WO2014027777A2 - 신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법 - Google Patents

신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법 Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to novel ursolic acid derivatives and methods for their preparation. More specifically, the present invention is a prodrug form of ursolic acid which may have pharmacokinetic properties such as excellent stability and oral absorption, and may be converted into ursolic acid in the body to exhibit excellent pharmacological activity. Novel ursolic acid derivatives thereof and methods for their preparation are disclosed.
  • Ursolic acid is a pentacyclic triterpene acid compound that can be extracted from natural products such as rosemary leaves. This ursolic acid can be seen as a natural-derived compound contained in many plants, such as apples, in particular skins, lavender, basil, rosemary, oregano or thyme.
  • the ursolic acid may have a structure of Formula 1 below, and may be referred to as a chemical name of 3 -hydroxy-urs-12-en-28-oic acid. Its molecular weight and general formula are about 456.68 and C 30 H 48 O 3 .
  • ursolic acid has a basic structure of pentacydic triterpene, a hydroxyl group on C-3, a double bond on C-12,
  • C-28 has a structure where a carboxyl group is substituted.
  • Ursolic acid having such a structure is known to be very poorly soluble in water, and is known as an optically active material having a very complicated structure having 10 member carbons. Due to this property, it is known that the ursolic acid cannot be manufactured by chemical synthesis, and can be obtained only by extracting and purifying from natural products such as grains containing a large amount of such materials. However, since the content of the ursolic acid is not so high even in natural products such as plants, very high cost is required to obtain such ursolic acid in high purity and high concentration through extraction and purification.
  • ursolic acid is known as a functional cosmetic material, in particular, it has been reported that it can be used for skin improvement or inflammation treatment due to photoaging.
  • ursolic acid which is used as a cosmetic material, is often not high in purity, oleanoic acid, a structural isomer of C-29 hydrogen and C-30 is dimethyl.
  • ursolic acid (oleanolic acid) and the like. Therefore, it is difficult to apply the low-purity ursolic acid used as the cosmetic material to a pharmaceutical use as it is. Nevertheless, it has been reported that ursolic acid can be applied to various medicines. For example, Int. J. Cancer (2010), 127, 462 473 reported that the ursolic acid inhibits NF-KB activation in living cells, thus enhancing the efficacy of chemotherapy-chemotherapy. Cell
  • ursolic acid showed excellent efficacy in the treatment and prevention of muscle atrophy.
  • the ursolic acid has been reported as a therapeutic agent for hepatic fibrosis (J of Hepatology (2011) 55, 379 ⁇ 387), and it has been known that it may be a therapeutic agent for hyperlipidemia by activating PPAR- ⁇ .
  • ursolic acid derivatives which may further enhance the efficacy of the above-described ursolic acid or may have new efficacy.
  • EP1889850A1 discloses a derivative in which phosphate is substituted for C-3 of ursolic acid
  • US3909089 discloses a derivative in the form of an amine salt in which piperazine or the like is bonded to a carboxylic acid of C-28 of ursolic acid.
  • US4530934 discloses derivatives in which a carboxypropionyloxy group is substituted for C-3 of ursolic acid, and these derivatives are described as being active as anti-ulcer therapeutic agents.
  • US2011 / In 0190388A1 as ursolic acid derivatives usable as an anti-inflammatory and anticancer agents, and a substituted group, an acyloxy group in C-3 discloses a derivative having a substituted alkyl group having a carbon number of 5 to 8 to the carboxylic acid of the C-28 have.
  • ursolic acid which is poorly soluble in water and very low in oral absorption, for example, less than 1%, is difficult to manufacture in high purity. Due to their properties, studies on formulations containing ursolic acid are facing limitations. [Content of invention]
  • the present invention is a prodrug form of ursolic acid which may have pharmacokinetic properties such as excellent stability and oral absorption, and is a novel form of ursolic acid prodrug that can be converted into ursolic acid in the body and exhibit excellent pharmaceutical activity.
  • ursolic acid derivative and a method for producing the same.
  • the present invention provides a ursolic acid derivative of Formula 2:
  • ⁇ is hydrogen or an acetyl group
  • R 2 is
  • the present invention also comprises the steps of acetylating the ursolic acid of Formula 1 to form a compound of Formula 3; And esterifying a compound of Formula 3 with R 2 -X of Formula 4, wherein the method for preparing the ursolic acid derivative of Formula 2 is provided.
  • X is a halogen radical of chloro (CI), bromo (Br) or iodine (I).
  • the ursolic acid derivative of Formula 2 is provided.
  • Such ursolic acid derivatives are those in which a predetermined functional group R 2 is introduced into the C 28 carboxylic acid of ursolic acid to have an ester structure.
  • R 2 is a (5-methyl-2-oxo-1,3-dioxol-4yl) methyl group derived from olmesartan medoxomil; 1-[[(cyclonuxyloxy) carbonyl] oxy] ethyl group derived from the prodrug of ceftiam (cefotiam hexetil); [(2,2-dimethylpropanoyl) oxymethyl group derived from a valproate pivoxil) of valproate acid; Or a 1-[(4- methoxybutanoyl) oxy] ethyl group derived from cefuroxime prodrug (cefuroxime axetil).
  • a predetermined functional group R 2 By introducing such a predetermined functional group R 2 into the poorly soluble drugs such as Imesartan, cytothioma, valproate acid or ceproxim, it is possible to increase oral absorption of poorly soluble drugs and to improve storage stability. This is known.
  • no example of introducing such a functional group R 2 into ursolic acid is known.
  • such a predetermined functional group f is introduced into a specific position of ursolic acid, ie, a carboxylic acid of C28, to provide a prodrug in ester form, ie, the ursolic acid derivative of Formula 2, Significantly lower oral absorption (eg less than 1%) and formulation stability of lyric acid It was confirmed that it can be improved.
  • ursolic acid derivatives of the formula (2) can be converted in the body in the form of ursolic acid, "may refer to ursolic acid distinctive excellent pharmacokinetic properties.
  • the ursolic acid derivative of Formula 2 is ursolic acid is introduced by applying a known prodrug type ester to ursolic acid, which has already been commercialized by applying it to emesatantan, ceputiac, valproate acid or ceproxim. While solving such problems as having low oral absorption or bioavailability, it can enhance the excellent pharmaceutical activity unique to ursolic acid in the body, it can greatly contribute to the application to the pharmaceutical formulation of ursolic acid or its derivatives.
  • the ursolic acid derivative may be obtained from a chemical synthesis described later from ursolic acid.
  • the ursolic acid derivative of Formula 2 may have a structure in which a predetermined functional group F is introduced into a carboxylic acid of C28, and may optionally have a structure in which an acetyl group is introduced into a hydroxy group of C3.
  • the functional group of R 2 can be rapidly degraded by enzymes in vivo to be converted to the ursolic acid, and as a result can exhibit excellent pharmaceutical activity unique to ursolic acid.
  • the ursolic acid derivative may be used for anticancer drugs, potency enhancers of anticancer agents (particularly, potentiators for chemotherapy for anticancer treatment), prophylactic or prophylactic agents, for treating liver fibrosis or for treating hyperlipidemia.
