vetor de expressão (pMXs-puro; Cosmo Bio) para construir um plasmídeo de expressão (FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro). O FGFR3-BAIAP2L1/pMXs-puro preparado foi usado para preparar uma solução de retrovírus, de acordo com o método usado no Exemplo de Teste 9.Exemplo de Teste 15: Investigação de crescimento independente de ancoragem de FGFR3-BAIAP2L1
[00155]A solução de vírus preparada com o uso de FGFR3- BAIAP2L1/pMXs-puro no Exemplo de Teste 14 foi usada para obter as células de NIH3T3 que expressam o FGFR3-BAIAP2L1 estavelmente de acordo com o método usado no Exemplo de Teste 10 (designadas como células NIH3T3 que expressam FGFR3-BAIAP2L1).
[00156]Para investigar a capacidade de promoção do crescimento independente da ancoragem de células NIH3T3 que expressam FGFR3-BAIAP2L1, o mesmo método que no Exemplo de Teste 10 foi aplicado. Foi confirmado que a contagem de células Mock/NIH3T3 não aumentou entre o Dia 1 e Dia 4, enquanto que a contagem de células NIH3T3 que expressam FGFR3 -BAIAP2L1 aumentou cerca de 2,5 vezes entre o Dia 1 e no Dia 4. À luz do exposto, foi mostrado que as células NIH3T3 que expressam FGFR3-BAIAP2L1 apresentam o crescimento celular independente de ancoragem.Exemplo de Teste 16: Atividade inibidora sobre o crescimento celular independente de ancoragem de células NIH3T3 que expressam FGFR3-BAIAP2L1
[00157]Em uma placa esferóide de 96 poços (Sumilon Celltight Spheroid 96U; Sumitomo Bakelite), as células NIH3T3 que expressam FGFR3-BAIAP2L1 foram semeadas a 1 x 103 células por poço em meio D-MEM contendo 10% de soro fetal bovino. Um poço suplementado apenas com meio foi também preparado por um controle positivo. A cultura foi realizada de um dia para o outro, na presença de 5% de CO2 a 37°C, seguido por adição de compostos de teste (concentrações finais: 100 nM, 10 nM, e 1 nM). Como um controle negativo, o DMSO, usado como um solvente para os compostos, foi adicionado na mesma concentração (0,1%), como no caso da adição dos compostos. Em seguida, a cultura foi realizada na presença de 5% de CO2 a 37°C durante 4 dias, e um reagente de contagem de células (Ensaio Viabilidade de Células Luminescentes CellTiter-GloTM; Promega) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante 20 minutos, seguido por medição com um luminômetro. Assumindo que os valores de controle positivo e controle negativo foram de 100% de inibição, e 0% de inibição, respectivamente, a taxa de inibição do crescimento (%) foi calculada para cada composto. Como mostrado na Tabela 6, verificou-se que alguns compostos da presente invenção inibem o crescimento independente de ancoragem de células NIH3T3 que expressam FGFR3-BAIAP2L1.
[00158]Os resultados descritos acima mostraram que o crescimento de células cancerosas e de tumores que expressam FGFR3-BAIAP2L1 pode ser inibido pelos compostos da presente invenção.
[00159][Tabela 6]
Figure img0023
[00160]Uma composição farmacêutica que compreende um ou mais dos compostos de fórmula (I) ou os sais dos mesmos, como ingrediente ativo pode ser preparada de um modo convencional usando um excipiente comumente usado na técnica, mais especificamente, um excipiente farmacêutico, veículo farmacêutico, ou outro aditivo.
[00161]Qualquer modo de administração pode ser usado: a saber, a administração oral na forma de comprimidos, pílulas, cápsulas, grânulos, pós, soluções ou semelhantes, ou a administração parentérica na forma de injeções (por exemplo, intra-articular, intravenosa, ou intramuscular), supositórios, gotas oculares, pomadas oftálmicas, soluções percutâneas, pomadas, emplastros percutâneas, soluções transmucosa, emplastros transmucosais, inalantes, instilação intravesical ou semelhantes.
[00162]As composições sólidas usadas para administração oral incluem comprimidos, pós, grânulos, e semelhantes. Nestas composições sólidas, um ou mais ingredientes ativos são misturados com pelo menos um excipiente inerte. As composições podem também conter aditivos inertes tais como lubrificantes, agentes de desintegração, estabilizadores, e/ou solubilizadores, como nos casos habituais. Os comprimidos ou pílulas podem ser revestidos com açúcar ou com um filme gastro-solúvel ou entérico, se necessário.
[00163]As composições líquidas para administração oral incluem emulsões, soluções, suspensões, xaropes, elixires farmaceuticamente aceitáveis, e semelhantes, e compreendem um diluente inerte geralmente usado tal como água purificada ou etanol. Estas composições líquidas podem compreender auxiliares (por exemplo, solubilizantes, agentes umectantes, agentes de suspensão), edulcorantes, aromatizantes, aromáticos, e/ou antissépticos, além de um tal diluente inerte.
[00164]As injeções para administração parentérica incluem soluções, suspensões ou emulsões estéreis aquosas ou não aquosas. Exemplos de solventes aquosos incluem água destilada injetável e soro fisiológico. Exemplos de solventes não aquosos incluem álcoois tais como etanol. Estas composições podem ainda compreender agentes de isotonização, antissépticos, agentes umectantes, emulsionantes, dispersantes, estabilizadores ou solubilizantes. Elas são esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção de bactérias, por incorporação de desinfectantes, ou por irradiação. Alternativamente, elas podem ser formuladas em uma composição sólida estéril e reconstituídas para uso sendo dissolvidas ou suspensas em água estéril ou em um solvente estéril injetável antes do uso.
[00165]As formulações para uso externo incluem pomadas, emplastros, cremes, geleias, cataplasmas, aerossóis, loções, gotas para os olhos, pomadas para os olhos e semelhantes. Elas incluem bases para pomadas comumente usadas, bases para loção, soluções, suspensões, emulsões aquosas ou não aquosas, ou semelhantes.
[00166]As formulações transmucosa, tais como inaladores ou formulações transnasais são usadas na forma sólida, líquida, ou semissólida e podem ser preparadas de um modo convencionalmente conhecido. Por exemplo, tais formulações podem ser suplementadas conforme apropriado com excipientes conhecidos, e ainda com ajustadores de pH, antissépticos, surfactantes, lubrificantes, estabilizantes, espessantes, ou semelhantes. Para a sua administração, um dispositivo adequado para inalação ou insuflação pode ser usado. Por exemplo, usando um dispositivo conhecido (por exemplo, um dispositivo de inalação de dose calibrada), ou um nebulizador, o(s) composto(s) pode(m) ser administrado isoladamente ou como um pó de uma mistura formulada ou como uma solução ou suspensão, em associação com um carreador farmaceuticamente aceitável. Os inaladores de pó seco e semelhantes podem ser para uso em administração única ou múltipla, e os pós secos ou cápsulas contendo os pós podem ser usados em tais dispositivos. Alternativamente, eles podem estar na forma de sprays de aerossóis ou semelhantes, que utilizam um propulsor apropriado, por exemplo, um gás preferencial, como clorofluoroalcano ou dióxido de carbono.
[00167]De um modo geral, para administração oral, a dosagem diária é, desejavelmente, de cerca de 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal, de preferência, 0,1 a 30 mg/kg de peso corporal, com mais preferência, de 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal, dada como uma única dose ou em 2 a 4 doses divididas. Para administração intravenosa, a dose diária é, desejavelmente de cerca de 0,0001 a 10 mg/kg de peso corporal, administrada em uma ou várias doses por dia. Da mesma forma, para formulações transmucosa, a dosagem diária é de cerca de 0,001 a 100 mg/kg de peso corporal, administrada em uma ou várias doses por dia. A dosagem pode ser determinada, conforme apropriado para cada caso, tendo em consideração os sintomas, a idade, o sexo, e semelhantes.
[00168]A composição farmacêutica da presente invenção compreende um ou mais dos compostos de fórmula (I) ou os sais dos mesmos, como ingredientes ativos, em uma quantidade de 0,01 a 100 % em peso (0,01 a 50 % em peso em uma modalidade), que varia de acordo com a via de administração, forma de dosagem, o local de administração, ou os tipos de excipientes e aditivos.
[00169]Os compostos de fórmula (I) podem ser usados em combinação com vários agentes terapêuticos ou profiláticos para doenças contra as quais os compostos de fórmula (I) seriam eficazes. Em tal terapia de combinação, o fármaco pode ser administrado simultaneamente, ou separadamente em sucessão ou em intervalos de tempo desejados. As formulações para administração simultânea podem ser quer na forma mista ou na forma separada.
EXEMPLOS
[00170]Os processos para a preparação dos compostos de fórmula (I) estão descritos em mais detalhes com referência aos exemplos mostrados abaixo. Deve-se notar que a presente invenção não é limitada aos compostos descritos nos exemplos apresentados abaixo. Além disso, os processos para a preparação dos compostos de partida são apresentados nos exemplos de preparação. Os processos para a preparação dos compostos de fórmula (I) não estão limitados só àqueles realmente descritos nos exemplos abaixo, e os compostos de fórmula (I) também podem ser preparados através de qualquer combinação destes processos, ou por quaisquer processos óbvios para os versados na técnica.
[00171]Nos exemplos, exemplos de preparação e tabelas mostradas abaixo, as seguintes abreviaturas são usadas conforme necessário.
