JPWO2005107734A1 - アルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物 - Google Patents

Abstract

本発明の目的は、副作用が少なく安心して摂取できるアルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物を提供することである。テアニンを含有する組成物、及びその組成物を含有する飲食物により、目的が達成される。テアニンは、血中アルコール濃度を速やかに減少させることにより、アルコール摂取による障害（例えば、二日酔い、アルコール性肝障害）を緩和または改善することができる。【選択図】 なし

Description

本発明は、テアニンを含有するアルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物に関する。

わが国のアルコール消費量は年々増加の一途をたどっており、１９９７年度の純アルコール消費量は８６９,８８９キロリットルである（国税庁統計年報書）。成人の飲酒者は、約６６００万人と言われているので、飲酒人口１人当たりの純アルコール消費量は、年間約８.８リットルにもなる。アルコールを過剰に摂取すると、肝臓においてグルタチオン（Glutathione：ＧＳＨ）の低下、過酸化脂質増加を伴うアルコール性障害を引き起こすことが知られていることから、アルコール性疾患を減少させるためには、アルコール摂取量を減らすことが望ましい。

しかし、常識的な量の飲酒はストレスを発散させ、人生を楽しくすることもある。また、いわゆるコンパや歓送迎会等の場では、飲酒を拒み難いこともあり得る。更に、アルコール中毒には至らないまでも、日常的となった飲酒の習慣を急に変更することは、必ずしも簡単ではない。そこで、二日酔いなどの悪酔い状態を回避したり、肝臓に対する影響を軽減するなどの目的で、アルコール代謝を促進する組成物の研究が進められている。例えば、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ゴマ中のセサミンなどには、アルコール代謝促進作用があると言われている。しかしながら、これらのアルコール代謝促進剤については、未だに十分な効果が得られているとは言い難い。

一方、本発明者らは、継続して緑茶特有のアミノ酸であるテアニン（Theanine）に関する作用を研究している。テアニンには、不安惹起抑制、月経前症候群抑制、精神集中向上、喫煙抑制等の様々な作用があることを突き止め、これらの成果の一部を開示してきた（特開平１２−１４３５０８、特開平１４−９７１３６）。また、テアニンには、アセトアルデヒド毒性の抑制作用も報告されている（特開平６−４０９０１）。

特開平１２−１４３５０８号公報 特開平１４−９７１３６号公報 特開平６−４０９０１号公報

しかし、テアニンのアルコール代謝促進に関する詳細な検討を行った研究開発は進められていなかった。
本発明は上記した事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、テアニンを含有するアルコール代謝促進組成物、及びこの組成物を含有する飲食物を提供することにある。

上記課題を解決するため、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、テアニンには、アルコール代謝促進作用があることを見出し、基本的には本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、〔１〕テアニンを含有することを特徴とするアルコール代謝促進組成物、
［２］前記［１］に記載の組成物を含有することを特徴とする飲食物に関する。

本発明のアルコール代謝促進組成物（以下、単に「組成物」と言うことがある）は、各種のアルコール飲料の摂取によって生じる障害（例えば、二日酔い、アルコール性肝障害）を緩和または改善することを目的として、単発的に或いは日常的に使用することができる。本発明の組成物によるアルコール代謝促進効果は、血中アルコール濃度の減少によってもたらされる。すなわち、本発明の組成物をアルコール飲料を摂取する前、間、或いは後に摂取することにより、その飲料中のアルコールの体内への吸収に基づく血中アルコール濃度をより早期に減少させる。このため、アルコール飲料の摂取によって生じる障害を緩和または改善することができる。

また、本発明の組成物を飲食物に含有させた状態で摂取することもできる。このため、アルコール飲料を摂取する際のおつまみ、食事、飲料等に本組成物を含有させることにより、容易かつ的確にアルコール代謝促進を図ることができる。

次に、本発明の実施形態について、詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は、下記の実施形態によって限定されるものではなく、その要旨を変更することなく、様々に改変して実施することができる。また、本発明の技術的範囲は、均等の範囲にまで及ぶものである。

本発明に用いられるテアニンとは、茶葉に含まれているグルタミン酸誘導体であり、茶の旨味の主成分であって、呈味を用途とする食品添加物として使用されている。本発明に用いられるテアニンの製造法としては、例えば、茶葉から抽出する方法、有機合成反応させてテアニンを得る方法（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９（７）１３０１−１３０７（１９７１））、グルタミンとエチルアミンの混合物にグルタミナーゼを作用させてテアニンを得る方法（特公平７−５５１５４号）、エチルアミンを含有する培地で茶の培養細胞群を培養し、培養細胞群中のテアニン蓄積量を増加させつつ培養細胞群の増殖促進を図る方法（特開平５−１２３１６６号）、また特公平７−５５１５４号、開平５−１２３１６６号におけるエチルアミンをエチルアミン塩酸塩などのエチルアミン誘導体に置き換えてテアニンを得る方法等があり、これらのいずれの方法によって得られたものでも良く、これ以外の方法によって製造されたものでも良い。茶葉としては、緑茶、ウーロン茶、紅茶等が例示される。