  • anticancer drugs such as, but not limited to, amitriptyline, amitriptyline, amitriptyline, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma, hematoma,
  • the process for preparing such ursolic acid derivatives can be represented by the following reaction formula 1: Scheme 1
  • an acetyl group may be introduced to the hydroxy group of the C3 of the ursolic acid of Formula 1 to form a compound of Formula 3, R 2-
  • the esterification reaction with the electrophilic compound of X may introduce R 2 into the carboxylic acid of C28 to form an ester form of the ursolic acid prodrug, ie, the ursolic acid derivative of formula (2).
  • the formed ursolic acid derivative is a form in which the hydroxyl group and the acetyl group of C3 are introduced (that is, the acetyl group in Formula 2), and if the preparation of the ursolic acid derivative of Formula 2 wherein Ri is hydrogen is necessary, the deacetylation step is performed. You can proceed further.
  • the manufacturing method of such ursolic acid derivatives will be described in each step as follows.
  • acetylation of the ursolic acid of formula (1) introduces an acetyl group to the hydroxy group of C3, thereby forming a compound of formula (3).
  • the acetylation reaction may proceed in the presence of a base, for example, an amine base such as triethylamine ⁇ diisopropylethylamine or pyridine, and an acetic anhydride or acetyl chloride may be used as a reactant for acetylation. have.
  • the acetylation reaction can be carried out in the presence of a catalyst such as ⁇ , ⁇ -dimethylaminopyridine.
  • a dichloromethane haloalkane solvent such as tetrahydrofuran or dioxane
  • an ester solvent such as ethyl acetate
  • an amide system such as ⁇ , ⁇ -dimethylformamide, etc.
  • Ketone solvents such as a solvent or acetone, or 2 or more types of mixed solvents selected from these can be used as a reaction solvent.
  • a double acedo, a haloalkane solvent, or a cyclic ether solvent can be used suitably.
  • the acetylation step may proceed at a reaction temperature of about 0 to 100 ° C, or about 10 to 30 ° C.
  • R 2 is introduced into the carboxylic acid of C28 by esterifying the compound of Formula 3 and the electrophilic compound of R 2 -X, whereby ⁇ is an acetyl group.
  • ⁇ is an acetyl group.
  • a base for ionizing the carboxylic acid of C-28 for example, an alkali metal base such as sodium hydroxide or sodium carbonate, or an alkaline earth metal base such as potassium hydroxide or potassium carbonate
  • an alkali metal base such as sodium hydroxide or sodium carbonate
  • an alkaline earth metal base such as potassium hydroxide or potassium carbonate
  • potassium carbonate can be used.
  • the uronic acid derivative of Formula 2 may be appropriately prepared by performing the esterification reaction step using the electrophilic compound.
  • the electrophilic compound include 4-chloromethyl-5-methyl-2-oxo-l, 3-dioxolene, 1-chloroethyl cyclonuxyl carbonate 1-chloromethyl pivalate or 1- (aceoxy Ethyl) bromide may be represented by the compound name.
  • 4-chloromethyl-5-methyl-2-oxo-1,3-dioxoene or 1-chloroethyl cyclohexyl carbonate is an optically active material having member carbon, and these optical Isomers may be used, but more appropriately, their racemates may be used.
  • the electrophilic compound is about 1.0 to about the compound of Formula 3
  • nitrile solvents such as acetonitrile, ketone solvents such as acetone or methyl ethyl ketone, black amide solvents such as ⁇ , ⁇ -dipentylformamide, or two selected from these
  • ketone solvents or amide solvents can be suitably used.
  • esterification reaction step about 0 to iocrc, black may be performed at a reaction temperature of about 10 to 5 (rc.
  • the deacetylation may be optionally performed in the third step, whereby the ursolic acid derivative wherein ⁇ is hydrogen may be prepared from the ursolic acid derivative of Formula 2, wherein ⁇ is an acetyl group.
  • deacetylation is carried out by treating the resultant esterification reaction with an acid or a base in an alcohol solvent such as methanol.
  • an alcohol solvent such as methanol.
  • the ursolic acid derivative can be deacetylated under basic conditions using methane in an alcohol solvent such as an aqueous sodium hydroxide solution, an aqueous potassium carbonate solution or an aqueous basic solution such as ammonia water.
  • the ursolic acid derivative may be deacetylated under acidic conditions using an acid such as 4-luluenesulfonic acid or a Lewis acid such as trifluoroborane diethyl ether in the alcohol solvent. .
  • the deacetylation step can be performed in the above-mentioned acidic conditions in a mixed solvent of a haloalkane solvent such as dichloromethane and an alcoholic solvent such as methanol.
  • a haloalkane solvent such as dichloromethane
  • an alcoholic solvent such as methanol
  • the deacetylation step may be carried out at a reaction temperature of about 0 to 10C C, black is about 10 to 40 ° C.
  • a novel ursolic acid derivative can be provided which is converted into the form of ursolic acid in vivo, while greatly improving the low oral absorbency and formulation stability of ursolic acid.
  • ursolic acid derivatives can solve problems such as low oral absorption or bioavailability of ursolic acid, and can exhibit excellent pharmacological activity peculiar to ursolic acid in the body, ursolic acid or derivatives thereof Can greatly contribute to the application of
  • Example 7 0.5 g of the compound obtained in Example 7 was added with 4 ml of dichloromethane and methanol.
  • Ursolic Acid Derivatives of the Examples (5-Methyl-2-oxo-1,3-dioxol-4-yl) methyl 3 ⁇ -hydroxy-urse-12-ene-28-oate
  • Ursolic acid was administered once intravenously to SD rats, and the ursolic acid derivative of Example 2 was collected by time after oral administration to analyze blood test substance concentrations. Through this, the bioavailability (bioavailability) of the ursolic acid and the ursolic acid derivatives of Examples was measured and compared.
  • Control intravenous: ursolic acid (UA) (HP area purity 99.0% or more I area percentage)
  • Test substance oral administration: Ursolic acid derivative of Example 2 (HPLC purity 99.4% or more I area percentage)
  • Intravenous controls were prepared in 0.5 mg / mL by dilution with 0.9% Saline in a sterile seal.
  • Test substances for oral administration were prepared at 25 mg / mL by diluting in the same 0.9% Saline, and diluted twice to prepare 12.5 mg / mL.
  • Test group configuration Table 1 below
  • Intravenous administration 0.6 mL of whole blood was collected at 0, 5, 15, 30, 45 minutes, 1, 2, 4, 8 hours (10 times) after administration of the sample material to the tube treated with heparin (5 IU / mL). Plasma was separated and stored in one tube for the whole amount.
  • Oral administration 0, 15, 30, 45 minutes, 1, 2, 4, 8, 12 hours after administration of test substance
  • Pretreated plasma samples were performed under HPLC / MS / MS conditions of Table 2 below.
  • Ursolic acid was dissolved in methanol to make a concentration of 1 mg / mL, and then stored in copper, and the solution was diluted with the co-plasma stored in the urethane.
