WO2007013401A1 - 免疫測定方法およびそれに用いる免疫測定用キット - Google Patents

免疫測定方法およびそれに用いる免疫測定用キット Download PDF

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antibody
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Kazuhiro Ohmiya
Kyouichi Ohshiro
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Arkray, Inc.
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    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding

Definitions

  • the present invention relates to an immunoassay method and an immunoassay kit used therefor.
  • the latex agglutination method is a method in which antibody-sensitized latex particles and a target antigen in a specimen are bound and aggregated by an antigen-antibody reaction, and the presence or absence of infection is detected based on the degree of aggregation.
  • this method can also be used for visual agglomeration judgment and quantitative inspection by measuring absorbance using an automatic analyzer.
  • Patent Document 1 a method for suppressing the occurrence of false positives by using a filtration filter or the like in advance and sieving the specimen according to the size of its pore diameter.
  • this method is effective for EI A (enzyme-labeled immunoassay) using a membrane solid phase, but it does not The immunoassay method using antibody-sensitized particles did not provide sufficient effects.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Laid-Open No. 2004-28875
  • the present invention provides an immunoassay method that prevents the occurrence of false positives and has high detection accuracy and quantitative accuracy in an immunoassay method using antibody-sensitized particles, and a measurement kit used therefor. Objective.
  • the immunoassay method of the present invention is an immunoassay method for detecting or quantifying a measurement target substance in a sample, and reacts with the sample and the measurement target substance in the sample.
  • the method includes a step of pretreating the specimen.
  • the immunoassay kit of the present invention is an immunoassay kit used in the immunoassay method of the present invention, and is an antibody-sensitized granule sensitized with an antibody that reacts with a measurement target substance in a sample. And a cation exchange material.
  • the cation exchange material is not particularly limited, and examples thereof include strong acid cation exchange materials and weak acid cation exchange materials, and among them, a cation having a sulfonic acid group or a carboxyl group as a functional group. Ion exchange materials are preferred.
  • the cation exchange material may have both a sulfonic acid group and a carboxyl group as functional groups.
  • Examples of the cation exchange material include a cation exchange resin.
  • a resin having at least one of a sulfonic acid group and a carboxyl group as a functional group is preferred.
  • Specific examples of the cation exchange resin include a resin obtained by introducing at least one of a sulfonic acid group and a carboxyl group into a polyethersulfone, polysulfone, or polystyrene-dibutylbenzene copolymer, and a sulfonic acid group into a hydrophilic metatalylate polymer. And rosin having at least one of carboxyl groups introduced therein.
  • polyester sulfone and a resin having at least one of a sulfonic acid group and a carboxyl group introduced into a hydrophilic metatalylate polymer are preferred.
  • the shape of the cation exchange resin is not particularly limited, and examples thereof include a spherical shape, a membrane, and a fiber.
  • the form of the cation exchange material is not particularly limited, and for example, a cation exchange filter, a cation exchange column, or the like is preferable.
  • the cation exchange filter include a filter in which a spherical cation exchange resin is supported on a carrier, a filter containing a fibrous cation exchange resin, and the like.
  • the material of the carrier is preferably a material other than a cation exchange resin such as cotton, and the shape is preferably fibrous.
  • Examples of the filter in which cation exchange resin is supported on the carrier include a filter in which powdery polyethersulfone is supported on absorbent cotton or the like.
  • the filter containing the fibrous cation exchange resin include a filter knitted with a polyethersulfone fiber.
  • the cation exchange column include a column filled with the cation exchange resin.
  • the antibody that reacts with the measurement target substance is not particularly limited, and examples thereof include a polyclonal antibody and a monoclonal antibody that specifically react with and bind to the measurement target substance.
  • the antibody-sensitized particles for example, particles in which the antibody is sensitized can be used.
  • the particles are not particularly limited, and examples thereof include insoluble carrier particles.
  • the insoluble carrier particles include latex particles such as polystyrene latex particles, polypropylene particles, polyethylene particles, gelatin particles, and metal colloids. Polystyrene latex particles are preferred.
  • the antibody-sensitized particles are preferably antibody-sensitized latex particles obtained by sensitizing the polystyrene latex particles with an antibody. The sensitization of the antibody to the particles can be performed by a conventionally known method. [0016] In the immunoassay method of the present invention, an assembly including the antibody-sensitized particles may be used.
  • the assembly examples include a reagent pack containing a reagent, and the reagent preferably contains the antibody-sensitized particles.
  • the reagent pack preferably includes two or more tanks, preferably a disposable cartridge shape, and includes a reagent tank containing the reagent as at least one of the tanks.
  • the reagent pack preferably includes, for example, a reaction tank that performs a reaction, a sample tank that contains a sample, a waste tank that contains waste liquid, a dispensing tip, and the like.
  • the reagent pack for example, an immunoassay cartridge described in JP-A-2001-318101 can be used.
  • the cartridge includes, for example, the reagent tank and the reaction tank, and may further include a sample tank, a waste tank, a dispensing chip, and the like.
  • the number of reagent vessels and reaction vessels is not particularly limited, and may be one or two or more.
  • the arrangement of these tanks is not particularly limited. For example, when a plurality of reagent tanks and reaction tanks are provided and these tanks are arranged in series, the reagent tanks and the reaction tanks are alternately arranged. Is preferred.
  • the upper part of the reagent tank and the reaction tank is preferably sealed with, for example, an aluminum foil or a polymer film.
  • a reaction buffer described later can be used.
  • Examples of the immunoassay method used in the present invention include a latex agglutination method.
  • the present invention is preferably applied in a latex agglomeration method.
  • the substance to be measured examples include bacteria and viruses.
  • the bacterium or the virus can be detected or quantified by detecting or quantifying a specific antigen of the bacterium or the virus.
  • Specific examples of the bacterium and the virus include hemolytic streptococci, influenza virus, adenovirus, RS (Respiratory Syncytial) virus, Bordetella pertussis, Chlamydia trachomatis, coronavirus (SARS), and mycoplasma.
  • the immunoassay method of the present invention is useful for hemolytic streptococci and influenza viruses.
  • the specimen is not particularly limited, and examples thereof include a nasal discharge-derived specimen and a throat-derived specimen.
  • the nasal discharge-derived specimen include a nasal wiping solution, a nasal aspirate, and a nasal wash.
  • the pharynx-derived specimen include pharyngeal wiping fluid and saliva.
  • the assay kit of the present invention is an immunoassay kit used in the immunoassay method of the present invention, and sensitizes an antibody that reacts with a measurement target substance in a sample. Contains antibody-sensitized particles and cation exchange material.
  • the reagent contains the antibody-sensitized particles.