[00172]PEx: No. do Exemplo de Preparação, Ex: No. do Exemplo, pSyn: No. do Exemplo de Preparação do composto preparado da mesma maneira, Syn: No. do Exemplo do composto preparado na mesma maneira, Str.: fórmula química estrutural (Me: metil, et: etil, iPr: isopropil, tBu: terc-butil, Boc: terc-butoxicarbonil, Bn: benzil, THP: tetra-hidropiranil), DAT: dados físicos e químicos, valor de ESI+: m/z na análise de massa (método de ionização ESI, (M+H)+ a menos que especificado de outro modo), valor de ESI-: m/z (método de ionização ESI, (M-H)-, a menos que especificado de outro modo), valor de EI: m/z na análise de massa (método de ionização EI, (M)+, a menos que especificado de outro modo), valor de APCI/ESI+: m/z de análise de massa (medição simultânea por métodos de ionização APCI e ESI, (M+H)+ a menos que especificado de outro modo), NMR1: δ (ppm) em 1H-NMR em dimetil sulfóxido -de, NMR2: δ (ppm) em 1H-NMR em CDCl3, NMR3: δ (ppm) em 1H-NMR em CD3OD, "M" no Exemplo de Preparação e Exemplo: que indica mol/L. "HCl" na fórmula estrutural indica cloridrato e o número em frente do termo "HCl" indica razão molar. Por exemplo, 2HCl significa um sal de dicloridrato. O símbolo "*" nas tabelas dos Exemplos e Exemplos de Preparação indica que os compostos apresentados com o símbolo são substâncias ativas opticamente.
Exemplo de Preparação 1
[00173]Sob uma atmosfera de argônio, a uma mistura de 3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]anilina (300 mg) e etanol (e mL), ácido metanossulfônico (128 μl) foi adicionado, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos. Subsequentemente, o 5-bromo-2-cloropirimidina (229 mg) foi adicionado à mesma e a mistura resultante foi agitada a 100°C durante 4 horas. 5-bromo-2-cloropirimidina adicional (95 mg) foram adicionados à mistura e a mistura resultante foi agitada a 100°C durante 12 horas. À mistura da reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida de extração com clorofórmio. A fase orgânica obtida foi seca sobre sulfato de sódio anidro e, em seguida, filtrou-se. Depois que o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básico (acetato de etilo/metanol) para produzir 5-bromo-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil} pirimidina-2-amina (352 mg).
Exemplo de Preparação 2
[00174]Para uma mistura de 3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il) piperidin- 1-il]anilina (253 mg) e isopropanol (6 ml), ácido metanossulfônico (162 mL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos. Depois disso, 2-cloro-5-iodopirimidina (200 mg) foi adicionada à mistura, e a mistura resultante foi agitada a 90°C durante 12 horas e ainda agitada a 130°C durante 2 horas sob irradiação de micro-ondas. Para a mistura da reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida de extração com clorofórmio. A fase orgânica obtida foi seca sobre sulfato de sódio anidro e, em seguida, filtrou-se. Depois que o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir o 5-iodo-N-{3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il ) piperidin-1-il] fenil} pirimidina-2-amina (282 mg).
Exemplo de Preparação 3
[00175]Sob uma atmosfera de argônio, uma mistura de 1-etinil-3,5- dimetoxibenzeno (3 g) e acetonitrila (30 mL) foi resfriada em gelo e, em seguida, cloreto de sulfurila (3,15 mL) foi adicionado à mistura, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. Cloreto de sulfurila adicional (449 mL) foi adicionado à mesma, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Após a mistura de reação ser concentrada sob pressão reduzida, acetato de etila e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionados ao resíduo resultante, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos. O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com acetato de etila e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir 2,4- dicloro-3-etinil-1,5-dimetoxibenzeno (1,99 g).
Exemplo de Preparação 4
[00176]Uma mistura de 1-etinil-3,5-dimetóxi-benzeno (4 g) e acetonitrila (80 mL) foi resfriada em gelo, e N-fluoro-N'-(clorometil)trietilenodiamina bis (tetrafluoroborato) (19,4 g) foi adicionado à mistura. A mistura resultante foi gradualmente aquecida e agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. Para a mistura da reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida de extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com solução salina saturada e, em seguida, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. Depois que o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) e, subsequentemente, purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/hexano) para produzir 3-etinil-2,4-difluoro-1,5- dimetoxibenzeno (798 mg, Exemplo de Preparação No. PEx 4-1, que é descrito mais adiante) e 1-etinil-2-fluoro-3,5-dimetoxibenzeno (375 mg, Exemplo de Preparação No. PEx. 4- 2, que é descrito mais adiante).
Exemplo de Preparação 5
[00177]Sob uma atmosfera de argônio, uma mistura de 1-etinil-2-fluoro- 3,5-dimetóxi benzeno (800 mg) e acetonitrila (8 mL) foi resfriada com gelo, e cloreto de sulfurila (378 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Para a mistura de reação, acetato de etila e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionados seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 2- cloro-3-etinil-4-fluoro-1,5-dimetóxi benzeno (787 mg).
Exemplo de Preparação 6
[00178]Para uma mistura de 2,6-difluoro-3-metóxi benzaldeido (500 mg), carbonato de potássio (803 mg), e metanol (10 mL), dimetil (1-diazo-2- oxopropil)fosfonato (523 μL) foi adicionado à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação durante 5 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2-etinil-1,3-difluoro-4-metóxi benzeno (452 mg).
Exemplo de Preparação 7
[00179]Para uma mistura de 2-amino-5-iodopirimidina (1 g), 3-etinil-2,4- difluoro-1,5-dimetóxi benzeno (897 mg), tetrakistrifenilfosfina paládio (261 mg), io- deto de cobre (43 mg), e N,N-dimetilformamida (20 mL), N,N-di-isopropiletilamina (1,55 mL) foi adicionada sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 80°C durante 1 hora. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e para o resíduo obtido foram adicionados clorofórmio e água, e os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. Depois que o filtrado foi extraído com clorofórmio, a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-fenil)etinil]pirimidin-2-amina (1,07 g).
Exemplo de Preparação 8
[00180]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- fenil)etinil]pirimidin-2-amina (400 mg), metanol (4 mL), e tetra-hidrofurano (4 mL), 10% de paládio-carbono (73 mg) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Depois que a mistura resultante foi agitada a 60°C durante 8 horas sob uma at- mosfera de hidrogênio, os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 5-[(2,6- difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]pirimidin-2-amina (402 mg).
Exemplo de Preparação 9
[00181]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]pirimidin- 2-amina (100 mg) e acetonitrila (2 mL) sob uma atmosfera de argônio foram adicionados cloreto de cobre (I-I) (68 mg) e nitrito de n-pentila (69 μL), seguido por agitação a 60°C durante 4 horas. Para a mistura de reação, acetato de etila foi adicionado e os materiais insolúveis foram removidos por filtração. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2-cloro-5-[2- (2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]pirimidina (20 mg).
Exemplo de Preparação 10
[00182]Uma mistura de (2-cloropirimidin-5-il)metanol (120 mg), 3,5- dimetóxi fenol (186 mg), tributilfosfina (297 μL), e tetra-hidrofurano (2,4 mL) foi resfriada com gelo, e 1,1’-(azodicarbonil)dipiperidina (305 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Materiais insolúveis foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2-cloro-5-[(3,5-dimetóxi-fenóxi)metil]pirimidina (119 mg).
Exemplo de Preparação 13
[00183]Uma mistura de 2-cloro-5-hidróxi pirimidina (278 mg), carbonato de potássio (453 mg), e N,N-dimetilformamida (3 mL) foi resfriada com gelo, e brometo de 3,5-dimetóxi-benzil (541 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 7 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2-cloro-5-[(3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidina (360 mg).
Exemplo de Preparação 14
[00184]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidina (4,17 g) e N,N-dimetilformamida (40 mL), N-cloro-succinimida (4,05 g) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas e agitação a 60°C durante 2 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada, e o sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e, em seguida, seco sob pressão reduzida. O sólido obtido foi suspenso em acetato de etila (40 mL) e aquecido a 80°C. O sólido foi recolhido por filtração, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir 2-cloro-5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidina (3,99 g).
Exemplo de Preparação 15
[00185]Uma mistura de 2-cloro-5-hidróxi pirimidina (487 mg) e 1-(3,5- dimetóxi-fenil)etanol (680 mg), tributilfosfina (1,37 mL), e tetra-hidrofurano (14 mL) foi resfriada com gelo, e 1,1’-(azodicarbonil)dipiperidina (1,4 g) foi adicionada à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas e agitação a 50°C durante 3 horas. Materiais insolúveis foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2- cloro-5-[1-(3,5-dimetóxi-fenil)etóxi]pirimidina (415 mg).
Exemplo de Preparação 16
[00186]Uma mistura de metil 3,5-dimetóxi-benzoato (1 g) e acetonitrila (20 mL) foi resfriada com gelo, e N-fluoro-N’-(clorometil)trietilenodiamina bis(tetrafluoroborate) (4,09 g) foi adicionada à mistura seguido por agitação à tem- peratura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, adicionou-se sulfato de sódio anidro e sílica gel básica seguido por agitação durante 30 minutos, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatogra- fia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-benzoato de metila (292 mg: Exemplo de Preparação 16-1) e 2-fluoro-3,5- dimetóxi-benzoato de metila (232 mg: Exemplo de Preparação 16-2).
Exemplo de Preparação 17
[00187]Uma mistura de 2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzoato de metila (10 g) e tetra-hidrofurano (50 mL) foi resfriada com gelo, e boro-hidreto de lítio (3,0M solução de tetra-hidrofurano, 43 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 65 horas. A mistura de reação foi resfriada com gelo novamente, e boro-hidreto de lítio adicional (solução de tetra-hidrofurano 3,0M, 14 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 22 horas. A mistura de reação foi resfriada com gelo e adicionada lentamente em água com gelo (300 mL). Além disso, ácido clorídrico concentrado (25 mL) foi adicionado lentamente à mistura, e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e extraída com tolueno/acetato de etila (1:1). Uma camada orgânica obtida foi lavada com uma solução aquosa saturada de carbonato hidro- genado de sódio e salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir (2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)metanol (8,67 g).
