CN101147065A - 免疫测定方法及该方法中使用的免疫测定用试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供使用了抗体致敏粒子的免疫测定方法,可以防止假阳性的发生。本发明的免疫测定方法为通过将使与检体中的测定对象物质发生反应的抗体致敏而得到的抗体致敏粒子与检体进行混合,利用抗原抗体反应对所述抗体致敏粒子的凝集进行测定,从而检测或定量所述检体中的测定对象物质的免疫测定方法,在所述混合之前包括使用阳离子交换物质对所述检体进行前处理。作为所述阳离子交换物质,例如可以使用具有磺酸基或羧基作为官能团的阳离子交换物质,其形态没有特别限定,例如可以是阳离子交换滤器和阳离子交换柱等。
Description
技术领域
本发明涉及免疫测定方法及该方法中使用的免疫测定用试剂盒。
背景技术
近年来,开发了利用抗原抗体反应、从测定开始在数分钟~数十分钟内即可检测或定量测定项目的简易检查试剂及试剂盒。测定项目为感染症时,如果能够当场判断采集于患者的检体有无感染,则可以在症状的早期对患者进行治疗。因此,这种简易检查试剂及试剂盒的重要性在医疗现场逐年提高。
目前,作为简易检查方法之一,广泛使用胶乳凝集法等免疫测定方法。胶乳凝集法是利用抗原抗体反应使抗体致敏了的胶乳粒子与检体中的目标抗原发生结合、凝集,并根据其凝集的程度来检测有无感染的方法。该方法也可以根据检体的浓度、通过目视判定凝集块或利用使用了自动分析装置的吸光度测定来进行定量检查。
但是,当使用胶乳凝集法等免疫测定方法分析检体(例如咽喉擦试液等)时,有产生假阳性的问题。即下述问题:尽管测定对象物质不存在于检体中,但由于非特异性反应,粒子发生结合、凝集,因此会判定为阳性。这样,如果在确定病原体的感染时产生假阳性,则关于病患会给出错误的信息。结果,造成原因确定的延迟或施以不恰当的治疗,也会引起病状变得更加严重等重大的问题。因此,抑制假阳性的发生是极为重要的课题。
以往,为了解决该问题,提出了预先使用过滤滤器等、利用其孔径的大小对检体进行筛分,从而抑制假阳性发生的方法(例如专利文献1)。但是,该方法在使用了膜固相的EIA(酶免疫测定法)中发挥了其效果,但在如胶乳凝集法那样使用了抗体致敏粒子的免疫测定方法中却无法获得充分的效果。
专利文献1:日本特开2004-28875号公报
发明内容
因此,本发明的目的在于提供在使用了抗体致敏粒子的免疫测定方法中防止假阳性的发生、检测精度和定量精度高的免疫测定方法以及在该方法中使用的测定用试剂盒。
为了达成上述目的,本发明的免疫测定方法是对检体中的测定对象物质进行检测或定量的免疫测定方法,其特征在于,其包含以下工序:将检体和使与上述检体中的测定对象物质发生反应的抗体致敏而得到的抗体致敏粒子进行混合的工序;利用抗原抗体反应对上述抗体致敏粒子的凝集进行测定的工序,并且在上述混合工序之前包括使用阳离子交换物质对上述检体进行前处理的工序。
另外,本发明的免疫测定用试剂盒是本发明的免疫测定方法中使用的免疫测定用试剂盒,其特征在于,包含使与检体中的测定对象物质发生反应的抗体致敏而得到的抗体致敏粒子和阳离子交换物质。
这样,如果使用阳离子交换物质对检体进行前处理,则可以防止非特异性反应。因此,可以抑制假阳性的发生,可以实现检测精度和定量精度高的免疫测定方法。
具体实施方式
接着,详细地说明本发明。
上述阳离子交换物质没有特别限定,例如可以列举出强酸性阳离子交换物质和弱酸性阳离子交换物质,其中,优选为具有磺酸基或羧基作为官能团的阳离子交换物质。另外,上述阳离子交换物质还可以具有磺酸基和羧基两者作为官能团。