  • the concentration of ursolic acid in plasma was 2, 5, 10, 50, 100, 500, Plasma samples were made to be 1000 ng / mL.
  • Add 50 ⁇ _ of internal standard 100 ⁇ ng / mL hydrochlorothiazide to 50 ⁇ _ of each standard plasma and mix.
  • 500 ⁇ _ of methyl l-tert-butyl ether was added thereto, followed by vortexing for 10 minutes, followed by centrifugation at 13000 rpm for 5 minutes.
  • Plasma samples were left at room temperature to dissolve and shaken. Then, 50 ⁇ _ of the plasma was taken, pretreated in the same manner as the calibration curve preparation method, and injected into LC / MS / MS.
  • Bioavailability data obtained as a result of the measurement as described above is shown in Table 3 below.
  • the ursolic acid derivative has a conventional oral absorption and bioavailability of about 2.3% at 25 mg / kg. About 3 ⁇ 4 times improvement compared to ursolic acid was confirmed. Therefore, the ursolic acid derivative is preferably used as an oral drug expressing the excellent efficacy of ursolic acid, unlike ursolic acid, which could not be used as an oral drug due to low oral absorption. It seems to be applicable.

Abstract

본 발명은 우수한 안정성 및 경구 흡수도 등 약동력학적 특성을 가질 수 있는 우르솔릭산의 전구 약물 형태로서, 체내에서 우르솔릭산으로 전환되어 우수한 약학적 활성을 나타낼 수 있는 우르솔릭산 전구 약물 형태의 신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 상기 우르솔릭산 유도체는 우르솔릭산의 C28의 카르복실산에 소정 약학적 화합물의 전구 약물이 결합된 에스테르 형태를 가질 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법
【기술분야]
본 발명은 신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로， 본 발명은 우수한 안정성 및 경구 흡수도 등 약동력학적 특성을 가질 수 있는 우르솔릭산의 전구 약물 형태로서， 체내에서 우르솔릭산으로 전환되어 우수한 약학적 활성을 나타낼 수 있는 우르솔릭산 전구 약물 형태의 신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
【배경기술】
우르솔릭산은 로즈마리 잎 등의 천연물에서 추출 가능한 펜타시클릭 트리테르펜산 (pentacyclic triterpene acid) 화합물이다. 이러한 우르솔릭산은 사과， 특히 껍질， 라벤더 (lavender), 바질 (basil), 로즈마리 (rosemary), 오레가노 (olegano) 또는 타임 (thyme) 등의 많은 식물에 함유되어 있는 천연물 유래 화합물로 볼 수 있다.
상기 우르솔릭산은 하기 화학식 1의 구조를 가질 수 있으며, 3 - hydroxy-urs-12-en-28-oic acid의 화학명으로 지칭될 수 있다. 이의 분자량 및 일반식은 약 456.68 및 C30 H48O3이다.
Figure imgf000002_0001
상기 화학식 1에서 볼 수 있는 바와 같이, 우르솔릭산은 pentacydic triterpene의 기본 구조를 가지고 있으며, C-3에 히드록시기, C-12에 이중결합,
C-28에 카르복실기가 치환된 구조를 가지고 있다. 이러한 구조를 갖는 우르솔략산은 물에 매우 난용성인 것으로 알려져 있고， 또， 10개의 부재탄소를 가지고 있는 매우 복잡한 구조의 광학활성 물질로 알려져 있다. 이러한 특성으로 인해， 상기 우르솔릭산은 화학적 합성으로 제조하기가 불가능하며， 단지 이러한 물질이 다량 함유된 삭물 등 천연물로부터 추출 및 정제해야만 얻어질 수 있는 것으로 알려져 있다. 그러나, 이러한 식물 등 천연물에도 상기 우르솔릭산이 함유된 함량이 그리 높지는 않으므로, 추출 및 정제를 통해 이러한 우르솔릭산을 고순도 및 고농도로 얻기 위해서는 매우 높은 비용이 요구된다.
한편， 상술한 우르솔릭산은 기능성 화장품 소재로서 알려져 있고, 특히, 광노화로 인한 피부개선이나 염증치료 등에 사용 가능함이 보고된 바 있다. 다만， 화장품 소재로 사용되는 우르솔릭산은 그 순도가 높지 않은 경우가 많고， C-29가수소이고 C-30이 디메틸인 구조 이성체인 올레아노릭산
(oleanolic acid) 등을 함유하고 있다. 따라서, 상기 화장품 소재로 사용되는 저순도의 우르솔릭산을 의약품 용도에 그대로 적용하기에는 어려움이 있다. 그럼에도 불구하고, 우르솔릭산을 다양한 의약품에 적용할 수 있음이 다수 보고된 바 있다. 예를 들어, Int. J. Cancer (2010), 127， 462 473 에는, 상기 우르솔릭산이 살아있는 세포쎄서 NF-KB 활성화를 저해하므로 항암치료 -화학요법의 효능을 증강시킬 수 있음이 보고되었다. 또， Cell
Metabolism (2011) 13, 627-638 에는 우르솔릭산이 근위축증 (Muscle atrophy)의 치료 및 예방에 우수한 효능을 나타내는 것으로 보고되었다. 이외에도， 상기 우르솔릭산은 간섬유화 (hepato fibrosis)의 치료제 (J of Hepatology (2011) 55, 379~387)로 보고된 바 있고， PPAR- α 를 활성화시킴으로서 고지혈증 치료제로 가능성을 나타냄이 알려진 바 있다
(Bioorg Med Chem Lett (2011)21, 5876-5880).
또한， 상술한 우르솔릭산의 효능을 더욱 증강시키거나 새로운 효능을 가질 수 있는 우르솔릭산유도체에 관한 연구도 일부 이루어진 바 있다. 예를 들어, EP1889850A1에는 우르솔릭산의 C-3에 포스페이트를 치환시킨 유도체가 개시되어 있고, US3909089에는 우르솔릭산의 C-28의 카르복실산에 피페라진 등을 결합시킨 아민염 형태의 유도체가 개시되어 있다. 그리고, US4530934에서는, 우르솔릭산의 C-3에 카르복시프로피오닐옥시기를 치환시킨 유도체를 개시하고 있으며, 이러한 유도체가 항궤양 치료제로서 활성을 나타내는 것으로 기재하고 있다. 부가하여， US2011/0190388A1에서는 항염증제 및 항암제로서 사용 가능한 우르솔릭산 유도체로서， C-3에 '아실옥시기를 치환시키고， C-28의 카르복실산에 탄소수 5 내지 8의 알킬기를 치환시킨 유도체를 개시하고 있다.
상술한 바와 같은 우르솔릭산 또는 이의 유도체들의 다양한 약학적 유용성 및 효능에도 불구하고, 물에 난용성이고 경구 흡수도가, 예를 들어, 1% 미만으로 매우 낮으며， 고순도 제조가 어려운 우르솔릭산 등의 특성으로 인해, 우르솔릭산을 포함하는 제제에 관한 연구는 한계에 부딪히고 있다. 【발명의 내용】
[해결하려는 과제]
이에 본 발명은 우수한 안정성 및 경구 흡수도 등 약동력학적 특성올 가질 수 있는 우르솔릭산의 전구 약물 형태로서, 체내에서 우르솔릭산으로 전환되어 우수한 약학적 활성을 나타낼 수 있는 우르솔릭산 전구 약물 형태의 신규한 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법을 제공하기 위한 것이다.
