WO2005107734A1 - アルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物 - Google Patents

Abstract

　本発明の目的は、副作用が少なく安心して摂取できるアルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物を提供することである。テアニンを含有する組成物、及びその組成物を含有する飲食物により、目的が達成される。テアニンは、血中アルコール濃度を速やかに減少させることにより、アルコール摂取による障害（例えば、二日酔い、アルコール性肝障害）を緩和または改善することができる。

Description

明 細 書

アルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物 技術分野

[0001] 本発明は、テアニンを含有するアルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含 有する飲食物に関する。

背景技術

[0002] わが国のアルコール消費量は年々増加の一途をたどっており、 1997年度の純ァ ルコール消費量は 869,889キロリットルである（国税庁統計年報書)。成人の飲酒者 は、約 6600万人と言われているので、飲酒人口 1人当たりの純アルコール消費量は 、年間約 8.8リットルにもなる。アルコールを過剰に摂取すると、肝臓においてグルタ チオン (Glutathione： GSH)の低下、過酸ィ匕脂質増加を伴うアルコール性障害を引き 起こすことが知られていることから、アルコール性疾患を減少させるためには、アルコ ール摂取量を減らすことが望まし 、。

[0003] しかし、常識的な量の飲酒はストレスを発散させ、人生を楽しくすることもある。また 、いわゆるコンパや歓送迎会等の場では、飲酒を拒み難いこともあり得る。更に、アル コール中毒には至らないまでも、 日常的となった飲酒の習慣を急に変更することは、 必ずしも簡単ではない。そこで、二日酔いなどの悪酔い状態を回避したり、肝臓に対 する影響を軽減するなどの目的で、アルコール代謝を促進する組成物の研究が進め られている。例えば、 γ—ァミノ酪酸（GABA)、ゴマ中のセサミンなどには、アルコー ル代謝促進作用があると言われている。しかしながら、これらのアルコール代謝促進 剤にっ 、ては、未だに十分な効果が得られて 、るとは言 、難!/、。

[0004] 一方、本発明者らは、継続して緑茶特有のアミノ酸であるテアニン (Theanine)に関 する作用を研究している。テアニンには、不安惹起抑制、月経前症候群抑制、精神 集中向上、喫煙抑制等の様々な作用があることを突き止め、これらの成果の一部を 開示してきた (特開平 12— 143508、特開平 14— 97136)。また、テアニンには、ァ セトアルデヒド毒性の抑制作用も報告されている（特開平 6— 40901)。

[0005] 特許文献 1 :特開平 12— 143508号公報 特許文献 2：特開平 14 97136号公報

特許文献 3：特開平⁶ -40901号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] しかし、テアニンのアルコール代謝促進に関する詳細な検討を行った研究開発は 進められていなかった。

本発明は上記した事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、テアニンを含有 するアルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物を提供すること にある。

課題を解決するための手段

[0007] 上記課題を解決するため、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、テアニンには、 アルコール代謝促進作用があることを見出し、基本的には本発明を完成するに至つ た。

すなわち、本発明は、〔1〕テアニンを含有することを特徴とするアルコール代謝促 進組成物、

[2]前記 [1]に記載の組成物を含有することを特徴とする飲食物に関する。

発明の効果

[0008] 本発明のアルコール代謝促進組成物（以下、単に「組成物」と言うことがある）は、各 種のアルコール飲料の摂取によって生じる障害（例えば、二日酔い、アルコール性肝 障害)を緩和または改善することを目的として、単発的に或いは日常的に使用するこ とができる。本発明の組成物によるアルコール代謝促進効果は、血中アルコール濃 度の減少によってもたらされる。すなわち、本発明の組成物をアルコール飲料を摂取 する前、間、或いは後に摂取することにより、その飲料中のアルコールの体内への吸 収に基づく血中アルコール濃度をより早期に減少させる。このため、アルコール飲料 の摂取によって生じる障害を緩和または改善することができる。

[0009] また、本発明の組成物を飲食物に含有させた状態で摂取することもできる。このた め、アルコール飲料を摂取する際のおつまみ、食事、飲料等に本組成物を含有させ ることにより、容易かつ的確にアルコール代謝促進を図ることができる。 発明を実施するための最良の形態

[0010] 次に、本発明の実施形態について、詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は、 下記の実施形態によって限定されるものではなぐその要旨を変更することなぐ様 々に改変して実施することができる。また、本発明の技術的範囲は、均等の範囲にま で及ぶものである。

[0011] 本発明に用いられるテアニンとは、茶葉に含まれているグルタミン酸誘導体であり、 茶の旨味の主成分であって、呈味を用途とする食品添加物として使用されている。本 発明に用いられるテアニンの製造法としては、例えば、茶葉から抽出する方法、有機 合成反応させてテアニンを得る方法（Chem. Pharm. Bull. , 19 (7) 1301— 1307 (1971) )、グルタミンとェチルァミンの混合物にダルタミナーゼを作用させてテアニン を得る方法 (特公平 7— 55154号）、ェチルァミンを含有する培地で茶の培養細胞群 を培養し、培養細胞群中のテアニン蓄積量を増加させつつ培養細胞群の増殖促進 を図る方法 (特開平 5— 123166号）、また特公平 7— 55154号、開平 5— 123166 号におけるェチルアミンをェチルァミン塩酸塩などのェチルァミン誘導体に置き換え てテアニンを得る方法等があり、これらのいずれの方法によって得られたものでも良く