Exemplo de Preparação 18
[00188]Uma mistura de (2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)metanol (1,71 g), trietilamina (2,57 mL), e tetra-hidrofurano (34 mL) foi resfriada com gelo, e cloreto de metanossulfonila (716 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 1 hora. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil metanos- sulfonato (2,32 g).
Exemplo de Preparação 19
[00189]Para uma mistura de 2-cloro-5-hidróxi pirimidina (4,38 g), carbonato de potássio (9,27 g), e N,N-dimetilformamida (79 mL), 2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil metanossulfonato (7,89 g) foi adicionado seguido por agitação a 60°C durante 1 hora. Para a mistura de reação, água foi adicionada, e o sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir 2-cloro-5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidina (8,53 g).
Exemplo de Preparação 20
[00190]Uma mistura de 2,3,5,6-tetrafluororpiridina (1,5 g) e metanol (15 mL) foi resfriada com gelo, e metóxido de sódio (4,03 g) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas e agitação a 50°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com éter dietílico. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 3,5-difluoro-2,6-dimetóxi-piridina (1,47 g).
Exemplo de Preparação 21
[00191]Uma mistura de di-isopropilamina (745 μL) e tetra-hidrofurano (5 mL) foi resfriada para -78°C, e n-butil lítio (solução de hexano 1,6M, 3,02 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação a 0°C durante 30 minutos. A mistura de reação foi resfriada para -78°C, e uma mistura de 3,5-difluoro-2,6-dimetóxi-piridina (770 mg) e tetra-hidrofurano (5 mL) foi adicionada à mistura gota a gota seguido por agitação durante 1 hora. Depois que N,N-dimetilformamida (440 μL) foi adicionadoà mistura, a mistura resultante foi aquecida à temperatura ambiente e agitou- se durante 1 hora. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de eti- la/hexano) para produzir 3,5-difluoro-2,6-dimetóxi-isonicotinaldeido (406 mg).
Exemplo de Preparação 22
[00192]Uma mistura de 3,5-difluoro-2,6-dimetóxi-isonicotinaldeido (400 mg) e metanol (4 mL) foi resfriada com gelo, e boro-hidreto de sódio (82 mg) foi adicionadoà mistura seguido por agitação durante 1 hora. Para a mistura de reação, ácido clorídrico 1M foi adicionado seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado para produzir (3,5- difluoro-2,6-dimetóxi-piridin-4-il)metanol (403 mg).
Exemplo de Preparação 23
[00193]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidina (235 mg), 4-(4-amino-3-metóxi-fenil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (306 mg), 1,1’-binaftaleno-2,2’-di-ilbis(difenilfosfina) (138 mg), carbonato de césio (660 mg), e dioxano (10 mL), acetato de paládio (30 mg) foi adicionado à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. A mistura resultante foi agitada a 100°C durante 3 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultan- te foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir terc-butil 4-[4-({5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)-3-metóxi-fenil]piperidina-1-carboxilato (298 mg).
Exemplo de Preparação 24
[00194]Para uma mistura de 2-fluoro-5-nitrotolueno (500 mg), carbonato de potássio (2,0 g), e N,N-dimetilformamida (15 mL), 4-piperidin-4-iltiomorfolina 1,1- dióxido bistrifluoroacetato (2,16 g) foi adicionado seguido por agitação a 80°C durante 20 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 4-[1- (2-metil-4-nitrofenil)piperidin-4-il]tiomorfolina 1,1-dióxido (870 mg).
Exemplo de Preparação 25
[00195]Para uma mistura de 4-[1-(2-metil-4-nitrofenil)piperidin-4- il]tiomorfolina 1,1-dióxido (1,5 g) e ácido acético (30 mL), 10% de paládio-carbono (452 mg) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Depois da agitação durante 13 horas sob uma atmosfera de hidrogênio, os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e, em seguida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada ao resíduo resultante. O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir 4-[4- (1,1-dioxidotiomorfolin-4-il)piperidin-1-il]-3-metilanilina (1,26 g).
Exemplo de Preparação 26
[00196]Para uma mistura de 1-cloro-2-(difluorometóxi)-4-nitrobenzeno (920 mg), carbonato de potássio (1,7 g), e N,N-dimetilformamida (10 mL), 1-metil-4- piperidin-4-ilpiperazina (1,13 g) foi adicionado seguido por agitação a 100°C de um dia para o outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e água foi adicionada para o resíduo resultante seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) para produzir 1-{1-[2-(difluorometóxi)-4-nitrofenil]piperidin-4-il}-4-metilpiperazina (1,38 g).
Exemplo de Preparação 27
[00197]Para uma mistura de 1-{1-[2-(difluorometóxi)-4-nitrofenil]piperidin-4- il}-4-metilpiperazina (1,38 g) e etanol (54 mL), 10% de paládio-carbono (397 mg) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Depois da agitação durante 1 hora sob uma atmosfera de hidrogênio, os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para pro-duzir3-(difluorometóxi)-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]anilina (1,25 g).
Exemplo de Preparação 28
[00198]Uma mistura de piperazina-1-carboxilato de benzila (10 g), 2,2,6,6- tetrametilpiperidin-4-ona (7,05 g), e diclorometano (100 mL) foi resfriada com gelo, e boro-hidreto triacetóxi de sódio (11,5 g) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou- se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de eti- la/hexano) para produzir benzil 4-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piperazina-1- carboxilato (7,18 g).
Exemplo de Preparação 29
[00199]Para uma mistura de benzil 4-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4- il)piperazina-1-carboxilato (7,18 g) e etanol (60 mL), 10% de paládio-carbono (2,0 g) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Depois da agitação durante 7 horas sob uma atmosfera de hidrogênio, os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 1-(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-il)piperazina (4,35 g).
Exemplo de Preparação 30
[00200]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidina (202 mg), 9-(4-amino-2-metóxi-fenil)-3,9- diazaespiro[5,5]undecano-3-carboxilato de terc-butila (311 mg), 2-(diciclo- hexilfosfino)-2’,4’,6’-tri-isopropil-1,1’-bifenil (30 mg), carbonato de potássio (134 mg), e terc-butanol (10 mL), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (19 mg) foi adicionadoà temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio. A mistura resultante foi agitada a 100°C durante 4 horas. Materiais insolúveis foram removidos por filtraçãoe lavados com acetato de etila. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 4-[4-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-metóxi-fenil]-3,9- diazaespiro[5,5]undecano-3-carboxilato de terc-butila (259 mg).
Exemplo de Preparação 31
[00201]Para uma mistura de N-[3-(1,4-dioxa-8-azaespiro[4,5]dec-8-il)fenil]- 5-[(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-amina (596 mg), ácido acético (9 mL), e água (9 mL), ácido clorídrico concentrado (0,5 mL) foi adicionado seguido por agitação a 80°C durante 7 horas. A mistura de reação foi resfriada com gelo, e uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (155 mL) e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionadas à mistura, e, em seguida, o sólido resultante foi recolhido por filtração. Clorofórmio foi adicionado à mistura, e a mistura resultante foi seca sobre sulfato de sódio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 1-[3-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)fenil]piperidin-4-ona (512 mg).
Exemplo de Preparação 32
[00202]Uma mistura de 2-[3-({5-[(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)-1H-pirazol-1-il]etanol (116 mg), trietilamina (84 μL), e tetra-hidrofurano (4 mL) foi resfriada com gelo, e cloreto de metanossulfonila (47 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 3 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 2-[3-({5-[(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]etil me- tanossulfonato (129 mg).
Exemplo de Preparação 33
[00203]Uma mistura de 4-(4-nitro-1H-pirazol-1-il)piperidina (250 mg), 1- metilpiperidin-4-ona (220 μL), e diclorometano (5 mL) foi resfriada com gelo, e bo- ro-hidreto triacetóxi de sódio (810 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) para produzir 1’-metil-4-(4-nitro-1H-pirazol-1-il)-1,4’- bipiperidina (342 mg).
Exemplo de Preparação 34
[00204]Para uma mistura de 1-(2-cloro-4-nitrofenil)-4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazina (3,7 g), cloreto de amônio (352 mg), etanol (94 mL), tetra-hidrofurano (47 mL), e água (47 mL), ferro em pó (3,06 g) foi adicionado seguido por agitação a 70°C durante 4 horas. Depois que materiais insolúveis foram removidos por filtração,o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Para o resíduo resultante, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 3-cloro-4-[4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin- 1-il]anilina (1,03 g).
Exemplo de Preparação 35
[00205]Para uma mistura de (3R,5S)-1-(2-metóxi-4-nitrofenil)-3,5,- dimetilpiperazina (3,0 g), N,N-di-isopropiletilamina (2,32 mL), di-terc- butildicarbonato (2,71 g), e dioxano (20 mL), 4-dimetilaminopiridina (69 mg) foi adicionado seguido por agitação a 80°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de eti- la/hexano) para produzir (2R,6S)-4-(2-metóxi-4-nitrofenil)-2,6-dimetilpiperazina-1- carboxilato terc-butila (1,73 g).
Exemplo de Preparação 36
[00206]Para uma mistura de 2-(2-bromoetóxi)-1-cloro-4-nitrobenzeno (3,0 g), carbonato de césio (5,23 g), N-metilpirrolidona (30 mL), 1H-pirazol (874 mg) foi adicionado seguido por agitação a 60°C durante 6 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada, e o sólido resultante foi recolhido por filtração. O sólido foi la- vado com água e seco sob pressão reduzida para produzir 1-[2-(2-cloro-5- nitrofenóxi)etil]-1H-pirazol (2,57 g).
