WO2019149114A1 - 一种化合物或其药用盐或组合物的制备及应用 - Google Patents

一种化合物或其药用盐或组合物的制备及应用 Download PDF

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WO2019149114A1
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alkyl
halogen
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黄立晔
毛文金
王志远
刘运
黄�俊
欧阳飞燕
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深圳铂立健医药有限公司
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
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    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present application relates to a class of tricyclic compounds and pharmaceutically acceptable salts thereof, pharmaceutical compositions containing such compounds, and the use of such compounds or compositions in the manufacture of a medicament.
  • the epidermal growth factor receptor (EGFR, Erb-B1) is a receptor tyrosine protein kinase that plays a regulatory role in the proliferation, survival, and differentiation of normal cells and cancer cells.
  • EGFR is over-activated or continuously activated in a variety of tumor cells, such as lung cancer, breast cancer, prostate cancer, and the like.
  • NSCLC non-small cell lung cancer
  • EGFR is not only overexpressed, but also has kinase-active mutations in the tyrosine kinase structural region of EGFR.
  • the most common kinase active mutants are EGFR (delE746-A750) and EGFR (L858R).
  • EGFR small molecule inhibitors gefitinib and erlotinib
  • gefitinib and erlotinib have been approved for the treatment of patients with non-small cell lung cancer who are positive for EGFR (delE746-A750) and EGFR (L858R).
  • T790M Drug resistance was derived from the secondary mutant T790M, and EGFR (delE746-A750/T790M) and EGFR (L858R/T790M) mutants were detected in most clinically resistant patients (Kobayashi et al. N. Engl. J. Med. 2005, 352, 786-792).
  • the T790M mutant nullifies the kinase activity of gefitinib and erlotinib.
  • the second-generation non-reversible covalent EGFR inhibitor afatinib is used in patients with non-small cell lung cancer who are positive for EGFR (delE746-A750) and EGFR (L858R) than gefitinib and erlotinib. More potent, but less effective against T790M mutants that inhibit resistance, due to inhibition of wild-type EGFR activity compared to EGFR (delE746-A750/T790M) and EGFR (L858R/T790M) resistant mutants Higher, thus exhibiting dose-limiting toxicity (D'Arcangelo et al. Biologics: Target and Therapy, 2014, 8, 183-192).
  • the third-generation non-reversible covalent EGFR inhibitor osimertinib is effective in the treatment of non-small cell lung cancer patients with EGFR (delE746-A750) and EGFR (L858R) positive, as well as EGFR (delE746-A750/T790M). Patients with EGFR (L858R/T790M) resistant mutants, but did not respond well to mutants that inhibit EGFR exon 20 insertion.
  • the EGFR exon 20 insertion mutant is an unusual EGFR mutant that is present in fewer patients with non-small cell lung cancer and there is currently no good treatment.
  • the present application provides a novel class of compounds which are effective in inhibiting EGFR (delE746-A750) and EGFR (L858R) mutants, and are also effective in inhibiting EGFR (delE746-A750/T790M) and EGFR (L858R/T790M) resistance.
  • the mutant also effectively inhibited the insertion of the EGFR exon 20 into the mutant.
  • R 1 is selected from the group consisting of: H, D, halogen or alkyl
  • R 2 and R 3 are each selected from: H, D, halogen, cyano, alkyl, cycloalkyl, haloalkyl, cyanoalkyl, cycloalkylalkyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl or hetero Cycloalkylalkyl;
  • R 4 is selected from the group consisting of: H or D;
  • Ar is selected from: an aryl or heteroaryl group, wherein the aryl and heteroaryl groups may be substituted with from 1 to 5 R 5 ;
  • R 5 is selected from the group consisting of: H, D, halogen, alkyl, cycloalkyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl or haloalkyl;
  • X is selected from: (CR 6 R 7 ) m ;
  • R 6 and R 7 are each selected from: H, D, halogen, alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl or cyano, or R 6 and R 7 form an alkene with the carbon atom to which they are attached base;
  • Y is selected from: (CR 8 R 9 ) n ;
  • R 8 and R 9 are each selected from the group consisting of: H, D, halogen, alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl or cyano;
  • n 1 or 2.
  • the present application provides compounds of formula (IA) and formula (IB):
  • R 1 is selected from the group consisting of: H, D, halogen or alkyl
  • R 2 and R 3 are each selected from: H, D, halogen, cyano, alkyl, cycloalkyl, haloalkyl, cyanoalkyl, cycloalkylalkyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl or hetero Cycloalkylalkyl;
  • R 5 is selected from the group consisting of: H, D, halogen, alkyl, cycloalkyl, heteroalkyl, heterocycloalkyl or haloalkyl;
  • R 6 and R 7 are each selected from: H, D, halogen, alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl or cyano, or R 6 and R 7 form an alkene with the carbon atom to which they are attached base;
  • R 8 and R 9 are each selected from the group consisting of: H, D, halogen, alkyl, heteroalkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl or cyano;
  • R 10 and R 11 are each selected from: H, D, halogen or alkyl.
  • p 1 to 5.
  • halo or halogen as used herein includes fluoro, chloro, bromo and iodo.
  • alkyl refers to a straight or branched saturated hydrocarbon group.
  • alkyl group include methyl (Me), ethyl (Et), propyl (e.g., n-propyl and isopropyl), butyl (e.g., n-butyl, isobutyl, tert-butyl), pentyl ( For example, n-pentyl, isopentyl, neopentyl), hexyl (eg n-hexyl, 2-hexyl, 3-hexyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 2,2-dimethylbutyl) , 3-ethylpentyl-1, etc., heptyl (eg n-heptyl, 2-heptyl, 3-heptyl, 4-heptyl, 2-methylhexyl, 3-methylhexyl, 2, 2-dimethylpentyl, 3,3-
  • the alkyl group especially refers to a linear or branched alkyl group having 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 carbon atoms, more specifically, the number of atoms is 1, 2, 3 a linear or branched alkyl group of 4, 5, or 6.
  • heteroalkyl refers to an alkyl group containing one or more heteroatoms in the alkyl chain, wherein the heteroatoms are N, O, P, S.
  • heteroalkyl groups include alkoxyalkyl groups, alkylaminoalkyl groups, dialkylaminoalkyl groups, and the like.
  • haloalkyl refers to an alkyl group having one or more halo substituents.
  • the alkyl group and the halo or halogen are as defined above.
  • Examples of haloalkyl groups include CH2F, CHF2, CF3, C2F5, CCl3, and the like.
  • cyanoalkyl refers to an alkyl group substituted with a cyano group (-CN).
  • alkenyl groups include ethenyl, propenyl, allyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 1,3-butadienyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 1,3-pentadienyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, and the like, and the like, and the like.
  • alkynyl refers to a hydrocarbyl group having one or more C ⁇ C triple bonds.
  • alkynyl groups include ethynyl, propynyl, propargyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 1-pentynyl, 2-pentynyl, 1-hexynyl, 2- An alkynyl group, etc., and the like.
  • cycloalkyl refers to a non-aromatic carbocyclic ring including a cyclized alkyl group, a cyclized alkenyl group, and a cyclized alkynyl group.
  • the cycloalkyl group can be a monocyclic or polycyclic ring system (e.g., having 2, 3 or 4 fused rings), including spiro rings.
  • a cycloalkyl group can have 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 carbon atoms.
  • cycloalkyl also included in the definition of cycloalkyl are those having one or more aromatic rings fused to a cycloalkyl ring (for example, having a common bond), such as pentane, pentene, hexane, and Benzo derivatives of alkenes, and the like, and similar compounds.
  • the cycloalkyl group having one or more fused aromatic rings may be bonded through an aromatic moiety or a non-aromatic moiety.
  • cycloalkyl group examples include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, a cycloheptyl group, a cyclopentenyl group, a cyclohexenyl group, a cyclohexadienyl group, a cycloheptenyl group, and a cycloheptyl group. Dienyl, adamantyl, indanyl, tetrahydronaphthyl and the like.
