WO2021065300A1 - 免疫検査方法及び濃縮用治具 - Google Patents

免疫検査方法及び濃縮用治具 Download PDF

Info

Publication number
WO2021065300A1
WO2021065300A1 PCT/JP2020/033152 JP2020033152W WO2021065300A1 WO 2021065300 A1 WO2021065300 A1 WO 2021065300A1 JP 2020033152 W JP2020033152 W JP 2020033152W WO 2021065300 A1 WO2021065300 A1 WO 2021065300A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
antigen
concentration
concentrate
superabsorbent polymer
immunoassay method
Prior art date
Application number
PCT/JP2020/033152
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
吉宏 油屋
西川　尚之
順一 片田
淳彦 和田
大 氏原
Original Assignee
富士フイルム株式会社
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 富士フイルム株式会社 filed Critical 富士フイルム株式会社
Priority to CN202080062157.0A priority Critical patent/CN114341639A/zh
Priority to JP2021550465A priority patent/JP7192146B2/ja
Priority to EP20871761.1A priority patent/EP4040151A4/en
Publication of WO2021065300A1 publication Critical patent/WO2021065300A1/ja
Priority to US17/690,101 priority patent/US20220196643A1/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/62—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving urea
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/02—Burettes; Pipettes
    • B01L3/0289—Apparatus for withdrawing or distributing predetermined quantities of fluid
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/405—Concentrating samples by adsorption or absorption
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
    • G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0631—Purification arrangements, e.g. solid phase extraction [SPE]
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/02—Identification, exchange or storage of information
    • B01L2300/025—Displaying results or values with integrated means
    • B01L2300/028—Graduation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0832—Geometry, shape and general structure cylindrical, tube shaped
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0848—Specific forms of parts of containers
    • B01L2300/0854—Double walls
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2400/00—Moving or stopping fluids
    • B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
    • B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
    • B01L2400/0478—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure pistons