、これ以外の方法によって製造されたものでも良い。茶葉としては、緑茶、ウーロン茶 、紅茶等が例示される。

[0012] このような方法により得られたテアニンは、 L一体、 D—体、 DL—体いずれも使用可 能である力 これらのうち、特に L一体は食品添加物にも認められており、経済的にも 利用しゃす 、ことから、 L—体を用いることが好ま 、。

本発明の組成物の投与方法、投与回数、投与期間等は、特に限定されるものでは なぐヒトに対し、たとえば 1回または複数回に分けて、適当な投与形態、好ましくは経 口投与により投与することができる。また、本発明の組成物は、単発的に或いは日常 的に摂取することにより、アルコール飲料の摂取によって生じる障害を緩和または改 善することができる。特に、アルコール飲料を摂取する前、そのような飲料の摂取中、 或いは摂取後に、本発明の組成物を摂取することが好ましい。

[0013] 本発明に用いられるテアニンの安全性は高ぐ例えばマウスを用いた急性毒性試 験において、 5gZkgの経口投与でも死亡例がなぐ一般状態および体重等に異常 は認められない。また、特にテアニンは茶のうまみ成分として知られているものであり 、呈味を用途とする食品添加物としても使用され、食品衛生法上、その添加量に制 限はない。し力も、従来の薬物と異なり、テアニンによる副作用は全く認められないの で、本発明の組成物によれば、安全かつ効果的にアルコール代謝促進組成物として 使用できる。

[0014] 上記のように、安全上の観点からは、テアニンについての用量上限は認められない 。但し、経済上の観点及び実際に摂取する際の観点力 見ると、テアニンの一回当り 用量は、 O.OlmgZkg体重〜 lOOmgZkg体重であり、好ましくは O. lmgZkg体重 〜80mgZkg体重であり、更に好ましくは lmgZkg体重〜 50mgZkg体重である。 また、本発明に用いるテアニンは、精製品 (テアニン含量 98%以上）、粗精製品 (テ ァニン含量 50%〜98%)、抽出エキス (テアニン含量 10%〜50%)等のいずれの形 態でも良い。

[0015] 本発明の組成物は、飲食物に含有させて摂取することができる。そのような飲食物 としては、特に限定されるものではないが、例えば、テアニンを含有する乾燥食品等 の固形状食品、サプリメント、清涼飲料 'ミネラルウォーター '嗜好飲料'アルコール飲 料等の液状食品が挙げられる。

[0016] 固形状食品としては、例えば練り製品、大豆加工品、ムース、ゼリー、ヨーグルト、冷 菓、飴、チョコレート、ガム、クラッカー、ビスケット、クッキー、ケーキ、パン等が挙げら れる。

液状食品としては、例えば、緑茶、ウーロン茶、紅茶、ハーブティー等の茶類、濃縮 果汁、濃縮還元ジュース、ストレートジュース、果実ミックスジュース、果粒入り果実ジ ユース、果汁入り飲料、果実 ·野菜ミックスジュース、野菜ジュース、炭酸飲料、清涼 飲料、乳飲料等が挙げられる。

[0017] また、本発明の組成物は、特にアルコールを含有する飲料 (例えば、ビール、 日本 酒、ワイン、焼酎、ウィスキー、ブランデーなど）の摂取前、摂取中、或いは摂取後に 取ることが、特に有効である。このため、本発明の組成物を含有する飲食物として、ド リンク剤、食品（例えば、ガム'飴等の菓子類、チーズ等のおつまみ類）、アルコール 飲料そのもの（例えば、発泡酒、カクテル類、チューハイなど)であることが好ましい。 特に、アルコール飲料そのものに、本発明の組成物を含有させた場合には、アルコ ールを摂取しつつ、アルコール代謝促進組成物を摂取していることになるので、悪酔 V、を防止できるアルコール飲料を提供できる。

[0018] また、本発明の組成物には、更に生薬、ハーブ、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、その 他食品に許容される素材'原料を併用することができる。ここにおいて、使用する生 薬とは特に限定されるものではないが、力ノコソゥ、当帰、芍薬、牡丹、高麗人参など が挙げられる。

ハーブについては特に限定されるものではないが、了ニス、キヤロットシード、クロー ブ、コリアンダー、サイプレス、シナモン、ジュニパー、ジンジャー、スイートオレンジ、 ノ イソ-一ドル、ノ ジノレ、ノ チユリ、ビターオレンジ、フェンネル、ブラックペッパー、ベ ィ、ぺノ 一ミント、ベルガモット、マンダリン、ミノレラ、レモングラス、ローズマリー、グレツ トリーフ、バニラ、ヒソップ、ユーカリ、ライム、レモン、イランイラン、カルダモン、クラリ セージ、ジャスミン、ゼラニゥム、ブノレガリアローズ、ローズ、オリバナム、力ミツレ、ゼラ ユウム、サンダルウッドネロリ、ノ 一べナ、プチダレン、ベチノく一、マージョラム、メリツ サ、ローズウッドなどが挙げられ、好ましくはペパーミントである。これらのハーブの形 状としては抽出エキス、精油、ハーブティー等が例示される。