  • heterocycloalkyl refers to a non-aromatic heterocyclic ring wherein one or more of the atoms forming the ring are heteroatoms such as O, N, P or S.
  • the heterocyclyl group may include a monocyclic or polycyclic ring (such as a ring system having 2, 3 or 4 fused rings) and a spiro ring.
  • heterocycloalkyl groups include, but are not limited to, aziridinyl (azepine), azetidinyl (azetidinyl), tetrahydrofuranyl, tetrahydrothiophenyl, pyrrolidine Base, oxazolidinyl, thiazolidinyl, imidazolidinyl, isoxazolidinyl, isothiazolidinyl, pyrazolidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, piperazinyl, piperidinyl, and Similar group.
  • heterocycloalkyl those having one or more aromatic rings fused to a non-aromatic heterocycloalkyl ring (for example, having a shared bond), such as 2,3-dihydrobenzene. And furyl, 1,3-benzodioxolyl, benzo-1,4-dioxanyl, phthalimido, naphthalimide, and the like Group.
  • Heterocycloalkyl groups having one or more fused aromatic rings may be attached through an aromatic moiety or a non-aromatic moiety.
  • aryl refers to a monocyclic or polycyclic (eg, having 2, 3 or 4 fused rings) aromatic hydrocarbons such as phenyl, naphthyl, anthracenyl, phenanthryl, anthracenyl, and the like.
  • heteroaryl refers to an aromatic heterocycle having at least one heteroatom ring member such as O, N or S.
  • Heteroaryl groups include monocyclic or polycyclic (eg, having 2, 3 or 4 fused rings) ring systems. Any N atom ringd in the heterocyclic group can also be oxidized to form an N-oxide.
  • heteroaryl groups include, but are not limited to, pyridyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, triazinyl, furyl, thienyl, imidazolyl, triazolyl, tetrazolyl , thiazolyl, isothiazolyl, 1,2,4-thiadiazolyl, pyrrolyl, pyrazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, benzofuranyl, benzothienyl, Benzothiazolyl, fluorenyl, carbazolyl, quinolyl, isoquinolyl, indolyl, oxazolyl, benzimidazolyl, pyrrolopyridyl, pyrrolopyrimidinyl, pyrazolopyridyl, Pyrazolopyrimidinyl, and similar groups.
  • compound as used herein, is meant to include all stereoisomers, geometric isomers, tautomers, isotopes.
  • the compounds of the present application may be asymmetric, for example having one or more stereocenters. Unless otherwise defined, all stereoisomers may be enantiomers and diastereomers.
  • Compounds of the present application containing asymmetrically substituted carbon atoms can be separated into optically pure or racemic forms. Optically pure forms can be prepared by resolution of the racemate or by the use of chiral synthons or chiral reagents.
  • Compounds of the present application may also include tautomeric forms.
  • the new form of tautomer is produced by the interchange of a single bond and an adjacent double bond with proton transfer.
  • Compounds of the present application may also include all isotopic forms of the atoms present in the intermediate or final compound.
  • Isotopes include those atoms having the same atomic number but different mass numbers.
  • isotopes of hydrogen include deuterium and tritium.
  • the present application also encompasses pharmaceutically acceptable salts of the compounds of formula (I), formula (IA), and formula (IB).
  • pharmaceutically acceptable salt is meant a derivative of a compound wherein the parent compound is modified by conversion of the base moiety present to its salt form, or wherein the parent compound is modified by conversion of the acid moiety present to its salt form. a derivative of the compound.
  • pharmaceutically acceptable salts include, but are not limited to, salts of inorganic or organic acids of basic groups such as ammonia, or salts of inorganic or organic bases of acidic groups such as carboxylic acids.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the present application can be synthesized from the parent compounds of formula (I), formula (IA), and formula (IB) by reacting the free base form of these compounds with from 1 to 4 equivalents of the appropriate acid in a solvent system. Suitable salts are listed in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977).
  • the compounds of the present application also include solvated or hydrated forms.
  • solvated or hydrated forms are equivalent to the unsolvated or non-hydrated forms and are included within the scope of the present application.
  • Some of the compounds of the present application may exist in a variety of crystalline forms or amorphous forms. In general, all physical forms of the compounds are included within the scope of the present application.
  • the present application also includes prodrugs of the compounds of formula (I), formula (IA) and formula (IB).
  • a prodrug is a pharmacological substance (ie, a drug) derived from a parent drug. Once administered, the prodrug is metabolized in the body to the parent drug.
  • Prodrugs can be prepared by substituting one or more functional groups present in the compound. The preparation and use of prodrugs can be found in T. Higuchi and V. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," Vol. 14 of the ACSSymposium Series and Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American. Found in the Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987.
  • the present application also provides a composition formed by combining a compound of formula (I), formula (IA) and formula (IB) and a pharmaceutically acceptable salt with one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • the composition of the present application can be administered orally, parenterally (injectable), spray inhalation, topical, rectal, nasal, vaginal, intraperitoneal or via Into the reservoir for administration.
  • the application provides a compound of formula (I), formula (IA) and formula (IB), and a pharmaceutically acceptable salt for use in inhibiting protein kinases.
  • the protein kinase is an EGFR, particularly an EGFR mutant.
  • the EGFR mutant is L858R or delE746-A750.
  • the EGFR mutant is G719S, G719C, G719A, L858R, L861Q, an exon 19 deletion mutant or an exon 20 insertion mutant.
  • the EGFR mutant is a drug resistant mutant such as EGFR T790M, T854A, D761Y or C797S.
  • the EGFR mutant is a EGFR L858R/T790M, EGFR del E745-A750/T790M, EGFR L858R/T790M/C797S, or EGFR delE745-A750/T790M/C797S.
  • the application provides a compound of formula (I), formula (IA), and formula (IB), and a pharmaceutically acceptable salt, for use in treating a disease caused by a protein kinase.
  • the compounds or compositions of the present invention are useful for treating diseases, particularly cancer, caused by EGFR mutants.
  • the compounds or compositions of the present invention are useful for the treatment of breast cancer, lung cancer (including small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, bronchoalveolar carcinoma), prostate cancer, choledochocarcinoma, bone cancer, bladder cancer, head and neck cancer , kidney cancer, liver cancer, gastrointestinal cancer, esophageal cancer, ovarian cancer, pancreatic cancer, skin cancer, testicular cancer, thyroid cancer, uterine cancer, cervical and vaginal cancer, leukemia, multiple myeloma and lymphoma.
  • the compounds or compositions of the present application are useful for the treatment of non-small cell lung cancer, prostate cancer, head and neck cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, breast cancer, rectal cancer, and glioma.
  • the compounds or compositions of the present application are useful for the treatment of non-small cell lung cancer resistant to gefitinib, erlotinib and afatinib. patient.
  • the compounds of formula (I), formula (IA) and formula (IB) and pharmaceutically acceptable salts or compositions of the present application may be used in combination with other drugs.
  • the compounds of the present application may act synergistically or synergistically with the drugs used in combination.
  • the drugs used in combination may be small molecule drugs, monomeric cloning drugs, fusion protein drugs, and anti-infective DNA drugs.
  • the application provides a method of preparing a compound as described above.
  • the compound of formula (I) can be prepared synthetically by the method of Reaction Scheme 1.
  • the iodination reaction of the starting material I-1 gives the iodinated product I-2.
  • the N-Boc-iodoserine methyl ester forms a zinc reagent with zinc, it is coupled with I-2 with a palladium catalyst (for example, Pd(dba) 2 /X-Phos) to obtain I-3.
  • a palladium catalyst for example, Pd(dba) 2 /X-Phos
  • the iodo reaction of I-3 gives I-4.
  • the boronic acid or boronic ester of I-4 with an aryl or heterocyclic aryl group is coupled with a palladium catalyst (e.g., Pd(dppf)Cl 2 ) to give I-5.
  • I-5 The iodo or bromo reaction of I-5 gives I-6 (wherein Z is bromine or iodine).
  • the carboxylic acid ester of I-6 is reduced with a reducing agent such as diisobutylaluminum hydride and then oxidized with MnO 2 to give aldehyde I-7.
