UA79430C2 - Method for the stepwise attachment of polyethylene glycol to polypeptide - Google Patents
Method for the stepwise attachment of polyethylene glycol to polypeptide Download PDFInfo
- Publication number
- UA79430C2 UA79430C2 UA20031212655A UA20031212655A UA79430C2 UA 79430 C2 UA79430 C2 UA 79430C2 UA 20031212655 A UA20031212655 A UA 20031212655A UA 20031212655 A UA20031212655 A UA 20031212655A UA 79430 C2 UA79430 C2 UA 79430C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- peg
- ifn
- polypeptide
- molecular weight
- low molecular
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims description 125
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 title claims description 122
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims abstract description 5
- -1 amino, sulfhydryl Chemical group 0.000 claims description 14
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 4
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims description 3
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- LOVPHSMOAVXQIH-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) hydrogen carbonate Chemical class OC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LOVPHSMOAVXQIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BTBWSRPRAGXJJV-UHFFFAOYSA-N 2h-benzotriazole;carbonic acid Chemical class OC(O)=O.C1=CC=C2NN=NC2=C1 BTBWSRPRAGXJJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 2
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical class C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical class NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 claims description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 claims description 2
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 claims 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 claims 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 claims 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 claims 1
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 claims 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 18
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 18
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 4
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 3
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002086 displacement chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000008431 aliphatic amides Chemical class 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000005858 glycosidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
Description
Опис винаходу
За даною заявкою був заявлений пріоритет у відповідності до (ст. 35 О.5.С.5 119(е), за датою подання первинної тимчасової заявки США Моб0/083339), повний зміст якої включений сюди як посилання.
Даний винахід відноситься до способу поетапного приєднання двох або більше частини поліетиленгліколю (ПЕГ) до поліпептиду, зокрема, до способу одержання кон'югатів поліетиленгліколь- р-інтерферон (ПЕГ-Д-ІФН), в яких поліольна частина ковалентно пов'язана з Сув 17, а також до використання продуктів, одержаних даним /0 способом в терапії, прогнозуванні або діагностиці бактеріальних інфекцій, вірусних інфекцій, аутоїмунних захворювань і запалювальних захворювань.
Інтерферон фібробластів людини (Д-ІФН) володіє противірусною активністю і може також стимулювати природні клітини-кілери проти пухлинних клітин. Це поліпептид з масою близько 20.000Да, що індукується вірусами і двохнитковими РНК. З нуклеотидної послідовності гена фібробластного інтерферону, клонованого за /5 Допомогою технології з використанням рекомбінантної ДНК, |Оегупк і інш. (Майте, 285:542-547, 1980) встановили повну амінокислотну послідовність протеїну. Вона має довжину в 166 амінокислот.
ІЗПперага еї аїЇ. (Майшге, 294:563-565, 1981) описали мутацію при основі 842 (Сув-Туг в положенні 141), яка знищувала противірусну активність інтерферону, і варіантний клон з делецією нуклеотидів 1119-1121.
ІМагк і інш. (Ргос. Май. Асад. Зсі. О.5.А., 81(18):5662-5666, 1984)| здійснили штучну мутацію шляхом заміни основи 469 (Т) на (А), викликавши заміну амінокислоти Суз-бег в положенні 17. Повідомлялося, що одержаний в результаті Д-ІФН був так само активний, як "нативний" Д-ІФН, і стійкий при тривалому зберіганні (-702С).
Ковалентне приєднання до молекул гідрофільного полімерного поліетиленгліколю (ПЕГ), також відомого як поліетиленоксид (ПЕС), має важливе застосування в біотехнології і медицині. У своїй найбільш загальній формі с
ПЕГ є лінійним полімером з гідроксильними групами на кожному кінці: но-сн.-сноФ(сньсСнНоО СнНоСНо-ОН. о
Ця формула може бути стисло представлена як НО-ПЕГ-ОН, де мається на увазі, що -ПЕГ- являє собою основний ланцюг полімеру без кінцевих груп: "-ПЕГ-" означає -«СНо-СНО(СНЬСНьЬО) СНоСН о-. о зо ПЕГ звичайно використовується у вигляді метокси-ПЕГ-ОН (м-ПЕГ),, в якому один кінець є відносно інертною метоксигрупою, в той час як інший кінець являє собою гідроксильну групу, яка є об'єктом хімічної модифікації. о снзо-сньсСнНОО,-СнНСНо-ОН «Е
Також звичайно використовуються розгалужені ПЕГ. Розгалужені ПЕГ можуть бути позначені як
К(-ПЕГ-ОН) уд, де К являє собою центральне ядро, таке, як, наприклад, пентаеритрит або гліцерин, і т означає б»
Зв число відгалужень. Число відгалужень (т) може варіюватися від трьох до ста або більше. Гідроксильні групи є ч- об'єктом хімічних модифікацій.
Інша розгалужена форма, така, як описана в публікації міжнародної патентної заявки МО 96/21469), має єдиний кінець, який є об'єктом хімічної модифікації. Цей тип ПЕГ може бути представлений як (СНзО- ПЕГ-)ре-Х, « де р дорівнює 2 або 3, К являє собою центральне ядро, таке, як наприклад, лізин або гліцерин, і Х означає функціональну групу, таку, як наприклад, карбоксильну, яка є об'єктом хімічної активації. Ще одна розгалужена шщ с форма, "ПЕГ з бічними ланцюгами", має реакційноздатні групи, такі, як наприклад, карбоксильна, вздовж . основного ланцюга ПЕГ, а не на кінці ланцюгів ПЕГ. и? У доповнення до цих форм ПЕГ, полімер може бути також одержаний зі слабими або здатними до розщеплення зв'язками в основному ланцюгу. Наприклад, |Наїгтіз в заявці на патент США 06/026716) показав, що
ЛПЕГ може бути одержаний зі складноефірними зв'язками в полімерному основному ланцюгу, які є об'єктом -І гідролізу. Цей гідроліз приводить до розщеплення полімеру на фрагменти з більш низькою молекулярною масою згідно зі схемою реакції: ее, -ПЕГ-СО25-ПЕГ- ї НО. 5ПЕГ-СО5НЯАНО-ПЕГ-, «» Згідно з даним винаходом термін поліетиленгліколь або ПЕГ включає всі описані вище похідні.
Співполімери етиленоксиду і пропіленоксиду близькі до ПЕГ за своїми хімічними властивостями, і вони о можуть бути використані замість ПЕГ в багатьох випадках його застосування. Вони мають наступну загальну с формулу: но-сньснко(сноснКО) ИСнНоСнНе-ОН, де К означає Н або СН3з.
ПЕГ є корисним полімером, що має високу розчинність у воді, а також високу розчинність в багатьох органічних розчинниках. ПЕГ також нетоксичний і не є імуногенним. Коли ПЕГ приєднують хімічно (приєднання іФ) ПЕГ) до нерозчинних у воді сполук, одержаний в результаті кон'юЮгат звичайно розчинний у воді, а також ка розчинний в багатьох органічних розчинниках.
Кон'югати ПЕГ-білок в цей час використовуються в білок-замісній терапії і для інших терапевтичних цілей. бо Наприклад, пов'язана з ПЕГ аденозиндезаміназа (АСАСЕМ Ф) використовується для лікування серйозних комплексних імунодефіцитних захворювань, пов'язана з ПЕГ І -аспарагіназа (ОМСАРБРАК 2). застосовується для лікування гострого лімфобластного лейкозу і пов'язаної з ПЕГ о-інтерферон (ІМТКОМ(К) А) знаходиться на
ШІ стадії випробувань з лікування гепатиту С.
Загальний огляд кон'югатів ПЕГ-білок, що мають клінічну ефективність, поданий в (МХ. Вигппйат, Ат. ./. 65 Ногр. РІіагт., 15:210-218, 1994).
Був розроблений ряд способів приєднання ПЕГ до білків. Звичайно проводять приєднання ПЕГ до реакційноздатних груп білка, використовуючи похідні ПЕГ з підвищеною електрофільністю. Приєднання ПЕГ до со- і є-аміногруп, що є в залишках лізину, і до М-кінця дає кон'югат, що складається з суміші продуктів.
Звичайно такі кон'югати включають ряд декількох молекул ПЕГ, приєднаних до молекули білка ("ПЕГ-заходи") в кількості в межах від нуля до числа, відповідного числу аміногруп в білку. Для молекули білка, яка була одноразово модифікована, одиниця ПЕГ може бути приєднана до ряду різних амінних сайтів.
Такий тип неспецифічного приєднання ПЕГ приводив до ряду кон'югатів, які ставали майже неактивними.
