WO2005067918A1

WO2005067918A1 - 天然物由来の活性酸素消去剤およびその用途

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Publication number: WO2005067918A1
Application number: PCT/JP2004/019773
Authority: WO
Inventors: Kiyoshi Midorikawa; Shigetoshi Kadota; Katsumichi Matsushige
Original assignee: Nihon Propolis Co., Ltd.
Priority date: 2004-01-16
Filing date: 2004-12-24
Publication date: 2005-07-28
Also published as: EP1621194A1; TW200528124A; EP1621194A4; US20060110520A1; BRPI0409330A; JP2005200360A

Abstract

水と、有機溶剤と、乳化剤を含むと共に、p-クマリン酸、3,4-ジ-O-カフェオイルキナ酸、3,5-ジ-O-カフェオイルキナ酸、4-ヒドロキシ-3-プレニルケイ皮酸および3,5,7-トリヒドロキシ-4'-メトキシフラボノールを主要有効成分として含む天然物由来の活性酸素消去剤、並びに該活性酸素消去剤を含む食品および化粧料である。

Description

明細書天然物由来の活性酸素消去剤およびその用途技術分野

本発明は、天然物由来の活性酸素消去剤およびその用途に関する。さらに洋しくは、本発明は、有効成分としてフラポノイド類ゃヒドロキシケィ皮酸誘導本などを含み、食品用や化粧料用などとして有用な天然物由来の活性酸素消去剤、並びに該活性酸素消去剤を含む食品および化粧料に関するものである。

背景技術

酸素は生体にとつて代謝によるエネルギーの産生など、生命の維持には必須な物質であるが、生体内外での諸反応系、すなわち一部の免疫反応や紫外線 ' 射線照射等により反応性に富んだ活性酸素種（スーパーォキサイドアェオン：〇₂ ―、過酸化水素： H ₂0 ₂、ヒドロキシルラジカル： O H■、一重項酸素：等）やフリーラジカルを産生する。これらの活性酸素種やフリーラジカルは、例えばある免疫反応においては侵入した細菌等の異物を不活性化することにはに立つ一方で、生体成分と反応して脂質の過酸化、蛋白質や核酸の変性を引き起こし、種々の疾病や老化の促進の原因となることが知られている。特に皮膚は、身体の最外層にあるために、紫外線や放射線等の外部要因により発生する活性酸素種やフリーラジカルの影響を受け易く、これらが皮膚で過剰に産生すると、ヲジカル反応による過酸化脂質の生成ゃシミ、ソバカス等の皮膚の異常な色素の茧生が増強されることが知られている。

生体内で種々の原因により生じたスーパーォキサイドアェオン O ₂ は、藤素スーパーオキサイドデイスムターゼ（以下 S O Dと略記する）により H ₂0₂に変換され、さらに H ₂ 0 ₂は酵素カタラーゼゃグルタチオンペルォキシダーゼの作用によって水と酸素とに分解される。これらの酵素に加えて生体内にはビタミン Cゃビタミン E等の食品由来の抗酸化物質が存在し、これらが生体内のラジカル反応や酸化反応を抑制するネットワークを形成して活性酸素ゃフリーラジカノレによる諸障害の防御にあたると考えられている。し力し、周囲ならぴに生体内の環境の変化、例えば細菌やウィルス等による感染、食物の摂取状態や栄養状態の変化、紫外線の過剰な照射、周囲から受ける種々のストレスおよび加齢 ·老化等により上記のネットワークのバランスが崩れると、生体内で産生される活性酸素やフリーラジカルの代謝バランスが崩れ、結果として過酸化脂質量の増加、皮膚炎、シミ、シヮ、湿疹、ソバカス等の美容上の障害となる諸症状が現れ、さらには関節リウマチ、動脈硬化、糖尿病、肝炎、腎炎や癌等の疾病が引き起こされることが知られている。

また、人が摂取する食品や食品添加物についても、紫外線や放射線の作用により発生する活性酸素やフリーラジカルによる酸化や通常の酸化によって、それらに含まれている脂質その他の成分の過酸化や変性が起こり、それら酸化、変性物の摂取は健康上好ましくないことは周知のことである。さらに、化粧品、皮膚外用剤に配合されることがある不飽和脂質を含む天然油脂や界面活性剤の中には、紫外線等の作用によつて酸化を受け易いものがあることが知られており、結果として変色や異臭の発生等の好ましくない現象が起こることが多レ、。このような酸化を受け易い化粧品基剤の使用によって、前述の諸原因によって皮膚に生ずる脂質過酸化物の量が増大し、上記の美容上の障害となる諸症状が増幅されることは容易に推測されることである。