【과제의 해결 수단]
본 발명은 하기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체를 제공한다:
[화학식 2]
Figure imgf000005_0001
상기 화학식 2에서， ^은 수소 또는 아세틸기 이고， R2는
Figure imgf000005_0002
본 발명은 또한， 화학식 1 의 우르솔릭산을 아세틸화하여 화학식 3의 화합물을 형성하는 단계 ; 및 화학식 3의 화합물을 화학식 4의 R2-X와 에스테르화 반웅시 키는 단계를 포함하는 상기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체의 제조 방법을 제공한다:
Figure imgf000005_0003
[화학식 4]
상기 식에서，
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000006_0002
X는 클로로 (CI), 브로모 (Br) 또는 요오드 (I)의 할로겐 라디칼이다. 이하 발명의 구체적인 구현예에 따른 우르솔릭산 유도체 및 이의 제조 방법에 대해 설명하기로 한다.
발명의 일 구현예쎄 따르면, 상기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체가 제공된다. 이러한 우르솔릭산 유도체는 우르솔릭산의 C28의 카르복실산에 소정의 작용기 R2가 도입되어 에스테르 구조를 갖는 것이다. 이때, R2는 올메사탄의 전구 약물 (olmesartan medoxomil)에서 유래한 (5-메틸 -2-옥소 -1,3- 디옥솔 -4일)메틸기; 세포티암의 전구 약물 (cefotiam hexetil)에서 유래한 1- [ [(시클로핵실옥시)카르보닐]옥시]에틸기; 발프로에이트 산의 전구 약물 (valproate pivoxil)에서 유래한 [(2，2-디메틸프로파노일)옥시ᅵ메틸기; 또는 세프록심의 전구 약물 (cefuroxime axetil)에서 유래한 1-[(4- 메록시부타노일)옥시]에틸기에 해당하는 것이다.
상기 을메사탄， 세포티암， 발프로에이트산 또는 세프록심 등의 난용성 약물에 이러한 소정의 작용기 R2를 도입함에 따라, 난용성 약물의 경구 흡수도를 증가시키고 보관상 안정성을 향상시킬 수 있음이 알려진 바 있다. 그러나， 이러한 작용기 R2를 우르솔릭산에 도입한 예는 알려진 바 없었다. 본 발명자들의 실험 결과， 놀랍게도 이러한 소정의 작용기 f 를 우르솔릭산의 특정 위치, 즉， C28의 카르복실산에 도입하여 에스테르 형태의 전구 약물， 즉， 상기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체로 제공함에 따라, 우르솔릭산의 낮은 경구 흡수도 (예를 들어， 1% 미만) 및 제제 안정성을 크게 향상시킬 수 있음이 확인되었다. 또한， 이들 작용기 R2는 체내에서 특정 효소， 예를 들어， 탈에스테르화 효소 등에 의해 빠르게 대사 및 분해될 수 있다. 그 결과， 상기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체는 체내에서 우르솔릭산의 형태로 전환될 수 있으므로， '우르솔릭산 특유의 우수한 약동학적 특성을 나타낼 수 있다.
따라서， 상기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체는 을메사탄， 세푸티암， 발프로에이트산 또는 세프록심에서 이미 적용하여 상품화하였던， 공지의 전구 약물 형태의 에스테르를 우르솔릭산에 적용하여 도입함으로서 우르솔릭산이 갖는 낮은 경구 흡수도 또는 생체 이용율 등의 문제점을 해결하면서도， 체내에서 우르솔릭산 특유의 우수한 약학적 활성을 향상시킬 수 있으므로， 우르솔릭산 또는 이의 유도체의 약학적 제제에 대한 적용에 크게 기여할 수 있다.
부가하여， 상기 우르솔뢰산 유도체는 우르솔릭산으로부터 후술하는 화학적 합성을 통해 얻어질 수 있다. 따라서, 이러한 우르솔릭산 유도체를 고순도로 정제하기가 보다 용이하게 되며, 이는 우르솔릭산 또는 이의 유도체의 약학적， 산업적 이용에 크게 기여할 수 있다.
한편， 상술한 바와 같이, 화학식 2의 우르솔릭산 유도체는 C28의 카르복실산에 소정의 작용기 F 가 도입된 구조를 갖게 되며, 선택적으로 C3의 히드록시기에 아세틸기가 도입된 구조를 가질 수 있다. 이러한 우르솔릭산 유도체의 구조에서, 상기 R2의 작용기는 생체 내에서 효소에 의해 빠르게 분해되어 상기 우르솔릭산으로 전환될 수 있으며， 그 결과 우르솔릭산 특유의 우수한 약학적 활성을 나타낼 수 있다.
예를 들어， 상기 우르솔릭산 유도체는 우르솔릭산 자체와 마찬가지로, 항암제, 항암제의 효능 증강제 (특히， 항암 치료를 위한 화학 요법에서의 효능 증강제)， 근위측증 치료 또는 예방제, 간섬유화 치료제 또는 고지혈증 치료제 등에 사용될 수 있다.
상술한 화학식 2의 우르솔릭산 유도체는， 상기 화학식 1의 우르솔릭산을 아세틸화하여 상기 화학식 3의 화합물을 형성하는 단계; 및 상기 화학식 3의 화합물을 R2-X와 에스테르화 반웅시키는 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있다. 또한， 이러한 제조 방법은 상기 에스테르화 반응 단계 후에, 그 반응 결과물을 탈아세틸화하는 단계를 더 포함할 수 있다. 이러한 우르솔릭산 유도체의 제조 방법은 하기 반웅식 1로 표시될 수 있다: [반응식 1]
Figure imgf000008_0001
화학 식 2 ( R =수 소 )
상기 반웅식 1을 참고하면， 상기 제조 방법에서 첫 번째 아세틸화 단계를 진행함에 따라， 화학식 1의 우르솔릭산의 C3의 히드록시기에 아세틸기가 도입되어 화학식 3의 화합물이 형성될 수 있으며, 이를 R2-X의 친전자체 화합물과 에스테르화 반응시키면， C28의 카르복실산에 R2가 도입되어 에스테르 형태의 우르솔릭산 전구 약물， 즉, 화학식 2의 우르솔릭산 유도체가 형성될 수 있다. 단, 이때 형성된 우르솔릭산 유도체는 C3의 히드록시기와 아세틸기가 도입된 형태로 되는데 (즉， 화학식 2에서 아세틸기)， Ri이 수소인 화학식 2의 우르솔릭산 유도체의 제조가 필요할 경우， 탈아세틸화 단계를 추가적으로 진행할 수 있다. 이러한 우르솔릭산 유도체의 제조 방법을 각 단계별로 설명하면 다음과 같다.