[0019] アミノ酸については特に限定されるものではないが、例えば、グルタミン、グルタミン 酸、イノシン酸、ァラニン、アルギニン、ァスパラギン酸、スレオ-ン、セリン、タウリン、 チォタウリン、ヒポタウリン等が挙げられる。

ビタミンについては特に限定されるものではないが、例えば、ビタミン A、ビタミン B1 、ビタミン B2、ビタミン B6、ビタミン B12、ビタミン C、ビタミン D、ビタミン E、ビタミン 、 葉酸、ニコチン酸、リボ酸、パントテン酸、ピオチン、ュビキノン等が挙げられ、好まし くはビタミン Bl、ビタミン B6、ビタミン B12である。更に、ビタミンはそれぞれの誘導体 も含まれる。

ミネラルについては特に限定されるものではないが、カルシウム、鉄、マグネシウム 、銅、亜鉛、セレン、カリウム等が例示される。

[0020] また、その他食品に許容される素材'原料としては、アロエ、ローヤルゼリー、プラセ ンタ、プロポリス、インフラボン、大豆レシチン、卵黄レシチン、卵黄油、コンドロイチン 、カカオマス、コラーゲン、酢、クロレラ、スピルリナ、イチヨウ葉、緑茶、杜仲茶、黄妃 茶、ウーロン茶、桑の葉、甜茶、バナバ茶、不飽和脂肪酸、糖アルコールやオリゴ糖 などの糖類、ビフィズス菌ゃ紅麹などの菌類、ァガリタス茸、姫マツタケ、霊芝、マイタ ケ等のキノコ類、ブルーベリー、ブルーン、ブドウ、ォリーブ、梅や稚橘類等の果実類

、落花生、アーモンド、ゴマゃ胡椒等の種実類、ピーマン、唐辛子、ネギ、カボチヤ、 ゥリ、人参、ゴボウ、モロヘイヤ、ニンニク、シソ、ヮサビ、トマト、ラツキヨウ、葉菜、芋や 豆等の野菜類、ワカメ等の海草類、魚介類、獣鳥鯨肉類、穀類等が例示され、更に これらの抽出物、乾燥品、粗精製品、精製品、加工品、醸造品等も使用できる。

[0021] また、本発明においては、 [3]テアニンを有効成分として含有するアルコール代謝 促進医薬品を提供することもできる。そのような、医薬品としての剤形は、例えば内服 薬、注射薬、貼付薬、坐薬、吸入薬等が挙げられるが、特に限定されるものではない 。内服薬は、従来使用されている錠剤、カプセル、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤等が挙 げられる。注射薬としては、筋肉注射剤、皮内注射剤、皮下注射剤、静脈注射剤等 が挙げられる。また、貼付薬としては、従来、貼付薬の製造に使用されている公知の 担体と本発明の有効成分とを配合したものを公知の貼付薬に使用されるシート等の 上に塗布してなるもの等が挙げられる。坐薬は、従来使用されるカカオ脂、グリセロゼ ラチン、ステアリン酸ナトリウム、プロピレングリコールモノステアレート等と本発明の組 成物とを配合してなるもの等が挙げられる。吸入薬としては、従来の方法により吸入さ せるものであって、例えば、水蒸気又は空気と共に鼻孔又は口腔より体内に吸収さ れ得る剤型を有するもの等が挙げられる。

[0022] また、本発明の組成物には、緑茶抽出物を併用することもできる。本発明における 緑茶抽出物には、カテキン類 (A)が 0.001%から 90%含まれており、好ましくは 0.0 1%から 85%、更に好ましくは 0.1%から 80%含まれる。緑茶抽出物に含まれるカテ キン類 (A)とは、カテキン、ガロカテキン、力テキンガレート、ガロカテキンガレート等 の非ェピ体力テキン類（B)及びェピカテキン、ェピガロカテキン、ェピカテキンガレー ト、ェピガロカテキンガレート等のェピ体力テキン類 (C)をあわせての総称 (すなわち 、 A=B + C)である。また、本発明におけるカテキン類の組成としては、更に非ェピ 体力テキン類 (B)とェピ体力テキン類 (C)の含有重量比は、非ェピ体力テキン類 Zェ ピ体力テキン類（B/C) =0.25〜9.0であるが、好ましくは 0.43〜9.0、より好ましく は 0.43〜5.67、特に 0.54〜5.67が好ましい。緑茶抽出物の一回当たりの用量は 0. 0005mgZkg体重〜 lOOOOmgZkg体重であり、好まし <は 0.0 lmgZkg体重〜 1 600mgZkg体重であり、更に好ましくは lmgZkg体重〜 lOOmgZkg体重である。 また、テアニン類 (A)と緑茶抽出物 (D)とを併用する場合には、その重量比は、緑茶 抽出物/テアニン類（DZA) =0.05〜100、好ましくは 0.1〜20、更に好ましくは 1〜 2とする。

[0023] 本発明の組成物の製法としては、テアニンを配合する工程を有するものであれば、 特に限定されるものではない。例えば、テアニンを混合する製法、溶媒中にテアニン を溶かし混合溶液とする製法、また、その混合溶液を凍結乾燥する製法、噴霧乾燥 する製法等の一般的な食品、医薬品の製法などが挙げられる。