従来、化粧品、食品、食品添加物および飼料に添加されている抗酸化剤としては、ジプチルヒドロキシトルエン ( B HT) 、プチルヒドロキシァ二ソール (B HA) 、エトキシキン等の合成抗酸ィ匕剤の他、ァスコルビン酸やビタミン E等の天然抗酸化剤がある。上記の合成抗酸化剤は、抗酸化効果は優れているが、発癌性等の安全性に問題があるものがあり、その使用については制限されているものもある。一方、上記の天然由来の抗酸化剤は、安全性については評価されるものの、抗酸化効果は合成抗酸化剤よりもかなり劣るという欠点がある。

近年、このような状況下で活'性酸素 ·フリ一ラジカル消去効果ゃ抗酸化効果を有する物質もしくは組成物の香粧品科学的、食品科学的また薬学的見地からの探索が活発に行われ、その結果、かなりの数の活性酸素 ·フリ一ラジカル消去剤や抗酸化剤が知られるようになった。例えば、ォゥゴンに含まれるフラボノイド成分であるバイカレインを含有する活性酸素消去剤（例えば、特公平 4一 3 4 9 6 9号公報参照）、クローブ油またはその成分であるデハイドロジオイゲノールからなる活性酸素消去 ·除去剤（例えば、特開平 3— 2 2 7 9 3 8号公報参照）、クルミ殼抽出物を有効成分とする活性酸素消去剤（例えば、特開平 7— 6 9 9 1 2号公報参照）などが提案されている。

一方、従来より、天然の抗菌性物質や健康増進物質としてプロポリスが知られている。このプロポリスは、ミツバチが巣の保全のために作る濃緑色〜茶褐色の粘着性物質であり、ミツバチが樹木より採取したガム質 ·樹液■植物色素系物質 -香油等の集合体に、自身の分泌物 ·蜜蠟等を混合して作られる。該プロポリスについては、抗腫瘍活性、抗酸化活性、抗炎症活性、抗菌活性など様々な生物活性が報告されている。生理活性を有する化合物群としてはケィ皮酸誘導体、フラボノイド類、エステル類や、その他のフエノール性化合物群等があげられ、亜熱帯産のプロポリスにおいては加えてテルペン類の存在が報告されている。

発明の開示

本発明は、活性酸素やフリーラジカル消去能が高く、かつ人体に対して安全であって、各種用途に有用な天然物由来の活性酸素消去剤およびその用途を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、前記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、例えばプロポリス原塊粉末の抽出処理で得ることのできる、フラポノイド類、ヒドロキシケィ皮酸誘導体、その他フェノール性化合物などの複数種の有効成分を含む天然物由来の物質により、その目的を達成し得ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、

( 1 ) 水と、有機溶剤と、乳化剤を含むと共に、； p—クマリン酸、 3， 4ージー O—力フエオイルキナ酸、 3 , 5—ジ—O—力フエオイルキナ酸、 4ーヒドロキシー 3—プレニルケィ皮酸および 3 , 5 , 7—トリヒドロキシー 4 ' ーメトキシブラボノールを主要有効成分として含むことを特徴とする天然物由来の活性酸素消去剤、

( 2 ) さらに、 3， 5—ジプレニルー 4ーヒドロキシケィ皮酸、カェムフェライド、べッレトーノレ、クロロゲン酸、ェノレマニン、タリシン、カフェ一酸、カェムフエ口ールおよびバニリンを有効成分として含む上記 ( 1 ) 項に記載の天然物由来の活性酸素消去剤、

(3) 有機溶剤が、分子中に水酸基²個以上を有する多価アルコール系化合物である上記 (1) または（2) 項に記載の天然物由来の活性酸素消去剤、

( 4 ) 乳化剤が、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸ェステル、レシチン類およぴサポユン類の中から選ばれる少なくとも 1種である上記 (1) 、（2) または（3) 項に記載の天然物由来の活性酸素消去剤、