作为上述阳离子交换物质,例如可以列举出阳离子交换树脂,其中优选为具有磺酸基和羧基中的至少一个作为官能团的树脂。作为上述阳离子交换树脂的具体例子,可以列举出聚醚砜、聚砜、在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物中引入了磺酸基和羧基中的至少一个后得到的树脂、在亲水性甲基丙烯酸酯系聚合物中引入了磺酸基和羧基中的至少一个后得到的树脂等。其中,优选为聚醚砜和在亲水性甲基丙烯酸酯系聚合物中引入了磺酸基和羧基中的至少一个后得到的树脂。上述阳离子交换树脂的形状没有特别限定,例如可以列举出球状、膜和纤维等。
上述阳离子交换树脂的形态没有特别限定,例如优选为阳离子交换滤器或阳离子交换柱等。作为上述阳离子交换滤器,例如可以列举出将球状的阳离子交换树脂担载在载体上后得到的滤器,含有纤维状的阳离子交换树脂的滤器等。上述载体的材质例如优选为棉等阳离子交换树脂以外的材质,其形状优选为纤维状。作为在上述载体上担载阳离子交换树脂后得到的滤器,例如可以列举出将粉末状的聚醚砜担载在脱脂棉等上后得到的滤器等。另外,含有上述纤维状的阳离子交换树脂的滤器例如可以列举出用聚醚砜纤维编织成的滤器等。作为上述阳离子交换柱,例如可以列举出将上述阳离子交换树脂填充到管中的柱等。
与上述测定对象物质发生反应的抗体没有特别限定,例如可以列举出与测定对象物质特异性地发生反应而结合的多克隆抗体和单克隆抗体等。
上述抗体致敏粒子例如可以使用使上述抗体致敏于粒子的物质。上述粒子没有特别限定,可以列举出不溶性载体粒子,作为上述不溶性载体粒子,例如可以列举出聚苯乙烯胶乳粒子等胶乳粒子、聚丙烯粒子、聚乙烯粒子、明胶粒子、金属胶体等,其中优选为聚苯乙烯胶乳粒子。上述抗体致敏粒子优选为使抗体致敏于上述聚苯乙烯胶乳粒子后得到的抗体致敏胶乳粒子。另外,抗体对粒子的致敏可以通过以往公知的方法进行。
另外,在本发明的免疫测定方法中,还可以使用具有上述抗体致敏粒子的组件。作为上述组件,例如可以列举出含有试剂的试剂包装等,优选上述试剂含有上述抗体致敏粒子。上述试剂包装例如优选为可以一次性使用的盒式形状,更优选为具有2个以上的槽、且具备含有上述试剂的试剂槽作为上述槽的至少1个。上述试剂包装除了上述试剂槽之外,还优选含有例如进行反应的反应槽、放入检体的检体槽、装废液的废弃槽和分注头(dispensing tip)等。通过使用具备这种槽的试剂包装,例如由于不需要试剂的调制等,因此可以连续地进行检体的前处理和测定。结果,测定变得更为简便,并且在自动化装置中的适用也变得极为容易。作为上述试剂包装,例如可以使用日本特开2001-318101号公报所记载的免疫测定用盒。上述盒例如含有上述试剂槽和反应槽,进而还可以含有检体槽、废弃槽和分注头等。上述试剂槽和反应槽的个数没有特别限定,可以是1个,也可以是2个以上。这些槽的配置没有特别限定,例如具有多个试剂槽和反应槽、且它们串联地配置时,优选上述试剂槽和上述反应槽交替地配置。另外,上述试剂槽和上述反应槽的上部优选例如用氧化铝箔或高分子薄膜等进行密封。作为上述试剂,例如可以使用后述的反应用缓冲液等。
作为本发明中使用的免疫测定方法,例如可以列举出胶乳凝集法。本发明优选在胶乳凝集法中适用。
上述测定对象物质例如可以列举出细菌或病毒等。本发明的免疫测定方法中,通过对上述细菌或上述病毒的特定抗原进行检测或定量,可以检测或定量上述细菌或上述病毒。作为上述细菌和上述病毒的具体例子,可以列举出溶血性链球菌、流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial virus)、百日咳菌、沙眼衣原体、冠状病毒(SARS)和支原体等。特别地,本发明的免疫测定方法对于溶血性链球菌和流感病毒是有用的。
上述检体没有特别限定,例如可以列举出来自于鼻涕的检体和来自于咽喉的检体等。上述来自于鼻涕的检体例如可以列举出鼻腔擦拭液、鼻腔吸引液和鼻腔洗涤液等。另外,上述来自咽喉的检体例如可以列举出咽喉擦拭液和唾液等。
下面,本发明的测定用试剂盒如上所述,是在本发明的免疫测定方法中使用的免疫测定用试剂盒,其含有使与检体中的测定对象物质发生反应的抗体致敏而得到的抗体致敏粒子和阳离子交换物质。