  • the aldehyde group of I-7 is reacted with methyltriphenylphosphonium bromide in the presence of a base such as potassium t-butoxide to give I-8.
  • I-8 After reacting I-8 with 9-BBN, coupling with a palladium catalyst (for example, Pd(dppf)Cl 2 ) in the presence of a base such as sodium hydroxide to obtain a ring-closing compound I-10; or I-8 directly using a palladium catalyst (for example, Pd(dppf)Cl 2 ) is coupled to give ring-closing compound I-10.
  • a palladium catalyst for example, Pd(dppf)Cl 2
  • a base such as sodium hydroxide
  • N-Boc-D-serine methyl ester (20 g, 91 mmol) was dissolved in THF (400 mL). Triphenylphosphine (36 g, 137 mmol) and pyridine (14 g, 177 mmol) were added sequentially to the solution, then I 2 (34 g, 134 mmol) was added portionwise, and the reaction was maintained at a temperature below 20 ° C for 4 h. After completion of the reaction, the reaction mixture was quenched with ice water and extracted with diethyl ether.
  • Methyl(R)-3-(4-aminopyrrole[1,2-f][1,2,4]triazin-7-yl)-2-(tert-butoxycarbonylamino)propionate (9.5 g , 28.4 mmol) was dissolved in AcOH (100 mL) and cooled in an ice water bath. The solution was added with NIS (3.6 g, 14.2 mmol) and allowed to react at room temperature for 0.5 h. Then it was placed in an ice water bath and cooled, and NIS (3.6 g, 14.2 mmol) was added, and the mixture was allowed to react at room temperature for 0.5 h. After the reaction was completed, it was diluted with ice water.
  • Methyl(R)-3-(4-amino-5-(quinolin-3-yl)pyrrole[1,2-f][1,2,4]triazin-7-yl)-2-(uncle Butoxycarbonylamino)propionate (7.0 g, 15.2 mmol) was dissolved in AcOH (70 mL) and cooled in ice water bath. The solution was added to NIS (1.7 g, 7.6 mmol) and allowed to react at room temperature for 2 h. Then it was placed in an ice water bath and cooled, and NIS (1.7 g, 7.6 mmol) was added, and the mixture was allowed to react at room temperature for 4 h.
  • Methyltriphenylphosphonium bromide (6.1 g, 17.2 mmol) and potassium t-butoxide (1.7 g, 15.5 mmol) were added to THF (80 mL) and heated to 50 ° C for 2 h.
  • the upper reaction mixture was cooled to room temperature, and tert-butyl(R)-1-(4-amino-6-iodo-5-(quinolin-3-yl)pyrrole [1,2-f][1,2,4 was added.
  • the N-Boc-L-serine methyl ester was used as a raw material, and was synthesized according to the method of the first step of the first step.
  • LCMS (ESI): m / z 352 (M + Na) +.
  • Step 1 of Example 1 from tert-butyl(S)-(1-(4-amino-6-iodo-5-(quinolin-3-yl)pyrrole[1,2-f][1,2 , 4] triazin-7-yl)-but-3-en-2-yl)carbamate was synthesized.
  • LCMS (ESI): m / z 431 (M + H) +.
  • Example A Test for inhibition of cell proliferation by compounds
  • HCC827 cells ATCC, catalog number: CRL-2868
  • PC-9 cells ECACC, catalog number: 90071810
  • NCI-H1975 cells ATCC, catalog number: CRL-5908
  • A431 Inhibition of proliferation of cells ATCC, catalog number: CRL-1555
  • LU0387 cells CMS
  • HCC827 cells and H1975 cell culture medium RPMI1640 (Invitrogen, catalog number: 11875-093) and 10% fetal bovine serum (Invitrogen, catalog number: 10099-141); PC-9 cells, A431 and LU0387 cell culture medium: DMEM ( Invitrogen, catalog number: 12430-054) and 10% fetal bovine serum.
  • the seeding density of H1975 was 4000 cells per 100 microliters
  • the density of inoculation of HCC827 cells, PC-9 cells and A431 cells was 10,000 cells per 100 microliters
  • the inoculation density of LU0387 cells was 15,000 per 100 microliters.
  • the cells were further cultured for 72 hours (H1975, HCC827, PC-9, A431) or 168 hours (LU0387) under conditions of 37 degrees and 5% carbon dioxide. Finally, 100 ⁇ l of CellTiter-Glo reagent (Promega, catalog number: G7571) was added to each well, and the luminescence signal was detected with Flex Station 3 (Molecular Devices), and the IC 50 value of the compound for inhibition of cell proliferation was calculated using XLfit software (Table 1).
  • the results in Table 1 indicate that the compound of the present application has a strong inhibitory effect on the proliferation of lung cancer cells HCC827 and PC9 which are highly expressed in the EGFR mutant delE746-A750 and the lung cancer cell H1975 which is highly expressed in the EGFR mutant L858R/T790M, and is outside the EGFR.
  • the insertion of the mutant 20 into the mutant cell LU0387 also showed a good inhibitory effect, while the proliferation of the human epidermal cell A431, which is highly expressed in wild-type EGFR, was weakly inhibited. Therefore, the compounds of the present application are useful for treating cancer caused by EGFR mutants.

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Abstract

本申请涉及式(I)的三环化合物及其药学上可接受的盐，这类化合物可用于抑制表皮生长因子受体(EGFR)激酶的突变体，例如EGFR(delE746-A750)，EGFR(L858R)，EGFR(delE746-A750/T790M),EGFR(L858R/T790M)，和EGFR exon 20 insertion等突变体，从而可用于治疗由EGFR突变体引起的癌症，例如非小细胞肺癌。本申请还涉及含有这类化合物的药物组合物，制备这类化合物的方法以及这类化合物或药物组合物在制备用于治疗由EGFR突变体引起的癌症的药物中的应用。(1)

Description

一种化合物或其药用盐或组合物的制备及应用 技术领域
本申请涉及一类三环化合物及其药学上可接受的盐，含有这类化合物的药物组合物和这类化合物或组合物在制备药物中的应用。
背景技术
表皮生长因子受体(EGFR，Erb-B1)是—种受体酪氨酸蛋白激酶，在正常细胞与癌细胞的增值，存活，与分化中起了调节的作用。EGFR在多种肿瘤细胞中过度活化或持续活化，例如肺癌，乳腺癌，***癌等。在非小细胞肺癌(NSCLC)病人中，EGFR不仅有过度表达，而且还有在EGFR的酪氨酸激酶结构区域有激酶活性突变。最通常的激酶活性突变体为EGFR(delE746-A750)和EGFR(L858R)。第一代EGFR小分子抑制剂，吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)，已经被批准用于治疗有EGFR(delE746-A750)和EGFR(L858R)阳性的非小细胞肺癌患者(Pao et al.Nat.Rev.Cancer 2010,10,760-774；Maemondo et al.N.Engl.J.Med.2010,362,2380-2388)。临床研究证实，EGFR激酶活性突变阳性的非小细胞肺癌患者对吉非替尼和厄洛替尼的响应率显著高于EGFR野生型的非小细胞肺癌患者，无进展生存(PFS))期和总生存(OS)期也显著延长。但尽管如此，大部分EGFR突变阳性患者的PFS不超过12～14个月，原因是对这些药产生了耐药性。