(5) 上記 (1) 〜（4) 項のいずれか 1項に記載の活性酸素消去剤を含むことを特徴とする贪品、および

(6) 上記 (1) 〜（4) 項のいずれか 1項に記載の活性酸素消去剤を含むことを特徵とする化粧料、

を提供するものである。

本発明によれば、活性酸素ゃフリーラジカル消去能が高く、カゝっ人体に対して安全であって、各種用途に有用な天然物由来の活性酸素消去剤、並びに該活性酸素消去剤を含む食品および化粧料を提供することができる。

図面の簡単な説明

図 1は、抽出溶媒として水を用いて得られたプロポリス原塊抽出物の 1例の高速液体クロマトグラムである。

図 2は、抽出溶媒としてグリセリンを用いて得られたプロポリス原塊抽出物の 1例の高速液体ク口マトグラムである。

図 3は、抽出溶媒として水とグリセリンの混合液を用いて得られたプロポリス原塊抽出物の 1例の高速液体クロマトグラムである。

図 4は、抽出溶媒として水とグリセリンと乱化剤の混合液を用いて得られたプ口ポリス原塊抽出物の 1例の高速液体クロマトグラムである。

発明を実施するための最良の形態

本発明の活性酸素消去剤は、水と、有機溶剤と、乳化剤を含むと共に、下記の構造を有する、 p—クマリン酸 (p— c o um a r i c a c i d) 、 3， 4一ジー O—カフェオイノレキナ酸（3， 4-d i -O-c a f f e o y l q u i n i c a c i d) 、 3， 5—ジー O—力フエオイルキナ酸（3, 5— d i—0—c a f f e o y l qu i n i c a c i d) 、 4ーヒドロキシー 3—プレ-レケイ皮酸 (4— hy d r o xy— 3— p r e ny 1 c i nn am i c a c i d) ょぴ 3， 5, 7—トリヒドロキシー 4' ーメトキシフラボノール（3， 5, 7- t r i hy d r o xy— 4 一 m e t h o x y f 1 a v o n o 1 ) を王要力成分として含む天然物由来のものである。

P-タマリン酸

3， 4ージー 0— カフヱオイルキナ酸

3， 5—ジー 0— カフェオイルキナ酸

4—ヒドロキシー 3—

プレニルケィ皮酸

CH=CHCOOH

3, 5, 7—トリヒドロキシ一 4'ーメトキシフラボノール

本発明の活性酸素消去剤は、さらに有効成分として、下記の構造を有する、 3 , 5—ジプレニルー 4—ヒドロキシケィ皮酸（ァーテピリン C) [3， 5— d i p r e ny l— 4— hy d r o xy c i nn am i c a c i d ( a r t e ι 1 1 i nC) ] 、カェムフェライド（k a e mp h e r i d e ) 、べッレトーノレ

(b e t u r e t o l) 、クロ口ゲン酸 (c h l o r o g e n i c a c i d) 、ェ /レマニン' （e rma n i n) 、タリシン (c h r y s i n) 、カフェ一酸 ( c a f f e i c a c i d) _Λ カェムフェローノレ (k a em h e r o 1) およびバニリン（v a n i 1 1 i n) を含むことができる。

=CHCOOH ³, 5—ジプレニル一4—ヒドロキシ

ケィ皮酸

クロロゲン酸

クリシン

カフヱ一酸

カェムフェローノレ

バエリン

なお、カェムフェライドは、 4' ーメトキシー 3, 5, 7—トリヒドロキシフラボン、べッレトールは、 4，， 6—ジメトキシー 3， 5， 7—トリヒドロキシフラボン、ェノレマ-ンは、 3， 4' ージメトキシー 5, 7—ジヒドロキシフラボン、クリシンは、 5, 7—ジヒドロキシフラボン、カェムフエロールは、 3, 4 ⁵ ， 5, 7—テトラヒドロキシフラボンのことである。

本発明の活性酸素消去剤に含まれる有機溶剤としては、分子中に水酸基 2個以上を有する多価アルコール系化合物が好ましく、具体的には、グリセリン、ェチレングリコーノレ、ジエチレングリコーノレ、プロピレングリコーノレ、ジプロピレングリコール、グリセリンのアルキレンォキサイド付加物、ェチレングリコールのアルキレンォキサイド付加物、プロピレングリコールのアルキレンォキサイド付加物、ダルコノデルタラタトン、さらにはキシリトール、へキシトール、マンェトール、ソルビトールなどの糖アルコ一ル等を挙げることができる。これらは 1 種含まれていてもよく、 2種以上含まれていてもよいが、該活性酸素消去剤を食品用途に用いる場合には、特にグリセリンおよび各種の糖アルコールが好適である。