Definitions

  • the present invention relates to an immunoassay method and a concentration jig.
  • Immunoassay methods are frequently used these days because they are easy to operate and can be measured in a short time.
  • an antigen such as influenza virus
  • immunochromatography the following operation is performed.
  • a label modified with an antibody (labeled antibody) is prepared and mixed with a sample containing an antigen.
  • the labeled antibody binds to the antigen to form a complex.
  • the complex is developed on an insoluble carrier having a detection line coated with an antibody that specifically reacts with an antigen, the complex is captured by reacting with the antibody on the detection line (test line) and detected visually or the like. Is confirmed.
  • Examples of such immunochromatography include immunochromatography disclosed in Patent Document 1.
  • an object of the present invention is to provide an immunoassay method having high detection sensitivity in view of the above circumstances.
  • the present inventors have found that the above problems can be solved by using a sample solution concentrated by a predetermined method, and have reached the present invention. That is, the present inventors have found that the above problems can be solved by the following configuration.
  • An immunoassay method comprising a detection step of detecting an antigen in the antigen concentrate using an antigen-antibody reaction.
  • the swelling rate of the super absorbent polymer is more than 0.2 g / g and less than 800 g / g.
  • An immunoassay method in which the antibody used in the antigen-antibody reaction is a monoclonal antibody.
  • the above detection step The antigen in a state in which a gold particle complex which is a complex of the antigen in the antigen concentrate and the modified gold particles which are gold particles modified with a first binding substance capable of binding to the antigen is formed.
  • a development step in which a second binding agent capable of binding to the insoluble carrier having an immobilized reaction site is developed.
  • a container for accommodating the super absorbent polymer is provided.
  • the container is a concentration jig having a take-in part for taking in a liquid containing the antigen and a discharge part for discharging the antigen concentrate.
  • the concentrating jig according to (9) above comprising a cylinder that is the container and a piston that can be inserted into the cylinder.
  • It It is in the shape of a dropper having a pipe part and a pump part.
  • an immunoassay method having high detection sensitivity and a concentration jig used for the immunoassay method.
  • the numerical range represented by using "-" in the present specification means a range including the numerical values before and after "-" as the lower limit value and the upper limit value.
  • each component may be used alone or in combination of two or more.
  • the content of the component means the total content unless otherwise specified.
  • the detection sensitivity and the S / N ratio (signal / noise ratio) are further improved is also referred to as "the effect of the present invention is more excellent”.
  • the immunoassay method of the present invention (hereinafter, also referred to as "method of the present invention") is A concentration step of mixing a liquid that can contain an antigen with a superabsorbent polymer to concentrate the liquid that can contain the antigen to obtain an antigen concentrate.
  • An immunoassay method comprising a detection step of detecting an antigen in the antigen concentrate using an antigen-antibody reaction.
  • the swelling rate of the super absorbent polymer is more than 0.2 g / g and less than 800 g / g.
  • the antibody used in the antigen-antibody reaction is a monoclonal antibody, which is an immunoassay method.
  • a liquid that can contain an antigen is concentrated using a super absorbent polymer having a specific swelling rate.
  • the sample liquid and the superabsorbent polymer are mixed, the water in the sample liquid is taken up by the superabsorbent polymer, whereas the antigen in the sample liquid has a certain degree of hydrodynamic radius, so that it has high water absorption.
  • the network structure on the surface of the polymer creates a sieving effect and is difficult to be incorporated into superabsorbent polymers.
  • the antigen in the sample solution is concentrated, leading to an improvement in detection sensitivity.
  • the sample liquid usually contains impurities such as low molecular weight components and salts.
  • impurities such as urea are included. From the studies by the present inventors, it has been found that when these impurities are concentrated together with the antigen, the antigen-antibody reaction is inhibited and the detection sensitivity is lowered. That is, it is known that the effect of improving the detection sensitivity by concentration cannot be sufficiently obtained.
  • the method of the present invention is based on the above findings and the like.
  • the concentration step is a step of concentrating the sample solution by mixing a solution (sample solution) that can contain an antigen and a superabsorbent polymer to obtain an antigen concentrate (a solution in which the antigen is concentrated).
  • a solution sample solution
  • a superabsorbent polymer a solution in which the antigen is concentrated.
  • the swelling rate of the super absorbent polymer is more than 0.2 g / g and less than 800 g / g.
  • sample solution used in the concentration step is not particularly limited as long as it can contain an antigen.
  • fluids include, for example, biological samples, especially animal (particularly human) body fluids (eg, blood, serum, plasma, cerebrospinal fluid, tears, sweat, urine, pus, runny nose, or sputum). Mouthwash and the like can be mentioned.
  • the sample solution is preferably urine because the effect of the present invention is more excellent.
  • the concentration of urea in the antigen concentrate obtained in the concentration step is preferably 5 times or less the concentration of urea in the sample solution for the reason that the effect of the present invention is more excellent. ..
  • antigen examples include bacteria, bacteria (for example, Mycobacterium tuberculosis, lipoarabinomannan (LAM) contained in Mycobacterium tuberculosis), bacteria, viruses (for example, influenza virus), and their nucleoproteins.
  • LAM is a major antigen in tuberculosis and a glycolipid which is a major constituent of cell membranes and cell walls.
  • the antigen is more preferably a virus (particularly influenza virus) or LAM, and even more preferably LAM, for the reason that the effects of the present invention are more excellent.
  • the sample solution is obtained as it is, in the form of an extract obtained by extracting an antigen with an appropriate extraction solvent, and further by diluting the extract with an appropriate diluent. It can be used in the form of a diluted solution or in the form of a concentrated extract by an appropriate method.
  • a solvent used in a usual immunological analysis method for example, water, physiological saline, buffer solution, etc.
  • a direct antigen-antibody reaction is carried out by diluting with such a solvent. It is also possible to use a water-miscible organic solvent that can be used.
  • the superabsorbent polymer used in the concentration step is a polymer having a swelling rate of more than 0.2 g / g and less than 800 g / g (hereinafter, also referred to as “specific superabsorbent polymer”).
  • the swelling rate is a value defined as "mass (g) of water held by 1 g of super absorbent polymer”.
  • the specific superabsorbent polymer is not particularly limited as long as the swelling rate is more than 0.2 g / g and less than 800 g / g, but for the reason that the effect of the present invention is more excellent, polyacrylic acid-based, polyacrylamide-based, cellulose-based, etc. Alternatively, it is preferably a polyethylene oxide-based polymer.
  • the swelling rate of the specific superabsorbent polymer is more than 0.2 g / g and less than 800 g / g.
  • it is preferably 1.0 g / g or more and 600 g / g or less, more preferably 10 g / g or more and 500 g / g or less, and 20 g / g or more and 100 g. It is more preferably / g or less.
  • the method of adjusting the swelling rate to the above-mentioned specific range is not particularly limited, and examples thereof include changing the type of polymer, changing the molecular weight of the polymer, changing the degree of cross-linking, and changing the particle size.
  • the water absorption rate of the specific superabsorbent polymer is not particularly limited, but for the reason that the effect of the present invention is more excellent, it is preferably 0.01 g / min or more and 40 g / min or less per 1 g of the superabsorbent polymer, and the superabsorbent polymer has high water absorption. More preferably, it is 0.02 g / min or more and 40 g / min or less per 1 g of the polymer.
  • the water absorption rate is measured as follows.
  • the mass of the superabsorbent polymer stored at 25 ° C. and 5% RH (relative humidity) for 10 days is measured (weight M 0 , unit g), and immediately after that, it is immersed in a large amount of distilled water. After 10 minutes, the superabsorbent polymer is removed, surface water is removed and the mass is measured (mass M 10 ). Immediately after the mass measurement, it is immersed again in a large amount of distilled water. After 10 minutes, the superabsorbent polymer is removed, surface water is removed, and the mass is measured again (mass M 20 ). Immediately after measuring the mass M 20 , it is re-immersed in a large amount of distilled water. After 10 minutes, the superabsorbent polymer is removed, surface water is removed and weighed again (mass M 30 ).
  • the specific superabsorbent polymer is preferably in the form of particles, and the particle size in that case is preferably 10 mm or less, more preferably 8 mm or less, and 5 mm or less, for the reason that the effect of the present invention is more excellent. Is more preferable.
  • the lower limit of the particle size of the specific superabsorbent polymer is preferably 0.001 mm or more, more preferably 0.005 mm or more, and more preferably 0.01 mm or more, for the reason that the effect of the present invention is more excellent. Is even more preferable.
  • the diameters of 50 particulate polymers can be measured with an optical microscope, and the arithmetic mean value thereof can be used as the particle size.
  • the amount of the specific superabsorbent polymer used is not particularly limited, but for the reason that the effect of the present invention is more excellent, it is preferably 0.01 to 100 g, preferably 0.1 to 50 g, based on 1 mL of the sample solution. Is more preferable.
  • the procedure of the concentration step is not particularly limited, and examples thereof include a method of mixing a sample solution and a specific superabsorbent polymer to recover a sample solution (antigen concentrate) that has not been absorbed by the specific superabsorbent polymer. Be done.
  • the method of mixing the sample solution and the specific superabsorbent polymer is also not particularly limited, and examples thereof include a method of blending the sample solution with the specific superabsorbent polymer, stirring the mixture, and allowing the sample solution to stand.
  • the detection step is a step of detecting the antigen in the antigen concentrate obtained in the above-mentioned concentration step by using the antigen-antibody reaction.
  • the antibody used for the antigen-antibody reaction is a monoclonal antibody. Therefore, there is little concern that the method of the present invention will be false positive.
  • the detection step is not particularly limited as long as it uses an antigen-antibody reaction, and is, for example, an enzyme immunoassay (EIA), a solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), a radioimmunoassay (RIA), or a fluorescence immunoassay. (FIA), Western blotting, immunochromatography and the like.
  • EIA enzyme immunoassay
  • ELISA solid phase enzyme-linked immunosorbent assay
  • RIA radioimmunoassay
  • FFA fluorescence immunoassay
  • Western blotting immunochromatography and the like.
  • immunochromatography is preferable because the effect of the present invention is more excellent. That is, the method of the present invention is preferably immunochromatography.
  • the detection step is performed because the effect of the present invention is more excellent.
  • the antigen in a state in which a gold particle complex which is a complex of the antigen in the antigen concentrate and the modified gold particles which are gold particles modified with a first binding substance capable of binding to the antigen is formed.
  • a development step in which a second binding agent capable of binding to the insoluble carrier having an immobilized reaction site is developed.
  • at least one of the first binding substance and the second binding substance is a monoclonal antibody. For the reason that the effect of the present invention is more excellent, it is preferable that both the first binding substance and the second binding substance are monoclonal antibodies.
  • the developing step is a gold particle which is a complex of an antigen in the antigen concentrate obtained in the above-mentioned concentration step and a modified gold particle which is a gold particle modified with a first binding substance capable of binding to the antigen.
  • This is a step of developing a second binding substance capable of binding to the antigen on an insoluble carrier having an immobilized reaction site in a state where the complex is formed.
  • Gold particle composite As described above, in the developing step, first, the antigen in the antigen concentrate obtained in the above-mentioned concentration step and the modified gold particles which are gold particles modified with the first binding substance capable of binding to the antigen are combined. A gold particle complex, which is a complex, is formed.
  • the modified gold particles are gold particles modified with a first binding substance capable of binding to the antigen.
  • Gold particles are not particularly limited. The gold particles act as a catalyst for reducing silver ions in the silver amplification step described later.
  • the particle size of the gold particles is preferably 100 nm or less, more preferably 50 nm or less, further preferably 30 nm or less, still more preferably 15 nm or less, for the reason that the effects of the present invention are more excellent. Is particularly preferable.
  • the lower limit of the particle size of the gold particles is not particularly limited, but for the reason that the effect of the present invention is more excellent, it is preferably 1 nm or more, more preferably 2 nm or more, and further preferably 5 nm or more. ..
  • the particle size can be measured with a commercially available particle size distribution meter or the like.
  • a measurement method of the particle size distribution optical microscopy, confocal laser microscopy, electron microscopy, atomic force microscopy, static light scattering, laser diffraction, dynamic light scattering, centrifugal sedimentation, electric pulse Measurement methods, chromatography methods, ultrasonic attenuation methods, etc. are known, and devices corresponding to each principle are commercially available.
  • a dynamic light scattering method can be preferably used because of the particle size range and ease of measurement.
  • Nanotrack UPA Nikkiso Co., Ltd.
  • dynamic light scattering particle size distribution measuring device LB-550 HORIBA, Ltd.
  • the first binding substance is not particularly limited as long as it can bind to the above antigen, but is preferably a protein for the reason that the effect of the present invention is more excellent, and an antibody (for example, a polyclonal antibody or a monoclonal antibody). Is more preferable, and a monoclonal antibody is further preferable from the viewpoint of achieving higher detection sensitivity.
  • the above antibody is not particularly limited, but for example, an antiserum prepared from the serum of an animal immunized with an antigen, an immunoglobulin fraction purified from the antiserum can be used, and the antibody is immunized with an antigen.
  • Monoclonal antibodies obtained by cell fusion using animal spleen cells or fragments thereof [eg, F (ab') 2, Fab, Fab', or Fv] can be used. Preparation of these antibodies can be carried out by a conventional method.
  • the A194-01 antibody described in International Publication No. 2017/139153 can be mentioned. All content described in WO 2017/139153 relating to A194-01 antibody is incorporated herein by reference as part of the disclosure herein.
  • an antibody having the sequence described as MoAb1 in paragraph number [0080] of WO 2013/12963 can be mentioned. All of the content described in WO 2013/129634 relating to MoAb1 antibodies is incorporated herein by reference as part of the disclosure herein.
  • the method for producing the modified gold particles is not particularly limited, and a known method can be used.
  • a known method can be used.
  • the SH bond is cleaved when approaching the gold particles and immobilized by the Au—S bond generated on the Au surface. Examples thereof include chemical bonding methods such as causing.
  • the insoluble carrier is an insoluble carrier having a reaction site (test line) on which a second binding substance capable of binding to the antigen is immobilized.
  • the insoluble carrier may have a plurality of test lines depending on the type of antigen (for example, a test line for influenza A virus and a test line for influenza B virus).
  • the insoluble carrier may have a control line on the downstream side of the test line in order to confirm the development of the gold particle composite.
  • a color-developing reagent immobilization line may be provided on the downstream side of the test line in order to detect the reducing agent solution.
  • the insoluble carrier for example, as shown in FIG.
  • the gold colloid holding pad 1 is a pad for holding gold particles (modified gold particles) modified with the first binding substance
  • the test line 2 is a line on which the second binding substance is immobilized.
  • the control line 3 is a line for confirming the development
  • the color-developing reagent immobilization line 4 is a line for detecting the reducing agent solution described later.
  • the upstream side and the downstream side mean a description intended to be developed from the upstream side to the downstream side when the gold particle composite is developed.
  • the insoluble carrier or an immunochromatographic kit having the same
  • the insoluble carrier and the immunochromatographic kit described in Japanese Patent No. 5728453 are mentioned, and Patent No. 2 relating to the insoluble carrier and the immunochromatographic kit All content described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 5728453 is incorporated herein by reference as part of the disclosure herein.
  • the insoluble carrier is preferably a porous carrier.
  • nitrocellulose membrane nitrocellulose membrane
  • cellulose membrane cellulose membrane
  • acetylcellulose membrane polysulfone membrane
  • polyethersulfone membrane nylon membrane
  • glass fiber glass fiber
  • non-woven fabric cloth, thread, etc.
  • a nitrocellulose membrane is more preferable.
  • the second binding substance is not particularly limited as long as it can bind to the above antigen. Specific examples and preferred embodiments of the second binding substance are the same as those of the first binding substance described above.
  • the second binding substance may be the same as or different from the first binding substance described above, but it is preferable that the second binding substance is a different substance for the reason that the effect of the present invention is more excellent. Further, when the first binding substance and the second binding substance are antibodies, the antibody which is the first binding substance and the antibody which is the second binding substance are different because the effects of the present invention and the like are more excellent. Aspects are preferred. When the first binding substance and the second binding substance are antibodies, the epitope of the first binding substance (a part of the antigen recognized by the first binding substance) and the epitope of the second binding substance (the first). A different embodiment of the antigen recognized by the binding substance (2) is preferable because the effect of the present invention is more excellent. The difference in the epitope of the antibody can be confirmed by, for example, ELISA (Enzyme-Linked Immuno Substance Assay).
  • the method of developing the gold particle composite on an insoluble carrier having a test line is not particularly limited, and for example, a nitrocellulose membrane 100 (or an immunochromatographic kit having the same) as shown in FIG. 1 described above). Is prepared, and the antigen concentrate obtained in the above-mentioned concentration step is dropped onto a gold colloid-holding pad and moved from the upstream side to the downstream side by using the capillary phenomenon as shown in FIG. Be done.
  • the capture step is a step of capturing the gold particle composite at the reaction site of the insoluble carrier.
  • the gold particle complex (antigen and modified gold particles) developed on the insoluble carrier in the above developing step. Complex) is captured at the reaction site (test line) of the insoluble carrier.
  • the gold particle complex is not formed, so that the gold particle complex is not captured at the reaction site of the insoluble carrier.
  • the silver amplification step is a step of silver-amplifying the gold particle composite captured in the capture step.
  • the silver amplification step is a step of forming large silver particles in the gold particle composite captured at the reaction site of the insoluble carrier by imparting silver ions to the insoluble carrier after the capture step. More specifically, it is a step in which silver ions are reduced using the gold particles of the gold particle composite as a catalyst to form silver particles (for example, a diameter of 10 ⁇ m or more). This significantly improves the detection sensitivity of the captured gold particle composite.
  • the method of imparting silver ions to the insoluble carrier after the capture step is not particularly limited, but a method of using the following reducing agent solution and the following silver amplification solution is preferable for the reason that the effects of the present invention are more excellent. Further, in addition to the reducing agent solution and the silver amplification solution, a washing solution may be used to wash the complex remaining on the insoluble carrier other than the specific binding reaction.
  • the reducing liquid may also serve as a cleaning liquid.
  • the reducing agent solution contains a reducing agent capable of reducing silver ions.
  • the reducing agent capable of reducing silver ions can be used in any inorganic or organic material or a mixture thereof as long as silver ions can be reduced to silver.
  • As the inorganic reducing agent a reducing metal salt whose valence can be changed by metal ions such as Fe 2+ , V 2+ , and Ti 3+, and a reducing metal complex salt can be preferably mentioned.
  • an inorganic reducing agent it is necessary to complex or reduce oxidized ions to remove or detoxify them.
  • citric acid or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) can be used to form a complex of Fe 3+ , which is an oxide, to make it harmless.
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • the developer used in the wet silver halide photographic photosensitive material for example, methyl gallic acid, hydroquinone, substituted hydroquinone, 3-pyrazolidones, p-aminophenols, p-phenylenediamines, hindered phenols, amidoxime).
  • Adins, catechols, pyrogallols, ascorbic acid (or derivatives thereof), and leuco pigments and other materials apparent to those skilled in the art, such as US Pat. No. 6,
  • the materials described in Nos. 020 and 117 can also be used as reducing agents.
  • Ascorbic acid reducing agent is also preferable as the reducing agent.
  • Useful ascorbic acid reducing agents include ascorbic acid and its analogs, isomers and derivatives thereof, such as D- or L-ascorbic acid and sugar derivatives thereof (eg, ⁇ -lactoascorbic acid, glucoascorbic acid, fucoascorbic acid).
  • Acid glucoheptascorbic acid, maltoascorbic acid
  • sodium salt of ascorbic acid potassium salt of ascorbic acid
  • isoascorbic acid or L-erythroascorbic acid
  • salts thereof eg alkali metal salt, ammonium salt or the present technology Salts known in the art
  • endiol type ascorbic acid enaminol type ascorbic acid, thioenoal type ascorbic acid and the like
  • endiol type ascorbic acid enaminol type ascorbic acid, thioenoal type ascorbic acid and the like
  • D, L or D, L-ascorbic acid And the alkali metal salt) or isoascorbic acid (or the alkali metal salt thereof) is preferable, and the sodium salt is a preferable salt.
  • a mixture of these reducing agents can be used.
  • the reducing agent solution is preferably flown so that the angle between the developing direction in the developing step and the developing direction of the reducing agent solution is 0 to 150 degrees for the reason that the effect of the present invention is more excellent. It is more preferable to flow the reducing agent solution so that the angle between the developing direction and the developing direction of the reducing agent liquid is 0 to 135 degrees. Examples of the method for adjusting the angle between the developing direction and the developing direction of the reducing agent liquid in the developing step include the methods described in Examples of JP-A-2009-150869.