このような方法により得られたテアニンは、Ｌ−体、Ｄ−体、ＤＬ−体いずれも使用可能であるが、これらのうち、特にＬ−体は食品添加物にも認められており、経済的にも利用しやすいことから、Ｌ−体を用いることが好ましい。
本発明の組成物の投与方法、投与回数、投与期間等は、特に限定されるものではなく、ヒトに対し、たとえば１回または複数回に分けて、適当な投与形態、好ましくは経口投与により投与することができる。また、本発明の組成物は、単発的に或いは日常的に摂取することにより、アルコール飲料の摂取によって生じる障害を緩和または改善することができる。特に、アルコール飲料を摂取する前、そのような飲料の摂取中、或いは摂取後に、本発明の組成物を摂取することが好ましい。

本発明に用いられるテアニンの安全性は高く、例えばマウスを用いた急性毒性試験において、５ｇ／ｋｇの経口投与でも死亡例がなく、一般状態および体重等に異常は認められない。また、特にテアニンは茶のうまみ成分として知られているものであり、呈味を用途とする食品添加物としても使用され、食品衛生法上、その添加量に制限はない。しかも、従来の薬物と異なり、テアニンによる副作用は全く認められないので、本発明の組成物によれば、安全かつ効果的にアルコール代謝促進組成物として使用できる。

上記のように、安全上の観点からは、テアニンについての用量上限は認められない。但し、経済上の観点及び実際に摂取する際の観点から見ると、テアニンの一回当り用量は、０.０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０.１ｍｇ／ｋｇ体重〜８０ｍｇ／ｋｇ体重であり、更に好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重〜５０ｍｇ／ｋｇ体重である。また、本発明に用いるテアニンは、精製品（テアニン含量９８％以上）、粗精製品（テアニン含量５０％〜９８％）、抽出エキス（テアニン含量１０％〜５０％）等のいずれの形態でも良い。

本発明の組成物は、飲食物に含有させて摂取することができる。そのような飲食物としては、特に限定されるものではないが、例えば、テアニンを含有する乾燥食品等の固形状食品、サプリメント、清涼飲料・ミネラルウォーター・嗜好飲料・アルコール飲料等の液状食品が挙げられる。

固形状食品としては、例えば練り製品、大豆加工品、ムース、ゼリー、ヨーグルト、冷菓、飴、チョコレート、ガム、クラッカー、ビスケット、クッキー、ケーキ、パン等が挙げられる。
液状食品としては、例えば、緑茶、ウーロン茶、紅茶、ハーブティー等の茶類、濃縮果汁、濃縮還元ジュース、ストレートジュース、果実ミックスジュース、果粒入り果実ジュース、果汁入り飲料、果実・野菜ミックスジュース、野菜ジュース、炭酸飲料、清涼飲料、乳飲料等が挙げられる。

また、本発明の組成物は、特にアルコールを含有する飲料（例えば、ビール、日本酒、ワイン、焼酎、ウイスキー、ブランデーなど）の摂取前、摂取中、或いは摂取後に取ることが、特に有効である。このため、本発明の組成物を含有する飲食物として、ドリンク剤、食品（例えば、ガム・飴等の菓子類、チーズ等のおつまみ類）、アルコール飲料そのもの（例えば、発泡酒、カクテル類、チューハイなど）であることが好ましい。特に、アルコール飲料そのものに、本発明の組成物を含有させた場合には、アルコールを摂取しつつ、アルコール代謝促進組成物を摂取していることになるので、悪酔いを防止できるアルコール飲料を提供できる。

また、本発明の組成物には、更に生薬、ハーブ、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、その他食品に許容される素材・原料を併用することができる。ここにおいて、使用する生薬とは特に限定されるものではないが、カノコソウ、当帰、芍薬、牡丹、高麗人参などが挙げられる。
ハーブについては特に限定されるものではないが、アニス、キャロットシード、クローブ、コリアンダー、サイプレス、シナモン、ジュニパー、ジンジャー、スイートオレンジ、パイソニードル、バジル、パチュリ、ビターオレンジ、フェンネル、ブラックペッパー、ベイ、ペパーミント、ベルガモット、マンダリン、ミルラ、レモングラス、ローズマリー、グレットリーフ、バニラ、ヒソップ、ユーカリ、ライム、レモン、イランイラン、カルダモン、クラリセージ、ジャスミン、ゼラニウム、ブルガリアローズ、ローズ、オリバナム、カミツレ、ゼラニウム、サンダルウッドネロリ、バーベナ、プチグレン、ベチバー、マージョラム、メリッサ、ローズウッドなどが挙げられ、好ましくはペパーミントである。これらのハーブの形状としては抽出エキス、精油、ハーブティー等が例示される。