本发明的测定用试剂盒还可以进一步含有包含试剂的试剂包装,优选上述试剂含有上述抗体致敏粒子。上述试剂包装例如优选为可一次性使用的盒式形状,更优选具有2个以上的槽、且具备含有上述试剂的试剂槽作为上述槽。而且,上述试剂包装优选含有反应槽、检体槽、分注头和废弃槽等。本发明的测定用试剂盒含有具有多个槽的试剂包装时,可以更为简便地实施本发明的免疫测定方法,而且,在自动化装置中的适用也变得极为容易。
本发明的测定用试剂盒为了进一步提高其便利性,优选进一步含有例如检体稀释液、反应用缓冲液、检体采集器具和检体提取液等中的至少一种。
作为本发明的测定用试剂盒,例如可以列举出在上述免疫测定用盒中适当密封上述抗体致敏粒子和阳离子交换物质、以及检体稀释液、反应用缓冲液、检体采集器具和检体提取液中的至少一种而得到的试剂盒。
上述检体稀释液为用于在测定前稀释检体的试剂,例如可以根据测定对象物质或检体等进行适当决定。上述检体稀释液没有特别限定,例如可以列举出含有BSA和NaN3等的PBS等。另外,根据检体的种类或量等,还可以省略上述检体稀释液。
上述反应用缓冲液例如可以根据测定对象物质等适当决定,没有特别限定,例如可以列举出Tris-HCl缓冲液及磷酸缓冲液等。上述反应用缓冲液例如还可以含有聚乙二醇(PEG20000)等、BSA(牛血清白蛋白)、NaCl和EDTA·2Na、NaN3等。
上述检体采集器具例如可以兼用上述分注头,还可以是棉棒等。
上述检体提取液例如为提取核蛋白等所使用的试剂,可以根据测定对象物质或检体等适当决定,没有特别限定,例如可以使用缓冲液等。
上述缓冲液例如可以列举出CHES(N-环己基-2-氨基乙磺酸)缓冲液、磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液和CAPS(N-环己基-3-氨基丙磺酸)缓冲液等。上述检体提取液例如还可以含有半碱蛋白酶、正辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、BSA、NaCl、CaCl2、EDTA·2Na和NaN3等。
以下说明本发明的测定方法的一个例子,但并不限于以下的方法。首先,以使用来自于咽喉的检体作为检体、测定对象物质为溶血性链球菌的情况为例进行说明。
首先,准备阳离子交换物质。作为上述阳离子交换物质,可以使用上述物质,例如优选为在玻璃滤器之间配置上述阳离子交换滤器,并将其填充到由聚乙烯形成的喷嘴内所得到的物质等。另外,作为上述阳离子交换物质,还可以使用市售的阳离子交换滤器和阳离子交换柱。
接着,将从咽喉采集的来自于咽喉的检体例如与2M亚硝酸钠溶液和1M醋酸溶液混合后,进行中和,调制检体液。当检体量为微量时,例如可以用含有1重量%BSA和0.1重量%NaN3的PBS(pH为7.4)等检体稀释液将检体预先混悬。
然后,使用上述阳离子交换物质对上述检体液进行阳离子交换处理。接着,将处理后的检体液、抗溶血性链球菌抗体致敏胶乳试剂和反应用缓冲液进行混合,并检测其凝集程度。凝集程度的检测例如可以通过使用了分光光度计等自动控制的光学测定装置的浊度测定来进行,还可以在载玻片上等通过目视确认有无凝集。上述抗溶血性链球菌抗体致敏胶乳试剂可以使用自己调制的试剂,还可以使用市售的试剂。
接着,以测定对象物质为流感病毒的情况为例进行说明。
对于流感病毒,优选通过本发明的免疫测定方法鉴别例如A型和B型。在上述鉴别中使用的抗体例如优选为对核蛋白特异性的抗体。由于流感病毒表面蛋白的血细胞凝集素等的抗原性不断变异,因此如果使用恒定的抗血细胞凝集素抗体,则由于流行的病毒的亚型不同,反应性不同,根据情况还有不发生反应的可能性。但是,由于核蛋白维持了成为分类A型和B型时的基本的抗原性,与亚型的种类无关地显示出恒定的反应性,因此适于A型和B型的鉴别。核蛋白由于局部存在于由病毒粒子的脂质双层膜构成的包膜内部,而不存在于病毒表面,因此优选首先例如通过反复进行超声波处理或冷冻融解等将病毒粒子进行物理破坏、或者通过表面活性剂等进行化学处理的方法等将核蛋白进行提取。