  • the silver amplification liquid is a liquid containing a compound containing silver ions.
  • a compound containing silver ions for example, an organic silver salt, an inorganic silver salt, or a silver complex can be used.
  • silver nitrate, silver acetate, silver lactate, silver butyrate, silver thiosulfate and the like which are silver ion-containing compounds having high solubility in a solvent such as water, can be mentioned.
  • Particularly preferred is silver nitrate.
  • a silver complex coordinated with a ligand having a water-soluble group such as a hydroxyl group or a sulfone group is preferable, and hydroxythioether silver and the like can be mentioned.
  • the organic silver salt, the inorganic silver salt, or the silver complex is 0.001 mol / L to 5 mol / L, preferably 0.005 mol / L to 3 mol / L, and further 0.01 mol / L to 1 mol in the silver amplification solution as silver. It is preferably contained at a concentration of / L.
  • auxiliary agent for the silver amplification liquid examples include buffers, preservatives, for example, antioxidants or organic stabilizers, speed regulators and the like.
  • buffers include acetic acid, citric acid, sodium hydroxide or one of these salts, a buffer using tris (hydroxymethyl) aminomethane, and other buffers used in general chemical experiments. Can be used. These buffers can be appropriately used to adjust the pH to the optimum pH for the amplified solution.
  • alkylamine can be used as an auxiliary agent as an antifog agent, and dodecylamine is particularly preferable.
  • a surfactant can be used, and particularly preferably C 9 H 19- C 6 H 4- O- (CH 2 CH 2 O) 50 H.
  • the silver amplification liquid is preferably flowed from the direction opposite to the development step described above because the effect of the present invention is more excellent, and the angle between the development direction in the development step and the development direction of the reducing agent solution is 45 degrees or more. It is more preferable to flow at 180 degrees.
  • Examples of the method for adjusting the angle between the developing direction and the developing direction of the silver amplification liquid in the developing step include the methods described in Examples of JP-A-2009-150869.
  • the concentrating jig of the present invention is a concentrating jig used in the above-mentioned concentration step, and includes a container for accommodating the above-mentioned super absorbent polymer, and the above-mentioned container is described above. It is a concentration jig having a take-in part for taking in a liquid which can contain the antigen and a discharge part for discharging the above-mentioned antigen concentrate.
  • the concentration jig of the present invention By using the concentration jig of the present invention in the above-mentioned concentration step, the recovery time of the concentrate is shortened, and the concentration step can be completed in a short time.
  • the antigen concentrate can be obtained quantitatively, and the variation in the concentration rate for each measurement can be suppressed to a low level. Further, since the concentration time, the concentration amount, and the concentration rate can be controlled, it is possible to concentrate more easily and repeatedly with high reproducibility.
  • a preferred embodiment of the concentration jig of the present invention is a concentration jig including a cylinder which is the above-mentioned container and a piston which can be inserted into the cylinder.
  • FIG. 2 is a schematic cross-sectional view of a concentration jig which is one aspect of the above-mentioned preferred aspect 1.
  • the concentrating jig 200 includes a cylinder 10 and a piston 20 that can be inserted into the cylinder 10.
  • the cylinder 10 has a nozzle portion 12, an opening portion 14, and a scale 16, and accommodates the specific super absorbent polymer 30.
  • a liquid (sample liquid) 40 that can contain an antigen is taken into the cylinder 10.
  • the method of taking in the sample liquid 40 include (i) a method of (i) plugging the nozzle portion 12 and then putting the sample liquid 40 into the cylinder 10 through the opening 14, and (ii) inserting the piston 20 into the cylinder 10.
  • a method of taking the sample liquid 40 from the nozzle part 12 into the cylinder 10 by immersing the nozzle part 12 in the sample liquid 40 and pulling the piston in that state can be mentioned.
  • the opening 14 is the intake portion described above.
  • the nozzle portion 12 is the above-mentioned intake portion.
  • the sample liquid 40 is taken up to a predetermined position of the cylinder 10 (for example, the upper end of the scale 16). In this way, a predetermined amount of the sample liquid 40 can be taken into the cylinder 10 (FIG. 2 (B)).
  • a stopper for taking in a predetermined amount of the sample liquid 40 may be provided instead of the scale 16.
  • the antigen concentrate 42 is discharged from the nozzle portion 12 (FIG. 2D).
  • the antigen concentrate 42 is obtained by collecting the discharged antigen concentrate 42.
  • a predetermined amount of the antigen concentrate 42 is discharged using the scale 16 of the cylinder 10.
  • the entire amount of the antigen concentrate 42 is discharged. In this way, a predetermined amount of the antigen concentrate 42 can be recovered.
  • the cylinder 10 is provided with a scale 16 in FIG. 2, a stopper for discharging a predetermined amount of the antigen concentrate 42 may be provided instead of the scale 16.
  • the cylinder 10 has a nozzle portion 12, an opening portion 14, and a scale 16, and accommodates the specific super absorbent polymer 30.
  • the material of the cylinder 10 is not particularly limited, but a thermoplastic resin is preferable because it can be injection molded, is inexpensive, and can be mass-produced. Since it has a certain degree of hardness, specifically, polypropylene, acrylic, polyacetal, polyamide, polyethylene, polyethylene terephthalate, polycarbonate, polystyrene, polyphenylene sulfide, polybutylene terephthalate, polyvinyl chloride, and ABS resin (both acrylonitrile-butadiene-styrene). Polymer resin) and AS resin (acrylonitrile-styrene copolymer resin) are preferable.
  • the nozzle portion 12 is a portion for discharging the antigen concentrate 42.
  • the nozzle portion 12 preferably has a structure in which the specific super absorbent polymer 30 is not discharged.
  • a method of forming such a structure for example, a method of making the inner diameter 12a of the nozzle portion 12 smaller than the particle size 30a of the specific super absorbent polymer 30 (before swelling) (preferably 1.5 minutes of the particle size 30a). 1 or less, more preferably 1/2 or less of the particle size 30a, still more preferably 1/5 or less of the particle size 30a), for preventing the specified superabsorbent polymer 30 from being discharged from the nozzle portion 12.
  • the mesh (the pore size of the mesh is smaller than the particle size 30a of the specific super absorbent polymer 30 (before swelling), preferably 1 / 1.5 or less of the particle size 30a, and more preferably 1/2 of the particle size 30a.
  • a method of installing (1/5 or less of the particle size 30a) a method of plugging the nozzle portion 12 (remove the plug when collecting the antigen concentrate 42), and a method of combining these. And so on.
  • the tip of the nozzle portion 12 is preferably slanted from the viewpoint of easy recovery of the antigen concentrate 42.
  • the concentration jig 200 includes a piston 20.
  • the material of the piston 20 is not particularly limited, and a preferred embodiment thereof is the same as that of the cylinder 10 described above. It is preferable that a rubber material (for example, silicon rubber) is attached to the tip portion 22 on the side of the piston 20 to be inserted into the cylinder.
  • a rubber material for example, silicon rubber
  • the diameter 22a of the tip portion 22 of the piston 20 is not particularly limited, but is preferably 5 times or more, more preferably 10 times or more, and 20 times or more the particle diameter 30a of the specific superabsorbent polymer 30. Is even more preferable.
  • a preferred embodiment 2 of the concentration jig of the present invention is a concentration jig including an inner cylinder which is the container described above and an outer cylinder into which the inner cylinder can be inserted and removed.
  • FIG. 3 is a schematic cross-sectional view of one aspect of the preferred embodiment 2.
  • the concentrating jig 300 includes an inner cylinder 50 and an outer cylinder 60 into which the inner cylinder 50 can be inserted and removed.
  • at least a part of the bottom surface 52 of the inner cylinder 50 is mesh-shaped (not shown).
  • the inner cylinder 50 accommodates the specific super absorbent polymer 30.
  • the outer cylinder 60 has a scale 16. One end of the outer cylinder 60 is closed by the bottom surface 62, and the other end is open.
  • the sample solution 40 is taken into the inner cylinder 50.
  • a method of taking in the sample liquid 40 for example, (i) when the inner cylinder 50 has an opening (not shown) above the inner cylinder 50, the sample liquid 40 is put into the inner cylinder 50 through the opening of the inner cylinder 50.
  • the opening of the inner cylinder 50 is the intake portion described above. Further, in the case of the above (ii), the mesh-like portion of the inner cylinder 50 serves as the intake portion.
  • the sample liquid 40 is taken up to a predetermined position of the outer cylinder 60 (for example, the upper end of the scale 16). In this way, a predetermined amount of the sample liquid 40 can be taken into the inner cylinder 50 (FIG. 3 (B)).
  • the antigen concentrate 42 is discharged from the mesh-like portion of the inner cylinder 50.
  • the discharged antigen concentrate 42 is collected in the outer cylinder 60. In this way, a predetermined amount of the antigen concentrate 42 can be recovered.
  • the inner cylinder 50 As described above, at least a part of the bottom surface 52 of the inner cylinder 50 is mesh-shaped (not shown). Further, the inner cylinder 50 accommodates the specific super absorbent polymer 30. It is preferable that all the bottom surfaces 52 of the inner cylinder 50 have a mesh shape. Further, the side surface 54 of the inner cylinder 50 is also preferably mesh-shaped, but when the sample liquid 40 is taken in by the method (i) above, the sample liquid 40 is put into the inner cylinder 50 through the opening of the inner cylinder 50. In order to prevent the sample liquid 40 from flowing out from the inner cylinder 50, the portion of the inner cylinder 50 that is exposed from the outer cylinder 60 when inserted into the outer cylinder 60 (upper portion) is not mesh-shaped. preferable.
  • the material of the inner cylinder 50 is not particularly limited, but for the reason that the effect of the present invention is more excellent, metal, a thermoplastic resin (a preferred embodiment is the same as that of the cylinder 10 described above), and a cloth are preferable, and a thermoplastic resin is more preferable. ..
  • the pore size of the mesh-like portion of the inner cylinder 50 is preferably smaller than the particle size 30a of the specific super absorbent polymer 30 (before swelling) because the effect of the present invention is more excellent. It is more preferably 1/5 or less, further preferably 1/2 or less of the particle size 30a, and particularly preferably 1/5 or less of the particle size 30a.
  • the pore diameter of the mesh-like portion is preferably 0.1 ⁇ m to 5 mm, more preferably 0.2 ⁇ m to 2 mm, for the reason that the effect of the present invention is more excellent.
  • the concentration jig 300 includes an outer cylinder 60.
  • the material of the outer cylinder 60 is not particularly limited, and a preferred embodiment thereof is the same as that of the cylinder 10 described above.
  • the inner cylinder 50 and / or the outer cylinder 60 may have a stopper so that the bottom surface 52 of the inner cylinder 50 and the bottom surface 62 of the outer cylinder 60 do not come into contact with each other.
  • a preferred embodiment 3 of the concentrating jig of the present invention is a dropper-shaped concentrating jig having a pipe portion and a pump portion.
  • the pipe portion is the container described above.
  • FIG. 4 is a schematic cross-sectional view of one aspect of the preferred embodiment 3.
  • the concentrating jig 400 has a dropper shape having a pipe portion 70 and a pump portion 80.
  • the tube portion 70 has a nozzle portion 72 and a scale 16, and accommodates the specific super absorbent polymer 30.
  • the sample solution 40 is taken into the tube portion 70.
  • the nozzle portion 72 is immersed in the sample liquid 40 while the pump portion 80 is pressed, and the sample liquid 40 is taken into the tube portion 70 from the nozzle portion 72 by releasing the pressing of the pump portion 80 in that state. ..
  • the sample liquid 40 is taken up to a predetermined position (for example, the scale 16) of the tube portion 70. In this way, a predetermined amount of the sample liquid 40 can be taken into the tube portion 70.
  • the sample liquid 40 is concentrated to become an antigen concentrate (the specific superabsorbent polymer 30 swells). It becomes a specific super absorbent polymer).
  • the antigen concentrate is discharged from the nozzle unit 72.
  • An antigen concentrate is obtained by collecting the discharged antigen concentrate.
  • the antigen concentrate is discharged to the total amount or to a predetermined scale (scales other than the scale 16) (not shown). In this way, a predetermined amount of antigen concentrate can be recovered.
  • the nozzle part 72 is the above-mentioned uptake part and the above-mentioned discharge part.
  • the tube portion 70 has a nozzle portion 72 and a scale 16, and accommodates the specific super absorbent polymer 30.
  • the material of the pipe portion 70 is not particularly limited, and a preferred embodiment thereof is the same as that of the cylinder 10 described above.
  • the tube portion 70 accommodates the specific super absorbent polymer 30.
  • the specific superabsorbent polymer 30 is preferably arranged so as to stay inside the tube portion 70, and more preferably exists on the inner wall of the tube portion 70.
  • a method of arranging the specific superabsorbent polymer 30 so as to stay in the tube portion 70 for example, a method of fixing the specific superabsorbent polymer 30 to the inner wall of the tube portion 70 with an adhesive, and setting the inner diameter of the nozzle portion 72 to the specific height.
  • Examples thereof include a method of making the particle size smaller than the particle size of the water-absorbent polymer 30, a method of installing a mesh having a pore size smaller than the particle size of the specific super absorbent polymer 30 in the nozzle portion, and the like.
  • the position where the specific superabsorbent polymer 30 is housed is preferably on the nozzle portion 72 side of the predetermined position (for example, the scale 16) for taking in the sample liquid.
  • the concentration jig 400 includes a pump unit 80.
  • the material of the pump portion 80 is not particularly limited, and a preferred embodiment thereof is the same as that of the cylinder 10 described above.
  • the pump section 80 may contain the specific superabsorbent polymer 30 in addition to the tube section 70. In that case, the sample liquid 40 comes into contact with the specific superabsorbent polymer 30 contained in the pump section 80. It is preferable to take in the sample liquid 40 as described above.
  • a sample solution (a solution containing an antigen) was prepared using Quick S-Influenza A / B "Seiken" negative / positive control solution (product number: 322968, manufactured by Denka Seiken Co., Ltd.). Specifically, the above positive control solution is diluted 10-fold with PBS (Phosphate buffered salts) buffer containing 0.1% by mass BSA (Bovine Serum Albumin), and the sample solution (which may contain an antigen) at each dilution ratio is diluted. Liquid).
  • PBS Phosphate buffered salts
  • BSA Bovine Serum Albumin
  • Example A1 Immunochromatography of Example A1 was performed as follows.
  • SAP super absorbent polymer
  • model number 197-12451 manufactured by Fujifilm Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
  • the particle size of the super absorbent polymer was 0.05 mm
  • the swelling rate was 600 g / g
  • the water absorption rate was 20 g / min.
  • a nitrocellulose membrane 100 having a gold colloid holding pad 1, a test line 2, a control line 3, and a coloring reagent immobilization line 4 was prepared from the upstream side.
  • the gold colloid holding pad 1 is a pad that holds gold colloid (modified gold particles) modified with an anti-influenza A type monoclonal antibody
  • the test line 2 is a line on which an anti-influenza A type monoclonal antibody is immobilized.
  • the control line 3 is a line for confirming the development
  • the color-developing reagent immobilization line 4 is a line for detecting the reducing liquid described later.
  • the above influenza virus concentrate was dropped onto a colloidal gold holding pad.
  • a gold particle complex which is a complex of the influenza A virus in the liquid and the gold colloid particles (modified gold particles) modified with the anti-influenza A monoclonal antibody in the gold colloid holding pad, was formed. In this state, it was developed on the downstream side of the nitrocellulose membrane.
  • the silver amplification step was carried out as follows.
  • Example A2 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example A1 except that the super absorbent polymer described below was used. The results are shown in Table 1.
  • Super absorbent polymer used in Example A2 Commercially available SAP (super absorbent polymer) particles (manufactured by M2 Polymer Technologies Inc.; SAP Surface 2.5 mm) were granulated to obtain a superabsorbent polymer used in the concentration step.
  • the particle size of the super absorbent polymer was 2.5 mm, the swelling rate was 13 g / g, and the water absorption rate was 0.5 g / min.
  • Example A3 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example A1 except that the super absorbent polymer described below was used. The results are shown in Table 1.
  • SAP super absorbent polymer
  • the SAP (super absorbent polymer) particles were prepared with reference to the methods of Example 1 and Comparative Example 1 described in JP-A-2015-536375, and for particles having different particle sizes, a 0.5 mm sieve was used. By classifying the particles, superabsorbent polymer particles having a particle size of 0.5 mm and a swelling rate of 30 g / g were obtained.
  • Example A4 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example A1 except that the super absorbent polymer described below was used. The results are shown in Table 1.
  • Example A1 Immunochromatography was performed and evaluated according to the same procedure as in Example A1 except that the above-mentioned sample solution itself was used instead of the influenza virus concentrate in the developing step without performing the concentration step. The results are shown in Table 1.
  • Comparative Example A2 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example A1 except that the super absorbent polymer described below was used. As a result, coloring could not be confirmed in Comparative Example A2. It is presumed that the antibody-antigen reaction was inhibited by impurities.
  • Lipoarabinomannan (LAM) (02249-61, Nacalai Tesque) extracted from Mycobacterium tuberculosis was added to a pooled urine sample of a healthy person (Bioreclamation IVT) to obtain the LAM concentration shown in Table 2.
  • a sample solution (a solution that can contain an antigen) was prepared.
  • Example B1 Immunochromatography of Example B1 was performed as follows.
  • a nitrocellulose membrane 100 having a gold colloid holding pad 1, a test line 2, a control line 3, and a coloring reagent immobilization line 4 was prepared from the upstream side.
  • the gold colloid holding pad 1 is a pad that holds gold colloid (modified gold particles) modified with an anti-LAM monoclonal antibody
  • the test line 2 is a line on which an anti-LAM monoclonal antibody is immobilized and is a control.
  • the line 3 is a line for confirming the development
  • the color-developing reagent immobilization line 4 is a line for detecting the reducing liquid in the silver amplification step described later.
  • the above LAM concentrate was added dropwise to the gold colloid holding pad.
  • a gold particle composite which is a composite of LAM in the liquid and gold colloidal particles (modified gold particles) modified with an anti-LAM monoclonal antibody, was formed.
  • the nitrocellulose membrane was developed from the upstream side to the downstream side.
  • Example B2 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example B1 except that the same superabsorbent polymer as that used in Example A2 was used. The results are shown in Table 2. The concentration of urea in the LAM concentrate was 5 times or less the concentration of urea in the sample solution.
  • Example B3 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example B1 except that the same superabsorbent polymer as that used in Example A3 was used. The results are shown in Table 2. The concentration of urea in the LAM concentrate was 5 times or less the concentration of urea in the sample solution.
  • Example B4 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example B1 except that the same superabsorbent polymer as that used in Example A4 was used. The results are shown in Table 2. The concentration of urea in the LAM concentrate was 5 times or less the concentration of urea in the sample solution.
  • Example B1 Immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example B1 except that the above-mentioned sample solution itself was used instead of the LAM concentrate in the developing step without performing the concentration step. The results are shown in Table 2.
  • Comparative Example B2 In the concentration step, immunochromatography was carried out and evaluated according to the same procedure as in Example B1 except that the same superabsorbent polymer as that used in Comparative Example A2 was used. The results are shown in Table 2. Coloring could not be confirmed in Comparative Example B2. It is presumed that the antibody-antigen reaction was inhibited by impurities such as urea.
  • a syringe-shaped concentrating jig 200 as shown in FIG. 2 (A) was prepared.
  • the inner diameter 10a is 29 mm ⁇
  • the length 10a is 100 mm
  • the inner diameter 12a of the nozzle portion 12 is 1 mm ⁇ .
  • the cylinder 10 contains the same super absorbent polymer (1 g) as the superabsorbent polymer used in Example A1 described above.
  • the nozzle portion 12 is plugged.
  • a rubber made of silicon is attached to the tip portion 22 of the piston 20.
  • Example D1 Immunochromatography was carried out according to the same procedure as in Example A1 except that the concentration step was carried out as follows. As a result, it showed high detection sensitivity as in Example A1.
  • sample solution 40 6 mL of the above-mentioned sample solution (sample solution 40) was added with a pipette from the opening 14 of the concentration jig 200 prepared as described above (FIG. 2 (B)). Next, it was allowed to stand for 10 minutes in the state of FIG. 2 (B). As a result, mainly water and impurities in the sample liquid were absorbed by the super absorbent polymer, and the sample liquid became the concentrated antigen concentrate 42. Then, the piston 20 was mounted on the cylinder 10 through the opening 14 (FIG. 2 (C)). Then, from the state shown in FIG. 2C, the nozzle portion 12 was unplugged and the piston 20 was pushed in to recover 200 ⁇ L of the antigen concentrate 42 from the nozzle portion 12 (FIG. 2D).
  • the concentration rate in the concentration step of Example D1 was evaluated.
  • the concentration rate was evaluated using a test solution diluted 2 times, 4 times, 8 times, 10 times, 16 times, 20 times, 32 times, and so on.
  • the concentration ratio of each of the repeated experiments was calculated by examining the dilution ratio of the detectable test solution for the sample solution after concentration as compared with the dilution ratio of the detectable test solution of the sample solution before concentration.
  • Concentration rate (detectable dilution ratio after concentration) / (detectable dilution ratio before concentration)
  • the concentration rate of the liquids recovered by the methods of Example A1 and Example D1 was evaluated by n10.
  • the coefficient of variation of the result of n10 can be derived from the following equation.
  • x_av. Is the average value of 10 measurements
  • the average recovery time was 1 minute in the method of Example A1, but the average recovery time was shortened to 20 seconds by using a syringe-shaped concentration jig, and the antigen concentrate was recovered. It was found that the time can be shortened.
  • the coefficient of variation of the concentration rate was reduced from 60% to 30%, so that the variation for each measurement was suppressed to a low level. , It turned out that it is a method with excellent measurement accuracy.
  • the concentration step was carried out in the same manner using the concentration jig shown in FIG. 3 and the concentration jig shown in FIG. 4, and the average recovery time and the coefficient of variation of the concentration rate were obtained. Similar to Example D1, it was confirmed that the recovery of the antigen concentrate can be shortened and the measurement accuracy is excellent.
  • the concentration jig was prepared, and in the concentration step and the immunochromatography performed in Example D1 according to the same procedure as in Example B1.
  • the same effect was confirmed in the detection of the lipoarabinomannan (LAM) concentration in the urine sample.
  • LAM lipoarabinomannan