  • the reagent pack is, for example, more preferably two or more tanks, preferably a disposable cartridge shape, and a reagent tank containing the reagent as the tank. Further, it is preferable that the reagent pack includes a reaction tank, a sample tank, a dispensing chip, a disposal tank, and the like.
  • the measurement kit of the present invention includes a reagent pack having a plurality of tanks, the immunoassay method of the present invention can be implemented more simply, and the application to an automated apparatus becomes extremely easy.
  • the measurement kit further includes at least one of, for example, a sample diluent, a reaction buffer, a sample collection device, a sample extract, and the like. It is preferable.
  • the measurement kit of the present invention includes, for example, the immunoassay cartridge, the antibody-sensitized particles and the cation exchange material, a specimen diluent, a reaction buffer, a specimen collection device, and a specimen extraction.
  • the immunoassay cartridge the antibody-sensitized particles and the cation exchange material
  • a specimen diluent a specimen diluent
  • a reaction buffer a specimen collection device
  • a specimen extraction examples include those in which at least one liquid is appropriately sealed.
  • the sample diluent is a reagent for diluting the sample before the measurement, and can be appropriately determined according to, for example, the substance to be measured and the sample.
  • the sample diluent is not particularly limited, and examples thereof include PBS containing BSA and NaN. Sample type and quantity
  • sample diluent may be omitted.
  • the reaction buffer solution can be appropriately determined according to the substance to be measured, for example, and is not particularly limited, and examples thereof include Tris-HCl buffer solution and phosphate buffer solution.
  • the anti-application buffer may contain, for example, polyethylene glycol (eg PEG 20000), BSA (usi serum albumin), NaCl, EDTA ′ 2Na, NaN, etc.
  • the sample collecting device may be used also as the dispensing tip, or may be a cotton swab, for example.
  • the sample extract is, for example, a reagent used for extraction of nucleoprotein and the like, and can be appropriately determined according to the substance to be measured, the sample and the like, and is not particularly limited.
  • a buffer solution or the like can be used.
  • the buffer include CHES (N-Cyclohexyl-2-aminoethane sulfonic acid) buffer, phosphate buffer, Tris-HCl buffer, and CAPS (N-Cyclohexyl-3-aminopropanesulfonic acid) buffer. Is given.
  • the specimen extract may contain, for example, semi-anoretical protease, n-octanoyl-N-methylglucamide, BSA, NaCl, CaCl, EDTA ′ 2Na, NaN, and the like.
  • the force for explaining an example of the measurement method of the present invention is not limited to the following method.
  • a pharynx-derived sample is used as a sample and the measurement target substance is hemolytic streptococci will be described as an example.
  • a cation exchange material is prepared.
  • a force that can use the above-mentioned materials is preferable.
  • a material in which the cation exchange filter is disposed between glass filters and loaded in a nozzle made of polyethylene is preferable.
  • a commercially available cation exchange filter and a cation exchange force ram may be used.
  • the pharyngeal sample collected from the pharyngeal force is mixed with, for example, a 2M sodium nitrite solution and a 1M acetic acid solution, and then neutralized to prepare a sample solution. If the amount of sample is very small, for example, sample dilution such as PBS (pH 7.4) containing 1 wt% BSA and 0.1 wt% NaN
  • the sample liquid is subjected to cation exchange treatment using the cation exchange material.
  • the sample solution after treatment, anti-hemolytic streptococcal antibody-sensitized latex reagent, and reaction buffer solution are mixed, and the degree of aggregation is detected.
  • the detection of the degree of aggregation may be performed by, for example, turbidity measurement using an automatically controlled optical measuring device such as a spectrophotometer, or the presence or absence of aggregation may be visually confirmed on a slide glass or the like. Good.
  • the anti-hemolytic streptococcal antibody-sensitized latex reagent a self-prepared one or a commercially available one may be used.
  • influenza virus it is preferable to differentiate between type A and type B, for example, by the immunoassay method of the present invention.
  • the antibody used for the discrimination is preferably an antibody specific for a nuclear protein, for example. Since the antigenicity of influenza virus surface proteins such as hemadalchun is mutated one after another, if certain anti-hemadalchun antibodies are used, the reactivity may differ depending on the subtype of the prevalent virus, and in some cases it may not react. There is power S. However, nucleoprotein maintains the antigenicity that is the basis for classifying A and B types, and shows a certain reactivity regardless of the type of subtype, so it is suitable for differentiation between A and B types. !,This is because that.
  • Nucleoprotein is localized inside the envelope composed of the lipid bilayer membrane of the virus particle and does not exist on the surface of the virus. Therefore, first, for example, physical destruction of the virus particle by repeated ultrasonic treatment, freeze-thawing, etc.
  • the nucleoprotein is preferably extracted by a chemical treatment method using a surfactant or the like. As the chemical treatment method,
  • a nonionic surfactant such as Tween20 (trade name, general name: Polyoxyethylene Sorbitan Monolau rate) or n-octanoyl-N-methylglucamide (for example, trade name: MEGA-8).
  • Tween20 trade name, general name: Polyoxyethylene Sorbitan Monolau rate
  • n-octanoyl-N-methylglucamide for example, trade name: MEGA-8
  • Tween 20 or the like is usually used as the surfactant.
  • the reactivity of particle aggregation reaction N-Octanoyl-N-methylgluca mide for example, trade name: MEGA-8 is preferable because it has a small influence on the water and a high extraction effect.
  • An antibody solution (antibody concentration 0.7 mgZmL) was prepared using an anti-hemolytic Streptococcus usagi polyclonal antibody and 50 mM borate buffer (pH 7.4).
  • 0.5 mL of the antibody solution and 1% (wZv) polystyrene latex particles manufactured by Sekisui Chemical Co., Ltd., average particle size 0.5 m
  • 0.5 mL Were mixed and incubated at 37 ° C. for 1 hour to sensitize the polystyrene latex particles with the anti-hemolytic Streptococcus usagi polyclonal antibody.
  • BS anti-hemolytic Streptococcus usagi polyclonal antibody
  • a body sensitized latex reagent (particle concentration 0.1% (w / v)) was prepared.
  • Streptococcus pyogenes A group 3 type Su strain was treated with penicillin-treated pisibanil (manufactured by Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.).
  • the antigen is diluted with a sample diluent (PBS (pH 7.4) containing 1% by weight BSA and 0.1% by weight Na N), and antigen solutions having two antigen concentrations (PBS (pH 7.4) containing 1% by weight BSA and 0.1% by weight Na N), and antigen solutions having two antigen concentrations (PBS (pH 7.4) containing 1% by weight BSA and 0.1% by weight Na N), and antigen solutions having two antigen concentrations (PBS (pH 7.4) containing 1% by weight BSA and 0.1% by weight Na N), and antigen solutions having two antigen concentrations (PBS (pH 7.4) containing 1% by weight BSA and 0.1% by weight Na N), and antigen solutions having two antigen concentrations (PBS (pH 7.4) containing 1% by weight BSA and 0.1% by
  • lOngZmL and 50 ngZmL were prepared. Then, immediately before the measurement, the antigen solution of each concentration, 2M sodium nitrite solution and 1M acetic acid solution were mixed and then neutralized to prepare a sample solution.