本発明の製品形態としては、溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等の任意の形態が 例示されるが、これらに限定するものではない。食品としては、具体的には固形状食 品または液状食品として前記例示したものの他、調味料、スープ、コーヒー、ココア、 乳製品、発泡酒、カクテル類、チューハイ等が挙げられる。また、医薬品としては、用 途、剤型等に応じて適宜選択される公知の任意の担体、本発明の組成物とその他の 併合物を配合してなる錠剤、カプセル、注射剤等が例示される。

実施例

[0024] 次に、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する力 本発明の範囲はこれらの 実施例のみに限定されるものではない。なお、以下において「mg/kg」とは、体重 lk gあたりの mg投与量を示す。

参考例 1 酵素法によるテアニンの製造

0.3Mグルタミン及び 1.5M塩酸ェチルァミンを 0.05Mホウ酸緩衝液（pHl l)中、 0 .3Uダルタミナーゼ（市販品）存在下にて、 30°C、 22時間反応させ 225nmolのテア ニンを得た。次、で、反応液を Dowex 50 X 8、 Dowex 1 X 2カラムクロマトグラフ ィー（共に室町化学工業 (株)製）にかけ、これをエタノール処理することにより、反応 液から目的物質を単離し、 8.5gのテアニンを得た。 [0025] この単離物質をアミノ酸アナライザー (株式会社日立製作所製）、ペーパークロマト グラフィーにかけ、標準物質と同じ挙動を示すことにより、 L—テアニンであることを確 認した。塩酸又はダルタミナーゼで加水分解処理を行うと、 1 : 1の割合で、グルタミン 酸とェチルァミンを生じた。このように、単離物質がダルタミナーゼによって加水分解 されたことから、ェチルァミンがグルタミン酸の γ位に結合していたことが示される。ま た、加水分解で生じたグルタミン酸が L-体であることも、グルタミン酸デヒドロゲナー ゼにより確認した。

[0026] 参考例 2 テアニンの茶葉からの抽出

茶（Camellia sinensis)葉 lOKgを熱水で抽出後、濃縮して酢酸ェチルで分配し、 カテキン層と水層に分離した。水層部の溶剤を真空下で留去し、得られたエキスを力 チオン交換榭脂 (日東電工 (株)製、 NTR 729 HF)に通じ、榭脂を水で洗浄後、 アンモニア水で洗い出し、真空下で留去し、加水、噴霧乾燥して 20%テアニン 125g を得た。

参考例 3 テアニンの茶葉からの抽出

茶（Camellia sinensis)葉 10kgを熱水で抽出後、カチオン交換榭脂（室町ィ匕学ェ 業 (株)製、 Dowex HCR W— 2)に通し、 IN NaOHにより溶出した。溶出画分を 活性炭 (二村化学工業 (株)製太閤活性炭 SG)に通し、 15%エタノールによる溶出 画分を RO膜（日東電工 (株)製、 NTR 729 HF)を用いて濃縮し、カラムクロマトグ ラフィ一にて精製し、更に再結晶を行い、 24.8gのテアニンを得た。

なお、以下における各試験及び各組成物の製造にはテアニン [商品名：サンテア- ン、太陽ィ匕学株式会社製]を用いた。

[0027] く実施例 1 > テアニンのアルコール代謝酵素の活性向上

[試験方法]

CDF雄性マウスにエタノールをマウス体重 lkg当たり 3.0g経口投与した。エタノー ルの投与前にテア-ンを単回腹腔内に投与した。投与後の血中エタノール濃度と肝 臓中の過酸化脂質濃度、 GSH濃度、アルコール脱水素酵素、アルデヒド脱水素酵 素およびチトクローム P2E1の酵素活性を測定した。

[0028] [測定方法] 血中エタノールは、以下の方法 (ADH法）で測定した。 0.33Nの過塩素酸 0.8mL に血液 O.lmLを添カ卩し、ボルテックス処理後に 1, 200g、 5分間の遠心処理を行った 。この上清 O.lmLを O.lmLの緩衝液（4.8mLの 2リン酸ナトリウム Zセミカルバジド緩 衝液（PH8.7)に 0.48mM NADを加えたもの）と混合し、 0.02ml ADH (≥32I U,mL)をカロえて、 37°C、 25分間インキユーペートした後に、 340nmで吸光度を測 定した。エタノール濃度が既知の標準サンプルデータとの比較により、未知サンプル 濃度を計算した。

[0029] 肝臓中の過酸化脂質濃度は、以下の方法 (TBA蛍光光度法)で測定した。 O.lmL の肝臓サンプル（生理食塩水中、 2%ホモジネート）に、 0.5mLの 3%SDS、 1.5mL の 2.0M酢酸緩衝液（pH3.6)、 1.5mLの 0.8%チォバルビツール酸（TBA)、及び 0 •4mLの精製水をカ卩えて、全量を 4.0mLとした。なお、（1)標準サンプルでは、上記 肝臓サンプルに代えて、 20 μ Lの 50 μ molZLのマロンジアルデヒド（MDA)を加え 、精製水量を 0.48mLとし、（2)ブランクサンプルでは、上記肝臓サンプルを添加す ることなく、精製水量を 0.5mLとすることにより、それぞれ全量を 4.0mLとした。この溶 液を沸騰水中、 75分間、熱処理した後、 5分間冷却した。これに l.OmLの 0.2N塩酸 と、 5.0mLの n—ブタノールを混合し、 30秒間振盪した。 l,200gにおいて 15分間遠 心処理し、上清を採取して、蛍光測定 (励起波長 515nm、蛍光波長 553nm)した。 濃度未知サンプルは、検量線を用いることにより算出した。