먼저, 첫 번째 단계에서는， 화학식 1의 우르솔릭산을 아세틸화하여 C3의 히드록시기에 아세틸기를 도입하며， 이에 따라 화학식 3의 화합물을 형성한다. 이때， 아세틸화 반웅은 염기， 예를 들어， 트리에틸아민ᅳ 디이소프로필에틸아민 또는 피리딘 등의 아민 염기의 존재 하에 진행할 수 있고， 아세틸화를 위한 반응물로는 무수 초산 또는 아세틸클로라이드 등을 사용할 수 있다. 경우에 따라， Ν,Ν-디메틸아미노피리딘과 같은 촉매의 존재 하에, 상기 아세틸화 반웅을 진행할 수 있다.
또, 상기 아세틸화 단계에서는, 디클로로메탄 둥의 할로알칸계 용매， 테트라히드로퓨란 또는 디옥산 등의 시클릭에테르계 용매， 에틸아세테이트 등의 에스테르계 용매, Ν,Ν-디메틸포름아미드 등의 아미드계 용매 또는 아세톤 등의 케톤계 용매나， 이들 중에 선택된 2종 이상의 흔합 용매를 반응 용매로 사용할 수 있다. 이중에사도， 할로알칸계 용매 또는 시클릭에테르계 용매를 적절히 사용할 수 있다.
그리고， 상기 아세틸화 단계는， 약 0 내지 100°C, 혹은 약 10 내지 30°C의 반응 온도에서 진행할 수 있다.
다음으로， 두 번째 단계에서는, 상기 화학식 3의 화합물과， R2-X의 친전자체 화합물을 에스테르화 반웅시켜 C28의 카르복실산에 R2를도입하며, 이에 따라, ^이 아세틸기인 화학식 2의 우르솔릭산 유도체를 형성한다. 이러한 에스테르화 반웅 단계에서는， 상기 C28의 카르복실산을 이온화한 후, 친전자체 화합물을 이용해 친핵성 치환 반웅을 진행함으로서, 상기 화학식 2의 우르솔릭산 유도체를 형성할 수 있다.
따라서, 상기 에스테르화 반웅 단계에서는, 상기 C-28의 카르복실산을 이온화하기 위한 염기， 예를 들어， 수산화나트륨 또는 소디움카보네이트 등의 알칼리 금속 염기나, 수산화칼륨 또는 포타슘카보네이트 등의 알칼리 토금속 염기의 존재 하에 상기 반응 단계를 진행할 수 있다. 적절하게는 포타슘카보네이트를 사용할 수 있다.
또한， 상기 R2-X의 친전자체 화합물의 구체적인 예로는，
Figure imgf000010_0001
등을 사용할 수 있고， 이러한 친전자체 화합물을 사용해 에스테르화 반웅 단계를 진행함으로서 화학식 2의 우르솔릭산 유도체를 적절히 제조할 수 있다. 상기 친전자체 화합물의 구체적인 예들은 4-클로로메틸 -5-메틸 -2-옥소- 1,3-디옥소렌， 1-클로로에틸 시클로핵실 카르보네이트 1-클로로메틸 피발레이트 또는 1- (아세록시에틸)브로마이드의 화합물명으로 표시될 수 있다.
이들 친전자체 화합물 중, 상기 4-클로로메틸 -5-메틸 -2-옥소 -1,3- 디옥소렌 또는 1-클로로에틸 시클로헥실 카르보네이트는 부재 탄소를 갖는 광학 활성 물질로서， 이들의 광학 이성체를 사용할 수도 있지만， 보다 적절하게는 이들의 라세미체를 사용할수 있다.
또， 상기 친전자체 화합물은 화학식 3의 화합물에 대해 약 1.0 내지
3.0 당량， 적절하게는 약 1.2 내지 2.0 당량, 더욱 적절하게는 약 1.4 내지
1.6 당량으로 사용될 수 있다.
그리고， 상기 에스테르화 반웅 단계에서는, 아세토니트릴 등의 니트릴계 용매，아세톤 또는 메틸에틸케톤 등의 케톤계 용매, 흑은 Ν,Ν- 디쩨틸포름아미드 등의 아미드계 용매나， 이들 중에 선택된 2종 이상의 흔합 용매를 반응 용매로 사용할 수 있다. 이중에서도ᅳ 케톤계 용매 또는 아미드계 용매를 적절히 사용할 수 있다.
또, 상기 에스테르화 반웅 단계는， 약 0 내지 iocrc, 흑은 약 10 내지 5(rc의 반웅 온도에서 진행할 수 있다.
상술한 제조 방법에서는 선택적으로 탈아세틸화를 세 번째 단계로 진행할 수 있고, 이에 따라 ^은 아세틸기인 화학식 2의 우르솔릭산 유도체로부터 ^이 수소인 우르솔릭산 유도체를 제조할 수 있다.
이러한 탈아세틸화 단계에서는， 메탄올 등의 알코올 용매 내에서, 상기 에스테르화 반웅 결과물을 산 또는 염기로 처리하여 탈아세틸화를 진행할 수 있다. 보다 구체적으로, 메탄을 등의 알코올 용매 내에서， 수산화나트륨 수용액, 탄산칼륨 수용액 또는 암모니아수 등의 염기성 수용액을 사용하는 염기성 조건 하에서， 상기 우르솔릭산 유도체를 탈아세틸화할 수 있다. 선택 가능한 다른 방법으로서 , 상기 알코올 용매 내에서， 4-를루엔술폰산 등의 산이나, 트리플루오로보란 디에틸에테르 등의 루이스 산을 사용하는 산성 조건 하에서， 상기 우르솔릭산 유도체를 탈아세틸화할 수도 있다.
다만， 적절하게는 디클로로메탄 등의 할로알칸계 용매와， 메탄올 등의 알코을계 용매의 흔합 용매 내에서， 상술한 산성 조건 하에 탈아세틸화 단계를 진행할 수 있다.
그리고， 상기 탈아세틸화 단계는, 약 0 내지 10C C, 흑은 약 10 내지 40°C의 반웅 온도에서 진행할 수 있다.
[발명의 효과]
본 발명에 따르면, 우르솔릭산의 낮은 경구 흡수도 및 제제 안정성을 크게 향상시키면서도， 생체 내에서 우르솔릭산의 형태로 전환되어 그 특유의 우수한 약학적 활성을 나타내는 신규한 우르솔릭산 유도체가 제공될 수 있다.
따라서， 이러한 우르솔릭산 유도체는 우르솔릭산이 갖는 낮은 경구 흡수도 또는 생체 이용율 등의 문제점을 해결하면서도， 체내에서 우르솔릭산 특유의 우수한 약학적 활성을 나타낼 수 있으므로， 우르솔릭산 또는 이의 유도체의 약학적 제제에 대한 적용에 크게 기여할 수 있다.