  • a sample solution having an antigen concentration of OngZmL was prepared by mixing the sample diluent, 2M sodium nitrite solution, and 1M acetic acid solution, followed by neutralization.
  • IX L was mixed in a cuvette, and the change in absorbance (measurement wavelength: 660 nm) was measured at 37 ° C. for 5 minutes using an immune reaction device (trade name: Spotchem®, ARKRAY).
  • the results are shown in Table 1 below as the amount of change in absorbance over 5 minutes (absorbance immediately after the start of measurement 5 minutes after the start of measurement).
  • the said reaction buffer used the thing of the following composition.
  • the symptomatic force was judged and clearly infected with hemolytic streptococci, and the throat was wiped from a person and the fluid was collected.
  • the pharyngeal wipe was confirmed to be negative for lytic streptococci using a commercially available lytic streptococcal detection kit (trade name: Strep A test pack; made by Plusbot Japan).
  • Strep A test pack made by Plusbot Japan
  • the throat swab was collected using a cotton swab that had been confirmed to be negative, and the amount of lytic streptococci was measured under the following condition 1.
  • Comparative Example 1 the amount of lytic streptococci was measured using the specimen under the following condition 2.
  • the sample liquid was filtered through a nozzle to perform cation exchange treatment.
  • the change in absorbance at a measurement wavelength of 660 nm was measured in the same manner as in “2. Measurement of hemolytic streptococcal antigen by latex agglutination method”.
  • Example 1 (Condition 1) and Comparative Example 1 (Condition 2) are shown in Table 2 below.
  • Table 2 the change in absorbance of 0.0050 or more was judged positive (+), and less than 0.0050 was judged negative (one).
  • An antibody solution (antibody concentration 0.8 mg / mL) was prepared using anti-influenza A mouse monoclonal antibody and 50 mM phosphate buffer (pH 7.4).
  • an anti-influenza type A antibody-sensitized latex reagent was prepared using the antibody solution.
  • antigen purified influenza A virus AZKievZ30lZ94 (H3N2) was used.
  • the antigen was diluted with the sample diluent used in Example 1, and antigen solutions with two antigen concentrations (4 / z gZmL and 20 / z gZmL) were prepared.
  • each concentration of the antigen solution was diluted 10-fold with a sample extract having the following composition, and used as a sample solution for the following measurements.
  • a sample solution having an antigen concentration of OngZmL was prepared by diluting the sample diluent with the sample extract 10 times.
  • the reaction buffer used was one having the following composition.
  • Symptom power Judgment force Human nasal aspirate fluid that was not infected with influenza A virus was collected. It was confirmed that the nasal aspiration fluid S influenza A virus was negative using a commercially available influenza virus detection kit (trade name: Capillaria FluAZB; manufactured by Nippon Becton, Dickinson). The nasal inhalation solution collected from human power, which was confirmed to be negative, was also applied to a cotton swab and suspended in 1 mL of the sample extract (hereinafter referred to as “suspension”). Using the suspension, the amount of influenza A virus was measured under the following conditions 1 and 2. As Comparative Example 2, the amount of influenza A virus was measured for the specimen under the following condition 3.
  • the suspension is added to COSMOGEL (registered trademark) 30SP (trade name) (cation exchange carrier (functional group: sulfonic acid group, particle size: 10 m); manufactured by Nacalai Tester) and allowed to stand for 2 minutes.
  • the cation exchange treatment was applied.
  • the change in absorbance at a measurement wavelength of 660 nm was measured in the same manner as in “2. Measurement of hemolytic streptococcal antigen by the latex agglutination method”.
  • the suspension is added to COSMOGEL (registered trademark) 30CM (trade name) (cation exchange carrier (functional group: carboxyl group, particle size: 10 m); manufactured by Nacalai Tester) and allowed to stand for 2 minutes. Ion exchange treatment was performed. Subsequently, the change in absorbance was measured in the same manner as in Condition 1.
  • COSMOGEL registered trademark
  • 30CM trade name
  • cation exchange carrier functional group: carboxyl group, particle size: 10 m
  • Table 4 shows the measurement results of the above conditions 1 to 3.
  • specimen numbers 1 to 4 are the measurement results of the specimens subjected to cation exchange treatment by the method of condition 1 (Example 2-1), and specimen numbers 5 to 7 are those of condition 2. This is a measurement result of a sample subjected to cation exchange treatment by the method (Example 2-2).
  • an absorbance change amount of 0.0050 or more was determined as positive (+), and less than 0.0005 was determined as negative (one).
  • the immunoassay method and measurement kit of the present invention since non-specific reactions can be prevented, an immunoassay method with high detection accuracy and quantitative accuracy without causing false positives. realizable. Therefore, the immunoassay method of the present invention is, for example, medical. And can be applied to a wide range of fields such as biology, and is particularly useful in the field of clinical testing.