耐药性来自于二级的突变体T790M，在大部分临床耐药病人中检测到了EGFR(delE746-A750/T790M)和EGFR(L858R/T790M)突变体(Kobayashi et al.N.Engl.J.Med.2005,352,786-792)。T790M突变体能使吉非替尼和厄洛替尼的激酶活性无效。
第二代的非可逆共价键EGFR抑制剂阿法替尼(afatinib)对治疗有EGFR(delE746-A750)和EGFR(L858R)阳性的非小细胞肺癌患者比吉非替尼和厄洛替尼更有效，但对抑制耐药性的T790M突变体的效果不佳，其原因是对抑制野生型EGFR比抑制EGFR(delE746-A750/T790M)和EGFR(L858R/T790M)耐药性突变体的活性更高，从而表现出了剂量限制性毒性(D’Arcangelo et al.Biologics:Target and Therapy,2014,8,183-192)。第三代的 非可逆共价键EGFR抑制剂osimertinib既能有效治疗有EGFR(delE746-A750)和EGFR(L858R)阳性的非小细胞肺癌患者，也能有效治疗有EGFR(delE746-A750/T790M)和EGFR(L858R/T790M)耐药突变体的患者，但对抑制EGFR外显子20***的突变体效果不佳。
EGFR外显子20***突变体是一种不通常的EGFR突变体，存在于较少的非小细胞肺癌病人中，目前还没有很好的治疗方法。本申请提供了一类新型的化合物，能够有效地抑制EGFR(delE746-A750)和EGFR(L858R)突变体，也能有效地抑制EGFR(delE746-A750/T790M)和EGFR(L858R/T790M)耐药突变体，还能有效地抑制EGFR外显子20***突变体。
申请内容
本申请提供式(I)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中，
R 1选自：H，D，卤素或烷基；
R 2和R 3各选自：H，D，卤素，氰基，烷基，环烷基，卤素烷基，氰基烷基，环烷基烷基，杂烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
R 4选自：H或D；
Ar选自：芳基或杂芳基，其中所说的芳基和杂芳基可以被1至5个R 5取代；
R 5选自：H，D，卤素，烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基或卤代烷基；
X选自：(CR 6R 7) m；
R 6和R 7各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基，或者R 6和R 7与它们连接的碳原子形成一个烯基；
Y选自：(CR 8R 9) n；
R 8和R 9各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基；
m为1，2，或3，n为1或2。
优选地，本申请提供式(IA)和式(IB)的化合物：
Figure PCTCN2019072704-appb-000002
或其药学上可接受的盐，其中，
R 1选自：H，D，卤素或烷基；
R 2和R 3各选自：H，D，卤素，氰基，烷基，环烷基，卤素烷基，氰基烷基，环烷基烷基，杂烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
R 5选自：H，D，卤素，烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基或卤代烷基；
R 6和R 7各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基，或者R 6和R 7与它们连接的碳原子形成一个烯基；
R 8和R 9各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基；
R 10和R 11各选自：H，D，卤素或烷基。
p为1至5。
具体实施方式
本申请的术语“卤基”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
术语“烷基”是指直链或支链的饱和烃基团。烷基的实例包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、特丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)、己基(例如正己基、2-己基、3-己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、3-乙基戊基-1等)、庚基(例如正庚基、2-庚基、3-庚基、4-庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、3-乙基戊基-1等)、辛基(例如1-辛基、2-辛基、2-乙基己基等)、壬基(如1-壬基)、癸基(如正癸基等)，以及类似基团。烷基尤其是指碳原子数为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10的直链或支链的烷基，更具体是指原子数为1、2、3、4、5、6的直链或支链烷基。
术语“杂烷基”是指在烷基链中含有一个或多个杂原子的烷基基团，其中杂原子为N，O，P，S。杂烷基的实例包括烷氧基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基等。
术语“卤代烷基”是指具有一个或多个卤素取代基的烷基基团。其中烷基基团和卤基或卤素的定义如上。卤代烷基基团的实例包括CH2F、CHF2、CF3、C2F5、CCl3，以及类似基团。
术语“氰基烷基”是指用氰基基团(-CN)取代的烷基基团。
术语“烯基”是指具有一个或多个C＝C双键的烃基基团。烯基基团的实例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、1,3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、1,3-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基等，以及类似基团。
术语“炔基”是指具有一个或多个C≡C三键的烃基基团。炔基基团的实例包括乙炔基、丙炔基、炔丙基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基等，以及类似基团。
术语“环烷基”是指非芳香碳环，包括环化的烷基、环化的烯基、和环化的炔基基团。环烷基基团可以是单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环)的环***，包括螺环。在某些实施方式中，环烷基基团可以具有3、4、5、6、7、8、9、10个碳原子。环烷基基团可以进一步具有0、1、2或3个C＝C双键和/或0、1或2个C≡C三键。同时被包括在环烷基的定义中的还有那些具有一个或多个稠合于环烷基环的芳香环(例如具有共用的键)的部分，例如戊烷、戊烯、己烷、己烯的苯并衍生物等，以及类似化合物。具有一个或多个稠合芳环的环烷基可以通过芳香部分或非芳香部分连接。环烷基基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环庚二烯基、金刚烷基，二氢茚基，四氢萘基以及类似基团。
术语“杂环烷基”是指其中一个或多个形成环的原子是如O、N，P或S这样的杂原子的非芳香杂环。杂环基基团可以包括单环或多环(如具有2、3或4个稠合环)的环***以及螺环。优选的“杂环烷基”基团的实例包括但不限于：吖丙啶基(氮杂环丙烷基)、吖丁啶基(氮杂环丁烷基)、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、哌啶基，以及类似基团。同时被包括在杂环烷基的定义中还有那些具有一个或多个稠合于非芳香杂环烷基环的芳香环(例如具有共用的键)的部分，例如2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-苯并二氧杂环戊烯基、苯并-1,4-二氧杂环己基、邻苯二甲酰亚胺基、萘二甲酰亚胺基，以及类似基团。具有一个或多个稠合芳环的杂环烷基基团可以通过芳香部分或非芳香部分连接。
术语“芳基”是指单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环)的芳烃， 例如苯基、萘基、蒽基、菲基、茚基，以及类似基团。
术语“杂芳基”是指具有至少一个如O、N或S这样的杂原子环成员的芳香杂环。杂芳基基团包括单环或多环(如具有2、3或4个稠合环)的环***。任何在杂环基团中成环的N原子也可以被氧化以形成N-氧化物。优选的“杂芳基”基团的实例包括但不限于：吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、***基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,4-噻二唑基、吡咯基,吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基，以及类似基团。
术语“化合物”，如在本文中所使用，是指包括所有的立体异构体、几何异构体、互变异构体、同位素。
本申请的化合物可以是非对称的，例如具有一个或多个立体中心。除非有另外的限定，所有的立体异构体，可以是对映异构体和非对映异构体。含有非对称取代的碳原子的本申请的化合物可以被分离成光学纯或外消旋形式。光学纯形式可以通过外消旋体的拆分来制备，或者通过使用手性合成子(synthon)或手性试剂来制备。
本申请的化合物也可以包括互变异构体形式。互变异构体新形式由单键和相邻的双键一起伴随质子的迁移而互换所产生的。
本申请的化合物也可以包括存在于中间体或最终化合物中的原子的所有同位素形式。同位素包括具有相同的原子序数但不同的质量数的那些原子。例如，氢的同位素包括氘和氚。
本申请还包括式(I)，式(IA)，和式(IB)化合物的药用盐。药用盐是指其中母体化合物通过所存在的碱部分转化成它的盐形式而进行改性的化合物的衍生物，或者其中母体化合物通过所存在的酸部分转化成它的盐形式而进行改性的化合物的衍生物。药用盐的实例包括但不限于：碱性基团(如氨)的无机或有机酸的盐，或者酸性基团(如羧酸)的无机或有机碱的盐。本申请的药用盐可以由式(I)，式(IA)，和式(IB)的母体化合物通过在溶剂体系中使这些化合物的游离碱形式与1～4当量适当的酸反应而合成。合适的盐被在Remington’s Pharmaceutical Sciences,17th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中列出。
本申请的化合物、以及其药用盐还包括溶剂化物形式或水合物形式。一 般而言，溶剂化物形式或水合物形式与非溶剂化物形式或非水合物形式是等同的，均包括在本申请的范围内。本申请的一些化合物可以以多种晶型形式或非晶型形式存在。总体而言，化合物的所有的物理形式都包括在本申请的范围内。
本申请还包括式(I)、式(IA)和式(IB)化合物的前药。前药是一种由母体药物衍生的药理学物质(即药物)。一旦给药之后，前药在体内被代谢成为母体药物。前药可以通过取代在化合物中存在的一个或多个官能团来制备。关于前药的制备和使用可以在T.Higuchi and V.Stella,“Pro-drugs as Novel Delivery Systems,”Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series和Bioreversible Carriers in Drug Design,ed.Edward B.Roche,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987中找到。