Зниження активності звичайно викликається екрануванням активного зв'язуючого домену білка, як у випадку багатьох цитокінів і антитіл. Наприклад, (Каїге і інш. в патенті США Мо4766106 і патенті США Мо4917888) 70 описують приєднання ПЕГ до Д-ІФН і інтерлейкіну 2 (ІЛ-2) з використанням великого надлишку метоксиполіетиленгліколілового ефіру М-сукцинімідилглутарової кислоти і метоксиполіетиленгліколілового ефіру
М-сукцинимідилянтарної кислоти. Обидва білки продукувались в мікробних клітинах-хазяях, що робило можливою сайт-специфічну мутацію вільного цистеїну в серин. Мутація була необхідна при мікробній експресії Д-ІФН для полегшення складання білка. Зокрема, рД-ІФН, що використовується в цих експериментах, є 75 товарним продуктом ВейазегопФ, в якому залишок Сув 7" замінений серином. Крім того, відсутність глікозидування зменшувала розчинність продукту у водному розчині. Неспецифічне приєднання ПЕГ приводило в результаті до підвищеної розчинності, але головною проблемою був знижений рівень активності і вихід.
ЇЗаявка на європейський патент ЕР 593868, названа "Кон'югати ПЕГ-інтерферон"), описує одержання кон'югатів ПЕГ-5-ІФН. Однак реакція приєднання ПЕГ не є сайт-специфічною, і тому виходить суміш ізомерів 20 положення кон'югатів ПЕГ-о-ІФН див. також Мопкагегй і інш., АС5 Зутр.Зег., 680:207-216, 1997).
ЇКіпеЦег і інш. в заявці на європейський патент ЕР 675201| продемонстрували селективну модифікацію
М-кінцевого залишку фактора росту і розвитку мегакаріоцитів м-ПЕГ-пропіоновим альдегідом. Це дозволило здійснити відтворювані приєднання ПЕГ і фармакокінетику від серії до серії. |(Зірегі і інш. в патенті США
Мо57119441| показали, що приєднання ПЕГ до 9-ІФН може бути проведено з оптимальним рівнем активності. У с 29 цьому випадку була потрібна трудомістка стадія очищення для одержання оптимального кон'югату. о
Більшість цитокінів, як і інші білки, не володіють специфічним сайтом для приєднання ПЕГ і, крім згаданих вище прикладів, дуже можливо, що деякі з ізомерів, які одержуються при реакції приєднання ПЕГ, є частково або повністю неактивними, викликаючи таким чином втрату активності кінцевої суміші.
Сайт-специфічна реакція приєднання однієї одиниці ПЕГ є, таким чином, бажаною метою при одержанні таких о 30 білкових кон'югатів. со (МУодпігеп і інш., Віосопіпдагєе Спет., 4 (5): 314-318, 1993), синтезували селективне до тіольної групи похідне ПЕГ для такого сайт-специфічного приєднання ПЕГ. Було показано, що стійке похідне ПЕГ, захищене по З тіольній групі ортопіридилдисульфідною (0О-П-55-) реакційноздатною групою специфічно кон'югується з вільним /« цистеїном в білку, папаїні. Знову утворений дисульфідний зв'язок між папаїном і ПЕГ міг бути розщеплений в 35 м'яких відновних умовах для регенерації нативного білка. -
Цитування тут будь-якого документа не передбачає визнання, що такий документ є раннім прототипом, або може бути розглянутий як матеріал відносно патентоздатності будь-якого пункту даної заявки.
Будь-яка заява, що стосується вмісту або дати будь-якого документа, основується на доступній заявникам « дю інформації на момент представлення документа і не є визнанням правильності такої заяви. -о
Даний винахід далі стосується способу поетапного приєднання ПЕГ-частин послідовно до поліпептиду, с зокрема, способу одержання кон'югатів поліетиленгіколь- Д-ІФН. Такі кон'югати, як очікують, демонструють :з» підвищену ефективність іп мімо. Метою винаходу є досягнення підвищеної розчинності при нейтральних значеннях рН, підвищеній стабільності (знижена агрегація), зниженій імуногенності і відсутності втрати активності по відношенню до "нативного" Д-ІФН. Результати такої кон'югації можуть зменшити число доз, -І необхідних для очікуваної дії, спростять і зроблять стабільною препаративну форму фармацевтичної композиції і збільшать тривалість дії. іс) На Фіг.1 показана крива капілярного електрофорезу (КЕ) кон'югату ПЕГ-Д-ІФН до очищення. ї» Фіг2А-2С показують очищення кон'югату ПЕГ-Д-ІФН, проведене за допомогою ексклюзійної за розмірами с 5р хроматографії (супероза 12): Фіг2А - перше проходження; Фіг2В - друге проходження; Фіг2С - третє проходження. оз Фіг.З являє собою хроматографію за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію (50О5-РАСЕ) кон'югату ПЕГ-Д-ІФН, очищеного після третього проходження хроматографії. Смуги 1 і 4 являють собою стандарти білків певної молекулярної маси, смуга 2 означає 5Б "Нативний" рД-ІФН, і смуга З являє собою кон'югат ПЕГ-р-ІФН.
Фіг4 являє собою криву капілярного електрофорезу (КЕ) очищеного кон'югату ПЕГ- р-ІФН, в якому р-ІФН
ІФ) приєднаний до ПЕГ використанням м-ПЕГ-о-п-ЗЗвк. ко Фіг5 являє собою мас-спектр лазерної десорбції і іонізації з матриці (МА 0І-М5) очищеного кон'югату
ПЕГ-Д-ІФН. 60 Фіг.б6 показує порівняння антивірусної активності "нативного" Д-ІФН і кон'югату ПЕГ-Д-ІФН. Клітини УМІЗН інкубували з вказаними концентраціями зразків Д-ІФН протягом 24 годин до контрольного зараження цитопатичною дозою вірусу везикулярного стоматиту. Цитопатичний ефект визначали після додаткових 48 годин при перетворенні із застосуванням МТТ (3-(4,5-диметилтіазол-2-іл|-2,5-дифенілтетразолійбромід, тіазоліловий синій). бо Фіг.7 являє собою криву скріплення р-ІФН і ПЕГ-ІФН в клітинах Оацаі.
Фіг.8 демонструє фармокінетичну криву Д-ІФН і ПЕГ-ІФН у мишей після внутрішньовенного введення.
Пунктирні лінії вказують аналіз нижньої межі, що спостерігається (Іод-аналіз) для кожної стандартної кривої.
Фіг.9 демонструє фармакокінетичну криву рД-ІФН і ПЕГ-ІФН у мишей після підшкірного введення. Пунктирні лінії означають І 00-аналіз для кожної стандартної кривої.
Даний винахід відноситься до способу поетапного приєднання двох або більше ПЕГ-частин до поліпептиду.
Цей спосіб основується на виявленні того, що активований ПЕГ з низькою молекулярною масою реагує більш повно зі стерично ускладненим реакційним сайтом на білку, ніж активований ПЕГ з високою молекулярною масою. ПЕГ-модифікація дорогих терапевтичних білків повинна бути ефективною за вартістю, щоб приготування 70 кон'югатів ПЕГ було доцільним. Крім того, щоб зменшити фільтрацію від конгломератів і оптимізувати фармакологічні властивості кон'югатів ПЕГ-білок, кон'югати повинні мати ефективний розмір, еквівалентний такому для білка з молекулярною масою в 70 кДа. Це означає, що для сайт-специфічної модифікації, коли приєднується один залишок ПЕГ, переважно приєднується похідне ПЕГ з молекулярною масою більшою ніж 20кДа. Якщо сайт модифікації стерично навантажений, реакційноздатна група на великій ПЕГ-частині може мати 75 складності в досягненні сайту модифікації, і це приведе до низьких виходів. Переважний спосіб приєднання ПЕГ до поліпептиду згідно з даним винаходом підвищує вихід сайт-специфічного приєднання ПЕГ шляхом того, що спочатку приєднується невелика гетеро- або гомобіфункціональна ПЕГ-частина, яка, завдяки своєму відносно меншому розміру, може реагувати зі стерично навантаженими сайтами. Подальше приєднання похідного ПЕГ з великою молекулярною масою до невеликого ПЕГ приводить до високого виходу бажаного білка з приєднаним
ПЕГ.