Exemplo de Preparação 37
[00207]Para uma mistura de 1-[2-(2-cloro-5-nitrofenóxi)etil]-1H-pirazol (1,3 g), carbonato de césio (1,0 g), N-metilpirrolidona (8 mL), cis-2,6-dimetilpiperazina (832 mg) foi adicionado seguido por agitação a 130°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água foi adicionada, e o sólido resultante foi recolhido por filtração.O sólido foi lavado com água e seco sob pressão reduzida para produzir (3R,5S)-3,5-dimetil-1-{4-nitro-2-[2-(1H-pirazol-1-il)etóxi]fenil}piperazina (1,15 g).
Exemplo de Preparação 38
[00208]Uma mistura de 2-cloro-5-[(3,5-dimetóxi-benzil)oxi]piridina (500 mg) e acetonitrila (10 mL) foi resfriada com gelo, e cloreto de sulfurila (297 μL) foi adicionadoà mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante três dias. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada ao resíduo obtido. O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir 2-cloro-5-[(2,6-dicloro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]piridina (596 mg).
Exemplo de Preparação 39
[00209]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-4-il]pirimidin-2-amina (3,6 g) e metanol (20 mL), a solução de cloreto de hidrogênio/dioxano 4M (40 mL) foi adicionada seguida por agitação à temperatura ambiente durante 6 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada ao resíduo obtido. O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-(1H- pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (2,9 g).
Exemplo de Preparação 40
[00210]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-(1H- pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (4,0 g), carbonato de potássio (4,6 g), e N,N- dimetilformamida (80 mL), bromoacetato de etila (2,4 mL) foi adicionado seguido por agitação a 80°C durante 3 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir [4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]acetato de etila (4,2 g).
Exemplo de Preparação 41
[00211]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-(1H- pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (50 mg), carbonato de potássio (57 mg), e N,N- dimetilformamida (1 mL), [(4R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]metil 4- metilbenzenossulfonato (98 μL) foi adicionado seguido por agitação a 60°C durante 1 hora e agitação a 110°C durante 4 dias. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de eti- la/hexano) para produzir 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-(1-{[(4S)-2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il]metil}-1H-pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (45 mg).
Exemplo de Preparação 111
[00212]Para uma mistura de 4-nitro-1H-pirazol (500 mg), (3-endo)-3-[(metil sulfonil)oxi]-8-azabiciclo[3,2,1]octano-8-carboxilato de terc-butila (1,35 g) e N- metilpirrolidona (6 mL), carbonato de césio (2,16 g) foi adicionado seguido por agitação a 100°C durante 6 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada, e o sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir (3-exo)-3-(4-nitro-1H-pirazol-1-il)-8- azabiciclo[3,2,1]octano-8-carboxilato de terc-butila (1,07 g).
Exemplo de Preparação 118
[00213]Uma mistura de 4-nitro-1H-pirazol (3 g), quinuclidin-3-ol (4,05 g), tri- fenilfosfina (9,05 g), e tetra-hidrofurano (60 mL) foi resfriada com gelo, e azodicar- boxilato di-isopropila (6,84 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, ácido clorídrico 1M (50 mL) foi adicionado para o resíduo resultante. A camada aquosa obtida foi lavada com acetato de etila, e, em seguida, uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (60 mL) foi adicionada para basificação. Depois da extração com clorofórmio, uma camada orgânica obtida foi seca sobre sulfato de sódio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e, em seguida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila) para produzir 3-(4-nitro-1H-pirazol-1-il)quinuclidine (5,15 g).
Exemplo de Preparação 133
[00214]Uma mistura de (4-amino-2-metóxi-fenil)[2-(4-metilpiperazin-1- il)etil]carbamato de terc-butila (1,21 g) e tetra-hidrofurano (24 mL) foi resfriada com gelo, e hidreto de lítio e alumínio (629 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 1 hora sob aquecimento a refluxo. Para a mistura de reação, água (0,63 mL), uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (0,63 mL), e água (1,89 mL) naquela ordem foram adicionadas. Depois que materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite, o filtrado foi extraído com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (clorofórmio/metanol) para produzir 2-metóxi-N1- metil-N1-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etil]benzeno-1,4-diamina (922 mg).
Exemplo de Preparação 138
[00215]Para uma mistura de 2-cloro-5-nitropirimidina (798 mg), carbonato de potássio (1,04 g), e N,N-dimetilformamida (16 mL), 1-metil-4-(piperidin-4- il)piperazina (1,1 g) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 2-[4- (4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]-5-nitropirimidina (542 mg).
Exemplo de Preparação 143
[00216]Para uma mistura de 4-(2-amino-1,3-tiazol-5-il)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (1,13 g) e acetato de etila (8 mL), solução de cloreto de hidrogênio/acetato de etila 4M (8 mL) foi adicionada seguida por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida para produzir cloridrato de 5-(piperidin-4-il)-1,3-tiazol-2-amina (877 mg).
Exemplo de Preparação 144
[00217]Para uma mistura de cloridrato de 5-(piperidin-4-il)-1,3-tiazol-2- amina (519 mg), diclorometano (5 mL), e metanol (5 mL), 1H-benzotriazol-1- ilmetanol (423 mg), acetato de sódio (388 mg), e boro-hidreto triacetóxi de sódio (1,0 g) naquela ordem foram adicionados seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio e gel de sílica básica foram adicionadas segui- do por concentração do solvente sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (clorofórmio/metanol) para produzir 5-(1-metilpiperidin-4-il)-1,3-tiazol-2-amina (411 mg).
Exemplo de Preparação 145
[00218]Uma mistura de 5-nitropiridin-2(1H)-ona (700 mg), (R)-2,2-dimetil- 1,3-dioxolano-4-metanol (661 mg), trifenilfosfina (1,97 g), e tetra-hidrofurano (20 mL) foi resfriada com gelo, azodicarboxilato de di-isopropila (1,49 mL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 5 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir (R)-2-[(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4- il)metóxi]-5-nitropiridina (541 mg).
Exemplo de Preparação 152
[00219]Para uma mistura de (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-metanol (661 mg) e N,N-dimetilformamida (23 mL), hidreto de sódio (218 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 10 minutos. Para a mistura de reação, 2-cloro-5-nitropiridina (793 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois que água foi adicionada para a mistura de reação, extração com acetato de etila foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir (S)-2-[(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metóxi]-5-nitropiridina (810 mg).
Exemplo de Preparação 162
[00220]Para uma mistura de 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]etil metanossulfonato (320 mg) e N- metilpirrolidona (6 mL), piperazina-1-carboxilato de terc-butila (1,31 g) foi adicionado seguido por agitação a 80°C de um dia para o outro e agitação adicional a 120°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionadas seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou- se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 4-{2-[4- ({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1- il]etil}piperazina-1-carboxilato de terc-butila (202 mg).
Exemplo de Preparação 175
[00221]Uma mistura de 5-metil-1H-pirazol-3-amina (522 mg) e N,N- dimetilformamida (10 mL) foi resfriada com gelo, e hidreto de sódio (473 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 30 minutos. Para a mistura de reação, 2-(2-bromoetóxi)tetra-hidro-2H-piran (893 μL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Depois que solução aquosa saturada de cloreto de amônio foi adicionada para a mistura de reação, a extração com acetato de etila foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir 5-metil-1-[2-(tetra-hidro-2H-piran-2-ilóxi)etil]-1H-pirazol-3-amina (427 mg: Exemplo de Preparação 175-1) e 3-metil-1-[2-(tetra-hidro-2H-piran-2-ilóxi)etil]-1H- pirazol-5-amina (199 mg: Exemplo de Preparação 175-2).
Exemplo de Preparação 176
[00222]Para uma mistura de 5-[2-(benzilóxi)etil]-3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1- il)-1-metil-1H-pirazol (640 mg) e etanol (9,7 mL), hidroxilamina (1,37 mL) e mono- hidrato de ácido p-toluenossulfônico (1,95 g) naquela ordem foram adicionados seguido por agitação a 95°C de um dia para o outro. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e, em seguida, água foi adicionada para o resíduo resultante seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofór- mio/metanol) para produzir 5-[2-(benzilóxi)etil]-1-metil-1H-pirazol-3-amina (470 mg).
Exemplo de Preparação 183
[00223]Para uma mistura de (1-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-il)metanol (398 mg), 3,4-di-hidro-2H-piran (459 μL), e acetato de etila (8 mL), mono-hidrato de áci-dop-toluenossulfônico (96 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Mais 3,4-di-hidro-2H-piran (459 μL) e mono-hidrato de ácido p-toluenossulfônico (96 mg) foram adicionados à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Depois que água foi adicionada para a mistura de reação, extração com acetato de etila foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir 1-metil-3-nitro-5-[(tetra-hidro-2H-piran-2- ilóxi)metil]-1H-pirazol (487 mg).
Exemplo de Preparação 186
[00224]Uma mistura de 4-nitro-1H-pirazol (300 mg), 2-fenil-1,3-dioxan-5-ol (717 mg), trifenilfosfina (1,11 g) e tetra-hidrofurano (4,5 mL) foi resfriada com gelo, e, em seguida, azodicarboxilato de di-isopropila (842 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 4- nitro-1-(2-fenil-1,3-dioxan-5-il)-1H-pirazol (121 mg).
Exemplo de Preparação 189
[00225]Para uma mistura de 5-nitropiridina-2-carbaldeido (761 mg), 2- (piperazin-1-il)etanol (1,23 mL), ácido acético (570 μL), e diclorometano (20 mL), boro-hidreto triacetóxi de sódio (2,23 g) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio/2-propanol. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 2-{4- [(5-nitropiridin-2-il)metil]piperazin-1-il}etanol (726 mg).