本申请还提供了一种组合物，由式(I)、式(IA)和式(IB)化合物和药学上可接受的盐跟一种或多种药用载体或赋形剂组合形成。本申请的组合物可以通过口服给药，胃肠外给药(注射给药)，喷雾吸入，局部给药，经直肠给药，经鼻腔给药，***给药，腹膜内给药或经由植入的储库给药。
本申请的另一方面，本申请提供一种式(I)、式(IA)和式(IB)化合物和药学上可接受的盐用于抑制蛋白质激酶。
在一些实施方案中，蛋白质激酶是EGFR，尤其是EGFR突变体。
在一些实施方案中，EGFR突变体是L858R或者delE746-A750。
在一些实施方案中，EGFR突变体是G719S，G719C，G719A，L858R，L861Q，外显子19缺失突变体或外显子20***突变体。
在一些实施方案中，EGFR突变体是EGFR T790M，T854A，D761Y或者C797S等抗药性突变体。
在一些实施方案中，EGFR突变体是EGFR L858R/T790M，EGFR delE745—A750/T790M，EGFR L858R/T790M/C797S，或者EGFR delE745-A750/T790M/C797S等抗药性突变体。
在本申请的另一方面，本申请提供了式(I)、式(IA)和式(IB)化合物和药学上可接受的盐用于治疗由蛋白质激酶引起的疾病。
在一些实施方案中，本申请化合物或组合物可用于治疗由EGFR突变体引起的疾病，尤其是癌症。
在一些实施方案中，本申请化合物或组合物可用于治疗乳癌，肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、支气管肺泡癌)，***癌，胆小管癌，骨 癌，膀胱癌，头颈癌，肾癌，肝癌，胃肠组织癌，食道癌，卵巢癌，胰腺癌，皮肤癌，睾丸癌，甲状腺癌，子宫癌，子宫颈和***癌，白血病，多发性骨髓瘤和淋巴瘤。
在一些实施方案中，本申请的化合物或组合物可用于治疗非小细胞肺癌，***癌，头颈癌，胃癌，胰腺癌，乳腺癌，直肠癌和脑胶质瘤。
在另一个实施方案中，本申请的化合物或组合物可用于治疗对于吉非替尼(gefitinib)，厄洛替尼(erlotinib)和阿发替尼(afatinib)产生耐药性的非小细胞肺癌病人。
在本申请的另一方面，本申请的式(I)、式(IA)和式(IB)化合物和药学上可接受的盐或组合物可以与其它药物联合使用。联合用药时，本申请化合物与联合使用的药物可能起到叠加的作用或协同的作用。联合使用的药物可以是小分子药物，单体克隆药物，融合蛋白药物和抗感DNA药物。
在本申请的另一方面，本申请提供了一种制备如上所述化合物的方法。
在一个实施方案中，式(I)化合物可以通过反应流程1的方法合成制备。
反应流程1：
Figure PCTCN2019072704-appb-000003
Figure PCTCN2019072704-appb-000004
在上述的合成方案中，原料I-1的碘化反应得到碘化产物I-2。N-Boc-碘代丝氨酸甲酯与锌形成锌试剂后，与I-2用一种钯催化剂(例如Pd(dba) 2/X-Phos)偶合得到I-3。I-3的碘代反应得到I-4。I-4与一个芳基或杂环芳基的硼酸或硼酸酯用一种钯催化剂(例如Pd(dppf)Cl 2)偶合得到I-5。I-5的碘代或溴代反应得到I-6(其中，Z为溴或碘)。I-6的羧酸酯用一种还原剂(例如二异丁基氢化铝)还原，然后用MnO 2氧化得到醛I-7。I-7的醛基与甲基三苯基溴化磷在碱(例如叔丁醇钾)的存在下反应得到I-8。I-8与9-BBN反应后，在碱(例如氢氧化钠)的存在下用钯催化剂(例如Pd(dppf)Cl 2)偶合得到关环化合物I-10；或者I-8直接用钯催化剂(例如Pd(dppf)Cl 2)偶合得到关环化合物I-10。I-8也可以转化为多一个碳原子的I-9，然后再用钯催化剂关环得到I-10。I-10的Boc用酸(例如三氟乙酸或盐酸)脱掉后，其氨基与R 1，R 2和R 3取代的丙烯酸用一种缩合剂(例如HATU)缩合得到本申请化合物(I)。
实施例一
(S)-N-(4氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺
步骤1.叔丁基1H-吡咯-1-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000005
于一2L三口瓶中，加入肼基甲酸叔丁酯(100g，0.76mol)、2,5-二甲氧基四氢呋喃(108g，0.83mol)和二氧六环(700mL)。搅拌下，往上溶液缓慢加入稀盐酸(2M，10mL)，然后加热到100℃反应48h。反应完成后，减压蒸馏除去溶剂，余物以EtOAc(500mL)溶解。酯相依次以饱和Na 2CO 3溶液、饱和NaCl水溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得黄色固体。所得固体分散于EtOH(100mL)中，过滤，滤渣以少量EtOH洗涤，干燥得目标物80g。产率58％。LCMS(ESI):m/z＝183(M+H) +。
步骤2.叔丁基2-氰基-1H-吡咯-1-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000006
于一1L三口瓶中，加入叔丁基1H-吡咯-1-基氨基甲酸酯(80g，0.44mol)和无水乙腈(500mL)，置于冰水浴冷却。往上溶液中缓慢滴入氯磺酰异氰酸酯(65g，0.46mol)，维持温度反应1h。然后缓慢滴入DMF(40mL)，维护温度反应1h。反应完成后，缓慢加入冰水淬灭反应，再以饱和Na 2CO 3溶液调至中性。水相以EtOAc萃取。所得有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得产物85g，直接用于下步反应，产率95％。LCMS(ESI):m/z＝208(M+H) +。
步骤3.1-氨基-1H-吡咯-2-甲腈
Figure PCTCN2019072704-appb-000007
于一1L圆底烧瓶中，冰浴冷却下，加入叔丁基2-氰基-1H-吡咯-1-基氨基甲酸酯(85g，0.41mol)和氯化氢二氧六环溶液(4M，500mL)，自然升至室温反应4h，析出白色固体。反应完成后，减压蒸馏除去溶剂，余物分散到EtOAc(100mL)中，过滤，滤渣以EtOAc洗涤，干燥得固体50g，为目标物的盐酸盐。LCMS(ESI):m/z＝108(M+H) +。
步骤4.吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-4-胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000008
于一2L圆底烧瓶中，加入1-氨基-1H-吡咯-2-甲腈盐酸盐(50g)、醋酸甲脒(109g，1.05mol)、K 3PO 4(222g，1.05mol)和EtOH(800mL)，加热回流反应16h。反应完成后，过滤，滤渣以EtOH洗涤。滤液浓缩，余物以EtOAc溶解，有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得红色固体。所得固体分散于CH 2Cl 2中，过滤，滤渣以CH 2Cl 2洗涤得淡黄色固体35g。LCMS(ESI):m/z＝135(M+H) +。
步骤5.7-碘吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-4-胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000009
吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-4-胺(35g，0.26mol)溶于无水DMF(150mL)，置于冰水浴中冷却。往上溶液加入NIS(29g，0.13mol)，维持温度反应1h。然后再加入NIS(29g，0.13mol)，维持温度反应1h。反应完成后，以H 2O稀释。水相以EtOAc萃取。所得有机相依次以5％Na 2SO 3溶液，饱和NH 4Cl溶液，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得深黄色固体69g。上固体溶于EtOAc，加入活性碳，加热回流脱色5h，过滤，滤渣以EtOAc洗涤。滤液浓缩，所得余物以EtOAc结晶得淡黄色固体50g，产率74％。LCMS(ESI):m/z＝261(M+H) +。
步骤6.甲基(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-碘代丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000010
N-Boc-D-丝氨酸甲酯(20g，91mmol)溶于THF(400mL)，置于冰水浴中冷却。往上溶液依次加入三苯基膦(36g，137mmol)和吡啶(14g，177mmol)，然后分批次加入I 2(34g，134mmol)，维持温度低于20℃反应4h。反应完成后，往上反应液中加入冰水淬灭反应，以***萃取。所得有机相依次以1％盐酸，5％Na 2SO 3溶液，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物加到石油醚中，搅拌析出固体，过滤，滤渣以石油醚洗涤。滤液浓缩得白色或微黄色固体26g，产率87％。LCMS(ESI):m/z＝352(M+Na) +。
步骤7.甲基(R)-3-(4-氨基吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000011
于一500mL三口瓶中，氮气保护下，加入锌屑(15g，234mmol)和DMF(160mL)，置于40℃水浴中，然后加入催化量的I 2，搅拌反应至无色。往上混合物中，加入甲基(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-碘代丙酸酯(40g，122mmol)和DMF(80mL)溶液和催化量的I 2，搅拌反应2h，得到(S)-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)碘化锌(II)溶液。
于一500mL三口瓶中，氮气保护下，加入7-碘吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-4-胺(10g，38.5mmol)、Pd(dba) 2(1.1g，1.9mmol)、2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(918mg，1.9mmol)和DMF(100mL)置于40℃水浴。往上混合物中分批次加入前所得的(S)-(2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)碘化锌(II)溶液，维持温度反应16h。反应完成后，反应液倒到水中，以EtOAc萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(PE∶EtOAc(v/v)＝1∶1)得9.5g，产率74％。LCMS(ESI):m/z＝336(M+H) +。
步骤8.甲基(R)-3-(4-氨基-5-碘吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000012
甲基(R)-3-(4-氨基吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯(9.5g，28.4mmol)溶于AcOH(100mL)，置于冰水浴中冷却。往上溶液加入NIS(3.6g，14.2mmol)，自然升室温反应0.5h。然后再置于冰水浴中冷却，加入NIS(3.6g，14.2mmol)，自然升室温反应0.5h。反应完成后，以冰水稀释。水相以EtOAc萃取。有机相依次以5％Na 2SO 3溶液，H 2O，饱和NaHCO 3溶液，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得深黄色固体12g，直接用于下步反应。产率92％。LCMS(ESI):m/z＝462(M+H) +。
步骤9.甲基(R)-3-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪 -7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000013