Спосіб поетапного приєднання двох або декількох ПЕГ-частин послідовно до поліпептиду згідно з даним винаходом включає приєднання гетеробіфункціональної або гомобіфункціональної ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою спочатку до поліпептиду і потім приєднання монофункціональної або біфункціональної
ПЕГ-частини до вільного кінця ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою, яка приєднана до поліпептиду. Га
Після поетапного приєднання двох або більше ПЕГ-частин послідовно до поліпептиду, який переважно є р-ІФН о і в якому Сув!", розташований в стерично навантаженому сайті, є переважним сайтом приєднання ПЕГ, кон'югат
ПЕГ-поліпептид може бути очищений з використанням однієї або більше хроматографічних методів. "Хроматографічний метод" має на увазі будь-яку методику, що використовується для розділення компонентів суміші при їх нанесенні на носій (стаціонарна фаза), через який пропускають розчинник (рухома фаза). Принципи «2 розділення при хроматографії основуються на різних фізичних властивостях стаціонарної і рухомої фази. с
Деякі особливі види хроматографічних методів, які добре відомі в літературі, включають: рідинну хроматографію, рідинну хроматографію високого тиску (високоефективну), іонообмінну хроматографію, Ж абсорбційну хроматографію, афінну хроматографію, розподільну хроматографію, хроматографію з гідрофобною Фу взаємодією, зворотно-фазову хроматографію, гель-фільтрацію, ультрафільтрацію або тонкошарову
Хроматографію. -
Термін "Д-ІФН", що використовується тут, означає інтерферон фібробластів людини, одержаний шляхом виділення з біологічних рідин або одержаний за допомогою методик з рекомбінантної ДНК з прокаріотичних або еукаріотичних клітин-хазяїв, а також його солі, функціональні похідні, попередники і активні фракції за « умови, що вони містять залишок цистеїну, який знаходиться в положенні 17 у формі, що зустрічається природі.
Поняття "солі", що використовується тут, відноситься як до солей карбоксильних груп, так і до солей З с аміногруп, одержаних відомими способами. Солі карбоксильних груп включають неорганічні солі, такі як, "» наприклад, натрієві, калієві, кальцієві солі і солі з органічними основами, такі, як утворені з аміном, таким " як, наприклад, триетаноламін, аргінін або лізин. Солі аміногруп включають, наприклад, солі з неорганічними кислотами, такими як соляна кислота, і з органічними кислотами, такими як оцтова кислота.
Поняття "функціональні похідні", що використовуються тут, відноситься до похідних, які можуть бути - одержані, завдяки функціональним групам, присутнім в бічних ланцюгах амінокислотних ділянок або в кінцевих о М- або С- групах, відповідно до відомих способів і включаються в даний винахід, коли вони є фармацевтично прийнятними, тобто коли вони не придушують активність білка або не додають токсичності фармацевтичним - композиціям, що їх містять. Такі похідні включають, наприклад, складні ефіри або аліфатичні аміди со 250 карбоксильних груп і М-ацилпохідні вільних аміногруп або О-ацилпохідні вільних гідроксильних груп і утворюються з ацильними групами, такими як, наприклад, алканоїльна або ароїльна групи. «2 "Попередники" являють собою сполуки, які перетворюються в р-ІФН в організмі людини або тварини.
Як "активні фракції" білка даний винахід має на увазі будь-який фрагмент або попередник поліпептидного ланцюга самої сполуки, однієї або в комбінації з родинними молекулами або з пов'язаними з ним залишками, 22 наприклад, залишки цукрів або фосфатів, або агрегати поліпептидної молекули, коли такі фрагменти або
ГФ) попередники виявляють таку ж активність, як р-ІФН, як лікарський засіб. ПЕГ-частина з низькою молекулярною масою має формулу: о Му-СньСснд(СснНьСНьЬО)СНьСНе-Х, де МУ і Х є групами, які незалежно реагують з аміном, сульфгідрильною, карбоксильною або гідроксильною бо функціональною групою для приєднання ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою до поліпептиду. М іх вибираються незалежно переважно з ортопіридилдисульфіду, імідів малеїнової кислоти, вінілсульфонів, йодацетамідів, амінів, тіолів, карбоксилів, активних складних ефірів, бензотриазолкарбонатів, п-нітрофенолкарбонатів, ізоціанатів і біотину. ПЕГ-частина з низькою молекулярною масою переважно має молекулярну масу в діапазоні від 100 до 5000Одальтон. бо Монофункціональна або біфункціональна ПЕГ-частина для приєднання до вільного кінця ПЕГ з низькою молекулярною масою, який пов'язаний з поліпептидом, має переважно молекулярну масу в діапазоні приблизно від 1ООдальтон до 200кДа і являє собою переважно метокси-ПЕГ, розгалужений ПЕГ, гідролітично або ферментативно розкладальний ПЕГ, доповнений ПЕГ або дендримірний ПЕГ. Монофункціональний або біфункціональний ПЕГ має, крім того, формулу:
Уу-сньсСн.о(СнНьЬСНьОСНьЬСН»-2, де У є реакційноздатним залишком по відношенню до кінцевої групи на вільному кінці ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою, яка приєднана до поліпептиду, і 7 є метоксигрупою або реакційно здатною групою для утворення біфункціонального кон'югату. 70 Кон'югат ПЕГ-поліпептид, одержаний вищезазначеним способом поетапного приєднання двох або більше
ПЕГ-частин, може бути застосований як активний інгредієнт для одержання лікарського засобу або фармацевтичної композиції для лікування захворювань або порушень, по відношенню до яких поліпептиди є ефективними.
Іншим об'єктом даного винаходу є одержання кон'югатів в по суті очищеній формі, для того, щоб вони були 7/5 придатні для використання в фармацевтичних композиціях як активні інгредієнти для лікування, діагностики або прогнозування бактерійних або вірусних інфекцій, а також аутоіїмунних, запальних захворювань і пухлин.
Нелімітуючі приклади вищезгаданих захворювань включають: септичний шок, СНІД, ревматоїдний артрит, червоний вовчак і розсіяний склероз.
Подальші варіанти здійснення винаходу і переваги винаходу будуть очевидні з наступного опису.
Варіантом здійснення винаходу є введення фармакологічно активної кількості кон'югатів за винаходом суб'єктам з ризиком розвитку одного з вищезазначених захворювань або суб'єктам, що вже має такі патології.
Може бути використаний будь-який спосіб введення, сумісний з діючим початком. Парентеральне введення, як, наприклад, підшкірне, внутрішньом'язова або внутрішньовенна ін'єкції переважно. Доза активного інгредієнта, яку потрібно ввести, залежить від медичного припису відповідно до віку, ваги і індивідуальної сч ов реакції хворого. | що І | о
Доза може бути в інтервалі від 1Омкг до 1мг на день для середньої ваги тіла 75кг, переважна денна доза знаходиться в інтервалі від 20мкг до 200мкг.
Фармацевтичні композиції для парентерального введення можуть бути одержані у вигляді ін'єктованої форми, що складається з активного початку і відповідного носія. Носії для парентерального введення добре о зо Відомі в цій області і включають, наприклад, воду, фізіологічний розчин, розчин Рінгера і/або декстрозу.
Носій може містити невеликі кількості наповнювачів для підтримки стабільності і ізотонічності фармацевтичного ме) препарату. Одержання розчинів може бути здійснено згідно із звичайними методиками. «г
Даний винахід описаний з посиланням на конкретні варіанти здійснення винаходу, але вміст опису включає всі модифікації і заміни, які можуть бути зроблені фахівцем в даній області без розширення об'єму і мети, Ме зв визначеного формулою винаходу. ї-
Винахід далі буде описаний за допомогою наступних прикладів, які не повинні бути розглянуті як такі, що будь-яким чином обмежують даний винахід.
Приклад 1: Одержання кон'югату ПЕГ-Д-ІФН
Модифікація р-ІФН за допомогою м-ПЕТв-З5-П-о. «
Рекомбінантний р-ІФН людини, стійкий при концентрації 0,37мг/мл в 50мМ буфері з ацетатом натрію, рН 3,6, - с використовували для одержання кон'югату ПЕГ- Д-ІФН. Приблизно 1,0мл ЄМ сечовини додавали до 2мл Д-ІФН в "» концентрації 0,37мг/мл (0,74мг, 3,7х10Змоль). Додавали м-ПЕТе-55-П-о з молярним лишком 5Омоль на один " моль Д-ІФН і обидва компоненти реагували в поліпропіленовій пробірці або протягом 2 годин при 372С, або протягом 1 години при 502С. Реакційну суміш перед будь-яким очищенням аналізували з використанням кривої капілярного електрофорезу (КЕ) для визначення міри утворення кон'югату ПЕГ-р-ІФН при реакції приєднання 7 ПЕГ (Фіг.1). Типовий вихід ПЕГ-Д-ІФН для цієї реакції становить 5095. Продукти реакції відфільтровували від (Се) реакційної суміші із застосуванням шприцевого фільтра діаметром 0,22мм і відфільтрований розчин потім завантажували в колонку для ексклюзивної за розмірами хроматографії (або супероза 12, або супердекс 75, е Ріпагтасіа) і елюювали буфером з рН 7,0, що містить 5Х0ОММ фосфат натрію, 150ММ Масі. На Фіг.2А представлена о 250 крива елюювання після очищення кон'югату ПЕГ- Д-ІФН на колонці із суперозою 12 для виштовхувальної за о розмірами хроматографії. Піки збирали і аналізували за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію (Фіг.3). Фракції, що містять кон'югат ПЕГ-Д-ІФН, об'єднували і концентрат потім повторно завантажували в таку ж колонку для виштовхувальної за розмірами хроматографії з метою подальшого очищення кон'югату ПЕГ- Д-ІФН через близькість піку "нативного" Д-ІФН (Фіг28). Цю процедуру повторювали (третє проходження), щоб гарантувати чистоту (Фіг.2С). Фіг.4 і Фіг.5 представляють відповідно (Ф) криву капілярного електрофорезу і мас-спектр лазерної десорбції і іонізації з матриці очищеного кон'югату ко ПЕГ-Д-ІФН.