アミノ酸については特に限定されるものではないが、例えば、グルタミン、グルタミン酸、イノシン酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、スレオニン、セリン、タウリン、チオタウリン、ヒポタウリン等が挙げられる。
ビタミンについては特に限定されるものではないが、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、葉酸、ニコチン酸、リボ酸、パントテン酸、ビオチン、ユビキノン等が挙げられ、好ましくはビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２である。更に、ビタミンはそれぞれの誘導体も含まれる。
ミネラルについては特に限定されるものではないが、カルシウム、鉄、マグネシウム、銅、亜鉛、セレン、カリウム等が例示される。

また、その他食品に許容される素材・原料としては、アロエ、ローヤルゼリー、プラセンタ、プロポリス、インフラボン、大豆レシチン、卵黄レシチン、卵黄油、コンドロイチン、カカオマス、コラーゲン、酢、クロレラ、スピルリナ、イチョウ葉、緑茶、杜仲茶、黄妃茶、ウ一口ン茶、桑の葉、甜茶、バナバ茶、不飽和脂肪酸、糖アルコールやオリゴ糖などの糖類、ビフィズス菌や紅麹などの菌類、アガリクス茸、姫マツタケ、霊芝、マイタケ等のキノコ類、ブルーベリー、プルーン、ブドウ、オリーブ、梅や稚橘類等の果実類、落花生、アーモンド、ゴマや胡椒等の種実類、ピーマン、唐辛子、ネギ、カボチャ、ウリ、人参、ゴボウ、モロヘイヤ、ニンニク、シソ、ワサビ、トマト、ラッキョウ、葉菜、芋や豆等の野菜類、ワカメ等の海草類、魚介類、獣鳥鯨肉類、穀類等が例示され、更にこれらの抽出物、乾燥品、粗精製品、精製品、加工品、醸造品等も使用できる。

また、本発明においては、［３］テアニンを有効成分として含有するアルコール代謝促進医薬品を提供することもできる。そのような、医薬品としての剤形は、例えば内服薬、注射薬、貼付薬、坐薬、吸入薬等が挙げられるが、特に限定されるものではない。内服薬は、従来使用されている錠剤、カプセル、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤等が挙げられる。注射薬としては、筋肉注射剤、皮内注射剤、皮下注射剤、静脈注射剤等が挙げられる。また、貼付薬としては、従来、貼付薬の製造に使用されている公知の担体と本発明の有効成分とを配合したものを公知の貼付薬に使用されるシート等の上に塗布してなるもの等が挙げられる。坐薬は、従来使用されるカカオ脂、グリセロゼラチン、ステアリン酸ナトリウム、プロピレングリコールモノステアレート等と本発明の組成物とを配合してなるもの等が挙げられる。吸入薬としては、従来の方法により吸入させるものであって、例えば、水蒸気又は空気と共に鼻孔又は口腔より体内に吸収され得る剤型を有するもの等が挙げられる。

また、本発明の組成物には、緑茶抽出物を併用することもできる。本発明における緑茶抽出物には、カテキン類（Ａ）が０.００１％から９０％含まれており、好ましくは０.０１％から８５％、更に好ましくは０.１％から８０％含まれる。緑茶抽出物に含まれるカテキン類（Ａ）とは、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類（Ｂ）及びエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類（Ｃ）をあわせての総称（すなわち、Ａ＝Ｂ＋Ｃ）である。また、本発明におけるカテキン類の組成としては、更に非エピ体カテキン類（Ｂ）とエピ体カテキン類（Ｃ）の含有重量比は、非エピ体カテキン類／エピ体カテキン類（Ｂ／Ｃ）＝０.２５〜９.０であるが、好ましくは０.４３〜９.０、より好ましくは０.４３〜５.６７、特に０.５４〜５.６７が好ましい。緑茶抽出物の一回当たりの用量は０.０００５ｍｇ／ｋｇ体重〜１００００ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０.０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１６００ｍｇ／ｋｇ体重であり、更に好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。また、テアニン類（Ａ）と緑茶抽出物（Ｄ）とを併用する場合には、その重量比は、緑茶抽出物/テアニン類（Ｄ／Ａ）＝０.０５〜１００、好ましくは０.１〜２０、更に好ましくは１〜２とする。