作为上述化学处理方法,例如有利用Tween20(商品名、通用名:聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯)或正辛酰基-N-甲基葡糖酰胺(例如商品名:MEGA-8)等非离子性表面活性剂等进行提取的方法。在EIA法或免疫色谱法等中,作为上述表面活性剂,通常使用Tween20等,但如本发明那样使用抗体致敏粒子的凝集进行抗原抗体反应时,优选正辛酰基-N-甲基葡糖酰胺(例如商品名:MEGA-8),这是由于对粒子凝集反应的反应性的影响很小,且提取效果高。接着,优选使用如此提取的核蛋白,通过本发明的免疫测定方法进行鉴别。
下面,与比较例一起说明本发明的实施例。但是,本发明并不限于以下实施例。
实施例1
1.抗溶血性链球菌抗体致敏胶乳试剂的调制
使用抗溶血性链球菌兔多克隆抗体和50mM硼酸缓冲液(pH为7.4),调制抗体液(抗体浓度为0.7mg/mL)。将上述抗体液0.5mL与1%(w/v)聚苯乙烯胶乳粒子(积水化学公司生产、平均粒径为0.5μm)0.5mL混合,在37℃下孵育1小时,从而使上述抗溶血性链球菌兔多克隆抗体致敏于上述聚苯乙烯胶乳粒子。接着,添加BSA(Sigma公司生产)使得达到1重量%。在37℃下孵育1小时,进行封闭。利用磷酸缓冲液洗涤封闭了的抗体致敏胶乳粒子后,将上述胶乳粒子分散在胶乳分散缓冲液(50mM Tris-HCl缓冲液(pH为8.4)、0.1重量%BSA、0.1重量%NaN3)中,调制抗溶血性链球菌抗体致敏胶乳试剂(粒子浓度为0.1%(w/v))。
2.利用胶乳凝集法测定溶血性链球菌抗原
抗原使用将化脓性链球菌(A组3型)Su株进行青霉素处理后得到的溶链菌制剂(Picibanil)(中外制药公司生产)。使用检体稀释液(含有1重量%BSA和0.1重量%NaN3的PBS(pH为7.4))稀释上述抗原,调制2种抗原浓度的抗原液(10ng/mL和50ng/mL)。接着,在马上要测定前,将上述各浓度的抗原液、2M亚硝酸钠溶液和1M醋酸溶液混合后进行中和,调制检体液。另外,抗原的浓度为0ng/mL的检体液通过在混合上述检体稀释液、2M亚硝酸钠溶液和1M醋酸溶液后进行中和而调制。
在比色杯内混合上述抗体致敏胶乳试剂63μL、上述检体液14μL和反应用缓冲液63μL,使用免疫反应装置(商品名:Spotchem-IM、Arkray公司生产),在37℃下测定5分钟的吸光度(测定波长为660nm)变化。将其结果作为5分钟的吸光度变化量(开始测定5分钟后的吸光度一刚开始测定后的吸光度)示于下述表1中。另外,上述反应用缓冲液使用下述组成。
(反应用缓冲液)
1.9重量%聚乙二醇20000(NACALAI公司生产)
1重量% BSA
2重量% NaCl
0.1重量%EDTA·2Na
0.1重量%NaN3
200mM Tris-HCl缓冲液(pH为8.4)
表1
抗原浓度(ng/mL) | 吸光度变化量(660nm) |
0 | 0.0010 |
1 0 | 0.0070 |
50 | 0.0310 |
如上述表1所示可以确认,由于吸光度变化量随着溶血性链球菌抗原浓度的增加而增加,因此通过胶乳凝集法可以定量地测定溶血性链球菌量。
3.测定溶血性链球菌阴性检体
从由症状判断明显未感染溶血性链球菌的人采集咽喉擦拭液。使用市售的溶血性链球菌检测试剂盒(商品名:Strep A Testpack;Plusbot Japan公司生产)确认了该咽喉擦拭液为溶血性链球菌阴性。接着,使用棉棒从确认了上述阴性的人采集咽喉擦拭液,通过下述条件1测定溶血性链球菌量。另外,作为比较例1,对于上述检体,通过下述条件2测定溶血性链球菌量。
(条件1)