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Abstract

検出感度の高い免疫検査方法を提供する。抗原を含み得る液と、高吸水性ポリマーとを混合することにより、上記抗原を含み得る液を濃縮して、抗原濃縮液を得る、濃縮工程と、抗原抗体反応を用いて、上記抗原濃縮液中の抗原を検出する、検出工程とを備える、免疫検査方法であって、上記高吸水性ポリマーの膨潤率が、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であり、上記抗原抗体反応に用いられる抗体が、モノクローナル抗体である、免疫検査方法。

Description

免疫検査方法及び濃縮用治具
　本発明は、免疫検査方法及び濃縮用治具に関する。
　免疫検査方法（特に、イムノクロマトグラフィー）は、操作が簡便であり短時間で測定可能であることから、昨今頻繁に利用されている。
　例えば、インフルエンザウイルス等の抗原をイムノクロマトグラフィーで検出する場合、以下のような操作が行われる。
　まず、抗体で修飾された標識（標識抗体）を用意し、抗原を含む試料と混合する。標識抗体は抗原と結合し、複合体を形成する。この状態で、抗原と特異的に反応する抗体が塗布された検出ラインを有する不溶性担体に展開させると、複合体は検出ライン（テストライン）上で抗体と反応して捕捉され、目視等により検出が確認される。
　このようなイムノクロマトグラフィーとしては、例えば、特許文献１に開示されるイムノクロマトグラフィーが挙げられる。
特許第５７２８４５３号公報
　昨今、抗原の濃度が極めて薄い検体液にも適用可能な免疫診断法が望まれている。そのため、イムノクロマトグラフィー等の免疫検査方法に対しても、特許文献１に開示されるような従来の方法よりもさらに高感度な方法が求められている。
　そこで、本発明は、上記実情を鑑みて、検出感度の高い免疫検査方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題について鋭意検討した結果、所定の方法により濃縮した検体液を用いることにより上記課題が解決できることを見出し、本発明に至った。
　すなわち、本発明者らは、以下の構成により上記課題が解決できることを見出した。
（１）　抗原を含み得る液と、高吸水性ポリマーとを混合することにより、上記抗原を含み得る液を濃縮して、抗原濃縮液を得る、濃縮工程と、
　抗原抗体反応を用いて、上記抗原濃縮液中の抗原を検出する、検出工程とを備える、免疫検査方法であって、
　上記高吸水性ポリマーの膨潤率が、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であり、
　上記抗原抗体反応に用いられる抗体が、モノクローナル抗体である、免疫検査方法。
（２）　上記高吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーである、上記（１）に記載の免疫検査方法。
（３）　上記抗原を含み得る液が、尿である、上記（１）又は（２）に記載の免疫検査方法。
（４）　上記抗原濃縮液中の尿素の濃度が、上記抗原を含み得る液中の尿素の濃度の５倍以下である、上記（３）に記載の免疫検査方法。
（５）　上記高吸水性ポリマーの粒子径が、５ｍｍ以下である、上記（１）～（４）のいずれかに記載の免疫検査方法。
（６）　上記高吸水性ポリマーの吸水速度が、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０１ｇ／分以上４０ｇ／分以下である、上記（１）～（５）のいずれかに記載の免疫検査方法。
（７）　イムノクロマトグラフィーである、上記（１）～（６）のいずれかに記載の免疫検査方法。
（８）　上記検出工程が、
　上記抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する、展開工程と、
　上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する、捕捉工程と、
　上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する、銀増幅工程とを備える、上記（７）に記載の免疫検査方法。
（９）　上記（１）～（８）のいずれかに記載の免疫検査方法の濃縮工程で使用される濃縮用治具であって、
　上記高吸水性ポリマーを収容する容器を備え、
　上記容器は、上記抗原を含み得る液を取り込むための取込部と、上記抗原濃縮液を排出するための排出部とを有する、濃縮用治具。
（１０）　上記容器であるシリンダーと、上記シリンダーに挿入可能なピストンとを備える、上記（９）に記載の濃縮用治具。
（１１）　上記容器である内筒と、上記内筒を挿入及び取り出し可能な外筒とを備える、上記（９）に記載の濃縮用治具。
（１２）　管部とポンプ部とを有するスポイト状であり、
　上記管部が上記容器である、上記（９）に記載の濃縮用治具。
（１３）　上記濃縮工程において、上記（９）～（１２）のいずれかに記載の濃縮用治具を用いる、上記（１）～（８）のいずれかに記載の免疫検査方法。
　以下に示すように、本発明によれば、検出感度の高い免疫検査方法及びこれに使用される濃縮用治具を提供することができる。
本発明の方法で使用される不溶性担体の一態様の模式図である。 本発明の濃縮用治具の好適な態様１の一態様の模式的断面図である。 本発明の濃縮用治具の好適な態様２の一態様の模式的断面図である。 本発明の濃縮用治具の好適な態様３の一態様の模式的断面図である。
　以下に、本発明の免疫検査方法及び本発明の免疫検査方法に使用される濃縮用治具について説明する。
　なお、本明細書において「～」を用いて表される数値範囲は、「～」の前後に記載される数値を下限値及び上限値として含む範囲を意味する。
　また、本明細書において各成分は、１種を単独で用いても、２種以上を併用して用いてもよい。ここで、各成分について２種以上を併用する場合、その成分について含有量とは、特段の断りが無い限り、合計の含有量を指す。
　また、本明細書において「検出感度及びＳ／Ｎ比（信号／ノイズ比）がより向上する」ことを「本発明の効果等がより優れる」とも言う。
［１］免疫検査方法
　本発明の免疫検査方法（以下、「本発明の方法」とも言う）は、
　抗原を含み得る液と、高吸水性ポリマーとを混合することにより、上記抗原を含み得る液を濃縮して、抗原濃縮液を得る、濃縮工程と、
　抗原抗体反応を用いて、上記抗原濃縮液中の抗原を検出する、検出工程とを備える、免疫検査方法であって、
　上記高吸水性ポリマーの膨潤率が、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であり、
　上記抗原抗体反応に用いられる抗体が、モノクローナル抗体である、免疫検査方法である。
　本発明の方法はこのような構成をとるため、上述した効果が得られるものと推測される。その理由は明らかではないが、およそ以下のとおりと考えられる。
　上述のとおり、本発明の方法では、特定の膨潤率の高吸水性ポリマーを用いて抗原を含み得る液（検体液）を濃縮する。検体液と高吸水性ポリマーとを混合した場合、検体液中の水は高吸水性ポリマーに取り込まれるのに対して、検体液中の抗原は、ある程度の流体力学半径を有するため、高吸水性ポリマーの表面の網目構造がふるい効果を生み出し、高吸水性ポリマーに取り込まれ難い。結果として、検体液中の抗原が濃縮され、検出感度の向上に繋がる。
　一方、検体液中には、通常、低分子成分や塩等の夾雑物が含まれる。例えば、検体液が尿である場合、尿素等の夾雑物が含まれる。本発明者らの検討から、抗原と一緒にこれらの夾雑物が濃縮された場合、抗原抗体反応が阻害され、検出感度が低下してしまうことが知見されている。すなわち、濃縮による検出感度の向上効果が十分に得られないことが分かっている。
　本発明の方法は上記知見等に基づくものである。すなわち、本発明の方法においては、高吸水性ポリマーとして特定の膨潤率の高吸水性ポリマーを使用するため、これらの夾雑物は水と一緒に高吸水性ポリマーに取り込まれる。そのため、上述したような検出感度の低下は生じ難い。結果として、極めて高い検出感度が達成されるものと考えられる。
　以下、本発明の方法が備える各工程について説明する。
［濃縮工程］
　濃縮工程は、抗原を含み得る液（検体液）と、高吸水性ポリマーとを混合することにより、検体液を濃縮して、抗原濃縮液（抗原が濃縮された液）を得る工程である。ここで、上記高吸水性ポリマーの膨潤率は、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満である。
〔検体液〕
　濃縮工程で使用される検体液は、抗原を含み得る液であれば特に制限されない。そのような液としては、例えば、生物学的試料、特には動物（特にヒト）の体液（例えば、血液、血清、血漿、髄液、涙液、汗、尿、膿、鼻水、又は喀痰）、うがい液等を挙げることができる。
　検体液は、本発明の効果がより優れる理由から、尿であることが好ましい。
　検体液が尿である場合、濃縮工程で得られる抗原濃縮液中の尿素の濃度は、本発明の効果等がより優れる理由から、検体液中の尿素の濃度の５倍以下であることが好ましい。
＜抗原＞
　抗原としては、例えば、菌、細菌（例えば、結核菌、結核菌に含まれるリポアラビノマンナン（ＬＡＭ））、バクテリア、ウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）や、それらの核タンパク質等が挙げられる。なお、ＬＡＭは、結核における主要な抗原であり、細胞膜および細胞壁の主要構成成分である糖脂質である。
　抗原は、本発明の効果等がより優れる理由から、ウイルス（特に、インフルエンザウイルス）又はＬＡＭであることがより好ましく、ＬＡＭであることがさらに好ましい。
＜検体液の前処理＞
　上記検体液は、検体液をそのままで、又は、抗原を適当な抽出用溶媒を用いて抽出して得られる抽出液の形で、更には、抽出液を適当な希釈剤で希釈して得られる希釈液の形、若しくは抽出液を適当な方法で濃縮した形で、用いることができる。
　上記抽出用溶媒としては、通常の免疫学的分析法で用いられる溶媒（例えば、水、生理食塩液、又は緩衝液等）、あるいは、かかる溶媒で希釈することにより直接抗原抗体反応を実施することができる水混和性有機溶媒を用いることもできる。
〔高吸水性ポリマー〕
　濃縮工程で使用される高吸水性ポリマーは、膨潤率が０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であるポリマー（以下、「特定高吸水性ポリマー」とも言う）である。ここで、膨潤率とは、「高吸水性ポリマー１ｇが保持する水の質量（ｇ）」として定義される値である。
　特定高吸水性ポリマーは膨潤率が０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であれば特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーであることが好ましい。
＜膨潤率＞
　上述のとおり、特定高吸水性ポリマーの膨潤率は０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満である。なかでも、本発明の効果等がより優れる理由から、１．０ｇ／ｇ以上６００ｇ／ｇ以下であることが好ましく、１０ｇ／ｇ以上５００ｇ／ｇ以下であることがより好ましく、２０ｇ／ｇ以上１００ｇ／ｇ以下であることがさらに好ましい。
（膨潤率の測定方法）
　２５℃５％ＲＨ（相対湿度）で１０日間保管した高吸水性ポリマーの質量を測定し、その後すぐに、多量の蒸留水の中に浸漬させる。１２０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度質量を測定し、以下の計算式を用いて膨潤率を測定する。
{（吸水後の質量（ｇ）－吸水前の初期質量（ｇ））／吸水前の初期質量（ｇ）}
　膨潤率を上述した特定の範囲に調整する方法は特に制限されないが、ポリマーの種類を変更する、ポリマーの分子量を変更する、架橋度を変更する、粒子径を変更する等の方法が挙げられる。
＜吸水速度＞
　特定高吸水性ポリマーの吸水速度は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０１ｇ／分以上４０ｇ／分以下であることが好ましく、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０２ｇ／分以上４０ｇ／分以下であることがより好ましい。
　上記吸水速度は以下のように測定する。
　２５℃５％ＲＨ（相対湿度）で１０日間保管した高吸水性ポリマーの質量を測定し（重量Ｍ０、単位ｇ）、その後すぐに、多量の蒸留水の中に浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、質量を測定する（質量Ｍ１０）。質量測定後ただちに、多量の蒸留水の中に再び浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度質量を測定する（質量Ｍ２０）。質量Ｍ２０の測定後ただちに、多量の蒸留水の中に再び浸漬させる。１０分後、高吸水性ポリマーを取り出し、表面の水を除去して、再度重量を測定する（質量Ｍ３０）。
　以下のように吸水量を定義する。
１０分間の吸水量：　ΔＭ１０　＝　（Ｍ１０－Ｍ０）／Ｍ０２０分間の吸水量：　ΔＭ２０　＝　（Ｍ２０－Ｍ０）／Ｍ０３０分間の吸水量：　ΔＭ３０　＝　（Ｍ３０－Ｍ０）／Ｍ０
　上記のように定義した吸水量を用いて、以下のように吸水速度を求める。
　横軸時間（ｘ＝１０，２０，３０；単位　分）と縦軸吸水量（ｙ＝ΔＭ１０、ΔＭ２０、ΔＭ３０；単位　ｇ水／ｇポリマー量）としてＸ－Ｙ平面に３点をプロットし、最小二乗法を用いた時間に対する吸水量の直線近似式の傾きを、単位時間（分）あたりの吸水速度とする。
＜粒子径＞
　特定高吸水性ポリマーは粒子状であることが好ましく、その場合の粒子径は、本発明の効果等がより優れる理由から、１０ｍｍ以下であることが好ましく、８ｍｍ以下であることより好ましく、５ｍｍ以下であることがさらに好ましい。特定高吸水性ポリマーの粒子径の下限は、本発明の効果等がより優れる理由から、０．００１ｍｍ以上であることが好ましく、０．００５ｍｍ以上であることがより好ましく、０．０１ｍｍ以上であることがさらに好ましい。粒子状の特定高吸水性ポリマーの粒子径の測定方法としては、光学顕微鏡により５０個の粒子状のポリマーの直径を測定し、その算術平均値を粒子径とすることができる。
＜使用量＞
　特定高吸水性ポリマーの使用量は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、検体液１ｍＬに対して、０．０１～１００ｇであることが好ましく、０．１～５０ｇであることがより好ましい。
〔濃縮工程の手順〕
　濃縮工程の手順は特に制限されないが、例えば、検体液と特定高吸水性ポリマーとを混合して、特定高吸水性ポリマーに吸収されなかった検体液（抗原濃縮液）を回収する方法等が挙げられる。
　検体液と特定高吸水性ポリマーとを混合する方法も特に制限されず、例えば、検体液に特定高吸水性ポリマーを配合、撹拌して、静置する方法等が挙げられる。
　濃縮工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、後述する濃縮用治具を使用するのが好ましい。
［検出工程］
　検出工程は、抗原抗体反応を用いて、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原を検出する工程である。ここで、抗原抗体反応に用いられる抗体は、モノクローナル抗体である。そのため、本発明の方法は擬陽性となる懸念が少ない。
　検出工程は、抗原抗体反応を用いるものであれば特に制限されないが、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射線免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフィー等が挙げられる。なかでも、本発明の効果等がより優れる理由から、イムノクロマトグラフィーが好ましい。すなわち、本発明の方法はイムノクロマトグラフィーであることが好ましい。