Модифікація Д-ІФН за допомогою м-ПЕ Тзок-35-П-о. во Наданий рекомбінантний людський Д-ІФН стійкий ов розчині в концентрації О,Збмг/мл в 50мМ натрій-ацетатному буфері, рН 3,6. Приблизно Збмг м-ПЕГзок-З35-П-О в Змл деіонізованої води додавали до
Змл Д-ІФН в концентрації 0,Збмг/мл (1,08мг, 4,910 моль) і обидва продукти реагували в поліпропіленовій пробірці протягом 2 годин при 502С. Реакційну суміш аналізували для визначення міри модифікації за допомогою капілярного електрофорезу. Звичайні виходи для цієї реакції становлять «3095. Розчин потім вміщують в колонку бо для виштовхувальної за розмірами хроматографії (супероза 12, фірма РІіапгтасіа) і елюють за допомогою буфера з рН 7,0, що містить 5ОММ фосфату/натрію, 150мММ Масі. Фракції збирають і аналізують на вміст із застосуванням електрофорезу в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію.
Приклад 2: Біологічна активність кон'югатів ПЕГ-р-ІФН.
Щоб оцінити вплив приєднання ПЕГ на противірусну активність рекомбінантного людського Д-ІФН, амніотичні клітини УУІЗН людини заздалегідь інкубували або із свіжоприготованим Д-ІФН (така ж серія, як використана для приєднання ПЕГ), або з кон'югатом ПЕГ- Д-ІФН. Опосередковану Д-ІФН противірусну активність, як виміряну за допомогою аналізу захворюваності клітин М/ІЗН при впливі вірусу везикулярного стоматиту (М5М), визначали згідно з розробленим біотестом для УМІЗН, основаному на протоколі |Моміск і інш.,
У. Іттипої, 129:2244-2247(1982)). Матеріали, використані в цьому аналізі УМІЗН, приведені нижче: клітини УМІЗН (АТОСС /Американська колекція типових культур/ССІ 25), штами вірусу везикулярного стоматиту (АТСС М-520-001-522), що зберігаються при -709С,
Д-ІФН, людський рекомбінантний, ІпіегРНагт І арогаюгієз І ТО (тип 32,075, партія Мо205035), 82х109МОд./мл, питома активність: 222Хх109МоОд./мг, кон'югат ПЕГ-Д-ІФН, одержаний в прикладі 1 і що зберігається в забуференому фосфатом фізіологічному 79 розчині (ЗФР), рН 74, середовище для росту МІЗН (мінімальне підтримуюче середовище /МЕМ/ з високим вмістом глюкози, з солями Еапен1тО95о фетальної бичачої сироваткин1,095 І-глутамінункпеніцилін/стрептоміцин (100Од./мл, 10Омкг/мл), середовище для аналізу МЛІЗН (МЕМ з високим вмістом глюкози, з солями ЕагпенбоУю фетальної бичачої 20 сироватки 1,095 І -глутамінунпеніцилін/стрептоміцин (100Од./мл, 10Омкг/мл),
МТТ в концентрації 5мг/мл в ЗФР, що зберігається при -7026.
Протокол випробування УУІЗН йде далі:
Роблять двократне розведення зразків р-ІФН відносно початкової концентрації в середовищі для аналізу сч
МІЗН. 25 Роблять трикратне розведення зразків Д-ІФН в середовищі для аналізу УУІЗН в 96-ямковому плоскодонному (о) планшеті так, щоб в кожній ямці містилося 50мкл розведеного зразка р-ІФН (в деякі контрольні ямки вміщують тільки 5ХОмкл середовища для аналізу УМІЗН).
Збирають клітини МІН фази логарифмічного зростання за допомогою розчину о
Зо трипсин/етилендіамінтетраоцтова кислота (ЕДТК), промивають середовищем для аналізу УМІЗН і доводять до кінцевої концентрації 0,8х10клітин/ мл. о
Додають 5Омкл суспензії клітин УУМІЗН (4х10"клітин/в ямці) в кожну ямку. Тепер кінцева концентрація В-ІФН, «І представленого клітинам, становить 1. Фу
Після інкубування протягом 24 годин в інкубаторі в атмосфері 596 СО з додають 5Омкл, розбавленої 1:10 (в 35 середовищі для аналізу ММІЗН) початкової культури УМ (доза, заздалегідь визначена для лізування 10095 клітин -
МУІ5Н протягом 48 годин) у всі ямки, крім контрольних ямок (в такі ямки вміщують тільки рівний об'єм середовища для аналізу).
Ще через 48 годин у всі ямки додають 25мкл розчину МТТ, після чого планшети інкубують ще протягом 2 « годин в інкубаторі. 40 Вміст ямок видаляють шляхом перевертання планшета і в ямки додають 200мкл 10095 етилового спирту. - с Через 1 годину знімають свідчення з планшетів при 595нм з використанням програмного забезпечення 5оїй ч» тах Рго і спектрофотометричної системи Зресігатах (фірми МоіІесшціаг Оемісев). и -
Ф
ЧК»
Фо 2 забезпечення Місгосаї! Огідіп 4.1.
Як вище показано на Фіг.б і в таблиці 1, кон'югати ПЕГ-Д-ІФН підтримували рівень противірусної активності
Вище за рівень активності свіжоприготованої партії батьківського р-ІФН. Спостереження, що кон'югат ПЕГ-р-ІФН має приблизно в 4 рази більш високу біоактивність, ніж активність свіжоприготованого р-ІФН, може також бути
ІФ) наслідком збільшеної стабільності кон'югату ПЕГ-Д-ІФН по відношенню до "нативного" Д-ІФН після додавання ко середовища для аналізу клітин УМІЗН.
Приклад З: Іп Міїго аналізи відносної активності 60 зразків ПЕГ-ІФН.
Визначали відносну біоактивність ПЕГ |ЗОкДа|- р-ІФН ії ПЕГ (2х20ОкДа|-Д-ІФН шляхом аналізу УМІЗН, використовуючи стандартний протокол, описаний в прикладі 2 (таблиця 2). Було проведено три незалежних аналізи трьома різними виконавцями в різний час. б
Відносна противірусна активність ПЕГ-Д-ІФН
0110 дно кн утерферону ож доспднну 11 я (6б,8бмкг/мл) були визначені за допомогою амінокислотного аналізу.
Щ , , , , .
Зв'язування ПЕГ- Д-ІФН з його рецептором на клітинах оцінювалося в присутності фіксованої кількості 125І1-ІФН-у2а. ІФН-а?га радіоактивно мітили за допомогою 722, використовуючи метод з хлораміном Т.
Пов'язаний з 1291-ІФН-ога відділяли від вільного йоду при пропущенні реагентів через колонку з Сефадексом 525 і об'єднанні утримуючих білок фракцій (фірма Ріагтасіа). 1291-ІФН-у2а кількісно оцінювали за допомогою 75 ферментного імуносорбентного аналізу (ЕІ І5А) (фірма Віозошгсе, США) і визначали питому активність. Збирали клітини Оацаї, що виросли в експонентній фазі росту, і 2х102 клітин інкубували з 0,5нМ 722І-ІФН-д2а протягом З годин при кімнатній температурі в присутності різних концентрацій ПЕГ-р-ІФН або ІФН-о2а, розведених в буфері для аналізу, який є середовищем КРМІ 1640, що містить 295 фетальної бичачої сироватки і 0,195 азиду натрію.
Після закінчення інкубування клітини пропускали Через шар фталату у вигляді масла і пов'язану з клітиною радіоактивність зчитували за допомогою лічильника гамма-квантів. Потрібно додати, що зв'язування
ПЕГІЗОкДа|-ВД-ІФН і ПЕГІ2х2ОкДа|-рД-І?ФН з рецептором було дуже схожим або близьким до зв'язуючої активності Д-ІФН, як показано на Фіг. 7.