[0030] 肝臓中の GSH濃度は、以下の方法 (HiSSIN— Hilf法）に準じて測定した。氷冷 下、 Potter型テフロンホモジナイザーを用い、 0.1Mリン酸ナトリウム 0.005M ED TA緩衝液 (pH8.0)にて、肝臓または心臓の 5%ホモジネート液を調製した。 0.75m Lのホモジネート液に 0.25mLの 25%メタリン酸をカ卩えよく混和した。 10,OOOgにお いて 30分間遠心分離後、 O.lmLの上清をとり、 0.1Mリン酸ナトリウム 0.005M E DTA緩衝液で 50倍希釈した。希釈液を 0.20mLとり、 3.6mLの 0.1Mリン酸ナトリウ ム 0.005M EDTA緩衝液（pH8.0)と 0.20mLの 0.1%OPT(o— phthalaldehyde) —メタノール溶液をカ卩ぇ混和した。室温にて 15分静置後、蛍光測定 (励起波長 350 nm、蛍光波長 420nm)した。濃度未知サンプルは、検量線を用いることにより算出し [0031] アルコール脱水素酵素は、以下の方法 (Hasebaらの改良法)で測定した。肝臓を 氷冷下 0.5mMトリス—塩酸緩衝液 (pH8.5)で 10%ホモジネート液とした後、 4°C、 1 05,OOOgで 20分間遠心分離し、その上清を再び 4°C、 105,OOOgで 1時間遠心分離 し、この上清を測定用のサンプルとした。 O.lmLのサンプルを 37°Cに保温したセル に入れ、 2.0mLの O.lmMグリシン—水酸化ナトリウム緩衝液 (ρΗΙΟ.7)で希釈した 後に O.lmLの 39mM NADを添加し、 37°Cで 1分間プレインキュペートし、基質とし て O.lmLの 2%エタノールを添カ卩した。 37°Cでさらに 3分間インキュベートしながら 3 40nmで吸光度を測定し、下記の数式に従 ヽ吸光度の差力 酵素活性を求めた。 式 1

[ ^] ADH activity [ n mol/min · mg protein]

= 0.40 X 厶 A /min X 1 / 0.1 X 1 / protein (mg/mi)

Δ Α Sample/min -厶 A Blank/xnin 一 Δ Α /min アルデヒド脱水酵素は、アルデヒドを酢酸などのカルボン酸に変換する酵素であり、 以下の方法 (Mantheyらの方法)で酵素活性を測定した。肝臓を氷冷下 0.1Mリン 酸緩衝液 (PH7.0)で 5%ホモジネート液とした後、 4°C、 15,OOOgで 30分間遠心分 離し、その上清をサンプルとした。 0.2mLのサンプルに 1.7mLの反応混液（64mM ピロリン酸ナトリウム 1.0mL、 lOOmM NAD 0.08mL、 lOmMピラゾール 0.02m L、 lOmM EDTA 0.2mL、蒸留水 0.4mLを混和したもの）を添カ卩し、 37°Cで 3分 間プレインキュペートした後、 O.lmLの 80mMァセトアルデヒドを加え、さらに 37°Cで インキュベートを続けながら、 5分間〜 10分間、 340nmで吸光度を測定し、下記の 数式に従!、吸光度の差力 酵素活性を求めた。

式 2

[0033] activity [ μ mol/min · mg protein]

= 1000 I 6220 X 厶 A /_min X 2.0 / 0.2 X 1 / protein (_mg/_mi)

Δ Α Sample/min Blank/min 一 Δ A/min チトクローム P2E1 (CYP2E1)の薬物代謝酵素活性は、基質と希釈したミクロソー ム液とを反応させ、生成する代謝物を蛍光検出器を用い HPLC法で測定することに より求めた。肝臓試料は、氷冷下、 Potter型テフロンホモジナイザーを用い、 0.25M スクロース + 50mMトリス塩酸緩衝液 (pH7.4)にて、 20%ホモジネート液を調製した 。 4。C、 10'OOOgで 30分間遠心分離後、上清をさらに 4。C、 105,000gで 60分間遠 心分離した後、上清をサイトゾル分画として分取し、 GST測定に用いた。遠心分離後 の沈渣であるミクロソーム分画は、 l.OmLの 50mMトリス塩酸緩衝液（pH7.4)をカロえ 、再度懸濁し、酵素活性測定に用いた。活性測定には、 3倍容の 50mMトリス塩酸緩 衝液 (PH7.4)を加え 4倍希釈したものを用いた。また、酵素活性測定とは別に、ミクロ ソーム分画のタンパク質濃度を求め、タンパク質量当りの活性を計算した。