【발명을 실시하기 위한 구체적인 내용】
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다. 참고예 1: 3'β-아세록시-우르스 -12-엔 -28-오익산 (화학식 3)의 제조
Figure imgf000012_0001
우르솔릭산 (순도 98%) 7.5g을 테트라히드로퓨란 50ml에 실온에서 가하여 용해시켰다. 이어서， 피리딘 6.45g과 Ν,Ν-디메틸아미노피리딘 0.2g을 가한 다음 10°C 이하로 냉각시키고, 무수 초산 5.9g을 30분 동안 서서히 적가하였다. 실온에서 12시간 동안 교반하여 반웅시킨 후， 반웅 완료가 확인되면 반웅액을 농축하였다. 이때, 반웅 완료 여부는 박막크로마토그래피법 (에틸아세테이트: n-헥산 = 1:4 rf=0.4)으로 확인하였다. 전개 용매 (에틸아세테이트: n-핵산 = 1: 2 에서 2:1 )를 사용한 컬럼크로마토그래피를 통하여 상기 반웅 농축액을 분리 및 정제하여 목적 화합물 5.5g을 제조하였다.
H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) 11.92(1 H. s), 5.12 5.14(1 H, t), 2.10~2.12(1H, d, J=11.0Hz), 2.00(3H, s), 1.06(3H,s), 0.91~0.92(6H, d), 0.81~0.86(9H, m), 0.76(3H,s);
IR(cm-1) 2924, 1734, 1686, 1459, 1367, 1245, 1027;
HPLC 순도: 99.0% 이상 (면적비 ). 실시예 1: (5-메틸 -2-옥소 -1,3-디옥솔 -4-일) 메틸 3 β-아세특시 -우르스- 12-엔 -28-오에이트의 제조
Figure imgf000012_0002
참고예 1에서 얻어진 화합물 1.0g을 아세톤 20ml에 용해시켰다. 탄산칼륨 0.9g와 포타슘요오드 (Kl) 0.4g을 가하고, 4-클로로메틸 -5-메틸 -2- 옥소 -1,3-디옥소렌 0.6g을 가하였다. 실온에서 24시간 동안 반웅시킨 후 농축하였다. 농축물에 에 틸아세테이트 10ml를 가하고, 물과 소금물 10ml로 각각 세척 한 다음, 무수황산나트륨으로 건조하였다. 감압 여과 후 농축하여 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피로 분리 및 정제하여 목적 화합물 0.7g을 제조하였다.
H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) 4.76~4.99(2H, dd) 5.17(1 H, t), 2.15~2.17(1 H, d, J=11.0Hz), 2.11(3H,s), 2.00(3H, s), 1.06(3H, s), 0.90~0.92(6H, d), 0.81~0.86(9H, m), 0.76(3H,s);
IR(cm- ) 2924, 1819, 1732, 1447, 1371 , 1244, 1129， 1010. 실시 예 2: (5-메틸 -2-옥소 -1，3-디옥솔 -4-일)메틸 3β -히드록시 -우르스- 12-엔 -28-오에 이트
Figure imgf000013_0001
실시 예 1에서 얻어진 화합물 0.5g을 디클로로메탄 4ml와 메탄올 0.7ml에 용해시키고, 4-를루엔술폰산 0.68.g을 가하여 10일 동안 실온에서 반웅시 켰다. 이후， 디클로로메탄 10mᅵ와 물 10ml를 가하고 추출한 다음， 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 얻어진 잔사를 전개 용매 (에 틸아세테이트: n-핵산 = 1 : 2 에서 2:1 )를 사용하여 컬럼크로마토그래피를 통하여 분리 정 제하여 목적 화합물 0.3g을 제조하였다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) 4.76~4.99(2H, dd) 5.16(1 H, t), 2.96-3.01 (1 H,m), 2.14~2.16(1 H, d, J=11.5Hz), 2.11(3H,s), 1.04(3H,s), 0.90~0.92(3H, d), 0.88(3H, s), 0.86(3H,s), 0.81~0.86(3H, d, J= 11.5Hz), 0.75(3H, s), 0.56(3H,s);
IR(cm " ) 2918, 1822, 1686, 1720, 1455, 1383, 1219, 1186, 1044, 1029. 실시 예 3: 1-[[(시클로핵실옥시 )카르보닐]옥시]에틸 3β -아세톡시- 우르스 -12-엔 -28-오에 이트
Figure imgf000014_0001
참고예 1에서 얻어진 화합물 1.0g을 아세톤 20ml에 용해시켰다. 탄산칼륨 0.9g와 포타슘요오드 (KI) 0.4g을 가하고, 1-클로로에틸 시클로핵실 카르보네이트 0.65g을 가하였다. 실온에서 24시간 동안 반응시킨 후 농축하였다. 농축불에 에틸아세테이트 10ml를 가하고， 물과 소금물 10ml로 각각 세척한 다음 무수황산나트륨으로 건조하였다. 감압 여과 후 농축하여 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피로 분리 및 정제하여 목적 화합물 0.8g을 제조하였다.
H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) 5.74-5.87(1 H, dd) 5.17(1 H, t), 3.0(1 H, m)
2.11~2.13(1H, d, J=11.0Hz), 2.00(3H,s), 1.45(3H,d), 1.06(3H, s), 0.90~0.92(6H, d), 0.81~0.86(9H, m), 0.76(3H,s), 1.00-2.20(1 OH, m);
IR(cm"1)2925 1756 1732, 1697, 1466, 1373, 1245, 983. 실시예 4: 1-[ [(시클로핵실옥시)카르보닐]옥시]에틸 3β-히드록시- 우르스 -12-엔 -28-오에이트 *
Figure imgf000014_0002
실시예 3에서 얻어진 화합물 0.7g을 디클로로메탄 4ml와 메탄올 0.7ml에 용해시키고， 4-를루엔술폰산 0.68.g을 가하여 10일 동안 실온에서 반웅시켰다. 이후， 디클로로메탄 10ml와 물 10ml를 가하고 추출한 다음， 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 얻어진 잔사를 전개 용매 (에틸아세테이트: n-핵산 = 1: 2 에서 2:1)를 사용하여 컬럼크로마토그래피를 통하여 분리 정제하여 목적 화합물 0.4g을 제조하였다. 'H-NMRiDMSO-de, 500MHz) 5.70-5.85(1 H, dd) 5.17(1 H, t), 3.0(1 H, m) 2.11~2.13(1 H, d, J=11.0Hz), 1.45(3H,d), 1.06(3H,s), 0.90~0.92(3H,d), 0.88(3H,s), 0.86(3H,s), 0.81~0.86(3H, d,), 0.75(3H, s), 0.56(3H,s), 1.00-2.20(1 OH, m);
IR(cm'1) 2920, 1754, 1732, 1697, 1466, 1373, 1220. 실시예 5: [(2,2-디 메틸-프로판오일)옥시]메틸 3 β -아세록시-우르스 -12- 엔 -28-오에 이트
Figure imgf000015_0001
참고예 1에서 얻어진 화합물 1.0g을 아세톤 20ml에 용해시 켰다. 탄산칼륨 0.9g와 포타슘요오드 (KI) 0.4g을 가하고, 1-클로로메틸 피발레이트 0.55g을 가하였다. 실온에서 24시 간 동안 반웅시 킨 후 농축하였다. 농축물에 에 틸아세테 이트 10ml를 가하고, 물과 소금물 10ml로 각각 세척 한 다음ᅳ 무수황산나트륨으로 건조하였다. 감압 여과 후 농축하여 얻어진 잔사를 컬럼크로마토그래피로 분리 및 정제하여 목적 화합물 0.7g을 제조하였다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) 5.63~5.68(2H, dd) 5.16(1 H, t), 2.11~2.13(1 H, d, J=11.0Hz), 2.02(3H, s), 2.0(3H,s), 1.13(9H,m), 1.06(3H, s), 0.90~0.92(6H, d), 0.82(9H, m), 0.71(3H, s);
IR(cm-1) 2920, 1749, 1726, 1686, 1466, 1372, 1245, 1152. 실시 예 6: [(2，2-디 메틸-프로판오일)옥시]메틸 3 β -히드록시-우르스 -12- 엔 -28-오에 이트 ()()()();,,,,,,, s90Ί3Η6H s 0900.926H d 082H m.71.03.. ~ ())()()((,,,,,,,,,,4 d J3.83H 1.1 d033 s 2.0HS 1392.31H1.0H 2.HHm11=~
()())(,,,,81H dd 56Od 5§MHZ 5.765.71 H t £NlvlRDMS6--~
Figure imgf000016_0001
IRicm"1) 2920, 1750, 1728, 1690, 1465, 1370, 1245, 1152. 실시예 8: 1- (아세특시) 에틸 3β-히드록시-우르스 -12-엔 -28-오에이트
Figure imgf000017_0001
실시예 7에서 얻어진 화합물 0.5g을 디클로로메탄 4ml와 메탄올
0.7ml에 용해시키고， 4-를루엔술폰산 0.68.g을 가하여 10일 동안 실온에서 반웅시켰다. 이후， 디클로로메탄 10ml와 물 10ml를 가하고 추출한 다음， 무수황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 얻어진 잔사를 전개 용매 (에틸아세테이트: n-핵산 = 1: 2 에서 2:1)를 사용하여 컬럼크로마토그래피를 통하여 분리 정제하여 목적 화합물 0.3g을 제조하였다.