Також відносна активність була визначена при аналізі протипроліфераційного ефекту відносно клітин Юацаї сч (В-клітини лімфоми людини) (Фіг.3). Всі інтерферони були приготовані в концентрації 2 х від 20Онг/мл. Зразки розводили в три рази вздовж по довжині планшета при кінцевому об'ємі 100мкл. Додавали в кожну ямку і) 1х10Уклітин/ямка (100мкл) і інкубували загалом протягом 72 годин при 37 "С у зволоженому СО» інкубаторі.
Через 48 годин додавали насичений тритієм (ЗН) тимідин в 2Омкл по 1мкКю/в ямці. У кінці 72-годинного інкубування весь вміст планшета збирали за допомогою пристрою для збору з планшета ТотіеК. Представленів «2 таблиці З результати показують, що після приєднання ПЕГ не спостерігали будь-якої втрати активності с інтерферону, що визначається. Насправді, активність була трохи вище, ніж для вільного р-ІФН. Це може бути пояснене утворенням неактивних агрегатів у вільному інтерфероні або відмінностями в способах кількісної « оцінки (амінокислотний аналіз для зразків ПЕГ-ІФН і зворотно-фазова ВЕРХ для р-ІФН). Фо
Таблиця З
Зо Аналіз протипроліфераційої активності на клітинах Рацаї в.
Тен кротістю звілниентя то віднешенню ле он, вна (и 00000000 « о бенланшет (бе З с ж і»
Приклад 4: Фармакокінетичне дослідження на мишах -і Внутрішньовенне введення с Мишей ін'єктували 1ООнг Д-ІФН, ПЕГ ІЗОкДа|-рД-ІФН або ПЕГІ2х2ОкДа|-Д-ІФН і кров відбирали після цього у вказані моменти часу. Концентрації Д-ІФН в сироватці визначали за допомогою специфічного до р-ІФН ЕГІЗА ве (Тогау Іпдизіпевз), результати приведені на Фіг.8. Двадцять вісім самиць мишей штаму В6О2Е1 (6-8 тижнів) со 250 (кожна вагою приблизно 20г) ділили на чотири групи таким чином: група 1 складалася з дев'яти мишей, одноразово ін'єктованих 200мкл болюсу людського Д-ІФН в концентрації 50Онг/мл (кінцева доза 10Онг/миша); ме, група 2 (дев'ять мишей) одержувала 200мкл еквівалентного по масі ПЕГ |ЗОкДа)- дД-ІФН; група З одержувала 200мкл еквівалентного по масі ПЕГ (2х2ОкДа|-Д-ІФН; і група 4 є групою з трьох неін'єктованих мишей, що служили як негативний контроль. Зразки крові (приблизно 20О0мкл/зразок) збирали в дев'ять вказаних моментів 25 часу шляхом введення до ретроочноямкового венозного сплетіння капілярної трубки. Зразкам крові давали
ГФ) можливість згорнутися протягом 1 години при кімнатній температурі, згустки, перемішуючи круговими рухами, юю відводили від стінок і піддавали мікроцентрифугуванню. Виділені при цьому сироватки зберігали при -702С доти, доки були зібрані всі зразки. Сироватки досліджувалися на присутність біоактивного людського Д-ІФН. з во використанням Тогау-аналізу. Результати показують, що площа під кривою (ППК) помітно зростає у випадку зразків ПЕГ-ІФН по відношенню до вільного р-ІФН і що ПЕГ (2х20кДа|-Д-ІФН перевершує ПЕГ |ЗОкДа1-р-ІФН.
Підшкірне введення
Мишам вводили підшкірно р-ІФН і ПЕГ-ІФН (10Онг/миша). Фіг.9 показує, що загальна площа під кривою (ППК) різко збільшена у випадку зразків ПЕГ-ІФН в порівнянні з вільним Д-ІФН. Фармакокінетичні дослідження 65 узгоджуються з тим, що зразки ПЕГ-ІФН мають більший період напіввиведення і збільшену ППК.
Приклад 5: Приєднання ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою до поліпептиду
Зв'язування р-інтерферону з о-П-88-ПЕГ»4К-гідразидом
Я АЖ й щ- нев зтть- Я не зв,
С вого З тет
Рекомбінантний людський р-інтерферон був використаний в розчині в концентрації О,З3Змг/мл в 50мММ натрій-ацетатного буфера, рН 3,8. Приблизно 3,бмг (40-мольний надлишок по відношенню до молів білка) гетеробіфункціонального реагенту, що включає ПЕГ, о-П-55-ПЕГоК-гідразид, в 2мл деіонізованої води додавали
Змл Д-ІФН в концентрації 0,ЗЗмг/мл (0,99мг) і обидва компоненти реагували в поліпропіленовій пробірці протягом 1 години при 452С. Реакційну суміш потім аналізували з використанням капілярного електрофорезу для визначення міри модифікації Типові виходи знаходилися в межах 90-97950, що залежало від 19 чистоти Д-інтерферону і ПЕГ реагенту. Потім розчин вносили в колонку для виштовхувальної за розмірами хроматографії (супердекс 75, Ріпагтасіа) і елюювали буфером з рН 7,0, що містить 5ММ фосфат натрію і 15ОММ масі. Фракції збирали і аналізували при електрофорезі в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію. Фракції, що містять р-інтерферон з однією приєднаною ПЕГ-частиною, об'єднували, використовуючи потім для подальшого етапу модифікації із застосуванням ПЕГ з високою молекулярною масою.
Зв'язування р-інтерферону з (0о-п-55)2- ПЕГзаоо
Яка ОО дер пює-вастиняі О с (у ннлюняняоу о
Рекомбінантний людський В-інтерферон використали в розчині в 5ОмММ натрій-ацетатному буфері, рН 3,8, в концентрації 0,3Змг/мл. Приблизно б, мг (40-мольний надлишок по відношенню до молів білка) гомобіфункціонального ПЕГ реагенту, (о-п-55)2-ПЕГзаоо, в 2мл деіонізованої води додавали Змл р-інтерферону | «в) в концентрації 0,ЗЗмг/мл (0,99мг) і проводили реакцію в поліпропіленовій пробірці 2 години при 5092С. За ходом со реакції стежили за допомогою невідновного електрофорезу в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію і кінцеву реакційну суміш аналізували за допомогою капілярного електрофорезу для « визначення міри модифікації. Ге!
Типові модифікації для цієї реакції з Д-інтерфероном становили 29595. Розчин потім вводили в колонку для виштовхувальної за розмірами хроматографії (супердекс 75, Рпагтасіа) і елюювали утримуючим 50мММ фосфат - натрію і 150мМ Масі буфером з рН 7,0. Фракції збирали і аналізували їх вміст за допомогою електрофорезу в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію.
Фракції, що містять р-інтерферон з одним приєднаним залишком ПЕГ, об'єднували. «
Приклад 6: Приєднання другої ПЕГ-частини до ПЕГ з низькою молекулярною масою, приєднаного до с 70 поліпептиду. Модифікація ІФН-5-5-ПЕГоКгідразиду за допомогою м-ПЕГзок альдегіду 8
І» ка є-а-пту З зник
Кк тезу юте-в-е-шть- Д-ме-несп-япюга -і я ПЕГх спокдк (Се) До об'єднаних фракцій ІФН-5-5-ПЕГоК-гідразиду прикладу 5 додавали м-ПЕГзок-альдегід в 20-мольному надлишку по відношенню до білка. Реакцію проводили при кімнатній температурі (2522) протягом 4 годин і е зразок вміщували в колонку для виштовхувальної за розмірами хроматографії (супероза 6, РНпагтасіа) для (95) 50 визначення виходу модифікації. Вихід модифікації звичайно становив 28095 в залежності від чистоти ПЕГ реагенту і умов реакції. с Після повного опису даного винаходу фахівцям в цій області зрозуміло, що те ж саме може бути здійснено у більшому діапазоні еквівалентних параметрів, концентрацій і умов без відступу від об'єму і суті винаходу і без надмірного експериментування. 59 Хоча цей винахід був описаний в зв'язку з конкретним варіантом його здійснення, зрозуміло, що він
ГФ) допускає подальші модифікації. Ця заявка передбачає поширення на будь-які варіанти, використання або т адаптацію винаходів, що дотримуються в більшості випадків принципів винаходу і що включають і такі відхилення від даного розкриття, як такі, що зустрічаються в рамках відомої або звичної практики в області, до якої відноситься винахід, і які можуть бути застосовані до основних істотних ознак, вказаних вище в 60 заявлених пунктах формули винаходу.