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Abstract

　抗体感作粒子を用いた免疫測定方法において、偽陽性の発生を防止する。 　本発明の免疫測定方法は、検体中の測定対象物質と反応する抗体を感作させた抗体感作粒子と検体とを混合し、抗原抗体反応による前記抗体感作粒子の凝集を測定することにより前記検体中の測定対象物質を検出または定量する免疫測定方法であって、前記混合に先立ち、陽イオン交換物質を用いて前記検体を前処理することを含む。前記陽イオン交換物質としては、例えば、官能基としてスルホン酸基又はカルボキシル基を有する陽イオン交換物質が使用でき、その形態は、特に制限されず、例えば、陽イオン交換フィルターおよび陽イオン交換カラム等であってもよい。

Description

免疫測定方法およびそれに用いる免疫測定用キット
技術分野
[0001] 本発明は、免疫測定方法およびそれに用いる免疫測定用キットに関する。
背景技術
[0002] 近年、抗原抗体反応を利用し、測定開始から数分〜数十分で測定項目を検出また は定量可能な簡易検査試薬およびキットが開発されて 、る。測定項目が感染症であ る場合、患者力 採取した検体の感染の有無がその場で判明すれば、症状が早期 のうちに患者を治療できる。このため、このような簡易検査試薬およびキットの重要性 は、医療の現場において年々高まっている。
[0003] 現在、簡易検査方法の 1つとして、ラテックス凝集法（latex agglutination assa y)等の免疫測定方法が広く用いられている。ラテックス凝集法は、抗体感作されたラ テックス粒子と検体中の標的抗原とを抗原抗体反応によって結合'凝集させ、その凝 集の度合いにより感染の有無を検出する方法である。この方法は、検体の濃度によ つては、目視による凝集塊の判定や自動分析装置を用いた吸光度の測定による定 量検査もできる。
[0004] し力しながら、ラテックス凝集法等の免疫測定方法を用いて検体 (例えば、咽頭拭 い液等)を分析する場合、偽陽性が生じる問題がある。すなわち、測定対象物質が検 体中に存在しないにも係わらず、非特異的な反応により粒子が結合'凝集するため、 陽性と判定してしまう問題である。このように、病原体の感染を特定する際に偽陽性 が生じると、罹患に関して誤った情報を与えることになる。その結果、原因特定の遅 延ゃ不適切な治療を施すことになり、病状がより重篤になる等の重大な問題を弓 Iき起 こすこともあり得る。したがって、偽陽性の発生の抑制は、極めて重要な課題である。
[0005] 従来、この問題を解決するために、予め、ろ過フィルタ一等を用い、その孔径の大 きさによって検体を篩い分けることにより、偽陽性の発生を抑制する方法が提案され ている（例えば、特許文献 1)。し力しながら、この方法は、メンブレン固相を用いた EI A (酵素標識免疫測定方法)ではその効果を発揮するが、ラテックス凝集法のように 抗体感作粒子を用いた免疫測定方法では充分な効果が得られな力 た。
特許文献 1：特開 2004— 28875号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0006] そこで、本発明は、抗体感作粒子を用いた免疫測定方法において、偽陽性の発生 を防止し、検出精度および定量精度の高い免疫測定方法、およびそれに用いる測 定用キットの提供を目的とする。
課題を解決するための手段
[0007] 前記目的を達成するために、本発明の免疫測定方法は、検体中の測定対象物質 を検出または定量する免疫測定方法であって、検体と、前記検体中の測定対象物質 と反応する抗体を感作させた抗体感作粒子とを混合する工程、および、抗原抗体反 応による前記抗体感作粒子の凝集を測定する工程を含み、前記混合工程に先立ち 、陽イオン交換物質を用いて前記検体を前処理する工程を含むことを特徴とする。
[0008] また、本発明の免疫測定用キットは、本発明の免疫測定方法に使用する免疫測定 用キットであって、検体中の測定対象物質と反応する抗体を感作させた抗体感作粒 子と、陽イオン交換物質とを含むことを特徴とする。
発明の効果
[0009] このように、陽イオン交換物質を用いて検体を前処理すれば、非特異的な反応を防 止できる。このため、偽陽性の発生を抑制することができ、検出精度および定量精度 の高 、免疫測定方法を実現できる。
発明を実施するための最良の形態
[0010] つぎに、本発明につ 、て、詳しく説明する。
[0011] 前記陽イオン交換物質は、特に制限されないが、例えば、強酸性陽イオン交換物 質および弱酸性陽イオン交換物質があげられ、中でも、官能基としてスルホン酸基又 はカルボキシル基を有する陽イオン交換物質が好ましい。また、前記陽イオン交換物 質は、官能基としてスルホン酸基およびカルボキシル基の双方を有してもょ 、。
[0012] 前記陽イオン交換物質としては、例えば、陽イオン交換樹脂があげられ、中でも官 能基としてスルホン酸基およびカルボキシル基の少なくとも一方を有する榭脂が好ま しい。前記陽イオン交換樹脂の具体例としては、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン 、ポリスチレンージビュルベンゼン共重合体にスルホン酸基およびカルボキシル基の 少なくとも一方を導入した榭脂、親水性メタタリレート系ポリマーにスルホン酸基およ びカルボキシル基の少なくとも一方を導入した榭脂等があげられる。中でも、ポリエー テルスルホン、および、親水性メタタリレート系ポリマーにスルホン酸基およびカルボ キシル基の少なくとも一方を導入した榭脂が好ま ヽ。前記陽イオン交換樹脂の形状 は、特に制限されず、例えば、球状、膜および繊維等があげられる。
[0013] 前記陽イオン交換物質の形態は、特に制限されないが、例えば、陽イオン交換フィ ルターや陽イオン交換カラム等が好ましい。前記陽イオン交換フィルタ一としては、例 えば、球状の陽イオン交換榭脂を担体に担持させたフィルター、繊維状の陽イオン 交換榭脂を含むフィルタ一等があげられる。前記担体の材質は、例えば、綿等の陽 イオン交換榭脂以外の材質が好ましぐその形状は、繊維状が好ましい。前記担体 に陽イオン交換榭脂を担持させたフィルタ一としては、例えば、粉末状のポリエーテ ルスルホンを脱脂綿等に担持させたフィルタ一等があげられる。また、前記繊維状の 陽イオン交換榭脂を含むフィルタ一は、例えば、ポリエーテルスルホン繊維で編まれ たフィルタ一等があげられる。前記陽イオン交換カラムとしては、例えば、前記陽ィォ ン交換榭脂を管に充填したもの等があげられる。
[0014] 前記測定対象物質と反応する抗体は、特に制限されないが、例えば、測定対象物 質に特異的に反応して結合するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体等が あげられる。