一方、乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸ェステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、レシチン類おょぴサポニン類などを例示することができる前記グリセリン脂肪酸エステルとしては、例えばグリセリン=モノラウレート、グリセリン =モノパルミテート、グリセリン =モノステアレート、グリセリン =モノォレエート、グリセリン =モノリノレート、グリセリン =モノリシノレ一トなどを挙げることができる。

ポリグリセリン脂方酸エステルとしては、例えばジグリセリン=モノラウレート、ジグリセリン =モノパルミテート、ジグリセリン =モノステアレート、ジグリセリン =モノォレエート、ジグリセリン =モノリノレート、ジグリセリン =モノリシノレート、テトラグリセリン =モノラウレート、テトラグリセリン =ジラゥレート、テトラグリセリン=モノパルミテート、テトラグリセリン =ジパルミテート、テトラグリセリン =モノステアレート、テトラグリセリン =ジステアレート、テトラグリセリン =モノォレエート、テトラグリセリン =ジォレエート、テトラグリセリン =モノリノレート、テトラグリセリン =ジリノレート、テトラグリセリン =モノリシノレート、テトラグリセリン =ジリシノレート、テトラグリセリン =モノべへネート、テトラグリセリン： =ジベへネート、ペンタグリセリン=モノラウレート、ペンタグリセリン =ジラウレート、ペンタグリセリン =モノパルミテート、ペンタグリセリン=ジパノレミテート、ペンタグリセリン=モノステアレート、ペンタグリセリン =ジステアレート、ペンタグリセリン =モノォレエート、ペンタグリセリン =：ジォレエート、ペンタグリセリン =モノリノレート、ペンタグリセリン =ジリノレート、ペンタグリセリン =モノリシノレート、ペンタグリセリン =ジリシノレート、ペンタグリセリン=モノべへネート、ペンタグリセリン =ジベへネート、デカグリセリン =モノラウレート、デカグリセリン=ジラウレート、デカグリセリン =トリラウレート、デカグリセリン =モノパルミテート、デカグリセリン=ジパルミテート、デカグリセリン =トリパルミテート、デカグリセリン =モノステアレート、デカグリセリン =ジステアレート、デカグリセリン二トリステアレート、デカグリセリン=モノォレエ一ト、デカグリセリン =ジォレエート、デカグリセリン =トリオレエート、デカグリセリン = モノリノレート、デカグリセリン ==ジリノレート、デカグリセリン ==トリリノレート、デカグリセリン =モノリシノレート、デカグリセリン =ジリシノレート、デカグリセリン =トリリシノレート、デカグリセリン =モノべへネート、デカグリセリン=ジベへネート、デカグリセリン： =トリベへネート、デカグリセリン= モノイソステアレート、デカグリセリン =セスキイソステアレート、デカグリセリン =ジイソステアレート、デカグリセリン =トリイソステアレート、デカダリセリン二モノ（1 2—ヒドロキシ）ステアレート、デカグリセリン-ジ（1 2— ヒドロキシ）ステアレート、デカグリセリン =トリ（1 2—ヒドロキシ）ステアレート等を挙げることができる。

プロピレンダリコール脂肪酸エステルとしては、例えばプロピレングリコール =モノラウレート、プロピレングリコーノレ =モノパノレミテート、プロピレングリコール =モノステアレート、プロピレングリコール =モノォレエート、プロピレングリコーノレ =モノリノレート、プロピレングリコーノレ: =モノリシノレート、プロピレングリコーモノイソステアレート、プロピレングリコール-モノ（1 2—ヒドロキシ）ステアレートなどを挙げることができる。

ソノレビタン脂肪酸エステルとしては、例えばソルビタン=モノラウレート、ソルビタン =ジラウレート、ソルビタン-モノパルミテート、ソルビタン ==ジパルミテート、ソノレビタン =モノステアレート、ソ^/ビタン =ジステアレート、ソノレビタン ==モノォレエート、ソノレビタン =ジォレエート、ソノレビタン-モノリノレート、ソルビタン ==ジリノレート、ソルビタン =モノリシノレート、ソルビタン =ジリシノレート、ソノレビタン =モノべへネート、ソノレビタン =ジベへネート、ソルビタン-モノイソステアレート、ソルビタン =ジイソステアレート、ソルビタン-モノ（1 2—ヒドロキシ）ステアレート、ソルビタン =ジ（1 2—ヒドロキシ）ステアレート等が挙げられる。