Всі зазначені тут посилальні матеріали, включаючи статті в журналах і реферати, опубліковані або неопубліковані заявки на патенти США або заявки на іноземні патенти, опубліковані патенти США або іноземні патенти або будь-які інші посилання, повністю включені сюди як посилання, включаючи всі дані, таблиці, малюнки і текст цитованих посилань. Крім цього, повний зміст посилальних матеріалів в приведених тут 62 посиланнях також повністю включений як посилання.
Посилання на відомі стадії методів, стадії звичайних методів, відомі методи або звичайні методи ні в якій мірі не є допущенням того, що будь-який аспект, опис або здійснення даного винаходу розкривається, вивчається або пропонується в рівні техніки.
Приведений вище опис конкретних варіантів здійснення винаходу настільки повно розкриває загальну природу винаходу, що інші можуть, використовуючи знання в межах необхідної в даній області кваліфікації (включаючи зміст процитованих посилань), легко модифікувати і/або адаптувати для різних застосувань такі спеціальні варіанти здійснення винаходу без надмірного експериментування, без відхилення від загальної концепції даного винаходу. Тому, основуючись на навчанні і дотримуванні представлених тут вказівок, 70 передбачається, що такі адаптації і модифікації знаходяться в межах об'єму і суті еквівалентів варіантів здійснення винаходу, що розкриваються. Потрібно також зрозуміти, що приведена тут фразеологія або термінологія використовується з метою опису, а не обмеження, так що термінологія або фразеологія даного технічного опису повинна інтерпретуватися кваліфікованим фахівцем в світлі представленого тут навчання і дотримування представлених вказівок в комбінації зі знаннями кваліфікованого фахівця в даній області.
Claims (12)
1. Спосіб поетапного приєднання частин поліетиленгліколю (ПЕГ) послідовно до поліпептиду, що включає стадії: взаємодії поліпептиду з гетеробіфункціональною або гомобіфункціональною ПЕГ-частиною, що має низьку молекулярну масу, яка має наступну формулу: М-сньСснод(СснНьСНьО) СНЬСНе-Х, де МУ ії Х є групами, які незалежно реагують з аміногрупою, сульфгідрильною, карбоксильною або сч гідроксильною функціональною групою для приєднання ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою до поліпептиду, і о взаємодії приєднаної до поліпептиду ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою з монофункціональною або біфункціональною ПЕГ-частиною для приєднання монофункціональної або біфункціональної ПЕГ-частини до вільного кінця ПЕГ-частини з низькою молекулярною масою і утворенням кон'югата ПЕГ-поліпептид. о зо
2. Спосіб за п. 1, де монофункціональна або біфункціональна ПЕГ-частина має наступну формулу: Уу-сньСнь.о(СнНьЬСНьО)СНоСН»-2, со де М є групою, реакційноздатною по відношенню до термінальної групи на вільному кінці ПЕГ-частини з « низькою молекулярною масою, приєднаною до поліпептиду, і 7 є метоксигрупою або групою, реагуючою з Х з утворенням біфункціонального кон'югата. б»
3. Спосіб за п. 2, де монофункціональною або біфункціональною ПЕГ-частиною є метокси-ПЕГ, розгалужений чн ПЕГ, ПЕГ, що розкладається гідролітично або ферментативно, ПЕГ, доповнений ПЕГ з бічними ланцюгами або дендримірний ПЕГ.
4. Спосіб за п. 1, де МУ і Х незалежно вибирають з групи, що включає ортопіридилдисульфід, іміди малеїнової кислоти, вінілсульфони, йодацетаміди, гідразиди, альдегіди, складні сукцинімідильні ефіри, « 20 епоксиди, аміни, тіоли, карбоксили, активовані складні ефіри, бензотриазолкарбонати, п-нітрофенолкарбонати, з с ізоціанати і біотин.
5. Спосіб за п. 1, де ПЕГ-частина з низькою молекулярною масою має молекулярну масу в діапазоні від 100 :з» до 5000 дальтон.
6. Спосіб за п. 1, де монофункціональна або біфункціональна ПЕГ-частина має молекулярну масу в діапазоні від 100 дальтон до 200 кілодальтон. -1
7. Спосіб за п. 1, де ПЕГ-частиною з низькою молекулярною масою і/або монофункціональною або біфункціональною ПЕГ-частиною є співполімер поліетиленгліколю. ре)
8. Спосіб за п. 7, де співполімер поліетиленгліколю вибирають з групи, що включає співполімери їз поліетиленгліколь/поліпропіленгліколь і співполімерів поліетиленгліколь/полі(молочна/гліколева кислота).
9. Спосіб за п. 1, що додатково включає стадію очищення кон'югата ПЕГ-поліпептид, що йде за поетапним о приєднанням двох ПЕГ-частин послідовно до поліпептиду. о
10. Спосіб за п. 9, де вказана стадія очищення включає одну або декілька методик очищення, вибраних з групи, що включає іонообмінну хроматографію, виштовхувальну за розмірами хроматографію, хроматографію з гідрофобною взаємодією, афінну хроматографію і зворотно-фазову хроматографію.
11. Спосіб за будь-яким з пп. 1-10, де поліпептидом є в- інтерферон. ГФ)
12. Застосування кон'югатів ПЕГ-поліпептид, одержаних за способом за будь-яким з пп. 1-10, як лікарського засобу. іме) 60 б5
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8333998P | 1998-04-28 | 1998-04-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA79430C2 true UA79430C2 (en) | 2007-06-25 |
Family
ID=22177687
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA20031212655A UA79430C2 (en) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | Method for the stepwise attachment of polyethylene glycol to polypeptide |
| UA2000116719A UA66857C2 (uk) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | КОН'ЮГАТ ПОЛІОЛ-<font face="Symbol">b</font>-ІНТЕРФЕРОН, СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ КОН'ЮГАТУ ПОЛІОЛ-<font face="Symbol">b</font>-ІНТЕРФЕРОН ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБ, ПУХЛИН І АУТОІМУННИХ І ЗАПАЛЬНИХ ЗАХВОРЮВАНЬ |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2000116719A UA66857C2 (uk) | 1998-04-28 | 1999-04-28 | КОН'ЮГАТ ПОЛІОЛ-<font face="Symbol">b</font>-ІНТЕРФЕРОН, СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ КОН'ЮГАТУ ПОЛІОЛ-<font face="Symbol">b</font>-ІНТЕРФЕРОН ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБ, ПУХЛИН І АУТОІМУННИХ І ЗАПАЛЬНИХ ЗАХВОРЮВАНЬ |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6638500B1 (uk) |
| EP (2) | EP1421956B1 (uk) |
| JP (2) | JP4574007B2 (uk) |
| KR (1) | KR100622796B1 (uk) |
| CN (2) | CN1187094C (uk) |
| AR (1) | AR020070A1 (uk) |
| AT (2) | ATE275422T1 (uk) |
| AU (1) | AU762621B2 (uk) |
| BG (2) | BG64694B1 (uk) |
| BR (1) | BR9910023A (uk) |
| CA (2) | CA2565375A1 (uk) |
| CY (1) | CY1108022T1 (uk) |
| CZ (2) | CZ298579B6 (uk) |
| DE (2) | DE69936409T2 (uk) |
| DK (2) | DK1421956T3 (uk) |
| EA (2) | EA003789B1 (uk) |
| EE (1) | EE05214B1 (uk) |
| ES (2) | ES2285286T3 (uk) |
| HK (2) | HK1038194A1 (uk) |
| HU (1) | HUP0300548A3 (uk) |
| IL (1) | IL139286A (uk) |
| NO (2) | NO329749B1 (uk) |
| NZ (1) | NZ507456A (uk) |
| PL (2) | PL196533B1 (uk) |
| PT (2) | PT1075281E (uk) |
| SI (2) | SI1075281T1 (uk) |
| SK (2) | SK286217B6 (uk) |
| TR (2) | TR200101751T2 (uk) |
| TW (2) | TWI266800B (uk) |
| UA (2) | UA79430C2 (uk) |
| WO (1) | WO1999055377A2 (uk) |
Families Citing this family (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| US7220717B2 (en) | 1997-08-14 | 2007-05-22 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use |
| US7704944B2 (en) | 1997-08-14 | 2010-04-27 | Yeda Research And Development Company Ltd. | Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use for the treatment of sepsis |
| IL121860A0 (en) | 1997-08-14 | 1998-02-22 | Yeda Res & Dev | Interleukin-18 binding proteins their preparation and use |
| PL200586B1 (pl) | 1998-10-16 | 2009-01-30 | Biogen Idec Inc | Polipeptydy zawierające mutanty interferonu-beta-1a, kodujące je cząsteczki kwasów nukleinowych, komórki gospodarza transformowane tymi cząsteczkami, sposób wytwarzania polipeptydów, zawierające je kompozycje farmaceutyczne i zastosowania polipeptydów |
| AU762616B2 (en) * | 1998-10-16 | 2003-07-03 | Biogen Ma Inc. | Polymer conjugates of interferon beta-1a and uses |