于一250mL圆底烧瓶中，氮气保护下，加入甲基(R)-3-(4-氨基-5-碘吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯(12g，26.0mmol)、喹啉-3-硼酸(6.7g，39.0mmol)，Pd(dppf)Cl 2(1.9g，2.6mmol)、n-Bu 4NF(679mg，2.6mmol)、Na 2CO 3(5.5g，52mmol)、DMSO(50mL)、EtOH(50mL)和H 2O(26mL)，升温80℃反应3h。反应完成后，反应液倒到水中，以EtOAc萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(PE∶EtOAc(v/v)＝1∶1)得7.0g，产率58％。LCMS(ESI):m/z＝463(M+H) +。
步骤10.甲基(R)-3-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000014
甲基(R)-3-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯(7.0g，15.2mmol)溶于AcOH(70mL)，置于冰水浴中冷却。往上溶液加入NIS(1.7g，7.6mmol)，自然升室温反应2h。然后再置于冰水浴中冷却，加入NIS(1.7g，7.6mmol)，自然升室温反应4h。反应完成后，以冰水稀释，过滤，滤渣依次以5％Na 2SO 3溶液，H 2O，饱和NaHCO 3溶液，H 2O和EtOAc洗涤，干燥得黄色固体7.8g，直接用于下步反应。产率87％。LCMS(ESI):m/z＝589(M+H) +。
步骤11.叔丁基(R)-1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000015
于一装有温度计的250mL三口圆底烧瓶中，氮气保护下，甲基(R)-3-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯(7.8g，13.3mmol)溶于CH 2Cl 2(70mL)，置于干冰/丙酮浴冷却。维持反应液温度低于-65℃，缓慢滴入DIBAL-H(1M，31.5mL)的THF溶液，维持温度反应0.5h。反应完成后，以饱和NH 4Cl溶液淬灭反应。水相以EtOAc萃取。有机相以无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩，所得余物溶于CH 2Cl 2，加入活性MnO 2(7.6g，133mmol)，室温搅拌反应12h，反应完成后，过滤，滤渣用CH 2Cl 2洗涤，滤液干燥后浓缩得产物4.8g，直接用于下步反应，产率65％。LCMS(ESI):m/z＝577(M+H 2O+H) +。
步骤12.叔丁基(R)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000016
甲基三苯基溴化鏻(6.1g，17.2mmol)和叔丁醇钾(1.7g，15.5mmol)加到THF(80mL)中，加热到50℃反应2h。上反应混合物冷却至室温，加入叔丁基(R)-1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯(4.8g，8.6mmol)的THF(20mL)溶液，室温搅拌反应8h。反应完成后，加水，以EtOAc萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(PE∶EtOAc(v/v)＝1∶1)得3.4g，产率71％。LCMS(ESI):m/z＝557(M+H) +。
步骤13.叔丁基(S)-4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000017
于一密封瓶中，加入叔丁基(R)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯(1.0g，1.8mmol)和9-BBN(0.5M，18mL)的THF溶液，盖好盖子，加热到100℃反应1h。上反应液冷却到室温，加入NaOH(2M，1.8mL)水溶液，pd(dppf)Cl 2(131mg，0.18mmol)，氮气保护下加热回流反应2h。反应完成后，加水，以EtOAc萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得300mg，产率39％。LCMS(ESI):m/z＝431(M+H) +。
步骤14.(S)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-4,8-二胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000018
叔丁基(S)-4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基氨基甲酸酯(300mg，0.70mmol)分散于CH 2Cl 2(5mL)，加入TFA(1mL)溶解，室温反应0.5h。反应完成后，将反应液倒入冰的5％NaHCO 3溶液中，以CH 2Cl 2多次萃取。有机相以无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得200mg，直接用于下步反应。产率87％。LCMS(ESI):m/z＝331(M+H) +。
步骤15.(S)-N-(4氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000019
(S)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-4,8-二胺(200mg，0.61mmol)溶于CH 2Cl 2(5mL)，加入DIEA(155mg，1.2mmol)、丙烯酸(44mg，0.61mmol)和HATU(278mg，0.73mmol)，室温反应0.5h。反应完成后，加水，以CH 2Cl 2萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得150mg，产率64％。LCMS(ESI):m/z＝385(M+H) +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.92(s,1H),8.33(s,1H),8.30(d,J＝7.5Hz,1H),8.11–8.00(m,2H),7.92(s,1H),7.83–7.73(m,1H),7.69–7.59(m,1H),6.29(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.18–6.08(m,1H),5.60(dd,J＝10.0,2.7Hz,1H),4.35–4.20(m,1H),3.22(dd,J＝16.5,5.6Hz,1H),2.83–2.62(m,3H),2.05–1.92(m,1H),1.87–1.73(m,1H)。
实施例二
(R)-N-(4氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺
步骤1.甲基(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-碘代丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000020
以N-Boc-L-丝氨酸甲酯为原料，依实施例一步骤6方法合成得到。LCMS(ESI):m/z＝352(M+Na) +。
步骤2.甲基(S)-3-(4-氨基吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000021
按实施例一步骤7方法，从甲基(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-碘代丙酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝336(M+H) +。
步骤3.甲基(S)-3-(4-氨基-5-碘吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000022
按实施例一步骤8方法，从甲基(S)-3-(4-氨基吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝462(M+H) +。
步骤4.甲基(S)-3-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000023
按实施例一步骤9方法，从甲基(S)-3-(4-氨基-5-碘吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝463(M+H) +。
步骤5.甲基(S)-3-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000024
按实施例一步骤10方法，从甲基(S)-3-(4-氨基-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝589(M+H) +。
步骤6.叔丁基(S)-1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000025
按实施例一步骤11方法，从甲基(S)-3-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸酯合成得到。LCMS (ESI):m/z＝577(M+H 2O+H) +。
步骤7.叔丁基(S)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000026
按实施例一步骤12方法，从叔丁基(S)-1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝557(M+H) +。
步骤8.叔丁基(R)-4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000027
按实施例一步骤13方法，从叔丁基(S)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝431(M+H) +。
步骤9.(R)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-4,8-二胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000028
按实施例一步骤14方法，从叔丁基(R)-4-氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基氨基甲酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝331(M+H) +。
步骤10.(R)-N-(4氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪 [1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000029
按实施例一步骤15方法，从(R)-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-4,8-二胺合成得到。LCMS(ESI):m/z＝385(M+H) +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.92(s,1H),8.34(s,1H),8.30(d,J＝7.4Hz,1H),8.10–7.98(m,2H),7.93(s,1H),7.82–7.74(m,1H),7.69–7.59(m,1H),6.29(dd,J＝17.0,10.0Hz,1H),6.13(dd,J＝17.0,2.4Hz,1H),5.60(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.36–4.19(m,1H),3.23(dd,J＝16.6,5.6Hz,1H),2.84–2.59(m,3H),2.04–1.91(m,1H),1.88–1.70(m,1H).