1H-NMR(DMSO-d6, 500MHz) 5.75 5.85(1 H, dd) 5.16(1 Hᅳ t), 3.0(1 H, m) ,2.11~2.13(1H, d, J=11.0Hz), 2.02(3H,s), , 1.45(3H,d), 1.06(3H,s), 0.90~0.92(3H,d), 0.88(3H,s), 0.86(3H,s), 0.81~0.86(3H, d,), 0.75(3H, s), 0.56(3H,s);
IR(cnT1) 2925, 1752, 1730, 1695, 1464, 1370, 1220 시험예: 우르솔릭산과, 실시예의 우르솔릭산 유도체를 사용한 SD(Sprague Dawley) 랫트 (rat)에 대한 약동력학 동물시험
- 실시예의 우르솔릭산 유도체: (5-메틸 -2-옥소 -1,3-디옥솔 -4-일)메틸 3β-히드록시-우르스 -12-엔 -28-오에이트 사용
가. 시험목적
SD 랫트에 대하여 우르솔릭산을 단회 정맥 투여하였고， 실시예 2의 우르솔릭산 유도체는 경구 투여 후 시간 별로 채혈하여 혈중 시험물질의 농도를 분석하였다. 이를 통해, 우르솔릭산 및 실시예의 우르솔릭산 유도체의 Bioavailability (생체이용률)를 측정 및 비교하였다.
나. 대조물질 및 시험물질 07003
i) 대조물질 (정맥 투여): 우르솔릭산 (UA) (HPLC 순도 99.0% 이상 I area percentage)
ii) 시험물질 (경구투여): 실시예 2의 우르솔릭산 유도체 (HPLC 순도 99.4% 이상 I area percentage)
다. 시험물질의 조제
정맥투여용 대조물질은 멸균 밀봉된 0.9% Saline으로 회석하여 0.5 mg/mL로 조제하였으며，
경구투여용 시험물질은 동일한 0.9% Saline에 회석하여 25 mg/mL로 조제하고, 이를 2배 희석하여 12.5 mg/mL로 조제하였다.
라. 시험재료 및 방법
[시험계 】
(1) 종 및 계통: 특정병원체 부재 (SPF)SD 랫트
(2)사용 동물수 및 성별 ： 수컷 18 마리
(3)체중범위: 약 180 g 土 20% 이내
(4)투여개시시 체중범위: 평균체중 (g) 士 20% 이내
(5)기타 동물시험 사항은 식품의약품안전청 고시 제 2009-183호 (2009년 12월 22일) '비임상시험관리기준' 및 OECD Principles of Good Laboratory Practice (199가를 참조하여 수행하였다.
[시험군 구성 및 투여량설정】
(1) 시험군 구성: 하기 표 1
[표 1]
Figure imgf000018_0001
(2) 투여량의 설정 하기 논문 1을 참고함:
논문 1 : Dong Won Jeong, Hye Suk Lee et al., Dose-linear pharmacokinetics of Oleanolic acid afterintravenous and oral administration in rats. Biopharm. Drug Dispos. (2007) 28:51-57.
[투여 및 채혈]
(1 ) 투여 경로: 상기 논문 1 참고함
(2) 투여횟수 및 투여기간: 정맥 및 단회 투여
(3) 투여 액량 산출: 투여 전 가장 최근에 측정 한 체중을 근거로 1 .0 또는 2.0 m!Jkg로 산출하여 투여하였다.
(4) 투여 방법 : 정맥투여는 투여할 동물을 보정기에 넣은 후, 꼬리를 70% 알코을. 솜으로 소독하고, 거즈를 이용하여 알코올 성분을 제거 한 후, 26G 주사침을 이용하여 bolus로 투여하였다. 경구투여는 동물을 경배부 피부 고정법으로 고정하고 경구투여용 존데를 이용하여 위 내에 직 접 주입하였다.
(5) 채혈
정맥투여 : 시함물질 투여 후 0， 5, 15, 30, 45분， 1， 2， 4， 8 시간 (10 회 )에 전혈 0.6 mL을 채혈하여 해파린 (5 IU/mL) 처 리 된 tube에 담아 혈장을 분리하여 1 개의 튜브에 전량 보관하였다.
경구투여 : 시험물질 투여 후 0， 15, 30, 45분, 1， 2， 4， 8, 12 시간
(9회 )에 전혈 0.6 ml_을 채혈하여 헤파린 (5 IU) 처 리된 tube에 담아 혈장을 분리하여 1개의 튜브에 전량 보관하였다. -
(6) 혈장부리 및 보관
채혈 후 혈액은 10，000 rpm에서 5분간 원심분리하여 혈장을 분리하였다. 분리 한 혈장은 분석기관에 송부할 때까지 -75 ± 5 °C Deep freezer에 보관하였다. 마. 분석방법
1.분석대상 랫트 혈장 중 우르솔릭산의 농도를 측정하였다.
2.분석조건
전처 리 된 혈장시료는 하기 표 2의 HPLC/MS/MS 조건에서 수행하였다.