将上述咽喉擦拭液与2M亚硝酸钠溶液和1M醋酸溶液混合后中和,调制检体液。接着,在由聚乙烯形成的喷嘴内填充在玻璃滤器间配置有厚度为140μm的离子交换盘式过滤膜(membrane disk filter)(PALL/日本Pall公司生产、商品名:I.C.E450(注册商标)(阳离子交换树脂:聚醚砜、官能团:磺酸基、滤器的孔径:0.45μm))的提取单元。将上述检体液装入在用聚乙烯形成的检体处理用管中后,将上述喷嘴安装在上述管上。接着,通过使上述检体液通过喷嘴后过滤而进行阳离子交换处理。使用上述阳离子交换处理后的检体液,与上述“2.利用胶乳凝集法测定溶血性链球菌抗原”同样地操作,对测定波长为660nm的吸光度变化进行测定。
(比较例1:条件2)
将上述咽喉擦拭液与2M亚硝酸钠溶液和1M醋酸溶液混合后中和而得到的溶液直接使用,与上述条件1同样地测定吸光度的变化。
将上述实施例1(条件1)和比较例1(条件2)的测定结果示于下述表2中。另外,在表2中,将吸光度变化量为0.0050以上者判定为阳性(+)、小于0.0050者判定为阴性(—)。
表2
检体号 | 实施例1(条件1) | 比较例1(条件2) | ||
吸光度变化量 | 判定 | 吸光度变化量 | 判定 | |
1 | 0.0012 | 0.0203 | + | |
2 | 0.0027 | 0.0063 | + | |
3 | 0.0032 | 0.0107 | + | |
4 | 0.0016 | 0.0054 | + | |
5 | 0.0021 | 0.0044 | ||
6 | 0.0025 | 0.0173 | + | |
7 | 0.0021 | 0.0091 | + | |
8 | 0.0023 | 0.0100 | + | |
9 | 0.0023 | 0.0142 | + | |
10 | 0.0015 | 0.0177 | + | |
11 | 0.0029 | 0.0201 | + | |
12 | 0.0020 | 0.0055 | + | |
13 | 0.0020 | 0.0013 | ||
14 | 0.0029 | 0.0128 | + |
如上述表2所示,在利用胶乳凝集法进行的溶血性链球菌的测定中,在未进行阳离子交换处理的比较例1(条件2)中,尽管使用溶血性链球菌为阴性的检体,在14个检体中也有12个检体产生非特异性凝集反应所导致的假阳性。另一方面,在预先进行了阳离子交换处理的实施例1(条件1)中,所有14个检体均为本来的阴性结果。
由该结果可知,在利用胶乳凝集法进行的免疫凝集法中,通过预先对检体实施阳离子交换处理,可以充分地抑制非特异性反应。
实施例2
1.抗流感A型抗体致敏胶乳试剂的调制
使用抗流感A型小鼠单克隆抗体和50mM磷酸缓冲液(pH为7.4),调制抗体液(抗体浓度为0.8mg/mL)。与上述实施例1的抗溶血性链球菌抗体致敏胶乳试剂同样地操作,使用上述抗体液调制抗流感A型抗体致敏胶乳试剂。
2.利用胶乳凝集法测定流感A型抗原
抗原使用精制流感A型病毒A/Kiev/301/94(H3N2)。使用在实施例1中使用的检体稀释液稀释上述抗原,调制2种抗原浓度的抗原液(4μg/mL和20μg/mL)。接着,在马上要测定前,利用下述组成的检体提取液将上述各浓度的抗原液稀释1 0倍,将其作为检体液用于以下测定。另外,抗原的浓度为0ng/mL的检体液通过利用上述检体提取液将上述检体稀释液稀释10倍来调制。
(检体提取液)
0.4mg/mL半碱蛋白酶
1重量% 正辛酰基-N-甲基葡糖酰胺
0.5重量%BSA
0.9重量%NaCl
0.1重量%EDTA·2Na
50mM Tris-HCl缓冲液(pH为8.4)
在比色杯内混合上述抗体致敏胶乳试剂56μL、上述检体液28μL和反应用缓冲液56μL,与上述实施例1同样地操作,对测定波长为660nm的吸光度变化进行测定。其结果示于下述表3中。另外,上述反应用缓冲液使用下述组成。
(反应用缓冲液)
2.1重量%聚乙二醇20000(NACALAI公司生产)
1重量% BSA
0.9重量%NaCl
0.1重量%EDTA·2Na
0.1重量%NaN3