实施例三
(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙烯酰胺
步骤1.叔丁基(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000030
于一50mL圆底烧瓶中，氮气保护下，加入叔丁基(R)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯(1.0g，1.8mmol)、AcOK(353mg，3.6mmol)、pd(dppf)Cl 2(131mg，0.18mmol)和DMF(10mL)，加热到80℃反应1h。反应完成后加水，以EtOAc萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得500mg，产率65％。LCMS(ESI):m/z＝429(M+H) +。
步骤2.(R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯 [2,1-f][1,2,4]三嗪-4,7-二氨
Figure PCTCN2019072704-appb-000031
叔丁基(R)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)氨基甲酸酯(500mg，1.17mmol)分散于CH 2Cl 2(10mL)，加入TFA(2mL)溶解，室温反应0.5h。反应完成后，将反应液倒入冰的5％NaHCO 3溶液中，以CH 2Cl 2多次萃取。有机相以无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得300mg，直接用于下步反应。产率78％。LCMS(ESI):m/z＝329(M+H) +。
步骤3.(R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000032
(R)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,7-二氨(300mg，0.91mmol)溶于CH 2Cl 2(7mL)，加入DIEA(232mg，1.8mmol)，丙烯酸(65mg，0.91mmol)和HATU(415mg，1.1mmol)，室温反应0.5h。反应完成后，加水，以CH 2Cl 2萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得150mg，产率43％。LCMS(ESI):m/z＝383(M+H) +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.97(d,J＝2.1Hz,1H),8.69(d,J＝8.4Hz,1H),8.40(d,J＝2.2Hz,1H),8.12–8.02(m,2H),7.94(s,1H),7.84–7.76(m,1H),7.71–7.61(m,1H),6.27(dd,J＝17.1,9.9Hz,1H),6.15(dd,J＝16.9,2.3Hz,1H),5.64(dd,J＝10.0,2.3Hz,1H),5.53–5.42(m,1H),4.83(d,J＝2.3Hz,1H),4.76(d,J＝1.9Hz,1H),3.51(dd,J＝16.2,8.2Hz,1H),2.88(dd,J＝16.3,4.8Hz,1H)。
实施例四
(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙烯酰胺
步骤1.叔丁基(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000033
按实施例三步骤1方法，从叔丁基(S)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝429(M+H) +。
步骤2.(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,7-二氨
Figure PCTCN2019072704-appb-000034
按实施例三步骤2方法，从叔丁基(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)氨基甲酸酯合成得到。LCMS(ESI):m/z＝329(M+H) +。
步骤3.(S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000035
按实施例三步骤3方法，从(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4,7-二氨合成得到。LCMS (ESI):m/z＝383(M+H) +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.97(d,J＝2.3Hz,1H),8.69(d,J＝8.4Hz,1H),8.40(d,J＝2.2Hz,1H),8.13–8.02(m,2H),7.94(s,1H),7.84–7.77(m,1H),7.70–7.62(m,1H),6.27(dd,J＝17.0,9.9Hz,1H),6.15(dd,J＝17.1,2.4Hz,1H),5.64(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),5.53–5.43(m,1H),4.83(d,J＝2.5Hz,1H),4.76(d,J＝1.9Hz,1H),3.51(dd,J＝16.3,8.3Hz,1H),2.87(dd,J＝16.4,4.7Hz,1H)。
实施例五
(S)-N-(4氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺
步骤1.叔丁基(R)-(1-(4-氨-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-羟基丁-2-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000036
于一100mL圆底烧瓶中，加入叔丁基(R)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[1,2-f][1,2,4]三嗪-7-基)-丁-3-烯-2-基)氨基甲酸酯(2.5g，4.5mmol)和9-BBN(0.5M，45mL)，室温搅拌反应1h。然后置于冰水浴中冷却，缓滴入K 2CO 3溶液(4M，12mL)和H 2O 2(30％，6mL)，反应30min。反应完成后，加H 2O稀释，小心滴入饱和Na 2SO 3水溶液淬灭反应，水相以EtOAc萃取。酯相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得2.1g，产率81％。LCMS(ESI):m/z＝575(M+H) +。
步骤2.叔丁基(S)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000037
叔丁基(R)-(1-(4-氨-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-羟基丁-2-基)氨基甲酸酯(2.1g，3.6mmol)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(114mg，0.72mmol)溶于CH 2Cl 2(50mL)，置于冰水浴冷却。加入冰的NaBr(741mg，7.2mmol)和NaHCO 3(1.8g，21mmol)水溶液(50mL)，然后缓滴入NaClO水溶液(8％，5mL)，维持冰水浴反应30min。反应完成后，加H 2O稀释，小心滴入饱和Na 2SO 3水溶液淬灭反应，水相以CH 2Cl 2萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物直接用于下步反应。
甲基三苯基溴化鏻(2.6g，7.2mmol)和叔丁醇钾(726mg，6.5mmol)加到THF(40mL)中，加热到50℃叔反应3h。然后冷却至室温，加入上所得余物的THF(20mL)溶液，室温搅拌反应8h。反应完成后，加水，以EtOAc萃取。酯相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(PE∶EtOAc(v/v)＝1∶1)得1.8g，产率88％。LCMS(ESI):m/z＝571(M+H) +。
步骤3.叔丁基(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)氨基甲酸酯
Figure PCTCN2019072704-appb-000038
于一100mL圆底烧瓶中，N 2保护下，加入叔丁基(S)-(1-(4-氨基-6-碘-5-(喹啉-3-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)戊-4-烯-2-基)氨基甲酸酯(1.8g，3.2mmol)，pd(dppf)Cl 2(234mg，0.32mmol)，THF(30mL)和NaOH水溶液(3M，2.1mL)，加热到70℃反应1h。反应完成后，加H 2O稀释，以EtOAc萃取。酯相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得1.0g，产率71％。LCMS(ESI):m/z＝443(M+H) +。
步骤4.(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-4,8-二胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000039
叔丁基(S)-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)氨基甲酸酯(1.0g，2.3mmol)分散于CH 2Cl 2(25mL)，加入TFA(5mL)溶解，室温反应0.5h。反应完成后，将反应液倒入冰的5％NaHCO 3溶液中，以CH 2Cl 2多次萃取。有机相以无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩得730mg，直接用于下步反应。产率92％。LCMS(ESI):m/z＝343(M+H) +。
步骤5.(S)-N-(4氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺
Figure PCTCN2019072704-appb-000040
(S)-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-4,8-二胺(350mg，1.02mmol)溶于CH 2Cl 2(10mL)，加入DIEA(263mg，2.04mmol)、丙烯酸(88mg，1.2mmol)和HATU(456mg，1.2mmol)，室温反应0.5h。反应完成后，加水，以CH 2Cl 2萃取。有机相以饱和NaCl溶液洗涤，无水Na 2SO 4干燥，过滤后浓缩。所得余物以硅胶柱层析纯化(CH 2Cl 2∶MeOH(v/v)＝40∶1)得280mg，产率69％。LCMS(ESI):m/z＝397(M+H) +。 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.91(d,J＝2.2Hz,1H),8.44(s,1H),8.30(s,1H),8.14–8.03(m,2H),7.95(s,1H),7.87–7.79(m,1H),7.72–7.64(m,1H),6.27(dd,J＝17.0,10.0Hz,1H),6.11(dd,J＝17.1,2.3Hz,1H),5.59(dd,J＝10.0,2.3Hz,1H),4.69–4.61(m,1H),4.34–4.21(m,2H),3.33(dd,J＝16.7,5.5Hz,1H),2.89(dd,J＝16.8,7.7Hz,1H),2.68–2.52(m,2H).