| US7238368B2 (en) * | 1999-04-23 | 2007-07-03 | Alza Corporation | Releasable linkage and compositions containing same |
| MXPA01010750A (es) * | 1999-04-23 | 2003-08-20 | Alza Corp | Conjugado que tiene un enlace dividible para utilizarse en un liposoma. |
| US7303760B2 (en) * | 1999-04-23 | 2007-12-04 | Alza Corporation | Method for treating multi-drug resistant tumors |
| US7144574B2 (en) | 1999-08-27 | 2006-12-05 | Maxygen Aps | Interferon β variants and conjugates |
| US7431921B2 (en) | 2000-04-14 | 2008-10-07 | Maxygen Aps | Interferon beta-like molecules |
| US6531122B1 (en) | 1999-08-27 | 2003-03-11 | Maxygen Aps | Interferon-β variants and conjugates |
| TR200101086A3 (uk) * | 1999-10-15 | 2001-08-21 | ||
| CA2395254C (en) | 1999-12-24 | 2010-05-11 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Branched polyalkylene glycols |
| CN1188172C (zh) | 2000-01-10 | 2005-02-09 | 马克西根控股公司 | G－csf偶联物 |
| RU2278123C2 (ru) | 2000-02-11 | 2006-06-20 | Максиджен Холдингз Лтд. | Молекулы, подобные фактору vii или viia |
| ATE471956T1 (de) | 2001-01-30 | 2010-07-15 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Verzweigte polyalkylenglykole |
| EP1234583A1 (en) * | 2001-02-23 | 2002-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | PEG-conjugates of HGF-NK4 |
| MXPA03007619A (es) | 2001-02-27 | 2003-12-04 | Maxygen Aps | Nuevas moleculas similares a interferon beta. |
| NZ530545A (en) | 2001-07-11 | 2006-10-27 | Maxygen Holdings Ltd | Specific conjugates comprising a polypeptide exhibiting G-CSF activity and a non-polypeptide moiety |
| GEP20074024B (en) | 2002-01-18 | 2007-01-10 | Biogen Idec Inc | Polyalkylene glycol comprising a radical for conjugation of biologically active compound |
| TWI334785B (en) | 2002-06-03 | 2010-12-21 | Serono Lab | Use of recombinant ifn-β1a and pharmaceutical composition comprising recombinant ifn-β1a for the treatment of hcv infection in patients of asian race |
| WO2004020468A2 (en) * | 2002-08-28 | 2004-03-11 | Maxygen Aps | Interferon beta-like molecules for treatment of cancer |
| US8129330B2 (en) * | 2002-09-30 | 2012-03-06 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof |
| WO2004060299A2 (en) * | 2002-12-26 | 2004-07-22 | Mountain View Pharmaceuticals, Inc. | Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency |
| RS20050501A (en) * | 2002-12-26 | 2007-08-03 | Mountain View Pharmaceuticals Inc., | Polymer conjugates of cytokines,chemokines,growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity |
| ATE431403T1 (de) | 2003-03-20 | 2009-05-15 | Bayer Healthcare Llc | Fvii oder fviia varianten |
| TWI272948B (en) | 2003-05-01 | 2007-02-11 | Ares Trading Sa | HSA-free stabilized interferon liquid formulations |
| GB0316294D0 (en) * | 2003-07-11 | 2003-08-13 | Polytherics Ltd | Conjugated biological molecules and their preparation |
| ES2428358T3 (es) | 2003-10-17 | 2013-11-07 | Novo Nordisk A/S | Terapia de combinación |
| AU2008201682B2 (en) * | 2004-02-02 | 2011-02-24 | Ambrx, Inc. | Modified human interferon polypeptides and their uses |
| AU2005211385B2 (en) * | 2004-02-02 | 2008-12-11 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone polypeptides and their uses |
| EP1586334A1 (en) * | 2004-04-15 | 2005-10-19 | TRASTEC scpa | G-CSF conjugates with peg |
| US7879320B2 (en) | 2004-05-17 | 2011-02-01 | Ares Trading S.A. | Hydrogel interferon formulations |
| EA010979B1 (ru) | 2004-06-01 | 2008-12-30 | Арес Трейдинг С.А. | Стабилизированные жидкие препаративные формы интерферона |
| WO2005117948A1 (en) | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Ares Trading S.A. | Method of stabilizing proteins |
| TW200633718A (en) * | 2004-12-16 | 2006-10-01 | Applied Research Systems | Treatment of hepatitis c in the asian population |
| ATE494012T1 (de) * | 2004-12-21 | 2011-01-15 | Nektar Therapeutics | Stabilisierte polymer-thiol-reagenzien |
| US7816320B2 (en) | 2004-12-22 | 2010-10-19 | Ambrx, Inc. | Formulations of human growth hormone comprising a non-naturally encoded amino acid at position 35 |
| ATE542920T1 (de) | 2004-12-22 | 2012-02-15 | Ambrx Inc | Modifiziertes menschliches wachstumshormon |
| MX2007007591A (es) | 2004-12-22 | 2007-07-25 | Ambrx Inc | Metodos para expresion y purificacion de hormona de crecimiento humano recombinante. |
| WO2006134173A2 (en) | 2005-06-17 | 2006-12-21 | Novo Nordisk Health Care Ag | Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine |
| EP2099495A2 (en) * | 2005-08-04 | 2009-09-16 | Nektar Therapeutics AL, Corporation | Conjugates of a g-csf moiety and a polymer |
| EP1917276B1 (en) | 2005-08-26 | 2018-03-21 | Ares Trading S.A. | Process for the preparation of glycosylated interferon beta |
| CA2616479A1 (en) | 2005-09-01 | 2007-03-08 | Ares Trading S.A. | Treatment of optic neuritis |
| US20070238656A1 (en) * | 2006-04-10 | 2007-10-11 | Eastman Kodak Company | Functionalized poly(ethylene glycol) |
| US20080096819A1 (en) * | 2006-05-02 | 2008-04-24 | Allozyne, Inc. | Amino acid substituted molecules |
| EP2018437A2 (en) * | 2006-05-02 | 2009-01-28 | Allozyne, Inc. | Non-natural amino acid substituted polypeptides |
| CN104593348A (zh) | 2006-05-24 | 2015-05-06 | 诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司 | 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 |
| WO2007135172A2 (en) | 2006-05-24 | 2007-11-29 | Laboratoires Serono S.A. | Cladribine regimen for treating multiple sclerosis |
| CA2685596A1 (en) | 2007-05-02 | 2008-11-13 | Ambrx, Inc. | Modified interferon beta polypeptides and their uses |
| CA2707840A1 (en) | 2007-08-20 | 2009-02-26 | Allozyne, Inc. | Amino acid substituted molecules |
| WO2009080699A2 (en) * | 2007-12-20 | 2009-07-02 | Merck Serono S.A. | Peg-interferon-beta formulations |
| JP5702150B2 (ja) | 2008-02-08 | 2015-04-15 | アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. | 修飾されているレプチンポリペプチドおよびそれらの使用 |
| CN101525381B (zh) * | 2008-03-04 | 2012-04-18 | 北京百川飞虹生物科技有限公司 | 一种重组复合干扰素及其表达载体的构建和表达 |
| US20100112660A1 (en) * | 2008-05-30 | 2010-05-06 | Barofold, Inc. | Method for Derivatization of Proteins Using Hydrostatic Pressure |
| US20110124614A1 (en) * | 2008-10-25 | 2011-05-26 | Halina Offner | Methods And Compositions For The Treatment of Autoimmune Disorders |
| DE102009032179A1 (de) * | 2009-07-07 | 2011-01-13 | Biogenerix Ag | Verfahren zur Reinigung von Interferon beta |
| ES2365343B1 (es) | 2009-11-19 | 2012-07-10 | Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii | Uso de cd98 como marcador de receptividad endometrial. |
| JP5914363B2 (ja) | 2010-02-16 | 2016-05-11 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 低減されたｖｗｆ結合を有する因子ｖｉｉｉ分子 |
| AR080993A1 (es) | 2010-04-02 | 2012-05-30 | Hanmi Holdings Co Ltd | Formulacion de accion prolongada de interferon beta donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
| US20120135912A1 (en) | 2010-05-10 | 2012-05-31 | Perseid Therapeutics Llc | Polypeptide inhibitors of vla4 |
| EP2593130A2 (en) | 2010-07-15 | 2013-05-22 | Novo Nordisk A/S | Stabilized factor viii variants |
| JP6042335B2 (ja) | 2010-09-15 | 2016-12-14 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | 細胞取込みが低下した第ｖｉｉｉ因子変異体 |
| US9913880B2 (en) | 2011-02-18 | 2018-03-13 | Stemdr Inc. | Method of treating sepsis or septic shock |
| MX2014000031A (es) | 2011-07-01 | 2014-07-09 | Bayer Ip Gmbh | Polipeptidos de fusion de relaxina y usos de los mismos. |
| US10358470B2 (en) * | 2011-10-01 | 2019-07-23 | Glytech, Inc. | Glycosylated polypeptide and pharmaceutical composition containing same |
| CN117462693A (zh) | 2012-02-27 | 2024-01-30 | 阿穆尼克斯运营公司 | Xten缀合组合物和制造其的方法 |
| CN104136038A (zh) | 2012-02-29 | 2014-11-05 | 东丽株式会社 | 体腔积液抑制剂 |
| MY171183A (en) | 2013-03-29 | 2019-09-30 | Glytech Inc | Polypeptide glycosylated with sialylated sugar chain |