[0015] 前記抗体感作粒子は、例えば、粒子に前記抗体を感作させたものが使用できる。
前記粒子は、特に制限されないが、不溶性担体粒子があげられ、前記不溶性担体 粒子としては、例えば、ポリスチレンラテックス粒子等のラテックス粒子、ポリプロピレン 粒子、ポリエチレン粒子、ゼラチン粒子、金属コロイド等があげられ、中でも、ポリスチ レンラテックス粒子が好ましい。前記抗体感作粒子は、前記ポリスチレンラテックス粒 子に抗体を感作させた抗体感作ラテックス粒子が好ましい。なお、粒子への抗体の 感作は、従来公知の方法により行うことができる。 [0016] また、本発明の免疫測定方法において、前記抗体感作粒子を備えたアセンブリを 使用してもよい。前記アセンブリとしては、例えば、試薬を含む試薬パック等があげら れ、前記試薬が前記抗体感作粒子を含むことが好ましい。前記試薬パックは、例え ば、使い捨て可能なカートリッジ形状が好ましぐより好ましくは 2つ以上の槽を備え、 前記槽の少なくとも 1つとして前記試薬を含む試薬槽を備える。前記試薬パックは、 前記試薬槽に加えて、例えば、反応を行う反応槽、検体を入れる検体槽、廃液を入 れる廃棄槽および分注チップ等を含むことが好まし ヽ。このような槽を備えた試薬パ ックを使用することにより、例えば、試薬の調製等が不要となるため、検体の前処理と 測定とを連続して行うことができる。その結果、測定がより一層簡便になり、また、自動 化装置への適用も極めて容易になる。前記試薬パックとして、例えば、特開 2001— 318101号公報に記載の免疫測定用カートリッジが使用できる。前記カートリッジは、 例えば、前記試薬槽および反応槽を含み、さらに、検体槽、廃棄槽および分注チッ プ等を含んでもよい。前記試薬槽および反応槽の個数は、特に制限されず、 1つで あってもよいし、 2つ以上であってもよい。これらの槽の配置は、特に制限されないが 、例えば、試薬槽および反応槽を複数備え、これらが直列に配置されている場合、前 記試薬槽と前記反応槽とが交互に配置されていることが好ましい。また、前記試薬槽 および前記反応槽の上部は、例えば、アルミ箔ゃ高分子フィルム等でシールされて いることが好ましい。前記試薬としては、例えば、後述する反応用緩衝液等が使用で きる。
[0017] 本発明にお 、て使用する免疫測定方法としては、例えば、ラテックス凝集法があげ られる。本発明は、ラテックス凝集法において適用することが好ましい。
[0018] 前記測定対象物質は、例えば、菌またはウィルス等があげられる。本発明の免疫測 定方法にぉ 、て、前記菌または前記ウィルスの特定の抗原を検出若しくは定量する ことにより、前記菌または前記ウィルスを検出若しくは定量できる。前記菌および前記 ウィルスの具体例としては、溶血性連鎖球菌、インフルエンザウイルス、アデノウィル ス、 RS (Respiratory Syncytial)ウィルス、百日咳菌、クラミジァ ·トラコマティス、コ ロナウィルス（SARS)およびマイコプラズマ等があげられる。中でも、本発明の免疫 測定方法は、溶血性連鎖球菌およびインフルエンザウイルスに有用である。 [0019] 前記検体は、特に制限されないが、例えば、鼻汁由来検体および咽頭由来検体等 力けあげられる。前記鼻汁由来検体は、例えば、鼻腔拭い液、鼻腔吸引液および鼻腔 洗浄液等があげられる。また、前記咽頭由来検体は、例えば、咽頭拭い液および唾 液等があげられる。
[0020] つぎに、本発明の測定用キットは、前述のとおり、本発明の免疫測定方法に使用す る免疫測定用キットであって、検体中の測定対象物質と反応する抗体を感作させた 抗体感作粒子および陽イオン交換物質を含む。
[0021] 本発明の測定用キットは、さら〖こ、試薬を含む試薬パックを含んでもよぐ前記試薬 が前記抗体感作粒子を含むことが好ましい。前記試薬パックは、例えば、使い捨て可 能なカートリッジ形状が好ましぐより好ましくは 2つ以上の槽を備え、前記槽として前 記試薬を含む試薬槽を備えることである。さら〖こ、前記試薬パックは、反応槽、検体 槽、分注チップおよび廃棄槽等を含むことが好ましい。本発明の測定用キットが複数 の槽を備えた試薬パックを含む場合、本発明の免疫測定方法をより一層簡便に実施 でき、また、自動化装置への適用も極めて容易になる。
[0022] 本発明の測定用キットは、その利便性をより一層向上させるために、さらに、例えば 、検体希釈液、反応用緩衝液、検体採取器具および検体抽出液等のうち少なくとも 1 つを含むことが好ましい。
[0023] 本発明の測定用キットとしては、例えば、前記免疫測定用カートリッジに、前記抗体 感作粒子および陽イオン交換物質、並びに、検体希釈液、反応用緩衝液、検体採 取器具および検体抽出液の少なくとも 1つを適宜封入したものがあげられる。
[0024] 前記検体希釈液は、測定前に検体を希釈するための試薬であって、例えば、測定 対象物質や検体等に応じて適宜決定できる。前記検体希釈液は、特に制限されな いが、例えば、 BSAや NaN等を含む PBS等があげられる。なお、検体の種類や量
3
等によって、前記検体希釈液は省略してもよい。
[0025] 前記反応用緩衝液は、例えば、測定対象物質等に応じて適宜決定でき特に制限さ れないが、例えば、 Tris—HCl緩衝液およびリン酸緩衝液等があげられる。前記反 応用緩衝液は、例えば、ポリエチレングリコール (PEG20000等）、 BSA (ゥシ血清ァ ルブミン）、 NaClおよび EDTA' 2Na、 NaN等を含んでもよい。 [0026] 前記検体採取器具は、例えば、前記分注チップを兼用してもよいし、綿棒等であつ てもよい。
[0027] 前記検体抽出液は、例えば、核蛋白等の抽出に使用する試薬であって、測定対象 物質や検体等に応じて適宜決定でき特に制限されないが、例えば、緩衝液等が使 用できる。前記緩衝液は、例えば、 CHES (N - Cyclohexyl- 2 - amino ethane su lfonic acid)緩衝液、リン酸緩衝液、 Tris—HCl緩衝液および CAPS (N— Cycloh exyl— 3— aminopropanesulf onic acid)緩衝 等があげられる。前記検体抽出 液は、例えば、セミアノレカリプロテアーゼ、 n—Octanoyl—N—methylglucamide、 BSA、 NaCl、 CaCl、 EDTA' 2Naおよび NaN等を含んでもよい。
2 3
[0028] 以下に、本発明の測定方法の一例について説明する力 以下の方法には制限さ れない。まず、検体として咽頭由来検体を使用し、測定対象物質が溶血性連鎖球菌 である場合を例にあげて説明する。
[0029] まず、陽イオン交換物質を準備する。前記陽イオン交換物質としては、前述のもの が使用できる力 例えば、ガラスフィルターの間に前記陽イオン交換フィルターを配 置し、それをポリエチレンで形成されたノズル内に装填したもの等が好ましい。また、 前記陽イオン交換物質として、市販の陽イオン交換フィルターおよび陽イオン交換力 ラムを使用してもよい。