[0034] 酵素活性の測定は、次の方法を用いた。 20 μ Lのミクロソーム分画に、 380 μしの 基質溶液（375 μ Lの 67mMリン酸カリウム緩衝液（ρΗ6.8)、 2.5 μ Lの 4mMパラ- トロフエノールメタノール（p- nitrophenoHnethanol)溶液、 2.5 μ Lの精製水を混和し たもの）と、 50 Lの精製水を混和し、 25°C、 5分間プレインキュベーションの後、 50 μ Lの NADPH—塩化マグネシウム溶液（ブランクとして、塩化マグネシウム溶液の み）を混合し、 37°C、 10分間インキュベーションした。反応終了後、 25 Lのトリフル ォロ酢酸を混合し振盪した後、 0°C、 15分間インキュベートし、 12,000g、 15分間遠 心分離して、上清を HPLCにより分析した。 HPLC分析では、酵素反応により生成す るパラ-トロカテコール (p-nitrocatechol)を測定した。 HPLC条件としては、カラムに Capcell Pack UGSO ^ m, 250x4.6mm,資生堂)を使用し、移動相としてトリ フルォロ酢酸—ァセトニトリル—水（0.1： 25： 74.9,v/v)を流速 0.8mLZminで用 いた。また、カラム温度は、 26°Cとした。検出には、 ECD ( + 700mV vs銀/塩化銀） を用いた。

[0035] <試験結果 >

表 1及び図 1には、マウスにアルコールを投与した後の血中アルコール濃度推移を 示した。

[表 1] 血中エタノール濃度 （m /m

テアニン（lOOmgZkg)をエタノール（3.0gZkg)投与 30分後に併用すると、ェタノ ール（3.0gZkg)単独で投与した場合に比べると、血中エタノール濃度は 1時間後に おいて有意に減少した (Pく 0.05)。また、 AUC は、テアニンの併用により、エタ

0-3hr

ノール単独の 76%まで減少した。このことより、エタノールとテアニンとを併用すること で、エタノールの体内からの消失が促進されることがわかった。

表 2及び図 2には、エタノール性肝障害時に上昇する過酸ィ匕脂質の濃度推移を示 した。

[表 2]

過酸化脂質 i農度 （ mol/g-protein)

エタノールのみを摂取すると、 3時間後には 1.036 (濃度単位は、 r ^u mol/gタンパク 質」である。以下同じ)まで上昇した。これは、正常時 (0時間）の 168%であった (pく 0.01)。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、過酸化脂質濃度は、正常時に 比べて、 1時間後及び 3時間後には、有意に減少した (p< 0.005)。このことより、テ ァニンはエタノール摂取による一過性の過酸ィヒ脂質濃度の上昇を抑制し、正常レべ ルに維持させることがわかった。

表 3及び図 3には、エタノール投与後のダルタチオン濃度推移を示した。 [表 3]

GSH漉度（％)

エタノールのみを投与すると、ダルタチオン濃度は、徐々に減少し、投与後 5時間 目では、正常時 (0時間）に比べると、 65.5%まで有意に減少した (p< 0.05)。一方、 エタノールとテアニンとを併用すると、ダルタチオン濃度は、投与後 30分の時点では 一過性に減少するものの（正常時の 79.84%)、その後は速やかに正常値付近まで 戻った。また、投与後 5時間目には、エタノール単独投与と比較して、ダルタチオン濃 度は有意に向上していた (Pく 0.001)。このことより、テアニンの投与は、エタノール 代謝による過酸ィ匕を防止し、肝保護作用を示すことがわ力 た。

表 4、表 5及び図 4には、エタノール投与から 3時間後の肝臓中のアルコールデヒド ロゲナーゼ活性（ADH)及び CYP2E1の変化を示した。

[表 4]

ADH活性 ( μ mol/min■ mg protein) (3hr)

[表 5] CYP2E1 (nmol/mg protein/min) (3hr)

[0039] ADH活性は、エタノールのみの投与により、コントロール（正常時）に比べると約 12 3%に上昇し、酵素が誘導され活性が増カロした。一方、エタノールとテアニンとを併用 すると、更に ADH活性の上昇が見られ (コントロールの約 183%)、酵素活性が大き く促進することが示された。

また、エタノール代謝の一部を担っている CYP2E1を測定した。このタンパク質は、 過剰のエタノールが存在するときに作用し、慢性的なエタノール摂取で誘導が起きる とされている。 CYP2E1によるアルコール代謝の際には、大量の活性酸素が生じる ために、細胞毒性を示すことが明らかになつている。図表より、エタノールの単独投与 では、コントロールに比べて有意に CYP2E1活性が上昇した (pく 0.01)。一方、ェ タノールとテアニンとを併用すると、 CYP2E1活性は、やや減少傾向（コントロールの 約 95.7%)を示した。これらのことから、テアニンを投与することにより、 CYP2E1活 性を介した肝障害を回避できる可能性があることが示された。

[0040] 表 6及び図 5には、エタノール投与から 3時間後の肝臓中のアルデヒド代謝酵素活 性 (ALDH)の変化を示した。

[表 6] ALDH活性 ( μ mol/min■ mg protein) (3hr)

エタノール単独投与では、コントロールと比べて、 ALDHは約 63.5%に減少した（p く 0.01)。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、 ALDHはコントロールとほぼ 同等の活性を示した (約 92.8%)。体内でのエタノール代謝では、アルデヒド酸化過 程が律速となっている。上記結果から見ると、テアニンは ALDH活性を上昇させる作 用が認められることから、アルデヒド代謝も促進させ、 ADH活性と併せて、アルコー ル代謝を促進することがわ力つた。