本発明の組成物の製法としては、テアニンを配合する工程を有するものであれば、特に限定されるものではない。例えば、テアニンを混合する製法、溶媒中にテアニンを溶かし混合溶液とする製法、また、その混合溶液を凍結乾燥する製法、噴霧乾燥する製法等の一般的な食品、医薬品の製法などが挙げられる。
本発明の製品形態としては、溶液、懸濁物、粉末、固体成形物等の任意の形態が例示されるが、これらに限定するものではない。食品としては、具体的には固形状食品または液状食品として前記例示したものの他、調味料、スープ、コーヒー、ココア、乳製品、発泡酒、カクテル類、チューハイ等が挙げられる。また、医薬品としては、用途、剤型等に応じて適宜選択される公知の任意の担体、本発明の組成物とその他の併合物を配合してなる錠剤、カプセル、注射剤等が例示される。

次に、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例のみに限定されるものではない。なお、以下において「ｍｇ/ｋｇ」とは、体重１ｋｇあたりのｍｇ投与量を示す。
参考例１ 酵素法によるテアニンの製造
０.３Ｍグルタミン及び１.５Ｍ塩酸エチルアミンを０.０５Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１１）中、０.３Ｕグルタミナーゼ（市販品）存在下にて、３０℃、２２時間反応させ２２５ｎｍｏｌのテアニンを得た。次いで、反応液をＤｏｗｅｘ ５０×８、Ｄｏｗｅｘ １×２カラムクロマトグラフィー（共に室町化学工業（株）製）にかけ、これをエタノール処理することにより、反応液から目的物質を単離し、８.５ｇのテアニンを得た。

この単離物質をアミノ酸アナライザー（株式会社日立製作所製）、ペーパークロマトグラフィーにかけ、標準物質と同じ挙動を示すことにより、Ｌ−テアニンであることを確認した。塩酸又はグルタミナーゼで加水分解処理を行うと、１：１の割合で、グルタミン酸とエチルアミンを生じた。このように、単離物質がグルタミナーゼによって加水分解されたことから、エチルアミンがグルタミン酸のγ位に結合していたことが示される。また、加水分解で生じたグルタミン酸がＬ-体であることも、グルタミン酸デヒドロゲナーゼにより確認した。

参考例２ テアニンの茶葉からの抽出
茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）葉１０Kgを熱水で抽出後、濃縮して酢酸エチルで分配し、カテキン層と水層に分離した。水層部の溶剤を真空下で留去し、得られたエキスをカチオン交換樹脂（日東電工（株）製、ＮＴＲ ７２９ ＨＦ）に通じ、樹脂を水で洗浄後、アンモニア水で洗い出し、真空下で留去し、加水、噴霧乾燥して20％テアニン１２５ｇを得た。
参考例３ テアニンの茶葉からの抽出
茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）葉１０ｋｇを熱水で抽出後、カチオン交換樹脂（室町化学工業（株）製、Ｄｏｗｅｘ ＨＣＲ Ｗ−２）に通し、１Ｎ ＮａＯＨにより溶出した。溶出画分を活性炭（二村化学工業（株）製太閤活性炭ＳＧ）に通し、１５％エタノールによる溶出画分をＲＯ膜（日東電工（株）製、ＮＴＲ ７２９ ＨＦ）を用いて濃縮し、カラムクロマトグラフィーにて精製し、更に再結晶を行い、２４.８ｇのテアニンを得た。
なお、以下における各試験及び各組成物の製造にはテアニン[商品名：サンテアニン、太陽化学株式会社製]を用いた。

＜実施例１＞ テアニンのアルコール代謝酵素の活性向上
［試験方法］
ＣＤＦ_１雄性マウスにエタノールをマウス体重１ｋｇ当たり３.０ｇ経口投与した。エタノールの投与前にテアニンを単回腹腔内に投与した。投与後の血中エタノール濃度と肝臓中の過酸化脂質濃度、ＧＳＨ濃度、アルコール脱水素酵素、アルデヒド脱水素酵素およびチトクロームＰ２Ｅ１の酵素活性を測定した。

［測定方法］
血中エタノールは、以下の方法（ＡＤＨ法）で測定した。０.３３Ｎの過塩素酸０.８ｍＬに血液０.１ｍＬを添加し、ボルテックス処理後に１，２００ｇ、５分間の遠心処理を行った。この上清０.１ｍＬを０.１ｍＬの緩衝液（４.８ｍＬの２リン酸ナトリウム／セミカルバジド緩衝液（ｐＨ８.７）に０.４８ｍＭ ＮＡＤを加えたもの）と混合し、０.０２ｍＬのＡＤＨ（≧３２ＩＵ／ｍＬ）を加えて、３７℃、２５分間インキューベートした後に、３４０ｎｍで吸光度を測定した。エタノール濃度が既知の標準サンプルデータとの比較により、未知サンプル濃度を計算した。