[0030] つぎに、咽頭力 採取した咽頭由来検体を、例えば、 2M亜硝酸ナトリウム液および 1M酢酸液と混合した後、中和して検体液を調製する。検体量が微量である場合は、 例えば、 1重量％BSAおよび 0. 1重量％NaNを含む PBS (pH7. 4)等の検体希釈
3
液で検体を予め懸濁してもよ 、。
[0031] そして、前記検体液を、前記陽イオン交換物質を用いて陽イオン交換処理する。つ いで、処理後の検体液、抗溶血性連鎖球菌抗体感作ラテックス試薬および反応用緩 衝液を混合し、その凝集度合いを検出する。凝集度合いの検出は、例えば、分光光 度計等の自動的に制御された光学測定装置を用いた濁度測定により行ってもよいし 、凝集の有無をスライドガラス上等で目視確認してもよい。前記抗溶血性連鎖球菌抗 体感作ラテックス試薬は、自家調製したものを使用してもよいし、市販のものを使用し てもよい。 [0032] つぎに、測定対象物質力インフルエンザウイルスである場合を例にあげて説明する
[0033] インフルエンザウイルスについては、本発明の免疫測定方法により、例えば、 A型と B型の鑑別を行うことが好ましい。前記鑑別に使用する抗体は、例えば、核蛋白に対 して特異的な抗体が好ましい。インフルエンザウイルス表面蛋白のへマダルチュン等 は抗原性が次々と変異するために、一定の抗へマダルチュン抗体を用いると、流行 したウィルスの亜型によって反応性が相違し、場合によっては反応しなくなる可能性 力 Sある。しかしながら、核蛋白は A型や B型を分類する際の基本となる抗原性を維持 しており亜型の種類に関わらず一定の反応性を示すため、 A型と B型の鑑別に適し て!、るからである。核蛋白はウィルス粒子の脂質二層膜からなるエンベロープの内部 に局在し、ウィルス表面には存在しないため、まず、例えば、超音波処理や凍結融解 等の繰り返しによるウィルス粒子の物理的な破壊や、界面活性剤等による化学的な 処理方法等により核蛋白を抽出することが好ましい。前記化学的な処理方法としては
、例えば、 Tween20 (商品名、一般名称： Polyoxyethylene Sorbitan Monolau rate)や n— Octanoyl— N— methylglucamide (例えば、商品名： MEGA— 8)等 の非イオン性界面活性剤等で抽出する方法がある。 EIA法やィムノクロマト法等では 、前記界面活性剤として、通常、 Tween20等が用いられる力 本発明のように抗体 感作粒子の凝集を用いて抗原抗体反応を行う場合、粒子の凝集反応の反応性に及 ぼす影響が少なく且つ抽出効果が高いことから、 n— Octanoyl— N— methylgluca mide (例えば、商品名： MEGA— 8)が好ましい。ついで、このようにして抽出した核 蛋白を用いて、本発明の免疫測定方法により鑑別を行うことが好ましい。
[0034] つぎに、本発明の実施例について比較例とあわせて説明する。ただし、本発明は、 以下の実施例に限定されるものではない。
実施例 1
[0035] 1.抗溶血性連鎖球菌抗体感作ラテックス試薬の調製
抗溶血性連鎖球菌ゥサギポリクローナル抗体および 50mMホウ酸緩衝液 (pH7. 4 )を用いて抗体液 (抗体濃度 0. 7mgZmL)を調製した。前記抗体液 0. 5mLと 1% ( wZv)ポリスチレンラテックス粒子 (積水化学社製、平均粒子径 0. 5 m) 0. 5mLと を混合し、 37°Cで 1時間インキュベートすることによって、前記抗溶血性連鎖球菌ゥ サギポリクローナル抗体を前記ポリスチレンラテックス粒子に感作させた。ついで、 BS
A (Sigma社製）を 1重量％となるように添カ卩し、 37°Cで 1時間インキュベートしてブロ ッキングを行った。ブロッキングした抗体感作ラテックス粒子をリン酸緩衝液で洗浄し た後、前記ラテックス粒子をラテックス分散緩衝液（50mM Tris— HC1緩衝液 (pH 8. 4)、 0. 1重量％BSA、 0. 1重量％NaN )に分散させて、抗溶血性連鎖球菌抗
3
体感作ラテックス試薬 (粒子濃度 0. 1 % (w/v) )を調製した。
[0036] 2.ラテックス凝集法による溶血性連鎖球菌抗原の測定
抗原は、ストレプトコックス 'ピオゲネス (A群 3型） Su株をペニシリン処理したピシバ ニール（中外製薬社製)を用いた。検体希釈液（1重量％BSAおよび 0. 1重量％Na Nを含む PBS (pH7. 4) )を用いて前記抗原を希釈し、 2種類の抗原濃度の抗原液 (
3
lOngZmLおよび 50ngZmL)を調製した。ついで、測定の直前に、前記各濃度の 抗原液、 2M亜硝酸ナトリウム溶液および 1M酢酸溶液を混合した後、中和して検体 液を調製した。なお、抗原の濃度が OngZmLの検体液は、前記検体希釈液、 2M亜 硝酸ナトリウム溶液および 1M酢酸溶液を混合した後、中和することにより調製した。
[0037] 前記抗体感作ラテックス試薬 63 μ L、前記検体液 14 μ Lおよび反応用緩衝液 63
IX Lをキュベット内で混合し、免疫反応装置（商品名：スポットケム— ΙΜ、アークレイ 社製)を用いて、 37°Cで 5分間、吸光度 (測定波長 660nm)の変化を測定した。その 結果を、 5分間の吸光度変化量 (測定開始 5分後の吸光度 測定開始直後の吸光 度）として下記表 1に示す。なお、前記反応用緩衝液は、下記組成のものを使用した
[0038] (反応用緩衝液）
1. 9重量0 /0 ポリエチレングリコール 20000 (ナカライ社製）
1重量％ BSA
2重量％ NaCl
0. 1重量％ EDTA- 2Na
0. 1重量％ NaN
3
200mM Tris— HC1緩衝液（pH8. 4) [0039] [表 1]
抗原濃度 吸光度変化量
( n g /m L ) ( 6 6 0 n m)
0 0 . 0 0 1 0
1 0 0 . 0 0 7 0
5 0 0 . 0 3 1 0
[0040] 前記表 1に示すように、溶血性連鎖球菌抗原濃度に応じて吸光度変化量が増加し ていることから、ラテックス凝集法により定量的に溶血性連鎖球菌量を測定できること が確認できた。
[0041] 3.溶血性連鎖球菌陰性検体の測定
症状力 判断して明らかに溶血性連鎖球菌に感染して 、な 、人から咽頭拭 、液を 採取した。その咽頭拭い液が溶菌性連鎖球菌陰性であることを、市販の溶菌性連鎖 球菌検出キット（商品名：ストレップ Aテストパック；プラスボットジャパン社製)を用いて 確認した。ついで、前記陰性が確認された人力ゝら綿棒を用いて咽頭拭い液を採取し 、下記の条件 1で溶菌性連鎖球菌量を測定した。また、比較例 1として、前記検体に っ 、て下記の条件 2で溶菌性連鎖球菌量を測定した。
[0042] (条件 1)