　以下、検出工程がイムノクロマトグラフィーである場合の好適な態様について説明する。
　検出工程は、本発明の効果等がより優れる理由から、
　上記抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する、展開工程と、
　上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する、捕捉工程と、
　上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する、銀増幅工程とを備えるのが好ましい。
　ここで、上記第１の結合物質及び上記第２の結合物質の少なくとも一方はモノクローナル抗体である。本発明の効果等がより優れる理由から、上記第１の結合物質及び上記第２の結合物質の両方がモノクローナル抗体であることが好ましい。
　以下、上記好適な態様が備える各工程について説明する。
［展開工程］
　展開工程は、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する工程である。
〔金粒子複合体〕
　上述のとおり、展開工程では、まず、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液中の抗原と、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させる。
＜修飾金粒子＞
　修飾金粒子は、上記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である。
（金粒子）
　金粒子は特に制限されない。
　金粒子は、後述する銀増幅工程において銀イオンを還元する触媒として働く。
　上記金粒子の粒子径は、本発明の効果等がより優れる理由から、１００ｎｍ以下であることが好ましく、５０ｎｍ以下であることがより好ましく、３０ｎｍ以下であることがさらに好ましく、１５ｎｍ以下であることが特に好ましい。
　上記金粒子の粒子径の下限は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、１ｎｍ以上であることが好ましく、２ｎｍ以上であることがより好ましく、５ｎｍ以上であることがさらに好ましい。
　なお、粒子径は、市販の粒度分布計等で計測することができる。粒度分布の測定法としては、光学顕微鏡法、共焦点レーザー顕微鏡法、電子顕微鏡法、原子間力顕微鏡法、静的光散乱法、レーザー回折法、動的光散乱法、遠心沈降法、電気パルス計測法、クロマトグラフィー法、超音波減衰法等が知られており、それぞれの原理に対応した装置が市販されている。粒子径の測定方法としては、粒子径範囲および測定の容易さから、動的光散乱法を好ましく用いることができる。動的光散乱を用いた市販の測定装置としては、ナノトラックＵＰＡ（日機装（株））、動的光散乱式粒径分布測定装置ＬＢ－５５０（（株）堀場製作所）、濃厚系粒径アナライザーＦＰＡＲ－１０００（大塚電子（株））等が挙げられ、本発明においては、２５℃の測定温度で測定したメジアン径（ｄ＝５０）の値として求める。
（第１の結合物質）
　第１の結合物質は上記抗原と結合し得るものであれば特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、タンパク質であることが好ましく、抗体（例えば、ポリクローナル抗体、あるいはモノクローナル抗体）であることがより好ましく、モノクローナル抗体であることがより高い検出感度を実現する観点でさらに好ましい。
　上記抗体は特に制限されないが、例えば、抗原によって免疫された動物の血清から調製する抗血清や、抗血清から精製された免疫グロブリン画分を用いることが可能であり、また、抗原によって免疫された動物の脾臓細胞を用いる細胞融合によって得られるモノクローナル抗体、あるいは、それらの断片［例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦｖ］を用いることができる。これらの抗体の調製は、常法により行うことができる。
　抗原がＬＡＭである場合の、第１の結合物質の一例としては、国際公開２０１７／１３９１５３号に記載のＡ１９４－０１抗体が挙げられる。Ａ１９４－０１抗体に関する国際公開２０１７／１３９１５３号に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
　抗原がＬＡＭである場合の、第１の結合物質の別の一例としては、国際公開２０１３／１２９６３４号の段落番号［００８０］においてＭｏＡｂ１として記載される配列を有する抗体を挙げることができる。ＭｏＡｂ１抗体に関する国際公開２０１３／１２９６３４号に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
（修飾金粒子の製造方法）
　上記修飾金粒子を製造する方法は特に制限されず、公知の方法を用いることができる。
例えば、金とＳＨ基とが化学結合することを利用し、抗体にＳＨ基を導入後、金粒子と接近するときにＳＨ結合が開裂してＡｕ表面上に生成するＡｕ－Ｓ結合で固定化させる等の化学的な結合方法が挙げられる。
〔不溶性担体〕
　上記不溶性担体は、上記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位（テストライン）を有する不溶性担体である。不溶性担体は、抗原の種類に合わせて複数のテストラインを有していてもよい（例えば、インフルエンザＡ型ウイルス用のテストラインとインフルエンザＢ型用のテストライン）。また、不溶性担体は、上記金粒子複合体の展開を確認するために、テストラインより下流側にコントロールラインを有していてもよい。また、後述する銀増幅工程において還元剤液を用いる場合には、還元剤液を検出するために、テストラインより下流側に発色試薬固定化ラインを有していてもよい。
　上記不溶性担体の具体的な態様としては、例えば、図１に示されるような、上流側から、金コロイド保持パッド１、テストライン２、コントロールライン３、発色試薬固定化ライン４を有するニトロセルロースメンブレン１００が挙げられる。ここで、金コロイド保持パッド１は第１の結合物質で修飾された金粒子（修飾金粒子）を保持するパッドであり、テストライン２は第２の結合物質が固定化されたラインであり、コントロールライン３は展開を確認するためのラインであり、発色試薬固定化ライン４は後述する還元剤液を検出するためのラインである。ここで上流側、下流側とは、金粒子複合体が展開する際、上流側から下流側に向けて展開することを意図した記載を意味する。
　上記不溶性担体（又はこれを有するイムノクロマトグラフキット）のより具体的な態様としては、例えば、特許第５７２８４５３号公報に記載の不溶性担体及びイムノクロマトグラフキットが挙げられ、不溶性担体及びイムノクロマトグラフキットに関する特許第５７２８４５３号公報に記載の内容はすべて本明細書の開示の一部として本明細書中に援用される。
＜不溶性担体＞
　不溶性担体は、多孔性担体が好ましい。特に、本発明の効果等がより優れる理由から、ニトロセルロース膜（ニトロセルロースメンブレン）、セルロース膜、アセチルセルロース膜、ポリスルホン膜、ポリエーテルスルホン膜、ナイロン膜、ガラス繊維、不織布、布、または糸等が好ましく、ニトロセルロース膜がより好ましい。
＜第２の結合物質＞
　第２の結合物質は上記抗原と結合し得るものであれば特に制限されない。
　第２の結合物質の具体例及び好適な態様は、上述した第１の結合物質と同じである。
　なお、上記第２の結合物質は上述した第１の結合物質と同じであっても異なってもよいが、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる物質である態様が好ましい。
　また、第１の結合物質及び第２の結合物質が抗体である場合、第１の結合物質である抗体と第２の結合物質である抗体は、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる態様が好ましい。
　また、第１の結合物質及び第２の結合物質が抗体である場合、第１の結合物質のエピトープ（第１の結合物質が認識する抗原の一部）と第２の結合物質のエピトープ（第２の結合物質が認識する抗原の一部）は、本発明の効果等がより優れる理由から、異なる態様が好ましい。抗体のエピトープが異なることは、例えば、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ　Ｉｍｍｕｎｏ　Ｓｏｒｂｅｎｔ　Ａｓｓａｙ）によって確認することができる。
〔展開〕
　金粒子複合体を形成させた状態でテストラインを有する不溶性担体に展開する方法は特に制限されないが、例えば、上述した図１に示されるようなニトロセルロースメンブレン１００（又はこれを有するイムノクロマトグラフキット）を準備して、上述した濃縮工程で得られた抗原濃縮液を金コロイド保持パッドに滴下し、図１に示されるように上流側から下流側に毛細管現象を利用して移動させる方法等が挙げられる。
［捕捉工程］
　捕捉工程は、上記不溶性担体の反応部位において、上記金粒子複合体を捕捉する工程である。
　上述のとおり、不溶性担体の反応部位には抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化されているため、上記展開工程で不溶性担体に展開された金粒子複合体（抗原と修飾金粒子との複合体）は、不溶性担体の反応部位（テストライン）で捕捉される。
　なお、検体液が抗原を含まない場合には上記金粒子複合体が形成されないため、金粒子複合体は不溶性担体の反応部位で捕捉されない。
［銀増幅工程］
　銀増幅工程は、上記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する工程である。
　銀増幅工程は、上記捕捉工程後の不溶性担体に銀イオンを付与することにより、不溶性担体の反応部位で捕捉された金粒子複合体に大きな銀粒子を形成する工程である。より詳細には、上記金粒子複合体の金粒子を触媒として銀イオンが還元され、銀粒子（例えば、直径１０μｍ以上）が形成される工程である。
　これにより、捕捉された金粒子複合体の検出感度が著しく向上する。
〔好適な態様〕
　上記捕捉工程後の不溶性担体に銀イオンを付与する方法は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、下記還元剤液及び下記銀増幅液を使用する方法が好ましい。
　また、還元剤液及び銀増幅液に加えて、特異的な結合反応以外で不溶性担体に残存している複合体を洗浄するために洗浄液を使用してもよい。上記還元液は洗浄液を兼ねていてもよい。
＜還元剤液＞
　上記還元剤液は、銀イオンを還元し得る還元剤を含有する。銀イオンを還元し得る還元剤は、銀イオンを銀に還元することができれば、無機・有機のいかなる材料、またはその混合物でも用いることができる。無機還元剤としては、Ｆｅ２＋、Ｖ２＋、Ｔｉ３＋、などの金属イオンで原子価の変化し得る還元性金属塩、還元性金属錯塩を好ましく挙げることができる。無機還元剤を用いる際には、酸化されたイオンを錯形成するか還元して、除去するか無害化する必要がある。例えば、Ｆｅ２＋を還元剤として用いる系では、クエン酸やエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を用いて酸化物であるＦｅ３＋の錯体を形成し、無害化することができる。本発明ではこのような無機還元剤を用いることが好ましく、本発明のより好ましい態様としては、Ｆｅ２＋の金属塩を還元剤として用いることが好ましい。
　なお、湿式のハロゲン化銀写真感光材料に用いられる現像主薬（例えばメチル没食子酸塩、ヒドロキノン、置換ヒドロキノン、３－ピラゾリドン類、ｐ－アミノフェノール類、ｐ－フェニレンジアミン類、ヒンダードフェノール類、アミドキシム類、アジン類、カテコール類、ピロガロール類、アスコルビン酸（またはその誘導体）、およびロイコ色素類）、および本分野での技術に熟練しているものにとって明らかなその他の材料、例えば米国特許第６，０２０，１１７号に記載されている材料も還元剤として用いることができる。
　還元剤としては、アスコルビン酸還元剤も好ましい。有用なアスコルビン酸還元剤は、アスコルビン酸とその類縁体、異性体とその誘導体を含み、例えば、Ｄ－またはＬ－アスコルビン酸とその糖誘導体（例えばγ－ラクトアスコルビン酸、グルコアスコルビン酸、フコアスコルビン酸、グルコヘプトアスコルビン酸、マルトアスコルビン酸）、アスコルビン酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のカリウム塩、イソアスコルビン酸（又はＬ－エリスロアスコルビン酸）、その塩（例えばアルカリ金属塩、アンモニウム塩又は当技術分野において知られている塩）、エンジオールタイプのアスコルビン酸、エナミノールタイプのアスコルビン酸、チオエノ－ルタイプのアスコルビン酸等を好ましく挙げることができ、特にはＤ、ＬまたはＤ，Ｌ－アスコルビン酸（そして、そのアルカリ金属塩）若しくはイソアスコルビン酸（またはそのアルカリ金属塩）が好ましく、ナトリウム塩が好ましい塩である。必要に応じてこれらの還元剤の混合物を用いることができる。
　還元剤液は、本発明の効果等がより優れる理由から、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度が０度～１５０度になるように流すのが好ましく、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度が０度～１３５度になるように流すのがより好ましい。
　なお、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度を調節する方法としては、例えば、特開２００９－１５０８６９号公報の実施例に記載の方法等が挙げられる。
＜銀増幅液＞
　上記銀増幅液は、銀イオンを含む化合物を含有する液である。銀イオンを含む化合物としては、例えば、有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体を用いることができる。好ましくは、水などの溶媒に対して溶解度の高い銀イオン含有化合物である、硝酸銀、酢酸銀、乳酸銀、酪酸銀、チオ硫酸銀などが挙げられる。特に好ましくは硝酸銀である。銀錯体としては、水酸基やスルホン基など水溶性基を有する配位子に配位された銀錯体が好ましく、ヒドロキシチオエーテル銀等が挙げられる。
　有機銀塩、無機銀塩、もしくは銀錯体は、銀として銀増幅液に０．００１ｍｏｌ／Ｌ～５ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは０．００５ｍｏｌ／Ｌ～３ｍｏｌ／Ｌ、更には０．０１ｍｏｌ／Ｌ～１ｍｏｌ／Ｌの濃度で含有されることが好ましい。
　銀増幅液の助剤としては、緩衝剤、防腐剤、例えば酸化防止剤または有機安定剤、速度調節剤等が挙げられる。緩衝剤としては、例えば、酢酸、クエン酸、水酸化ナトリウムまたはこれらの塩のうちの一つ、又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いた緩衝剤、その他一般的化学実験に用いられる緩衝剤を用いることができる。これら緩衝剤を適宜用いて、その増幅溶液に最適なｐＨに調整することができる。また、カブリ防止剤としてアルキルアミンを助剤として用いることができ、特に好ましくはドデシルアミンである。またこれら助剤の溶解性向上のため、界面活性剤を用いることができ、特に好ましくはＣ９Ｈ１９－Ｃ６Ｈ４－Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５０Ｈである。
　銀増幅液は、本発明の効果等がより優れる理由から、上述した展開工程と逆方向から流すのが好ましく、展開工程における展開方向と還元剤液の展開方向との間の角度が４５度～１８０度になるように流すのがより好ましい。
　なお、展開工程における展開方向と銀増幅液の展開方向との間の角度を調節する方法としては、例えば、特開２００９－１５０８６９号公報の実施例に記載の方法等が挙げられる。
［２］濃縮用治具