肝臓中の過酸化脂質濃度は、以下の方法（ＴＢＡ蛍光光度法）で測定した。０.１ｍＬの肝臓サンプル（生理食塩水中、２％ホモジネート）に、０.５ｍＬの３％ＳＤＳ、１.５ｍＬの２.０Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３.６）、１.５ｍＬの０.８％チオバルビツール酸（ＴＢＡ）、及び０.４ｍＬの精製水を加えて、全量を４.０ｍＬとした。なお、（１）標準サンプルでは、上記肝臓サンプルに代えて、２０μＬの５０μｍｏｌ／Ｌのマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を加え、精製水量を０.４８ｍＬとし、（２）ブランクサンプルでは、上記肝臓サンプルを添加することなく、精製水量を０.５ｍＬとすることにより、それぞれ全量を４.０ｍＬとした。この溶液を沸騰水中、７５分間、熱処理した後、５分間冷却した。これに１.０ｍＬの０.２Ｎ塩酸と、５.０ｍＬのｎ−ブタノールを混合し、３０秒間振盪した。１,２００ｇにおいて１５分間遠心処理し、上清を採取して、蛍光測定（励起波長５１５ｎｍ、蛍光波長５５３ｎｍ）した。濃度未知サンプルは、検量線を用いることにより算出した。

肝臓中のＧＳＨ濃度は、以下の方法（ＨｉＳＳＩＮ−Ｈｉｌｆ法）に準じて測定した。氷冷下、Ｐｏｔｔｅｒ型テフロンホモジナイザーを用い、０.１Ｍリン酸ナトリウム−０.００５Ｍ ＥＤＴＡ緩衝液（ｐＨ８.０）にて、肝臓または心臓の５％ホモジネート液を調製した。０.７５ｍＬのホモジネート液に０.２５ｍＬの２５％メタリン酸を加えよく混和した。１０,０００ｇにおいて３０分間遠心分離後、０.１ｍＬの上清をとり、０.１Ｍリン酸ナトリウム−０.００５Ｍ ＥＤＴＡ緩衝液で５０倍希釈した。希釈液を０.２０ｍＬとり、３.６ｍＬの０.１Ｍリン酸ナトリウム−０.００５Ｍ ＥＤＴＡ緩衝液（ｐＨ８.０）と０.２０ｍＬの０.１％ＯＰＴ（o-phthalaldehyde）−メタノール溶液を加え混和した。室温にて１５分静置後、蛍光測定（励起波長３５０ｎｍ、蛍光波長４２０ｎｍ）した。濃度未知サンプルは、検量線を用いることにより算出した。

アルコール脱水素酵素は、以下の方法（Ｈａｓｅｂａらの改良法）で測定した。肝臓を氷冷下０.５ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.５）で１０％ホモジネート液とした後、４℃、１０５,０００ｇで２０分間遠心分離し、その上清を再び４℃、１０５,０００ｇで１時間遠心分離し、この上清を測定用のサンプルとした。０.１ｍＬのサンプルを３７℃に保温したセルに入れ、２.０ｍＬの０.１ｍＭグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０.７）で希釈した後に０.１ｍＬの３９ｍＭ ＮＡＤを添加し、３７℃で１分間プレインキュベートし、基質として０.１ｍＬの２％エタノールを添加した。３７℃でさらに３分間インキュベートしながら３４０ｎｍで吸光度を測定し、下記の数式に従い吸光度の差から酵素活性を求めた。

式１

アルデヒド脱水酵素は、アルデヒドを酢酸などのカルボン酸に変換する酵素であり、以下の方法（Ｍａｎｔｈｅｙらの方法）で酵素活性を測定した。肝臓を氷冷下０.１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７.０）で５％ホモジネート液とした後、４℃、１５,０００ｇで３０分間遠心分離し、その上清をサンプルとした。０.２ｍＬのサンプルに１.７ｍＬの反応混液（６４ｍＭピロリン酸ナトリウム１.０ｍＬ、１００ｍＭ ＮＡＤ ０.０８ｍＬ、１０ｍＭピラゾール ０.０２ｍＬ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ ０.２ｍＬ、蒸留水０.４ｍＬを混和したもの）を添加し、３７℃で３分間プレインキュベートした後、０.１ｍＬの８０ｍＭアセトアルデヒドを加え、さらに３７℃でインキュベートを続けながら、５分間〜１０分間、３４０ｎｍで吸光度を測定し、下記の数式に従い吸光度の差から酵素活性を求めた。

式２

チトクロームＰ２Ｅ１（ＣＹＰ２Ｅ１）の薬物代謝酵素活性は、基質と希釈したミクロソーム液とを反応させ、生成する代謝物を蛍光検出器を用いＨＰＬＣ法で測定することにより求めた。肝臓試料は、氷冷下、Ｐｏｔｔｅｒ型テフロンホモジナイザーを用い、０.２５Ｍスクロース＋５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７.４）にて、２０％ホモジネート液を調製した。４℃、１０,０００ｇで３０分間遠心分離後、上清をさらに４℃、１０５,０００ｇで６０分間遠心分離した後、上清をサイトゾル分画として分取し、ＧＳＴ測定に用いた。遠心分離後の沈渣であるミクロソーム分画は、１.０ｍＬの５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７.４）を加え、再度懸濁し、酵素活性測定に用いた。活性測定には、３倍容の５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７.４）を加え４倍希釈したものを用いた。また、酵素活性測定とは別に、ミクロソーム分画のタンパク質濃度を求め、タンパク質量当りの活性を計算した。