前記咽頭拭い液、 2M亜硝酸ナトリウム溶液および 1M酢酸溶液を混合した後、中 和して検体液を調製した。ついで、ポリエチレンで形成されたノズル内に、厚み 140 μ mのイオン交換メンブレンディスクフィルター (PALL/日本ポール社製、商品名：1 . C. E450(登録商標)（陽イオン交換榭脂：ポリエーテルスルホン、官能基:スルホン 酸基、フィルターの孔径： 0. 45 m) )をガラスフィルターの間に配置した抽出ュ-ッ トを充填した。前記検体液をポリエチレンで形成された検体処理用チューブに入れた 後、前記チューブに前記ノズルを装着した。ついで、前記検体液をノズルに通してろ 過することにより陽イオン交換処理を行った。前記陽イオン交換処理後の検体液を用 いて、前記「2.ラテックス凝集法による溶血性連鎖球菌抗原の測定」と同様にして、 測定波長 660nmにおける吸光度の変化を測定した。
[0043] (比較例 1 :条件 2)
前記咽頭拭い液、 2M亜硝酸ナトリウム溶液および 1M酢酸溶液を混合した後、中 和したものをそのまま使用して、前記条件 1と同様にして吸光度の変化を測定した。
[0044] 前記実施例 1 (条件 1)および比較例 1 (条件 2)の測定結果を、下記表 2に示す。な お、同表において、吸光度変化量が 0.0050以上を陽性（+ )とし、 0.0050未満を 陰性（一）と判定した。
[0045] [表 2]
検体^ 実施例 1 (条件 1) 比較例 1 (条件 2 )
吸光度変化量 判定 吸光度変化量 判定
1 0. 0012 0. 0203 +
2 0. 0027 ― 0. 0063 +
3 0. 0032 0. 0107 +
4 0. 0016 - 0. 0054 +
5 0. 0021 0. 0044 -
6 0. 0025 - 0. 0173 十
7 0. 0021 一 0. 0091 +
8 0. 0023 ― 0. 0100 +
9 0. 0023 0. 01 2 +
10 0. 0015 ― 0. 0177 +
11 0. 0029 0. 0201 +
12 0. 0020 - 0. 0055 +
13 0. 0020 0. 0013
14 0. 0029 0. 0128 +
[0046] 前記表 2に示すように、ラテックス凝集法による溶血性連鎖球菌の測定にぉ 、て、 陽イオン交換処理を行わない比較例 1 (条件 2)では、溶菌性連鎖球菌が陰性である 検体を使用したにも関わらず、 14検体中 12検体で非特異的な凝集反応による偽陽 性が生じた。一方、予め陽イオン交換処理を行った実施例 1(条件 1)では、 14検体 すべてが本来の陰性結果となった。
[0047] この結果より、ラテックス凝集法による免疫凝集法において検体に予め陽イオン交 換処理を施すことにより、非特異的反応が充分に抑制できることがわ力つた。
実施例 2
[0048] 1.抗インフルエンザ A型抗体感作ラテックス試薬の調製
抗インフルエンザ A型マウスモノクローナル抗体および 50mMリン酸緩衝液（pH7. 4)を用いて抗体液 (抗体濃度 0.8mg/mL)を調製した。前記実施例 1の抗溶血性 連鎖球菌抗体感作ラテックス試薬と同様にして、前記抗体液を用いて抗インフルェン ザ A型抗体感作ラテックス試薬を調製した。 [0049] 2.ラテックス凝集法によるインフルエンザ A型抗原の測定
抗原は、精製インフルエンザ A型ウィルス AZKievZ30lZ94 (H3N2)を用いた 。実施例 1で使用した検体希釈液を用いて前記抗原を希釈し、 2種類の抗原濃度の 抗原液 (4 /z gZmLおよび 20 /z gZmL)を調製した。ついで、測定の直前に、下記 の組成の検体抽出液で前記各濃度の抗原液を 10倍希釈し、それを検体液として以 下の測定に用いた。なお、抗原の濃度が OngZmLの検体液は、前記検体希釈液を 前記検体抽出液で 10倍希釈することにより調製した。
[0050] (検体抽出液）
0. 4mg/mL セミアノレカリプロテアーゼ
1直量 % n— uctanoyl— N— methylgiucamide
0. 5重量％ BSA
0. 9重量％ NaCl
0. 1重量％ EDTA- 2Na
50mM Tris— HC1緩衝液（pH8. 4)
[0051] 前記抗体感作ラテックス試薬 56 μ L、前記検体液 28 μ Lおよび反応用緩衝液 56
/z Lをキュベット内で混合し、前記実施例 1と同様にして、測定波長 660nmにおける 吸光度の変化を測定した。その結果を下記表 3に示す。なお、前記反応用緩衝液は 、下記組成のものを使用した。
[0052] (反応用緩衝液）
2. 1重量0 /0 ポリエチレングリコール 20000 (ナカライ社製）
1重量％ BSA
0. 9重量％ NaCl
0. 1重量％ EDTA- 2Na
0. 1重量％ NaN
3
200mM Tris— HC1緩衝液（pH8. 4)
[0053] [表 3] 抗原濃度 吸光度変化量
( a g m L ) ( 6 6 0 n m)
0 - 0 . 0 0 3 9
4 0 . 0 3 4 4
_ 2 0 0 . 1 0 4 3
[0054] 前記表 3に示すように、インフルエンザ A型ウィルス濃度に応じて、吸光度変化量が 増加していることから、ラテックス凝集法により定量的にインフルエンザ A型ウィルス量 を測定できることが確認できた。
[0055] 3.インフルエンザ A型ウィルス陰性検体の測定
症状力 判断して明ら力にインフルエンザ A型ウィルスに感染していない人力 鼻 腔吸引液を採取した。その鼻腔吸引液力 Sインフルエンザ A型ウィルス陰性であること を、市販のインフルエンザウイルス検出キット（商品名：キヤピリア FluAZB ;日本べク トン'ディキンソン社製)を用いて確認した。陰性が確認された人力ゝら採取した鼻腔吸 引液を綿棒に力もませ、前記検体抽出液 lmLに懸濁した (以下、「懸濁液」という)。 前記懸濁液を使用し、下記の条件 1および 2でインフルエンザ A型ウィルス量を測定 した。また、比較例 2として、前記検体について下記の条件 3でインフルエンザ A型ゥ ィルス量を測定した。
[0056] (実施例 2— 1 :条件 1)
前記懸濁液を、 COSMOGEL (登録商標） 30SP (商品名）（陽イオン交換担体 (官 能基:スルホン酸基、粒子径： 10 m)；ナカライテスタ製）に添加して 2分間放置する ことによって陽イオン交換処理を施した。ついで、前記「2.ラテックス凝集法〖こよる溶 血性連鎖球菌抗原の測定」と同様にして、測定波長 660nmにおける吸光度の変化 を測定した。
[0057] (実施例 2— 2 :条件 2)
前記懸濁液を、 COSMOGEL (登録商標） 30CM (商品名）（陽イオン交換担体（ 官能基:カルボキシル基、粒子径： 10 m)；ナカライテスタ製）に添加して 2分間放置 することによって陽イオン交換処理を施した。ついで、前記条件 1と同様にして吸光 度の変化を測定した。