　本発明の濃縮用治具は、上述した濃縮工程で使用される濃縮用治具であって、上述した特定高吸水性ポリマーを収容する容器を備え、上記容器は上述した抗原を含み得る液を取り込むための取込部と、上述した抗原濃縮液を排出するための排出部とを有する、濃縮用治具である。
　上述した濃縮工程において本発明の濃縮用治具を使用することにより、濃縮液の回収時間が短くなり短時間に濃縮工程を終了させることが可能となる。加えて、抗原濃縮液を定量的に取得でき、測定ごとの濃縮率のばらつきを低く抑えることが可能となる。さらに、濃縮時間と濃縮量、および濃縮率を制御可能となることにより、より簡便に且つ繰り返し再現性の高い濃縮が可能となる。
　以下、本発明の濃縮用治具の好適な態様について説明する。
［好適な態様１］
　本発明の濃縮用治具の好適な態様１は、上述した容器であるシリンダーと、上記シリンダーに挿入可能なピストンとを備える濃縮用治具である。
　図面を用いて、上記好適な態様１について説明する。
　図２は、上記好適な態様１の一態様である濃縮用治具の模式的断面図である。
　図２（Ａ）に示されるように、濃縮用治具２００は、シリンダー１０とシリンダー１０に挿入可能なピストン２０とを備える。
　ここで、シリンダー１０はノズル部１２と開口部１４と目盛り１６とを有し、特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
〔濃縮工程の手順〕
　まず、シリンダー１０に抗原を含み得る液（検体液）４０を取り込む。
　検体液４０を取り込む方法としては、例えば、（ｉ）ノズル部１２に栓をしてから開口部１４からシリンダー１０に検体液４０を入れる方法、（ｉｉ）シリンダー１０にピストン２０を挿入してからノズル部１２を検体液４０に浸け、その状態でピストンを引っ張ることにより、ノズル部１２からシリンダー１０に検体液４０を取り込む方法、等が挙げられる。
　上記（ｉ）の場合、開口部１４が上述した取込部となる。また、上記（ｉｉ）の場合、ノズル部１２が上述した取込部となる。
　その際、シリンダー１０の所定の位置（例えば、目盛り１６の上端）まで検体液４０を取り込む。このようにして、シリンダー１０に所定量の検体液４０を取り込むことができる（図２（Ｂ））。
　なお、図２ではシリンダー１０に目盛り１６が付されているが、目盛り１６の代わりに、所定量の検体液４０を取り込むためのストッパーを有していてもよい。
　次に、図２（Ｂ）の状態で所定の時間放置する。これにより、検体液４０のうち主に液（特に水）及び夾雑物が特定高吸水性ポリマー３０に吸収され、検体液４０は濃縮されて抗原濃縮液４２となる（特定高吸水性ポリマー３０は膨潤した特定高吸水性ポリマー３２となる）（図２（Ｃ））。
　そして、図２（Ｃ）の状態からピストン２０を押し込むことによりノズル部１２から抗原濃縮液４２を排出する（図２（Ｄ））。排出された抗原濃縮液４２を回収することにより抗原濃縮液４２を得る。
　抗原濃縮液４２を排出する際には、シリンダー１０の目盛り１６を利用して所定量の抗原濃縮液４２を排出する。または、抗原濃縮液４２を全量排出する。このようにして、所定量の抗原濃縮液４２を回収することができる。
　なお、図２ではシリンダー１０に目盛り１６が付されているが、目盛り１６の代わりに、所定量の抗原濃縮液４２を排出するためのストッパーを有していてもよい。
〔シリンダー〕
　上述のとおり、シリンダー１０はノズル部１２と開口部１４と目盛り１６とを有し、特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
＜材質＞
　シリンダー１０の材質は特に制限されないが、射出成型可能で安価で大量に生産できることから、熱可塑性樹脂であることが好ましい。ある程度の硬度を有することから、具体的には、ポリプロピレン、アクリル、ポリアセタール、ポリアミド、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリフェニレンサルファイド、ポリブチレンテレフタレート、ポリ塩化ビニル、ＡＢＳ樹脂（アクリロニトリル－ブタジエン－スチレン共重合樹脂）、ＡＳ樹脂（アクリロニトリル－スチレン共重合樹脂）が好ましい。
＜排出部＞
　ノズル部１２は抗原濃縮液４２を排出する部分である。
　ノズル部１２は、特定高吸水性ポリマー３０が排出されない構造を有することが好ましい。そのような構造にする方法としては、例えば、ノズル部１２の内径１２ａを特定高吸水性ポリマー３０（膨潤前）の粒子径３０ａよりも小さくする方法（好ましくは粒子径３０ａの１．５分の１以下、より好ましくは粒子径３０ａの２分の１以下、さらに好ましくは粒子径３０ａの５分の１以下）、ノズル部１２から特定高吸水性ポリマー３０が排出されることを防止するためのメッシュ（メッシュの孔径は、特定高吸水性ポリマー３０（膨潤前）の粒子径３０ａよりも小さく、好ましくは粒子径３０ａの１．５分の１以下、より好ましくは粒子径３０ａの２分の１以下、さらに好ましくは粒子径３０ａの５分の１以下）を設置する方法、ノズル部１２に栓をする方法（抗原濃縮液４２を回収する際には栓を外す）、これらの組み合わせた方法、等が挙げられる。
　ノズル部１２の先端は、抗原濃縮液４２の回収し易さの観点から、斜めになっているのが好ましい。
〔ピストン〕
　上述のとおり、濃縮用治具２００はピストン２０を備える。
＜材質＞
　ピストン２０の材質は特に制限されず、その好適な態様は上述したシリンダー１０と同じである。ピストン２０のシリンダーに挿入する側の先端部２２にはゴム材料（例えば、シリコン製のゴム）が付着されているのが好ましい。
＜径＞
　ピストン２０の先端部２２の径２２ａは特に制限されないが、特定高吸水性ポリマー３０の粒子径３０ａの５倍以上であることが好ましく、１０倍以上であることがより好ましく、２０倍以上であることがさらに好ましい。
［好適な態様２］
　本発明の濃縮用治具の好適な態様２は、上述した容器である内筒と、上記内筒を挿入及び取り出し可能な外筒とを備える濃縮用治具である。
　図面を用いて、上記好適な態様２について説明する。
　図３は、上記好適な態様２の一態様の模式的断面図である。
　図３（Ａ）に示されるように、濃縮用治具３００は、内筒５０と内筒５０を挿入及び取り出し可能な外筒６０とを備える。
　ここで、内筒５０の底面５２の少なくとも一部はメッシュ状である（図示せず）。また、内筒５０は、特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
　また、外筒６０は目盛り１６を有する。外筒６０の一方の端は底面６２によって塞がれ、他方の端は空いている。
〔濃縮工程の手順〕
　まず、内筒５０に検体液４０を取り込む。
　検体液４０を取り込む方法としては、例えば、（ｉ）内筒５０がその上方に開口部（図示せず）を有する場合には、内筒５０の開口部から内筒５０に検体液４０を入れる方法、（ｉｉ）内筒５０を外筒６０から取り出した状態で外筒６０の開口部６４から検体液４０を入れ、その後、内筒５０を外筒６０に挿入することにより、内筒５０のメッシュ状の部分から内筒５０に検体液４０を取り込む方法、等が挙げられる。
　上記（ｉ）の場合、内筒５０の開口部が上述した取込部となる。また、上記（ｉｉ）の場合、内筒５０のメッシュ状の部分が取込部となる。
　その際、外筒６０の所定の位置（例えば、目盛り１６の上端）まで検体液４０を取り込む。このようにして、内筒５０に所定量の検体液４０を取り込むことができる（図３（Ｂ））。
　次に、図３（Ｂ）の状態で所定の時間放置する。これにより、検体液４０のうち主に液（特に水）及び夾雑物が特定高吸水性ポリマー３０に吸収され、検体液４０は濃縮されて抗原濃縮液４２となる（特定高吸水性ポリマー３０は膨潤した特定高吸水性ポリマー３２となる）（図３（Ｃ））。
　そして、図３（Ｃ）の状態から内筒５０を取り出すことにより内筒５０のメッシュ状の部分から抗原濃縮液４２を排出する。排出された抗原濃縮液４２は外筒６０に溜まる。このようにして、所定量の抗原濃縮液４２を回収することができる。
〔内筒〕
　上述のとおり、内筒５０の底面５２の少なくとも一部はメッシュ状である（図示せず）。また、内筒５０は、特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
　内筒５０の底面５２の全てがメッシュ状であることが好ましい。また、内筒５０の側面５４もメッシュ状であることが好ましいが、上記（ｉ）の方法で検体液４０を取り込む場合には、内筒５０の開口部から内筒５０に検体液４０を入れる際に検体液４０が内筒５０から流出しないようにする理由から、内筒５０のうち外筒６０に挿入されたときに外筒６０から露出する部分（上側の部分）はメッシュ状でないことが好ましい。
＜材質＞
　内筒５０の材質は特に制限されないが、本発明の効果等がより優れる理由から、金属、熱可塑性樹脂（好適な態様は上述したシリンダー１０と同じ）、布が好ましく、熱可塑性樹脂がより好ましい。
＜メッシュ＞
　内筒５０のメッシュ状の部分の孔径は、本発明の効果等がより優れる理由から、特定高吸水性ポリマー３０（膨潤前）の粒子径３０ａよりも小さいことが好ましく、粒子径３０ａの１．５分の１以下であることがより好ましく、粒子径３０ａの２分の１以下であることがさらに好ましく、粒子径３０ａの５分の１以下であることが特に好ましい。
　上記メッシュ状の部分の孔径は、本発明の効果等がより優れる理由から、０．１μｍ～５ｍｍであることが好ましく、０．２μｍ～２ｍｍであることがより好ましい。
〔外筒〕
　上述のとおり、濃縮用治具３００は外筒６０を備える。
＜材質＞
　外筒６０の材質は特に制限されず、その好適な態様は上述したシリンダー１０と同じである。
　なお、内筒５０の底面５２と外筒６０の底面６２とが接しないように、内筒５０及び／又は外筒６０はストッパーを有していてもよい。
［好適な態様３］
　本発明の濃縮用治具の好適な態様３は、管部とポンプ部とを有するスポイト状である濃縮用治具である。ここで、上記管部が上述した容器である。
　図面を用いて、上記好適な態様３について説明する。
　図４は、上記好適な態様３の一態様の模式的断面図である。
　図４に示されるように、濃縮用治具４００は、管部７０とポンプ部８０とを有するスポイト状である。
　ここで、管部７０はノズル部７２と目盛り１６とを有し、特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
〔濃縮工程の手順〕
　まず、管部７０に検体液４０を取り込む。具体的には、ポンプ部８０を押圧した状態でノズル部７２を検体液４０に浸け、その状態でポンプ部８０の押圧を解除することにより、ノズル部７２から管部７０に検体液４０を取り込む。
　その際、管部７０の所定の位置（例えば、目盛り１６）まで検体液４０を取り込む。このようにして、管部７０に所定量の検体液４０を取り込むことができる。
　次に、所定の時間放置する。これにより、検体液４０のうち主に液（特に水）及び夾雑物が特定高吸水性ポリマー３０に吸収され、検体液４０は濃縮されて抗原濃縮液となる（特定高吸水性ポリマー３０は膨潤した特定高吸水性ポリマーとなる）。
　そして、ポンプ部８０を押圧することによりノズル部７２から抗原濃縮液を排出する。排出された抗原濃縮液を回収することにより抗原濃縮液を得る。
　抗原濃縮液を排出する際には、全量又は所定の目盛り（目盛り１６以外の目盛り）（図示せず）まで抗原濃縮液を排出する。このようにして、所定量の抗原濃縮液を回収することができる。
　上述のとおり、ノズル部７２から管部７０に検体液４０を取り込み、ノズル部７２から抗原濃縮液を排出するため、ノズル部７２は上述した取込部且つ上述した排出部である。
〔管部〕
　上述のとおり、管部７０はノズル部７２と目盛り１６とを有し、特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
＜材質＞
　管部７０の材質は特に制限されず、その好適な態様は上述したシリンダー１０と同じである。
＜特定高吸水性ポリマー＞
　上述のとおり、管部７０は特定高吸水性ポリマー３０を収容する。
　特定高吸水性ポリマー３０は、管部７０の内部にとどまるように配置されていることが好ましく、管部７０の内壁に存在するのがより好ましい。特定高吸水性ポリマー３０を管部７０にとどまるように配置させる方法としては、例えば、特定高吸水性ポリマー３０を管部７０の内壁に接着剤で固定する方法、ノズル部７２の内径を特定高吸水性ポリマー３０の粒子径よりも小さくする方法、特定高吸水性ポリマー３０の粒子径よりも小さい孔径のメッシュをノズル部に設置する方法、等が挙げられる。
　また、特定高吸水性ポリマー３０が収容されている位置は、検体液を取り込む所定の位置（例えば、目盛り１６）よりもノズル部７２側であることが好ましい。このような態様にすることにより、収容されている全ての特定高吸水性ポリマー３０が検体液４０と接触することが可能となり、再現性の良い濃縮率を実現することが可能となる。
〔ポンプ部〕
　上述のとおり、濃縮用治具４００はポンプ部８０を備える。
＜材質＞
　ポンプ部８０の材質は特に制限されず、その好適な態様は上述したシリンダー１０と同じである。
　管部７０に加えてポンプ部８０が特定高吸水性ポリマー３０を収容していてもよいが、その場合は、ポンプ部８０に収容されている特定高吸水性ポリマー３０に検体液４０が接触するように検体液４０を取り込むことが好ましい。
　以下、実施例により、本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
［Ａ］抗原がインフルエンザウイルスである例
［検体液の調製］
　クイックＳ－インフルＡ・Ｂ「生研」陰性／陽性コントロール液（品番；３２２９６８、デンカ生研社製）を用いて検体液（抗原を含み得る液）を調製した。
　具体的には、上記陽性コントロール液を、０．１質量％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ）を含むＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｔｓ）バッファーで、１０倍ずつ希釈し、各希釈率の検体液（抗原を含み得る液）とした。
［実施例Ａ１］
　以下のとおり、実施例Ａ１のイムノクロマトグラフィーを行った。
〔濃縮工程〕
　市販のＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子（型番１９７－１２４５１：富士フイルム和光純薬（株）社製）を、分粒して、濃縮工程で使用する高吸水性ポリマーとした。上記高吸水性ポリマーの粒子径は０．０５ｍｍであり、膨潤率は６００ｇ／ｇであり、吸水速度は２０ｇ／分であった。
　上述した検体液６ｍＬに上記高吸水性ポリマー１ｇを滴下した。滴下後、スパチュラで１０秒程撹拌して、静置した。静置時間１０分後、高吸水性ポリマーに吸収されなかった液（インフルエンザウイルス濃縮液）（抗原濃縮液）をエッペンドルフ（ピペット）で回収した。
〔展開工程〕
　図１に示されるように、上流側から、金コロイド保持パッド１、テストライン２、コントロールライン３、発色試薬固定化ライン４を有するニトロセルロースメンブレン１００を準備した。なお、金コロイド保持パッド１は、抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体で修飾された金コロイド（修飾金粒子）を保持するパッドであり、テストライン２は、抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体が固定化されたラインであり、コントロールライン３は、展開を確認するためのラインであり、発色試薬固定化ライン４は、後述する還元液を検出するためのラインである。
　上記インフルエンザウイルス濃縮液を金コロイド保持パッドに滴下した。これにより、液中のインフルエンザＡ型ウイルスと金コロイド保持パッド中の抗インフルエンザＡ型モノクローナル抗体で修飾された金コロイド粒子（修飾金粒子）との複合体である金粒子複合体が形成された。この状態で、上記ニトロセルロースメンブレンの下流側に展開した。
〔捕捉工程〕
　展開工程で展開された金粒子複合体はテストラインで捕捉される。
〔銀増幅工程〕
　以下のとおり、銀増幅工程を実施した。
＜還元剤液の調製＞