200mM Tris-HCl缓冲液(pH为8.4)
表3
抗原浓度(ng/mL) | 吸光度变化量(660nm) |
0 | -0.0039 |
4 | 0.0344 |
20 | 0.1043 |
如上述表3所示可以确认,由于吸光度变化量会随着流感A型病毒浓度的增加而增加,因此通过胶乳凝集法可以定量地测定流感A型病毒量。
3.测定流感A型病毒阴性检体
从由症状判断明显未感染流感A型病毒的人采集鼻腔吸引液。使用市售的流感病毒检测试剂盒(商品名:Capilia FluA/B;日本BectonDickinson公司生产)确认了该鼻腔吸引液为流感A型病毒阴性。使用棉棒从确认了阴性的人采集鼻腔吸引液,混悬在1mL的上述检体提取液中(以下称为“混悬液”)。使用上述混悬液,在下述条件1和2下测定流感A型病毒量。另外,作为比较例2,对于上述检体,通过下述条件3测定流感A型病毒量。
(实施例2-1:条件1)
将上述混悬液添加在COSMOGEL(注册商标)30SP(商品名)(阳离子交换载体(官能团:磺酸基、粒径:10μm);NACALAI TESQUE生产)中,放置2分钟,从而实施阳离子交换处理。接着,与上述“2.利用胶乳凝集法测定溶血性链球菌抗原”同样地操作,对测定波长为660nm的吸光度变化进行测定。
(实施例2-2:条件2)
将上述混悬液添加在COSMOGEL(注册商标)30CM(商品名)(阳离子交换载体(官能团:羧基、粒径:10μm);NACALAI TESQUE生产)中,放置2分钟,从而实施阳离子交换处理。接着,与上述条件1同样操作,测定吸光度的变化。
(比较例2:条件3)
直接使用上述混悬液,与上述条件1同样操作,测定吸光度的变化。
将上述条件1~3的测定结果示于下述表4中。在表4的实施例中,检体号1~4为通过条件1的方法实施了阳离子交换处理的检体的测定结果(实施例2-1)、检体号5~7为通过条件2的方法实施了阳离子交换处理的检体的测定结果(实施例2-2)。另外,在表4中,将吸光度变化量为0.0050以上者判定为阳性(+)、小于0.0050者判定为阴性(—)。
表4
检体号 | 实施例2 | 比较例2 | ||
吸光度变化量 | 判定 | 吸光度变化量 | 判定 | |
1 | -0.0009 | 0.0556 | + | |
2 | 0.0018 | 0.0536 | + | |
3 | 0.0014 | 0.0569 | + | |
4 | -0.0033 | 0.0582 | + | |
5 | 0.0038 | 0.0992 | + | |
6 | 0.0008 | 0.0536 | + | |
7 | 0.0023 | 0.0536 | + |
如上述表4所示,在利用胶乳凝集法进行的流感A型病毒的测定中,在未进行阳离子交换处理的比较例2(条件3)中,尽管使用流感A型病毒为阴性的检体,7个检体中也全部产生非特异性凝集反应所导致的假阳性。另一方面,在进行了阳离子交换处理的实施例2(条件1和2)中,所有的检体均为本来的阴性结果。
由该结果可知,在利用胶乳凝集法进行的免疫凝集法中,通过预先对检体实施阳离子交换处理,可以充分地抑制非特异性反应。
另外,在以上的实施例1和2中,示出了使用预先确认了阴性的检体进行本发明的测定方法的例子,但也可知,根据本发明的测定方法,对于阳性的检体,也可以检测出阳性反应。
如上所述,根据本发明的免疫测定方法和测定用试剂盒,可以防止非特异性反应,因此不会发生假阳性,可以实现检测和定量精度高的免疫测定方法。因此,本发明的免疫测定方法例如可以适用在医学和生物学等广阔的领域中,其中,在临床检查领域中是特别有用的。
Claims (22)
1.对检体中的测定对象物质进行检测或定量的免疫测定方法,其包括以下工序:将检体和使与所述检体中的测定对象物质发生反应的抗体致敏而得到的抗体致敏粒子进行混合的工序;和利用抗原抗体反应对所述抗体致敏粒子的凝集进行测定的工序,并且,在所述混合工序之前包括使用阳离子交换物质对所述检体进行前处理的工序。