ショ糖脂肪酸エステルとしては、例えばショ糖 =モノラウレート、ショ糖 =ジラウレート、ショ糖 =モノパルミテート、ショ糖 =ジパルミテート、ショ糖 =モノステアレート、ショ糖 =ジステアレート、ショ糖 =モノォレエート、ショ糖 = ジォレエート、ショ糖 =モノリノレート、ショ糖 =：ジリノレート、ショ糖 =：モノリシノレート、ショ糖-ジリシノレート、ショ糖 =モノイソステアレート、ショ糖 =ジイソステアレート、ショ糖 =モノ（1 2—ヒドロキシ）ステアレート、ショ糖 =ジ（1 2—ヒドロキシ）ステアレート等を挙げることができる。

また、レシチン類としては、例えば大豆レシチンゃ他の植物レシチンなどを、サポニン類としては、例えばキラャ抽出物やダイズサポユンなどを挙げることができる。

これらの乳ィヒ剤は、 1種含まれていてもよく、 2種以上含まれていてもよい。なお、前記乳ィヒ剤は、食品用として使用可能であるので、当該活性酸素消去剤を食品用途に用いる場合、含まれていてもかまわない。

本発明の活性酸素消去剤においては、水と前記有機溶剤と前記乳化剤の含有割合は、それらの合計量を 1 0 0質量％とすると、通常水： 5〜5 0質量％、有機溶剤： 4 5〜 9 4. 9質量⁰ /₀および乳化剤： 0. 1〜 1 0質量⁰ /₀であり、好ましくは、水： 5〜 3 0質量％、有機溶剤： 6 5〜9 4. 5質量％および乳化剤： 0 . 1〜 5質量％の範囲である。

本発明の活性酸素消去剤においては、前記有効成分の合計含有量は、当該活性酸素消去剤の用途に応じて適宜選定される力通常 3〜4 0質量％程度である。本発明の活性酸素消去剤は、例えば以下に示すように、プロポリス原塊を抽出処理することにより製造することができる。

原料のプロポリス原塊は、粉碎および抽出処理を効率的に行うために、 1 5 °C 以下、好ましくは 0〜1 0 °C程度の温度に保存したものを用いることが望ましいまず、上記プロポリス原塊を粉 Sにより粉砕処理する。この際、粉に装着するスクリーンの孔径は、通常 1〜 5 mm径、好ましくは 2〜 3 mm径である。次いで、このプロポリス原塊粉砕物 1質量部に対し、水と前記有機溶剤と前記乳化剤を前記の割合で含有する混合液からなる抽出溶媒を 3〜 7質量部程度加える。抽出溶媒の使用量が 3質量部未満ではプロポリス原塊粉砕物と抽出溶媒の粘性により、抽出作業効率が低下する原因となり、また 7質量部を超えると有効成分の含有量が低下するおそれがある。

次に、 5 0〜 9 0 °C程度、好ましくは 6 5〜 8 0 °Cの温度にカロ熱して 3 0〜 1 2◦分間程度抽出処理を行う。抽出処理後、ろ過処理して固形分を取り除くことにより、本発明の活性酸素消去剤が得られる。

このようにして得られた本発明の活性酸素消去剤は、用途に適した濃度になるように、抽出溶媒を留去または添加して、濃度調整を行うことができる。さらに、必要により、凍結乾燥や噴霧乾燥を行い、粉末状で用いてもよい。

本発明の活性酸素消去剤は、フラポノイド類、ヒドロキシケィ皮酸誘導体、その他フエノ一ル性化合物など、親水性から疎水性まで幅広レヽ成分を含んでおり、高い活性酸素 ·フリーラジカル消去能および抗酸化能を有し、例えば食品用途、化 IS料用途、さらには飼料用途などに用いることができる。

本発明の活性酸素消去剤は、そのまま液状品として食品や化粧料などの組成物に配合するカゝ、または予め該有効成分を製剤化したものを前記組成物に配合して、活性酸素消去効果およぴ抗酸化効果を賦与して前記組成物の商品価値を高めることが可能である。