　水２９０ｇに、硝酸鉄（ＩＩＩ）九水和物（富士フイルム和光純薬社製）を水に溶解して作製した１ｍｏｌ／Ｌの硝酸鉄水溶液２３．６ｍＬ、及び、クエン酸（富士フイルム和光純薬社製）１３．１ｇを溶解させた。全て溶解した後、スターラーで攪拌しながら硝酸（１０質量％）を３６ｍｌ加え、硫酸アンモニウム鉄（ＩＩ）六水和物（富士フイルム和光純薬社製）を６０．８ｇ加え、これを還元剤液とした。
＜銀増幅液の調製＞
　水６６ｇに、硝酸銀溶液８ｍＬ（１０ｇの硝酸銀を含む）と１ｍｏｌ／Ｌの硝酸鉄水溶液２４ｍＬを加えた。さらに、この溶液と、硝酸（１０質量％）５．９ｍＬ、ドデシルアミン（富士フイルム和光純薬社製）０．１ｇ、界面活性剤Ｃ１２Ｈ２５－Ｃ６Ｈ４－Ｏ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５０Ｈ　０．１ｇをあらかじめ４７．６ｇの水に溶解した溶液を混合し、これを銀増幅液とした。
＜還元剤液の展開＞
　ニトロセルロースメンブレンにおいて、上述した展開工程と同じ方向から（より上流側から）、上述のとおり調製した還元剤液を流した。
＜銀増幅液の展開＞
　発色試薬固定化ラインが変色した後、展開工程における展開方向と逆方向から（下流側から）、上述のとおり調製した銀増幅液を流した。このようにして、テストラインで捕捉された金粒子複合体を銀増幅した。
〔評価〕
　テストラインの着色を目視により確認し、着色が確認された最も小さい希釈率（最小検出感度）を調べた。結果を表１に示す。最小検出感度が小さいほど、抗原の濃度が薄い試料でも抗原を検出できることを意味し、検出感度が高いことを意味する。
［実施例Ａ２］
　濃縮工程において、下記高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表１に示す。
〔実施例Ａ２で用いた高吸水性ポリマー〕
　市販のＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子（Ｍ２　Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　Ｉｎｃ．社製；ＳＡＰ　Ｓｐｈｅｒｅ　２．５ｍｍ）を、分粒して、濃縮工程で使用する高吸水性ポリマーとした。上記高吸水性ポリマーの粒子径は２．５ｍｍであり、膨潤率は１３ｇ／ｇであり、吸水速度は０．５ｇ／分であった。
［実施例Ａ３］
　濃縮工程において、下記高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表１に示す。
〔実施例Ａ３で用いた高吸水性ポリマー〕
　ＳＡＰ（高吸水性ポリマー）粒子は、特表２０１５－５３６３７５号公報に記載の実施例１及び比較例１の方法を参考に調製し、粒子径の異なる粒子に関しては、０．５ｍｍの篩を使って分級することにより、粒子径０．５ｍｍ、膨潤率３０ｇ／ｇの高吸水性ポリマー粒子を得た。
［実施例Ａ４］
　濃縮工程において、下記高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表１に示す。
〔実施例Ａ４で用いた高吸水性ポリマー〕
　実施例Ａ３で用いた高吸水性ポリマーの調製において、０．１ｍｍの篩を使用した以外は同様の手順に従って高吸水性ポリマーを調製した。結果、粒子径０．１ｍｍ、膨潤率９０ｇ／ｇの高吸水性ポリマー粒子を得た。
［比較例Ａ１］
　濃縮工程を行わずに、展開工程においてインフルエンザウイルス濃縮液の代わりに上述した検体液自体を用いた点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表１に示す。
［比較例Ａ２］
　濃縮工程において、下記高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。
　その結果、比較例Ａ２では着色を確認することができなかった。夾雑物によって抗体抗原反応が阻害されたためと推測される。
〔比較例Ａ２で用いた高吸水性ポリマー〕
　富士フイルム和光純薬社製ポリアクリル酸５０００を、分粒して、濃縮工程で使用する高吸水性ポリマーとした。上記高吸水性ポリマーの粒子径は０．０１ｍｍであり、膨潤率は１，０００ｇ／ｇであり、吸水速度は６０ｇ／分であった。
［比較例Ａ３］
　濃縮工程において、下記高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表１に示す。
〔比較例Ａ３で用いた高吸水性ポリマー〕
　１０質量％のＰＶＡ（ポリビニルアルコール）溶液を調製して、これを１Ｍ　ＨＣｌ中に滴下することにより粒子を調製した。得られた粒子を、分粒して、濃縮工程で使用する高吸水性ポリマーとした。上記高吸水性ポリマーの粒子径は０．５ｍｍであり、膨潤率は０．２ｇ／ｇであり、吸水速度は０．０１ｇ／分であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　表１等から分かるように、濃縮工程を行わなかった比較例Ａ１、及び、膨潤率が特定の範囲から外れる高吸水性ポリマーを用いて濃縮工程を行った比較例Ａ２～Ａ３と比較して、膨潤率が特定の範囲にある高吸水性ポリマー（特定高吸水性ポリマー）を用いて濃縮工程を行った実施例Ａ１～Ａ４は、高い検出感度を示した。なかでも、特定高吸水性ポリマーの膨潤率が２０ｇ／ｇ以上である実施例Ａ１及び実施例Ａ３～Ａ４は、より高い検出感度を示した。そのなかでも、特定高吸水性ポリマーの膨潤率が５００ｇ／ｇ以下である実施例Ａ３～Ａ４は、さらに高い検出感度を示した。
［Ｂ］抗原がＬＡＭである場合
［検体液の調製］
　健常人の尿検体（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社）をプールした尿検体に、結核菌より抽出されたリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）（０２２４９－６１、ナカライテスク社）を添加し、表２に記載のＬＡＭ濃度の検体液（抗原を含み得る液）を調製した。
［実施例Ｂ１］
　以下のとおり、実施例Ｂ１のイムノクロマトグラフィーを行った。
〔濃縮工程〕
　上述した検体液６ｍＬに、上述した実施例Ａ１で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマー１ｇを滴下した。滴下後、１０秒間撹拌して、静置した。静置時間１０分後、高吸水性ポリマーに吸収されなかった液（ＬＡＭ濃縮液）（抗原濃縮液）をエッペンドルフ（ピペット）で回収した。ＬＡＭ濃縮液中の尿素の濃度は、検体液中の尿素の濃度の５倍以下であった。
〔展開工程〕
　図１に示されるように、上流側から、金コロイド保持パッド１、テストライン２、コントロールライン３、発色試薬固定化ライン４を有するニトロセルロースメンブレン１００を準備した。なお、金コロイド保持パッド１は、抗ＬＡＭモノクローナル抗体で修飾された金コロイド（修飾金粒子）を保持するパッドであり、テストライン２は、抗ＬＡＭモノクローナル抗体が固定化されたラインであり、コントロールライン３は、展開を確認するためのラインであり、発色試薬固定化ライン４は、後述する銀増幅工程の還元液を検出するためのラインである。
　上記ＬＡＭ濃縮液を金コロイド保持パッドに滴下した。これにより、液中のＬＡＭと抗ＬＡＭモノクローナル抗体で修飾された金コロイド粒子（修飾金粒子）との複合体である金粒子複合体が形成された。この状態で、上記ニトロセルロースメンブレンの上流側から下流側に向けて展開した。
〔捕捉工程〕
　展開工程で展開された金粒子複合体はテストラインで捕捉される。
〔銀増幅工程〕
　実施例Ａ１と同様の手順に従って、銀増幅工程を実施した。
　このようにして、テストラインで捕捉された金粒子複合体を銀増幅した。
〔評価〕
　テストラインの着色を目視により確認し、以下の基準で評価した。
　＋＋＋：着色が濃い
　＋＋：着色がある
　＋：薄い着色がある
　－：着色がない
　結果を表２に示す。＋＋＋、＋＋又は＋と評価された検体液のＬＡＭ濃度のうち最も小さいＬＡＭ濃度（最小検出感度）が小さい程、検出感度が高いことを意味する。
［実施例Ｂ２］
　濃縮工程において、上述した実施例Ａ２で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表２に示す。なお、ＬＡＭ濃縮液中の尿素の濃度は、検体液中の尿素の濃度の５倍以下であった。
［実施例Ｂ３］
　濃縮工程において、上述した実施例Ａ３で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表２に示す。なお、ＬＡＭ濃縮液中の尿素の濃度は、検体液中の尿素の濃度の５倍以下であった。
［実施例Ｂ４］
　濃縮工程において、上述した実施例Ａ４で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表２に示す。なお、ＬＡＭ濃縮液中の尿素の濃度は、検体液中の尿素の濃度の５倍以下であった。
［比較例Ｂ１］
　濃縮工程を行わずに、展開工程においてＬＡＭ濃縮液の代わりに上述した検体液自体を用いた点以外は、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表２に示す。
［比較例Ｂ２］
　濃縮工程において、上述した比較例Ａ２で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表２に示す。
　比較例Ｂ２では着色を確認することができなかった。尿素等の夾雑物によって抗体抗原反応が阻害されたためと推測される。
［比較例Ｂ３］
　濃縮工程において、上述した比較例Ａ３で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマーを用いた点以外は、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施し、評価した。結果を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　表２等から分かるように、濃縮工程を行わなかった比較例Ｂ１、及び、膨潤率が特定の範囲から外れる高吸水性ポリマーを用いて濃縮工程を行った比較例Ｂ２～Ｂ３と比較して、膨潤率が特定の範囲にある高吸水性ポリマー（特定高吸水性ポリマー）を用いて濃縮工程を行った実施例Ｂ１～Ｂ４は、高い検出感度を示した。なかでも、特定高吸水性ポリマーの膨潤率が２０ｇ／ｇ以上である実施例Ｂ１及び実施例Ｂ３～Ｂ４は、より高い検出感度を示した。そのなかでも、特定高吸水性ポリマーの膨潤率が５００ｇ／ｇ以下である実施例Ｂ３～Ｂ４は、さらに高い検出感度を示した。
［Ｃ］擬陽性評価
［擬陽性評価１］
　ＬＡＭを添加していない個別尿（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社）を実施例Ｂ１の方法で濃縮し、同様に評価した。５人分の個別尿を用いて該手法で評価し、擬陽性の懸念に関して調べた。結果を表３に示す。
　＋：着色がある
　－：着色がない
［擬陽性評価２］
　ＬＡＭを添加していない個別尿（ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴ社）を実施例Ｂ１の方法で濃縮し、抗ＬＡＭモノクローナル抗体の代わりに抗ＬＡＭポリクローナル抗体を用いた点以外は実施例Ｂ１と同様に評価した。５人分の個別尿を用いて該手法で評価し、擬陽性の懸念に関して調べた。結果を表３に示す。
　＋：着色がある
　－：着色がない
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　表３から分かるように、モノクローナル抗体を用いた場合には擬陽性は見られなかったが、ポリクローナル抗体を用いた場合には擬陽性が見られた。
［Ｄ］濃縮用治具を使用したイムノクロマトグラフィー
　以下のとおり、濃縮工程において濃縮用治具を使用してイムノクロマトグラフィーを行った。
［濃縮用治具の準備］
　図２（Ａ）に示されるようなシリンジ状の濃縮用治具２００を準備した。
　ここで、シリンダー１０について、内径１０ａは２９ｍｍφであり、長さ１０ａは１００ｍｍであり、ノズル部１２の内径１２ａは１ｍｍφである。また、シリンダー１０には、上述した実施例Ａ１で使用した高吸水性ポリマーと同じ高吸水性ポリマー（１ｇ）が収容されている。また、ノズル部１２には栓がされている。
　また、ピストン２０の先端部２２にはシリコン製のゴムが付着されている。
［実施例Ｄ１］
　以下のとおり濃縮工程を行った点以外は、実施例Ａ１と同様の手順にしたがって、イムノクロマトグラフィーを実施した。その結果、実施例Ａ１と同様に高い検出感度を示した。
〔濃縮工程〕
　上述のとおり準備した濃縮用治具２００の開口部１４から上述した検体液（検体液４０）６ｍＬをピペットで添加した（図２（Ｂ））。
　次に、図２（Ｂ）の状態で１０分間静置した。これにより、検体液のうち主に水及び夾雑物が高吸水性ポリマーに吸収され、検体液は濃縮された抗原濃縮液４２となった。そして、ピストン２０を開口部１４からシリンダー１０に装着した（図２（Ｃ））。
　そして、図２（Ｃ）の状態から、ノズル部１２の栓を外し、ピストン２０を押し込むことにより、ノズル部１２から抗原濃縮液４２を２００μＬ回収した（図２（Ｄ））。
［回収時間］
　上記実施例Ｄ１の濃縮工程において、抗原濃縮液４２を回収するのに要した時間（回収時間）を計測した。なお、上記濃縮工程を合計で１０回行い、それぞれについて回収時間を計測した。そして、回収時間の平均（平均回収時間）を求めた。
　また、上述した実施例Ａ１についても同様に平均回収時間を求めた。
　結果を下記表４に示す。
［濃縮率の変動係数］
　上記実施例Ｄ１の濃縮工程における濃縮率を評価した。濃縮率に関しては、２倍、４倍、８倍、１０倍、１６倍、２０倍、３２倍、・・・と希釈していった検査液を使って評価した。濃縮前の検体液の検出可能な検査液の希釈倍率に比べて、濃縮後の検体液について検出可能な検査液の希釈倍率を調べる事で、繰り返し実験のそれぞれの濃縮率を計算した。
濃縮率＝（濃縮後の検出可能希釈倍率）／（濃縮前の検出可能希釈倍率）実施例Ａ１の方式と実施例Ｄ１の方式で回収した液の濃縮率をｎ１０で評価した。
ｎ１０の結果の変動係数は、以下の式から導くことができる。
標準偏差σは、σ＝√｛（１／Ｎ）Σ（ｘ＿ａｖ．－ｘｉ）２｝変動係数ＣＶは、ＣＶ＝σ／ｘ＿ａｖ．　　ここで、ｘ＿ａｖ．　は１０回測定の平均値
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　表４からわかるように、実施例Ａ１の方法では平均回収時間１分であったが、シリンジ状の濃縮用治具を使用することにより平均回収時間が２０秒に短縮され、抗原濃縮液の回収の短時間化が可能になることが分かった。また、同じ操作を１０回繰り返した時の濃縮後のインフルエンザウイルス濃度のバラつきに関し、濃縮率の変動係数は、６０％が３０％まで減少していることから、測定ごとのバラツきが低く抑えられ、測定精度の優れた方法であることが分かった。
　また、図３に示される濃縮用治具、及び、図４に示される濃縮用治具を用いて同様に濃縮工程を行い、平均回収時間、及び、濃縮率の変動係数を求めたところ、実施例Ｄ１と同様に、抗原濃縮液の回収の短時間化が可能になり、測定精度の優れた方法であることが確認された。
　上記のように行った濃縮用治具を使用したイムノクロマトグラフィーと同様に、濃縮用治具を準備し、実施例Ｂ１と同様の手順にしたがって、実施例Ｄ１で行った濃縮工程とイムノクロマトグラフィーにおいて、イムノクロマトグラフィーを実施し、抗原濃縮液の回収時間と濃縮率の変動係数を求めたところ、尿検体中のリポアラビノマンナン（ＬＡＭ）濃度の検出においても同様の効果が確認された。
　１　金コロイド保持パッド
　２　テストライン
　３　コントロールライン
　４　発色試薬固定化ライン
　１００　ニトロセルロースメンブレン
　１０　シリンダー
　１２　ノズル部
　１４　開口部
　１６　目盛り
　２０　ピストン
　２２　先端部
　３０　特定高吸水性ポリマー
　３２　膨潤した特定高吸水性ポリマー
　４０　抗原を含み得る液（検体液）
　４２　抗原濃縮液
　５０　内筒
　５２　底面
　５４　側面
　６０　外筒
　６２　底面
　６４　開口部
　７０　管部
　７２　ノズル部
　８０　ポンプ部
　２００、２１０、２２０、２３０、３００、３１０、３２０、３３０、４００　濃縮用治具