2.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述阳离子交换物质为阳离子交换树脂。
3.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述阳离子交换物质为强酸性阳离子交换物质和弱酸性阳离子交换物质中的至少1种。
4.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述阳离子交换物质为具有磺酸基或羧基作为官能团的阳离子交换物质。
5.权利要求2所述的免疫测定方法,其中,所述阳离子交换树脂为选自聚醚砜、聚砜、在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物中引入了磺酸基或羧基后得到的树脂、以及在亲水性甲基丙烯酸酯系聚合物中引入了磺酸基或羧基后得到的树脂中的至少1种。
6.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述阳离子交换物质的形态为阳离子交换滤器和阳离子交换柱中的至少1种。
7.权利要求6所述的免疫测定方法,其中,所述阳离子交换滤器为在载体上担载球状的阳离子交换树脂后得到的滤器或含有纤维状的阳离子交换树脂的滤器。
8.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述抗体为多克隆抗体和单克隆抗体中的至少1种。
9.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述抗体致敏粒子为使抗体致敏于不溶性载体粒子后所得到的抗体致敏粒子。
10.权利要求9所述的免疫测定方法,其中,所述不溶性载体粒子为胶乳粒子。
11.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述测定对象物质为细菌或病毒。
12.权利要求1所述的免疫测定方法,其中,所述测定对象物质为选自溶血性链球菌、流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、百日咳菌、沙眼衣原体、冠状病毒和支原体中的至少1种。
13.在权利要求1所述的免疫测定方法中使用的免疫测定用试剂盒,其含有使与检体中的测定对象物质发生反应的抗体致敏而得到的抗体致敏粒子和阳离子交换物质。
14.权利要求13所述的测定用试剂盒,其中,所述阳离子交换物质为阳离子交换树脂。
15.权利要求14所述的测定用试剂盒,其中,所述阳离子交换物质为具有磺酸基或羧基作为官能团的阳离子交换物质。
16.权利要求14所述的测定用试剂盒,其中,所述阳离子交换树脂为选自聚醚砜、聚砜、在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物中引入了磺酸基或羧基后得到的树脂、以及在亲水性甲基丙烯酸酯系聚合物中引入了磺酸基或羧基后得到的树脂中的至少1种。
17.权利要求13所述的测定用试剂盒,其中,所述阳离子交换物质的形态为阳离子交换滤器和阳离子交换柱中的至少1种。
18.权利要求13所述的测定用试剂盒,其中,所述抗体致敏粒子为使抗体致敏于不溶性载体粒子后得到的抗体致敏粒子。
19.权利要求18所述的测定用试剂盒,其中,所述不溶性载体粒子为胶乳粒子。
20.权利要求13所述的测定用试剂盒,其中,其还含有包含试剂的试剂包装,所述试剂含有所述抗体致敏粒子。
21.权利要求20所述的测定用试剂盒,其中,所述试剂包装为可一次性使用的盒式形状。
22.权利要求13所述的测定用试剂盒,其中,其还含有选自检体稀释液、反应用缓冲液、检体采集器具和检体提取液中的至少1种。
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