製剤化の例としては、錠剤、カプセル剤、散剤、または顆粒剤の場合は、上記有効成分を澱粉、乳糖やマエトール等の賦型剤、カルポキシメチルセルロースやヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロースやカルボキシメチルセノレロースカルシウム等の崩壌剤、タルクゃステアリン酸マグネシウム等の潤沢剤、その他必要に応じて湿潤剤、着色剤や香料等を適宜組み合わせて処方することにより製剤化することができる。また、液剤としては、水性もしくは油性の乳濁斉 IJやシロップ剤にすればよく、単シロップ、ソルビトール、メチルセルロースやカルボキシメチルセルロースナトリウム等の懸濁化剤、卵黄レシチン、ソルビタンモノ脂肪酸エステル、ラウロマクロゴールやヒマシ油等の乳化剤、その他必要に応じて防腐剤、保存剤や安定化剤等を適宜配合して製剤化することができる。軟膏の場合は、ワセリン、パラフィン、シリコン、プラスチベース、植物油やロウ類等の疎水性基剤、精製ラノリン、カルボキシビ二ルポリマー、プロピレングリコールゃ 1， 3—ブタンジオール等の親水性基剤、ポリエタノールァミン等の乳化剤等を適宜配合して製剤化することができる。

本発明はまた、前記活性酸素消去剤を含む食品およぴ化粧料を提供する。前記食品の形態としては、当該活性酸素消去剤そのもの、あるいは味噌、醤油、マヨネーズ等の調味料、サラダオイル等の食用油、各種調理食品、デザート類、氷菓、飴、チューインガムや果汁等の菓子'飲料等を挙げることができる。これらの食品には、使用目的に応じた任意の成分を用いることができる。例えば氷菓ゃ飲料の場合は、果汁、甘味料、酸味料、着色料や香料等を適宜配合することができる。本宪明の有効成分の食品への添加量は、その形態により適宜変えればよい。

—方、ィ匕粧品の形態としては種々のものを挙げることができ、例えばローション、乳液、クリームをはじめとして洗顔料、パック料、メーキャップ化粧料、頭髮化粧料、 ***化粧料、爪用化粧料、浴剤や制汗剤等が挙げられる。これらの化粧品には、使用目的に応じた任意の成分を用いることができ、例えばクリームの場合は、ワセリン、パラフィン、スクヮランなどの球水性基剤、ラノリン、プロピレングリコール、 1， 3—ブタンジオール等の親水性基剤、脂肪酸モノグリセライド類、ソルビタン脂肪酸エステル類等の乳化剤、防腐剤、顔料、香料、その他必要に応じて栄養剤、保湿剤、美白剤及び紫外線吸収剤等を常法に従って適宜配合することができる。同様に、その他の製品についても、その種類に応じた必要成分を適宜配合することができる。本発明の有効成分の化粧品への添加量は、その形態により適宜変えればよい。

また、本発明の活性酸素消去剤は、飼料に配合することもできる。飼料の形態としては、種々のものを挙げることができ、例えば家畜■家禽■魚類用の粉状、練り製品状またはペレツト状の配合飼料を挙げることができる。これらの飼料には、使用目的に応じた任意の成分を用いることができ、例えば練り製品状の飼料の場合は、着色料や香料等を適宜配合することができる。本発明の有効成分の飼料への添力 Π量は、その形態により適宜変えればよい。 '

実施例

次に、本発明を実施例により、さらに詳細に説明するが、本発明は、これらの例によってなんら限定されるものではない。

実施例 1

(1) プロポリス原塊抽出物

抽出溶媒として、（_a) 水単独、 (b) グリセリン単独、 (c) 水 10質量％とグリセリン 90質量⁰ /₀の混合液おょぴ（d) 水 10質量％とグリセリン 89質量％と乳匕剤（グリセリン=モノォレート） 1質量％の混合液の 4種を用いた。プロポリス原塊（ブラジノレ産 B a c c h a r i s d r a c un c u l i f o 1 i a基、源タイプ）の粉砕物 25 gに、上記の抽出溶媒 (a) 〜（d) それぞれ 200 gをカロえ、攪拌しながら 70°Cで 1時間抽出したのち、ろ過することにより、 4種のプロポリス原塊抽出物（a) 、 (b) 、 (c) 、 (d) を得た。