Claims (13)

  1. 　抗原を含み得る液と、高吸水性ポリマーとを混合することにより、前記抗原を含み得る液を濃縮して、抗原濃縮液を得る、濃縮工程と、
    　抗原抗体反応を用いて、前記抗原濃縮液中の抗原を検出する、検出工程とを備える、免疫検査方法であって、
    　前記高吸水性ポリマーの膨潤率が、０．２ｇ／ｇ超８００ｇ／ｇ未満であり、
    　前記抗原抗体反応に用いられる抗体が、モノクローナル抗体である、免疫検査方法。
  2. 　前記高吸水性ポリマーが、ポリアクリル酸系、ポリアクリルアミド系、セルロース系、又は、ポリエチレンオキシド系のポリマーである、請求項１に記載の免疫検査方法。
  3. 　前記抗原を含み得る液が、尿である、請求項１又は２に記載の免疫検査方法。
  4. 　前記抗原濃縮液中の尿素の濃度が、前記抗原を含み得る液中の尿素の濃度の５倍以下である、請求項３に記載の免疫検査方法。
  5. 　前記高吸水性ポリマーの粒子径が、５ｍｍ以下である、請求項１～４のいずれか１項に記載の免疫検査方法。
  6. 　前記高吸水性ポリマーの吸水速度が、高吸水性ポリマー１ｇ当たり０．０１ｇ／分以上４０ｇ／分以下である、請求項１～５のいずれか１項に記載の免疫検査方法。
  7. 　イムノクロマトグラフィーである、請求項１～６のいずれか１項に記載の免疫検査方法。
  8. 　前記検出工程が、
    　前記抗原濃縮液中の抗原と、前記抗原と結合し得る第１の結合物質で修飾された金粒子である修飾金粒子との複合体である金粒子複合体を形成させた状態で、前記抗原と結合し得る第２の結合物質が固定化された反応部位を有する不溶性担体に展開する、展開工程と、
    　前記不溶性担体の反応部位において、前記金粒子複合体を捕捉する、捕捉工程と、
    　前記捕捉工程で捕捉された金粒子複合体を銀増幅する、銀増幅工程とを備える、請求項７に記載の免疫検査方法。
  9. 　請求項１～８のいずれか１項に記載の免疫検査方法の濃縮工程で使用される濃縮用治具であって、
    　前記高吸水性ポリマーを収容する容器を備え、
    　前記容器は、前記抗原を含み得る液を取り込むための取込部と、前記抗原濃縮液を排出するための排出部とを有する、濃縮用治具。
  10. 　前記容器であるシリンダーと、前記シリンダーに挿入可能なピストンとを備える、請求項９に記載の濃縮用治具。
  11. 　前記容器である内筒と、前記内筒を挿入及び取り出し可能な外筒とを備える、請求項９に記載の濃縮用治具。
  12. 　管部とポンプ部とを有するスポイト状であり、
    　前記管部が前記容器である、請求項９に記載の濃縮用治具。
  13. 　前記濃縮工程において、請求項９～１２のいずれか１項に記載の濃縮用治具を用いる、請求項１～８のいずれか１項に記載の免疫検査方法。
PCT/JP2020/033152 2019-09-30 2020-09-01 免疫検査方法及び濃縮用治具 WO2021065300A1 (ja)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202080062157.0A CN114341639A (zh) 2019-09-30 2020-09-01 免疫检查方法及浓缩用夹具
JP2021550465A JP7192146B2 (ja) 2019-09-30 2020-09-01 免疫検査方法及び濃縮用治具
EP20871761.1A EP4040151A4 (en) 2019-09-30 2020-09-01 IMMUNOLOGICAL TEST METHOD AND CONDENSATION TEMPLATE
US17/690,101 US20220196643A1 (en) 2019-09-30 2022-03-09 Immunological test method and concentration jig

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019-178682 2019-09-30
JP2019178682 2019-09-30
JP2020-005325 2020-01-16
JP2020005325 2020-01-16
JP2020096898 2020-06-03
JP2020-096898 2020-06-03

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US17/690,101 Continuation US20220196643A1 (en) 2019-09-30 2022-03-09 Immunological test method and concentration jig

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021065300A1 true WO2021065300A1 (ja) 2021-04-08

Family

ID=75338142

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2020/033152 WO2021065300A1 (ja) 2019-09-30 2020-09-01 免疫検査方法及び濃縮用治具

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220196643A1 (ja)
EP (1) EP4040151A4 (ja)
JP (1) JP7192146B2 (ja)
CN (1) CN114341639A (ja)
WO (1) WO2021065300A1 (ja)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022054510A1 (ja) * 2020-09-11 2022-03-17 富士フイルム株式会社 検体液の濃縮方法、及び、検体液の検査方法
WO2023212067A1 (en) * 2022-04-28 2023-11-02 Sorrento Therapeutics, Inc. Sample collection and concentration device and methods of its use
WO2023227428A1 (de) * 2022-05-25 2023-11-30 Ist Innuscreen Gmbh Verfahren zur automatisierten online-detektion mindestens einer biologischen zielsubstanz in einer probeflüssigkeit mittels eines online-analysegeräts
WO2024074271A1 (de) * 2022-10-06 2024-04-11 Ist Innuscreen Gmbh Verfahren zur aufkonzentrierung mindestens einer anthropogenen zielsubstanz in einer probenflüssigkeit

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5728453B2 (ja) 1976-12-09 1982-06-16
US6020117A (en) 1998-09-30 2000-02-01 Eastman Kodak Company Thermally processable imaging element
WO2001040762A1 (de) * 1999-12-01 2001-06-07 Agrobiogen Gmbh Biotechnologie Probenbehälter zur konservierung und trocken-lagerung von dna/rna haltigem material
WO2005058453A1 (en) * 2003-12-15 2005-06-30 Preentec Ag Method for the concentration and purification of biological compounds
JP2009150869A (ja) 2007-11-29 2009-07-09 Fujifilm Corp イムノクロマトグラフ方法
WO2013129634A1 (ja) 2012-02-29 2013-09-06 大塚製薬株式会社 抗リポアラビノマンナン抗体及び当該抗体を用いた抗酸菌症のイムノアッセイ
JP2013543110A (ja) * 2010-09-08 2013-11-28 キアゲン ゲーエムベーハー 標的化合物を濃縮するための方法およびデバイス
JP5728453B2 (ja) * 2012-09-27 2015-06-03 富士フイルム株式会社 クロマトグラフ方法及びクロマトグラフキット
JP2015536375A (ja) 2012-11-15 2015-12-21 エルジー・ケム・リミテッド 高吸水性樹脂
WO2017139153A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Rutgers, The State University Of New Jersey Novel anti-lam and anti-pim6/lam monoclonal antibodies for diagnosis and treatment of mycobacterium tuberculosis infections

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2474940A1 (en) * 2004-07-16 2006-01-16 Peter Lea Method and device to process, label and concentrate analytes
CN109569023B (zh) * 2018-11-29 2021-03-02 杭州立昂科技有限公司 参杂去污剂的干燥水凝胶颗粒及大分子浓缩和比活性提升

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5728453B2 (ja) 1976-12-09 1982-06-16
US6020117A (en) 1998-09-30 2000-02-01 Eastman Kodak Company Thermally processable imaging element
WO2001040762A1 (de) * 1999-12-01 2001-06-07 Agrobiogen Gmbh Biotechnologie Probenbehälter zur konservierung und trocken-lagerung von dna/rna haltigem material
WO2005058453A1 (en) * 2003-12-15 2005-06-30 Preentec Ag Method for the concentration and purification of biological compounds
JP2009150869A (ja) 2007-11-29 2009-07-09 Fujifilm Corp イムノクロマトグラフ方法
JP2013543110A (ja) * 2010-09-08 2013-11-28 キアゲン ゲーエムベーハー 標的化合物を濃縮するための方法およびデバイス
WO2013129634A1 (ja) 2012-02-29 2013-09-06 大塚製薬株式会社 抗リポアラビノマンナン抗体及び当該抗体を用いた抗酸菌症のイムノアッセイ
JP5728453B2 (ja) * 2012-09-27 2015-06-03 富士フイルム株式会社 クロマトグラフ方法及びクロマトグラフキット
JP2015536375A (ja) 2012-11-15 2015-12-21 エルジー・ケム・リミテッド 高吸水性樹脂
WO2017139153A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Rutgers, The State University Of New Jersey Novel anti-lam and anti-pim6/lam monoclonal antibodies for diagnosis and treatment of mycobacterium tuberculosis infections

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP4040151A4

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022054510A1 (ja) * 2020-09-11 2022-03-17 富士フイルム株式会社 検体液の濃縮方法、及び、検体液の検査方法
WO2023212067A1 (en) * 2022-04-28 2023-11-02 Sorrento Therapeutics, Inc. Sample collection and concentration device and methods of its use
WO2023227428A1 (de) * 2022-05-25 2023-11-30 Ist Innuscreen Gmbh Verfahren zur automatisierten online-detektion mindestens einer biologischen zielsubstanz in einer probeflüssigkeit mittels eines online-analysegeräts
WO2024074271A1 (de) * 2022-10-06 2024-04-11 Ist Innuscreen Gmbh Verfahren zur aufkonzentrierung mindestens einer anthropogenen zielsubstanz in einer probenflüssigkeit

Also Published As

Publication number Publication date
CN114341639A (zh) 2022-04-12
US20220196643A1 (en) 2022-06-23
EP4040151A4 (en) 2023-02-15
JP7192146B2 (ja) 2022-12-19
EP4040151A1 (en) 2022-08-10
JPWO2021065300A1 (ja) 2021-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2021065300A1 (ja) 免疫検査方法及び濃縮用治具
JP5132664B2 (ja) イムノクロマトグラフ方法
JP5276568B2 (ja) アッセイ用デバイス
JP7141458B2 (ja) クロマトグラフキットおよびクロマトグラフ方法
JP2010230634A (ja) アッセイ方法およびアッセイ用デバイス
US20230341398A1 (en) SARS-CoV-2 DETECTION KIT AND SARS-CoV-2 DETECTION METHOD
JPWO2019124532A1 (ja) イムノクロマトグラフィー装置
JP5011244B2 (ja) 被験物質の検出方法
US8663910B2 (en) Assay method
JP5782533B2 (ja) クロマトグラフ方法及びクロマトグラフキット
KR101998948B1 (ko) 수용성 코팅층을 이용한 측방유동 분석에서의 신호 증폭 방법 및 이를 이용한 측방유동 분석 장치
JP7425883B2 (ja) 濃縮デバイス、検体液の濃縮方法、検体液の検査方法、及び、検査キット
US20220196647A1 (en) Immunochromatography
WO2021153127A1 (ja) 免疫検査方法
WO2021065144A1 (ja) イムノクロマトグラフィー
JP7350100B2 (ja) イムノクロマトグラフィー
JP2013181935A (ja) クロマトグラフ方法
JP7257556B2 (ja) イムノクロマトグラフィー
WO2022054510A1 (ja) 検体液の濃縮方法、及び、検体液の検査方法
JP5265423B2 (ja) クロマトグラフ方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20871761

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2021550465

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020871761

Country of ref document: EP

Effective date: 20220502