Exemplo de Preparação 191
[00226]Para uma mistura de 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-3-carboxilato de metila (871 mg), etanol (8,7 mL), e tetra-hidrofurano (8,7 mL), uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (3,45 mL) foi adicionado seguido por agitação a 60°C durante 2 horas. Para a mistura de reação, ácido clorídrico 1M foi adicionado, e o sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir ácido 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-3-carboxílico (846 mg).
Exemplo de Preparação 193
[00227]Uma mistura de ácido 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-3-carboxílico (300 mg) e dioxano (8,5 mL) foi resfriada com gelo, e 1,1’-carbonildi-imidazol (99 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas e agitação a 60°C durante 2 horas. Mais 1,1’-carbonildi-imidazol (99 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação a 60°C durante 2 horas. Além disso, 1,1’-carbonildi-imidazol (297 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura de reação foi resfriada com gelo e boro-hidreto de sódio (230 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Água foi adicionada para a mistura de reação e extração com acetato de etila foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir [5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-3-il]metanol (126 mg).
Exemplo de Preparação 201
[00228]Para uma mistura de 1-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-carbaldeido (850 mg) e tetra-hidrofurano (50 mL), (trifenilfosforanilideno)acetato de metila (3,66 g) foi adicionado seguido por agitação a 60°C durante 3 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, água foi adicionada para o resíduo resultante seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo obtido foi lavado com clorofórmio e o sólido resultante foi recolhido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, combinado com o sólido obtido anteriormente para produzir (E)-3-(1-metil-3-nitro- 1H-pirazol-5-il)acrilato de metila (1,15 g).
Exemplo de Preparação 202
[00229]Sob uma atmosfera de argônio, para uma mistura de (E)-3-(1-metil- 3-nitro-1H-pirazol-5-il)acrilato de metila (1,15 g) e etanol (50 mL) foi adicionado 10% de paládio-carbono (580 mg). Depois da agitação sob uma atmosfera de hidrogênio em 1 atm durante 12 horas e em 2,7 atm durante 4 horas, materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. O filtrado resultante foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 3-(3-amino-1-metil-1H-pirazol-5- il)propanoato de metila (955 mg).
Exemplo de Preparação 204
[00230]Para uma mistura de ácido 2-[(terc-butóxi-carbonil)amino]-1,3- tiazol-5-carboxílico (500 mg), cloridrato de N-[3-(dietilamino)propil]-N’-etilcarbodi- imida (589 mg), 1H-benzotriazol-1-ol (415 mg), e N,N-dimetilformamida (10 mL), 1- metilpiperazina (451 μL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 dias. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir {5- [(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1,3-tiazol-2-il}carbamato de terc-butila (560 mg).
Exemplo de Preparação 205
[00231]Uma mistura de 4-aminopiridin-2(1H)-ona (400 mg) e N- metilpirrolidona (15 mL) foi resfriada com gelo, e hidreto de sódio (218 mg) foi adicionadoà mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos. Para a mistura de reação, p-toluenossulfonato de (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan- 4-ilmetil (1,14 g) e iodeto de sódio (109 mg) naquela ordem foram adicionados se-  guido por agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. Depois o hidreto de sódio (218 mg) foi adicionado para a mistura de reação seguido por agitação a 80°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, a solução aquosa saturada de cloreto de amônio foi adicionada, e, em seguida, a mistura resultante foi saturada com cloreto de sódio, e a extração com metanol/clorofórmio foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi seca sobre sulfato de sódio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de eti- la/metanol) para produzir (R)-4-amino-1-[(2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil]piridin- 2(1H)-ona (136 mg).
Exemplo de Preparação 209
[00232]Uma mistura de [5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-1H-pirazol-3-il]metanol (126 mg), trietilamina (147 μL), diclorometano (6 mL), e tetra-hidrofurano (6 mL) foi resfriada com gelo, e, em seguida, cloreto de metanossulfonila (82 μL) foi adicionadoà mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Para a mistura de reação, N,N-dimetilformamida (6 mL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Água foi adicionada para a mistura de reação e a extração com clorofórmio foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzirN-[3-(clorometil)-1H-pirazol-5-il]-5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin- 2-amina (109 mg).
Exemplo de Preparação 210
[00233]Para uma mistura de {5-[(4-metilpiperazin-1-il)carbonil]-1,3-tiazol-2- il}carbamato de terc-butila (560 mg) e acetato de etila (8 mL) foi adicionada solução de cloreto de hidrogênio/acetato de etila 4M (8 mL) seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de gel de sílica básica (metanol/clorofórmio) para produzir (2-amino-1,3-tiazol-5-il)(4- metilpiperazin-1-il)metanona (357 mg).
Exemplo de Preparação 211
[00234]Para uma mistura de (5-nitro-1H-pirazol-3-il)metanol (1,86 g), 3,4- di-hidro-2H-piran (4,7 mL), e acetonitrila (28 mL), ácido trifluoroacético (40 μL) foi adicionado seguido por agitação a 70°C durante 3 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou- se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir 5-nitro-1-(tetra-hidro-2H-piran-2-il)-3-[(tetra-hidro-2H-piran-2-ilóxi)metil]- 1H-pirazol (3,98 g).
Exemplo de Preparação 214
[00235]Uma mistura de [5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3-il]metanol (200 mg) e 1,2-dicloroetano (12 mL) foi resfriada com gelo, e dióxido de manganês (442 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos e, em seguida, agitação a 90°C durante 2 horas. Depois que materiais insolúveis foram removidos por filtração, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para pro-duzir5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3- carbaldeido (142 mg).
Exemplo de Preparação 229
[00236]Uma mistura de metil 2-cloro-6-fluoro-3,5-dimetóxi-benzoato (682 mg) e tetra-hidrofurano (25 mL) foi resfriada com gelo, e hidreto de lítio e alumínio (104 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Para a mistura de reação, éter dietílico foi adicionado para diluição mediante resfriamento com gelo, e, em seguida, uma solução aquosa saturada de sulfato de sódio foi adicionada à mistura. Os materiais insolúveis foram separados por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir (2-cloro-6-fluoro-3,5-dimetóxi-fenil)metanol (363 mg).
Exemplo de Preparação 232
[00237]Para uma mistura de 2-bromo-5-nitroanisol (3,15 g), 3-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-8-azabiciclo[3,2,1]oct-2-eno-8-carboxilato terc- butila (5,00 g), e dioxano (40 mL), complexo de dicloreto de [1,1’- bis(difenilfosfino)ferroceno]paládio e diclorometano (554 mg) e carbonato de potássio (2,81 g) naquela ordem foram adicionados sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 80°C durante 21 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir 3-(2-metóxi-4-nitrofenil)-8-azabiciclo[3,2,1]oct-2-eno-8- carboxilato terc-butila (2,78 g).
Exemplo de Preparação 252
[00238]Uma mistura de 4,4-bis(acetóxi metil)-1,4’-bipiperidin-1’-carboxilato de terc-butila (712 mg) e diclorometano (6 mL) foi resfriada com gelo, e, em seguida,ácido trifluoroacético (3 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com diclorometano. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmou- ra, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir 1,4’-bipiperidin-4,4-di-ilbis(metileno) diacetato (529 mg).
Exemplo de Preparação 255
[00239]Uma mistura de 4,4-bis(hidróxi metil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (1,01 g), trietilamina (861 μL), e diclorometano (10 mL) foi resfriada com gelo, e anidrido acético (950 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 2 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com diclorometano. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir 4,4- bis(acetóxi metil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (1,38 g).
Exemplo de Preparação 295
[00240]Depois que uma mistura de 2-[3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-1-metil- 1H-pirazol-5-il]etanol (630 mg), brometo de benzila (376 μL), e tetra-hidrofurano (8 mL) foi resfriada com gelo, hidreto de sódio (173 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 6 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 5-[2-(benzilóxi)etil]-3-(2,5-dimetil-1H-pirrol- 1-il)-1-metil-1H-pirazol (640 mg).
Exemplo de Preparação 296
[00241]Depois que uma mistura de 3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-1-metil-1H- pirazol (2 g) e tetra-hidrofurano (60 mL) foi resfriada para -78°C, n-butil lítio (solu- ção de hexano 1,6M, 8,56 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 2 horas. Para a mistura de reação, oxirano (solução de tetra-hidrofurano 1,1M, 15,6 mL) e complexo de borotrifluoreto e tetra-hidrofurano (1,51 mL) foram adicionados seguido por agitação durante 30 minutos. Depois que a mistura foi obtida foi aquecida à temperatura ambiente e agitou-se durante 6 horas. Para a mistura de reação, a solução aquosa saturada de cloreto de amônio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou- se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) para produzir 2-[3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-1-metil-1H-pirazol-5-il]etanol (630 mg).
[00242]Os compostos mostrados nas Tabelas 7 a 62 abaixo foram preparados da mesma maneira que nos exemplos de preparação descritos acima. As Tabelas 7 a 62 também mostram os processos para a preparação dos Compostos dos exemplos de preparação e os dados estruturais, químicos e físicos dos Compostos.
Exemplo 1
[00243]Para uma mistura de 5-bromo-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (104 mg), 1-etinil-3,5-dimetóxi benzeno (37 mg), tetrakistrifenilfosfina paládio (13 mg), iodeto de cobre (4 mg), e N,N- dimetilformamida (2 mL), trietilamina (157 μL) foi adicionada sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 120°C durante 30 minutos. Além disso, uma mistura de 1-etinil-3,5-dimetóxi benzeno (146 mg) e N,N-dimetilformamida (1 mL) foi adicionada à mistura seguido por agitação a 120°C durante 2 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, e os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e subsequentemente, purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/metanol), e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir 5-[(3,5-dimetóxi-fenil)etinil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (23 mg).