实施例A：化合物对细胞增殖抑制的测试
用CellTiter-Glo法检测化合物对HCC827细胞(ATCC，目录号：CRL-2868)，PC-9细胞(ECACC，目录号：90071810)，NCI-H1975细胞(ATCC，目录号：CRL-5908)，A431细胞(ATCC，目录号：CRL-1555)和LU0387细胞(中美冠科)增殖的抑制。HCC827细胞和H1975细胞培养液：RPMI1640(Invitrogen,目录号：11875-093)和10％胎牛血清(Invitrogen，目录号：10099-141)；PC-9细胞，A431和LU0387细胞培养液：DMEM(Invitrogen，目录号：12430-054)和10％胎牛血清。
H1975的接种密度是每100微升4000个细胞，HCC827细胞，PC-9细胞和A431细胞接种密度是每100微升10000个细胞，LU0387细胞接种密度是每100微升15000个。
将含有4000个细胞(H1975)或10000个细胞(HCC827，PC-9，A431)或15000个细胞(LU0387)的100微升培养液加到96孔培养板(Corning#3903)的每个孔中，放置于二氧化碳培养箱中培养过夜。第二天每孔加入0.5微升的待测化合物(用DMSO配置成8个连续的浓度梯度)，每个浓度设两个重复，并设无细胞孔(空白对照)和DMSO孔(溶剂对照)。加药后将细胞在37度、5％二氧化碳的条件下继续培养72小时(H1975，HCC827，PC-9，A431)或168小时(LU0387)。最后每孔加入100微升CellTiter-Glo试剂(Promega，目录号：G7571)，用Flex Station3(Molecular Devices)检测发光信号，用XLfit软件计算化合物对细胞增殖抑制的IC 50值(表1)。
表1、化合物对细胞增殖的抑制
Figure PCTCN2019072704-appb-000041
表1结果表明，本申请化合物对EGFR突变体delE746-A750有高度表达的肺癌细胞HCC827和PC9以及EGFR突变体L858R/T790M有高度表达的肺癌细胞H1975的增殖有很强的抑制作用，对EGFR外显子20***突变体细胞LU0387也表现出很好的抑制作用，而对野生型EGFR有高度表达的人表皮细胞A431的增殖有较弱的抑制作用。所以，本申请化合物可用于治疗由EGFR突变体引起的癌症。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本申请创造的保护范围之中。

Claims (9)

  1. 一种式(I)化合物或其药用盐：
    Figure PCTCN2019072704-appb-100001
    其中，
    R 1选自：H，D，卤素或烷基；
    R 2和R 3各选自：H，D，卤素，氰基，烷基，环烷基，卤素烷基，氰基烷基，环烷基烷基，杂烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
    R 4选自：H或D；
    Ar选自：芳基或杂芳基，其中所说的芳基和杂芳基可以被1至5个R 5取代；
    R 5选自：H，D，卤素，烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基或卤代烷基；
    X选自：(CR 6R 7) m；
    R 6和R 7各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基，或者R6和R7与它们连接的碳原子形成一个烯基；
    Y选自：(CR 8R 9) n；
    R 8和R 9各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基；
    m为1，2或3，n为1或2。
  2. 根据权利要求1所述的化合物或其药用盐，其特征在于：所述化合物具有式(IA)和(IB)的结构：
    Figure PCTCN2019072704-appb-100002
    其中，
    R 1选自：H，D，卤素或烷基；
    R 2和R 3各选自：H，D，卤素，氰基，烷基，环烷基，卤素烷基，氰基烷基，环烷基烷基，杂烷基，杂环烷基或杂环烷基烷基；
    R 5选自：H，D，卤素，烷基，环烷基，杂烷基，杂环烷基或卤代烷基；
    R 6和R 7各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基，或者R 6和R 7与它们连接的碳原子形成一个烯基；
    R 8和R 9各选自：H，D，卤素，烷基，杂烷基，环烷基，烯基，炔基或氰基；
    R 10和R 11各选自：H，D，卤素或烷基；
    p为1至5。
  3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药用盐，所述化合物选自：
    (S)-N-(4氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺、
    (R)-N-(4氨基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺、
    (R)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙烯酰胺、
    (S)-N-(4-氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-7,8-二氢-6H-环戊烯并[4,5]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)丙烯酰胺、
    (S)-N-(4氨基-6-亚甲基-5-(喹啉-3-基)-6,7,8,9-四氢-[1,2,4]三嗪[1,6-a]吲哚-8-基)丙烯酰胺。
  4. 一种药用组合物，由权利要求1-3任一项所述的化合物或其药用盐与至少一种药用载体或赋形剂组成。
  5. 一种如权利要求1-3任一项所述的化合物或其药用盐或权利要求4所述的药用组合物在制备用于治疗由蛋白激酶引起的疾病尤其是癌症的药物中的应用，其中所述的蛋白激酶是受体酪氨酸激酶尤其是EGFR突变体激酶。
  6. 一种如权利要求1-3任一项所述的化合物或其药用盐或权利要求4所述的药用组合物在治疗癌症的药剂中的应用。
  7. 根据权利要求6所述的治疗癌症的药剂应用，其特征在于，所述的癌症是乳癌、肺癌、***癌、胆小管癌、骨癌、膀胱癌、头颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、 子宫癌、子宫颈和***癌、白血病、多发性骨髓瘤或淋巴瘤。
  8. 根据权利要求6或7所述治疗癌症的药剂应用，其特征在于：所述药剂可联合使用其它抗癌药物，所述其它抗癌药物可以是小分子药物、单体克隆药物、融合蛋白药物或抗感DNA药物。
  9. 一种制备如权利要求1-3任一项所述化合物的方法，由以下步骤组成：
    1)原料I-1用一种碘代试剂碘代得到I-2；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100003
    2)N-Boc-碘代丝氨酸甲酯与锌形成锌试剂后，与I-2用一种钯催化剂偶合得到I-3；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100004
    3)I-3用一种碘代试剂碘代得到I-4；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100005
    4)I-4与一个芳基或杂环芳基(Ar)的硼酸或硼酸酯用一种钯催化剂偶 合得到I-5；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100006
    5)I-5的碘代或溴代反应得到I-6，其中，Z为溴或碘；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100007
    6)I-6的羧酸酯用一种还原剂还原，然后用MnO 2氧化得到醛I-7；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100008
    7)I-7的醛基与甲基三苯基溴化磷在碱的存在下反应得到I-8；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100009
    8)I-8与9-BBN反应后，在碱的存在下用钯催化剂偶合得到关环化合物I-10；或者I-8直接用钯催化剂偶合得到关环化合物I-10；I-8也可以转化为多一个碳原子的I-9，然后再用钯催化剂关环得到关环产物I-10；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100010
    9)I-10的Boc用酸脱掉得到I-11；
    Figure PCTCN2019072704-appb-100011
    10)I-11的氨基与R1，R2和R3取代的丙烯酸用一种缩合剂缩合得到所述化合物(I)：
    Figure PCTCN2019072704-appb-100012
PCT/CN2019/072704 2018-01-31 2019-01-22 一种化合物或其药用盐或组合物的制备及应用 WO2019149114A1 (zh)

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