酵素活性の測定は、次の方法を用いた。２０μＬのミクロソーム分画に、３８０μＬの基質溶液（３７５μＬの６７ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６.８）、２.５μＬの４ｍＭパラニトロフェノールメタノール（p-nitrophenol-methanol）溶液、２.５μＬの精製水を混和したもの）と、５０μＬの精製水を混和し、２５℃、５分間プレインキュベーションの後、５０μＬのＮＡＤＰＨ−塩化マグネシウム溶液（ブランクとして、塩化マグネシウム溶液のみ）を混合し、３７℃、１０分間インキュベーションした。反応終了後、２５μＬのトリフルオロ酢酸を混合し振盪した後、０℃、１５分間インキュベートし、１２,０００ｇ、１５分間遠心分離して、上清をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ分析では、酵素反応により生成するパラニトロカテコール（p-nitrocatechol）を測定した。ＨＰＬＣ条件としては、カラムにＣａｐｃｅｌｌ Ｐａｃｋ ＵＧ８０（５μｍ，２５０ｘ４.６ｍｍ，資生堂)を使用し、移動相としてトリフルオロ酢酸−アセトニトリル−水（０.１：２５：７４.９,ｖ／ｖ）を流速０.８ｍＬ／ｍｉｎで用いた。また、カラム温度は、２６℃とした。検出には、ＥＣＤ（＋７００ｍＶ vs 銀/塩化銀)を用いた。

＜試験結果＞
表１及び図１には、マウスにアルコールを投与した後の血中アルコール濃度推移を示した。

テアニン（１００ｍｇ／ｋｇ）をエタノール（３.０ｇ／ｋｇ）投与３０分後に併用すると、エタノール（３.０ｇ／ｋｇ）単独で投与した場合に比べると、血中エタノール濃度は１時間後において有意に減少した（ｐ＜０.０５）。また、ＡＵＣ_{０−３ｈｒ}は、テアニンの併用により、エタノール単独の７６％まで減少した。このことより、エタノールとテアニンとを併用することで、エタノールの体内からの消失が促進されることがわかった。

表２及び図２には、エタノール性肝障害時に上昇する過酸化脂質の濃度推移を示した。

エタノールのみを摂取すると、３時間後には１.０３６（濃度単位は、「μmol/gタンパク質」である。以下同じ）まで上昇した。これは、正常時（０時間）の１６８％であった（ｐ＜０.０１）。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、過酸化脂質濃度は、正常時に比べて、１時間後及び３時間後には、有意に減少した（ｐ＜０.００５）。このことより、テアニンはエタノール摂取による一過性の過酸化脂質濃度の上昇を抑制し、正常レベルに維持させることがわかった。

表３及び図３には、エタノール投与後のグルタチオン濃度推移を示した。

エタノールのみを投与すると、グルタチオン濃度は、徐々に減少し、投与後５時間目では、正常時（０時間）に比べると、６５.５％まで有意に減少した（ｐ＜０.０５）。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、グルタチオン濃度は、投与後３０分の時点では一過性に減少するものの（正常時の７９.８４％）、その後は速やかに正常値付近まで戻った。また、投与後５時間目には、エタノール単独投与と比較して、グルタチオン濃度は有意に向上していた（ｐ＜０.００１）。このことより、テアニンの投与は、エタノール代謝による過酸化を防止し、肝保護作用を示すことがわかった。

表４、表５及び図４には、エタノール投与から３時間後の肝臓中のアルコールデヒドロゲナーゼ活性（ＡＤＨ）及びＣＹＰ２Ｅ１の変化を示した。

ＡＤＨ活性は、エタノールのみの投与により、コントロール（正常時）に比べると約１２３％に上昇し、酵素が誘導され活性が増加した。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、更にＡＤＨ活性の上昇が見られ（コントロールの約１８３％）、酵素活性が大きく促進することが示された。
また、エタノール代謝の一部を担っているＣＹＰ２Ｅ１を測定した。このタンパク質は、過剰のエタノールが存在するときに作用し、慢性的なエタノール摂取で誘導が起きるとされている。ＣＹＰ２Ｅ１によるアルコール代謝の際には、大量の活性酸素が生じるために、細胞毒性を示すことが明らかになっている。図表より、エタノールの単独投与では、コントロールに比べて有意にＣＹＰ２Ｅ１活性が上昇した（ｐ＜０.０１）。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、ＣＹＰ２Ｅ１活性は、やや減少傾向（コントロールの約９５.７％）を示した。これらのことから、テアニンを投与することにより、ＣＹＰ２Ｅ１活性を介した肝障害を回避できる可能性があることが示された。