[0041] <実施例 2> 長期的アルコール摂取による肝障害に対するテアニンの影響

[試験方法]

5週齢 CDF系雄性マウスにエタノールをマウス体重 lkgあたり l.Ogもしくは 2.0gを 1日 2回経口投与した。また、テアニンを体重 lkgあたり lOOmg腹腔内投与した。エタ ノール及びテアニンを 10日間連続投与した後、血中 GOT、 GPT、 y— GTPを測定 した。併せて、肝臓中の過酸化脂質レベル、および GSHレベルを測定した。

[0042] [測定方法]

血中 GOTおよび GTPの測定は、トランスアミラーゼ C テストヮコー（和光純薬株 式会社製）により測定した。また、 γ—GTPの測定は、 γ—GTP Cテストヮコー（和 光純薬株式会社製）により測定した。また、肝臓成分の測定は実施例 1の方法に従つ て、測定した。

[0043] 血中 GOTの測定方法は、次の通りであった。まず、分離した血清 0.02mLに GOT 測定用基質酵素液 0.5mLを添加し、 37°Cで 5分間インキュベーションした。その後、 発色試液 0.5mLを添加後、 37°Cで 20分間インキュベーションし、反応停止液 2.0m Lを加え、 555nmで吸光度を測定した。 GOT活性値は、 GOT標品を用いた検量線 を作成し、その検量線との比較により、 GOT活性値 (Karmen単位)で表した。

[0044] 血中 GPTの測定方法は、次の通りであった。まず、分離した血清 0.02mLに GPT 測定用基質酵素液 0.5mLを添加し、 37°Cで 5分間インキュベーションした。その後、 発色試液 0.5mLを添加後、 37°Cで 20分間インキュベーションし、反応停止液 2.0m Lを加え、 555nmで吸光度を測定した。 GPT活性値は、 GPT標品を用いた検量線 を作成し、その検量線との比較により、 GPT活性値 (Karmen単位)で表した。

[0045] 血中 γ — GTPの測定方法は、次の通りであった。まず、基質緩衝液を 37°Cで 3分 間インキュベーションした後、血清 0.02mLを添カ卩し 37°Cで 15分間インキュベーショ ンした。次に、発色試液 2.0mLを添カ卩し、 660nmで吸光度を測定した。 y—GTP活 性値は、 γ—GTP標品を用いた検量線を作成し、その検量線との比較により、 γ - GTP活性値 (IU/1,37°C)で表した。

[0046] <試験結果 >

結果を図 6及び図 7に示した。血中 GPTは、エタノール投与により増加した力 テア ニンの併用により抑制傾向が見られた（図 6)。血中 GOTについても同様の傾向を示 した。また、肝臓中過酸ィ匕脂質量増加は、テアニンの併用により抑制された。さらに、 肝臓中 GSHレベルは、エタノール投与により有意に減少した力 テアニンの併用に より減少を抑制する傾向が見られた（図 7)。

以上より、長期的なアルコールを摂取する際に、テアニンを併用することにより、ァ ルコールによる障害を軽減することがわ力つた。

[0047] [結論]

このように本実施例によれば、テアニンは、 ADH活性及び ALDH活性を上昇させ ることにより、アルコール代謝を促進し、血中アルコール濃度を速やかに減少させるこ とがわかった。また、 CYP2E1活性の増加を押さえることにより、活性酸素による肝障 害を防止し得ることが示された。

また、長期的なアルコールを摂取する際に、テアニンを併用することにより、アルコ ールによる障害を軽減することがわ力つた。

こうして、テアニンを含有する組成物は、各種のアルコール飲料の摂取によって生 じる障害 (例えば、二日酔い、アルコール性肝障害)を緩和または改善するために提 供できる。

上記知見に基づいて、テアニンを含有する組成物、或いはその組成物を含有する 飲食物を次のようにして提供することができる。

<実施例 3 >

下表 7に示す原料を混合後打錠し、テアニンを含有する錠剤を製造した。表に示す 材料を混合し、錠剤（1錠当り lOOOmg)を打錠した。

[表 7] 材 料 名 里直 /0 ： (mg) テアニン 5. 0 50. 00 カモミール 50 500

グァーガム酵素分解物 1. 7 17. 00 結晶セノレロース 0. 75 7. 50 還元麦芽糖水飴粉末 5. 0 50. 00 乳糖 36. 675 366. 75 二酸化ケイ素 0. 125 1. 25 ショ糖脂肪酸エステル 0, 75 7. 50 口 P 1 100 1000 <実施例 4>

下表 8に示す原料を用レ、てテアニン配合キャンディーを製造した。

闘 材 料 名 重 量 グラニュー糖

水飴

テアニン

力モミ一ノレ

香料 （レモンフレ

50%酒石酸

水 グラニュー糖を水 20kgに溶解しながら 110°Cまで加熱し、テアニンを溶解した残り の水 10kgとカモミールと水飴をカ卩えて、 145°Cまで温度を上げた。火を止め、 50% 酒石酸を添加し混合した。 75°C〜80°Cまで冷却し、成形ローラーで成形し、テア- ン配合キャンディーを調製した。なお、キャンディ一中のテアニンの含量を測定した 結果、含量は 1個 1.2gで 89.6mg/gであった。