Exemplo 2
[00244]Para uma mistura de 5-[(3,5-dimetóxi-fenil)etinil]-N-{3-metóxi-4-[4- (4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (72 mg), metanol (2 mL), e tetra-hidrofurano (2 mL), 10% de paládio-carbono (25 mg) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio. Depois da agitação durante 4 horas sob uma atmosfera de hidrogênio (3 atm), os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com éter dietílico para produzir 5-[2-(3,5-dimetóxi- fenil)etil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (17 mg).
Exemplo 3
[00245]Para uma mistura de 5-iodo-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (100 mg), 2,4-dicloro-3-etinil-1,5-dimetóxi benzeno (55 mg), tetrakistrifenilfosfina paládio (23 mg), iodeto de cobre (2 mg), e N,N-dimetilformamida (2 mL), N,N-di-isopropiletilamina (67 μL) foi adicionada sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 100°C durante 4 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, e os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite. Para o filtrado, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em co- luna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e subsequentemente, purificado por croma- tografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/metanol), e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- fenil)etinil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2- amina (56 mg).
Exemplo 4
[00246]Para uma mistura de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-fenil)etinil]-N-{3- metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (92 mg) e acetato de etila (6 mL), a solução de cloreto de hidrogênio/acetato de etila 4M (1 mL) foi adicionada seguida por agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. O sólido resultante foi recolhido por filtração e seco sob pressão reduzida para produzir tricloridrato de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-fenil)etinil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (101 mg).
Exemplo 5
[00247]Uma mistura de 5-[2-(3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (131 mg) e acetonitrila (1,3 mL) foi resfriada com gelo, e, em seguida, cloreto de sulfurila (41 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, lavado com éter di-isopropílico para produzir N-{2-cloro-5-metóxi-4-[4- (4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}-5-[2-(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- fenil)etil]pirimidin-2-amina (29 mg).
Exemplo 6
[00248]Sob uma atmosfera de argônio, uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-fenil)etinil]-N-{3-metóxi-4-[4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1- il]fenil}pirimidin-2-amina (164 mg), 4-metilbenzeno sulfonil hidrazida (2,63 g), e 1,2- dimetóxi etano (3 mL) foi agitada a 110°C, e uma mistura de acetato de sódio (1,16 g) e água (1 mL) foi adicionado à mistura. Depois de 2 horas, 4-metilbenzeno sul- fonil hidrazida (1,32 g) foi adicionado à mistura, e, em seguida, uma mistura adicional de acetato de sódio (581 mg) e água (1 mL) foi adicionada à mistura seguida por agitação a 110°C durante 2 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/metanol/solução aquosa de amônia conc.) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5-[2-(2,6- difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-metóxi-4-[4-(1-metilpiperidin-4-il)piperazin-1- il]fenil}pirimidin-2-amina (114 mg).
Exemplo 7
[00249]Uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etinil]-N-[3- metóxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil]pirimidin-2-amina (100 mg), tetra-hidrofurano (5 mL), e metanol (5 mL) foi reagida com o uso de H-Cube (nome comercial) (10% de paládio-carbono, 0,5 mL/min, 50°C, 1 atm). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N- [3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil]pirimidin-2-amina (29 mg).
Exemplo 8
[00250]Para uma mistura de [4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]acetato de etila (292 mg), tetra- hidrofurano (6 mL), e etanol (6 mL), uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (1,3 mL) foi adicionada à temperatura ambiente seguido por agitação durante 5 horas. A mistura de reação foi neutralizada com ácido clorídrico 1M e o sólido resultante foi recolhido por filtração. O sólido foi lavado com água e seco sob pressão reduzida para produzir [4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)-1H-pirazol-1-il]ácido acético (267 mg).
Exemplo 9
[00251]Para uma mistura de 2-cloro-5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- fenil)etil]pirimidina (56 mg), 1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-amina (48 mg), 1,1’-binaftaleno-2,2’-di-ilbis(difenilfosfina) (33 mg), carbonato de césio (174 mg), e dioxano (2,2 mL), o acetato de paládio (8 mg) foi adicionado à temperatura ambiente sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 100°C durante 4 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N- [1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]pirimidin-2-amina (43 mg).
Exemplo 10
[00252]Para uma mistura de 1-(bromometil)-2,6-difluorobenzeno (14 mg), 2-cloro-5-hidróxi pirimidina (9,1 mg), e N,N-dimetilformamida (1 mL), carbonato de potássio (16 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi concentrado sob pressão reduzida. Para o resíduo resultante, uma mistura de 3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]anilina (30 mg), carbonato de césio (65 mg), acetato de paládio-X-Phos (Pd:P = 1:2) comprimido de ChemDose (nome comercial), e álcool terc-butílico (0,5 mL) foi adicionado seguido por agitação a 120°C de um dia para o outro sob uma atmosfera de nitrogênio. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por HPLC (0,1% de solução aquosa de ácido fórmico/metanol) para produzir 5-[(2,6- difluorobenzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1- il]fenil}pirimidin-2-amina (17 mg).
Exemplo 11
[00253]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-(1- {[(4S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il]metil}-1H-pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (45 mg) e tetra-hidrofurano (2 mL), ácido clorídrico 1M (1 mL) foi adicionado seguido por agitação a 50°C durante 3 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir (2S)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]propano-1,2-diol (27 mg).
Exemplo 12
[00254]Uma mistura de 4-[4-({5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-3-metóxi-fenil]piperidin-1-carboxilato de terc-butila (298 mg) e clorofórmio (6 mL) foi resfriada com gelo, e ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. Depois que a mistura de reação foi resfriada com gelo, uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (10 mL) e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionadas à mistura para basificação seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um produto bruto (273 mg). Além disso, o produto bruto (60 mg) foi purificado por cromatografia de sílica gel (clorofórmio/metanol/solução aquosa de amônia conc.), e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]-N-[2-metóxi-4-(piperidin-4-il)fenil]pirimidin-2-amina (23 mg).
Exemplo 13
[00255]Para uma mistura de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[2- metóxi-4-(piperidin-4-il)fenil]pirimidin-2-amina (63 mg), diclorometano (2 mL), e metanol (1 mL), 1H-benzotriazol-1-ilmetanol (20 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, boro-hidreto tria- cetóxi de sódio (51 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada e a extração com clorofórmio foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[2-metóxi-4-(1-metilpiperidin-4- il)fenil]pirimidin-2-amina (28 mg).
Exemplo 14
[00256]Para uma mistura de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1- (piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]pirimidin-2-amina (200 mg), etanol (3 mL), e N,N- dimetilformamida (3 mL), 2,2-dimetilóxirano (112 μL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou- se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila) e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir 1-{4-[4-({5-[(2,6-dicloro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]piperidin-1-il}-2-metilpropan- 2-ol (93 mg).
Exemplo 15
[00257]Uma mistura de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1- (piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]pirimidin-2-amina (150 mg), trietilamina (131 μL), e diclorometano (4 mL) foi resfriada com gelo, e cloreto de ciclopropanocarbonil (29 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi solidificado com acetato de etila para produzir ciclopropil{4-[4-({5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]piperidin-1-il}metanona (159 mg).
Exemplo 16
[00258]Para uma mistura de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1- (piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il]pirimidin-2-amina (150 mg), carbonato de potássio (130 mg), e N,N-dimetilformamida (4 mL), éter 2-bromoetil metílico (32 μL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro e agitação a 60°C durante 3 horas. Mais éter 2-bromoetil metílico (12 μL) foi adicionadoà mistura seguido por agitação a 60°C durante 4 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma ca- mada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/hexano) e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-[1-(2-metóxietil)piperidin- 4-il]-1H-pirazol-4-il}pirimidin-2-amina (41 mg).
Exemplo 17
[00259]Para uma mistura de 1-metil-5-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3-carboxilato de etila (663 mg), etanol (6,6 mL), e tetra-hidrofurano (6,6 mL), uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1M (3,2 mL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. Para a mistura de reação, ácido clorídrico 1M (3,2 mL) foi adicionado, e o sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com água, e seco sob pressão reduzida para produzir ácido 1-metil-5-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3-carboxílico (464 mg).
Exemplo 18
[00260]Para uma mistura de ácido 1-metil-5-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3-carboxílico (100 mg), 1- metilpiperazina (83 μL), 1H-benzotriazol-1-ol (68 mg), e N,N-dimetilformamida (2 mL), cloridrato de N-[3-(dietilamino)propil]-N’-etilcarbodi-imida (97 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi addd seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofór- mio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) para produzir (4-metilpiperazin-1- il)[1-metil-5-({5-[(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3- il]metanona (79 mg).
Exemplo 19
[00261]Uma mistura de 4-[4-({5-[(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)-2-metóxi-fenil]-3,9-diazaespiro[5,5]undecano-3-carboxilato de terc-butila (232 mg) e diclorometano (3 mL) foi resfriada com gelo, e ácido trifluoroacético (0,5 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, acetato de etila e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionados para o resíduo resultante. O sólido resultante foi recolhido por filtração, lavado com acetato de etila, e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir N-[4-(3,9-diazaespiro[5,5]undec-3-il)-3-metóxi-fenil]-5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-amina (167 mg).
Exemplo 20
[00262]Para uma mistura de 2-[3-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]etil metanossulfonato (160 mg) e N-metilpirrolidona (6 mL), 1-metilpiperazina (382 μL) foi adicionado seguido por agitação a 80°C durante 2 horas. Para a mistura de reação, água e uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foram adicionadas seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou- se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di- isopropílico para produzir N-{1-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etil]-1H-pirazol-3-il}-5- [(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-amina (64 mg).