表６及び図５には、エタノール投与から３時間後の肝臓中のアルデヒド代謝酵素活性（ＡＬＤＨ）の変化を示した。

エタノール単独投与では、コントロールと比べて、ＡＬＤＨは約６３.５％に減少した（ｐ＜０.０１）。一方、エタノールとテアニンとを併用すると、ＡＬＤＨはコントロールとほぼ同等の活性を示した（約９２.８％）。体内でのエタノール代謝では、アルデヒド酸化過程が律速となっている。上記結果から見ると、テアニンはＡＬＤＨ活性を上昇させる作用が認められることから、アルデヒド代謝も促進させ、ＡＤＨ活性と併せて、アルコール代謝を促進することがわかった。

＜実施例２＞ 長期的アルコール摂取による肝障害に対するテアニンの影響
[試験方法]
５週齢ＣＤＦ_１系雄性マウスにエタノールをマウス体重１ｋｇあたり１.０ｇもしくは２.０ｇを１日２回経口投与した。また、テアニンを体重１ｋｇあたり１００ｍｇ腹腔内投与した。エタノール及びテアニンを１０日間連続投与した後、血中ＧＯＴ、ＧＰＴ、γ−ＧＴＰを測定した。併せて、肝臓中の過酸化脂質レベル、およびＧＳＨレベルを測定した。

[測定方法]
血中ＧＯＴおよびＧＴＰの測定は、トランスアミラーゼＣ−テストワコー（和光純薬株式会社製）により測定した。また、γ−ＧＴＰの測定は、γ−ＧＴＰ Ｃテストワコー（和光純薬株式会社製）により測定した。また、肝臓成分の測定は実施例１の方法に従って、測定した。

血中ＧＯＴの測定方法は、次の通りであった。まず、分離した血清０.０２ｍＬにＧＯＴ測定用基質酵素液０.５ｍＬを添加し、３７℃で５分間インキュベーションした。その後、発色試液０.５ｍＬを添加後、３７℃で２０分間インキュベーションし、反応停止液２.０ｍＬを加え、５５５ｎｍで吸光度を測定した。ＧＯＴ活性値は、ＧＯＴ標品を用いた検量線を作成し、その検量線との比較により、ＧＯＴ活性値（Karmen単位）で表した。

血中ＧＰＴの測定方法は、次の通りであった。まず、分離した血清０.０２ｍＬにＧＰＴ測定用基質酵素液０.５ｍＬを添加し、３７℃で５分間インキュベーションした。その後、発色試液０.５ｍＬを添加後、３７℃で２０分間インキュベーションし、反応停止液２.０ｍＬを加え、５５５ｎｍで吸光度を測定した。ＧＰＴ活性値は、ＧＰＴ標品を用いた検量線を作成し、その検量線との比較により、ＧＰＴ活性値（Karmen単位）で表した。

血中γ−ＧＴＰの測定方法は、次の通りであった。まず、基質緩衝液を３７℃で３分間インキュベーションした後、血清０.０２ｍＬを添加し３７℃で１５分間インキュベーションした。次に、発色試液２.０ｍＬを添加し、６６０ｎｍで吸光度を測定した。γ−ＧＴＰ活性値は、γ−ＧＴＰ標品を用いた検量線を作成し、その検量線との比較により、γ−ＧＴＰ活性値(IU/l,37℃)で表した。

＜試験結果＞
結果を図６及び図７に示した。血中ＧＰＴは、エタノール投与により増加したが、テアニンの併用により抑制傾向が見られた（図６）。血中ＧＯＴについても同様の傾向を示した。また、肝臓中過酸化脂質量増加は、テアニンの併用により抑制された。さらに、肝臓中ＧＳＨレベルは、エタノール投与により有意に減少したが、テアニンの併用により減少を抑制する傾向が見られた（図７）。
以上より、長期的なアルコールを摂取する際に、テアニンを併用することにより、アルコールによる障害を軽減することがわかった。

［結論］
このように本実施例によれば、テアニンは、ＡＤＨ活性及びＡＬＤＨ活性を上昇させることにより、アルコール代謝を促進し、血中アルコール濃度を速やかに減少させることがわかった。また、ＣＹＰ２Ｅ１活性の増加を押さえることにより、活性酸素による肝障害を防止し得ることが示された。
また、長期的なアルコールを摂取する際に、テアニンを併用することにより、アルコールによる障害を軽減することがわかった。
こうして、テアニンを含有する組成物は、各種のアルコール飲料の摂取によって生じる障害（例えば、二日酔い、アルコール性肝障害）を緩和または改善するために提供できる。