| KR101671501B1 (ko) * | 2014-07-24 | 2016-11-03 | 에이비온 주식회사 | 페길화된 인터페론-베타 변이체 |
| WO2016013697A1 (ko) * | 2014-07-24 | 2016-01-28 | 에이비온 주식회사 | 인터페론-베타 변이체의 폴리에틸렌글리콜 배합체 |
| SI3183264T1 (sl) | 2014-08-19 | 2021-03-31 | Biogen Ma Inc. | Metoda pegilacije |
| CN115919996A (zh) | 2015-05-01 | 2023-04-07 | 雅利斯塔制药公司 | 用于治疗眼科疾病的脂联素拟肽 |
| PE20180498A1 (es) * | 2015-06-19 | 2018-03-09 | Eisai Randd Man Co Ltd | Inmunoglobulinas conjugadas en cys80 |
| WO2018195006A1 (en) * | 2017-04-17 | 2018-10-25 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Optimization of enzyme replacement therapy for treatment of homocystinuria |
| US20220220176A1 (en) | 2019-01-28 | 2022-07-14 | Toray Industries, Inc. | Polyethylene glycol-modified form of hepatocyte growth factor or active fragment thereof |
| US20220118050A1 (en) | 2019-01-28 | 2022-04-21 | Toray Industries, Inc. | Polyethylene glycol-modified form of hepatocyte growth factor or active fragment thereof |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| EP0229108B1 (en) * | 1985-06-26 | 1990-12-27 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
| US5206344A (en) * | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
| US5208344A (en) * | 1987-07-31 | 1993-05-04 | American Home Products Corporation | Naphthalenepropionic acid derivatives as anti-inflammatory/antiallergic agents |
| US5166322A (en) * | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
| US5595732A (en) * | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
| US5382657A (en) * | 1992-08-26 | 1995-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Peg-interferon conjugates |
| DK0730470T3 (da) | 1993-11-10 | 2002-06-03 | Enzon Inc | Forbedrede interferonpolymerkonjugater |
| RO115788B1 (ro) * | 1994-03-31 | 2000-06-30 | Amgen Inc. | Polipeptidă mgdf, derivat de polipeptidă mgdf, polipeptidă mgdf mono-pegilată şi procedee de obţinere a acestora |
| AU696387B2 (en) * | 1994-05-18 | 1998-09-10 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Methods and compositions for the dry powder formulation of interferons |
| US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| SE9503380D0 (sv) * | 1995-09-29 | 1995-09-29 | Pharmacia Ab | Protein derivatives |
| TW517067B (en) * | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
| US5851984A (en) * | 1996-08-16 | 1998-12-22 | Genentech, Inc. | Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides |
| KR0176625B1 (ko) | 1996-11-05 | 1999-04-01 | 삼성전자주식회사 | 적외선 물체검출장치 |
| JP2001508783A (ja) * | 1997-01-29 | 2001-07-03 | ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー | Ｐｅｇ化法 |
| EP1881005B1 (en) * | 1997-07-14 | 2013-04-03 | Bolder Biotechnology, Inc. | Derivatives of G-CSF and related proteins |
| US6307024B1 (en) * | 1999-03-09 | 2001-10-23 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine zalpha11 Ligand |
| US6531122B1 (en) * | 1999-08-27 | 2003-03-11 | Maxygen Aps | Interferon-β variants and conjugates |
-
1999
- 1999-04-28 CN CNB998054968A patent/CN1187094C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-28 UA UA20031212655A patent/UA79430C2/uk unknown
- 1999-04-28 HU HU0300548A patent/HUP0300548A3/hu unknown
- 1999-04-28 PL PL378728A patent/PL196533B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 CA CA002565375A patent/CA2565375A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-28 DE DE69936409T patent/DE69936409T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 SK SK1622-2000A patent/SK286217B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 PT PT99920094T patent/PT1075281E/pt unknown
- 1999-04-28 ES ES04003053T patent/ES2285286T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 CZ CZ20003995A patent/CZ298579B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 JP JP2000545574A patent/JP4574007B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 AU AU37674/99A patent/AU762621B2/en not_active Ceased
- 1999-04-28 TR TR2001/01751T patent/TR200101751T2/xx unknown
- 1999-04-28 AT AT99920094T patent/ATE275422T1/de active
- 1999-04-28 EP EP04003053A patent/EP1421956B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 DE DE69920002T patent/DE69920002T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 SI SI9930662T patent/SI1075281T1/xx unknown
- 1999-04-28 PL PL344490A patent/PL193352B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 WO PCT/US1999/009161 patent/WO1999055377A2/en active IP Right Grant
- 1999-04-28 EE EEP200000614A patent/EE05214B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 BR BR9910023-1A patent/BR9910023A/pt active Search and Examination
- 1999-04-28 DK DK04003053T patent/DK1421956T3/da active
- 1999-04-28 CZ CZ20050048A patent/CZ298597B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 ES ES99920094T patent/ES2224649T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 TR TR2000/03161T patent/TR200003161T2/xx unknown
- 1999-04-28 EA EA200001111A patent/EA003789B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 KR KR1020007011587A patent/KR100622796B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 EA EA200300382A patent/EA200300382A1/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 AT AT04003053T patent/ATE365563T1/de active
- 1999-04-28 CN CNB2004100898478A patent/CN100335503C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-04-28 PT PT04003053T patent/PT1421956E/pt unknown
- 1999-04-28 SI SI9930974T patent/SI1421956T1/sl unknown
- 1999-04-28 CA CA002330451A patent/CA2330451A1/en not_active Abandoned
- 1999-04-28 NZ NZ507456A patent/NZ507456A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 SK SK66-2007A patent/SK286654B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 IL IL13928699A patent/IL139286A/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-04-28 EP EP99920094A patent/EP1075281B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-28 UA UA2000116719A patent/UA66857C2/uk unknown
- 1999-04-28 DK DK99920094T patent/DK1075281T3/da active
- 1999-04-29 AR ARP990101987A patent/AR020070A1/es active IP Right Grant
- 1999-07-26 TW TW093123043A patent/TWI266800B/zh active
- 1999-07-26 TW TW088112596A patent/TWI232882B/zh active
-
2000
- 2000-10-17 BG BG104871A patent/BG64694B1/bg unknown
- 2000-10-17 BG BG109291A patent/BG65046B1/bg unknown
- 2000-10-23 NO NO20005337A patent/NO329749B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-10-30 US US09/698,133 patent/US6638500B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-12-24 HK HK01109037A patent/HK1038194A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-08-28 US US10/649,609 patent/US7357925B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-11-17 HK HK05110273A patent/HK1076115A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-02-13 US US11/674,476 patent/US7700314B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-19 CY CY20071100966T patent/CY1108022T1/el unknown
-
2010
- 2010-03-09 NO NO20100324A patent/NO332224B1/no not_active IP Right Cessation
- 2010-04-26 JP JP2010100840A patent/JP2010184929A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| UA79430C2 (en) | Method for the stepwise attachment of polyethylene glycol to polypeptide | |
| JP2980569B2 (ja) | インターフェロン複合体 | |
| HUT75533A (en) | Improved interferon polymer conjugates | |
| CN102757505A (zh) | 具有延长的体内半衰期的生理学活性多肽缀合物 | |
| IL136290A (en) | Improved interferon polymer couplings | |
| WO2006004959A2 (en) | Pegylated interferon alpha-1b | |
| JP5563475B2 (ja) | Ｐｅｇインターフェロン−ベータ製剤 | |
| US20060276586A1 (en) | Peg-physiologically active polypeptide homodimer complex having prolonged in vivo half-life and process for the preparation thereof | |
| BRPI0822530A2 (pt) | hormônio do crescimento modificado por polietileno glicol de fita dupla, método de preparação e sua aplicação | |
| MXPA00010223A (en) | Polyol-ifn-beta conjugates |