(2) プロポリス食品規格成分含有量

上記 (1) で得た 4種のプロポリス原塊抽出物（a) 、（b) 、 (c) 、 (d ) について、財団法人日本健康'栄養食品協会プロポリス食品規格成分含有量測定法（平成 7年改定）を適用し、吸光光度法（ = 415ηπι) を用い Qu e r c e t i η (東京化成）当量を測定した。その結果を表 1に示す。

また、財団法人日本健康 ·栄養食品協会プロポリス食品規格成分含有量測定法 (平成 13年改定）により、プロポリス食品規格成分含有量（質量％) を測定した。その洁果を表 1に示す。

(3) D Ρ Ρ [ラジ力ル消去活性

上記（1 ) で得た 4種のプロポリス原塊抽出物（a) 、（b) 、（c) 、 (d ) について、抗酸化活性を評価するためにこれらの様々な濃度のエタノール溶液を作製し、同量の 60マイクロモル ZL濃度の DPPH (1, 1ージフエ二ルー 2ーピクリノレヒドラジノレ）（和光純薬工業）エタノール溶液と混合し、 30分後の吸光度 (1 = 520 nm) を測定しそれぞれのプロポリス原塊抽出物の D P P Hラジカル消去の I C₅。値を求めた。その結果を表 1に示す。表 1

表 1から、水と有機溶剤と乳化剤との混合液からなる抽出溶媒 (d) を用いて得られたプロポリス原塊抽出物（d) (本発明の活性酸素消去剤）は、プロポリス食品規格成分含有量（Qu e r c e t i n当量、質量％) 力他の抽出溶媒 ( a) 、 (b) 、 (c) を用いて得られたプロポリス原塊抽出物（a) 、 (b) 、

(c ) よりも、高い値を示すことが分かる。

また、プロポリス原塊抽出物（d) は、プロポリス原塊抽出物（b) 、 (c) とぼぼ同程度の高い D P P Hラジカル消去活性を示すことが分かる。

(4) HP LCによる含有成分の分析

上記（1) で得られたプロポリス原塊抽出物（a) 、 (b) 、 (c) 、 (d) について、高速液体クロマトグラフィー（HP LC) による分析を行った。

H!P LCの測定条件は、カラム C LC一 OD S (1 5 0 X 6. Omm, i . d. ) 、カラム温度 40°C、移動相は HPLC用の送液を用い、リニアグラジェント条件で開始時 0. 5%齚酸（和光純薬工業）一メタノール（和光純薬工業） (7 0 : 30 v/v) から 30分後 0. 5%酢酸一メタノール (20： 80 v/ V ) 30分以降保持、分析時間 50分、流量 1. Om l /分、測定波長 λ = 27 51 ； mでめる。

プロポリス原塊抽出物（a) 、 (b) 、 (c) 、 (d) は、 HPLC用蒸留水 (和光純薬工業）又は HP LC用メタノールに溶解（濃度： l OmgZm l) 後、ザノレトリウスミ二ザルト（0. 45 μπι, Go e t t i n g e n, G e r m a n y) にてろ過後、ろ夜 10 / 1を HPLC分析に用いた。

プロポリス原塊抽出物（_a) 、 (b) 、 (c) および（d) のクロマトグラムを、それぞれ図 1、図 2、図 3および図 4に示すと共に、クロマトグラムの保持時間を指標に、対応するピークの面積およびピーク高さを表²に示す。

表 2

ピーク面積 30O00以下のデータは未記載。 R.T.=保持時間（分) 化合物名は、 a ：クロ口ゲン酸 (c h l o r o g e n i c a c i d) 、 c ：カフェ一酸（c a f ί e i c a c i d) , d ：バニリン（v a n i l l i n) 、 e ：： —クマリン酸 (p— c o uma r i c a c i d) _N f : 3 , 5―ジー O—力フエオイノレキナ酸（3， 5— d i— 0— c a f f e o y l q i n i c a c i d) 、 h ： 3， 4ージ一O—力フエオイノレキナ酸（3, 4— d i— O— c a f f e o y l q u i n i c a c i d) 、 o ： 3, 5， 7—トリヒドロキシー 4 ' ーメトキシフラボノーノレ (3， 5 , 7— t r i h y d r o x y— 4' — m e t h o x y f 1 a v o n o l) _N p ：カェムフェローノレ ^K a emp h e r o l ) 、 q ： 4ーヒドロキシー 3—プレニルケィ皮酸（4一 hy d r o xy— 3— p r e n y l c i n n am i c a c i d) _N s : 'クリシン、c n r y s i n) 、 u ：カェムフェライド (k a emp h e r i d e) 、 z ： 3 , 5ージプレニノレ一 4—ヒドロキシケィ皮酸（ァーテピリン C) [3, 5-d i p r e n y l -4- ny d r o x y c i n n am i c a c i d ^a r t e p i 1 1 i nC) ] である。