[0058] (比較例 2 :条件 3) 前記懸濁液をそのまま使用して、前記条件 1と同様にして吸光度の変化を測定した
[0059] 前記条件 1〜3の測定結果を下記表 4に示す。同表の実施例において、検体番号 1〜4が、条件 1の方法で陽イオン交換処理を施した検体の測定結果であり（実施例 2— 1)、検体番号 5〜7が、条件 2の方法で陽イオン交換処理を施した検体の測定結 果である（実施例 2— 2)。なお、同表において、吸光度変化量が 0. 0050以上を陽 性（+ )とし、 0. 0050未満を陰性（一）と判定した。
[0060] [表 4]
検体番号 実施例 2 比較例 2
吸光度変化量 判定 吸光度変化量 判定
1 一 0 . 0 0 0 9 一 0 . 0 5 5 6 +
2 0 . 0 0 1 8 一 0 . 0 5 3 6 +
3 0 . 0 0 1 4 - 0 . 0 5 6 9 +
4 一 0 . 0 0 3 3 - 0 . 0 5 8 2 +
5 0 . 0 0 3 8 一 0 . 0 9 9 2 +
6 0 . 0 0 0 8 一 0 . 0 5 3 6 +
7 0 . 0 0 2 3 - 0 . 0 5 3 6 +
[0061] 前記表 4に示すように、ラテックス凝集法によるインフルエンザ A型ウィルスの測定 において、陽イオン交換処理を行わない比較例 2 (条件 3)では、インフルエンザ A型 ウィルスが陰性である検体を使用したにも関わらず、 7検体中すべての検体で非特 異的な凝集反応による偽陽性が生じた。一方、陽イオン交換処理を行った実施例 2 ( 条件 1および 2)では、すべての検体が本来の陰性結果となった。
[0062] この結果より、ラテックス凝集法による免疫凝集法において、検体に陽イオン交換処 理を施すことにより、非特異的反応が充分に抑制できることがわ力つた。
[0063] なお、以上の実施例 1および 2では、予め陰性を確認した検体を用いて本発明の測 定方法を行った例を示したが、本発明の測定方法によれば、陽性の検体では、陽性 反応が検出されることがわ力つて 、る。
産業上の利用可能性
[0064] 以上説明したように、本発明の免疫測定方法および測定用キットによれば、非特異 的な反応を防止できるため、偽陽性が発生することなぐ検出および定量精度の高い 免疫測定方法を実現できる。したがって、本発明の免疫測定方法は、例えば、医学 および生物学等の広い分野に適用でき、中でも、臨床検査の分野に特に有用である

Claims

請求の範囲
[1] 検体中の測定対象物質を検出または定量する免疫測定方法であって、
検体と、前記検体中の測定対象物質と反応する抗体を感作させた抗体感作粒子と を混合する工程、および、
抗原抗体反応による前記抗体感作粒子の凝集を測定する工程を含み、 前記混合工程に先立ち、陽イオン交換物質を用いて前記検体を前処理する工程 を含む免疫測定方法。
[2] 前記陽イオン交換物質が、陽イオン交換榭脂である請求の範囲 1記載の免疫測定 方法。
[3] 前記陽イオン交換物質が、強酸性陽イオン交換物質および弱酸性陽イオン交換物 質の少なくとも一方である請求の範囲 1記載の免疫測定方法。
[4] 前記陽イオン交換物質が、官能基としてスルホン酸基又はカルボキシル基を有する 陽イオン交換物質である請求の範囲 1記載の免疫測定方法。
[5] 前記陽イオン交換榭脂が、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリスチレン一ジビ -ルベンゼン共重合体にスルホン酸基又はカルボキシル基を導入した榭脂、および 、親水性メタタリレート系ポリマーにスルホン酸基又はカルボキシル基を導入した榭脂 から選択される少なくとも 1つである請求の範囲 2記載の免疫測定方法。
[6] 前記陽イオン交換物質の形態が、陽イオン交換フィルターおよび陽イオン交換カラ ムの少なくとも一方である請求の範囲 1記載の免疫測定方法。
[7] 前記陽イオン交換フィルターが、球状の陽イオン交換榭脂を担体に担持させたフィ ルターまたは繊維状の陽イオン交換榭脂を含むフィルターである請求の範囲 6記載 の免疫測定方法。
[8] 前記抗体が、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の少なくとも一方である 請求の範囲 1記載の免疫測定方法。
[9] 前記抗体感作粒子が、不溶性担体粒子に抗体を感作させた抗体感作粒子である 請求の範囲 1記載の免疫測定方法。
[10] 前記不溶性担体粒子が、ラテックス粒子である請求の範囲 9記載の免疫測定方法
[11] 前記測定対象物質が、菌またはウィルスである請求の範囲 1記載の免疫測定方法
[12] 前記測定対象物質が、溶血性連鎖球菌、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、 RSゥイノレス、百日咳菌、クラミジァ 'トラコマティス、コロナゥイノレスおよびマイコプラズ マ力 なる群力 選択される少なくとも 1つである請求の範囲 1記載の免疫測定方法
[13] 請求の範囲 1記載の免疫測定方法に使用する免疫測定用キットであって、検体中 の測定対象物質と反応する抗体を感作させた抗体感作粒子と、陽イオン交換物質と を含む免疫測定用キット。
[14] 前記陽イオン交換物質が、陽イオン交換榭脂である請求の範囲 13記載の測定用 やット。
[15] 前記陽イオン交換物質が、官能基としてスルホン酸基又はカルボキシル基を有する 陽イオン交換物質である請求の範囲 14記載の測定用キット。
[16] 前記陽イオン交換榭脂が、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリスチレンージビ
-ルベンゼン共重合体にスルホン酸基又はカルボキシル基を導入した榭脂、および
、親水性メタタリレート系ポリマーにスルホン酸基又はカルボキシル基を導入した榭脂 力も選択される少なくとも 1つである請求の範囲 14記載の測定用キット。
[17] 前記陽イオン交換物質の形態が、陽イオン交換フィルターおよび陽イオン交換カラ ムの少なくとも一方である請求の範囲 13記載の測定用キット。
[18] 前記抗体感作粒子が、不溶性担体粒子に抗体を感作させた抗体感作粒子である 請求の範囲 13記載の測定用キット。
[19] 前記不溶性担体粒子が、ラテックス粒子である請求の範囲 18記載の測定用キット。
[20] さらに、試薬を含む試薬パックを含み、前記試薬が前記抗体感作粒子を含む請求 の範囲 13記載の測定用キット。
[21] 前記試薬パックが、使い捨て可能なカートリッジ形状である請求の範囲 20記載の測 定用キット。
[22] さらに、検体希釈液、反応用緩衝液、検体採取器具および検体抽出液からなる群 力も選択される少なくとも 1つを含む請求の範囲 13記載のキット。
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