上記知見に基づいて、テアニンを含有する組成物、或いはその組成物を含有する飲食物を次のようにして提供することができる。
＜実施例３＞
下表７に示す原料を混合後打錠し、テアニンを含有する錠剤を製造した。表に示す材料を混合し、錠剤（１錠当り１０００ｍｇ）を打錠した。

＜実施例４＞
下表８に示す原料を用いてテアニン配合キャンディーを製造した。

グラニュー糖を水２０ｋｇに溶解しながら１１０℃まで加熱し、テアニンを溶解した残りの水１０ｋｇとカモミールと水飴を加えて、１４５℃まで温度を上げた。火を止め、５０％酒石酸を添加し混合した。７５℃〜８０℃まで冷却し、成形ローラーで成形し、テアニン配合キャンディーを調製した。なお、キャンディー中のテアニンの含量を測定した結果、含量は１個１.２ｇで８９.６ｍｇ／ｇであった。

＜実施例５＞
一例として、下表９に示す原料を用いてテアニン配合飲料を製造した。

果糖ブドウ糖、ブルーベリー濃縮果汁、１／５透明レモン果汁、クエン酸Ｎａ、カモミールおよびテアニンを水に加え攪拌溶解した。５０％クエン酸Ｎａ(結晶)を用いｐＨ３.１に調製し９５℃まで昇温後香料を加えて１００ｍＬに充填して冷却し、テアニン配合ブルーベリー飲料を製造した。なお、ブルーベリージュース中のテアニンを定量した結果、含量は９８.３ｍｇ／１００ｍＬであった。

＜実施例６＞
下表１０に示す原料を用いてテアニン配合飲料を製造した。

果糖ブドウ糖液、テアニン、カモミール、ピロリン酸第二鉄、プラセンタエキスおよびグレープフルーツ果汁１００％を水に加え攪拌溶解した。クエン酸Ｎａを用いｐＨ３.１に調製し９５℃まで昇温後香料を加えて、１００ｍＬづつ充填して冷却し、テアニン配合グレープフルーツ飲料を製造した。なお、グレープフルーツジュース中のテアニンを定量した結果、含量は９６.４ｍｇ／１００ｍＬであった。

＜実施例７＞
下表１１に示す原料を用いてテアニン配合アルコール飲料（チューハイ。アルコール分７％）を製造することができる。

上記原料からチューハイを製造する場合には、上記原料のうち炭酸水を除く８つのもの（果糖ブドウ糖液糖、１／５レモン濃縮果汁、焼酎、クエン酸、クエン酸三ナトリウム、レモンエッセンス、水、及びテアニン）を混合溶解し、冷却後缶等の容器に入れ、よく冷却した炭酸水を混合し密封する。

＜実施例８＞
ウイスキー２０ｇ、ライム・ジュース５ｇ、グレナデインシロップ２ｇ、砂糖１ｇ、テアニン（太陽化学（株）製、サンテアニン）０.２ｇおよびミネラルウオーター７２ｇを良く混合し密封することにより、カクテルが得られる。
＜実施例９＞
ウォッカ２０ｍＬ、グレープフルーツジュース４０ｍＬ、食塩０.１ｇ、テアニン（太陽化学（株）製、サンテアニン）および果糖ぶどう糖液糖５ｇを良く混合し密封することにより、カクテルが得られる。
＜実施例１０＞
アルコール度数３５％の甲種焼酎（ホワイトリカー）、梅および砂糖を３：３：１の割合で漬け込み、３ヶ月間後に梅を除く。清澄液にテアニン（太陽化学（株）製、サンテアニン）を０.１％になるように溶解し、密封することにより梅リキュールが得られる。
実施例３〜実施例１０の飲食物によっても、実施例１及び実施例２と同様の効果を得ることができる。

アルコール摂取後の血中アルコール濃度の時間推移を示すグラフである。図中、「◇」は、エタノールの単独投与を示し、「□」は、エタノールとテアニンとの併用を示す（以下、同じ）。 アルコール摂取後の肝臓中過酸化脂質濃度の時間推移を示すグラフである。 アルコール摂取後の肝臓中ＧＳＨ濃度の時間推移を示すグラフである。 アルコール摂取後の肝臓中のＡＤＨ活性（左図）、及びＣＹＰ２Ｅ１活性（右図）を示すグラフである。 アルコール摂取後の肝臓中のＡＬＤＨ活性を示すグラフである。 １０日間アルコール摂取後の血中ＧＴＰ活性を示すグラフである。 １０日間アルコール摂取後の肝臓中ＧＳＨ濃度を示すグラフである。

Claims (2)

1. テアニンを含有することを特徴とするアルコール代謝促進組成物。
2. 請求項１に記載の組成物を含有することを特徴とする飲食物。

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