<実施例 5〉

一例として、下表 9に示す原料を用いてテアニン配合飲料を製造した。

9]

材 料 名 重 量 果糖ブドウ糖 12kg

ブル一ベリ一濃縮果汁 1kg

1/5透明レモン果汁 0. 4kg

クェン酸 Na 0. 05kg

50%クェン酸 Na (結晶） pH調整用

テアニン 0. 1kg

力モミ一ノレ 0. 6kg

香料 （ブルーベリ一フレーバー） 0. 05kg

水 適量 全 100kg 果糖ブドウ糖、ブルーベリー濃縮果汁、 1 5透明レモン果汁、クェン酸 Na、力モミ ールおよびテアニンを水にカ卩ぇ攪拌溶解した。 50%クェン酸 Na (結晶)を用い pH3.1 に調製し 95°Cまで昇温後香料をカ卩えて lOOmLに充填して冷却し、テアニン配合ブ ルーべリー飲料を製造した。なお、ブルーべリージユース中のテアニンを定量した結 果、含量は 98.3mgZlOOmLであった。

<実施例 6 >

下表 10に示す原料を用いてテアニン配合飲料を製造した。

[表 10]

材 料 名 重 量 果糖ブドウ糖液 6kg テアニン 0. 1kg 力モミ一ノレ 0. 6kg ピロリン酸第二鉄 0. 06kg プラセンタエキス 0. 01kg グレープフルーツ果汁 100% 30kg クェン酸 Na pH調整用 香料 （グレープフルーツフレーバー） 0. 05kg 水 適量 全 100kg 果糖ブドウ糖液、テアニン、カモミール、ピロリン酸第二鉄、ブラセンタエキスおよび グレープフルーツ果汁 100%を水に加え攪拌溶解した。クェン酸 Naを用い pH3.1に 調製し 95°Cまで昇温後香料を加えて、 lOOmLづっ充填して冷却し、テアニン配合 グレープフルーツ飲料を製造した。なお、グレープフルーツジュース中のテアニンを 定量した結果、含量は 96.4mg/100mLであった。

<実施例 7>

下表 11に示す原料を用いてテアニン配合アルコール飲料 (チューハイ。アルコー ル分 7%)を製造することができる。

[表 11] 原 料 配合量 （g )

果糖ぶどう糖液糖 5. 0 0

1 / 5 レモン濃縮果汁 1 . 0 0

焼酎 （アルコール分 2 5 %) 2 8. 0 0

クェン酸 （結晶） 0. 2 0

クェン酸三ナトリ ウム 0. 0 5

レモンェッセンス 0. 1 0

水 残量 テアニン（太陽化学㈱製、サンテアニン） 0. 2

炭 酸 水 5 0. 0 0 口 PT 1 0 0. 0 0 上記原料力 チューハイを製造する場合には、上記原料のうち炭酸水を除く 8つの もの（果糖ブドウ糖液糖、 1,5レモン濃縮果汁、焼酎、クェン酸、クェン酸三ナトリウ ム、レモンエッセンス、水、及びテアニン)を混合溶解し、冷却後缶等の容器に入れ、 よく冷却した炭酸水を混合し密封する。

<実施例 8>

ウィスキー 20g、ライム'ジュース 5g、グレナディンシロップ 2g、砂糖 lg、テア-ン（ 太陽ィ匕学 (株)製、サンテアニン) 0.2gおよびミネラルウォーター 72gを良く混合し密 封することにより、カクテルが得られる。

<実施例 9>

ウォッカ 20mL、グレープフルーツジュース 40mL、食塩 0.1g、テアニン（太陽化学 (株)製、サンテアニン)および果糖ぶどう糖液糖 5gを良く混合し密封することにより、 カクテルが得られる。

<実施例 10>

アルコール度数 35%の甲種焼酎 (ホワイトリカー）、梅および砂糖を 3： 3： 1の割合 で漬け込み、 3ヶ月間後に梅を除く。清澄液にテアニン (太陽化学 (株)製、サンテア ニン)を 0.1%になるように溶解し、密封することにより梅リキュールが得られる。

実施例 3〜実施例 10の飲食物によっても、実施例 1及び実施例 2と同様の効果を 得ることができる。

図面の簡単な説明

[図 1]アルコール摂取後の血中アルコール濃度の時間推移を示すグラフである。図 中、「◊」は、エタノールの単独投与を示し、「口」は、エタノールとテアニンとの併用を 示す (以下、同じ)。

圆 2]アルコール摂取後の肝臓中過酸ィ匕脂質濃度の時間推移を示すグラフである。

[図 3]アルコール摂取後の肝臓中 GSH濃度の時間推移を示すグラフである。

[図 4]アルコール摂取後の肝臓中の ADH活性 (左図）、及び CYP2E1活性 (右図）を 示すグラフである。

[図 5]アルコール摂取後の肝臓中の ALDH活性を示すグラフである。

[図 6]10日間アルコール摂取後の血中 GTP活性を示すグラフである。

[図 7] 10日間アルコール摂取後の肝臓中 GSH濃度を示すグラフである。

Claims

請求の範囲

[1] テアニンを含有することを特徴とするアルコール代謝促進組成物。

[2] 請求項 1に記載の組成物を含有することを特徴とする飲食物。