図 1〜図 4に示すように、プロポリス原塊抽出物（a) と比較して、プロポリス原塊抽出物 (b) 、（c) 、 (d) のクロマトグラムでは、明らかに移動相のメタノールの割合が上昇するにつれ、プロポリス原塊抽出物（a) のクロマトグラムには見られなかったピークが出現することが分かり、これにより、さらに個別のピークを用いての比較で、プロポリス原塊抽出物（b) 、 (c) 、 (d) のクロマトグラム上に疎水性を示すと考えられる化合物のピーク群の出現により、上記 (2) および（3) で示された結果が裏付けられた。さらに詳しくは親水性の化合物 a〜： hのピーク面積及びピーク高は、 4種のプロポリス原塊抽出物においてほぼ同レベル力、プロポリス原塊抽出物（d) において優位な傾向が確認される。また、 i〜ABの化合物については、化合物 m， o (3， 5, 7—トリヒドロキシー 4， —メトキシフラボノール）、 z (3, 5—ジプレニルー 4ーヒドロキシケィ皮酸）を除き、プロポリス原塊抽出物（b) 、 (c) 、 (d) のクロマトグラム上に明確に確認されるものであるが、プロポリス原塊抽出物（d) において優位な傾向が確認される。

さらに詳しくは、保持時間 15分以前に溶出する生理活性物質 a (クロ口ゲン酸）、 c (カフェ一酸）、 f ( 3， 5—ジー O—力フェイルキナ酸）、 h ( 3， 4ージ一 O—力フエオイルキナ酸）などの測定値を変えずに、保持時間 2 5分以降に溶出する有力な生理活性成分 u (力ェムフェライド）、 _Z ( 3， 5—ジプレ二ルー 4ーヒドロキシケィ皮酸）について、プロポリス原塊抽出物（b ) 、 ( c ) と（d ) の比較において、プロポリス原塊抽出物（d ) に明らかに測定値の增加が確認できる。したがって、上記（2 ) における測定値の増加は、化合物 u、 Zの増加が寄与するものと考えられ、プロポリス原塊抽出物（d ) (本発明の活性酸素消去剤）は、親水†生から疎水性まで、幅広い成分を含有し、ラジカル消去能を始め、有望な生理活性を有することが示唆される。

産業上の利用の可能性

本発明の活性酸素消去剤は、人体に対する安全性が高く、かつ高い活性酸素' フリーラジカル消去能おょぴ抗酸化能を有し、例えば食品用、化粧料用、飼料用などとして好適に用いられる。

Claims

請求の範囲

1 . 水と、有機溶剤と、乳化剤を含むと共に、 p—クマリン酸、 3， 4ージー O 一力フエオイルキナ酸、 3 , 5—ジー O—カフェオイルキナ酸、 4ーヒドロキシ一 3—プレ-ルケィ皮酸および 3， 5 , 7—トリヒドロキシ一 4，ーメトキシフラボノ一/レを主要有効成分として含むことを特徴とする天然物由来の活性酸素消去剤。

2 . さらに、 3， 5—ジプレニルー 4ーヒドロキシケィ皮酸、カェムフェライド、べッレトーノレ、クロロゲン酸、ェノレマエン、クリシン、カフェ一酸、力ェムフエロールおよびバエリンを有効成分として含む請求項 1に記載の天然物由来の活性酸素消去剤。

3 . 有機溶剤が、分子中に水酸基 2個以上を有する多価アルコール系化合物である請求項 1または 2に記載の天然物由来の活性酸素消去剤。

4 . 乳化剤が、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、レシチン類およびサポニン類の中から選ばれる少なくとも 1種である請求項 1、 2または 3に記載の天然物由来の活性酸素消去剤。

5 . 請求項 1〜 4のいずれか 1項に記載の活性酸素消去剤を含むことを特徴とする食品。

6 . 請求項 1〜 4のいずれか 1項に記載の活性酸素消去剤を含むことを特徴とする化粧料。