Exemplo 21
[00263]Uma mistura de N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil]-5- [(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-amina (100 mg) e clorofórmio (4 mL) foi resfriada com gelo, e ácido m-cloroperbenzoico (43 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação a 4 a 10°C durante 3 horas e agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa de tiosulfato de sódio foi adicionada, e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (clorofór- mio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir N-[3-metóxi-4-(4-metil-4-oxidopiperazin-1-il)fenil]-5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-amina (16 mg).
Exemplo 22
[00264]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]piridina (100 mg), 3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]anilina (87 mg), 2-(diciclo-hexilfosfino)-2’,4’,6’-tri-isopropil-1,1’-bifenil (27 mg), terc- butóxido de sódio (41 mg), e N-metilpirrolidona (3 mL), acetato de paládio (6,4 mg) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 160°C durante 2 horas sob irradiação de micro-ondas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (clorofórmio/metanol) para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}piridin-2-amina (27 mg).
Exemplo 23
[00265]Uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-(1H- pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (200 mg), carbonato de césio (215 mg), (2S)-2- metiloxilano (128 mg), e N-metilpirrolidona (4 mL) foi agitada a 130°C durante 30 minutos sob irradiação de micro-ondas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etila/hexano) e, em seguida, lavado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir (2S)-1-[4-({5-[(2,6- difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]propan-2-ol (171 mg).
Exemplo 24
[00266]Para uma mistura de ácido [4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il] acético (50 mg), cloreto de amônio (25 mg), trietilamina (66 μL), 1H-benzotriazol-1-ol (32 mg) e N,N-dimetilformamida (1 mL) foi adicionado cloridrato de N-[3-(dietilamino)propil]-N’-etilcarbodi-imida (45 mg) seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi solidificado com éter di-isopropílico para produzir 2-[4-({5-[(2,6-difluoro- 3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]acetamida (48 mg).
Exemplo 64
[00267]Para uma mistura de 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[2- metóxi-4-(piperidin-4-il)fenil]pirimidin-2-amina (62 mg), acetona (118 μL), e diclo- rometano (3 mL), boro-hidreto triacetóxi de sódio (51 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofór- mio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]-N-[4-(1-isopropilpiperidin-4-il)-2-metóxi-fenil]pirimidin-2-amina (14 mg).
Exemplo 106
[00268]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{4- (piperazin-1-il)-3-[2-(1H-pirazol-1-il)etóxi]fenil}pirimidin-2-amina (229 mg), formalde- ído (37% de solução aquosa, 164 μL), ácido acético (231 μL), e diclorometano (6 mL), boro-hidreto triacetóxi de sódio (257 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 5- [(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{4-(4-metilpiperazin-1-il)-3-[2-(1H-pirazol-1- il)etóxi]fenil}pirimidin-2-amina (72 mg).
Exemplo 120
[00269]Para uma mistura de 1-[3-({5-[(2,3,5,6- tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)fenil]piperidin-4-ona (209 mg), 1- metilpiperazina (103 μL), e diclorometano (4 mL), boro-hidreto triacetóxi de sódio (298 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol/solução aquosa de amônia conc.) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir N-{3-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}-5-[(2,3,5,6-tetrafluorobenzil)oxi]pirimidin-2- amina (98 mg).
Exemplo 161
[00270]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[4- (piperidin-4-il)fenil]pirimidin-2-amina (52 mg), ácido glicólico (26 mg), 1H- benzotriazol-1-ol (31 mg), e N,N-dimetilformamida (1 mL), cloridrato de N-[3- (dietilamino)propil]-N’-etilcarbodi-imida (44 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 dias. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di-isopropílico para produzir 1-{4-[4-({5- [(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)fenil]piperidin-1-il}-2- hidróxi etanona (10 mg).
Exemplo 162
[00271]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3- [4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (123 mg) e etanol (3 ml), ácido fumárico (26 mg) foi adicionado seguido por aquecimento a refluxo. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro, e o sólido resultante foi recolhido por filtração. O sólido foi lavado com etanol e, em seguida, seco sob pressão reduzida para pro-duzir5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-[4-(4-metilpiperazin-1-il)piperidin- 1-il]fenil}pirimidin-2-amina hemifumarato (82 mg).
Exemplo 166
[00272]Para uma mistura de 4-[4-({5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- fenil)etil]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]piperidina-1-carboxilato de terc-butila (276 mg) e acetato de etila (2 mL), a solução de cloreto de hidrogênio/acetato de etila 4M (2 mL) foi adicionada seguida por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada ao resíduo resultante seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila/éter di- isopropílico para produzir 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-[1-(piperidin-4- il)-1H-pirazol-4-il]pirimidin-2-amina (119 mg).
Exemplo 190
[00273]Para uma mistura de {2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-1-il]etil}carbamato de terc-butila (101 mg) e acetato de etila (2 mL), a solução de cloreto de hidrogênio/acetato de etila 4M (2 mL) foi adicionada seguida por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. O sólido resultante foi recolhido por filtração e, em seguida, seco sob pressão reduzida para produzir tricloridrato de N-[1-(2-aminoetil)-1H-pirazol-4-il]-5-[(2,6- difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-amina (100 mg).
Exemplo 212
[00274]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1- [3-(tetra-hidro-2H-piran-2-ilóxi)propil]-1H-pirazol-4-il}pirimidin-2-amina (1,6 g), tetra- hidrofurano (6,9 mL), e água (3,4 mL), ácido acético (13,8 mL) foi adicionado seguido por agitação a 70°C durante 2 dias. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidro- genado de sódio foi adicionada ao resíduo resultante seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi dissolvido em metanol (30 mL). Carbonato de potássio (656 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação a 60°C durante 5 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada e a extração com clorofórmio foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para pro-duzir3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol- 1-il]propan-1-ol (510 mg).
Exemplo 213
[00275]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{6- [(2-fenil-1,3-dioxan-5-il)oxi]piridin-3-il}pirimidin-2-amina (335 mg) e ácido acético (10 mL), água (2 mL) foi adicionada seguida por agitação a 60°C durante 16 horas. Depois que o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada ao resíduo resultante seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou- se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir 2-{[5-({5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)piridin-2-il]oxi}propano-1,3-diol (92 mg).
Exemplo 214
[00276]Para uma mistura de 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{6- [2-(tetra-hidro-2H-piran-2-ilóxi)etóxi]piridin-3-il}pirimidin-2-amina (1,49 g) e metanol (5 mL), a solução de cloreto de hidrogênio/dioxano 4M (5 mL) foi adicionada seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada ao resíduo resultante seguido por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi solidificado com acetato de etila. O sólido foi recolhido por filtração para produzir 2-{[5-({5-[(2,6-difluoro- 3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)piridin-2-il]oxi}etanol (452 mg). Além disso, o filtrado foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofór- mio/metanol) para produzir o produto (701 mg).
Exemplo 217
[00277]Para uma mistura de 1-[5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)piridin-2-il]piperidin-4-ona (256 mg), 2-aminoetanol (131 μL), ácido acético (200 μL), e diclorometano (9,3 mL), boro-hidreto triacetóxi de sódio (243 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com cloro- fórmio/2-propanol. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna de sílica gel básica (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com acetato de etila para produzir 2-({1-[5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)piridin-2-il]piperidin-4-il}amino)etanol (137 mg).
Exemplo 239
[00278]Uma mistura de N-{5-[2-(benzilóxi)etil]-1-metil-1H-pirazol-3-il}-5- [(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-amina (283 mg) e diclorometano (47 mL) foi resfriada para -78°C, e tribrometo de boro (solução de diclorometano 1,0M, 830 μL) foi adicionado à mistura seguido por agitação a -78°C durante 1 hora e agitação a 0°C durante 1 hora. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de magnésio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cro- matografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 2-[3-({5- [(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-metil-1H-pirazol-5- il]etanol (38 mg).
Exemplo 246
[00279]Uma mistura de ácido 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-metil-1H-pirazol-3-carboxílico (320 mg) e dioxano (6 mL) foi resfriada com gelo, e 1,1’-carbonildi-imidazol (616 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 2 horas. Para a mistura de reação, boro-hidreto de sódio (287 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Para a mistura de reação, água e clorofórmio foram adicionados, e os materiais insolúveis foram removidos por filtração através de celite, e, em seguida, o filtrado foi extraído com clorofórmio. Uma camadaorgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano/acetato de etila) para produzir [5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-metil-1H-pirazol-3-il]metanol (125 mg).
Exemplo 253
[00280]Para uma mistura de 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-(2-hidróxi etil)piridin-2(1H)-ona (90 mg), trietilami- na (50 μL), e diclorometano (3 mL), cloreto de metanossulfonila (20 μL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 1 hora. Para a mistura de reação, 1-metilpiperazina (50 μL) e N,N-dimetilformamida (3 mL) foram adicionados seguido por agitação a 50°C durante 20 horas. Para a mistura de reação, água foi adicionada e extração com acetato de etila foi realizada. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/clorofórmio) e, em seguida, solidificado com éter dietílico para produzir 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1-[2- (4-metilpiperazin-1-il)etil]piridin-2(1H)-ona (28 mg).
Exemplo 254
[00281]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidina (270 mg), 1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-imidazol-4-amina (231 mg), 1,1’-binaftaleno-2,2’-di-ilbis(difenilfosfina) (80 mg), carbonato de césio (556 mg), e dioxano (5,4 mL), acetato de paládio (19 mg) foi adicionada sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 150°C durante 30 minutos sob irradiação de micro-ondas. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromato- grafia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) e, em seguida, solidificado com etanol/éter dietílico para produzir 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(1- metilpiperidin-4-il)-1H-imidazol-4-il]pirimidin-2-amina (241 mg).