[표 2]
Figure imgf000020_0001
3.검량선의 작성
우르솔릭산 표준품올 methanol에 녹여 1 mg/mL의 농도로 만든 후 넁동 보관시키고, 이 용액을 넁동 보관 하였던 공혈장으로 희석하여 우르솔릭산의 혈장 중 농도가 2， 5, 10, 50, 100, 500, 1000 ng/mL 가 되도록 혈장시료를 만들었다. 각각의 표준혈장 50 μΙ_에 내부표준물질 100 ng/mL 히드로클로로티아지드 50 μΙ_를 가한 후 섞는다. 여기에 메틸 -l-tert-부틸 에 테르 500μΙ_ 를 가하여 10분간 vortexing 한 후 13000 rpm에서 5분 동안 원심 분리하였다. 유기층 450 μΙ_ 을 깨끗한 폴리프로필렌 튜브에 옮기고 질소 하에서 완전히 건조시켰다. 잔사에 이동상 ί20 μΙ_를 가하여 녹인 후 이 중 5μΙ_를 취하여 LC-MS/MS에 주입하였다. 여 기에서 얻은 내부표준물질의 피크 면적에 대한 우르솔릭산 의 피크 면적비를 구하여 검 량선을 작성하였다.
4. 혈장시료의 처리
동물개체로부터 각 시간별로 채혈하여 -70 °C 이하에 보관하였던 혈장시료를 실온에 방치하여 녹인 후 진탕한 다음 이 혈장 50 μΙ_를 취하여 검량선 작성방법과 동일한 방법으로 전처리 한 후 LC/MS/MS에 주입하였다.
5. 혈중농도 계산
얻어진 크로마토그램으로부터 내부표준물질의 피크 면적 에 대한 우르솔릭산의 피크 면적비를 구하여 미리 작성 한 검량선으로부터 혈장 중 우르솔릭산 의 농도를 구하였다. 바. 약물동태 분석 프로그램
약물동태 분석은 BA Calc. 2007 (KFDA)을 사용하여， Non-compartment analysis (best fit)에 의해 수행하였고， AUClast, Cmax, Tmax 및 t1/2를 산출하였다. AUCiast 및 Cmax 결과는 Bioequivalence analysis를 수행하였다. 사. 시험결과: 생체 이용률 (Bioavailability)
상술한 바와 같은 방법으로 측정 한 결과 얻은 생체 이용률 데이터를 하기 표 3에 정 리하여 나타내었다.
[표 3]
Figure imgf000021_0001
상기 표 3을 참고하면， 실시 예 2의 우르솔릭산 유도체를 사용해 랫트를 대상으로 약동력학 시험을 수행한 결과, 상기 우르솔릭산 유도체는 25mg/kg에서 경구흡수도 및 생체이용률이 약 2.3%로서 기존의 우르솔릭산 대비 약 3~4배가 향상됨 이 확인뒤 었다. 따라서 , 상기 우르솔릭산 유도체는 낮은 경구흡수도로 인해 경구용 약물로 사용될 수 없었던 우르솔릭산과는 달리 , 우르솔릭산의 우수한 효능을 발현하는 경구용 약물로서 바람직하게 적용될 수 있을 것으로 보인다.
참고로, 상기 논문 1에서， 우르솔릭산과 유사한 물리화학적 성 질을 가지는 이성 질체인 Oleanolic acid에 대한 약동력학 실험 결과는 경구흡수도가 약 0.7%임을 보여주고 있는 바， 이를 통해서도 실시 예 2의 우르솔릭산 유도체의 우수한 경구흡수도 및 생체이용률이 입증될 수 있다.

Claims

【특허청구범위】
【청구항 1】
하기 화학식 2와 우르솔릭산 유도체:
[화학식 2]
Figure imgf000023_0001
상기 화학식 2에서, Rr 수소 또는 아세틸기아 R;
Figure imgf000023_0002
이다.
【청구항 2]
제 1 항에 있어서， 생체 내에서 우르솔릭산으로 전환되는 우르솔릭산 전구 약물 (prodrug)인 우르솔릭산 유도체.
【청구항 3]
제 1 항에 있어서, 항암제 또는 항암제의 효능 증강제에 사용되는 우르솔릭산 유도체..
【청구항 4】
제 1 항에 있어서, 근위축증의 치료에 사용되는 우르솔릭산 유도체. 【청구항 5】
제 1 항에 있어서， 간섬유화 치료에 사용되는우르솔릭산 유도체. 【청구항 6】
제 1 항에 있어서, 고지혈증 치료에 사용되는 우르솔릭산 유도체. 【청구항 7】
화학식 1의 우르솔릭산을 아세틸화하여 화학식 3의 화합물을 형성하는 단계; 및
화학식 3의 화합물을 화학식 4의 R2-X와 에스테르화 반웅시키는 단계를 포함하는 제 1 항의 우르솔릭산 유도체의 제조 방법:
[화학식 1]
Figure imgf000024_0001
상기 식에서， f 는 이고, X는 클로로 (CI), 브로모 (Br) 또는 요오드 (I)의 할로겐
Figure imgf000025_0001
【청구항 8】
제 7 항에 있어서 , 상기 에스테르화 반응 단계 후에， 그 반응 결과물을 탈아세틸화하는 단계를 더 포함하는 우르솔릭산 유도체의 제조 방법 .
【청구항 9】
Figure imgf000025_0002
Figure imgf000025_0003
인 우르솔릭산 유도체의 제조 방법
【청구항 10】
제 7 항에 있어서， 상기 아세틸화 단계에서는， 아민 염기의 존재 하에 화학식 1의 우르솔릭산을 무수 초산 또는 아세틸클로라이드와 반웅시 키는 우르솔릭산 유도체의 제조 방법 .
[청구항 "】
제 7 항에 있어서 , 상기 에스테르화 반웅 단계에서는, 알칼리 금속 염기 또는 알칼리 토금속 염기의 존재 하에， 화학식 3의 화합물을 화학식 4의 R2-X와 반응시 키는 우르솔릭산 유도체의 제조 방법 .
【청구항 12】 제 8 항에 있어서， 상기 탈아세틸화 단계에서는, 알코올 용매 내에서， 상기 에스테르화 반웅 결과물을 산 또는 염기로 처리하는 우르솔릭산 유도체의 제조 방법 .
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2020163642A1 (en) * 2019-02-07 2020-08-13 Ardelyx, Inc. Glycyrrhetinic acid derivatives for use in treating hyperkalemia
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Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3909089A (en) 1974-07-08 1975-09-30 Plastics Inc Container for storing and carrying articles
IT1215626B (it) 1982-07-26 1990-02-22 Isf Spa Derivato dell'acido ursolico farmacologicamente attivo.
CA2611435C (en) 2005-06-10 2013-01-08 Pola Chemical Industries Inc. Novel triterpenic acid derivative and preparation for external application for skin comprising the same
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TWI386415B (zh) 2010-02-02 2013-02-21 Univ Kaohsiung Medical 熊果酸衍生物及其醫藥組合物
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CN101928322B (zh) 2010-03-02 2013-08-07 福州大学 具抗癌活性的熊果酸修饰物多元醇单酯
CN102558279B (zh) 2011-11-09 2014-09-17 四川国康药业有限公司 熊果酸-3’-取代丙醇酯衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

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