Exemplo 278
[00282]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(2-fluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidina (200 mg), 2-(4-amino-1H-pirazol-1-il)etanol (170 mg), 4,5- bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (39 mg), carbonato de césio (655 mg), e dioxano (4 mL), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (31 mg) foi adicionado sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 80°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (acetato de etila/metanol) e, em seguida, solidificado com eta- nol para produzir 2-[4-({5-[(2-fluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]etanol (58 mg).
Exemplo 282
[00283]Para uma mistura de 5-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H-pirazol-3-carbaldeido (100 mg), morfolina (67 μL), e N,N-dimetilformamida (2 mL), boro-hidreto triacetóxi de sódio (243 mg) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 12 horas. Para a mistura de reação, uma solução aquosa saturada de carbonato hidrogenado de sódio foi adicionada seguida por extração com clorofórmio. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel básica (clorofór- mio/metanol) e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofór- mio/metanol) e, em seguida, solidificado com etanol/éter di-isopropílico para pro-duzir5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[3-(morfolin-4-ilmetil)-1H-pirazol-5- il]pirimidin-2-amina (42 mg).
Exemplo 286
[00284]Para uma mistura de 2-cloro-5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidina (159 mg), 3-metóxi-4-(1-metilpiperidin-4-il)anilina (100 mg), e terc-butanol (5 mL), tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (13 mg), 2-(diciclo- hexilfosfino)-2’,4’,6’-tri-isopropil-1,1’-bifenil (20 mg), e carbonato de potássio (88 mg) foram adicionados sob uma atmosfera de argônio seguido por agitação a 100°C durante 8 horas. Materiais insolúveis foram removidos por filtração, lavado com acetato de etila, e, em seguida, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[3- metóxi-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil]pirimidin-2-amina (35 mg).
Exemplo 302
[00285]Para uma mistura de 2-{4-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)fenil]piperazin-1-il}etil metanossulfonato (100 mg) e metanol (3 mL), metóxido de sódio (solução de metanol a 25%, 3 mL) foi adicionado seguido por agitação a 90°C durante 15 minutos sob irradiação de micro-ondas. Depois que a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, água foi adicionada para o resíduo resultante seguido por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]-N-{4-[4-(2-metóxietil)piperazin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina (46 mg).
Exemplo 315
[00286]Para uma mistura de {1’-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-metóxi-fenil]-1,4’-bipiperidina-4,4-di- il}bis(metileno)diacetato (46 mg) e metanol (3 mL), metóxido de sódio (25% solução de metanol, 0,2 mL) foi adicionado seguido por agitação à temperatura ambiente durante 14 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clo- rofórmio/metanol) para produzir {1’-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-metóxi-fenil]-1,4’-bipiperidina-4,4-di-il}dimetanol (34 mg).
Exemplo 336
[00287]Uma mistura de 4-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-fluorofenil]butanoato de etila (150 mg) e tetra- hidrofurano (3 mL) foi resfriada com gelo, e hidreto de lítio e alumínio (11 mg) foi adicionado à mistura seguido por agitação à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reação foi diluída com éter dietílico mediante resfriamento com gelo e, em seguida, uma solução aquosa saturada de sulfato de sódio foi adicionado à mistura. Os materiais insolúveis foram separados por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatogra- fia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 4-[4-({5-[(2,6- difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-fluorofenil]butan-1-ol (70 mg).
Exemplo 349
[00288]Uma mistura de etil 4-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-fluorofenil]butanoato (150 mg) e tetra-hidrofurano (3 mL) foi resfriada com gelo, e, em seguida, brometo de metil magnésio (1,0M solução de tetra-hidrofurano, 1,2 mL) foi adicionado à mistura seguido por agitação durante 3 horas. Para a mistura de reação, a solução aquosa saturada de cloreto de amônio foi adicionada seguida por extração com acetato de etila. Uma camada orgânica obtida foi lavada com salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio anidro, e, em seguida, filtrou-se. Após o filtrado ser concentrado sob pressão redu- zida, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (clorofórmio/metanol) para produzir 5-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-2-fluorofenóxi]-2-metilpentan-2-ol (104 mg).
Exemplo 356
[00289]Para uma mistura de ácido 2-(4-aminofenóxi)-2-metilpropiônico (14,6 mg), carbonato de césio (49 mg), 2-cloro-5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi- benzil)oxi]pirimidina (15,8 mg) e terc-butanol (0,5 mL) foi adicionado paládio(I-I) acetato-2-(diciclo-hexilfosfino)-2’,4’,6’-tri-isopropil-1,1’-bifenil (Pd:P 1:2) comprimido de ChemDose (nome comercial) sob uma atmosfera de nitrogênio seguido por agitação a 120°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com clorofórmio (2 mL), e, em seguida, o solvente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por HPLC (0,1% de solução aquosa de ácido fórmico/metanol) para produzir ácido 2-[4-({5- [(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)fenóxi]-2-metilpropiônico (0,7 mg).
Exemplo 375
[00290]Para uma mistura de 4-amino-1-(1-terc-butoxicarbonil-azetidin-3-il)- 1H-pirazol (17,9 mg), carbonato de césio (49 mg), 2-cloro-5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]pirimidina (15,8 mg), terc-butanol (0,34 mL) e N,N- dimetilformamida (0,16 mL) foi adicionado paládio(I-I) acetato-2-(diciclo- hexilfosfino)-2’,4’,6’-tri-isopropil-1,1’-bifenil (Pd:P 1:2), comprimido ChemDose (nome comercial), sob uma atmosfera de nitrogênio seguido por agitação a 120°C de um dia para o outro. Para a mistura de reação, água foi adicionada seguida por extração com clorofórmio (2 mL), e, em seguida, o solvente foi concentrado sob pressão reduzida. Para o resíduo resultante, etanol (1 mL) e a solução de cloreto de hidrogênio/acetato de etila 4M (0,5 mL) foram adicionados seguido por agitação à temperatura ambiente de um dia para o outro. Depois disso, o solvente foi con- centrado sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por HPLC (0,1% solução aquosa de ácido fórmico/metanol) para produzir N-[1-(azetidin-3-il)-1H- pirazol-4-il]-5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-amina (1,7 mg).
[00291]Da mesma forma que nos exemplos acima, os compostos apresentados nas Tabelas 63 a 137 abaixo foram preparados. As Tabelas 63 a 137 mostram as estruturas dos compostos dos exemplos e as Tabelas 138 a 156 mostram os processos de preparação e os dados físicos e químicos dos compostos dos exemplos. [Tabela 7]
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APLICAÇÃO INDUSTRIAL
[00292]O composto de fórmula (I) ou um sal do mesmo de acordo com a presente invenção tem ação inibidora em FGFR1, FGFR2, e/ou de FGFR3, particularmente, FGFR3 mutante, e pode ser usado como um agente terapêutico para vários cânceres relacionados com FGFR1, FGFR2 , e/ou FGFR3, como câncer de pulmão e câncer de mama resistente à terapêutica com hormônio, câncer de estômago, câncer de mama triplo negativo, câncer endometrial e câncer de bexiga, particularmente como um agente terapêutico para o câncer de bexiga FGFR3- positivo mutante.
TEXTO LIVRE DE LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[00293]O título numérico <223> na Listagem Sequência mostrada abaixo contém uma explicação de "Sequência Artificial". Mais especificamente, as sequências de bases representadas pelas SEQ ID NOs: 7, 8, 17, 20, e 21 na listagem de sequências, são sequências iniciadoras artificialmente sintetizadas. A sequência de base representada pela SEQ ID NO: 24 na listagem de sequências é uma sequência de marcador FLAG sintetizada artificialmente.

Claims (9)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é selecionado a partir do grupo que consiste em: 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, (2S)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin- 1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[2-(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-fenil)etil]-N-{3-fluoro-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[3-metóxi-4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-pirazol- 4-il]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-dicloro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4- il]pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(1-metilpiperidin-4- il)piperazin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metil-4-[4-(4-metilpiperazin-1- il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{4-[(3R,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1- il]-3-metóxi-fenil}pirimidin-2-amina, N-[4-(3,9-diazaespiro[5,5]undec-3-il)-3-metóxi-fenil]-5-[(2,6-difluoro-3,5- dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-[2-(4-metilpiperazin-1-il)etil]- 1H-pirazol-4-il}pirimidin-2-amina, 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]-1-(3-hidroxiazetidin-1-il)etanona, (2R)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]propano-1,2-diol, 2-({1-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)fenil] piperidin-4-il}amino)etanol, 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-metil-5-[(4-metilpiperazin-1- il)metil]-1H-pirazol-3-il}pirimidin-2-amina, e 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina; ou um sal do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{3-metóxi-4-[4-(4- metilpiperazin-1-il)piperidin-1-il]fenil}pirimidin-2-amina ou um sal do mesmo.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é 2-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)-1H- pirazol-1-il]etanol ou um sal do mesmo.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é (2R)-3-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2-il}amino)- 1H-pirazol-1-il]propano-1,2-diol ou um sal do mesmo.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é 2-({1-[4-({5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]pirimidin-2- il}amino)fenil] piperidin-4-il}amino)etanol ou um sal do mesmo.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-{1-metil-5-[(4-metilpiperazin-1- il)metil]-1H-pirazol-3-il}pirimidin-2-amina ou um sal do mesmo.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é 5-[(2,6-difluoro-3,5-dimetóxi-benzil)oxi]-N-[4-(4-metilpiperazin-1- il)fenil]pirimidin-2-amina ou um sal do mesmo.
8. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende o composto ou um sal do mesmo, como definido na reivindicação 1, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
9. Uso do composto ou de um sal do mesmo, como definido na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento de câncer FGFR3-positivo mutante.
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